플라스미드 pUZ 8002 를 갖 는 에 쉐 리키아 콜리 ET 12567 를 전기 천공 에 의해 pLSS 315 로 형질전환 시켜 접합 을 위한 이 . 콜리 공 여자 균주 를 생성 하 였 다 . 이러 한 균주 를 사용 하 여 증식 형 접합 에 의해 BIOT - 3870 을 형질 전환 시켰 다 ( Matsushima et al . , 1994 ) . 경 접합 개체 를 MAM 배지 ( 1 % 밀 전분 , 0 . 25 % 옥수수 침지 고형물 , 0 . 3 % 효모 추출물 , 0 . 3 % 탄산칼슘 , 0 . 03 % 황산 제 1 철 , 2 % 한천 ) 에 도말 하 고 , 28 ℃ 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 24 시간 후 50 mg / L 아프 라 마이신 및 25 mg / L 날리딕스산 으로 중첩 시켰 다 . pLSS 315 는 BIOT - 3870 에서 복제 할 수 없 으므로 , 아프 라 마이신 내성 콜로니 는 , 상동 체의 플라스미드 - 매개 영역 을 통한 상동성 재조합 에 의해 염색체 로 통합 된 플라스미드 를 포함 하 는 형질전환 체 인 것 으로 예상 되 었 다 .