한국 재래 돼지 특이 AFLP 마커 를 개발 하 기 위해 항응고제 ( 0 . 5 M EDTA ) 가 처리 된 진공 주사기 ( BD vacutainer , Franklin Lakes , USA ) 를 이용 하 여 돼지 의 경정맥 에서 약 5 ~ 10 ㎖ 정도 의 혈액 을 채취 하 였 다 . 여기 에 0 . 2 % NaCl 용액 을 첨가 한 후 천천히 흔들 어서 혈구 를 파괴 한 후 2000 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 백혈구 층 을 분리 하 였 다 . 분리 된 백혈구 층 에 0 . 16 M NaCl / 1 mM EDTA 와 0 . 5 % N - 라우 로일 사코신 ( N - lauroylsarcosine ) 용액 을 첨가 하 여 세포막 을 파괴 시켜 핵 내 의 DNA 를 용출 시키 고 , 막 단백질 및 기타 단백질 들 을 제거 하 기 위해 프로 티 나 아제 K ( 10 ㎎/㎖, 프로 메가 미국 메디슨 ) 를 처리 하 여 37 ℃ 에서 12 시간 동안 배양 하 였 다 . 배양 이 끝난 후 동량 의 TE : 페놀 ( 1 : 1 ) 과 페놀 : 클로로포름 : 이소아밀알코올 = 25 : 24 : 1 을 각각 1 회 씩 2 시간 동안 처리 하 여 단백질 을 제거 한 후 , 3000 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 상층 액 만 새로운 튜브 에 옮겨 담 고 , 3 M 소듐 아세테이트 ( pH 5 . 2 ) 와 100 % 에탄올 을 넣 어 DNA 를 응축 시켰 다 . 응축 된 DNA 는 70 % 에탄올 을 넣 어 세정 하 고 , 세정 된 DNA 는 TE ( 10 mM Tris - HCl pH 8 . 0 , 1 mM EDTA ) 에 녹여 4 ℃ 에 보관 하 였 다 .