우선 50 mL 카나마이신 을 첨가 한 CM 배지 ( 박토 - 펩톤 10 g / L , 박토 비프 익스 트렉 트 ( Bacto beef extract ) 5 g / L , 박토 이스트 익스 트렉 트 ( Yeast extract ) 5 g / L , NaCl 2 . 5 g / L ) 4 mL 배지 에 선 배양 을 위해 코 리네 박 테리 움 암모니아 게 네스 형질전환 체 를 30 ℃ 에서 24 시간 배양 하 였 다 . 선배 양 된 형질전환 체 1 mL 를 50 mL 의 CM 배지 배양액 에 접종 하 여 30 ℃ 에서 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 초음파 파쇄기 로 형질전환 체 를 파쇄 한 후 , 30 mM XMP , 13 mM ATP , 16 mM MgSO 4 7 H 2 O , 40 mM ( NH 4 ) 2 SO 4 를 16 mM Trizma HCl 완충액 ( pH 8 . 6 ) 에 녹인 반응 액 800 mL 에 200 mL 의 세포 파쇄 액 을 섞 고 , 40 ℃ 에서 15 분 간 반응 을 진행 시켰 다 . 시료 200 mL 를 0 . 175 % TCA 용액 3 . 8 mL 에 섞 어 반응 을 중지 시켰 다 . 상기 반응 액 을 HPLC 를 이용 해서 생성 된 GMP 량 을 비교 하 였 다 . 이때 , 5 '- 크 산 틸 산 아미 나 아제 의 효소 활성 은 1 분당 1 mmol 의 5 '- 구아닐산 이 생성 되 는 조건 을 1 단위 활성 으로 정하 였 다 . HPLC 분석 조건 은 다음 과 같 다 .