따라서 , 본 발명자 들 은 본 발명자 들 의 항체 들 의 내재 화 성질 을 분석 하 였 다 . 요약 하 건대 , EMEM 배지 + 15 % FCS 중 에서 배양 된 GM 05389 세포 ( 인간 폐 섬유 모세포 ) 를 탈착 시키 고 세척 하 고 카 운 팅 하 고 생존 력 에 대해 조사 하 고 0 . 2 mio ( 최소 확인 가능 한 차수 ) 세포 / 웰 의 밀도 로 12 - 웰 플레이트 에 시 딩 하 였 다 . 다음 날 , FAP 항체 4 G 8 및 3 F 2 ( 도 13 a ) 또는 4 G 8 단독 ( 도 13 b ) 을 냉각 된 배지 중 에 10 ㎍/㎖ 까지 희석 하 였 고 , 세포 를 얼음 상 에서 냉각 시켰 고 , 희석 된 항체 ( 0 . 5 ㎖/ 웰 ) 또는 배지 단독 을 표시 된 바 와 같이 첨가 하 였 다 . 그 후 , 세포 를 약하 게 교반 하 면서 냉장실 내 에서 30 분 동안 항온 처리 한 후 0 . 5 ㎖ 의 따뜻 한 배지 를 첨가 하 였 고 상기 세포 를 37 ℃ 에서 표시 된 시간 동안 추가 로 항온 처리 하 였 다 . 상이 한 시점 에 도달 되 었 을 때 , 세포 를 얼음 으로 옮기 고 냉각 된 PBS 로 1 회 세척 하 고 4 ℃ 에서 0 . 4 ㎖ 의 이 차 항체 ( 알렉사 플루오르 ( Alexa Fluor ) 633 - 접합 된 염소 항 - 인간 IgG , 몰레 큘라 프로브 스 ( Molecular Probes ) # A - 21091 , 2 mg / ㎖, 사용 1 : 500 ) 와 함께 30 분 동안 항온 처리 하 였 다 . 그 다음 , 세포 를 PBS / 0 . 1 % BSA 로 2 회 세척 하 고 96 - 웰 플레이트 로 옮기 고 4 ℃ 에서 4 분 동안 400 x g 로 원심 분리 하 였 고 , 세포 펠 렛 을 볼 텍 싱 으로 재현 탁하 였 다 . 세포 를 100 ㎕ 의 2 % PFA 를 사용 하 여 고정 시켰 다 . FACS 측정 을 위해 , 세포 를 샘플 당 200 ㎕ 의 PBS / 0 . 1 % BSA 에 재현 탁하 였 고 FACS 캔 토 II ( 소프트웨어 FACS 디바 ) 에서 플레이트 프로토콜 로 측정 하 였 다 . 이 들 실험 의 결과 는 도 13 a 및 13 b 에 제시 되 어 있 고 4 G 8 및 3 F 2 항 - FAP 항체 가 섬유 모세포 상의 FAP 의 내재 화 를 유도 하 지 않 는다는 것 을 보여준다 .