B - B 4 VH 및 V κ 유전자 들 을 먼저 조심 스럽 게 분석 하 여 , 임의 의 원 하 지 않 는 스 플라이스 공여 부위 , 스 플라이스 수여 부위 ( splice acceptor ) , Kozak 서열 과 기능 성 전체 항체 의 서브 클로닝 및 / 또는 발현 을 나중 에 방해 하 게 되 는 임의 의 기타 서브 - 클로닝 제한 효소 부위 의 존재 를 확인 하 였 다 . V κ 서열 에서 원 하 지 않 는 HindIII 부위 가 발견 되 었 으며 , 이 는 아미노산 서열 에 변화 를 주 지 않 으면서 PCR 을 통한 부위 - 특이 적 인 돌연변이 에 의해 반드시 제거 되 어야 한다 . 이 를 위해 , 올리 고 뉴클레오티드 프라이 머들 BT 03 ( 5 '- CAACA - GTA - TAGTA - AGCTC - CCTC - GGACG - TTCG - GTGG - 3 ') [ 서열 번호 10 ] 및 BT 04 ( 5 '- CC - ACC - GAACG - TCCGA - GGGAGC - TTACT - ATACTG - TTG - 3 ') [ 서열 번호 11 ] 를 사용 하 였 고 , Stratagene ( La Jolla , CA ) 의 신속 변경 돌연변이 유발 키트 프로토콜 에 따라 돌연변이 유발 을 수행 하 였 다 .