마이크로 어레이 프로파일링 에 의해 선택 된 후보 mRNA 바이오 마커 는 마이크 로 어레이 분석 에서 사용 된 동일 한 시료 ( n = 94 ) 를 이용 하 여 중첩 된 RT - qPCR ( 개별 SYBR green qPCR 을 이용 한 RT - PCR ) 에 의해 검증 되 었 다 . qPCR 프라이머 는 Primer 3 소프트웨어 를 이용 하 여 설계 되 었 고 , Primer - BLAST 조사 를 수행 한 후 Sigma - Genosys 에 의해 합성 되 었 다 . 프라이머 서열 은 표적 유전자 에서 단일 뉴클레오티드 변이 ( SNP ) 영역 을 피하 도록 설계 되 었 다 . 모든 증폭 산물 ( amplicon ) 은 인트론 범위 ( spanning ) 에 있 었 다 . RT - qPCR 분석 은 ' 정량 적 실시간 PCR 실험 의 발표 를 위한 최소한 의 정보 ( Minimum Information for Publication of Quantitative Real - Time PCR Experiment ) ' 지침 에 따라 각 바이오 마커 후보 에 대해 중복 으로 수행 되 었 다 . 자세 한 실험 방법 은 http : / / www . clinchem . org / content / vol 64 / issue 10 에서 확인 할 수 있 다 . 각 유전자 에 대한 PCR 산물 의 특이 도 는 용융 곡선 분석 및 3 % 아가로스 겔 분석 으로 확인 되 었 다 . Δ Cq 값 은 [ Δ Cq = ( 각 바이오 마커 후보 의 기존 Cq 값 ) - ( 참고 유전자 ( housekeeping gene ) 인 GAPDH 또는 ACTB 의 Cq 값 ) ] 으로 계산 되 었 다 . 전사체 바이오 마커 확인 및 검증 에 사용 된 mRNA 바이오 마커 후보 및 그 프라이머 서열 은 하 기 표 4 와 같 다 .