동물 당 3 개 의 슬라이스 ( slice ) 를 항 - 시 냅 토피 신 항체 ( 1 : 200 ; Neo Markers ; Cat # RM 9111 - SO ) 와 바 이오티 닐 화 된 2 차 항체 ( 1 : 200 ; Vector Laboratories ; Cat # PK - 6101 ) 로 염색 시킨 후 , VIP 발색 시켰 다 ( 퍼 옥시다아제 에 대한 기질 키트 ; Cat # SK 4600 ) . 개개 의 평균 시냅스 밀도 를 측정 하 기 위해 , 슬라이스 및 영역 ( 해마 CA 1 , CA 3 및 덴 테이트 기 루스 미디 얼 블레이드 ( dentate gyrus medial blade , DGmb ) 로부터 의 과립 층 ) 당 3 개 의 이미지 를 마크 로 ( macro ) 기반 측정 절차 로 평가 하 였 다 . 마크 로 작업 동안 , 이미지 를 동일 하 게 대비 시키 고 , 일정 한 한계 치를 초과 한 시냅스 를 계수 하 였 다 . 단일 및 연속 시냅스 를 크기 제한 의 사용 하 에 개별 적 으로 계수 하 였 다 . 연속 시냅스 의 전체 면적 을 단일 시냅스 의 평균 크기 에 의해 나눈다 . 최종 적 인 시냅스 카운트 는 하 기 식 을 이용 하 여 계산 한다 :