포유 동물 분비 시스템 에서 연결 없 는 dsFv 의 제조 를 위한 하나 의 병목 은 , 샤페 론 의 도움 이 없 는 VH 및 VL 도메인 의 효과 없 는 어셈블리 일 수 있 다 : dsFv 성분 은 BIP 에 의해 인지 되 는 불변 영역 을 함유 하 지 않 는다 ( 도 4 b 참조 ) . 이러 한 제한 을 극복 하 기 위해 , 본 발명자 들 은 중간체 를 통해 VH 및 VL 도메인 의 어셈블리 에 접근 하 였 다 ( 도 4 c ) . 따라서 , dsFv 의 하나 의 성분 ( VH 또는 VL ) 을 커넥터 펩티드 를 통해 하나 의 H - 사슬 의 C - 말단 에 , 상응 하 는 다른 성분 을 또 다른 커넥터 펩티드 에 의해 두 번 째 H - 사슬 의 C - 말단 에 연결 시켰으나 , 이 는 세포 에서 발현 동안 절단 될 수 있 거나 , 시험관 내 정제 후 절단 될 수 있 는 하나 이상 의 프로테아제 절단 부위 를 함유 한다 . 중간체 이중 특이 적 항체 의 예 는 도 2 d 에 나타나 있 다 ( 도 2 a 에서 나타낸 바 와 같 은 항체 에 대해 ) .