CH 2 도메인 내 huigG 1 결합 모티프 의 아미노산 E 233 L 234 L 235 를 huigG 2 의 P 233 V 234 A 235 로 치환 하 기 위하 여 , 짧 은 섹션 을 PCR 로 재 증폭 하 여 돌연변이 를 편입 시켰 다 . 치환 및 구성 적 제한 부위 AhdI 를 포함 하 는 역방향 프라이머 huigG 1 PVA Rev 를 정 방향 프라이머 HIBF ( 표 2 ) 및 주형 pDCOrig IB 15 와 함께 사용 하 였 다 . 생성 되 는 단편 을 벡터 pCR 2 . 1 ( Invitrogen ) 에 연결 하 였 다 . 서열 확인 후 , 야생 형 서열 을 플라스미드 pDCOrig IB 15 huigG 1 의 싱글 커터 AgeI / AhdI 부위 중 으로 삽입 함 으로써 돌연변이 를 포함 하 는 섹션 으로 효과 적 으로 치환 하 였 다 ( 도 15 ) .