농도 2 . 0 ㎍/ ml 의 염소 항 - 인간 IgE ( Tago , Inc . CA ) 를 샘플 내 총 IgE 측정 에 이용 하 였 다 . IgE 항체 는 ELISA 로 측정 하 였 다 . 간략 하 게 는 , 바닥 이 평평 한 96 웰 ELISA 플레이트 ( Immunoplate I ; Polysorp , Nunc , Roskilde , Denmark ) 를 단일 의 소듐 바이 카르보 네이트 완충액 ( pH 9 . 6 ) 또는 소듐 - 바이 카르보 네이트 완충액 중 에 적정 농도 로 항원 100 ㎕ 과 함께 4 ℃ 에서 밤새 코팅 시켰 다 . 웰 을 0 . 05 % ( v / v ) Tween 20 ( PBS / Tween ) 이 포함 된 PBS pH 7 . 2 로 3 번 헹군 후 , PBS / T 중 의 % ( w / v ) BSA ( Radioimmunoassay grade ; Sigma , St Lois , MO ) 100 ㎕ 를 첨가 하 여 37 ℃ 에 60 분 간 두 었 다 . 웰 을 PBS / T 로 헹군 후 , 각 웰 에 1 % BSA / PBS / T 중 에 희석 한 샘플 100 ㎕ 을 첨가 하 였 다 . 그런 후 , 플레이트 를 37 ℃ 에서 다시 60 분 간 인 큐 베이 션 한 다음 , 이 를 헹구 고 , 여기 에 1 % BSA / PBS / T 중 에 1 : 1000 으로 희석 한 바이오틴 이 부착 된 염소 항 - 인간 IgE ( Tago , Inc . California , USA ) 100 ㎕ 를 첨가 하 여 다시 37 ℃ 에서 60 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이 를 세정 한 후 , 1 % BSA / PBS / T 중 에 1 : 40 , 000 으로 희석 한 페록시다제 - 접합 된 스 트 렙 타비 딘 ( Tago ) 100 ㎕ 를 각 웰 에 넣 어 , 37 ℃ 에서 45 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 헹군 후 , 효소 기질 로 기질 완충액 중 의 3 , 3 ', 5 , 5 '- 테 트 , 라메 틸 - 벤지딘 ( Sigma ) 100 ㎕ 를 각 웰 에 첨가 하 여 , 실온 에서 15 - 30 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 반응 은 황산 ( 1 . 0 M ) 100 ㎕ 를 첨가 하 여 중지 시킨 다음 , ELISA 플레이트 리더 에서 490 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 샘플 내 총 IgE 를 측정 하 기 위한 염소 항 - 인간 IgE ( 2 . 0 ㎍/ ml ) ( Bioclone , Australia ) 와 , 샘플 에서 OMP IgE 및 P 6 IgE 의 측정 을 위해 10 명 의 만석 기관지염 환자 로부터 모은 혈청 을 , 2 배수 연속 희석 한 5 가지 의 희 석물 로 실시 하 여 , 표준 곡선 을 구하 였 다 . 표준 곡선 과 샘플 은 2 배수 로 테스트 하 였 다 . 카르보 네이트 완충액 웰 내 샘플 의 흡광도 는 각 항체 코팅 된 웰 의 흡광도 를 제하 여 최종 결과 를 구하 였 다 . 총 IgE 의 민감 도 범위 는 0 . 15 - 2 . 43 ng / ml 이 었 다 . 바둑판 식 적정 을 수행 하 여 , 모든 항체 농도 를 최적 화 하 고 , 단백질 표준 농도 및 샘플 희석 에 대한 유용 한 범위 를 최적 화 하 였 다 .