달리 표시 되 지 않 으면 , 모든 생화학 적 물질 을 영국 도싯 풀 소재 의 시그마 - 알드리치 케미 칼 컴퍼니 ( Sigma - Aldrich Chemical Company ) 로부터 구매 하 고 , " 분석 등급 이상 의 등급 의 비수 성 용매 를 영국 러 퍼 버러 소재 의 서모 피셔 사이언 티 픽 ( ThermoFisher Scientific ) 으로부터 구매 하 였 다 . 밀 리큐 ( MilliQ ) 물 ( 엘 릭스 ( Elix ) 5 및 밀 리큐 그래디 언 트 ( MilliQ Gradient ) ; 머크 밀리 포어 ( Merck Millipore ) ) 을 생물학 적 완충제 를 구성 하 는 기본 수성 용매 로 사용 하 였 다 . 5 . 0 의 최종 pH 가 달성 될 때 까지 50 mM 트리 소듐 시트 레이트 ( 1 . 06448 ; 머크 바이오 사이언 시즈 ( Merck Biosciences ) ) 의 교반 용액 에 50 mM 시트르산 용액 ( 1 . 00244 ; 머크 바이오 사이언 시즈 ) 을 첨가 함 으로써 기본 분석 완충제 를 제조 하 였 다 . 이것 에 40 % 폴리에틸렌 글리콜 ( "" PEG "")( P 1458 ; 시그마 알드리치 ) 용액 을 0 . 05 % 의 최종 농도 까지 첨가 하 였으며 ; 따라서 기본 완충제 는 0 . 05 % PEG 를 함유 하 는 50 mM 시트르산 나트륨 ( pH 5 . 0 ) 으로 이루 어 졌 다 . 모든 분석 을 일상 적 으로 384 웰 분석 플레이트 ( 코스타 ( Costar ) 4514 ; 코닝 라이프 사이언 시즈 ( Corning Life Sciences ) ) 에서 실시 하 고 "," 이 를 37 ± 1 ℃ 에서 60 분 동안 인 큐 베이 션 한 후 종점 형광 강도 를 판독 하 였 다 . ( 7 - 메톡실 쿠마린 - 4 - 일 ) 아세트산 계 기질 인 β - 세크레타 제 기질 VI ( M 2465 ; 바 켐 ( Bachem ) ) 을 100 % DMSO ( D / 4121 / PB 08 ; 서모 피셔 ) 중 1 mM 스톡 으로 제조 하 였 다 . DMSO 를 기본 완충제 에 1 % ( vol . / vol . ) 의 최종 농도 까지 첨가 함 으로써 분석 완충제 를 제조 하 였 다 . β - 세크레타 제 I ( 18 . 64 μ M ; "" BACE 1 "") 및 β - 세크레타 제 II ( 4 . 65 μ M ; "" BACE 2 "") 를 벨기에 비어스 소재 의 얀센 파 마슈 티 카 ( Janssen Pharmaceutica ) 로부터 입수 하 고 ", 냉동 분취 물 ( 대략 20 μ l ) 로서 보관 하 고 , 필요 할 경우 해동 시켰 다 .