PCR 프라이머 서열 과 무관 한 , 분명 한 B - B 4 VH 리더 서열 을 Kabat 데 이타 베이스 에서 뮤 라인 리더 서열 과 정렬 하 였 다 . B - B 4 VK 리더 와 가장 근접 하 게 매치 되 는 것 은 VH 17 - 1 A ( Sun et al . , PNAS , 84 ( 1987 ) , 214 ) 이 었 다 . 이 리더 서열 은 시그널 P 알고리즘 에 의해 정확 하 게 절단 되 는 것 으로 추정 된다 . 프라이머 cBB 4 Hfor ( 상기 에서 언급 됨 ) 및 g 22949 ( 5 '- CGAT - GGGCCCT - TGGTG - GAGGC - TGAGGA - GACGGTG - ACTGA - GGTTCC - 3 ' [ 서열 번호 13 ] ; 제한 효소 부위 는 밑줄 침 ) 을 , VH 17 - 1 A 리더 , B - B 4 VH 영역 과 , pG 4 D 200 발현 벡터 에 클로닝 하 기 위한 HindIII 및 ApaI 말단 제한 효소 부위 가 포함 된 , PCR 산물 을 제조 하 도록 설계 하 였 다 . 정 방향 프라이머 , cBBHFor 는 HindIII 제한 효소 부위 , Kozak 번역 개 시부 및 VH 17 - 1 A 리더 서열 을 도입 시킨다 . 역방향 프라이머 g 22949 는 감마 4 C 영역 의 5 ' 말단 과 천연 ApaI 제한 효소 부위 를 도입 시킨다 . 제조 되 는 단편 은 pG 4 D 200 의 HindIII / ApaI 제한 효소 부위 에 클로닝 하 여 , 벡터 pG 4 D 200 cBB 4 를 제조 하 였 다 .