ktaExplorer 크로마토그래피 시스템 ( GE Healthcare , 카탈로그 번호 18 - 1112 - 41 ) 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 친화 도 정제 단계 를 위해 사용 된 완충액 시스템 은 20 mM 의 인산나트륨 ( pH 7 . 2 ) , 150 mM 의 염화나트륨 으로 이루어진 평형 완충액 및 10 Mm 의 포름산 ( pH 3 . 5 ) 으로 이루어진 용리 완충액 및 0 . 4 M 의 인산나트륨 ( pH 9 . 0 ) 으로 구성 된 pH 조절 완충액 이 었 다 . 세포 상청 액 을 사전 평형 화 된 kappaSelect SuRe 칼럼 에 임의 의 조절 없이 직접 적용 하 였 다 . 칼럼 을 10 칼럼 부피 의 평형 완충액 으로 세척 하 고 , Fab 분자 를 약 5 컬럼 부피 의 용리 완충액 중 에서 등 용매 방식 으로 ( isocratically ) 용리 하 였 다 . 풀 링 된 ( pooled ) 분획 의 pH 는 용리 직후 에 기술 된 pH 조절 완충액 을 사용 하 여 중성 으로 조절 하 였 다 . Fab 분자 를 추가 로 정제 하 고 , 칼럼 에 사전 에 채워둔 겔 여과 수지 를 사용 하 여 완충액 을 교환 하 였 다 . 크기 배제 크로마토그래피 에 사용 된 런닝 완충액 ( running buffer ) 은 25 mM HEPES 및 150 mM 염화나트륨 , pH 7 . 4 였 다 . Fab 분자 는 약 0 . 5 컬럼 부피 에서 단일 피크 로서 용리 하 였 다 . 피크 에 포함 하 는 분획 은 , Agilent LC 1100 / 1200 시스템 상 에 설정 된 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피 ( SE - HPLC ) 를 사용 하 고 , BIOSep - SEC - S 3000 300 ? 7 . 8 mm 칼럼 ( Phenomenex , 카탈로그 번호 00 H - 2146 - K 0 ) , 및 200 mM 의 인산나트륨 ( pH 6 . 9 ) , 300 mM 의 염화나트륨 및 10 % 이소프로판올 로 구성 된 런닝 완충액 ( running buffer ) 을 사용 하 여 분석 하 였 다 . 이러 한 분석 에 기초 하 여 , 분획 을 풀 링 하 여 균질 단백질 조 제물 을 수득 하 였 다 . 최종 조 제물 은 분당 1 ml 의 유속 으로 대략 10 분 의 보유 시점 에 대칭 피크 로서 용리 되 었 다 .