생성 된 항체 의 인간 ANGPT 2 에 대한 결합 을 또한 , BIACORE T 100 기구 ( GE Healthcare Biosciences AB , Uppsala , Sweden ) 를 사용 하 는 표면 플라스몬 공명 으로 조사 하 였 다 . 간략 하 게 는 , 친화성 측정 을 위해 , 인간 ANGPT 2 에 대한 항체 제시 를 위한 아민 커플링 을 통해 염소 < hIgG - Fcg > 다 클론 항체 를 CM 5 또는 CM 4 칩 상 에서 고정 시켰 다 . 5 mM Ca 2 + 를 갖 거나 또는 갖 지 않 는 HBS 완충액 ( HBS - P ( 10 mM HEPES , 150 mM NaCl , 0 . 005 % 트윈 20 , ph 7 . 4 ) , 25 ℃ 에서 결합 을 측정 하 였 다 . 정제 된 ANGPT 2 - His ( R & D Systems 또는 자체 정제 된 ) 를 용액 에서 의 다양 한 농도 로 첨가 하 였 다 . 3 분 의 ANGPT 2 - 주입 으로 결합 을 측정 하 고 ; HBS 완충액 으로 3 내지 5 분 동안 칩 표면 을 세 척하 여 해리 를 측정 하 고 , 1 : 1 랭뮤어 결합 모델 을 사용 하 여 KD 값 을 추정 하 였 다 . ANGPT 2 제조 물 의 이종 성 으로 인해 , 1 : 1 결합 이 관찰 될 수 없 고 ; 따라서 KD 값 은 단지 상대 적 인 추정 값 이 다 . 시스템 고유 의 기 저선 이동의 보정 , 및 노이즈 신호 감소 를 위해 , 음성 대 조군 데이터 ( 예 를 들 어 완충액 곡선 ) 를 샘플 곡선 에서 뺐 다 . Biacore T 100 평가 소프트웨어 버전 1 . 1 . 1 을 , 센서 그램 의 분석 및 친화성 데이터 의 계산 에 사용 하 였 다 ( 도 19 ) .