건강 한 인간 공 여자 로부터 의 CD 4 + 및 CD 8 + T 세포 내 로 CART 19 - 발현 렌 티 바이러스 를 형질 도입 함 으로써 CD 19 - 유도 된 CAR - T 세포 ( CART 19 ) 를 생성 하 였 다 . CART 19 구축물 은 CD 19 - 인식 도메인 ( FMC 63 모노클 로 날 항체 로부터 유래 된 단일 쇄 가변 단편 ) , CD 28 로부터 유래 된 공동 자극 성 도메인 , 및 CD 3 제타 도메인 을 함유 한다 . CART 19 의 세포독성 을 유동 세포 계수법 - 기반 검정 에 의해 평가 하 였 다 . 셀 트레이스 바이올렛 ( CellTrace Violet ) 염료 로 염색 된 라지 - 플 럭 - GFP 세포 가 표적 세포 로서 제공 되 었 다 . CART 19 구축물 로 형질 도입 되 지 않 은 T 세포 를 , 세포독성 검정 을 위한 음성 대 조군 으로서 사용 하 였 다 . 이펙터 ( E ) 및 종양 표적 ( T ) 세포 를 표시 된 E / T 비 ( 10 : 1 , 3 : 1 , 0 : 1 ) 하 에 , CTS 옵 트 마 이 저 ( OpTmizer ) - 기반 무 혈청 배지 에서 웰 당 200 μ l 의 총 용적 으로 1 x 104 개 의 표적 세포 와 공동 배양 하 였 다 . 인 큐 베이 션 20 시간 후 , 세포 를 프로 피 듐 아이 오다 이드 에 대해 염색 하 고 어 튠 NxT 유동 세포 측정기 ( 라이프 테크 놀 로지스 ) 에 의해 분석 하 였 다 . 살 아 있 는 표적 세포 를 프로 피 듐 아이 오다 이드 - 음성 및 셀 트레이스 바이올렛 - 양성 으로서 게이팅 하 였 다 . 세포독성 은 ( 1 -( CART 19 군 내 의 살 아 있 는 표적 세포 분획 ) / ( 음성 대 조군 내 의 살 아 있 는 표적 세포 분획 ) ) x 100 % 로서 계산 되 었 다 .