요약 하 면 , 재조합 효소 - 매개 된 재조합 을 사용 한 2 회 연속 표적 화 과정 에서 마우스 중쇄 유전자좌 를 결실 시켰 다 . 일 차 표적 화 과정 은 5 ' 부터 3 ' 으로 마우스 상동 암 , 재조합 효소 인식 부위 , 네오마이신 카세트 및 3 ' 상동 암 을 포함 한 표적 화 벡터 를 사용 하 는 , 마우스 중쇄 유전자좌 의 5 ' 말단 에서 의 표적 화 을 포함 하 였 다 . 5 ' 및 3 ' 상동 암 은 마우스 중쇄 유전자좌 의 서열 5 ' 을 함유 하 였 다 . 이 차 표적 화 과정 은 5 ' 부터 3 ' 으로 5 ' 마우스 상동 암 , 5 ' 재조합 효소 인식 부위 , 제 2 재조합 효소 인식 부위 , 하이 그 로마 이 신 카세트 , 제 3 재조합 효소 인식 부위 및 3 ' 마우스 상동 암 을 함유 한 제 2 표적 화 벡터 를 사용 하 는 , JH 유전자 절편 의 영역 에서 마우스 중쇄 유전자좌 의 3 ' 말단 에서 의 표적 화 을 포함 하 였 다 . 5 ' 및 3 ' 상동 암 은 마우스 JH 유전자 절편 과 인트론 인 핸 서 및 불변 영역 의 5 ' 를 연결 하 는 서열 을 함유 하 였 다 . 상기 된 양 표적 화 벡터 로 적중 된 변이 중쇄 유전자좌 를 함유 한 양성 ES 세포 를 염색체 분석 으로 확인 하 였 다 . 이어서 , 이중 - 표적 화 된 ES 세포 로부터 DNA 를 분리 하 고 재조합 효소 로 처리 하 여 제 1 표적 화 벡터 의 5 ' 재조합 효소 인식 부위 와 제 2 표적 화 벡터 의 5 ' 재조합 효소 인식 부위 사이 의 마우스 중쇄 유전자좌 의 게놈 DNA 를 결실 시켜 단일 재조합 효소 인식 부위 와 두 재조합 효소 인식 부위 사이 에 연결 된 하이 그 로마 이 신 카세트 를 형성 한다 ( 참조 : 도 2 의 최상위 ) . 따라서 , 아래 기술 된 표적 화 벡터 를 사용 하 여 정확 하 게 사람 κ 생식선 유전자 절편 을 단계 적 으로 삽입 시키 기 위한 , 완전 한 CH 유전자 를 함유 한 변이 된 마우스 중쇄 유전자좌 가 생성 되 었 다 .