상기 rMSCs 를 인터 루킨 - 2 ( IL - 2 , R & D Systems , Minneapolis , MN 55413 , USA ) , 인터 루킨 - 15 ( IL - 15 , R & D Systems ) 및 과립구 대식세포 콜로니 자극 인 자 ( GM - CSF , LGPhD ) 단독 또는 다양 한 조합 으로 시험관 내 ( in vitro ) 에서 활성 화 시켰 다 . 세포 ( 3 × 105 ) 를 20 % FBS 및 다양 한 사이토카인 ( IL - 2 단독 , IL - 15 단독 , IL - 2 및 IL - 15 조합 , GM - CSF 단독 , 및 GM - CSF 및 IL - 2 조합 ) 이 보충 된 7 ml 의 DMEM 을 함유 하 는 100 - mm 배양 접시 에서 72 h 동안 37 ℃ 에서 배양 하 였 다 . 활성 화 사이토카인 의 농도 는 다음 과 같 다 : IL - 2 , 50 ng / ml ; IL - 15 , 20 ng / ml ; GM - CSF / Sargramo - stim , 40 ng / ml . 대 조군 배양 접시 는 사이토카인 이 없 는 배지 에 세포 를 함유 하 였 다 . 상기 활성 화 기간 후 에 세포 를 Fisherbrand Cell - Scrapers 를 이용 하 여 수확 하 고 , DMEM 로 2 회 세척 하 고 , Careside H - 2000 ( Culver , CA , USA ) 전자 세포 계수기 를 이용 하 여 계수 하 였 다 . 다음 상기 세포 를 이용 하 여 유동 세포 측정 법 ( flow cytometry ) 에 의해 면역 표현 형 을 위해 염색 된 세포독성 ( cytotoxicity ) 측정 ( visual survival cell assay ) 을 실시 하 였 다 . 또한 , 다양 한 사이토카인 으로 활성 화 된 rMSC 에서 IL - 4 및 γ - 인터페론 ( γ - INF ) 의 농도 를 종래 기술 된 ELISA 법 [ Kumagai N et al . , ( 2000 ) Investig Ophthalmol Vis Sci 41 : 1448 - 1453 ] 에 의해 결정 하 였 다 .