DR 5 - 양성 BxPC - 3 세포 ( ATCC , CRL - 1687 ) 에 대한 항 - DR 5 항체 IgG 1 - hDR 5 - 01 - G 56 T 및 IgG 1 - hDR - 05 의 효능 작용 활성 에 대한 Fc - Fc - 증진 치환 E 430 G ( WO 2013 / 004842 ; WO 2014 / 108198 ; WO 2014 / 006217 ; de Jong et al . 2016 ) 와 K 326 A / E 333 A / P 396 L ( WO 2016 / 116635 ) 의 조합 의 효과 를 평가 하 기 위해 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . 세포 를 트립신 처리 에 의해 수거 하 고 세포 스 트레이너 에 통과 시켰 다 . 세포 를 1 , 200 rpm 에서 5 분 동안 원심 분리 에 의해 펠릿 화 하 고 , 배양 배지 ( 25 mM Hepes 및 L - 글루타민 ( 론 자 ( Lonza ) 카탈로그 번호 BE 12 - 115 F ) + 철 을 함유 한 10 % 열 불활성 화 된 공 여자 소 혈청 ( DBSI ; 라이프 테크 놀 로지스 ( Life Technologies ) 카탈로그 번호 10371 - 029 ) + 50 U / mL 페니실린 / 스트렙토마이신 ( Pen / Strep ; 론 자 ; 카탈로그 번호 DE 17 - 603 E ) 을 함유 한 RPMI 1640 ) 에 0 . 5 x 105 개 세포 / mL 의 농도 로 재현 탁 시켰 다 . 100 μ L 의 단세포 현탁액 ( 웰 당 5 , 000 개 세포 ) 을 폴리스티렌 96 - 웰 편평 - 바닥 플레이트 ( 그 라이너 바이오 - 원 ( Greiner Bio - One ) , 카탈로그 번호 655182 ) 에 시 딩 하 고 , 37 ℃ 에서 밤새 부착 되 도록 하 였 다 . 이어서 , 50 μ L 의 일련 의 연속 희석 항체 제제 ( 4 배 희석 으로 범위 0 . 0003 내지 20 , 000 ng / mL 최종 농도 ) 를 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 3 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 음성 및 양성 대 조군 으로서 , 세포 를 각각 항체 없이 또는 5 μ M 스타 우로스 포린 ( 시그마 알드리치 ( Sigma Aldrich ) , 카탈로그 번호 S 6942 ) 과 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 배 양물 의 생존 율 을 대사 적 으로 활성 인 세포 의 지표 인 존재 하 는 ATP 를 정량 화 하 는 셀타 이터 - 글 로 발광 세포 생존 율 검정 ( 프로 메가 ( Promega ) , 카탈로그 번호 G 7571 ) 에서 결정 하 였 다 . 키트 로부터 , 웰 당 20 μ L 루시페린 용액 시약 을 첨가 하 고 , 플레이트 를 500 rpm 에서 2 분 동안 진탕 함 으로써 혼합 하 였 다 . 이어서 , 플레이트 를 37 ℃ 에서 1 . 5 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 100 μ L 상청 액 을 백색 옵 티 플레이트 - 96 ( 퍼킨 엘머 ( Perkin Elmer ) , 카탈로그 번호 6005299 ) 으로 옮기 고 , 발광 을 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 1 은 하 기 식 을 사용 하 여 계산 된 바 와 같 은 생존 세포 백분율 을 보여준다 : % 생존 세포 = [ ( 발광 항체 샘플 - 발광 스타 우로스 포린 샘플 ) / ( 발광 부재 항체 샘플 - 발광 스타 우로스 포린 샘플 ) ] * 100 .