plasma humano dessecado é preparado por dessecação do líquido obtido através da centrifugação ou sedimentação do sangue humano total.No decurso da preparação não deve ser adicionada nenhuma substância anti-séptica ou bacteriostática.O plasma humano dessecado obtém-se por liofilização ou por qualquer outro método que evite a desnaturação das proteínas. O produto seco deve ser facilmente solúvel numa quantidade de água igual ao volume do líquido a partir do qual ele foi preparado.A solução assim obtida não deve conter menos de 45 gramas de proteínas por litro e não deve apresentar nenhum sinal visível da existência de produtos de hemólise. O título das hemaglutininas não deve exceder 1 : 32.Plasma humano dessecado preparado a partir de uma ou duas amostras de sangueAs amostras que revelem conter níveis perigosos de iso-hemolisinas determinados através de uma amostra de soro fresco ou hemaglutinina imune devem ser rejeitadas. Excepto se o plasma for misturado e congelado nas 48 horas seguintes à colheita do sangue, a esterilidade de cada unidade deve ser verificada através de uma cultura de, pelo menos, 10 mililitros.Plasma humano dessecado preparado por mistura de mais de duas amostrasAs misturas que contenham níveis perigosos de hemaglutininas imunes ou de iso-hemolisinas devem ser rejeitadas. Para evitar os efeitos nocivos dos produtos do desenvolvimento de bactérias no plasma, não será utilizada nenhuma amostra individual que apresente sinais de contaminação bacteriológica, e a esterilidade de cada mistura será controlada por meio de culturas não inferiores a 10 mililitros.Para reduzir o risco de transmissão de hepatite de inoculação, o plasma deve ser preparado a partir de misturas que não contenham mais de 12 amostras ou por qualquer outro método conhecido como fazendo diminuir igualmente este risco.Solubilidade na águaAdicionar uma quantidade de água igual ao volume líquido a partir do qual a amostra foi preparada ; a substância dissolve-se completamente em 10 minutos à temperatura de 15 C a 20 C.IdentificaçãoDissolver uma determinada quantidade do produto num volume de água igual ao volume do líquido a partir do qual a mesma foi preparada ; a solução é submetida aos seguintes testes:i) Testes de precipitação com anti-soros específicos que indicam se ela contém, apenas, proteínas plasmáticas humanas;ii) Adicionar a 1 mililitro uma quantidade adequada de trombina ou de cloreto de cálcio ; a coagulação produz-se, o que pode ser acelerado por incubação a 37 C.Perda de massa por dessecaçãoA dessecação do plasma humano dessecado, em presença de anidrido fosfórico sob uma pressão não superior a 0,02 mm de mercúrio durante 24 horas, não deve provocar uma perda de peso superior a 0,5 %.EsterilidadeO produto, após reconstituição, deve ser estéril quando examinado por um método bacteriológico
horas, não deve provocar uma perda de peso superior a 0,5 %.EsterilidadeO produto, após reconstituição, deve ser estéril quando examinado por um método bacteriológico adequado.ConservaçãoO plasma humano dessecado deve ser conservado em atmosfera de azoto ou no vácuo, num recipiente estéril, selado de modo a eliminar micro-organismos e, tanto quanto possível, a humidade ; deve estar protegido da luz e conservado a uma temperatura inferior a 20 C.EtiquetagemA etiqueta do recipiente deve fornecer todas as informações constantes da etiqueta modelo (Anexo 3).3. ALBUMINA HUMANA E SOLUÇÕES ESTÁVEIS DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS HUMANASA albumina humana e as soluções estáveis de proteínas plasmáticas humanas são preparados da proteína que constitui cerca de 60 % da massa das proteínas totais do plasma do sangue humano total.O método de preparação utilizado deve ser de modo a permitir que o produto final satisfaça os registos mencionados mais adiante. Quer o produto final seja líquido quer seja seco, o preparado, após adição de um estabilizante adequado, deve ser aquecido, no estado líquido e no recipiente final a 60 C ± 0,5 C durante 10 horas, a fim de desactivar o agente causador de hepatite de inoculação. Durante a preparação não deve ser adicionada qualquer substância anti-séptica ou bacteriostática.Nas preparações de albumina humana pelo menos 95 % da massa de proteínas devem ser constituídos por albumina. Nas soluções estáveis de proteínas plasmáticas humanas pelo menos 85 % da massa de proteínas devem ser constituídos por albumina.Estes dois tipos de preparações não devem conter mais de 10 miligramas de imunoglobulina G/grama de produto.Se o produto final for liofilizado deve conter, pelo menos, 950 miligramas de proteínas por grama de