100 μ L 반응 에서 25 μ L 용해 물 의 용해 물 로딩 을 사용 하 고 50 % 에탄올 중 의 20 mM 원액 용액 으로부터 1 mM 스테비오 시드 A ( Sigma , > 96 % 순도 ) 의 기질 로딩 및 0 . 5 mM UDP - 글루코스 ( Sigma , > 98 % 순도 ) 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 여 서열 번호 757 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양액 용해 물 의 96 웰 플레이트 상 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 4 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM Tris - HCl 완충제 , pH 7 . 5 , 3 mM MgCl 2 , 30 ℃. 반응물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 0 . 5 부피 / 부피 아세 토니 트릴 로 켄 칭 하 고 , 4 ℃ 에서 10 분 동안 원심 분리 하 였 다 . 실시 예 1 , 표 1 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 글 리코 실화 된 생성물 을 물 에 1 : 20 으로 희석 한 후 , LC - MS / MS 에 의해 상청 액 에서 검출 하 였 다 . 레바 우디 오시드 A 로부터 레바 우디 오시드 D 를 서열 번호 758 보다 더 많 은 양 으로 생성 한 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 변이체 폴리펩티드 가 확인 되 었 다 . 조작 된 폴리펩티드 는 표 14 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 서열 번호 758 과 비교 하 여 하 기 표 14 . 1 에 나타낸 바 와 같 은 아미노산 돌연변이 를 갖 는 변이체 의 분석 을 위해 , 실시 예 1 에서 설명 된 바 와 같 은 동결 건조 된 분말 생성 을 위해 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 성장 시켰 다 .