FreeStyle ™ 293 발현 시스템 을 제조사 의 지침 ( Invitrogen , USA ) 에 따라 사용 하 여 인간 배아 콩팥 293 - F 세포 의 일시 적 트랜스펙션 에 의해 재조합 면역 글 로 불린 변이체 를 발현 시켰 다 . 간략히 , 현 탁 FreeStyle ™ 293 - F 세포 를 FreeStyle ™ 293 발현 배지 에서 37 ℃/ 8 % CO 2 에서 배양 하 고 , 트랜스펙션 하 는 날 에 세포 를 새로운 배지 에 밀도 1 - 2 x 106 생 세포 / ㎖ 로 파종 했 다 . 325 ㎕ 의 293 fectin ™ ( Invitrogen , Germany ) 및 250 ㎍ 의 중쇄 및 경쇄 플라스미드 DNA 를 1 : 1 몰 비로 250 ㎖ 최종 트랜스펙션 부피 로 사용 하 여 Opti - MEM ® I 배지 ( Invitrogen , USA ) 에서 DNA - 293 fectin ™ 복합체 를 제조 했 다 . 325 ㎕ 의 293 fectin ™ ( Invitrogen , " Germany ) 및 250 ㎍ 의 "" 놉 - 인 투 - 홀 "" 중쇄 1 및 2 및 경쇄 플라스미드 DNA 를 1 : 1 : 2 몰 비로 250 ㎖ 최종 트랜스펙션 부피 로 사용 하 여 Opti - MEM ® I 배지 ( Invitrogen "," USA ) 에서 "" 놉 - 인 투 - 홀 "" DNA - 293 fectin 복합체 를 제조 했 다 . 트랜스펙션 한지 7 일 후 에 30 분 동안 14000 　 g 로 원심 분리 하 여 항체 함유 세포 배 양물 상청 액 을 수집 하 고 멸균 필터 ( 0 . 22 ㎛) 를 통해 여과 시켰 다 . 정제 전 까지 상청 액 을 - 20 ℃ 에서 저장 했 다 . "