hNR 10 / hOSMR / BaF 3 세포 를 10 % FBS ( MOREGATE ) , 1 % Penicillin - Streptomycin ( Invitrogen ) 을 포함 하 는 RPMI 1640 배지 ( GIBCO ) 에서 1 . 5 × 105 cells / mL 가 되 도록 조제 하 였 다 . 그 일부 를 취하 여 , hIL - 31 ( R & D Systems ) 을 4 ng / mL 가 되 도록 첨가 하 였 다 ( IL - 31 ( +), final conc . ; 2 ng / mL ) . 나머지 세포 현탁액 을 IL - 31 ( -) 로 하 였 다 . 정제 한 NS 22 를 배지 에서 2 ㎍/ mL 로 조정 하 고 , 추가 적 으로 희석 공비 3 , 합계 8 계열 의 희석 액 을 조제 하 였 다 ( final conc . ;≤ 1 ㎍/ mL ) . 96 well flat bottom plate ( CORNING ) 의 각 well 에 세포 현탁액 과 키메라 NS 22 ( 인간 γ 1 , κ ) 희석 용액 각각 50 μ L 를 파종 하 고 , 37 ℃, 5 % CO 2 인큐베이터 에서 2 일 간 배양 하 였 다 . 배양 종료 후 , 각 well 에 Cell Counting Kit - 8 ( Dojindo ) 와 PBS 를 등량 혼합 한 용액 을 20 μ L 첨가 하 고 , 흡광도 ( 450 ㎚/ 620 ㎚) 를 측정 하 였 다 ( TECAN , SUNRISE CLASSIC ) . 37 ℃, 5 % CO 2 인큐베이터 에서 2 시간 반응 시킨 후 , 다시 흡광도 를 측정 하 였 다 . NS 22 의 중화 활성 은 2 시간 값 에서 0 시간 값 을 뺀 값 을 사용 하 여 , 저해 율 로 나타내 었 다 . 그 결과 , NS 22 는 hNR 10 / hOSMR / BaF 3 세포주 에 있 어서 , 농도 의존 적 으로 IL - 31 자극 에 의한 세포 증식 을 억제 하 는 것 이 명백 해져 , 인간 IL - 31 시 그날 링 에 대해 중화 활성 을 갖 는 것 이 증명 되 었 다 ( 도 5 ) .