H 2 부위 에 삽입 하 기 위하 여 , 벡터 pOrigHIB H 2 및 / 또는 pOrigHIB H 1 H 2 를 MscI 제한 분해 ( 에 피토프 의 삽입 을 위해 사용 될 CDR 에 좌우 됨 ) 를 셋 업 하 여 선형 화 한 다음 , 37 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 하 였 다 . 상기 분해 물 을 1 . 5 % 아가로스 겔 상 에서 전기영동 한 다음 절단 벡터 를 겔 추출 에 의해 정제 하 였 다 . 선형 화 된 벡터 의 자기 연결 을 방지 하 기 위하 여 , 벡터 의 5 ' 말단 으로부터 인 산기 를 37 ℃ 에서 송아지 장 알 칼라인 포스 파타 제 ( Calf Intestinal Alkaline Phosphatase , CIAP ) 5 단위 , 멸균 증류수 로 최종 부피 10 O ㎕ 로 만든 10 ㎕ 1 O x NEB 완충제 3 으로 처리 하 고 밤새 인 큐 베이 션 하 여 제거 하 였 다 . 탈 인산화 벡터 를 정제 하 고 , 그대로 연결 한 다음 , 어닐링 된 올리 고 뉴클레오타이드 의 1 / 100 및 1 / 200 희석 액 을 표준 기술 을 이용 하 여 H 2 부위 중 으로 직접 클로닝 하 였 다 . 유니버설 ( universal ) 프라이머 CMV forward 를 사용 하 여 단일 벡터 내 서열 분석 에 의해 에 피토프 삽입 을 확인 하 였 다 .