[ 남궁석 의 신약 연구 史 ] 신장 - 혈압 연결 고리 , ' 코자 ' 의 탄생 - 바이오스 펙 테이터 
 입력 2019 - 03 - 06 13 : 43 수정 2019 - 03 - 06 13 : 43 
 혈압 조절 의 역사 ③ 레닌 - 안지 오 텐 신 시스템 과 여기 에 작용 하 는 혈압 조절 제 의 탄생 
 지난 연재 에서 는 약물 요법 에 의해서 최초 로 혈압 조절 을 가능 케 한 이뇨제 와 베타 차단제 발견 의 역사 를 알아보 았 다 . 이번 연재 에서 는 혈압 조절 과 밀접 한 관련 이 있 는 호르몬 계 인 레닌 - 안지 오 텐 신계 ( Renin - angiotension system ) 에 관련 된 발견 의 역사 와 이 를 조절 함 으로써 혈압 조절 을 가능 케 한 안지 오 텐 신 전환 효소 억제제 ( angiotensin converting enzyme inhibitor , ACE inhibitor ) 와 안지 오 텐 신 수용체 차단제 ( angiotensin receptor blocker , ARB ) 의 개발 과정 을 알아보 도록 한다 . 
 레닌 Renin 의 발견 
 신장 의 이상 과 고 혈압 , 그리고 좌심실 비대증 ( hypertrophy ) 등 이 서로 연관 관계 가 있 다는 것 은 19 세기 의 의사 들 도 깨달 았 다 . 그러나 신장 에서 의 이상 이 어떻게 고 혈압 과 심장 이상 으로 연관 되 는지 에 대한 정확 한 이해 까지 이르지 는 못했 다 . 
 신장 과 혈압 조절 과 의 직접 적 인 연결 고리 가 되 는 레닌 - 안지 오 텐 신계 ( Renin - angiotensin system ) 의 발견 계기 는 1898 년 핀란드 출신 생리학자 인 로베르트 티 거스 테 트 ( Robert Tigerstedt , 1853 - 1923 ) 의 발견 이 었 다 . 그 와 그 의 학생 인 퍼 군나르 버그만 ( Per Gunnar Bergm ) 은 토끼 의 신장 피질 ( Renal Cortex ) 조직 의 추출물 을 주사 하 자 혈압 이 즉시 상승 하 는 것 을 발견 하 였 다 . 그런데 기이 하 게 도 신장 수질 ( Renal medulla ) 유래 의 추출물 에서 는 그러 한 효과 가 보이 지 않 았 다 . 티 거스 테 트 는 신장 피질 에서 분비 되 는 물질 이 혈압 상승 효과 를 가져온다는 가설 을 세우 고 , 이 신장 유래 의 혈압 상승 물질 을 ‘ 레닌 ’( Renin ) 이 라고 이름 지 었 다 [ 1 ] . 
 그러나 티 거스 테 트 는 스웨덴 에서 핀란드 로 귀국 한 1901 년 이후 에 는 소속 기관 의 행정 업무 때문 에 별다른 후속 연구 를 수행 하 지 못하 였 고 , 그 의 연구 결과 는 당대 의 학자 들 에게 큰 영향 을 주 지 못하 였 다 . 
 티 거스 테 트 의 레닌 의 발견 이후 에 신장 과 고 혈압 의 관계 는 그다지 많이 연구 되 지 않 았 다 . 그러나 1930 년 대 에 미국 클리블랜드 의 케이스 웨스턴 리저브 의대 의 병리학자 해리 골드 블라트 ( Harry Goldblatt , 1891 - 1977 ) 가 개 를 이용 한 고혈압 모델 동물 을 만든 이후 에 그 관심 이 다시 높 아 지 게 되 었 다 . 골드 블라트 는 고 혈압 으로 사망 한 환자 중 에서 신장 혈관 이 좁 아 져 있 는 것 을 발견 했 다 . 그 는 신장 으로 의 혈관 유입 이 감소 하 는 것 이 고 혈압 을 유발 하 는 것 이 아닌가 하 는 가설 을 세우 고 , 이 를 입증 하 기 위하 여 개 의 신장 동맥 을 클램프 로 조여 혈관 을 부분 적 으로 조여 보 았 다 . 그러 자 개 의 혈압 은 즉시 올라갔 다 . 반면 췌장 이나 대퇴 동맥 을 비슷 하 게 조여도 혈압 에 는 변화 가 없 었 다 [ 2 ] . 즉 골드 블라트 의 가설 대로 신장 으로 의 혈관 유입 이 몸 전체 에서 의 혈압 상승 을 유도 한다는 것 을 입증 하 는 결과 였 다 . 
