RIKEN 세포 은행 ( Tsukuba , Japan ) 으로부터 입수 한 뮤 린 전구 세포 ( 세포주 C 3 H 10 T 1 / 2 또는 ATDC 5 ) 또는 인간 면역 선택 적 Stro - 1 + 전구 세포 ( Mesoblast Ltd , Melbourne , Australia ) 를 전술 한 바 와 같이 미세 배 양물 로 형성 하 거나 , 6 - 웰 배양 플레이트 에 1 . 5 x 105 세포 / 웰 의 농도 로 접종 하 고 , 화합물 을 첨가 하 기 전 에 24 시간 동안 부착 시킨다 . 배양 에 요구 되 는 농도 의 2 배 로 10 % FCS 및 50 ㎕/ ml 의 겐타마이신 을 함유 하 는 DMEM 배지 에서 , 다양 한 농도 의 rhNC 4 단독 및 PPS ( Bene - Arzneimittel , Munich , Germany ) 와 의 조합 제제 를 제조 하 고 , 0 . 22 μ m 필터 로 멸균 한 후 , 연속 적 으로 희석 하 여 각 실험 에 필요 한 최종 농도 를 갖 는 약물 을 제조 한다 . 각 시험 용액 의 분취 물 을 24 - 웰 배양 플레이트 의 각 웰 에 가한다 . 3 H - 글루코사민 원액 을 배지 에서 희석 시켜 1 . 0 μ Ci / ml 용액 을 제조 하 고 , 즉시 각 웰 에 첨가 한다 . 플레이트 를 추가 24 h 동안 인 큐 베이 션 시킨다 . 배양 종결 시 , 배지 를 캡 핑 된 5 ml 관 에 수집 하 고 , 3 H - HA 분석 을 위해 - 20 ℃ 에서 저장 한다 . 세포 는 트립 신화 를 통해 유리 시키 고 , 세 척 과 함께 원심 분리 한다 . 배지 에 대해 , 트립신 이동성 ( mobilized ) 방사성 표지 된 - HA 및 세 척 을 분석 하 고 , 세포 는 , 후술 한 바 와 같이 유전자 발현 평가 및 RNA 추출 을 위해 사용 된다 .