title: Скачать презентацию или конспект Клиент-центрированный подход К.Роджерса

extracted_text:
Клиент-центрированный подход К.Роджерса
Подготовила:
Студентка 4 курсаВасиленко Анжелика
Карл Роджерс практиковал психодинамическую терапию в 30-х гг. Но скоро он начал сомневаться в ее ценности. Особенно не импонировало ему быть беспристрастным экспертом, который "понимает" пациента. Он убедился в том, что менее формальный подход более эффективен, и начал использовать так называемую "недирективную терапию", то есть он позволял своим пациетам решать, о чем говорить и когда, без направления, оценки или интерпретации со стороны терапевта. Этот подход сейчас называют, как "Клиент центрированная терапия Роджерса", чтобы подчеркнуть роль клиента.
Карл Роджерс учил, что люди постоянно, даже помимо своей воли, занимаются самопознаванием. Для него было наиболее важно, что человек воспринимает не внешнюю реальность, а свой внутренний мир. Реальность, окружающий мир существуют для Рождерса только как символы; главное же, что формирует восприятие этого мира, заложено в самом человеке.
Самость, для Роджерса - это представление о себе, которое постепенно меняется в процессе развития личности.
"Самость - это организованный гештальт, постоянно находящийся в процессе формирования". Идеальная самость - это представление о себе, как об идеале. Истиная самость отличается от идеальной. Степень этого различия определяет уровень дискомфорта личности и может вызвать невротическое состояние. Идеальная самость может быть конечной целью развития личности, но не причиной душевного конфликта.
Клиент центрированная терапия Роджерса, стремится создать атмосферу, в которой факторы, деформирующие личность, могут быть устранены, а здоровые силы самости - прийти в равновесие и привести к выздоровлению.

Социальные отношения. Основное в учении Рождерса - это роль и значение межличностных отношений, как в механизме развития невроза, так и в процессе выздоровления. Роджерс полагал, что только во взаимотношениях с другими людьми человек в состоянии раскрыть и осознать свое истинное Я.
Терапия, центрированная на клиенте. Основные положения нового подхода в клиент центрированной терапии Роджерса, сводятся к следующему:
1. Сам клиент всегда стремится к выздоровлению. Роль терапевта заключается в том, чтобы использовать это стремление и направить клиента по нужному пути.2. Терапия акцентируется больше на эмоциональных аспектах, нежели на интеллектуальных.3. Терапия больше опирается на непосредственную конкретную ситуацию (по принципу здесь и теперь), а не на прошлый опыт индивида.4. Терапия ориентирована на инициативу самого клиента и помогает человеку разрешить свою проблему с минимумом участия со стороны терапевта.
Фундаментом лечения Роджерса является создание отношения, характеризуемого тремя важными и взаимосвязанными позициями ("триада Рождерса"):
безусловное позитивное отношение,
эмпатия,
Конгруэнтность (согласованность слов и жестов)
Терапевт должен показать, что он искренне заботится о клиенте, принимает его как человека и доверяет его способности изменяться. Это не только требует готовности слушать клиента, не прерывая его, но также и принятия того, о чем говорится, без суждения и оценки, невзирая на то, каким бы "плохим" или "странным" это не казалось. Терапевту не нужно одобрять все, что говорит клиент, но он должен принять это как реальную часть оцениваемого человека. Терапевт должен также доверять клиентам в самостоятельном решении их собственных проблем, следовательно, он не дает советов. Совет, говорит Роджерс, несет скрытое сообщение о том, что клиент некомпетентен или неадекватен, - это делает его менее уверенным и более зависимым от помощи.
Безусловное позитивное отношение.
Эмпатия
Многие формы терапии предлагают взгляд на пациента со стороны. Эмпатия требует внутреннего взгляда, сосредоточения на том, что пациент может думать и чувствовать. Клиент-центрированный терапевт действует не как сторонний наблюдатель, каторый стремится наклеить диагностический ярлык на клинта, а как человек, который хочет понять, как выглядит мир с точки зрения клиента.
Об эмпатии нельзя сообщить: "Я понимаю" или: "Я знаю, что вы сейчас чувствуете". Терапевт передает эмпатию, показывая, что он активно слушает клиента. Подобно искусным интервьюерам, клиент-центрированные терапевты вступают в контакт с клиентом с помощью глаз, кивают головой, когда пациент говорит, оказывают другие знаки внимания. Используется также техника, называемая отражением (рефлексией). Отражение показывает, что терапевт активно слушает, а также помогает клиенту осознать те мысли и чувства, которые он переживает. Действительно, большинство клиентов реагируют на эмпатическое отражение пристальным вниманием к своим чувствам.
Конгруэнтность
Это согласованность между тем, что терапевт чувствует, и тем, как он ведет себя по отношению к клиенту. Это значит, что безусловное позитивное отношение терапевта позволяет клиенту увидеть, возможно впервые, что открытость и честность могут быть основой человеческих отношений.
Роджерс замечал, что в процессе клиент-центрированной терапии клиенты становятся не только более уверенными в себе, но они начинают лучше осознавать свои подлинные чувства, принимать себя, держаться более комфортно и естественно с другими людьми, в большей степени полагаться на собственную оценку, чем на мнения других, становятся более продуктивными и спокойными.

В своей ранней книге "Консультации и психотерапия" К. Роджерс перечисляет характерные шаги процесса помощи:
1) клиент приходит за помощью;2) определяется ситуация;3) поощрение свободного выражения;4) советующий принимает и проясняет;5) постепенное выражение позитивных чувств;6) обнаружение позитивных импульсов;7) появление инсайта;8) прояснение выбора;9) позитивные действия;10) возрастание инсайта;11) растущая независимость;12) уменьшающаяся потребность в помощи.
Ученый вводит еще одно понятие: терапевт, центрированный на клиенте. Чтобы обрести доверие клиента, учит Роджерс, психотерапевт должен быть тем, что он есть на самом деле, а не играть роль терапевта.

Такое отношение (терапевт-клиент) подобно отношению учителей восточных школ, которые, видя божественное в каждом человеке, могут относиться ко всем с одинаковым уважением и состраданием.
Терапевт, центрированный на клиенте, должен уметь поддержать в клиенте уверенность в его внутренних силах, утвердить в нем веру в свои способности к самосовершенствованию. А для этого, утверждал Роджерс, нужно чувствовать внутренний мир клиента, как свой собственный.

Рождерс использует слово "клиент" вместо традиционного "пациент". Пациент - это тот, кто болен, нуждается в помощи, и обращается за ней к обученным профессионалам. Клиент - тот, кто нуждается в услуге и полагает, что он может сделать это сам. Клиент, хотя у него есть проблемы, все же рассматривается как человек, внутренне способный понимать собственную ситуацию. В представлении о клиенте содержится идея равенства, отсутствующая в отношении психотерапевта и пациента.
Роль терапевта и пациента в процессе психотерапии. "Ключи к исцелению, - писал Рождерс, - находятся у клиента, но терапевт должен обладать определенными личными качествами, способными помочь клиенту научиться использовать эти ключи".


title: Скачать презентацию или конспект Иммунологические реакции

extracted_text:
Иммунологические реакции
Кафедра микробиологии и вирусологии фгбоу ВО ТГМУ 2016г
план
1. Серологические реакции, которые используются для серологической диагностики.
2.Серологические реакции, которые используются для серологической идентификации.
3.Современные методы Иммунологических исследований при инфекционных болезнях: (Иммунолюминесцентный и Иммуноферментный анализ,  генодиагностика, полимеразная цепная реакция).
4.Серологические реакции, которые используются в вирусологии.

Все серологичные реакции используются с двоякой целью:
для выявления антител в сыворотке больного с помощью стандартных антигенов-диагностикумов – для серологической диагностики инфекционной болезни;
для определения неизвестных антигенов (бактерий, грибов, вирусов) за известными стандартными сыворотками-антителами – для серологической идентификации возбудителей.

классифиация
Иммунные реакции подразделяются на простые и сложные. Для их постановки необходимы основные два компонента: антиген и антитело.
 К простым реакциям, применяемым для диагностики, относятся реакции агглютинации, реакции преципитации, реакции нейтрализации.
 К сложным реакциям – иммунофлюоресцентный метод, радиоиммунный метод, иммуноферментный метод, иммунолюминесцентный метод исследования, метод иммуноблотинга.

Реакция агглютинации
Реакция агглютинации (agglutinacio — склеивание) внешне проявляется в склеивании и выпадении в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, а также частиц с адсорбированными на них антигенами под влиянием антител в среде с электролитом.
Реакция протекает в две фазы.
В первой фазе происходит специфическая адсорбция антител на поверхности клетки или частицы, несущей соответствующие антигены,
 Во второй — образование агрегата (агглютината) и выпадение его в осадок, причем этот процесс происходит только в присутствии электролита (раствор хлорида натрия).
Агглютинат
Агглютинат может быть двух типов - мелкозернистый и крупнохлопчатый.
Мелкозернистый – это результат взаимодействия мелких бактерий,
крупнохлопчатый – бактерий, имеющих жгутики.

Реакция агглютинации-типы
Все реакции агглютинации подразделяются на два типа:
ориентировочные (ОРА), которые выполняются на стекле,
развернутые (РРА) – выполняются в пробирках с титрованием сыворотки.

