Cas 9 니카 제 와 복합체 형성 하 는 2 개 의 gRNA 가 NHEJ - 매개 삽입 결실 을 유도 할 목적 으로 2 개 의 단일 가닥 단절 을 유도 하 는 실시 형태 에서 , 2 개 의 gRNA , 예 를 들 어 독립 적 으로 , 단 분자 ( 또는 키메라 ) 또는 모듈 식 gRNA 는 , 표적 위치 의 뉴클레오타이드 의 NHEJ 수선 을 대비 하 기 위해 2 개 의 단일 가닥 단절 을 위치 시키 도록 배열 된다 . 실시 형태 에서 , gRNA 들 은 본질 적 으로 이중 가닥 절 단부 을 모방 하 여 , 상이 한 가닥 상 의 동일 한 위치 또는 서로 의 수 뉴클레오타이드 내 에 절단 을 위치 시키 도록 배열 된다 . 실시 형태 에서 , 더 가까운 닉 은 표적 위치 로부터 0 내지 30 bp 사이 ( 예 를 들 어 표적 위치 로부터 30 , 25 , 20 , 1 , 10 , 9 , 8 , 7 , 6 , 5 , 4 , 3 , 2 또는 1 bp 미만 ) 떨어져 있 고 , 두 개 의 닉 은 서로 의 25 내지 55 bp 내 ( 예 를 들 어 25 내지 50 , 25 내지 45 , 25 내지 40 , 25 내지 35 , 25 내지 30 , 50 내지 55 , 45 내지 55 , 40 내지 55 , 35 내지 55 , 30 내지 55 , 30 내지 50 , 35 내지 50 , 40 내지 50 , 45 내지 50 , 35 내지 45 , 또는 40 내지 45 bp 사이 ) 에 있 으며 , 서로 로부터 100 bp 이하 ( 예 를 들 어 90 , 80 , 70 , 60 , 50 , 40 , 30 , 20 또는 10 bp 이하 ) 떨어져 있 다 . 실시 형태 에서 , gRNA 들 은 표적 위치 의 뉴클레오타이드 의 각 편 상 에 단일 가닥 단절 을 배치 하 도록 배열 된다 .