이전 완충액 으로 니트 로 셀룰로스 막 옵 티 트란 ( Optitran ) BA - S 85 0 , 22 ( Schleicher & Schuell ) 상 에 반 - 건조 이전 ( semi - dry transfer ) 을 실행 하 였 다 : Tris 48 mM - 글리신 39 mM - SDS 0 . 037 % - 메탄올 20 %, 이어서 PBS - 5 % 우유 ( 블 로 팅 등급 블로커 무 지방 건조 우유 , ref 170 - 6404 , BioRad ) 내 에서 블로킹 , 4 ℃ 에서 밤샘 . PBS - 0 . 1 % 트윈 20 으로 막 을 세척 하 고 PBS - 0 . 1 % 트윈 20 - 2 % 우유 에 1 : 2000 으로 희석 한 1 차 항체 , 네오 시스템 항혈청 ( Neosystem antiserum ) 과 함께 실온 에서 1 시간 30 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 막 을 세척 한 후 에 , PBS - 0 . 1 % 트윈 20 - 2 % 우유 에 1 : 5000 으로 희석 한 HRP 당나귀 항 - 토끼 IgG ( HRP donkey anti - rabbit IgG ) ( NA 934 , Amersham ) 와 함께 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 막 을 세 척하 여 ECL ( RPN 2209 , Amersham ) 로 검출 하 였 다 .