adicionar 2 gotas de ácido sulfúrico e 1 ml de ácido nítrico, aquecer a mistura até à libertação de vapores brancos e arrefer. Adicionar uma gota de ácido perclórico e aquecer lentamente durante uma meia hora. Arrefecer o resíduo e adicionar água para obter 25 ml. Transvasar 10 ml da solução para um balão de titulação de 25 ml, adicionar 8 ml de solução de molibdato de amónio-ácido sulfúrico e 2 ml de uma solução de ácido ascórbico recentemente preparada, com uma concentração de 100 g/l. Aquecer em banho-maria a 50 C durante 30 minutos, arrefecer a mistura e diluí-la até obter 25 ml. A coloração verde ou branca da solução não é mais intensa do que a que se obtém tratando 25 ml da solução-testemunho do mesmo modo.5. Reacção10 ml do extracto não tomam uma coloração vermelha com a adição de duas gotas de solução de fenoftaleína e não exigem mais de 0,4 ml de solução de 10 milimoles de hidróxido de sódio por litro para dar uma coloração vermelha. Após eliminação desta coloração por adição de 0,8 ml de solução de 10 milimoles de ácido clorídrico por litro, a adição de 5 gotas de solução de vermelho de metilo produz uma coloração vermelha ou vermelho-alaranjada.6. Resíduo na evaporaçãoEvaporar 100 ml do extracto a seco em banho-maria e secar a 105 C até obter um peso constante. O resíduo não pesa mais do que 5,0 mg.7. Limpidez e corO extracto, observando através de uma espessura de 5 cm, é límpido e incolor quando comparado com a solução-testemunho.8. Sabor e cheiroComparado com a solução-testemunho, o extracto é inodoro e insípido.9. Elementos especiaisO extracto é submetido aos ensaios-limite adequados para:i) Qualquer dos elementos seguintes : arsénico, cromo, cobre, chumbo, silício, prata e estanho, correspondendo a 1,0 g/g;ii) O cádmio correspondente a 0,1 g/g.10. Resíduo na incineração1,0 g de matérias plásticas incinerado a peso constante não deve deixar um resíduo superior a 1 mg.11. Metais pesadosDissolver o resíduo na incineração numa quantidade mínima de solução de 2 moles de ácido clorídrico por litro, aquecendo se necessário. Efectuar um ensaio-limite próprio para os metais pesados. A matéria plástica obedece a um limite que não ultrapassa 5 microgramas por grama calculada como Pb.II. ANÁLISES BIOLÓGICAS1. O estudo de um excesso de toxicidade será efectuado aquando da análise inicial das formulações das matérias plásticas destinadas ao fabrico dos frascos e dos dispositivos de colheita e de injecção, utilizando o extracto A, e para cada novo lote de matérias de formulação aprovada, utilizando o extracto B, segundo o processo prescrito na farmacopeia
a 4 C- 6 C sobreviverão 24 horas após a transfusão. Isto pode ser determinado de acordo com um dos métodos propostos na alínea b) seguinte:b) Métodos propostos:1. ISO/TC/76/WGD/3, App. E.2. Ashby Technique - Ashby, W. The determination of the length of life of transfused blood corpuscules in man.J. Exp. Med. 29 : 267-82. 1919.Young, L.E., Platzer, R.F. and Rafferty, J.A.,Differencial agglutitation of human erythrocytes.J. Lab. Clin. Med. 32 : 489-501, 1947.3. The Gibson-Scheitlin method-Gibson, J.G. and Scheitlin, W.A. A method employing radio-active chromium for assaying the viability of human erythrocytes returned to the circulation after refrigerated storage.J. Lab. Clin. Med. 46 : 679-88, 1955.4. The Strumia method - Strumia, M.M., Taylor, L. Sample A.B., Colwell, L.S. and Dugan, A. Uses and limitations of survival studies of erythrocytes tagged with Cr 51.Blood 10 : 429-40, 1955.5. Cr51-I125 technique - Button, L.N., Gibson, J.G. and Walter, C.W. Simultaneous determination of the volume of red cells and plasma for survival studies of stored blood.Transfusion 5 : 143-148, 1965.6. Recommended Method for Radioisotope Red Cell Survival Studies Brit. J. Haemat. 