다음 라이브러리 는 주요 결합 파 라토프 에서 허용 가능 한 다양 성 을 추가 로 탐색 하 도록 설계 되 었 다 . 각 원래 의 위치 ( 384 , 386 , 387 , 388 , 389 , 390 , 413 , 416 , 및 421 ) 에 추가 로 2 개 의 핫 스팟 ( 380 및 415 ) 을 NNK 코돈 으로 개별 적 으로 무작위 화 하 여 , 이스트 에서 일련 의 단일 위치 포화 돌연변이 생성 라이브러리 를 생성 하 였 다 . 추가 적 으로 , 각각 의 위치 를 개별 적 으로 야생 형 잔기 로 되돌리 고 , 이 들 개별 클론 을 이스트 에 표시 하 였 다 . 위치 380 , 389 , 390 및 415 는 야생 형 잔기 로 의 복귀 시 TfR 에 실질 적 으로 결합 을 유지 한 유일 한 위치 였 다 ( 413 의 야생 형 으로 의 복귀 되 는 경우 결합 은 일부 잔류 하 지만 그러나 상당히 감소 됨 이 관찰 됨 ) .