Реакция агглютинации недостаточно специфична и чувствительна.
Повысить специфичность и чувствительность реакции можно путем разведения исследуемой сыворотки до ее титра или половины титра.
Титром сыворотки называется то ее максимальное разведение, в котором обнаруживается агглютинация антигена.
Чем выше титр антител, тем достовернее результаты реакции.
Чтобы дифференцировать причину положительной реакции (ранее перенесенная инфекция, вакцинация или текущее заболевание), оценивают динамику нарастания титра антител, которое наблюдается только при текущей инфекции..
Основные цели
 Ориентировочные реакции также могут иметь две цели:
Идентификация микробного вида (с  использованием известной иммунной сыворотки).
Поиск антител в сыворотке крови пациента с использованием известного микробного диагностикума.

Реакция агглютинации
ОРИЕНТИРОВОЧНЫЕ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ
             ОРА - ориентировочной реакции агглютинации
Схема ориентировочной реакции агглютинации.
Этапы выполнения реакции:

На обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора.
Внести петлей исследуемую культуру бактерий, равномерно распределить в капле физиологического раствора
Добавить каплю специфической агглютинирующей иммунной сыворотки
Учесть результат реакции.
Положительной считается реакция, когда в капле происходит просветление жидкости и формирование агглютината.
ИНТЕНСИВНОСТЬ ОБРАЗОВАНИЯ АГГЛЮТИНАТА
модификации Реакция агглютинации : это реакция Минкевича и реакция Хеддельсона.
Реакция Минкевича позволяет определить наличие противотуляремийных антител у инфицированного пациента.
Необходимые ингредиенты:
Капля крови пациента, взятая при помощи скарификатора из пальца больного
Дистиллированная вода
Туляремийный диагностикум.

Этапы выполнения реакции Минкевича :
На обезжиренное стекло нанести каплю крови пациента
Добавить каплю дистиллированной воды для лизиса эритроцитов
Внести каплю туляремийного диагностикума
Учесть результаты.
Положительной считается реакция, если  в капле образуются зерна агглютината.
ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ ХЕДДЛЬСОНА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ
Реакция Хеддельсона позволяет не только выявить антитела в сыворотке инфицированного бруцеллезом пациента, но и определить титр антител.
 Необходимые ингредиенты:
Сыворотка пациента
Физиологический раствор
Бруцеллезный диагностикум

Принцип метода
основан на использовании большого стекла фотопластины,
концентрированной неразведённой сыворотки крови больного в нарастающих или уменьшающихся объёмах,
дополняемой до определённого уровня физиологическим раствором, что приравнивается к разным разведениям, и
окрашенного метиленовым синим диагностикума для лучшей видимости образующегося агглютината.
Ускорение реакции достигается смешиванием ингредиентов путём лёгкого покачивания стекла и помещения его в термостат при +37Сº.
На одном стекле одновременно проводят анализ сывороток от нескольких больных.
Результат получают через 2-5 минут в виде голубого агглютината разной активности в зависимости от разведений.

реакцию адсорбции агглютининов по Кастеллани применяют для детального изучения антигенной структуры бактерий с целью определения их серовара:
Данная реакция основана на способности родственных групп бактерий адсорбировать из антисыворотки только групповые антитела при сохранении в ней типоспецифических антител. Полученные сыворотки называются монорецепторным, так как содержат антитела только к одному определенному антигену.
При наличии у разных бактерий одинаковых или сходных групповых антигенов они могут агглютинироваться одной и той же антисывороткой, что затрудняет их идентификацию.

Принцип метода:
Перекрёстная РА направлена на извлечение групповых антител методом адсорбции
специфический антиген (АГ) изымает из сыворотки все антитела — и специфические только для него, и групповые; неспецифический АГ — только групповые.
В данной реакции наряду со специфическим антигеном используют родственные  гетерологические АГ.
Например, у больного брюшным тифом (Т) сыворотка крови дала агглютинацию со специфическим диагностикумом Т и с групповым паратифа А.

Реакция агглютинации латекса (РАЛ) экспресс-метод выявления антигенов и антител(ориентировачный вариант)
 Для постановки РАЛ используют сенсибилизованные частицы полистиролового латекса диаметром  0,5-1,2 мкм, которые в присутствии гомологичного иммунологического реагента (антигена или антитела) склеиваются. Эта реакция происходит достаточно быстро – на протяжении 2-7 мин.
Нагруженные антителами частицы латекса широко используются для выявления антигенов вирусов и бактерий.
Нагружая латекс антигенами, можно определять наличие антител в сыворотке больного.
Такую модификацию РАЛ используют для выявления противогриппозных, противокраснушных, протикоревых антител и т.д.

Проведение  реакции латекс-аглютинации

Реакция коагглютинации (КОА) .
Для постановки КОА  используют золотистые стафилококки (штамм Cowan 1). В клеточной стенке этих микроорганизмов содержится белок А, который имеет значительное родство к Fc фрагменту IgG человека и кролика. Поэтому молекулы IgG после адсорбции на стафилококках, которые имеют белок А, ориентированные в окружающую среду своими свободными Fab фрагментами, в которых находится активный центр антитела.
Реакция коагглютинации (КОА) .
Реакцию ставят на стеклянных пластинках, смешивая одинаковые объемы (1-2 капли) исследуемого материала (кровь, моча, слюна, фильтраты фекалий и др.) и стафилококкового диагностикума.
Смесь тщательно перемешивают  и через 2-5 мин.  на тёмном фоне должна четко будет просматриваться мелкозернистая агглютинация стафилококков.
РЕАКЦИЯ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ наиболее из чувствительных серологических реакций
Основана на способности антител взаимодействовать с антигеном, фиксированным на различных эритроцитах, которые при этом агглютинируют.
Для постановки этой реакции необходимо приготовление эритроцитарного диагностикума.
Эритроцитарный диагностикум может быть двух видов: антигенный и антительный.

Этапы выполнения реакции:
Необходимые ингредиенты:
Сыворотка крови  инфицированного пациента
Физиологический раствор
Эритроцитарный диагностикум
 Реакция пассивной гемагглютинации выполняется в лунках иммунологического планшета.

В лунки планшета внести физиологический раствор в одинаковом количестве -0,25 мл для разведения сыворотки
В первую лунку внести сыворотку крови пациента, разведенную в  50  раз в объеме 0,25 мл; перемешать содержимое пипеткой и этой же пипеткой набрать 0,25 мл и перенести в следующую лунку
Перемешать содержимое и повторить эту процедуру во всех лунках, предназначенных для проведения реакции.
Приготовить контроль, для чего в одну лунку внести 0,25 мл физиологического раствора
Во все лунки, включая контрольную, внести по 2 капли приготовленного эритроцитарного диагностикума и перемешать путем  осторожного покачивания планшета.

РЕАКЦИЯ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
Положительной считается  проба, когда в лунках планшета на дне в контроле эритроциты ложатся в виде «пуговки», а в опытных лунках появляется осадок в виде «зонтика».
Схема постановки и учета РПГА
Критерии учета результатов реакции
РАЗВЕРНУТЫЕ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ.
 Развернутые реакции агглютинации предложены для поиска антител в сыворотках крови инфицированных  пациентов при некоторых бактериальных инфекциях.
При этом применяются диагностикумы, приготовленные из микроорганизмов.
 Для выполнения этих реакций необходимо предварительное  титрование сыворотки.
 Для выполнения этих реакций необходимо предварительное  титрование сыворотки.
 Разведение  1:10    это 1мл сыворотки + 9 мл физ. раствора
                      1:50   это 1 мл сыворотки + 49 мл физ. раствора или
                      1:50  это  0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физ. раствора
                      1:100 это 1 мл сыворотки + 99 мл физ. раствора или
                      1:100 это 0,1 мл сыворотки +9,9 мл физ. раствора.
В 10 пробирок вносим по 2,5 мл физиологического раствора. 8 пробирок будут опытными, 2 – контрольными: контроль сыворотки и контроль антигена.
В контроль сыворотки вносим только разведенную сыворотку в объеме 2,5 мл, в контроль антигена - только взвесь диагностикума.

Учет реакции
Затем во все пробирки, кроме контроля сыворотки, вносим по 1 мл взвеси диагностикума.
В результате образования агглютината мутная жидкость в пробирках просветляется, на дно оседает осадок агглютината.
Учет реакции начинается с контрольных проб: в контроле сыворотки должна быть прозрачная сыворотка, в контроле антигена- равномерно мутная взвесь диагностикума.
Титр РРА учитывается по разведению сыворотки, в которой еще явственно видно формирование осадка агглютината.
СХЕМА ПОСТАНОВКИ РАЗВЁРНУТОЙ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ С СЫВОРОТКОЙ БОЛЬНОГО ПО ВИДАЛЮ (РАЙТУ)
Реакция преципитации отличается от агглютинации по характеру антигенов:
В реакции агглютинации они корпускулярные, даже целые клетки, а в реакции преципитации – молекулярные, в растворимом состоянии.
 Антигенами могут быть экстракты микроорганизмов, тканей, органов, химические вещества.
Феномен преципитации заключается в том, что антитела (преципитины), соединяясь с растворимыми антигенами (преципитиногенами), предопределяют образование осадка (преципитата) или помутнения раствора.
 За титр реакции принимают наибольшее разведение антигена, которое дает положительный результат.
Феномен преципитации широко используется в микробиологической практике:
В судебно-медицинской экспертизе его применяют для определения видовой принадлежности крови: можно установить, какому виду принадлежит выявленная кровь.
  Определяют возможную фальсификацию продуктов (мясо, мед). Для диагностики эпидемического цереброспинального менингита, чумы, дизентерии, определения инфицированности возбудителем сибирской язвы продуктов и материалов животного происхождения (кожа, мех, щетина).
  Реакцию Ухтерлони  используют для определения антигенного состава органов и тканей, как нормальных, так и опухолевых, количества антигенов в сложных системах.
 Она имеет важное значение в диагностике дифтерии, оспы и других заболеваний.
.   Выявление АГ в реакции кольцепреципитации.
Реакция микропреципитации на примере экспресс-диагностики сифилиса (ЭДС).
Данная реакция выполняется для скрининга сывороток при массовых обследованиях на сифилис.
 В качестве антител применяются сыворотки крови пациентов, антигеном служит кардиолипиновый антиген (неспецифический). Реакция выполняется в лунках иммунологического планшета. Необходимо иметь два контроля: в первом в качестве ингредиентов применяется физиологический раствор и кардиолипиновый антиген (контроль мутности),  во втором контроле – заведомо положительная сыворотка и кардиолипиновый антиген (контроль преципитата).
В опытной лунке – изучаемая сыворотка больного, взятая в разведении 1:10 и кардиолипиновый антиген.
После смешивания реагентов в течение 2-5 минут осторожно покачиваем  планшет, в течение этого времени формируется преципитат, жидкость в лунке становится прозрачной.
Учет реакции ведется по четырех плюсовой системе. Результат, оцениваемый как один и два плюса считается сомнительным, на 3 и 4 ++++ - положительным. Схема реакции микропреципитации представлена на рис. 10.

Экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС).
Методика определения количества иммуноглобулиновв сыворотке крови (реакция Манчини)
Метод простой линейной иммунодиффузии основан на взаимодействии антисыворотки, содержащейся в геле агар-агара с раствором антигена образуют линии и полосы преципитации.
Судя по ширине зон преципитации в тесте простой радиальной диффузии, можно проводить количественное определение антигенов.
 Взаимное расположение линий преципитации в тестах двойной и встречной иммунодиффузии позволяет оценивать иммунохимическое сходство или различие антигенных компонентов.
Методы иммунодиффузии характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью.
Обычно тесты иммунодиффузии используют для идентификации белков в биологических жидкостях, таких как сыворотка крови, цереброспинальная жидкость, секреты желез или экстракты различных органов и т. д.
Иммуноэлектрофорез
 Метод объединяет реакцию преципитации в геле с электрофорезом.
Для этого слой агара наносят на предметное стекло, на его разных краях вырезают две лунки, а в центре – разделяющую канавку.
В лунки вносят смесь антигенов и проводят электрофорез в течение 1-2 часов.
Различные антигены с разной скоростью перемещаются между катодом и анодом.
Затем в канавку вносят преципитирующую сыворотку и через 5-7 суток в геле образуются зоны преципитации.
Для лучшей визуализации агар окрашивают красителями (например, амидо черным).

Схема постановки иммуноэлектрофореза.
Иммуноэлектрофорез

                    дуги преципитации.

Реакция бактериолиза
применяется редко, она используется для дифференциальной диагностики холерного вибриона от других холероподобных бактерий.
В основе реакции лежит способность специфических антител образовывать иммунные комплексы с клетками, в том числе с бактериями,
что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и лизису бактерий.

В реакции гемолиза
антигеном служат эритроциты, антителом – антигемолитические антитела.
При образовании комплекса антиген-антитело начинается активация комплемента, в результате чего мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость – «лаковую» кровь вследствие выхода гемоглобина.
При постановке диагностической реакции связывания комплемента (РСК) реакция гемолиза используется как индикаторная: для тестирования присутствия или отсутствия (связывания) свободного комплемента.

Реакция лизиса и связывание комплемента.
Необходимые антиген, антитело и комплемент.
 Антигеном могут быть микроорганизмы, эритроциты или другие клетки.
Как антитело (лизин) используют специфическую сыворотку или сыворотку больного.
В зависимости от того, против каких клеток направленное действие лизины, они имеют свои названия:
против бактерий - бактериолизины, спирохет - спирохетолизины, эритроцитов - гемолизины, против других клеток - цитолизины.
Комплемент при образовании комплекса клетка (антиген) - антитело, связывается с ним, активируется за классическим путем и вызывает растворение клетки.
 Без комплемента лизис клетки невозможен. Различают несколько реакций лизиса: бактериолиза, гемолиза, цитолиза.
Реакция связывания комплемента (РСК).
При образовании комплекса антиген - антитело к нему всегда присоединяется комплемент.
Если антиген и антитело не отвечают друг другу, то комплемент не связывается, остается свободным в системе.
 При добавлении комплекса эритроциты барана - гемолизины свободный комплемент, связываясь с ним, вызывает гемолиз эритроцитов.
Этот принцип и положено в основу РСК.
При соответствии антигена антителу с ним связывается комплемент. Чтобы убедиться в этом, добавляют эритроциты барана и гемолитическую сыворотку.
При отсутствии гемолиза заключают, что реакция положительная, при наличии гемолиза - реакция негативная.
Реакция связывания комплемента (РСК).
Реакция связывания комплемента (РСК).
Критерии учета результатов реакции
(РСК)

Определение антирезус - антител в сыворотке.
Данная реакция проводится у беременных женщин, имеющих отрицательный резус-фактор.
 В случае,  если у отца ребенка положительный резус-фактор, то у плода возможен как положительный, так и отрицательный резус.
Для предотвращения резус-конфликта необходимо знать, образуются ли антирезус-антитела в течение беременности
и если они образуются, то идет ли динамика нарастания их титра.

Для постановки данной реакции необходимы следующие ингредиенты
Исследуемая сыворотка
Эритроциты человека, несущие положительный резус-фактор (стандартные эритроциты)
Комплемент.
Этапы постановки теста:
В пробирку вносим 1 мл исследуемой сыворотки
В каждую пробирку вносим 2% взвесь стандартных эритроцитов
Добавляем одинаковое количество комплемента в рабочей дозе.
В качестве положительного контроля используем сыворотку, имеющую антирезус-антитела; в качестве отрицательного контроля – заведомо отрицательную сыворотку.
Учет результата ведется по гемолизу:
В пробирке с отрицательным контролем наблюдаем осадок эритроцитов
-  В пробирке с положительным контролем – полный гемолиз, то есть
   равномерно окрашенная в красный цвет жидкость
- В исследуемых образцах при наличии антирезус-антител – полный гемолиз, при их отсутствии – осадок эритроцитов.

РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ВИРУСОВ
Реакция широко применяется в вирусологии для определения вида (типа) возбудителя и титра вируснейтрализующих антител.
Эти антитела обычно выявляются при смешивании иммунной сыворотки с соответствующим вирусом с последующим введением этой смеси восприимчивым лабораторным животным или заражением культуры клеток.
На основании выживания животного в первом случае или отсутствия цитопатического действия вируса во втором судят о нейтрализующей активности сыворотки.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
Основана на свойстве антисыворотки подавлять вирусную гемагглютинацию, так как нейтрализованный специфическими антителами вирус утрачивает способность агглютинировать эритроциты.
РТГА широко применяется для серодиагностики вирусных инфекций с целью обнаружения специфических антигемагглютининов
и для идентификации многих вирусов по их гемагглютининам (антигенам).

РЕАКЦИИ С УЧАСТИЕМ МЕЧЕНЫХ АНТИГЕНОВИЛИ АНТИТЕЛ
Участвуют меченые антигены или антитела.
 К ним относятся реакции иммунофлюоресценции,
радиоиммунный
иммуноферментный методы.
По своей чувствительности они превосходят все описанные выше серологические реакции.
Реакции иммунофлюоресценции (по Кунсу) метод экспресс-диагностики,
Для выявления микробных антигенов в тканях использовали меченую диагностическую сыворотку, содержащую антитела к определенным видам (вариантам) микроорганизмов (бактерий, вирусов).
Метку антител производят флюорохромами(изотиоцианат флюоресцеина)
МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА – ИФА
включает использование коммерческих реагентов – антигенов или антител, маркированных ферментами (например, пероксидазой или щелочной фосфатазой).
Метод выполняется в полистироловых планшетах, где в лунках фиксирован антиген или антитело.
После образования иммунного комплекса в систему вносят субстрат, расщепляемый ферментом, что приводит к окрашиванию среды.
В отличие от классических методов выявления, ИФА позволяет непосредственно регистрировать взаимодействие антигена с антителом в специфической фазе,
 а не анализировать вторичные проявления взаимодействия – агглютинацию, преципитацию или гемолиз.
 Метод отличает высокая чувствительность – обычно достаточно присутствия антигена в концентрации 1 нг мл.

МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА – ИФА
Этапы выполнения реакции (на примере диагностики антител при ВИЧ-инфекции):
В лунки полистиролового планшета, на которых сорбирован антиген ВИЧ, вносят сыворотку крови пациентов. Первая лунка предназначена для внесения заведомо положительной сыворотки, вторая – заведомо отрицательной
Инкубируем планшет во влажной камере в течение 30 минут
Промываем лунки планшета фосфатно-солевым буфером 5 раз
Вносим во все лунки антисыворотку, содержащую антитела против иммуноглобулинов человека, меченные ферментом
Промываем лунки фосфатно-солевым буфером 5 раз
Во все лунки добавляем субстрат, содержащий перекись водорода  и бензидин
Выдерживаем планшет 20 минут в темном месте
Проводим визуальный учет результатов и определение оптической плотности раствора в каждой лунке с использованием прибора
МЕТОД ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА – ИФА
При правильной постановке анализа в лунке, содержащей положительную контрольную сыворотку, меняется цвет - он становится желтым.
В отрицательном контроле цвет прозрачный.
Учет результатов опытных образцов зависит от изменения цвета в исследуемой лунке – если он меняется, как в положительном контроле, значит, у данного пациента обнаружены антитела к ВИЧ.

