구체 적 으로 , PG - 400 - 1 단백질 을 발현 하 는 Stable cell line 을 개발 하 기 위해서 , 상기 에서 제조 된 유전자 컨스 트럭 트 를 sub - vector cloning 단계 를 거쳐 pGP 30 발현 벡터 에 클로닝 하 였 다 . 그 후 상기 발현 벡터 를 CHO DG 44 ( from Dr . Chasin , Columbia University , USA ) 세포 에 Neon - transfection system 을 이용 하 여 형질 감염 시켰 다 . 1 차 스크리닝 과정 으로 HT ( 5 - hydroxytrypamine ) 가 없 는 10 % dFBS ( Gibco , USA , 30067 - 334 ) , MEM α ( Gibco , 12561 , USA , Cat No . 12561 - 049 ) , HT + ( Gibco , USA , 11067 - 030 ) 배지 를 사용 하 여 HT 선별 을 수행 하 였 고 , LDC ( Limiting Dilution Cloning ; 96 wells , 30 plates ) 를 진행 하 여 최종 세포주 를 확보 하 였 다 . 최종 확보 된 세포주 를 hyCellCHO 배지 400 ml 에서 Fed - batch 배양 수행 하 였으며 , 배양 15 일 차 에 수득 된 배양액 에 대해 Protein A 정제 를 수행 하 여 정제 된 단백질 을 확인 하 였으며 , 정제 된 단백질 은 SDS - PAGE 및 SEC - HPLC 를 통해 양 및 순도 를 분석 하 였 다 .