이 분석 의 배경 이론 은 관심 대상 키나아제 에 대한 Alexa Fluor 647 - 표지 된 트레이서 의 결합 및 축출 ( displacement ) 에 기초 한다 . 키나아제 에 대한 트레이서 의 결합 은 EU - 표지 된 항 - tag 항체 를 이용 하 여 검사 한다 . 키나아제 에 대한 트레이서 와 항체 두 가지 모두 의 동시 결합 에 의해 FRET - 시그널 이 발생 한다 . 키나아제 에 대한 억제제 의 결합 은 트레이서 와 의 결합 을 두 고 경쟁 하 여 , FRET - 시그널 의 손실 을 ㅇ이 일으킨다 . 먼저 화학식 ( I ) 의 화합물 을 20 mM Hepes pH 8 . 0 , 1 mM DTT , 10 mM MgCl 2 및 0 . 01 % Brij 35 에 희석 하 였 다 . 이어서 Axl 키나아제 ( 5 nM 최종 농도 ; Proqinase ) , 키나아제 트레이서 ( 15 nM 최종 농도 ; Invitrogen ) 및 LanthaScreen Eu - Anti - GST 항체 ( 2 nM 최종 농도 ; Invitrogen ) 를 적절 한 화합물 희석 물 과 혼합 하 고 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . FRET - 시그널 을 EnVision Multilabelreader 2104 ( Perkin Elmer ) 를 이용 하 여 정량 하 였 다 .