상기 사이클 로 필 린 A 프로모터 서열 을 Genomatrix 의 MatInspector 를 사용 하 여 분석 했 다 ( http : / / www . genomatrix . de ) . 네 가지 저산소증 - 반응 요소 ( HRE ) 후보 자 ( candidates ) 를 상기 사이클 로 필 린 A 프로모터 내 에서 확인 하 였 다 . 루시퍼 라 제 리포터 플라스미드 의 제작 을 위해 , PCR 을 통하 여 연속 적 으로 200 bp 씩 삭제 하 여 Cyp A 프로모터 서열 의 1012 염기쌍 ( bp ) 을 제거 하 였 다 . 삭제 된 절편 들 은 HindIII 와 KpnI 과 함께 pGL 3 basic 벡터 ( Promega ) 내 로 클로닝 하 였 다 . 변이 분석 ( mutational analysis ) 을 위해 , CypA 프로모터 상 의 각각 의 추정 적 인 HRE 자리 ( putative HRE site ) 는 PCR - based site - directed mutagenesis 에 의해 변이 시켰 다 . CypA promoter 또는 변이 된 HRE ( Hypoxia Response Element ) site 의 다양 한 부분 을 포함 하 는 luciferase reporter 를 제작 하 기 위한 프라이머 는 다음 과 같 다 .