E . coli 2 - 상 추출 유가 식 발효 는 20 g / L glucose , 20 mM MET , 3 g / L ( NH 4 ) 2 SO 4 , 40 mg / L L - TRP , 10 mg / L thiamine 이 첨가 된 1 . 8 L MR 배지 가 담긴 6 . 6 - L 발효기 ( Bioflo 3000 ; New Brunswick Scientific Co . , Edison , NJ ) 에서 진행 되 었 다 . 먼저 , 2 mL 테스트 튜브 LB 배지 에 접종 한 균주 를 최소 12 시간 동안 37 ℃ 에서 배양 하 였 다 . 전 배양액 은 각각 100 mL 씩 동일 한 배지 가 담긴 두 개 의 250 mL 플라스크 에 접종 하 여 37 ℃ 200 rpm 에서 10 시간 동안 배양 하 였 다 . 이 전배 양액 ( 200 mL ) 을 발효기 에 접종 하 였 다 ( 시작 OD 600 ~ 0 . 3 ) . 유가 식 발효 배 양시 pH 는 암모니아수 ( 28 %, Junsei Chemical Co . , Ltd . , Tokyo , Japan ) 를 이용 하 여 7 . 0 으로 유지 하 였 고 온도 는 P - I - D 모드 ( proportional - integral - derivaive ) 로 각각 37 ℃ 로 유지 하 였 다 . Aeration rate 은 1 vvm 으로 유지 하 였으며 , Dissolved oxygen ( DO ) 는 40 % 로 유지 하 기 위해 agitation 을 200 에서 1000 rpm 으로 진행 하 고 , 1000 rpm 이 넘어가 면 산소 가 함께 주입 하 도록 하 였 다 . 균주 들 의 OD 600 이 ~ 5 정도 되 었 을 때 IPTG 를 첨가 하 였 고 , 500 mL 의 tributyrin 은 250 ml / h 의 속도 로 배지 에 첨가 하 였 다 . 유가 식 발효 를 위해 pH - stat feeding strategy ( Lee , S . Y . Trends Biotechnol . 14 , 98 - 105 , 1996 ) 를 이용 하 여 pH 가 7 . 02 보다 높 아 지 면 feed solution 을 pH 가 7 . 02 보다 낮 아 질 때 까지 첨가 하 는 방식 으로 진행 하 였 다 . Feed solution 의 조성 은 700 g / L glucose , 8 g / L MgSO 4 · 7 H 2 O , 20 mM MET , 30 g / L ( NH 4 ) 2 SO 4 , 100 mg / L of l - TRP , 10 mg / L of thiamine , 5 ml / L trace metal solution , 1 mM IPTG 이 다 . 24 시간 과 48 시간 에 20 mL 의 L - TRP ( 4 g / L ) 를 배지 에 첨가 하 였 다 .