본 발명자 들 은 지방 합성 과정 중 , 지방 생성 ( adipogenesis ) 관련 유전자 인 PPAR - γ ( peroxisome proliferator - activated receptor gamma ) , 지방분 해 ( lipolysis ) 관련 유전자 인 ATGL ( adipose triglyceride lipase ) 와 HSL ( hormone - sensitive lipase ) 의 발현 을 분석 하 기 위하 여 , 마우스 서혜부 지방 조직 으로부터 단백질 을 추출 하 여 웨스턴 블 럿팅을 수행 하 였 다 . 구체 적 으로 , Protease inhibitors cocktail 이 포함 된 RIPA assay buffer ( 50 mM Tris - HCl , 150 mM NaCl , 1 % Triton X - 100 , 1 % sodium deoxycholate , 0 . 1 % SDS , 2 mM EDTA ) 700 μ L 에 서혜부 지방 50 mg 을 넣 어 분쇄 한 후 , 얻 어 진 단백질 의 양 을 Bradford method 를 사용 하 여 정량 하 였 다 . 정량 된 단백질 ( 30 μ g ) 은 SDS 12 %- polyacrylamide gel 을 이용 하 여 전기영동 을 통해 단백질 을 분리 후 , NC ( nitrocellulose ) 멤 브레인 으로 이동 시켰 다 . 이후 , 멤 브레인 은 5 % BSA ( bovine serum albumin , in TBS - T ) 를 이용 하 여 블 러 킹 시키 고 , TBS - T 로 15 분 간 3 번 세척 하 였 다 . 1 차 항체 를 처리 하 여 4 ℃ 에서 overnight binding 시킨 후 , HRP 가 붙 어 있 는 2 차 항체 를 TBS - T 에 희석 하 여 실온 에서 1 시간 동안 처리 한 후 , ECL ( enhanced chemiluminesence ) assay kit 를 이용 하 여 LAS ( Leica Microsystems , Buffalo Grove , IL , USA ) 로 발 현량 을 확인 하 였 다 . β - actin 은 loading control 로 사용 되 었 다 .