PCR 반응 액 은 각각 0 . 4 mM 의 상기 N - 프라이머 및 C - 프라이머 , 주형 으로 상기 재조합 플라스미드 pG 1 5 ng , 10 mM 트리스 완충액 ( Tris - HCl , pH 8 . 3 ) , 50 mM KCl , 7 mM MgCl 2 , 0 . 1 mM MnCl 2 , 0 . 2 mM dATP , 0 . 2 mM dGTP , 1 mM dCTP , 1 mM dTTP 및 Taq 중합효소 5 효소 단위 ( unit ) 를 포함 하 도록 50 mL 를 조제 하 였 다 . 이어 반응 액 을 94 oC 에서 1 분 , 50 oC 에서 1 분 , 72 oC 에서 1 분 의 조건 으로 25 회 수행 후 , 72 oC 에서 7 분 간 돌연변이 유발 형 PCR 을 수행 하 여 돌연변이 유전자 를 얻 었 다 .