실시 예 1 에 따른 난자 의 체외 성숙 38 - 42 시간 후 0 . 1 % ( w / v ) 히아 루 로니 다 아제 ( hyaluronidase ) 가 첨가 된 체외 성숙 배양액 내 에서 난자 를 부드럽 게 피펫 팅 함 으로 써 난자 에 부착 되 어 난구 세포 를 제거 하 였 다 . 난구 세포 제거 후 형태학 적 으로 정상 이 라고 판단 되 는 난자 를 선별 하 여 TLH - BSA 로 2 회 세정 한 후 핵 이 식 에 이용 하 였 다 . 체외 성숙 난자 를 5 ㎍/ ml 사이토 칼라 신 B ( cytochalasin B ) 및 5 ㎍/ ml 비스 벤지 미드 ( bis benzimide ) 가 들 어 있 는 미세 조작 배양액 에서 10 - 15 분 간 정치 시킨 후 미세 조작 용 배양액 의 미소 적 으로 옮겨 탈핵 용 피펫 ( 내경 16 - 17 mm ) 을 이용 하 여 제 1 극체 및 중기 염색체 ( metaphase chromosome ) 를 흡인 , 제거 하 였 다 . 이 과정 에서 난자 를 자외선 에 순간 적 으로 노출 시켜 탈핵 여부 를 확인 하 였 다 . 탈핵 이 끝난 난자 는 새로운 미세 조작 용 배양액 으로 옮겨 공여 핵 세포 주입 전 까지 39 ℃ 에서 정치 하 였 다 . 이때 , 난자 미세 조작 용 배양액 으로 는 헤페스 완충 티 로 이드 배지 ( Hepes buffered Tyrode ' s medium , Bavister et al . , Biol Reprod 28 , 235 - 24 , 1983 ) 에 0 . 4 %( w / v ) 소혈 청알 부민 및 0 . 6 mM 시스테인 을 첨가 하 여 사용 하 였 고 , 핵 이 식란 의 체외 배양액 으로 는 글루코스 를 제거 한 NCSU - 23 배양액 ( North Carolina State University - 23 ) 에 0 . 5 mM 피루브산 ( pyruvate ) , 5 . 0 mM 젖산 ( lactate ) 을 첨가 하 여 사용 하 였 다 ( Park et al . , Zygote 2005 , 13 , 269 - 27 , 2005 ) .