분리 된 다수 의 균주 중 , CAU 1447 균주 를 최종 선발 하 여 동정 분석 하 였 다 . 균주 의 동정 은 생리 생화학 적 방법 과 분자 계통 분류학 적 방법 으로 실시 하 였 다 . 이 를 위한 16 S rRNA 유전자 염기 서열 결정 및 분석 방법 은 다음 과 같 다 . DNA 의 분리 를 위하 여 , 먼저 배양 한 균체 를 모아 STES 버퍼 [ 0 . 4 M NaCl , 0 . 2 M Tris - HCl ( pH 7 . 6 ) , 0 . 01 M EDTA , 1 % SDS ] 100 ㎕ 에 현 탁 시켰 다 . 시료 에 글래스 비드 ( glass bead ) 를 첨가 하 여 5 분 간 TOMY ( micro tube mixer MT - 360 ) 로 파쇄 하 여 세포질 을 용출 시켰 다 . 세포 용출 액 을 TE 버퍼 ( pH 8 . 0 ) 200 ㎕, 페놀 / 클로로포름 ( phenol / chloroform ) 200 ㎕ 에 현 탁 하 여 12 , 000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 를 수행 한 후 , 상층 액 을 RNase A 5 ㎕ 로 처리 한 다음 37 ℃ 조건 에서 1 시간 동안 반응 시키 고 다시 클로로포름 을 첨가 하 여 12 , 000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 를 수행 하 였 다 . 이후 원심 분리 한 시료 의 상등 액 을 에탄올 로 2 회 세척 한 후 건조 ( vacuum dry : SpeedVac ) 시켰 다 . 최종 적 으로 회수 한 DNA 는 멸균 증류수 에 용해 보존 하 였 다 . 16 S rDNA 의 PCR 증폭 에 는 PCR premix ( 바이오 니아 , 대한민국 ) 와 유 니버 셜 프라이머 ( universal primer ) 를 사용 하 였으며 , 정 방향 프라이머 ( 5 '- AGAGTTTGATCCTGGCTCAG - 3 '/ 서열 번호 2 ) 와 역방향 프라이머 ( 5 '- AAGGAGGTGATCCAGCC - 3 '/ 서열 번호 3 ) 를 사용 하 여 증폭 시켰 다 . PCR 증폭 시 총 반응 액 20 ㎕ 로 맞추 어 PCR 을 수행 하 였 다 . DNA 변성 을 위해 94 ℃ 에서 1 분 , 프라이머 의 결합 을 위해 50 ℃ 에서 1 분 , DNA 가닥 의 합성 을 위해 72 ℃ 에서 1 분 50 초 과정 을 30 회 반복 하 였 다 . 증폭 된 DNA 의 염기 서열 결정 및 계통 분류학 적 분석 은 장 등 ( Chang et al . , Int . J . Syst . Evol . Microbiol . 52 : 377 - 381 , 2002 ) 의 방법 에 따라 실시 하 였 다 .