FRET 센서 세포 ( Tau RD P 301 S FRET 바이오센서 , 카탈로그 : CRL - 3275 ™, ATCC ® 에서 구함 ) 는 폴리 - D - 리신 ( PDL ) - 피복 된 96 - 웰 플레이트 ( Corning ® BioCoat ™ 폴리 - D - 리신 다중 웰 플레이트 , 카탈로그 : 356640 , Thermo Fisher Scientific ™ 에서 구함 ) 에 웰 당 100 μ L 의 DMEM ( DMEM 고포 도당 ( 카탈로그 : 11 - 965 - 092 ) + 10 % HI - FBS ( 카탈로그 : 10082 - 147 ) , 1 x MEM 비 - 필수 아미노산 용액 ( 카탈로그 : 11 - 140 - 050 ) , 1 mM 피 루 베이트 나트륨 ( 카탈로그 : 11 - 360 - 070 ) , 및 1 x 페니실린 - 스트렙토마이신 - 글루타민 ( 카탈로그 : 10 - 378 - 016 ) ( 모두 Thermo Fisher Scientific ™ 에서 구함 ) 에서 30 , 000 의 밀도 로 도말 되 었 고 , 37 ℃ 에서 5 % CO 2 농도 에서 유지 되 었 다 . 세포 를 플 레이팅 한 지 4 - 5 시간 후 에 , hTau 및 항 - Tau 항체 를 함유 하 는 단백질 씨드 를 Lipofectamine ® 2000 을 사용 하 여 공동 - 형질 감염 시켰 다 . 각 웰 에 는 알츠하이머 병 ( AD ) 환자 뇌 조직 또는 연령 - 일치 되 는 건강 한 대 조군 뇌 조직 ( Banner Health ® 에서 구함 , 그리고 ELISAs 와 같이 상기 에서 기술 된 동일 한 프로토콜 을 사용 하 여 준비 ) 의 PBS - 가용성 분획 과 1 μ g 전체 단백질 ( 약 0 . 2 ng Tau 단백질 ) , 및 항 - Tau 또는 대 조군 항 - RSV 항체 ( 2 μ g ) 이 포함 되 며 , 이 는 25 μ l Opti - MEM ™ ( 카탈로그 : 31 - 985 - 088 , Thermo Fisher Scientific ™ 에서 구함 ) 에서 희석 되 며 , 37 ℃ 에서 20 분 간 항온 처리 되 었 다 . 0 . 5 μ l Lipofecatmine ® 2000 ( 카탈로그 : 11 - 668 - 019 , Thermo Fisher Scientific ™ 에서 구함 ) 을 함유 하 는 25 μ L Opti - MEM ™ 를 상기 단백질 - 항체 혼합물 에 추가 하 고 , 실온 에서 10 분 동안 더 항온 처리 하 였 다 . FRET 센서 세포 의 DMEM 는 그 다음 형질 감염 혼합물 ( 웰 당 단백질 씨드 ( 1 μ g 전체 단백질 ) , 항체 ( 2 μ g ) , 및 Lipofectamine ® 2000 ( 0 . 5 μ l ) 를 포함 하 는 50 μ L Opti - MEM ™) 로 전적 으로 대체 되 었 고 , 및 FRET 센서 세포 는 37 ℃ 에서 5 % CO 2 농도 와 함께 , 24 시간 동안 유지 되 었 다 . 항체 와 함께 , 또는 항체 없이 단백질 씨드 로 형질 감염 된 FRET 센서 세포 는 4 % PFA ( 카탈로그 : 15714 - S , Electron Microscopy Sciences ) 및 4 % 슈 크로스 ( 카탈로그 : S 5 - 3 , Thermo Fisher Scientific ™ 에서 구함 ) 를 함유 한 1 x PBS ( 카탈로그 : P 0191 , Teknova ) 에 15 분 실온 에서 고정 시키 고 , 이어서 1 x PBS 로 4 x 세척 되 었 다 .