겔 여과 후 , 혼 성물 을 각각 dNTP , 60 단위 의 E . coli DNA 폴리머 라 아제 I ( GE Healthcare . Piscataway , NJ USA ) , 5 . 25 단위 의 RNase H ( Promega , Madison . Wl 1 USA ) , 및 15 단위 의 E . coli DNA 리가아제 ( Boehringer Mannheim Manheim , Germany ) 의 200 μ M 를 함유 하 는 250 μ l 의 두 번 째 가닥 버퍼 ( 20 mM Tris - HCl pH 7 . 4 , 90 mM KCl , 4 . 6 mM MgCl 2 , 10 mM ( NH 4 ) 2 SO 4 , 0 . 16 mM NAD ) 에서 희석 하 였 다 . 두 번 째 가닥 cDNA 합성 을 16 ℃ 에서 2 시간 및 25 ℃ 에서 추가 15 분 동안 반응 튜브 를 배양 함 으로써 수행 하 였 다 . 반응 을 20 mM 의 최종 농도 로 EDTA 의 첨가 에 의해 중단 시킨 다음 페놀 및 클로로포름 추출 을 하 였 다 .