일반 적 으로 , 패 키 징 된 게놈 을 갖 는 AAV 벡터 입자 및 중공 캡시드 에 대한 검정 방법 은 관련 기술 분야 에 공지 되 어 있 다 ( 예 를 들 어 , 문헌 [ Grimm et al . ,　 Gene Therapy 　( 1999 ) 6 : 1322 - 1330 ; Sommer et al . ,　 Molec . Ther . ( 2003 ) 7 : 122 - 128 ] 참고 ) . 변성 캡시드 에 대해서 시험 하 기 위해서 , 방법 은 처리 된 AAV 스톡 을 , 3 종 의 캡시드 단백질 , 예 를 들 어 , 완충제 중 에 3 내지 8 % 의 트리스 - 아세테이트 를 함유 하 는 구배 젤 을 분리 할 수 있 는 임의 의 젤 로 이루어진 , SDS - 폴리 아크릴아마이드 젤 전기영동 법 에 적용 하 는 단계 , 이어서 , 젤 을 샘플 물질 이 분리 될 때 까지 전개 시키 는 단계 , 및 젤 을 나일론 또는 나이트로셀룰로스 막 , 바람직 하 게 는 나일론 상 에 블롯 팅 하 는 단계 를 포함 한다 . 이어서 , 항 - AAV 캡시드 항체 는 변성 캡시드 단백질 , 바람직 하 게 는 항 - AAV 캡시드 단 클론 성 항체 , 가장 바람직 하 게 는 B 1 항 - AAV - 2 단 클론 성 항체 에 결합 하 는 1 차 항체 로서 사용 된다 ( Wobus et al . , J . Virol . ( 2000 ) 74 : 9281 - 9293 ) . 이어서 , 2 차 항체 , 즉 , 1 차 항체 에 결합 하 고 , 1 차 항체 와 의 결합 을 검출 하 기 위한 수단 , 보다 바람직 하 게 는 그것 에 공유 결합 된 검출 분자 를 함유 하 는 항 - IgG 항체 , 가장 바람직 하 게 는 호스 래 디쉬 퍼 옥시 다제 에 공유 연결 된 양 항 - 마우스 IgG 항체 인 것 이 사용 된다 . 결합 을 검출 하 기 위한 방법 을 사용 하 여 1 차 항체 와 2 차 항체 간 의 결합 을 반 - 정량 적 으로 결정 하 는데 , 바람직 하 게 는 검출 방법 은 방사성 동위 원소 방출 , 전자기 방사선 , 또는 표색 계 변화 , 가장 바람직 하 게 는 화학 발광 검출 키트 를 검출 할 수 있 다 . 예 를 들 어 , SDS - PAGE 의 경우 , 칼럼 분획 으로부터 의 샘플 을 취하 고 , 환원제 ( 예 를 들 어 , DTT ) 를 함유 하 는 SDS - PAGE 적 재 완충액 중 에서 가열 할 수 있 고 , 캡시드 단백질 을 프리 - 캐스트 ( pre - cast ) 구배 폴리 아크릴아마이드 젤 ( 예 를 들 어 , 노 벡스 ( Novex ) ) 상 에서 분할 시켰 다 . 제 조사 의 설명서 에 따라서 실버 엑스 프레스 ( SilverXpress ) ( 인 비트 로 젠 사 ( Invitrogen ) , 미국 캘리포니아주 소재 ) 를 사용 하 여 또는 다른 적합 한 염색 방법 , 즉 SYPRO 루비 또는 쿠마시 염색 제 를 사용 하 여 은 염색 을 수행 할 수 있 다 . 일 실시 형태 에서 , 칼럼 분획 중 의 AAV 벡터 게놈 ( vg ) 의 농도 를 정량 적 실시간 PCR ( Q - PCR ) 에 의해서 측정 할 수 있 다 . 외인성 DNA 를 제거 하 기 위해 샘플 은 DNase I ( 또는 다른 적합 한 뉴클레아제 ) 를 이용 하 여 희석 되 고 분해 된다 . 뉴클레아제 의 비활성 화 후 에 , 상기 샘플 은 추가 로 희석 되 며 , 프라이머 사이 의 DNA 서열 에 특이 적 인 태 크 만 ( TaqMan ) ( 상표명 ) 형 광원 프로브 및 프라이머 를 이용 하 여 증폭 시킨다 . 정의 된 형광 수준 에 도달 하 는 데 필요 한 사이클 의 수 ( 역치 사이클 , Ct ) 를 어 플 라이드 바이오 시스템즈 프리즘 ( Applied Biosystems Prism ) 7700 서열 검출 시스템 상 에서 각각 의 샘플 에 대해서 측정 한다 . AAV 벡터 에 함유 된 것 과 동일 한 서열 을 함유 하 는 플라스미드 DNA 를 사용 하 여 Q - PCR 반응 에서 표준 곡선 을 생성 시킨다 . 샘플 로부터 얻 은 사이클 역치 ( Ct ) 값 을 사용 하 여 그것 을 플라스미드 표준 곡선 의 Ct 값 에 정규 화 시킴 으로써 벡터 게놈 역가 를 결정 한다 . 디지털 PCR 을 기반 으로 한 종점 검정 을 또한 사용 할 수 있 다 .