제조사 ( CisBio International Cat No . 62 EUSPEA ) 의 설명서 에 따라 Eu 3 + 크 립 테이트 표지 화 키트 를 사용 하 여 항체 를 크 립 테이트 로 표지 화 하 고 IL - 4 R α / Fc ( R & D systems Cat . No . 604 - 4 R - 050 ) 는 제조사 ( Perbio Cat No . 20217 ) 의 설명서 에 따라 EZ Link NHS - 비오틴 으로 표지 화 하 였 다 . 분석 조건 은 384 웰 마이크 로타 이터 플레이트 ( Greiner ) 중 전체 20 ㎕ 부피 로 1 xDPBS , 0 . 1 % BSA , 0 . 4 M 불화 칼륨 중 0 . 4 nM 크 립 테이트 표지 된 항체 , 0 . 25 nM 비오틴 표지 된 IL - 4 R α / Fc , 2 . 5 nM 스 트 렙 타비 딘 XL 665 ( CisBio International Cat . No . 611 SAXLB ) 였 다 . 분석 을 위해서 , 테스트 단백질 의 희석 시리즈 물 ( 1000 nM 내지 0 . 017 nM ) 을 부가 하 고 분석 물 을 밤새 4 ℃ 에서 항온 반응 시켰 다 . FRET 신호 는 320 nm 여기 필터 및 620 nm 와 665 nm 방출 필터 를 사용 하 는 PerkinElmer EnVision 플레이트 판독기 를 사용 해 검출 하 였 다 . 결과 는 특이 적 결합 비율 로서 665 / 620 비율 에서 산출 하 였 다 ( 경쟁 인자 항체 가 없 는 신호 ) . 결과 는 S 형 용량 반응 모델 을 사용 하 는 Prism ( GraphPad Software ) 으로 분석 하 였 다 .