일 구 현예 에서 , KD 는 방사선 라벨 링 된 항원 결합 검정 ( RIA ) 에 의해 측정 된다 . 일 구 현예 에서 , RIA 는 당해 항체 의 Fab 버 젼 및 이 의 항원 으로 수행 된다 . 예 를 들 어 , 항원 에 대한 Fabs 의 용액 결합 친화도 는 라벨 링 되 지 않 은 항원 의 적정 시리즈 의 존재 하 에서 ( 125 I ) - 라벨 링 된 항원 의 최소 농도 로 Fab 평형 화 , 그 다음 항 - Fab 항체 - 코팅 된 플레이트 로 결합 된 항원 포착 에 의해 측정 된다 ( 참고 , 예 를 들 어 , Chen 등 J . Mol . Biol . 293 : 865 - 881 , 1999 ) . 검정 에 대한 조건 을 확립 하 기 위해 , MICROTITER ® 멀티 웰 플레이트 ( Thermo Scientific ) 은 50 mM 탄산 나트륨 ( pH 9 . 6 ) 중 에 5 ㎍/㎖ 의 포착 항 - Fab 항체 ( Cappel Labs ) 로 밤새 코팅 되 고 , 후속 하 여 실온 ( 대략 23 ℃) 에서 2 시간 내지 5 시간 동안 PBS 중 의 2 % ( w / v ) 소 혈청 알부민 으로 차단 된다 . 비 - 흡착제 플레이트 ( Nunc # 269620 ) 에서 , 100 pM 또는 26 pM [ 125 I ] - 항원 은 하 기 와 혼합 된다 : 당해 Fab 의 연속 희석 액 ( 예 를 들 어 , 하 기 에서 , 항 - VEGF 항체 , Fab - 12 의 평가 와 일치 : Presta 등 Cancer Res . 57 : 4593 - 4599 , 1997 ) . 이후 , 당해 Fab 는 밤새 인 큐 베이 션 되 지만 , 인 큐 베 이 션 은 평형 이 도달 된다는 것 을 보장 하 도록 더 긴 기간 ( 예 를 들 어 , 약 65 시간 ) 동안 계속 할 수 있 다 . 이후 , 혼합물 은 실온 에서 ( 예 를 들 어 , 1 시간 동안 ) 인 큐 베이 션 을 위해 포착 플레이트 로 이동 된다 . 용액 은 그 다음 제거 되 고 플레이트 는 PBS 내 0 . 1 % 폴리 소르 베이트 20 ( TWEEN ®- 20 ) 으로 8 회 세정 된다 . 플레이트 가 건조 된 경우 , 150 μ l / 웰 의 섬광 기 ( MICROSCINT - 20 TM ; Packard ) 는 첨가 되 고 , 플레이트 는 TOPCOUNT ™ 감마 계수기 ( Packard ) 에서 10 분 동안 계수 된다 . 최대 결합 의 20 % 이하 를 제공 하 는 각각 의 Fab 의 농도 는 경쟁 적 결합 검정 에서 의 사용 을 위해 선택 된다 .