먼저 , 250 mL 의 진탕 플라스크 배 양물 을 실시 예 1 에서 설명 된 바 와 같이 성장 시키 고 , 유도 하 고 , 용해 시키 고 , 히스티딘 - 친화도 정제 하 고 , 투석 하 고 , 글리세롤 로 1 : 1 로 희석 하 여 정제 된 단백질 을 제조 하 였 다 . 이어서 , 이 들 단백질 50 μ L 를 1 mM 스테비오 시드 ( ChromaDex , > 94 % 순도 ) 또는 레바 우디 오시드 D ( Sigma , > 93 % 순도 ) 및 0 . 5 mM ADP - 글루코스 와 함께 200 μ L 의 총 반응 부피 의 50 mM 트리스 - HCl 완충제 , pH 7 . 5 , 3 mM MgCl 2 로 희석 하 였 다 . 반응 은 16 시간 동안 300 RPM 으로 진탕 하 면서 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 30 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 상기 설명 한 반응 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 0 . 5 % 부피 / 부피 아세 토니 트릴 로 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 실시 예 1 , 표 1 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 글 리코 실화 된 생성물 을 물 에 1 : 10 희석 한 후 , LC - MS / MS 에 의해 상청 액 에서 검출 하 였 다 .