본 발명자 들 은 칼슘 이온 통로 α 1 B 유전자 가 결실 된 유전자 변이 생쥐 를 제조 하 기 위하 여 , 일반 적 으로 사용 되 는 유전자 적중 법 ( gene targeting method ) 을 이용 하 였 다 . 우선 , α 1 B 유전자 를 포함 하 는 생쥐 게놈 DNA 를 얻 기 위해 129 / sv 생쥐 게놈 DNA 절편 들 을 무작위 로 삽입 시킨 박테리오파지 람다 FIX Ⅱ ( bacteriophage lamda FIX Ⅱ , Stratagene ) 라이브러리 를 α 1 B 랫 트 cDNA ( AUG ~ 720 bp , Dr . Jin HM ( NIH ) 으로부터 얻 음 ) 를 프로브 로 사용 하 여 스크리닝 하 였 다 . 상기 스크리닝 을 통하 여 α 1 B 유전자 IS ( intervening segment ) 1 - 3 코딩 지역 을 포함 하 는 18 . 4 kb 게놈 DNA 를 가진 박테리오파지 클론 을 얻 었 으며 , 다양 한 제한 효소 를 이용 하 여 제한 효소 지도 를 완성 한 후 , 적중 벡터 를 만드 는데 사용 하 였 다 . 기본 벡터 는 pBluescript Ⅱ KS ( +/-)( Stratagene ) 를 기본 벡터 로 사용 하 였으며 , pEGFP - 1 ( Clonetech ) 벡터 로부터 SV 40 - 폴리 A 를 포함 하 는 GFP ( green fluorescent protein ) 유전자 를 잘라 내 어 엑손 ( 아미노산 158 ) 을 포함 하 는 BamHI - 태그 IS 2 에 융합 하 였 다 . pLNT 벡터 ( Sugitaui Noda 로부터 얻 음 ) 로부터 PGK - neo 유전자 를 잘라 내 어 GFP 유전자 의 하위 에 연결 하 였 다 .