K 326 A / E 333 A / P 396 L / E 430 G 를 함유 하 는 1 가 항 - DR 5 항체 의 효능 을 연구 하 기 위해 인간 BxPC - 3 췌장암 및 COLO 205 결장암 세포 에 대해 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . 1 가 DR 5 항체 를 실시 예 1 에 기재 된 바 와 같이 IgG 1 - hDR 5 - 01 - G 56 T - K 326 A / E 333 A / P 396 L / K 409 R / E 430 G 와 IgG 1 - b 12 - K 326 A / E 333 A / P 396 L / F 405 L / E 430 G 사이 의 제어 된 Fab - 아암 교환 에 의해 생성 하 였 다 . BsAb ( hDR 5 - 01 - G 56 T - K 409 Rxb 12 - F 405 L ) - K 326 A / E 333 A / P 396 L / E 430 G 로 지칭 되 는 생성 된 이중 특이 적 항체 는 DR 5 에 특이 적 인 하나 의 아암 및 HIV 당단백질 gp 120 에 대한 하나 의 비 - 특이 적 아암 을 함유 하 여 , DR 5 - 양성 인간 암 세포 에 대한 1 가 DR 5 결합 을 유발 한다 . BxPC - 3 세포 를 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 수거 하 였 다 . COLO 205 세포 ( ATCC , CCL - 222 ) 를 비 - 부착 세포 및 트립신 처리 된 부착 COLO 205 세포 를 함유 하 는 배양 상청 액 을 풀 링 함 으로써 수거 하 였 다 . 세포 를 1 , 200 rpm 에서 5 분 동안 원심 분리 에 의해 펠릿 화 하 고 , 배양 배지 ( 25 mM Hepes 및 L - 글루타민 + 10 % 열 불활성 화 된 DBSI + 50 U / mL Pen / Strep 을 함유 한 RPMI 1640 ) 에 0 . 5 x 105 개 세포 / mL 의 농도 로 재현 탁 시켰 다 . 100 μ L 의 단세포 현탁액 ( 웰 당 5 , 000 개 세포 ) 을 폴리스티렌 96 - 웰 편평 - 바닥 플레이트 에 시 딩 하 고 , 37 ℃ 에서 밤새 부착 되 도록 하 였 다 . 이어서 , 50 μ L 의 일련 의 연속 희석 항체 제제 ( 4 배 희석 으로 범위 0 . 0024 내지 10 , 000 ng / mL 최종 농도 ) 를 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 3 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 음성 및 양성 대 조군 으로서 , 세포 를 각각 항체 없이 또는 5 μ M 스타 우로스 포린 과 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 배양 된 세포 의 생존 율 을 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 셀타 이터 - 글 로 발광 세포 생존 율 검정 에서 결정 하 였 다 .