레바 우디 오시드 D 로부터 레바 우디 오시드 M 의 형성 을 용이 하 게 하 기 위한 조작 된 라운드 4 SuS 변이체 의 활성 을 특성 화 하 기 위해 실험 을 수행 하 였 다 . 진탕 플라스크 분말 ( SFP ) 을 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 7 . 3 , 3 mM 염화마그네슘 , 1 g / L 레바 우디 오시드 D , 10 mM 수크로스 , 1 mM ADP , 및 2 g / L 서열 번호 734 를 함유 하 는 0 . 125 g / L 농도 의 100 μ L 의 총 반응 부피 에 첨가 하 였 다 . 반응 은 1 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 10 μ L 의 반응 혼합물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 90 μ L 아세 토니 트릴 에 첨가 하 여 반응 을 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 상청 액 은 물 에 10 배 희석 한 후 , 표 31 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 RapidFire SPE - MS / MS 에 의해 스 테 비올 글리코시드 에 대해 분석 되 었 다 . 변이체 중 적어도 3 개 가 서열 번호 1222 보다 더 높 은 활성 을 가졌 다 . 서열 번호 1222 에 비해 변이체 에 의해 레바 우디 오시드 D 로부터 생성 된 레바 우디 오시드 M 의 수준 이 표 31 . 3 에 열거 되 어 있 다 . 서열 번호 1222 와 비교 하 여 돌연변이 H 47 L , R 93 V , P 358 E , I 372 V , W 375 Y , R 440 P 및 K 724 H ( 서열 번호 1392 ) 를 갖 는 변이체 가 가장 높 은 활성 을 가졌 다 . 따라서 , 코딩 폴리뉴클레오티드 ( 서열 번호 1391 ) 은 글루코스 를 수크로스 로부터 ADP 로 전달 하 는 재순환 반응 의 촉매 작용 을 위한 추가 의 유도 진화 를 위해 선택 되 었 다 .