각 변이체 의 제작 은 실시 예 4 에 준하 는 방법 , 또는 PCR 을 사용 한 어셈블리 PCR 을 사용 함 으로써 행해졌 다 . 어셈블리 PCR 을 사용 해서 행하 는 방법 은 , 개변 부위 를 포함 하 는 순 쇄 ( 順 鎖 ) 및 역 쇄 ( 逆 鎖 ) 의 서열 을 토대 로 설계 한 올리 고 DNA 의 합성 을 행한다 . 개변 부위 를 포함 하 는 순 쇄 의 올리 고 DNA 와 개변 을 행하 는 유전자 가 삽입 되 어 있 는 벡터 에 결합 하 는 역 쇄 의 올리 고 DNA , 개변 부위 를 포함 하 는 역 쇄 의 올리 고 DNA 와 개변 을 행하 는 유전자 가 삽입 되 어 있 는 벡터 에 결합 하 는 순 쇄 의 올리 고 DNA 를 각각 조합 하 고 , PrimeSTAR ( TAKARA ) 를 사용 하 여 PCR 을 행함 으로써 , 개변 부위 를 포함 하 는 단편 을 5 ' 말단 측 과 3 ' 말단 측 의 2 개 를 제작 하 였 다 . 그 2 개 의 단편 을 어셈블리 PCR 에 의해 서로 연결 함 으로써 , 각 변이체 를 제작 하 였 다 . 제작 된 변이체 를 동물 세포 에 있 어서 삽입 유전자 를 발현 가능 하 게 하 는 발현 벡터 에 삽입 하 고 , 얻 어 진 발현 벡터 의 염기 서열 은 당업자 공지 의 방법 으로 결정 하 였 다 . 항체 의 제작 및 정제 는 실시 예 4 의 방법 에 따라 행하 였 다 .