HeLa 세포 는 트립신 화 되 고 opti - MEM 에서 세척 되 었 다 . 200 ㎕ opti - MEM 내 의 2 x 105 세포 들 은 10 ㎍ NY - ESO - 1 - 암호 화 mRNA 로 전기 천공 되 었 다 . 세 번 의 전기 천 공법 을 통한 세 폰 들 은 혼합 되 고 2 ml RPMI 1640 배지 에서 6 - 웰 플레이트 내 에 접종 되 었 다 . 형질 주입 24 시간 후 , 세포 들 은 채취 하 고 96 - 웰 V - 형 밑바닥 플레이트 로 옮겼 다 ( 2 wells per mRNA ) . 세포 들 은 인산 완충 식염수 ( phosphate buffered saline ( PBS ) ) 로 세척 하 였 고 , Cytofix / Cytoperm ( Becton Dickinson ( BD ) ) 웰 당 200 ㎕ 로 침투 시켰 다 . 15 분 후 에 , 세포 들 은 PermWash ( BD ) 로 세척 되 었 다 . 그 다음 , 세포 들 은 생쥐 anti - NY - ESO - 1 IgG 1 또는 아이 소 타입 대 조군 ( isotype control ) ( 20 ㎍/ ml ) 으로 실온 에서 1 시간 동안 배양 하 였 다 . 세포 들 은 PermWash 로 다시 두 번 씩 세척 하 였 다 . 다음 으로 , 세포 들 은 1 : 500 비율 로 희석 된 , goat - anti - mouse IgG 으로 커플링 된 Alexa - 647 으로 4 ℃ 에서 1 시간 동안 배양 되 었 다 . 마지막 으로 , 세포 들 은 PermWash 로 두 번 세척 하 였 다 . 세포 들 은 200 ㎕ 버퍼 ( PBS , 2 % FCS , 2 mM EDTA , 0 . 01 % sodium azide ) 에서 재 부유 하 였 다 . NY - ESO - 1 발현 은 형광 강도 ( MFI ) 로써 유세포 분석기 에 의해 정량 화 되 었 다 .