상기 < 3 - 1 > 과 동일 한 대 조군 및 실험 군 마우스 의 신장 을 0 . 3 M 수크로오스 , 25 mM 이미다졸 , 1 mM EDTA , 8 . 5 μ M 루 펩 틴 , 1 mM 페닐 메틸 설포닐 플루오르 를 함유 한 차가운 분리 용액 ( pH 7 . 2 ) 에 넣 고 균질 화 하 였 다 ( Ultra - Turrax T 8 균질 화 기 , IKA Labortechnik , Germany ) . 균질 화 된 액 으로부터 큰 세포 파쇄 물 및 핵 을 제거 하 기 위하 여 4 , 000 × g , 4 ℃ 에서 15 분 간 원심 분리 한 후 상등 액 을 취득 하 였 다 . 총 단백질 농도 를 Bio - Rad 단백질 분석 키트 ( Bio - Rad , CA ) 를 사용 하 여 브래드포드 법 에 의해 측정 하 였 다 . 시료 내 최종 단백질 농도 가 동일 하 게 되 도록 분리 용액 으로 조절 하 고 , 램 나이 ( Laemmli ) 시료 완충액 에서 65 ℃ 로 15 분 동안 용해 한 후 - 20 ℃ 에서 저장 하 였 다 . 상기 시료 를 10 % 폴리아 크릴 젤 에 로딩 하 여 SDS - PAGE 를 수행 하 였 다 . 단백질 을 니트로셀룰로오스 멤 브레인 ( Amersham , UK ) 으로 옮긴 다음 , 이 를 5 % 우유 가 함유 된 PBS - T ( 80 mM Na 2 HPO 4 , 20 mM NaH 2 PO 4 , 100 mM NaCl , 0 . 1 % Tween 20 , pH 7 . 5 ) 로 1 시간 동안 블로킹 한 후 일 차 항체 로서 α - SMA 항체 ( 1 : 2000 희석 , Sigma , 미국 ) 및 E - 카드 헤 린 항체 ( 1 : 100 희석 , R & D systems , 미국 ) 를 처리 하 여 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 반응 시키 고 HRP - 결합 된 2 차 항체 ( P 447 또는 P 448 , 1 : 3000 희석 ; DAKO , 덴마 크 ) 와 반응 시켰 다 . 이 를 ECL 시스템 을 사용 하 여 시각 화 한 후 필름 ( Amersham , UK ) 에 노출 하 였 다 . 밴드 밀도 는 필름 스캐닝 및 표준 화 된 농도계 값 에 의하 여 정량 화 하 였 다 . 웨스턴 블롯 팅 시 로딩 대 조군 으로 는 β - 액틴 을 사용 하 였 다 . 실험 은 독립 적 으로 3 회 반복 하 였 고 , 대 조군 에 대해서 백 분 율 로 나타내 었 다 . 데이터 의 통계 분석 은 상기 실시 예 < 2 - 2 > 와 동일 한 방법 으로 수행 하 였 다 .