PCR 조건 은 94 ℃ 에서 5 분 간 예 비변 성 , 94 ℃/ 30 s , 57 ℃/ 30 s , 그리고 72 ℃/ 1 min 으로 30 사이클 을 실시 하 고 최종 연장 을 72 ℃/ 5 min 간 실시 하 였 다 . PCR 산물 을 0 . 8 % 아가로스 겔 에서 전기영동 을 실시 하 였 다 . 형질 전환 된 콜로니 를 선택 하 여 다시 증 균 및 플라스미드 정제 를 거치 고 제한 효소 인 EcoRI 으로 처리 하 여 인서 트 의 삽입 여부 를 확인 하 고 , 확인 된 구축물 에 한하 여 전체 시퀀싱 을 실시 하 여 원 하 는 염기 서열 이 증폭 되 었 는지 재 확인 하 였 다 . EcoRI 으로 처리 된 1 . 3 kb 분획 은 상동 재조합 용 인서 트 로 사용 되 었 다 .