플라스크 배양 조건 은 다음 과 같 았 다 . E . coli 균주 는 - 80 ℃ glycerol stock 에서 부터 5 mL LB 배지 ( 10 g / L tryptone , 5 g / L yeast extract , 10 g / L NaCl ) 에 접종 하 여 37 ℃ 200 rpm 에서 12 시간 동안 배양 하 였 다 . 12 시간 후 , LB 배지 에서 배양 한 균주 1 mL 을 300 mL 배 플 플라스크 의 50 mL MR 배지 에 ( 추가 로 20 mg / L of L - tryptophan and 10 mg / L of thiamine 첨가 ) 접종 하 여 37 ℃ 200 rpm 에서 배양 하 였 다 . 접종 한 지 6 시간 후 OD 600 이 0 . 6 ~ 0 . 8 에 도달 하 였을 때 , 1 mM 의 IPTG 를 첨가 하 였 다 . 플라스크 배양 은 균주 접종 후 60 시간 동안 진행 하 였 다 .