칼 세인 - 방출 세포독성 분석 을 위해 , 표시 된 표적 세포 를 배양액 으로부터 회수 하 고 , FCS 불 포함 RPMI 1640 배지 로 세척 하 고 , 37 ℃ 에서 FCS 불 포함 RPMI 1640 배지 에서 30 분 동안 10 　 μ M 칼 세인 AM ( Invitrogen / Molecular Probes , cat . : C 3100 MP ) 으로 표지 시켰 다 . 세 척 후 에 , 표지 된 세포 를 완전 RPMI 배지 ( 10 % 열 - 불활성화 FCS , 4 　 mM L - 글루타민 , 100 　 U / mL 페니실린 G 소디 움 , 100 　㎍/ mL 스트렙토마이신 술 페이트 로 보충 된 RPMI 1640 배지 ) 에 재현 탁 시켰 다 . 2 개 의 재 현물 ( duplicate ) 로 , 둥근 - 바닥 96 - 웰 마이크로 플레이트 의 개별 적 인 웰 에 200 　㎕/ 웰 의 총 부피 로 1 x 104 개 표적 세포 를 2 , 5 : 1 의 E : T 비율 로 일차 인간 NK - 세포 및 표시 된 항체 와 함께 접종 했 다 . 각 플레이트 에서 4 개 의 재 현물 ( quadruplicate ) 로 항체 의 부재 하 에 작동 자 ( effector ) 에 의한 자발 적 방출 ( spontaenous release ) , 최대 방출 및 표적 의 사멸 을 결정 했 다 .