구체 적 으로 , 상기 에서 구축 된 Fc ε RI α - NTIG - IL - 10 Vm 융합 단백질 을 암호 화 하 는 유전자 컨스 트럭 트 를 포함 하 는 발현 벡터 pAD 15 발현 벡터 ( WO 2015 / 009052 A ) 를 CHO DG 44 ( from Dr . Chasin , Columbia University , USA ) 세포 에 Neon ㄾ transfection system 을 이용 하 여 형질 주입 하 였 다 . 1 차 스크리닝 과정 으로 HT ( 5 - hydroxytrypamine ) 가 없 는 10 % dFBS ( Gibco , USA , 30067 - 334 ) , MEM α ( Gibco , 12561 , USA , Cat No . 12561 - 049 ) , HT +( Gibco , USA , 11067 - 030 ) 배지 를 사용 하 여 HT 선별 을 수행 하 였 다 . 이후 , DHFR ( dihydrofolate reductase ) - 시스템 을 이용 하 여 생산 성 을 증폭 시키 기 위해 , HT 선별 된 클론 들 을 이용 하 여 메토 트렉 세이 트 ( MTX ) 증폭 을 수행 하 였 다 . 높 은 생산 성 의 클론 을 확보 하 기 위해 플레이트 상 에서 미니 풀 의 형태 로 MTX 증폭 을 수행 하 였으며 증폭 이 확인 된 1 종 에 대해 선별 한 후 , LDC ( Limiting Dilution Cloning ; 96 wells , 30 plates ) 를 진행 하 여 최종 세포주 를 확보 하 였 다 .