His - 태그 부착 QC 를 먼저 고정 금속 친화성 크로마토그래피 ( IMAC ) 로 정제 하 였 다 . 통상 의 정제 에서 , 750 mM NaCl 을 포함 하 는 50 mM 인산 완충액 ( pH 6 . 8 ) 으로 평형 화 시킨 Ni 2 +- 로딩 된 킬 레이팅 세파 로즈 FF 칼럼 ( 1 . 6 x 20 cm , Pharmacia ) 에 배양 상등 액 1000 ml 를 5 ml / 분 의 유속 으로 적용 하 였 다 . 10 칼럼 부피 의 평형 완충액 및 5 칼럼 부피 의 5 mM 히스티딘 함유 평형 완충액 으로 세척 한 다음 150 mM NaCl 및 100 mM 히스티딘 을 포함 하 는 50 mM 인산 완충액 ( pH 6 . 8 ) 으로 이행 하 여 결합 된 단백질 을 용출 시켰 다 . 얻 어 진 용출 액 을 20 mM Bis - Tris / HCl ( pH 6 . 8 ) 에 대해 4 ℃ 에서 밤새 투석 하 였 다 . 그 후 , Mono Q 6 칼럼 ( BioRad ) 의 음 이온 교환 크로마토그래피 로 QC 를 추가 정제 하 고 , 투석 완충액 으로 평형 화 하 였 다 . QC - 포함 분획 을 4 ml / 분 의 유속 으로 칼럼 에 로딩 하 였 다 . 100 mM NaCl 을 포함 하 는 평형 완충액 으로 칼럼 을 세 척하 였 다 . 각각 30 또는 5 칼럼 부피 내 에 240 mM 및 360 mM NaCl 을 포함 하 는 평형 완충액 을 사용 하 는 두 가지 구배 를 사용 하 여 용출 시켰 다 . 6 ml 분획 을 수집 하 여 SDS - PAGE 로 순도 를 분석 하 였 다 . 균질 QC 포함 분획 을 모아서 한외 여과 로 농축 하 였 다 . 장기 저장 ( - 20 ℃) 을 위해 글리세롤 을 50 % 의 최종 농도 가 되게 첨가 하 였 다 . 브래드포드 또는 길 및 폰 히 펠 의 방법 ( Bradford , M . M . 1976 Anal Biochem 72 , 248 - 254 ; Gill , S . C . 및 von Hippel , P . H . 1989 Anal Biochem 182 , 319 - 326 . ) 에 따라 단백질 을 정량 하 였 다 .