비 염색 파라핀 절편 은 , 매트릭스 성분 의 면역 조직 화학 적 분석 을 목적 으로 사용 된다 . 이 들 절편 들 은 , 37 ℃ 에서 1 시간 동안 20 mM 트리스 - 아세테이트 완충액 ( pH 8 . 0 ) 내 콘 드 로 이티 나제 ABC ( 0 . 25 U / ml ) 및 37 ℃ 에서 1 시간 동안 포스 페이트 완충액 ( pH 5 . 0 ) 내 소 고환 히 알 루 로니 다제 ( 1000 U / ml ) 의 조합 으로 , 전소 화 시킨 ( pre - digested ) 후 , 6 분 간 실온 에서 20 mM Tris - HCl pH 7 . 2 0 . 5 M NaCl ( TBS ) 또는 단 백 분 해 효소 - K ( DAKO S 3020 ) 로 3 회 세척 하 여 , 항원 성 에 피토프 를 노출 시킨다 . 그 후 , 조직 을 20 % 정상 돼지 혈청 으로 1 시간 동안 블록 킹 하 고 , 다수 의 일차 항체 로 크 고 작 은 프로테 오 글리 칸 및 콜라겐 을 탐색 한다 ( 표 7 ) . 음성 대 조군 절편 은 , 일 차 항체 를 결실 시키 거나 , 아이 소 타입 이 일치 하 는 ( isotype matched ) 관련 없 는 일차 항체 를 관심 있 는 진정 한 일차 항체 로 치환 하 여 , 가공 될 것 이 다 . 이 단계 에서 상용 제품 인 ( DAKO ) 아이 소 타입 이 일치 하 는 마우스 IgG ( DAKO Code X 931 ) 또는 IgM ( DAKO Code X 942 ) ( 적절 한 ) 대 조군 항체 가 사용 될 것 이 다 . DAKO 제품 X 931 및 X 942 는 , 포유 동물 조직 에 유도 성 이 아니 고 존재 하 지 도 않 는 효소 인 , 아스 퍼질러 스 나 이거 ( Aspergillus niger ) 글루코스 옥시다아제 에 대한 , 마우스 단일 클론 IgG 1 ( 클론 DAK - GO 1 ) 및 단일 클론 IgM ( 클론 DAK - GO 8 ) 항체 일 수 있 다 . TBS 내 의 0 . 05 % 3 , 3 '- 디 아미노 벤지 덴 디하 이드 로 클로라이드 및 0 . 03 % H 2 O 2 , 노바 레드 ( Nova RED ) , 니트 로 블루 테트라 졸리움 / 5 - 브로모 - 4 - 클로로 - 3 - 인 돌릴 포스 페이트 / 아이오 도 니트 로 테트라 졸리움 바이올렛 ( NBT / BCIP / INT ) 또는 뉴 푹신 ( New Fuchsin ) 을 기재 로 사용 하 여 검출 하 는데 , 이 차 항체 에 결합 된 , 허스 래 디시 ( Horseradish ) 퍼 옥시다아제 또는 알 칼린 포스 페이 타아 제 가 사용 될 것 이 다 . 염색 된 슬라이드 는 명시 야 현미경 ( bright field microscopy ) 으로 관찰 하 고 , 레이카 MPS 60 광학 현미경 디지털 카메라 시스템 으로 촬영 할 것 이 다 .