" 용어 "" 기질 로서 합성 펩타이드 S - 2288 을 사용 하 는 인간 트립 타제 베타 효소 적 검정 으로 결정시 "" 는 ", 청구 항 의 맥락 에서 , 억제 활성 이 실시 예 1 ( A ) ( viii ) ( a ) 에서 기재 된 검정 에 따라 측정 되 는 것 을 의미 한다 . 간단히 , 재조합 인간 트립 타제 베타 1 사량 체 활성 효소 는 TNH 완충액 ( 200 mM Tris , 150 mM NaCl , 0 . 1 mg / mL 헤파린 , 0 . 01 % TRITON ™ X - 100 , pH 8 . 0 ) 내 0 . 75 nM 로 희석 되 고 , 384 - 웰 플레이트 에서 ( PBS 에서 희석 된 ) 항 - 트립 타제 항체 와 1 : 1 조합 된다 . 플레이트 는 온화 한 진탕 과 함께 주위 온도 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 된다 . 비색계 기질 S - 2288 ( Chromogenix , 부품 번호 82 - 0852 - 39 ) , 또는 동등 한 기질 은 TNH 완충액 내 1200 μ M 로 희석 되 고 플레이트 에 첨가 된다 . 최종 인 - 웰 농도 는 400 μ M S - 2288 , 0 . 25 nM 재조합 인간 트립 타제 베타 1 사량 체 , 66 μ g / mL 헤파린 , 및 0 . 10 내지 222 nM 항 - 트립 타제 항체 이 다 . 플레이트 는 온화 한 진탕 과 함께 주위 온도 에서 40 분 동안 인 큐 베이 션 되 고 그 다음 A 405 에서 판독 된다 . 항 - 트립 타제 항체 의 IC 50 은 그 들 의 각각 의 곡선 의 4 - 파라미터 적합 으로부터 결정 된다 .