mbcM 결실 돌연변이체 를 배지 4 에 패치 하 고 , 4 일 동안 28 ℃ 에서 성장 시켰 다 . 각각 의 패치 로부터 의 6 mm 원형 플러그 를 사용 하 여 10 mL 시드 배지 ( 배지 1 로부터 변형 됨 - 2 % 글루 코즈 , 3 % 가용성 전분 , 0 . 5 % 옥수수 침지 고형물 , 1 % 콩가루 , 0 . 5 % 펩톤 , 0 . 3 % 염화나트륨 , 0 . 5 % 탄산칼슘 ) 를 포함 하 는 각각 의 50 mL 팔 콘 시험관 에 접종 하 였 다 . 이 들 시드 배 양물 을 2 일 동안 28 ℃, 200 rpm , 2 inch 쓰 로 우로 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 이 들 을 사용 하 여 ( 0 . 5 mL 을 10 mL ) 생 성 배지 ( 배지 2 - 5 % 글리세롤 , 1 % 옥수수 침지 고형물 , 2 % 효모 추출물 , 2 % 인산 이 수소 칼륨 , 0 . 5 % 염화마그네슘 , 0 . 1 % 탄산칼슘 ) 에 접종 하 고 , 24 시간 동안 28 ℃, 이어서 추가 의 5 일 동안 26 ℃ 에서 성장 시켰 다 . 이 차 적 대 사물 을 등 용적 의 에틸 아세테이트 를 가해 이 들 배 양물 로부터 추출 하 였 다 . 세포 파편 을 원심 분리 에 의해 제거 하 였 다 . 상등 액 을 새로운 시험관 에 옮기 고 , 용매 를 진공 하 에 제거 시켰 다 . 샘플 을 0 . 23 mL 메탄올 에 재 구성 하 고 , 0 . 02 mL 의 1 % ( w / v ) FeCl 3 용액 을 가하 였 다 . 샘플 을 막베 신 유사 체의 생 성 에 대해 평가 하 였 다 . 상기 실시 예 2 . 3 에서 기술 된 방법 을 이용 하 는 LCMS 에 의한 화학 적 분석 에 따라 , 동일 한 정체 시간 및 매 쓰 스펙트럼 을 갖 는 것 에 기초 하 여 , 화합물 18 및 19 의 존재 를 분명히 확인 하 였 다 .