도 73 내지 도 76 은 융합 단백질 이 항원 결합 도메인 을 다른 항원 결합 도메인 과 브릿지 시킬 수 있 음 을 추가 로 입증 한다 . 293 T 세포 는 , 제조자 지시 사항 에 따라 , 리포 펙 타민 2000 시약 ( ThermoFisher ) 을 이용 하 여 HER 2 또는 EGFR cDNA 발현 구축물 ( Genscript ) 을 이용 하 여 일시 적 으로 형질 감염 되 었 다 . 형질 감염 한 지 48 시간 후 , EDTA 용액 을 이용 하 여 조직 배양액 플레이트 로부터 세포 를 부드럽 게 제거 하 였 다 . FAC 완충액 으로 세척 한 후 , 형질 감염 된 세포 를 나타낸 발현 된 융합 단백질 을 함유 하 는 상등 액 과 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 모든 인 큐 베 이 션 은 4 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 차가운 FAC 완충액 중 에서 세포 를 세척 한 후 , HER 2 - huIgGFc 또는 EGFR - huIgGFc 중 어느 하나 를 2 ug / ml 첨가 하 고 , 세포 와 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 결합 된 융합 단백질 은 유세포 분석기 ( Accuri , BD Biosciences ) 상 에서 항 - huIgGFc - FITC 컨 쥬 게이트 된 항체 ( Jackson immunoResearch Laboratories , cat #: 100 - 096 - 098 ) 를 이용 하 여 검출 되 었 다 ( Jackson immunoResearch Laboratories , cat #: 100 - 096 - 098 ) .