아데노신 A 1 및 A 3 수용체 를 발현 하 는 중국 햄스터 난소 ( CHO , ATCC ; 미국 세포주 은행 No . CCL - 61 ) 세포 들 은 10 ％ 소 태아 혈청 ( FBS ) 과 페니실린 / 스 트 렙 토마 이 신 ( 100 유 니트 / ㎖ 와 100 ㎍ / ㎖) 을 포함 하 는 F - 12 ( Gibco 사 , 미국 ) 배지 에서 37 ℃, 5 ％ 이산화 탄소 의 조건 하 에서 배양 되 어 사용 되 었 다 . 50 / 10 / 1 완충 용액 을 시험관 에 넣 고 , 적합 한 hAR 가 발현 된 CHO 세포 일정량 과 각 아데노신 A 1 및 A 3 수용체 에 선택 적 으로 결합 하 는 표지 리간드 ( 1 nM [ 3 H ] CCPA 및 0 . 5 nM [ 125 I ] AB - MECA 를 혼합 시켰 다 . 여러 농도 의 본 발명 의 유도체 를 디 메틸 술 폭 시드 ( DMSO ) 에 먼저 용해 시킨 후 , 완충 용액 과 희석 되 는데 , DMSO 의 최종 농도 는 1 ％ 를 초과 하 지 않 도록 주의 하 며 , 37 ℃ 항온조 에서 1 시간 동안 배양 시킨 후 세포 수집 기 ( TOMTEC 사 , 미국 ) 를 사용 하 여 신속히 감압 여과 하 였 다 . 계속 해서 , 시험관 은 3 ㎖ 완충액 으로 3 회 세척 한 후 , 방사성 을 γ - 카운터 를 사용 하 여 결정 하 였 다 . 비 특이 적 결합 ( Nonspecific binding ) 은 전체 결합 을 측정 하 기 위한 조건 과 동일 한 조건 에서 , 비 표지 리간드 인 5 '- N - 에틸 카 복사 미 도마 데 노신 ( NECA ) 의 10 μ M 존재 하 에서 결정 되 며 , 평형 상수 인 Ki 값 은 [ 125 I ] AB - MECA 의 Kd 값 이 1 . 48 nM 이 라는 가정 하 에 쳉 - 프루 소프 ( Cheng - Prusoff ) 방정식 에 의거 하 여 결정 하 였 다 . 특이 적 결합 은 전체 결합 에서 비 특이 적 결합 을 감산 하 여 산출 하 였 다 . 이렇게 측정 된 특이 적 결합 으로부터 여러 가지 수용체 에 대한 각각 의 시료 의 결합 친화도 를 구하 였 다 .