평형 친화성 계측 이 기존 문헌 에서 전반 적 으로 기술 된 바 와 같이 수행 되 었 다 ( Estep et al . , 위 와 같 음 ) . 간단히 말 하 면 , 용액 평형 적정 ( SET ) 이 50 pM 에서 일정 하 게 유지 된 비오틴 화 된 인간 TIGIT - His 단위체 를 포함 하 는 PBS + 0 . 1 % IgG - 없 는 BSA ( PBSF ) 에서 수행 되 고 , 그리고 대략 5 nM 에서 시작 하 는 항체 의 3 - 내지 5 - 배 계열 희석 액 과 함께 배양 되 었 다 . 항체 ( PBS 에서 20 nM ) 가 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 또는 실온 에서 30 분 동안 표준 결합 MSD - ECL 평판 위 에 코팅 되 었 다 . 평판 은 이후 , 700 rpm 에서 진탕 하 면서 30 분 동안 1 % BSA 로 차단 되 었 고 , 그 이후 에 세 척 완충액 ( PBSF + 0 . 05 % Tween 20 ) 으로 3 회 세 척 이 이어졌 다 . SET 표본 이 700 rpm 에서 진탕 하 면서 평판 위 에 150 s 동안 적용 되 고 배양 되 었 고 , 그 이후 에 1 회 세 척 이 이어졌 다 . 평판 에서 포획 된 항원 은 3 분 동안 평판 위 에서 배양 에 의해 , PBSF 에서 250 ng / ml 술포 태그 - 표지 화 된 스 트 렙 타 비딘 으로 검출 되 었 다 . 이 들 평판 은 세 척 완충액 으로 3 회 세척 되 고 , 그리고 이후 , 계면 활성제 를 포함 하 는 1 x 판독 완충액 T 를 이용 하 여 MSD 섹터 영상 장치 2400 기기 에서 판독 되 었 다 . 유리 항원 퍼센트 가 Prism 에서 적정 된 항체 의 함수 로서 플로팅 되 고 , 그리고 KD 를 도출 하 기 위해 이 차 방정식 에 적합 되 었 다 . 처리 량 을 향상 시키 기 위해 , 액체 취급 로봇 이 SET 표본 준비 를 비롯 한 MSD - SET 실험 내내 이용 되 었 다 .