무 처리 BALB / c 마우스 ( ( 주 ) 오리엔트 바이 오사 ) 로부터 70 % 아이소프로필 알콜 로 소독 하 여 무균 적 으로 비장 을 적출 한 후 EBSS ( Earl ' s Balanced Salt Solution , Sigma 사 ) 에 담가 두 었 다 . 주사기 플런저 ( plunger ) 를 사용 하 여 비장 을 으깨 어 단일 세포 ( single cell ) 로 만든 후 15 ㎖ 튜브 에 담 고 5 분 간 실온 에 방치 하 였 다 . 찌꺼기 가 가라앉 으면 파스퇴르 파이 펫 을 이용 해 상층부 만 을 새 튜브 로 옮겨 담 았 다 . 이 를 1 , 200 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 상층부 는 버리 고 비장 세포 펠 렛 ( pellet ) 만 을 분리 하 였 고 , 이 를 10 % FBS , 2 mM L - 글루타민 , 100 단위 / ㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 이 보충 된 RPMI 1640 배지 에 현 탁 하 였 다 . 이때 , 상기 세포 현탁액 의 농도 는 ㎖ 당 1 × 106 개 의 세포 가 되 도록 하 였 다 .