상청 액 을 취하 여 SDS - PAGE 전기 영동 ( Mini - PROTEAN 3 Cell , Bio - Rad , Hercules , CA , USA ) 을 수행 하 고 , 전기 영동 완료 후 , 반 건식 전기 전달 시스템 을 이용 하 여 단백질 을 니트 로 셀룰로오스 막 으로 전달 하 며 ( Amersham Life Sciences , Arlington Heights , IL , USA ) , 니트 로 셀룰로오스 막 을 차단액 ( 5 % 의 탈지 분유 를 1 mmol 의 바나듐 산 나트륨 을 함유 한 TBS 에 희석 함 ) 으로 실온 하 에서 2 시간 동안 차단 한 후 , 막 을 제 1 항체 에 넣 어 4 ℃ 의 온도 하 에서 하룻밤 지낸다 . 1 mmol 의 바나듐 산 나트륨 을 함유 한 TBS 로 15 분 씩 세 번 세척 하 였 다 . 막 을 제 2 항체 용액 에 넣 어 실온 하 에서 1 - 2 시간 동안 반응 시키 고 ; 상기 와 같이 막 을 세 번 세 척 한 후 , ECl ( Picece , Rockford , IL ) 시약 으로 발색 하 여 현상 한다 .