상세 한 동역학 변수 를 수득 하 게 위해 , 대 규모 배양액 에서 Fab 를 발현 시키 고 정제 하 였 다 . 200 mL 의 LB + 앰 피 실린 ( 50 ㎍/ ml ) + 2 % 글루코스 를 함유 하 는 삼각 플라스크 에 선택 된 Fab - 발현 이 . 콜라 이 클론 으로부터 나온 하룻밤 배양액 5 ml 를 접종 하 였 다 . 1 . 0 의 OD 550 nm 에 도달 할 때 까지 클론 을 30 ℃ 에서 항온 배양 한 후 배지 를 200 ml 의 LB + 앰 피 실린 ( 50 ㎍/ ml ) + 1 mM IPTG 로 대체 하 였 다 . 30 ℃ 에서 5 시간 의 발현 시간 후 에 , 원심 분리 하 여 세포 를 펠 렛 화 한 후 10 ml 의 PBS ( pH 8 ) 에 재현 탁 시켰 다 . 2 주기 의 동결 / 해동 ( 각각 - 80 ℃ 및 37 ℃) 에 의해 세포 를 용균 시켰 다 . 세포 용균 액 의 상층 액 을 PBS , pH 8 로 평형 화 시킨 후 컬럼 의 5 배 체적 의 PBS , pH 8 로 세척 한 Ni - NTA 슈퍼 플로우 세파 로스 ( 캘리포니아주 발렌시아 소재 의 퀴아겐 ( Qiagen ) ) 컬럼 에 부하 하 였 다 . 개별 적 인 Fab 는 PBS ( pH 8 ) + 300 mM 이미다졸 을 이용 하 여 서로 다른 분획 으로 용출 되 었 다 . Fab 를 함유 한 분획 을 모으 고 , PBS 에서 투석 한 후 , 친화성 특성 을 규명 하 기 전 에 ELISA 로 정량 하 였 다 .