일반 적 으로 , 혼합물 은 이후 10 분 내지 30 분 의 기간 동안 약 0 ℃ 에서 배양 된다 . 이후 추가 적 인 PEG 를 혼합물 에 첨가 하 여 원 하 는 핵산 서열 의 흡수 를 추가 적 으로 강화 시킨다 . 25 % PEG 4000 은 일반 적 으로 형질전환 혼합물 부피 의 5 내지 15 배 의 부피 로 첨가 되 지만 ; 더 크 고 적 은 부피 가 적합 할 수 있 다 . 25 % PEG 4000 은 바람직 하 게 는 형질전환 혼합물 부피 의 약 10 배 이 다 . PEG 가 첨가 된 후 , 형질전환 혼합물 은 소르비톨 및 CaCl 2 용액 을 첨가 하 기 전 에 실온 또는 얼음 상 에서 배양 된다 . 이후 원형질체 현탁액 을 성장 배지 의 용융 분취 액 에 추가 로 첨가 한다 . 성장 배지 가 성장 선택 물 ( 예 를 들 어 아세트아미드 또는 항생제 ) 을 포함 하 는 경우 , 이 는 형질전환 체 만 이 성장 하 게 한다 .