희석 모듈 의 출력 은 ' 로드 ' 위치 에 세팅 된 수집 스테이션 주입 밸브 를 통하 여 유동 하 였 다 . 폴링 모드 를 입력 하 도록 세팅 된 WinLISSY 를 이용 하 여 , CyclOps 컨트롤 소프트웨어 에 의한 접점 폐쇄 에 의해 바이오 어세 이 프로토콜 이 시작 되 었 다 . 첫 번 째 작동 은 주입 밸브 를 ' 주입 ' 위치 로 트리거 링 하 여 루프 내용물 들 을 격리 시키 고 , 분획 수집 시스템 은 루프 내용물 들 을 수집 플레이트 상 의 주소 지정 가능 웰 에 분배 하 였 다 . 부수 적 으로 , 액체 처리 시스템 은 분석 플레이트 를 액체 처리 베드 상 의 분석 스테이션 에 전달 하 였 다 . 액체 처리 시스템 은 , 분석 플레이트 의 컬럼 상 에 , B 열 로부터 P 열 까지 분석 플레이트 의 두 컬 럼 에 12 . 5 μ l 의 분석 완충제 를 아래 로 분배 하 였 다 . A 열 에 수집 플레이트 의 각각 의 웰 로부터 의 테스트 화합물 18 . 75 μ l 를 첨가 하 였 다 . A 열 로부터 의 샘플 분취 물 6 . 25 μ l 를 B 열 로 옮겼 다 . 이 과정 을 상기 컬럼 둘 다 에 대하 여 플레이트 아래 로 반복 하 고 , 6 . 25 μ l 의 시약 을 N 열 에서 버렸 다 . O 열 및 P 열 을 양성 및 음성 대 조군 으로 표기 하 였 다 . P 열 에 6 . 25 μ l 의 분석 완충제 를 첨가 하 였 다 . 첫 번 째 컬럼 의 A 열 내지 O 열 에 기본 완충제 중 에 보관 된 40 nM BACE 1 6 . 25 μ l 를 첨가 하 였 다 . BACE 2 효소 첨가 를 위하 여 , 17 . 5 μ l 의 400 nM BACE 2 를 157 . 5 μ l 의 기본 완충제 로 희석 시켰 다 . 이것 은 175 μ l 의 용액 을 표기 된 수용 에 펜 도르 프 튜브 에서 5 회 피펫 팅 함 으로써 혼합 하 였으며 , 그 후 6 . 25 μ l 의 희석 BACE 2 를 각각 의 컬럼 에 첨가 하 였 다 . MCA 기질 에 있 어서 , 100 % DMSO 중 1 mM MCA 기질 30 . 8 μ l 를 385 μ l 의 HPLC 용 물 로 희석 시켰 다 . 이것 은 400 μ l 를 표기 된 수용 에 펜 도르 프 튜브 에서 5 회 피펫 팅 함 으로써 혼합 하 였으며 , 6 . 25 μ l 를 각각 의 컬럼 에 첨가 하 였 다 . 그 후 분석 플레이트 를 플레이트 판독기 캐리지 에 옮기 고 , 드 로어 를 닫 고 , 어 세 이 인 큐 베이 션 을 시작 하 였 다 . 60 분 후 , WinLISSY 는 , 형광 강도 를 판독 하 는 프로토콜 파일 을 로딩 및 실행 하 도록 플레이트 판독기 에 지시 하 는 서브루틴 을 실행 하 였 다 . 이러 한 프로토콜 파일 은 마이크 로 타이 터 플레이트 를 판독 하 여 상응 하 는 데이터 를 텍스트 파일 로서 작성 하 는 데 필요 한 파라미터 를 포함 하 였 다 . 형광 강도 는 웰 당 9 회 판독 의 프로토콜 ( 50 ms 적분 ; 3 의 치밀도 , 0 . 25 mm 의 이 격치 ) 을 이용 하 여 360 / 405 nm ( 여기 / 방출 ) 에서 판독 하 였으며 , 상기 9 개 의 판독 치 의 중앙값 을 텍스트 파일 로 출력 하 였 다 .