동결 보존 된 세포 는 37 ℃ 수조 에서 1 분 간 신속히 해동 하 고 , 10 mL 폴리프로필렌 튜브 에 옮겼 다 . 일정 하 게 혼합 하 면서 적절 한 배지 약 3 mL 를 상기 세포 에 점 적 첨가 하 고 , 최종 부피 가 10 mL 가 되 도록 하 였 다 . 세포 를 4 ℃ 에서 5 분 간 400 x g 로 원심 분리 하 여 펠 렛 화 하 고 , 상청 액 을 흡인 하 였 다 . 잔류 DMSO 를 확실히 제거 하 기 위해 , 세포 를 매질 중 에 세척 시키 고 , 전술 한 바 와 같이 원심 분리 하 였 다 . 세포 를 최종 부피 10 mL 로 재 부유 시키 고 , 5 % CO 2 존재 하 에 37 ℃, 습식 배양기 에 접종 하 기 전 에 , 75 cm 2 플라스크 에 접종 하 였 다 .