개 PBMC 의 제조 : 개 전혈 을 헤파린 처리 진공 채 혈관 ( BD ( Franklin Lakes , NJ ) ) 을 사용 하 여 수집 하 였 다 . 이어서 , 혈액 을 동일 한 부피 의 따뜻 한 HBSS ( Gibco ( Grand Island , NY ) ) 와 혼합 하 였 다 . 4 ㎖ 의 희석 된 혈액 을 15 ㎖ 코니컬 ( conical ) 튜브 내 의 3 ㎖ 의 림 포 라이트 - M ( Cedarlane Laboratories ( Westbury , NY ) ) 상 에 천천히 층상 화 시켰 다 . 튜브 를 20 분 동안 800 ×g 에서 원심 분리 하 고 , PBMC 계면 을 수집 하 고 , HBSS 로 2 회 세정 하 고 , TCM 에서 2 × 106 개 / ㎖ 로 재현 탁 시켰 다 . PBMC 를 24 웰 플레이트 의 웰 에 첨가 하 고 ( 2 ㎖/ 웰 ) , 세포 를 2 ㎍/㎖ 의 ConA ( Sigma ( St . Louis , MO ) ) 로 48 시간 동안 자극 하 였 다 .