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超解像光ゆらぎイメージングを用いた細胞膜上のタンパク質密度の定量
生理的および病理学的条件における細胞膜分子の分子構成の特性評価のための定量的アプローチは、最近開発された超解像イメージング技法の恩恵を受けている。現在のツールは、統計アルゴリズムを用いて、単一分子局在化顕微鏡法（SMLM）データに基づいて分子クラスターを決定する。これらのアプローチは、密度の高い領域の分子を同定・局在決定するSMLM技法の能力と、サンプル調製および撮像の実験条件によって制限される。我々は、標識密度の高い領域に優れ、様々な実験条件、すなわち複数の、または高い点滅速度に耐える膜分子の分布を決定するために、堅牢で、モデルを使用しない定量的クラスタリング分析を開発した。この方法は、TIRF顕微鏡と、その後の超解像光ゆらぎイメージング（SOFI）分析に基づく。方法の有効性と堅牢性は、T細胞の細胞膜におけるCD4糖タンパク質変異体のナノスケール分布を調べたシミュレーションデータと実験データを使って検証される。