먼저 , 신생아 의 표피 로부터 분리 해 일차 배양 한 사람 의 각질 형성 세포 를 배양 용 플라스크 에 넣 어 바닥 에 부착 시킨 뒤 하 기 표 15 의 시험 물질 을 배양액 에 5 ppm 농도 로 처리 한 후 세포 가 바닥 면적 의 70 ~ 80 % 정도 자랄 때 까지 5 일 간 배양 하 였 다 . 이때 , 저 칼슘 ( 0 . 03 mM ) 처리 군 과 고 칼슘 ( 1 . 2 mM ) 처리 군 을 각각 음성 대 조군 , 양성 대 조군 으로 하 였 다 . 그 다음 상기 배양 한 세포 를 수확 하 여 PBS ( Phophate buffered saline ) 로 세척 한 뒤 2 % SDS ( sodium dodecyl sulfate ) 와 20 mM 농도 의 DTT ( Dithiothreitol ) 를 함유 한 10 mM 농도 의 트리스 - 염산 완충액 ( Tris - HCl , pH 7 . 4 ) 1 ml 를 가하 여 소니 케이 션 ( sonication ) , 보일링 ( boiling ) , 원심 분리 를 하 고 , 침전물 을 다시 PBS 1 ml 에 현 탁 시켜 340 nm 에서 의 흡광도 를 측정 하 였 다 . 이 와 별도 로 상기 소니 케이 션 후 의 용액 을 일부 취하 여 단백질 함량 을 측정 하 고 , 세포 분화 정도 평가 시 기준 으로 삼 았 다 . 그 결과 를 하 기 표 15 에 나타내 었 다 .