HLA DR 이 결실 된 유도 만능 줄기세포 의 HLA DR 이 전혀 기능 을 하 지 않 는지 정확히 확인 하 기 위하 여 , 유도 만능 줄기세포 를 수지상 세포 ( dendritic cell ; DC ) 로 분화 시켜 확인 하 였 다 . 보다 자세 하 게 는 , growth factor - reduced Matrigel 로 코팅 되 어 있 는 6 - 웰 플레이트 에 유도 만능 줄기세포 를 접종 하 고 , 80 ng / mL 의 BMP 4 가 첨가 된 mTeSR 1 배지 에서 4 일 동안 배양 하 였 다 ( STEP 1 ) . 그리고 2 mM 의 글 루타 맥스 ( gluramax , Invitrogen ) , 80 ng / mL 의 hVEGF , 100 ng / mL 의 hSCF , 및 25 ng / mL 의 basic FGF 가 첨가 된 StemPro - 34 serum free medium 로 교체 하 고 6 일 동안 배양 한 후 에 ( STEP 2 ) , 다시 50 ng / mL 의 hSCF , 50 ng / mL 의 IL - 3 , 50 ng / mL 의 hFlt - 3 ligand , 50 ng / ml 의 M - CSF , 및 5 ng / mL 의 Thrombopoietin 이 첨가 된 StemPro - 34 medium 으로 교체 해 주 었 다 . 그리고 다시 13 일 내지 15 일 동안 배양 한 후 에 ( STEP 3 ) , 50 ng / mL 의 hFlt - 3 ligand , 50 ng / mL 의 M - CSF , 및 25 ng / mL 의 GM - CSF 이 첨가 된 StemPro - 34 medium 으로 교체 하 고 , 3 일 마다 새로운 배지 로 교체 하 며 16 일 내지 28 일 동안 추가 로 배양 하 였 다 ( STEP 4 ) . 그리고 CD 14 conjugated bead ( MicroBeads ) 를 세포 에 처리 하 여 CD 14 양성 세포 를 autoMACS pro ( Miltenyi Biotec ) 를 이용 하 여 분리 하 였 다 . 분리 된 CD 14 양성 수지상 세포 를 성숙 시키 기 위하 여 , Ultra - Low Attachment Surface 6 - well plate ( Corning ) 에 수지상 세포 를 접종 하 고 , 10 % 의 우태 아 혈청 , 50 ng / mL 의 GM - CSF , 및 50 ng / mL 의 IL - 4 가 첨가 된 RPMI 배지 를 이용 하 여 5 일 동안 배양 하 고 , 100 mg / mL 의 LPS 및 20 ng / mL 의 TNF α 를 첨가 하 여 2 일 동안 추가 로 배양 하 였 다 ( STEP 5 ) . 그리고 각각 의 스텝 마다 FACS 를 이용 하 여 확인 하 고 , 확인 된 수지상 세포 를 분리 하 였 다 . 또한 , 정상 유도 만능 줄기세포 로부터 분화 된 정상 수지상 세포 ( WT iPS - DC ) 와 HLA DR 이 결실 된 유도 만능 줄기세포 로부터 분화 된 HLA DR 이 결실 된 수지상 세포 ( KO iPS - DC ) 는 유리 슬라이드 위 에 올리 고 , CYTOSPIN 4 ( Thermo Scientific ) 및 Giemsa stain 을 이용 하 여 염색 하 고 , 광학 현미경 으로 관찰 하 였 다 . 실험 방법 은 도 12 에 , 결과 는 도 13 및 14 에 나타내 었 다 .