도 6 . EGFP 에 대한 evoCas 9 온 - 타 겟 활성 . ( a ) EGFP 로커스 에 대한 evoCas 9 활성 . EGFP 를 안정 하 게 발현 하 는 293 세포 를 EGFP 코딩 서열 의 상이 한 영역 을 타 겟 팅 하 는 sgRNA 와 함께 wt SpCas 9 , evoCas 9 ( VNEQ ) 또는 VNEL 변이체 로 형질 감염 시켰 다 . EGFP 형광 의 소실 을 형질 감염 후 7 일 에 FACS 분석 에 의해 측정 하 였 다 . 파선 은 EGFP 형광 의 배경 소실 을 나타낸다 . 오 차 막대 는 n ≥ 2 에 대한 s . e . m . 을 나타낸다 . ( b ) EGFP 로커스 에 대해 계산 된 야생 형 SpCas 9 에 대한 evoCas 9 및 VNEL 변이체 의 온 - 타 겟 활성 의 비 . 중위수 및 사 분 위간 범위 가 제시 되 어 있 다 . wt 단백질 의 70 % 초과 의 온 - 타 겟 활성 의 수준 은 음영 표시 된 영역 에 의해 나타내 어 진다 . ( c ) evoCas 9 세포 내 발현 . wt SpCas 9 , evoCas 9 또는 다른 고 - 충실 도 변이체 로 형질 감염 된 293 T 세포 로부터 의 용해 물 의 대타 겟 인 웨스턴 블롯 . 튜불린 을 로딩 대 조군 으로서 사용 하 였 다 . SpCas 9 를 항 - FLAG 항체 를 사용 하 여 검출 한다 .