PBZ 1 cDNA 는 정 방향 프라이머 ( 5 ’- CGGATCCATGGCTCCGGCCTGCGTC - 3 ’ ( 서열 번호 6 ) ) ( 밑줄 은 BamHI 제한 효소 부분 ) 및 역방향 프라이머 ( 5 ’- CATCTTAGGCGTATTCGGCAGGG - 3 ’ ( 서열 번호 7 ) ) 를 사용 하 여 PCR 에 의해 증폭 시켰 다 . PCR 산물 은 pGEM - T 벡터 ( Promega ) 로 서브 클론 하 였 다 . BamH 1 및 Pst 1 로 절단 된 Open reading frame ( ORF ) 조각 은 pQE 30 벡터 ( Qiagen , Chatsworth , CA ) 로 클론 하 였 다 . 재조합 6 xHis - tagged PBZ 1 단백질 은 pQE 30 발현 벡터 로 배열 시키 고 E . coli 세포 에서 성장 된 플라스미드 pQE 30 : : PBZ 1 는 흡광도 A 600 가 0 . 6 이 될 때 까지 LB 배지 에서 30 ℃ 로 성장 시켰 다 . IPTG 는 1 mM 의 최종 농도 에서 첨가 하 고 단백질 의 발현 을 위해 30 ℃ 에서 5 ~ 6 시간 동안 계속 해서 배양 시켰 다 . E . coli 세포 에서 과 발현 시킨 재조합 PBZ 1 단백질 은 Ni - NTA 정제 키트 ( Qiagen ) 를 사용 하 여 정제 하 였 다 .