동종 이계 반응 자 ( responder ) PBMC 는 말초 혈관 으로부터 그라 디언 트 원심 분리 에 의해 분리 되 었 다 . DC 자극 ( 10000 , 2000 , 또는 400 ) 은 96 웰 밑 둥근 플레이트 상 에서 2 % 인간 혈장 ( pooled ) 이 보충 된 200 ㎕ AIM - V 배지 내 에서 105 개 반응 자 세포 를 사용 하 여 3 중 으로 배치 되 었 다 . 양성 기준 으로 , 105 개 반응 자 세포 는 100 ng / ml 스타 필로 코 커스 엔테로톡신 A / B ( SEA / SEB , Toxin Technologies Inc . , Sarasota , FL ) 로 자극 받 았 다 . 4 일 째 , 공동 - 배 양물 은 추가 18 시간 동안 1 μ Ci 의 트리 티 움 티미 딘 용액 ( NEN Life Science Products , Boston , MA ) 으로 항온 처리 되 었 다 . 마지막 으로 , 세포 는 Skatron ( Lier , Norway ) 수득 기 로 회수 되 었 다 . Trilux - 플레이트 판독기 ( Wallac Oy , Turku , Finland ) 를 이용 하 여 결합 된 트리 티 움 티미 딘 이 카운트 되 었 다 . 대안 으로 , 동종 이계 PBMC 는 CFSE ( Molecular Probes , Eugene , OR ) 으로 라벨 되 고 , 1 / 5 , 1 / 10 , 1 / 20 , 1 / 40 , 및 1 / 80 의 비율 로 DC 와 혼합 되 었 다 . 대 조군 의 경우 , DC 또는 SEA / SEB 의 첨가 는 없 었 다 . 마지막 으로 , PBMC 는 항 - CD 3 - PerCP 으로 라벨 되 고 , FACS Calibur 유동 혈구 계산기 를 이용 하 여 분석 되 었 다 . CD 3 양성 CFSE 음성 T - 림프구 의 비율 이 결정 되 었 다 .