단일 클론 을 단리 하 고 , CH 3 C . 18 변이체 의 표면 발현 을 유도 하 기 위해 0 . 2 % 글루코스 가 보충 된 SG - CAA 배지 에서 하 롯 밤 동안 성장 시켰 다 . 각각 의 클론 에 대해 , 2 백만 개 의 세포 를 pH 7 . 4 에서 PBS + 0 . 5 % BSA 에서 3 회 세척 하 였 다 . 세포 는 바 이오티 닐 화 된 표적 , 250 nM 인간 TfR , 250 nM cyno TfR , 또는 250 nM 의 무관 한 바 이오티 닐 화 된 단백질 로 1 시간 동안 4 ℃ 에서 교반 과 함께 착색 되 었 고 , 그 다음 동일 완충액 으로 2 회 세척 되 었 다 . 세포 를 4 ℃ 에서 30 분 동안 뉴트 라비딘 - Alexafluor 647 ( AF 647 ) 로 염색 한 후 , 다시 2 회 세척 하 였 다 . 항 - 닭 - Alexfluor 488 ( AF 488 ) 이 차 항체 와 함께 , 항 - c - myc 항체 를 사용 하 여 발현 을 측정 하 였 다 . 세포 를 재현 탁 시키 고 , AF 647 및 AF 488 의 중앙 형광 강도 ( MFI ) 를 BD FACS CantoII 에서 측정 하 였 다 . MFI 는 각각 의 집단 에 대한 TfR - 결합 집단 에 대해 계산 되 었 고 , 인간 TfR , cyno TfR 또는 대 조군 결합 으로 플롯 팅 되 었 다 ( 도 49 ) .