 이러 한 결과 로 신장 과 고 혈압 과 의 관계 는 다시 주목 을 받 기 시작 하 였으며 , 티 거스 테 트 가 30 년 전 에 보 고 한 신장 유래 의 혈압 상승 유도 물질 인 ‘ 레닌 ’ 의 정체 를 파악 하 고자 하 는 노력 이 다시 시작 되 기 시작 하 였 다 . 
 안지 오 텐 신 과 안지 오 텐 신 변환 효소 ( Angiotensin Converting Enzyme ) 와 혈압 조절 의 관계 
 장 에서 분비 되 는 혈압 상승 물질 의 정체 를 규명 하 고자 이 를 정제 하 려고 했 던 연구자 들 은 곧 난관 에 직면 하 였 다 . 즉 , 신장 유래 의 추출물 은 정제 하 지 않 은 상태 에서 는 강력 한 혈압 상승 효과 를 보였 지만 , 단백질 정제 를 시작 하 기 위한 첫 단계 인 투석 ( Dialysis ) 를 하 는 순간 그 활성 을 잃어버렸 다 . 그러나 기묘 하 게 도 정상 적 인 ( 고 혈압 이 아닌 ) 개 유래 의 혈액 과 투석 을 통하 여 혈압 상승 효과 를 잃 은 신장 유래 추출물 을 섞 어 주 니 혈압 상승 효과 가 다시 되살아났 다 [ 3 ] . 이러 한 발견 은 결국 신장 에서 분비 되 는 ‘ 레닌 ’ 그 자체 는 혈압 상승 을 일으키 는 원인 물질 이 아닌 다른 물질 을 활성 화 시켜 주 는 물질 이 라는 결론 에 이르 렀다 . 
 1939 - 1940 년 , 아르헨티나 부에노스아이레스 의 생리학 연구소 의 연구 팀 과 미국 릴 리사 ( Lilly Laboratory ) 의 어빈 페이지 ( Irvine H Page , 1901 - 1991 ) 는 각각 하이퍼텐신 ( Hypertensin ) 과 안지 오토 닌 ( angiotonin ) 이 라고 불리 는 혈압 상승 의 원인 물질 을 발견 하 였 다 [ 4 ] . 이 물질 은 신장 에서 분비 되 는 레닌 에 의해서 만들 어 지 는 물질 로 , 곧 동일 한 물질 임 이 밝혀졌 고 이 물질 은 우리 가 현재 안지 오 텐 신 ( angiotensin ) 이 라고 부르 는 물질 이 된다 . 
 1954 년 안지 오 텐 신 은 두 종류 로 나뉜다는 것 이 밝혀졌 다 [ 5 ] . 즉 , 레닌 에 의해서 생성 되 는 것 은 안지 오 텐 신 I 이 고 , 이것 이 다시 안지 오 텐 신 II 로 변환 되 는데 , 결국 혈압 상승 의 매개 물질 이 되 는 것 은 안지 오 텐 신 II 가 된다 . 안지 오 텐 신 I 은 452 개 의 아미노산 으로 이루어진 안지 오 텐 시노 겐 ( angiotensinogen ) 이 단백질 분해 효소 인 레닌 에 의해서 절단 되 어 생성 되 는 10 개 의 아미노산 으로 구성 되 어 있 으며 , 안지 오 텐 신 II 는 나중 에 안지 오 텐 신 변환 효소 ( Angiotensin converting enzyme , ACE ) 라고 알려진 단백질 분해 효소 에 의해서 형성 된 8 개 의 아미노산 으로 구성 된 호르몬 이 된다는 것 이 1956 년 에 알려 지 게 되 었 다 [ 6 ] . 안지 오 텐 신 II 는 동맥 의 수축 효과 를 유발 하 여 혈압 상승 을 유발 할 뿐 만 아니 라 부신피질 에서 분비 되 어 신장 의 네프론 에서 소듐 과 물 의 재흡수 와 포타슘 의 방출 을 증가 시키 는 스테로이드 호르몬 인 알도스테론 ( Aldosterone ) 의 방출 을 유도 한다 . 
