생성 된 항체 의 결합 특성 을 IGF - 1 R 세포 외 도메인 ( ECD ) 으로 의 ELISA 검정 법 에서 평가 하 였 다 . 이 를 위해 , N - 말단 His - 스 트 렙 타비 딘 결합 펩티드 - 태그 ( His - SBP ) 에 융합 된 알파 사슬 의 인간 IGF - 1 R 엑 토 도메인 의 LI - 시스테인 풍부 - 12 도메인 및 본래 의 선도자 서열 을 포함 하 는 IGF - 1 R 의 세 포외 도메인 ( 잔기 1 ~ 462 ) ( McKern et al . , 1997 ; Ward et al , 2001 에 따름 ) 을 pcDNA 3 벡터 유도체 내 에 클로닝 하 고 HEK 293 F 세포 에서 일시 적 으로 발현 시켰 다 . IGF - 1 R - His - SBP ECD 의 단백질 서열 을 SEQ ID NO : 10 에 제시 하 였 다 . StreptaWell High Bind 스 트 렙 타비 딘 A - 96 웰 마이크 로타 이터 플레이트 ( Roche ) 를 , 4 ℃ 에서 밤새 가용성 IGF - 1 R - ECD - SBP 융합 단백질 을 함유 하 는 100 ㎕/ 웰 세포 배 양물 상청 액 으로 코팅 하 고 , 200 ㎕/ 웰 PBS , 0 . 05 % Tween ( PBST , Sigma ) 으로 3 회 세척 하 였 다 . 이어서 , 각각 의 항체 , 및 참조 로서 1 % BSA ( 분획 V , Roche ) 를 포함 하 는 PBS 중 의 야생형 < IGF - 1 R > 항체 ( Sigma ) 의 연속 희석 물 100 ㎕/ 웰 을 상기 웰 에 첨가 하 고 실온 에서 마이크 로 타 이터 플레이트 쉐이 커 에서 1 ~ 2 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 연속 희석 을 위해 , 동량 의 정제 된 항체 를 상기 웰 에 적용 하 였 다 . 200 ㎕/ 웰 PBST 로 상기 웰 을 3 회 세척 하 고 , 마이크 로 타 이터 플레이트 쉐이 커 상 의 실온 에서 1 ~ 2 시간 동안 검출 항체 로서 0 . 1 ㎍/ mL ( 1 : 8000 ) 의 F ( ab ') 2 < hFc γ > POD ( Dianova ) 100 ㎕/ 웰 로 결합 된 항체 를 검출 하 였 다 . 200 ㎕/ 웰 PBST 로 3 회 세척 하 여 미 결합 검출 항체 를 제거 하 고 100 ㎕ ABTS / 웰 을 첨가 하 여 , 결합 된 검출 항체 를 검출 하 였 다 . Tecan Fluor 분광계 로 405 nm 의 측정 파장 ( 참조 파장 492 nm ) 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .