단계 1 : 2 - MeTHF ( 194 mL ) 중 의 화합물 24 ( 4 . 86 g ) 에 1 , 1 '- 카르보닐 - 다이 -( 1 , 2 , 4 - 트리아졸 ) ( CDT ) ( Sigma - Aldrich , Cat # 21861 ) 2 . 084 g ( 3 당량 ) 을 첨가 하 였 다 . 반응 혼합물 을 실온 에서 5 시간 동안 교반 하 였 고 LC - MS 는 반응 이 완료 된 것 을 보여 주 었 다 . 반응 혼합물 을 그런 후 물 로 세척 하 고 ( 49 mL x 3 ) ( 상 분리 를 위해 적 은 양 의 NaCl 이 필요 함 ) , ( 주 : 습식 용액 은 밤새 안정 적 임 ) 무수 황산 나트륨 상 에서 건조 시켰 다 . 용제 를 증발 시켜서 고체 ( 5 . 833 g ) 를 얻 었 다 . 그 고체 및 MMAE ( 25 ) 3 . 646 g ( 1 . 3 당량 ) 을 2 - MeTHF ( 29 mL ) 에 용해 시켰 다 . 4 mL 의 2 - MeTHF 중 의 1 - 하이드 록 시 벤조 트리아졸 수화물 ( HOBt ) ( 0 . 15 g , 0 . 2 당량 ) ( Sigma - Aldrich , Cat # 711489 ) 을 증발 시켜서 부피 를 약 1 / 2 로 감소 시켰 다 . 농축 된 HOBt 용액 을 그런 후 반응 혼합물 에 첨가 하 고 , 그것 을 55 ℃ 에서 60 시간 동안 교반 하 였 다 . 반응 을 물 로 세척 하 여 ( 29 mLx 4 ) 과잉 MMAE 및 HOBt 를 제거 하 고 무수 황산 나트륨 상 에서 건조 시켰 다 . 용제 를 EtOAc 로 교환 하 고 그 결과 로 얻 어 지 는 용액 을 Biotage 칼럼 위 에 로딩 하 엿 다 . EtOAc 중 의 5 % MeOH 를 사용 하 여 생성물 을 용출 하 여 4 . 914 g ( 62 % 수율 ) 의 화합물 26 을 제공 하 였 다 . 분석 용 LC - MS : t R = 2 . 22 분 , m / z ( ES +) 실측치 1894 . 1 .