시판 인간 PBMC ( Cellular Technology Limited 사 ) 를 5 % FBS 함유 PBS 로 적당 한 농도 로 조제 하 고 , LIVE / DEAD Fixable Near - IR Dead Cell Stain Kit ( Thermo Fisher Scientific 사 ) 와 항 CD 19 항체 ( Beckman Coulter 사 ) 를 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 30 분 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 1 × 106 세포 / mL 의 농도 로 조제 하 고 , 100 μ L / well 로 96 - well U 바닥 마이크 로 플레이트 에 파종 하 고 , 원심 후 상청 을 제거 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 희석 한 , 실시 예 14 에서 조제 한 Fc 부착 항 - GPRC 5 D - 항 - CD 3 이중 특이 성 분자 를 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 60 분 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 100 배 희석 한 R - Phycoerythrin AffiniPure F ( ab ') 2 Fragment Goat Anti - Human IgG , Fc γ Fragment Specific ( Jackson ImmunoResearch 사 ) 을 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 재현 탁 시키 고 , 플로 사이토 미터 ( FACSCanto ( 상표 ) II ) 로 검출 을 행하 였 다 . 데이터 해석 은 Flowjo 로 행하 고 , 사 세포 를 제거 한 획 분 의 PE 형광 강도 의 히스토그램 을 작성 하 여 , 평균 형광 강도 ( MFI ) 를 산출 하 였 다 . 그 결과 , Fc 부착 항 - GPRC 5 D - 항 - CD 3 이중 특이 성 분자 는 인간 CD 3 발현 세포 에 결합 하 는 것 이 나타났 다 ( 도 250 ) .