동물 작업 은 Home Office approved project licence 하 에 수행 하 였 다 . 6 내지 12 주령 의 암수 C 57 Bl / 6 ( Harlan ) 또는 HLA - A 2 트랜스 제닉 ( HHDII ) ( Pasteur Institute , Paris ) 을 사용 하 였 다 . 합성 펩타이드 ( John Keyte 제조 , Department of Biomedical Sciences , Nottingham University , UK ) 를 프로인트 불완전 애 쥬 번트 로 유화 시킨 다음 , 피하 경로 를 통해 주사 하 였 다 . 각각 의 마우스 는 10 ㎍ 펩타이드 / 면역 화 를 투여 받 았 다 . 제조 업자 의 지시 에 따라 DNA 를 1 . O ㎛ 금 입자 ( BioRad , Hemel Hempstead , UK ) 에 코팅 한 다음 , Helios 유전자 총 ( BioRad ) 으로 피내 투여 하 였 다 . 각각 의 마우스 는 1 ㎍ DNA / 면역 화 를 투여 받 았 다 . 단기 전기 펄스 로 주사 직후 병행 하 여 네이키드 DNA 용액 을 또한 i . d . 또는 i . m 투여 하 였 다 ( 10 ㎍/ 면역 화 ) . 마우스 를 0 , 1 및 2 주 째 에 면역 화 시킨 다음 , 3 주 째 에 비장 을 적출 하 였 다 . 생체 내 에서 T 세포 서브 세트 의 고갈 은 면역 화 4 일 전 400 ㎍ 항 - CD 25 항체 ( PC 61 ) 의 주사 ( i . p . ) 또는 2 차 면역 화 와 동시 에 200 ㎍ 항 - CTLA - 4 항체 의 주사 ( i . p . ) 에 의하 여 수행 하 였 다 .