Lysis buffer 로 단백질 을 추출 한 후 , 단백질 은 브레드 포드 ( Bradford ) 방법 을 이용 하 여 정량 하 였 다 . 정량 한 단백질 50 ㎍ 을 10 % Tris - glycine gel 에 SDS - PAGE 를 실시 하 였 다 . SDS - PAGE 후 gel 를 nitrocellulose membrane 에 120 mA 에서 1 시간 동안 transfer 를 실시 한 후 membrane 은 5 % skim milk 를 이용 하 여 1 시간 실온 에서 blocking 하 였 다 . 4 ℃ 에서 밤샘 배양 하 여 1 차 항체 와 반응 시킨 후 T - PBS 로 멤 브레인 을 세 척하 고 , 2 차 항체 로 실온 에서 2 시간 반응 하 였 다 . 반응 이 끝난 멤 브레인 을 ECL kit 으로 반응 후 X - ray film ( Agpa , Belgium ) 을 이용 하 여 현상 하 였 다 .