네 개 의 형질 도 입체 를 고르 고 , 5 ㎖ L 브 로 쓰 및 20 ㎍/㎕ 클로람페니콜 을 접종 하 는 데 사용 하 였 다 . 배 양물 을 200 rpm 에서 진탕 하 면서 30 ℃ 에서 하룻밤 동안 성장 시켰 다 . PCR 분석 을 위한 각각 의 형질 도 입체 의 게놈 DNA 프 렙 을 만들 기 위해 , 1 . 5 ㎖ 의 하룻밤 세포 배 양물 을 원심 분리 하 였 다 . 세포 펠릿 을 400 ㎕ 재현 탁 완충액 ( 2 O mM Tris , 1 mM EDTA , 5 O mM NaCl , pH 7 . 5 ) 으로 재현 탁하 고 , 4 ㎕ RNase ( 무 - DNase ) ( Roche ) 를 첨가 하 였 다 . 튜브 를 30 분 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 한 후 , 4 ㎕ 10 % SDS 및 4 ㎕ 의 10 mg / ㎖ 프로테 이나 아제 K 저장액 ( Sigma - Aldrich ) 을 첨가 하 였 다 . 튜브 를 1 시간 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 용해 물 을 2 ㎖ Phase Lock Light Gel 튜브 ( Eppendorf ) 에 옮기 고 , 각각 200 ㎕ 의 포화 페놀 ( pH 7 . 9 ) ( Ambion Inc . ) 및 클로로포름 을 첨가 하 였 다 . 튜브 를 잘 혼합 시키 고 , 5 분 동안 미세 원심 분리 ( microcentrifuge ) 하 였 다 . 400 ㎕ 클로로포름 으로 두 번 째 추출 을 수행 하 고 , 수성 층 을 새로운 에 펜 도르 프 튜브 에 옮겼 다 . 1 ㎖ 의 100 % 에탄올 을 첨가 하 고 5 분 동안 원심 분리 하 여 게놈 DNA 를 침전 시켰 다 . 게놈 DNA 펠릿 을 1 ㎖ 의 70 % 에탄올 로 세척 하 였 다 . 에탄올 을 제거 하 고 게놈 DNA 펠릿 을 짧 게 자연 건조 시켰 다 . 게놈 DNA 펠릿 을 200 ㎕ TE 로 재현 탁하 였 다 .