384 웰 Maxi - sorp plate ( Black , Nunc 사 ) 에 PBS ( 0 . 138 M 염화 나트륨 및 0 . 0027 M 염화 칼륨 을 함유 하 는 0 . 01 M 인산 완충 생리 식염수 ( pH 7 . 4 ) , Sigma - Aldrich 사 ) 로 1 μ g / mL 로 희석 한 NeutrAvidin ( Life Technologies 사 ) 을 50 μ L 씩 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 하룻밤 정치 하 여 고상 화 하 였 다 . Tween - 20 ( 바이오 - 래드 사 ) 을 0 . 05 % 포함 하 는 PBS ( ELISA 버퍼 ) 로 3 회 세정 후 , PBS 로 1 μ g / mL 로 희석 한 , 실시 예 10 ) - 1 에서 도 이용 한 인간 또는 사이 노 몰 거스 원숭이 비오틴 화 GPRC 5 D 의 아미노 말단 펩티드 를 첨가 하 고 1 시간 실온 에서 진탕 하 였 다 . ELISA 버퍼 로 3 회 세정 후 , Blocker Casein ( Thermo Scientific 사 ) 으로 블로킹 하 고 , ELISA 버퍼 로 3 회 세정 하 였 다 . 그 후 , scFv 를 발현 시킨 대장균 의 배양액 을 첨가 하 고 , 실온 에서 2 시간 반응 시켰 다 . ELISA 버퍼 로 3 회 세정 후 , ELISA 버퍼 로 5000 배 로 희석 한 Horseradish peroxidase ( HRP ) 표지 항 - FLAG 항체 ( Sigma - Aldrich 사 ) 를 50 μ L 첨가 하 고 , 실온 에서 1 시간 반응 시켰 다 . ELISA 버퍼 로 5 회 세정 후 , SuperSignal Pico ELISA Chemiluminescent substrate ( Thermo Scientific 사 ) 를 첨가 하 고 , 10 분 후 의 화학 발광 을 플레이트 리더 ( Envision 2104 Multilabel Reader , Perkin Elmer ) 로 측정 하 고 , GPRC 5 D 결합 scFv 를 분리 하 였 다 .