함께 트립 타제 사량 체 를 보유 하 는 작 은 또는 큰 단백질 계면 이 huE 104 . v 2 Fab 결합 시 탈 안정 화 되 는지 를 결정 하 기 위해 , 사량 체 트립 타제 돌연변이체 Y 75 C 또는 I 99 C ( 참고 상기 ) 는 복합체 형성 을 위하 여 2 - 배 몰 과잉 의 Fab huE 104 . v 2 와 혼합 되 었 고 SEC 로 분석 되 었 다 ( 도 6 C ) . huE 104 . v 2 Fab 는 사량 체 트립 타제 돌연변이체 Y 75 C 와 복합체 를 형성 하 였 고 크로마토그램 은 과잉 Fab 를 포함 하 는 tr = 31 분 ( 피크 4 ) 및 tr = 21 . 6 분 ( 도 , 6 C , 실행 1 , 피크 1 ) 의 체류 시간 을 가진 2 피크 를 보여준다 . huE 104 . v 2 Fab 는 사량 체 트립 타제 돌연변이체 I 99 C 와 복합체 를 형성 하 였 고 크로마토그램 은 과잉 Fab 를 포함 하 는 tr = 31 분 ( 실행 2 , 피크 5 ) 및 tr = 23 . 8 분 ( 도 6 C , 실행 2 , 피크 2 ) 의 체류 시간 을 가진 2 피크 를 보여준다 . SDS - PAGE 분석 은 huE 104 . v 2 Fab 및 트립 타제 이량체 돌연변이체 둘 모두 가 피크 1 및 2 에서 존재 하 였 고 과잉 Fab 가 피크 4 및 5 에서 존재 하 였 다는 것 을 보여 주 었 다 ( 데이터 도시 되 지 않 음 ) . 비교 하 기 위해 , WT 트립 타제 사량 체 와 복합체 에서 huE 104 . v 2 Fab 는 , huE 104 . v 2 ( tr = 23 . 8 분 , 실행 2 , 피크 2 ) 와 복합체 에서 트립 타제 사량 체 돌연변이체 I 99 C 보다 더 작 은 , Fab huE 104 . v 에 의해 결합 된 단량체 를 포함 하 는 , tr = 26 분 ( 도 6 C , 실행 3 , 피크 3 ) 의 체류 시간 을 가졌 다 . huE 104 . v 2 Fab 와 복합체 에서 트립 타제 돌연변이체 Y 75 C ( 작 은 계면 - 잠금 된 돌연변이체 사량 체 ) 는 huE 104 . v 1 의 4 개 의 Fabs 에 결합 된 WT 트립 타제 사량 체의 안정 한 , 온전 한 복합체 와 유사 한 체류 시간 을 가졌 다 ( 참고 도 6 A , 실행 1 , ref 피크 ) . 다른 한편 으로 , huE 104 . v 2 와 복합체 에서 트립 타제 돌연변이체 I 99 C ( 큰 계면 - 잠금 된 돌연변이체 사량 체 ) 는 실행 1 에서 제 1 피크 보다 더 작 은 복합체 를 나타내 는 더 긴 체류 시간 을 가졌 다 . 결과 는 huE 104 . v 2 Fab 가 , 사량 체의 큰 계면 이 아닌 , 작 은 계면 을 해리 시킬 수 있 을 뿐 이 었 음 을 나타낸다 . 따라서 , 야생 형 트립 타제 사량 체 에 결합 하 는 경우 , huE 104 . v 2 Fab 결합 은 작 은 계면 만 을 해리 시킨다 . 실험 조건 하 에서 , 해리 된 작 은 계면 은 , 사량 체의 재 조립 으로 이어질 수 있 는 , 높 은 국소 농도 ( 예 를 들 어 , 0 . 1 mg / ml ) 에서 존재 하 는 헤파린 에 의해 빠르 게 회복 될 수 있 다 . 이 헤파린 농도 는 생리 적 헤파린 농도 보다 실질 적 으로 더 높 고 , 이 는 혈청 의 약 1 . 5 μ g / ml 인 것 으로 보 고 되 었 다 ( 참고 , 예 를 들 어 , Engelberg 등 , Circulation 23 : 578 - 581 , 1961 및 Davids 등 S . Afr . Med . J . 100 : 307 - 307 , 2010 ) . 저 농도 의 헤파린 에서 , huE 104 . v 2 Fab 는 , IgG 형식 에서 huE 104 . v 2 보다 덜 강력 하 여도 , WT 트립 타제 사량 체 를 완전히 해리 시킬 수 있 고 트립 타제 활성 을 중화 시킬 수 있 다 .