인간 GITRL , OX 40 L , 4 - 1 BBL 을 발현 하 는 L 세포 들 은 본 발명 이 속한 기술 분야 에서 의 지식 을 습득 하 고 있 는 인간 들 이 이해 하 는 것 처럼 레트로바이러스 가 매개 하 는 형질도입 을 이용 하 여 생성 한다 . 간략 하 게 설명 하 면 , 인간 유래 GITRL ( Accession # NM _ 005092 ) , OX 40 L ( Accession # NM _ 003326 ) , 4 - 1 BBL ( Accession # NM _ 003811 ) , ICOSL ( Accession # NM _ 015259 ) 의 전장 암호 화 염기 서열 을 HSV - 1 으로 자극 한 PBMC 로부터 마련 한 RNA 를 이용 한 RT - PCR 로 증폭 한다 . 그 이후 cDNA 를 MSCV 에 기반 한 레트로바이러스 벡터 pMIGW 2 안 에 클로닝 하 고 결과물 로 나오 는 플라스미드 를 제한 효소 로 잘라 낸 다음 DNA 염기 서열 분석 으로 확인 한다 . 재조합 레트로바이러스 를 생산 하 기 위하 여 , 각각 의 벡터 는 팩 키 징 컨스 트럭 트 ( packaging construct ) pCL - gp ( gag / pol ) 와 pHCMV - VSVg ( VSV 글 라이코 단백질 ( glycoprotein ) 봉투 ) 와 함께 HEK 293 T 세포 에 동시 - 형질 감염 ( co - transfect ) 한다 . 이틀 후 에 바이러스 를 함유 한 배양 상층 액 을 회수 하 여 moi 100 에 CD 32 L 세포 를 감염 시키 는 데 사용 한다 . 이러 한 조건 에서 > 95 % 의 세포 들 이 생산 적 으로 형질 전환 하 였 다 .