C 57 BL / 6 mice 의 피부 내 로 프로타민 으로 착화 된 NY - ESO - 1 - 암호 화 mRNA 를 예방 접종 하 였 다 ( 14 일 동안 5 번 ) . 대 조군 생쥐 는 버퍼 로 처리 하 였 다 . 예 방접 종 한 쥐 와 대 조군 쥐 에서 NY - ESO - 1 - 특이 적 항체 들 의 수준 은 마지막 접종 후 8 일 뒤 에 ELISA 에 의해 분석 되 었 고 : 96 웰 ELISA 플레이트 ( Nunc ) 는 4 ℃ 에서 16 시간 동안 웰 당 100 ㎕ 로 10 ㎍/ ml 재조합 NY - ESO - 1 단백질 을 덮 었 다 . 플레이트 는 세 척 버퍼 ( PBS , 0 . 05 % Tween - 20 ) 로 두 번 세척 하 였 다 . 비 특이 적 결합 을 막 기 위하 여 , 플레이트 는 그 다음 블 라 킹 버퍼 ( blocking buffer ( PBS , 0 . 05 % Tween - 20 , 1 % BSA ) ) 로 2 시간 동안 37 ℃ 에서 배양 하 였 다 . 블 라 킹 이후 에 , 웰 당 100 ㎕ 의 순차 적 으로 희석 된 쥐 혈청 이 추가 되 었 고 실온 에서 4 시간 동안 배양 되 었 다 . 플레이트 는 그 다음 세척 버퍼 로 세 번 세척 되 었 다 . 다음 으로 , 웰 당 100 ㎕ 의 블 라킹 버퍼 에서 1 : 600 으로 희석 된 비오틴 결합 된 rat anti - mouse IgG 2 a [ b ] 검출 항체 ( BD Biosciences ) 는 실온 에서 1 시간 동안 결합 되 도록 하 였 다 . 플레이트 는 다시 세 척 버퍼 로 세 번 세척 되 었 고 , 웰 당 100 ㎕ 의 겨자무 과산화 효소 - 결합 된 스 트 렙 트 아 비딘 ( horseradish peroxidase - coupled streptavidin ) 으로 실온 에서 30 분 동안 배양 하 였 다 . 세 척 버퍼 로 4 번 세 척 한 후 에 , 웰 당 100 ㎕ 의 3 , 3 ', 5 , 5 '- 테트라메틸 벤지딘 ( tetramethylbenzidine ) ( Thermo Scientific ) 이 추가 되 었 다 . 색깔 이 변하 고 웰 당 100 ㎕ 의 20 % 황산 이 추가 되 었 다 . 흡광도 는 405 nm 에서 측정 하 였 다 .