인 큐 베이 션 전 에 , 동결 보존 된 간세포 를 37 ℃ 의 수조 에서 해동 하 였 다 . 동결 보존 된 간세포 의 1 개 튜브 를 인 비트로 ADMET 래 보 러 토리 즈 ( 메릴랜드 주 콜럼 비아 ) 로부터 입수 한 동결 보존 된 간세포 회복 배지 ( UCRM ) 의 각각 50 - mL 원추형 튜브 에 첨가 하 였 다 . 세포 를 실온 4 ℃ 에서 10 분 동안 740 rpm 에 GH 3 . 8 로터 로 베크만 ( Beckman ) 원심분리기 ( 캘리포니아주 브레아 ) 에서 회전 시켰 다 . 상청 액 을 제거 하 고 세포 는 계수 를 위한 플 레이팅 배지 중 에 재현 탁하 였 다 . 세포 를 플 레이팅 배지 중 에 재현 탁한 후 , 재 현탁액 20 μ L 를 옮겨 AOPI 스테이 닝 용액 20 μ L 와 혼합 하 였 다 . 용액 은 완만 하 게 혼합 하 고 세포 를 셀 로 미터 ( Cellometer ) ( 넥스 셀 롬 , 매사추세츠 주 로렌스 ) 를 사용 하 여 계수 하 였 다 . 계수 한 후 , 이어서 세포 를 2 mmol / L L - 글루타민 함유 윌리암스 E 배지 ( pH 7 . 4 ) 중 에 1 또는 2 백만 개 의 생존 가능 세포 / ml 로 재현 탁하 였 다 .