시노 바이 기술 회사 로부터 인간 PD - L 1 유전자 cDNA 서열 을 함유 하 는 플라스미드 HG 10084 - M 를 구매 하 여 , 정 방향 프라이머 5 '- G T A C G C T AGCCACCATGAGGATATTTGCTGTC - 3 '( SEQ ID NO : 50 ) , 역방향 프라이머 5 '- G A T C CTCGAGCGTGAGTCCTTTCATTTGG - 3 '( SEQ ID NO : 51 ) 를 이용 하 여 , 인간 PD - L 1 세 포외 단편 ( 뉴클레오티드 서열 은 SEQ ID NO : 41 으로 표시 됨 ) 을 PCR 증폭 시킨다 . 증폭 단편 은 NheI 와 XhoI 에 의해 이중 효소 절단 된 후 , 자 가 구축 된 진 핵 발현 플라스미드 시스템 ( pSec CAGA 2 ECD , pCDNA 3 . 1 플라스미드 의 기초 상 에서 개조 하 여 얻 어 진 것 으로 , 도 1 A 에 도시 된 바 와 같 음 ) 에 클론 되 어 , 이 로써 플라스미드 는 PEI 에 의하 여 293 E 세포 를 형질 감염 ( transfection ) 시켜 , 6 일 후 배지 상층 액 을 수집 하 여 , 친화성 크로마토그래피 에 의하 여 인간 PD - L 1 세 포외 도메인 단백질 을 정제 하 여 얻 는다 . 결과 는 도 1 B 에 도시 된 바 와 같이 , 인간 PD - L 1 세 포외 도메인 단백질 크기 는 SDS - PAGE 에서 쿠마 쉬 브릴리언트 블루 염색 을 거친 후 75 K 달톤 좌우 로 나타난다 .