탈지 를 위하 여 , 난모 세포 를 3 분 간 50 % 소 혈청 ( CS ) 의 존재 하 에서 1 mg / ㎖ 프로 나제 로 분해 시켰 고 , 20 % CS 로 보충 된 Hepes - 완충 된 TCM - 199 배지 에서 세척 하 여 부분 적 인 투명대 분해 를 초래 하 였 다 ( 도 7 a ) . 이어서 40 - 50 개 의 난모 세포 를 2 % CS , 3 mg / ㎖ PVA 및 7 . 5 ㎍/㎖ 시토 칼라 신 B ( CB ) 로 보충 된 Hepes - 완충 된 TCM - 199 배지 에서 실온 에서 원심 분리 하 였 다 ( 12000 x g , 20 분 ) ( 도 7 b ) . 원심 분리 되 난모 세포 와 온전 한 난모 세포 둘 다의 투명대 를 2 mg / ㎖ 프로 나 제 용액 에서 추가 로 분해 시켜 완전 하 게 제거 하 였 다 . 활성 화 를 위하 여 , 80 us 동안 85 Kv / cm 의 단일 직류 를 양 군 에 적용 하 였 고 , 그 후 5 ㎍/㎖ CB 및 10 ㎍/㎖ 시클 로 헥 시 미드 ( CHX ) 로 4 시간 처리 하 였 다 . 그 후 모든 배아 를 변형 된 NCSU 37 배지 에서 배양 시켰 다 . 제 7 일 에 배반 포 를 유리 화 시키 고 Cryotop 기술 을 사용 하 여 38 . 5 ℃ 로 가온 하 였 다 ( Kuwayama et al . , RBM Online , in press ) . 유리 화 된 배 반포 의 생존 을 10 % CS 가 보충 된 배양 배지 에서 회수 24 시간 후 재 확장 비율 에 따라 결정 하 였 다 . 양 군 으로부터 의 재 확장 된 배 반포 의 세포 수 를 Hoechst 염색 후 결정 하 였 다 . 결과 를 ANOVA 분석 에 의해 비교 하 였 다 . 부분 적 층 분해 와 원심 분리 는 난모 세포 의 173 / 192 ( 90 %) 에서 성공 적 인 탈지 를 완성 시켰 다 . 배반 포로 의 발생 은 탈지 된 난모 세포 와 온전 한 난모 세포 사이 의 차이 가 없 었 다 ( 각각 28 ± 7 % 대 28 ± 5 %; P > 0 . 05 ) . 그러나 , 탈지 된 난모 세포 로부터 유래 한 배 반포 의 생존 율 은 온전 한 난모 세포 로부터 유래 한 것 보다 상당히 높 았 다 ( 각각 85 ± 6 % 대 32 ± 7 %; P < 0 . 01 ) . 탈지 된 또는 온전 한 난모 세포 중 하나 로부터 유래 한 재 확장 된 배 반포 의 평균 세포 수 에 는 차이 가 없 었 다 ( 각각 36 ± 7 대 38 ± 9 ; P > 0 . 05 ) . 결과 는 간단 한 탈지 기술 은 활성 화 된 돼지 난모 세포 의 시험관 내 발생 능력 을 방해 하 지 않 고 , 세포 수 에 있 어서 상당 한 손실 없이 유래 된 배 반포 의 동결 생존 률 을 개선 시킨다는 것 을 증명 한다 .