2 차 증폭 은 주형 으로서 1 μ l 의 각각 1 차 PCR 생성물 , 0 . 4 mM 각각 의 dATP , dTTP , dGTP , 및 dCTP , 10 pmol 의 Adaptor Primer 2 ( Clontech Laboratones Inc . , Mountain View , CA , USA ) , 10 pmol 의 네 스티드 프라이머 MtGH 61 F - R 2 또는 MtGH 61 F - F 7 , 1 X ADVANTAGE ® GC - Melt LA Buffer , 및 1 . 25 유닛 의 ADVANTAGE ® GC Genomic Polymerase Mix 로 25 μ l 의 최종 부피 로 구성 된다 . 증폭 을 94 ℃ 에서 1 분 동안 전 - 변성 ; 94 ℃ 의 변성 온도 에서 30 초 동안 5 사이클 , 72 ℃ 에서 5 분 동안 어닐링 및 신장 , 및 각각 94 ℃ 의 변성 온도 에서 30 초 동안 20 사이클 , 67 ℃ 에서 5 분 동안 어닐링 및 신장 다음 에 67 ℃ 에서 7 분 의 최종 연장 으로 프로그램 된 EPPENDORF ® MASTERCYCLER ® 5333 을 사용 하 여 수행 하 였 다 .