T - 세포 ( 이펙터 ; E ) 및 표적 세포 ( 표적 ; T ) 를 1 : 1 , 이펙터 - 대 - 표적 비 ( 30 , 000 개 T 세포 ; 30 , 000 개 표적 세포 ) 로 , 1 μ g / mL 의 항 - BCMA 항체 와 함께 , 10 % 태아 소 혈청 이 보충 된 RPMI 1640 배지 중 에서 200 - μ L 반응 부피 로 인 큐 베이 션 하 였 다 . 반응물 을 24 시간 동안 37 ℃ 에서 CO 2 ( 5 %) 인큐베이터 내 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 2 개 의 활성 화 마커 , CD 25 및 CD 69 의 기하 평균 형광 강도 ( gMFI ) 를 유동 세포 측정 법 을 통해 총 CD 3 + CD 16 + ACTR T - 세포 게이트 에서 결정 하 였 다 . 간략 하 게 , 세포 를 염색 완충제 중 에서 2 회 세척 한 후 , 라이브 / 데드 이 플루오르 - 450 염료 로 4 ℃ 에서 30 분 동안 염색 하 였 다 . 살 아 있 는 세포 / 사멸 세포 염색 중 에서 인 큐 베이 션 후 , 세포 를 2 회 세척 하 고 , AF 488 - 접합 된 항 - 인간 CD 3 항체 , APC - 접합 된 항 - 인간 CD 16 항체 , PerCP - Cy 5 . 5 - 접합 된 항 - 인간 CD 25 항체 , 및 BV 510 - 접합 된 항 - 인간 CD 69 항체 로 이루어진 항체 칵테일 100 μ L 와 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 후속 해서 , 세포 를 2 회 세척 하 고 , 고정 시키 고 , 투과 화 하 고 , 세포내 분자 에 대해 염색 한 후 , 유동 세포 측정 법 을 통해 검출 하 였 다 . CD 3 + CD 16 + ACTR T - 세포 에 대한 유동 세포 측정 법 게이팅 을 이중선 및 사멸 세포 배제 후 에 수행 하 였 다 .