일시 적 세포 발현 은 다음 과 같이 수행 되 었 다 : 150 mm 접시 중 의 CHO 및 HEK 293 T 세포 를 25 ㎍ 의 각각 의 플라스미드 ( 즉 , 중쇄 를 함유 하 는 하나 의 플라스미드 및 경쇄 를 함유 하 는 하나 의 플라스미드 ) 로 일시 적 공동 - 형질 감염 시켰 다 . 제조자 의 지시 에 따라 DNA 를 100 ㎕ 의 리포 펙 타민 2000 ( 인비 트로겐 ) 과 혼합 하 였 다 . DNA - 지질 복합체 가 혈청 또는 항체 없이 5 시간 동안 DMEM / F 12 배지 중 의 세포 와 접촉 하 게 두 었 다 . 이러 한 배양 후 , 이틀 동안 임의 의 첨가제 없이 배지 를 Opti - MEM ( 인비 트로겐 ) 으로 발현 을 위해 변경 시켰 다 . 항체 를 함유 하 는 세포 상층 액 을 연속 적 으로 4 회 수확 하 고 후속 적 으로 배지 를 교환 하 였 다 . 맵 셀렉 트 프로테인 ( MapSelect Protein ) A 수지 ( 아머샴 바이오 사이언 시즈 17 - 5199 - 02 ) 를 이용 한 친화성 크로마토그래피 에 의해 상층 액 을 정제 하 였 다 . 항체 를 0 . 3 M 글리신 , 0 . 6 M NaCl 완충액 pH 8 중 의 단백질 A 수지 에 결합 시킨 후 , 0 . 1 M 시트 레이트 완충액 , pH 3 으로 용출 시켰 다 . 항체 를 함유 한 분획 을 1 M 트리스 완충액 pH 8 . 0 으로 즉각 중화 시켰 다 . 그런 다음 , 항체 분획 을 투석 하 고 PBS 에서 농축 하 였 다 .