상기 한 TNF - 결합 Fn 3 및 야생 형 Fn 3 서열 에 상응 하 는 DNA 서열 을 이 . 콜라 이 에서 의 발현 을 위해 최적 화 하 고 , 게네 아르트 아 게 ( 독일 ) 에서 제조 하 였 다 . C - 말단 시스테인 잔기 의 삽입 을 위해 , TNF - 결합 서열 을 프라이머 6 ( 서열 21 ) 및 7 ( 서열 22 ) 을 사용 하 여 증폭 시키 고 , 야생 형 서열 을 프라이머 6 ( 서열 21 ) 및 8 ( 서열 23 ) 을 사용 하 여 증폭 시켰 다 ( 물질 및 방법 섹션 에서 상기 설명 된 프라이머 참조 ) . PCR 생산물 을 NdeI / BamHI 로 소화 시키 고 , pET 9 a 의 대응 하 는 부위 내 로 클로닝 하 였 다 . 또한 , TNF - 결합 서열 을 프라이머 9 ( 서열 24 ) 및 10 ( 서열 25 ) 을 사용 하 여 증폭 시키 고 , 야생 형 서열 을 프라이머 9 ( 서열 24 ) 및 11 ( 서열 26 ) 을 사용 하 여 증폭 시켰 다 . PCR 생산물 을 BamHI / HindIII 으로 소화 시키 고 , dsbA 신호 서열 을 갖 는 pQE - 80 L 의 대응 하 는 부위 내 로 클로닝 하 였 다 .