IgG 1 - CONA 항체 변이체 에 의한 세포 사멸 의 유도 에서 Fc - Fc - 매개 된 항체 육량 체화 의 관여 를 시험 하 기 위해 , 본 발명자 들 은 Fc - Fc 상호 작용 에 관여 하 는 소수성 노브 영역 내 의 코어 아미노산 ( Diebolder et al . , Science . 2014 Mar 14 ; 343 ( 6176 ) : 1260 - 3 ) 을 함유 하 는 영역 에서 Fc 에 결합 하 는 13 - 잔기 펩티드 DCAWHLGELVWCT ( DeLano et al . , Science 2000 Feb 18 ; 287 ( 5456 ) : 1279 - 83 ) 를 사용 하 였 다 . WIL 2 - S SF 세포 의 생존 율 을 본질 적 으로 실시 예 14 에 기재 된 바 와 같이 DCAWHLGELVWCT 펩티드 의 존재 또는 부재 하 에 결정 하 였 다 . 간략 하 게 , 75 μ L WIL 2 - S SF 세포 현탁액 을 폴리스티렌 96 - 웰 편평 - 바닥 플레이트 내 무 혈청 배지 에 ( 웰 당 50 , 000 개 세포 ) 시 딩 하 였 다 . 25 μ L 의 항체 ( 2 . 5 μ g / mL 최종 농도 ) 를 첨가 하 고 , 실온 에서 10 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 25 μ L 의 Fc - Fc - 억제 펩티드 DCAWHLGELVWCT 또는 스크램블 링 된 대 조군 펩티드 WCDLEGVTWHACL ( 80 μ g / mL ) 을 첨가 하 고 , 실온 에서 10 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 25 μ L 의 정제 된 C 1 q ( 실시 예 14 , 표 1 에 열거 된 바 와 같 은 각각 의 상이 한 항체 에 대한 EC 90 에 근사 한 최종 C 1 q 농도 ) 를 첨가 하 고 , 반응 혼합물 을 37 ℃ 에서 1 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 셀타 이터 - 글 로 검정 을 사용 하 여 세포 생존 율 을 결정 하 였 다 . 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 발광 을 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 14 는 Fc - Fc - 억제 펩티드 DCAWHLGELVWCT 의 존재 하 에 , K 326 W / E 430 G , E 333 S / E 430 G , K 326 W / E 333 S 또는 K 326 W / E 333 S / E 430 G 치환 을 갖 는 IgG 1 - CONA - C 49 W 변이체 의 DR 5 효능 제 활성 이 부분 적 으로 억제 되 었 다는 것 을 보여준다 . Fc - Fc - 억제 펩티드 는 돌연변이 E 430 G 를 갖 지 않 는 IgG 1 - CONA - C 49 W - K 326 W / E 333 S 보다 Fc - Fc - 증진 돌연변이 E 430 G 를 갖 는 IgG 1 - CONA - C 49 W - K 326 W / E 333 S / E 430 G 의 효능 작용 활성 을 더 강하 게 억제 하 였 다 .