라 이게 이 션 믹스 를 사용 하 여 XL 1 - Blue 또는 DH 5 알파 수용성 세포 를 형질 전환 시켰 다 . 양성 클론 을 DNA 서열 결정 에 의해 입증 하 였 다 . 구성체 를 HEK 293 T , FreeStyle ™ 293 - F , HKB 11 및 HEKEBNA 을 포함 한 몇몇 세포주 에서 발현 시켰 다 . 모든 단계 에 내독소 ' 미 함유 ' 버퍼 를 사용 하 였 다 . 배양 상등 액 을 여과 하 고 단백질 A 세파 로스 컬럼 상 으로 로딩 하 였 다 . 컬 럼 을 PBS 로 세척 한 후 , 50 mM 시트 레이트 ( pH 2 . 7 ) , 140 mM NaCl 로 용출 하 였 다 . 샘플 을 중화 시키 고 Bis - Tris 겔 ( 인비 트로겐 ) 상 에서 분석 한 후 , Amicon Ultra - 15 튜브 내 에서 농축 시키 고 , 수퍼 덱스 프 렙 등급 컬럼 ( 아머샴 ) 상 으로 로딩 하 고 , 10 mM Tris 버퍼 또는 PBS 로 용출 하 였 다 . 샘플 을 다시 Bis - Tris 겔 상 에서 및 LC - MS 에 의해 분석 하 였 다 . 환원 및 N - 탈 글 리코 실화 를 위해 , 샘플 ( 34 ㎍) 을 50 ㎕ 의 최종 부피 에서 0 . 8 M 우레 아 , 0 . 04 M NH 4 CO 3 및 0 . 01 M DTT 와 함께 30 분 동안 50 ℃ 에서 인 큐 베 이 팅 하 였 다 . 이어서 , 1 x 반응 버퍼 G 7 및 1 ㎍ 의 PNGaseF 를 첨가 하 고 , 1 h 동안 37 ℃ 에서 인 큐 베 이 팅 하 였 다 . 단백질 A 정제 에 추가 로 , Ni - NTA 정제 를 또한 선행 실시 예 에 설명 된 바 와 같이 수행 하 였 다 . 상응 하 는 항원 에 대한 결합 은 ELISA 에 의해 입증 하 였 다 .