실험동물 로 12 주령 된 스프라그 도올 리 ( Sprague - Dawley ) 수컷 랫 트 ( 평균 체중 350 g ) 를 사용 하 여 , 실험 시작 전 일반 고형 사료 ( 삼양사 ) 와 물 을 자유 롭 게 섭취 하 도록 하 고 , 1 주간 온도 ( 18 ± 4 ℃), 습도 ( 70 ± 10 %), 명암 ( 일 일 12 시간 주기 ) 로 예비 사육 을 통해 적응 기간 을 두 었 다 . 그 후 랫 트 의 복강 에 케타민 하이드로 클로라이드 ( ketamine hydrochloride ) ( 60 ㎍/㎏) 를 투여 하 여 마취 시킨 후 , 우측 서혜부 를 절개 하 여 대퇴 정맥 에 24 게이지 정맥 삽 입관 을 삽 관한 후 헤파린 ( 500 IU / ㎏) 을 주입 하 여 혈액 의 응고 를 막 은 후 개복 하 였 다 . 그 후 간 아래 에 있 는 문맥 ( portal vein ) 에 카테 터 를 삽입 하 여 인산 완충 식염수 ( phosphate buffer saline ; PBS ) - EDTA 를 가하 면서 간 에 있 는 혈액 을 모두 제거 하 였 다 . 혈액 이 제거 된 간 을 적출 하 여 문맥 에 있 는 카테 터 를 통하 여 0 . 05 % 의 콜라 게나 아제 를 가하 여 관류 시킨 후 조직 을 분리 하 여 개별 적 인 독립 된 간세포 를 얻 었 다 . 그 후 인산 완충 식염수 로 세척 한 후 3 × 106 세포 / ㎖ 가 되 도록 φ 60 페트리 디시 에 분주 하 여 10 % FBS 와 10 nmol 의 인슐린 과 덱사메타손 및 1 % 의 항생제 가 포함 된 둘 베 코즈 변형 이 글 즈 배지 ( Dulbecco ' s Modified Eagle ' s Medium ; DMEM ) 를 사용 하 여 37 ℃, 95 % O 2 , 5 % CO 2 배양기 에서 하루 동안 배양 하 면서 안정 화 시켰 다 . 그 후 각각 1 ㎎, 100 ㎍, 10 ㎍, 1 ㎍, 100 ng , 10 ng , 1 ng , 100 pg , 10 pg 및 1 pg 의 혼합 희 토 를 배양액 에 첨가 하 여 간세포 의 생존 율 을 일정 시간 배양 후 트립 판 블루 ( typhan blue ) 로 염색 하 여 측정 하 였 다 .