( Day 5 ) 에 는 배양 후 플레이트 의 배지 를 멀티채널 피펫 으로 조심 스럽 게 제거 하 였 다 . 1 x PBS 200 ul 씩 분주 하 여 4 회 세척 하 였 다 . 마지막 세척 시 , 플레이트 에 막 ( membrane ) 손상 없이 PBS 를 완전히 제거 하 였 다 . 1 x PBS 에 스 트 렙 타비 딘 - HRP ( streptavidin - HRP ) 을 1 : 250 으로 희석 ( 4 ul / ml ) 하 였 다 . 제조 한 용액 을 각각 의 웰 에 50 ul 씩 분주 하 였 다 . 96 - 웰 플레이트 당 5 ml 의 양 이 필요 하 다 . 플레이트 뚜껑 을 닫 고 랩 으로 감싼 후 상온 ( room temperature ) 에서 60 분 동안 배양 하 였 다 ( HRP 반응 시키 는 동안 에 ABC kit 를 상온 에 꺼내 놓 는다 ) .