HEK - 293 T 세포 를 24 웰 플레이트 에 1 . 5 X 105 세포 / 웰 농도 로 접종 하 고 , 각 웰 에 150 ng MITF - Luc reporter plasmid , 150 ng Tyrosinase - Luc reporter plasmid , 50 ng RSV - β gal plasmid 를 처리 하 여 각 조건 에 따라 형질 주입 ( transfection ) 하 였 다 . PEI ( 1 mg / ml ) 는 DNA 1 μ g 당 3 μ l 의 비율 로 처리 하 였 다 . 형질 주입 후 24 시간 뒤 약물 ( 10 μ M ) 과 포스 콜린 ( 10 μ M ) 을 처리 하 고 6 시간 후 배지 를 제거 하 고 웰 에 Luciferase lysis buffer ( 1 X gly - gly , 1 % Tripton X , 100 mM ATP , 1 M DTT ) 150 μ l 를 처리 하 여 세포 를 회수 한 후 96 웰 플레이트 로 옮겨 주 었 다 . 이후 - 80 ℃ deep freezer 에서 30 분 간 방치 한 고 얼음 위 에서 녹인 뒤 1000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 하 였 다 . 이후 웰 당 25 μ l 씩 white 96 웰 플레이트 로 옮기 고 , Assay mix 25 μ l , Luciferin 50 μ l 를 처리 한 다음 마이크 로 플레이트 리더 기 ( BioTek , Winooski , Vermont , USA ) 에서 Luminescence 를 측정 하 였 다 . 보정 을 위한 β - gal assay 는 Well 당 25 μ l 씩 clear 96 웰 플레이트 로 옮기 고 , β - gal Assay mix 25 μ l 를 처리 한 다음 빛 을 차단 하 여 상온 에서 반응 시켰 다 . 이후 10 분 마다 마이크 로 플레이트 리더 기 를 이용 하 여 420 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 Luminescence 측정값 을 보정 하 는 데 사용 하 였 다 .