각각 전체 항체 중쇄 및 경쇄 를 발현 하 는 벡터 로 VH 및 VL 도메인 을 서브 클로닝 하 여 클론 을 scFv 에서 IgG 포맷 으로 전환 시켰 다 . VH 도메인 을 인간 중쇄 불변 영역 및 조절 성분 을 함유 하 는 벡터 ( pEU 9 . 2 ) 로 클로닝 하 여 포유 동물 세포 에서 전체 IgG 중쇄 를 발현 시켰 다 . 유사 하 게 , VL 도메인 은 포유 동물 세포 에서 전체 IgG 경쇄 를 발현 시키 기 위해 조절 성분 과 , 인간 람다 경쇄 불변 도메인 의 발현 을 위한 벡터 ( pEU 4 . 4 ) 로 클로닝 되 었 다 . 중쇄 및 경쇄 의 발현 을 위한 벡터 는 본래 Peric 등 ( Gene 187 : 9 - 18 , 1997 ) 에 기술 되 어 있 다 . 이 들 벡터 를 OriP 성분 을 도입 하 여 간단히 조작 하 였 다 . IgG 를 얻 기 위해 , 중쇄 및 경쇄 IgG 발현 벡터 로 EBNA - HEK 293 포유동물 세포 ( Invitrogen R 620 - 07 -) 를 형질 감염 시켰 다 . IgG 가 발현 되 어 배지 로 분비 되 었 다 . 회수 물 을 모으 고 여과 한 후 정제 하 였 다 . IgG 는 단백질 A 크로마토그래피 를 사용 하 여 정제 하 였 다 . 배 양물 상등 액 을 적절 한 크기 의 세라믹 단백질 A 컬럼 ( BioSepra ) 상 에 적재 하 고 50 mM Tris - HCl pH 8 . 0 , 250 mM NaCl 로 세척 하 였 다 . 결합 된 IgG 는 0 . 1 M 시트르산 나트륨 ( pH 3 . 0 ) 을 사용 하 여 컬 럼 으로부터 용리 하 고 Tris - HCl ( pH 9 . 0 ) 을 부가 하 여 중성 화 시켰 다 . 용리 된 물질 은 Nap 10 컬럼 ( Amersham , # 17 - 0854 - 02 ) 을 사용 하 여 PBS 로 완충액 교환 을 수행 하 였 고 , IgG 의 농도 는 IgG 의 아미노산 서열 을 기초 로 하 는 소광 계수 를 사용 하 여 분광 광도 적 으로 측정 하 였 다 ( Mach et al . , Anal Biochem . 200 ( 1 ) : 20 - 26 , 1992 ) . 정제 된 IgG 는 SEC - HPLC 및 SDS - PAGE 를 사용 하 여 응집 또는 분해 정도 에 대해 분석 하 였 다 .