일 실시 형태 에서 , 본 발명 은 듀플렉스 핵산 의 동일 한 또는 상이 한 가닥 상 에서 25 , 000 개 미만 , 20 , 000 개 미만 , 15 , 000 개 미만 , 14 , 000 개 미만 , 13 , 000 개 미만 , 12 , 000 개 미만 , 11 , 000 개 미만 , 10 , 000 개 미만 , 9 , 000 개 미만 , 8 , 000 개 미만 , 7 , 000 개 미만 , 6 , 000 개 미만 , 5 , 000 개 미만 , 4 , 000 개 미만 , 3 , 000 개 미만 , 2 , 000 개 미만 , 1 , 000 개 미만 , 900 개 미만 , 800 개 미만 , 700 개 미만 , 600 개 미만 , 500 개 미만 , 400 개 미만 , 300 개 미만 , 200 개 미만 , 100 개 미만 , 90 개 미만 , 80 개 미만 , 70 개 미만 , 60 개 미만 , 50 개 미만 , 40 개 미만 또는 30 개 미만 의 뉴클레오타이드 가 이격 되 어 배치 된 2 개 의 gRNA 결합 부위 사이 에 배치 된 핵산 을 절제 하 는 ( 예 를 들 어 결실 시키 는 ) 방법 을 제공 한다 . 일 실시 형태 에서 , 이러 한 방법 은 각각 의 gRNA 결합 부위 와 연관 된 PAM 부위 사이 에 배치 된 뉴클레오타이드 중 50 % 초과 , 60 % 초과 , 70 % 초과 , 80 % 초과 , 85 % 초과 , 86 % 초과 , 87 % 초과 , 88 % 초과 , 89 % 초과 , 90 % 초과 , 91 % 초과 , 92 % 초과 , 93 % 초과 , 94 % 초과 , 95 % 초과 , 96 % 초과 , 97 % 초과 , 98 % 초과 , 99 % 초과 또는 100 % 의 결실 을 제공 한다 . 실시 형태 에서 , 이러 한 결실 은 각각 의 gRNA 결합 부위 와 연관 된 하나 이상 의 PAM 부위 내 에 하나 이상 의 뉴클레오타이드 를 추가 로 포함 한다 . 실시 형태 에서 , 이러 한 결실 은 또한 , 각각 의 gRNA 결합 부위 와 연관 된 하나 이상 의 PAM 부위 사이 의 영역 의 외부 에 하나 이상 의 뉴클레오타이드 를 포함 한다 .