pTrcKudzuKan 을 PstI 으로 소화 시키 고 , SAP 으로 처리 하 고 , 열 사 멸 시키 고 겔 정제 하 였 다 . 이 를 합성 RBS 를 갖 는 S . 세레비 지에 로부터 의 idi 를 인코딩 하 는 PCR 생성물 에 라 이게 이 션 하 였 다 . PCR 용 프라이머 는 NsiI - YIDI 1 F 5 '- C A T C A A T G C A T C G CCCTTAGGAGGTAAAAAAAAATGAC ( SEQ ID NO : 16 ) 및 PstI - YIDI 1 R 5 '- C CTTCTGCAGGACGCGTTGTTATAGC ( SEQ ID NO : 17 ) 이 고 ; 주형 은 S . 세레 비지 에 게놈 DNA 였 다 . PCR 생성물 을 NsiI 및 PstI 으로 소화 시키 고 , 라 이게 이 션 하 기 전 에 겔 정제 하 였 다 . 라 이게 이 션 혼합물 을 화학 적 수용성 TOP 10 세포 에 형질 전환 하 고 , 50 ㎍/㎖ 카나마이신 을 함유 하 는 LA 상 에서 선별 하 였 다 . 여러 형질 전환 체 를 선별 하 고 서열 분석 하 고 , 생성 된 플라스미드 를 pTrcKudzu - yIDI ( kan ) 로 지칭 하 였 다 ( 도 34 및 35 ) .