WM 266 . 4 흑색종 세포 의 배 양물 을 5 % CO 2 수포화 ( water saturated ) 분위기 하 에서 37 ℃ 에서 DMEM / 10 % 우태 아 혈청 에 일상 적 으로 배양 하 였 다 . 합류 되 기 전 에 배 양물 을 보조 배양 ( sub - culturing ) 에 의해 가속 성장기 로 유지 하 였 다 ( 3 내지 5 일 간격 ) . 5 ㎖ 의 상업 적 인 트립신 EDTA 포함 80 ㎠ 조직 배양 플라스크 를 수거 하 여 단일 세포 현탁액 을 제조 하 였 다 . 5 분 후 , 탈착 된 세포 를 5 ㎖ 의 완전 보충 배양 매질 과 혼합 하 고 , 원심 펠 렛 팅 하 였 다 ( 7 분 동안 1 , 000 rpm ) ) . 상청 액 을 흡인 한 후 , 세포 펠 렛 을 10 ㎖ 의 신선 한 매질 에 재현 탁 시키 고 , 19 게이지 주사 를 통해 5 회 전부 피 를 상하 로 움직여서 세포 를 완전히 분해 하 였 다 . 혈구계 ( 1 / 10 희석 ) 를 이용 하 여 세포 의 농도 를 측정 하 였 다 . 세포 현탁액 을 10 , 000 / ㎖ 로 희석 하 여 시험 수 의 적어도 2 배 과량 을 제공 하 는 적절 한 부피 , 통상 적 으로 100 내지 200 ㎖ 를 제조 하 고 , 프로그램 화 가능 8 채널 연동 펌프 를 이용 하 여 100 ㎕/ 웰 을 96 웰 플레이트 에 분배 하 여 1000 세포 / 웰 을 얻 고 , 컬럼 12 를 공 상태 로 두 었 다 . 플레이트 를 24 시간 동안 항온 처리 기 에 되돌려서 세포 를 재 부착 시켰 다 .