본 발명 에서 는 NbBTF 3 유전자 침묵 을 확인 하 기 위해 , TRV - 기초 한 VIGS 벡터 를 도입 하 여 NbBTF 3 cDNA 의 세 개 다른 영역 을 클론 하 고 , 각각 의 구축물 에서 바이러스 유도 된 유전자 침묵 을 이용 하 여 상기 유전자 의 발현 양상 을 확인 하 였 다 ( 도 4 a 참조 ) . TRV : BTF 3 ( N ) 및 TRV : BTF 3 ( C ) 는 0 . 3 kb N - 말단 및 0 . 4 kb C - 말단 부분 을 포함 하 는 반면 TRV : BTF 3 ( F ) 는 NbBTF 3 cDNA ( 695 bp ) 전체 길이 를 포함 하 고 있 다 . 이 들 세 개 의 구축물 들 은 잎 의 황변 및 비 정상 적 인 잎 성장 이 라는 동일 한 표현 형 을 보여 주 었 다 ( 도 4 b 참조 ) . 내인성 NbBTF 3 mRNAs 에 있 어 VIGS 효과 는 반정량 적 RT - PCR 을 실시 하 여 측정 하 였 다 ( 도 4 c 참조 ) . RT - PCR 을 수행 하 기 위해 프라이머 는 VIGS 구축물 에서 사용 된 cDNA 영역 을 제외 하 여 설계 하 고 , 액틴 mRNA 수준 을 대 조구 로서 사용 하 였 다 .