인 큐 베이 션 물 ( 이중 ) 은 최종 농도 1 μ M 의 95 A 또는 96 , 또는 95 A 및 96 둘 다 , 풀 링 된 시노 몰구 스 원숭이 간 마이크로솜 ( 캔자스주 레 넥 사 소재 제노 테크 , 엘엘 씨 ( Xenotech , LLC ) , 0 . 21 mg / mL 단백질 농도 에 등가 인 0 . 25 μ M CYP 단백질 ) , NADPH ( 1 . 3 mM ) , 염화마그네슘 ( 3 . 3 mM ) 및 인산칼륨 완충제 ( 100 mM , pH 7 . 4 ) 를 함유 하 였 다 . 최종 반응 부피 ( 500 μ L ) 는 0 . 003 % DMSO , 0 . 5 % 아 세토 니트릴 을 함유 하 였 다 . 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 을 수행 하 고 , 0 , 5 , 10 , 15 , 20 , 30 , 45 및 60 분 에 분취 물 ( 50 μ L ) 을 수거 하 고 , 질량 분광 측 정법 ( MS ) 내부 표준물 ( 200 μ L ) 을 함유 하 는 차가운 아 세토 니트릴 에 첨가 하 여 켄 칭 하 였 다 . 켄 칭 된 인 큐 베이 션 물 을 1 분 동안 볼 텍 싱 하고 , 이어서 3000 rpm 에서 5 분 동안 실온 에서 원심 분리 하 였 다 ( 알레그라 X - 12 R , 캘리포니아주 풀 러 톤 소재 베크만 쿨터 ) . 이어서 , 상청 액 ( 150 μ L ) 을 수거 하 고 , 0 . 1 % 포름산 ( v / v ) 을 갖 는 물 150 μ L 를 함유 하 는 96 - 딥 웰 주입 플레이트 에 첨가 하 였 다 . 플레이트 를 마개 로 막 고 , 1 분 동안 볼 텍 싱 하고 , 후속 적 으로 하 기 기재 된 바 와 같이 LC - MS / MS 를 사용 하 여 분석 하 였 다 . 대 조군 인 큐 베이 션 물 을 NADPH 보조인 자 를 첨가 하 지 않 고 유사 하 게 제조 하 여 , 임의 의 비 - CYP / FMO 대사 에 대해 모니터링 하 였 다 . 별개 의 표준 곡선 ( 0 . 5 - 2000 nM ) 을 상기 기재 된 바 와 같이 제조 하 고 , 가공 하 고 , 분석 하 였 다 .