도 1 에 나타낸 바 와 같이 , 본 발명 의 갈 롤기 로 수식 된 히알루론산 유도체 를 제조 하 였 다 . 구체 적 으로 , 히알루론산 ( MW 200 K , Lifecore Biomedical , IL , USA ) 을 물 ( TDW ) 에 완전히 용해 시키 고 , 1 당량 의 NHS ( N - hydroxysuccinimide , Sigma , St . Louis , MO , USA ) 와 1 . 5 당량 의 EDC ( 1 -( 3 - dimethylaminopropyl ) - 3 - ehtylcarbodiimide hydrochloride , Thermo Scientific , Rockford , IL , USA ) 를 첨가 하 였으며 , 이 로부터 30 분 후 , PG 모이 어 티 로서 1 당량 의 5 '- 하이드 록 시도 파민 ( 5 - hydroxydopamine , Sigma ) 을 첨가 하 여 pH 4 ~ 4 . 5 에서 24 시간 동안 반응 시켰 다 . 2 개 의 다른 몰 비 의 반응물 을 HA - PG 컨 쥬 게이트 제조 에 사용 하 였 다 ( HA : EDC : NHS : PG = 1 : 1 . 5 : 1 : 1 or 2 : 1 . 5 : 1 : 1 ) . 이후 , EDC , NHS , 5 '- 하이드 록 시도 파민 을 PBS 및 물 기반 의 투석 ( Cellu / Sep ( 상표명 ) , dialysis membrane ( 6 . 8 kDa cut - off , Membrane Filtration Products Inc . , Seguin , TX , USA ) ) 으로 제거 하 고 , 동결 건조 를 통해 용매 를 증발 시켜 본 발명 의 히알루론산 유도체 를 제조 하 였 다 . 상기 히알루론산 유도체 의 합성 을 확인 하 고자 , FT - IR ( Fourier transform - infrared spectroscopy ) ( Vertex 70 , Bruker , Billerica , MA , USA ) 및 H - NMR ( proton Nuclear magnetic Resonance ) ( Bruker 400 MHz , Bruker ) 로 분석 한 결과 , 도 2 a 에 나타낸 바 와 같이 , 약 1 , 580 cm - 1 에서 1 , 700 cm - 1 파수 영역 에서 의 강한 피크 를 통해 새롭 게 형성 된 아마이드 결합 을 확인 할 수 있 었 으며 , 도 2 b 에 나타낸 바 와 같이 , 6 . 5 ppm 및 3 ppm 부근 의 피크 를 통해 각각 5 '- 하이드 록 시도 파민 의 방향 족 의 벤젠 고리 및 - CH 2 CH 2 - 의 구조 를 확인 할 수 있 었 다 . 상기 결과 로부터 본 발명 의 히알루론산 유도체 는 , 히알루론산 의 카르복시기 와 5 '- 하이드 록 시도 파민 의 아민 기간 형성 된 아마이드 결합 으로 5 '- 하이드 록 시도 파민 이 도입 됨 을 알 수 있 었 다 . HA 골격 에 대한 갈 롤기 의 치환 정도 를 계산 하 기 위해 , HA - PG 컨 쥬 게이트 를 PBS ( pH 5 ) 에 1 ㎎/㎖ 에서 용해 시키 고 용액 의 흡광도 를 283 ㎚ ( UV - visible spectrophotometer ( Cary 100 UV - vis , Varian Inc . , Palo Alto , CA , USA ) 에서 측정 하 였 다 . PG 로 치환 된 HA 내 의 카르복실 시의 % 를 5 - hydroxydopamine solution ( from 1 mg / mL concentration ) 의 연속 희석 을 통해 수득 한 표준 곡선 을 이용 하 여 계산 하 였 다 .