제조사 의 프로토콜 에 따라 , 프라이머 MCM 120 및 MCM 196 및 Herculase II Fusion 키트 와 함께 PCR 증폭 을 위한 주형 으로서 플라스미드 MCM 484 - 487 을 사용 하 였 다 . 0 , 1 또는 3 uL DMSO 로 , 주형 당 세 반응 을 실행 하 였 다 . 5 O uL 반응물 을 하 기 와 같 은 사이클 에 적용 하 였 다 : 95 ℃, 2 분 ; 5 사이클 동안 ( 95 ℃, 20 초 ; 55 ℃, 20 초 ; 72 ℃, 1 . 5 분 ) ; 25 사이클 동안 ( 95 ℃, 20 초 ; 6 O ℃, 20 초 ; 72 ℃, 1 . 5 분 ) ; 72 ℃ 에서 3 분 ; 하룻밤 동안 4 ℃. 주어진 주형 으로부터 의 세 반응물 을 모으 고 Qiagen PCR 컬럼 상 에서 정제 하 고 , 60 ℃ 에서 30 uL EB 로 용리 하 였 다 . 37 ℃ 에서 3 시간 동안 1 x Roche 완충액 A 에서 5 uL DNA 를 1 uL DpnI 으로 소화 시켰 다 . 상기 DNA 를 이후 30 분 동안 과량 의 물 에 대해 미세 투석 하 였 다 .