형질전환 고구마 의 잎 으로부터 RNA 를 4 . 4 M guanidinium - SDS lysis buffer ( chirgwin et al . , 1979 ) 와 5 . 7 M CsCl gradient method ( Glisin et al . , 1974 ) 를 사용 하 여 추출 하 였 다 . 전체 RNA 양 6 ㎍, dNTP Oligo dT primer 10 pmole 씩 넣 고 총 ( total ) 13 ul 되게 하 여 68 ℃ 에서 5 분 간 변성 시킨 후 바로 얼음 ( ice ) 으로 옮겼 다 . 5 X RT - buffer 4 ㎕, RNase inhibitor ( RNasin ) 1 ㎕, 0 . 1 M DTT 1 ㎕, 200 U / ㎕ 의 역전사 효소 ( Superscript III ) 를 1 ㎕ 씩 샘플 ( sample ) 당 넣 어 준 후 , 50 ℃ 에서 1 시간 20 분 동안 역전사 시킨 후 , 바로 70 ℃ 에서 15 분 간 변성 시킨 후 , D . W . 를 샘플 ( sample ) 당 30 ㎕ 씩 넣 어 주 었 다 . 위 에서 나온 cDNA 를 주형 ( Template ) 으로 사용 하 여 RT - PCR 하 였 다 . IbExpansin 유전자 특이 적 프라이머 ( IbExpansin gene specific primer ; 5 ' TTC CAGATA AGG TGT GTG AAC 3 '( 서열 번호 14 ) , 5 ' ACT GTC TCC ACA CTC AGC 3 '( 서열 번호 15 ) ) 를 이용 하 여 PCR 을 수행 하 였으며 , PCR 반응 조건 은 95 ℃ 30 초 변성 ( denature ) , 58 ℃ 30 초 결합 ( annealing ) , 72 ℃ 신장 ( extension ) 1 분 으로 30 회 순환 반복 하 였으며 , 전변 성 ( pre - denature ) 은 95 ℃ 에서 5 분 간 반응 하 였 다 . 내 적대 조군 ( Internal equal loading control ) 으로 고구마 튜불린 프라이머 ( tublin primer ) ( Tublin - 1 ; 5 ' CAA CTA CCA GCC ACC AAC TGT 3 '( 서열 번호 16 ) , Tublin - 2 ; 5 ' CAA GAT CCT CAC GAG CTT CAC 3 '( 서열 번호 17 ) ) 로 PCR 을 IbExpansin 과 같 은 조건 으로 수행 하 였 다 . PCR 산물 을 1 % 아가로스 젤 에 전기영동 하 여 확인 한 결과 , Anti - sense line 1 과 4 번 은 완벽 한 넉 - 아웃 ( knock - out ) 개체 였으며 , anti - sense line 3 번 은 발현 양 이 줄어든 넉 - 다운 ( knock - down ) 개체 임 을 확인 하 였 다 ( 도 11 ) .