" 도 3 : 씨 . 글루 타미 컴 균주 를 조작 하 기 위해 개발 된 "" 루프 - 인 "," 단일 - 크로스오버 "" 게놈 통합 전략 . 루프 - 인 단독 구성체 ( 제목 "" 루프 - 인 "" 으로 표시 ) 는 단일 2 - kb 상동성 팔부 ( "" 통합 유전자좌 "" 로 표시 ) "," 양성 선별 마커 ( "" 마커 "" 로 표시 ) ) "," 및 관심 유전자 ( 들 ) ( "" 프로모터 - 유전자 - 종결 인자 "" 로 표시 ) 를 함유 하 였 다 . 단일 크로스오버 사건 은 플라스미드 를 씨 . 글루 타미 컴 염색체 에 통합 시켰 다 . 통합 사건 은 항생제 ( 예 를 들 어 ", 25 ㎍/㎖ 카나마이신 ) 의 존재 하 에서 성장 에 의해 게놈 에서 안정 하 게 유지 된다 . 루프 - 인 통합 으로부터 유래 된 콜로니 중 올바른 게놈 통합 은 UF / IR 및 DR / IF PCR 프라이머 를 사용 한 콜로니 PCR 에 의해 확인 하 였 다 . 루프 - 인 , " 루프 - 아웃 구성체 ( 제목 "" 루프 - 인 ", 루프 - 아웃 으로 표시 ) 는 2 개 2 - kb 상동성 팔부 ( 5 ' 및 3 ' 팔부 ) , 관심 유전자 ( 들 ) ( 화살표 ) , " 양성 선별 마커 ( "" 마커 "" 로 표시 됨 ) "," 및 역선 별 마커 를 함유 하 였 다 . "" 루프 - 인 "" 단독 구성체 와 유사 하 게 ", 단일 크로스오버 사건 은 플라스미드 를 씨 . 글루 타미 컴 의 염색체 에 통합 시켰 다 . 주 : 2 가지 가능 한 통합 중 오직 하나 만 여기 에 도시 되 어 있 다 . 올바른 게놈 통합 은 콜로니 PCR 에 의해 확인 되 었 고 역선 별 은 플라스미드 골격 및 역선 별 마커 가 절개 될 수 있 도록 적용 되 었 다 . 이러 한 결과 로 2 가지 가능 성 중 하나 가 발생 된다 : 야생 형 으로 의 복귀 또는 바람직 한 경로 통합 . 역시 , 올바른 게놈 루프 - 아웃 은 콜로니 PCR 로 확인 된다 . ( 약어 : 프라이머 : UF = 상류 전 방향 , DR = 하류 역방향 , IR = 내부 역방향 , IF = 내부 전 방향 ) . 실시 예 1 을 참조 한다 .