упрощения использования ИФА  «безреагентные» системы
Для проведения анализа необходимо только нанести на носитель образец и визуально наблюдать изменение окраски носителя, происходящее вследствие образования продукта ферментативной реакции.
 Преимущества:
не используются радиоактивные изотопы,
стабильность конъюгатов позволяет хранить их в течение длительного времени,
 измерение оптической плотности проводят в оптическом диапазоне,
результаты ИФА можно оценивать полуколичественно без применения аппаратуры (визуально).
 ИФА очень легко поддается автоматизации.

Радиоиммунологический анализ (РИА)
Преимущество РИА: отсутствует необходимость оценивать протекающую реакцию по вторичным проявлениям, таким как агглютинация, преципитация, лизис эритроцитов .
2 варианта:
меченый и немеченый антигены конкурируют за ограниченное число участков связывания со специфическими антителами.
Для того чтобы происходило конкурентное взаимодействие, должна существовать определенная степень родства между меченым и немеченым антигеном.
После двух этапов инкубации антител сначала с исследуемым, а затем со стандартным меченым антигеном
количество включившегося в состав иммунных комплексов меченого антигена будет обратно пропорционально количеству немеченого антигена в исследуемой пробе..
Источники информации:
Основные А.
.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. -С-П.,2000.
Медицинская микробиология./ Под ред. В.И. Покровского.М., 2001.
Л.Б.Борисов.Медицинская микробиология,вирусология,иммунология. М.,2001
Медицинская микробиология,вирусология /Под ред.   А.А.Воробьева.М.2004.


title: Скачать презентацию или конспект Теория психического развития Д.б.Эльконина

extracted_text:
Теория психического развития Д.б.Эльконина
По мнению Л.С. Выготского, гипотеза Д.Б. Эльконина связана, со стремлением перейти от «чисто симптоматического и описательного принципа к выделению существенных особенностей самого детского развития».
Основной предмет исследования автора.
Являясь  учеником Выготского и разделяя взгляды А.Н. Леонтьева, Д.Б. Эльконин строил свою теорию психического развития на фундаменте психологической теории деятельности.
Понимание развития в теории
Развитие-это качественные изменения какой-либо психической функции, возникновение в ней новообразований.

Ход развития определяется движением от системы «ребенок – обществнный взрослый» к системе «ребенок – общественный предмет».Сначала устанавливаются отношения со взрослым, как носителем общественного опыта, и только потом на этой основе осваивается предметная деятельность.

Движущий фактор развития.
 Эльконин открыл закон чередования,периодичности разных типов деятельности: на определенном этапе активность ребенка направлена на познание взаимоотношений с людьми, затем наступает этап познания способов употребления предметов–предметно-манипулятивнаядеятельность.Каждый раз между этими двумя типами деятельности возникают противоречия, которые становятся причиной развития.
Основные понятия, разрабатываемые автором.
«Неклассическая психология»
Классическая психология – это психология, которая опирается на естественнонаучную парадигму в исследовании психического развития ребенка.

Неклассическая психология опирается на культурно-историческую парадигму. Выготский совершил в психологии переворот геологического масштаба – он изменил основание понимания психического развития ребенка, предложил новую парадигму. Нам это очень важно осознать, чтобы сделать свой профессиональный выбор – по какому пути нам идти.
Ключевые идеи теории
закон периодичности: «К каждой точке своего развития ребенок подходит с известным расхождением между тем, что он усвоил из системы отношений человек — человек, и тем, что он усвоил из системы отношений человек — предмет. Как раз моменты, когда это расхождение принимает наибольшую величину, и называются кризисами, после которых идет развитие той стороны, которая отставала в предшествующий период. Но каждая из сторон подготавливает развитие другой».

Методы исследования.

1)Наблюдение

2) Констатирующий  эксперимент.
Периодизация психич.развития
непосредственно-эмоциональное общение (младенческий возраст);
предметно-манипулятивная деятельность (раннее детство);
ролевая	игра, т.е. ролевое общение (дошкольный возраст);
учебная деятельность (младший школьный возраст);
интимно-личное общение (подростковый возраст);
учебно-профессиональная деятельность (юношеский возраст).

Ценность теории
Автор попытался охватить и связать между собой два основных вектора развития ребенка.
  Первый-характеризует взаимоотношения ребенка с миром вещей, что предполагает познание и овладение предметным миром.
 Другой- характеризует взаимодействие ребенка с миром людей
Подход этого ученого считается общепринятым в современной возрастной психологии, а проблема периодизации навсегда останется актуальной.


title: Скачать презентацию или конспект Константин Дмитриевич Бальмонт

extracted_text:
Константин Дмитриевич Бальмонт
Основные мотивы лирики

Лирике талантливого и прославившегося поэта Бальмонта присуща острота ощущений и поиск впечатляющего мгновения, который хотелось бы облечь в слова и оставить в человеческой памяти навсегда. Константин Бальмонт относится к поэтам-символистам, которые широко использовали в своем творчестве импрессионистские приемы, передавая тонкие оттенки ощущений и чувств.
«В этой жизни смутной…»

В этой жизни смутной
Нас повсюду ждет —
За восторг минутный -
Долгой скорби гнет.
Радость совершенства
Смешана с тоской.
Есть одно блаженство:-
Мертвенный покой.
Жажду наслажденья
В сердце победи,
Усыпи волненья,
Ничего не жди.

Поэтическим прорывом Бальмонта называют второй сборник его стихотворений «В  безбрежности».
Особенности лирики Бальмонта
Особенность поэзии Бальмонта в том, что ее можно назвать вечным поиском значимого и необычайно красивого мгновения для того, чтобы обратить внимание читателей  на то, что жизнь каждого человека полна великолепных и запоминающихся моментов. Бальмонту удалось возвысить в своей лирике переменчивость настроения, душевное непостоянство и пристальное внимание к быстропроходящим переживаниям и мироощущениям.
Его стихотворения «Безглагольность», «Уходящие тени», «Аккорды», «Грусть» знамениты обильным использованием внутренних рифм и аллитерации.
Ключевым моментом лирики Бальмонта можно назвать своеобразное волшебством слов – это связано с той музыкальностью, которую поэт закладывал в их сочетание и лирический поток словесных перекличек в своих стихотворениях
Грусть
Внемля ветру, тополь гнется, с неба дождь осенний льется,
Надо мною раздается мерный стук часов стенных;
Мне никто не улыбнется, и тревожно сердце бьется,
И из уст невольно рвется монотонный грустный стих;
И как тихий дальний топот, за окном я слышу ропот,
Непонятный странный шепот — шепот капель дождевых…..

Замысел и мотивы лирики Бальмонта
Основной фрагмент лирики Бальмонта – это очарование настроения, и именно созданная им композиция стихотворения позволяет подчеркнуть любую деталь быстропроходящего переживания. Этим особо характерно знаменитое стихотворения «Осень» и «Влага», в которых очень четко выражена музыкальная композиция стихотворения и броские звуковые ассонансы.
ОСЕНЬ

Поспевает брусника,
Стали дни холоднее,
И от птичьего крика
В сердце стало грустнее.

Стаи птиц улетают
Прочь, за синее море.
Все деревья блистают
В разноцветном уборе.

Солнце реже смеется,
Нет в цветах благовонья.
Скоро Осень проснется
И заплачет спросонья.

Лирика поэта наполнена умышленными повторами и излишне созвучными словами, однородными эпитетами, основным для поэта Бальмонта было – каким будет стихотворение на слух, ему была важна звуковая сочетаемость слов.
Характерные черты любовной лирики Бальмонта
Любовная лирика Бальмонта демонстрирует неуловимость мига, безуспешные попытки поймать его, которые сравниваются с бесконечным счастьем жить этим мигом. Любимая форма любовной лирики Бальмонта – сонеты, которые провозглашают вечные истины и силу красоты.
….Я - изысканность русской медлительной речи,
Предо мною другие поэты - предтечи,
Я впервые открыл в этой речи уклоны,
Перепевные, гневные, нежные звоны.
Я - внезапный излом,
Я - играющий гром,
Я - прозрачный ручей,
Я - для всех и ничей….

Любовная лирика Бальмонта очень откровенна, поэт говорит и изображает такие вещи, которые зачастую слишком интимны, чтобы писать о них стихи.
Но, тем не менее, Константин Дмитриевич воспевает все ипостаси любви, даже порочные, грешные и вызывающе откровенные.

В стихотворении, посвященном поцелуям, Бальмонт пишет, что они могут быть «как сны свободные», «как снег холодные», а могут – «жгучие и странные» или «блаженно-яркие, до исступления». Такая шокирующая интимность любовной лирики Бальмонта не могла не вызывать разговоров и осуждения в среде критиков и коллег по перу, однако, наряду с этим, образы любви, были поразительно яркие и точные, что ненадолго, но успокаивало критиков, возмущенных творчеством поэта.
Любовная лирика Бальмонта необычна еще и тем, что поэт-символист в открытую говорит «люблю», без метафор и скрытого смысла. Наряду с этим, любовная лирика Бальмонта призывает любить.

….Люблю тебя капризною мечтой,
Люблю тебя всей силою души,
Люблю тебя всей кровью молодой,
Люблю тебя, люблю тебя, спеши!

