구체 적 으로 , 무 처리 DBA 마우스 ( ( 주 ) 오리엔트 바이 오사 ) 로부터 70 % 이소프로필 알콜 로 소독 하 여 무균 적 으로 적출 한 비장 을 EBSS 에 담가 두 었 다 . 주사기 플런저 를 사용 하 여 비장 을 으깨 어 단일 세포 로 만든 후 , 세포 가 든 튜브 에 마 이토마이 신 C ( Mitomycin C ) 를 50 ㎍/㎖ 농도 로 첨가 하 고 37 ℃, 5 % CO 2 배양기 에서 45 분 간 배양 하 였 다 . 배양 이 끝난 후 세포 를 EBSS 로 3 회 세척 한 후 10 % FBS , 2 mM L - 글루타민 , 100 단위 / ㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 이 보충 된 RPMI 1640 배지 에 현 탁 하 였 다 . 이때 , 세포 현탁액 의 농도 는 ㎖ 당 4 × 106 개 의 세포 가 되 도록 하 였 다 .