실시 예 1 ) - 3 의 Cell - ELISA 로 양성 으로 판정 된 하이브리도마 가 산생 하 는 항체 의 인간 GPRC 5 D 에 대한 결합 특이 성 을 플로 사이토 메트리 법 에 의해 추가 로 확인 하 였 다 . 실시 예 1 ) - 4 - 1 에서 조제 한 HEK 293 T 세포 현탁액 을 100 μ L / well 로 96 - well U 바닥 마이크 로 플레이트 에 파종 하 고 , 원심 후 상청 을 제거 하 였 다 . pcDNA 3 . 1 - DEST - hGPRC 5 D 도입 HEK 293 T 세포 및 pcDNA 3 . 1 - DEST 도입 HEK 293 T 세포 각각 에 대해 하이브리도마 배양 상청 을 첨가 하 여 현 탁 시키 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 1 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 100 배 로 희석 한 PE Goat Anti - Rat Ab ( BD 사 ) 를 첨가 하 여 현 탁 시키 고 , 4 ℃ 에서 30 분 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 에 재현 탁 시키 고 , 플로 사이토 미터 ( FACSCanto ( 상표 ) II ; BD 사 ) 로 검출 을 행하 였 다 . 데이터 해석 은 Flowjo ( Treestar 사 ) 로 행하 였 다 . 세포 획 분 의 PE 형광 강도 의 히스토그램 을 작성 하 였 다 . 컨트롤 인 pcDNA 3 . 1 - DEST 도입 HEK 293 T 세포 의 형광 강도 히스토그램 에 대해 pcDNA 3 . 1 - DEST - hGPRC 5 D 도입 HEK 293 T 세포 의 히스토그램 이 강한 형광 강도 측 으로 시프트 하 고 있 는 샘플 을 산생 하 는 하이브리도마 를 항 - 인간 GPRC 5 D 항체 산생 하이브리도마 로서 취득 하 였 다 .