犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达
犬新孢子虫新疆Nc-1株NcSRS2基因的克隆及原核表达
根据GenBank中犬新孢子虫NcSRS2基因序列设计了1对引物，从新孢子虫病阳性牛血液中提取总DNA，经PCR扩增NcSRS2基因，将其插入原核表达质粒pGEX-4T-2中，重组质粒pGEX-4T-NcSRS2经测序确定后，转入表达菌株BL21，优化其表达条件，并探讨了GST-NcSRS2蛋白的生物活性。结果显示，在37℃条件下，经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达4h后，获得融合蛋白。Western-blot分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合，rELISA检测与弓形虫和布鲁氏菌阳性血清无交叉反应。