이후 5 % 세 럼 ( normal donkey serum ) 으로 실온 에서 1 시간 동안 블로킹 ( blocking ) 후 PBS 로 세척 하 고 , 일 차 항체 ( goat CD 138 Ab ( R & D Systems ) , mouse anti - PD - L 1 mAb [ ABM 4 E 54 ] ( Abcam ) ) 를 사용 하 여 4 ℃ 에서 오버 나 잇 ( overnight ) 으로 배양 하 였 다 . 이후 PBS 로 5 분 동안 3 회 세척 하 고 이 차 항체 ( alexa flour 488 conjugated donkey anti - goat IgG ( Invitrogen ) , alexa flour 647 conjugated donkey anti - mouse IgG ( Invitrogen ) ) 를 사용 하 여 실온 에서 1 시간 동안 배양 후 PBS 로 5 분 동안 3 회 세척 하 고 DAPI 가 포함 된 마운트 제 ( mountant , ProLong ™ Diamond Antifade Mountant with DAPI ( Invitrogen ) ) 를 이용 하 여 처리 하 였 다 .