생성 된 항체 의 결합 특성 을 전체 길 이 ANGPT 2 - His 단백질 ( R & D Systems ) 로 ELISA 검정 에서 평가 하 였 다 . 이 를 위해 Falcon 폴리스티렌 투명 강화 마이크 로 타이 터 플레이트 를 , PBS 에서 의 1 ㎍/ mL 재조합 인간 ANGPT 2 ( R & D Systems , 무 - 담체 ) 100 ㎕ 로 실온 에서 2 시간 또는 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 코팅 하 였 다 . 웰 을 300 ㎕ PBST ( 0 . 2 % 트윈 20 ) 로 3 회 세척 하 고 , 200 ㎕ 2 % BSA 0 . 1 % 트윈 20 으로 실온 에서 30 분 동안 블로킹 한 후 , 300 ㎕ PBST 로 3 회 세척 하 였 다 . 정제 된 < ANGPT 2 > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 , 및 참조 로서 야생 형 < ANGPT 2 > 항체 의 PBS ( Sigma ) 에서 의 연속 희석 물 100 ㎕/ 웰 을 웰 에 첨가 하 고 , 실온 에서 마이크 로 타 이터 플레이트 진탕기 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 웰 을 300 ㎕ PBST ( 0 . 2 % 트윈 20 ) 로 3 회 세척 하 고 , 결합 된 항체 를 검출 항체 로서 2 % BSA , 0 . 1 % 트윈 20 에서 의 100 ㎕/ 웰 0 . 1 ㎍/ ml F ( ab ')< hk > POD ( Biozol 카탈로그 번호 206005 ) 또는 100 ㎕/ 웰 0 . 1 ㎍/ ml F ( ab ')< hFc γ > POD ( Immuno research ) 로 실온 에서 마이크 로 타 이터 플레이트 진탕기 에서 1 시간 동안 검출 하 였 다 . 비 결합 된 검출 항체 를 300 ㎕/ 웰 PBST 로 3 회 세척 하 여 제거 하 고 , 결합 된 검출 항체 를 100 ㎕ ABTS / 웰 을 첨가 하 여 검출 하 였 다 . 405 nm 의 측정 파장 ( 참조 파장 492 nm ) 에서 Tecan Fluor 분광계 로 흡광도 를 측정 하 였 다 .