구체 적 으로 , 배양 중 인 대식 세포주 Raw 264 . 7 세포 가 들 어 있 는 T 75 플라스크 의 상등 액 을 제거 해 준 후 PBS 로 한 차례 세척 하 였 다 . TrypLETM Select Enzyme 3 ml 을 첨가 한 후 37 ℃ 배양기 에서 3 - 5 분 동안 배양 하 였 다 . 이 어 , 새로운 배지 10 ml 을 T 75 플라스크 에 첨가 한 뒤 플레이트 에서 분리 된 세포 부 유액 을 50 mL 원심 분리 튜브 에 담 은 뒤 1 , 500 rpm 으로 5 분 동안 원심 분리 하 였 다 . 그런 다음 , 상층 액 을 제거 하 고 , 원심 분리 튜브 를 손 으로 수차례 약하 게 타격 하 여 세포 를 현 탁 하 였 다 . 이 어 , 배지 5 mL 로 혼합 한 뒤 세포 를 계수 하 였 다 . 세포 의 농도 가 1 X 105 cells / ml 이 되 도록 배지 를 첨가 하 여 희석 한 후 96 웰 평편 바닥 플레이트 에 100 μ l 씩 분주 하 였 다 . 10 시간 경과 후 최종 농도 가 1000 ~ 0 . 003 nM 이 되 도록 순차 희석 된 PG - 410 을 96 웰 평편 바닥 플레이트 에 50 μ l 씩 처리 하 였 다 . 20 분 경과 후 , LPS 400 ng / ml 를 처리 하 였 다 . 그런 다음 37 ℃ 배양기 에서 16 시간 동안 배양 하 고 , 다음 날 상등 액 을 모아 준 후 TNF α ELISA 키트 ( Biolegend ) 를 이용 하 여 제조사 의 프로토콜 에 따라 TNF α 의 농도 를 측정 하 였 다 ( 도 9 a ) . 한편 , 양성 대 조군 으로 재조합 IL - 10 을 사용 하 였 다 .