이종 이량체 dsFv 의 양쪽 성분 을 CH 3 에 묶 었 다 . VH 및 VL 을 그 들 의 N - 말단 에서 부피 가 큰 CH 3 도메인 에 이렇게 동시 부착 하 는 것 은 Fv 의 구조 에 영향 을 미치 지 않 는다 . 그러나 , 그것 은 항원 에 따라 ( 예 를 들 어 링커 길 이 및 각각 의 항원 구조 에 따라 ) 항원 에 대한 접근성 을 제한 할 수 있 는데 , 그 이유 는 CDR 영역 이 CH 3 가 위치 하 는 방향 을 가리키 기 때문 이 다 . 또한 , 2 개 의 연결 점 에서 묶 는 것 은 Fv 가 회전 하 거나 CH 3 옆 으로 이동 하 는 자유 를 매우 제한 한다 . 그 때문 에 항원 은 CH 3 과 Fv 사이 에 비집 고 들어가 야 한다 . 이 는 항원 으로 의 접근성 에 영향 을 미치 고 친화성 을 감소 시킬 수 있 으며 , 이 를 본 발명자 들 은 실제로 이중 특이 적 항체 의 이중 - 연결 된 dsFv 부분 에 대해 관찰 했 다 ( 표 2 의 SPR 데이터 참조 ) . 입체 장애 로 인한 항원 접근성 문제 와 일관 되 게 , 친화성 측정 은 이중 - 묶인 dsFv 에 대한 유의 하 게 감소 된 온 - 레이트 ( on - rate ) 를 밝혔 다 . 그럼에도 불구 하 고 , Fv 의 구조 적 완전 성 은 온전 해 보이 는데 , 그 이유 는 일단 항원 이 결합 하 면 , 오프 - 레이트 ( off - rate ) 가 비 수식 항체 의 경우 와 동일 기 때문 이 다 . 이중 특이 적 항체 의 IgG - 유사 접근 가능 팔 의 결합 에 대한 , 뿐 만 아니 라 부가 적 이중 - 묶인 dsFv 에 대한 친화성 값 ( 이 는 예상 대로 완전 한 친화성 을 가짐 ) 이 표 2 에 열거 되 어 있 다 . 여기 서 이중 - 묶음 후 입체 장애 로 인해 온 - 레이트 가 감소 된 dsFv 모듈 에 대해 용어 ' 제한 또는 감소 된 결합 방식 ' 을 사용 한다 .