본 발명 에서 는 핵 DNA 분열 을 감지 하 기 위해 기존 에 보 고 된 방법 ( Caccia , 2001 ) 에 따라 수행 하 였 다 . TUNEL 분석 에서 는 DIG - 11 - dUTP 및 알칼리 성 인산염 이 연결 된 항 디 고시 제닌 항체 를 DNA 3 '- OH 그룹 을 가시 화 하 기 위해 사용 하 였 다 . 샘플 은 단백질 분해 효소 ( proteinase K ) 용액 ( 0 . 05 M Tris - HCl , pH 7 . 6 속 에 0 . 5 / mL ) 과 실온 에서 20 분 동안 배양 시킨 다음 , 냉수 와 TdT 완충 용액 ( 25 mM Tris - HCl , pH 6 . 6 , 200 mM sodium - cacodylate 및 5 mM CoCl 2 ) 으로 헹구 고 라벨 링 된 혼합물 ( TdT 10 units 및 TdT 완충 용액 50 에 dig - 11 dUTP 0 . 5 nmol ) 과 37 ℃ 에서 1 시간 동안 배양 시켰 다 . 반응 은 300 mM NaCl 및 30 mM 구연산나트륨 으로 실온 에서 30 분 동안 헹구 어 주 면서 중지 시켰 다 . 슬라이드 를 100 mM Tris - HCl , pH 7 . 5 , 150 mM NaCl 로 10 분 간 세척 한 다음 , 1 % ( w / v ) 차단제 가 포함 된 동일 완충 용액 으로 50 분 간 세척 해 주 었 다 . 면역 염색 감지 는 DIG DNA 라벨 링 및 감지 키트 ( Roche Diagnostics , Mannheim , Germany ) 를 이용 하 여 실시 하 였 다 . 양성 및 음성 대 조구 는 TdT 및 라벨 링 혼합물 과 배양 전 에 실온 에서 10 분 동안 DNase I ( 23 units mL 1 ) 을 처리 한 부분 으로부터 채취 하 였 다 . 착색 된 부분 은 일반 광학 현미경 으로 관찰 하 고 즉시 사진 을 촬영 하 였 다 . 핵 을 착색 하 기 위해 형광 염색 제 DAPI 를 사용 하 였 다 . 샘플 은 형광 도 립 현미경 ( Leica DM RHC ) 으로 관찰 하 였 다 . 필터 는 여기 상태 의 파장 은 334 - 365 nm , 방출 파장 은 420 nm 로 사용 하 였 다 .