다음 으로 , 클론 CH 3 C . 3 을 테스트 클론 으로 사용 하 여 클론 이 TfR - 발현 세포 에서 내재 화 될 수 있 는지 시험 하 였 다 . 흡착 HEK 293 세포 는 96 - 웰 플레이트 에서 약 80 % 합류 되 도록 성장 되 었 고 , 배지 를 제거 하 고 , 샘플 은 1 μ M 농도 로 추가 되 었 다 : 클론 CH 3 C . 3 , 항 - TfR 기준 양성 대 조군 항체 ( Ab 204 ) , 항 - BACE 1 기준 음성 대 조군 항체 ( Ab 107 ) , 및 인간 IgG 동소체 대 조군 ( Jackson Immunoresearch 에서 구함 ) . 이 들 세포 는 37 ℃ 및 8 % CO 2 농도 에서 30 분 간 항온 처리 되 었 고 , 그 다음 세척 되 고 , 0 . 1 % Triton ™ X - 100 로 투과 화 되 고 , 항 - 인간 - IgG - Alexa Fluor ® 488 제 2 항체 로 착색 되 었 다 . 추가 세척 후 , 세포 를 고함 량 형광 현미경 ( 즉 , Opera Phenix ™ 시스템 ) 하 에서 이미지 화 하 고 , 세포 당 펀 타 ( puncta ) 의 수 를 정량 화 하 였 다 . 1 μ M 에서 클론 CH 3 C . 3 은 양성 항 - TfR 대 조군 과 유사 한 내재 화 경향 을 보였으며 , 한편 음성 대 조군 은 내재 화 를 나타내 지 않 았 다 .