" 오버랩 핑 올리 고 ( overlapping oligo ) 의 증대 ( build up ) 및 PCR 증폭 에 의해 또는 기존 의 변이체 를 주형 으로서 사용 하 는 특정 부위 ( site directed ) 돌연변이 유발 에 의해 사람 화 된 V 영역 을 새로 합성 하 였 다 . 포유동물 발현 벡터 RLD - bshe 및 RLN - bshe 내 로 클로닝 하 기 위한 제한 부위 및 뮤 린 신호 서열 ( Kabat et al "" Sequences of Immunological Interest """, NIH , 1991 , Fifth edition , p . 30 95 VNP ' CL ) 을 포함 시켰 다 . 그 후 , 신호 서열 및 제 한 부위 와 함께 사람 화 된 V 영역 을 엔 코딩 하 는 PCR 생성물 을 포유 동물 발현 벡터 내 로 인 프레임 클로닝 하 였 는데 , 중쇄 변이체 를 RLD - bshe 내 로 클로닝 하 여 전장 사람 IgG 1 Fc 돌연변이 된 중쇄 를 엔 코딩 하 는 DNA 를 생성 시켰 고 , 사람 카파 불변 영역 을 엔 코딩 하 는 DNA 를 함유 하 는 RLN - bshe 내 로 경쇄 변이체 를 인 프레임 클로닝 하 여 전장 사람 카파 경쇄 를 엔 코딩 하 는 DNA 를 생성 시켰 다 .