즉 , 외부 소견 상 넙치 의 주요 세균성 질병 으로 보 고 된 연쇄 구 균증 , 에드워드 증 , 비브리오 증 , 활주 세균 증 에 감염 된 것 으로 추정 되 는 넙치 시료 를 대상 으로 실시 하 였 다 . 즉 연쇄 구 균증 원인 균 인 스 트 렙 토코 쿠스 이니 애 ( Streptococcus iniae ) , 스 트 렙 토코 쿠 스파 라우베 리스 ( Streptococcus parauberis ) , 에드워드 증 원인 균 인 에드워드 시엘 라 타 다 ( Edwardsiella tarda ) , 활 주세 균증 원인 균 으로 보 고 된 플렉 시박 터 막 티 무스 ( Flexibacter maritimus ) 를 분리 대상 으로 실시 하 였 다 . 먼저 스 트 렙 토코 쿠스 이니 애 , 스 트 렙 토코 쿠 스파 라우베 리스 , 에드워드 시엘 라 타다 의 분리 는 넙치 를 무균 적 으로 해부 한 후 , 신장 및 간 조직액 을 2 . 5 % NaCl - BHIA ( Difco , USA ) , 2 . 5 % NaCl - SS agar ( Difco , USA ) , 혈액 한 천 배지 평판 에 도말 하 여 30 ± 0 . 5 ℃, 24 ~ 48 시간 배양 후 분리 하 였 다 . 분리 균주 의 동정 은 각각 의 평판 에서 자란 colony 를 대상 으로 MacFaddin ( 2000 ) 의 방법 을 이용 하 여 그람 염색 , 산화 효소 검사 , 카탈라 제 테스트 등 의 생화학 적 성상 시험 을 거쳐 스 트 렙 토코 쿠스 종 . 에드워드 시엘 라 종 으로 간 이동정 후 , PCR 방법 을 이용 해 스 트 렙 토코 쿠스 이니 애 , 스 트 렙 토코 쿠 스파 라우베 리스 , 에드워드 시엘 라타 다로 각각 동정 하 였 다 . 플렉 시박 터 막 티 무스 의 분리 및 동정 은 어류 의 체표 궤양 환부 를 현미경 검경 을 실시 하 여 활주 운동 성 세균 을 확인 후 , Hsu - Shotts 배지 ( Bullock , 1986 ) 에 도말 배양 후 , 담황색 콜로니 를 분리 하 여 생화학 성상 시험 및 PCR 수행 을 통해 동정 하 였 다 . PCR 을 이용 한 분리 균주 의 동정 은 도 2 에 나타낸 프라이머 세트 및 조건 을 이용 하 였 다 . 이 때 PCR 에 사용 할 DNA 의 추출 은 MFX 6100 ( TOYOBO , Japan ) 을 이용 하 였 다 .