미성숙 CD 4 + T 세포 와 메모리 CD 4 + T 세포 ( 순 도 각 > 99 %) 를 본 발명 이 속한 기술 분야 의 지식 을 습득 한 자 들 이 이해 하 는 것 처럼 CD 4 + T 세포 분리 키트 II ( 밀트 네이 바이오 텍 ( Miltenyi Biotec ) ) 를 이용 하 여 PBMC 로부터 얻 어 내 고 셀 소팅 한단 ( 미성숙 T 세포 는 CD 4 + CD 45 RA + CD 45 RO - CD 25 - 분획 , CD 4 + CD 45 RA - CD 45 RO + CD 25 - 분획 은 메모리 T 세포 ) . 본 발명 이 속한 기술 분야 의 지식 을 습득 한 자 들 이 이해 하 는 것 처럼 , 4 x 104 개 의 신선 하 게 순 화 한 동종 의 미성숙 CD 4 + T 세포 를 인간 유래 재조합 OX 40 L ( R & D , 100 ng / ml ) 의 존재 또는 부 재하 에 둥근 바닥 96 - 웰 배양 접시 에서 7 일 간 미성숙 의 또는 배양 한 DC ( DC 와 T 비율 1 : 10 ) 과 함께 배양 한다 . 본 발명 이 속한 기술 분야 의 지식 을 습득 한 자 들 이 이해 하 는 것 처럼 순화 한 CD 4 + T 세포 들 또한 수용성 항 - CD 28 단일 클론 항체 ( CD 28 . 2 , 1 ㎍/ ml ) 과 IL - 2 ( 50 U / ml , R & D ) 의 존재 하 에서 IL - 12 ( 10 ng / ml , R & D ) , IL - 4 ( 25 ng / ml , R & D ) , 또는 덱사메타손 ( dexamethasone ) ( 5 x 10 - 8 M , 라이프 테크놀로지 ( Life Technologies ) ) 과 1 알파 , 25 - 디하 이드 록 시 비타민 D 3 ( 10 - 7 M ) 의 혼합물 과 함께 방사선 을 조사 한 CD 32 / OX 40 L - L 세포 , CD 32 / GITRL - L 세포 , CD 32 / 4 - 1 BBL - L 세포 , 또는 CD 32 - L 세포 에서 항 - CD 3 단일 클론 항체 ( OKT 3 , 0 . 2 ㎍/ ml ) 로 전 코팅 한 48 - 웰 배양 접시 ( T 세포 와 L 세포 비율 2 . 5 : 1 ) 에서 7 일 간 배양 한다 . 본 발명 이 속한 기술 분야 의 지식 을 습득 한 자 들 이 이해 하 는 것 처럼 , 배양 에 는 RPMI 1640 배지 에 10 % FCS , 2 mM L - 글루타민 ( L - glutamine ) , 1 mM 소디 움 파이 루 베이트 ( sodium pyruvate ) , 페니실린 G ( penicillin G ) , 스트렙토마이신 ( streptomycin ) 을 첨가 한 것 을 사용 하 였 다 .