C - 말단 인자 X 절단 부위 의 HER 3 ECD 상류 및 인간 IgG 힌지 및 Fc 도메인 를 융합 한 추가 의 재조합 HER 3 단백질 을 생성 하 여 Fc - 태그 부착 된 단백질 을 생성 하 였 다 . 이 를 달성 하 기 위해 , 다양 한 HER 3 ECD 를 PCR 증폭 시키 고 , 인자 X 부위 - 힌지 - hFc 의 인 - 프레임 C - 말단 융합 을 함유 하 도록 변형 된 벡터 ( 예 를 들 어 , pcDNA 3 . 1 ) 에 클로닝 하 였 다 . 생성 된 오픈 리딩 프레임 을 게이트웨이 ® 재조합 클로닝 기술 ( 인 비트 로 젠 ) 로 의 추가 의 클로닝 을 위해 AttB 1 및 AttB 2 부위 로 말단 절단 시켰 다 . LR 게이트웨이 반응 을 이용 하 여 HER 3 - Fc 를 CMV 프로모터 를 함유 하 는 데스 티 네이션 발현 구축물 로 전달 하 였 다 . HER 3 점 돌연변이 발현 구축물 을 표준 부위 지정 돌연변이 유발 프로토콜 및 검증 된 생성 된 벡터 서열 을 이용 하 여 생성 하 였 다 .