변이체 를 제조 하 기 위한 다른 방법 인 카세트 돌연변이 유발 은 문헌 [ Wells et al . , Gene 34 : 315 - 323 ( 1985 ) ] 에 설명 된 기술 을 기초 로 한다 . 출발 물질 은 돌연변이 시킬 출발 폴리펩티드 DNA 를 포함 하 는 플라스미드 ( 또는 다른 벡터 ) 이 다 . 돌연변이 시킬 모 DNA 내 의 코돈 ( 들 ) 이 확인 된다 . 확인 된 돌연변이 부위 ( 들 ) 의 각각 의 측면 상 에 특유 한 제한 엔 도 뉴클레아제 부위 가 존재 해야 한다 . 그러 한 제한 부위 가 존재 하 지 않 으면 , 이 들 부위 는 이 들 을 출발 폴리펩티드 DNA 내 의 적절 한 위치 에 도입 하 기 위해 상기 한 올리 고 뉴클레오티드 - 매개 돌연변이 유발 방법 을 이용 하 여 생성 될 수 있 다 . 플라스미드 DNA 는 선형화 를 위해 상기 부위 에서 절단 된다 . 제한 부위 사이 의 DNA 의 서열 을 코딩 하 지만 목적 하 는 돌연변이 ( 들 ) 을 함유 하 는 이중 가닥 의 올리 고 뉴클레오티드 는 표준 절차 를 이용 하 여 합성 되 고 , 여기 서 올리 고 뉴클레오티드 의 2 개 의 가닥 은 따로 합성 된 후 , 표준 기술 을 이용 하 여 함께 혼성 화 된다 . 상기 이중 가닥 올리 고 뉴클레오티드 는 카세트 로서 불린다 . 상기 카세트 는 플라스미드 에 직접 라이 게이팅 될 수 있 도록 선형 화 된 플라스미드 의 단부 들 과 적합 성 인 5 ' 및 3 ' 말단 을 갖 도록 설계 된다 . 상기 플라스미드 는 이제 돌연변이 된 DNA 서열 을 함유 한다 .