결합 분석 을 위해 , 세포 를 4 도 에서 30 분 동안 리간드 - 염료 단독 또는 리간드 - 염료 및 유리 리간드 ( 100 x , 30 분 동안 사전 배양 된 ) 와 함께 배양 하 였 다 . 배양 후 세포 를 3 회 세척 하 고 , 2 % FBS PBS 에 재 - 현 탁 시키 고 , 7 - AAD 를 첨가 하 여 죽 은 세포 를 게이트 아웃 시켰 다 . FK 506 - 로다민 및 FA - S 0456 의 FRET 영상 화 : 융합 수용체 의 점유 를 이해 하 기 위해 , FKBP - FRa + jurkat 세포 는 지시 된 서열 및 농도 에서 FA / FA - S 0456 , FK 506 / FK 506 - 로다민 과 함께 배양 한다 . FRET 는 BD Fortessa 유세포 분석기 에 의해 검출 되 는 , 동일 하 거나 근처 의 수용체 에서 FA - OTL 38 로 그 의 에너지 가 전달 될 때 FA - 로다민 의 강도 손실 에 의해 시각 화 된다 . FlowJo 소프트웨어 를 사용 하 여 결과 를 분석 했 다 .