PCR 증폭 은 마스터 사이클 러 그래 디언 트 ( Mastercycler gradient ) ( Eppendorf , Hamburg , Germany ) 으로 수행 하 였 다 . PCR 반응 은 95 ℃ 에서 5 분 ( initial denaturation ) , 94 ℃ 에서 45 초 ( denaturation ) , 52 ℃ 에서 45 초 ( annealing ) , 72 ℃ 에서 1 분 ( extension ) , 30 사이클 을 실시 하 였 고 , 72 ℃ 에서 5 분 동안 최종 연장 ( extension ) 을 실시 하 였 다 . 증폭 된 약 1400 bp 의 fragment 를 T 벡터 ( Invitrogen , Carlsbad , CA , USA ) 에 결합 시킨 후 형질 전환 하 였 다 . T 벡터 시퀀싱 프라이머 를 이용 하 여 염기서열 결정 을 수행 하 였으며 , 그 결과 는 BLAST 분석 프로그램 ( http : / / www . ncbi . nlm . nih . gov ) 을 이용 하 여 GenBank ( NCBI , Bethesda , MD , USA ) 의 ribosomal DNA 유전자 시퀀싱 과 비교 하 여 동정 하 였 다 . 결정 된 염기 서열 은 Clustal _ W 및 BioEdit 프로그램 으로 정렬 하 였 고 , 발생 한 gap 은 이후 분석 과정 에서 결여 형질 로 처리 하 였 다 . 염기서열 간 의 유전 적 거리 계산 과 neighbor - joining , maximum - likelihood 및 parsimony 계통수 의 제작 은 Mega 프로그램 을 사용 하 여 수행 하 였 고 계통 군 의 지지 도 를 알아보 기 위해 위 의 세 가지 분석 에 대해 각각 동일 한 사양 으로 bootstrap 분석 하 였 다 ( 1 , 000 replicates ) .