HT 22 세포 를 90 mm 배양 접시 에 5 x 105 cells / dish 분주 하 여 24 시간 안정 화 시킨 뒤 , 미리 스타 게 놀 A ( Myristargenol A ) 를 1 , 3 , 5 , 7 , 10 μ M 의 농도 와 글 루타 메이트 10 mM 농도 를 HT 22 세포주 에 처리 하 여 24 시간 동안 반응 시켰 다 . 글루 타 메이트 와 약물 처리 후 에 는 cell 을 dish 에서 분리 한 뒤 cell 을 tube 에 모아 준 뒤 , RIPA 버퍼 ( Thermo Fisher Scientific Inc . ) 로 세포 를 깬 뒤 단백질 을 모아 정량 한다 . 단백질 샘플 들 을 SDS - PAGE 로 분리 하 고 , PVDF ( polyvinylidene fluoride membrane ) 로 옮겨 준 후 , 5 % skim milk 로 blocking 을 1 시간 동안 해 준다 . 첫 번 째 항체 로 caspase - 3 , PARP , Bcl - 2 , β - Actin ( Cell signaling Technology Inc . ) 와 caspase - 9 , Bax ( Santa Cruz biotechnology Inc ) 를 1 : 2000 blocking 용액 에 희석 시켜 반응 시키 고 , TBS - T ( tris - buffer saline ) 으로 3 회 세척 한다 . 두 번 째 항체 로 는 anti - rabbit IgG 1 : 4000 blocking 용액 에 희석 시켜 2 시간 동안 반응 시키 고 , TBS - T ( tris - buffer saline ) 으로 3 회 세척 한 뒤 , ECL 용액 ( pico or Femto ) 로 검출 하 였 다 .