신선 하 게 준비 된 보르데 텔라 브론 키 셉 티 카 배양액 5 ml 을 500 ml BHI 브 로쓰 ( BBL ™, Becton , Dickinson and Company , Sparks , MD ) 에 접종 하 여 OD 595 값 이 0 . 5 가 될 때 까지 배양 하 고 , 배양 후 얼음 위 에서 20 분 간 냉각 후 4 , 000 xg 로 15 분 간 원심 분리 하 여 균 을 회수 하 였 다 . 이 를 2 . 5 ml 의 냉각 된 10 % 글리세롤 용액 으로 농축 하 여 , 전기 천공 용 컴 피턴 트 세포 를 제조 하 였 다 . 상기 균체 에서 λ Red 리 콤비 나제 를 발현 하 기 위해 pKD 46 플라스미드 를 Gene Pulser Xcell ™ 전기 천 공 시스템 ( Bio - Rad , Hercules , CA ) 을 이용 하 여 형질전환 후 , 암피실린 과 L - 아라비노스 ( 최종 농도 10 mM ) 가 첨가 된 250 ml SOB 배지 ( 증류수 1 리터 당 박토 트립 톤 20 g , 박토 효모 추출 액 5 g , NaCl 0 . 5 g 을 넣 고 멸균 하 여 제조 ) 에서 선택 후 , 30 ℃ 에서 OD 595 값 이 0 . 5 가 될 때 까지 배양 하 였 다 . 그 후 , 다시 2 . 5 ml 의 냉각 된 10 % 글리세롤 용액 으로 농축 하 여 먼저 제조 된 상동 재조합 용 선형 DNA 를 형질 전환 하 기 위한 일렉트로 컴 피턴 트 세포 를 제조 하 였 다 .