실시 예 1 ~ 34 에서 제조 된 시스테인 - 도입 G - CSF 변이체 PEG 접합 물 의 생물학 적 활성 을 필 그라스 팀 ( 대장균 유래 G - CSF ) 과 비교 하 였 다 . 활성 측정 은 인간 골수 의 백혈병 세포 주인 NFS - 60 ( ATCC X 65622 , murine myeloid leukemic cell line ) 의 세포 증식 을 통하 여 수행 하 였 다 . NFS 60 세포 를 10 %( v / v ) 의 소 태아 혈청 과 WEHI - 1640 세포주 배양액 5 % 를 포함 하 는 RPMI 1640 배지 에서 배양 한 후 , 약 2 × 105 세포 / ㎖ 이 되 도록 10 %( v / v ) 의 소 태아 혈청 을 포함 하 는 RPMI 배지 에 현 탁 하 였 다 . 현 탁 된 세포 배양액 을 96 well plate 의 각 웰 에 50 ㎕ 씩 넣 어서 웰 당 세포 가 약 1 × 104 개 가 되 도록 분주 하 였 다 . Filgrastim 및 상기 실시 예 에 따라 제조 된 시스테인 - 도입 변이체 들 의 PEG 접합 물 을 BCA ( Bicinconinic acid ) 단 백 정량 하 여 15 ng / ㎖ 되 도록 10 %( v / v ) 의 소 태아 혈청 을 포함 하 는 RPMI 1640 으로 희석 하 였 고 , 이 를 다시 10 %( v / v ) 의 소 태아 혈청 을 포함 하 는 RPMI 1640 에 3 배 씩 12 단계 희석 하 였 다 . 이렇게 만들 어 진 시료 를 NFS 60 배양 중 인 각 웰 에 100 ㎕ 씩 첨가 하 여 , 배양액 내 의 최종 시료 농도 가 연속 적 으로 감소 하 여 10000 ~ 0 . 05 pg / ml 범위 에 들 도록 하 였 다 . 37 ℃ 배양기 에서 48 시간 배양 후 . 프로 메가 ( PROMEGA ) 사 의 CellTiter 96 TM ( Cat . No . G 3580 ) 을 이용 하 여 세포 의 증가 를 측정 하 였 다 .