활성 검색 12 - 24 시간 전 에 폴리 - L - 라이신 ( 0 . 05 ㎎/㎖) 으로 처리 된 96 - 웰 플레이트 에 96 - 웰 세포 분배 기 ( Titertek 제품 ) 를 이용 하 여 α 1 G T 형 칼슘 채널 과 Kir 2 . 1 이 안정 적 으로 발현 되 어 있 는 HEK 293 세포주 ( α 1 G 세포주 : KCTC 10519 BP , 한국 생명 공학 연구원 유전자은행 ) 의 세포 를 한 웰 당 4 × 104 밀도 로 분주 해 주 었 다 . 실험 당일 96 - 웰 플레이트 에 부착 된 세포 들 은 96 - 웰 플레이트 자동 세척 기기 ( Bio Tek ) 를 이용 하 여 HEPES 완충 용액 ( 단위 mM : 150 염화나트륨 ( NaCl ) , 5 염화칼륨 ( KCl ) , 1 염화마그네슘 ( MgCl 2 ) , 2 염화칼슘 ( CaCl 2 ) , 10 HEPES , 10 글루코스 , pH 7 . 4 ) 으로 3 회 세척 한 후 5 μ M 플 루오 - 3 / AM 과 0 . 001 % 플 루 로닉 ( Pluronic ) F - 127 을 포함 하 는 HEPES 완충 용액 의 실온 조건 에서 1 시간 반응 시켜 형광 염료 로 표지 한 후 HEPES 완충 용액 으로 다시 2 회 세척 하 였 다 . 그 후 FDSS 6000 기기 측정 10 분 전 에 염화칼슘 10 mM 을 포함 하 는 HEPES 완충 용액 으로 1 회 씻 고 최종 부피 를 81 ㎕ 로 조정 하 였 다 . 세포 가 준비 된 96 - 웰 플레이트 와 는 별도 로 T 형 칼슘 채널 을 활성 화 시킬 염화칼륨 ( 최종 농도 75 mM ) 과 차단제 약물 을 포함 할 2 개 의 96 - 웰 약물 플레이트 를 준비 하 였 다 . 대부분 의 세포 기반 HTS 기기 의 경우 약물 주입 에 필요 한 액체 어플리케이션 시스템 은 있 지만 액체 흡입 시스템 은 없 기 때문 에 검색 하 고자 하 는 차단제 약물 및 염화칼륨 을 5 배 의 고농도 로 10 mM 염화칼슘 HEPES 완충 용액 에 27 ㎕ 씩 준비 하 여 세포 플레이트 의 최종 부피 인 135 ㎕ 에서 1 / 5 로 희석 되 어 측정 되 어 진다 . 구체 적 인 FDSS 6000 기기 의 측정 조건 으로 는 20 초 의 기준 수치 기록 후 75 초 동안 약물 전처리 후 염화칼륨 투여 에 의해 변화 되 는 세포 내 칼슘 농도 변화 를 측정 한 것 으로 시험 물질 을 처리 하 지 않 은 대 조군 에서 의 340 / 380 비율 값 의 면적 을 100 % 로 하 고 시험 물질 의 억제 효과 에 대한 퍼센티지 ( %) 억제 효과 를 구하 였 고 10 μ M 의 미 베프 라 딜 을 대조 약물 로 사용 하 였 다 .