항 - CD 20 mAb 및 Fc γ RIIb 의 세포내 트래 피 킹 을 검출 하 기 위해 , CLL 세포 를 적절 한 Alexa 488 - 표지 mAb 와 함께 도 범례 에 표기 된 바 와 같이 다양 한 시간 동안 배양 한 다음 수거 , 세정 하 고 2 % 파라포름알데히드 로 고정 하 였 다 . 그 다음 , 각각 , Fc γ RIIb 및 LAMP - 1 의 검출 을 위해 , 세포 들 을 0 . 3 % 사포닌 으로 투과 가능 하 도록 하 고 , ( 제조자 의 프로토콜 에 따라 Alexa Fluor - 647 키트 ( Invitrogen ) 로 라벨 링 이 수행 된 ) Alexa - 647 - 표지 AT 10 F ( ab ') 2 및 / 또는 바이오틴 컨 주 게 이티 드 항 - 인간 CD 107 a ( LAMP - 1 ) ( eBioscience , UK ) 와 함께 배양 하 였 다 . 그 다음 , 세포 들 을 세정 하 고 , 스 트 렙 타비 딘 - Alexa Fluor - 547 ( Invitrogen ) 을 첨가 하 고 , 추가 세정 하 였 다 . 그 다음 , 세포 들 을 슬라이드 상 에 옮기 고 , TCS - SP 5 레이저 스캐닝 공 초점 현미경 ( Leica Microsystems , UK ) ( 10 x 접안 렌즈 , 100 x 대물렌즈 ) 에서 LAS - AF v 2 소프트웨어 를 이용 하 여 이미지 를 촬영 하 였 다 .