녹 - 인 / 녹 - 아웃 ( knock - out ) 마우스 를 만드 는 방법 은 문헌 에 출판 되 어 있 으며 , 당업자 에게 잘 알려져 있 다 . 간략 하 게 설명 하 자면 , C 57 Bl 6 마우스 를 이용 하 여 단일 세포 배아 로 의 전핵 미세 주사 를 통하 여 인간 정점 TfR 마우스 계통 의 녹 - 인 ( knock - in ) 을 만든 후 , 모 의 임신 암컷 으로 배 를 옮겼 다 . 구체 적 으로 , Cas 9 , sgRNAs 서열 번호 : 10 - 11 , 및 공 여 DNA , 서열 번호 : 4 는 이 배아 에 도입 되 었 다 . 상기 공 여 DNA 는 마우스 에서 발현 을 위하 여 코돈 최적 화 된 인간 정점 도메인 코딩 서열 , 서열 번호 : 2 를 포함 하 였 다 . 상기 정점 도메인 코딩 서열 은 좌측 ( 서열 번호 : 4 의 뉴클레오티드 1 - 817 ) 및 우측 상동 아암 ( 서열 번호 : 4 의 뉴클레오티드 1523 - 2329 ) 의 측면 에 있 다 . 정점 도메인 은 마우스 의 4 번 째 엑손 다음 에 삽입 되 고 , 마우스 의 9 번 째 엑손 의 3 ' 말단 에 바로 측면 에 위치 하 도록 , 이러 한 방식 으로 공여 서열 이 기획 되 었 다 . 배아 를 받 은 암컷 자손 의 기반 ( founder ) 수컷 을 야생 형 암컷 에게 사육 하 여 F 1 이 형 접합체 마우스 를 만들 었 다 . 동형 접합체 마우스 는 F 1 세대 이 형 접합체 마우스 의 번식 으로부터 후속 적 으로 생성 되 었 다 .