세포 들 을 1 ㎍/ mL Pam 3 CSK 4 ( TLR 2 아고 니스트 ) , 1 ㎍/ mL LPS ( TLR 4 아고 니스트 ) , 10 ㎍/ mL Tri - DAP ( NOD 1 아고 니스트 ) 또는 10 ㎍/ mL MDP ( NOD 2 아고 니스트 ) 를 각각 첨가 하 여 24 시간 동안 배양 한 후 수득 한 다음 , 2 mM dithiothreitol 과 protease cocktail ( Roche 사 , US ) 이 첨가 된 1 % Nonidet - P 40 버퍼 를 사용 하 여 파쇄 ( lysate ) 하 였 다 . 세포 파쇄 물 ( lysate ) 은 12 % SDS - PAGE 로 resolve 한 후 , 니트 로 셀 룰 로즈 막 으로 옮겨 1 차 항체 ( COX - 2 , GAPDH ( Santa Cruz biotechnology , Santa Cruz , CA , USA ) ) 로 면역 염색 하 였 다 . 그 후 2 차 항체 로 면역 염색 한 후 , 단백질 을 ECL ( enhanced chemiluminescence ) reagent ( Intron Biotechnology ) 를 이용 하 여 검출 하 였 다 .