단백질 추출물 에 5 mM 의 TCEP [ Tris ( 2 - carboxyethyl ) phosphine hydrochloride ] 를 첨가 하 고 , 실온 에서 30 분 동안 반응 시켜 단백질 추출물 을 환원 시키 고 , 환원 이 완료 된 단백질 추출물 에 10 mM 의 이오 도 아세트아미드 ( iodoacetamide ) 를 첨가 한 후 , 실온 에서 30 분 동안 반응 시켜 카바 미도 메틸화 를 유도 하 였 다 . 카바 미도 메틸화 유도 가 완료 된 단백질 추출물 에 2 내지 8 M 의 우 레아 와 1 M 트리스 버퍼 및 2 mM 의 염화칼슘 을 첨가 한 후 , 5 μ g 의 트립신 을 첨가 하 여 단백질 을 가수 분해 하 고 질소 농축기 를 이용 하 여 농축 하 여 단백질 검출 용 시료 를 농축 하 였 다 .