주요 생성물 A ) 단일 특이 적 < IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 , B ) 이중 특이 적 < ANGPT 2 - IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 및 C ) < ANGPT 2 > 야생 형 항체 의 혼합물 을 생성 하 기 위해 , 네 가지 플라스미드 DW 047 - pUC - HC *- IGF - 1 R 및 DW 048 - pUC - LC *- IGF - 1 R , 및 플라스미드 SB 07 - pUC - Hyg - OriP - HC - ANGPT 2 및 SB 09 - pUC - Hyg - OriP - LC - ANGPT 2 ( 또는 플라스미드 SB 04 - pUC - HC - ANGPT 2 및 SB 06 - pUC - LC - ANGPT 2 ) 를 , 10 % 극 저 IgG FCS ( 송아지 태아 혈청 , Gibco ) , 2 mM L - 글루타민 ( Gibco ) 및 250 ㎍/ ml 제 네 티 신 ( Gibco ) 이 보충 된 DMEM ( 둘 베코 개질 이 글 배지 , Gibco ) 에서 배양 된 , 점착 성장 하 는 HEK 293 - EBNA 세포 ( 엡스타인 - 바 - 바이러스 핵 항원 을 발현 하 는 인간 배아 신장 세포주 293 ; 미국 미생물 보존 센터 수탁 번호 ATCC # CRL - 10852 , 롯 트 959 218 ) 에서 일시 적 으로 공동 - 발현 시켰 다 . 트랜스펙션 을 위해서 FuGENETM 6 트랜스펙션 시약 ( Roche Molecular Biochemicals ) 을 4 : 1 ( 3 : 1 내지 6 : 1 의 범위 ) 의 FuGENETM 시약 ( ㎕) 대 DNA ( ㎍) 의 비율 로 사용 하 였 다 . < IGF - 1 R > HC * 및 LC * 를 인코딩 하 는 ( 플라스미드 DW 047 - pUC - HC *- IGF - 1 R 및 DW 048 - pUC - LC *- IGF - 1 R ) , 및 < ANGPT 2 > HC 및 LC 를 인코딩 하 는 ( 각각 플라스미드 SB 07 - pUC - Hyg - OriP - HC - ANGPT 2 및 SB 09 - pUC - Hyg - OriP - LC - ANGPT 2 , 또는 플라스미드 SB 04 - pUC - HC - ANGPT 2 및 SB 06 - pUC - LC - ANGPT 2 ) 경쇄 및 중쇄 플라스미드 를 , 1 : 1 ( 등 몰 ) 의 경쇄 대 중쇄 인코딩 플라스미드 의 몰 비율 로 사용 하 여 네 가지 상이 한 플라스미드 로부터 발현 시켰 다 . 합하 여 4 mM 이 되 는 L - 글루타민 , 글루코오스 [ Sigma ] 및 NAA [ Gibco ] 를 3 일 에 세포 에 공급 하 였 다 . 채취 된 상청 액 에 는 주요 생성물 A ) 단일 특이 적 < IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 , B ) 이중 특이 적 < ANGPT 2 - IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 및 C ) < ANGPT 2 > 야생 형 항체 의 혼합물 이 포함 되 었 고 , " "" 이중 특이 적 VL - VH / CL - CH 1 교환 혼합물 "" 로서 표시 된다 . 이중 특이 적 VL - VH / CL - CH 1 교환 혼합물 을 함유 하 는 세포 배양 상청 액 을 트랜스펙션 5 일 내지 11 일 후 에 원심 분리 로 채취 하 고 ", - 20 ℃ 에서 보관 하 였 다 .