구체 적 으로 , IL - 12 를 발현 하 는 Ad E 1 셔틀 벡터 를 구축 하 기 위하 여 , pCA 14 / IL 12 로부터 마우스 IL - 12 유전자 를 잘라 내 고 , pXC 1 RdB E 1 셔틀 벡터 에 서브 클로닝 하 여 , pXC 1 RdB / IL 12 E 1 셔틀 벡터 를 제작 하 였 다 또한 , shVEGF 발현 E 3 셔틀 벡터 를 구축 하 기 위하 여 , 골수 - 유래 활성 수지상 세포 로부터 얻 은 전체 RNA 를 이용 하 여 , 전장 ( full - length ) 마우스 shVEGF 상보 적 DNA 를 RT - PCR 로 클로닝 하 였 다 . shVEGF 상보 적 DNA ( 53 - 982 nucleotides of National Center for Biotechnology Information L 15435 ) 는 다음 의 프라이머 세트 를 이용 하 여 제작 하 였 다 : sense ( 5 '- g a t c c c g g a a g g a g a g c a g a a g t c c c a t g t t c a a gagacatgggacttctgctctcctt tttttttggaaa - 3 '), antisense ( 5 '- tttccaaaaaaa a a g g a g a g c a g a a g t c c c a t g t c t c t t g a a c a t g ggacttctgctctccttccgggatc - 3 '). 상기 PCR 생성물 을 BamHI / Hind Ⅲ 로 자른 후 , BamHI / Hind Ⅲ 처리 한 pSP 72 E 3 / CMV - polA Ad E 3 셔틀 벡터 에 클로닝 하 여 , pSP 72 E 3 / shVEGF E 3 셔틀 벡터 를 제작 하 였 다 . 또한 pSP 72 E 3 / CMV - polA Ad E 3 셔틀 벡터 에 GMCSF - IRES - Relaxin 유전자 를 클로닝 하 여 , pSP 72 E 3 / GMCSF - RLX E 3 셔틀 벡터 를 제작 하 였 다 .