METHOD FOR DETERMINING COMPATIBILITY BETWEEN A DONOR AND A RECIPIENT BY MEANS OF THE FLOW CYTOMETRIC DETECTION OF ALLOREACTIVE T CELLSMethod for determination of compatibility between a donor and a recipient by flow cytometric detection of allo-reactive T cells comprising the following steps: a) addition of a marker to a obtained blood sample from a donor/recipient pair to be analyzed, called labelled sample in the following, wherein the marker is suitable for discrimination of a sample from the recipient; the other blood sample obtained from donor/recipient pair to be analyzed is called in the following non-labelled sample,b) at least one-time dilution of both samples with a first medium, separation of cellular parts of the samples from the liquid phase,c) respective separated reuptake of the cellular parts, in particular in the same volume, of the blood sample residue of the labelled sample, of the blood sample residue of the non-labelled sample in a second mediumd) mixing of a part from the non-labelled sample and a part of the labelled sample, in particularly in a ratio of about 1:1 under preservation of a mixture,e) stimulation of antigen presenting cells (APC) in a mixture of labelled and non-labelled sample according to step d) of claim 1 by addition of anti-CD28− antibodies or anti-CD28− antibodies and anti-CD49d-antibodies followed byf) a first incubation of the mixture for the period of 1.5 h to 2.5 h, preferably 2 h, at a temperature of 35-39° C., preferably 37° C., optional under protective atmosphere, CO2 atmosphere,g) addition of a secretion inhibitor,h) mixing of the sample of step d) of claim 1, i) followed by a second incubation for a period of at least 2.5 h at a temperature of 35-39° C., preferably 37° C., optional under protective atmosphere, CO2 atmosphere,j) if necessary lysing of erythrocytes,k) flow cytometric detection of lymphocytes by marking and flow cytometric detection of CD4 or CD8 lymphocytes e.g. by labelled anti-CD4 and/or anti-CD8 antibodiesl) flow cytometric detection of lymphocytes activated by a intracellular cytokine, activated lymphocytes and lymphocytes expressing an activation marker,m) wherein a present allo-reactivity was detected between the individual, from which the labelled sample and that from which the non-labelled sample was obtained, if in the flow cytometric detection the following results occur: a. marking pos/CD4 pos/CD69 pos/INFgamma pos,b. marking neg/CD4 pos/CD69 pos/INFgamma pos,c. marking pos/CD8 pos/CD69 pos/INFgamma pos,d. marking pos/CD8 pos/CD69 pos/INFgammaA method for determining compatibility between a donor and a recipient by flow cytometric detection of allo-reactive T cells comprising the following steps: providing a first blood sample obtained from a donor/recipient pair to be analyzed and adding a marker to said first blood sample to create a labelled sample, wherein the marker is suitable for discrimination of a sample from the recipient and providing second blood sample obtained from said donor/recipient pair to create a non-labelled sample,diluting both samples with a first medium, and separating cellular parts of both samples from the liquid phase,c) performing respective separated reuptake of the cellular parts of both samples in a second medium,d) mixing a portion of the non-labelled sample and a portion of the labelled sample, to create a mixture,e) stimulating antigen presenting cells (APC) in the mixture step d) by adding anti-CD28-antibodies or anti-CD28-antibodies and anti-CD49d-antibodies,f) incubating the mixture of step e) for 1.5 to 2.5 hrs, at a temperature of 35-39° C.,g) adding a secretion inhibitor to the mixture of step f),h) mixing of the sample,i) incubating the mixture of step h) for a period of at least 2.5 hrs at a temperature of 35-39°,j)detecting, using flow cytometry, CD4 or CD8 lymphocytes, andl) detecting, using flow cytometry, lymphocytes activated by a intracellular cytokine, and lymphocytes expressing an activation marker,wherein allo-reactivity is detected between the individual from which the labelled sample was obtained and the individual from which the non-labelled sample was obtained, if in the flow cytometric detection the following results occur: 1) marking pos/CD4 pos/CD69 pos/IFNγ pos,2) marking neg/CD4 pos/CD69 pos/IFNγ pos,3) marking pos/CD8 pos/CD69 pos/IFNγ pos, or4) marking pos/CD8 pos/CD69 pos/IFNγ pos.
