RQ - PCR 실험 을 수행 하 기 위해서 먼저 환자 의 암 조직 으로부터 상기 마이크 로 어레이 실험 의 RNA 추출 과정 과 동일 한 방법 을 사용 하 여 RNA 를 준비 하 였 고 , 역전사 효소 를 이용 하 여 제 1 가닥 cDNA 를 합성 하 였 다 . 합성 된 cDNA 를 주형 으로 하 여 PCR 을 수행 하 였 는데 , PCR 용 튜브 에 cDNA ( 250 pg / ㎕) 4 ㎕, Taq 중합효소 믹스 5 ㎕, 해당 유전자 의 프로브 ( 10 μ M ) 및 프라이머 한 쌍 ( 20 μ M 씩 ) 을 각각 0 . 2 ㎕ 씩 , 멸 균수 0 . 4 ㎕ 를 분주 하 여 총 10 ㎕ 를 반응 용 튜브 에 준비 하 였 다 . 준비 된 튜브 를 실시간 중합효소 연쇄 반응 기기 인 LightCycler 480 시스템 ( Roche Applied Science , USA ) 에 적용 하 여 PCR 을 수행 하 였 다 . PCR 반응 조건 은 95 ℃ 에서 10 분 간 초기 변성 ( pre - denaturation ) 시키 고 , 95 ℃ 에서 10 초 , 60 ℃ 에서 30 초 동안 반응 시키 는 일련 의 과정 을 55 회 반복 하 여 수행 하 였 다 . 상기 과정 에서 유전자 시료 에 대한 PCR 산물 이 축적 되 는 양 을 프로브 의 3 ' 말단 에 표지 된 6 - 카르복시 테트라메틸 - 로다민 으로부터 나오 는 형광 세기 로 모니터링 하 였 는데 , 이 형광 세기 로부터 Cp 값 을 구했 다 .