huE 104 . v 1 Fab 는 huE 104 . v 1 의 결합 이 사량 체 를 해리 시키 지 않 기 때문 에 트립 타제 사량 체 를 가진 결정 구조 를 생성 하 는 데 사용 되 었 다 . 트립 타제 / huE 104 . v 1 결정 은 0 . 1 M Tris ( pH 8 . 5 ) , 0 . 2 M 염화칼슘 , 20 % 폴리에틸렌 글리콜 ( PEG ) 4000 및 8 % 펜타에리트리톨 에 톡 실 레이트 를 함유 하 는 저 장소 용액 과 1 : 1 ( v / v ) 로 단백질 을 혼합 함 으로써 증기 확산 방법 을 사용 하 여 19 ℃ 에서 성장 되 었 다 . 　 결정 은 0 . 1 M Tris ( pH 8 . 5 ) , 0 . 2 M 염화칼슘 , 35 % PEG 3350 을 함유 하 는 인공 모액 에서 동결 - 보호 되 었 고 액체 질소 에서 플래시 냉동 되 었 다 . 회절 데이터 는 Pilatus 6 M 픽셀 어레이 검출기 및 0 . 9795 Å 파장 X - 선 을 사용 하 는 3 Å 해상도 까지 확장 하 는 단사 정계 격자 의 SSRL 빔 라인 12 - 2 에서 수집 되 었 다 . 데이터 는 감소 되 었 고 ( Kabsch , Acta Crystallogr . D Biol . Crystallogr . 66 : 125 - 132 , 2010 ; Vonrhein 등 Acta . Crystallogr . D 67 : 293 - 302 , 2011 ) 그리고 확장 되 었 고 ( Winn 등 Acta Crystallogr . D Biol . Crystallogr . 67 : 235 - 242 , 2011 ) , 및 구조 는 분자 대체로 해결 되 었 다 ( McCoy 등 J . Appl . Crystallogr . 40 : 658 - 674 , 2007 ) ( 4 Fabs 에 의해 결합 된 트립 타제 사량 체 를 드러내 는 공간 그룹 P 21 에서 ) . 분자 대체 검색 프로브 는 회전 기능 만 을 사용 하 는 팔꿈치 각 의 범위 로 변형 된 버전 을 스캐닝 함 으로써 PDB 수탁 1 FVD 로부터 유래 된 항체 Fab 단편 그리고 PDB 수탁 4 A 6 L 로부터 트립 타제 프로토 머이 었 다 . 제한 된 개량 후 , 하나 의 Fab 불변 영역 은 1 FVD 로부터 단지 불변 영역 을 사용 하 는 분자 대체 검색 에서 대체 되 었 다 . 트립 타제 잔기 넘버링 은 키모트립시노겐 반응식 으로 변화 되 었 고 Fab - E 104 v 1 잔기 넘버링 은 카 밧 반응식 으로 변화 되 었 다 . 모델 및 전자 밀도 맵 점검 및 조정 은 하 기 를 사용 하 여 수행 되 었 고 : Coot ( Emsley 등 Acta Crystallogr . D Biol . Crystallogr . 66 : 486 - 501 , 2010 ) 그리고 구조 는 하 기 를 사용 하 여 정제 되 었 다 : REFMAC 5 ( Murshudov 등 Acta Crystallogr . D Biol . Crystallogr . 67 : 355 - 367 , 2011 ) 및 Phenix . refine ( Adams 등 Acta Crystallogr . D Biol . Crystallogr . 66 , 213 - 221 , 2010 ) . 데이터 수집 및 개량 메 트릭스 는 표 9 에 나타난다 . HDX 실험 은 상기 기재 된 바 와 같이 수행 되 었 다 .