파니 투 무 맙 - CD 19 및 LY 2875358 - CD 19 융합 단백질 의 발현 수준 은 융합 단백질 을 발현 하 는 세포 의 배 양물 로부터 웨스턴 블롯 분석 에 의해 결정 되 었 다 . 형질 감염 후 48 시간 에 세포 배 양물 로부터 1 ml 의 상등 액 을 취하 였 다 . 세포 배양 배지 는 , 부드럽 게 흔들 면서 , PBS ( GE Healthcare ) 중 20 ㎕ 50 % r 단백질 A 세파 로 오스 패스트 플로우 ( rProtein A Sepharose Fast Flow ) 슬러시 와 함께 실온 에서 3 시간 동안 혼합 되 었 다 . 결합 된 캡쳐 된 항체 를 갖 는 단백질 - A 비즈 를 원심 분리 에 의해 회전 감소 시키 고 , PBS 로 세척 하 였 다 . 세 척 단계 를 반복 하 였 다 . 이후 , 환원제 로서 DTT 를 포함 하 는 , 20 ㎕ 2 ×Laemmli Sample 완충액 ( Bio - Rad ) 을 비즈 에 의해 캡쳐 된 임의 의 항체 를 제거 하 기 위하 여 넣 었 다 . 환원 조건 하 에서 단백질 을 분리 하 기 위하 여 Bio - Rad 의 4 ~ 20 % 폴리 아크릴아미드 겔 상 에 용해 물 ( 10 ㎕) 을 넣 었 다 . 중쇄 및 경쇄 는 퍼 옥시 다제 - 커플링 된 항 - 인간 IgG 다 클론 성 항체 를 이용 하 여 확인 되 었 다 . 퍼 옥시 다제 신호 는 SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate ( Thermo Fisher ) 를 이용 하 여 효소 적 으로 검출 되 었 으며 , 결과 의 밴드 는 Chemi Doc MP Imaging System ( Bio - Rad ) 및 Image Lab 소프트웨어 를 이용 하 여 이미지 화 되 었 다 . 발현 수준 은 도 14 a 및 도 14 b 에 묘사 되 어 있 다 . 도 14 a 및 도 14 b 에서 , " 다음 구축물 의 발현 을 보여준다 : 파니 투 무 맙 중쇄 ( 서열 번호 1 ) 및 파니 투 무 맙 경쇄 ( 서열 번호 4 ) ( 구축물 "" 1 + 4 ""); CD 19 - D 1 + 2 - 파니 투 무 맙 LC ( 서열 번호 32 ) 및 파니 투 무 맙 HC ( 서열 번호 1 ) ( 구축물 "" 32 + 1 ""); CD 19 - D 1 + 2 - 파니 투 무 맙 HC ( 서열 번호 33 ) 및 파니 투 무 맙 LC ( 서열 번호 4 ) ( 구축물 "" 33 + 4 ""); 파니 투 무 맙 LC - CD 19 - D 1 + 2 ( 서열 번호 34 ) 및 파니 투 무 맙 HC ( 서열 번호 1 ) ( 구축물 "" 34 + 1 ""); 파니 투 무 맙 HC - CD 19 - D 1 + 2 ( 서열 번호 35 ) 및 파니 투 무 맙 LC ( 서열 번호 4 ) ( 구축물 "" 35 + 4 ""); CD 19 - D 1 + 2 - LY 2875358 LC ( 서열 번호 36 ) 및 LY 2875358 HC ( 서열 번호 7 ) ( 구축물 "" 36 + 7 ""); CD 19 - D 1 + 2 - LY 2875358 HC ( 서열 번호 37 ) 및 LY 2875358 LC ( 서열 번호 10 ) ( 구축물 "" 37 + 10 ""); LY 2875358 LC - CD 19 - D 1 + 2 ( 서열 번호 38 ) 및 LY 2875358 HC ( 서열 번호 7 ) ( 구축물 "" 38 + 7 ""); LY 2875358 HC - CD 19 - D 1 + 2 ( 서열 번호 39 ) 및 LY 2875358 LC ( 서열 번호 10 ) ( 구축물 "" 39 + 10 ""); LY 2875358 HC ( 서열 번호 7 ) 및 LY 2875358 LC ( 서열 번호 10 ) ( 구축물 "" 7 + 10 "")."