본 발명 의 바이오 마커 조합 의 유방암 진단 의 정확도 를 확인 하 기 위하 여 , 유방암 환자 들 과 정상 대 조군 들 로부터 얻 은 혈액 시료 에서 혈장 을 분리 하 고 , Bradford assay 를 통하 여 총 단백질 을 정량 하 였 다 . 이 중 총 단백질 200 ㎍ 을 우 레아 ( urea ) 로 변형 시킨 뒤 디 티오 트레이 톨 ( dithiothreitol , DTT ) 로 환원 시키 고 , 이오 도 아세트아미드 ( iodoacetamide ) 를 통해 알킬화 시켰 다 . 이후 , 트립신 을 넣 어 주 어 펩티드 화 시키 고 , C 18 컬럼 을 이용 하 여 염 을 제거 하 였 다 . 내부 표준물질 로 는 펩타이드 의 말단 에 붙 어 있 는 아미노산 기 가 동위 원소 로 치환 된 합성품 을 이용 하 였 다 .