인간 TfR 표적 은 MaxiSorp ® 미량 적정 플레이트 ( PBS 에서 1 - 10 μ g / mL 의 농도 , 전형 적 으로 200 μ L ) 상 에서 하룻밤 동안 4 ℃ 에서 피복 되 었 다 . 다른 언급 이 없 는 한 , 모든 결합 은 실온 에서 실행 되 었 다 . 상기 파 아지 라이브러리 를 각 웰 에 첨가 하 고 밤새 항온 처리 하 여 결합 시켰 다 . 미량 적정 웰 은 0 . 05 % Tween ® 20 ( PBST ) 을 함유 하 는 PBS 로 강력히 세척 되 고 , 결합 된 파 아 지 는 상기 웰 을 산 ( 전형 적 으로 50 mM HCl + 500 mM KCl , 또는 100 mM 글리신 , pH 2 . 7 ) 과 함께 30 분 동안 항온 처리 함 으로써 용리 되 었 다 . 용리 된 파 아지 를 1 M Tris ( pH 8 ) 로 중화 시키 고 , TG 1 세포 및 M 13 / KO 7 헬퍼 파 아지 를 사용 하 여 증폭 시키 고 , 그리고 50 μ g / mL 카르 베나 실린 , 및 50 μ g / mL 카나마이신 을 함유 하 는 2 YT 배지 에서 하룻밤 동안 37 ℃ 에서 성장 시켰 다 . 표적 - 함유 웰 로부터 용출 된 파 아지 의 역가 를 비 - 표적 - 함유 웰 로부터 회수 된 파 아지 역가 와 비교 하 여 , 농축 을 평가 하 였 다 . 결합 동안 항온 처리 시간 을 후속 적 으로 감소 시키 고 , 세 척 시간 및 세 척 횟수 를 증가 시킴 으로써 , 선별 엄격 성 을 증가 시켰 다 .