가용성 hNKG 2 D 절편 ( SEQ ID NO : 2 의 잔기 81 - 216 에 대응 ) 및 hzON 72 Fab ( SEQ ID NO : 70 및 SEQ ID NO : 71 , 각각 중쇄 절편 및 경쇄 ) 을 약간 의 몰 과량 의 hNKG 2 D 와 혼합 하 고 복합체 를 겔 - 여과 컬럼 에서 정제 하 였 다 . 그 다음 복합체 를 약 7 . 5 mg / ml 으로 농축 하 였 다 . 결정 을 현적 법 ( hanging drop - technique ) 으로 1 M LiSO 4 및 100 mM MES 버퍼 에서 pH 6 . 5 로 성장 시켰 다 . 결정 을 75 % 침전 용액 및 25 % 글리세롤 을 함유 하 는 저온 - 용액 으로 이동 시켰 다 . 결정 을 약 15 초 동안 잠기 게 하 였 다 . 그 다음 결정 을 액체 N 2 에서 급속 냉동 시키 고 데 이타 수집 동안 극저온 N 2 가스 흐름 에 의해 100 K 에서 유지 하 였 다 . 3 . 15 Å 해상도 에 대한 결정학 적 데 이타 를 MAX - lab , Lund , Sweden 에서 빔 - 라인 BL 911 - 5 ( 2 ) 을 사용 하 여 수집 하 였 다 . 공간군 결정 , 통합 및 데이터 의 스케일링 은 XDS 소프트웨어 패키지 ( 3 ) 에서 이루 어 졌 다 . 셀 파라미터 는 각각 65 . 7 , 93 . 3 , 128 . 9 Å , 90 °, 93 . 83 ° 및 90 ° 이 되 도록 결정 하 였 다 . 공간군 은 비대칭 유닛 에서 하나 의 NKG 2 D 다 이 머 및 두 개 의 hzON 72 Fab 분자 에 대한 공간 을 갖 는 P 21 가 되 는 것 으로 결정 되 었 다 . CCP 4 스위트 ( 7 ) 의 MOLREP ( 4 ) 소프트웨어 프로그램 및 PDB - 기탁 된 ( 8 ) 구조 1 UJ 3 ( 15 ) 의 Fab 분자 , 및 기탁 된 1 MPU 구조 ( 1 O ) 의 hNKG 2 D 다 이 머 를 사용 하 는 분자 교체 를 구조 결정 을 위해 사용 하 였 다 . Fab 분자 를 먼저 상이 한 엘보 우 각 으로 회전 기능 실행 에서 테스트 하 였 고 , 가장 높 은 점수 를 갖 는 Fab 를 선택 하 였 다 . 분자 교체 계산 에서 다 이 머 로서 NKG 2 D 를 조사 하 였 다 . 두 개 의 hNKG 2 D 모노머 사이 및 두 개 의 Fab 분자 사이 의 비 - 결정학 적 억제 를 사용 하 는 결정학 적 개선 이 CCP 4 프로그램 스위트 ( 7 ) 의 REFMAC 5 소프트웨어 프로그램 ( 11 ) 에서 이루 어 졌 다 . 결정학 적 개선 에 이어서 전자 밀도 맵 의 컴퓨터 그래픽 검사 , 모델 보정 및 Coot 소프트웨어 프로그램 ( 12 ) 을 사용 하 는 빌딩 을 행하 였 다 . 모델 에 이루어질 수 있 는 더 이상 의 현저 한 개선 이 없 을 때 까지 이 과정 이 순환 되 었 다 . 모든 데이터 에 대한 최종 R - 및 R - 프리 는 각각 0 . 216 및 0 . 268 이 었 고 , 모델 은 0 . 012 Å 의 이상 적 결합 길이 로부터 의 평균 제곱근 편차 ( RMSD ) 를 나타내 었 다 ( 표 13 ) .