또한 , 면역 과 산화 효소 법 분석 을 위하 여 상기 3 개 그룹 의 마우스 들 을 각각 흡 입 마취 ( enflurane ) 로 안락사 시킨 후 , 안락사 한 마우스 로부터 간 조직 을 수득 하 고 상기 간 조직 을 고정액 ( 0 . 1 mol / L 카코딜 산염 완충액 ( pH 7 . 4 ) 에 4 % 파라포름 알데하이드 ( paraformaldehyde ) 를 첨가 함 ) 에 2 시간 동안 침지 시킨 후 파라핀 에 넣 어 고정 하 고 회전식 마이크로톰 ( Leica , 독일 ) 을 사용 하 여 3 ㎛ 두께 로 세절 함 으로서 조직 절편 을 제조 하 였 다 . 이후 , 상기 조직 절편 을 0 . 5 % 과산화수소 가 포함 된 무수 메탄올 로 처리 하 고 상온 에서 30 분 간 반응 시켜 세포 내 과산화 효소 를 제거 하 였 다 . 항원 이 노출 되 도록 , 상기 조직 절편 을 0 . 5 mmol / L EGTA ( ethyleneglycol tetra acetate ) 가 첨가 된 1 mmol / L 트리스 용액 ( Tris , pH 9 . 0 ) 에 침지 시키 고 10 분 간 전자레인지 로 가열 하 였 다 . 그 다음 , 상기 조직 절편 을 50 mmol / L NH 4 Cl 에서 30 분 간 반응 시키 고 1 % BSA ( bovine serum albumin ) , 0 . 05 % 사포닌 ( saponin ) 및 0 . 2 % 젤라틴 ( gelatine ) 이 첨가 된 PBS ( phosphate - buffered saline ) 로 30 분 간 반응 시켜 비 특이 적 인 면역 글로불린 의 결합 을 차단 하 였 다 . 이후 , 상기 조직 절편 을 0 . 1 % BSA , 0 . 3 % 트리톤 X - 100 이 포함 된 PBS 로 희석 한 α - SMA 항체 ( Sigma , 미국 ) 와 함께 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 반응 시켰 다 . 상기 일 차 항체 로 처리 된 절편 을 HRP ( horseradish peroxidase ) - 결합 된 이 차 항체 ( P 447 또는 P 448 , 1 : 200 , DAKO , Glostrup , Denmark ) 로 처리 하 고 1 시간 동안 반응 시켰 다 . 상기 조직 절편 을 커버 슬립 으로 봉입 한 후 광학 현미경 ( DMRE , 독일 ) 으로 관찰 하 였 다 .