분석 하 기 24 시간 전 에 인간 α 1 A - 7 수용체 를 발현 하 는 CHO 세포 를 폴리 - D - 리신 으로 코팅 된 384 - 웰 블랙 월 마이크 로 티 터 플레이트 에 시 딩 하 였 다 . 배양 배지 를 흡입 하 고 , 5 % 의 CO 2 하 에 37 ℃ 에서 1 시간 동안 Hank 평형 염액 ( 138 mM 의 NaCl , 5 mM 의 KCl , 1 . 3 mM 의 CaCl 2 , 0 . 5 mM 의 MgCl 2 , 0 . 4 mM 의 MgSO 4 , 0 . 3 mM 의 KH 2 PO 4 , 0 . 3 mM 의 Na 2 HPO 4 , 5 . 6 mM 의 글루코스 ) 에 더 하 여 20 mM 의 HEPES , pH 7 . 4 , 0 . 05 % 의 BSA 및 2 . 5 mM 의 프로 베 니 시드 ( probenicid ) ( 50 ㎕/ 웰 ) 로 구성 된 분석 완충액 에서 1 . 5 μ M 의 Fluo - 4 로 세포 를 염료 - 부하 하 였 다 . 여분 의 염료 를 제거 한 후 , 세포 를 분석 완충액 에서 세정 하 고 , 45 ㎕/ 웰 ( 또는 ( 길항제 분석 를 위해 30 ul / 웰 ) 과 동일 한 최종 부피 로 쌓았 다 . 길항제 평가 에서 , 최종 농도 ( 최종 DMSO = 1 %) 의 4 배 인 4 % 의 DMSO - 함유 완충액 중 15 ㎕ 의 분취 액 과 같 은 상기 지점 에서 길항제 또는 매개 제 를 첨가 한 후 , 20 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 기준 형광 을 형광 측정 조영 플레이트 판독기 또는 488 nm 의 여기 파장 및 500 내지 560 nm 의 방출 범위 를 갖 는 Molecular Devices ( Sunnyvale , CA ) 로부터 의 FLIPR ™ 에서 모니터 하 였 다 . 판독 된 기준 형광 이 약 8000 상대 형광 유닛 ( RFU ) 이 되도록 레이 져 여기 에너지 를 조절 하 였 다 . 그 다음 , 세포 를 분석 완충액 ( 15 ㎕) 에서 희석 된 작용 제 로 실온 에서 자극 하 고 , RFU 를 2 . 5 분 동안 1 . 5 초 의 간격 으로 측정 하 였 다 . 형광 의 최대 변화 를 각 웰 에 대해 계산 하 였 다 . 형광 의 최대 변화 로부터 유도 된 농도 - 반응 곡선 을 비 선형 회귀분석 ( Hill 식 ) 으로 분석 하 였 다 . 길항 성 측정 을 위해 , 화합물 을 인 큐 베이 션 ( 상기 에 기재 된 바 와 같 음 ) 하 고 20 분 후 에 고정 된 농도 의 표준 작용 제 세로토닌 을 첨가 하 였 다 .