세포 배양 - 모든 연구 에 사용 된 C 2 C 12 뮤 린 근육 모세포 세포주 를 미국 미생물 보존 센터 ( American Type Culture Collection ) ( Manassas , VA ) 에서 입수 하 였 다 . 세포 를 10 % 우태 아 혈청 , 100 units / ml 페니실린 및 100 ug / ml 스트렙토마이신 이 보충 된 CHO 세포 를 위한 햄스 ( Ham ' s ) F 12 배지 또는 C 2 C 12 를 위한 DMEM 배지 중 에서 37 ℃ 및 5 % CO 2 에서 가습 화 된 환경 에서 성장 시켰 다 . 근관 분화 를 유도 하 기 위해 , C 2 C 12 근육 모세포 를 컨 플루언스 ( confluence ) 로 성장 시키 고 , 배지 를 2 % 말 혈청 , 페니실린 ( 100 U / ml ) , 스트렙토마이신 ( 100 μ g / ml ) 을 함유 하 는 DMEM 으로 교환 하 였 다 . 일시 적 트랜스펙션 을 위해 , C 2 C 12 근육 모세포 또는 CHO 세포 를 유리 바닥 접시 에서 70 % 컨 플루언스 로 플 레이팅 시켰 다 . 24 시간 후 , 세포 를 진재 머 ( GeneJammer ) 시약 ( Stratagene ) 을 이용 하 여 상기 기재 된 바 와 같 은 플라스미드 로 트랜스펙션 시켰 다 . 트랜스펙션 24 - 48 시간 후 또는 개별 적 실험 을 위해 지정 된 시간 에 살 아 있 는 세포 의 공 초점 이미지 화 에 의해 세포 를 시각 화 시켰 다 . 몇몇 실험 에서 , C 2 C 12 근육 모세포 를 관찰 전 에 지정 된 시간 에 근관 으로 분화 시켰 다 .