Константин Дмитриевич Бальмонт провозглашает вечную ценность Любви, является ее извечным глашатаем и певцом.
…Молю Тебя, Вышний, построй мне дорогу,Чтоб быть мне хоть мертвым желаемом "там".
В эмиграции, в нужде, болезнях, лишениях и неизбывной тоске по России явился новый Бальмонт – замечательный русский поэт, до сих пор неоцененный по достоинству. Основной темой произведений Бальмонта в годы эмиграции оставалась Россия: воспоминания о ней и тоска по утраченному.
Книги опубликованные в годы эмиграции:
Дар Земле
Светлый час
Марево
Моё – ей
В раздвинутой дали
Северное сияние
Голубая подкова
Светослужение
Под новым серпом
Воздушный путь
Где мой дом?
Факел в ночи
Белый сон

Славу Бальмонту как поэту-символисту принесли сборники «Тишина», «Горящие здания», «Будем как солнце». В 1913 году в России было издано 10 томов его произведений.

Тема солнца проходит через все творчество поэта. Образ животворящего солнца у него – символ жизни, живой природы, органическую связь с которой он всегда ощущал.

Я в этот мир пришел, чтоб видеть Солнце
И синий кругозор.
Я в этот мир пришел, чтоб видеть Солнце.
И выси гор.
Я в этот мир пришел, чтоб видеть Море
И пышный цвет долин.
Я заключил миры. В едином взоре,
Я властелин…

О творческом пути художника-творца, о самосовершенствовании повествует стихотворение «В безбрежности». Путь поэта представляется как некая «лестница в небо», каждая ступенька которой – это годы тяжелого труда. Но чем выше поднимается поэт, тем большим смыслом наполняются его жизнь и творчество
Я мечтою ловил уходящие тени,
Уходящие тени погасавшего дня…


title: Скачать презентацию или конспект Патология развития носа и околоносовых пазух у детей

extracted_text:
Патология развития носа и околоносовых пазух у детей
Врожденным уродством носа называется обезображение его формы, происшедшее во время развития организма. В зависимости от степени уродства можно с некоторой вероятностью судить и о времени его происхождения. Считают, что чем раньше происходит нарушение развития этого органа, тем тяжелее бывает и уродство. С другой стороны, степенью уродства обусловливается понятие об уродстве в буквальном смысле этого слова и понятие об аномалии и вариации. Именно, чем больше выражен порок развития этого органа, тем с большим правом он должен быть отнесен к уродствам, и, наоборот, слабые степени обезображения относят обычно к аномалиям, а едва заметные изменения - к вариациям. Таким образом, между понятиями нормальное развитие носа и врожденное уродство стоят два промежуточных звена - вариация и аномалия. Практически иногда трудно строго отграничить все эти степени конечного этапа развития органа. Не останавливаясь на переходных формах, все же можно выделить слабо выраженные уродства, которые мы и будем называть аномалиями.

Этиология. В результате неблагоприятного влияния различных эндо- и экзогенных факторов на внутриутробное развитие плода нарушается процесс формирования носа. Лицевые кости срастаются неполно или вообще не срастаются.
При незаращении эмбриональных щелей формируются врожденные свищи и кисты спинки носа. При несращении двух пластинок передней части носовой перегородки на верхушке носа образуется углубление, полностью разъединяющее половины носа.
Врожденная атрезия хоан является следствием сохранения носонебной мембраны и возникает между 6-й и 12-й неделями гестации, вследствие сближения и последовательного сращения заднего края сошника с задними концами носовых раковин. Существуют 3 теории происхождения атрезий:
- внутриматочная — частичная гиперплазия раковин;
- избыточное разрастание вертикальной пластинки небной кости;
- гипоплазия всей области хоан и глотки.

Согласно классификации Б.В. Шеврыгина (1984) врожденные пороки и аномалии развития наружного носа и его полости распределены на 3 группы.

классификация
Персистенция
срединная расщелина носа;

синдром Гольденхара (фацио-аурикуло-вертебральный синдром);

Придаток перегородки носа. Буллезная средняя носовая раковина
Атипичное расположение выводного отверстия носослезного канала
Дистопия

Врожденные аномалии развития носа
Боковой хобот и недоразвитие правой половины носа
Расщеплеление
 носа, верхней
 губы и неба
дисгенезия
дисгенезия
Агенезия носа
ВПР носа: врожденная атрезия хоан- односторонняя, двухсторонняя-  частичная, полная- перепончатая, хрящевая, костная, смешанная
Диагностика:
Полное отсутствие носового дыхания на стороне поражения
Зондирование носовых ходов
Закапывание контрастных веществ в нос
Рентгенография
КТ
Агенезия носа — два отверстия входа в нос при полном или частичном отсутствии носа и внутриносовых структур. При гипогенезии отмечается недостаточное развитие наружного носа, его полости и внутриносовых структур. Тотальная гипогенезия проявляется равномерным недоразвитием наружного носа и отдельных внутриносовых структур; носовые раковины небольшого размера или в стадии начального развития; возможны отставание в развитии и деформация одной половины носа. Гипогенезия хрящей крыльев носа проявляется в слабости, податливости и пролабировании крыльев в сторону полости носа при форсированном дыхании. Среди гипогенезии внутриносовых структур выделяют недоразвитие носовых раковин с их плотным прилеганием к латеральной стенке носа, что обычно сопровождается явлениями атрофического ринита.
Гипергенезия характеризуется избыточным развитием носа или его отдельных структур. При тотальной гипергенезии наряду с интенсивным ростом наружного носа возможно его удвоение. В функциональном отношении наиболее значима гипергенезия носовых раковин, особенно решетчатого пузырька и крючковидного отростка, с нарушением обоняния и проходимости выводных отверстий околоносовых пазух.
Дисгенезия наружного носа проявляется его деформацией (горбатый нос, косоносость, боковой хобот) и деформацией носовых раковин (разная форма искривления и фиксация на боковой стенке носа).

Дистопия — развитие отдельных образований носа в необычном для них месте. Относительно частой дистопией полости носа является буллезная средняя носовая раковина — шаровидное вздутие ее переднего конца с нарушением проходимости обонятельной щели и частичной или полной утратой обоняния.
Нередко отмечаются дистопия выводного отверстия носослезного канала, участки девиации в области сошника и перпендикулярной пластинки решетчатой кости.
Персистенция предполагает сохранение тех элементов, которых к моменту рождения не должно быть. Среди аномалий развития носа данного типа имеют значение следующие.
Срединные расщелины носа от раздвоения кончика носа до полной его расщелины, когда обе половины носа находятся на отдалении друг от друга. Раздвоенные или двойные носовые раковины с выраженным нарушением проходимости носовых ходов.
.

Деформация наружного носа (одно или два отверстия входа в нос при полном отсутствии носа и внутриносовых структур или избыточное развитие носа и его отдельных структур), затруднение (нарушение) сосания и глотания вследствие нарушения целости сосательных мышц.
Выделение пищи через нос при кормлении (возникает при щелевидных дефектах дна полости носа, при расщеплении твердого и мягкого неба у детей с «волчьей пастью» вследствие нарушения целости полости рта, невозможности разъединения носоглотки и ротоглотки при глотании) является серьезным препятствием для правильного развития новорожденных.
Наружное устье врожденных свищей спинки носа, как правило, располагается по средней линии на границе костного и хрящевого отделов, свищевой ход направлен кверху и заканчивается кистозным образованием в области надпереносья.
Свищи и кисты склонны к воспалению и нагноению, особенно в связи с травмами носа; возможно развитие менингита при сообщении свищей с передней черепной ямкой.
Носовое дыхание нарушается вследствие:
- слабости и податливости крыльев носа с пролабированием их в сторону полости носа (при гипогенезии крыльев носа);
- гипергенезии носовых раковин и крючковидного отростка с нарушением проходимости выводных отверстий околоносовых пазух;
- развитие асфиксии новорожденных при не распознанном вовремя полном заращении обеих хоан. Возможен летальный исход, если опытная акушерка вовремя не откроет рот ребенка; после первого же вдоха у него налаживается ротовое дыхание.

Клиническая характеристика
Развитие гнойного процесса в околоносовых пазухах на стороне односторонней или неполной двусторонней недиагностированной атрезии хоан приводит в последующем и к нарушению формы лицевого отдела черепа. При этом отмечается:
- полное отсутствие или затруднение носового дыхания на стороне поражения;
- неправильный рост резцов;
- высокое небо и его асимметрия при односторонней атрезии;
- скопление густой тягучей слизи на дне полости носа;
- развитие дерматита в области преддверия носа и носогубной области от постоянного раздражения отделяемым из полости носа;
- при риноскопии слизистая оболочка полости носа бледная, влажная; раковины недоразвиты, укорочены и атрофичны; перегородка носа искривлена в сторону атрезии;
- при фарингоскопии атрофия и сухость слизистой оболочки носоглотки.
Атрезия хоан чаще наблюдается у девочек, при двустороннем процессе преимущественно бывает костной, в ряде случаев сочетается с другими врожденными пороками и сопровождается изменением околоносовых пазух и других ЛОР-органов (искривление перегородки носа в сторону заращения, атрофия заднего конца нижней носовой раковины, изменение величины глазницы, расщепление неба).

Диагноз устанавливается на основании внешнего вида ребенка, данных осмотра, а также результатов ряда исследований.
Рентгенография (при необходимости с контрастным веществом). Достоверным признаком атрезии хоан считается задержка контрастного вещества на уровне хоаны при боковой рентгенографии полости носа (рис. 3.6).

Диагностика
Микрориноскопия.
Зондирование полости носа резиновыми катетерами или металлическими зондами наименьшего диаметра после анестезии слизистой оболочки полости носа с целью обнаружения атрезии хоан.
Закапывание в нос 1% раствора метиленового синего или водного раствора бриллиантового зеленого с последующим детальным осмотром задней стенки глотки, по которой краситель должен стекать при свободном просвете хоаны.
Компьютерная томография дает возможность получить полную анатомическую характеристику атрезии хоаны и выявить сопутствующие изменения полости носа: искривление заднего отдела перегородки носа, утолщение боковой костной стенки, расширение сошника, что позволяет успешно провести хоанотомию с учетом всех анатомических особенностей.
Фиброэндоскопия дает возможность выявить аномально измененные внутриносовые микроструктуры, ранее не доступные осмотру.

