우리 는 용액 에서 사량 체 트립 타제 에 대한 Fab hu 31 A . v 11 결 합의 화학 양론 을 결정 하 였 다 . 활성 사량 체 트립 타제 베타 1 은 각각 의 프로 토머 에 2 - 배 몰 과잉 의 Fab hu 31 A . v 11 과 혼합 되 었 고 복합체 형성 은 평형 에 도달 하 도록 허용 되 었 다 . 사량 체가 비 - 공유 적 으로 조립 되 기 때문 에 , 사량 체 구조 상 의 각각 의 항체 의 해리 효과 는 크기 배제 크로마토그래피 ( SEC ) 로 분석 되 었 고 개별 단백질 피크 의 분자량 및 체류 시간 / 용적 은 결정 되 었 다 . 단백질 을 함유 하 는 분획 은 단백질 성분 을 결정 하 기 위해 SDS - PAGE 를 특징 으로 하 였 다 ( 도 3 A ) . 사량 체 트립 타제 단독 의 체류 시간 은 Fab hu 31 A . v 11 과 복합체 인 경우 ( tr = 28 . 1 분 , 실행 3 , 피크 3 ) 보다 상당히 더 짧 았 다 ( tr = 26 분 , 실행 1 , 피크 1 ) 다중 - 각 광 산란 ( MALS ) 와 조합 으로 추가 의 SEC 분석 은 용출 된 단백질 복합체 의 분자량 을 결정 하 기 위해 수행 되 었 다 . 사량 체 트립 타제 는 MALS 에 따른 120 kDa ± 0 . 2 % 의 분자량 을 가졌 고 , 이 는 ( 당화 제외 ) 아미노산 서열 에 기반 된 109 . 537 kDa 의 이론 적 분자량 과 일치 한다 . Fab hu 31 A . v 11 과 복합체 에서 트립 타제 를 함유 하 는 단백질 피크 는 MALS 에 의해 67 . 7 kDa ± 3 % ( 피크 3 ) 인 것 으로 측정 되 었 고 , 이 는 1 Fab 에 결합 된 1 트립 타제 단량체 를 포함 하 는 복합체 를 반영 한다 . 이것 은 트립 타제 사량 체가 Fab hu 31 A . v 11 에 결합 시 단량체 로 해리 하 는 것 을 나타내 고 , 이 는 hu 31 A . v 11 Fab 의 억제 활성 및 결정 구조 ( 참고 실시 예 3 ) 에 의해 추가 로 확증 된다 .