모든 ELISA - 양성 클론 은 표준 방법 ( MabSelect SuRe ™; GE Healthcare ) 를 사용 하 는 친화 도 크로마토그래피 로 정제 되 었 고 그 다음 재조합 트립 타제 활성 검정 에서 인간 트립 타제 활성 의 억제 를 위하 여 스크리닝 되 었 다 . 간단히 , 항체 는 PBS , pH 7 . 4 에서 0 . 007 내지 100 , 000 ng / mL ( 0 . 046 pM 내지 667 nM ) 로 희석 되 었 다 . 재조합 인간 트립 타제 베타 1 은 TNH 완충액 ( 200 mM Tris , 150 mM NaCl , 0 . 1 mg / mL 헤파린 , 0 . 01 % TRITON ™ X - 100 , pH 8 . 0 ) 에서 3 nM 로 희석 되 었 고 흑색 384 - 웰 플레이트 ( ViewPlate - 384 F , Black , Clear - Bottom , Perkin Elmer , Catalog No . 6007470 ) 에서 항 - 트립 타제 항체 와 1 : 1 조합 되 었 다 . 플레이트 는 1 시간 동안 주위 온도 에서 온화 한 진탕 과 함께 인 큐 베이 션 되 었 다 . 비색계 기질 S - 2288 ( Chromogenix , 부품 번호 82 - 0852 - 39 ) 는 TNH 완충액 에서 900 μ M 로 희석 되 었 고 플레이트 에 첨가 되 었 다 . 최종 인 - 웰 농도 는 300 μ M S - 2288 , 1 nM 재조합 인간 트립 타제 베타 1 , 및 0 . 015 pM 내지 222 nM 항 - 트립 타제 항체 이 었 다 . 플레이트 는 40 분 동안 주위 온도 에서 온화 한 진탕 과 함께 인 큐 베이 션 되 었 고 그 다음 A 405 에서 판독 되 었 다 . 항 - 트립 타제 항체 의 절반 - 최대 억제 농도 ( IC 50 ) 은 그 들 의 각 곡선 의 4 - 파라미터 적합 으로부터 결정 되 었 다 . 원 하 는 억제 를 입증 하 는 클론 은 그 다음 희석 ( 단일 세포 / 웰 ) 을 제한 시킴 으로써 서브 클로닝 되 었 고 , 상기 기재 된 바 와 같이 재시험 되 었 고 추가 로 특성 규명 되 었 다 .