고정 된 FRET 센서 세포 는 Opera Phenix High Content Screening System ( PerkinElmer ) 을 사용 하 여 이미지 화 되 었 고 , 이미지 는 Harmony 소프트웨어 ( PerkinElmer ) 를 사용 하 여 정량 화 되 었 다 . FRET 이미지 를 얻 기 위하 여 , 내장 CFP / YFP FRET 획득 프로토콜 ( 425 nm 에서 여기 , 435 - 480 nm 에서 공 여자 방출 및 500 - 550 nm 에서 수용체 방출 ) , Alexa 647 획득 프로토콜 ( 640 nm 에서 여기 , 650 - 760 nm 에서 방출 ) 및 비 - 공 촛 점 모드 하 에서 침수 20 x 대물 렌즈 ( NA = 1 . 0 ) 가 사용 되 었 다 . FRET 강도 는 각 픽셀 당 수용체 형광 대 공 여체 형광 의 비율 ( FRET = 수용체 / 공 여체 ) 로 정의 되 었 다 . 세포 는 세포 마스크 ( Mask ) 염색 에 의해 정의 되 었 다 . 이어서 , 각 세포 에 대한 평균 FRET 강도 를 계산 하 고 , 각각 의 조건 ( 가령 , 항체 없이 AD 환자 뇌 조직 으로 형질 감염 된 세포 ) 에 대해 평균 FRET 강도 ( 세포 당 ) 의 분포 를 나타내 는 막대 그래프 를 만들 었 다 . FRET 양성 세포 를 결정 하 기 위한 임계 치 는 항체 없이 , 건강 한 대 조군 대상 뇌 조직 용해 물 로 형질 감염 된 FRET 센서 세포 의 최고 평균 FRET 값 주변 으로 임의 적 으로 설정 되 었 다 ( 일반 적 인 평균 FRET 강도 는 2 . 5 - 2 . 6 보다 컸 다 ) . FRET - 양성 세포 의 FRET 신호 를 통합 하 고 ( iFRET : 통합 된 FRET ) 각각 의 웰 에 대한 모든 세포 의 통합 된 FRET 강도 로 표준 화 하 였 다 .