GPRC 5 D 를 발현 하 고 있 는 인간 다발 성 골수종 세포주 KHM - 1 B 세포 를 5 % FBS 함유 PBS 로 2 × 106 세포 / mL 의 농도 로 조제 하 고 , 100 μ L / well 로 96 - well U 바닥 마이크 로 플레이트 에 파종 하 고 , 원심 후 상청 을 제거 하 였 다 . 실시 예 10 ) - 5 에서 얻 어 진 인간 항 - GPRC 5 D 항체 ( C 2037 , C 3048 , C 3015 및 C 3022 를 포함 하 는 완전 장 IgG 화체 ) 의 배양 상청 , 또는 Human IgG isotype control 항체 ( CALBIOCHEM 사 ) 를 14 ng / mL 내지 30 μ g / mL 로 조제 한 것 을 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 100 배 희석 한 R - Phycoerythrin AffiniPure F ( ab ') 2 Fragment Goat Anti - Human IgG , Fc γ Fragment Specific ( Jackson ImmunoResearch 사 ) 을 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 재현 탁 시키 고 , 플로 사이토 미터 ( FACSCanto ( 상표 ) II ; BD 사 ) 로 검출 을 행하 였 다 . 데이터 해석 은 Flowjo ( Treestar 사 ) 로 행하 였 다 . 세포 획 분 의 PE 형광 강도 의 히스토그램 을 작성 하 여 , 평균 형광 강도 ( MFI ) 를 산출 하 고 , GPRC 5 D 항체 의 MFI 값 으로부터 control 항체 의 MFI 값 을 빼 서 MFI 값 의 상대 치 ( rFMI ) 를 산출 하 였 다 . 그 결과 , C 2037 , C 3048 , C 3015 및 C 3022 IgG 는 인간 GPRC 5 D 발현 세포 에 결합 하 는 것 이 나타났 다 ( 도 167 ) .