프라이머 인 CJ 1 F 와 CJ 1 을 이용 하 여 CJ 1 프로모터 를 이용 하 여 녹색 형광 단백질 을 발현 시킬 수 있 는 벡터 를 주형 으로 첫 번 째 PCR 을 수행 하 였 다 . PCR 반응 은 각각 0 . 4 mM 의 상기 CJ 1 F 와 CJ 1 프라이머 , 주형 , 10 mM 트리스 완충액 ( Tris - HCl , pH 8 . 3 ) , 50 mM KCl , 2 mM MgCl 2 , 0 . 2 mM dATP , 0 . 2 mM dGTP , 0 . 2 mM dCTP , 0 . 2 mM dTTP 및 Puf 중합효소 5 효소 단위 ( unit ) 를 포함 하 도록 50 mL 를 조제 하 였 다 . 이어 반응 액 을 94 ℃ 1 분 , 50 ℃ 1 분 , 72 ℃ 에서 1 분 의 조건 으로 25 회 수행 후 72 ℃ 에서 7 분 간 PCR 을 수행 하 여 PCR 산물 을 얻 었 다 . CJ 1 프라이머 는 OL 1 의 염기 서열 의 일부 를 포함 하 여 첫 번 째 PCR 에서 얻 어 진 PCR 산물 은 CJ 1 프로모터 와 OL 1 염기 서열 의 일부 를 포함 하 게 된다 . 두 번 째 PCR 에서 는 프라이머 CJ 2 와 GFPB 를 이용 하 여 상기 와 동일 한 조건 에서 PCR 을 수행 하 였 다 . CJ 2 프라이머 는 CJ 1 프로모터 의 SD 서열 을 포함 하 고 있 다 . 첫 번 째 PCR 산물 을 주형 으로 하 여 CJ 1 F , CJ 4 프라이머 를 이용 하 여 CJ 1 프로모터 , OL 1 , SD 서열 이 연속 된 PCR 산물 을 얻 기 위해 상기 의 조건 으로 PCR 을 수행 하 였 다 . 또한 , 두 번 째 PCR 산물 을 주형 으로 하 고 CJ 3 , GFPB 프라이머 를 이용 하 여 상기 의 조건 을 통해 PCR 을 수행 하 였 다 . 이렇게 각각 얻 어 낸 PCR 산물 인 CJ 1 프로모터 - OL 1 + SD , SD + GFP 주형 을 상동성 의 염기 서열 을 이용 하 여 　 CJ 1 프로모터 부분 중 - 10 부위 다음 으로 OL 1 부 분과 - 10 부위 그리고 + 1 부위 의 아래 에 는 CJ 1 의 SD 서열 과 GFP 유전자 가 있 는 PCR 산물 인 CJ 1 OG 를 얻 어 내 었 다 ( 도 1 ) . 제작 된 PCR 산물 인 CJ 1 OG 의 염기 서열 은 서열 번호 1 과 동일 하 였 다 .