이론 에 구애 없이 , CAR - T 세포 인식 을 향상 시키 기 위해 골수종 세포 에서 BCMA 를 증가 시키 기 위해 GSI 를 사용 할 때 주의 해야 할 점 은 고 농도 의 GSI 가 T - 세포 신호 전달 및 이펙터 기능 을 억제 할 수 있 다는 것 이 다 . 문헌 [ Eagar et al . , Immunity 20 ( 4 ) : 407 , 2004 ] 참조 . 표적 리간드 발현 이 안정 하 게 유지 되 는 환경 에서 CAR T 세포 에 대한 GSI 의 잠재 적 효과 를 평가 하 기 위해 , CD 19 CAR - T 세포 를 GSI ( 0 . 01 μ M 내지 100 μ M 의 ) 의 존재 하 에 Raji 또는 K 562 / CD 19 + 표적 세포 와 공 - 배양 하 고 , 생존 성 및 이펙터 기능 을 측정 하 였 다 . 이 농도 범위 초과 에서 는 CD 19 항원 발현 ( 도 5 A ) 또는 24 시간 후 의 CAR - T 세포 생존 성 에 영향 을 미치 지 않 았 다 ( 도 5 B ) . GSI RO 4929097 은 IL - 2 ( 도 5 C , 상부 패널 ) 및 IFN γ ( 도 5 C , 하부 패널 ) 생산 을 측정 함 으로써 결정 된 바 와 같이 ( 또한 도 5 D - 5 F 참조 ) , K 562 CD 19 + 세포 와 공 - 배양 될 때 1 μ M 이상 의 농도 에서 CD 19 CAR - T 세포 이펙터 기능 을 억제 하 는 것 으로 밝혀졌 다 . 그러나 , CD 19 CAR - T 세포 가 표적 세포 를 특이 적 으로 사멸 시키 는 능력 은 GSI 농도 에 영향 을 받 지 않 았 다 ( 도 5 G ) . CD 19 CAR - T 세포 는 또한 10 μ M GSI RO 4929097 의 존재 하 에서 표적 세포 자극 에 반응 하 여 증식 하 였 지만 , GSI RO 4929097 의 부재 ( 도 5 H ) 하 에서 보다 덜 효과 적 이 었 다 . CAR - T 세포 분열 에 대한 GSI 의 투여 효과 를 더 조사 하 기 위해 , GSI RO 4929097 의 용량 적정 을 CD 19 CAR - T 및 표적 세포 의 공 - 배 양물 에 첨가 하 였 다 . CAR - T 세포 분열 은 치료 용량 의 GSI ( 0 . 01 μ M 내지 1 μ M ) 첨가 에 의해 본질 적 으로 영향 을 받 지 않 았 거나 약간 영향 을 받 은 반면 , 더 높 은 비 - 치료 용량 ( 10 μ M ) 에서 의 GSI 는 증식 을 검출 가능 하 게 억제 하 였 다 ( 도 5 I ) . GSI 의 존재 하 에 배양 된 CD 19 CAR - T 세포 는 외인성 IL - 2 의 존재 ( 도 5 J ) 또는 부재 ( 도 5 K ) 하 에 배양 시 8 일 에 걸쳐 확장 감소 를 나타내 지 않 았 다 . 또한 , 5 μ M , 0 . 5 μ M 의 GSI 의 존재 또는 GSI 의 부 재하 에 확장 된 T 세포 는 외인성 IL - 2 의 존재 ( 도 5 L ) 또는 부재 ( 도 5 M ) 하 에 확장 된 후 표적 세포 로 재 자극 되 었 을 때 IFN - γ 생산 에 유의 한 차이 를 나타내 지 않 았 다 . CAR - T 세포 그룹 간 의 IL - 2 생산 또한 현저히 상이 하 지 않 았 다 ( 도 5 N ) . 전체 적 으로 , 치료 수준 에서 의 GSI 는 사이토카인 생성 , 세포 용해 활성 및 증식 을 포함 하 는 T 세포 기능 에 영향 을 미치 지 않 는다 .