독립 영양 성 으로 제조 된 접종물 : Cupriavidus necator DSM 531 접종물 은 H 2 / CO 2 / O 2 재배 된 혈청병 배양액 으로부터 채취 되 었 다 . 혈청병 의 접종물 은 DSMZ 531 균주 의 경우 - 80 ° C 에서 저장 된 보존 된 0 . 5 mL 글리세롤 원액 으로부터 순서 대로 준비 되 었 다 . 재생 배양 은 살 시예 1 에 기술 된 혈청병 프로토콜 에 따라 가스 밀착 혈청병 에서 20 mL 최소 염 배지 ( MSM ) 에 0 . 5 mL 글리세롤 원액 을 첨가 하 면서 H 2 / CO 2 / O 2 가스 믹스 상 에서 시작 하 였 다 . 다음 으로 초기 혈청병 을 H 2 / CO 2 / O 2 가스 상부 공간 하 에 2 개 의 혈청병 에 1 mL 내지 20 mL 신선 한 MSM 으로 계대 배양 하 였 다 . 이 들 혈청병 은 30 ° C , 250 RPM 에서 배양 되 었 다 . 가스 상 에서 글리세롤 원액 으로부터 의 초기 재생 은 2 일 이 걸렸 고 , 계대 배양 은 하루 가 더 걸려 성장 하 였 다 . 두 개 의 혈청병 배 양물 은 생물 반응기 를 위한 접종물 로서 제공 되 었 다 . 접종물 의 광학 밀도 ( OD ) 뿐 만 아니 라 DNA 분석 을 위한 시료 를 가져왔 다 . 가스 배양 된 접종물 은 OD ~ 1 을 가졌 다 . 발효기 는 접종 되 어 초기 OD ~ 0 . 1 을 얻 었 다 . 다른 말 로 하 면 , 혈청병 배양액 은 1 : 10 의 비율 로 생물 반응기 에서 희석 되 었 다 . 접종물 은 60 mL 주사기 를 사용 하 여 혈청병 부터 생물 반응기 로 이동 되 었 다 . 접종 이후 , T 0 OD 를 측정 하 였 다 . 일반 적 으로 모든 OD 측정 은 Beckman Coulter DU 720 UV / Vis 분광 광도계 로 수행 되 었 다 .