본 발명 은 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 를 제조 하 기 위하 여 , 크로스트 리디 움 써 모셀 럼 균주 로부터 유래 한 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 유전자 를 먼저 분리 하 였 다 . 구체 적 으로 유전자 염기 서열 과 아미노산 서열 이 이미 특정 되 어 있 는 크로스트 리디 움 써 모셀 럼 ZP 00503831 균주 를 선별 하 고 , 이 로부터 유래 한 서열 번호 1 의 염기 서열 을 포함 하 는 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 유전자 의 서열 [ 서열 목록 참조 ; 진 뱅크 수탁 번호 CP 00058 ( Genebank Accession No . CP 00058 ) ] 을 기초 로 하 여 서열 번호 2 및 서열 번호 3 의 염기 서열 을 각각 포함 하 는 프라이 머들 ( primers ) 을 고안 제작 하 였 다 . 그 다음 이 프라이머 를 이용한 중합효소 연쇄 반응 ( PCR ) 을 실시 하 여 해당 유전자 의 염기 서열 을 증폭 하 였 다 . 대량 으로 얻 은 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 유전자 는 제한 효소 NcoI 및 PstI 을 사용 하 여 플라스미드 벡터 pBluescript Ⅱ SK ( +) ( Stratagene 사 제품 ) 에 삽입 하 였 다 . 그 다음 상기 재조합 벡터 를 제한 효소 NcoI 및 PstI 을 처리 하 여 상기 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 유전자 를 포함 하 는 단편 을 회수 하 고 클 레노 효소 ( Klenow fragment ; Takara 사 제품 ) 를 처리 하 여 제한 효소 NcoI 인식 부위 를 제거 하 였 다 . 또한 , 상기 유전자 단편 은 다시 발현 벡터 pQE 30 ( Qiagen 사 제품 ) 의 제한 효소 SmaI 및 PstI 부위 에 삽입 하 여 재조합 발현 벡터 pQE 30 / 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 를 제작 하 였 다 . 상기 와 같이 얻 은 재조합 발현 벡터 는 통상 적 인 형질전환 방법 에 의하 여 대장균 BL 21 ( DE 3 ) 균주 에 형질전환 하 였 다 . 또한 , 상기 형질전환 된 미생물 은 20 % 글리세린 ( glycerine ) 용액 을 첨가 하 여 알로스 의 생산 을 위한 배양 을 실시 하 기 전 에 냉동 보관 하 였 다 . 상기 재조합 대장균 은 E . coli BL 21 ( DE 3 ) pQE 30 / 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 균주 로 명명 하 였 다 .