RAW 264 . 7 세포주 와 iNOS - pro - RAW 세포주 에 대한 루시퍼 라 아제 활성 분석 은 통상 의 방법 으로 수행 하 였으며 , LPS 에 의하 여 iNOS - pro - RAW 세포주 에서 iNOS 프로모터 가 유전자 발현 을 유도 하 는지 를 확인 하 기 위해 다음 의 방법 을 실시 하 였 다 . 우선 96 well 에 iNOS - pro - RAW 세포주 2 . 5 X 105 개 를 분주 하 고 , 4 시간 뒤 에 새 배지 로 교체 후 LPS 를 1 ㎍/ mL 로 24 시간 동안 처리 하 였 다 . 이어 세포 배양액 을 제거 한 다음 , 1 X PBS 로 2 번 세척 하 고 리포터 라 이시스 완충 용액 ( Promega , USA ) 을 첨가 하 고 세포 를 모아 파괴 하 였 다 . 원심 분리 법 으로 얻 어 낸 상층 액 10 ㎕ 에 루시퍼 라 아 제 기질 액 ( promega , USA ) 40 ㎕ 를 첨가 한 후 루미 노 미터 ( Wallac 1420 , USA ) 를 이용 하 여 활성 을 측정 하 였 다 . 총 단백질 은 단백질 분석 염색액 ( Biorad , USA ) 을 이용 하 여 측정 한 다음 루시퍼 라 제 활성 을 보정 하 였 다 . LPS 를 처리 하 지 않 은 대 조군 과 의 활성 을 비교 하 였 다 ( 도 3 ) .