PCR 프라임 서열 과 독립 적 인 , 명백 한 B - B 4 V κ 리더 서열 을 Kabat 데 이타 베이스 에서 뮤 라인 리더 서열 과 정렬 하 였 다 . B - B 4 VH 리더 와 가장 근접 하 게 매치 되 는 것 은 VK - 10 ARS - A ( Sanz et al . , PNAS , 84 ( 1987 ) , 1085 ) 이 었 다 . 이 리더 서열 은 시그널 P 알고리즘 에 의해 정확 하 게 절단 되 는 것 으로 추정 된다 ( Nielsen et al . , Protein Eng , 10 ( 1997 ) ; 1 ) . 프라이머 CBB 4 Kfor ( 상기 에 언급 됨 ) 및 g 2258 ( 5 '- CGCG - GGATC - CACTCA - CGTTTGA - TTTCCAGC - TTGGT - GCCTCC - 3 ' [ 서열 번호 12 ] ; 제한 효소 부위 는 밑줄 침 ) 을 , 완전 한 리더 B - B 4 V κ 영역 과 , pKN 100 발현 벡터 에 클로닝 하 기 위한 HindIII 및 BamHI 말단 제한 효소 부위 가 포함 된 , PCR 산물 을 제조 하 도록 설계 하 였 다 . 정 방향 프라이머 , CBB 4 K 는 HindIII 제한 효소 부위 , Kozak 번역 개 시부 및 VK - 10 ARS - A 리더 서열 을 도입 시킨다 . 역방향 프라이머 g 2258 은 스 플라이스 공여 부위 와 BamHI 제한 효소 부위 를 도입 시킨다 . 제조 되 는 단편 은 pKN 100 의 HindIII / BamHI 제한 효소 부위 에 클로닝 하 였 다 .