본 발명 의 감귤 과 피 알칼리 추출물 3 % 가 함유 된 수용액 을 미생물 배지 로 제조 하 여 , 각각 의 배지 를 250 ㎖ 삼각플라스크 에 50 ㎖ 씩 분주 하 였 다 . 이후 5 노르말 의 염산 또는 수산화 나트륨 을 이용 하 여 수소 이온 농도 를 동일 하 게 7 . 0 으로 맞춘 후 고온 습식 멸균 하 였 다 ( 121 ℃, 20 분 ) . 준비 된 대조 시험 군 및 시험 군 배지 에 바실 러스 서브 틸리스 ( Bacillus subtilis : ATCC 21332 ) , 바실 러스 코아 굴 런 스 ( Bacillus coagulans ) , 바실 러스 리 체니 포르 미스 ( Bacillus licheniformis ) , 바실 러스 메가테리움 ( Bacillus megaterium ) , E . coli , 락 토 바실 러스 플란 타 눔 ( Lactobacillus plantarum ) , 락 토 바실 러스 아시 도 필 러스 ( Lactobacillus acidophilus ) , 슈도모나스 푸 티 다 ( Pseudomonas putida ) 균주 를 사용 하 였 다 . 배지 는 전배 양 을 위해 TSB 배지 를 사용 하 였 고 , 본 배양 시 에 는 바실 러스 리 체니 포르 미스 , 바실 러스 코아 굴 런 스 , 바실 러스 서브 틸리스 , 바실 러스 메가테리움 은 TBS 배지 에서 , 바실 러스 리 체니 포르 미스 , 바실 러스 코아 굴 런 스 , 바실 러스 서브 틸리스 , 바실 러스 메가테리움 , E . coli , 슈도모나스 푸티 다는 LB 배지 에서 , 락 토 바실 러스 플란 타 눔 , 락 토 바실 러스 아시 도 필러 스 는 MRS 배지 에서 배양 하 였으며 , 상기 시험 군 으로 는 감귤 과 피 알칼리 추출물 을 이용 한 미생물 배양 배지 를 이용 하 였 다 . 배양 은 TSB 배지 5 ㎖( w / v ) 튜브 에 1 % 접종 하 여 30 ℃, 250 rpm 으로 진탕 배양기 ( shaking incubator ) 에서 전배 양 후 50 ㎖( w / v ) , 250 ㎖ 플라스크 에 1 % 접종 하 여 30 ℃ 에서 1 일 동안 배양 하 였 다 . 단 락 토 바실 러스 속 미생물 은 37 ℃ 에서 50 ㎖ 튜브 에 40 ㎖ 로 정치 배양 하 였 다 . 배양 후 각각 의 배양액 을 순차 적 희석 ( Serial dilution ) 을 수행 항 후 LB 평판 배지 ( 한천 1 . 5 % 함유 ) 에 도말 하 여 생 균수 를 측정 하 였 다 .