동종반응성 T 세포의 유세포 검출을 이용하여 공여체와 수용체 사이의 호환성을 결정하는 방법다음 단계를 포함하는 동종 반응성 T 세포의 유세포 분석 검출에 의한 기증자와 수용자 사이의 적합성을 결정하는 방법으로서, a) 분석할 기증자/수혜자 쌍으로부터 채취한 혈액 시료에 마커 추가(이하 표지 시료라고 함, 마커는 수혜자 시료 식별에 적합) 분석할 기증자/수혜자 쌍으로부터 얻은 다른 혈액 샘플은 다음의 비표지 샘플에서 호출하는 단계, b) 두 샘플을 첫 번째 배지로 1회 이상 희석하여 액체 상태에서 샘플의 세포 부분을 분리하는 단계, c) 제2 배지에서 표지된 샘플의 혈액 샘플 잔류물, 비표지된 샘플의 혈액 샘플 잔류물의 세포 부분, 특히 동일한 부피의 각각의 분리된 재흡수하는 단계; d) 비표지 시료의 일부와 표지 시료의 일부를 혼합물의 보존 하에 특히 약 1:1의 비율로 혼합하는 단계,e) 다음 혼합물에서 항원 제시 세포(APC)의 자극 항-CD28- 항체 또는 항-CD28- 항체 및 항-CD49d-항체를 첨가한 후, 제1항의 단계 d)에 따른 표지 및 비표지 샘플링 하는 단계 f) 35-39℃, 바람직하게는 37℃의 온도에서 1.5시간 내지 2.5시간, 바람직하게는 2시간 동안 선택적으로 보호 분위기, CO2 분위기 하에 혼합물의 제1 인큐베이션하는 단계 g) 첨가 분비 억제제의 h) 제1항의 단계 d)의 샘플의 혼합하는 단계, i) 35-39℃, 바람직하게는 37℃의 온도에서 2.5시간 이상의 기간 동안 보호 대기, CO2 대기 하에서 선택 사항으로 두 번째 인큐베이션 하는 단계,j) 필요한 경우 적혈구 용해하는 단계,k) CD4 또는 CD8 림프구의 표시 및 유세포 분석 검출에 의한 림프구의 유세포 분석 검출 표지된 항-CD4 및/또는 항-CD8 항체l) 세포내 사이토카인에 의해 활성화된 림프구, 활성화된 림프구 및 활성화 마커를 발현하는 림프구의 유세포 분석 검출하는 단계, m) 개체 간에 존재하는 동종 반응성을 검출하는 단계, 여기서 유세포 분석에서 다음 결과가 발생하는 경우 레이블이 지정된 샘플과 레이블이 지정되지 않은 샘플을 얻은 샘플은: a. 마킹 pos/CD4 pos/CD69 pos/INFgamma pos,b. 마킹 네거티브/CD4 pos/CD69 pos/INFgamma pos,c. 마킹 pos/CD8 pos/CD69 pos/INFgamma pos,d. 마킹 pos/CD8 pos/CD69 pos/INFgamma인 것을 특징으로 한다.다음 단계를 포함하는 동종 반응성 T 세포의 유세포 분석 검출에 의해 기증자와 수용자 사이의 적합성을 결정하는 방법으로서, a) 분석할 기증자/수혜자 쌍으로부터 얻은 첫 번째 혈액 샘플을 제공하고 표지된 샘플을 생성하기 위해 상기 첫 번째 혈액 샘플에 마커를 추가하는 단계, -여기서 마커는 비표지 샘플을 생성하기 위해 수용자로부터의 샘플을 식별하고 상기 기증자/수혜자 쌍으로부터 얻은 두 번째 혈액 샘플을 제공하는 데 적합함-, b)두 샘플을 첫 번째 배지로 희석하고 두 샘플의 세포 부분을 액상에서 분리하는 단계,c) 두 번째 배지에서 두 샘플의 세포 부분 각각의 분리된 재흡수를 수행하는 단계, d)표지되지 않은 샘플의 일부와 표지된 샘플의 일부를 혼합하여 혼합물을 생성하는 단계,e)항-CD28-항체 또는 항-CD28-항체 및 항-CD49d-항체를 첨가함으로써 혼합물 단계 d)에서 항원 제시 세포(APC)를 자극하는 단계,f) 35-39℃의 온도에서 1.5 내지 2.5시간 동안 단계 e)의 혼합물을 인큐베이션하는 단계, g) 단계 f)의 혼합물에 분비 억제제를 첨가하는 단계, h) 샘플을 혼합하는 단계, i) 혼합물을 인큐베이션하는 단계 단계 h) 35-39°의 온도에서 적어도 2.5시간 동안, j) 유세포 분석을 사용하여 CD4 또는 CD8 림프구를 검출하는 단계, 및 l) 유세포 분석을 사용하여, 세포내 사이토카인에 의해 활성화된 림프구, 및 활성화 마커를 발현하는 림프구를 검출하는 단계로서, 여기서 동종 반응성은 표지된 샘플을 얻은 개체와 비표지된 샘플이 제공된 개체 사이에서 검출됨 유세포 분석 검출에서 다음 결과가 발생하는 경우 획득하는 것으로, 상기 결과는 1) pos/CD4 pos/CD69 pos/IFNγ pos 표시,2) neg/CD4 pos/CD69 pos/IFNγ pos 표시,3) pos/CD8 pos/CD69 표시 pos/IFNγ pos, 또는4) pos/CD8 pos/CD69 pos/IFNγ pos를 표시하는 것을 특징으로 하는 방법.