추가 로 , 야자유 와 함께 시험 튜브 에 함유 된 변형 TM 3 매질 에서 세척 된 세포 를 1 내지 10 배 희석 시킴 으로써 배 양물 을 제조 하 였 다 . 추가 희석 없이 세척 된 세포 의 잔여물 ( 2 . 5 ㎖) 에 0 . 125 % C 12 FA 를 첨가 함 으로써 추가 튜브 를 제조 하 였 다 ( 생물 변환 ( bioconversion ) ) . 250 rpm 에서 진탕 하 면서 30 ℃ 에서 3 . 75 시간 성장 시킨 후 , 50 uM IPTG 를 첨가 하 여 배 양물 모두 를 유도 하 였 다 . 변형 된 상부 공간 검정 법 ( 500 rpm 에서 진탕 하 면서 30 ℃ 에서 1 시간 축적 ) 을 이용 하 여 이소프렌 축적 에 대해 각각 의 배 양물 200 uL 를 검정 한 후 4 시간 동안 인 큐 베이 션 을 지속 하 였 다 . 추가 적 인 이소프렌 검정 법 을 GCMS 분석 전 에 검정 법 유리 블록 의 12 시간 인 큐 베이 션 으로 수행 하 였 다 . 유도 된 배 양물 의 인 큐 베이 션 을 하룻밤 동안 유지 하 고 , 다음 날 아침 200 uL 분취 량 을 이소프렌 생성 에 대해 다시 검정 하 였 다 ( 1 시간 , 30 deg , 500 rpm Shel - Lab 진탕기 ) . 상기 배 양물 의 분석 을 통해 유의 한 수준 의 이소프렌 의 생 성 이 나타났 다 . 하룻밤 동안 인 큐 베이 션 되 고 유도 된 후 하룻밤 종균 배 양물 로부터 의 1 / 10 희 석물 로 접종 된 배 양물 에서 최고 수준 의 이소프렌 이 관찰 되 었 다 . 이러 한 결과 는 상기 배 양물 이 지속 적 으로 성장 하 고 세포 밀도 를 증가 시킨다는 것 을 제안 한다 . 이러 한 결과 를 도 70 B 에 나타내 었 다 . 지방산 현탁액 의 외관 이 탁하 기 때문 에 세포 밀도 를 직접 측정 할 수 없 다 . 그러므로 상기 배 양물 의 분취 량 을 플 레이팅 하 여 상기 배 양물 의 세포 밀도 를 측정 하 였 고 , 8 xl 07 콜로니 형성 단위 가 나타났 다 . 이 는 0 . 1 의 OD 600 에 거의 상응 한다 . 그럼에도 , 상기 배 양물 은 유의 한 이소프렌 생성 을 제공 하 였 고 ; 본 실시 예 에 기재 된 경로 없이 는 유사 한 균주 에 대해서 이소프렌 이 관찰 되 지 않 는다 .