2 B 10 으로부터 유도 된 TNC A 2 에 대한 인간 IgG 1 항체 를 , 실시 예 1 에 기재 된 바 와 같이 GnTIII 및 ManII 를 코딩 하 는 플라스미드 로 동시 - 형질 감염 시켜 당조 작하 였 다 . 이어서 , 당 조작 된 2 B 10 모 항체 및 2 B 10 으로부터 유도 된 친화 성숙 된 인간 IgG 1 항체 를 , 그 들 의 비 - 당 조작 된 야생 형 버전 에 비해 더 우수 한 항체 매개 된 세포성 세포독성 을 매개 하 는 그 들 의 잠재력 에 대해 ADCC 분석 에서 비교 하 였 다 . 요약 하 건대 , U 87 MG 아교 모세포 종 세포 또는 SK - Mel 5 흑색종 세포 를 표적 세포 로서 수집 하 고 세척 하 고 배양 배지 에 재현 탁하 고 37 ℃ 에서 즉석 제조 된 칼 세인 ( Calcein ) AM ( 몰레 큘라 프로브 스 ( Molecular Probes ) ) 으로 30 분 동안 염색 하 고 3 회 세척 하 고 카 운 팅 하 고 300 , 000 개 의 세포 / ㎖ 까지 희석 하 였 다 . 이 현탁액 을 환저 96 - 웰 플레이트 로 옮기 고 ( 30 , 000 개 의 세포 / 웰 ) , 각각 의 항체 희석 물 을 첨가 하 고 10 분 동안 항온 처리 하 여 이펙터 세포 와 의 접촉 전 에 시험 된 항체 와 세포 의 결합 을 촉진 하 였 다 . 이펙터 대 표적 의 비 는 PBMC 의 경우 30 대 1 이 고 , 대안 적 으로 NK 92 세포 가 적용 될 수 있 다 . 동시 - 항온 처리 를 4 시간 동안 수행 하 였 다 . 공격 받 은 세포 의 붕해 후 상청 액 내로 의 락 테이트 데 하이드로 게나 제 ( LDH ) 의 방출 을 판독 치 로서 사용 하 였 다 . 동시 - 배양 상청 액 으로부터 LDH 를 수집 하 고 LDH 검출 키트 ( 로슈 어 플 라이드 사이언스 ) 로 분석 하 였 다 . LDH 효소 에 의한 기질 전환 을 ELISA 흡광 판독기 ( 소프트 맥스 프로 ( SoftMaxPro ) 소프트웨어 , 기준 파장 : 490 nm 대 650 nm ) 로 측정 하 였 다 .