반응 생성물 을 TAE 버퍼 에서 1 . 0 % 아가로오스 겔 전기 이동 에 의해 분리 하 였 고 제조 업자 의 설명서 에 따라서 MINELUTE ® Gel Extraction Kit 를 사용 하 여 정제 하 였 다 . pCR ® 2 . 1 - TOPO ® 벡터 ( Invitrogen , Carlsbad , CA , USA ) 에 PCR 단편 을 클로닝 하 기 위해서 , 3 ' A - 돌출부 의 첨가 를 Taq DNA 폴리머 라 아제 ( New England Biolabs Ipswich , MA , USA ) 를 사용 하 여 수행 하 였 다 .