Opti - PRO SFM 배지 ( Thermo Fisher Scientific 사 ) 3 mL 에 PEImax ( Polyscience 사 ) 800 μ g 을 용해 시켜 , PEImax 용액 으로 하 였 다 . 또한 Opti - PRO SFM 배지 3 mL 에 , pC 3 E - 8025 , pTAA _＃ 2 , 및 pCL _＃ 12123 을 1 : 1 : 1 . 5 의 비율 로 혼합 한 벡터 혼합물 100 μ g , 및 pAKT 및 pGFP 와 단편 화 완료 된 연어 정자 DNA 를 혼합 한 DNA 혼합물 100 μ g 을 각각 첨가 하 였 다 . PEImax 용액 , 벡터 혼합물 , 및 DNA 용액 을 합쳐서 온화 하 게 교반 하 고 , 5 분 간 방치 한 후 에 200 mL 의 CHO - 3 E 7 세포 배양액 에 첨가 하 였 다 . 37 ℃, 5 % CO 2 인큐베이터 내 에서 1 일 진탕 배양 한 후 , Transfectory Supplement ( Irvine Scientific 사 ) 22 mL , Anti clumping suppliment ( Thermo Fisher Scientific 사 ) 480 μ L , 및 valproic acid ( Sigma - Aldrich 사 ) 500 μ L 를 첨가 하 고 , 32 ℃ 에서 9 일 간 더 진탕 배양 하 였 다 . 배양 개시 후 10 일 째 에 배양 상청 을 회수 하 고 , 0 . 2 μ m filter ( Sartorius 사 ) 로 여과 하 여 평가 용 의 샘플 로 하 였 다 .