세포 자극 이 끝난 다음 , 차가운 PBS 완충 용액 으로 배양 세포 를 2 회 세척 한 다음 PBS 완충 용액 을 제거 한 각 웰 에 1 ㎖ 의 트리 졸 ( Trisol ) 을 투여 하 여 5 분 동안 항온 에서 배양 하 였 다 . 배양 이 끝난 다음 , 트리 졸 에 녹인 세포 용액 을 3 회 피펫 팅 하 여 E - 튜브 에 담 고 0 . 2 ㎖ 의 클로로포름 을 첨가 한 다음 10 초 정도 볼텍스 ( vortex ) 하 여 세포 를 잘 혼합 하 고 다시 원심 분리 ( 속도 12 , 000 rpm , 60 분 , 4 ℃) 하 였 다 . 그 다음 전체 RNA 층 인 상층 액 만 을 E - 튜브 에 옮기 고 , 차가운 100 % 이소프로판올 을 넣 어 적어도 하루 동안 침전 시켰 다 . 다시 동일 한 조건 에서 20 분 정도 원심 분리 하 여 상층 액 을 따라 버리 고 이 과정 을 반복 하 여 순수 한 전체 RNA 를 분리 하 였 다 . 그 다음 75 % 에탄올 을 첨가 하 여 손 으로 잘 저어 혼합 하 고 원심 분리 하 였으며 , 원심 분리 가 끝나 면 상층 액 을 버리 고 0 . 1 % DEPC - H 2 O 를 넣 어 65 ℃ 에서 10 분 동안 가열 한 후 - 20 ℃ 에서 사용 할 때 까지 저장 하 였 다 .