먼저 , 내열 성 을 측정 하 기 위하 여 동결 건조 된 레반 - Phytase 나노 복합체 를 50 mM sodium acetate ( pH 5 . 5 ) 버퍼 에 용해 시켰 다 . 내열성 측정 은 50 ℃ 에서 23 시간 동안 열처리 후 , 잔류 phytase 활성 을 측정 하 여 분석 하 였 다 . Phytase 활성 측정 은 ammonium molybdate blue assay 방법 으로 수행 되 었 다 . 이 를 위하 여 2 mM phytic acid sodium salt hydrate ( Sigma - Aldrich ) 기질 45 ul 와 효소 5 ul 혼합 하 여 37 ℃ 에서 10 분 간 반응 하 였 다 . 반응 후 5 % TCA 용액 50 ul 를 첨가 하 여 반응 을 정지 시킨 후 2 % ammonium molybdate 와 2 . 5 % ferrous sulfate 용액 을 혼합 한 reagent 75 ul 를 이용 하 여 발색 시킨 후 400 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 효소 의 활성 단위 ( unit ) 는 1 분당 유리 된 1 umole 의 무기 인산 을 생성 하 는 효소 의 양 으로 정의 하 였 다 . 대 조군 으로 는 정제 된 YwPhy 를 사용 하 였 다 .