TCDD 를 처리 한 경우 의 실험 결과 를 확인 하 기 위하 여 , 먼저 , 78 passage 의 HaCaT 세포 를 3 × 105 / well 의 세포 밀도 로 6 - well plate 에 seeding 후 16 시간 동안 배양 시키 고 배양액 을 serum free media 로 교체 한 다음 , 여기 에 미리 반응 시켜 둔 TCDD 와 상기 펩타이드 의 혼합물 을 2 시간 동안 처리 하 였 다 . TCDD 는 0 . 1 μ M 의 농도 로 처리 하 였 고 펩타이드 는 각각 10 , 50 , 100 μ M 의 농도 로 처리 하 였 다 . negative control 은 펩타이드 는 처리 하 지 않 고 TCDD 만 처리 하 였 고 , positive control 은 TCDD 와 함께 CH 223191 를 10 μ M 의 농도 로 처리 하 였 다 . 세포 를 상기 혼합물 과 2 시간 동안 반응 시킨 후 RNA 를 분리 하 였 다 . 배양액 을 제거 한 후 세포 를 배양 한 플레이트 에 TRIzol ( Thermo Fisher Scientific , USA ) 을 처리 하 여 스 크 래퍼 를 이용 해 RNA 를 포함 하 는 시료 를 얻 은 다음 , 클로로포름 을 처리 하 고 원심 분리 를 통해 상층 액 을 얻 었 다 . 상층 액 에 이소프로판올 을 처리 하 고 다시 원심 분리 하 여 바닥 의 RNA pellet 을 확인 하 고 여기 에 70 % 의 에탄올 을 처리 하 여 pellet 을 세척 한 후 충분히 건조 시켜 RNA 를 분리 하 였 다 . 분리 된 RNA 는 RNase - free water ( Corning , USA ) 에 녹여 사용 하 였 다 . 분리 된 RNA 를 cDNA 로 역전사 시켜 CYP 1 A 1 및 COX - 2 의 프라이머 ( 표 2 ) 를 이용 하 여 RT - PCR 을 수행 하 였 다 ( cDNA 중합 키트 및 PCR pre - mix : Intron , Korea ) . 각 처리 군 의 전체 RNA 양 비교 를 위해 사용 된 GAPDH 의 프라이머 는 하 기 표 2 의 서열 을 가진 것 을 이용 하 였 다 .