실시 예 4 에서 제조 한 대장균 BL 21 ( DE 3 ) / pET 22 b ( +)- LipG 를 암피실린 ( ampicillin , 100 ㎍/㎖) 이 포함 된 액체 영양 배지 ( 1 %( w / v ) 트립 톤 ( trypton ) , 0 . 5 %( w / v ) 효모 추출 액 ( yeast extract ) , 0 . 5 %( w / v ) 염화나트륨 ( NaCl ) ) 에서 600 nm 에서 의 흡광도 가 0 . 6 이 될 때 까지 배양 한 후 , 최종 농도 1 mM 의 IPTG ( isopropyl - β - D - thiogalactopyranoside ) 를 배양액 에 넣 어 12 시간 동안 배양 하 였 다 . 원심 분리 를 통해 얻 어 진 대장균 BL 21 ( DE 3 ) / pET 22 b ( +)- LipG 는 결합 완충액 ( 50 mM 트리 즈 마 완충액 ( Tris - HCl , pH 8 . 0 ) , 500 mM 염화나트륨 ( NaCl ) , 10 mM 이미다졸 ( imidazole ) ) 에 현 탁 시킨 후 , 초음파 분쇄 법 으로 파쇄 하 였 다 . 이 를 다시 원심 분리 하 여 회수 한 상층 액 만 을 니켈 - 엔 티 에이 ( Ni - NTA ( nitriloteiacetic acid ) ) 컬럼 에 가하 여 이미다졸 ( imidazole ) 농도 구배 를 이용해 리 파제 를 용출 시킨 후 투석 농축 하 였 다 . 상기 와 같이 정제 된 리 파제 를 확인 하 기 위해 , SDS - PAGE ( Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis ) 를 수행 하 였 고 쿠마시 블루 ( comassie brilliant blue ) 로 염색 하 였 다 ( 도 5 ) . 그 결과 , 본 발명 의 리파 제 는 발현 12 시간 후 시료 속 단백질 의 분자량 이 약 35 kDa 으로 효과 적 으로 생산 되 었 음 을 알 수 있 었 으며 , 이 는 리파 제 의 아미노산 배열 로부터 추론 된 분자량 과 상당히 근접 하 여 이 단백질 밴드 가 본 발명 의 신규 리파 제임 을 확인 할 수 있 었 다 . 또한 본 발명 의 리파 제 는 수용성 형태 로 발현 이 이루어지 고 있 었 으며 , Ni - NTA 컬럼 을 통한 정제 에서 순수 분리 된 리 파제 의 비활성 은 458 . 8 Umg - 1 으로 4 . 6 배 증가 하 였 고 61 % 의 회수 율 을 보였 다 .