FIX / FIXa 및 FX / FXa 에 각각 결합 하 는 항 FIX / FIXa 및 항 FX / FXa 항체 에 대한 결합 친화도 는 PEAQ - ITC 열량계 ( Malvern , 영국 ) 를 사용 함 으로써 등온 적정 형 열량 측정 ( ITC ) 에 의해 측정 된다 . 실험 은 25 mM 트리스 , 150 mM NaCl , 5 mM CaCl 2 ( 트리스 - 완충액 ) 를 사용 하 여 37 ℃ 및 pH 7 . 4 에서 수행 한다 . 샘플 세포 ( 200 μ l ) 에 는 FIX , FIXa , FX 또는 FXa 중 하나 를 포함 시키 고 , 항 FIX / FIXa 및 항 FX / FXa 항체 를 주사기 를 통해 주입 한다 . 완충액 조건 을 일치 시키 기 위해 , 측정 에 앞서 모든 단백질 을 트리스 - 완충액 에 광범위 하 게 투석 한다 . 열 평 형 단계 다음 에 60 초 의 지연 이 이어지 고 , 이어서 항체 0 . 2 μ l 을 주입 한 다음 , 2 . 5 μ l 의 항체 를 120 초 의 간격 으로 14 회 주입 한다 . 교반 속도 는 750 rpm 으로 유지 하 고 , 기준 전력 은 5 ~ 10 μ cal / 초로 일정 하 게 유지 한다 . 각각 의 항체 주입 과 관련 된 열 을 취합 하 여 리간드 대 거대 분자 의 몰 비 에 대해 도시 한다 . 생성 된 등온선 을 제조사 에 의해 제공 된 소프트웨어 를 사용 하 여 단일 부위 결합 모델 에 피팅 시켜 상호 작용 의 친화도 ( KD ) , 화학 양론 ( n ) , 및 엔탈피 ( Δ H ) 를 수득 한다 . 실험 을 2 회 또는 3 회 수행 하 였 다 .