RNA 샘플 을 제조자 의 지시 에 따라 , RNA 추출 키트 ( TaKaRa , # 9767 ) 를 이용 하 여 추출 하 였 다 . 그 다음 , 역 전사 - PCR 프리 믹스 ( iNtRON Biotechnology , # 25081 ) 를 이용 하 여 cDNA 를 제조 하 였 다 . 45 ℃ 에서 1 시간 동안 , 뒤 이 어 95 ℃ 에서 5 분 동안 역전사 를 수행 하 였 다 . 본원 에서 나타낸 mRNA 프라이머 및 TB ™ Green Premix Ex Taq ™( TaKaRa , # RR 420 A ) 으로 Rotor - Gene 6000 실시간 열 적 순환 시스템 ( Corbett Research , NSW , Australia ) 을 이용 하 여 , cDNA 샘플 을 증폭 시켰 다 . qPCR 을 다음 과 같이 수행 하 였 다 : 95 ℃ 에서 15 분 동안 DNA 중합효소 활성 화 및 94 ℃ 에서 20 초 , 55 ℃ 에서 20 초 및 72 ℃ 에서 30 초 의 60 사이클 . 증폭 된 산물 의 특이 성 및 동일 성 을 녹 는 곡선 분석 으로 입증 하 였 다 . 표적 유전자 의 mRNA 발현 수준 의 정량화 를 이중 델타 Ct 분석 으로 수행 하 였 고 , 데이터 를 ACTB 유전자 의 것 으로 표준 화 하 였 다 .