FRT - 기준 재조합 카세트 , 및 Red / ET - 매개 융합 용 플라스미드 및 항생제 마커 루프 아웃 을 Gene Bridges GmbH ( 독일 ) 에서 수득 하 였 다 . 이 들 재료 를 사용 하 는 절차 를 Gene Bridges 프로토콜 에 따라 실행 하 였 다 . 프라이머 Pgl - F 및 PglGI 1 . 5 - R 을 사용 하 여 , 제 조사 의 프로토콜 에 따라 Stratagene Herculase II Fusion 키트 를 사용 하 여 FRT - gb 2 - Cm - FRT 주형 으로부터 내성 카세트 를 증폭 하 였 다 . PCR 반응물 ( 최종 부피 50 uL ) 은 5 uL 완충액 , 1 uL 주형 DNA ( Gene Bridges 로부터 의 FRT - gb 2 - Cm - F ) , 각 프라이머 10 pmol , 및 1 . 5 uL 25 mM dNTP 믹스 를 함유 하 였 고 , dH 2 O 를 사용 하 여 50 uL 로 제조 하 였 다 . 반응물 을 하 기 와 같 은 사이클 에 적용 하 였 다 : 1 x 2 분 , 95 ℃, 이후 ( 95 ℃ 에서 30 초 ; 63 ℃ 에서 30 초 ; 72 ℃ 에서 3 분 ) 의 30 사이클 .