PBS 중 1 μ g / mL r - Tau 로 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 96 - 웰 ELISA Nunc 플레이트 를 코팅 하 여 1 차 스크리닝 을 수행 하 였 다 . 상기 플레이트 를 Biotek 플레이트 워 셔 를 사용 하 여 PBST 로 3 회 세척 하 였 다 . 50 μ L / 웰 의 하이브리도마 상청 액 을 실온 에서 1 시간 동안 배양 하 면서 플레이트 에 첨가 하 였 다 . 플레이트 를 PBST 로 3 회 세척 하 였 다 . 1 : 2000 희석 , 50 μ L / 웰 로 2 차 검출 항체 염소 X m HRP ( Southern Biotech ) 를 플레이트 에 첨가 하 고 , 실온 에서 1 시간 동안 항온 처리 하 였 다 . 1 시간 이 끝날 때 , 플레이트 를 PBST 로 3 회 세 척 하 였 다 . 플레이트 를 50 μ L / 웰 의 TMB 기질 ( Thermo Fisher ) 로 현상 하 고 , 50 μ L / 웰 의 1 N 황산 으로 ? 칭하 였 다 . 신호 는 A 450 에서 BioTek ® 플레이트 리더 에서 정량 화 되 었 다 . r - Tau 에 대한 배경 의 3 배 의 OD 를 갖 는 웰 은 양성 으로 간주 되 었 고 2 차 스크리닝 을 위해 이월 되 었 다 .