구체 적 으로 , 상기 면역 항원 으로 사용 된 각각 의 사 균 된 균주 를 초음파 처리 하 여 분쇄 하 고 , 상기 분쇄 물 을 흡착 용 완충 용액 ( 1 . 59 g / L sodium carbonate , 2 . 93 g / L sodium bicarbonate , 0 . 20 g / L sodium azide , pH 9 . 6 ) 으로 희석 하 여 효소 면역 분석 용 마이크 로 플레이트 에 가하 고 , 4 ℃ 에서 16 시간 반응 시켜서 , 상기 항원 을 플레이트 에 흡착 시켰 다 . 상기 항원 이 흡착 된 플레이트 에 상기 수득 한 난황 분획 을 가하 고 37 ℃ 에서 1 시간 동안 반응 시킨 후 , PBS 로 3 회 세척 하 였 다 . 이 어 , 페록시다아제 가 포함 되 어 있 는 닭 의 면역 항체 ( IgG ) 에 대한 항체 ( anti - chicken IgG HRP labeled ) ( BioRad Co . , Ltd . , USA ) 인 2 차 항체 를 가하 고 37 ℃ 에서 1 시간 동안 반응 시킨 다음 , 다시 PBS 로 3 회 세척 하 였 다 . 그런 다음 , 발색 기질 인 TMB 를 가하 고 , 3 분 동안 반응 시킨 후 , 0 . 25 몰 황산 을 가하 여 반응 을 정지 시키 고 , 분광 광도계 를 이용 하 여 450 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 , 각 균체 에 대한 항체 가 형성 된 난황 을 선별 하 였 다 .