우선 , 에세 리키아 콜리 로부터 유래 된 1 , 578 bp 의 5 '- 크 산 틸 산 아미 나 아제 유전자 ( 서열 번호 1 ) 를 trc 프로모터 를 지니 고 에세 리키아 콜리 에서 증폭 이 가능 한 복제 기원 을 지닌 발현 벡터 인 pTrc 99 a 에 작동 가능 하 도록 연결 한 재조합 플라스미드 pG 1 을 제작 하 여 이 를 돌연변이 유발 형 중합효소 연쇄 반응 의 주형 으로 준비 하 였 다 . 돌연변이 유발 형 중합효소 연쇄 반응 에 사용 된 프라이머 는 서열 번호 23 의 N - 말단 프라이머 와 서열 번호 24 의 C - 말단 프라이머 를 사용 하 였으며 , 이 는 에세 리키아 콜리 로부터 유래 된 5 '- 크 산 틸 산 아미 나 아제 유전자 의 염기 서열 에 근거 하 여 합성 하 였 다 .