TCDD 를 처리 한 경우 의 실험 결과 를 확인 하 기 위하 여 , 먼저 , 74 passage 의 HaCaT 세포 를 3 × 105 / well 의 세포 밀도 로 6 - well plate 에 seeding 후 16 시간 동안 배양 시키 고 배양액 을 serum free media 로 교체 한 다음 , 여기 에 미리 반응 시켜 둔 TCDD 와 상기 펩타이드 의 혼합물 을 1 시간 동안 처리 하 였 다 . TCDD 는 0 . 1 μ M 의 농도 로 처리 하 였 고 펩타이드 는 각각 10 , 50 , 100 μ M 의 농도 로 처리 하 였 다 . negative control 은 펩타이드 는 처리 하 지 않 고 TCDD 만 처리 하 였 고 , positive control 은 TCDD 와 함께 CH 223191 를 10 μ M 의 농도 로 처리 하 였 다 . 세포 를 상기 혼합물 과 1 시간 동안 반응 시킨 후 , 세포 를 용해 하 고 세포 질 및 핵 단백질 을 분리 할 수 있 는 키트 ( Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents Kit , Thermo scientific , USA ) 를 이용 하 여 핵 단백질 만 을 분리 한 다음 , 항 - AhR 항체 ( Santacruz biotechnology , USA ) 와 항 - HDAC 항체 ( Santacruz biotechnology , USA ) 를 사용 하 여 AhR 에 대한 웨스턴 블랏팅 을 진행 하 였 다 . 실험 에 사용 한 핵 단백질 총량 을 비교 하 기 위하 여 HDAC 도 함께 확인 하 였 다 .