20 ㎕ 혈청 부재 및 항생제 부재 DMEM 배지 에 재조합 벡터 DNA 350 ng , 내부 표준 벡터 pRL - CMV ( Promega 사 , 도 2 ) DNA 50 ng 및 2 ㎕ 리포 펙 타민 플러스 시약 ( Invitrogen 사 ) 을 혼합 하 고 , 상온 에서 15 분 동안 항온 처리 한 다음 , 상기 의 혼합물 을 다시 22 ㎕ 혈청 부재 및 항생제 부재 DMEM 배지 와 3 ㎕ 리포 펙 타민 의 혼합물 에 첨가 한 후 추가 로 15 분 동안 상온 에서 항온 처리 하 여 DNA : 리포 펙 타민 플러스 시약 : DMEM 배지 의 복합체 를 제조 하 였 다 . 상기 복합체 를 형성 하 는 동안 , HeLa 세포주 를 PBS 로 두 번 세척 하 고 , 각 웰 당 20 , 000 개 의 세포 가 20 시간 전 에 이식 배양 된 24 - 웰 플레이트 ( Falcon 사 ) 의 웰 에 , 200 ㎕ 의 혈청 부재 및 항생제 부재 DMEM 배지 를 투입 하 였 다 . 각 웰 에 상기 복합체 50 ㎕ 를 첨가 한 후 , 37 ℃, 5 % CO 2 배양기 에서 3 시간 동안 배양 하 였 다 . 배양 이 끝나 면 10 % 우태 아 혈청 , 페니실린 ( 100 U / ㎖, Invitrogen 사 ) 및 스트렙토마이신 ( 100 ㎍/㎖, Invitrogen 사 ) 이 첨가 된 DMEM 배지 로 교체 하 고 , 37 ℃ 에서 24 시간 동안 항온 배양 하 였 다 .