강화 약쑥 에탄올 추출물 에 의한 NO 감소 효과 가 iNOS 의 발현 의 감소 로부터 기인 하 는지 여부 를 알아보 기 위하 여 웨스턴 블롯 ( Western blot ) 을 통해 iNOS 의 발현 정도 를 비교 해 보 았 다 . 상기 웨스턴 블롯 분석 은 통상 적 인 실험 방법 에 의해 수행 하 였 다 . 구체 적 으로 , 세포 를 수거 한 후 차가운 PBS 로 2 회 세척 하 였 고 , 완충 용액 ( 10 mM HEPES , 10 mM KCl , 2 mM MgCl 2 , 1 mM dithiothreitol , 0 . 1 mM EDTA and 0 . 1 mM PMSF ) 를 처리 하 여 세포내 단백질 들 이 잘 녹 아 나오 도록 30 분 간 반응 시킨 후 , 12 , 000 x g ( 4 ℃) 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 세포내 단백질 들 을 분리 해 내 었 다 . 단백질 들 을 12 % SDS - PAGE 를 이용 하 여 전기영동 한 후 , PVDF ( polyvinylmembrane ) 로 전달 시켰 다 . 이 후 비 특이 적 인 반응 을 줄이 기 위해 5 % 탈지유 로 반응 시키 고 , 각각 의 항원 에 대한 특이 적 인 항체 들 , iNOS ( BD transduction Laboratories , Lexington , KY ) 를 1 차 항체 로 1 : 500 - 1 : 1000 정도 의 비율 로 반응 시켜 준 후 , HRP - 가 부착 되 어 있 는 1 차 항체 각각 에 대한 2 차 항체 ( anti - rabbit , Santa - Cruz Biotechnology , USA ) 를 처리 하 였 다 . 이 후 , 막 을 ECL 용액 ( ELPIS biotech , Korea ) 으로 반응 시킨 후 , X - 선 필름 으로 감광 하 여 나온 각각 의 밴드 들 을 Quantity One ( Bio - Rad , co . , Hercules , CA , USA ) 을 이용 하 여 분석 하 였 다 .