항체 결합 에 대한 시험 과 함께 , 상기 하이브리도마 상청 액 들 의 세포독성 효과 ( 항체 유도성 세포독성 ) 를 하 기 세포주 들 에서 시험 하 였 다 : OCC - 1 , OVCAR - 3 및 CCD - 27 sk . Molecular Probes ( Eugene , OR ) 로부터 칼 세인 ( Calcein ) AM 을 입수 하 였 고 , 하 기 개요 한 바 와 같이 검정 을 수행 하 였 다 . 세포 를 상기 검정 전 에 미리 결정 한 적절 한 밀도 로 플 레이팅 하 였 다 . 2 일 후 에 , 상기 하이브리도마 마이크 로 타이 터 플레이트 로부터 의 상청 액 75 마이크 로 리터 를 상기 세포 플레이트 들 에 옮기 고 , 5 % CO 2 인큐베이터 에서 5 일 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 양성 대 조군 으로 이용 된 웰 들 을 비워 질 때 까지 흡인 하 고 , 배양 배지 중 에 용해 시킨 소듐 아지드 ( NaN 3 , 0 . 01 %, Sigma , Oakville , ON ) , 시클 로 헥 시 미드 ( CHX , 0 . 5 마이크 로 몰 , Sigma , Oakville , ON ) 또는 항 - EGFR 항체 ( c 225 , IgG 1 , 카파 , 5 마이크로그램 / mL , Cedarlane , Hornby , ON ) 100 마이크 로 리터 를 첨가 하 였 다 . 처리 5 일 후 , 상기 플레이트 들 을 그 후 뒤집 어 흡 취지 로 건조 ( blotting dry ) 하 여 비웠 다 . MgCl 2 및 CaCl 2 가 함유 된 실온 의 DPBS ( Dulbecco 인산 완충 식염수 ) 를 다채널 스퀴즈 병 ( squeeze bottle ) 으 로부터 각 웰 에 분배 하 고 , 가볍 게 3 회 두드리 고 , 뒤집 어 비운 후 , 흡 취지 로 건조 시켰 다 . MgCl 2 및 CaCl 2 가 함유 된 DPBS 중 에 희석 시킨 형광 칼 세인 염료 50 마이크 로 리터 를 각 웰 에 첨가 하 고 , 5 % CO 2 인큐베이터 내 에서 37 ℃ 에서 30 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 상기 플레이트 들 을 Perkin - Elmer HTS 7000 형광 플레이트 판독기 에서 판독 하 고 , 데이터 를 마이크 로 소프트 엑셀 로 분석 하 였 다 . 결과 는 도 1 에 표 로 나타나 있 다 . AR 51 A 630 . 3 하이브리도마 로부터 의 상청 액 은 OCC - 1 세포 에 대해서 는 18 %, OVCAR - 3 세포 에 대해서 는 40 % 의 특이 적 세포 독성 을 일으켰 다 . 이 는 , 양성 대 조군 들 인 소듐 아지드 및 시클 로 헥 시미 드 각각 을 이용 하 여 OCC - 1 에 대해 수득 한 세포독성 의 21 및 19 % 이 었 고 , 마찬가지 로 , c 225 및 시클 로 헥 시미 드 각각 의 OVCAR - 3 에 대한 세포독성 의 64 및 89 % 이 었 다 . 비 ( 非 ) - 암 피부 세포주 CCD - 27 sk 에 대해서 는 관찰 가능 한 세포독성 이 존재 하 지 않 았 다 . 공지 된 비 ( 非 ) - 특이 적 세포독성 제 들 인 시클 로 헥 시미 드 및 NaN 3 은 전반 적 으로 예상 된 세포독성 을 일으켰 다 . 항 - EGFR 항체 인 c 225 는 OVCAR - 3 에 대해 예상 된 세포독성 을 일으켰 다 .