췌장 조직 에서 분리 된 cytoplasmic 층 과 nuclear 층 은 각각 세포 파쇄 용액 과 4 ℃ 에서 30 분 반응 시킨 후 동량 의 단백질 을 BCA 용액 으로 정량 하 였 다 . 두 배 의 sample buffer ( 5 mM EDTA , 4 % sodium dodesyl sulfate ( SDS ) , 20 % glycerol , 200 mM Tris , pH 6 . 8 , 0 . 06 % bromophenol blue ) 와 혼합 후 100 ℃ 에서 5 분 가열 하 여 단백질 변성 을 유도 하 고 10 % gel 에서 sodium dodesyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS - PAGE ) 를 시행 하 였 다 . 전기영동 을 마친 gel 의 단백질 은 semi - dry electrotransfer system ( 0 . 8 mA / ㎠) 을 이용 하 여 nitrocellulose membrane 으로 이동 시킨 다음 , 5 % skim milk 와 4 ℃ 에서 2 시간 반응 시켜 비 특이 적 인 항체 반응 을 억제 시켰 다 . 일 차 항체 는 skim milk 에 1 : 2 , 000 으로 희석 하 여 nitrocellulose membrane 과 4 ℃ 에서 15 시간 반응 시키 고 , TBS - T 로 10 분 씩 3 번 세 척 한 후 이 차 항체 ( TBS - T 로 1 : 2 , 000 으로 희석 , Amersham Co . , England ) 와 4 ℃ 에서 1 시간 반응 시켰 다 . 그 후 ECL kit ( Amersham Co . , England ) 를 이용 하 여 nitrocellulose 에 노출 시키 고 image analyzer 를 사용 하 였 다 .