DNA 단편 은 물 과 함께 관 에 넣 은 다음 5 분 간 45 ℃ 로 가온 하 여 , 제조 하 는 동안 에 다시 어닐링 되 는 코 헤 시브 ( cohesive ) 말단 을 용융 하 였 다 . 나머지 연결 반응 시약 을 첨가 하 기 전 에 DNA 는 0 ℃ 로 냉각 한 다음 , 반응 혼합물 을 16 ℃ 에서 철야 인 큐 베이 션 하 였 다 ( Sambrook and Russell , 2001 ) .