23 신호 펩티드 가 결여 된 , 인간 콜라겐 IX 의 NC 4 의 유전자 ( GenBank accession number NM _ 001851 ) 는 , 관절 연골 유래 의 인간 연골 세포 로부터 추출 한 RNA 를 이용 한 역전사 PCR 로 , 수득 하 였 다 . 인간 연골 세포 를 10 % FCS 가 보충 된 알파 - MEM 매질 에 접종 하 였 다 . 세포 가 융합 되 면 ( confluent ) , 트립신 처리 하 고 원심 분리 하 여 세포 펠 렛 으로 수집 하 였 다 . RNeasy ® Mini Kit ( QiaGen Pty Ltd , Melbourne , Australia ) 로 세포 펠 렛 으로부터 전체 RNA 를 추출 하 였 다 . 제조자 의 지시 에 따라 플 라티 늄 택 ( Platinum Taq ) 을 이용 한 SuperScript ™ One - Step RT - PCR 로 ( Invitrogen , Melbourne , Australia ) 역전사 PCR 를 수행 하 였 다 . 상류 및 하류 프라이머 는 각각 KL - NC 451 및 KL - NC 431 였 다 ( 표 4 ) . 30 분 간 55 ℃ 에서 1 사이클 로 cDNA 합성 을 수행 한 후 , 2 분 간 94 ℃ 에서 전 변성 ( pre - denaturation ) 한 후 , PCR 증폭 을 40 사이클 수행 하 였 다 ( 변성 : 94 ℃ 에서 30 초간 ; 아닐 링 : 55 ℃ 에서 30 초간 ; 확장 : 72 ℃ 에서 1 분 간 ) . RT - PCR 생성물 은 0 . 8 % 아가로스 겔 로 분리 하 고 , SNAP ™ 겔 정제 ( Invitrogen , Melbourne , Australia ) 로 정제 시켰 다 .