단일 PDH 폴리뉴클레오티드 상 에 PDH 바이패스 유전자 ( Ald 6 및 AcsL 641 P ) 를 사용 하 여 , PDH 바이패스 공 여체 폴리뉴클레오티드 를 pCRISPR 를 이용 하 여 출아 형 효모 ( S . cerevisiae ) 로 공동 - 형질 전환 시켰 다 ( co - tranformed ) . 형질 전환 은 지 에츠 ( Gietz ) 에 의해 기재 된 바 와 같이 리튬 아세테이트 ( lithium acetate ) 열 충격 법 에 의해 수행 되 었 다 . pCRISPR 플라스미드 는 Cas 9 를 발현 하 는데 , 이 는 gRNA 분자 에 의해 출아 형 효모 ( S . cerevisiae ) 게놈 의 선택 된 위치 를 표적 으로 한다 . 그 위치 에서 , Cas 9 단백질 은 DNA 에서 이중 가닥 파열 ( double stranded break ) 을 생성 한다 . PDH 바이패스 공 여체 폴리뉴클레오티드 는 CRISPR 반응 으로 공 여체 폴리뉴클레오티드 로서 사용 된다 . Ald 6 , AcsL 641 P , 프로모터 , 및 터미네이터 를 포함 하 는 PDH 바이패스 공 여체 폴리뉴클레오티드 는 상동 재조합 에 의해 파열 부위 인 , 부위 19 에서 게놈 으로 통합 하 여 , 균주 HB 82 를 생성 한다 .