고정 된 랫 트 의 슬관절 조직 을 파라핀 포 매 후 5 um 두께 로 박절 한 관상 절편 에서 MMP - 3 및 MMP - 9 단백질 발현 을 확인 하 기 위해 면역 조직 화학 반응 검사 실시 하 였 다 . 각 실험 조건 에 따라 처리 한 관절 조직 의 면역 조직 화학 적 염색 은 조직 의 탈 파라핀 과정 을 끝낸 후 , 면역 조직 화학 염색 을 위한 전처리 과정 으로 3 % 의 내인성 과산화 효소 ( endogenous peroxidase ) 를 반응 시키 고 , 0 . 15 % triton X - 100 을 첨가 한 PBS 용액 을 사용 하 여 조직 의 투과성 을 높였 다 . BSA ( Bovine serum albumin ; Sigma - Aldrich Chemical Co . , USA ) 가 포함 된 용액 에 1 % 차단 용액 으로 처리 하 여 비 특이 적 반응 을 차단 한 후 , 0 . 01 M PBS 를 이용 하 여 조직 을 수세 하 였 다 . 이후 항 - 토끼 IgG ( 1 : 1000 , Abcam , Cambridge , UK ) 를 처리 한 후 0 . 1 % Triton X - 100 으로 반응 시켰 다 . 다시 절편 을 수세 한 후 , ABC ( Avidin - biotin complex ) 키트 ( vector Laboratories , InC . , Burlingame , CA , USA ) 로 60 분 간 반응 시켰으며 , 수세 과정 을 거쳐 10 분 간 3 , 3 '- Diaminobenzidine ( DAB , ZYMED Lab . , Reichenbach , Germany ) 으로 발색 하 였 다 . 발색 이 유발 된 조직 을 슬라이드 에 올려 헤마톡실린 으로 3 분 간 염색 한 후 흐르 는 물 에서 수세 하 고 에탄올 과 자일렌 을 이용 하 여 탈 수 및 투명 화 과정 을 거친 다음 마운 팅 배지 ( permanent mounting media ) 를 이용 하 여 봉입 을 실시 하 였 다 . 관찰 은 광학 현미경 ( Carl Zeiss , Jena , Germany ) 을 이용 하 여 관찰 하 였 다 .