PCR II : PLE 알파 1 / EcoRIPLE + ER 2 프라이머 쌍 또는 PLE 알파 1 / EcoRIPLE 2 ( C - 말단 HAEL 테트라 펩티드 의 결실 ) 프라이머 쌍 을 사용 하 여 pHILZ 플라스미드 로부터 PLE 및 APLE 서열 을 증폭 시켰 다 . 50 μ l 의 혼합물 ( ' 퓨 션 고 충실 도 DNA 폴리머 라 제 ' 매뉴얼 ( 핀 자임 ) 에 따른 1 x 퓨 션 HF 완충액 중 2 ng 의 주형 , 0 . 5 μ M 의 각 프라이머 , 0 . 2 mM dNTP , 1 U 의 퓨 선 DNA 폴리머 라 제 ( 핀 자임 ) ) 중 에서 PCR 을 수행 하 였 다 . 95 ℃ 에서 3 분 간 변성 시킨 후 30 주기 ( 95 ℃ 30 초 , 57 ℃ 30 초 , 72 ℃ 15 초 ) 로 증폭 시키 고 72 ℃ 에서 7 분 간 최종 단계 를 수행 하 였 다 .