HaCaT 세포 를 수확 하 여 lysis buffer [ 20 mM HEPES ( N - 2 - hydroxyethylpiperazine - N '- 2 - ethanesulfonic acid ) , 1 % Triton X - 100 , 10 % 글리세롤 , 150 mM NaCl , 10 ㎍/㎕ Leupeptin 및 1 mM PMSF ( phenylmethylsulfonyl fluoride ) ] 를 처리 하 여 세포 를 용해 시킨 후 , 탁상 용 원심분리기 를 이용 하 여 세포 용해액 만 을 수확 하 였 다 . 세포 용해액 의 단백질 의 양 은 Pierce BCA Protein Assay Reagent ( Thermo Scientific ) 를 사용 하 여 분석 하 였 다 . 동량 의 단백질 ( 10 ~ 20 μ g ) 이 포함 되 도록 제조 된 시료 를 SDS - PAGE ( sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel ) 전기영동 을 실시 하 여 세포 에 존재 하 는 단백질 들 을 분리 하 였 다 . 전기영동 으로 분리 된 단백질 을 폴리스 틸렌 막 ( polystyrene membrane ) 으로 옮긴 후 , 필라 그린 및 GAPDH 를 인지 하 는 일차 항체 를 각각 5 시간 반응 시킨 후 , 상기 일 차 항체 를 인지 하 는 이 차 항체 ( Cell Signaling Technology ) 를 1 시간 동안 반응 시켰 다 . 일 차 항체 가 인지 하 는 단백질 밴드 양 은 화학 형광 감지 시스템 ( Enhanced Chemiluminescence System ; Amersham Pharmacia Biotechnology ) 을 이용 하 여 단백질 변화 량 을 분석 하 였 다 . 각 시료 의 필라 그린 전구체 단백질 양 은 GAPDH 양 을 표준 화 하 여 대 조군 을 100 % 로 하 고 이 에 대한 상대 적 인 양 을 환산 하 였 다 . GAPDH 와 필라 그린 전구체 의 단백질 밴드 는 ImageJ 프로그램 ( 미국 National Institutes of Health 에서 제공 ) 을 이용 하 여 정량 하 였 다 .