포획 분석 : 항혈청 중 의 마우스 항 - 362 . 78 - CHO ( Ab 2 , 항 - 이 디오 타입 ) 항체 가 362 . 78 - CHO ( Ab 1 , CHO 세포 에서 생성 된다 , lot # E 10569 ) 에 결합 하 는 능력 을 포획 사이클 ELISA 분석 을 사용 하 여 평가 하 였 다 . 이 분석 에서 96 - 웰 폴리스티렌 ELISA 플레이트 의 웰 을 먼저 코팅 완충액 ( 0 . 1 M Na 2 CO 3 , pH 9 . 6 ) 중 의 1 ㎍/ mL 의 농도 의 100 μ L / 웰 의 염소 항 - 사람 IgG , Fc 특이 적 항체 ( Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove , PA ) 로 코팅 하 였 다 . 플레이트 를 밤새 4 ℃ 에서 인 큐 베이 션 한 후 , 미 결합 항체 를 흡인 제거 하 고 플레이트 를 300 μ L / 웰 의 세 척 완충액 ( PBS - Tween , 0 . 137 M NaCl , 0 . 0022 M KCl , 0 . 0067 M Na 2 HPO 4 , 0 . 0020 M KH 2 PO 4 , 0 . 05 % v / w 폴리 소르 베이트 20 , pH 7 . 2 ) 으로 2 회 세척 하 였 다 . 웰 을 200 μ L / 웰 의 차단 완충액 ( PBS - 트윈 + 1 % w / v 우 혈청 알부민 ( BSA ) ) 으로 60 분 동안 실온 ( RT ) 에서 차단 하 고 , 흡인 한 후 , 플레이트 를 300 μ L / 웰 의 PBS - 트윈 으로 2 회 세척 하 였 다 . 웰 을 362 . 78 - CHO ( Ab 1 , CHO 세포 에서 생성 된 ZGI , , lot # E 10569 ) 와 함께 1 g / ml ( PBS - 트윈 중 의 1 % BSA 중 의 ) 의 농도 로 인 큐 베이 션 하 였 다 . RT 에서 1 시간 후 , 웰 을 흡인 하 고 플레이트 를 상기 에서 설명 한 것 과 같이 2 회 세척 하 였 다 . 항혈청 ( Ab 2 ) 의 연속 적 인 10 - 배 희석 액 ( PBS - 트윈 중 의 1 % BSA 중 의 ) 을 1 : 1000 의 초기 희석 으로 시작 하 여 1 : 1 , 000 , 000 의 범위 로 제조 하 였 다 . 그런 다음 각 희석 액 의 이중 샘플 을 분석 플레이트 에 100 μ L / 웰 로 옮겼 다 . 정상 적 인 마우스 혈청 을 네거티브 대조 표준 으로서 사용 하 였 다 . 1 시간 동안 RT 에서 인 큐 베이 션 한 후 , 웰 을 흡인 하 고 플레이트 를 상기 에서 설명 한 것 과 같이 2 회 세척 하 였 다 . 그런 다음 웰 에 1 : 5000 의 희석 으로 염소 항 - 마우스 IgG , Fc 특이 적 , HRP 포합 된 항체 ( Jackson ImmunoResearch Laboratories ) 를 100 μ L / 웰 로 첨가 하 였 다 . 1 시간 동안 RT 에서 인 큐 베이 션 한 후 에 미 결합 검출 항체 를 웰 로부터 흡인 제거 하 고 플레이트 를 2 회 세척 하 였 다 . 흡인 후 에 , 100 μ L / 웰 의 테트라메틸 벤지딘 ( TMB ) ( BioFX Laboratories , Owings Mills , MD ) 을 각 웰 에 첨가 하 고 , 플레이트 를 1 분 동안 RT 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 색 발생 을 100 μ L / 웰 의 중지 시약 ( BioFX Laboratories , Owings Mills , MD ) 을 첨가 함 으로써 중지 시키 고 , 웰 의 흡광 도 값 을 Molecular Devices Spectra MAX 340 기기 상 에서 450 nm 에서 판독 한다 .