PDE 4 d 유전자 는 PDE 4 d 의 촉매 성 도메인 ( catalytic domain ) 을 GST 융합 발현 벡터 인 pGEX 4 T 3 ( APBiotech ) 에 클로닝 한 후 대장균 ( E . coli BL 21 , DE 3 ) 에 형질 전환 시켰 다 . 이 균주 를 LB 배지 에서 37 ℃ 로 배양 한 후 OD 0 . 3 - 0 . 5 가량 되 었 을 때 온도 를 18 ℃ 로 낮추 어 0 . 5 mM IPTG 로 PDE 4 d 의 발현 을 유도 하 였 다 . 발현 유도 후 15 시간 후 에 PDE 4 d 가 발현 된 세포 를 얻 은 다음 완충 용액 ( 50 mM Tris , pH 8 . 0 , 0 . 4 M NaCl , 5 mM DTT ) 에 세포 를 현 탁한 후 파쇄 하 여 원심 분리 후 정제 하 여 수득 하 였 다 . 정제 에 사용 한 컬럼 은 순서 대로 Q - 세파 로즈 ( APBiotech ) , 글루 타 니 온 - 세파 로즈 ( APBiotech ) 및 수퍼 덱스 200 겔 여과 크로마토그래피 ( APBiotech ) 등 이 다 .