해동 - 후 48 시간 째 에 , 세포 를 1 ) Cas 9 단독 ; 또는 2 ) sg 1128 ( 상기 기재 된 바 와 같 음 ) , 또는 표 11 의 sgRNA 중 하나 를 함유 하 는 Cas 9 RNP 복합체 를 이용 하 여 전기 천공 시켰 다 . 간략 하 게 는 , 1 : 2 몰 비 의 Cas 9 단백질 : sgRNA 를 사용 하 여 RNP 를 제조 하 여 , 10 uM Cas 9 및 20 uM sgRNA 와 의 RNP 혼합물 을 초래 하 였 다 . 5 ul 의 10 uM RNP 를 20 ul P 3 완충제 ( Lonza ) 에서 1 x 106 개 CD 34 + 세포 에 첨가 하 였 다 . 22 ul 의 전기 천공 믹스 를 96 웰 전기 천 공 플레이트 의 1 개 웰 로 옮기 고 , Lonza Amaxa 96 - 웰 Shuttle 또는 Lonza Nucleofector 시스템 , 프로그램 CA - 137 을 사용 하 여 전기 천공 시켰 다 . 전기 천 공 후 즉시 , 80 ul 의 배양 배지 ( StemSpan SFEM + 100 ng / ml SCF / IL 6 / Flt 3 L / TPO + 500 nM 화합물 4 + 1 X Pen / Strep ) 를 전기 천공 된 시료 에 첨가 하 였 다 .