형질전환 체 를 PCR 분석 으로 확인 하 였으며 , 증폭 된 단편 을 서열 분석 하 였 다 . 콜로니 를 배지 4 ( 50 mg / L 아프 라 마이신 및 25 mg / L 날리딕스산 포함 ) 에 패치 ( patch ) 하 였 다 . 각각 의 패치 로부터 의 6 mm 원형 플러그 를 사용 하 여 10 mL 시드 배지 ( 배지 1 의 변형 - 2 % 글루 코즈 , 3 % 가용성 전분 , 0 . 5 % 옥수수 침지 고형물 , 1 % 콩가루 , 0 . 5 % 펩톤 , 0 . 3 % 염화나트륨 , 0 . 5 % 탄산칼슘 ) + 50 mg / L 아프 라 마이신 을 포함 하 는 각각 의 50 mL 팔 콘 시험관 에 접종 하 였 다 . 이 들 시드 배 양물 을 2 일 동안 28 ℃ 에서 200 rpm , 5 cm 쓰 로 우로 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 이 들 을 사용 하 여 ( 5 % v / v ) 발효 배지 ( 배지 2 ) 을 접종 하 고 , 28 ℃ 에서 24 시간 동안 , 이어서 26 ℃ 에서 추가 의 5 일 동안 성장 시켰 다 . 대 사물 을 상술 된 표준 프로토콜 에 따라 이 들 로부터 추출 하 였 다 . 샘플 을 상술 된 표준 프로토콜 을 이용 하 여 HPLC 에 의해 막베 신 유사 체의 생 성 에 대해 평가 하 였 다 .