역 분화 줄기세포 유래 조혈모세포 ( iPS derived Hematopoietic stem cell ; iPS - HSC ) 를 제조 하 기 위하 여 , vitronectin 이 코팅 된 24 - 웰 플레이트 에 mTeSR 1 배지 를 첨가 하 고 실시 예 1 . 1 과 동일 한 방법 으로 제조 된 역 분화 줄기세포 KW 군 과 BM 군 을 각각 1 X 104 cells 의 농도 로 접종 하 고 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 그리고 24 시간 후 에 50 ng / mL 의 골 형성 단백질 4 ( Bone morphogenetic protein 4 ; BMP 4 ) 가 첨가 된 STEMdiffTM APELTM 2 배지 ( Stem cell Technologies , Cat # 05270 ) 로 교체 하 고 2 일 동안 배양 하 였 다 . 그리고 50 ng / mL 의 혈관 내피 성장 인 자 ( vascular endothelial growth factor ; VEGF ) 및 50 ng / mL 의 염기 성 섬 유아 세포 성장 인 자 ( Basic fibroblast growth factor ; bFGF ) 가 첨가 된 STEMdiffTM APELTM 2 배지 로 교체 하 여 2 일 동안 다시 배양 하 였 다 . 그리고 5 μ M 의 SB 431542 , 50 ng / mL 의 VEGF , 및 50 ng / mL 의 bFGF 가 첨가 된 STEMdiffTM APELTM 2 배지 로 교체 하 여 2 일 동안 추가 로 배양 한 후 에 , 50 ng / mL 의 줄기세포 인 자 ( Stem cell factor ; SCF ) , 50 ng / mL 의 트 롬 보포 이 에틴 ( Thrombopoietin ; TPO ) , 및 50 ng / mL 의 인터 루킨 - 3 ( Interleukin - 3 ; IL - 3 ) 이 첨가 된 STEMdiffTM APELTM 2 배지 로 교체 하 여 2 일 동안 배양 하 였 다 . 그리고 이틀 간격 으로 50 ng / mL 의 SCF , 50 ng / mL 의 TPO , 및 50 ng / mL 의 IL - 3 이 첨가 된 새로운 STEMdiffTM APELTM 2 배지 로 교체 하 며 13 일 동안 배양 하 였 다 . 그리고 상등 액 을 수거 하 고 300 x g 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 상등 액 으로 방출 된 세포 를 획득 한 후 , StemSpanTM SFEM Ⅱ 배지 ( Stem Cell Technologies , Cat # 09605 ) 를 기본 으로 하 여 , StemSpan ™ CC 110 ( Stem cell Technologies , Cat # 02697 ) 를 첨가 하 거나 , 또는 10 ng / mL 의 Flt 3 L ( FMS - like tyrosine kinase 3 ligand ) , 10 ng / mL 의 SCF , 10 ng / mL 의 TPO , 10 ng / mL 의 IL - 3 , 및 10 ng / mL 의 인터 루킨 - 6 ( Interleukin - 6 ; IL - 6 ) 의 조합 을 첨가 하 고 , 각각 의 배지 에 재 접종 하 고 6 일 동안 추가 배양 하 였 다 . 배양 하 는 동안 이틀 간격 으로 새로운 배지 로 교체 하 였 다 . 전반 적 인 실험 방법 은 도 1 에 나타내 었 다 . 역 분화 줄기세포 유래 조혈모세포 의 생 성 은 광학 현미경 을 통하 여 매일 관찰 하 였으며 , 그 결과 는 도 2 에 나타내 었 다 .