항 염증 효과 가 있 는지 살펴보 기 위하 여 인간 단핵구 세포 인 THP - 1 세포 ( 한국 세포주 은행 ) 에서 의 통상 의 방법 에 따라 COX ( cyclooxygenase ) 활성 억제 능 실험 을 시행 하 였 다 . COX 활성 측정 은 F . J . Van de Ouderaaa and Muytenhek 가 발표 한 Method in Enzymology 43 : 9 ( 1994 ) 에 따라 실시 하 였 다 . COX assay 는 THP - 1 세포주 를 배양 한 다음 24 - 웰 플레이트 에 세포 들 을 분주 하 였 다 . 웰 당 반응 부피 를 500 ㎕ 로 맞추 고 리포 폴리 사카 리드 ( lipopolysaccharide ) ( LPS ) ( 1 ㎍/㎖)( Sigma ) 와 하 기 표 5 에 표기 된 용매 에 각각 녹인 시료 화합물 2 ㎕ 를 첨가 한 다음 24 - 48 시간 동안 같 은 조건 으로 배양 하 였 다 . 24 - 48 시간 후 각 웰 에 칼슘 이 오노 포어 ( calcium ionophore , Sigma ) 와 〔 1 - 14 C 〕 아라키돈산 1 ㎕( in EtOH , 0 . 1 μ Ci / ml , Sigma ) 를 첨가 한 다음 동일 조건 으로 10 분 동안 배양 하 였 다 . 배양 후 각 웰 에 시트르산 을 첨가 하 여 pH 를 3 . 5 로 맞추 어 흔들 어 주 고 , 각 배양액 을 500 ㎕ 를 취하 여 마이크 로 원심분리기 튜브 에 분주 한 다음 에틸 아세테이트 700 ㎕ 를 첨가 하 여 10 분 동안 진탕 추출 하 였 다 . 에틸 아세테이트 층 을 500 ㎕ 취하 여 스피드 진공 건조기 를 이용 하 여 20 분 동안 농축 하 고 농축 된 잔여 부분 20 ㎕ 를 에틸 아세테이트 로 녹인 다음 TLC 플레이트 에 어 센 틱 스탠다드 ( authentic standard ) 와 함께 적용 하 였 다 . 방사능 밴드 는 어 센 틱 이 오코사 노이드 스탠다드 ( authentic eicosanoid standards ) 로 확인 하 였 고 , 확인 된 밴드 의 방사능 은 BAS 2000 바이오 - 이메이 징 어 넬 라이저 ( bio - imaging analyzer ) ( Fuji , 일본 ) 를 이용 하 여 측정 하 였 다 .