100 ml 의 삼각플라스크 에 10 ml 의 증류수 와 10 %( g / v ) 의 올리브 오일 을 녹인 10 ml 의 이소옥탄 ( isooctane ) 을 넣 은 후 여기 에 상기 실시 예 4 에서 고정 화 된 리파아제 1 ㎖ 첨가 하 여 30 분 동안 37 ℃, 150 rpm 의 조건 에서 가수 분해 반응 시켰 다 . 리파아제 에 의해 올리브 오일 이 분해 되 어 생기 는 지방산 은 이소옥탄 층 에 녹 아 있 게 된다 . 30 분 반응 후 5 N HCl 1 ml 로 효소 반응 을 종결 시키 고 분해 되 어 생긴 지방산 이 녹 아 있 는 이소옥탄 2 ml 취해서 이것 을 구리 - 아세테이트 - 피리딘 ( Cu - acetate - pyridine ) 용액 0 . 5 ml 와 반응 시켰 다 . 지방산 은 Cu 2 + 와 비누화 반응 을 일으켜 발색 을 하 게 되 는데 이때 발색 정도 를 715 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 흡광도 를 알 면 기준 곡선 을 통해 분해 되 어 생성 된 지방산 의 양 을 알 수 있 다 . 1 분 간 생성 된 지방산 의 μ mol 수 를 1 U 으로 하 여 리파아제 의 활성 을 계산 하 였 다 .