원심 분리 후 상층 액 만 모아 - 20 ℃ 에서 보관 하 여 사용 한다 . 단백질 분석 기법 ( Immunoblotting ) 을 위해 단백질 25 ㎍/ lane 을 10 % SDS - Polyacrylamide gel 상 에서 전기영동 하 고 , membrane 은 5 % Skim milk 를 첨가 하 여 상온 에서 1 시간 반응 시킨다 . 1 차 항체 는 Tris Buffered saline 에 1 : 1000 비율 로 처리 하 였으며 , 다음 날 TBST ( Tris Buffered saline - Tween 20 ) 에 세 번 washing 후 2 차 항체 는 3 % skim milk 에 anti - rabbit 또는 anti - mouse antibody ( 2 차 항체 ) 를 1 : 1000 비율 로 1 시간 처리 한 후 immunoblotting 한다 .