리간드 결합 분석 을 위해 , " 재조합 인간 GRO - g ( "" 리간드 "") 를 펩 프로 테크 ( Peprotech ) ( 미국 뉴저지주 소재 ) 에서 구입 하 였 다 . 125 I - 볼튼 - 헌터 ( 125 I - Bolton - Hunter ) 표지 된 GRO - g 는 퍼킨 - 엘머 ( Perkin - Elmer ) ( 미국 매사추세츠 주 보스톤 소재 ) 로부터 비방사능 이 2200 Ci / mM 인 것 으로 구입 하 였 다 . 세포 를 결합 완충액 ( 50 mM Hepes ", pH 7 . 5 , 1 mM CaCl , 5 mM MgCb , 0 . 5 % BSA ) 에 1 회 세척 하 고 2 . 5 x 106 세포 / ml 의 농도 의 결합 완충액 에 재현 탁하 였 다 . 정제 된 콜드 ( cold ) 단 클론 항체 ( 콜드 경쟁자 ) 를 96 웰 플레이트 에 첨가 한 후 1 x 105 세포 를 함유 하 는 동일 부피 ( 40 ㎕) 의 결합 완충액 을 첨가 하 였 다 . 세포 및 경쟁자 를 실온 에서 15 분 동안 사전 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 방사성 표지 된 리간드 ( 최종 농도 0 . 5 - 2 nM ) 를 각 웰 에 첨가 하 고 최종 반응 부피 를 120 ㎕ 로 만들 었 다 . 실온 에서 60 분 동안 인 큐 베이 션 한 후 , 세포 를 150 mM NaCl 을 함유 하 는 1 ml 의 결합 완충액 으로 3 회 세척 하 였 다 . 세포 펠 렛 에서 방사능 ( 결합 된 표지 의 양 ) 을 탑 카운트 ( TopCount ) 액체 섬광 계수기 ( Packard ) 에서 계수 하 였 다 . 방사성 표지 된 리간드 없이 세포 를 인 큐 베이 션 함 으로써 비 특이 적 배경 결합 을 계산 하 였 다 . 샘플 을 이중 으로 분석 하 였 다 .