10 % FBS ( Sigma ) 가 보충 된 1 : 1 고 글루코스 DMEM / Ham 의 F - 12 매질 ( Invitrogen ) 100 ㎕ 중 평균 100 , 000 개 의 세포 를 포함 하 는 부 유액 으로서 제조 된 , 인간 면역 선택 적 Stro - 1 + 전구 세포 ( Mesoblast Ltd , Melbourne , Australia ) 를 , 마이크 로 피펫 을 사용 하 여 , 24 웰 배양 플레이트 의 웰 에 위치 한 , 제조 콜라겐 스폰지 블록 의 중심 부분 에 주입 한다 . 콜라겐 스폰지 는 , 0 . 5 cm 3 큐브 로 미리 잘라 낸 , 멸균 젤 폼 ( Gelfoam ) ( Pharmacia & Upjohn Co . , Kalamazoo , MI ) 이 다 . 각 웰 에 2 mL 의 배지 + FBS 를 가하 고 , 플레이트 를 48 시간 동안 37 ℃, 5 % CO 2 / 95 % 공기 에서 인 큐 베이 션 시켰 다 . 그 후 추가 48 시간 동안 배지 를 , 다양 한 농도 의 PPS ( 0 , 0 . 1 , 0 . 5 , 1 . 0 , 2 . 5 , 5 . 0 , 10 . 0 , 25 . 0 ㎕/ ml ) 함유 10 % FBS ( Sigma ) 로 보충 된 , 1 : 1 고 글루코스 DMEM / Ham 의 F - 12 매질 ( Invitrogen ) 로 교체 한다 . 모든 농도 의 PPS 는 3 회 배양 된다 . 그 후 , 매질 은 , 지정 된 농도 의 PPS 및 5 μ Ci / ml 의 35 S - H 2 SO 4 ( Perkin Elmer , USA ) 를 포함 하 는 , 정의 된 매질 로 교체 한다 . 48 시간 인 큐 베이 션 후 실험 을 종결 하 며 , 이때 전술 한 바 와 같이 스폰지 의 콜라 게나 제 소화 후 , ( 35 S - GAGs ) 가 배지 로 유리 되 기 때문 에 , PG 생합 성 은 35 SO 4 를 PG 에 결합 시켜 측정 함 으로써 , 결정 된다 .