4 시간 후 , 모든 재조합 및 활성 화 된 배아 를 세 척하 고 , 38 . 5 ℃ 에서 , 최대 습도 로 5 % CO 2 , 5 % O 2 , 및 90 % N 2 에서 미네랄 오일 로 덮 은 400 ㎕ IVCO - 2 내 눈 크 포 - 웰 디쉬 ( Nunc four - well dish ) 에서 배양 하 였 다 . IVCO - 2 는 제 0 일 ( 활성 화 당일 ) 부터 제 2 일 까지 4 mg / ㎖ BSA , 0 . 17 mM 피루브산 나트륨 , 및 2 . 73 mM 락트산 나트륨 을 함유 하 는 변형 된 NCSU 37 배지 였 다 ( Kikuchi , et al . , 1999 ) . 피루브산 나트륨 및 락트산 나트륨 을 제 2 일 내지 제 7 일 에 5 . 5 mM 글루코오스 로 대체 하 였 다 ( IVC 2 - 7 ) . 모든 투명대 부재 배아 를 상기 사용 한 바 와 같 은 동일 한 배양 배지 및 기체 혼합물 에서 WOW ( the Well of the Well ) 시스템 에서 배양 하 였 고 , WOW 로부터 배아 를 제거 하 는 것 없이 제 2 일 에 조심 스럽 게 배지 변경 을 하 였 다 . TC 배아 를 동일 배 지량 과 조성 을 사용 하 여 포 - 웰 디쉬 의 웰 에서 15 내지 30 의 군 에서 배양 하 였 다 . 절단 및 배 반포 비율 을 제 2 일 및 제 7 일 에 각각 기록 하 였 다 . 전체 세포 수 를 결정 하 기 위하 여 , 배반 포 를 고정 시키 고 10 ㎍/㎖ Hoechst 33342 를 함유 하 는 소량 ( < 2 μ l ) 의 글리세롤 내 에서 유리 현미경 슬라이드 에 올려 두 었 다 . 실온 에서 몇 시간 동안 염색 한 후 , 형광 부착 과 UV - 2 A 필터 를 가지 는 Diaphot 200 역상 현미경 ( Nikon , Tokyo , Japan ) 하 에서 관찰 하 였 다 .