역전사 ( reverse transcription ) 반응 은 RT premix ( reverse transcriptase , reaction buffer , dNTPs , dT 20 primer , stabilizer ) 에 total RNA 를 1 ㎍ 첨가 하 고 DEPC ( diethyl pyrocarbonate ) 처리 된 증류수 를 최종 부피 가 20 ㎕ 가 되 도록 하 여 첨가 하 였 다 . 이 혼합액 을 섞 은 후 2 , 000 rpm 에서 5 초간 원심 침강 하 고 45 ℃ heating block 에서 60 분 동안 반응 시켜 first - strand cDNA 를 합성 하 였 다 . 이 를 다시 95 ℃ 에서 5 분 동안 반응 시켜 M - MLV RT 를 불 활성 화 시킨 후 합성 이 완료 된 cDNA 를 PCR 에 사용 하 였 다 .