실시 예 1 ) - 1 - 1 에서 조제 한 발현 벡터 도입 HEK 293 α 세포 의 배양 상청 을 제거 한 후 , pcDNA 3 . 1 - DEST - hGPRC 5 D 또는 pcDNA 3 . 1 - DEST 도입 HEK 293 α 세포 각각 에 대해 하이브리도마 배양 상청 을 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . well 중 의 세포 를 5 % FBS 함유 PBS 로 1 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 500 배 로 희석 한 Anti - Rat IgG , HRP - Linked Whole Ab Goat ( GE Healthcare Bioscience 사 ) 를 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . well 중 의 세포 를 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , OPD 발색 액 ( OPD 용해액 ( 0 . 05 M 시트르산 3 나트륨 및 0 . 1 M 인산 수소 2 나트륨 · 12 물 , pH 4 . 5 에 o - 페닐 렌 다이아 민 이 염산염 ( 와코 순 약사 ) 및 H 2 O 2 를 각각 0 . 4 mg / mL 및 0 . 6 %( v / v ) 가 되 도록 용해 ) ) 을 100 μ L / well 로 첨가 하 였 다 . 가끔 교반 하 면서 발색 반응 을 행하 고 , 1 M HCL 을 100 μ L / well 로 첨가 하 여 발색 반응 을 정지 시킨 후 , 플레이트 리더 ( ENVISION : PerkinElmer 사 ) 로 490 nm 의 흡광도 를 측정 하 였 다 . 세포막 표면 상 에 발현 하 는 인간 GPRC 5 D 에 특이 적 으로 결합 하 는 항체 를 산생 하 는 하이브리도마 를 선택 하 기 위해 , 컨트롤 인 pcDNA 3 . 1 - DEST 도입 HEK 293 α 세포 와 비교 하 여 pcDNA 3 . 1 - DEST - hGPRC 5 D 발현 벡터 도입 HEK 293 α 세포 쪽 에서 보다 높 은 흡광도 를 나타내 는 배양 상청 을 산생 하 는 하이브리도마 를 항 - 인간 GPRC 5 D 항체 산생 양성 으로서 선택 하 였 다 .