단백질 A - SepharoseTM ( GE Healthcare , Sweden ) 를 사용 하 는 친화성 크로마토그래피 및 Superdex 200 크기 배제 크로마토그래피 에 의해 세포 배 양물 상청 액 으로부터 이중 특이 적 및 대 조군 항체 를 정제 했 다 . 간략히 , PBS 완충액 ( 10 mM Na 2 HPO 4 , 1 mM KH 2 PO 4 , 137 mM NaCl 및 2 . 7 　 mM KCl , pH 7 . 4 ) 으로 평형 시킨 HiTrap 단백질 A HP ( 5 ㎖) 칼럼 에 멸균 여과 된 세포 배 양물 상청 액 을 적용 했 다 . 결합 되 지 않 은 단백질 을 평형 완충액 으로 씻 어 냈 다 . 항체 및 항체 변이체 를 0 . 1 　 M 시트 레이트 완충액 , pH 　 2 . 8 로 용리 하 고 , 단백질 함유 분획 을 0 . 1 ㎖ 1 M Tris , pH 8 . 5 로 중화 시켰 다 . 그 후 , 용리 된 단백질 분획 을 모으 고 , Amicon Ultra 원심 필터 장치 ( MWCO : 30 K , Millipore ) 를 사용 하 여 부피 3 ㎖ 로 농축 하 고 , 20 mM 히스티딘 , 140 mM NaCl , pH 6 . 0 으로 평형 시킨 Superdex 200 HiLoad 120 ㎖ 16 / 60 겔 투과 칼럼 ( GE Healthcare , Sweden ) 에 로딩 했 다 . 정제 된 이중 특이 적 및 대 조군 항체 와 5 　% 미만 의 고분자 량 응 집체 를 함유 하 는 분획 을 모으 고 , 1 . 0 ㎎/㎖ 앨리 쿼트 로 - 80 ℃ 에서 저장 했 다 .