본원 에 기재 된 인간 모노클 로 날 항체 를 생산 하 는 하이브리도마 를 생성 하 기 위해 , 면역 화 된 마우스 로부터 비장 세포 및 / 또는 림프절 세포 를 단리 하 고 적절 한 불멸 화 세포주 , 예컨대 마우스 골수종 세포주 에 융합 시킬 수 있 다 . 생성 되 는 하이브리도마 는 항원 - 특이 적 항체 의 생산 에 대해 스크리닝 될 수 있 다 . 예 를 들 어 , 면역 화 된 마우스 로부터 의 비장 림프구 의 단세포 현탁액 을 50 % PEG 를 갖 는 Sp 2 / 0 비분 비 마우스 골수종 세포 ( ATCC , CRL 1581 ) 에 융합 시킬 수 있 다 . 세포 를 대략 2 x 105 개 로 편평 바닥 마이크 로 타이 터 플레이트 에 플 레이팅 하 고 , 이어서 10 % 태아 클론 혈청 , " 18 % "" 653 "" 조건 화 배지 ", 5 % 오리겐 ( IGEN ) , 4 mM L - 글루타민 , 1 mM 피루브산 나트륨 , 5 mM HEPES , 0 . 055 mM 2 - 메르 캅 토 에탄올 , 50 단위 / ml 페니실린 , 50 mg / ml 스트렙토마이신 , 50 mg / ml 겐타마이신 및 1 X HAT ( 시그마 ) 를 함유 하 는 선택 배지 에서 2 주 인 큐 베이 션 한다 . 대략 2 주 후 에 , HAT 를 HT 로 대체 한 배지 에서 세포 를 배양 할 수 있 다 . 이어서 , 개별 웰 을 인간 모노클 로 날 IgM 및 IgG 항체 에 대해 ELISA 에 의해 스크리닝 할 수 있 다 . 광범위 한 하이브리도마 성장 이 일어나 면 , 통상 적 으로 10 - 14 일 후 에 배지 를 관찰 할 수 있 다 . 항체 분비 하이브리도마 를 재 플 레이팅 하 고 , 다시 스크리닝 하 고 , 인간 IgG 에 대해 여전히 양성 인 경우 에 는 , 모노클 로 날 항체 를 한계 희석 함 으로써 적어도 2 회 서브 클로닝 할 수 있 다 . 이어서 , 안정 한 서브 클론 을 시험관 내 배양 하 여 조직 배양 배지 중 에 특징화 를 위한 소량 의 항체 를 생성 할 수 있 다 .