혈청 시료 는 국립 당뇨병 ㆍ소화기병ㆍ신장병 연구소 ( NIDDK ) 로부터 얻 은 시약 을 사용 하 여 이중 항혈청 방법 으로 LH 에 대해 분석 한다 . 간략 하 게 , 총 용적 200 ㎕ 의 시료 및 표준물 ( NIDDK - rLH - RP - 3 ) 을 1 : 100 , 000 으로 희석 된 100 ㎕ 의 1 차 항혈청 ( 토끼 NIDDK - 항 - rLH - S - 11 ) 과 함께 실온 에서 2 내지 3 일 간 배양 한다 . 이어서 , 200 , 000 내지 300 , 000 cpm / ㎖ 로 희석 된 100 ㎕ 의 요오드화 LH ( Covance Laboratories Inc . ) 를 관 에 첨가 하 고 추가 로 24 시간 동안 계속 배양 한다 . 결합 된 호르몬 을 특이 적 염소 항 - 토끼 혈청 ( GARS ; Antibodies Inc ) 으로 침전 시켜서 유리 호르몬 으로부터 분리 시킨다 . 이 목적 을 위해 , 50 ㎕ 의 4 % 정상 토끼 혈청 을 각각 의 배 양관 에 첨가 한 후 , 추가 로 50 ㎕ 의 1 : 10 GARS 용액 을 첨가 한다 . 관 을 진탕 시키 고 4 ℃ 에서 밤새 배양 한다 . 4 ℃ 의 원심분리기 에서 2 , 500 rpm 으로 30 분 간 원심 분리 시킴 으로써 분석 을 종결 한다 . 상청 액 을 따라 버리 고 , 펠릿 을 10 - 채널 감마 - 계수기 로 계수 한다 . 당해 분석 은 최소 검출 가능 량 이 0 . 001 ng / 관 이 며 , 분석 내 및 분석 간 변이 는 10 % 미만 이 다 . 분석 간 변이 를 최소 화 하 기 위해 , 단회 연구 로부터 모든 시료 를 동일 분석 으로 시험 한다 .