일차 6 개 사람 V κ 유전자 절편 및 5 개 사람 J κ 유전자 절편 을 함유 한 약 110 , 499 bp 사람 게놈 절편 을 조작 하 여 사람 J κ 5 유전자 절편 의 PI - Scel 부위 431 bp 하류 ( 3 ') 를 도입 하 였 다 . 마우스 중쇄 유전자좌 의 마우스 중쇄 인트론 인 핸 서 , IgM 스위치 영역 ( S μ ) 및 IgM 유전자 를 함유 한 약 7 , 852 bp 게놈 단편 의 5 ' 말단 에 다른 PI - Scel 부위 를 도입 하 여 다 . 이 마우스 단편 을 약 110 . 5 kb 사람 단편 과 결합 시켜 3 ' 상동 암 으로서 사용 하 였 고 , 이 로 인해 5 ' 부터 3 ' 으로 약 110 . 5 kb 의 사람 κ 경쇄 유전자좌 게놈 서열 , 일차 6 개 연속 V κ 유전자 절편 및 5 개 J κ 유전자 절편 , PI - Scel 부위 , 약 7 , 852 bp 의 마우스 중쇄 서열 ( 마우스 인트론 인 핸 서 , S μ 및 마우스 IgM 불변 유전자 를 함유 ) 를 함유 하 는 3 ' 접합부 가 형성 되 었 다 . 사람 V κ 1 - 6 유전자 로부터 의 상류 ( 5 ') 은 마우스 중쇄 유전자좌 의 서열 5 ' 에 상응 하 는 19 , 752 bp 의 마우스 게놈 DNA 를 함유 한 5 ' 마우스 상동 암 의 개시 전 에 추가 3 , 710 bp 의 사람 κ 서열 이 다 . 5 ' 상동 암 과 사람 κ 서열 의 개시 사이 에 3 개 의 재조합 효소 인식 부위 에 연결 된 네오마이신 카세트 가 위치 하 였 다 ( 참조 : 표적 화 벡터 , 도 2 ) . 사람 κ 서열 의 일차 삽입 을 위한 최종 표적 화 벡터 는 5 ' 부터 3 ' 으로 중쇄 유전자좌 의 마우스 게놈 서열 5 ' 약 20 kb 를 함유 한 5 ' 상동 암 , 일 차 재조합 효소 인식 부위 ( R 1 ) , 네오마이신 카세트 , 이 차 재조합 효소 인식 부위 ( R 2 ) , 삼 차 재조합 효소 인식 부위 ( R 3 ) , 약 110 . 5 kb 의 사람 게놈 κ 서열 ( 일차 6 개 연속 사람 V κ 유전자 절편 및 5 개 사람 J κ 유전자 절편 을 함유 ) , PI - Scel 부위 및 3 ' 상동 암 ( 인트론 인 핸 서 , S μ 및 마우스 IgM 불변 유전자 를 포함 한 약 8 kb 의 마우스 게놈 서열 ) 을 포함 하 였 다 ( 참조 : 도 2 , 표적 화 벡터 1 ) . 이 표적 화 벡터 와 의 상동 재조합 은 재조합 시 하이브리드 중쇄 ( 즉 , 사람 V κ 도메인 과 마우스 CH 영역 ) 의 형성 을 유도 하 는 내인성 마우스 중쇄 불변 유전자 에 작동 적 으로 연결 된 6 개 사람 V κ 유전자 절편 과 5 개 사람 J κ 유전자 절편 을 함유 한 변이 마우스 중쇄 유전자좌 를 형성 하 였 다 .