Don Juan de Austria
Don Juan de Austria, yang lahir di Kota Swapraja Regensburg, Oberpfalz, adalah anak hasil hubungan gelap antara Kaisar Romawi Suci, Carlos V (menduda semenjak 1539), dan Barbara Blomberg, seorang biduanita, anak perempuan seorang burger (saudagar).
Juana dari Kastila
Juana lahir di Toledo, ibu kota Kerajaan Kastila. Dia adalah anak ketiga dan putri kedua dari Isabel, Ratu Kastila dan Leon, dan Fernando II, Raja Aragon. Juana adalah anak yang rajin dan pintar. Ratu Isabel memberikan pendidikan yang baik kepada Juana, juga kepada para saudarinya, Isabel, Maria, dan Catalina.