ANT 를 과량 생산 하 는 E . coli 균주 W 3110 trpD 9923 ( Yanofsky et al . , Genet . 69 , 409 - 433 , 1971 ) 에서 MANT 생합성 유전자 를 발현 할 수 있 는 벡터 pTrcT 를 다음 과 같 은 과정 을 통해 제작 하 였 다 . 유전자 aamt 1 은 대장균 에 코돈 최적화 codon - optimize 하 여 aamt 1 opt 로 지정 하 고 ( 서열 번호 1 ) GenScript ( New Jersey , 미국 ) 에서 합성 하 였 다 . 서열 번호 2 과 서열 번호 3 의 프라이머 를 이용 하 여 aamt 1 opt 증폭 하 고 ecoRI 및 PstI 으로 절단 된 벡터 pTrc 99 A 에 삽입 하 여 벡터 pTrcT 를 구축 하 였 다 . MR 배지 ( 6 . 67 g / L KH 2 PO 4 , 4 g / L ( NH 4 ) 2 HPO 4 , 0 . 8 g / L MgSO 4 · 7 H 2 O , 0 . 8 g / L citric acid , and 5 mL trace metal solution ( Lee et al . , J . Environ . Polym . Degrad . 4 , 131 - 134 , 1996 ) ) 에 단일 탄 소원 으로 포도당 을 사용 하 는 쉐이크 플라스크 배양 에서 ANT 및 MANT 생산 을 확인 하 였 다 .