하나 는 Myceliophthora thermopbila gh 61 f 유전자 의 상류 영역 을 그리고 나머지 는 하류 영역 을 분리 하 도록 2 개 의 프라이머리 PCR 증폭 을 수행 하 였 다 . 각각 의 PCR 증폭 ( 25 ㎕) 은 주형 으로서 1 ㎕ ( 대략 6 ng ) 의 각 라이브러리 , 0 . 4 mM 각각 dATP dTTP , dGTP , 및 dCTP , 10 pmol 의 Adaptor Primer 1 ( Clontech Laboratones , Inc . , Mountain View , CA , USA ) , 10 pmol 의 프라이머 MtGH 61 F - R 1 또는 프라이머 MtGH 61 F - F 1 , 1 X ADVANTAGE ® GC - Melt LA 버퍼 , 및 1 . 25 유닛 의 ADVANTAGE ® GC Genomic Polymerase Mix 로 구성 된다 . 증폭 을 94 ℃ 에서 1 분 동안 전 - 변성 ; 94 ℃ 의 변성 온도 에서 30 초 동안 7 사이클 , 72 ℃ 에서 5 분 동안 어닐링 및 신장 ; 및 각각 94 ℃ 의 변성 온도 에서 30 초 동안 32 사이클 , 67 ℃ 에서 5 분 동안 어닐링 및 신장 다음 에 67 ℃ 에서 7 분 의 최종 연장 으로 프로그램 된 EPPENDORF ® MASTERCYCLER ® 5333 을 사용 하 여 수행 하 였 다 .