DH 1 - ORT ( Cobra Biomanufacturing , CTL 2006 # 0492 P ) 의 형질 감염 된 글리세롤 스톡 을 사용 하 여 25 ml 멸균 유니버설 ( universal ) 에서 8 x 5 ml 의 멸균 LB 배지 를 접종 하 였 다 . 5 ml 배 양물 을 약 16 시간 동안 200 rpm 및 37 ℃ 에서 진탕 인큐베이터 내 에 인 큐 베이 션 하 였 다 . 2 OD ml 시료 를 미 니 프 렙 ( miniprep ) 하 여 플라스미드 의 존재 를 확인 하 였 다 . 선택 된 배 양물 1 OD ml 를 사용 하 여 25 ml 의 LB 배지 를 접종 하 였 다 . 이 를 37 ℃ 에서 200 rpm 으로 진탕 하 면서 0 . 8 - 1 . 5 OD 단위 의 광학 밀도 ( 600 nm ) 에 달할 때 까지 성장 시켰 다 . 20 % v / v 글리세롤 을 사용 하 여 배 양물 을 냉동 보존 하 였 다 . 이 를 20 개 이상 의 멸균 냉동 바이알 에 1 ml ± 0 . 2 ml 로 분주 하 여 - 70 ℃ 에 보관 하 였 다 .