그 후 , 10 배 ( 10 X ) 등온 증폭 반응 버퍼 ( 20 mM Tris - HCl , 10 mM ( NH 4 ) 2 SO 4 , 10 mM KCl , 2 mM MgSO 4 , 0 . 1 % 및 Triton X - 100 ) 2 uL , 10 mM dNTPs ( 각각 10 mM 이 포함 되 어 있 는 dATP , dGTP , dTTP , dCTP 혼합물 ) 0 . 5 uL , 10 pmole 농도 의 F 3 및 B 3 프라이머 0 . 5 uL , 10 pmole 농도 의 FIP 및 BIP 프라이머 2 uL , 주형 plamsid DNA 1 uL ( 1 ng / uL ) 및 멸균 증류수 10 . 5 uL 를 반응 튜브 에 첨가 한 후 혼합 하 였 다 . 제조 된 등온 증폭 반응 조성물 을 95 ℃ 에서 10 분 및 4 ℃ 에서 1 분 간 반응 시킨 후 , Bst . polymerase ( 8 unit / uL ) 1 uL 를 반응 튜브 에 첨가 하 여 최종 적 으로 등온 증폭 반응 용 프라이머 조성물 ( 세트 1 ) 20 uL 를 제조 하 였 다 .