이 들 미니 - 라이브러리 의 조합 ( 각각 하나 의 위치 가 돌연변이 되 어 20 개 의 변이체 가 생성 됨 ) 은 더 큰 친화력 결합 을 유도 하 는 임의 의 위치 에 대해 이스트 표면 디스플레이 를 사용 하 여 선택 된 작 은 라이브러리 를 생성 하 였 다 . TfR 정점 도메인 단백질 을 사용 하 여 상기 기재 된 바 와 같이 선별 을 수행 하 였 다 ( 도 22 ) . 3 라운드 의 분류 ( sorting ) 후 , 농축 이스트 라이브러리 로부터 의 클론 을 서열 화 하 고 , " 특정 점 돌연변이 가 정점 도메인 단백질 에 대한 결합 을 유의 하 게 개선 시키 는 몇몇 "" 핫 - 스팟 ( hot - spot ) "" 위치 가 확인 되 었 다 . 클론 CH 3 C . 35 의 경우 ", 이 들 돌연변이 는 E 153 ( Trp , Tyr , Leu , 또는 Gln 로 돌연변이 됨 ) 및 S 188 ( Glu 로 돌연변이 됨 ) 를 포함 하 였 다 . 상기 CH 3 C . 35 단일 및 복합 돌연변이체 의 서열 은 서열 번호 : 21 - 23 , 236 - 241 , 및 297 - 299 에서 제시 된다 . CH 3 C . 18 의 경우 , 이 들 돌연변이 는 E 153 ( Trp , Tyr , 또는 Leu 로 돌연변이 됨 ) 및 K 165 ( Gln , Phe , 또는 His 로 돌연변이 됨 ) 를 포함 하 였 다 . CH 3 C . 18 단일 돌연변이 의 서열 은 서열 번호 : 242 - 247 에 제시 된다 .