 안지 오 텐 신 변환 효소 억제제 ( ACE inhibitor ) 와 혈압 조절 
 이렇게 레닌 - 안지 오 텐 신 시스템 과 그 의 혈압 조절 에 대한 광범위 한 연관 성 이 밝혀 지 면서 서서히 레닌 - 안지 오 텐 신 시스템 을 억제 함 으로써 혈압 조절 을 할 수 있 을 것 이 라는 가능 성 이 떠오르 게 되 었 다 . 
 1968 년 ACE 의 활성 이 브라질 산 살무사 유래 의 독소 에 함유 되 어 있 는 펩타이드 에 의해서 억제 된다는 것 이 알려진 이후 [ 7 ] , ACE 의 활성 을 억제 하 는 화합물 의 탐색 에 대한 관심 이 생기 게 되 었 다 . ER 스큅 스 앤 썬 스 ( ER Squibb and Sons , 현재 는 BMS 의 일부 가 되 었 다 ) 의 연구자 들 은 처음 에 는 뱀 독소 유래 의 ACE 활성 저해 펩타이드 를 분리 하 여 정제 하 고자 하 였 다 . 1971 년 이 들 은 일련 의 ACE 활성 저해 펩타이드 를 분리 하 였 고 , 이 를 12 명 의 고 혈압 환자 에 투여 하 였을 때 이완기 혈압 을 126 ± 3 mmHg 에서 101 ± 4 mm Hg 로 감소 시키 는 효과 를 보여줌 을 확인 하 였 다 [ 8 ] . 
 그러나 이 펩타이드 의 임상 개발 은 더 이상 진행 되 지 못하 였 는데 , 펩타이드 제형 으로 인해 경구 투여 가 불 가능 하 다는 점 , 그리고 생산 단가 의 문제 때문 에 경제 성 이 없 다고 판단 되 었 기 때문 이 다 [ 9 ] . 
 이 들 은 전략 을 바꾸 어 경구 투여 가 가능 한 소분 자 화합물 의 개발 을 추진 하 기 로 하 였 다 . 그렇 다면 ACE 를 저해 하 는 소분 자 화합물 을 어디 서부터 개발 해야 만 할까 ? 연구자 들 은 ACE 가 안지 오 텐 신 II 의 C 말단 에서 세 번 째 펩타이드 결합 을 분해 하 여 두 개 의 아미노산 을 떼 어 내 는 단백질 분해 효소 인데 , 이 특성 은 기존 에 잘 알려진 카르복시펩티다아제 A 와 유사 하 다는 것 에 착안 했 다 ( 카르복시펩티다아제 A 는 C 말단 에서 마지막 아미노산 1 개 를 분해 하 는 효소 이 다 ) . 때마침 벤질 숙신산 ( Benzylsuccinic acids ) 가 카르복시펩티다아제 를 저해 한다는 연구 결과 를 접하 고 [ 10 ] , 이것 을 응용 하 여 ACE 의 저해 물질 을 만들 수 있 을지 를 생각 하 였 다 . 
 이 들 은 카르복시펩티다아제 A 에 존재 하 는 2 가 아연 ( Zn 2 +) 과 숙신산 의 카르복실기 의 결합 이 단백질 분해 효소 의 저해 에 필요 하 다는 가설 하 에 숙신산 과 기존 에 ACE 를 저해 하 는 펩타이드 에 공통 적 으로 존재 하 는 프롤린 잔기 를 결합 한 화합물 을 만들 어 보 았 다 . 이 화합물 은 ACE 의 저해 능력 은 매우 낮 았 으나 , 연구자 들 의 가설 을 입증 하 는 데 는 성공 하 였 고 , 이 화합물 변이체 의 하나 인 SQ 14225 라는 화합물 은 ACE 를 매우 강력 하 게 저해 하 였 다 [ 11 ] . 
