GCR - 0048 및 GCR - 0067 표적 화 도메인 은 HBG 1 과 HBG 2 둘 모두 에 존재 하 고 , 다른 표적 화 도메인 은 다른 프로모터 에서 잠재 적 인 미스 매칭 된 표적 - 외 부위 를 갖 는 HBG 1 ( GCR - 0001 , GCR - 0008 및 GCR - 0010 ) 또는 HBG 2 ( GCR - 0051 ) 에 존재 한다 . HBG 1 및 HBG 2 표적 / 표적 - 외 부위 둘 모두 에서 동시 적 인 절단 은 개입 4 . 9 kb 게놈 서열 의 결실 및 / 또는 역위 를 초래 하 는 잠재 성 을 가지 며 ; 본원 에서 이 는 이따금 ' 4 . 9 kb ' 또는 ' HBG 1 - HBG 2 ' 또는 ' 대형 ' 역위 또는 결실 로 지칭 된다 . 따라서 , 3 개 의 상이 한 PCR 반응 세트 를 사용 하 여 , 이 영역 의 결실 또는 역위 를 갖 는 게놈 의 존재 를 검출 하 였 다 . 따라서 , 3 개 의 상이 한 PCR 반응 세트 를 사용 하 여 , 이러 한 영역 의 결실 또는 역위 를 갖 는 게놈 의 존재 를 검출 하 였 다 . HBG 1 - HBG 2 결실 또는 역위 가 없 는 게놈 서열 이 생성 된 3 . 8 kb 생성물 과 함께 증폭 될 것 인 반면 , HBG 1 - HBG 2 결실 또는 역위 를 갖 는 서열 은 증폭 되 지 않 도록 P 2 반응 을 설계 하 였 다 . 대략 이러 한 크기 의 밴드 를 모든 시료 에서 검출 하 였으며 ( 도 9 ) , 이 는 각각 의 개별 HBG 1 또는 HBG 2 표적 화 부위 에서 더 작 은 삽입 결실 의 검출 과 일관 되 었 다 ( 표 6 및 표 7 ) . HBG 1 - HBG 2 역위 된 ( inverted ) 게놈 서열 이 생성 된 1 . 7 kb 생성물 과 함께 증폭 될 것 인 반면 , 이러 한 역위 가 없 거나 HBG 1 - HBG 2 결실 이 있 는 / 없 는 서열 은 증폭 되 지 않 도록 P 3 반응 을 설계 하 였 다 . 대략 이러 한 크기 의 밴드 를 , 지시 된 표적 화 도메인 과 함께 Cas 9 및 sgRNA 를 함유 하 는 RNP 를 이용 하 여 전기 천공 된 배 양물 에서 검출 하 였으나 , 비 편집 된 대 조군 배양 물 에서 는 검출 되 지 않 았 다 ( 도 9 ) . 마지막 으로 , HBG 1 과 HBG 2 표적 화 영역 둘 모두 를 스팬 ( span ) 하 여 , HBG 1 - HBG 2 결실 이 없 는 서열 뿐 만 아니 라 HBG 1 - HBG 2 영역 이 역위 된 서열 의 증폭 둘 모두 가 7 . 7 kb 생성물 을 생산 할 것 인 한편 , HBG 1 - HBG 2 결실 을 함유 하 는 서열 의 증폭 이 2 . 8 kb 생성물 을 초래 하 도록 P 1 반응 을 설계 하 였 다 . 사실상 , 비 편집 된 대 조군 시료 는 대략 8 kb 에서 두드러진 상부 밴드 및 대략 2 . 8 kb 에서 희미 하 며 잠재 적 으로 비 - 특이 적 인 밴드 를 가졌 다 . 대조 적 으로 , 지시 된 표적 화 도메인 과 함께 Cas 9 및 sgRNA 를 함유 하 는 RNP 를 이용 하 여 전기 천공 된 배 양물 은 대략 2 . 8 kb 에서 두드러진 밴드 및 대략 8 kb 에서 희미 한 밴드 를 가졌 다 ( 도 9 ) . 별표 로 지시 된 각각 의 밴드 에 대한 DNA 를 단리 하 고 , 차세대 시퀀싱 시켜 , 예측 된 서열 ( 기재 된 바 와 같이 HBG 1 - HBG 2 역위 또는 결실 이 있 거나 없 음 ) 의 증폭 으로서 이 의 정체 성 ( identity ) 을 확인 하 였 다 .