본 발명 의 인간 모노클 로 날 항체 를 생산 하 는 하이브리도마 를 생성 하 기 위해서 , 면역 화 된 마우스 로부터 비장 세포 및 / 또는 림프절 이 분리 되 고 , 마우스 골수종 셀 라인 과 같 은 적절 한 불멸 화 된 셀 라인 과 융합 될 수 있 다 . 얻 어 진 하이브리도마 는 항원 - 특이 적 항체 생산 에 대해 스크리닝 될 수 있 다 . 예 를 들 어 , 면역 화 된 마우스 로부터 의 비장 림프구 의 단일 세포 현탁액 이 50 % PEG 를 사용 하 여 P 3 X 63 - Ag 8 . 653 비 - 분비 마우스 골수종 세포 ( ATCC , CRL 1580 ) 수의 1 / 6 과 융합 될 수 있 다 . 또는 달리 , 세포 는 전기 융합 에 의해 융합 될 수 있 다 . 바닥 이 편평 한 마이크 로 타이 터 플레이트 에 세포 가 약 2 x 105 로 평판 되 고 , 20 % 태아 클론 혈청 , " 18 % "" 653 "" 컨디션 배지 ", 5 % 오리 젠 ( IGEN ) , 4 mM L - 글루타민 , 1 mM 나트륨 피 루 베이트 , 5 mM HEPES , 0 . 055 mM 2 - 메르 캅 토 에탄올 , 50 단위 / mL 페니실린 , 50 mg / mL 스트렙토마이신 , 50 mg / mL 젠타 마이신 및 1 x HAT ( Sigma ; HAT 는 융합 후 24 시간 뒤 에 첨가 된다 ) 를 함유 하 는 선택 성 배지 에서 2 주 인 큐 베이 션 된다 . 약 2 주 후 에 세포 는 HAT 를 HT 로 교체 한 배지 에서 배양 될 수 있 다 . 다음 에 , 각 웰 이 ELISA 에 의해 인간 모노클 로 날 IgM 및 IgG 항체 에 대해 스크리닝 될 수 있 다 . 일단 광범 한 하이브리도마 성장 이 일어나 면 , 일반 적 으로 10 - 14 일 후 에 배지 가 관찰 될 수 있 다 . 항체 분비 하이브리도마 가 재 평판 되 고 , 다시 스크리닝 될 수 있 으며 , 만일 여전히 인간 IgG 에 대해 양성 이 라면 , 제한 희석 에 의해 모노클 로 날 항체 가 적어도 2 번 서브 클로닝 될 수 있 다 . 다음 에 , 안정 한 서브 클론 이 시험관 내 배양 될 수 있 고 , 이 로써 특성 화 를 위한 조직 배양 배지 중 에 소량 의 항체 가 생성 된다 . 인간 모노클 로 날 항체 를 정제 하 기 위하 여 분비 된 하이브리도마 는 모노클 로 날 항체 정제 를 위해 2 L 스피너 - 플라스크 에서 성장 될 수 있 다 . 상청 액 이 여과 되 고 농축 된 다음 , 단백질 A - 세파 로스 ( Pharmacia , Piscataway , N . J . ) 로 친화성 크로마토그래피 를 수행 할 수 있 다 . 용출 된 IgG 는 겔 전기영동 및 고 성능 액체 크로마토그래피 에 의해 조사 되 어 순도 를 확정 할 수 있 다 . PBS 로 버퍼 용액 이 교환 될 수 있 고 , 분광법 에 의해 농도 가 결정 될 수 있 다 . 모노클 로 날 항체 는 알리 쿼트 로 나눠져 - 80 ℃ 에 보관 될 수 있 다 .