또한 , 상기 와 동일 한 조건 으로 세포 를 회수 하 여 인산 효소 저해제 와 단백질 분해 효소 저해제 가 포함 된 RIPA lysis 완충액 를 사용 하 여 단백질 을 추출 하 였 다 . 단백질 샘플 ( 20 ㎍) 은 SDS - PAGE 를 사용 하 여 이 뮤 노블 롯 팅 ( Immunoblotting ) 플리 비닐 리 딘다 이플 루오 라이드 ( ( polyvinylidinedifluoride , PVDF ) 반투막 에서 전기영동 하 였 다 . 상기 반투막 은 블로킹 완충액 ( 5 % 우 혈청 알부민 , Bovine Serum Albumin , BSA ) 에서 1 시간 동안 실온 에서 반응 시킨 후 항 - SOD 1 다 클론 항체 ( 1 : 1000 희석 ) , 항 - HO 1 다 클론 항체 ( 1 : 1000 희석 ;), 항 - Catalase 다 클론 항체 ( 1 : 500 ) , 항 - caspase - 3 다 클론 항체 ( 1 : 1000 희석 ) 및 항 - GAPDH 다 클론 항체 ( 1 : 3000 희석 ) 를 사용 하 여 4 ℃ 에서 반응 시켰 다 . 16 시간 후 , 인산 완충 식염수 ( washing solution ; 0 . 1 % 트윈 - 20 ) 에서 5 분 간 5 번 세척 하 고 효소 ( horseradish peroxidase ) 와 결합 된 쥐 의 IgG 에 대응 하 는 이 차 항체 로 실온 에서 1 시간 반응 시킨 후 , 화학 발광 검사 ( chemiluminescence ) 를 통해 항체 특이 적 밴드 를 검출 하 였 다 .