토마토 는 두 카피 의 유전자 아 세토 락 테이트 신타 아제 ( ALS 1 및 ALS 2 ) 를 함유 하 며 , 이 의 단백질 은 광범위 한 제초제 의 표적 이 다 . ALS 2 위치 P 184 및 S 640 , 및 ALS 1 단백질 에서 이 에 상응 하 는 아미노산 들 ( P 186 및 S 642 ) 에서 의 특이 적 아미노산 변화 는 제초제 의 활성 에 저항성 인 단백질 을 생성 하 고 , 이러 한 단백질 을 발현 하 는 식물 세포 는 제초제 적용 을 존속 시킨다 . P 184 및 S 640 코돈 둘 모두 에서 의 돌연변이 가 지배 적 이 며 , 단일 세포 및 식물 수준 둘 모두 에 대해 선택 될 수 있 다 . 우리 는 rAPOBEC 1 - Cas 9 D 10 A - UGI - NLS 단백질 이 원형질체 에서 이 들 코돈 에 표적 화 될 수 있 으며 , 이 는 제초제 저항성 을 부여 하 는 돌연변이 를 생성 하 는 것 으로 추론 하 였 다 . 제초제 의 원형질체 성장 배지 에 의 첨가 는 P 184 및 S 640 코돈 및 그 주변 에서 C 에서 T 로 의 전이 를 함유 한 원형질체 를 선택 하 고 , 이어서 제초제 내성 캘리 가 생성 될 것 이 다 . 그런 다음 , 이러 한 캘리 는 이 들 표적 부위 에서 생성 된 돌연변이 를 확인 하 기 위해 제노 타이핑 될 수 있 다 . 이러 한 실험 은 다른 식물 위치 에서 C 에서 T 로 의 전이 가 도입 될 수 있 음 을 보여 줄 수 있 다 . 실시 예 1 에서 입증 된 바 와 같이 , 표적 영역 에서 다수 의 시토신 이 변형 될 수 있 으며 , 그 결과 여러 인접 아미노산 이 변형 된다 . 따라서 , 본 발명자 들 은 ALS 억제 제초제 에 대한 개선 된 내성 을 나타내 는 , 이전 에 확인 되 지 않 은 아미노산 변화 의 조합 으로 제초제 내성 캘리 를 선택 할 수 있 다 . 또한 , 두 카피 의 ALS 가 토마토 에 존재 하 기 때문 에 , 우리 는 디 아미 나 아제 - Cas 9 단백질 이 단일 세포 에서 ALS 1 및 ALS 2 유전자 둘 모두 에 동시 에 돌연변이 를 도입 하 는 능력 을 평가 하 고자 했 다 .