본 발명 의 라이 보스 5 - 인산 이성화 효소 의 금속 이온 에 대한 특이 성 을 조사 하 기 위하 여 , 상기 효소 활성 은 10 mM EDTA 를 처리 하 고 금속 이온 의 첨가 하 지 않 거나 1 mM 농도 의 금속 이온 ( Na +, K +, Mn 2 +, Zn 2 +, Ba 2 +, Cu 2 +, Co 2 +, Ca 2 +, Mg 2 +, Fe 2 +, Al 3 +) 을 첨가 하 여 반응 시킨 후 다음 과 같이 활성 을 측정 하 였 다 . 상기 효소 반응 은 1 . 0 % 사이 코스 와 0 . 154 단위 / ㎖ 효소 가 포함 된 50 mM 트리스 - 염산 완충 용액 ( pH 7 . 5 ) 을 사용 하 여 65 ℃ 에서 30 분 동안 수행 하 였 고 , 다시 100 ℃ 에서 5 분 동안 가열 하 여 반응 을 정지 시켰 다 . 본 발명 에서 는 효소 활성 은 사이 코스 를 기질 로 사용 하 여 측정 되 었 고 , 상기 효소 활성 의 효소 1 단위 ( unit ) 는 pH 7 . 5 와 65 ℃ 에서 분당 1 mmol 의 알로스 를 생산 하 는 양 으로 정의 하 여 비교 분석 을 원활히 하 였 다 . 또한 , 효소 활성 의 측정 시 사이 코스 농도 및 알로스 농도 그리고 다른 당 들 의 분석 은 알 아이 ( RI ) 검출기 및 쇼 덱스 아사히 펙 ( Shodex Asahipak ) 칼럼 또는 코스 모실 ( Cosmosil ) 칼럼 이 장착 된 고압 액체 크로마토그래피 를 실시 하 여 진행 되 었 다 . 이 때 , 상기 쇼 덱스 아사히 펙 컬럼 은 30 ℃ 에서 0 . 8 ㎖/ 분 속도 로 70 % 아 세토 니트릴 ( acetonitrile ) 을 통과 시키 고 , 상기 코스 모실 칼럼 은 30 ℃ 에서 1 ㎖/ 분 속도 로 80 % 아 세토 니트릴 을 통과 시키 도록 하 였 다 .