표적 단백질 내 의 HES 커플링 부위 는 IEX - 정제 된 HES - 단백질 접합체 를 펩티드 지도 화 함 으로써 확인 하 였 다 . 적합 한 프로테아제 를 이용 하 여 상기 접합체 를 분해 시키 고 ( 2 % 엔 도 프로테 이나 제 Lys - C , pH 8 . 6 , 37 ℃, 밤새 ) , 이 로써 생성 된 단편 을 , TFA 를 수반 한 산 성 수 / 아 세토 니트릴 구배 를 이용 하 여 C 4 칼럼 ( 공급 처 : Phenomenex , Jupiter ) 상 에서 역상 크로마토그래피 함 으로써 분리 하 였 다 . 단백질 내 의 HES 화 부위 는 표적 단백질 단독 의 대 조군 분해 물 과 비교 해서 크로마토그램 에서 각각 의 펩티드 가 감소 되 거나 소멸 되 는 것 에 의해 간접 적 으로 확인 할 수 있 었 다 .