ELISA 결합 분석법 은 [ Fishwild et al . ( 1996 ) , Nature Biotechnology 14 : 845 - 851 ] 에 기술 된 바 와 같 았 다 . 간략 하 게 , 미량 역가 플레이트 를 PBS 내 의 1 ㎍/㎖ 의 정제 된 재조합 OX 40 R - Ig 용액 으로 50 ㎕/ 웰 로 코팅 하 고 , 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 그 후 , 200 ㎕/ 웰 의 PBS / 트윈 ( Tween ) ( 0 . 05 ％) 내의 5 ％ 닭 혈청 을 사용 하 여 웰 을 차단 하 였 다 . OX 40 R - 면역 화 마우스 로부터 의 혈장 의 희 석물 을 각각 의 웰 에 첨가 하 고 , 주위 온도 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 PBS / 트윈 으로 세정 한 후 , 양 고추냉이 과산화 효소 ( HRP ) 와 접합 된 염소 - 항 - 인간 IgG Fc 폴리 클로 날 항체 와 함께 1 시간 동안 실온 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세정 후 , 플레이트 를 ABTS 기질 ( Moss Inc . , 제품 #: ABTS - 1000 ㎎/㎖) 로 발색 시키 고 , OD 405 에서 분광 광도계 에 의해 분석 하 였 다 .