먼저 , 사람 섬유 아 세포 를 48 - 웰 플레이트 에 4ⅹ105 의 밀도 로 접종 한 후 , 37 ℃, 5 % CO 2 배양기 에서 24 시간 배양 하 였 다 . 이후 TNF - α 10 ng / ml 을 이용 하 여 노화 반응 을 유도 하 고 , 비 교예 1 , 비 교예 2 , 비 교예 3 , 실시 예 2 의 샘플 을 100 μ g / ml 의 농도 로 배양 배지 에 희석 하 여 각각 해당 하 는 웰 에 처리 한 다음 추가 로 48 시간 동안 배양 하 였 다 . 양성 대 조군 은 레티 놀 ( retinol ) 을 처리 하 였 다 . 이후 배양 배지 를 회수 하 여 배지 로 방출 된 MMP - 1 의 양 을 MMP - 1 키트 ( Human Total MMP - 1 DY 901 ) 를 사용 하 여 , 항원 - 항체 반응 , 블로킹 ( blocking ) , 기질 - 발색 반응 을 제조사 의 매뉴얼 에 따라 순서 대로 진행 한 후 450 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 흡광 도 값 을 세 포수 로 보정 하 여 , 각 조건 별 , 농도 별 총 MMP - 1 양 을 계산 하 였 다 .