PCS 의 가수 분해 를 1 mM 황산 망간 - 50 mM 아세트산나트륨 , pH 5 . 0 중 에서 1 . 0 ml 의 총 반응 부피 및 50 mg / ml 의 PCS 농도 를 사용 하 는 1 . 6 ml 딥 - 웰 플레이트 ( Axygen , Santa Clara CA ) 를 사용 하 여 수행 하 였 다 . M . thermophila 폴리펩티드 ( GH 61 A 및 GH 61 F ) 를 염기 셀룰라아제 혼합물 의 단백질 농도 의 0 내지 25 % 의 범위 에 있 는 농도 에서 염기 셀룰라아제 혼합물 에 첨가 하 였 다 . 168 시간 동안 50 ℃ 에서 배양 을 하 였 다 . 분석 을 3 중 으로 수행 하 였 다 . 알리 쿼트 를 원심 분리 하 였 고 , 상청 액 액체 를 플레이트 원심분리기 ( SORVALL ® RT 7 , Thermo Fisher Scientific . Waltham , MA , USA ) 를 사용 하 여 3000 rpm 에서 10 분 동안 원심 분리 ( MULTISCREEN ® HV 0 . 45 μ m Millipore , Billerica , MA , USA ) 로 여과 하 였 다 . 즉시 사용 되 지 않 았 을 때 , 여과 가수 분해 물 알리 쿼트 를 - 20 ℃ 에서 냉동 시켰 다 . 0 . 005 M H 2 SO 4 에서 0 . 05 % w / w 벤조산 과 함께 희석 한 샘플 의 당 농도 를 4 . 6 x 250 mm AMINEX ® HPX - 87 H 컬럼 ( Bio - Rad Laboratories , Inc . , Inc . , Hercules , CA , USA ) 으로부터 0 . 6 ml / 분 의 유속 에서 65 ℃ 에서 0 . 05 % w / w 벤조산 과 함께 순수 한 당 샘플 ( Absolute Standards Inc . , Hamden , CT , USA ) 에 의해 조정 된 굴절 률 검출 로부터 글루코오스 및 셀로비오스 신호 의 통합 에 의한 정량 ( CHEMSTATION ®. AGILENT ® 1100 HPLC , Agilent Technologies , Santa Clara , CA , USA ) 으로 0 . 005 M H 2 SO 4 에 의한 용리 후 측정 하 였 다 . 결과 동등 물 을 각 반응 의 셀룰로오스 변환 의 백분율 을 계산 하 기 위해 사용 하 였 다 . 글루코오스 + 셀로비오스 당 으로 셀룰로오스 의 변환 의 정도 ( 변환 %) 를 하기식 을 사용 하 여 계산 하 였 다 :