6 - 8 주령 의 BALB / C 수컷 마우스 의 림프절 로부터 Macs ( 자기 세포 분리 시스템 ) 법 에 의해 CD 4 양성 세포 를 분획 했 다 . 4 × 106 cells / ㎖ 가 되 도록 RPMI 1640 배지 ( 니 프로 사 제조 , 소태 아 혈청 5 % 함유 , 페니실린 - 스트렙토마이신 용액 ( GIBCO 사 제조 ) 1 % 함유 ; 이하 5 % FCS / RPMI 라고 함 ) 에 현 탁한 후 , 50 ㎕/ well 로 항마 우스 CD 3 항체 코팅 96 웰 플레이트 ( 벡 튼 ㆍ딕슨사 제조 ) 에 파종 했 다 ( 2 × 105 cells / well ) . 항마 우스 CD 28 항체 를 최종 농도 2 . 5 ㎍/㎖ 가 되 도록 첨가 하 고 , 또한 실시 예 1 에서 얻 어 진 유즙 유래 염기 성 단백질 분획 및 대조 로 하 고 소 혈청 알부민 ( 이하 , BSA ) 을 최종 농도 0 , 10 , 100 ㎍/㎖ 가 되 도록 첨가 한 후 , 5 % 탄산 가스 인큐베이터 중 에서 배양 했 다 . 4 일 후 에 상청 을 회수 하 여 , 상청 중 의 RANKL 량 을 ELISA 법 으로 측정 했 다 .