대한민국 공개 특허 제 10 - 2008 - 0104850 호 에 따라 제조 된 태반 - 유래 중 간엽 줄기세포 ( Placenta - derived stem cell , " 이하 "" PDSC "") 를 10 % 우태 아 혈청 ( Fetal Bovine Serum ", FBS ) , 1 % 페니실린 - 스트렙토마이신 ( P / S ) , 25 ng / ml 섬유 아 세포 성장 인자 - 4 ( Fibroblast Growth Factor - 4 , FGF - 4 ) , 1 ㎍/ ml 헤파린 이 포함 된 MEM ( minimum essential medium ) - alpha modification 배지 중 에서 37 ℃, 5 % CO 2 배양기 에서 배양 하 였 다 . 배양 된 세포 를 회수 하 여 1200 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 하 였 다 . 회수 된 세포 를 혈색소 계 ( hemocytometer ) 를 이용 하 여 계수 한 후 , 재 회수 를 통해 200 g 에서 10 분 간 원심 분리 하 여 보충 물 이 포함 되 어 있 는 Nucleofector 를 넣 어 세포 ( 5 x 105 / 100 ㎕) 를 현 탁 시켰 다 . PEDF 를 포함 하 는 DNA 플라스미드 2 ㎍ 을 넣 어 큐벳 내 에서 Nucelofection 장비 에 넣 어 U - 23 조건 으로 프로그램 을 작동 시켰 다 . 종료 된 후 신속 하 게 새로운 배지 를 포함 하 고 있 는 배 양접시 를 37 ℃, 5 % CO 2 배양기 에서 안정 화 시켰 다 . 4 시간 후 , 부착 된 세포 는 100 ㎍/ ml Hygromycin 을 포함 하 고 있 는 상기 태반 - 유래 중 간엽 줄기세포 배지 ( 1 %, P / S 는 미 포함 ) 를 이용 하 여 PEDF 기능 강화 태반 - 유래 중 간엽 줄기세포 를 선택 적 으로 배양 함 으로써 , 천연 태반 - 유래 중 간엽 줄기세포 내 에 PEDF 유전자 를 전기 청공 법 을 이용 하 여 PEDF 기능 강화 태반 - 유래 중 간엽 줄기세포 를 제작 하 였 다 .