최초 융합 약 1 시간 후 에 , 각 쌍 을 다른 세포질체 와 서로 융합 시키 고 활성 화 배지 ( 0 . 3 M 만니톨 , 0 . 1 mM MgSO 4 , 0 . 1 mM CaCl 2 및 0 . 01 % PVA ) 에서 동시 에 활성 화 시켰 다 . 0 . 6 kV / cm 및 700 kHz 의 AC 를 사용 하 여 , 하나 의 융합 된 쌍 과 하나 의 세포질체 를 전선 을 접촉 시키 는 융합 쌍 을 갖 는 융합 챔버 의 하나 의 전선 에 정렬 시킨 후 , 80 마이크로초 동안 0 . 85 kV / cm 의 단일 DC 펄스 를 사용 하 였 다 . 융합 을 T 10 방울 에서 관찰 하 였 고 , 재조합 배아 를 5 ㎍/㎖ 시토 칼라 신 B 와 10 ㎍/㎖ 시클 로 헥 시미 드 로 보충 된 돼지 접합체 배지 3 ( PZM - 3 ; Yoshioka et al . , 2002 ) 에 이동 시켰 다 . 38 . 5 ℃, 최대 습도 로 5 % CO 2 , 5 % O 2 및 90 % N 2 에서 4 시간 인 큐 베이 션 후 , 배양 전 에 배아 를 PZM - 3 배지 에서 3 회 세척 하 였 다 .