구체 적 으로 , 코팅 버퍼 ( coating buffer ) ( 1 L 증류수 에 8 . 40 g NaHCO 3 , 3 . 56 g Na 2 CO 3 , pH 9 . 5 ) 에 포획 항체 ( Anti - mouse IgE , anti - mouse IgG 2 a ) 를 각각 1 : 250 으로 희석 시킨 뒤 , 각 웰 에 100 ㎕ 씩 분주 하 고 , 4 ℃ 에서 24 시간 동안 반응 시킨 뒤 워싱 버퍼 ( wash buffer ) ( 0 . 05 % Tween - 20 PBS ) 로 3 회 세척 하 였 다 . 그 다음 assay 희석 액 ( PBS 중 10 % FBS ) 를 각 웰 당 200 ㎕ 씩 분주 한 뒤 실온 에서 1 시간 반응 시키 고 , 이 를 다시 워싱 버퍼 로 5 회 세척 하 였 다 . 그 다음 마우스 혈청 을 assay 희석 액 에 1 : 100 으로 희석 하 여 100 ㎕ 씩 각 웰 당 분주 한 뒤 실온 에서 2 시간 반응 시키 고 5 회 세척 한 뒤 검출 항체 ( Biotin rat - anti mouse IgE , Bioninylated - anti - mouse IgG 2 a ) 와 효소 시약 ( enzyme reagent ) ( SAv - HRP ) 을 각각 1 : 250 으로 assay 희석 액 에 희석 하 여 각 웰 당 100 ㎕ 씩 을 가하 여 1 시간 동안 실온 에서 반응 시킨 후 각각 1 분 동안 5 회 세척 하 였 다 . 마지막 으로 , 기질 용액 ( substrate solution ) 을 100 ㎕ 씩 분주 하 고 빛 을 차단 한 뒤 30 분 방치 한 다음 50 ㎕ 의 정지액 ( stop solution ) 을 처리 한 후 ELISA 판독기 로 450 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . IgE 및 IgG 2 a 의 발 현양 ( ㎍/㎖) 은 Standard 의 농도 와 O . D . 값 으로 그래프 의 기울기 를 구해 , 기울기 값 y = ax + b 라는 기울기 공식 에 내 sample 의 O . D . 값 을 대입 하 여 도출 되 었 다 . DFE 특이 적 IgE 의 검출 을 위해 , PBS 에 용해 된 10 ㎎/ ml DFE 를 코팅 용액 으로 사용 하 였 다 . DFE 특이 적 IgE 발 현양 은 O . D . ( optical density ) 으로 나타내 었 다 .