인간 T 림프구 의 제조 : 인간 전혈 을 헤파린 - 처리 주사기 ( Baxter ( Deerfield , IL ) ) 내 로 수집 한 후 , 시그마 ( Sigma ) 의 아쿠 스핀 ( Accuspin ) 튜브 ( Sigma ( St . Louis , MO ) ) 로 제조사 가 기술 한 바 와 같이 말초 혈 단핵 세포 ( PBMC ) 를 단리 하 기 위해 즉각 적 으로 옮겼 다 . PBMC 를 DPBS 로 2 회 세정 하 고 , 제 조사 ( R & D Systems ( Minneapolis , MN ) ) 가 기술 한 바 와 같이 T 세포 정제 칼럼 을 사용 하 여 T 림프구 를 단리 하 였 다 . 간략 하 게 , PBMC 를 2 ㎖ 의 칼럼 완충제 에 재현 탁 시키 고 , 미리 세정 된 T 세포 단리 칼럼 내 로 로딩 ( loading ) 하 였 다 . PBMC 를 실온 에서 10 분 동안 인 큐 베이 션 하 고 , T 세포 를 칼럼 완충제 로 용출 시키 고 , 1 회 세정 하 고 , 10 ％ 소 태아 혈청 ( Hyclone ( Logan , UT ) ) 및 L - 글루타민 ( 2 mM ) , HEPES ( 10 mM ) , 페니실린 ( 100 U / ㎖), 스트렙토마이신 ( 50 ug / ㎖) ( Gibco ( Grand Island , NY ) ) 이 보충 된 RPMI 1640 ( Sigma ( St Louis , MO ) ) 으로 구성 된 TCM 에 2 × 106 개 / ㎖ 로 재현 탁 시켰 다 . 1 ㎍/㎖ 의 항 - 인간 CD 28 항체 ( 클론 37407 , R & D Systems ( Minneapolis , MN ) ) 를 함유 하 는 2 ㎖ 부피 의 T 세포 를 PBS 내 의 5 ㎍/㎖ 의 항 - 인간 CD 3 항체 클론 UCTH 1 ( R & D Systems ( Minneapolis , MN ) ) 으로 미리 코팅 된 24 웰 플레이트 의 웰 에 첨가 하 였 다 . T 세포 배 양물 을 3 일 동안 자극 한 후 , 유동 세포 측정 법 에 의해 인간 OX 40 교차 - 반응 성 에 대해 테스트 하 였 다 .