본 발명 에 방법 에 따른 치료 방법 으로 처리 된 인간 성상 교세포 의 독성 평가 를 위해 DCFH - DA ( 2 ’, 7 ’- dichlorodihydro - fluorescein diacetate ; Molecular Probes , USA ) 를 사용 하 여 ROS ( Reactive oxygen species ) 를 측정 하 였 다 . 이 를 위해 세포 를 먼저 10 μ g / ml DCFH - DA 를 포함 하 는 무 혈청 배지 로 세포 를 1 시간 동안 starvation 한 후 , 10 μ g / ml DCFH - DA 가 포함 된 무 혈청 배지 로 30 분 간 배양 하 여 염색 하 였 다 . 그런 다음 다시 무 혈청 배지 로 3 번 washing 한 후 에 유세포 분석기 ( flow cytometer ; Beckman Coulter Quanta SC 5 . 2 ) 로 분석 하 였 다 . 그 결과 는 도 3 c , d 에 나타내 었 다 . ( ROS 결과 값 은 Control : 2 . 8 ± 0 . 5 %; OGD : 32 . 0 ± 1 . 4 %; HPE ( 10 μ g / ml ) + OGD : 16 . 8 ± 1 . 9 % 이 었 다 . ) 소수성 물질 인 DCFH - DA 는 세포막 을 투과 한 후 , 세포내 에스 테라 제 에 의해 아세틸 화 되 어 형광 을 띠 지 않 는 DCFH 로 분해 된다 . 이때 DCFH 가 ROS 에 의해 산화 되 면 녹색 형광 을 띠 는 DCF 로 변환 되 게 된다 . 이 형광 세기 를 측정 하 여 세포내 ROS 농도 를 평가 할 수 있 다 .