USE OF LENTIVIRAL VECTORS EXPRESSING FACTOR VIIIThe present disclosure provides lentiviral vectors comprising codon optimized Factor VIII sequences, and methods of using such lentiviral vectors. The liver-targeted lentiviral vectors disclosed herein can be used for gene therapy, wherein the lentiviral gene delivery enables stable integration of the transgene expression cassette into the genome of targeted cells (e.g., hepatocytes) of pediatric (e.g., neonatal) or adult subjects, achieving an improvement in FVIII expression (for example, a 100-fold improvement) at low lentiviral vector doses (e.g., 5x1010 or lower, such as 1.5x109 or lower, or 1x108 TU/kg or lower). The present disclosure also provides methods of treating bleeding disorders such as hemophilia (e.g., hemophilia A) comprising administering to a subject in need thereof a liver-targeted lentiviral vector comprising a codon optimized Factor VIII nucleic acid sequence at low dosages (1x108 TU/kg or lower to 1.5x1010 TU/kg).A method of treating a bleeding disorder in a subject in need thereof comprising administering to the subject at least one dose of 5x1010 or less transducing units/kg (TU/kg) of a lentiviral vector comprising an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide with FVIII activity, wherein the nucleotide sequence has:(i) at least 91 %, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 1 ;(ii) at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 2;(iii) at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91 %, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 70;(iv) at least 85%, at least 86%, at least 87%, at least 88%, at least 89%, at least 90%, at least 91 %, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 71 ;(v) at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 3;(vi) at least about 91 %, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 4;(vii) at least 89%, at least 90%, at least 91 %, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 5;(viii) at least 89%, at least 90%, at least 91 %, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity to nucleotides 58-2277 and 2320-4374 of SEQ ID NO: 6; or(ix) or any combination of (i) to (viii).
인자 VIII을 발현하는 렌티바이러스 벡터의 용도본 발명은 코돈 최적화된 인자 VIII 서열을 포함하는 렌티바이러스 벡터 및 이러한 렌티바이러스 벡터의 사용 방법을 제공한다. 본원에 개시된 간-표적화 렌티바이러스 벡터는 유전자 요법에 사용될 수 있으며, 여기서, 렌티바이러스 유전자 전달은 트랜스진 발현 카세트가 소아(예를 들어, 신생아) 또는 성인 대상체의 표적화된 세포(예를 들어, 간세포)의 게놈 내로 안정적으로 통합되게 하여, 낮은 렌티바이러스 벡터 용량(예를 들어, 5x1010 TU/kg 이하, 예컨대 1.5x109 TU/kg 이하 또는 1x108 TU/kg 이하)에서 FVIII 발현을 향상시키는 것이 가능하다(예를 들어, 100배 향상). 본 발명은 또한 혈우병(예를 들어, 혈우병 A)과 같은 출혈 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 낮은 투여량(1x108 TU/kg 이하~1.5x1010 TU/kg)으로 코돈 최적화 인자 VIII 핵산 서열을 포함하는 간-표적화 렌티바이러스 벡터를 투여하는 단계를 포함한다. 출혈 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 출혈 장애를 치료하는 방법으로서, FVIII 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자를 포함하는 렌티바이러스 벡터의 5X1010 TU/kg(형질도입 단위/kg) 이하의 적어도 1회 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 뉴클레오티드 서열은 다음의 서열 동일성을 갖는, 방법: (i) 서열 번호 1의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 91%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(ii) 서열 번호 2의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(iii) 서열 번호 70의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(iv) 서열 번호 71의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(v) 서열 번호 3의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(vi) 서열 번호 4의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(vii) 서열 번호 5의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성;(viii) 서열 번호 6의 뉴클레오티드 58~2277 및 2320~4374에 대하여 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성; 또는(ix) 또는 (i) 내지 (viii)의 임의의 조합.