제 2 면역 화 시리즈 에 대한 1 차 스크린 은 항 - NKG 2 D 특이 적 항체 의 존재 에 대하 여 테스트 하 기 위한 직접 ELISA 이 었 다 . 간단히 말 해서 , maxisorp 플레이트 를 1 - 2 mg / ml hFc - NKG 2 D ( R & D Systems ) 로 밤새 PBS 에서 4 ℃ 에서 코팅 한 다음 PBS , 0 . 05 % Tween 20 , 5 % 닭 의 혈청 으로 30 - 60 분 동안 실온 에서 블로킹 함 으로써 ELISA 를 행하 였 다 . 이어서 플레이트 를 50 μ l 하이브리도마 상청 액 및 50 μ l 블로킹 완충액 과 함께 인 큐 베이 션 하 고 , 산양 - 항 - 사람 IgG - HRP ( Bethyl , A 80 - 115 P ) 를 사용 하 여 블로킹 완충액 에서 NKG 2 D - 특이 적 항체 를 검출 하 였 다 . 이 들 인 큐 베이 션 을 1 시간 동안 실온 에서 행하 고 , 각 단계 사이 에 플레이트 를 PBS , 0 . 05 % Tween 20 으로 세정 하 였 다 . ABTS 기질 을 사용 하 여 결합 된 항체 를 시각 화 하 였 다 ( Moss Inc , product : ABTS - 1000 ) . 플레이트 를 415 nm 에서 Molecular Devices Software 로 판독 하 였 다 .