폐 샘플 은 총 단백질 의 제조 를 위해 설명 한 바 와 같이 제조 하 였 다 . 세포 용해 물 은 13 , 000 g 에서 10 분 간 원심 분리 하 고 상등 액 은 10 % 아크릴아마이드 겔 상 에서 SDS - PAGE 를 수행 한 다음 , Novex wet transfer system ( 100 V 에서 2 시간 ) 으로 PVDF ( polyvinylidene difluoride ) 막 에 옮겼 다 . 상기 막 은 무 지방 건조 스킴 밀크 ( nonfat dry skim milk ) 가 첨가 된 0 . 05 % ( v / v ) Tween 20 에 5 % ( w / v ) 를 포함 하 는 TBS ( Tris - buffered saline ) 에서 1 시간 동안 차단 한 후 , 3 % ( w / v ) BSA 가 첨가 된 0 . 05 % ( v / v ) Tween 20 을 포함 하 는 TBS 에서 1 차 항체 로 2 시간 동안 인 큐 베이 션 한 다음 , ECL ( enhanced chemiluminescence ; Amersham Pharmacia Biotech , Ltd . , UK ) 에 의한 발달 전 양 고추냉이 페록시다아제 ( HRP ) - 결합 된 2 차 항체 로 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 .