mRNA 분자 를 얻 기 위해 , 총 RNA 는 샘플 로부터 분리 된다 . 총 RNA 의 분리 는 다양 한 방법 으로 수행 될 수 있 다 ( Sambrook , J . et al . , Molecular Cloning . A Laboratory Manual , 3 rd ed . Cold Spring Harbor Press ( 2001 ) ; Tesniere , C . et al . , Plant Mol . Biol . Rep . , 9 : 242 ( 1991 ) ; Ausubel , F . M . et al . , Current Protocols in Molecular Biology , John Willey & Sons ( 1987 ) ; and Chomczynski , P . et al . , Anal . Biochem . 162 : 156 ( 1987 ) ) . 예 를 들 어 , 세포 에서 총 RNA 는 트리 졸 ( Trizol ) 을 이용 하 여 분리 될 수 있 다 . 그 후 , cDNA 분자 는 분리 된 mRNA 분자 를 이용 하 여 합성 된 후 증폭 된다 . 본 발명 에 사용 된 총 RNA 분자 는 인간 샘플 에서 분리 된 이후 로 , mRNA 분자 는 폴리 - A 꼬리 ( poly - A tails ) 를 가지 며 dT 프라이머 와 역전사 효소 의 사용 에 의해 cDNA 로 변환 되 었 다 ( PNAS USA , 85 : 8998 ( 1988 ) ; Libert F , et al . , Science , 244 : 569 ( 1989 ) ; and Sambrook , J . et al . , Molecular Cloning . A Laboratory Manual , 3 rd ed . Cold Spring Harbor Press ( 2001 ) ) . 합성 된 cDNA 분자 는 이후 증폭 반응 에 의해 증폭 된다 .