HepG 2 세포 에 퓨 로 마이신 ( puromycin ) 에 저항 을 보이 는 ACK 1 플라스미드 를 형질 감염 시켰 다 . 3 일 후 에 FLAG 태그 가 부착 된 ACK 1 이 발현 되 는 세포 만 을 선별 하 기 위하 여 , 세포 에 퓨 로 마이신 1 ㎍/ mL 를 처리 한 후 , 살 아 있 는 세포 만 을 선별 하 였 다 . 선별 한 세포 를 회수 하 여 웨스턴 블롯 팅 ( western blotting ) 을 수행 하 였 다 . 구체 적 으로 , RIPA 버퍼 로 세포 를 용해 하 고 , SDS - PAGE 로 단백질 을 분리 하 여 PVDF 멤 브레인 에 옮겼 다 . 5 % 스킴 밀크 ( 5 % non - fat dry skim milk ) 를 이용 하 여 블로킹 ( blocking ) 한 후 , 1 : 2 , 000 으로 희석 한 항 - FLAG - M 2 ( Cat . #. A 5316 , Sigma ) 항체 로 ACK 1 단백질 을 검출 하 였 다 . 대 조군 으로 ACK 1 유전자 를 포함 하 지 않 는 플라스미드 인 pIRES 만 을 도입 한 세포주 를 제작 하 여 ACK 1 단백질 발현 을 비교 하 였 다 .