원 하 는 유전자 분절 을 Geneart AG ( Regensburg , Germany ) 가 자동 화 된 유전자 합성 에 의해 합성 올리 고 뉴클레오티드 및 PCR 산물 로부터 제조 했 다 . 하나 의 제 한 엔 도 뉴클레아제 절단 자리 가 측면 에 있 는 유전자 분절 을 pGA 18 ( ampR ) 플라스미드 내 로 클로닝 했 다 . 플라스미드 DNA 를 형질 전환 된 박테리아 로부터 정제 하 고 , 농도 를 UV 분광 분석법 으로 측정 했 다 . 서브 클로닝 된 유전자 조각 의 DNA 서열 을 DNA 서열 분석 에 의해 확인 했 다 . 적당 하 고 / 거 나 필요 한 경우 , 5 '- BamHI 및 3 '- XbaI 제한 자리 를 사용 했 다 . 모든 구축물 이 진 핵 세포 에서 의 분비 를 위한 단백질 을 표적 화 하 는 리더 펩티드 를 코딩 하 는 5 '- 말단 DNA 서열 을 갖 도록 디자인 했 다 .