혈액 내 에서 장기간 의 ANP 의 존재 가 cGMP 혈중 농도 의 증가 에 의해 반영 되 는 지속 적 인 약 력학 적 효과 를 보유 하 는지 여부 , 또는 그러 한 평가 가 ANP 의 수준 에 비례 하 는지 여부 를 결정 하 기 위한 조사 를 수행 하 였 다 . ANP 에 대한 혈중 cGMP 의 수준 을 측정 하 였 다 . 놀랍 게 도 , 2 시간 및 8 시간 에서 ANP 의 증가 된 수준 에 도 불구 하 고 , cGMP 의 수준 은 증가 된 상태 를 유지 하 지 않 았 고 , 이 는 증가 된 수준 으로 혈중 ANP 수준 을 유지 하 기 위해 천연 ANP 제제 를 장기간 작용 시키 는 것 은 예상 되 는 바 와 같 은 효과 가 없 을 수 있 다는 것 을 나타낸다 . 이 문제 는 문헌 에 보 고 되 지 않 았 고 , 이전 에 알려 지 지 않 았 던 문제 를 해결 할 이유 도 없 었 다 . 이러 한 관찰 을 설명 할 수 있 는 2 가지 가능 성 이 있 었 다 : 1 ) 검출 된 ANP 는 비활성 일 수 있 고 , 또는 2 ) ANP 수용체 의 쇄도 ( swamping ) 는 수용체 고갈 을 초래 할 수 있 다 . ANP 수용체 의 쇄도 가 이후 시점 에서 반응 의 손실 및 동시 에 상기 첫 번 째 가능 성 을 배제 할 수 있 는지 여부 를 조사 하 기 위해 , 혈장 cGMP 증가 가 새롭 고 ( 공지 된 ) 활성 ANP 의 두 번 째 투여 후 회복 될 수 있 는지 여부 를 연구 하 기 위한 조사 가 수행 되 었 다 . 이 연구 에서 , 4 그룹 의 Balb / c 마우스 ( n = 3 / 그룹 ; 암컷 , 5 - 6 주령 ; 18 - 25 g ) 를 사용 하 였 고 , 제 2 ANP 투여 와 함께 , 또는 단독 으로 ANP 투여 후 여러 시점 에서 cGMP 수준 을 평가 하 였 다 . 수용체 고갈 이 발생 하 는 경우 , 제 1 용량 에서 발생 하 고 또한 제 2 용량 후 면역 반응 이 없 거나 최소 의 면역 반응 을 담보 하 기 위해 , 의도 적 으로 높 은 용량 을 사용 하 였 다 . 중합체 부형제 ( 생체 내 안정 성 을 증가 시키 기 위해 ) 내 에 제형 화 된 ANP 의 2 회 연속 s . c . ( 피하 ) 투여 를 평가 하 였 다 . 혈액 수집 은 미리 ( 투여 이전 ; 0 시간 ) , 투여 후 2 시간 , 및 8 시간 에서 수행 하 였 다 . 2 개 의 투여 그룹 에게 는 6 시간 에 제 2 용량 을 투여 하 였 다 . 혈액 ( ~ 100 ㎕/ 시점 ) 샘플 은 안구 뒤 부비강 으로부터 수집 하 고 , 이 칼륨 EDTA 를 함유 하 는 냉장 된 테스트 튜브 에 넣 었 다 . 혈액 샘플 은 4 ℃ 및 13 , 000 rpm 에서 10 분 동안 원심 분리 하 여 혈장 을 분리 하 였 다 . 혈장 샘플 은 제조사 의 프로토콜 에 따라 cGMP ELISA 키트 ( GE Healthcare Life Sciences , Marlborough , MA ) 를 이용 하 여 cGMP 에 대해 분석 하 였 다 . 전체 적 인 절차 는 하 기 를 포함 한다 : 1 ) 투여 이전 베이스 라인 cGMP 를 측정 한다 ; 2 ) 2 시간 에서 ANP 를 주입 하 고 최대 반응 을 측정 한다 ; 3 ) 6 시간 에서 제 2 ANP 를 주입 하 고 8 시간 에서 최대 cGMP 반응 을 측정 하 여 cGMP 의 추가 상승 이 달성 되 는지 여부 를 확인 한다 . 2 시간 시점 과 적어도 같 은 시기 또는 그 이후 에 추가 의 평가 가 존재 한 경우 , 면역 반응 의 상실 을 없 었 고 , 수용체 는 높 은 용량 에서 도 고갈 되 지 않 을 수 있 다 . 8 시간 에서 반응 이 2 시간 반응 미만 인 경우 , 수용체 고갈 이 발생 한 것 으로 추정 하 는 것 이 합리 적 이 고 ; 4 ) 용량 반응 을 확인 하 기 위해 더 높 은 용량 을 주사 한다 . 용량 반응 이 관찰 되 지 않 았 으면 , 수용체 는 고갈 되 거나 포화 된 것 이 었 다 . 그러나 , ANP - 수용체 복합체 는 , 수용체 의 공급 이 제한 되 었 을 경우 고갈 을 유도 할 수 있 는 세포 에 의해 내재 화 되 는 것 이 공지 되 어 있 었 다 . 또한 , cGMP 와 결합 된 ANP 의 수준 을 측정 하 여 수용체 고갈 이 , 존재 한다면 , 반응 성 결핍 의 결과 였 는지 를 추가 로 확인 하 였 다 . ANP 의 관련 된 수준 은 제조사 의 프로토콜 에 따라 cGMP ELISA 키트 ( GE Healthcare Life Sciences , Marlborough , MA ) 를 이용 하 여 측정 하 였 다 . 이 연구 의 결과 는 표 1 에 제시 한다 .