원형질체 트랜스펙션 의 경우 , 10 ㎍ 의 rAPOBEC 1 - Cas 9 - UGI - NLS 발현 플라스미드 ( 또는 니카 아제 변이체 ) 또는 TadA - Cas 9 D 10 A - NLS 발현 플라스미드 와 함께 20 ㎍ 의 sgRNA 발현 플라스미드 KG 10075 를 500 μ L ( 500000 원형질체 ) 의 원형질체 서스펜션 및 500 μ L 의 PEG 용액 ( 400 g / l 폴리 ( 에틸렌 글리콜 ) 4000 , Sigma - Aldrich # 81240 과 혼합 하 고 ; 0 . 1 M Ca ( NO 3 ) 2 ) 을 첨가 하 고 , 트랜스펙션 을 20 분 동안 실온 에서 수행 하 였 다 . 다른 실험 에서 , 5 ㎍ 의 rAPOBEC 1 - Cas 9 D 10 A - UGI - NLS ( KG 10098 ) 및 5 ㎍ 의 TadA - Cas 9 D 10 A - NLS ( KG 10436 ) 를 20 ㎍ 의 sgRNA 발현 플라스미드 KG 10075 와 함께 혼합 하 고 , 상기 기재 된 바 와 같이 토마토 원형질체 에 트랜스펙션 시켰 다 . 트랜스펙션 으로부터 플라스미드 중 하나 또는 둘 모두 를 생략 함 으로써 컨트롤 샘플 을 또한 제조 하 였 다 . 정제 된 rAPOBEC 1 - Cas 9 - UGI - NLS 단백질 및 LIN 5 sgRNA 를 사용 하 는 경우 , 1 x PBS 버퍼 에 재현 탁 된 8 pmol 의 Cas 9 단백질 및 150 pmol 의 LIN 5 sgRNA 를 ( 500000 원형질체 ) 의 원형질체 현탁액 및 500 μ L 의 PEG 용액 ( 400 g / l 폴리 ( 에틸렌 글리콜 ) 4000 , Sigma - Aldrich # 81240 과 혼합 하 고 ; 0 . 1 M Ca ( NO 3 ) 2 ) 를 첨가 하 고 , 트랜스펙션 을 실온 에서 20 분 동안 수행 하 였 다 .