항 - FMC 63 의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 의 2 개 의 배향 을 갖 는 항 - FMC 63 scFv - 트라 스투 주 맙 scFv 융합 단백질 을 발현 시키 도록 구축물 을 생성 하 였 다 . 구축물 # 171 ( 서열 번호 117 ) 은 항 - FMC 63 VH - 링커 - VL - 링커 - 트라 스투 주 맙 scFv - His 를 함유 하 고 , 구축물 # 172 ( 서열 번호 118 ) 은 VL - 링커 - VH 배열 에 항 - FMC 63 을 함유 한다 . 이 들 서열 을 GenScript 에 의해 화학 적 으로 합성 하 고 , pcDNA 3 . 1 ( +) hygro 내 로 클로닝 하 였 다 . Lipofectamine 2000 ( Invitrogen / Thermo Fisher ) 을 사용 하 여 293 T 세포 를 형질 감염 시킴 으로써 2 특이 적 scFv 를 함유 하 는 상등 액 을 생성 하 였 다 . 72 시간 후 에 12 k rpm 으로 4 C 에서 3 분 동안 회전 시킴 으로써 상등 액 을 수집 하 였 다 .