Flag - tag 을 부가 한 BRD 2 , 3 및 4 의 cDNA 를 포함 하 는 발현 벡터 를 CHO 세포 에 트랜 스펙 트 하 고 , 24 시간 후 에 세포 용해액 을 조제 하 였 다 . 아세틸화 히스톤 H 4 와 BRD 의 결합 은 Time Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer ( TR - FRET ) 법 을 이용 하 여 확인 하 였 다 . 384 - well white plate ( Coaster 사 제조 ) 에 50 ㎚ ol / L 의 비오틴 표지 아세틸화 히스톤 H 4 펩티드 ( Upstate 사 제조 ) 와 단계 희석 한 피검 화합물 을 가하 였 다 . 또한 BRD 발현 벡터 를 트랜 스펙 트 한 CHO 세포 용해액 , 유로 피움 표지 항 Flag 항체 ( Cisbio 사 제조 ) , 및 XL - 665 표지 아 비딘 ( Cisbio 사 제조 ) 을 가하 고 , 실온 에서 30 분 내지 2 시간 반응 시켰 다 . FRET 에 의한 형광 을 EnVision 2103 Multilabel Reader ( Perkin Elmer 사 제조 ) 로 측정 하 였 다 . 결합 저해 활성 은 , 화합물 비첨 가군 의 카운트 에 대한 화합물 첨 가군 의 카운트 의 감소 율 로 나타내 고 , 화합물 의 농도 를 바꿔 구한 카운트 의 감소 율 과 화합물 의 농도 를 나타낸 용량 - 반응 곡선 으로부터 IC 50 값 을 구하 였 다 .