Dual targetingThe present invention relates to antibody-based dual targeting molecules, and to methods for generating such dual targeting molecules, including a library-based approach.1., for generation of a method for bi-specific antibody or its functional pair of specific fragment, comprise step:(A) qualification has antibody or its function fragment of binding specificity to the first object target, comprise step: by (i) set according to claim 10 to the antibody according to any one of 19 or its function fragment, or the set of (ii) antibody or its function fragment, wherein said set comprises the diverse collection of antibody variable territory sequence, wherein said antibody variable territory sequence comprises the combination of VL structural domain and VH structural domainA. wherein said VL structural domain be based on be selected from SEQ-ID NOs:1,3, the framework of 5 and 7, wherein said VL structural domain according to SEQ-ID NOs:8,12,18,19, in 27 or 28 any one, especially SEQ-ID NOs:8,12, in 18 or 19 any one or the diversity schemes variation shown in any one of SEQ-ID NOs 27 or 28, andB. wherein said VH structural domain be based on be selected from SEQ-ID NOs:2,4 and 6 framework, wherein said VH structural domain according to SEQ-ID NOs:9,13, the diversity schemes variation shown in 20 or 21 any one;Especially, be selected from the following antibody of any one set or the set of its function fragment: Lib3-L, Lib4-L, Lib4-LE and Lib5-L,Contact with described first object target and screen or select to have described first object target antibody or its function fragment of binding specificity; With(B) qualification has antibody or its function fragment of binding specificity to the first object target, comprise step: by (i) antibody according to any one of claim 2 to 9 or the set of its function fragment, or the set of (ii) antibody or its function fragment, wherein said set comprises the diverse collection of antibody variable territory sequence, wherein said antibody variable territory sequence comprises the combination of VL structural domain and VH structural domainA. wherein said VL structural domain be based on be selected from SEQ-ID NOs:1,3, the framework of 5 and 7, wherein said VL structural domain according to SEQ-ID NOs:10,14,16,22, in 23 or 29 any one, especially SEQ-ID NOs:10,14,16, in 22 or 23 any one or the diversity schemes variation shown in SEQ-ID NO:29, andB. wherein said VH structural domain be based on be selected from SEQ-ID NOs:2,4 and 6 framework, wherein said VH structural domain according to SEQ-ID NOs:11,15,17,24, the diversity schemes variation shown in 25 or 26 any one;Especially, be selected from the following antibody of any one set or the set of its function fragment: Lib3-H, Lib4-H, Lib4-HE_ini and Lib4-HE,Contact with described second object target and screen or select to have described second object target antibody or its function fragment of binding specificity; And(C) complementary bit combinations that paratope that will be special to the epi-position on described first target of one of the antibody of qualification in step (A) is special with the epi-position on described second target to one of the antibody identified in step (B),But condition gets rid of from the paratope in the antibody of the set according to claim 20c or its function fragment and the combination from the paratope in the antibody of the set according to claim 22c or its function fragment.
이중 표적화본 발명은 항원-기반 이중 표적화 분자, 및 라이브러리-기반 접근법을 포함하는 이러한 이중 표적화 분자의 생성 방법에 관한 것이다.하기 단계를 포함하는, 2-특이적 항체 또는 이의 기능적 2-특이적 단편의 생성 방법: (A) (i) 제 10 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션, 또는 (ii) 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션 (상기 콜렉션은 항체 가변 도메인 서열의 다양한 콜렉션을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인 서열은 VL 도메인 및 VH 도메인의 조합을 포함함), a. 상기 VL 도메인은 SEQ-ID NO: 1, 3, 5, 및 7 로부터 선택되는 프레임워크에 기반하고, 상기 VL 도메인은 SEQ-ID NO: 8, 12, 18, 19, 27 또는 28 중 임의의 하나; 특히 SEQ-ID NO: 8, 12, 18, 또는 19 중 임의의 하나, 또는 SEQ-ID NO 27 또는 28 중 임의의 하나에 제시된 다양화 도식에 따라 다양화되고, b. 상기 VH 도메인은 SEQ-ID NO: 2, 4 및 6 으로부터 선택되는 프레임워크에 기반하고, 상기 VH 도메인은 SEQ-ID NO: 9, 13, 20 또는 21 중 임의의 하나에 제시된 다양화 도식에 따라 다양화됨;특히 하기 콜렉션: Lib3-L, Lib4-L, Lib4-LE, 및 Lib5-L 중 임의의 하나로부터 선택되는 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션을,상기 관심의 첫번째 표적과 접촉시키고, 상기 관심의 첫번째 표적에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 이의 기능적 단편을 스크리닝하거나 선택하는 단계를 포함하는, 관심의 첫번째 표적에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 이의 기능적 단편을 확인하는 단계; 및(B) (i) 제 2 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션, 또는 (ii) 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션 (상기 콜렉션은 항체 가변 도메인 서열의 다양한 콜렉션을 포함하고, 상기 항체 가변 도메인 서열은 VL 도메인 및 VH 도메인의 조합을 포함함), a. 상기 VL 도메인은 SEQ-ID NO: 1, 3, 5, 및 7 로부터 선택되는 프레임워크에 기반하고, 상기 VL 도메인은 SEQ-ID NO: 10, 14, 16, 22, 23 또는 29 중 임의의 하나; 특히 SEQ-ID NO: 10, 14, 16, 22, 또는 23 중 임의의 하나, 또는 SEQ-ID NO 29 에 제시된 다양화 도식에 따라 다양화되고, b. 상기 VH 도메인은 SEQ-ID NO: 2, 4 및 6 으로부터 선택되는 프레임워크에 기반하고, 상기 VH 도메인은 SEQ-ID NO: 11, 15, 17, 24, 25 또는 26 중 임의의 하나에 제시된 다양화 도식에 따라 다양화됨;특히 하기 콜렉션: Lib3-H, Lib4-H, Lib4-HE_ini, 및 Lib4-HE 중 임의의 하나로부터 선택되는 항체 또는 이의 기능적 단편의 콜렉션을,상기 관심의 두번째 표적과 접촉시키고, 상기 관심의 두번째 표적에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 이의 기능적 단편을 스크리닝하거나 선택하는 단계를 포함하는, 관심의 첫번째 표적에 대해 결합 특이성을 갖는 항체 또는 이의 기능적 단편을 확인하는 단계; 및(C) 단계 (A) 에서 확인된 항체 중 하나의 상기 첫번째 표적 상의 에피토프에 특이적인 파라토프를 단계 (B) 에서 확인된 항체 중 하나의 상기 두번째 표적 상의 에피토프에 특이적인 파라토프와 조합하는 단계, 단, 그러나, 제 20 항 c 에 따른 콜렉션으로부터의 항체 또는 이의 기능적 단편으로부터의 파라토프와 제 22 항 c 에 따른 콜렉션으로부터의 항체 또는 이의 기능적 단편으로부터의 파라토프와의 조합은 배제됨.