그 의 뉴클레아제 활성 으로부터 독립 적 인 Cas 9 에 대한 대안 적 인 적용 은 Cas 9 의 촉매 적 으로 불활성 인 버전 ( dCas 9 ) 을 전사 를 자극 할 수 있 는 다양 한 단백질 도메인 에 융합 함 에 의한 RNA - 가이드 된 전사 활성화제 의 생성 이 다 . VP 64 - 기반 전사 활성화제 를 evoCas 9 의 촉매 적 으로 불활성 인 돌연변이체 ( evo - dCas 9 ) 를 사용 하 여 조작 하 고 , 야생 형 dCas 9 - VP 64 활성화제 와 병렬 로 시험 하 였 다 . 전사 활성 화 를 최소 CMV 프로모터 내 에서 통합 된 Tet 오퍼레이터 요소 를 통한 TetR - 기반 트랜스 - 활성화제 에 의해 조절 된 유도 성 EGFP - 발현 벡터 에 기반 한 리포터 시스템 을 사용 함 으로써 시험 하 였 다 . Tet 트랜스 - 활성화제 를 반복 된 Tet 오퍼레이터 서열 을 타 겟 팅 하 는 sgRNA 에 의해 가이드 된 Cas 9 - 기반 전사 활성화제 로 치환 하 였 다 ( 도 11 a ) . 가외 의 5 '- G 뉴클레오티드 의 존재 또는 부재 에 대해서 만 상이 한 2 가지 상이 한 온 - 타 겟 sgRNA 를 리포터 플라스미드 의 Tet 오퍼레이터 로커스 , 더 하 기 스 페이서 서열 을 따라 상이 한 위치 에 1 개 또는 2 개 의 돌연변이 를 갖 는 동일 한 온 - 타 겟 서열 에 기반 한 3 개 의 추가 적 인 미스 매칭 된 가이드 에 대해 설계 하 였 다 . EGFP 발현 의 보다 낮 은 절대 수준 이 매칭 및 미스 매칭 된 가이드 RNA 둘 다 에 대해 dCas 9 - VP 64 에 비해 evo - dCas 9 - VP 64 로 관찰 되 었 으며 , 이 는 야생 형 dCas 9 에 의한 타 겟 DNA 에 의 보다 강한 결합 을 시사 한다 ( 도 11 b ) . 그러나 , 대 조군 sgRNA 에 비한 온 - 타 겟 배수 활성 화 는 evo - dCas 9 로 관찰 된 보다 낮 은 배경 활성 화 로 인해 야생 형 dCas 9 및 evo - dCas 9 둘 다 에 대해 유사 하 였 다 . 이러 한 결과 는 아마도 DNA 에 비 특이 적 으로 결합 하 는 evo - Cas 9 의 보다 낮 은 경향 에 기인 할 것 이 다 ( 도 11 c ) . 흥미 롭 게 도 , evo - dCas 9 - VP 64 에 의해 제시 된 증가 된 특이 성 은 dCas 9 - VP 64 와 비교 할 경우 에 보통 이 었 으며 , 이 는 evoCas 9 가 비록 덜 효율 적 이 더라도 미스 매칭 된 타 겟 에 결합 하 지만 , 그 후 절단 반응 을 완결 할 수 없 음 을 시사 한다 ( 도 11 c ) . 전체 적 으로 , 이 들 결과 는 evoCas 9 가 비록 더 적 은 절대 활성 화 효능 일지라도 더 낮 은 배경 활성 화 , 및 약간 증가 된 활성 화 충실 도 를 특징 으로 하 는 전사 조절 인자 를 수립 하 는 데 이용 될 수 있 음 을 나타낸다 .