한편 멸균 된 용기 에 담 아 둔 시험 대상 화장료 20 ~ 50 g 에 전 배양 하 여 준비 한 시험 균 을 세균 의 경우 , 최종 농 도 약 1 × 106 CFU 의 균 농도 로 접종 하 고 , 효모 의 경우 , 약 1 × 105 CFU 의 균 농도 로 접종 하 며 , 사상 균 의 경우 , 약 1 × 104 CFU 의 균 농도 로 각각 의 시료 에 접종 한다 . 접종 직후 , 각각 의 시료 를 채취 하 여 , 총호 기성 생 균수 시험 을 수행 하 여 , 세균 은 37 ℃ 에서 24 시간 배양 하 고 효모 는 25 ℃ 배양기 에서 3 일 간 배양 하 고 , 사상 균 은 25 ℃ 배양기 에서 3 일 간 배양 한 후 , 각 시료 에 접종 된 시험 균 의 초기 균수 를 확인 한다 . 이 후 , 접종 된 각각 의 시료 는 실온 에서 보관 하 며 , 1 일 , 2 일 , 3 일 , 7 일 , 14 일 , 28 일 경과 시 마다 , 총 호기성 생 균수 시험 을 통해 시험 균 의 균수 및 사멸 정도 를 확인 하 여 , 화장료 의 방부 활성 을 측정 한다 . 그 결과 를 표 4 에 D - value 값 으로 나타내 었 다 .