각각 의 이중 특이 적 항체 의 응고 촉진 활성 은 , 주어진 항체 농도 에서 유리 FIXa 에 의한 FX 활성 화 와 관련 된 배수 자극 ( fold stimulation ) 으로서 보고 된다 . 이중 특이 적 항체 는 , 분석 완충액 ( 50 mM HEPES , 100 mM NaCl , 5 mM CaCl 2 , 0 . 1 % ( w / v ) PEG 8000 , pH 7 . 3 + 1 mg / ml BSA ) 중 의 125 pM 인간 혈장 유래 FIXa ( Haematologic Technologies Inc , 미국 ) 및 500 μ M 25 : 75 포스파티딜 세린 : 포스파티딜 콜린 인지질 소포 ( Haematologic Technologies Inc , 미국 ) 와 10 분 동안 의 사전 배양 ( pre - incubation ) 에 의해 8 가지 농도 ( 분석 완충액 중 에서 의 연속 3 배 희석 에 의해 이루어짐 ) 에서 시험 하 였 다 . 그런 다음 , 인간 혈장 유래 FX ( Haematologic Technologies Inc , 미국 ) 를 25 nM 의 농도 로 첨가 하 여 활성 화 를 시작 하 였 다 . 실온 에서 15 분 의 활성 화 후 , 25 μ l ? 치 완충액 ( 50 mM HEPES , 100 mM NaCl , 60 mM EDTA , 0 . 1 % PEG 8000 , pH 7 . 3 + 1 mg / ml BSA ) 을 첨가 하 여 반응물 ( 50 μ l ) 을 ? 칭하 였 다 . FXa 의 생성량 은 25 μ l 2 mM S - 2765 발색 기질 ( Chromogenix , 스웨덴 ) 을 첨가 하 고 , 마이크 로 플레이트 판독기 에서 405 nm ( Δ OD / min ) 에서 의 흡광 측정치 에 의해 발색 기질 변환 의 측정 함 으로써 결정 하 였 다 . 유사 하 게 , 유리 FIXa 에 의한 FX 활성 화 는 25 nM 의 FIXa 농도 및 60 분 의 반응 시간 에 결정 하 였 다 .