본 발명 측정 방법 의 제 3 공정 에서 는 , 우선 , 하 기 의 각 본 공정 의 전 공정 중 제 3 ( 전 A ) 공정 으로서 , 제 2 공정 에서 얻 어 진 미소 화물 인 단일 가닥 DNA ( 상기 의 마스킹 용 올리 고 뉴클레오티드 로 보호 된 메틸화 감수 성 제 한 효소 의 인식 부위 에 비 메틸화 상태 의 CpG 를 포함 하 지 않 는 단일 가닥 DNA ) 를 고정 화 메틸화 DNA 항체 로부터 일단 분리 하 여 단일 가닥 상태 인 DNA 로 한다 . 구체 적 으로 는 예 를 들 면 , 제 2 공정 에서 얻 어 진 미소 화물 인 단일 가닥 DNA ( 상기 의 마스킹 용 올리 고 뉴클레오티드 로 보호 된 메틸화 감수 성 제 한 효소 의 인식 부위 에 비 메틸화 상태 의 CpG 를 포함 하 지 않 는 단일 가닥 DNA ) 에 , 어닐링 버퍼 를 첨가 함 으로써 , 혼합물 을 얻 는다 . 이어서 , 얻 어 진 혼합물 을 95 ℃ 에서 몇 분 간 가열 함 으로써 , 단일 가닥 상태 인 DNA ( 플러스 가닥 ) 를 얻 는다 . 그 후 , 제 3 ( 전 B ) 공정 에서 는 , 구체 적 으로 예 를 들 면 , 제 3 ( 전 A ) 공정 에서 얻 어 진 단일 가닥 상태 의 DNA ( 플러스 가닥 ) 와 포워드 프라이머 를 , 멸균 초 순수 를 17 . 85 μ L , 최적 완충액 ( 예 를 들 면 , 100 mM Tris － HCl pH 8 . 3 , 500 mM KCl , 15 mM MgCl 2 ) 를 3 μ L , 2 mM dNTP 를 3 μ L , 5 N 베타 인 을 6 μ L 첨가 하 고 , 이어서 당해 혼합물 에 AmpliTaq ( DNA 폴리머 라 아제 의 1 종 ： 5 U / μ L ) 를 0 . 15 μ L 첨가 하 여 액량 을 30 μ L 로 한 용액 중 에서 혼합 하 고 , 37 ℃ 에서 약 2 시간 인 큐 베이 션 하 여 , 목적 으로 하 는 DNA 영역 을 포함 하 는 단일 가닥 DNA ( 플러스 가닥 ) 를 이중 가닥 DNA 로 신장 형성 시킨다 .