프라이머 쌍 의 설계 는 A , G , C , T 함량 비 , 프라이머 결합체 ( dimer ) 형성 방지 , 같 은 염기 서열 의 3 회 이상 반복 금지 등 여러 가지 제약 이 따른다 . 그 외 에 주형 ( template ) DNA 의 양 , 프라이머 의 농도 , dNTP 의 농도 , Mg 2 + 의 농도 , 반응 온도 , 반응 시간 등 의 조건 이 적정 해야 한다 .