염증 매개체 루 코 트리 엔 B 4 ( LTB 4 ) 의 방출 을 자극 하 기 위해 , 분화 되 거나 되 지 않 은 MM 6 세포 ( 1 - 15 x 106 / mL ; 0 . 5 - 1 mL ) 를 25 - 50 μ M 아라키돈산 과 2 - 10 μ M 칼슘 이온 포어 ( ionophore ) A 23187 ( A 23187 은 또한 아라키돈산 없이 사용 할 수 있 음 ) 과 함께 5 - 30 분 간 ( 37 ℃, 칼슘 이 첨가 된 PBS 중 에서 ) 인 큐 베이 션 하 였 다 . 또한 , MM 6 세 포 는 . 입증 된 생물학 적 활성 농도 의 . 아데노신 디 포스 페이트 ( ADP ) , 및 / 또는 트 롬복 산 유사 체 U - 46619 를 이용 하 여 , 전술 한 A 23187 및 / 또는 아라키돈산 첨가 또는 무 첨가 상태 로 자극 하 였 다 . 상기 MM 6 인 큐 베이 션 / 자극 은 또한 ( 건강 한 공 여자 혈액 유래 의 ) 인간 혈소판 존재 하 에 , MM 6 : 혈소판 이 1 : 10 내지 1 `: 10000 인 비율 에서 수행 하 였 다 . 인 큐 베이 션 / 자극 은 , 내부 표준 물질 로서 첨가 한 2 배 부피 의 차가운 메탄올 과 프로스타글란딘 B 2 ( PGB 2 ) 로 중지 시켰 다 . 샘플 을 원심 분리 하 여 , 상층 액 을 물 로 희석 하 여 메탄올 최종 농도 가 30 % 가 되게 하 였 고 , pH 는 3 - 4 로 조정 하 였 다 . 상층 액내 의 아라키돈산 대사산물 은 , 미리 조정한 ( 1 mL 메탄올 -> 1 mL H 2 O ) C 18 고상 컬럼 ( Sorbent Technology , U . K . ) 에서 추출 하 였 다 . 대사산물 을 메탄올 로 용출 시킨 후 , 1 배수 의 물 을 용출 물 에 첨가 하 였 다 . 역상 HPLC 에서 는 각 샘플 76 ㎕ 에 39 ㎕ H 2 O ( 다른 부피 비율 도로 사용 할 수 있 음 ) 를 혼합 하 였 다 . Waters RCM 8 x 10 컬럼 을 메탄올 / 아 세토 니트릴 / H 2 O / 아세트산 ( 30 : 35 : 35 : 0 . 01 v / v ) 으로 유속 1 . 2 mL / min 으로 용리 시켰 다 . PGB 2 및 LTB 4 를 검출 및 정량 하 기 위해 용출 물 의 흡광도 를 270 nm 에서 모니터링 하 였 다 . 시판 되 는 효소 면역 - 분석 키트 를 LTB 4 측정 을 위해 키트 제조사 의 설명서 에 따라 사용 하 였 다 . 제 조사 의 설명서 에 따른 시판 되 는 효소 면역 - 분석 키트 ( EIA / ELISA 키트 ) 를 이용 하 여 , 또한 상기 MM 6 인 큐 베이 션 / 자극 으로부터 수득 한 상층 액 을 염증 매개체 인 프로스타글란딘 E 2 ( PGE 2 ) 및 / 또는 트 롬복 산 B 2 ( TXB 2 ) 의 함량 에 대해 분석 할 수 있 다 .