곰팡이 에 의해 배나무 로 ASGV 가 전이 되 는 것 을 확인 하 기 위해 , 무독 묘 에 곰팡이 를 두 가지 방법 으로 접종 하 였 다 . 초본 기주 식물 에서 수행 했 던 것 과 동일 하 게 일부 는 잎 에 물리 적 인 방법 으로 접종 하 였 고 일부 는 흙 에 관주 하 였 다 . 배나무 무독 묘 20 개체 는 무독 묘 에서 취한 접수 를 바이러스 가 없 는 대목 에 접 을 붙여 만들 었 다 . 이 중 10 개체 는 대 조구 로 사용 하 였으며 다른 10 개체 는 바이러스 에 감염 된 곰팡이 접종 에 사용 하 였 다 . 배 의 잎 6 개 개체 는 주사기 를 이용 하 여 잎 표면 에 물리 적 인 상처 를 준 뒤 곰팡이 를 접종 하 였 고 , 4 개 개체 는 PDB ( Potato dextrose broth ) 에서 배양 한 액 을 흙 에 직접 처리 하 였 다 . 병 징 의 발현 과 바이러스 의 감염 양상 에 대한 비교 대 조구 로 사용 하 기 위해 ASGV 에 감염 된 배나무 가지 를 접수 로 취해 바이러스 가 없 는 대목 에 접목 하 고 배양 하 였 다 . 6 개월 경과 후 ASGV 에 감염 된 가지 를 접 붙인 배나무 에서 전형 적 인 검 은 점 ( pear black necrotic leaf spot ) 을 관찰 할 수 있 었 다 . 이 시기 까지 건전 주 에서 는 병 징 이 발현 되 지 않 았 다 ( 도 2 ) . 도 2 에서 , ( a ) 건전 주 , ( b ) 지표 식물 , ( c ) ASGV 매개 T . flavus 를 감염 시킨 배나무 잎 , ( d ) 6 개월 경과 후 건전 주 , 및 ( e ) 6 개월 경과 후 지표 식물 을 각각 나타낸다 . 병 징 을 보이 지 않 은 건 전주 와 전형 적 인 병 징 을 보인 지표 식물 ( indicator plants ) 에 두 가지 방법 으로 접종 하 여 병 징 을 관찰 할 수 있 었 던 각각 의 개체 에서 이병 잎 을 취해 전체 RNA 를 추출 하 고 ASGV CP ( coat protein ) 증폭 을 위한 프라이머 세트 ( 서열 번호 : 5 및 6 ) 를 이용 하 여 RT - PCR 을 수행 하 였 다 . 5 ug 이상 의 전체 RNA 와 10 pmol 농도 의 서열 번호 6 번 프라이머 를 0 . 2 ul 첨가 하 여 열 변성 한 뒤 반응 완충액 , 2 . 5 mM dNTP 와 5 u / ul 역전사 효소 를 넣 고 42 ℃ 에서 1 시간 동안 cDNA 를 합성 하 였 다 . PCR 반응 에서 는 합성 된 cDNA 를 0 . 1 - 3 ul 까지 첨가 하 였 다 . 역전사 반응 과 PCR 반응 모두 에서 2 . 5 mM dNTP 의 양 은 1 ul 이상 첨가 하 지 않 았 다 . 93 ℃ 에서 10 초 동안 변성 , 53 ℃ 에서 40 초 동안 반응 한 뒤 72 ℃ 에서 1 분 동안 합성 하 는 것 을 하나 의 반응 으로 간주 하 여 30 회 반복 되 도록 하 였 다 . 건전 주 에서 는 PCR 결과물 을 확인 할 수 없 었 고 , 병 징 이 발현 된 지표 식물 에서 는 결과물 을 확인 할 수 있 었 다 ( 도 3 ) . 도 3 에서 M 은 100 bp DNA 크기 의 ladder ; 제 1 레인 은 건전 주 ; 제 2 레인 은 ASGV 감염 된 이병주 ; 제 3 레인 및 제 4 레인 은 ASGV 매개 T . flavus 로 접목 부위 의 상부 에 접종 ; 제 5 레인 및 제 6 레인 은 ASGV 매개 T . flavus 로 접목 부위 의 하부 에 접종 ; 제 7 레인 은 ASGV 매개 T . flavus 를 흙 에 관주 . 홀수 레인 ( 3 , 5 및 7 ) 새로 자란 잎 이 고 , 짝수 레인 ( 4 및 6 ) 은 곰팡이 접종 부위 . 염기 서열 을 확인 한 결과 모두 ASGV 와 98 % 이상 의 염기 서열 의 상동 성 을 나타냈 다 .