24 - well plate 에 RBL - 2 H 3 ( 비 만 세포 ) 세포 를 10 % FBS 가 포함 된 DMEM media 를 이용 해 seeding 하 고 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 그 다음 배양액 을 제거 하 고 벨 루틴 을 2 - 100 μ g / ml 의 농도 가 되 도록 siraganian buffer ( NaCl 119 mM , KCl 5 mM , Glucose 5 . 6 mM , PIPES 25 mM , MgCl 2 , 0 . 4 mM , CaCl 2 1 mM , BSA 0 . 1 %, pH 7 . 2 ) 에 희석 하 여 세포 에 1 시간 동안 처리 하 였 고 또 한 벨 루틴 의 효과 와 비교 하 기 위해 대 조군 으로 겐 크 와 닌 과 루 테 올 린을 100 μ g / ml 농도 로 처리 하 였 다 . 그 다음 세포 로부터 용액 을 제거 하 고 , PIPES 를 이용 해 두 번 washing 하 였으며 , 50 nM PMA ( phorbol myristate acetate ) 와 1 μ M A 23187 ( calcium ionophore ) 를 30 분 동안 처리 하 여 면역 반응 을 유도 하 였 다 . 그 다음 20 μ L 상층 액 을 취해 96 - well plate 로 옮기 고 , substrate 인 4 - p - nitrophenyl - N - acetyl - β - D - glucosaminide 를 2 mM 농도 가 되 도록 0 . 05 M sodium citrate buffer ( pH 4 . 5 ) 에 희석 하 여 80 μ L 와 섞 고 30 분 간 37 도 에서 반응 시켰 다 . 그 후 stop buffer ( 0 . 1 M · NaHCO 3 , pH 10 ) 200 μ L 를 첨가 하 여 반응 을 종결 시키 고 , 405 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .