FAS 수용체 는 Fas 리간드 에 의한 수용체 의 가교 에 의해 프로그램 화 된 세포 사멸 ( 아 폽 토 시스 ) 을 유도 하 는 세포 표면 상 의 사멸 수용체 이 다 ( Wajant et al . , 2002 Science 296 ( 5573 ) : 1635 - 6 ) . FAS 는 또한 아 폽 토 시스 항원 1 ( APO - 1 또는 APT ) , 분화 클러스터 95 ( CD 95 ) 또는 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼 패밀리 구성원 6 ( TNFRSF 6 ) 으로 공지 되 어 있 다 . K 326 W / E 333 S / E 430 G 삼중 돌연변이 를 함유 하 는 항 - FAS 항체 에 의한 CDC 를 FAS - 양성 WIL 2 - S B - 림프구 에 대한 시험관 내 CDC 검정 에서 분석 하 였 다 . 상이 한 FAS 항체 IgG 1 - FAS - E 09 , IgG 1 - CD 95 - APO 1 및 IgG 1 - CD 95 - HFE 7 A 에 C 1 q 결합 - 증진 돌연변이 K 326 W E 333 S 와 조합 하 여 육량 체화 - 증진 돌연변이 E 430 G 를 도입 하 는 것 을 본질 적 으로 실시 예 26 에 기재 된 바 와 같이 WIL 2 - S SF 세포 를 사용 하 여 CDC 검정 에서 연구 하 였 다 . 간략 하 게 , 진탕기 상 에서 실온 에서 15 분 동안 RPMI - 1640 배지 내 30 μ L WIL 2 - S SF 세포 ( 3 . 33 x 106 개 세포 / mL ) 를 50 μ L 의 일련 의 농도 의 항체 ( 3 배 희석 으로 0 . 003 - 10 . 0 μ g / mL 최종 농도 ) 와 함께 둥근 - 바닥 96 - 웰 플레이트 ( 0 . 1 x 106 개 세포 / 웰 ) 에서 사전 - 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 20 μ L 정상 인간 혈청 을 보체 의 공급원 으로서 첨가 하 고 ( 20 % 최종 농도 ) , 37 ℃ 인큐베이터 에서 45 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 얼음 상 에 놓 음 으로써 반응 을 정지 시켰 다 . 세포 용해 를 아이오딘화 프로 피 듐 염색 에 의해 결정 하 였 다 . 샘플 을 아이큐 스 크리너 를 사용 하 여 유동 세포 측정 법 에 의해 분석 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 로그 - 변환 된 농도 축 을 갖 는 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 모든 3 종 의 야생 형 항 - FAS 항체 IgG 1 - FAS - E 09 ( 도 27 A ) , IgG 1 - CD 95 - APO 1 ( 도 27 B ) 및 IgG 1 - CD 95 - HFE 7 A ( 도 27 C ) 는 음성 대 조군 항체 IgG 1 - b 12 와 유사 한 CDC 를 유도 하 지 않 았 다 . Fc - Fc - 증진 돌연변이 ( E 430 G ) 또는 C 1 q 결합 - 증진 돌연변이 ( K 326 W / E 333 S ) 를 갖 는 IgG 1 - FAS - E 09 는 CDC 를 유도 한다 . IgG 1 - FAS - E 09 에서 E 430 G 를 K 326 W / E 333 S 와 조합 하 는 것 은 IgG 1 - FAS - E 09 - E 345 R / E 430 G / S 440 Y 와 유사 한 최대 CDC 를 유발 하 였 다 . IgG 1 - CD 95 - APO 1 에서 유사 한 패턴 이 관찰 되 었 으며 , 여기 서 IgG 1 - CD 95 - APO 1 - E 430 G 는 CDC 를 유도 하 고 IgG 1 - FAS - E 09 - K 326 W / E 333 S / E 430 G 는 CDC 를 추가 로 강화 시킬 수 있 다 . 항체 IgG 1 - CD 95 - HFE 7 A 의 경우 돌연변이 E 430 G 의 부가 는 CDC 에 대해 효과 를 나타내 지 않 았 지만 , 삼중 돌연변이 K 326 W / E 333 S / E 430 G 를 갖 는 IgG 1 - CD 95 - HFE 7 A 는 CDC 를 최대 용해로 완전히 회복 시켰 다 .