화합물 을 HUVEC 세포 의 VEGF 유발 성 증식 에서 의 세포 활성 에 대해 분석 하 였 다 . HUVEC 세포 ( 캠 브렉스 ( Cambrex ) , CC - 2517 ) 를 37 ℃ 및 5 ％ CO 2 에서 EGM ( 캠 브렉스 , CC - 3124 ) 에 유지 시켰 다 . HUVEC 세포 를 EGM 에 5000 개 세포 / 웰 ( 96 웰 플레이트 ) 의 밀도 로 플 레이팅 하 였 다 . 세포 부착 ( 1 시간 ) 에 이어서 , EGM 배지 를 EBM ( 캠 브렉스 , CC - 3129 ) + 0 . 1 ％ FBS ( ATTC , 30 - 2020 ) 로 대체 하 고 , 세포 를 37 ℃ 에서 20 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 배지 를 EBM + 1 ％ FBS 로 대체 하 고 , 화합물 을 DMSO 로 연속 희석 시키 고 , 0 내지 5 , 000 nM 및 1 ％ DMSO 의 최종 농도 로 세포 에 첨가 하 였 다 . 37 ℃ 에서 의 1 시간 예비 - 인 큐 베이 션 이후 , 세포 를 10 ng / ml VEGF ( 시그마 ( Sigma ) , V 7259 ) 로 자극 시키 고 , 37 ℃ 에서 45 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 4 시간 동안 BrdU DNA 삽입 에 의해 세포 증식 을 측정 하 고 , ELISA ( 로슈 키트 ( Roche kit ) , 16472229 ) 에 의해 BrdU 표지 를 정량 하 고 , 1 M H 2 SO 4 를 사용 하 여 반응 을 중지 시켰 다 . 690 nm 에서 의 참고 파장 을 사용 하 여 흡광도 를 450 nm 에서 측정 하 였 다 .