따라서 PA 분리 정제 를 위하 여 세포 내 불용성 단백질 만 을 얻 어 낸 뒤 이 를 변 성 조건 ( 6 M 구아니딘 - HCl ) 에서 용해 시킨 뒤 Ni - 세파 로 오스 칼럼 을 통과 시켜 PA 단백질 을 결합 시킨 뒤 에 변성 된 PA 를 되 접힘 시키 기 ( Refolding ) 위하 여 칼럼 에 결합 된 상태 로 선형 구배 ( Linear gradient ) ( 우레 아의 저감 농도 ) 를 통하 여 서서히 변 성체 를 제거 시켜 가 며 PA 를 되 접힘 시키 고 500 mM 이미다졸 선형 구배 하 에 용출 시켰 다 .