 SQ 14225 는 캅 토프 릴 ( Captopril ) 이 라는 정식 성분 명 이 되 었 고 , 1981 년 FDA 로부터 사용 이 허가 되 었 다 . 한편 같 은 타 겟 을 저해 하 는 경쟁 약물 로 머크 ( Merck ) 는 에 날라 프릴 ( Enalapril ) 을 개발 하 였 고 , 이 는 1984 년 FDA 로부터 판매 승인 을 얻 게 되 었 다 . 
 ▲ 그림 2 . ACE 저해제 의 디자인 . ACE 저해제 는 이 를 저해 하 는 뱀 독소 기반 의 펩타이드 와 ACE 와 비슷 한 효소 작동 기전 을 카르복실 펩티다아제 A ( Carboxypeptidase A ) 의 구조 정보 를 참조 하 여 디자인 되 었 다 [ 11 ] . 카르복실 펩티다아제 A 와 ACE 는 공통 적 으로 촉매 반응 에 필수 적 인 아연 금속 이온 이 존재 하 고 , 카르복실 펩티다아제 A 를 저해 하 는 저 해제 의 카르복실기 가 여기 에 결합 하 는 가설 에 근거 하 여 기존 에 뱀 독소 기반 의 ACE 저해 펩타이드 에 존재 하 던 프롤린 을 결합 시킨 리드 컴 파운드 ( Lead compound ) 를 설계 하 였 다 . 이 를 설피 드릴 기 로 치환 하 여 좀 더 강한 저해 활성 을 얻 게 되 었 다 . 후 에 규명 된 ACE 저해제 와 캅 토프 릴 ( Captopril ) 의 결합 구조 를 보 면 캅 토프 릴 의 설피 드릴 기 가 ACE 에 존재 하 는 아연 이온 과 결합 함 을 확인 할 수 있 었 다 . 
 이러 한 ACE 억제제 가 등장 하 였을 때 는 시장 에 다른 기전 의 혈압 조절 제 가 이미 오래 전 에 등장 한 상태 였 고 , 새로운 기전 의 혈압 조절 제 가 폭넓 게 사용 되 기 위해서 는 이 들 의 임상 적 효용 성 이 입증 되 어야 만 했 다 . 이러 한 상황 은 1980 년 대 말 과 90 년 대 초반 에 수행 된 두 종류 의 임상시험 결과 가 발표 되 면서 크 게 바뀌 게 되 었 다 . 1987 년 NEJM 에 보 고 된 ' Cooperative North Scandinavian Enalapril Survival Study ( CONSENSUS ) ' 라는 임상시험 에서 는 253 명 의 울혈성 심부전 ( Congestive heart failure ) 환자 를 대상 으로 에 날라 프릴 복용 군 과 위 약군 에 대해서 이 중맹 검 방식 으로 사망 위험 도 를 확인 하 였 다 . 그 결과 에 날라 프릴 복용 군 의 사망 위험 도 가 대 조군 에 비해서 27 % 감소 되 는 결과 를 확인 하 였 다 [ 12 ] . 한편 1992 년 보고 된 좌심실 기능 부전 ( Left ventricular dysfunction ) 환자 를 대상 으로 한 캅 토프 릴 임상 시험 에서 는 캅 토프 릴 복 용군 이 대 조군 에 비해서 사망 율 이 20 % 감소 한다는 것 이 보 고 되 었 다 [ 13 ] . 이러 한 임상시험 결과 는 ACE 저해제 의 폭넓 은 활용 의 임상 적 근거 로 활용 되 기 시작 하 였 고 , ACE 저해제 는 혈압 조절 의 새로운 수단 으로 사용 되 기 시작 하 였 다 . 
