서열 번호 3081 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 용해 완충제 부피 는 400 μ L 이 었 고 , 용해 물 은 20 배 희석 되 었 다 . 이전 라운드 로부터 의 유익 한 돌연변이 가 재조합 된 라이브러리 의 스크리닝 을 위해 , 검정 은 100 μ L 반응 부피 에서 10 μ L 의 희석 된 용해 물 및 0 . 15 g / L SUS SFP 서열 번호 1764 를 사용 하 고 8 mM 레바 우디 오시드 A 의 기질 로딩 및 0 . 2 mM ADP ( Sigma , > 95 %) 및 24 mM 수크로스 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 2 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 60 ℃. 반응물 은 상기 한 바 와 같이 희석 하 고 , 켄 칭 하 고 , 분석 하 였 다 . 레바 우디 오시드 A 에 대한 SuS 와 연결 된 글 루 코 실트 랜스 퍼라 제 활성 을 갖 는 생성 된 조작 된 변이체 가 표 50 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 라운드 11 포화 돌연변이 유발 라이브러리 에 대해 , 스크리닝 은 상기 설명 한 바 와 같이 수행 하 되 , 10 mM 레바 우디 오시드 A 의 기질 로딩 을 사용 하 였 다 . 생성 된 조작 된 GT 변이체 폴리펩티드 는 표 50 . 2 에 열거 되 어 있 다 . 여러 변이체 에 대해 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 성장 시키 고 , 용해 시키 고 , 분말 로 동결 건조 시켰 다 .