본 발명 에서 설명 된 방법 으로 PEG 접합 반응 을 수행 한 후 SDS - PAGE 를 통해 PEG 와 G - CSF 변이체 의 결합 여부 를 확인 하 였 다 . 접합 반응물 로부터 모노 - PEG - G - CSF 접합체 를 얻 기 위해 , 먼저 양 이온 교환 크로마토그래피 를 이용 하 여 모노 - PEG - G - CSF 유도체 를 분리 해 낸다 . 상기 의 양이온 교환 크로마토그래피 를 통해 분리 된 것 을 크 기 배제 크로마토그래피 를 이용 하 여 반응 에 참여 하 지 않 고 존재 하 는 미량 의 G - CSF 를 제거 한 모노 - PEG - G - CSF 접합체 만 을 분리 하 였 다 .