일 차 사람 B 세포 의 분리 : 일차 B 세포 를 얻 기 위하 여 , 200 mL 의 말초 혈 을 건강 한 지원자 로부터 수집 하 였 다 ( ZymoGenetics ) . 혈액 을 200 mL 의 실온 PBS 로 희석 하 고 , 35 mL 의 분취 액 을 50 mL 의 원뿔형 튜브 에서 만들 었 다 . 14 mL 의 실온 피 콜 / 하이 파크 ( Pharmacia , Uppsala , Sweden ) 를 밑 에 놓 고 튜브 를 20 분 동안 2000 rpm 에서 회전 시켰 다 . PBMC 계면 층 을 흡인 하 고 MACS 완충액 ( PBS , HEPES 20 mM , 및 1 % BSA ; Invitrogen , Carlsbad , CA ) 으로 2 회 세척 하 였 다 . 세포 를 계수 하 고 B 세포 를 Miltenyi Biotec ( Auburn , CA ) 사 의 B 세포 분리 키트 를 사용 하 여 제조 업체 가 개관 한 프로토콜 을 따라 음성 적 으로 선택 하 였 다 . 정제 된 B 세포 의 소량 샘플 을 FACS 분석 에 의해 순도 에 대해 시험 하 였 고 , 그 결과 모든 실험 에서 97 % 이상 으로 순수 한 것 으로 나타났 다 .