재조합 마우스 Rae - 1 델타 - Fc ( 알 앤디 시스템즈 ( R & D Systems ) 로부터 구입 함 ) 를 마이크 로 플레이트 의 웰 에 흡착 시켰 고 , 비 - 특이 적 결합 을 감소 시키 기 위해 웰 을 소 혈청 알부민 으로 차단 하 였 다 . 마우스 NKG 2 D - Fc - 비오틴 을 웰 에 첨가 한 다음 , NKG 2 D - 결합 도메인 을 첨가 하 였 다 . 인 큐 베이 션 및 세 척 후 에 , Rae - 1 델타 - Fc 코팅 된 웰 에 결합 된 채 로 남 아 있 는 NKG 2 D - Fc - 비오틴 을 스 트 렙 타비 딘 - HRP 및 TMB 기질 을 이용 하 여 검출 하 였 다 . 흡광도 를 450 nM 에서 측정 하 고 , 540 nM 에서 보정 하 였 다 . 백그라운드 를 차감 한 후 에 , NKG 2 D - Fc 단백질 에 대한 NKG 2 D - 결합 도메인 의 특이 적 결합 을 Rae - 1 델타 - Fc 코팅 된 웰 에 대한 결합 이 차단 된 NKG 2 D - Fc - 비오틴 의 백분율 로부터 계산 하 였 다 . 양성 대 조군 ( SEQ ID NO : 45 - 48 , 또는 이 바이오 사이언스 에서 입수 가능 한 항 - 마우스 NKG 2 D 클론 MI - 6 및 CX - 5 로부터 선택 됨 ) 및 다양 한 NKG 2 D - 결합 도메인 클론 은 Rae - 1 델타 가 마우스 NKG 2 D 에 결합 하 는 것 을 차단 한 반면 에 , 이소 타입 대 조군 항체 는 Rae - 1 델타 와 거의 경쟁 하 지 않 는 것 으로 보였 다 ( 도 21 ) .