플라스미드 KG 10075 로부터 의 LIN 5 sgRNA 를 프라이머 를 사용 하 여 증폭 시켰으며 , 이 에 의해 포워드 프라이머 는 또한 T 7 폴리머 라 아 제 프로모터 를 포함 하 였 다 . 이어서 , PCR 생성물 을 Probe Quant G 50 Micro column ( GE Healthcare ) 상 에 침전 시키 고 정제 한 다음 , Ampliscribe T 7 Flash Transcription Kit ( Epicentre ) 를 사용 하 여 시험관 내 RNA 합성 을 위한 주형 으로서 사용 하 였 다 . ssDNA / RNA Clean and Concentrator kit ( ZymoResearch ) 를 사용 하 여 sgRNAs 를 정제 및 농축 하 고 Qubit 상 에서 정량 화 하 였 다 .