서열 번호 32 의 뉴클레오티드 디 포스 페이트 특이 성 을 프로파일링 하 기 위해 , 다음 실험 을 수행 하 였 다 . 먼저 , 정제 된 단백질 50 μ L 을 1 mM 레바 우디 오시드 D ( ChromaDex , > 93 % 순도 ) 및 2 mM ADP - 글루코스 , UDP - 글루코스 , TDP - 글루코스 또는 GDP - 글루코스 와 함께 50 mM 트리스 - HCl 완충제 , pH 7 . 5 , 3 mM MgCl 2 의 100 μ L 의 총 반응 부피 로 희석 하 였 다 . 반응 은 1 - 18 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 30 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 상기 설명 한 반응 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 0 . 5 부피 / 부피 아세 토니 트릴 로 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 글 리코 실화 된 생성물 은 실시 예 1 , 표 1 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 물 에서 1 : 10 희석 한 후 , LC - MS / MS 에 의해 상청 액 에서 검출 되 었 다 . 서열 번호 31 에 의해 코딩 되 는 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 ( 즉 , 서열 번호 32 ) 는 레바 우디 오시드 M 을 ADP - 글루코스 에 비해 GDP - 글루코스 를 사용 할 때 50 %, UDP - 글루코스 를 사용 할 때 70 %, TDP - 글루코스 를 사용 할 때 검출 한계 미만 의 양 으로 생성 하 였 다 . 레바 우디 오시드 D 및 ADP - 글루코스 를 사용 할 때 서열 번호 32 의 GT 의 특이 적 활성 ( 분당 정제 된 단백질 mg 당 μ mol RebM ) 은 UDP - 글루코스 를 사용 할 때 의 특이 적 활성 보다 1 . 4 배 더 높 았 다 . 따라서 , 서열 번호 31 에 의해 코딩 된 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 ( 즉 , " 서열 번호 32 ) 는 새로 은 아데닌 디 포스 포 글루코스 의존 적 글 리코 실트 랜스 퍼라 제 또는 "" AGT "" 이 다 . "