0 . 1 % SDS 폴리 아크릴아미드 전기영동 상 의 분리 겔 과 상단 겔 은 각각 16 % 및 3 % 를 사용 하 였 고 , 전기영동 시 전류 는 55 mA ( Powersupply ; 스웨덴 Pharmacia 사 제품 ) 로 공급 하 고 , 온도 는 쿨링 시스템 ( cooling system ; 스웨덴 LKB 사 제품 ) 을 사용 하 여 4 ℃ 를 유지 하 며 약 4 ~ 5 시간 동안 런닝 하 였 다 . 또한 , 전기영동 시스템 은 Hoefer SE 600 ( 미국 Hoefer - Pharmacia 사 제품 ) 을 사용 하 였 다 . 상기 전기영동 이 끝난 다음 얻 은 겔 은 트랜스퍼 완충 용액 ( transfer buffer ; 39 mM 글리신 2 . 9 g , 48 mM 트리스 베이스 5 . 8 g , 0 . 037 % SDS , 20 % 메탄올 , pH 8 . 3 ) 에 미리 적신 니트 로 셀룰로스 멤 브레인 ( nitrocellulose membrane ; NC ) 을 위 에 올려 놓 고 파이버 패드 ( fiber pad ) 에 넣 어 조립 시켰 다 . 그러 고 나 서 면역 블 럿팅 트랜스퍼 카세트 ( immunoblotting transfer cassette ) 를 니트 로 셀룰로스 멤 브레인 이 양극 ( positive charge ) 방향 으로 오 고 , 겔 이 음극 ( 음성 charge ) 방향 으로 오 도록 맞추 어 트랜스퍼 챔버 에 넣 어 두 었 다 . 전류 는 1 A 로 공급 하 고 , 온도 는 쿨링 시스템 을 사용 하 여 4 ℃ 를 유지 하 면서 1 시간 30 분 동안 트랜스퍼 시켰 다 . 상기 니트 로 셀룰로스 멤 브레인 은 블로킹 완충 용액 ( blocking buffer ; 5 % 비 지방 분유 ( nonfat dry milk ) 를 녹인 TBS - T 완충 용액 ( 20 mM 트리스 - HCl pH 7 . 5 , 150 mM NaCl , 0 . 05 % 트윈 - 20 ) ) 약 200 ㎖ 에 1 시간 동안 Red - Rocker ( Hoefer ; CA , USA ) 를 사용 하 여 로킹 하 고 항체 ( antibody ) 의 비 특이 적 결합 ( non - specific binding ) 을 블로킹 한 다음 , 다시 TBS - T 완충 용액 으로 15 분 동안 1 회 , 10 분 동안 2 회 세척 하 였 다 .