ANT 생산 능 을 향상 시키 기 위해 ANT 생산 에 있 어 경쟁 대사 회로 들 을 결실 하 고자 하 였 다 . 여기 에 는 L - tryptophan 생산 을 주도 하 는 trpD 효소 를 포함 하 여 qsuB 및 qusD 효소 를 코딩 하 는 유전자 들 을 결실 하 기 로 하 였 다 ( 도 1 b ) . 해당 trpD , qsuB 및 qusD 효소 를 코딩 하 는 유전자 결실 하 기 위하 여 , 먼저 C . glutamicum 에 pTacCC 1 - HrT 벡터 가 형질 전환 된 균주 를 제작 하 였 다 ( Cho et al . , Metabolic Engineering , 42 : 157 - 167 , 2017 ) . 이후 상기 제작 된 C . glutamicum 균주 에 대하 여 i ) 3 종 유전자 의 sgRNA 서열 을 각각 포함 하 는 pCG 9 ts - series , ii ) 3 종 의 유전자 에 각각 결합 하 는 ssODN 을 제작 하 여 C . glutamicum 에 대한 유전자 결실 을 시도 하 였 다 .