공개 된 연구 ( Slaymaker IM et al . , Science . 2016 , 351 ( 6268 ) : 84 - 8 ; Kleinstiver BP et al . , Nature . 2016 , 529 ( 7587 ) : 490 - 5 ) 와 는 상이 하 게 , 본 발명자 들 은 비 편향 된 접근 법 이 보다 높 은 충실 도 를 갖 는 SpCas 9 변이체 를 얻 을 가능 성 을 증가 시키 는 비 - 사소 한 아미노산 치환 의 단리 를 초래 할 수 있 다고 믿 었 다 . 무작위 돌연변이 유발 을 위한 적합 한 타 겟 을 발견 하 기 위해 , 이용 가능 한 구조 적 데이터 를 분석 하 여 어느 SpCas 9 도메인 이 이러 한 종류 의 상호 작용 의 형성 에 보다 수반 될 수 있 는지 를 확인 하 였 다 . Cas 9 의 뉴클레아제 로브 는 , 그것 이 절단 활성 을 유지 하 기 위해 보존 되 어야 하 는 2 개 의 촉매 부위 를 함유 하 기 때문 에 , 이러 한 분석 으로부터 제외 되 었 다 . Rec 1 , Rec 2 및 브리지 헬 릭스 도메인 을 함유 하 는 인식 로브 는 gRNA : DNA 듀플렉스 와 몇몇 접촉 을 하 는 것 으로 보 고 되 었 다 . 또한 , 전체 로서 의 인식 로브 는 유형 II CRISPR 시스템 에 속하 는 3 가지 Cas 9 족 모두 에 걸쳐 가장 적 게 보존 된 영역 중 하나 이 며 , 이 는 높 은 정도 의 서열 가소 성 을 나타낸다 . 반대 로 , 브리지 헬 릭스 은 상이 한 Cas 9 이종상 동체 중 에서 가장 보존 된 영역 중 하나 이 며 , 이 는 그 의 서열 이 뉴클레아제 기능 에 특히 중요 함 을 시사 한다 . Rec 1 - Rec 2 영역 은 무작위 돌연변이 유발 에 적합 하 지 않 은 크기 인 600 개 초과 의 아미노산 에 걸쳐 있 지만 , 상호 작용 하 는 잔기 의 대다수 는 대략 잔기 400 내지 700 의 Rec 1 - II 도메인 의 마지막 부분 에 위치 한다 ( 도 3 ) .