본 발명 에 따른 SpCas 9 변이체 는 처음 에 그 의 REC 1 - II 도메인 의 무작위 돌연변이 유발 에 의해 얻 어 졌으며 , 2 개 의 조작 된 게놈 타 겟 에 대한 온 - 및 오프 - 타 겟 활성 을 동시 에 평가 하 는 것 을 허용 하 는 효모 - 기반 검정 에 의해 증가 된 온 / 오프 비 를 갖 는 히트 의 확인 을 위해 스크리닝 되 었 다 . 포유동물 세포 에서 의 추가 의 검증 후 에 , 본 발명 에 따른 Cas 9 변이체 를 생성 하 였 다 . 놀랍 게 도 , 본 발명 에 따른 변형 된 SpCas 9 는 야생 형 SpCas 9 와 비교 할 경우 에 유의 하 게 감소 된 오프 - 타 겟 활성 을 제시 하 였으며 , 이전 에 보 고 된 합리 적 으로 설계 된 변이체 로 의 병렬 분석 은 본 발명 의 SpCas 9 변이체 의 충실 도 의 유의 한 개선 을 입증 하 였 다 . 추가 적 으로 , 본 발명 에 따른 및 전사 활성 화 도메인 ( VP 64 ) 과 융합 된 추가 적 인 D 10 A 및 H 840 A 돌연변이 를 갖 는 변형 된 SpCas 9 는 D 10 A 및 H 840 A 돌연변이 를 함유 하 는 야생 형 Cas 9 변이체 와 비교 할 경우 에 유의 하 게 감소 된 오프 - 타 겟 활성 을 제시 하 였 다 .