AR 51 A 630 . 3 하이브리도마 세포주 에 의해 생성 된 단일 클론 항체 의 중쇄 ( VH ) 및 경쇄 ( VL ) 로부터 의 가변 영역 의 서열 들 을 결정 할 수 있 다 . 면역 글로불린 의 중쇄 및 경쇄 를 인코딩 하 는 RNA 는 , 구 아니 디 늄 이소 티오시 아 네이트 를 이용 한 세포 용해 를 수반 하 는 표준 방법 을 사용 하 여 대상 하이브리도마 로부터 추출 할 수 있 다 ( Chirgwin 등 Biochem . 18 : 5294 - 5299 ( 1979 ) ) . 상기 mRNA 를 , 당업 계 에 공지 된 PCR 방법 론 에 의해 후속 적 인 VH 및 VL 유전자 의 분리 를 위한 cDNA 를 제조 하 는 데 사용 할 수 있 다 ( Sambrook 등 , eds . , Molecular Cloning , Chapter 14 , Cold Spring Harbor laboratories Press , N . Y . ( 1989 ) ) . 상기 중쇄 및 경쇄 의 N - 말단 아미노산 서열 은 자동 화 Edman 서열 분석 으로 독립 적 으로 결정 될 수 있 다 . CDR 및 플 랭킹 ( flanking ) FR 들 에 대한 추가 적 인 서열 들 은 VH 및 VL 절편 들 에 대한 아미노산 서열 분석 으로 결정 할 수 있 다 . 그 후 AR 51 A 630 . 3 단일 클론 항체 로부터 의 VH 및 VL 유전자 들 의 분리 를 위해 합성 프라이 머들 을 설계 할 수 있 고 , 분리 된 유전자 를 적절 한 서열 분석 용 벡터 내 로 결찰 할 수 있 다 . 키메라 및 인간 화 IgG 를 생성 하 기 위해서 , 가변 경쇄 및 가변 중쇄 도메인 들 을 적절 한 발현 용 벡터 내 로 서브 클로닝 할 수 있 다 .