< IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 의 결합 활성 을 확인 하 기 위해 , I 24 세포 ( 재조합 인간 IGF - 1 R 을 발현 하 는 NIH 3 T 3 세포 , Roche ) 의 표면 상 에서 과다 발현 된 IGF - 1 R 에 대한 결합 을 FACS 로 연구 하 였 다 . 간단 하 게 , FACS 튜브 당 5 x 10 E 5 I 24 세포 를 정제 된 < IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 , 및 참조 로서 야생 형 < IGF - 1 R > 항체 의 희 석물 로 인 큐 베이 션 하 고 , 1 시간 동안 얼음 상 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 비 결합 된 항체 를 4 ml 얼음 냉각 된 PBS ( Gibco ) + 2 % FCS ( Gibco ) 로 세척 하 여 제거 하 였 다 . 이후 세포 를 원심 분리 ( 400 g 에서 5 분 ) 하 고 , 결합 된 항체 를 F ( ab ') 2 < hFc γ > PE 접합체 ( Dianova ) 로 , 차광 하 여 1 시간 동안 얼음 상 에서 검출 하 였 다 . 비 결합 된 검출 항체 를 4 ml 얼음 냉각 된 PBS + 2 % FCS 로 세척 하 여 제거 하 였 다 . 이후 세포 를 원심 분리 ( 400 g 에서 5 분 ) 하 고 , 300 ~ 500 ㎕ PBS 에서 재현 탁하 고 , 결합 된 검출 항체 를 FACSCalibur 또는 FACS Canto ( BD ( FL 2 채널 , 획득 량 당 10 , 000 세포 ) 상 에서 정량 하 였 다 . 상기 실험 동안 각각 의 동형 대 조군 을 포함 시켜 , 임의 의 비 특이 적 결합 사건 을 제외 시켰 다 . 평균 형광 세기 의 농도 의존 적 이동 을 통해 , I 24 세포 에서 의 < IGF - 1 R > VL - VH / CL - CH 1 교환 항체 및 야생 형 < IGF - 1 R > 참조 항체 의 IGF - 1 R 에 대한 결합 을 비교 하 였 다 .