17 ) - 2 - 1 에서 얻 어 진 배양 상청 으로부터 각종 이중 특이 성 분자 를 Protein A 어피 니티 크로마토그래피 , 하이드 록 시아파 타이트 크로마토그래피 , 및 양 이온 교환 크로마토그래피 의 3 단계 공정 으로 정제 하 였 다 . 상세 하 게 는 , PBS pH 7 . 4 로 평형 화 한 MabSelectSuRe 컬럼 ( GE Healthcare Bioscience 사 ) 에 배양 상청 을 어 플라이 하 여 , 목적 의 이중 특이 성 분자 를 흡착 시켰 다 . 비 흡착 성분 을 PBS 로 제거 한 후 , 100 mM 아세트산 버퍼 pH 3 . 5 로 흡착 성분 을 용출 시켰 다 . 용출 획 분 은 즉시 Tris 버퍼 pH 9 . 0 으로 pH 를 중성 으로 조제 한 후 , 50 mM HEPES , 10 mM 인산 칼륨 , 및 100 mM 염화 나트륨 용액 으로 투석 하 고 , 하이드 록 시아파 타이트 컬럼 Bio - Scale CHT Type - I ( BioRad Laboratories 사 ) 에 어 플라이 하 였 다 . 직선 적 농도 구배 법 에 의해 용매 중 의 염화 나트륨 농도 를 0 . 1 M 로부터 1 M 까지 변화 시키 는 것 에 의해 , 흡착 한 목적 의 이중 특이 성 분자 를 용출 시켰 다 . 얻 어 진 피크 획 분 을 SDS - PAGE 로 해석 하 여 , 목적 의 이중 특이 성 분자 에 상당 하 는 획 분 을 회수 하 였 다 . 다음 으로 회수 한 획 분 의 버퍼 를 50 mM HEPES pH 8 . 0 및 20 mM 염화 나트륨 용액 으로 교환 한 후 , 양 이온 교환 컬럼 Mono S ( GE Healthcare Bioscience 사 ) 에 어 플라이 하 였 다 . 직선 적 농도 구배 법 에 의해 용매 중 의 염화 나트륨 농도 를 20 mM 로부터 1 M 까지 변화 시키 는 것 에 의해 , 흡착 한 목적 의 이중 특이 성 분자 를 용출 시켰 다 . 얻 어 진 피크 획 분 을 SDS - PAGE 로 해석 하 여 , 목적 의 이중 특이 성 분자 에 상당 하 는 획 분 을 회수 하 였 다 . 마지막 으로 회수 한 획 분 을 HBsor ( 25 mM 히스티딘 , 5 % 소르비톨 ) pH 6 . 0 으로 투석 하 고 , 필터 로 여과 한 후 , 정제 샘플 로 하 였 다 . 정제 샘플 은 질량 분석 , SDS - PAGE , 및 SEC 분석 에 의해 , 목적 의 항 - GPRC 5 D - 항 - CD 3 이중 특이 성 분자 가 틀림없 는 것 을 확인 하 였 다 .