K 326 W / E 333 S / E 430 G 돌연변이 와 , 상이 한 세포 - 표면 - 표적 - 결합 된 항체 사이 의 분자 간 Fc - Fc 상호 작용 을 제어 할 수 있 는 다른 Fc - 조작 돌연변이 , 예컨대 상보 적 Fc 돌연변이 쌍 K 439 E ; S 440 K 과 의 상용 성 을 , WIL 2 - S SF 세포 에 대한 시험관 내 생존 율 검정 에서 항 - DR 5 효능 제 항체 조합 IgG 1 - hDR 5 - 01 - K 326 W / E 333 S / E 430 G + IgG 1 - hDR 5 - 05 - K 326 W / E 333 S / E 430 G 를 사용 하 여 시험 하 였 다 . 1 - 일 생존 율 검정 을 본질 적 으로 실시 예 8 에 기재 된 바 와 같이 수행 하 였 다 . 간략 하 게 , 100 μ L 세포 를 96 - 웰 플레이트 내 무 혈청 배지 에 피펫 팅 하 였 다 ( 50 . 000 개 셀 / 웰 ) . 이어서 , 25 μ L 의 일련 의 농도 희석 물 의 항체 샘플 ( 5 배 희석 으로 범위 0 . 0003 - 20 μ g / mL 최종 농도 ) 및 25 μ L 의 정제 된 C 1 q 샘플 ( 2 . 5 μ g / mL 최종 농도 ) 을 세포 에 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 1 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 셀타 이터 글 로 검정 을 사용 하 여 세포 생존 율 을 결정 하 였 다 . 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 발광 을 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 24 는 Fc - Fc - 억제 돌연변이 K 439 E 를 함유 하 는 단일 항체 IgG 1 - hDR 5 - 01 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - K 439 E 가 임의 의 세포 사멸 을 거의 유도 하 지 않 았 다는 것 을 보여준다 . Fc - Fc - 억제 돌연변이 S 440 K 를 함유 하 는 IgG 1 - hDR 5 - 05 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - S 440 K 는 최대 사멸 이 100 % 는 아니 었 지만 , 일부 세포 사멸 을 유도 하 였 다 . 대조 적 으로 , 2 개 의 상보 적 Fc - Fc 제어 돌연변이 K 439 E 및 S 440 K 를 조합 한 , IgG 1 - hDR 5 - 01 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - K 439 E + IgG 1 - hDR 5 - 05 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - S 440 K 둘 다의 조합 은 , 상보 적 Fc - Fc 제어 돌연변이 K 439 E 및 S 440 K 가 없 는 조합 의 경우 와 유사 한 , 효율 적 인 세포 사멸 을 나타냈 다 . K 326 W / E 333 S / E 430 G 돌연변이 를 함유 하 는 항체 조합 ( 상보 적 돌연변이 K 439 E ; S 440 K 를 갖 는 것 및 갖 지 않 는 것 ) ( IgG 1 - hDR 5 - 01 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - K 439 E + IgG 1 - hDR 5 - 05 - K 326 W / E 333 S / E 430 G - S 440 K ) 에 의한 세포 사멸 은 단지 E 430 G Fc - Fc - 증진 돌연변이 만 을 함유 하 는 항체 의 조합 보다 훨씬 더 효율 적 이 었 다 .