Raw 264 . 7 ( 마우스 대식세포 주 ) 는 한국 세포주 은행 ( KCLB ) 에서 분양 받 아 사용 하 였으며 , 10 % FBS , 페니실린 ( 100 unit / mL ) , 스트렙토마이신 설 페이트 ( 100 ㎍/ mL ) 가 포함 된 DMEM 배지 에서 37 ℃, 5 % 이산화 탄소 의 습기 있 는 환경 에서 배양 하 였 다 . RAW 264 . 7 을 DMEM 배지 를 이용 하 여 5 × 105 세포 / mL 로 24 웰 에 1 mL 씩 시 딩 ( seeding ) 하 고 , 하룻밤 동안 방치 한 후 배지 를 갈 아 준 다음 약물 을 적당 농도 로 처리 했 다 . 1 시간 동안 인 큐 베이 션 한 후 LPS 를 1 ㎍/ mL 로 처리 하 고 24 시간 ( 또는 적당 한 시간 ) 동안 인 큐 베이 션 했 다 . 상등 액 을 취하 여 5 배 희석 했 다 . NSB ( Non Specific Binding ) 웰 에 150 μ L 의 분석 버퍼 를 넣 고 , 100 μ L 의 분석 버퍼 를 영점 표준 ( B 0 ) 웰 에 넣 었 다 . 나머지 웰 에 100 μ L 의 표준 샘플 을 넣 고 50 μ L 의 PGE 2 컨 쥬 게이트 를 넣 었 다 ( NSB 제외 ) . 50 μ L 의 PGE 2 항체 용액 을 넣 고 2 시간 동안 진탕 하 였 다 . 각 웰 을 흡인 ( suction ) 하 고 세 척 버퍼 로 5 회 세척 했 다 . 200 μ L 의 pNPP ( para - nitrophenyl phosphate ) 기질 을 전체 웰 에 넣 고 1 시간 동안 bench 내 에서 상온 보관 한 후 50 μ L 의 정지액 을 넣 고 405 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 측정 한 흡광 도 값 과 표준 곡선 을 이용 하 여 PGE 2 생성량 을 정량 하 고 LPS 만 단독 처리 한 군 과 비교 하 여 50 % 를 저해 하 는 농도 ( IC 50 ) 를 구하 였 다 .