수컷 갈색 - 노르웨이 래트 를 0 . 2 ml 명반 중 100 μ g 의 OA ( 오브알부민 ) 로 매주 1 회 3 주 동안 ( 0 일 째 , 7 일 째 , 및 14 일 째 ) 복강 내 감작 시킨다 . 21 일 째 ( 최종 감작 한 후 1 주 째 ) , 그 래트 에 OA 에어로졸 도전 ( 45 분 동안 1 % OA ) 하 기 0 . 5 시간 전 에 비 히 클 또는 화합물 제형 을 피하 ( q . d . ) 에 투여 하 고 , 도전 한 지 4 또는 24 시간 후 에 종결 시킨다 . 희생 시점 에 , 혈청 및 혈장 을 각각 혈청 테스트 및 PK 를 위해 모든 동물 로부터 채혈 한다 . 기관 캐 뉼라를 삽입 하 고 , 폐 를 PBS 로 세척 한다 ( 3 X ) . BAL 유체 를 총 백 혈구 수 및 백혈구 감별 계수 를 위해 분석 한다 . 세포 중 일부 ( 20 내지 100 μ l ) 의 총 백 혈구 수 를 콜터 계수기 ( Coulter Counter ) 로 측정 한다 . 백혈구 감별 계수 를 위해 , 50 - 200 μ l 의 샘플 을 시토 스핀 ( Cytospin ) 에서 원심 분리 하 고 , 슬라이드 를 디프 - 퀵 ( Diff - Quik ) 으로 염색 한다 . 단핵 백혈구 , 호산구 , 호중구 및 림프구 의 비율 을 표준 형태학 적 기준 을 사용 하 여 광현 미경 하 에 계수 하 고 , % 로 표현 한다 . 대표 적 인 Btk 억제제 는 대 조군 의 수준 과 비 교시 OA 감작 및 도전 된 래트 의 BAL 에서 총 백 혈구 수 의 감소 를 나타낸다 .