항체 포획 , 펩티드 주입 / 회합 , 해리 를 위한 장기간 의 완충제 흐름 및 표면 재생 의 분석 사이클 을 다중 으로 사용 하 여 결합 을 평가 하 였 다 . 항체 포획 단계 를 위해 , 포획 될 항체 의 유형 에 따라 , CM 5 칩 에 단백질 A 또는 염소 항 - 마우스 Fc 를 고정 시켰 다 . 마우스 항체 를 제외 하 고는 , 각각 의 사이클 은 약 5 - 7 ㎕ 의 10 ㎍/㎖ 항 - N 3 pGlu 항체 를 5 ㎕/ 분 으로 주입 하 는 단계 ( 약 3 , 000 RU 를 포획 함 ) , 100 ㎕ 의 펩티드 를 50 ㎕/ 분 으로 주입 하 는 단계 ( 각각 의 사이클 에 대해 2 배 단계 희석 으로 1000 nM - 62 . 5 nM ) , 그 후 10 분 동안 해리 시키 는 단계 로 이루 어 졌 다 . 마우스 항체 에 대해서 는 , 유량 이 50 ㎕/ 분 이 었 고 , 20 ㎕ 의 50 ㎍/㎖ 의 마우스 항체 를 주입 하 였 다 . 두 경우 모두 , 20 ㎕ 의 10 mM 글리신 히 드 로 클로라이드 ( pH 1 . 5 ) 를 사용 하 여 칩 표면 을 재생 시켰 다 . 그 후 , 비 아이 밸류 에 이 션 ( BIAevaluation ) 분석 소프트웨어 내 의 1 : 1 결합 모델 을 사용 하 여 각각 의 사이클 에 대한 회합 및 해리 속도 로부터 결합 친화도 ( KD ) 를 수득 하 였 다 . 항 - N 3 pGlu 항체 인 B 12 L 및 R 17 L 및 모 ( parental ) 마우스 항체 ( mE 8 C ) 는 1 nM 미만 의 KD 로 N 3 pGlu A β 를 특이 적 으로 인식 하 였 다 . 항 - N 3 pGlu 항체 인 B 12 L 및 R 17 L 및 모 마우스 항체 ( mE 8 C ) 는 유사 한 친화도 로 pE 3 - 16 에 또한 결합 하 였 고 , 이 는 에 피토프 가 펩티드 의 이러 한 영역 내 에 위치 한다는 것 을 가리킨다 . 글리신 돌연변이체 펩티드 에 대한 항체 의 결합 분석 은 결합 에 결정 적 인 잔기 가 3 내지 7 이 었 음 을 나타냈 다 : 위치 3 의 pyroE , 위치 4 의 F , 위치 5 의 R , 위치 6 의 H , 위치 7 의 D . A β 1 - 40 에 대한 검출 가능 한 결합 은 본 발명 의 항체 에 대해 검출 되 지 않 았 다 .