IFN - γ ELISPOT . 수집 된 종양 조직 은 소화 완충제 ( Miltenyl Biotec , San Diego , CA ) 내 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 된 다음 100 μ M 조직 스 트레이너 에 걸쳐 으깨 졌 다 . 적혈구 의 용해 는 ACK 용해 완충제 ( Thermo Fisher Scientific , Waltham , MA ) 를 사용 하 여 수행 되 었 고 단일 세포 현탁액 은 40 μ M 필터 에 걸쳐 세포 현탁액 거름 에 의해 진행 되 었 다 . CD 8 + T 세포 의 단리 는 음성 α - 마우스 CD 8 마이크 로 비드 단리 프로토콜 ( Miltenl Biotec , San Diego , CA ) 를 사용 하 여 수행 되 었 다 . 96 웰 플레이트 ( MAHAS 4510 , Millipore , Burlington , MA ) 는 항 - 마우스 IFN - γ mAb 15 mg / ml ( 클론 AN 18 , Mabtech Inc . , Cincinnati , OH ) 로 코팅 되 었 다 . T 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 은 어느 한쪽 으로 자극 되 지 않 은 채 남 아 있 거나 ( 배지 ) 또는 24 시간 동안 2 중 으로 비 - 종양 - 보유 B 6 마우스 로부터 γ - 조사 된 B 16 종양 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 또는 비 접촉 비장 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 로서 γ - 조사 된 MC 38 종양 세포 ( 2 x 104 / 웰 , 96 - 웰 플레이트 ) 또는 무관 한 표적 세포 로 도전 되 었 다 .