인간 α CD 3 IL - 2 분석법 : 인간 전혈 을 헤파린 처리 주사기 ( Baxter ( Deerfield , IL ) ) 내 에 수집 하 고 , 아쿠 스핀 튜브 ( Sigma ( St . Louis , MO ) ) 상 에 층상 화 시키 고 , 15 분 동안 2000 rpm 에서 원심 분리 하 였 다 . 백혈구 연층 을 수집 하 고 , PBS ( Sigma ( St . Louis , MO ) ) 로 세정 하 고 , 적혈구 를 물 로 용해 시켰 다 . T 세포 를 인간 CD 3 + 강화 칼럼 ( R & D ( Minneapolis , MN ) ) 에 의해 분리 하 고 , 카 운 팅 하 고 , 10 ％ 송아지 태아 혈청 ( Hyclone ( Logan , UT ) ) , 10 mM HEPES , 1 ％ 페니실린 - 스트렙토마이신 , 2 mM L - 글루타민 및 0 . 1 mM 비 - 필수 아미노산 ( 모두 깁 코 ( Gibco ) ) 을 함유 하 는 RPMI 배지 ( Gibco ( Grand Island , NY ) 에서 1 × 106 개 / ㎖ 로 조정 하 였 다 . 동시 에 , 인간 항 - CD 3 ε 클론 # UCHT 1 ( R & D systems ( Minneapolis , MN ) ) 을 24 웰 플레이트 ( Costar ( Corning , NY ) ) 내 에 PBS 내 의 2 . 5 ㎍/㎖ 로 놓 고 , 2 시간 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 PBS 로 3 회 세정 하 고 , 1 × 106 개 / 웰 의 T 세포 , OX 40 항체 ( 또는 IgG 2 KLH 대 조군 ) 의 단계 희석 물 및 F ( ab ') 2 염소 항 - 인간 IgG Fc γ ( 2 . 5 ㎍/㎖ 로 첨가 ) 를 웰 에 첨가 하 여 , 가교 시켰 다 . 상등 액 을 48 시 및 72 시 에 수집 하 여 , IL - 2 수준 을 ELISA ( R & D ) 에 의해 평가 하 였 다 .