IL - 1 β , IL - 6 , TNF , IL - 8 , IL - 10 , IL - 12 p 70 , MCP - 11 과 같 은 염증 성 사이토카인 및 케모 카인 의 방출 을 자극 하 기 위해 , PBMC / PMN ( 1 - 10 x 106 / mL ) 를 리포 폴리 사카 라이드 ( LPS , 최종 농도 1 - 100 ng / mL ) , 포르 볼 - 12 - 미리 스테이트 - 13 - 아세테이트 ( PMA , 최종 농도 1 - 100 ng / mL ) 또는 LPS / PMA 혼합물 과 함께 , ( 1 - 10 % 소 태아 혈청 이 첨가 된 RPMI - 1640 배지 에서 ) 4 - 24 시간 동안 인 큐 베이 션 ( 37 ℃/ 5 % CO 2 ) 한다 . 또한 , PBMC / PMN 을 , 상기 PMA 및 / 또는 LPS 의 첨가 또는 무 첨가 한 상태 에서 , 아데노신 디포 스 페이트 ( ADP ) , 아라키돈산 , 칼슘 이온 포어 A 23187 및 / 또는 트 롬복 산 유사 체 U - 46619 를 입증 된 생물학 적 으로 활성 인 농도 로 사용 하 여 , 자극 할 수 있 다 . PBMC / PMN 의 인 큐 베이 션 / 자극 은 또한 ( 건강 한 공 여자 혈액 유래 의 ) 인간 혈소판 존재 하 에 , PBMC / PMN : 혈소판 이 1 : 10 내지 1 `: 10000 인 비율 에서 수행 할 수 있 다 . 세포 를 , 사이토카인 / 케모 카인 방출 을 위한 PBMC / PMN 자극 전 1 분 내지 24 시간 동안 , 테스트 약물 ( 들 ) ( 서 플라 타스 트 와 스타 틴 의 조합 , 서 플라 타스 트 단독 및 스타 틴 단독 ) 과 함께 ( 37 ℃/ 5 % CO 2 , 1 - 10 % 소 태아 혈청 이 첨가 된 RPMI - 1640 배지 에서 ) 인 큐 베이 션 한다 ( 비교 를 위해 , 일부 실험 에서 는 약물 없이 수행 하 며 ; 테스트 약물 ( 들 ) 은 또한 PBMC / PMN 자극 과 동시 에 첨가 될 수 있 음 ) . 인 큐 베이 션 / 자극 후 세포 를 스핀 다운 한 다음 , 인간 사이토카인 과 케모 카인 의 상층 액내 농도 를 세포 측정 비드 분석 ( BD Biosciences Pharmingen , San Diego , USA ) 을 이용 하 여 제조사 의 설명 에 따라 정량 한다 . 또한 , 사이토카인 과 케모 카인 측정 을 위한 상업 적 으로 시판 되 는 효소 면역 - 분석 키트 ( EIA / ELISA 키트 ) 를 제조사 의 설명서 에 따라 사용 할 수 있 다 . 세포 펠 렛 은 마이크 로 어레이 실험 을 위해 추가 적 으로 가공 할 때 까지 RLT 완충액 ( QIAGEN , Valencia , CA ) 중 에 동결 ( - 80 ℃) 저장 한다 ( 하 기 실시 예 12 참조 ) .