8 주령 의 정상 랫 드 를 대 조군 ( vehicle ) , 1 kDa PEG 링커 가 결합 된 지속 형 인슐린 결합체 투여 군 ( 65 . 1 nmol / kg ) , 2 kDa PEG 링커 가 결합 된 지속 형 인슐린 결합체 투여 군 ( 65 . 1 nmol / kg ) , 2 . 5 kDa PEG 링커 가 결합 된 지속 형 인슐린 결합체 투여 군 ( 65 . 1 nmol / kg ) , 3 kDa PEG 링커 가 결합 된 지속 형 인슐린 결합체 투여 군 ( 65 . 1 nmol / kg ) 그리고 3 . 4 kDa PEG 링커 가 결합 된 지속 형 인슐린 결합체 ( 65 . 1 nmol / kg ) 투여 군 으로 각각 나누 었 다 . 정상 랫 드 에 상기 시험 물질 을 각 군 마다 3 마리 씩 단회 피하 투여 후 1 , 4 , 8 , 24 , 48 , 및 72 시간 에 각각 미 정맥 채혈 을 통해 전혈 을 1 . 5 mL 용량 의 마이크 로 튜브 에 넣 고 5 , 000 rpm 으로 10 분 간 상온 에서 원심 분리 하 여 혈청 을 분리 한 뒤 , - 20 ° C 에 보관 하 였 다 . 보관 된 각 군 의 혈청 은 ELISA 분석법 을 이용 하 여 혈청 내 인슐린 결합체 의 농도 를 정량 화 하 였 다 . ELISA 분석 은 인슐린 단 클론 항체 가 코팅 된 플레이트 ( ALPCO , # 80 - INSHU - E 10 . 1 ) 에 각 시간 에 취하 여진 혈청 과 항 인간 IgG 4 - HPR ( Alpha Diagonosis , # 10124 ) 를 동시 에 넣 고 , 한 시간 동안 상온 에서 반응 시킨 뒤 , TMB 시약 으로 발색 반응 시키 고 , 450 nm 파장 에서 흡광도 를 측정 하 는 방식 으로 하 였 다 .