重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质
重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质
肝素酶工是一种多糖裂解酶，可特异性裂解硫酸肝素分子中糖苷键以制备低分子质量肝素。由于重组肝素酶工在大肠杆菌中表达时极易形成包涵体，将肝素酶工基因的N端融合谷胱甘肽-S-转移酶标签，在大肠杆菌中进行低温表达。结果显示，约90%的GST-Hep I融合蛋白以可溶性形式表达，表达的目标蛋白粗酶经过一步亲和纯化，比活为124.7 U/rag，纯化倍数达到366.7倍，酶活回收率为31.0%；结果表明Ca^对重组GST-Hep I有很强的激活作用，GPC-HPLC结果显示重组GST-HepI与天然肝素酶工裂解图谱相同。