레바 우디 오시드 A 에 대한 조작 된 라운드 11 변이체 의 활성 을 특성 화 하 기 위해 진탕 플라스크 분말 로딩 용량 반응 실험 을 수행 하 였 다 . 0 . 006 - 0 . 2 g / L 수준 의 진탕 플라스크 분말 ( SFP ) 을 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 10 mM 레바 우디 오시드 A , 0 . 2 mM ADP , 24 mM 수크로스 , 및 0 . 15 g / L SUS SFP 서열 번호 1764 를 함유 하 는 100 μ L 의 총 반응 부피 에 첨가 하 였 다 . 반응 은 2 시간 동안 300 RPM 에서 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 60 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 반응 은 상기 한 바 와 같이 희석 하 고 , 켄 칭 하 고 , 분석 하 였 다 . 0 . 025 g / L SFP 로딩 시 에 레바 우디 오시드 A 에 대해 가장 개선 된 라운드 11 변이체 는 서열 번호 1764 에 비해 돌연변이 G 8 S , G 252 D , D 255 P , V 322 L , M 325 L , 및 K 448 A 를 갖 는 서열 번호 3244 이 었 다 . 서열 번호 3244 의 상기 변이체 가 추가 의 유도 진화 를 위해 선택 되 었 다 .