발현 되 고 분비 된 단일 특이 적 , 2 가 < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 를 상기 기재 된 방법 에 따라 단백질 A 친화성 크로마토그래피 에 의해 , 여과 된 세포 배 양물 상청 액 으로부터 정제 하 였 다 . 간략 하 게 는 , 일시 적 트랜스펙션 으로부터 < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 를 함유 하 는 세포 배 양물 상청 액 을 원심 분리 및 여과 에 의해 정화 시키 고 , PBS 완충액 ( 10 mM Na 2 HPO 4 , 1 mM KH 2 PO 4 , 137 mM NaCl 및 2 . 7 mM KCl , pH 7 . 4 ) 으로 평형 화 된 단백질 A HiTrap MabSelect Xtra 컬럼 ( GE Healthcare ) 에 적용 하 였 다 . PBS 평형 완충액 , 이어서 0 . 1 M 나트륨 시트 레이트 완충액 ( pH 5 . 5 ) 으로 세척 하 여 미 결합 된 단백질 을 제거 하 고 , PBS 로 세척 하 였 다 . 100 mM 나트륨 시트 레이트 ( pH 2 . 8 ) 로 항체 를 용리 한 후 , 2 ml 분획 당 2 M 트리스 ( pH 9 . 0 ) 300 ㎕ 로 샘플 을 즉각 적 으로 중화 하 였 다 . 응집 된 단백질 을 20 mM 히스티딘 , 150 mM NaCl ( pH 6 . 0 ) 중 의 HiLoad 26 / 60 Superdex 200 정제 등급 컬럼 ( GE Healthcare ) 상 에서 크기 배제 크로마토그래피 에 의해 단량체 성 항체 로부터 분리 하 고 , 이어서 단량체 적 항체 분획 을 MILLIPORE Amicon Ultra - 15 원심 분리 농축기 를 사용 하 여 농축 하 였 다 . < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 를 - 20 ℃ 또는 - 80 ℃ 에서 동결 및 보관 하 였 다 . 환원제 의 존재 또는 부재 하 에서 SDS - PAGE 에 의해 < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 의 온전 성 을 분석 하 고 , 이어서 상기 기재 된 바 와 같이 코 마시 브릴리언트 블루 로 염색 하 였 다 . < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 의 단량체 성 상태 를 분석 적 크기 배제 크로마토그래피 에 의해 확인 하 였 다 ( 도 12 ) . 특징 분석 된 샘플 을 후속 단백질 분석법 및 기능 적 특징 분석 에 제공 하 였 다 . ESI 질량 분석 으로 , 완전히 탈 글 리코 실화 된 < IGF - 1 R > VL - VH 교환 항체 의 이론 적 분자량 을 확인 하 였 다 .