본 발명 의 BBS 변이 주 에 의해서 도 야 외주 와 마찬가지 로 BBS 에 대해 항체 가 유사 하 게 발현 유도 되 는지 를 알아보 기 위해 , 6 주령 의 BALB / c 마우스 를 5 마리 씩 3 그룹 으로 나누 어 비강 으로 균 배양액 10 ㎕( 1 × 108 BBS 세포 / ml ) 를 각각 투입 하 고 음성 대 조군 은 PBS ( 인산 완충 염수 ) 를 투여 하 였 다 . 실험 군 은 14 일 및 28 일 째 에 2 차 부 스팅 ( boosting ) 을 실시 하 였 고 , 최종 접종 후 1 주일 후 채혈 하 여 혈청 을 준비 하 였 다 . 혈청 중 에 존재 하 는 항 - BBS IgG 를 검출 하 기 위해 , 항원 으로 는 포르말린 을 처리 한 BBS 균체 를 , 2 차 항체 로 는 염소 항 - 마우스 HRP 접합 된 항체 ( Pierce , USA ) 를 이용 하 여 ELISA 법 으로 항 - BBS 항체 를 검출 하 였으며 , 발색 을 위해 50 ㎕ 의 기질 용액 과 반응 시켰 다 . 기질 용액 은 포스 페이트 - 시트 레이트 버퍼 ( pH 5 . 0 , 24 mM 시트 레이트 , 64 mM 디 소듐 히 드로 겐 포스 페이트 , 0 . 01 % ( v / v ) 과산화수소 포함 ) 에 0 . 04 % ( w / v ) o - 페닐 렌 디아민 ( Sigma , USA ) 을 녹인 것 을 사용 하 였 다 . 발색 반응 은 50 ㎕ 의 10 % SDS 용액 을 첨가 하 여 정지 시켰 고 Multiskan Ascent microplate reader ( Thermo Labsysterms , USA ) 로 405 nm 의 파장 에서 읽 었 다 . 그 결과 , 본 발명 의 변이 주 는 야 외주 와 비슷 하 게 항 - BBS 항체 를 유도 함 으로써 , 변이 주 가 되 었 더라도 항체 의 생산 유도 능력 은 변함 이 없 음 을 알 수 있 었 다 ( 도 6 ) .