При врожденных аномалиях развития носа проводится только хирургическое лечение. Частичная гипергенезия кончика носа устраняется путем косметической коррекции.
В случае щелевидных дефектов дна полости носа при расщеплении твердого и мягкого неба у детей с «волчьей пастью» показана пластика неба для восстановления возможности питания и предотвращения дальнейшего углубления расщелины твердого неба. При несвоевременном выполнении операции деформации неба и носа прогрессируют, резко нарушаются речь и развитие альвеолярного отростка верхней челюсти. Срок оперативного вмешательства в каждом случае определяется индивидуально.
Свищи и кисты подлежат хирургическому лечению по мере их выявления независимо от возраста ребенка. Хирургическому иссечению свищей и кист должна предшествовать фистулография. При фронтобазальной локализации врожденных свищей спинки носа, сообщающихся с передней черепной ямкой, операция производится с участием нейрохирурга.
При лечении перечисленных аномалий развития наружного носа наряду с косметическими операциями широко используют функциональную микрохирургию внутриносовых структур — операции щадящего типа с сохранением обоняния и других функций носа. Это подслизистая тотальная и секторальная конхотомия, удаление сферических образований и гипертрофированного крючковидного отростка, редрессация и латеропозиция нижних и средних носовых раковин.

Лечение

Лечение при атрезии хоан исключительно хирургическое. При врожденной двусторонней атрезии хоан показано срочное хирургическое вмешательство для восстановления проходимости хоан и акта сосания.
Существуют 3 основных доступа при хоанотомии.
Трансназальный доступ (устранение хоанальной атрезии непосредственно через полость носа) в основном используется у новорожденных и грудных детей, называется интраназальным методом удаления атрезии; в родильных домах с этой целью используют троакары. У более старших детей операция заключается в том, что скальпелем делают овальный разрез слизистой оболочки от перегородки носа по дну носовой полости с дальнейшим ее отслоением тупым путем до места предполагаемой атрезии, которую вскрывают хоанотомом или желобоватым долотом, костные края сформированной хоаны сглаживают острой костной ложкой, в сформированные отверстия вводят специальные дренажные термопластические трубки.
Трансмаксиллярный доступ используется тогда, когда одновременно необходимо вскрыть верхнечелюстную пазуху по поводу ее эмпиемы. Трансмаксиллярный доступ не показан новорожденным и детям младшего возраста, так как при нем повреждаются зачатки зубов.
Транспалатинный доступ осуществляется через твердое небо, обеспечивает хороший визуальный контроль оперируемой зоны. При операции через твердое небо после отсепаровки слизисто-надхрящничного лоскута (на расстоянии 0,5 см от края десны) производят трепанацию заднего края твердого неба. После вскрытия полости носа под визуальным контролем устраняют атрезию. В более старшем возрасте в настоящее время наиболее надежным считается транспалатинный доступ с применением микрохирургической техники. Благодаря оптимальному обзору операционного поля и пластическим реконструктивным приемам операция с транспалатинным доступом является самой безопасной и обеспечивающей хорошие отдаленные результаты.
В послеоперационном периоде требуются тщательный уход, систематическое смазывание носовых ходов раствором адреналина и их туалет, смена дренажных трубок через каждые 10—14 дней. Формирование просвета хоан после операции занимает 1—2 мес.

Monstra per defectum
Самым тяжелым пороком развития, встречающимся чрезвычайно редко и не представляющим клинического интереса вследствие ранней гибели таких уродов, является циклопия. При циклопии имеется остановка развития переднего и промежуточного мозга. Обонятельный мозг и обонятельный нерв обычно отсутствуют. Сообразно с недоразвитием мозга у циклопов остаются недоразвитыми лицевой череп, глаза и нос. Отсутствуют части лица, расположенные по средней линии: носовой скелет, решетчатая кость. Обе верхние челюсти сдвинуты к средней линии, основная и фронтальные кости остаются рудиментарными. Сдвиг лицевого черепа к средней линии обусловливает образование одной орбиты по средней линии, на месте корня носа. В орбите помещается глаз, нередко недоразвитый. Вместо носа имеется только рудимент в виде хобота (proboscis), свешивающегося над глазом. По исследованиям Schwalbe и Joseph, хобот представляет собой уродство крайней степени, когда вместо носа имеется только бесформенный комплекс рудиментарных деталей: можно найти отдельные хрящевые пластинки, соответствующие рудиментарным носовым раковинам и носовой перегородке, остатки носового хода, покрытые слизистой оболочкой (рис. 1).

Реже встречающимся подвидом ариненцефалии является цебоцефалия. При этом уродстве имеется только какое - то подобие носа, расположенное между глазами, стоящими очень близко друг к другу. Отверстие на верхушке недоразвитого носа ведет в слепо заканчивающуюся рудиментарную носовую полость (рис. 3).
К ариненцефалии, по Kundrat, должны быть отнесены и такие уродства, когда при отсутствии обонятельного мозга и общем недоразвитии лицевого черепа особенно заметно недоразвитие межчелюстной кости и septum narium. Образуется щель, захватывающая альвеолярный отросток верхней челюсти, верхнюю губу и вход в нос. Передние отделы носа свободно сообщаются с полостью рта. Вследствие недоразвития костно-хрящевого остова наружного носа и соединения носовых отростков верхней челюсти друг с другом, наружный нос представляется настолько плоским, что обе щеки и спинка носа лежат в одной плоскости. Такую форму уродства Kundrat называет ложной срединной щелью верхней челюсти (рис. 4).
Рис. 3. Цебоцефалия (по Kundrat).
Рис. 4. Ложная срединная щель (по Monnier)
Периферический отдел
Проводниковый отдел
Центральный отдел
Строение анализаторных систем
Наружное ухо
Среднее ухо
Внутреннее ухо
Периферический отдел:
Наружное ухо
Ушная раковина:
1 — козелок; 2 — мочка
а — натянутая часть;
б — расслабленная часть
(шрапнеллевая перепонка);
7 — световой рефлекс;
2 — короткий отросток
молоточка; 3 — задняя
складка барабанной
перепонки; 4 — передняя
складка; 5 — рукоятка
молоточка; 6 — пупок
Среднее ухо представляет собой систему воздухоносных полостей в толще височной кости и состоит из барабанной полости, слуховой трубы и сосцевидного отростка с его костными ячейками
Внутреннее ухо
. Слепок с костного лабиринта:
1 — преддверие;
2 — верхний полукружный канал;
3 — наружный полукружный канал;
4 — задний полукружный канал;
5 — улитка
Вертикальный разрез
через костную улитку:
1 – костная колонка,
2 – спиральный костный гребень,
3 – преддверная лестница,
4 – барабанная лестница
Поперечный разрез через один из завитков улитки
1 — основная мембрана;
2 — волокна слухового нерва,
3 — костная стенка улитки,
4 — слуховые (волосковые) клетки;
5 — поддерживающие клетки;
6 — покровная мембрана;
7 — рейснерова мембрана,
П — преддверная лестница;
Б — барабанная лестница,
У — улитковый ход
Проводниковый отдел слухового анализатора
Пороки развития наружного, среднего и внутреннего уха. Слуховые расстройства при данных заболеваниях. Врождённые аномалии наружного уха. Очень часто сочетаются с врождёнными пороками развития. Встречаются 1:10000 детей. Врожденные пороки развития наружного уха: -  анотия — врождённое отсутствие ушной раковины; - микротия – недоразвитие ушной раковины (например, нет только мочки); - деформация ушной раковины (например, обезьяньи уши – оттопырены); - атрезия – заращение наружного слухового прохода. Врожденные пороки развития среднего уха: - заполнение барабанной полости косной тканью; - отсутствие слуховых косточек; - сращение слуховых косточек. Врожденные пороки развития внутреннего уха: - отсутствие лабиринта или недоразвитие отдельных его частей - недоразвитие кортиева органа (чаще всего волосковых клеток).
Одним из таких дефектов является микротия – недостаточное развитие или полное отсутствие ушной раковины. Это редкая особенность, которая встречается, по разным оценкам, у одного из 6-10 тыс. человек. Как правило она бывает односторонняя, обычно с правой, реже с левой стороны, но в ~10% случаях встречается двусторонняя (билатеральная) микротия.
Результаты научных исследований, а также практика пластических и ЛОР-хирургов видетельствуют о том, что примерно в половине случаев проблема сочетается с иными нарушениями пропорций лица, и почти всегда – с атрезией (частичным или полным отсутствием) ушного канала и структур среднего уха.

Этиология этого явления до сих пор не изучена. Теорий выдвигалось немало, в частности – повреждения кровеносных сосудов, краснуха и прием препаратов талидомида во время беременности – но ни одна из них не нашла подтверждения. Изучение «генетической» стороны вопроса показало, что наследственный фактор, возможно, имеет место, но в любом случае не является определяющим.
Также, в медицинской литературе отдельно подчеркивается, что микротия не является следствием неправильного образа жизни родителей во время вынашивания ребенка. Что бы «плохого» ни делала будущая мама в этот ответственный период – алкоголь, кофеин, никотин, стрессы и т.п. – это не может быть поводом винить себя в случившемся.

