원형질체 를 하 기 배지 변형 과 함께 문헌 ( Weber and Losick 1988 ) 으로부터 변화 된 방법 을 이용 하 여 BIOT - 3872 로부터 생성 하 였 다 : 악 티 노신 네마 프레티 오 숨 배 양물 을 28 ℃ 에서 3 시간 동안 ISP 2 플레이트 ( 배지 3 ) 에서 성장 시키 고 , 5 mm 2 스 크 래핑 ( scraping ) 을 사용 하 여 물 중 2 mL 의 멸균 된 10 %( w / v ) 글리신 으로 보충 된 40 mL 의 ISP 2 브로 쓰 에 접종 하 였 다 . 원형질체 를 문헌 ( Weber and Losick 1988 ) 에 기술 된 바 와 같이 제조 한 후 , R 2 플레이트 ( R 2 처 방법 - 슈 크로즈 103 g , K 2 SO 4 0 . 25 g , MgCl 2 . 6 H 2 O 10 . 12 g , 글루 코즈 10 g , 디프 코 카사미 노산 ( Difco Casaminoacids ) 0 . 1 g , Difco Bacto 한 천 22 g , 800 mL 이 되게 하 는 물 , 혼합물 을 20 분 동안 121 ℃ 에서 오토클레이브 하 여 멸균 시킴 ) 에서 재생 하 였 다 . 오토클레이브 후 , 하 기 의 오토클레이브 된 용액 을 첨가 하 였 다 : 0 . 5 % KH 2 PO 4 10 mL , 3 . 68 % CaCl 2 . 2 H 2 O 80 mL , 20 % L - 프롤린 15 mL , 5 . 73 % TES 완충액 ( pH 7 . 2 ) 100 mL , 미량 원소 용액 ( ZnCl 2 40 mg , FeCl 3 . 6 H 2 O 200 mg , CuCl 2 . 2 H 2 O 10 mg , MnCl 2 . 4 H 2 O 10 mg , Na 2 B 4 O 7 - 10 H 2 O 10 mg , ( NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 . 4 H 2 O 10 mg , 증류수 로 1 L 가 되게 함 ) 2 mL , NaOH ( 1 N ) ( 멸균 되 지 않 음 ) 5 ml ) .