레바 우디 오시드 A 에 대한 조작 된 라운드 13 변이체 의 활성 을 특성 화 하 기 위해 진탕 플라스크 분말 로딩 용량 반응 실험 을 수행 하 였 다 . 0 . 006 - 0 . 2 g / L 수준 의 진탕 플라스크 분말 ( SFP ) 을 69 ℃ 에서 50 분 동안 예비 인 큐 베이 팅 한 후 , 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 15 mM 레바 우디 오시드 A , 0 . 2 mM ADP , 37 . 5 mM 수크로스 , 및 0 . 1 g / L SUS SFP 서열 번호 1804 를 함유 하 는 100 μ L 의 총 반응 부피 에 첨가 하 였 다 . 반응 은 4 시간 동안 300 RPM 에서 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 60 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 반응물 을 상기 한 바 와 같이 희석 하 고 , 켄 칭 하 고 , 분석 하 였 다 . 0 . 025 g / L SFP 로딩 시 에 레바 우디 오시드 A 에 대한 라운드 13 변이체 의 전환 은 표 53 . 3 에 열거 되 어 있 다 . 표 53 . 3 에 열거 된 10 개 의 모든 변이체 는 서열 번호 3502 보다 더 높 은 활성 을 가졌 다 . 돌연변이 H 73 P , N 172 R , N 240 E , A 242 I , 및 E 408 P ( 서열 번호 3696 ) 및 그 의 코딩 폴리뉴클레오티드 ( 서열 번호 3695 ) 를 갖 는 변이체 가 가장 개선 되 었 고 , 레바 우디 오시드 A 의 글 루 코 실화 를 위한 추가 의 유도 진화 를 위해 선택 되 었 다 .