최초 융합 약 1 시간 후 , 남 은 세포질체 와 함께 융합 된 세포 쌍 을 각각 활성 화 배지 방울 ( 0 . 3 M 만니톨 , 0 . 1 mM MgSO 4 , 0 . 1 mM CaCl 2 및 0 . 01 % PVA ) 에서 평형 화 시켰 다 . 0 . 6 KV / cm AC 하 에서 , 세포질체 - 융합 된 쌍 을 10 개 의 군 으로 전선 으로부터 먼 융합 쌍 과 함께 전선 에 순차 적 으로 정렬 시켰 다 . 80 마이크로초 동안 0 . 7 KV / cm 의 단일 DC 펄스 를 두 번 째 융합 과 활성 화 의 개시 에 사용 하 였 다 . 그 후 , 세포 쌍 을 전선 으로부터 제거 하 였 고 , 융합 을 확인 하 기 위해 T 10 방울 에 조심 스럽 게 옮겼 다 . 재조합 배아 를 5 ㎍/㎖ CB 와 10 ㎍/㎖ 시클 로 헥 시미 드 로 보충 된 PZM - 3 배지 에서 38 . 5 ℃ 로 , 최대 습도 의 5 % CO 2 , 5 % O 2 및 90 % N 2 에서 4 시간 인 큐 베이 션 한 후 , 배양 전 에 철저히 세척 하 였 다 .