대식세포 주인 RAW 264 . 7 세포 ( ATCC ) 를 10 % 우태 아 혈청 ( FBS , Hyclone ) , 2 mM L - 글루타민 , 100 units / ㎖ 페니실린 , 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 을 함유 하 는 DMEM ( Gibco ) 배지 를 이용 하 여 37 ℃, 습윤 한 5 % CO 2 배양기 에서 배양 하 였 다 . 대식세포 에서 의 세포독성 실험 을 위하 여 , 먼저 배경 대 조군 ( background control , DMEM + 1 % FBS + 항생제 1 x ) , 저대 조군 ( low control , DMEM + 1 % FBS + 항생제 1 x ) 및 고 대 조군 ( high control , DMEM + 1 % FBS + 2 % Triton X - 100 + 항생제 1 x ) 의 3 가지 LDH ( lactate dehydrogenase ) 분석 용 배지 를 준비 하 였 다 . 저대 조군 분석 용 배지 를 이용 하 여 실시 예 1 에서 제조 한 강화 약쑥 추출물 의 농도 가 1 , 5 , 10 , 20 , 50 , 100 ㎍/㎖ 이 되 도록 미리 준비 해 두 었 다 . 이때 , DMSO 의 농도 가 DMEM 배지 에 대하 여 0 . 1 % 이하 가 되 도록 DMSO 를 첨가 하 였 다 . 96 - 웰 플레이트 의 웰 당 DMEM 배지 와 대식세포 ( RAW 264 . 7 ) 를 5 x 104 세포 / 100 ㎕ 씩 분주 하 고 , CO 2 인큐베이터 에서 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 배경 대 조군 에 해당 하 는 웰 에 는 세포 를 첨가 하 지 않 았 다 . 24 시간 이 지난 후 각 웰 에서 배지 를 모두 제거 하 고 웰 에 각각 배경 대 조군 , 저대 조군 및 고대 조군 분석 용 배지 를 200 ㎕ 씩 첨가 하 였 다 . 다시 72 시간 동안 배양 한 후 , 각 웰 의 상층 액 을 조심 스럽 게 취하 여 새로운 96 - 웰 플레이트 에 100 ㎕ 씩 옮겨 넣 었 다 . 이 후 디아 퍼라 제 ( diaphorase ) 와 NAD + 가 함유 된 용액 C ( TAKARA Co . , LDH Cytotoxicity Detection Kit ) 를 100 ㎕ 씩 첨가 하 여 30 분 간 반응 시킨 후 , 마이크 로 플레이트 판독기 ( Bio - Rad Co . , USA ) 를 사용 하 여 490 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .