Tie 2 결합 으로 간섭 하 기 위한 ANGPT 2 항체 의 능력 을 시험 하 기 위해 , 하 기 의 ELISA 를 설정 하 였 다 . 실온 에서 384 웰 마이크 로타 이터 플레이트 ( MicroCoat , DE , 카탈로그 번호 464718 ) 에서 상기 시험 을 수행 하 였 다 . 각각 의 인 큐 베이 션 단계 후 플레이트 를 PBST 로 3 회 세척 하 였 다 . 시작 할 때 , 플레이트 를 0 . 5 ㎍/ ml Tie - 2 단백질 ( R & D Systems , UK , 카탈로그 번호 313 - TI ) 로 2 시간 이상 동안 코팅 하 였 다 . 그 후 , 웰 을 0 . 2 % 트윈 - 20 및 2 % BSA 가 보충 된 PBS ( Roche Diagnostics GmbH , DE ) 로 1 시간 동안 블로킹 하 였 다 PBS 에서 의 정제 된 항체 희석 물 을 0 . 2 ㎍/ ml huANGPT 2 ( R & D Systems , UK , 카탈로그 번호 623 - AN ) 와 함께 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세 척 후 , 0 . 5 ㎍/ ml 바 이오티 닐 화 항 - ANGPT 2 클론 BAM 0981 ( R & D Systems , UK ) 및 1 : 3000 희석 된 스 트 렙 타비 딘 HRP ( Roche Diagnostics GmbH , DE , 카탈로그 번호 11089153001 ) 의 혼합물 을 1 시간 동안 첨가 하 였 다 . 그 후 , 플레이트 를 PBST 로 6 회 세척 하 였 다 . 새로이 제조 한 ABTS 시약 ( Roche Diagnostics GmbH , DE , 완충액 # 204 530 001 , 정제 # 11 112 422 001 ) 으로 실온 에서 30 분 동안 현상 하 였 다 . 405 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .