종래 의 IVT 반응 들 은 DNA 주형 을 RNA 중합효소 및 GTP , ATP , CTP , 및 UTP 를 포함 하 는 등 몰 양 의 뉴클레오티드 트라이 포스 페이트 와 함께 전사 완충액 에서 배양 함 으로써 실시 된다 . 5 ' 말단 구아노신 트라이 포스 페이트 를 가지 는 RNA 전사체 가 이 반응 으로부터 생성 된다 . 이 들 반응 들 은 또한 면역 자극 성 이 며 부가 적 인 영향 을 미칠 수 있 는 수많 은 불순물 들 , 가령 , 이중 가닥 및 단일 가닥 RNA 들 을 생성 하 는 결과 를 가져온다 . 본 명세서 에 기재 된 순도 방법 들 은 역 보체 들 의 형성 을 저해 하 므로 두 가지 종류 모두 의 선천 면역 인식 을 저해 한다 . 일부 구체 예 들 에서 변형 된 IVT 방법 들 은 등 몰의 NTP 들 을 이용 하 여 선행 기술 의 방법 들 을 사용 하 여 제조 된 RNA 제재 보다 현저히 감소 된 T 세포 활성 을 가지 는 RNA 를 생성 한다 . 선행 기술 은 일련 의 후속 정제 단계 들 을 사용 하 여 이러 한 바람직 하 지 않 은 성분 들 을 제거 하 려고 시도 하 였 다 . 이러 한 정제 방법 들 은 추가 시간 및 자원 들 을 요하 고 또 한 최종 생성물 에서 제 약학 적 생성물 에 바람직 하 지 않 은 잔부 유기 용매 들 을 혼입 시키 게 되 므로 바람직 하 지 않 다 . 역상 크로마토그래피 ( RP ) 와 같 은 공정 들 을 확장 시키 는 것 은 노동 및 자본 집약 적 이 다 : 예 를 들 어 , 고압 , 고온 , 인화 성 용매 등 을 위한 방폭 설비 , HPLC 컬럼 및 정제 시스템 을 이용 . 대 규모 생산 을 위한 규모 와 처리 량 은 이러 한 인자 들 에 의해 제한 된다 . 또한 공정 에서 이용 되 는 알킬 암모늄 이온쌍 을 제거 하 기 위해 후속 정제 가 필요 하 다 . 대조 적 으로 , 본 명세서 에 기재 된 방법 들 은 심지어 현재 이용 되 는 방법 들 ( 예컨대 RP ) 를 향상 시킨다 . 불순물 부하 가 낮 을 수록 사이토카인 유도 오염 물질 이 없 는 전장 RNA , 예컨대 , 처음 부터 높 은 품질 의 재료 들 의 정제 회수 율 이 더 높 아 진다 .