抗菌肽(tachyplesin Ⅰ)串联基因的构建、表达及抗菌活性
为了实现通过基因工程方法制备具有稳定结构的抗菌肽tachyplesin Ⅰ,采取了tachyplesinⅠ基因串联表达的方法.实验以高拷贝穿梭表达载体pSBPTQ为表达载体,通过RT-PCR扩增tachyplesin Ⅰ基因(tac)和采用直接退火的方法合成tachyplesin Ⅰ串联基因(2tac).构建重组表达载体pSBPTQ-TAC和pSBPTQ-2TAC,转化到枯草杆菌WB800实现高效表达,经2％蔗糖诱导获得表达串联产物(2TAC)和TAC.通过离子交换柱层析纯化后得表达产物2TAC和TAC,2TAC经BrCN水解后,对表达产物抑菌活性分析,观察发酵液上清对大肠杆菌(E.coli K88)和伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)的抑菌圈和细胞微观形态的变化.实验结果表明:基因tac和2tac在枯草杆菌中表达成功,表达产物在发酵上清液中的含量分别约为8.25、17.36 mg·L-1;表达产物TAC和2TAC对大肠杆菌K88和伤寒沙门氏菌都具有明显的抑菌作用,2TAC经BrCN水解产物抑菌活力高于TAC.