RIKEN 세포 은행 ( Tsukuba , Japan ) 으로부터 입수 한 뮤 린 전구 세포 ( 세포주 C 3 H 10 T 1 / 2 또는 ATDC 5 ) 또는 인간 면역 선택 적 Stro - 1 + 전구 세포 ( Mesoblast Ltd , Melbourne , Australia ) 를 DMEM + 10 % FBS 을 함유 하 는 2 mL 스 크류 캡 ( screw - capped ) 원심 분리 관 에 , 다양 한 세포 밀도 로 1 . 68 x 105 - 1 . 0 x 106 세포 범위 에 걸쳐 접종 하 였 다 . 분리 관 에서 , DMEM + 20 % FBS 및 15 % DMSO 에 용해 된 PPS 를 필요량 의 2 배 로 함유 하 는 원액 ( stock solution ) 을 제조 하 였 다 . 이 원액 을 세포 배양액 에 가하 여 , PPS 의 최종 농도 가 원액 농도 의 50 %, FBS 농도 의 10 %, 및 DMSO 농도 의 7 . 7 % 가 되 도록 하 였 다 . 여러 회 에 걸친 독립 적 인 실험 에서 , 최종 용액 내 PPS 의 최종 농도 는 0 . 0 - 100 μ g / ml 범위 였 다 ( 더욱 상세 한 것 은 도면 참조 ) . 사용 된 PPS 는 전 농도 에서 3 회 시험 하 였 다 . PPS 함유 동결 보존 용액 및 세포 를 5 분 간 부드럽 게 혼합 하 고 , 액체 질소 에서 보관 하 였 다 . 3 일 후 , 액체 질소 로부터 튜브 를 제거 하 고 , 37 ℃ 수조 에서 해동 시킨 후 , 실온 에 약 15 분 간 두 었 다 . 세포 를 5 분 간 200 g 으로 원심 분리 하 고 상청 액 을 버렸 다 . 세포 를 페놀 레드 없이 DMEM 900 ul 로 세척 한 후 , 5 분 간 200 g 로 원심 분리 하 였 다 . 세포 를 DMEM 내 1 mg / ml MTT 용액 500 ul 중 에 재 부유 시키 고 , 3 시간 동안 37 ℃ 에서 배양 한 후 , 5 분 간 6000 g 로 원심 분리 하 였 다 . DMSO 300 ul 를 각 튜브 에 가하 여 , 염료 결정 을 용해 시켰 다 . 각 튜브 로부터 90 ulx 3 씩 96 웰 플레이트 에 옮기 고 , 540 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .