한 실시 양태 에 따라 , KD 를 표면 플라스몬 공명 을 이용 하 여 측정 한다 . 예 를 들 면 , 항원 고정 을 위한 CM 5 칩 과 함께 25 ℃ 에서 비아 코어 ( BIACORE : 등록 상표 ) T 100 기계 ( 지이 헬 쓰 케어 ( GE Healthcare ) ) 를 이용 하 여 이러 한 분석 을 수행 할 수 있 다 . 요약 하 건대 , 카 복시 메틸 화 된 덱스트란 바이오센서 칩 ( CM 5 , 지이 헬 쓰 케어 ) 을 공급자 의 지시 에 따라 N - 에틸 - N '-( 3 - 다이메틸 아미노 프로필 ) - 카 보다 이 이미드 하이드로 클로라이드 ( EDC ) 및 N - 하이드 록 시석 신 이미드 ( NHS ) 로 활성 화 시킨다 . 항 - His 항체 ( 펜 타 His , 퀴아젠 ( Qiagen ) ) 를 10 mM 아세트산나트륨 ( pH 5 ) 으로 40 ㎍/㎖ 까지 희석 한 후 10 ㎕/ 분 의 유속 으로 주입 하 여 약 9000 반응 유닛 ( RU ) 의 커플링 된 단백질 을 달성 한다 . 항 - His 항체 의 주입 후 , 1 M 에탄올아민 을 주입 하 여 비 - 반응 된 기 를 차단 한다 . 그 후 , His - 태 깅된 항원 을 10 ㎕/ 분 의 유속 으로 10 nM 에서 20 초 동안 ( Fab 단편 을 사용 하 여 측정 하 는 경우 ) 또는 20 nM 에서 25 초 동안 ( IgG 항체 를 사용 하 여 측정 하 는 경우 ) 주입 하 고 고정 화 된 항 - His 항체 로 그 의 His 태그 를 통해 포획 한다 . 적합 한 FAP 항원 구축물 의 단백질 및 DNA 서열 은 서열 번호 317 내지 서열 번호 322 에 제시 되 어 있 다 . 동역학 적 측정 을 위해 , 10 mM HEPES , 150 mM NaCl , 3 mM EDTA 및 0 . 05 % 계면 활성제 P 20 ( pH 7 . 4 ) 중 의 항체 의 연속 희석 물 ( Fab 단편 의 경우 6 . 25 nM 내지 200 nM 범위 의 2 배 희석 물 , 또는 IgG 의 경우 3 . 2 pM 내지 10 nM 범위 의 5 배 희석 물 ) 을 25 ℃ 에서 90 ㎕/ 분 의 유속 으로 주입 한다 . 하 기 파라미터 들 이 적용 된다 : 결합 시간 180 초 , 해리 시간 300 초 ( Fab 의 경우 ) 또는 900 초 ( IgG 의 경우 ) , 각각 의 주기 사이 에 60 초 동안 10 mM 글리신 ( pH 2 ) 을 사용 한 재생 . 결합 및 해리 센서 그램 을 동시 에 피팅 함 으로써 단순 1 - 대 - 1 랭뮤어 ( Langmuir ) 결합 모델 ( 비아 코어 ( 등록 상표 ) T 100 평가 소프트웨어 ) 을 이용 하 여 결합 속도 ( kon ) 및 해리 속도 ( koff ) 를 계산 한다 . 평형 해리 상수 ( KD ) 를 비 koff / kon 으로서 계산 한다 . 예 를 들 면 , 문헌 ( Chen et al . , J . Mol . Biol . 293 : 865 - 881 ( 1999 ) ) 을 참조 한다 .