produto.As soluções estáveis de proteínas plasmáticas humanas devem ter uma contcentração de 45 a 50 gramas de proteínas totais por litro. Se a albumina humana estiver preparada sob a forma de solução ela deverá ter uma concentração de pelo menos 45 gramas em proteínas totais/litro.Solubilidade do produto secoTotalmente solúvel após a adição da quantidade de água indicada.EstabilidadeA comparação dos valores de viscosidade e de turvação bem como a ultracentrifugação e a electroforese, efectuadas sobre as soluções, antes e depois do aquecimento, não devem relevar qualquer indício de desnaturação das proteínas dissolvidas.Após aquecimento a 57 C e agitação mecânica durante 6 horas, a esta temperatura, a solução deve apresentar-se totalmente isenta de partículas visíveis.Identificaçãoi) Os testes de precipitação por meio de anti-soros específicos indicam que os dois produtos contêm somente proteínas plasmáticas humanas;ii) A electroforese, praticada em migração livre, em condições aceitáveis e adequadas, mostra que a fracção INOCUIDADE DO EQUIPAMENTO DE TRANSFUSÃO DE SANGUE EM MATÉRIA PLÁSTICAI. ENSAIOS QUÍMICOSOs ensaios destinam-se a ser efectuados com equipamento de transfusão de sangue em matéria plástica. Este equipamento é constituído por duas categorias principais:1. Recipientes em matéria plástica destinados à colecta, à separação e à conservação do sangue e dos produtos do sangue;2. Equipamento em matéria plástica para a colheita e a administração do sangue.O material será submetido aos ensaios depois de ter sido esterilizado de acordo com o método a utilizar na esterilização final do equipamento. Esse material incluirá:1. A matéria plástica utilizada para fabricar os recipientes;2. Os tubos existentes nos recipientes;3. O equipamento de colheita e administração do sangue.Os recipientes devem ser submetidos aos ensaios antes do seu enchimento com a solução anticoagulante. Todavia, se os ensaios forem efectuados com recipientes cheios de solução anticoagulante, os ensaios-limite à própria solução anticoagulante, prescritos no Capítulo III, devem ser tomados em conta, aquando da avaliação dos resultados dos ensaios aos quais o recipiente foi submetido.O fabricante do equipamento de transfusão deve revelar às autoridades sanitárias competentes a fórmula pormenorizada das matérias plásticas e de qualquer outra substância utilizada no fabrico do equipamento bem como indicar a origem dos compostos que entram no fabrico da ou das matérias, o seu método de fabrico (ou, em vez disso, os números de referência dos compostos), os pormenores dos métodos de fabrico do equipamento, a natureza de quaisquer aditivos ou adesivos usados no processo de produção, bem como o método de esterilização.Não poderá ser feita qualquer alteração aos elementos acima referidos sem que seja, previamente, comunicada à autoridade sanitária competente e por ela aprovada.Cada lote de matéria-prima utilizada no fabrico do equipamento é identificado por um número que será dado pelo fabricante juntamente com os números de identificação de todos os lotes de equipamento de transfusão fabricados a partir desta matéria-prima e com os resultados de todas as análises às quais eles foram submetidos.Devem ser tomadas todas as precauções possíveis para diminuir os riscos de contaminação em cada fase do fabrico.A. Preparação do extracto e da substância-testemunhoa) Para realizar um ensaio completo tal como a seguir se descreve, utilizam-se 1250 cm2 de matéria plástica (superfície total das duas faces de uma amostra constituída por uma folha de matéria plástica, medindo cada face 625 cm2). A amostra, que não tem qualquer indicação escrita ou etiqueta, deve ser cortada em pedaços de 10 cm2 no máximo.O comprimento (L) dos tubos em cm, é calculado como se segue:D1 = diâmetro interior em cm,D2 = diâmetro exterior em cm.Os tubos devem ser cortados no sentido do comprimento, em secções adicionar 2 gotas de ácido sulfúrico e 1 ml de ácido nítrico, aquecer a mistura até à libertação de vapores brancos e arrefer. Adicionar uma gota de ácido perclórico e aquecer lentamente durante uma meia hora. Arrefecer o resíduo e adicionar água para obter 25 ml. Transvasar 10 ml da solução para um balão de titulação de 25 ml, adicionar 8 ml de solução de molibdato de amónio-ácido sulfúrico e 2 ml de uma solução de ácido ascórbico recentemente preparada, com uma concentração de 100 g/l. Aquecer em banho-maria a 50 C durante 30 minutos, arrefecer a mistura e diluí-la até obter 25 ml. A coloração verde ou branca da solução não é mais intensa do que a que se obtém tratando 25 ml da solução-testemunho do mesmo