중 사슬 용 pHg 3 A - 3 플라스미드 벡터 ( plasmid vector ) 는 pyruvate dehydrogenase complex - E 2 ( PDO - E 2 ) 에 특이 적 으로 결합 하 는 Fab ( SP 112 ) 의 중 사슬 ( Fd 사슬 ) 을 내재 하 고 있 는 pHf 1 g 3 A - 2 파지 미드 벡터 ( phagemid vector ) 를 이용 하 여 제작 하 였 다 [ Joo et al . , Journal of Immunological Methods , 333 ( 2008 ) 24 - 37 ] . pHf 1 g 3 A - 2 벡터 에 Not Ⅰ , Sal Ⅰ 제한 효소 를 처리 한 후 , 획득 한 5 . 0 kb 의 DAN 단편 을 1 % 아가로스 겔 을 이용 하 여 분리 하 였 다 . 분리 된 5 . 0 kb 의 유전자 단편 에 3 unit 의 shrimp alkaline phosphatase ( USbio , USA ) 를 첨가 하 여 37 ℃ 에서 1 시간 동안 반응 시킨 후 , 다시 65 ℃ 에서 1 시간 동안 반응 시켜 효소 를 불활성화 시켰 다 . 두 개 의 올리 고 뉴클레오티드 ( 5 '- GGCCGCGCTAGCCCGCGGG - 3 ', 5 '- CGCGATCGGGCGCCCAGCT - 3 ') 를 서로 교반 하 여 90 ℃ 에서 5 분 동안 반응 시킨 후 , 30 분 동안 상온 에서 반응 시켜 어댑터 분자 ( adaptor molecule ) 를 획득 하 였 다 . 이후 , 상기 획득 한 5 . 0 kb DNA 단편 과 어댑터 분자 를 spectrophotometer ( Bio - rad , USA ) 로 정량 한 후 , T 4 DNA ligase 와 교반 하 여 16 ℃ 에서 4 시간 동안 반응 시켰 다 . 반응 완료 후 , 반응 액 을 TG 1 세포 에 2 . 5 kv , 25 μ F , 200 Ω 의 조건 으로 Gene - pulser Ⅱ ( Bio - rad , USA ) 를 이용 하 여 형질 전환 시켰 다 . 형질 전환 된 TG 1 세포 에 3 ml 의 2 x YT 배양액 을 첨가 하 여 37 ℃ 에서 1 시간 동안 배양 한 후 , 2 x YT / AC ( 2 x YT with 50 μ g / ml ampicillin , 10 μ g / ml carbenicillin ) 아가 플레이트 ( agar plate ) 에 도말 하 여 37 ℃ 에서 밤새 도록 ( overnight ) 배양 하 였 다 .