발현 된 변이 형 항체 가 항원 에 대한 특이 성 을 유지 한다는 것 을 증명 함 으로써 이 들 의 충실 성 을 확인 하 였 다 . Biacore 3000 기구 를 이용 하 여 수행 된 표면 플 라즈 몬 공명 ( surface plasmon resonance ) ( SPR , Biacore ) 으로 VEGF 결합 을 모니터링 하 였 다 . 표준 방법 을 이용 한 N - 하이드 록 시숙 신 이미드 / N - 에틸 - N '-(- 3 - 디메틸아미노 - 프로필 ) 카르 보디 이미드 ( NHS / EDC ) 와 의 결합 으로 , 재조합 VEGF ( VEGF - 165 , PeproTech , Rocky Hill , NJ ) 를 CM 5 칩 표면 에 부착 시켰 다 . WT 와 변이 형 항체 를 분석 물 ( analyte ) 로서 주입 하 고 , 공명 단위 ( resonance unit , RU ) 로 측정 된 반응 을 획득 하 였 다 . 충실 한 평형 상수 ( equilibrium constant ) 를 측정 하 기 에 는 분리 단계 ( dissociation phase ) 가 너무 느리 기 때문 에 , 결합 단계 ( association phase ) 의 종결 시점 에서 RU 를 측정 함 으로써 상대 적 인 결합 을 결정 하 였 는데 , 이 는 단백질 농도 ( 이 는 본 실험 에서 일정 하 게 유지 된다 ) 및 결합 속도 상수 ( association rate constant ) 에 비례 할 것 이 다 . 이러 한 데이터 ( 도 6 ) 는 VEGF 에 결합 하 지 않 는 음성 대조 항 - Her 2 항체 와 대조 적 으로 , 이 들 변이 형 항 - VEGF 항체 가 항원 에 결합 을 유지 한다는 것 을 증명 한다 .