본 명세서 에 기술 된 방법 의 일부 실시 형태 에서 , 단편 화 및 태그 화 이후 에 , 방법 은 5 ' 태그 화 된 표적 단편 으로부터 트랜스 포사 제 를 제거 하 여 비 - 복합체 화 된 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 제공 하 는 단계 를 추가 로 포함 한다 . 트랜스 포사 제 의 제거 는 화학 적 조건 하 에서 , 예컨대 , 변성제 , 예컨대 소듐 도데 실 설 페이트 ( SDS ) 로 의 처리 로 성취 될 수 있 다 . 이러 한 방법 은 5 ' 태그 화 된 표적 단편 의 완전히 듀 플렉 싱 된 버전 을 생성 시키 는 단계 를 추가 로 포함 할 수 있 다 . 완전 듀플렉스 를 생성 시키 는 단계 는 5 ' 태그 화 된 표적 단편 으로부터 어닐링 된 ( 그러나 결찰 되 지 않 음 ) 제 2 트랜스포존 ( AE - 링커 - 제 2 트랜스포존 ) 을 제거 하 는 단계 및 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 연장 시켜 완전히 듀 플렉 싱 된 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 생성 시키 는 단계 를 포함 할 수 있 다 . 생성 시키 는 단계 는 , 예 를 들 어 , 비 - 복합체 화 된 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 제 2 트랜스포존 을 선택 적 으로 변성 시키 기 에 충분 한 온도 까지 가열 하 여 , 단편 의 남 아 있 는 듀플렉스 영역 을 무 손상 상태 로 유지 되 게 함 으로써 달성 될 수 있 다 . 연장 시키 는 단계 는 dNTP 및 적합 한 중합효소 의 존재 하 에서 성취 될 수 있 다 . 대안 적 으로 , 생성 시키 는 단계 는 , 비 - 복합체 화 된 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 단일 뉴클레오타이드 ( dNTP ) 및 중합효소 의 존재 하 에서 인 큐 베이 션 킴 으로써 하나 의 반응 으로 성취 될 수 있 다 . 일부 실시 형태 에서 , 인 큐 베이 션 시키 는 단계 는 어닐링 된 제 2 트랜스포존 을 변성 시키 고 , 남 아 있 는 듀플렉스 를 연장 시키 기 에 충분 한 하나 이상 의 온도 에서 가열 하 는 것 을 포함 한다 . 다른 실시 형태 에서 , 중합효소 는 가닥 - 이동 중합효소 인데 , 이것 은 제 2 트랜스포존 을 제거 하 고 , 남 아 있 는 듀플렉스 를 연장 시켜 완전히 듀 플렉 싱 된 5 ' 태그 화 된 표적 단편 을 생성 하 는 작용 을 한다 . 적합 한 중합효소 는 KAPA HiFi , Pfu , 및 유사 한 효소 를 포함 한다 . 적합 한 중합효소 는 가닥 - 이동 중합효소 , 예컨대 , Bst , Bsu Vent , Klenow , 및 유사 한 효소 를 포함 한다 .