96 웰 플레이트 ( Pierce , Cat # 15041 ) 를 4 C 에서 하룻밤 동안 0 . 1 M 탄산염 ( pH 9 . 5 ) 중 1 . 0 ㎍/ ml 염소 항 - mIgG 로 코팅 하 였 다 . 플레이트 를 실온 에서 1 시간 동안 Tris 완충 식염수 ( TBS 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl ) 중 0 . 3 % 탈지 우유 ( 200 ㎕/ 웰 ) 로 차단 하 고 , 이어서 , 세 척 완충액 ( 1 x TBST : 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl , 0 . 05 % Tween 20 ) 으로 3 회 세척 하 였 다 . 세포 배양 상등 액 을 50 x 희석 물 로부터 3 x 희석 물 까지 적정 하 고 , 웰 당 100 ㎕ 를 첨가 하 고 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 희석 완충액 은 1 x TBS 중 1 % BSA 이 다 . 플레이트 를 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , 이어서 1 : 2000 의 HRP - 염소 항 - mIgG 를 웰 당 100 ㎕ 로 적용 하 고 , 암소 에서 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , Thermo Fisher 의 1 - Step Ultra TMB - ELISA ( Prod # 34028 ) 를 웰 당 100 ㎕ 로 첨가 하 고 , 색상 이 전개 되 었 을 때 플레이트 를 405 nm 에서 판독 하 였 다 .