IFN β mRNA 정량화 를 위해 , 제조 업체 의 프로토콜 에 따라 총 RNA 를 RN 이 지 소형 키트 ( 퀴아젠 , 독일 ) 를 사용 하 여 단리 하 였 다 . IFN β mRNA 는 qPCR 검정 에 의해 정량 화 하 였 다 . 간략 하 게 , 총 RNA ( 400 ng 내지 1000 ng ) 를 슈퍼 스 크 립 VILO 매스 터 믹스 ( SuperScript VILO MasterMix ) ( 라이프 테크 놀 로지스 ( Life Technologies ) , 미국 ) 를 사용 하 여 60 - μ l 반응 부피 에서 cDNA 로 전환 하 였 다 . 획득 한 cDNA ( 10 ng ) 를 IFNB 1 ( Hs 01077958 _ s 1 ) 및 GAPDH ( Hs 99999905 _ m 1 ) 을 위한 RNA - 특이 적 프라이머 를 사용 하 는 어 플 라이드 바이오 시스템즈 택 맨 발현 검정 을 사용 하 여 후속 적 으로 증폭 시켰 다 . qPCR 분석 은 50 ℃ 에서 의 초기 2 - 분 단계 에 이어서 2 초 동안 95 ℃ 및 1 초 동안 95 ℃ 와 20 초 동안 60 ℃ 의 40 회 사이클 에 의해 , 어 플 라이드 바이오 시스템즈 퀀트 스튜디오 12 K 플렉스 실시간 PCR 시스템 상 에서 택 맨 패스트 어드밴스 드 마스터 믹스 ( TaqMan Fast Advanced Master Mix ) ( 라이프 테크놀로지 스 , 미국 ) 를 사용 하 여 수행 하 였 다 . 상대 유전자 발현 은 2 - ΔΔ CT 방법 을 사용 하 여 참조 유전자 GAPDH 에 대한 정규 화 후 에 계산 하 였 다 . 계산 은 어 플 라이드 바이오 시스템즈 퀀트 스튜디오 12 K 플렉스 소프트웨어 v 1 . 2 . 2 를 사용 하 여 수행 하 였 다 . 비 히 클 처리 샘플 대비 IFN β mRNA 배수 변화 는 표 11 에 요약 된다 . 결과 는 화합물 1 a 가 1 차 PBMC 에서 IFN β mRNA 를 용량 - 및 시간 - 의존 성 방식 으로 유도 할 수 있 다는 것 을 제시 하 였 다 . 표 11 은 5 명 의 서로 다른 공 여자 로부터 계산 된 평균 을 제시 한다 .