96 웰 플레이트 ( Pierce , Cat # 15041 ) 를 4 C 에서 하룻밤 동안 0 . 1 M 탄산염 ( pH 9 . 5 ) 중 2 . 0 ㎍/ ml 항 - INFg NIB 42 ( BD Pharmingen , cat # 551221 , Fisher 를 통함 ) 100 ㎕ 로 코팅 하 였 다 . 이어서 , 플레이트 를 실온 에서 1 시간 동안 TBS 중 0 . 3 % 탈지 우유 ( 200 ㎕/ 웰 ) 로 차단 하 고 , 세 척 완충액 200 ㎕/ 웰 ( 1 x TBST : 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl , 0 . 05 % Tween 20 ) 로 3 회 세척 하 였 다 . 다음 으로 , 100 ㎕ 의 세포 배양 상등 액 을 사멸 검정 으로부터 의 플레이트 상 으로 의 24 시간 및 48 시간 후 에 그 플레이트 상 에 옮기 고 , 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 인터페론 감마 ( INFg ) 표준물 ( Thermo Fisher 의 재조합 인간 인터페론 감마 , cat # RIFNG 100 ) 을 0 . 1 ㎍/ ml 의 출발 농도 에서 1 pg / ml 까지 3 x 연속 희석 물 로 제조 하 고 , 이어서 웰 당 100 ㎕ 를 첨가 하 고 , 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 희석 완충액 은 1 x TBS ( 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl ) 중 1 % BSA 이 다 . 이어서 , 플레이트 를 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , 비오티 닐 화 - 마우스 항 - 인간 INFg ( BD Pharmingen , cat # 554550 , Fisher 를 통함 ) 를 실온 에서 1 시간 동안 1 ㎍/ ml 농도 로 첨가 하 였 다 . 플레이트 를 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , HRP - 컨 쥬 게이트 된 SA ( Pierce 고감 수성 스 트 렙 트 아 비딘 - HRP : Thermo Fisher , Cat # 21130 ) 를 1 : 2000 으로 첨가 하 고 ; 그것 을 웰 당 100 ㎕ 로 적용 하 고 , 암소 에서 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 세척 완충액 으로 다시 3 회 세척 하 고 , Thermo Fisher 의 1 - Step Ultra TMB - ELISA ( Prod # 34028 ) 를 웰 당 100 ㎕ 로 첨가 하 였 다 . 색상 이 전개 되 었 을 때 플레이트 를 405 nm 에서 판독 하 였 다 .