폴리 사카 라이드 는 담체 단백질 의 N - 말단 에서 의 아민 기 또는 CRM 197 내 39 개 리신 잔기 의 임의 의 측쇄 에 접합 될 수 있 다 . CRM 197 의 아미노산 서열 은 표 2 에 제공 되 며 , 여기 서 리신 ( K 로 약칭 됨 ) 은 밑줄 및 볼드체 이 다 . CRM 197 단백질 상 의 상이 한 부위 에서 의 폴리 사카 라이드 접합 의 위치 를 찾아내 고 접합 정도 를 정량 화 하 기 위해 , LC / UV / MS 펩티드 맵 핑 방법 을 사용 하 였 다 . 대표 적 인 접합체 샘플 ( DMSO 또는 수용액 으로 제조 됨 ) 을 트립신 으로 이중 으로 소화 시켜 트립신 펩티드 를 생성 하 였 다 . 이어서 , 혼합물 을 역상 C 18 칼럼 상 에서 분리 하 고 , UV 및 질량 분광계 에 의해 분석 하 였 다 . CRM 197 단백질 샘플 ( 폴리 사카 라이드 와 접합 되 지 않 음 ) 을 또 한 대 조군 으로서 동시 에 삼중 으로 처리 하 였 다 . 트립신 은 리신 및 아르기닌 잔기 의 C - 말단 측 상 에서 단백질 을 절단 하 기 때문 에 , 리신 잔기 에서 의 접합 은 그 부위 를 프로테아제 저항성 이 게 만든 다 . 특정 한 부위 에서 의 접합 정도 는 CRM 197 대 조군 과 비교 하 여 트립신 펩티드 의 피크 강도 의 감소 를 계산 함 으로써 결정 하 였 다 . 절단 부위 및 서열 에 따라 , 특정 한 펩티드 의 신호 감소 는 선행 펩티드 에서 의 리신 의 오 - 절단 , 또는 펩티드 의 말단 에서 의 리신 의 오 - 절단 , 또는 펩티드 서열 의 중간 에서 의 접합 으로 인한 것 일 수 있 다 .