하위 MVA 경로 를 또한 카나마이신 항생제 내성 마커 를 함유 하 는 pTrc 에 클로닝 하 였 다 . 플라스미드 pTrcKKDIy 를 제한 엔 도 뉴클레아제 ApaI 및 PstI 으로 소화 시키 고 , 5930 bp 절편 을 1 . 2 % 아가로오스 E - 겔 상 에서 분리 시키 고 , 제 조사 의 지시 사항 에 따라 Qiagen Gel Purification 키트 를 사용 하 여 정제 하 였 다 . 실시 예 7 에서 기재 된 플라스미드 pTrcKudzuKan 을 제한 엔 도 뉴클레아제 ApaI 및 PstI 로 소화 시키 고 , 벡터 를 함유 하 는 3338 bp 절편 을 Qiagen Gel Purification 키트 를 사용 하 여 1 . 2 % E - 겔 에서 정제 하 였 다 . 3338 bp 벡터 절편 및 5930 bp 하위 MVA 경로 절편 를 Roche Quick Ligation 키트 를 사용 하 여 라 이게 이 션 하 였 다 . 라 이게 이 션 혼합물 을 대장균 TOP 10 세포 에 형질 전환 하 고 , 형질전환 체 를 카나마이신 ( 50 ㎍/㎖) 함유 LA 상 에서 선별 하 면서 37 ℃ 에서 하룻밤 동안 성장 시켰 다 . 형질전환 체 를 제한 효소 소화 로 확인 하 고 , 하나 를 저장물 로서 동결 시켰 다 . 플라스미드 를 pTrcKanKKDIy 로 지정 하 였 다 .