세포 를 35 - mm 플레이트 에 7 × 105 cells / plate 의 밀도 로 멸균 된 커버 슬립 ( coverslip ) 위 에 배양 하 였 다 . 24 시간 후 , 세포 를 3 시간 동안 혈청 이 무 첨가 된 배지 에서 배양 하 였 다 . 그 후 , 세포 를 U 75302 ( 0 . 5 , 1 μ M ) , LY 255283 ( 5 , 10 μ M ) 로 처리 하 고 , 48 시간 동안 37 ℃ 에서 배양 하 였 다 . 이후 , 세포 를 70 % 차가운 에탄올 로 상온 에서 30 분 동안 고정 시킨 후 , PBS 로 한번 세척 하 였 다 . DAPI ( 50 ng / ml ) 를 고정 된 세포 에 첨가 하 고 , 상온 에서 20 분 동안 배양 시킨 후 , PBS 로 세척 하 였 다 . 세포 를 형광 현미경 에 고정 시키 고 관찰 하 였 다 . 핵 의 응축 과 분열 로 사멸 된 세포 를 확인 하 였 다 . 사멸 된 세포 들 의 비율 은 총 계산 된 세포 들 중 사멸 된 세포 의 비율 로 계산 하 였 다 . 최소 500 개 세포 들 이 각각 처리 된 군 에서 계산 되 었 다 .