앞서 기재 된 변이체 핵산 이외 에 도 , 서열 1 , 3 , 5 , 7 , 9 , 12 및 13 으로써 나타낸 예시 핵산 중 의 하나 이상 과 혼성 화 되 는 핵산 을 또한 사용 하 여 PreF 항원 을 암호 화 할 수 있 다 . 당업자 는 상기 논의 된 서열 동일 성 ( %) 측정치 이외 에 도 , 두 핵산 간 의 서열 유사 성 의 또 다른 지표 가 혼성 화 할 수 있 는 능력 이 라는 것 을 인지 할 것 이 다 . 두 핵산 의 서열 이 보다 유사 할 수록 , 이 들 을 혼성 화 시켜 줄 조건 이 보다 엄격 해진다 . 혼 성 화 조건 의 엄격 도 는 서열 의존 성 이 고 , 상이 한 환경 적 파라미터 하 에 상이 하 다 . 따라서 , 특별 한 엄 격도 를 가져다 주 는 혼성 화 조건 은 선택 되 는 혼성 화 방법 의 종류 , 및 혼성 화 되 는 핵산 서열 의 조성 과 길이 에 따라서 다양 할 것 이 다 . 일반 적 으로 , 혼성 화 온도 및 혼성 화 완충제 의 이온 강도 ( 특히 , Na + 및 / 또는 Mg ++ 농도 ) 가 혼성 화 의 엄 격도 를 결정 하 긴 하 지만 , 세 척 횟수 또한 엄 격도 에 영향 을 미친다 . 일반 적 으로 , 엄격 한 조건 은 규정 된 이온 강도 및 pH 에서 특이 적 서열 에 대한 열 융점 ( Tm ) 보다 약 5 ℃ 내지 20 ℃ 정도 낮 도록 선택 된다 . Tm 은 표적 서열 의 50 % 가 완벽 하 게 매칭 된 프로브 와 혼성 화 되 는 온도 ( 규정 된 이온 강도 및 pH 하 에 ) 이 다 . 핵산 혼성 화 조건 및 엄격 도 계산 은 , 예 를 들 어 다음 문헌 을 참고 할 수 있 다 [ 참고 : Sambrook et al . , Molecular Cloning : A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press , Cold Spring Harbor , NY , 2001 ; Tijssen , Hybridization With Nucleic Acid Probes , Part I : Theory and Nucleic Acid Preparation , Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology , Elsevier Science Ltd . , NY , NY , 1993 . 및 Ausubel et al . Short Protocols in Molecular Biology , 4 th ed . , John Wiley & Sons , Inc . , 1999 ] .