재조합 S . 피 오 게 네스 Cas 9 단백질 ( SEQ ID NO : 236 ) 을 에스 케 리키아 콜라 이 로부터 정제 하 고 , 리보 핵단백질 ( RNP ) 복합체 를 발생 시키 기 위해 crRNA 및 tracr 로 구성 된 합성 이중 gRNA ( dgRNA ) 와 복합체 화 하 였 다 . 연구 에 사용 된 gRNA 표적 화 도메인 의 목록 및 서열 을 표 1 에서 보여준다 . 대부분 의 gRNA 서열 은 HBG 1 및 HBG 2 프로모터 영역 둘 모두 에서 완벽 한 표적 또는 단지 1 또는 2 개 미스 매치 만 가진다 . 이러 한 상황 은 인간 베타 글 로 빈 유전자좌 내 에서 HBG 유전자 의 중복 ( duplication ) 으로 인한 것 이 다 . RNP 복합체 를 물질 및 방법 하 에 기재 된 바 와 같이 전기 천공 을 통해 CD 34 + HSPC 내 로 전기 천공 시켰 다 . RNP 복합체 의 전달 전 에 세포 를 확장 시켰 다 . 이론 으로 결부 시키 고자 하 는 것 은 아니 지만 , 활동 적 으로 분열 하 는 세포 는 전기 천공 에 의해 전달 된 RNP 복합체 의 흡수 ( uptake ) 를 용이 하 게 할 수 있 다 .