상기 제작 한 항 - S 229 인산화 Oct 4 항체 를 이용 하 여 줄기세포 의 세포 주기 를 측정 하 기 위해 Oct 4 S 229 인산화 정도 를 유세포 분석 을 통해 확인 했 다 . 유세포 분석 을 위해 참고 예 1 의 E 14 배아줄기세포 1 X 106 개 를 채취 한 뒤 2 % ( v / v ) paraformaldehyde ( Sigma ) 로 고정 하 였 다 . PBS 로 두 번 세 척 한 뒤 Perm / Wash Buffer ( BD , 554723 ) 로 30 분 간 배양 하 여 permeabilization 하 였 다 . 그리고 나 서 , 2 % ( w / v ) Bovine serum albumin ( BSA ) 을 함유 한 PBS 을 30 분 간 처리 하 고 1 : 500 의 비율 로 희석 한 항 - Oct 4 ( Santa Cruz , sc - 5279 ) 항체 와 1 : 200 의 비율 로 희석 한 상기 제작 한 항 - p - Oct 4 ( S 229 ) 항체 를 각각 배양 했 다 . 그리고 나 서 Alexa Fluor 488 - 또는 568 - 결합 된 항 - 마우스 또는 항 - 토끼 항체 ( Invitrogen ) 를 사용 하 여 배양 한 후 Perm / Wash Buffer ( BD , 554723 ) 로 세 번 세척 하 였 다 . 그 후 유세포 분석기 LSR II ( BD ) 를 이용 하 여 10000 개 에 해당 하 는 세포 의 신호 를 측정 하 였 다 .