GEVO 1780 은 피루브산 을 아 이소 부탄올 로 변환 시키 는 효소 경로 를 암호 화 하 는 두 개 의 플라스미드 상 의 유전자 들 을 포함 하 는 변형 된 박테리아 촉매 이 다 . 생체 촉매 GEVO 1780 이 약 30 ℃ 에서 촉매 성장 에 적절 한 배지 에서 포도당 과 접촉 될 때 , 생체 촉매 는 포도당 으로부터 아 이소 부탄올 을 생산 했 다 . 하루 밤 동안 종군 배양 은 냉동고 로부터 GEVO 1780 세포 를 갖 는 250 ㎖ 의 삼각 플라스크 ( Erlenmeyer flask ) 에서 85 g / L 의 포도당 , 20 g / L 의 효소 추출물 , 20 μ M 의 구연산 철 , 5 . 72 mg / L 의 H 3 BO 3 , 3 . 62 mg / L 의 MnCl 2 · 4 H 2 O , 0 . 444 mg / L 의 ZnSO 4 · 7 H 2 O , 0 . 78 mg / L 의 Na 2 MnO 4 · 2 H 2 O , 0 . 158 mg / L 의 CuSO 4 · 5 H 2 O , 0 . 0988 mg / L 의 CoCl 2 · 6 H 2 O , NaHPO 4 6 . 0 g / L , KH 2 PO 4 3 . 0 g / L , NaCl 0 . 5 g / L , NH 4 Cl 2 . 0 g / L , MgSO 4 0 . 0444 g / L 및 CaCl 2 0 . 00481 g / L 으로 이루어진 40 mL 의 변형 된 M 9 배지 로 약 0 . 05 의 배양액 OD 600 에서 시작 되 었 다 . 종군 배양 은 30 ℃ 쉐이 커 에서 250 rpm 으로 약 14 시간 동안 성장 되 었 다 . 다음 으로 종군 배양 중 일부 는 0 . 1 의 초기 배양 OD 600 을 달성 하 기 위하 여 약 1500 mL 의 변형 된 M 9 배지 를 포함 하 는 2000 mL 의 DasGip 발효 용기 로 이송 되 었 다 . 발효 용기 는 베이스 의 첨가 , 약 30 ℃ 의 온도 , 용해 된 산소 및 교반 ( agitation ) 을 통하 여 pH 를 6 . 5 에서 감시 하 고 제어 하 기 위하 여 컴퓨터 제어 시스템 에 연결 되 었 다 . 이 용기 는 최소 400 rpm 의 교반 으로 교반 되 고 , 교반 은 OD 600 이 약 1 . 0 이 될 때 까지 25 sL / h 의 공기 분무 ( air sparge ) 를 사용 하 여 약 50 % 의 용해 된 산소 함량 을 유지 하 도록 변경 된다 . 다음 으로 용기 는 0 . 1 mM IPTG 가 도입 되 었 다 . 약 8 내지 10 시간 동안 의 계속 적 인 성장 후 , 용해 된 산소 함량 은 400 rpm 의 최소 교반 및 10 sl / h 공기 흐름 ( airflow ) 으로 5 % 까지 감소 되 었 다 . GC - MS 분석 에 의한 발효 용기 방출 가스 의 연속 적 인 측정 이 실험 동안 , 산소 , 아이 소 부탄올 , 에탄올 및 이산화 탄소 에 대하 여 수행 되 었 다 . 샘플 들 은 실험 동안 발효 용기 로부터 무균 적 으로 제거 되 었 으며 , 발효 액 내 에 OD 600 , 포도당 농도 및 아 이소부탄 올 농도 를 측정 하 기 위하 여 사용 되 었 다 . 실험 동안 , 사전 - 성장 및 사전 - 유도 된 생체 촉매 세포 들 의 보충 제 가 실험 시작 후 3 회 , 즉 21 시간 , 38 시간 및 46 . 3 시간 에 농축 액 으로 추가 되 었 다 . 이 세포 들 은 상술 한 것 과 동일 한 균주 및 플라스미드 들 이 며 , 발효기 에 사용 된다 . 보충 된 세포 들 은 2 . 8 L 의 삼각 플라스크 ( Fernbach flask ) 에서 1 L 의 배양액 으로 성장 되 었 고 , 85 g / L 의 포도당 을 구비 한 변형 된 M 9 배지 에서 250 RPM 으로 30 ℃ 에서 배양 되 었 다 . 배양액 은 0 . 1 mM IPTG 로 접종 시 도입 되 었 다 . 세포 들 이 약 4 . 0 내지 5 . 0 의 OD 600 에 도달 하 였을 때 , 배양액 은 원심 분리 에 의해 농축 되 고 다음 으로 발효기 에 추가 된다 . DI 워터 내 에 500 g / L 의 무균 포도당 공급 이 발효기 내 에서 약 30 g / L 이상 의 포도당 농도 를 유지 하 기 위하 여 12 시간 보다 큰 시간 의 실험 의 생산 구간 동안 간헐 적 으로 사용 되 었 다 .