본 실험 은 뮤 라인 멜로 노마 ( murine melanoma ) ( B - 16 F 10 ) 세포 ( 한국 세포주 은행 ) 를 10 % 의 FBS ( fetal bovine serum ) 가 함유 된 DMEM 배지 로 6 - 웰 플레이트 에 웰 당 1 × 105 개 로 접종 한 후 , 5 % CO 2 및 37 ℃ 하 에서 세포 가 웰 바닥 에 약 80 % 이상 부착 될 때 까지 배양 하 였 다 . 배양 후 배지 를 제거 하 고 시료 를 적당 농도 로 희석 된 배지 에 교체 하 고 , 5 % CO 2 , 37 ℃ 하 에서 3 일 간 배양 하 였 다 . 바르비투르산 의 농도 범위 는 세포독성 이 없 는 1 ppm , 5 ppm 및 10 ppm 으로 결정 하 였 다 . 배지 를 제거 한 세포 를 PBS ( phosphate buffer saline ) 로 세척 하 고 , 이것 을 트립신 으로 처리 하 여 세포 를 회수 하 였 다 . 회수 된 세포 는 헤 마토 사이토 미터 ( hematocytometer , Tiefe Depth Profondeur 0 . 100 mm , Paul Marienfeld GmbH & Co . KG , 독일 ) 를 이용 하 여 세포 수 를 측정 한 후 5 , 000 내지 10 , 000 rpm 으로 10 분 간 원심 분리 한 다음 상층 액 을 제거 하 여 펠릿 을 얻 었 다 . 이 세포 펠릿 을 60 ℃ 에서 건조 한 후 , 10 % DMSO 가 함유 된 1 M 수산화 나트륨 액 100 ㎕ 를 넣 어 60 ℃ 항온조 에서 세포 내 멜라닌 을 얻 었 다 . 이 액 을 가지 고 마이크 로 플레이트 리더 ( microplate reader ) ( Bio - Tek ELx 8081 U , 미국 ) 로 490 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 세포 일정 수당 멜라닌 양 을 구하 였 다 . 그 결과 를 하 기 표 1 에 나타내 었 다 .