Причины микротии
Симптоматика
Немного уменьшенная ушная раковина с имеющимся слуховым проходом, который, однако, несколько уже, чем должен быть в норме

I  степень
Симптоматика
Частично недоразвитая ушная раковина с отсутствующим или очень узким наружным слуховым проходом, сопровождается частичной утратой слуха
 IIстепень
Симптоматика
Ушная раковина является рудиментарной, т.е. выглядит как зачаток нормального уха. Отсутствует наружный слуховой проход и барабанная перепонка

III степень
Симптоматика
Полное отсутствие ушной раковины (анотия)

IV степень

Единственный, но вполне эффективный вариант решения эстетической части проблемы – частичная или полная хирургическая реконструкция ушной раковины. Это сложная многоступенчатая процедура, которая может занять до полутора лет и более. Выполняет ее пластический, реконструктивный или ЛОР-хирург.
Как правило, такая операция состоит из 4 этапов, последовательность и техники выполнения которых могут немного различаться:
Формирование хрящевого каркаса будущего уха. Наиболее подходящим материалом является фрагмент ребра или здорового уха самого пациента. Помимо собственных тканей, возможно использование и других материалов: донорский хрящ, силикон, полиамидная нить, полиакрил и др. При некоторых достоинствах использования инородных имплантов (возможность воссоздания каркаса до операции, что сокращает длительность процедуры) существует высокая вероятность их отторжения, донорского – раньше, искусственного – позже. Поэтому имплант из своих тканей будет предпочтительнее чужеродного.
Лечение микротии, реконструктивная операция
Формирование подкожного кармана в области отсутствующей или поврежденной (недоразвитой) ушной раковины, в который помещается уже сформированный хрящевой каркас. Приживание каркаса происходит в течение 4-6 месяцев.
Из сформированного ушного блока создается основа ушной раковины, ей придается необходимое анатомическое положение.
На последнем этапе сформированный ушной блок поднимают для воссоздания ушной раковины, с помощью кожно-хрящевого имплантата, взятого у здорового уха реконструируется козелок. В заушной области возможно образование неэстетичного дефекта, который закрывается свободной кожной складкой. Этот этап также занимает от 4 до 6 месяцев.

Фото до и после реконструкции ушной раковины при микротии:

Факторы, исключающие возможность проведения реконстурктивной операции при микротии, в основном являются общехирургическими:
возраст пациента до 6 лет (причем, несмотря на то, что к этому возрасту ушная раковина уже считается полностью сформированной, далеко не все хирурги берутся оперировать пациентов до совершеннолетия);
нарушения свертываемости крови;
сахарный диабет;
обострение хронических заболеваний;
сердечно-сосудистые заболевания.
Последнее слово всегда остается за лечащим врачом, который будет учитывать общее состояние пациента, степень проявления микротии и возможные хирургические риски.

Противопоказания к операции
4 неделя – формирование СП (инвагинация эктодермы и отделение от нее с формированием отдельной структуры; формирование ПЛ)
II триместр – формирование хряща, оссификация, формирование капсулы внутреннего уха
Сенсорный эпителий развивается из клеток ПЛ; полное созревание – во II триместре
К 26 нед. – окончательное развитие внутреннего уха

Aномалии развития внутреннего ухаЭмбриология
Аплазия/дисплазия сенсорного эпителия
Аномалии структуры перепончатого лабиринта
Аномалии строения костной капсулы
Аномалии развития внутреннего уха
1/1 000 – сенсоневральные нарушения слуха (Haggard, 1999)
Заболевания и травмы в пре- и постнатальном периодах в 25 % случаев являются причинами сенсоневральных нарушений слуха
В пренатальном периоде – генетические нарушения и воздействие тератогенных факторов
Аномалии развития внутреннего уха
I. Аномалии развития перепончатого лабиринта
	А. Полная дисплазия
	В. Частичная дисплазия
	- Кохлеосаккулярная дисплазия (Scheibe)
	- Дисплазия базального завитка улитки (Alexander)

Диагностика: КТ  ; МРТ в 3х мерном пространстве
Классификация(Jackler, Luxford, House, 1987)

II. Аномалии развития костной капсулы и ПЛ
	А. Тотальная аплазия (Michel)
	B. Аномалии улитки (аплазия, гипоплазия, аномалия  Mondini, общая полость)
	С. Аномалии лабиринта (аплазия, гипоплазия)
	D. Аномалии строения водопроводов (расширение)
	Е. Аномалии ВСП (сужение, расширение)
Диагностика: КТ; МРТ в 3х мерном пространстве
Классификация(Jackler, Luxford, House, 1987)
Высокоразрешающая КТ височных костей
Аксиальная/коронарная проекции: срезы 1 мм
МРТ (Т2 режим показан больным-кандидатам на кохлеарную имплантацию)
МРТ в 3х мерном пространстве позволяет производить виртуальную трехмерную реконструкцию перепончатого лабиринта и определять аномалии, связанные с сужением или облитерацией эндолимфатических пространств
Диагностика
Предотвратить дополнительное снижение слуха
Реабилитация
Тактика
Ликворея
Менингит (плановая иммунизация)
Перилимфатическая фистула при ЧМТ или баротравме
Слухопротезирование
Возможность выполнения кохлеарной имплантации ?
Проблемы
Доказана эффективность операции при наличии только слухового нерва при отсутствии волосковых клеток (Schmidt, 1985)
В норме СГ – 25 000-30 000 ВК
8 ушей c врожденными аномалиями – N=7,677-16,110 (11,478)
Проблема – ЛН
Абсолютные противопоказания для КИ – аплазия улитки или отсутствие слухового нерва

Miyamoto (1986) – КИ б-ному с аномалией Мондини
House et al. (1987) – 5 КИ
Tucci (1995) – 6 КИ

Кохлеарная имплантация ?
Двусторонняя глухота
С 2-месячного возраста дв.гн.средний отит
Консервативное лечение: капли, промывания борным спиртом
Стационарное лечение: удаление грануляций
Индивидуальные занятия с сурдопедагогом
Б-ная Л., 7 лет 6 месяцевДиагноз: Двусторонняя врожденная сенсоневральная глухота. Двусторонний хронический гнойный средний отит, мезотимпанит
Аудиометрическое исследование

   межа
                       по                                               МА-31
                             кістковій   провідності

     межа
                      по                                             МА-31
                         повітряній провідності

Тест в нормі
числівників
словесний

                                          праве вухо

      125    250     500     1000       2000        4000       8000    шум

	     10     20    30     40    50    60    70     80     90   100  110  120 дБ

          	  пороги КП до операції;	             пороги КП після операції;

            пороги ПП до операції;                  пороги ПП після операції

КСВП
Пороги регистрации КСВП ~ 70-75 дБ HL с обеих сторон
КТ	Норма				Б-ная Л.
КТ
Демонстрация фильма


title: Скачать презентацию или конспект Механическое и тепловое оборудование кондитерского цеха

extracted_text:
Механическое и тепловое оборудование кондитерского цеха
Выполнила студентка 11 группы Кормильцева Юлия
Введение
Ассортимент оборудования для кондитерских цехов весьма разнообразен, в зависимости от количества выпускаемой продукции и степени автоматизации различных этапов производства можно выбрать оборудование, как для промышленного производства, так и для небольшого семейного бизнеса. Мы рассмотрим оборудование, которое используется в кондитерском бизнесе наиболее часто, а из него можно выбрать для своего цеха наиболее необходимое.
Мукопросеиватель.
Планетарный миксер.
Тестомесильная машина.
Тестораскаточная машина.
Отсадочная машина.
Печь кондитерская.
Мельница для сахара.
Дозатор начинки.
Мельница для сухарей
Холодильные камеры для хранения продуктов и готовых изделий.
Производственные столы.
Тестомесильная машина
Планетарный миксер
Тестораскаточная машина
Мукопросеиватель
Дозатор начинки
Мельница для сахара
Отсадочная машина
Мельница для сухарей
Печь кондитерская
Инвентарь кондитерского цеха
Основной инвентарь для приготовления кондитерских изделий:
Делители теста.
Сита.
Венчики.
Противни.
Формы для выпечки.
Формы для шоколада.
Скалки.
Ножи.
Кондитерские мешки с насадками.
Резцы для теста.
Выемки кондитерские.
Лопатки для перекладывания пирожных.
Лейка для пропитки изделий.
Лопатка бордюрная.
Кисточки для смазывания изделий.
Кольцо для круглых тортов.
Шаблоны для деления тортов.
Листы кондитерские двух бортовые и трёх бортовые.
Формы кондитерские для кексов и тортов.
Тарталетницы.
Шаблон для нарезки бисквита на порции.
Щипцы кондитерские.
Лопатка кондитерская.
Упаковочные коробки для готовых изделий.
Дозатор начинки
Технические характеристики
Напряжение	220 В, 50 герц
Мощность	150 кВт
Размеры	400 х 300 х 580мм
Вес	21 кгДозатор позволяет дозировать вареную сгущенку, джемы, мёд и прочие густые массы в готовые хлебопекарные и кондитерские изделия или в мелкую тару. Подходит для наполнения вареной сгущенкой и другими вязкими начинками пончиков Берлинеров, Донатсов, эклеров, заварных колец, булочек и др., а именно дозирования жидких и пастообразных начинок в пончики кольцеобразной формы по кругу в несколько мест (в 6 мест) одновременно.
Насадка для Донатсов Дозатор имеет сменные насадки для Донатсов, где иголки дозируют начинку по кругу и насадки с одной иголкой, где начинка дозируется в одном месте.

