단백질 정제 에 사용 될 , > 1 L 부피 의 30 일 째 배양액 을 Celite - 512 로 여과 하 여 , 세포 및 조직 파편 ( debris ) 을 제거 하 였 다 . 청정 한 수성 여액 을 투석 여과 하 고 , 컷오프 접선 유동 여과 ( Tangential Flow Filtration ; TFF ) 막 ( Millipore Ltd , Sydney , Australia ) 에 적용 하 여 , 농축 하 였 다 . 50 mM 인산염 나트륨 완충액 ( pH 7 . 4 ) 2 X 5 부피 를 투석 여과 한 후 , 배지 용액 을 1 - 2 L 로 농축 시키 고 , 밤새 4 ℃ 에서 저장 하 거나 , 즉시 ( NH 4 ) 2 SO 4 참전 을 실시 하 였 다 . 고체 ( NH 4 ) 2 SO 4 를 배지 용액 에 가하 여 , 80 % 로 포화 시켰 다 ( 0 ℃). 4 ℃ 에서 30 분 간 14 , 000 로 원심 분리 하 여 , 침전물 을 수집 하 고 , 50 mM 인산염 나트륨 완충액 ( pH 7 . 4 ) 에 용해 시켰 다 . Bradford 또는 BCA ( Sigma , Sydney , Australia ) 분석법 을 이용 하 여 , 정제 된 hNC 4 의 단백질 농도 를 정량 하 였 다 . 대장균 ( E . coli ) 으로부터 제조 된 rhNC 4 에 대해 수행 된 , 본 명세서 에 기재 된 방법 과 동일 한 방법 으로 , 상기 물질 의 추가 정제 를 수행 하 였 다 .