Fab 라이브러리 를 스크리닝 하 기 위해 96 웰 플레이트 에서 의 소 규모 발현 을 최적 화 시켰 다 . Fab 라이브러리 로 형질 전환 시킨 이 . 콜라 이 로부터 시작 하 여 , 콜로니 를 따 서 마스터 플레이트 ( 아가 LB + 앰 피 실린 ( 50 ㎍/ ml ) + 2 % 글루코스 ) 및 작업 플레이트 ( 2 ml / 웰 , 1 . 5 ml 의 LB + 앰 피 실린 ( 50 ㎍/ ml ) + 2 % 글루코스 를 함유 하 는 플레이트 당 96 개 웰 ) 둘 모두 에 접종 하 였 다 . 두 가지 플레이트 를 모두 30 ℃ 에서 8 내지 12 시간 동안 성장 시켰 다 . 마스터 플레이트 를 4 ℃ 에서 저장 하 고 , 작업 플레이트 에서 나온 세포 를 5000 rpm 에서 펠 렛 화 시키 고 , 1 ml 의 LB + 앰 피 실린 ( 50 ㎍/ ml ) + 1 mM IPTG 를 이용 하 여 재현 탁 시켜 Fab 의 발현 을 유도 하 였 다 . 30 ℃ 에서 5 시간 의 발현 시간 후 에 원심 분리 함 으로써 세포 를 수확 한 후 , 500 ㎕ 의 완충액 HBS - EP ( 100 mM HEPES 완충액 pH 7 . 4 , 150 mM NaCl , 0 . 005 % P 20 , 3 mM EDTA ) 에 재현 탁 시켰 다 . 냉동 ( - 80 ℃) 및 37 ℃ 에서 의 해동 의 1 회 사이클 에 의해 HBS - EP 재현 탁 된 세포 를 용균 시켰 다 . 세포 용균 물 을 5000 rpm 에서 30 분 동안 원심 분리 하 여 Fab 를 함유 하 는 상층 액 으로부터 세포 부스러기 를 분리 하 였 다 . 그런 다음 , 상층 액 을 BIAcore 플라스몬 공명 장치 에 주입 하 여 각각 의 Fab 에 대한 친화성 정보 를 수집 하 였 다 . DNA 서열 규명 , 대 규모 Fab 생산 및 하 기 개시 된 상세 한 특성 화 를 위해 Fab 를 발현 하 는 클론 을 마스터 플레이트 로부터 회수 하 였 다 .