구체 적 으로 , 상기 실험 예 1 - 1 의 자궁 내막 기질 세포 를 미소 중력 환경 에 1 일 동안 배양 하 고 0 . 5 mM 의 막 투과성 cAMP 유도체 인 8 - Br - cAMP 가 포함 된 분화 배지 에 첨가 하 여 1 일 동안 배양 하 여 탈락막 화 를 유도 하 였 다 . 프로락틴 ( prolactin , PRL ) 및 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 1 ( insulin - like growth factor binding protein , IGFBP 1 ) 은 탈락막 화 과정 중 특이 적 으로 발현 하 는 단백질 이 므로 , 상기 두 종류 의 단백질 을 발현 하 는 mRNA 의 발현 정도 를 정량 적 실시간 중합효소 연쇄 반응 ( quantitative real - time polymerase chain reaction , Q - RT - PCR ) 으로 비교 하 였 다 . 미소 중력 환경 하 의 자궁 내막 기질 세포 와 대 조군 자궁 내막 기질 세포 로부터 TRIzol 시약 ( Thermo Fisher Scientific , Waltham , MA ) 을 이용 하 여 총 RNA 를 얻 은 뒤 cDNA 를 얻 기 위해 TOPscriptTM RT DryMIX 키트 ( dT 18 plus ) ( Enzynomics , Daejeon , Korea ) 에 1 ㎍ 의 RNA 를 첨가 한 후 , 37 ℃ 에서 5 분 , 50 ℃ 에서 60 분 , 95 ℃ 에서 5 분 동안 반응 시켰 다 . 합성 된 cDNA 50 ng 을 이용 하 여 CFX 384 C 1000 Thermal Cycler ( Bio - Rad , Hercules , CA ) 로 정량 적 실시간 중합효소 연쇄 반응 을 수행 하 였 다 . TOPrealTM qPCR 2 X PreMIX ( SYBR Green with high ROX ) ( Enzynomics , Daejeon , Korea ) 5 ㎕, 10 pM 의 하 기 표 1 에 기재 된 서열 을 갖 는 프라이머 , 25 ng / ㎕ 의 cDNA 2 ㎍ 를 총 10 ㎕ 가 되 도록 혼합 하 고 , 95 ℃ 에서 10 초 , 60 ℃ 에서 15 초 , 72 ℃ 에서 30 초 의 과정 을 40 회 반복 하 여 진행 하 였 다 . 그 결과 프로락틴 과 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 의 mRNA 발 현량 을 GAPDH 유전자 의 발 현량 과 상대 적 비교 를 통해 정규 화 하 였 다 .