실시 예 1 ( 1 ) 및 ( 2 ) 에서 제작 한 형질전환 체 6 주 ( JM 109 / pSTK 001 , JM 109 / pSTK 002 , JM 109 / pSTK 003 , JM 109 / pSTT 001 , JM 109 / pSTT 002 , JM 109 / pSTT 003 ) 및 일본 특허 공고 평 5 - 317066 호 공보 에 기재 된 JM 109 / pST 111 의 합계 7 주 를 , IPTG ( 아이소프로필 - 1 - 싸이 오 - D - β - D - 갈락토사이드 ) 의 평가 를 다음 과 같이 행했 다 . LB Amp 배지 를 바서만 ( Wassermann ) 시험관 에 1 ㎖ 씩 분주 하 고 , 각 시험관 에 2 차 평가 선발 주 6 주 및 JM 109 / pST 111 의 콜로니 를 각각 식균 했 다 . 37 ℃, 210 rpm 으로 약 8 시간 배양 한 후 , 얻 어 진 각 배양액 100 ㎕ 를 IPTG 를 최종 농도 로서 1 mM 포함 하 는 LB Amp 배지 ( 500 ㎖ 용 ( 容 ) 삼각 플라스크 중 의 100 ㎖) 에 식균 하 여 , 37 ℃, 210 rpm 으로 24 시간 배양 했 다 . 얻 어 진 배양액 으로부터 원심 분리 ( 3 , 700 ×g , 10 분 간 , 4 ℃) 에 의해 각 균체 를 회수 하 고 , 20 mM Tris - 황산 완충액 ( pH 8 . 0 ) 으로 세정 한 후 , 균 농도 가 12 . 5 gDC / L 이 되 도록 동일 한 완충액 에 현 탁 했 다 . 얻 어 진 균체 현탁액 의 1 ㎖ 를 , 초음파 파쇄기 VP - 15 S ( 다이 테크 , 일본 ) 를 사용 하 여 , 출력 컨트롤 4 , DUTY CYCLE 40 %, PULS , TIMER = B 모드 10 s 의 조건 으로 빙 냉하 면서 3 분 간 파쇄 했 다 . 파쇄 한 균체 현탁액 을 원심 분리 ( 23 , 000 ×g , 5 분 간 , 4 ℃) 하 여 , 상청 을 조효 소액 으로서 채취 했 다 . 얻 어 진 조효 소액 을 , 각각 파쇄 전 의 ( 균체 현탁액 시점 에서 의 ) 균 농도 로서 6 . 25 gDC / L 이 되 도록 , 20 mM Tris - 황산 완충액 ( pH 8 . 0 ) 으로 희석 했 다 . 희석 한 각 형질전환 체 유래 의 조효 소액 을 등량 의 폴리 아크릴아마이드 겔 전기영동 용 샘플 버퍼 ( 0 . 1 M Tris - HCl ( pH 6 . 8 ) , 4 % w / v SDS , 12 % v / v β 머 캅 토 에탄올 , 20 % v / v 글 라 이 세 롤 , 미량 브로모 페놀 블루 ) 와 혼합 하 고 , 5 분 간 끓여 변성 처리 를 행했 다 . 10 % 폴리 아크릴아마이드 겔 을 제작 하 여 , 변성 처리 가 끝난 샘플 을 1 레인 당 5 ㎕ 씩 가하 여 전기영동 분석 을 행했 다 ( 도 1 ) . 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 는 30 kDa 세기 의 밴드 로서 각각 관찰 되 었 다 ( 도 1 중 의 화살표 ) . 야생 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 1 st ) 를 발현 하 는 JM 109 / pST 111 유래 조효 소액 과 비교 하 여 , 동 야생 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 001 유래 조효 소액 및 JM 109 / pSTT 001 유래 조효 소액 은 발 현량 이 증가 되 어 있 는 것 이 확인 되 었 다 ( 이 는 발현 벡터 의 차이 에 의한 것 으로 생각 됨 ) . 한편 , JM 109 / pSTK 001 유래 조효 소액 및 JM 109 / pSTT 001 유래 조효 소액 과 비교 하 여 , 2 번 째 의 아미노산 잔기 가 아스파라진 으로 치환 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 003 유래 조효 소액 및 JM 109 / pSTT 003 유래 조효 소액 은 , 각각 더욱 발 현량 이 증가 되 어 있 고 , 또한 2 번 째 의 아미노산 잔기 가 라이신 으로 치환 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 002 유래 조효 소액 및 JM 109 / pSTT 002 유래 조효 소액 은 각각 더욱 대폭 발 현량 이 증가 되 어 있 는 것 이 확인 되 었 다 .