4 - 1 BB 또는 CD 137 또는 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼 패밀리 구성원 9 ( TNFRSF 9 ) 는 종양 괴사 인자 수용체 ( TNFR ) 슈퍼 패밀리 의 구성원 이 고 , 림프구 활성 화 에 의해 유도 된다 ( ILA ) ( Schwarz et al . , 1993 , Gene . 134 ( 2 ) : 295 - 8 ) . 4 - 1 BB 의 가교 는 T 세포 증식 , IL - 2 분비 , 생존 및 세포 용해 활성 을 증진 시킨다 ( Sica et al . , 2000 Arch . Immunol . Ther . Exp . ( Warsz . ). 47 ( 5 ) : 275 - 9 ) . 4 - 1 BB 바이오 어세 이 키트 ( 프로 메 가 , 카탈로그 번호 CS 196005 ) 를 , 본질 적 으로 제조 업체 에 의해 공급 된 설명서 에 따라 사용 하 여 , 항 - 4 - 1 BB 항체 MOR 7480 및 BMS - 663513 의 상이 한 변이체 를 사용 하 여 4 - 1 BB 신호 전달 에 대한 돌연변이 K 326 W / E 333 S / E 430 G 의 효과 를 시험 하 였 다 . 인간 4 - 1 BB 및 NFAT 반응 요소 하류 의 루시 페라 제 리포터 유전자 를 안정 하 게 발현 하 는 쏘 - 앤 - 유즈 글 로리스 판스 ™ NF κ B - luc 2 / 4 - 1 BB Jurkat 세포 는 CD 40 활성 화 시 루시 페라 제 를 발현 한다 . 25 μ L 의 새로 해동 된 세포 를 96 - 웰 백색 F - 바닥 옵 티 플레이트 ( 퍼킨 엘머 , 카탈로그 번호 6005299 ) 내 25 μ L RPMI 1640 배지 ( 프로 메 가 , 카탈로그 번호 G 708 A ) 에서 1 % 태아 소 혈청 ( J 121 A ) 의 존재 하 에 밤새 인 큐 베이 션 하 였 다 . 다음 날 , 연속 희석 물 의 항체 또는 His 태그 를 갖 는 정제 된 재조합 4 - 1 BB 리간드 ( 알 앤디 시스템즈 , 카탈로그 번호 2295 - 4 L - 025 / CF ) 항 - His - 태그 항체 ( 클론 J 099 B 12 ) 를 80 μ L 의 최종 부피 로 배지 내 세포 에 첨가 하 였 다 . 세포 를 추가 5 시간 동안 인 큐 베이 션 한 후 , 바이오 - 글 로 시약 ( 프로 메 가 , 카탈로그 번호 CS 197704 ) 을 첨가 하 였 다 . 주위 온도 에서 5 - 10 분 인 큐 베이 션 한 후 , 엔 비전 멀티 라벨 플레이트 판독기 를 사용 하 여 발광 을 기록 하 였 다 . 태아 소 혈청 ( FBS , 프로 메가 Ref . J 121 A ) 을 혈청 공급원 으로서 사용 하 였 다 . 4 - 1 BB 반응 검정 에서 양성 대 조군 으로서 사용 된 재조합 4 - 1 BB 리간드 및 항 - His Ab 혼합물 은 비 - 결합 음성 대 조군 항체 IgG 1 - b 12 - WSG 에 비해 명확 한 반응 신호 를 유도 하 였 다 ( 도 33 ) . C 1 q 결합 - 증진 돌연변이 K 326 W / E 333 S 와 조합 된 Fc - Fc - 증진 돌연변이 E 430 G 를 함유 하 는 시험 된 항체 는 태아 소 혈청 의 존재 하 에 Jurkat 세포 상 에서 4 - 1 BB 신호 전달 의 용량 - 의존 성 활성 화 를 유도 하 였 다 ( IgG 1 - CD 137 - MOR 7480 - K 326 W / E 333 S / E 430 G 의 경우 EC 50 16 . 9 ng / mL 및 IgG 1 - BMS - 663513 - K 326 W / E 333 S / E 430 G 의 경우 EC 50 32 . 9 ng / mL ) .