이 방법 들 중 대다수 가 분석 전 몇몇 형태 의 샘플 분리 ( sample fractionation ) 에 의존 하 거나 이 를 필요 로 한다 . 따라서 , 일련 의 잘 정의 된 샘플 집단 에서 통계학 적 으로 관련 이 있 는 바이오 마커 를 확인 하 고 / 발굴 하 도록 설계 된 충분히 효력 이 있 는 연구 를 가능 하 게 하 는데 요구 되 는 샘플 제조 물 은 매우 까다로우 며 , 많 은 비용 이 들 며 , 시간 이 많이 걸린다 . 분리 하 는 동안 , 다양 한 변수 들 이 여러 가지 샘플 내 로 도입 될 수 있 다 . 예 를 들 면 , 잠재 적 마커 는 공정 에 대하 여 불 안정 할 수 있 고 , 마커 의 농도 가 변할 수 있 으며 , 부적절 한 응집 ( aggregation ) 또는 분해 ( disaggregation ) 가 발생 할 수 있 고 , 우발 적 인 샘플 오염 이 발생 할 수 있 으므로 , 초기 질병 에서 예측 되 는 미묘 한 변화 들 이 잘 알려져 있 지 않 다 .