Дозатор отлично дозирует начинку как в традиционные русские пончики, так и в дрожжевые Донатсы.
Дозатор дозирует начинку как густую, так и жидкую (вареную сгущенку, джемы, творожную массу, мёд, взбитые сливки и пр.). Все детали аппарата, контактирующие с дозируемым продуктом, выполнены из нержавеющей стали 12Х18Н10Т и фторопласта Ф-4, разрешенного в пищевой промышленности.
Универсальность
Запас начинки может находиться в любой ёмкости – даже в стеклянной.
Сменные насадки позволяют применять дозатор для различных типов кондитерских изделий (Донатсов, Берлинеров, Элеров, Заваных трубочек и пр.).Надёжность
Плавная и чёткая регулировка дозируемого объёма.
Удобство разборки и возможность промывки дозатора как в собранном, установленном на столе виде, так и в полностью разобранном виде.Технические характеристики

Максимальная производительность:       1000 доз/час
Объём дозы:  4...10 мл - регулируется (вес начинки может быть до 30г)
Погрешность:  не более 1%
Вес:          0,6 кг
 Ручной дозатор начинки с настольным креплением
Ручной дозатор начинки применяется для наполнения начинкой готовых хлебопекарных и кондитерских изделий. Подходит для наполнения пончиков Берлинеров, Донатсов, эклеров, заварных колец, булочек и пр.
Дозатор максимально прост в использовании, не потребляет электричество, легко устанавливается на любой стол.
Подходит для наполнения различных пирожных, пончиков, круассанов, профитролей и др. джемом, вареной сгущенкой или близких к  этому начинками. Начинка дозируется движением рычага. Плавная регулировка объема дозирования. Простота в использовании, обработки и чистки. Отсутствие утечек при правильном использовании. Безопасная установка на столешницу толщиной до 50 мм.
Корпус из литого алюминия, камера дозирования из нержавеющей стали.
Воронка сделана из небьющегося пластика с фиксатором.
Ручной дозатор

Производительность	25-35 доз/минуту
Объем воронки	              7л
Объем дозирования	от 5 до 30г за ход поршня
Габаритные размеры	400х350х550 мм
Вес	                           2,4 кг
Дозатор начинки электрический
  Дозатор начинки электрический от компании SHELDEM (пр-во Германия)  - дозатор шестерёнчатого типа, предназначен для дозирования различных текучих, не слишком вязких начинок. Дозируются начинки по вязкости похожие на джем, повидло, вареную сгущенку в кондитерские и хлебобулочные изделия, например: Берлинеры, трубочки, эклеры и т.п. Процесс дозирования достигается за счет специально разработанной конструкции дозирующего узла. В отличии от других дозаторов, в которых объем дозирующей камеры является общим для двух иголок, в дозаторе начинки  каждая дозирующая шестеренка приходится на соответствующую ей иголку.
 Поскольку плотность дозируемых джемов, вареной сгущенки, ореховых муссов и т.п. является разной,  то вес начинки нужно выставлять не по граммам, а по времени вращения шестеренок. Этот принцип используется в дозаторе. Это позволяет выбирать и выставлять время дозирования и подбирать необходимый оператору вес начинки, который будет выдаваться дозатором за один раз.
В конструкции дозатора предусмотрена возможность быстрого перехода на другую начинку. Для этого необходимо заменить дозирующую воронку (в комплекте идет одна воронка 14л, можно заказать несколько), а также дозирующие иголки.
Схема дозатора

Технические характеристикиВоронка: Объем: сталь  14 л
Диапазон дозирования: от 0 до 200г
Подключение:	230V, 50 Hz, 1,15 A
Размер : длина 550мм, ширина 360мм, высота 540 мм
Масса:	40 кгПреимущества:
- высокая точность дозирования
- надежная немецкая конструкция из высококачественной стали
- возможность быстрого перехода с одной начинки на другую
- большая воронка 14л
- регулируемый вес начинки в широком диапазоне


title: Скачать презентацию или конспект Методы выделения нуклеиновых кислот

extracted_text:
Методы выделения нуклеиновых кислот
Геномный материал прокариот
Геномный материал эукариот
Основные этапы выделения ДНК из биологических образцов
Получение биологического образца
Разрушение клеточной стенки, капсулы, биологических мембран
Удаление белков (депротеинизация)
Очистка, переосаждение,растворение ДНК
Проверка качественного и количественного выхода ДНК
-    Венозная кровь – центрифугирование образца и отбор ядросодержащих клеток

Культура клеток в среде – центрифугирование,отбор питательной среды (для культур бактерий, выращенных в жидкой среде); отделение клеток от подложки, центрифугирование (для культур эукариотических клеток)
Бактериальная культура на чашке Петри – забор материала при помощи микробиологической петли

1. Получение биологического образца (клеток, содержащих генетический материал)

2. Разрушение клеточной стенки, капсулы, биологических мембран
Строение биологической
мембраны
Tris-HCl – поддержание постоянства рН (необходимо для работы лизоцима, а также дл сохранения целостности ДНК)
ЭДТА – хелатирующий агент (связывает двухвалентные ионы, в т.ч. ионы Mg2+
– кофакторы
 ДНКаз )
Детергент
( тритон Х -100,CTAB,
SDS) – солюбилизация мембраны, денатурация белков
Дополнительно:
Лизоцим – мурамидаза, осуществляет гидролиз пептидогликана клеточной стенки бактерий муреина
Нагрев до 650С-900С
Солюбилизация
 мембраны
3. Депротеинизация

Протеиназа К – удаления белковой примеси в препаратах нуклеиновых кислот, расщепление и инактивация нуклеаз в препаратах ДНК,
устойчива ко многим денатурирующим агентам, таким как додецил-сульфат натрия и мочевина, повышающим доступность пептидных связей белков для протеиназы К
Удаление белков

Необратимое осаждение связано с глубокими внутримолекулярными изменениями структуры белка, что приводит в потере ими нативных свойств (растворимости, биологической активности и др.).Денатурация белков при помощи фенола (рН 7,5) с последующим его удалением смесью фенол-хлороформ, хлороформом

Денатурация
Освобождение нуклеиновых кислот от детергента, солей
- Используют AcNa + изопропиловый спирт или AcNa + 96% этиловый спирт– образование осадка нуклеиновых кислот
- 70% этанол – дополнительная промывка образовавшегося осадка ДНК от солей
-  Центрифугирование
Растворение ДНК в ddH2O
Хранить при -200С
4. Переосаждение и растворение ДНК
Подведение итогов:
Для выделния ДНК нужно получить лизат клеток, осветлить его центрифугированием (удаляем мембрану, клеточную стенку, капсулу)
Очистить ДНК, поскольку в препарате могут содержаться ДНКазы, ингибиторы лигаз, рестриктаз, Taq-полимеразы

Очистка препарата ДНК Потенциальные ингибиторы ПЦР

1. Фенол-хлороформная экстракция (удаление белков), спиртовое осаждение ДНК (изопропанол, этанол)
2. Хроматография (гель-фильтрация, ионообменная хроматография,селективная адсорбция) – метод часто используется в коммерческих наборах для выделения ДНК
3. Центрифугирование в градиенте хлористого цезия
Методы очистки нуклеиновых кислот
Хроматография
Гель-фильтрация
Ионно-обменная хроматография

Селективная адсорбция
Аффинное связывание – использование биотин меченых
праймеров,с последующей стрептовидиновой акцепцией ДНК
В чем различия между методами выделения геномной и плазмидной ДНК?
Основные стадии – одинаковы (получение лизата, депротеинизация, преципитация ДНК)
При выделении геномной ДНК используются более мягкие методы лизиса (НЕ используется нагревание, щелочной лизис) для сохранения целостности ДНК (геномная ДНК имеет большие размеры по сравнению с плазмидной, легко рвется  при действии температуры, рН, при механическом воздействии)
При выделении геномной ДНК следует избегать интенсивного пипетирования раствора ДНК, а также нельзя использовать узкие наконечники для пипеток
Подсушивать препарат высокомолекулярной ДНК следует БЕЗ подогрева
Растворять такой препарат следует аккуратно, без встряхивания пробирки
Виды биологических образцов
Выделение ДНК из различных объектов
Варьируют методики лизиса (использование дополнительных ферментов, подбор детергента). Пример:
  - для выделения ДНК из грибов и растений используют CTAB (цетилтриметиламмоний бромид) – позволяет избавиться от полисахаридов и соединений фенольной природы – в буфере с низкой ионной силой преципитирует ДНК, в то время как полисахариды и фенольные соединения остаются в растворе

Метод иммуномагнитной сепарации
5-10 грамм кал
200 мл Hanks буфер
.
Фильтрация гомогенезата. нейлоновый фильтр dпоры= 220 мкм
Разделение гомогенезата.
5 порций по 40мл + 40мкл ММС. Инкубация 30 мин.

Инкубация в магнитном сепараторе на горизонтальной платформе шейкера 15 мин

1 – ММС с колоноцитами после коньюгации Аг(колоноцит)+Ат(ММС)
2 – ММС без колоноцитов
1
2

Выделение ДНК из колоноцитов

Matsushita H, Matsumura Y, Moriya Y, Akasu T, Fujita S, Yamamoto S, Onouchi S, Saito N, Sugito M, Ito M, Kozu T, Minowa T, Nomura S, Tsunoda H, Kakizoe T: A new method for isolating colonocytes from naturally evacuated feces and its clinical application to colorectal cancer diagnosis. Gastroenterology 2005;129:1918-1927
Проверка качественного и количественного выхода ДНК
1. Гель-электрофорез (агароза,ПААГ)
2. Спектрофотометрия

Спектрофотометрическое измерение концентрации ДНК

Гель-электрофорез

А ТЕПЕРЬ
ВСЕ НА ПРАКТИКУМ!!!