실시 형태 에서 , Cas 9 분자 는 비하전 또는 비극 성 아미노산 , 예 를 들 어 알라닌 을 일정 위치 에 도입 하 는 하나 이상 의 돌연변이 를 포함 하 는 SEQ ID NO : 205 의 S . 피 오 게 네스 Cas 9 변이체 이 다 . 실시 형태 에서 , Cas 9 분자 는 SEQ ID NO : 205 의 위치 497 에서 의 돌연변이 , 위치 661 에서 의 돌연변이 , 위치 695 에서 의 돌연변이 및 / 또는 위치 926 에서 의 돌연변이 , 예 를 들 어 SEQ ID NO : 205 의 위치 497 , 위치 661 , 위치 695 및 / 또는 위치 926 에서 알라닌 으로 의 돌연변이 를 포함 하 는 , SEQ ID NO : 205 의 S . 피 오 게 네스 Cas 9 변이체 이 다 . 실시 형태 에서 , Cas 9 분자 는 SEQ ID NO : 205 에 비해 오직 SEQ ID NO : 205 의 위치 497 , 위치 661 , 위치 695 및 위치 926 에서 만 돌연변이 를 가지 며 , 예 를 들 어 각 돌연변이 는 비하전 아미노산 , 예 를 들 어 알라닌 으로 이 다 . 임의 의 이론 으로 결부 시키 고자 하 는 것 은 아니 지만 , 이러 한 돌연변이 는 표적 - 외 부위 에서 의 Cas 9 분자 에 의한 절단 을 감소 하 는 것 으로 여겨진다 .