 안지 오 텐 신 수용체 차단제 ( Angiotensin Receptor Blocker ) 의 개발 
 ACE 억제제 의 경우 탁월 한 혈압 강하 효과 를 보였 고 , 심부전 환자 를 대상 으로 한 임상시험 에서 극 적 으로 사망 률 을 낮추 어 주 는 효과 를 보여 1990 년 대 이후 에 혈압 강하 제 로 널리 사용 되 게 되 었 다 . 그러나 한 가지 단점 이 있 었 는데 , 안지 오 텐 신 I 을 안지 오 텐 신 II 로 바꾸 는 ACE 는 다른 펩타이드 호르몬 인 브라 디 키닌 ( Bradikinin ) 의 분해 에 도 관여 하 며 , 브라 디 키닌 은 혈관 확장 을 유도 한다 . 그런데 ACE 억제제 에 의해서 브 라 디 키닌 이 축적 되 면 , 이것 은 일부 사람 에게서 마른 기침 의 원인 이 되 며 , 심한 경우 에 는 혈관 성 부종 의 원인 이 되 기 도 한다 . ( 이 글 을 쓰 고 있 는 필자 역시 ACE 억제제 를 복용 하 면 심한 마른 기침 을 하 는 부작용 을 경험 하 여 ACE 억제제 대신 안지 오 텐 신 수용체 차단제 로 약물 을 바꾼 경험 이 있 다 ) 
 그렇 다면 ACE 대신 레닌 - 안지 오 텐 신계 의 다른 부위 를 차단 하 여 안지 오 텐 신 II 의 기능 을 억제 하 는 것 은 어떨까 ? 사실 안 지 오 텐 신 II 의 혈압 상승 효과 가 규명 되 던 1960 년 대 말 에서 1970 년 대 까지 안지 오 텐 신 II 의 펩타이드 유사 체인 사라라 신 ( Saralasin ) 가 안지 오 텐 신 II 수용체 의 부분 적 길항제 ( Partial antagonist ) 로 작용 한다는 것 이 알려졌 다 [ 14 ] . 사라라 신 은 안지 오 텐 신 II 의 첫 번 째 와 마지막 아미노산 이 변형 된 펩타이드 유사 체 였 다 . 그러나 최초 의 ACE 저해제 와 마찬가지 로 이 는 펩타이드 계 물질 로써 경구 투여 가 불 가능 하 며 , 지속 성 이 낮 았 으며 부분 적 길항제 로써 그 자체 로 는 약물 로 의 가치 가 없 었 다 . 그러나 사라라 신 은 안지 오 텐 신 II 에 의한 혈압 상승 을 억제 한다는 것 을 보임 으로써 실제로 안 지 오 텐 신 II 수용체 가 혈압 조절 을 위한 타 겟 으로 작용 할 수 있 다는 것 을 보여 주 었 다는 의미 가 있 다 . 
 1970 년 대 말 부터 안지 오 텐 신 II 수용체 에 결합 하 여 안지 오 텐 신 II 에 의한 혈압 상승 을 억제 하 는 소분 자 화합물 을 찾 으려는 노력 들 이 듀퐁 ( Du Pont ) 을 비롯 한 여러 제약 회사 에서 시작 되 었 다 . 그런데 1982 년 일본 의 다케다 ( Takeda ) 에서 약한 활성 을 가진 소분 자 화합물 안지 오 텐 신 II 수용체 길항제 를 발견 했 다는 소식 이 특허 공개 를 통해 알려졌 고 , 이 를 통해 다른 제약 회사 들 역시 비슷 한 화합물 을 찾 기 위한 경쟁 에 뛰어들 었 다 [ 15 ] . 
 다케다 에서 찾 은 리드 컴 파운드 ( lead compounds ) 들 은 15 uM 에서 40 uM 정도 의 매우 낮 은 IC 50 을 가지 는 화합물 이 었 다 . 연구자 들 은 이 들 이 안지 오 텐 신 II 수용체 에 붙 기 는 하지만 이 의 결합력 이 신통 치 않 기 때문 에 낮 은 활성 을 보이 는 것 이 라고 생각 했 다 . 즉 이 화합물 은 아마도 안 지 오 텐 신 II 의 구조 와 유사 하 기 는 하지만 충분히 크 지 않 기 때문 에 화합물 을 확장 하 여 안지 오 텐 신 II 수용체 와 의 결합력 을 높여 보 려고 했 다 . 
