상기 와 같이 2 차 solution - phase sorting 후 , IL - 15 에 특이 적 인 Fab - p Ⅲ 단백질 을 생산 하 는 E . coli TG 1 세포 를 선별 하 기 위해 , 96 개 의 E . coli 클론 을 무작위 로 선별 하 여 멸균 된 96 - 웰 플레이트 ( Nunc , Denmark ) 에 150 μ l 의 2 x YT / ACTG 배지 에서 OD 600 nm = 0 . 5 까지 27 ℃ 에서 배양 하 였 다 . 배양 이 완료 된 배양액 을 3 , 300 ×g 으로 10 분 동안 원심 분리 하 여 상등 액 을 제거 하 고 , 세포 침전물 을 0 . 02 % 아라비노스 ( arabinose ) ( w / v ) 와 0 . 1 mM IPTG ( w / v ) 를 포함 한 2 x YT / ACT 배지 150 μ l 로 재현 탁하 여 27 ℃ 에서 밤새 도록 배양 하 였 다 . 배양 상등 액 을 MBP - IL - 15 , MBP 가 10 μ g / ml 농도 로 코팅 ( coating buffer ; 0 . 1 M NaHCO 3 , pH 9 . 6 ) 되 어 있 는 MaxiSorb ELISA 플레이트 ( Nunc ) 의 각 웰 에 각각 50 μ l 씩 첨가 하 였 다 . 각 웰 을 PBST 를 이용 하 여 세척 한 후 , 각 웰 에 goat anti - human kappa L chain antibody - HRPO ( Sigma - Aldrich ) 를 첨가 하 여 반응 시켰 다 . 이후 , 시 그날 ( signal ) 은 3 , 3 ', 5 , 5 '- tetramethyl benzidine ( TMB ) ( Sigma - Aldrich ) 로 확인 하 였으며 , ELISA 리더 기 ( ELISA reader , BioRad ) 의 파장 450 nm 로 흡광도 를 측정 하 였 다 . 그 결과 , Fab 클론 의 60 % 이상 이 MBP - IL - 15 에 특이 적 으로 결합 하 였 다 ( 도 1 의 ( A ) ) . 상기 의 ELISA 결과 에서 MBP - IL - 15 에 특이 적 으로 결합 하 는 클론 중 OD 450 = 0 . 25 이상 의 ELISA 시그널 ( signal ) 을 보인 15 개 의 Fab 클론 들 은 DNA 시퀀스 분석 을 위해 선별 하 였 다 .