단백질 은 Mg / NP - 40 완충 용액 을 이용 하 여 추출 하 고 PEG 4000 으로 분획 을 얻 은 다음 기존 에 보 고 된 방법 ( Kim et al . Electrophoresis , 2001 , 22 , 2103 - 2109 ) 으로 분석 을 실시 하 였 다 . PEG 로 분획 화 된 시료 는 SDS - PAGE 로 분석 하 고 반 건조 전기영동 시스템 ( Hoefer , San Francisco , CA , USA ) 을 이용 하 여 PVDF 멤 브레인 으로 옮겼 다 . 블 럿된 막 은 7 % w / v 무 지방 건조 우유 가 포함 된 TTBs ( 50 mM Tris - HCl pH 8 . 2 , 0 . 1 % v / v Tween 20 및 150 mM NaCl ) 에서 2 시간 동안 반응 을 차단 시켰 다 . 차단 후 막 은 TTBs 로 1000 배 희석 된 PBZ 1 폴리 클로 날 안티 세 럼 으로 배양 시켰 다 . 항원 - 항체 상호 작용 은 2 시간 동안 실시 하 였 다 . 막 은 20 분 동안 TTBs 로 3 회 세척 하 고 이 차 항체 goat anti - rabbit IgG 항체 를 TTBs 로 5000 배 희석 시킨 양 고추냉이 과산화 효소 ( horseradish peroxidase ) 와 공유 결합 시키 고 단백질 밴드 를 확인 하 였 다 . TTBs 로 생성 된 밴드 를 세척 한 다음 , 면역 블 럿 신호 를 ECL ( PerkinElmer Life Sciences , Boston , MA , USA ) 를 이용 하 여 확인 하 였 다 . 본 발명 에서 는 항체 를 이용 하 여 PBZ 1 단백질 의 기능 을 확인 하 였으며 , 분리 된 PBZ 1 단백질 을 유전자 클로닝 하 여 염기서열 ( 서열 번호 1 ) 및 아미노산 서열 ( 서열 번호 2 ) 을 확인 하 였 다 .