HeLa 세포 의 트랜스펙션 을 IGF 1 R siRNA 의 시험관 내 표준 농도 ( 0 . 1 - 10 nM ) , siCONTROL RISC - 무 함유 siRNA # 1 또는 siCONTROL 비 - 표적 siRNA # 2 ( NTC 2 ) 및 DHARMAFECT ® # 1 트랜스펙션 시약 ( Dharmacon , Lafayette , CO ) 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 모든 siRNA 를 1 X siRNA 버퍼 , 20 mM KCl 의 수용액 , 6 mM HEPES ( pH 7 . 5 ) , 0 . 2 mM MgCl 2 중 에 용해 시켰 다 . 버퍼 대조 에 포함 되 는 대조 샘플 은 siRNA 의 용적 을 동일 한 용적 의 1 × siRNA 버퍼 ( - siRNA ) 로 대체 하 였 다 . 항 - IGF - 1 R β 항체 를 사용 하 는 웨스턴 블랏 을 IGF - 1 R 단백질 발현 을 평가 하 기 위하 여 수행 하 였 다 . 이 항체 는 200 - kDa IGF - 1 R 전구체 및 97 - kDa 성숙 된 IGF - 1 R β 단백질 모두 를 인식 한다 . IGF 1 R siRNA 는 하 기 표적 에 대하 여 특이 성 을 갖 는 간섭 RNA 이 다 : siIGF 1 R # 6 는 서 열 번호 38 을 표적 으로 한다 ; SiIGF 1 R # 8 은 서열 번호 39 를 표적 으로 한다 ; siIGF 1 R # 17 은 서열 번호 13 을 표적 으로 한다 ; siIGF 1 R # 18 은 서열 번호 40 을 표적 으로 한다 . 도면 의 데이터 에서 보여진 바 와 같이 , siIGF 1 R # 8 및 siIGF 1 R # 17 siRNA 는 대조 siRNA 와 비교 하 여 10 nM 및 1 nM 농도 에서 IGF - 1 R 단백질 발현 을 유의 하 게 감소 시켰 고 , 이 들 IGF 1 R siRNA 가 siIGF 1 R # 6 및 siIGF 1 R # 18 보다 더욱 효과 적 임 을 나타내 었 다 . 0 . 1 nM 에서 IGF - 1 R 단백질 발현 을 유의 하 게 감소 시킨 siRNA 는 없 었 다 .