0 . 1 M 탄산염 버퍼 ( pH 9 . 6 ) 중 항 - 표적 항체 ( 1 ng / mL ) 를 96 - 웰 마이크 로 플레이트 에 4 ℃ 에서 밤새 고정 했 다 . 코팅 된 웰 을 PBS - T 로 3 회 세척 하 고 1 % BSA ( w / w ) 로 차단 하 였 다 . 다양 한 농도 의 재조합 표적 단백질 및 압 타머 ( 1 pM ) 를 상온 에서 30 분 동안 사전 배양 하 였 다 . 임상 샘플 분석 을 위해 , 바이러스 를 용해 하 기 위한 분석 희석제 로서 2 % Triton ™ X - 100 을 함유 하 는 결합 완충액 을 사용 하 였 다 . 표적 단백질 - 압 타머 혼합물 을 코팅 된 웰 에 로딩 하 고 실온 에서 45 분 동안 부드럽 게 진탕 하 면서 배양 하 였 다 . 프라이머 , dNTP , 반응 버퍼 및 아세트산 마그네슘 ( MgOAc ) 을 포함 하 는 RPA 용액 을 등온 증폭 을 유도 하 는 항체 - 항원 - 압 타머 를 포함 하 는 H - 샌드위치 복합체 에 첨가 하 고 , 형광 신호 검출 을 용이 하 게 하 기 위해 삽입 염료 ( 0 . 5 × EvaGreen ®) 을 웰 에 첨가 하 고 37 ℃ 에서 20 분 동안 배양 하 였 다 . 이후 530 nm 의 방출 파장 으로 500 nm 의 여기 파장 에서 형광 신호 를 측정 했 다 . 표적 단백질 이 없 는 반응 의 형광 강도 를 음성 대 조군 ( Ic ) 으로 사용 하 였 고 , 표적 단백질 과 의 RPA 반응 후 형광 신호 를 형광 강도 ( I ) 로 기록 하 였 다 . 형광 강도 의 정규 화 된 비율 은 다음 과 같 은 신호 값 의 차이 를 사용 하 여 계산 되 었 다 :