C 2 C 12 세포 를 6 well plate 에 6 × 105 cells / well 씩 분주 하 여 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 24 시간 후 에 세포 분화 를 시키 기 위해 분화 배지 로 교체 하 였 고 , 6 일 동안 이틀 에 한 번 씩 배지 를 교환 해 줬 다 . 6 일 후 참당귀 추출물 50 ㎍/㎖ + TNF - α 20 ng / ml 를 처리 하 여 다시 48 시간 동안 반응 시켰 다 . 반응 이 끝난 후 RIPA buffer 와 100 x PI ⅠⅡⅢ 를 넣 어서 Lysis 를 진행 하 여 단백질 추출 을 진행 하 였 다 . 10 % gel 에 SDS - PAGE 진행 후 PVDF membrane 에 transfer 를 진행 하 였 고 , 그 후 First antibody 1 : 500 , 4 ℃ overnight 시켰 다 . 상온 에서 secondary antibody 1 : 10000 , chemiluminescence ( ECL ) detection reagent 로 항원 항체 반응 을 확인 하 였 다 .