 안지 오 텐 신 II 의 C 말단 카르복실기 는 기존 연구 에 의해서 안지 오 텐 신 II 수용체 와 의 결합 에 필수 적 이 라고 알려져 있 었 다 . 이 들 은 다케다 에서 찾 은 리드 컴 파운드 의 피 롤기 에 달려 있 는 카르복실기 가 이 와 비슷 한 역할 을 한다는 가설 하 에 , 1978 년 에 규명 된 안지 오 텐 신 II 의 NMR 구조 에 리드 화합물 의 구조 를 겹쳐 보 았 다 . 그 결과 좀 더 펩타이드 에 가까운 구조 가 되 기 위해서 는 리드 컴 파운드 의 페닐 링 에 다른 잔기 를 붙여서 확장 해야 한다는 결론 을 얻 게 되 었 다 . 이 들 은 페닐 링 을 카르복실기 로 바꿔 본 결과 IC 50 이 1 uM 로 대폭 낮 아 짐 으로써 이 들 의 가설 이 맞 다는 확신 을 가지 게 되 었 다 . 이 들 은 여기 에 자극 받 아 다양 한 유도체 를 합성 하 여 활성 을 확인 하 였으며 , 궁극 적 으로 안지 오 텐 신 II 수용체 타입 1 에 대해서 IC 50 이 0 . 012 uM 로 작용 하 는 안지 오 텐 신 II 수용체 차단제 ( Angiotensin II receptor Blocker , ARB ) 를 얻 게 되 었 다 . 
 ▲ 그림 3 . 좌상 ) 다케다 ( Takeda Pharmaceutical ) 에서 1982 년 특허 로 공개 된 안지 오 텐 신 II 수용체 저해 물질 은 [ 13 ] IC 50 ( uM ) 기준 15 정도 의 낮 은 활성 을 가진 물질 이 었 다 . 이 를 리드 컴 파운드 로 하 여 듀퐁 사 의 연구원 들 은 안지 오 텐 신 의 구조 에 착안 하 여 페닐 링 에서 구조 를 확장 해야 한다는 가설 을 서 웠다 . 페닐기 의 파라 ( para ) 위치 에 카르복시기 를 추가 하 니 IC 50 이 10 배 감소 하 였 고 ( 좌하 ) , 이 를 시작 으로 한 여러 단계 의 화합물 최적화 를 통하 여 안지 오 텐 신 II 수용체 타입 1 을 특이 적 으로 저해 하 는 화합물 인 로사 르 탄 ( Losartan ) 을 발굴 하 게 되 었 다 ( 우하 ) [ 17 ] . 
 최종 적 으로 얻 어 진 화합물 은 로사 르 탄 ( Losartan ) 이 라고 명명 되 었 다 . 1986 년 특허 가 취득 된 이 약물 은 1995 년 최초 의 안지 오 텐 신 II 수용체 ( 안지 오 텐 신 II 수용체 타입 1 특이 적 ) 차단제 로 FDA 의 승인 을 받 았 으며 , 코 자 ( Cozaar ) 라는 이름 으로 시판 되 게 되 었 다 . 로사 르 탄 의 제네릭 은 2010 년 처음 판매 허가 를 얻 었 으며 , 2016 년 현재 , 미국 에서 9 번 째 로 많이 처방 되 는 약물 이 되 었 다 . 
 ACE 저해제 와 ARB 의 개발 과정 을 역시 레닌 - 안지 오 텐 신 시스템 에 대한 약 100 년 에 걸친 연구 끝 에 이루 어 졌으며 , 특히 ACE 저해제 의 경우 는 단백질 의 작용 기전 및 구조 정보 에 기반 하 여 디자인 된 극히 초창기 의 사례 라는 것 을 눈여겨 볼 필요 가 있 다 . 또한 궁극 적 으로 로사 르 탄 이 된다 . 
 다음 연재 에서 는 현재 가장 널리 사용 되 고 있 는 혈압 조절 제 의 클 래스 인 칼슘 채널 차단제 ( Calcium Channel Blocker , CCB ) 의 개발 을 낳 게 된 연구 와 그 개발 과정 을 살펴보 고자 한다 . 
