샌드위치 ELISA 법 을 이용 하 여 MCP - 1 과 그 수용체 CCR 2 의 결합 저해 활성 을 확인 하 였 다 . 이것 은 세포 와 MCP - 1 을 반응 시킨 후 결합 하 지 않 은 MCP - 1 의 양 을 측정 함 으로써 간접 적 인 결합 저해 활성 을 확인 하 는 방법 이 다 . 96 - 웰 ELISA 플레이트 에 MCP - 1 의 포획 항체 ( capture antibody , anti - hMCP - 1 antibody , PBS 로 1 : 250 희석 ) 를 100 ul 를 첨가 하 여 4 ℃ 에서 24 시간 코팅 시켰 다 . 100 ul 의 블로킹 용액 ( 1 % BSA , 5 % sucrose , 0 . 05 % NaN 3 의 PBS ) 을 첨가 하 여 37 ℃ 에서 1 시간 블로킹 시킨 후 , 세 척 용액 ( 0 . 05 % Tween - 20 의 PBS ) 로 3 회 세척 하 였 다 . THP - 1 세포 를 HEPES 완충액 ( 50 mM HEPES , 1 mM CaCl 2 , 5 mM MgCl 2 , 150 mM NaCl , 0 . 5 % BSA , pH 7 . 2 ) 로 현 탁 시킨 후 , rhMCP - 1 ( 1 nM ) 과 위령선 조추 출물 ( 5 ul ) 및 위령선 의 사포닌 - 풍부 분획 ( 5 ul ) 을 넣 고 37 ℃ 에서 1 시간 반응 시켰 다 . 반응 후 상등 액 100 ul 를 포획 항체 로 코팅 된 96 - 웰 ELISA 플레이트 에 첨가 하 였 다 . 2 시간 동안 실온 에서 배양 한 후 플레이트 를 세 척하 고 , 바이오틴 이 부착 된 anti - hMCP - 1 항체 ( 1 : 5000 희석 , 1 ng / 웰 ) 를 처리 하 여 실온 에서 다시 2 시간 반응 시킨 후 다시 플레이트 를 세 척하 고 스 트 렙 타비 딘 ( streptavidin ) - HRP ( 1 : 1000 희석 , 1 ug / ml ) 을 첨가 하 여 실온 에서 20 분 간 배양 하 였 다 . 플레이트 를 세척 한 후 퍼 옥시 다제 기질 시약 ( 100 ul / 웰 ) 를 첨가 하 여 실온 에서 30 분 배양 시켰 다 . 50 ul 의 중단 용액 ( 3 M H 2 SO 4 ) 을 첨가 하 여 반응 을 중지 시킨 후 마이크 로 플레이트 리더 로 450 nm 에서 MCP - 1 을 측정 하 였 다 . 위령선 조추 출물 및 사포닌 - 풍부 분획 의 최종 농도 를 25 ug / ml 로 하 여 MCP - 1 활성 저해 효과 를 측정 한 결과 , 위령선 추출물 을 처리 하 지 않 은 대 조군 에서 는 약 4 . 3 % 의 활성 저해 효과 를 나타낸 반면 , 위령선 조추 출물 을 처리 한 군 에서 는 42 . 4 % 의 활성 저해 효과 를 , 위령선 의 사포닌 - 풍부 분획 을 처리 한 군 에서 는 81 . 7 % 로서 위령선 조추 출물 에 비하 여 약 2 배 정도 강력 한 활성 저해 효과 를 나타내 었 다 .