DR 5 - 양성 WIL 2 - S 세포 에 대한 항 - DR 5 항체 IgG 1 - CONA - C 49 W 의 효능 작용 활성 에 대한 , K 326 W / E 333 S 와 비교 하 여 Fc - Fc - 증진 치환 E 430 G 와 K 326 W / E 333 T 의 조합 의 효과 를 평가 하 기 위해 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . 시험관 내 생존 율 검정 을 본질 적 으로 실시 예 8 에 기재 된 바 와 같이 수행 하 였 다 . 간략 하 게 , 100 μ L WIL 2 - S 세포 를 96 - 웰 플레이트 내 배양 배지 ( 25 mM Hepes 및 L - 글루타민 ( 론 자 , 카탈로그 번호 BE 12 - 115 F ) + 10 % 열 불활성 화 된 DBSI + 1 mM 피루브산 나트륨 ( 론 자 , 카탈로그 번호 BE 13 - 115 E ) + 50 U / mL Pen / Strep 를 함유 한 RPMI 1640 ) 에 피펫 팅 하 였 다 ( 50 . 000 개 세포 / 웰 ) . 이어서 , 50 μ L 의 일련 의 농도 희석 물 의 항체 샘플 ( 5 배 희석 으로 범위 0 . 001 - 20 μ g / mL 최종 농도 ) 및 10 μ L 의 정제 된 C 1 q 샘플 ( 2 . 5 μ g / mL 최종 농도 ) 을 세포 에 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 1 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 셀타 이터 글 로 검정 을 사용 하 여 세포 생존 율 을 결정 하 였 다 . 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 발광 을 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 19 는 WIL 2 - S 세포 에 대한 시험관 내 생존 율 검정 에서 IgG 1 - CONA - C 49 W 내 K 326 W / E 333 T / E 430 G 의 도입 이 K 326 W / E 333 S / E 430 G 의 도입 에 의한 것 과 유사 한 사멸 효능 을 갖 는 단일 작용 제 의 DR 5 효능 제 활성 의 유도 를 일으켰 다는 것 을 보여준다 .