HCV 양성 가닥 의 시험관 내 전사체 는 문헌 [ 참조 ; Lohmann V et al . , J . Virol . , 77 : 3007 - 3019 , 2003 ] 에 기재 된 프로토콜 을 사용 하 여 생성 하 였 다 . 양성 - 가닥 HCV RNA 의 전사 를 위해 , 플라스미드 DNA ( pFK I 341 PI - Luc / NS 3 - 3 '/ ET , 제조원 ; ReBLikon Gmbh ( Heidelberg , Germany ) ) 를 AseI 에 이 어 Sca 1 으로 분해 시켰 다 . 제 한 분 해 ( restriction digest ) 후 , DNA 를 페놀 및 클로로포름 으로 추출 하 고 , 에탄올 로 침전 시키 고 , RNase - 비 함유 물 로 용해 시켰 다 . 시험관 내 전사 반응물 은 80 mM HEPES ( pH 7 . 5 ) , 12 mM MgCl 2 , 2 mM 스퍼 미 딘 , 40 mM 디 티오 트레이 톨 , 3 . 125 mM 농도 의 각각 의 뉴클레오사이드 트리 포스 페이트 , 1 U 의 RNasin 을 함유 하 였 다 . 5 ug 의 제한 된 플라스미드 DNA 및 80 U 의 T 7 RNA 폴리머 라 제 ( 제조원 ; Promega ) 를 사용 하 였 다 . 37 ℃ 에서 2 시간 후 , 추가 의 40 U 의 T 7 폴리머 라 제 를 가하 고 , 반응물 을 또 다른 2 시간 동안 항온 처리 하 였 다 . 플라스미드 DNA 1 ug 당 1 U 의 RNase - 비 함유 DNase ( 제조원 ; Promega ) 를 가한 다음 37 ℃ 에서 30 분 동안 항온 처리 하 여 전사 를 종료 하 였 다 . 산 성 페놀 및 클로로포름 으로 추출 한 후 , RNA 를 이소프로판올 로 침전 시키 고 , RNase - 비 함유 물 에 용해 시켰 다 . 260 nm 에서 의 광학 밀도 ( OD 260 ) 의 측정 에 의해 농도 를 결정 하 고 , RNA 강도 는 변성 아가로스 겔 전기영동 에 의해 확인 하 였 다 .