상기 PCR 로 증폭 된 비오틴 으로 표지 된 프로브 ( biotinylated probe ) 는 QIAquickTM PCR purification kit ( QIAGEN , Germany ) 로 정제 하 였 고 , 약 100 ng 을 막 ( membrane ) 에 첨가 하 여 65 ℃ 혹은 68 ℃ 에서 18 시간 동안 혼성 화 ( hybridization ) 하 였 다 . 2 × SSC / 1 % SDS 를 실온 에서 5 분 2 차례 , 0 . 1 × SSC / 1 % SDS 로 68 ℃ 에서 15 분 2 차례 , 그리고 1 × SSC 로 실온 에서 5 분 2 차례 처리 하 였 다 . 프로브 검출 ( Probe detection ) 은 Southern - starTM kit ( Tropix , USA ) 를 사용 하 여 실시 하 였 다 . 블 럿 ( Blot ) 을 블럭 킹 버퍼 ( blocking buffer ) ( 1 × PBS , 0 . 2 % I - BlockTM Reagent 와 0 . 5 % SDS ) 로 처리 한 후 , 스 트 렙 타비 딘 결합 알칼리 성 포스 파 타제 ( Alkaline phosphatase conjugated streptavidin ) 를 붙여 준 다음 CDP - StarTMReady - to - Use 를 처리 해 주 었 다 . 막 ( Membrane ) 은 X - ray film ( Fujifilm , Japan ) 에 10 분 ~ 1 시간 30 분 간 노출 하 였 다 .