본 출원 에서 발굴 된 플라스미드 들 을 이용 한 시스템 이 보다 유용 함 을 보이 기 위하 여 코 리네 박 테리 움 에서 발굴 한 플라스미드 들 에 D - 타가토스 전환 효소 발현 시스템 을 적용 하 였 고 , 생산 균주 자체 를 이용한 타가토스 전환 반응 을 시행 함 으로써 타가토스 생산 의 증대 를 확인 하 고자 하 였 다 . 타가토스 전환 을 위해 코 리네 박 테리 움 은 BHI 배지 에 접종 후 , 30 ℃ 에서 24 시간 배양 한 이후 계대 배양 도 동일 한 배지 와 동일 한 온도 , 시간 조건 에서 250 mL 플라스크 에 50 mL 로 계대 배양 한다 . 배양 한 코 리네 박 테리 움 은 45 mL 을 3500 rpm , 10 분 간 원심 분리 하 여 균주 만 을 얻 은 후 , 전체 반응 의 20 % 무게 로 균주 를 넣 어 반응 한다 . 본 출원 에 사용 한 타가토스 전환 반응 은 20 % 의 과당 을 기질 로 사용 하 였 고 , 반응 조건 은 최종 1 mM NiSO 4 을 포함 한 50 mM Tris - HCl ( pH 8 . 0 ) 조건 으로 진행 하 였 다 . 반응 은 60 ℃ 에서 30 분 간 균주 와 기질 을 각각 따로 전처리 반응 하 여 섞 은 후 , 60 ℃ 에서 2 시간 반응 하 여 13000 rpm , 10 분 원심 분리 과정 을 거쳐 상층 액 을 회수 하 여 HPLC 로 분석 하 였 다 . HPLC 는 5 mM H 2 SO 4 용매 를 이용 하 여 HPX 87 H 컬럼 을 이용 하 여 RID 검출기 로 만들 어 진 타가토스 와 기질 인 과당 을 정량 하 였 다 . pHCP ( negative control ) 는 D - 타가토스 전환 효소 가 삽입 되 지 않 은 플라스미드 이 며 , 그 외 는 pHCP , pHCP 51 , pHCP 7 에서 D - 타가토스 전환 효소 ( TN full ) 를 발현 하 는 벡터 를 이용 한 전환 결과 이 다 . pHCP 플라스미드 를 이용 한 것 에 비하 여 본 출원 에서 발굴 한 pHCP 51 을 이용 하 여 발현 한 시스템 의 타가토스 전환율 은 0 . 9 % 증가 하 였 고 , pHCP 7 을 이용 한 것 은 1 . 6 % 증가 함 을 확인 하 였 다 . 이 를 통하 여 본 출원 에서 발굴 한 플라스미드 시스템 은 고 복제 수 를 가지 고 있 으며 , 목적 하 는 단백질 의 발 현양 에 도 영향 을 주 는 것 과 동시 에 균주 자체 의 전환 활성 도 증대 시키 는 결과 를 보이 므로 유용 한 시스템 임 을 확인 할 수 있 었 다 .