나머지 조합 라운드 2 라이브러리 는 다음 과 같이 스크리닝 되 었 다 : 1 mM 레바 우디 오시드 A ( Sigma , > 96 % 순도 ) 의 기질 로딩 및 1 mM UDP - 글루코스 ( Sigma , > 93 % 순도 ) 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 면서 100 μ L 반응 에서 25 μ L 용해 물 의 용해 물 로딩 을 사용 하 거나 또는 100 μ L 반응 에서 10 μ L 의 4 배 희석 된 용해 물 을 사용 하 여 서열 번호 769 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 1 - 2 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 트리스 - HCl 완충제 , pH 7 . 5 , 3 mM MgCl 2 , 40 ℃. 반응물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 0 . 5 % 부피 / 부피 아세 토니 트릴 로 켄 칭 하 거나 또는 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 90 μ L 의 아 세토 니트릴 로 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 실시 예 1 , 표 1 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 글 리코 실화 된 생성물 을 물 에 1 : 100 또는 1 : 10 으로 희석 한 후 , LC - MS / MS 에 의해 상청 액 에서 검출 하 였 다 . 서열 번호 770 보다 더 많 은 양 으로 레바 우디 오시드 A 로부터 레바 우디 오시드 D 를 생성 한 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 변이체 폴리펩티드 가 확인 되 었 다 . 조작 된 폴리펩티드 는 표 15 . 3 에 열거 되 어 있 다 .