바이러스 소독 효능 시험 은 국립 수 의 과학 검역원 예규 제 30 호 ( 2003 . 1 . 27 ) 소독 제 효력 시험 지침 에 의거 수행 되 었 다 . 시료 의 시험관 내 살 바이러스 효능 ( Virucidal activity ) 을 시험 하 기 위하 여 시료 를 증류수 로 100 배 희석 한 것 을 기준 으로 하 여 1000 배 , 2000 배 , 4000 배 , 8000 배 , 16000 배 , 32000 배 희석 하 였 다 . 4 ℃ 상태 의 시료 희석 액 2 . 5 ㎖ 이 들 어 있 는 시험관 에 1 분 간격 으로 준비 된 바이러스 액 2 . 5 ㎖ 을 시험관 에 넣 고 혼합 한 다음 4 ℃ 에서 정확히 30 분 동안 반응 시키 며 도중 에 10 분 마다 잘 흔들 어 주 었 다 . 대 조군 은 희석 된 시료 대신 증류수 를 사용 하 는 점 만 다르 게 실험 하 였 다 . 상기 의 희석 된 시료 와 바이러스 를 섞 은 혼합액 을 세포 배양 용 배지 를 사용 하 여 희석 배수 를 원액 , 10 - 1 , 10 - 2 , 10 - 3 , 10 - 4 , 10 - 5 으로 하 여 세포 를 단층 으로 배양 한 96 웰 조직 배양 플레이트 ( greiner 사 , 독일 ) 에 8 웰 ( well ) / 희석 배수 로 적용 하 여 혼합액 을 25 ㎕ 씩 접종 한 후 , 30 분 흡착 시킨 후 배지 를 갈아주 었 다 . 인플루엔자 바이러스 시험 의 경우 에 는 세 포변 성 효과 ( CPE , cytophatic effect ) 를 유발 하 기 위하 여 5 ug / ml 트립신 ( trypsin ) 이 함유 된 배지 로 갈아주 었 다 . 접종 후 37 ℃ 의 CO 2 배양기 에서 4 일 동안 배양 하 며 , 매일 현미경 으로 세 포변 성 효과 여부 를 관찰 하 고 최종 적 으로 접종 3 - 4 일 후 CPE 를 해석 ( reading ) 하 여 바이러스 존재 여부 를 판단 하 였 다 . 사용 된 바이러스 에 따라 접종 에 사용 한 세포 는 적절 하 게 치환 되 었 으며 , 세포 에서 CPE 를 나타내 지 않 는 바이러스 ( H 9 N 2 및 IBV ) 의 경우 희석 배수 별 시료 와 각각 의 바이러스 반응 액 을 10 일 령 SPF 종란 에 0 . 2 ㎖ 씩 접종 하 여 접종 3 일 후 혈구 응집 반응 및 도트 면역 분석법 ( Dot immunoassay ) 를 통하 여 바이러스 의 존재 여부 를 판단 하 였 다 ( Song CS et al . , Avian Diseases , 42 ( 92 ) , pp 92 - 100 , 1998 ) . 바이러스 함유량 계산 은 캐 버 방법 ( Kaeber method ) 을 이용 하 여 산출 하 였 다 ( Payment P et al . , Methods and Techniques in Virology , p 33 , 1993 ) .