엄격 한 하이브리드 화 조건 이 라는 어구 는 프로브 가 전형 적 으로 는 핵산 의 복합 혼합물 중 에서 다른 서열 에 는 하이브리드 화 하 지 않 지만 , 그 의 표적 서브 서열 에 는 하이브리드 화 하 게 되 는 상태 의 조건 을 의미 한다 . 엄격 한 조건 은 서열 에 의존 하 며 , 이 는 다른 환경 하 에서 는 달라지 게 될 것 이 다 . 보다 장쇄 인 서열 은 보다 고온 인 온도 에서 특이 적 으로 하이브리드 화 한다 . 핵산 의 하이브리드 화 에 관한 광범위 한 가이드 는 [ Tijssen , Techniques in Biochemistry and Molecular Biology - Hybridization with Nucleic Probes , " "" Overview of principles of hybridization and the 전략 법 of nucleic acid assays "" ( 1993 ) ] 에서 살펴볼 수 있 다 . 일반 적 으로 ", 엄격 한 조건 은 정의 된 이온 강도 , pH 에서 특정 서열 에 대한 열 적 융점 ( Tm : thermal melting point ) 보다 약 5 - 10 ℃ 정도 낮 은 온도 가 되 도록 선택 된다 . Tm 은 ( 표적 서열 은 과량 으로 존재 하 는 바 , Tm 에서 프로브 의 50 % 가 평형 상태 로 점유 되 기 때문 에 ) 표적 에 상보 적 인 프로브 중 50 % 가 평형 상태 로 표적 서열 에 하이브리드 화 하 게 되 는 ( 정의 된 이온 강도 , pH 및 핵산 농도 하의 ) 온도 이 다 . 엄격 한 조건 은 또한 , 탈 안정 화제 , 예컨대 , 포름 아미드 를 첨가 함 으로써 달성 될 수 있 다 . 선택 적 또는 특이 적 하이브리드 화 를 위해 , 양 의 신호 는 배경 의 2 배 이상 , 바람직 하 게 는 배경 하이브리드 화 의 10 배 인 것 이 다 . 예 시 적 인 엄격 한 하이브리드 화 조건 은 하 기 와 같 다 : 50 %> 포름 아미드 , 5 x SSC , 및 1 % SDS , 42 ℃ 에서 인 큐 베이 션 , 또는 5 x SSC , 1 % SDS , 65 ℃ 에서 인 큐 베이 션 , 0 . 2 x SSC 중 에서 , 및 65 ℃ 에서 0 . 1 % SDS 중 에서 세 척 .