48 시간 동안 15 ng / ㎖ PMA 를 처리 하 여 대식세포 로 분화 된 THP - 1 세포 를 18 시간 동안 락트산 으로 처리 하 고 4 % 파라포름알데히드 에서 15 분 간 고정 시켰 다 . 0 . 3 % Triton X - 100 을 함유 하 는 PBS 중 5 % FBS 에서 1 시간 동안 세포 를 블로킹 한 후 , 48 ℃ 에서 하 기 의 1 차 항체 와 함께 밤새 배양 하 였 다 : FITC - 접합 CD 68 ( KP 1 ; Santa Cruz Biotechnology , Inc . , Santa Cruz , CA , USA ) 및 APC - 접합 항마 우스 - VEGF ( C - 1 , Santa Cruz Biotechnology , Inc . ) 세포 를 헹구 고 PBS 로 3 회 세 척 하 였 다 . 핵 을 염색 하 기 위해 , 세포 를 핵 염색약 DAPI ( 4 ', 6 - diamidino - 2 - phenylindole ) 3 ㎕ 로 15 분 동안 처리 하 였 다 . Olympus FV 1000 Confocal Scanning Scope ( Olympus , Tokyo , Japan ) 를 사용 하 여 염색 된 세포 를 관찰 하 였 다 . ImageJ 소프트웨어 ( http : / / imagej . nih . gov / ij / ; provided in the public domain by the National Institutes of Health , Bethesda , MD , USA ) 를 사용 하 여 VEGF 강도 를 측정 하 였 다 .