스 트 렙 토코 쿠스 피 오 게 네스 Cas 9 ( SpCas 9 ) 의 비 특이 적 게놈 절단 으로부터 유래 되 는 제한 을 다루 고 , 보다 높 은 절단 충실 도 를 갖 는 변이체 를 확인 하 기 위해 , 본 발명 은 2 개 의 조작 된 게놈 타 겟 에 대한 온 - 및 오프 - 타 겟 활성 을 동시 에 평가 하 는 것 을 허용 하 는 효모 - 기반 검정 을 기재 한다 . Rec 1 - II 도메인 의 무작위 돌연변이 유발 에 의해 얻 어 진 SpCas 9 변이체 의 스크리닝 은 증가 된 온 / 오프 비 를 갖 는 히트 의 확인 을 허용 하 였 다 . 가장 성능 이 양호 한 뉴클레아제 인 evoCas 9 는 단일 변이체 내 의 확인 된 돌연변이 의 조합 을 통해 단리 되 었 다 . 이전 에 보 고 된 합리 적 으로 설계 된 변이체 로 의 병렬 분석 은 본 발명 의 evoCas 9 의 충실 도 의 유의 한 개선 을 입증 하 였 다 .