라 이게 이 션 믹스 ( mix ) 를 사용 하 여 XL 1 - Blue 또는 DH 5 알파 수용성 세포 를 형질 전환 시켰 다 . 양성 클론 을 DNA 서열 결정 에 의해 입증 하 였 다 . 구성체 를 BL 21 ( DE 3 ) 을 포함 한 몇몇 이 . 콜라 이 종 에서 발현 시켰 다 . 유도 및 발현 후 에 , 세포 펠 렛 을 - 20 ℃ 에서 동결 시킨 후 , 용해 버퍼 ( 20 mM NaH 2 PO 4 , 10 mM 이미다졸 , 500 mM NaCl , 50 ml 버퍼 당 EDTA 가 없 는 Complete ( 로슈 ( Roche ) ) 1 정제 , 2 mM MgCl 2 , 10 U / ml 벤조 나제 ( 머크 ( Merck ) ) [ pH 7 . 4 ] ) 내 에 재현 탁 시켰 다 . 세포 를 얼음 상 에서 초음파 분해 하 고 , 원심 분리 하 였 다 . 상등 액 을 여과 하 고 Ni - NTA 컬럼 상 으로 로딩 하 였 다 . 컬 럼 을 세척 버퍼 ( 용해 버퍼 와 같 지만 20 mM 이미다졸 을 함유 함 ) 로 세척 한 후 , 용출 버퍼 ( 용해 버퍼 와 같 지만 500 mM 까지 의 이미다졸 을 함유 함 ) 를 사용 하 여 용출 시켰 다 . 샘플 을 Bis - Tris 겔 ( 인비 트로겐 ( Invitrogen ) ) 상 에서 분석 한 후 , Amicon Ultra - 15 튜브 내 에서 농축 시키 고 , 수퍼 덱스 프 렙 ( Superdex prep ) 등급 컬럼 ( 아머샴 ( Amersham ) ) 상 으로 로딩 하 고 , 10 mM Tris 또는 PBS 로 용출 시켰 다 . 샘플 을 다시 Bis - Tris 겔 상 에서 분석 하 였 다 .