총 RNA 는 mirVana PARIS extraction kit ( Ambion ) 를 이용 하 여 타액 상층 액 300 ㎕ 로부터 추출 되 었 다 . RNA 추출 시 오염 시키 는 DNA 를 제거 하 기 위해 On - column DNase treatment ( Qiagen ) 를 사용 하 였 다 . 총 RNA ( 3 ng ) 는 the TaqMan miRNA Reverse Transcription Kit ( Applied Biosystems ) 를 이용 하 여 상보 적 인 DNA 로 전환 되 었 다 . 하 기 표 5 와 같이 , 두 세트 의 stem - loop RT 프라이머 ( human pool A 및 human pool B ) ( Megaplex RT primers , Applied Biosystems ) 를 사용 하 였 다 . 역전사 후 , RT 생성물 은 TaqMan PreAmp Master Mix ( Applied Biosystems ) 및 Megaplex PreAmp primer ( Applied Biosystems ) 으로 예비 증폭 되 었 다 . miRNA 를 정량 하 기 전 에 는 예비 증폭 생성물 을 희석 하 지 않 았 다 . miRNA 를 정량 하 는데 TaqMan Human miRNA array set version 3 . 0 ( Applied Biosystems ) 및 TaqMan Universal PCR Master Mix ( no AmpErase uracil N - glycosylase ) 를 사용 하 였 다 . 모든 반응 은 7900 HT Fast Real - Time PCR System containing a special cardholder ( Applied Biosystems ) 에서 수행 되 었 다 . 데이터 는 usingRQManager 소프트웨어 버전 1 . 2 및 DataAssist 소프트웨어 버전 3 . 0 ( Applied Biosystems ) 을 이용 하 여 분석 되 었 다 . Δ Cq 값 은 [ Δ Cq = ( 각 바이오 마커 후보 의 기존 Cq 값 ) - ( 참고 유전자 인 U 6 소핵 RNA 로 전사 된 RNA 중합효소 Ⅲ 의 Cq 값 ) ] 으로 계산 되 었 다 .