SINGLE CHAIN VARIABLE FRAGMENT CD3 BINDING PROTEINSDisclosed herein are single chain variable fragment CD3 binding proteins with improved binding affinities, and robust aggregation profiles. Also described are multispecific binding proteins comprising a single chain variable fragment CD3 binding protein according to the instant disclosure. Pharmaceutical compositions comprising the binding proteins disclosed herein and methods of using such formulations are provided.A single chain variable fragment CD3 binding protein, comprising a variable heavy chain region (VH), a variable light chain region (VL), and a linker, wherein VH comprises complementarity determining regions HC CDRl, HC CDR2, and HC CDR3, wherein VL comprises complementarity determining regions LC CDRl, LC CDR2, and LC CDR3, wherein(a) the amino acid sequence of HC CDRl is as set forth in GXiX2X3NX4YX5X6N (SEQ ID NO. 2), Xi is phenylalanine or asparagine, X2 is threonine, glutamic acid or methionine, X3 is phenylalanine or tyrosine, X4 is lysine, threonine, glycine, asparagine or glutamic acid, X5 is alanine or proline, X6 is methionine, leucine, valine or isoleucine;(b) the amino acid sequence of HC CDR2 is as set forth inRIRSX7X8NX9YXioTXiiYXi2DXi3VK (SEQ ID NO. 3), X7 is lysine or glycine, X8 is tyrosine or serine, X9 is asparagine or lysine, X10 is alanine or glutamic acid, Xu is tyrosine or glutamic acid, X12 is alanine or lysine, X13 is serine, glutamic acid, aspartic acid, alanine, or glutamine;(c) the amino acid sequence of HC CDR3 is as set forth in HX14NFX15Xi6SXi7ISYWAXi8 (SEQ ID NO. 4), X14 is glycine, alanine, or threonine, Xi5 is glycine or asparagine, X16 is asparagine or aspartic acid, X17 is tyrosine, histidine, proline, glutamine, leucine or glycine, X18 is tyrosine or threonine;(d) the amino acid sequence of LC CDRlis as set forth inXi9X2oX2iX22GX23VX24X25GX26YPN (SEQ ID NO. 5), X19 is glycine or alanine, X20 is serine or glutamic acid, X21 is serine or tyrosine, X22 is threonine, phenylalanine, lysine, or serine, X23 is alanine or tyrosine, X24 is threonine or valine, X25 is serine, aspartic acid, lysine, histidine or valine, X26 asparagine or tyrosine;(e) the amino acid sequence of LC CDR2is as set forth in GX27X28X29X30X3iP (SEQ ID NO. 6), X27 is threonine or isoleucine, X28 is lysine, glutamic acid, tyrosine, asparagine or serine, X29 is phenylalanine, leucine, glutamic acid, isoleucine, methionine, or valine, X3o is leucine, asparagine, or glycine, X31 is alanine or valine; and (f) the amino acid sequence of LC CDR3is as set forth in X32LWYX33NX34WX35 (SEQ ID NO. 7), X32 is valine, threonine or alanine, X33 is serine, aspartic acid or alanine, X34 is arginine or serine, X35 is valine, isoleucine or alanine,wherein Xi, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, Xn, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, Xi9, X20, X21, X22, X23, X24, X25, X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34 and X35 are not simultaneously phenylalanine, threonine, phenylalanine, lysine, alanine, methionine, lysine, tyrosine, asparagine, alanine, tyrosine, alanine, serine, glycine, glycine, asparagine, tyrosine, tyrosine, glycine, serine, serine, threonine, alanine, threonine, serine, asparagine, threonine, lysine, phenylalanine, leucine, alanine, valine, serine, arginine, and valine respectively.
