MSA 및 PD 뇌 조직 으로부터 의 뇌 균질 물 을 상기 기재 된 바 와 같이 생성 하 였 다 . 각각 의 뇌 균질 물 의 200 μ l 를 , PBS ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 의 첨가 에 의해 400 μ l 의 총 부피 가 되게 하 였 다 . 희석 된 샘플 을 100 , 000 x g 에서 30 분 동안 4 ℃ 에서 원심 분리 하 여 고분자 량 응 집체 를 단리 하 였 다 . 펠릿 을 200 μ l PBS 중 에 재현 탁 시켰 다 . 4 X NuPAGE 로딩 염료 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 50 μ l 및 NuPAGE 10 X 환원제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 20 μ l 를 펠릿 균질 물 130 μ l 에 첨가 하 였 다 . 샘플 을 95 ℃ 에서 의 5 분 인 큐 베이 션 에 의해 변성 시킨 다음 , 샘플 10 μ l 를 4 - 12 % NuPAGE 비스 - 트리스 겔 상 에서 1 X MES 구동 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 를 사용 하 여 분획 화 하 였 다 . 겔 을 200 V 에서 50 분 동안 전개 시킨 후 , 0 . 4 μ m 니트 로 셀룰로스 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 로 30 V 에서 1 시간 동안 옮겼 다 . 이어서 , 블롯 을 TBST ( 0 . 1 % 트윈 - 20 함유 TBS ( 프로 메가 ( Promega ) ) ) 중 5 % 우유 중 에서 차단 하 였 다 . 이어서 , 블롯 을 TBST 중 1 % BSA ( 바이오 라드 ( BioRad ) ) 중 에 1 : 5000 으로 희석 된 하 기 항체 와 함께 진탕 하 면서 4 ℃ 에서 밤새 프로 빙 하 였 다 : 4 B 12 ( 바이오 레전드 ) , 4 D 6 ( 바이오 레전드 ) , Syn - 303 ( 바이오 레전드 ) , 81 A ( 바이오 레전드 ) , EP 1536 Y ( 압 캠 ) , LB 509 ( 바이오 레전드 ) , 마우스 IgG ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) , 항 - 액틴 ( 시그마 ) . 모든 항체 를 바이오 라드 EZ - 연결 접합 키트 를 사용 하 여 HRP 에 접합 시켰 다 . 밤샘 인 큐 베이 션 후 , 블롯 을 TBST 로 세척 하 였 다 . HRP - 표지 된 항체 를 슈퍼 시그널 웨스트 펨토 맥시멈 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ) 검출 시약 을 사용 하 여 검출 하 였 고 , GE AI 600 CCD 카메라 를 사용 하 여 영상 을 포획 하 였 다 .