배양 된 hACAT - 1 과 hACAT - 2 가 각각 과량 발현 된 Hi 5 세포 들 로부터 마이크 로 좀 분획 을 분리 하 기 위하 여 , 500 ×g 에서 15 분 간 원심 분리 하 여 세포 들 을 모으 고 저장 완충액 ( hypotonic buffer ) 에서 급 냉동 · 급 해동 방법 으로 세포 를 파쇄 한 후 , 100 , 000 ×g 에서 1 시간 동안 초 원심 분리 하 였 다 . 얻 어 진 마이크 로 좀 분획 들 을 단백질 농도 가 8 ㎎/㎖ 이 되 도록 저장 완충액 으로 현 탁 하 여 사용 전 까지 저 온냉 동기 에 보관 하 였 다 .