96 웰 의 배양 플레이트 에 인간 간 장암 유래 의 세포 주인 HepG 2 / C 3 A 세포 ( ATCC 보다 입수 , ATCC 번호 : CRL - 10741 ) 를 , 10 , 000 세포 / 80 μ L / 웰 이 되 도록 파종 하 였 다 . 배지 는 , 10 % 소 태자 혈청 ( FBS ) , 1 mM 피루브산 나트륨 ( 나카 라이 테스 크 사 제조 , 카탈로그 번호 : 06977 - 34 ) , 1 % MEM Non - Essential Amino Acids ( 서모 피셔 사이 엔 티 픽사 제조 , 카탈로그 번호 : 11140 - 050 ) 를 포함 하 는 MEM 배지 ( 나카 라이 테스 크 사 제조 , 카탈로그 번호 : 21442 - 25 ) 를 이용 하 였 다 . 2 본 쇄 핵산 은 , 표 2 에 기재 된 것 을 진 ( gene ) 디자인 으로 합성 하 여 이용 하 였 다 . 구체 적 으로 는 서열 번호 2828 ∼ 2899 에 나타내 는 리보 뉴클레오티드 로 이루어지 는 센스 쇄 , 서열 번호 2900 ∼ 2971 에 나타내 는 리보 뉴클레오티드 로 이루어지 는 안티 센스 쇄 를 어닐링 시킨 2 본 쇄 핵산 으로 구성 된다 [ 서열 번호 n ( n = 2828 ∼ 2899 ) 에 나타내 는 센스 쇄 와 서열 번호 [ n + 72 ] 에 나타내 는 안티 센스 쇄 가 쌍 을 이룬다 ] . 이 표 2 에 기재 된 2 본 쇄 핵산 과 RNAiMax 트랜스펙션 시약 ( 서모 피셔 사이 엔 티 픽사 제조 , 카탈로그 번호 : 13778 - 150 ) 을 Opti - MEM 배지 ( 서모 피셔 사이 엔 티 픽사 제조 , 카탈로그 번호 : 31985 - 070 ) 로 희석 하 여 , 2 본 쇄 핵산 의 종 농도 가 10 nM 가 되 도록 20 μ L 의 siRNA / RNAiMax 혼합액 을 각각 96 웰 의 배양 플레이트 에 첨가 하 여 , 37 ℃, 5 % CO 2 조건 하 에서 24 시간 배양 하 였 다 . 그 후 , 세포 를 PBS ( Phosphate buffered saline ) 로 세정 하 여 , 각각 의 플레이트 로부터 SuperPrep ( 등록 상표 ) Cell Lysis & RT Kit for qPCR kit ( 도요 보사 제조 , 카탈로그 번호 : SCQ - 101 ) 를 이용 하 여 제품 에 첨부 된 설명서 에 기재 된 방법 에 따라 cDNA 를 합성 하 였 다 . 이 cDNA 4 μ L 을 MicroAmpOptical 384 웰 플레이트 ( 어 플 라이드 바이오 시스템스 사 제조 , 카탈로그 번호 : 4309849 ) 에 부가 하 고 , 더욱 10 μ L 의 TaqMan ( 등록 상표 ) Gene Expression Master Mix ( 어 플 라이드 바이오 시스템스 사 제조 , 카탈로그 번호 4369016 ) , 4 μ L 의 UltraPure Distilled Water ( 서모 피셔 사이 엔 티 픽사 제조 , 카탈로그 번호 : 10977 - 015 ) , 1 μ L 의 human MASP 2 프로브 ( 어 플 라이드 바이오 시스템스 사 제조 , Hs 00198244 _ m 1 ) , 1 μ L 의 human GAPDH 프로브 ( 어 플 라이드 바이오 시스템스 사 제조 , Hs 02786624 _ g 1 ) 를 첨가 하 였 다 . QuantStudio ( 등록 상표 ) 12 K Flex 리얼타임 PCR 시스템 을 이용 하 여 , human MASP 2 유전자 및 human GAPDH ( D - glyceraldehyde - 3 - phosphate dehydrogenase ) 유전자 의 리얼타임 PCR 을 행하 였 다 . GAPDH 는 구성 적 발현 유전자 이 며 내부 대조 로서 측정 하 여 , MASP 2 발 현량 을 보정 하 였 다 . siRNA 를 첨가 하 지 않 고 트랜스펙션 시약 만 으로 HepG 2 / C 3 A 세포 를 처리 하 였을 때 의 MASP 2 mRNA 량 을 1 . 0 으로 하 여 , 각 2 본 쇄 핵산 을 도입 하 였을 때 의 MASP 2 mRNA 상대 발 현량 을 산출 하 였 다 . 본 실험 을 2 또는 4 회 행하 여 , MASP 2 mRNA 상대 발 현량 의 평균값 을 표 2 에 나타내 었 였 다 . 표 2 중 의 비고란 에 있 어서 , * 표시 는 4 회 의 실험 의 평균값 , 그 이외 는 2 회 의 실험 의 평균값 을 나타내 었 다 .