분리 한 DNA 를 다시 E . coli DH 10 B 세포 에 도입 시킨 후 , 한 플레이트 당 50 - 100 개 의 콜로니 가 자랄 수 있 도록 , 4 - 5 개 의 플레이트 를 준비 하 였 다 . 상기 플레이트 로부터 다시 단일 콜로니 를 취하 여 LB 배지 에 접종 한 후 , 단일 플라스미드 DNA 를 공지 의 알 칼린 - 라 이시스 법 으로 분리 하 였 다 . pCEV 29 발현 벡터 에 삽입 된 cDNA 를 확인 하 기 위하 여 , 상기 벡터 의 삽입 유전자 의 5 ' 및 3 ' 부근 각각 에 존재 하 는 염기 서열 로 구성 된 프라이머 ( forward : 5 '- CGACTGGAGCACGAGGACACTGA - 3 '; reverse : 5 '- CATCAAAAATAGCCAAAAGG - 3 ') 를 사용 하 고 , 상기 분리 한 각각 의 p 53 유도 세포 사멸 저항성 Saos - 2 세포주 에서 추출 한 pCEV 29 발현 벡터 를 주형 으로 사용 하 여 94 ℃ 1 min , 48 ℃ 1 min , 72 ℃ 10 min 을 1 주기 로 하 는 30 주기 의 PCR 반응 을 수행 하 였 다 .