이렇게 얻 어 진 종양 침윤 림프구 세포 를 1 × 106 세 포수 / 200 ㎕ 의 양 으로 둥근 바닥 의 96 웰 세포 배양 플레이트 의 각 웰 에 분주 하 고 , 2500 rpm 에서 2 분 동안 원심 분리 를 수행 하 였 다 . 이후 , 상층 액 을 제거 하 고 , PBS 에 희석 된 1 차 마커 ( CD 4 , CD 8 , Lrig - 1 ) 를 표적 으로 하 는 항체 를 각 웰 에 50 ㎕ 씩 분주 한 뒤 에 파이 펫 팅 하 여 잘 섞 어 주 었 다 . 그런 다음 , 호일 을 이용 하 여 플레이트 에 빛 을 차단 하 고 4 도씨 냉장고 에서 30 분 동안 배양 하 고 , 150 ㎕ 의 PBS 를 추가 로 넣 고 원심 분리 를 수행 하 였 다 . 이후 , 고정 화 / 펌 ( perm ) 시약 을 각 웰 당 80 ㎕ 씩 분주 하 고 , 4 도씨 에서 30 분 동안 배양 한 뒤 에 120 ㎕ 의 1 × 펌 버퍼 를 넣 고 원심 분리 를 수행 하 였 다 . 마지막 으로 , 1 × 펌 버퍼 에 포함 된 1 ㎕ 의 2 차 마커 ( Foxp 3 ) 를 각 웰 당 50 ㎕ 씩 분주 하 고 , 4 도씨 에서 30 분 동안 배양 한 뒤 에 원심 분리 를 수행 하 여 얻 어 진 세포 를 200 ㎕ 의 PBS 에 재 현 탁 시킨 뒤 에 통상 의 방법 에 따라 FACS 를 측정 하 여 , 그 결과 를 도 17 에 나타내 었 다 .