murine melanoma ( B 16 F 10 ) 세포 를 10 % 의 FBS 가 함유 된 DMEM 배지 로 6 - 웰 플레이트 에 웰 당 1 × 105 개 로 접종 한 후 , 5 % CO 2 및 37 ℃ 하 에서 세포 가 웰 바닥 에 약 80 % 이상 부착 될 때 까지 배양 하 였 다 . 배양 후 배지 를 제거 하 고 시료 를 적당 농도 로 희석 된 배지 에 교체 한 후 , 5 % CO 2 및 37 ℃ 하 에서 3 일 간 배양 하 였 다 . 덩굴 차 추출물 및 지페 노 사이드 의 농도 범위 는 세포독성 이 없 는 1 ppm , 10 ppm , 100 ppm 으로 결정 하 였 다 . 배지 를 제거 한 세포 를 PBS 로 세척 하 고 , 이것 을 트립신 으로 처리 하 여 세포 를 회수 하 였 다 . 회수 된 세포 는 혈구계 를 이용 하 여 세 포수 를 측정 한 후 5 , 000 내지 10 , 000 rpm 으로 10 분 간 원심 분리 한 다음 상등 액 을 제거 하 여 펠 렛 을 얻 었 다 . 이 세포 펠 렛 을 분해 완충액 ( lysis buffer ) 을 이용 하 여 분쇄 한 후 , 12 , 000 rpm 으로 10 분 간 원심 분리 하 여 상층 액 을 수집 하 였 다 . 이 액 을 가지 고 마이크 로 플레이트 리더 로 492 ㎚ 에서 흡광도 를 측정 하 여 , 세포 일정 수당 티 로 시 나 제 활성 을 구하 였 다 . 대 조군 으로 는 알 부틴 을 사용 하 였 다 .