 2 . 	 Goldblatt , H . , Lynch , J . , Hanzal , R . F . , & Summerville , W . W . ( 1934 ) . Studies on experimental hypertension : I . The production of persistent elevation of systolic blood pressure by means of renal ischemia . Journal of Experimental Medicine , 59 ( 3 ) , 347 - 379 . 
 3 . 	 Kohlstaedt , K . G . , Helmer , O . M . , & Page , I . H . ( 1938 ) . Activation of renin by blood colloids . Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine , 39 ( 1 ) , 214 - 215 . 
 5 . 	 Skeggs , L . T . , Marsh , W . H . , Kahn , J . R . , & Shumway , N . P . ( 1954 ) . The existence of two forms of hypertensin . Journal of Experimental Medicine , 99 ( 3 ) , 275 - 282 . 
 6 . 	 Skeggs , L . T . , Lentz , K . E . , Kahn , J . R . , Shumway , N . P . , & Woods , K . R . ( 1956 ) . The amino acid sequence of hypertensin II . Journal of Experimental Medicine , 104 ( 2 ) , 193 - 197 . 
 7 . 	 Bakhle , Y . S . ( 1968 ) . Conversion of angiotensin I to angiotensin II by cell - free extracts of dog lung . Nature , 220 ( 5170 ) , 919 . 
 8 . 	 Gavras , H . , Brunner , H . R . , Laragh , J . H . , Sealey , J . E . , Gavras , I . , & Vukovich , R . A . ( 1974 ) . An angiotensin converting - enzyme inhibitor to identify and treat vasoconstrictor and volume factors in hypertensive patients . New England Journal of Medicine , 291 ( 16 ) , 817 - 821 . 
 9 . 	 Cushman , D . W . , & Ondetti , M . A . ( 1991 ) . History of the design of captopril and related inhibitors of angiotensin converting enzyme . Hypertension , 17 ( 4 ) , 589 - 592 . 
 10 . 	 Byers , L . D . , & Wolfenden , R . ( 1973 ) . Binding of the by - product analog benzylsuccinic acid by carboxypeptidase A . Biochemistry , 12 ( 11 ) , 2070 - 2078 . 
 11 . 	 Ondetti , M . A . , Rubin , B . , & Cushman , D . W . ( 1977 ) . Design of specific inhibitors of angiotensin - converting enzyme : new class of orally active antihypertensive agents . Science , 196 ( 4288 ) , 441 - 444 . 
 12 . 	 Consensus Trial Study Group *. ( 1987 ) . Effects of enalapril on mortality in severe congestive heart failure . New England Journal of Medicine , 316 ( 23 ) , 1429 - 1435 . 
 13 . 	 Pfeffer , M . A . , Braunwald , E . , Moyé , L . A . , Basta , L . , Brown Jr , E . J . , Cuddy , T . E . , . .. & Klein , M . ( 1992 ) . Effect of captopril on mortality and morbidity in patients with left ventricular dysfunction after myocardial infarction : results of the Survival and Ventricular Enlargement Trial . New England journal of medicine , 327 ( 10 ) , 669 - 677 . 
 14 . 	 Pals , D . T . , Masucci , F . D . , Denning Jr , G . S . , Sipos , F . , & Fessler , D . C . ( 1971 ) . Role of the Pressor Action of Angiotensin IIin Experimental Hypertension . Circulation Research , 29 ( 6 ) , 673 - 681 . 
 15 . 	 Adam , M . ( 2005 ) . Integrating research and development : the emergence of rational drug design in the pharmaceutical industry . Studies in History and Philosophy of Science Part C : Studies in History and Philosophy of Biological and Biomedical Sciences , 36 ( 3 ) , 513 - 537 . 
 16 . 	 Furukawa Y , Kishimoto S , Nishikawa K . Hypotensive 
 imidazole - 5 - acetic acid derivatives . US patent 4 , 355 , 040 . Issued to Takeda Chemical IndustriesLtd ( Osaka , Japan ) , 1982 . 
 17 . 	 Bhardwaj , G . ( 2006 ) . How the antihypertensive losartan was discovered . Expert opinion on drug discovery , 1 ( 6 ) , 609 - 618 .