하 기 샘플 을 동등 비율 로 조합 하 여 풀 링 된 인간 뇌 추출물 을 제조 하 였 다 : PD ( PD 1 , PD 3 및 PD 5 ) , MSA ( 12 - 18 , 01 - 03 및 14 - 49 ) , 및 DLB ( 13 - 37 , 05 - 31 및 08 - 26 ) . 풀 링 된 샘플 을 PBSTB 완충제 ( 1 % BSA + 0 . 05 % 트윈 + PBS ) 로 100 - 배 희석 하 였 다 . 면역 침전 을 위해 , 뇌 추출물 을 항체 와 함께 4 ℃ 에서 2 시간 동안 엔드 오버 엔드 회전 에 의해 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 단백질 A / G 아가로스 비드 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 를 첨가 하 고 , 샘플 을 4 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 하 였 다 . 단백질 A / G 비드 를 제조 하 기 위해 , 1 . 2 ml 비드 슬러리 를 1000 x g 에서 2 분 동안 4 ℃ 에서 원심 분리 하 였 다 . 저장 완충제 를 제거 하 고 , 비드 를 0 . 05 % 트윈 - 20 을 함유 하 는 PBS 0 . 6 ml 로 1 - 회 세척 하 고 , 상기 와 같이 원심 분리 하 고 , 비드 를 0 . 6 ml PBS 로 3 - 회 세척 하 였 다 . 최종 회전 후 , 비드 를 PBS 중 1 % BSA 0 . 6 ml 의 첨가 에 의해 차단 하 고 , 4 ℃ 에서 2 시간 동안 엔드 오버 엔드 인 큐 베이 션 에 의해 인 큐 베이 션 하 였 다 . 차단 후 , 비드 를 원심 분리 에 의해 단리 하 고 , 0 . 6 ml PBS 중 에 1 . 2 ml 의 최종 부피 로 재현 탁 시켰 다 . 비드 슬러리 를 1 : 10 ( vol : vol ) 희석 으로 각각 의 뇌 추출물 에 첨가 하 였 다 . 밤샘 면역 침전 후 , 샘플 을 원심 분리 하 여 비드 를 제거 하 고 , 고갈 된 뇌 샘플 을 단리 하 고 , ELISA 에 의해 평가 하 였 다 . 하 기 항체 를 면역 침전 에 사용 하 였 다 : 26 D 6 ( 인간 A 베타 에 특이 적 인 마우스 IgG 대 조군 항체 ( a . a . 1 - 12 ) , MJFR - 14642 ( 압 캠 ) , LB 509 ( 코 반스 ) , 클론 42 ( BD ) , 7 A 10 , 및 1 E 8 .