표지 가 없 는 경합 ELISA 포맷 ( LFC - ELISA ) 이 또한 항체 를 묶 기 위해 사용 될 수 있 다 . 이 방법 은 나가타 등 에 의해 설명 된다 ( Nagata et al . , J . Immuno Methods 292 : 141 - 155 , 2004 ) . 에 피토프 를 묶 기 위한 이 방법 은 비오티 닐 화 된 IL - 21 을 활용 하 였 다 . IL - 21 에 대해 발생 된 마우스 단 클론 성 항체 를 묶 는 실례 에 대해서 , 미소 역가 플레이트 가 100 μ L / 웰 로 ELISA B ( PBS , 0 . 1 % 트윈 20 , 1 % BSA ) 에 희석 된 1 ㎍/ mL 의 염소 항 - 마우스 IgG Fc - γ 특이 적 항체 ( Jackson ImmunoResearch ) 로 코팅 된다 . 3 시간 동안 주변 온도 에서 있 음 으로써 이 코팅 항체 가 결합 된 후 , 각각 의 mAb - 함유 조절 배지 가 ELISA B 로 희석 되 어 0 . 5 ㎍/ mL 의 대략 적 인 mAb 농도 를 만들 어 4 ℃ 에서 염소 항 - 마우스 IgG 코팅 된 플레이트 에 결합 되 는 것 을 허용 한다 ( mAb # 1 ) . 그것 과 나란히 , 두 번 째 세트 의 조절 배지 ( mAb # 2 ) 를 폴리스티렌 시험 튜브 에서 ELISA B 에 대략 0 . 5 ㎍/ mL mAb 로 희석 하 고 , 50 ng / mL 의 비오티 닐 화 된 IL - 21 항원 과 혼합 한 후 , 4 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 한다 . mAb # 1 을 코팅 항체 와 함께 인 큐 베이 션 한 후 에 , 플레이트 를 미 관련 항체 로 차단 하 여 플레이트 상 의 비 어 있 는 결합 부위 를 포화 시킨다 . mAb # 2 - 비오틴 - IL - 21 혼합물 은 플레이트 에 첨가 되 어 결합 되 는 것 이 허용 된다 . 분석 에서 ( 비 - 경합 ) 에 대한 대조 표준 으로서 50 ng / mL 의 비오티 닐 화 된 IL - 21 이 직접 ( mAb # 2 와 의 사전 인 큐 베이 션 없이 ) 고정 된 mAb # 1 을 함유 하 고 있 는 웰 에 첨가 된다 . 비오티 닐 화 된 IL - 21 - mAb # 2 복합체 와 의 인 큐 베이 션 후 에 스 트 렙 트 아 비딘 - HRP ( Pierce , Rockford , IL ) 가 플레이트 에 0 . 5 ㎍/ mL 로 첨가 된다 . 플레이트 는 TMB 기질 ( BioFX Laboratories , Owings Mills , MD ) 을 사용 하 여 현상 되 고 , 개별 적 인 웰 의 450 nm 에서 의 흡광도 를 플레이트 판독기 ( Molecular Devices SPECTRAMAX ® 340 , Sunnyvale , CA ) 를 사용 하 여 측정 한다 . 마약 mAb # 1 이 mAb # 2 와 는 상이 한 에 피토프 에 결합 한다면 , 비오틴 - IL - 21 - mAb # 2 복합체 는 플레이트 에 결합 하 여 높 은 흡광 도 판독 값 을 초래 할 것 이 다 . 만약 mAb # 1 이 mAb # 2 와 동일 한 에 피토프 에 결합 한다면 , 비오틴 - IL - 21 - mAb # 2 복합체 는 플레이트 에 결합 하 지 않 을 것 이 고 , 낮 은 흡광 도 판독 값 을 초래 할 것 이 다 .