다음 으로 , 랄 록 시 펜 을 농도 별 로 처리 하 고 총 콜라겐 발현 변화 를 확인 하 였 다 . 상기 실시 예 5 - 3 과 동일 하 게 1 x 106 개 의 섬 유아 세포 를 100 mm 배양 접시 에 도말 하 고 , 약물 을 처리 한 뒤 , 유지 및 확장 하 였 다 . 콜라겐 발현 은 Hydroxyproline assay kit ( Sigma ) 를 이용 하 였 다 . 세포 또는 세포 배양액 을 수확 하 여 염산 과 1 : 1 의 비율 로 혼합 하 고 , 120 ℃ 에서 3 시간 배양 한다 . 배양 후 , 5 mg 의 activated charcoal 을 넣 어 준 뒤 , 13 , 000 xg 에서 5 분 간 원심 분리 하 여 상층 액 만 분리 하 였 다 . 수확 된 상층 액 을 96 웰 플레이트 로 옮겨 준 뒤 60 ℃ 에서 완전히 건조 하 였 다 . Chloramine T / Oxidation Buffer 혼합 제 를 웰 에 넣 고 실온 에서 5 분 간 배양 한다 . 희석 한 DMAB Reagent 를 넣 고 60 ℃ 에서 90 분 간 배양 한 뒤 , 560 nm 의 흡광도 를 측정 하 였 다 .