먼저 , 배양 된 Murine B 16 F 10 melanoma 세포 를 6 - 웰 플레이트 ( 6 - well plate ) 에 웰 당 5 X 104 cells / mL 로 분주 한 후 , 24 시간 배양 하 였 다 . D - phosphate buffered saline ( D - PBS ) 으로 세척 한 다음 1 μ M α - MSH 를 포함 하 는 배지 로 교환 후 , 각각 추출물 을 농도 별 로 첨가 하 여 3 일 간 배양 하 였 다 . 3 일 동안 배양 후 배지 를 제거 하 고 D - PBS buffer 로 세척 한 후 , 트립신 으로 처리 하 여 세포 를 회수 하 였 다 . 회수 된 세포 는 1 M NaOH 0 . 3 mL 을 참가 후 , 55 ℃ 에서 2 시간 방치 하 여 세포 내 의 멜라닌 을 얻 었 다 . 이 를 96 - 웰 플레이트 ( 96 - well plate ) 로 옮긴 후 ELISA reader 를 이용 하 여 492 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 시료 를 처리 하 지 않 은 세포 배양액 의 흡광도 를 대 조군 100 % 로 하 였으며 , 실험 은 각각 3 회 씩 수행 하 여 평균값 ± 표준편차 로 나타내 었 다 .