단일 쇄 가변 단편 CD3 결합 단백질본원은 개선된 결합 친화성 및 강력한 응집 프로파일을 가진 단일 쇄 가변 단편 CD3 단백질을 개시한다. 본 개시에 따른 단일 쇄 가변 단편 CD3 결합 단백질을 포함하는 다중특이적 결합 단백질도 기재된다. 본원에 개시된 결합 단백질을 포함하는 약학 조성물 및 이러한 제형을 사용하는 방법이 제공된다.상보성 결정 영역 HC CDR1, HC CDR2 및 HC CDR3을 포함하는 가변 중쇄 영역(VH), 상보성 결정 영역 LC CDR1, LC CDR2 및 LC CDR3을 포함하는 가변 경쇄 영역(VL), 및 링커를 포함하는 단일 쇄 가변 단편 CD3 결합 단백질로서, (a) HC CDR1의 아미노산 서열이 GX1X2X3NX4YX5X6N(서열번호 2)으로 기재된 바와 같고, X1이 페닐알라닌 또는 아스파라긴이고, X2가 쓰레오닌, 글루탐산 또는 메티오닌이고, X3이 페닐알라닌 또는 티로신이고, X4가 라이신, 쓰레오닌, 글리신, 아스파라긴 또는 글루탐산이고, X5가 알라닌 또는 프롤린이고, X6이 메티오닌, 류신, 발린 또는 이소류신이고; (b) HC CDR2의 아미노산 서열이 RIRSX7X8NX9YX10TX11YX12DX13VK(서열번호 3)로 기재된 바와 같고, X7이 라이신 또는 글리신이고, X8이 티로신 또는 세린이고, X9가 아스파라긴 또는 라이신이고, X10이 알라닌 또는 글루탐산이고, X11이 티로신 또는 글루탐산이고, X12가 알라닌 또는 라이신이고, X13이 세린, 글루탐산, 아스파르트산, 알라닌 또는 글루타민이고; (c) HC CDR3의 아미노산 서열이 HX14NFX15X16SX17ISYWAX18(서열번호 4)로 기재된 바와 같고, X14가 글리신, 알라닌 또는 쓰레오닌이고, X15가 글리신 또는 아스파라긴이고, X16이 아스파라긴 또는 아스파르트산이고, X17이 티로신, 히스티딘, 프롤린, 글루타민, 류신 또는 글리신이고, X18이 티로신 또는 쓰레오닌이고; (d) LC CDR1의 아미노산 서열이 X19X20X21X22GX23VX24X25GX26YPN(서열번호 5)으로 기재된 바와 같고, X19가 글리신 또는 알라닌이고, X20이 세린 또는 글루탐산이고, X21이 세린 또는 티로신이고, X22가 쓰레오닌, 페닐알라닌, 라이신 또는 세린이고, X23이 알라닌 또는 티로신이고, X24가 쓰레오닌 또는 발린이고, X25가 세린, 아스파르트산, 라이신, 히스티딘 또는 발린이고, X26이 아스파라긴 또는 티로신이고; (e) LC CDR2의 아미노산 서열이 GX27X28X29X30X31P(서열번호 6)로 기재된 바와 같고, X27이 쓰레오닌 또는 이소류신이고, X28이 라이신, 글루탐산, 티로신, 아스파라긴 또는 세린이고, X29가 페닐알라닌, 류신, 글루탐산, 이소류신, 메티오닌 또는 발린이고, X30이 류신, 아스파라긴 또는 글리신이고, X31이 알라닌 또는 발린이고; (f) LC CDR3의 아미노산 서열이 X32LWYX33NX34WX35(서열번호 7)로 기재된 바와 같고, X32가 발린, 쓰레오닌 또는 알라닌이고, X33이 세린, 아스파르트산 또는 알라닌이고, X34가 아르기닌 또는 세린이고, X35가 발린, 이소류신 또는 알라닌이고, X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22, X23, X24, X25, X26, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34 및 X35가 동시에 각각 페닐알라닌, 쓰레오닌, 페닐알라닌, 라이신, 알라닌, 메티오닌, 라이신, 티로신, 아스파라긴, 알라닌, 티로신, 알라닌, 세린, 글리신, 글리신, 아스파라긴, 티로신, 티로신, 글리신, 세린, 세린, 쓰레오닌, 알라닌, 쓰레오닌, 세린, 아스파라긴, 쓰레오닌, 라이신, 페닐알라닌, 류신, 알라닌, 발린, 세린, 아르기닌 및 발린이 아닌 것인 단일 쇄 가변 단편 CD3 결합 단백질.