인간 CD 137 에 대해 특이 적 인 쥐과 단 클론 성 항체 의 패널 을 고친 화 도 결합 을 나타내 는 항체 에 대해 스크리닝 하 였 다 . 3 개 의 항체 를 추가 연구 를 위해 선택 하 였 다 . 이러 한 평가 에 대하 여 , 정제 된 pan T - 세포 ( 상기 참조 ) 를 항 - CD 3 / CD 28 비즈 로 ( 세포 : 비즈 = 1 : 1 ) 72 시간 동안 IL - 2 ( 100 U / mL ) 의 존재 하 에 자극 하 였 다 . 100 μ L 의 활성 화 된 T 세포 ( 1 . 0 x 106 세포 / mL ) 및 100 μ L 의 연속 희석 된 ( 5 - 또는 10 - 배 희석 ) 테스트 물품 ( 항체 또는 이중 특이 적 디아 바디 ) 을 미세 역가 검정 플레이트 ( 들 ) 의 각 웰 에 첨가 하 고 , 혼합 한 후 실온 에서 45 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 를 FACS 완충액 으로 세척 하 고 이 차 항체 ( 항 - 인간 - Fc 영역 - APC ) 를 그런 후 각 웰 에 첨가 하 였 고 ; 혼합 하 고 실온 에서 30 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 그런 후 세포 를 FACS 완충액 으로 세척 한 다음 T 세포 표면 마커 항체 ( V 510 으로 표지 화 된 항 - CD 4 , 및 FITC 로 표지 화 된 항 - CD 8 ) 를 각 웰 에 첨가 하 였 고 ; 혼합 하 고 실온 에서 30 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 를 세 척하 고 100 μ L FACS 완충액 에 재현 탁하 고 세포 사건 집단 에 대해 유동 세포 분석 ( BD LSR Fortessa 또는 FACSCanto ll ) 에 의해 분석 하 였 다 . 데이터 분석 을 FloJo v 10 을 통해 수행 하 였 다 .