이때 ELISA 는 다음 과 같 은 방법 으로 수행 되 었 다 . 먼저 CFL 1 recombinant protein 1 vial 에 샘플 희석 완충 용액 ( sample dilution buffer ) 1 ml ( 10 ng / mL ) 첨가 한 후 10 내지 20 초간 볼 텍 싱하 여 표준 대 조군 ( Standard control ) 을 준비 하 였 다 . 또한 , 환자 의 혈청 샘플 을 샘플 희석 완충 용액 로 1 : 8 로 용해 시켜 준비 하 였 다 . 다음 으로 , 플레이트 의 각 웰 에 표준 대 조군 과 준비 된 샘플 각 100 ㎕ 씩 넣 고 37 ℃ 에서 90 분 간 인 큐 베이 션 시켰 다 . 인 큐 베이 션 중 비오틴 화 된 항체 용액 ( Biotinylated Detection Ab working solution ) 을 제조 하 였 다 . 플레이트 에 들 어 있 는 샘플 을 제거 하 고 , 제조 해 둔 비오틴 화 된 항체 용액 100 ㎕ 를 각 웰 에 넣 어 준 후 , 37 ℃ 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 시켰 다 . 농축 된 HRP 컨 쥬게 이 션 용액 ( Concentrated HRP Conjugate working solution ) 제조 하 여 인 큐 베이 션 후 비오틴 화 된 항체 용액 을 제거 하 고 각 웰 에 300 ㎕ 워싱 용액 으로 세척 진행 후 각 웰 에 농축 된 HRP 컨 쥬게 이 션 용액 을 100 ㎕ 씩 넣 고 37 ℃ 에서 30 분 동안 인 큐 베이 션 진행 하 였 다 . 인 큐 베이 션 후 농축 된 HRP 컨 쥬게 이 션 용액 을 제거 하 고 각 웰 에 300 ㎕ 워싱 용액 을 넣 어 세 척 진행 하 였 다 . 각 웰 에 기질 용액 ( Substrate Reagent ) 을 90 ㎕ 씩 넣 은 후 37 ℃ 에서 10 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 기질 시약 ( Substrate Reagent ) 이 들 어 있 는 각 웰 에 정지 용액 ( stop solution ) 을 50 ㎕ 씩 첨가 하 여 ELISA 판독기 ( Micro - plate reader ) 를 이용 해 450 nm 에서 흡광도 ( optical density ; OD ) 값 을 측정 하 였 다 .