バイオアカデミア(株)  Tel. 06-6877-2335  Fax.06-6877-2336  info@bioacademia.co.jp http://www.bioacademia.co.jp/    
Taq DNA polymerase Economy (+dNTPs), with Enhancer for High GC template and Robust 
buffer 
02-003     200 U (5U/l)        02-003-5     5 x 200 U (5U/l) 
本製品は、Thermus aquaticus DNA polymerase (Taq DNA polymerase) 遺伝子を大腸菌で大量に発
現させ、高度に精製したものである。天然の Taq DNA polymerase と同じく分子量 94 kDa で耐熱性 DNA
ポリメラーゼ活性をもつ。本酵素を弊社独自の強力 (Robust)バッファーと GC Enhancer を組み合わせて
使用することにより Higｈ GC template での PCR 反応を行うことができます。 
■ PCR 反応に適した酵素で多様なプライマーを用いての DNA の増幅が可能 
・ ハイスループット PCR 
・ コロニーPCR 
・ dUTP、dITP、蛍光標識ヌクレオチド 
の取り込み 
 ・ プライマーエクステンション 
・  平滑末端の 3’末端に A を１塩基付加 
   （TA ベクターへのクローニング可） 
製品の性質 
活性の定義：活性化サケ精子 DNA を鋳型/プライマーとして 74℃、30 分間に 10 nmol の全ヌクレオチド
を酸不溶性沈殿物に取り込む活性を１unit とする。  
純   度：SDS-PAGE（CBB 染色）で 95％以上が Taq DNApolymerase タンパク質。 
エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼのコンタミネーションが検出されないこと
を確認している。 
P C R 検定：λDNA を鋳型とした PCR 反応において良好な増幅がみられることを確認している（図１）。 
濃   度：5 unit/l 
性   状：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% glycerol,      
0.5% Tween20, 0.5% Igepal CA-630 
保   存：－20℃ 
添   付： 1. 10 x Robust buffer (Taq)   
2. 2.5mM(each) dNTPs 
             3. 5 x GC Enhancer 
（Robust buffer 使用上のご注意） 
新しく添付しております 10 x Robust buffer Buffer (Taq)は Taq DNA polymerase の活性
を最大限に引き出すように作成されておりますので伸長時間を長くとりすぎますと目的の
プロダクト以外に上下にスメアーな泳動物が出現する場合があります。 
       次ページの実験例を参考に目的のプロダクトの大きさに合わせた伸長時間を設定してご使
用ください。                                                         （続く） 
一般的な PCR 反応液組成 (total 50l) 
Taq DNA polymerase (5 unit/l) 
10x Robust ｂuffer (Taq) 
5x GC Enhancer 
2.5mM (each) dNTPs 
Template 
Primer 1  
Primer 2 
滅菌蒸留水 
*過剰に使用すると反応の不具合を生じることがあります 
* 0.25 l 
5~10l 
<500 ng 
0.2～1.0 M (final conc.) 
0.2～1.0 M (final conc.) 
up to 50 l 
バイオアカデミア(株)  Tel. 06-6877-2335  Fax.06-6877-2336  info@bioacademia.co.jp http://www.bioacademia.co.jp/    
プロトコール：例 
λDNA 増幅例 PCR 条件 
2kb, 4kb                         6kb                          8kb 
94 ﾟ C  1min           94 ﾟ C  1min           94 ﾟ C  1min       
95 ﾟ C   5sec                     95 ﾟ C  5sec                  95 ﾟ C  5sec           
65 ﾟ C  20sec    25cycles         65 ﾟ C  1min    25 cycles    65 ﾟ C  1min 20sec   25 cycles      
                                                                     
10kb, 12kb                      14kb 
94 ﾟ C  1min                    94 ﾟ C  1min 
98 ﾟ C  5sec                     98 ﾟ C  5sec 
68 ﾟ C  3min   30 cycles               68 ﾟ C  4min     30 cycles 
72 ﾟ C  3min                    72 ﾟ C  4min 
    （図１）                         M    1    2    3    4    5    6    7               
実験例では２step PCR を行っておりますが３step PCR もだいたい同じ伸長時間を目安にしてください。 
８ｋｂぐらいまでの伸長時間は１ｋｂあたり約５～１０秒、８ｋｂ以上の伸長には１ｋｂあたり約１５秒
を設定しています。 
また目的のプロダクトの生成のない場合は少し伸長時間を伸ばして PCR を行ってください。 
実験例に示したように新規 Buffer による酵素反応は非常に速いですので２-step PCR を行うことをおすす
めします。２-step PCR を行なうことにより従来のＰＣＲより大幅に時間短縮して結果の確認ができます。 
GC Enhancer を用いたＰＣＲ例（Bordetella pertussis（ToHAMA I) genomic DNA (GCcontent 67%)を用い
関連製品: # 02-001 Taq DNA Polymerase (+dNTPa)   #02-021 Pfu DNA Polymerase(+dNTPs)  
--- 4kb 
- 2kb 
M  marker 
1   2kb 
2   4kb 
3   6kb 
4   8kb 
5  10kb 
6  12kb 
7  14kb 
バイオアカデミア(株)  Tel. 06-6877-2335  Fax.06-6877-2336  info@bioacademia.co.jp http://www.bioacademia.co.jp/    
た adenylate cyclaseA gene の増幅）(Fig.3) 
PCR 条件 
98 ﾟ C  2min                     
98 ﾟ C  5sec                      
68 ﾟ C  1min   14 cycles  
98 ﾟ C  5sec            * decrease 0.5 ﾟ C / cycle                  
68 ﾟ C * 1min   16 cycles 
72 ﾟ C  3min 
Fig.3 High GC template での GC Enhancer の有効性 
(Bordetella pertussis; 67% GC)の the adenylate cyclase gene(6 kb)の増幅  
  M    1    2    3   
        
M  Marker 
 1  GC Enhancer 非添加 
 2  GC Enhancer 添加 
 3  PCR 産物(lane2)の NcoI 消化物  
adenylate cyclase A 遺伝子には NcoI 消化部位が一箇所
あり、その消化物である２本の断片はフィジカルマップか
ら 予想されるものと一致した。 
 GC Enhancer は主に DNA のメルティングポイントを下げた
り、酵素と DNA の相互作用を安定化させる化合物の混合物で
構成されています。 
５ｘと表記されておりますがこれは効果を示す使用濃度の上
限を示しており、まず１０x で使用してみてください。効果が
見られない場合５x まで濃度を増すことができます。それぞれ
の Template DNA に有効な濃度でご使用ください。 