남성 불임 환자 의 혈액 3 ㎖ 를 EDTA 시험관 ( tube ) 에 채혈 한 후 , 15 ㎖ 코니컬 튜브 ( conical tube ) 로 옮겼 다 . 여기 에 TKM 1 buffer ( 10 mM Tris - HCl pH 7 . 6 , 10 mM KCl , 10 mM MgCl 2 , 2 mM EDTA ) 3 ㎖ 과 Nondiet P - 40 75 ㎕ 를 넣 어 잘 혼합 한 후 2200 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 를 하 여 펠 렛 을 얻 었 다 . 펠 렛 에 다시 TKM 1 buffer 3 ㎖ 를 넣 어 피펫 팅 을 한 후 2200 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 다시 펠 렛 을 얻 었 다 . 여기 에 TKM 2 buffer ( 10 mM Tris - HCl pH 7 . 6 , 10 mM KCl , 10 mM MgCl 2 , 2 mM EDTA , 0 . 4 M NaCl ) 0 . 48 ㎖ 을 넣 어 펠 렛 을 잘 풀 어 준 후 10 % SDS 30 ㎕ 를 넣 어 주 고 , 55 ℃ 에서 2 시간 배양 하 였 다 . 배양 된 용액 을 E - tube ( Eppendorf tube ) 로 옮겨 6 M NaCl 0 . 18 ㎖ 첨가 한 후 12000 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 였 다 . 여기 서 상층 액 만 을 15 ㎖ 코니컬 튜브 로 옮겨 2 배 의 100 % 에탄올 을 넣 고 천천히 앞뒤 로 뒤집 어 DNA 만 을 얻 고 여기 에 다시 차가운 70 % 에탄올 1 ㎖ 을 넣 어 4 ℃, 12000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 를 한 후 펠 렛 을 얻 었 다 . 에탈 올 이 모두 없 어 질 때 까지 펠 렛 을 건조 하 고 , 100 ㎕ 의 3 차 증류수 를 넣 어 펠 렛 을 녹이 고 , 남성 불임 환자 로부터 gDNA 시료 를 얻 었 다 .