BV 147 ( 서열 번호 16 ) 및 BV 148 ( 서열 번호 17 ) 를 사용 하 여 템 플레이트 로서 코 스미드 52 ( 실시 예 1 로부터 의 것 ) 및 Pfu DNA 폴리머 라 제 를 사용 하 면서 표준 PCR 반응 으로 악 티 노신 네마 프레티 오 숨 ( ATCC 31280 ) 으로부터 1423 bp 영역 의 DNA 를 증폭 시켰 다 . 각각 의 올리고 에 5 ' 연장 을 디자인 하 여 증폭 된 단편 의 클로닝 을 보조 할 제한 부위 를 도입 하 였 다 ( 도 4 ) . 증폭 된 PCR 생성물 은 mbcM 의 5 ' 말단 의 30 bp 및 상부 상 동체 의 추가 의 1373 bp 를 암호 화 하 였 다 . 이러 한 1423 bp 단편 을 SmaI 으로 선형 화 된 pUC 19 으로 클로닝 하 여 플라스미드 pWV 309 를 생성 하 였 다 .