실시 예 3 ( 1 ) 에서 제작 한 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 유전자 부위 특이 적 ( T 133 , F 136 , D 199 ) 변이체 라이브러리 로부터 , 보다 유용 한 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 의 스크리닝 을 행했 다 . 96 웰 플레이트 ( 딥 웰 ) 에 , IPTG 를 최종 농도 로서 1 mM 포함 하 는 LB Amp 배지 를 웰 당 500 ㎕ 씩 분주 하 고 , 실시 예 3 ( 1 ) 에서 제작 한 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 유전자 부위 특이 적 ( T 133 , F 136 , D 199 ) 변이체 라이브러리 의 각 계열 에 대하 여 200 콜로니 를 각 웰 에 식균 했 다 . 한편 , 평가 의 대조 로서 사용 하 는 JM 109 / pSTT 002 - T 133 A , JM 109 / pSTT 002 - F 136 S , JM 109 / pSTT 002 - D 199 H 및 JM 109 / pSTT 002 를 더불 어 식균 했 다 . 37 ℃, 800 rpm 으로 약 16 시간 배양 한 후 , 얻 어 진 배양액 중 20 ㎕ 를 평형 96 웰 플레이트 에 분주 했 다 . 원심분리기 ( 사쿠마 제작소 50 A - IVD ) 및 로터 ( 사쿠마 제작소 HM - 2 HLS ) 를 사용 하 여 , 평형 96 웰 플레이트 를 원심 분리 ( 3000 rpm , 5 분 간 , 4 ℃) 하 였 다 . 배양액 상청 을 제거 한 후 , 실시 예 2 ( 2 ) 에 기재 된 평가 용 반응 액 1 및 평가 용 반응 액 3 ( 200 mM ( S ) - CHBN , 0 . 025 % 브로모 크레졸 퍼플 ( BCP ) , 50 mM Tris - 황산 ( pH 8 ) ) 40 ㎕ 를 각 웰 에 첨가 했 다 . 현 탁 후 , 실온 에서 정치 하 여 , 반응 액 의 정색 변화 를 경시 적 으로 관찰 하 여 , 평가 용 반응 액 1 을 첨가 한 계 에서 대조 인 JM 109 / pSTT 002 보다 도 상당히 빨리 변색 이 보인 주 , 평가 용 반응 액 3 을 첨가 한 계 에서 대조 인 JM 109 / pSTT 002 보다 도 상당히 빨리 변색 이 보인 주 , 및 각 주 의 평가 용 반응 액 1 첨 가계 에 있 어서 의 정색 속도 와 평가 용 반응 액 3 첨 가계 에 있 어서 의 정색 속도 의 비율 이 , 대조 인 JM 109 / pSTT 002 의 상기 비율 과 다른 주 를 선발 했 다 . 각 계열 U 200 콜로니 에 대하 여 상기 평가 를 행하 여 , 계열 1 ( T 133 랜덤 변이체 라이브러리 ) 로부터 7 주 , 계열 2 ( F 136 랜덤 변이체 라이브러리 ) 로부터 7 주 , 계열 3 ( D 199 랜덤 변이체 라이브러리 ) 으로부터 19 주 를 선발 했 다 .