현미 조작 술 을 이전 에 기술 한 바 와 같이 Diaphot 200 역상 현미경 ( Nikon , Tokyo , Japan ) 으로 수행 하 였 다 ( Chen et al . , 1999 ; Zhang et al . , 2005 ) . 간단 하 게 , 42 - 44 시간 시험관 내 성숙 후 , 난구 세포 를 상기 기술 한 바 와 같이 제거 하 였 다 . 모든 조작 을 39 ℃ 로 조절 된 가열 단계 에서 수행 하 였 다 . 단일 50 ㎕ 현미 조작 술 용액 방울 을 60 mm 배양 접시 뚜껑 의 중앙 부위 에 만들 었 고 미네랄 오일 로 덮 었 다 . 20 - 30 개 의 난모 세포 와 태아 섬유 아 세포 의 군 을 동일 한 방울 에 두 었 다 . 15 - 30 분 동안 인 큐 베이 션 후 , 난모 세포 를 홀딩 피펫 ( 내부 직경 = 25 - 35 ㎛ 및 외부 직경 = 80 - 100 ㎛) 으로 확보 하 였 다 . 5 - 6 시 의 위치 에 배치 한 후 , 중기 플레이트 를 추정 적 으로 함유 하 는 최초 극체 및 근접 한 세포질 ( 난모 세포 의 전체 부피 의 약 10 %) 을 흡인 하 고 , 사선 주입 피펫 ( 내부 지름 = 20 ㎛) 으로 제거 하 였 다 . 그 후 , 태아 섬유 아 세포 를 동일 한 슬롯 을 통해 공간 으로 주입 시켰 다 . 핵 이식 ( NT ) 후 에 , 재조합 된 한 쌍 을 융합 및 활성 화 가 수행 될 때 까지 1 - 1 . 5 시간 동안 , " 미네랄 오일 로 덮 은 배지 의 방울 안 으로 옮겼 다 . 회수 배지 는 4 mg / ㎖ BSA 및 7 . 5 ㎍/㎖ CB 로 보충 한 NCSU - 23 이 었 다 . 재조합 한 쌍 을 4 분 동안 융합 배지 에서 배양 하 였 다 . 정교 하 게 당겨 지 고 연마 된 유리 모세관 을 사용 하 여 수동 으로 정렬 시켜 접촉면 을 전극 에 평행 하 도록 하 였 다 . 그 후 30 마이크로초 동안 2 . 0 kV / cm 의 단일 직류 펄스 를 사용 하 였 다 . 7 . 5 ㎍/㎖ CB 로 보충 된 IVCO - 2 방울 ( "" 배아 배양 및 평가 "" 에서 기술 ) 에서 30 - 60 분 동안 배양 후 ", 융합 결과 를 입체 현미경 하 에서 검사 하 였 다 . 융합 된 한 쌍 을 활성 화 용액 에서 두 번 째 펄스 에 노출 시켰 다 . T 10 에서 30 분 동안 배양 한 후 , 시험관 내 발생 을 평가 하 기 위해 IVCO - 2 에 그것 들 을 이식 하 였 다 .