상기 실험 예 2 의 세포 배양 조건 으로 동일 한 방법 으로 세포 를 6 well plate 에 분주 한 후 37 ℃ 5 % CO 2 조건 의 배양기 에서 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 이후 쥐손이풀 추출물 ( 1 , 10 , 100 ㎍/㎖) 를 포함 하 는 배지 와 효능 원료 를 포함 하 지 않 은 배지 로 교체 해 준 다음 24 시간 동안 추가 로 배양 하 였 다 . 그 후 각 시료 의 세포 에서 트리 졸 ( RNA iso , DAKARA , 일본 ) 을 이용 하 여 RNA 를 분리 한 뒤 nanodrop 으로 260 ㎚ 에서 RNA 를 정량 한 후 , 각각 2 ㎍ 의 RNA 를 사용 하 여 증폭기 에서 cDNA 를 합성 하 였 다 ( C 1000 Thermal Cycler , Bio - Rad , 미국 ) . 합성 된 cDNA 에 타 겟 단백질 인 COL 1 A 1 프라이머 와 시아닌 염료 인 사이버 그린 ( SYBR Green supermis , Applied Biosystems , 미국 ) 을 첨가 한 혼합물 을 이용 하 여 실시간 ( real - time ) PCR 기계 에서 실시간 중합효소 연쇄 반응 을 실시 함 으로써 최종 적 으로 COL 1 A 1 유전자 의 발현 정도 를 확인 하 였 다 .