* 배양 된 세포 로부터 의 분비 에 의한 재조합 MG 53 단백질 의 생성 . 본 발명자 의 기존 의 방법 은 실험 적 사용 을 위한 수준 으로 재조합 단백질 을 생성 시키 기 위해 대장균 ( E . coli ) 세균 을 사용 하 였 다 . 이러 한 벤치 ( bench ) 수준 의 제조 물 은 본 발명자 의 생화학 적 및 시험관 내 세포 배양 검정 을 위한 최초 의 시약 을 제공 하 였 다 . hMG 53 제조 물 의 양 및 순도 를 개선 시키 기 위해 , 본 발명자 는 면역 - 친화성 크로마토그래피 를 포함 하 는 Ni - 컬럼 에 대한 추가 단계 를 추가 함 으로써 정제 프로토콜 을 최적 화 시키 려 계획 하 였 다 . 본 발명자 의 래빗 MG 53 단백질 에 대해 생성 된 최초 의 모노클 로 날 항체 는 인간 MG 53 에 결합 하 지 않 았 고 , 본 발명자 는 hMG 53 에 대한 mAb 를 생성 하 는 하이브리도마 를 최근 에 발생 시켰 다 . 이러 한 모노클 로 날 항체 ( mAb 4 A 3 F 6 F 2 ) 는 웨스턴 블롯 에서 인간 ( 및 마우스 ) MG 53 단백질 을 검출 하 는데 매우 효과 적 이 다 ( 도 25 ) . 이러 한 항체 는 본 발명 의 단백질 정제 를 개선 시키 기 위한 면역 - 친화성 컬럼 을 발생 시키 는데 매우 유용 해야 한다 . 대장균 으로부터 정제 된 단백질 은 2 개 의 잠재 적 인 불 이익 을 가지 며 , 이중 하나 는 세균 으로부터 의 내독소 로 인한 오염 의 가능 성 이 고 , 다른 하나 는 원핵생물 에서 의 번역 후 변형 , 예 를 들 어 , 당화 및 인산화 의 결핍 이 완전 한 기능 을 가진 재조합 단백질 을 방해 할 수 있 는 가능 성 이 다 . 따라서 , 본 발명자 는 배양 된 포유동물 세포 로부터 재조합 MG 53 을 생성 하 는 추가 의 방법 을 개발 하 였 다 . 이 를 달성 하 기 위해 , 본 발명자 는 또한 다른 시판 되 는 단백질 치료제 , 예 를 들 어 , 공학 처리 된 CHO 세포 로부터 의 배양 배지 로부터 의 분비 된 단백질 의 정제 를 포함 하 는 암 치료 를 위한 인간 화 된 모노클 로 날 항체 의 생 성 에 사용 되 는 방법 을 적합 화 시켰 다 . hGM 53 의 아미노 말단 에서 의 신호 - 펩티드 는 분비 단백질 로서 의 재조합 MG 53 의 배출 을 가능 케 한다 . 웨스턴 블롯 은 풍부 한 MG 53 단백질 이 공학 처리 된 hMG 53 cDNA 로 일시 적 으로 트랜스펙션 된 CHO 세포 를 갖 는 적 응용 배지 로부터 정제 될 수 있 음 을 나타내 었 다 . 이러 한 방법 은 일반 적 으로 FDA 에 의해 승인 되 었 다 . 본 발명자 는 피부 , 심장 및 근육 세포 의 손상 에 대해 보호 하 기 위한 치료 에서 광범위 하 게 사용 되 는 재조합 MG 53 을 생성 시키 기 위해 , 분비 생성물 로서 MG 53 을 발현 하 는 안정 적 인 CHO 세포주 를 확립 하 는 방법 을 진행 중 이 다 .