SEQ ID NO : 2 의 51 내지 7114 번 째 염기 를 CRISPR 에 의해 HB 42 균주 로 통합 하 여 , 출아 형 효모 ( S . cerevisiae ) 에서 PDH 바이패스 유전자 를 갖 는 HB 82 베이스 균주 를 제공 했 다 . pPDH 플라스미드 를 출아 형 효모 ( S . cerevisiae ) 에서 어 셈 블링 한 후 서열 확인 했 다 . 서열 - 확인 된 pPDH 플라스미드 를 대장균 ( E . coli ) 에서 성장 시키 고 , 정제 시키 고 , BciV 1 제한 효소 로 소화 시켰 다 ( digested ) . 표 1 에서 와 같이 , BciV 1 에 의한 소화 는 Ald 6 및 SeAcsL 641 P 의 유전자 , 프로모터 , 터미네이터 , 및 Cas 9 에 의해 PDH - 부위 19 에서 출아 형 효모 ( S . cerevisiae ) 게놈 으로 통합 하 기 위한 통합 부위 상동 서열 을 포함 하 는 폴리뉴클레오티드 를 제공 했 다 . SEQ ID NO : 2 의 51 내지 7114 번 째 염기 에서 나타내 는 생성 된 선형 PDH 바이패스 공 여체 폴리뉴클레오티드 를 겔 분리 에 의해 정제 했 다 .