IL - 4 - 유도 STAT 6 인산화 반응 의 측정 을 위하 여 , Ramos 세포 ( ATCC ) 를 10 % FBS RPMI - 1640 에서 웰 당 1 . 0 × 104 세포 로 96 웰 플레이트 에 두 고 37 ℃, 5 % CO 2 로 3 시간 동안 배양 한다 . 세포 를 interleukin - 4 ( 10 ng / ml final ) 로 30 분 더 자극 하 기 전 에 30 분 동안 화합물 로 배양 하 였 다 . 그 다음 에 , 세포 를 2 % 파라포름알데히드 에서 45 분 동안 고정 하 고 30 분 동안 얼음 처럼 차가운 메탄올 에 배양 하 였 다 . PBS 에서 세정 후 , 세포 를 rabbit anti - phospho - STAT 6 ( Y 641 ) ( Cell Signaling Technologies , 항체 희석 액 에 1 : 1000 ) 1 차 항체 와 함께 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 배양 하 였 다 . Goat anti - rabbit IgG Alexa 488 ( Invitrogen , PBS 에서 1 : 1 , 000 희석 ) 2 차 항체 를 PBS 세정 전 에 90 분 동안 첨가 하 였 다 . 세포 를 하 기 배양 에서 7 . 5 uM 프로 피디 움 요오드화물 , 100 ㎍/ ml RNaseA , PBS 용액 에서 어둠 속 에서 60 분 동안 카 운 팅 하 였 다 . 플레이트 를 Acumen X 3 instrument ( TPP Labtech ) 에 읽힌다 .