10 % 울트라 로우 ( Ultra Low ) IgG FCS ( 우태 혈청 , Gibco ) , 2 mM L - 글루타민 ( Gibco ) , 및 250 ㎍/ ml 게 네 티 신 ( Geneticin ) ( Gibco ) 이 보충 된 DMEM ( 둘 베코 변형 이 글 배지 : Dulbecco ' s modified Eagle ' s medium , Gibco ) 에서 배양 되 는 부착 성장 하 는 HEK 293 - EBNA 세포 ( 엡스테인 - 바르 - 바이러스 ( Epstein - Barr - Virus ) 핵 항원 을 발현 하 는 인간 배아 신장 세포주 293 ; 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 ( American type culture collection ) 수탁 번호 ATCC # CRL - 10852 , Lot . 959 218 ) 에서 각각 의 발현 플라스미드 ( 예 를 들 어 , 중쇄 및 개질 된 중쇄 뿐 아니 라 , 상응 하 는 경쇄 및 개질 된 경쇄 를 코딩 하 는 ) 의 일시 적 공동 - 트 렌 스펙 션 에 의해 이중 특이 적 항체 를 발현 시켰 다 . 트랜스펙션 을 위해 , FuGENE ™ 6 트랜스펙션 시약 ( Roche Molecular Biochemicals ) 을 FuGENE ™ 시약 ( ㎕) 대 DNA ( ㎍) 를 4 : 1 ( 3 : 1 내지 6 : 1 의 범위 ) 의 비율 로 사용 하 였 다 . ( 개질 형 및 야생형 ) 경쇄 및 중쇄 코딩 플라스미드 를 각각 1 : 2 내지 2 : 1 의 범위 의 1 : 1 ( 등 몰 ) 의 몰 비 로 사용 하 여 각각 의 플라스미드 로부터 단백질 을 발현 시켰 다 . 제 3 일 에 세포 에 L - 글루타민 4 mM , 글루코오스 [ Sigma ] 및 NAA [ Gibco ] 를 공급 하 였 다 . 트랜스펙션 후 제 5 일 내지 제 11 일 로부터 원심 분리 에 의해 이중 특이 적 항체 를 함유 하 는 세포 배양 상청 액 을 수집 하 고 , - 20 ℃ 에 저장 하 였 다 . 예 를 들 어 , HEK 293 세포 에서 의 인간 면역 글로불린 의 재조합 발현 과 관련 된 일반 적 인 정보 는 [ Meissner , P . et al . , Biotechnol . Bioeng . 75 ( 2001 ) 197 - 203 ] 에 기재 되 어 있 다 .