21, 241, 1971.Feito em Estrasburgo, em 19 de Abril de 1982.Franz ARASEKSecretário-geralCópia autenticada do exemplar original único em línguas francesa e inglesa, depositado nos Arquivos do Conselho da Europa.Erik HARREMOESDirector dos Assuntos Jurídicos do Conselho da Europa inoculação. Além disso, o método de preparação deve ser de modo a que os anticorpos contidos no produto inicial estejam concentrados em quantidades adequada no produto final. O processo utilizado deve ser considerado, em relação a cada preparado, satisfatório a esse respeito, titulando os anticorpos correspondentes, pelo menos, a um vírus e a uma toxina bacteriana no produto inicial e no produto final. Serão escolhidos anticorpos para os quais existam métodos de titulação experimentados.Durante a preparação, não deve ser adicionada nenhuma substância anti-séptica ou bacteriostática.A fim de conservar a esterilidade bacteriana e a estabilidade do produto final, pode acrescentar-se-lhe um conservante e um estabilizante adequados.O produto final apresenta-se sob a forma, cuja concentração de imunoglobulina deve ser de 100 a 170 gramas por litro.Identificaçãoi) Os testes de precipitação com anti-soros específicos indicam que o produto contém apenas proteínas plasmáticas humanas;ii) A electroforese, praticada em migração livre em condições aceitáveis e adequadas, deve indicar que pelo menos 90 % da massa das proteínas têm a mobilidade do componente gama das globulinas do plasma humano normal.EstabilidadeNão deve haver qualquer sinal visível de precipitação ou de turvação na solução final, antes e depois de ter sido aquecida a 37 C durante 7 dias. É também recomendável efectuar controlos de ultracentrifugação para determinar a importância da degradação do produto em componentes de peso molecular mais reduzido. O método utilizado deve ser escolhido entre os aprovados pela autoridade nacional de controlo.AcidezO pH da solução final, medido a uma temperatura de 15 C a 25 C após diluição num concentrado de 10 gramas de proteínas por litro por meio de uma solução de 0,15 mole de cloreto de sódio por litro, deve ser de 6,8 ± 0,4.EsterilizaçãoO produto final deve ser estéril, quando examinado segundo um método bacteriológico adequado.ConservaçãoAs soluções de imunoglobulina humana serão conservadas em recipiente estéril, selado, de modo a excluir micro-organismos, ao abrigo da luz e a uma temperatura de 4 C a 6 C.EtiquetagemA etiqueta do recipiente deve fornecer todas as informações constantes da etiqueta modelo (Anexo 5). A data de preparação corresponde à data da introdução do produto no recipiente final.5. IMUNOGLOBULINAS HUMANAS ESPECÍFICASAs imunoglobulinas humanas específicas contêm anticorpos que correspondem a determinados agentes virais ou bacterianos. Por este motivo, estes produtos são preparados a partir de misturas de um número limitado de amostras.Os requisitos adiante definidos aplicam-se às seguintes imunoglobulinas humanas específicas:- imunoglobulina humana antitetânica,- imunoglobulina humana antivacina.Poderão ser preparadas outras imunoglobulinas humanas específicas. Se existir uma norma internacional, elas deverão ser controladas em função dessa norma e a sua actividade (L) dos tubos em cm, é calculado como se segue:D1 = diâmetro interior em cm,D2 = diâmetro exterior em cm.Os tubos devem ser cortados no sentido do comprimento, em secções de cerca de 10 cm. Para a extracção utilizam-se 10 ml de água por 50 cm2.b) Os pedaços de película ou de tubo de matéria plástica devem ser introduzidos num recipiente de vidro de borosilicato com 250 ml de água destilada, apirógena, proveniente de um alambique eficaz com superfícies de condensação e tubos de captação em vidro (1) A abertura do recipiente é recoberta com um copo de boca larga em posição invertida e o recipiente é, então, aquecido a vapor saturado a 110 C, durante 30 minutos (em autoclave) e rapidamente arrefecido à temperatura ambiente, sendo o volume elevado a 250 ml por adição de água destilada, apirógena. Uma possível aderência ligeira entre as amostras de matéria plástica não deve ser considerada importante.(1) Se as matérias plásticas tiverem estado em contacto com uma solução anticoagulante, os pedaços devem, primeiro, ser introduzidos num recipiente semelhante contendo água destilada fria (100 ml), o qual deve ser agitado várias vezes. Esta operação deve ser repetida mais uma vez.Em vez de serem aquecidas em autoclave, as matérias plásticas sensíveis ao calor podem ser aquecidas a 70 , durante 72 horas.