UV 챔버 를 이용 하 여 인간 진피 섬유 아 세포 에 UVA 를 5 J / ㎠ 의 에너지 로 조사 한다 . 자외선 조사량 과 배양 시간 은 예비 실험 을 통하 여 확립 한 섬 유아 세포 에서 MMP 발 현량 이 최대 가 되 는 조건 으로 수행 하 였 다 . 음성 대 조군 은 은박지 로 싸 서 UVA 의 환경 에 같 은 시간 유지 하 였 다 . UVA 방출 량 은 UV 라디오미터 를 이용 하 여 측정 하 였 다 . UVA 가 조사 되 는 동안 의 세포 는 이전 에 분주 된 배지 그대로 이 고 UVA 를 조사 한 후 샘플 이 들어간 배지 로 교환 하 여 24 시간 배양 후 배지 를 회수 하 여 96 - 웰 플레이트 에 코팅 한다 . 일 차 항체 ( MMP - 1 ( Ab - 5 ) 단일 클론 항체 와 MMP - 2 ( Ab - 3 ) 단일 클론 항체 ) 를 처리 하 고 37 ℃ 에서 60 분 반응 시킨다 . 이 차 항체 인 안티 마우스 IgG ( whole mouse , alkaline phosphatase conjugated ) 를 다시 60 분 정도 반응 시킨 후 , 알 카린 포스 파타 제 기질 용액 ( 1 mg / ml ρ - nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충 용액 ) 을 상온 에서 30 분 간 반응 시키 고 마이크 로 플레이트 리더 로 405 nm 에서 흡광도 를 측정 한다 . 대 조군 으로 는 시료 를 첨가 하 지 않 은 것 을 사용 한다 .