HDAC 10 유전자 의 프로모터 영역 을 PCR 에 의해 증폭 하 였 다 . HDAC 10 프로모터 ( 952 bp 단편 , - 1095 부 터 - 142 까지 ) 서열 로부터 주형 으로서 대립 유전자 - 매칭 된 B 세포주 의 게놈 DNA 를 사용 하 여 제 1 PCR 산물 을 증폭 하 였 다 . 일차 PCR 반응 혼합물 을 희석 하 여 네 스티드 ( nested ) 프라이머 를 사용 하 는 네 스티드 PCR 을 위한 주형 으로서 사용 하 였 다 . 프로모터 ( 459 bp 단편 , - 801 부 터 - 354 까지 ) 영역 의 제 2 PCR 프라이머 는 제한 효소 부위 Bgl II ( AGATCT ) , Hind III ( AAGCTT ) 를 포함 하 고 있 다 . 사용 된 프라이 머들 을 표 4 에 정리 하 였 다 . 증폭 된 PCR 산물 을 pGEM - T easy vector ( Promega , Medison , WI ) 내 로 클로닝 하 고 Bgl II , Hind III ( New England Biolabs , Beverly , MA ) 로 효소 분해 하 였 다 . 생성 된 프로모터 의 단편 을 프로모터 가 없 는 루시퍼 라 제 리포터 pGL 3 - Basic vector ( Promega , Madison , WI ) 의 Bgl II , Hind III 부위 내 로 클로닝 하 였 다 . QIAGEN Plasmid purification kit ( Qiagen , Santa Clarita , CA ) 를 사용 하 여 플라스미드 를 단리 하 였 다 .