6 배 몰 과량 의 oxHES 알데히드 ( Mn 를 기준 으로 함 ) 를 반응 혼합물 중 의 최종 단백질 농도 8 mg / ml 와 함께 사용 하 였 는데 ; oxHES 알데히드 농도 는 20 % ( w / v ) 였 다 . 탈 보호 된 oxHES 알데히드 를 단백질 용액 과 합 하 고 , 신선 하 게 제조 된 NaCNBH 3 용액 ( 접합 완충액 중 의 0 . 5 M ) 을 가함 으로써 환원 적 아민 화 반응 을 시작 하 여 최종 농도 가 20 mM 인 환원제 를 수득 하 였 다 . 철저히 혼합 한 후 , 상기 반응물 을 5 ℃ 하 에 밤새 항온 배양 하 였 다 .