역전사 반응 을 위한 역전 사용 프라이머 는 일반 적 으로 랜덤 프라이머 ( random primer ) 또는 dT 프라이머 ( dT primer ) 를 사용 할 수 있 는데 , 통상 랜덤 프라이머 는 5 ~ 15 머 ( mer ) 정도 , dT 올리 고 프라이머 는 14 ~ 23 머 정도 를 사용 하 는 것 이 바람직 하 다 . 예 를 들 어 랜덤 6 머의 경우 G , A , T , C 의 염기 서열 이 정해 지 지 않 고 임의 로 합성 되 므로 특정 염기 서열 만 반복 되 어 합성 된 올리고머 도 있 을 수 있 다 . 예 를 들 면 T 만 6 개 로 합성 된 올리고머 와 G 만 6 개 로 합성 된 올리고머 도 있 을 수 있 는데 , 이 들 의 경우 각각 어닐링 온도 가 12 ℃ 와 24 ℃ 정도 로 10 ℃ 이상 의 온도 차이 를 나타낸다 . 랜덤 프라이머 는 그 염기 서열 의 다양 한 조합 만큼 의 여러 어닐링 온도 를 갖 는다 . 기존 의 단일 온도 반응 의 경우 , 그 반응 온도 보다 낮 거나 다양 한 어닐링 온도 를 갖 는 역전사 프라이머 를 사용 하 면 반응 효율 이 떨어질 수 있 다 . 이 에 본 발명 에서 는 10 ~ 40 ℃ 의 어닐링 반응 단계 를 거쳐 반응 온도 보다 낮 거나 다양 한 어닐링 온도 를 갖 는 프라이머 들 이 충분히 어닐링 할 수 있 도록 함 으로써 반응 의 효율 을 극대 화 할 수 있 다 .