올리 고 FPLS 1 및 FPLS 3 를 사용 하 여 템 플레이트 로서 코 스미드 43 및 Taq DNA 폴리머 라 제 를 사용 하 면서 표준 PCR 반응 으로 악 티 노신 네마 미 룸 으로부터 gdmM 상 동체 의 내부 단편 을 증폭 시켰 다 . 생성 된 793 bp PCR 생성물 을 SmaI 으로 선형 화 된 pUC 19 으로 클로닝 하 여 , 플라스미드 pLSS 301 을 생성 하 였 다 . 클로닝 된 영역 을 서열 분석 한 결과 , gdmM 과 상당 한 상동 성 을 갖 는 것 으로 나타났 다 . 악 티 노신 네마 프레티 오 숨 아종 프레티 오 숨 의 막베 신 생합성 유전자 클러스터 의 mbcM 유전자 의 서열 을 사용 하 여 코 스미드 43 ( 에이 . 미 룸 ) 으로부터 증폭 된 유전자 단편 을 정렬 한 결과 , 이 들 서열 ( 디 제너 레이트 올리고 의 서열 에 의해 지시 되 는 영역 은 제외 ) 간 에 단지 1 bp 만 이 차이 가 났 다 . 증폭 된 서열 은 에이 . 미 룸 의 막베 신 클러스터 의 mcbM 유전자 로부터 의 것 으로 가정 되 었 다 . 플라스미드 pLSS 301 을 EcoRI / HindIII 으로 분해 시키 고 , 단편 을 EcoRI / HindIII 으로 분해 시킨 플라 ㅅ , 미드 pKC 1132 ( Bierman et al . , 1992 ) 으로 클로닝 하 였 다 . 생성 된 플라스미드 ( pLSS 308 로 명명 ) 은 아프 라 마이신 내성 이 며 에이 . 미 룸 mbcM 유전자 의 내부 단편 을 포함 한다 .