모든 게놈 분석 을 위해 , 퀴아젠 ( Qiagen ) DNeasy 키트 를 사용 하 여 세포 로부터 DNA 를 수거 하 였 다 . T 7 E 1 검정 의 경우 , CRISPR 커트 부위 를 플 랭킹 하 는 프라이머 로 PCR 을 수행 하 였 다 . 산물 을 PCR 정제 ( 퀴아젠 ) 에 의해 정제 하 고 200 ng 를 변성 시키 며 , 열 순환기 에서 재 어닐링 시키 고 , 제조 업체 의 프로토콜 에 따라 T 7 엔 도 뉴클레아제 I ( 뉴 잉글랜드 바이오 랩스 ) 로 소화 시켰 다 . 소화 된 DNA 를 1 % 아가로스 겔 에서 전기영동 하 고 바이오 래드 케 미독 ( BioRad ChemiDoc ) 영상 기 상 에서 관찰 하 였 다 . 밴드 강도 를 , 이미지 랩 ( Image Lab ) 소프트웨어 ( 바이오 - 래드 ) 를 사용 하 여 분석 하 였 고 대립 유전자 변형 빈도 ( INDEL ) 를 하 기 공식 으로 계산 하 였 다 : 100 x ( 1 -( 1 - 절단 된 분획 ) ^ 0 . 5 ) . TIDE ( 분해 에 의한 In / dels 의 추적 ) 를 사용 하 여 대립 유전자 변형 빈도 를 분석 하 기 위해 , 정제 된 PCR 산물 을 PCR 프라이머 둘 다를 사용 하 여 생어 ( Sanger ) - 서열 분석 하 고 [ 이튼 ( Eton ) ] , 각각 의 서열 크로마토그램 을 온라인 TIDE 소프트웨어 [ 데스크 젠 ( Deskgen ) ] 로 분석 하 였 다 . 모 의 - 형질 감염 된 ( Cas 9 단백질 단독 ) 샘플 로부터 의 참조 서열 을 사용 하 여 분석 을 수행 하 였 다 . 파라미터 는 10 개 뉴클레오티드 의 디폴트 최대 삽입 - 결실 ( indel ) 크기 , 및 고품질 트레이스 를 수반 한 가능 한 가장 큰 윈도우 를 커버 하 는 분 해 윈도우 로 설정 하 였 다 . 3 . 5 % 의 검출 감도 아래 의 모든 TIDE 분석 을 0 % 로 설정 하 였 다 .