CDC 효능 에 대한 , K 326 W / E 333 S C 1 q 결합 - 증진 돌연변이 와 세포 표면 상 의 항체 다량체 화 를 용이 하 게 하 는 K 248 E / T 437 R 치환 ( Zhang et al . , 2017 MAbs ( 9 ) 7 : 1129 - 42 ) 과 의 조합 의 효과 를 , CD 52 - 양성 Wien 133 B 세포 림프종 세포 상 에서 항 - CD 52 IgG 1 - 캄 파트 변이체 ( 알 렘 투 주 맙 기반 ) 를 사용 하 여 시험 하 였 다 . Wien 133 세포 ( 영국 옥스포드 소재 바 이오아나 랩 리 미티 드 ( BioAnaLab Limited ) 의 제프 홀 박사 ( Dr . Geoff Hale ) 에 의해 친절 하 게 제공 됨 ) 를 수거 하 고 , 배지 [ 0 . 2 % 소 혈청 알부민 ( BSA ; 로슈 카탈로그 번호 10735086001 ) 을 함유 하 는 RPMI ( 론 자 , 카탈로그 번호 BE 12 - 115 F ) ] 에 재현 탁 시켰 다 . 40 μ L 세포 를 둥근 - 바닥 96 - 웰 플레이트 에 피펫 팅 하 였 다 ( 0 . 1 x 106 개 세포 / 웰 ) . 40 μ L 의 연속 희석 된 항체 샘플 ( 4 배 희석 으로 범위 0 . 002 - 40 μ g / mL 최종 농도 ) 을 첨가 하 고 , 진탕 시키 면서 실온 에서 15 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 20 μ L NHS ( 20 % 최종 농도 ) 를 인간 보체 의 공급원 으로서 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 45 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 샘플 을 얼음 상 에 배치 하 여 반응 을 정지 시켰 다 . 냉각 된 세포 를 펠릿 화 하 고 , 30 μ L 의 2 μ g / mL 아이오딘화 프로 피 듐 ( PI ; 시그마 알드리치 ) 에 재현 탁 시켰 다 . 샘플 을 인텔리 사이트 아이큐 스 크리너 플러스 상 에서 유동 세포 측정 법 에 의해 분석 하 고 , 용해 백분율 을 하 기 식 에 따라 결정 하 였 다 : % 용해 = ( PI - 양성 세포 의 수 / 총 세포 수 ) x 100 %. 도 25 는 WT IgG 1 - 캄 파트 에 육량 체화 - 증진 단일 돌연변이 E 430 G 또는 다량체 화 - 증진 이중 돌연변이 K 248 E / T 437 R 의 도입 이 Wien 133 세포 에 대한 증가 된 CDC 효능 을 유발 하 였 다는 것 을 보여준다 . 세포 표면 상 의 다량체 화 를 용이 하 게 하 는 K 248 E / T 437 R 돌연변이 와 C 1 q 결합 을 증진 시키 는 K 326 W / E 333 S 돌연변이 를 조합 함 으로써 IgG 1 - 캄 파트 - K 248 E / K 326 W / E 333 S / T 437 R 에서 CDC 효능 이 추가 로 증진 되 었 다 .