본 발명 에서 사용 하 고자 하 는 E . coli 및 C . glutamicum 균주 의 MANT 대사 에 대해 아직 까지 충분 한 연구 가 진행 되 지 않 아 , 식물 의 MANT 생합성 메커니즘 을 기초 로 연구 를 시작 하 였 다 . 식물 에 는 두 가지 상이 한 효소 인 anthraniloyl - CoA : methanol acyltransferase 와 SAM - dependent methyltransferase 가 안 트 라 닐 산염 ( anthranilate ) 으로 부 터 의 MANT 을 생합 성 에 관여 하 는 것 으로 보 고 되 어 있 다 ( 도 3 A ) . 두 경로 모두 식물 의 L - tryptophan ( L - TRP ) 생합성 경로 에서 동일 한 전구체 대 사물 ANT 를 공유 한다 . 본 발명 은 MANT 생합 성 을 위한 대사 경로 설계 에서 다음 과 같 은 이유 로 anthraniloyl - CoA : methanol acyltransferase 보다 는 aamt 1 에 의해 암호 화 된 SAM - dependent methyltransferase 를 선택 하 였 다 . 첫째 , 안 트 라 닐 산염 ( anthranilate ) 에서 anthraniloyl - CoA : methanol acyltransferase 는 MANT 생산 을 위하 여 두 단계 ( CoA 활성 화 및 아실 전달 ) 가 필요 하 지만 SAM - dependent methyltransferase 경로 의 경우 ANT 에서 MANT 로 의 단일 단계 반응 만 필요 하 다 . 둘째 , anthraniloyl - CoA : methanol acyltransferase 기반 의 MANT 생산 을 위해 , 메틸 그룹 을 ANT 에 전달 하 여 MANT 을 형성 하 기 위해서 는 메탄올 이 보조 기질 로서 필요 하 다 . 그러나 E . coli 는 자연 적 으로 메탄올 을 생산 할 수 없 기 때문 에 외부 로부터 메탄올 보충 이 필요 하 고 전체 미생물 생산 시스템 을 복잡 하 게 만든 다 . 따라서 본 발명 에서 는 후자 의 경로 가 독성 이 있 는 메탄올 을 필요 로 하 지 않 기 때문 에 후자 의 경로 에 대한 연구 를 진행 하 였 다 . MANT 생합 성 을 위해 SAM 의존 적 anthranilic acid methyltransferase 는 옥수수 ( Maize ) 에서 유래 한 anthranilic acid methyltransferase 1 ( AAMT 1 , aamt 1 ) 효소 를 이용 하 고자 하 였 다 .