증식 검정 을 위하 여 , 검정 수행 에 1 일 앞서 , BSMCs 는 완전 한 배양 배지 내 96 웰 조직 배양 플레이트 ( 카탈로그 번호 353072 , Falcon BD ) 에서 2 x 105 세포 / ml 로 플 레이팅 되 었 다 . 24 시간 후 , 배양 배지 는 검정 배지 로 대체 되 었 고 세포 는 추가 의 24 시간 동안 인 큐 베이 션 되 었 다 . 항 - 인간 트립 타제 항체 는 96 웰 조직 배 양판 ( 카탈로그 번호 353072 , Falcon BD ) 에서 검정 배지 내 3 . 3 - 배 연속 으로 희석 되 었 다 . 100 μ l 의 희석 된 hu 31 A . v 11 IgG 4 는 100 μ l 의 200 nM 인간 트립 타제 를 함유 하 는 96 웰 플레이트 로 이동 되 었 다 . 활성 트립 타제 및 항 - 인간 트립 타제 항체 는 30 분 동안 실온 에서 인 큐 베이 션 되 었 다 . 이때 , 검정 배지 는 플 레이팅 된 세포 로부터 제거 되 었 고 100 μ l 의 희석 된 항체 플러스 트립 타제 로 대체 되 었 다 . 항체 의 최종 농도 는 2 . 0 μ M 내지 4 pM 범위 이 었 다 . 트립 타제 의 최종 농도 는 100 nM ( 헤파린 없 음 ) 이 었 다 . 최종 염 농도 는 약 130 mM 이 었 다 . 트립 타제 단독 을 가진 웰 들 은 자극 대 조군 으로서 포함 되 었 다 . 검정 배지 단독 을 가진 웰 들 은 미 자극 된 대 조군 으로서 포함 되 었 다 . 플레이트 는 24 시간 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 된 다음 1 μ Ci 의 H 3 - 티미 딘 / 웰 이 첨가 되 었 다 . 추가 의 6 시간 의 인 큐 베이 션 후 , 증식 은 H 3 - 티미 딘 편입 으로 측정 되 었 다 . 세포 - 연관 된 방사능 은 섬광 계수 로 정량 화 되 었 다 . 결과 는 3 중 샘플 의 평균 으로서 표현 되 었 다 . 그래프 는 생성 되 었 고 통계 분석 은 KaleidaGraph ( Synergy Software ) 를 사용 하 여 수행 되 었 다 .