타 겟 팅 된 딥 - 시퀀싱 . VEGFA 3 및 EMX 1 게놈 로커스 에 대한 선택 된 오프 - 타 겟 부위 를 그 들 의 상대 적 온 - 타 겟 과 함께 EMX 1 및 VEGFA 3 로커스 를 타 겟 팅 하 는 sgRNA , 또는 pUC 비 어 있 는 벡터 와 함께 야생 형 SpCas 9 또는 evoCas 9 로 의 형질 감염 후 7 일 에 추출 된 293 T 게놈 DNA 로부터 퓨전 고 - 충실 도 폴리머 라 제 ( 써 모 사이언 티 픽 ) 또는 유로 택 ( EuroTaq ) 폴리머 라 제 ( 유로 클론 ( Euroclone ) ) 를 사용 하 여 증폭 시켰 다 . 오프 - 타 겟 앰 플리 콘 을 정제 및 인덱싱 전 에 거의 등 몰 농도 로 풀 링 하 였 다 . 라이브러리 를 넥스 테라 ( Nextera ) 인덱스 ( 일 루미나 ( Illumina ) ) 를 사용 하 여 PCR 에 의해 인덱싱 하 고 , 큐빗 dsDNA 고 민감 도 검정 키트 ( 인 비트 로 젠 ( Invitrogen ) ) 로 정량 화 하 고 , 타 겟 의 수 에 따라 풀 링 하 고 , 일루 미나 MiSeq 리 에이전트 키트 V 3 - 150 사이클 ( 150 bp 단일 리드 ) 을 사용 하 여 일 루미나 MiSeq 시스템 상 에서 시퀀싱 하 였 다 . 앰 플리 콘 을 생성 하 는 데 사용 된 완전 한 프라이머 목록 을 부록 표 7 에 보 고 한다 .