초 나선 화 된 DNA pBR 322 ( 100 ng , Thermo , USA ) 를 topo II α ( USB Corp . , USA ) 3 units 와 37 ℃ 에서 30 분 간 인 큐 베이 션 하 고 , topo II 정지액 을 첨가 하 여 반응 을 종료 시킨 후 단백질 가수 분해 효소 K ( Sigma - Aldrich , USA ) 를 45 ℃ 에서 30 분 간 처리 하 여 분해 시켰 다 .