또 다른 방법 에서 , HIS 6 정제 태그 를 통해 재조합 단백질 ( HIS 6 마우스 41 BBL ) 을 부위 특이 적 으로 표지 하 기 위해 티오 링커 화학 을 이용 하 였 다 . 단백질 을 전형 적 으로 탈염 시키 고 , 완충액 을 PBS 로 교환 하 고 , 표지 화 전 에 1 mg / mL 이상 으로 농축 시켰 다 . 이어서 , ( 비 환원 된 ) 단백질 의 HIS 6 태그 를 표지 하 기 위해 티오 링커 커플링 시약 을 단백질 농도 에 비해 20 배 몰 과량 으로 첨가 하 였 다 . 단백질 표지 화 반응 을 실온 에서 3 시간 동안 인 큐 베이 션 하 고 , Zeba 탈염 칼럼 을 사용 하 여 완충액 을 PBS 로 교환 하 였 다 . AS - 표지 RBC 상 으로 클릭 된 HIS 6 마우스 41 BBL 의 티오 링커 표지 화 는 , 각각 IL - 2 생성 ( 도 8 a ) 및 인터페론 - γ ( IFN - γ ) 생 성 ( 도 8 b ) 에 의해 나타나 는 바 와 같이 , 41 BBL - 클릭 세포 가 면역 세포 를 활성 화 시키 는 기능 적 능력 을 증가 시켰 다 . HIS 6 마우스 41 BBL 의 배향 된 연결 은 무작위 연결 과 비교 하 여 실질 적 으로 더 큰 IL - 2 및 IFN - γ 분비 를 가져왔 지만 , 후자 는 클릭 CTL 대 조군 ( AS - 표지 RBC 단독 ) 보다 유의 하 게 큰 사이토카인 분비 를 유도 하 는 것 으로 관찰 되 었 다 .