올리 고 Is 4 del 3 b ( 서열 번호 20 ) 및 Is 4 del 4 ( 서열 번호 21 ) 를 사용 하 여 템 플레이트 로서 코 스미드 52 ( 실시 예 1 로부터 의 것 ) 및 Pfu DNA 폴리머 라 제 를 사용 하 면서 표준 PCR 반응 으로 악 티 노신 네마 프레티 오 숨 ( ATCC 31280 ) 으로부터 1541 bp 영역 의 DNA 를 증폭 시켰 다 . 각각 의 올리 고 Is 4 del 3 b 에 5 ' 연장 을 디자인 하 여 증폭 된 단편 의 클로닝 을 보조 할 AvrII 부위 를 도입 하 였 다 ( 도 10 ) . 증폭 된 PCR 생성물 은 mbcP 의 5 ' 말단 의 약 100 bp 및 상부 상 동체 의 추가 의 약 1450 bp 를 암호 화 하 였 다 . 이러 한 약 1550 bp 단편 을 SmaI 으로 선형 화 된 pUC 19 으로 클로닝 하 여 플라스미드 pLSS 3 b + 4 를 생성 하 였 다 .