일 차 인간 조혈 줄기 세포 ( HSC ) 에서 베타 - 2 - 마이크 로 글로불린 ( B 2 M ) 유전자 를 넉 아웃 하 는 효율 을 측정 함 으로써 14 개 의 정제 된 스 트 렙 토코 커스 피 오 게 네스 Cas 9 ( SPyCas 9 ) 단백질 을 평가 하 였 다 . 이 들 단백질 을 3 개 의 그룹 으로 나누 었 다 : 제 1 그룹 은 개선 된 선택 성 을 갖 는 SPyCas 9 변이체 로 구성 되 었 다 ( 문헌 [ Slaymaker et al . 2015 , Science 351 : 84 ( e 1 . 0 , e 1 . 1 and K 855 A ) ; Kleinstiver et al . 2016 , Nature 529 : 490 ( HF ) ] ) . 제 2 그룹 은 절단 가능 한 TEV 부위 가 있 거나 없 는 상이 한 수 및 / 또는 위치 의 SV 40 핵 국재 화 신호 ( NLS ) 및 6 x 히스티딘 ( His 6 ) 태그 ( SEQ ID NO : 247 ) 또는 8 x 히스티딘 ( His 8 ) 태그 ( SEQ ID NO : 248 ) 를 갖 는 야생 형 SPyCas 9 , 및 구조 연구 를 위해 Cas 9 를 안정 화 시키 는 것 으로 보 고 된 ( 문헌 [ Nishimasu et al . 2014 , Cell 156 : 935 ] ) 2 개 의 시스테인 치환 ( C 80 L , C 574 E ) 을 갖 는 SpyCas 9 단백질 로 구성 되 었 다 . 제 3 그룹 은 상이 한 공정 에 의해 생산 된 동일 한 재조합 SPyCas 9 로 구성 되 었 다 ( 도 6 ) . B 2 M 넉 아웃 은 FACS 및 차세대 시퀀싱 ( NGS ) 으로 결정 하 였 다 .