루시퍼 레이스 활성 분석법 : 루시퍼 레이스 를 함유 하 는 NfkB 리포터 에 융합 된 OX 40 의 세 포외 도메인 및 CD 40 의 세포내 도메인 을 함유 하 는 293 T 세포 를 제조 하 였 다 . 세포 들 을 수확 하 고 , 세정 하 고 , 페놀 레드 가 없 는 완전 배지 ( 10 ％ 소 태아 혈청 , HEPES 완충제 , 비 - 필수 아미노산 및 L - 글루타민 을 함유 하 는 DMEM ) 에 0 . 5 × 106 개 의 세포 / ㎖ 의 밀도 로 재현 탁하 였 다 . 80 ㎕ 의 세포 를 96 웰 플레이트 ( PerkinElmer , 파트 번호 6005680 ) 의 각각 의 분석 웰 내 로 플 레이팅 하 였 다 . 테스트 항체 를 각각 의 웰 에 단독 으로 또는 가교 항체 Fab ' 염소 항 - 인간 IgG ( Jackson ImmunoResearch ( West Grove , PA ) ) 의 존재 하 에 첨가 하 였 다 . 플레이트 를 하룻밤 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 100 ㎕ 의 루시퍼 레이스 ( Promega , 브라이트 ( Bright ) - glo 루시퍼 레이스 시스템 , 카탈로그 번호 E 2620 ) 를 다음 날 첨가 하 고 , 루시퍼 레이스 활성 의 양 을 섬광 카운터 ( TopCount , Packard - NXT ) 를 사용 하 여 측정 하 였 다 .