É preparada uma solução-testemunho correspondente sem as matérias plásticas.B. Ensaios sobre o extracto1. Matérias oxidáveisA 20 ml de extracto, contidos num frasco Erlenmeyer de vidro de borosilicato, adicionar 20 ml de solução de 2 milimoles de permanganato de potássio por litro e 1,0 ml de ácido sulfúrico de 1 mole por litro e deixar ferver a mistura durante 3 minutos. Arrefecer a solução rapidamente e adicionar 100 mg de iodeto de potássio e 5 gotas de solução de amido. Titular com uma solução contendo 10 milimoles de tiossulfato de sódio por litro efectuando uma titulação paralela com a solução-testemunho. A diferença entre a quantidade de tiossulfato utilizada nas duas titulações não ultrapassa 2,00 ml de uma solução de 10 milimoles de tiossulfato de sódio por litro.2. CloretoO extracto é submetido a um ensaio-limite próprio para os cloretos correspondendo a um máximo de 11,2 ¶moles de cloreto por litro.3. AmoníacoO extracto é submetido a um ensaio-limite próprio para o amoníaco correspondendo a um máximo de 120 ¶mole de NH3 por litro.4. Ácido fosfórico-fosfatoO extracto é submetido ao ensaio-limite dos fosfatos.Ensaio-limite dos fosfatosFazer evaporar 25 ml do extracto quase a seco num balão Kjeldahl, arrefecer o resíduo, adicionar 2 gotas de ácido sulfúrico e 1 ml de ácido nítrico, aquecer a mistura até à libertação de vapores brancos e arrefer. Adicionar uma gota de o produto final é liofilizado, a dessecação em presença de anidrido fosfórico sob uma pressão não superior a 0,02 mm de mercúrio durante 24 horas não deve provocar perda de peso superior a 1,5 %.ConservaçãoO factor VIII humano deve ser conservado a uma temperatura inferior a -30 C, para a preparação congelada, e inferior a 5 C, para a preparação liofilizada, e protegido da luz. A preparação dessecada deve ser conservada em atmosfera de azoto ou no vácuo, em frasco estéril, rolhado de modo a excluir qualquer micro-organismo e, tanto quanto possível a humidade. O período de conservação não pode exceder 6 meses no estado congelado e um ano no estado dessecado, a menos que se tenha repetido o teste da actividade mínima exigida.III. ApresentaçãoA etiqueta da preparação deve dar todas as informações constantes da etiqueta modelo (Anexo 7).8. FACTOR IX DE COAGULAÇÃO HUMANO DESSECADOI. Requisitos em relação aos dadoresO dador deve gozar de boa saúde e, em particular, estar isento de qualquer doença transmissível segundo os critérios adoptados para o plasma humano seco.II. Requisitos em relação ao concentradoEsterilização e atoxicidadeO produto final, experimentado segundo os métodos adequados, deve ser esterilizado, apirógeno e isento de efeitos indesejáveis sobre as vias respiratórias. A ausência de efeitos vasodepressores deve ser testada no cão ou no gato.SolubilidadeA adição da quantidade indicada do solvente deve provocar a dissolução completa em 10 minutos, à temperatura de 37 C.Actividade tromboplástica e ausência de trombina livreO tempo de recalcificação do plasma normal, medido a 37 C em presença de um volume igual de várias diluições do produto reconstituído, não pode ser inferior a 40 segundos. O produto reconstituído e adicionado de um volume igual de fibrinógeno (3 g/l) não pode coagular durante 6 horas à temperatura de 37 C.ActividadeA preparação reconstituída conterá a quantidade mínima indicada do factor IX, correspondendo 1 unidade à actividade de 1 mililitro de plasma fresco normal médio, actividade medida por um método aprovado pela autoridade nacional competente.Rendimento e estabilidade in vivoO método de preparação deve ser de modo a que a administração intravenosa rápida de uma dose de 50 unidades/kg de peso do corpo, de diversos lotes do produto em vários indivíduos, provoque, na ausência de inibidor específico e em condições basais, uma elevação média, decorridos 15 minutos, de, pelo menos, 300 unidades/litro de plasma e a persistência, após 24 horas, de uma elevação média de pelo menos 60 unidades/litro de plasma.IdentificaçãoOs testes de precipitação com anti-soros específicos indicam que o produto contém unicamente proteínas plasmáticas humanas.Perda de massa por dessecaçãoA dessecação em presença de