남성 성체 도너 의 피부 로부터 생검 을 취하 여 , 항생제 및 항진 균제 를 포함 하 는 행크 완충 염 용액 ( Hank ' s Buffered Salt Solution : HBSS ) 으로 세척 하 여 , 2 ml 의 0 . 25 % 트립신 / EDTA ( 표 4 ) 또는 TrypLE 셀렉 트 중 에서 4 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 하 였 다 . 샘플 을 3 회 헹구 었 고 2 차 헹굼 후 에 트립신 억제제 를 사용 하 였 다 ( 표 4 ) . 멸균 핀셋 을 사용 하 여 진피 와 표피 를 분리 하 였 다 . 진피 를 작 은 조각 으로 절단 하 여 , 실온 에서 소정 의 효소 를 포함 한 0 . 75 ml 의 효소 용액 ( 표 4 ) 중 에서 3 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 ( 12 웰 또는 24 웰 플레이트 ) . 약 35 분 후 , 조직 구조 가 분해 하 기 시작 하 였 다 . 10 ㎕/ ml 의 폴리비닐 피 롤리 돈 ( PVP ) 을 함유 한 동일 부피 의 배지 를 첨가 하 고 , 약 10 회 피펫 팅 업 / 다운 으로 조직 을 물리 적 으로 해체 시켰 다 . 샘플 을 실온 에서 400 g 로 10 분 동안 원심 분리 하 고 새로운 배지 / PVP 로 2 회 세척 하 였 다 . 상청 액 을 버리 고 , 펠릿 을 3 ml 의 완전 배지 에 재현 탁 시키 고 , 1 ml 의 세포 현탁액 을 웰 당 3 ㎍ 의 비트 로 넥 틴 으로 코팅 된 6 웰 플레이트 의 웰 로 옮겼 다 . 플레이트 를 37 ℃ 에서 5 % CO 2 로 인 큐 베이 션 하 였 고 , 배지 를 매일 교환 하 였 다 . 섬 유아 세포 는 플레이트 에 부착 하 였 지만 , 배지 를 교환 할 때 비 부착 성 세포 및 잔해 는 제거 되 었 다 .