modo.5. Reacção10 ml do extracto não tomam uma coloração vermelha com a adição de duas gotas de solução de fenoftaleína e não exigem mais de 0,4 ml de solução de 10 milimoles de hidróxido de sódio por litro para dar uma coloração vermelha. Após eliminação desta coloração por adição de 0,8 ml de solução de 10 milimoles de ácido clorídrico por litro, a adição de 5 gotas de solução de vermelho de metilo produz uma coloração vermelha ou vermelho-alaranjada.6. Resíduo na evaporaçãoEvaporar 100 ml do extracto a seco em banho-maria e secar a 105 C até obter um peso constante. O resíduo não pesa mais do que 5,0 mg.7. Limpidez e corO extracto, observando através de uma espessura de 5 cm, é límpido e incolor quando comparado com a solução-testemunho.8. Sabor e cheiroComparado com a solução-testemunho, o extracto é inodoro e insípido.9. Elementos especiaisO extracto é submetido aos ensaios-limite adequados para:i) Qualquer dos elementos seguintes : arsénico, cromo, cobre, chumbo, silício, prata e estanho, correspondendo a 1,0 g/g;ii) O cádmio correspondente a 0,1 g/g.10. Resíduo na incineração1,0 g de matérias plásticas incinerado a peso constante não deve deixar um resíduo superior a 1 mg.11. Metais pesadosDissolver o resíduo na incineração numa quantidade mínima de solução de 2 moles de ácido clorídrico por litro, aquecendo se necessário. Efectuar um ensaio-limite próprio para os metais pesados. A matéria plástica obedece a um limite que não ultrapassa 5 microgramas por grama calculada como Pb.II. ANÁLISES BIOLÓGICAS1. O estudo de um excesso de toxicidade será efectuado aquando da análise inicial das formulações das matérias plásticas destinadas ao fabrico dos frascos e dos dispositivos de colheita e de injecção, utilizando o extracto A, e para cada novo lote de matérias de formulação aprovada, utilizando o extracto B, segundo o processo prescrito na farmacopeia PROTOCOLO AO ACORDO EUROPEU relativo ao intercâmbio de substâncias terapêuticas de origem humanaPRIMEIRA PARTE CONDIÇÕES GERAISA. ETIQUETAGEMCada recipiente ou acessório deve estar munido, antes da sua expedição, de uma etiqueta em inglês e francês estabelecida de acordo com o modelo correspondente que consta dos anexos 2 a 10 do presente Protocolo.B. EMBALAGEM E EXPEDIÇÃOO sangue humano total deve ser sempre expedido em embalagens que mantenham uma temperatura de 4 C a 6 C durante o período de transporte.Esta condição não é exigida aos derivados incluídos no Protocolo.C. PRODUTOS E ACESSÓRIOSOs produtos e acessórios mencionados na Segunda Parte do presente Protocolo devem ser esterilizados, apirógenos e não tóxicos.Recomenda-se que junto com a encomenda sigam os acessórios necessários à administração, assim como os solventes destinados aos produtos secos.D. INOCUIDADE DOS EQUIPAMENTOS DE TRANSFUSÃO SANGUÍNEA EM MATÉRIA PLÁSTICAOs equipamentos devem estar em conformidade com as disposições previstas no Anexo 11 do presente Protocolo.SEGUNDA PARTE CONDIÇÕES ESPECIAIS1. SANGUE HUMANO TOTALO sangue humano total é o sangue que foi misturado com um anticoagulante apropriado após ter sido colhido de um indivíduo normal.Não se efectua colheita de sangue de um individuo:a) Que se saiba (sofrer ou ter sofrido) de sífilis ou de hepatite;oub) Cujos testes sanguíneos de infecção sifilítica não tenham sido negativos;ouc) Que não esteja isento de doença transmissível por transfusão sanguínea, desde que tal possa ser comprovado mediante simples exame médico e pelo estudo dos seus antecedentes.O sangue é colhido assepticamente, através de um dispositivo tubular fechado e esterilizado, em recipiente esterilizado no qual a solução anticoagulante foi colocada antes da sua esterilização. O material utilizado deve ser apirógeno. Logo que terminada a colheita, o frasco é imediatamente fechado e arrefecido até uma temperatura entre 4 C e 6 C, não devendo ser posteriormente aberto até ao momento da sua administração.O sangue é colhido sobre uma solução citrada ácida contendo glucose, não devendo ser adicionada nenhuma substância anti-séptica ou bacteriostática.O volume da solução anticoagulante não deve exceder 220 mililitros por litro de sangue humano total, e a concentração de hemoglobina não deve ser inferior a 97 gramas por litro.Grupo SanguíneoO grupo sanguíneo do sistema AB0 deve ter sido determinado mediante exame dos glóbulos e do soro, e o grupo do sistema Rhésus (Rh) mediante exame dos glóbulos, utilizando-se uma amostra separada do sangue do dador. Sempre que exista uma técnica nacional, normalizada e recomendada, para determinação do grupo sanguíneo, deve a mesma ser utilizada.O termo Rh negativo deve ser apenas