이전 실시 예 는 증진 된 C 1 q 결합 이 E 430 G Fc - Fc - 증진 돌연변이 를 함유 하 는 시험 된 항 - DR 5 항체 의 보다 우수 한 효능 작용 활성 에 기여 한다는 것 을 시사 하 였 다 . C 1 q 의 효과 를 시험 하 기 위해 , 정제 된 인간 C 1 q 의 존재 또는 부재 하 에 무 혈청 배지 내 WIL 2 - S SF 세포 에서 IgG 1 - CONA - K 326 A / E 333 A / P 396 L / E 430 G 및 IgG 1 - hDR 5 - 01 - G 56 T - K 326 W / E 333 S / E 430 G 를 사용 하 여 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . WIL 2 - S SF 세포 는 WIL 2 - S ( ATCC , CRL - 8885 ) B 림프 모구 로부터 유래 되 었 으며 , 이 를 50 U / mL Pen / Strep 및 1 mM 피루브산 나트륨 을 함유 하 는 HyQ - ADCF - Mab 로 제제화 된 배양 배지 ( 퍼 바이오 ( Perbio ) , 카탈로그 번호 SH 30349 ) 에서 무 혈청 조건 하 에 성장 하 도록 적응 시켰 다 . WIL 2 - S SF 현 탁 세포 를 세포 스 트레이너 에 통과 시키 고 , 300 xg 에서 5 분 동안 원심 분리 에 의해 펠릿 화 하 고 , 무 혈청 배양 배지 에 0 . 5 x 106 개 세포 / mL 의 농도 로 재현 탁 시켰 다 . 100 μ L 의 단세포 현탁액 ( 웰 당 50 , 000 개 세포 ) 을 폴리스티렌 96 - 웰 편평 - 바닥 플레이트 ( 그 라이너 바이오 - 원 , 카탈로그 번호 655182 ) 에 시 딩 하 였 다 . 25 μ L 의 일련 의 연속 희석 항체 제제 ( 4 배 희석 으로 범위 0 . 0003 내지 20 , 000 ng / mL 최종 농도 ) 및 25 μ L 의 정제 된 C 1 q ( 퀴델 , 카탈로그 번호 A 400 ; 2 . 5 μ g / mL 최종 농도 ) 를 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 1 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 음성 및 양성 대 조군 으로서 , 세포 를 각각 항체 없이 또는 5 μ M 스타 우로스 포린 ( 시그마 알드리치 , 카탈로그 번호 S 6942 ) 과 함께 배지 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 생존 율 을 TO - PRO - 3 염색 에 의해 결정 하 였 다 . TO - PRO - 3 은 이중 가닥 DNA 에 결합 하 는 세포 - 불 투과성 카르보시아닌 단량체 염색 제 이 다 . 이 에 따라 , TO - PRO - 3 은 사멸 세포 지표 로서 사용 될 수 있 다 . 모든 샘플 을 폴리스티렌 96 - 웰 U - 바닥 플레이트 ( 그 라이너 바이오 - 원 , 카탈로그 번호 650261 ) 로 옮기 고 , 300 x g 에서 3 분 동안 원심 분리 한 후 , 70 μ L 의 상청 액 을 분리 해 내 었 다 . 10 μ L TO - PRO - 3 혼합물 ( 인 비트 로 젠 , 카탈로그 번호 T 3605 , 20 μ L TO - PRO - 3 + 1980 μ L PBS ) 을 첨가 한 후 , 세포 를 피펫 팅 에 의해 재현 탁 시켰 다 . TO - PRO - 3 - 양성 세포 의 양 을 BD LSR 포르테 사 X - 20 세포 분석기 ( BD 바이오 사이언 시스 ( BD Biosciences ) ) 상 에서 유동 세포 측정 법 에 의해 결정 하 였 다 .