MCM 331 세포 ( S . 세레 비지 에 메 발 로 네이트 키나아제 , 메 발로 네이트 포스 페이트 키나아제 , 메 발로 네이트 피로 포스 페이트 데 카르복실라아제 및 IPP 이성화 효소 를 인코딩 하 는 염색체 구성 물 gi 1 . 2 KKDyI 를 함유 함 ) 를 LB 에서 중간 로그 상 까지 성장 시킨 후 얼음 냉각 된 멸 균수 로 3 회 세척 하 였 다 . 50 ㎕ 의 세포 현탁액 을 1 ㎕ 의 플라스미드 EWL 244 와 혼합 하 였 다 . 세포 현탁액 혼합물 을 Gene Pulser Electroporator 를 사용 하 여 2 . 5 볼트 및 25 uFd 에서 2 mm 큐벳 내 에서 전기 천공 하 였 다 . 1 ㎖ 의 LB 를 세포 에 즉시 첨가 한 후 , 금속 마개 를 갖 는 14 ㎖ 폴리프로필렌 튜브 에 옮겼 다 . 30 ℃ 에서 2 시간 동안 성장 시켜 세포 가 회수 되게 하 였 다 . 형질전환 체 를 LA 및 50 ㎍/㎕ 카르 베 니 실린 및 5 mM 메 발론 산 플레이트 상 에서 선별 하 고 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 한 콜로니 를 선별 하 고 균주 EWL 251 로 지정 하 였 다 .