본 출원 에서 발굴 된 복제 수 가 향상 된 플라스미드 가 직접 적 으로 단백질 발 현양 을 증가 시킬 수 있 음 을 확인 하 기 위하 여 목적 산물 인 D - 타가토스 전환 효소 의 발현 을 확인 하 였 다 . 각각 의 플라스미드 에 D - 타가토스 전환 효소 가 삽입 된 시스템 을 코 리네 박 테리 움 에서 발현 확인 하 고자 하 였으며 , 각 세포 들 은 BHI 배지 에 접종 후 , 30 ℃ 에서 24 시간 배양 한 이후 한 번 의 동일 한 조건 의 계대 배양 과정 을 거친 다음 O . D 600 nm 4 로 수확 후 세포 파쇄 를 초음파 파쇄기 를 이용 하 여 진행 하 였 다 . 각각 의 세포 들 은 동일 한 시간 의 배양 과 초음파 파쇄 과정 을 거쳤으며 , 동일 한 조건 으로 단백질 발현 분석 을 진행 하 였 다 . 단백질 발현 을 확인 하 기 위하 여 SDS - PAGE 를 이용 한 발현 단백질 분석 과정 을 통해 56 . 6 kDa 크기 의 D - 타가토스 전환 효소 의 발현 을 확인 하 였 다 . Western blot 을 이용 한 단백질 분석 도 진행 하 였으며 , 이 는 D - 타가토스 전환 효소 에 붙인 히스티딘 6 개 tag 을 이용 하 여 항 히스티딘 항체 를 이용 하 여 확인 하 였 고 , 예상 되 는 단백질 크기 의 밴드 만 확인 되 는 것 으로 보 아 원 하 는 D - 타가토스 전환 효소 의 발현 과 발 현양 을 확인 할 수 있 었 다 . SDS - PAGE 결과 를 이용 하 여 생산 된 전체 단백질 대비 D - 타가토스 전환 효소 의 발 현양 은 Gel Analyzer 프로그램 을 이용 하 여 정량 분석 하 였 다 . 도 6 에서 C 는 발현 유전자 가 없 는 벡터 이 며 , H 는 pHCP 를 이용 하 여 D - 타가토스 전환 효소 를 발현 하 는 것 이 고 51 , 7 은 각각 pHCP 51 , pHCP 7 을 이용 한 발현 시스템 에서 의 발 현양 이 다 . 결과 적 으로 pHCP 보다 pHCP 51 을 이용 한 것 의 발 현양 이 3 . 8 % 증가 하 였 고 , pHCP 7 을 이용 한 발현 시스템 은 pHCP 보다 5 . 3 % 의 발 현양 의 증가 함 을 확인 할 수 있 었 다 ( 도 6 ) . 이 는 본 출원 에서 발굴 한 플라스미드 가 기존 pHCP 보다 단백질 발현 에 있 어 발 현양 의 증가 함 을 보였 기 에 더욱 유용 하 다는 것 을 확인 할 수 있 었 다 .