Granzyme B
گرینزیم بی (جی آر بی) سیرائن پروٹیز گرینزیموں میں سے ایک ہے جو عام طور پر قدرتی قاتل خلیوں (این کے خلیوں) اور سائٹوٹوکسک ٹی خلیوں کے دانے میں پایا جاتا ہے۔ یہ ہدف خلیوں میں اپوپٹوسس میں ثالثی کے لیے سوراخ بنانے والے پروٹین پرفورن کے ساتھ ان خلیوں کے ذریعے خارج ہوتا ہے۔ گرینزیم بی کو باسوفیلس اور ماسٹ خلیوں سے لے کر ہموار پٹھوں کے خلیوں تک کے غیر سائٹوٹوکسک خلیوں کی ایک وسیع رینج کے ذریعے بھی تیار کیا گیا ہے۔ گرینزیم بی کے ثانوی افعال بھی بے شمار ہیں۔ گرینزیم بی نے سائٹوکائن کی رہائی کو متحرک کرکے سوزش پیدا کرنے میں ملوث ہونے کا مظاہرہ کیا ہے اور یہ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس ری ماڈلنگ میں بھی شامل ہے۔ گرینزیم بی کی بلند سطح متعدد آٹومیمون بیماریوں، جلد کی متعدد بیماریوں اور ٹائپ 1 ذیابیطس میں بھی ملوث ہے۔ ساخت انسانوں میں، گرینزیم بی کو کروموسوم 14q.11.2 پر GZMB کے ذریعے انکوڈ کیا جاتا ہے، جو 3.2kb لمبا ہوتا ہے اور 5 ایکسون پر مشتمل ہوتا ہے۔ یہ سب سے زیادہ وافر مقدار میں پائے جانے والے گرینزیموں میں سے ایک ہے جس میں انسانوں میں 5 اور چوہوں میں 10 ہوتے ہیں۔ خیال کیا جاتا ہے کہ گرینزیم بی ایک گرینزیم ایچ سے متعلق پیش خیمہ سے تیار ہوا ہے اور دوسرے گرینزیموں کے مقابلے میں کم ارتکاز پر زیادہ موثر ہے۔ یہ انزائم ابتدائی طور پر ایک غیر فعال پیش رو زیموجن کی شکل میں ہوتا ہے، جس میں ایک اضافی امینو ٹرمینل پیپٹائڈ ترتیب ہوتی ہے۔ اس ترتیب کو 2 امینو ایسڈ کو ہٹاتے ہوئے کیتھیپسن سی کے ذریعے الگ کیا جا سکتا ہے۔ کیتھیپسن ایچ میں گرینزیم بی کو چالو کرنے کی بھی اطلاع دی گئی ہے۔ گرینزیم بی کی ساخت 3 ٹرانس ڈومین حصوں کے ساتھ دو 6 پھنسے ہوئے β شیٹس پر مشتمل ہے۔ سائٹوٹوکسک لیمفوسائٹس کے دانوں میں انزائم دو گلائکوسیلیٹڈ شکلوں میں موجود ہو سکتا ہے۔ اونچی مینوز کی شکل کا وزن 32kDa اور پیچیدہ شکل 35kDa ہے۔ گرینزیم بی اپنے فعال مقام پر اتپریرک ٹرائیڈ ہسٹائڈائن-ایسپرٹک ایسڈ-سیرین پر مشتمل ہوتا ہے اور ترجیحی طور پر پی 1 پوزیشن میں واقع ایسپرٹک ایسڈ کے باقیات کے بعد الگ ہوجاتا ہے۔ اسپرٹک ایسڈ کے باقیات کو الگ کیا جانا انزائم کی بائنڈنگ جیب میں ارجنائن کے باقیات کے ساتھ وابستہ ہوتا ہے۔ گرینزیم بی غیر جانبدار پی ایچ پر فعال ہوتا ہے اور اس لیے تیزابی سی ٹی ایل دانے میں غیر فعال ہوتا ہے۔ دانے میں سیرگلیسن سے جڑے ہونے پر انزائم بھی غیر فعال ہو جاتا ہے تاکہ خود سائٹوٹوکسک ٹی خلیوں کے اندر شروع ہونے والے اپوپٹوسس سے بچا جا سکے۔ ڈیلیوری گرینزیم بی پرفورن کے ساتھ خارج ہوتا ہے جو ٹارگٹ سیل کی پلازما جھلی میں داخل ہوتا ہے جس سے ایک سوراخ بنتا ہے۔ پرفورائن کا رداس 5.5 این ایم ہے اور گرینزیم بی کا اسٹاک کا رداس 2.5 این ایم ہے اور اس لیے وہ پرفورائن کے سوراخ سے گزر کر تباہ ہونے والے ہدف میں جا سکتا ہے۔ متبادل طور پر، ایک بار جاری ہونے کے بعد، گرینزیم بی ایک ٹارگٹ سیل پر ریسیپٹرز پر مشتمل منفی طور پر چارج شدہ ہیپیرن سلفیٹ سے جڑا ہو سکتا ہے اور اینڈوسیٹوزڈ ہو سکتا ہے۔ وہ پھوڑے جو انزائم کو اندر لے جاتے ہیں پھر پھٹ جاتے ہیں، جس سے گرینزیم بی کو سائٹوپلازم اور اس کے سبسٹریٹس سے بے نقاب کیا جاتا ہے۔ ایچ ایس پی-70 کو گرینزیم بی کے اندراج میں مدد کرنے سے بھی جوڑا گیا ہے۔ گرینزیم بی کو ہدف کی پلازما جھلی میں منفی فاسفولیپیڈز کے لیے پہلے اپنے باؤنڈ سرگلیسن کا تبادلہ کرکے ہدف میں داخل ہونے کی تجویز بھی دی گئی ہے۔ اس کے بعد داخلہ جذب کرنے والے پنوسیٹوسس کے کم انتخابی عمل سے ہوتا ہے۔ ایک بار ٹارگٹ سیل کے اندر داخل ہونے کے بعد، گرینزیم بی ابتدائی کیسپیس 8 اور 10 کو توڑ اور چالو کر سکتا ہے، اور پھانسی دینے والا کیسپیس 3 اور 7 جو اپوپٹوسس کو متحرک کرتا ہے۔ کیسپیس 7 گرینزیم بی کے لیے سب سے زیادہ حساس ہے اور کیسپیس 3، 8، اور 10 صرف انٹرمیڈیٹ ٹکڑوں سے کٹے ہوئے ہیں اور مکمل ایکٹیویشن کے لیے مزید کلیویج کی ضرورت ہے۔ گرینزیم بی بی آئی ڈی کو بھی توڑ سکتا ہے جس کی وجہ سے بی اے ایکس/بی اے کے اولیگومیرائزیشن اور مائٹوکونڈریا سے سائٹوکروم سی کی رہائی ہوتی ہے۔ گرینزیم بی آئی سی اے ڈی کو الگ کر سکتا ہے جس کی وجہ سے ڈی این اے کے ٹکڑے ٹکڑے ہو سکتے ہیں اور اپپوٹوسس سے وابستہ سیڑھی کا نمونہ بن سکتا ہے۔ گرینزیم بی میں 300 سے زیادہ سبسٹریٹس کی صلاحیت ہے اور یہ ایم سی ایل-1 کو بیرونی مائٹوکونڈریل جھلی میں تقسیم کر سکتا ہے جس سے بیم کی روک تھام میں راحت ملتی ہے۔ بیم بی اے ایکس/بی اے کے اولیگومیرائزیشن، مائٹوکونڈریل جھلی پارگمیتا اور اپوپٹوسس کو متحرک کرتا ہے۔ گرینزیم بی مائٹوکونڈریا پولرائزیشن کو آسان بنانے کے لیے ایچ اے ایکس 1 (ایچ ایس-1 سے وابستہ پروٹین ایکس-1) کو بھی الگ کر سکتا ہے۔ گرینزیم بی خلیوں کی موت میں ثالثی کے لیے مائٹوکونڈریل ری ایکٹیو آکسیجن پرجاتیوں (آر او ایس) کی سائٹوٹوکسک سطح بھی پیدا کر سکتا ہے۔ خیال کیا جاتا ہے کہ خلیوں کی موت کے کیسپیس آزاد راستے وائرس پر قابو پانے کے لیے پیدا ہوئے ہیں جو کیسپیس کو روک سکتے ہیں اور اپوپٹوسس کو روک سکتے ہیں۔ ٹارگیٹ نیوکلئس گرینزیم بی میں بہت سے سبسٹریٹ ہوتے ہیں جو نیوکلئس میں واقع ہوتے ہیں۔ گرینزیم بی ڈی این اے کی مرمت اور ریٹرو وائرل ڈی این اے انضمام میں خلل ڈالنے کے لیے پی اے آر پی (پولی اے ڈی پی رائبوس پولیمریز) اور ڈی این اے پی کے (ڈی این اے پروٹین کینیز) کو الگ کر سکتا ہے۔ گرینزیم بی وائرل نقل کو روکنے کے لیے نیوکلیوفوسمین، ٹوپو آئسومیرس 1 اور نیوکلیولن کو بھی الگ کر سکتا ہے۔ گرینزیم بی ایچ ایس وی 1 وائرس سے آئی سی پی 4 کو الگ کر سکتا ہے جو کہ جین کی منتقلی کے لیے استعمال ہونے والا ایک ضروری پروٹین ہے اور مائٹوسس کو روکنے کے لیے این یو ایم اے (نیوکلیئر مائٹوٹک اپریٹس پروٹین) کو الگ کیا جا سکتا ہے۔ گرینزیم بی ڈی بی پی (ڈی این اے بائنڈنگ پروٹین) کو 50 کے ڈی اے ٹکڑے میں اور پھر اضافی 60 کے ڈی اے میں بالواسطہ طور پر اس کے فعال ہونے والے کیسپیسز کے ذریعے بھی تقسیم کر سکتا ہے۔ ایکسٹرا سیلولر میٹرکس گرینزیم بی ایکسٹرا سیلولر میٹرکس (ای سی ایم) میں بہت سے پروٹینوں کو خراب کر سکتا ہے جن میں فائبرونیکٹن، وٹرونیکٹن اور ایگریکن شامل ہیں۔ کلیویج انوئیکس کے ذریعے خلیوں کی موت کا سبب بن سکتا ہے اور سوزش پیدا کرنے والے ای سی ایم سے الارمن جاری کر سکتا ہے۔ فائبرونیکٹن کے ٹکڑے نیوٹروفلز کو اپنی طرف متوجہ کر سکتے ہیں اور کونڈروسائٹس سے ایم ایم پی کے اظہار کو متحرک کر سکتے ہیں۔ باسوفیلس گرینزیم بی کا اخراج کرتے ہیں تاکہ اینڈوتھیلیل سیل سیل کے رابطوں کو خراب کیا جا سکے جس سے سوزش کی جگہوں پر اضافی پھیلاؤ ہوتا ہے۔ گرینزیم بی سائٹوکائنز آئی ایل-1α اور آئی ایل 18 پر کارروائی کرکے بھی سوزش پیدا کر سکتا ہے۔ یہ پی اے آر 1 (پروٹیز ایکٹیویٹڈ ریسیپٹر 1) کو چالو کرنے کے ذریعے آئی ایل 6 اور آئی ایل 8 کی رہائی کو بھی متحرک کر سکتا ہے۔ وٹرونیکٹن کا کلیویج آر جی ڈی انٹیگرن بائنڈنگ سائٹ پر ہوتا ہے جو سیل گروتھ سگنلنگ کے راستوں میں خلل ڈالتا ہے۔ لامینن اور فائبرونیکٹن کی کلیج ڈرمل-ایپیڈرمل جنکشن اٹیچمنٹ اور کراس ٹاک میں خلل ڈالتی ہے جبکہ گرینزیم بی کے ذریعے ڈیکورین کی تباہی کولیجن کی بے ترتیبی، جلد کے پتلے ہونے اور بڑھاپے کا سبب بنتی ہے۔ کیریٹنوسائٹس یو وی اے اور یو وی بی کی نمائش کے بعد گرینزیم بی کا اظہار کر سکتے ہیں جو جلد کی تصویر کشی سے منسلک ہے۔ گرینزیم بی زخم کی شفایابی کو بھی خراب کر سکتا ہے۔ وان ولی برانڈ عنصر کا کلیویج پلیٹلیٹ کے جمع ہونے کو روکتا ہے اور پلازمینوجن کا انجیوجینیسیس کو روکنے والا انجیوسٹیٹن ٹکڑا پیدا کرتا ہے۔ فائبرونیکٹنس اور وٹرونیکٹنس کاٹنے سے عارضی میٹرکس کی تشکیل میں تاخیر ہوتی ہے جس سے زخم کی شفایابی کو مزید نقصان پہنچتا ہے۔ ٹی سیل ریگولیشن گرینزیم بی کو سی ڈی 4 + ٹی خلیوں کو مارنے کے لیے ریگولیٹری ٹی خلیوں (ٹریگس) کے ذریعے خفیہ کیا جاتا ہے جو میزبان خلیوں کے سامنے نہیں آئے ہیں جو پردیی بافتوں تک محدود ہیں اور تھائمس تک نہیں پہنچ سکتے ہیں۔ یہ ایکٹیویشن-انڈیوسڈ سیل ڈیتھ (اے آئی سی ڈی) فاس ڈیتھ پاتھ وے کے بغیر حاصل کیا جا سکتا ہے اور سیلف اینٹیجنز کے لیے آٹو امیون رد عمل کو روکتا ہے۔ انفیکٹر گرینزیم بی کا سب سے عام انفیکٹر SERPINB9 ہے جسے پروٹینز انفیکٹر نائن (PI-9) بھی کہا جاتا ہے جو 376 امینو ایسڈ لمبا ہوتا ہے اور نیوکلئس اور سائٹوپلازم میں پایا جاتا ہے۔ یہ حادثاتی گرینزیم بی ثالثی سیل کی موت سے خود کو بچانے کے لیے کئی قسم کے خلیوں کے ذریعے تیار کیا جاتا ہے۔ پی آئی-9 میٹاسٹیبل ہے اور گرینزیم بی سے منسلک ہونے پر توانائی کے لحاظ سے سازگار تشکیل بناتا ہے۔ پی آئی-9 مالیکیول کا ری ایکٹیو لوپ سینٹر (آر سی ایل) ایک سیوڈو سبسٹریٹ کے طور پر کام کرتا ہے اور ابتدائی طور پر ایک ریورسیبل مائیکلس کمپلیکس بناتا ہے۔ ایک بار جب آر سی ایل کے پیپٹائڈ بانڈ کو پوزیشن پی 1 اور پی 1 'کے درمیان الگ کر دیا جاتا ہے، تو گرینزیم بی مستقل طور پر روک دیا جاتا ہے۔ تاہم، اگر آر سی ایل کو مؤثر طریقے سے الگ کیا جاتا ہے، تو پی آئی-9 1:1 خودکش سبسٹریٹ کے طور پر کام نہیں کرتا ہے اور گرینزیم بی کو بغیر کسی رکاوٹ کے چھوڑ دیا جاتا ہے۔ گرینزیم ایم گرینزیم بی کی روک تھام کو دور کرنے کے لیے نیوکلئس اور سائٹوپلازم میں پی آئی-9 کو بھی الگ کر سکتا ہے۔ اڈینو وائرس سے پروٹین ایل 4-100 کے ایکزوسائٹس اور مخصوص بائنڈنگ جیبوں پر باندھ کر گرینزیم بی کو بھی روک سکتا ہے۔ ایل 4-100 کے ایک اسمبلی پروٹین ہے جو ہیکسن کیپسومیرس کو اڈینو وائرس کے مرکزے میں منتقل کر سکتا ہے۔ 100k کو گرینزیم H کے ذریعے 90kDa کے ٹکڑے میں تقسیم کیا جا سکتا ہے تاکہ اس رکاوٹ کو دور کیا جا سکے جو اڈینو وائرس 5 متاثرہ خلیوں میں اہم ہے۔ بیماری میں گرینزیم بی کا کردار خون کے پلازما میں 20-40 pg/ml کی معمول کی حراستی رکھتا ہے جبکہ 70 ٪ سرگرمی کو برقرار رکھتا ہے اور گرینزیم بی کی بلند حراستی متعدد بیماری کی حالتوں میں پائی جاتی ہے۔ گرینزیم بی غیر منظم علاقوں اور اینٹیجن کے لنکر علاقوں میں نئے ایپیٹوپس کو بے نقاب کرکے آٹو اینٹیجن پیدا کر سکتا ہے اور یہ آٹومیمون بیماریوں کی نشوونما کا سبب بن سکتا ہے۔ سی ڈی 8 + ٹی خلیوں سے پرفورن کے ساتھ گرینزیم بی کی رہائی ایلوجینک اینڈوتھیلیل خلیوں کو مار کر دل اور گردے کی پیوند کاری کو مسترد کر سکتی ہے۔ پینکریٹک آئیلیٹس میں انسولین پیدا کرنے والے β خلیوں کی تباہی کی ثالثی ٹی خلیات اور گرینزیم بی کے ذریعے کی جاتی ہے جو ٹائپ 1 ذیابیطس میں حصہ ڈالتے ہیں۔ گرینزیم بی ریڑھ کی ہڈی کی چوٹ کے بعد خلیوں کی موت میں بھی ثالثی کر سکتا ہے اور ریمیٹائڈ گٹھیا میں بلند سطح پر پایا جاتا ہے۔ دائمی رکاوٹ پھیپھڑوں کی بیماری (سی او پی ڈی) کو این کے اور ٹی خلیوں سے نکلنے والے گرینزیم بی سے منسوب کیا گیا ہے جس کی وجہ سے برونچیل اپیتھیلیل خلیات کا اپوپٹوسس ہوتا ہے۔ میٹرکس کو غیر مستحکم کرنا اور گرینزیم بی کے ذریعے دوبارہ تیار کرنا بھی دمہ کے پیتھوجینسیس سے منسلک ہے۔ گرینزیم بی میلانوسائٹس کو مار سکتا ہے جس کی وجہ سے جلد کی حالت وٹیلگو ہوتی ہے اور گرینزیم بی کا زیادہ اظہار کانٹیکٹ ڈرمیٹائٹس، لائکن سکلیروس اور لائکن پلانس کے معاملات میں پایا جاتا ہے۔ گرینزیم بی کا اظہار کرنے والے سائٹوٹوکسک خلیوں کی شناخت بالوں کے پودوں کے قریب کی گئی ہے جو بالوں کے گرنے میں ممکنہ کردار کو جوڑتے ہیں۔ گرینزیم بی کی ای سی ایم ری ماڈلنگ خصوصیات نے بائیں وینٹریکلر ری ماڈلنگ میں اس کی شمولیت کو بھی شامل کیا ہے، جس سے مایوکارڈیل انفکشن کے بعد کے امکانات بڑھ جاتے ہیں۔ ہموار پٹھوں کے خلیوں کے اپوپٹوسس کے ذریعے ایٹیرومیٹس پلیکس کی ریشے دار ٹوپی کے کمزور ہونے کو بھی گرینزیم بی سے جوڑا گیا ہے۔ حوالہ جات بیرونی روابط ای سی 3.4.21