세포 를 도말 한 후 4 - 5 시간 후 , 인간 AD 환자 뇌 용해 물 및 음성 대 조군 , 키메라 IgG 클론 1 C 7 , 및 항 - Tau 항체 1 C 7 / 3 C . 35 . 21 을 비롯 한 다양 한 항체 의 가용성 분획 은 Lipofectamine 2000 을 이용 하 여 공동 - 형질 감염 되 었 다 . 1 μ g 전체 단백질 ( 약 0 . 2 ng Tau 단백질 ) 및 상기 항체 ( 2 μ g ) 를 포함 하 는 AD 환자 뇌 또는 연령 - 일치 된 건강 한 대 조군 뇌 의 PBS - 가용성 분획 은 25 μ L OPTI - MEM ( Thermo Fisher Scientific , 카탈로그 : 31 - 985 - 088 ) 에서 희석 되 었 고 , 37 ℃ 에서 20 분 간 항온 처리 되 었 다 . 그 다음 , 0 . 5 μ L Lipofecatmine 2000 ( Thermo Fisher Scientific , 카탈로그 : 11 - 668 - 019 ) 을 함유 하 는 25 μ L OPTI - MEM 는 단백질 - 항체 혼합물 에 추가 되 었 고 , RT 에서 10 분 추가 항온 처리 되 었 다 . 각 웰 의 경우 , 배지 를 형질 감염 혼합물 로 완전히 교체 하 고 , FRET 센서 세포 는 24 시간 동안 5 % CO 2 와 함께 , 37 ℃ 에서 유지 시켰 다 . 항체 와 함께 , 또는 항체 없이 , 단백질 씨드 로 형질 감염 된 FRET 센서 세포 는 4 % PFA ( Electron Microscopy Sciences , 카탈로그 : 15714 - S ) 및 4 % 슈 크로스 ( Thermo Fisher Scientific , 카탈로그 : S 5 - 3 ) 를 함유 한 1 x PBS ( Teknova , 카탈로그 : P 0191 ) 에 15 분 RT 에서 고정 시키 고 , 이어서 1 x PBS 로 4 x 세척 되 었 다 . 그 다음 세포 는 0 . 2 % TritonX - 100 와 함께 , 1 x PBS 에서 CellMask Deep Red Plasma Membrane Stain ( Thermo Fisher Scientific , 카탈로그 : C 10046 ) 로 RT 에서 10 분 동안 착색 시키 고 , 영상 화 한 후 , 1 x PBS 로 2 x 세척 하 였 다 .