서열 번호 1053 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 용해 완충제 부피 는 400 μ L 이 었 고 , 용해 물 은 4 배 희석 되 었 다 . 검정 은 100 μ L 반응 부피 에서 10 μ L 의 희석 된 용해 물 을 사용 하 고 1 mM 스테비오 시드 A ( > 97 % 순도 ) 의 기질 로딩 및 1 mM ADP - 글루코스 ( Sigma , > 93 % 순도 ) 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 1 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 7 , 3 mM MgCl 2 , 50 ℃. 반응물 은 25 μ L 의 희석 된 검정 물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 75 μ L 아세 토니 트릴 에 첨가 함 으로써 켄 칭 하 였 다 . 생 성 혼합물 을 4 ℃ 에서 10 분 동안 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 상청 액 을 물 에 1 : 5 로 희석 하 고 , 표 31 . 1 에서 설명 한 바 와 같이 RapidFire SPE - MS / MS 에 의해 분석 하 였 다 . ADP - 글루코스 를 사용 하 여 레바 우디 오시드 A 로부터 레바 우디 오시드 D 를 생성 한 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 변이체 폴리펩티드 가 확인 되 었 고 , 조작 된 폴리펩티드 는 표 43 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 표 43 . 2 에 열거 된 변이체 에 대해 실시 예 31 에서 설명 된 바 와 같이 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 성장 시키 고 , 용해 시키 고 , 분말 로 동결 건조 시켰 다 .