세포 를 10 % FBS 가 포함 된 MEM 배지 에서 37 ℃, 5 % CO 2 의 환경 에서 배양 하 였 다 . 준비 된 세포 를 다시 2 × 106 세포 / ㎖ 로 φ 100 페트리 디시 에 분주 한 후 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 그 후 각각 1 ㎎, 100 ㎍, 10 ㎍, 1 ㎍, 100 ng , 10 ng , 1 ng , 100 pg , 10 pg 및 1 pg 의 혼합 희 토와 반치 사 농도 인 5 % 의 에탄올 을 첨가 하 여 24 시간 배양 하 여 지질 과산화 정도 와 항산 화 효소 인 슈퍼 옥사이드 디스 뮤 타아 제 ( SOD ) 의 활성 을 측정 하 였 다 . 페트리 디시 에 붙 어 있 는 세포 를 트립신 ( trypsin ) - EDTA 로 떼 어 낸 후 원심 분리 하 여 세포 를 모았 다 . 그 후 초음파 분쇄기 용 완충 용액 ( sonication buffer ) [ 50 mM Tris -/ HCl ( pH 7 . 5 ) , 20 mM HEPES ( N -[ 2 - hydroxyethyl ] piperazin - N '-[ 2 - ethanesulfonic ] acid ) , 1 mM EDTA ( e thylenediaminetetraacetic acid ) , 2 mM PMSF ( phenylmethanesulfonyl fluoride ) , 1 % Triton - X 100 ] 에 옮겨 담 았 다 . 그 후 4 ℃ 에서 1 시간 동안 반응 시킨 후 초음파 분쇄기 ( sonicator ) 로 세포 를 파쇄 하 여 단백질 을 얻 고 , 그 중 일부 는 원심 분리 없이 일정량 을 취한 후 단백질 을 정량 하 여 지질 과산화 측정 용 으로 사용 하 고 , 나머지 는 15 , 000 rpm , 4 ℃ 에서 15 분 간 원심 분리 하 여 SOD 의 활성 측정 에 사용 하 였 다 .