성인 골수 - 유래 HSPC 를 , 재조합 S . 피 오 게 네스 Cas 9 단백질 ( SEQ ID NO : 236 ) 및 sgRNA 포맷 의 지시 된 gRNA 로부터 형성 된 RNP 복합체 를 이용 하 여 전기 천공 시켰 다 . 생성 된 게놈 편집 된 및 비편 집 된 HSPC 를 형광 염료 에 공액 된 항체 를 사용 하 여 태아 글 로 빈 및 적혈구 계 세포 표면 마커 트랜스페린 수용체 ( CD 71 ) 의 발현 수준 에 대한 유세포 분석 에 의해 분석 하 였 다 . 살 아 잇 는 세포 를 라이브 데드 바이올렛 ( Live Dead Violet ) 의 배제 에 의해 식별 하 고 게이팅 하 였 다 . HSPC 로 의 이 들 gRNA RNP 의 전달 은 전기 천 공 후 7 일 차 에 모크 전기 천공 된 세포 ( 39 . 0 %) 와 비교 하 여 HbF 를 함유 하 는 자손 적 혈구계 세포 의 증가 된 퍼센트 ( 74 . 6 % 이하 ) 를 초래 하 였 다 ( 표 5 ) . 14 일 차 및 21 일 차 에 HbF 유도 수준 의 부가 적 인 평가 는 최상 으로 수행 하 는 sgRNA 서열 에 대해 높 은 유도 수준 을 확인 시켜 주 었 다 ( 표 5 ) . 대조 군 에서 검출 된 백그라운드 HbF 수준 은 7 일 차 와 비교 하 여 더 높 았 다 . 전기 천 공 후 3 일 차 에 단리 된 HBG 1 및 HBG 2 프로모터 영역 의 게놈 DNA 로부터 의 PCR 생성물 을 또한 , 차세대 시퀀싱 ( NGS ) 하 여 , 세포 집단 에서 편집 된 대립 유전자 의 퍼센트 를 결정 하 였 다 . HBG 1 및 HBG 2 프로모터 영역 에서 높 은 게놈 편집 퍼센트 ( 대형 결실 을 배제 함 ) 는 Cas 9 및 주어진 표적 화 도메인 의 sgRNA 를 함유 하 는 RNP 를 이용 하 여 전기 천공 된 많 은 세포 배양 물 에서 관찰 되 었 으나 ( 표 5 ) , sgRNA 가 전달 되 지 않 은 대 조군 세포 ( Cas 9 만 함유 함 ) 에서 는 관찰 되 지 않 았 다 .