자극제 ( 50 nM PMA ( phorbol 12 - myristate 13 - acetate ) + 1 μ M A 23187 in siraganian buffer ) 를 처리 한 후 다시 30 분 동안 추가 배양 하 였 다 . 배양 후 상등 액 20 μ L 을 취하 여 새로운 96 - well plate 로 옮긴 후 substrate buffer ( 2 mM 4 - p - nitrophenyl - N - acetyl - β - D - glucosaminide in 50 mM sodium citrate buffer , pH 4 . 5 ) 80 μ L 를 혼합 하 고 37 ℃ 배양기 에서 30 분 간 반응 시켰 다 . 반응 이 끝난 후 각 well 에 stop solution ( 0 . 1 M NaHCO 3 , pH 10 ) 200 μ L 을 첨가 하 여 반응 을 종결 시킨 후 ELISA 리더 를 이용 하 여 405 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 그 결과 를 바탕 으로 β - 헥 소사미 니다 아 제 의 방출 정도 를 양성 대 조군 대비 50 % 억제 하 는 각 화합물 의 농도 로서 IC 50 값 을 하 기 표 A 에 기재 하 였 다 . 자극제 를 처리 하 지 않 은 군 을 음성 대 조군 ( -) 으로 , 자극제 만 처리 한 군 을 양성 대 조군 ( +) 으로 하 였 다 .