CJ 1 OG 융합 프로모터 를 포함 하 는 유도 발현 시스템 을 제작 하 기 위해 실시 예 1 에서 제작 된 CJ 1 OG 를 pGEM T / A 클로닝 벡터 ( Gem - T easy cloning system ) 에 삽입 하 였 다 . 클로닝 과정 은 Quiagen 사 에서 제공 된 과정 및 시약 을 이용 하 여 진행 하 였 다 . 제작 된 벡터 인 pGem - CJ 1 OG 를 제한 효소 인 Not 으로 소화 시킨 후 , 동일 한 제한 효소 로 소화 된 pCES 208 , pCES - SC 1 에 도입 하 여 pCES - CJ 1 OG , pCES - CJ 1 OG + SC 1 을 획득 하 였 다 ( 도 7 ) . 만들 어 진 재조합 DNA 를 최종 적 으로 코 리네 박 테리 움 글루 타미 쿰 에 도입 하 였 다 . pCES - CJ 1 OG , pCES - CJ 1 OG + SC 1 을 지니 는 재조합 코 리네 박 테리 움 글루 타미 쿰 을 얻 기 위해 electroporation 방법 을 사용 하 였 다 . 코 리네 박 테리 움 글루 타미 쿰 을 LB 배지 ( 박 토트 립톤 ( bacto tryptone ) 1 %, 박토 이스트 익스 트렉 트 ( Bacto yeast extract ) 1 %, NaCl 0 . 5 %, 2 % glucose ) 에 접종 하 여 완전히 배양 한 후 2 . 5 % 글리신 과 0 . 5 % 의 tween 80 그리고 4 ml of 이소니코틴산 ( 100 mg / ml ) 이 첨가 된 LB 배지 에 OD 600 에서 0 . 3 이 되 도록 이 를 transfer 하 여 18 ℃, 170 rpm 으로 A 600 에서 OD 가 1 . 0 이 될 때 까지 진탕 배양 하 였 다 . 이 를 얼음 에서 10 분 동안 방치 하 고 세포 를 원심 분리 ( 4000 rpm , 15 min , 4 ℃) 한 뒤 1 / 2 부피 의 10 %( v / v ) 냉각 글리세롤 에 현 탁 시킨 후 , 다시 동일 조건 으로 원심 분리 하 여 동량 의 10 %( v / v ) 냉각 글리세롤 로 4 회 세척 하 였 다 . 이 를 동일 조건 으로 원심 분리 하 여 최종 적 으로 원래 부피 의 1 / 200 부 피의 ( 500 ㎕) 10 % 글리세롤 에 재 현 탁 시켰 다 . 이 를 100 ㎕ 씩 분주 하 여 DNA 를 첨가 한 뒤 0 . 2 ㎝ cuvette 에 넣 어서 GENE PULSER ( Bio - Rad Co . ) 를 사용 하 여 2 , 500 V , 25 ㎌, 600 Ω 에서 전기 충격 을 준 다음 1 ㎖ 의 BHIS - 재생 배지 ( 1 X 브레인 하트 인 퓨전 ( brain heart infusion ) , 0 . 5 M 솔비톨 / 50 ml 증류수 ) 를 첨가 하 고 46 ℃ 에서 6 분 간 방치 하 였 다 . 이 를 30 ℃ 에서 1 . 5 시간 동안 배양 한 뒤 카나마이신 ( kanamycin ) 이 첨가 된 한 천 배지 에서 선별 하 였 다 . 상기 의 선별 배지 는 표 1 에 나타내 었 다 .