APPARATUS FOR AUTO-PRETREATING SUGAR CHAINTo provide an autoanalyzer for analyzing a sugar chain contained in a biological sample, in particular, serum. Namely, it is intended to provide a method of analyzing a sugar chain in a sample, which comprises the following steps: A) the sugar chain-releasing step of releasing the sugar chain in the sample; B) the detection sample-preparing step of preparing the released sugar chain for detection; and, in the case of conducting mass spectrometry using a plate, C) the step of forming a plate for the mass spectrometry having the captured sugar chain dotted thereon which comprises the step of providing the tagged sugar chain sample solution obtained in the step B) on a collection plate; and, if required, the step of conducting an operation in a solid phase support-enclosed plate to form the plate for mass spectrometry; and D) the step of analyzing the sugar chain to be assayed.A method for analyzing a sugar chain in a sample, the method comprising the following steps: A) a sugar chain releasing step of releasing a sugar chain in a sample, the step comprising the following steps: A-1) a step of providing the sample on a plate for reaction; A-2) a step of adding a solubilizing agent to the sample to thereby place the sample under a reaction condition; A-3) a step of adding a reducing agent to the sample to thereby place the sample under a reaction condition; A-4) a step of adding an -SH protecting agent to the sample to thereby place the sample under a reaction condition; A-5) a step of adding a proteolytic enzyme to the sample to thereby place the sample under a reaction condition; A-6) a step of deactivating the proteolytic enzyme; and A-7) a step of adding a sugar chain releasing enzyme to the sample to thereby release the sugar chain; B) a detection sample preparing step of preparing the released sugar chain for use in detection, the step comprising the following steps: B-1) a step of contacting the sample prepared in the step (A) with a sugar chain-capturing bead to thereby place the sample under the conditions allowing the released sugar chain in the sample to bind to the bead, and thus producing a captured sugar chain sample; B-2) a step of adding a protein denaturing agent to the captured sugar chain sample to thereby place the captured sugar chain sample under a reaction condition; B-3) a step of washing the captured sugar chain sample, and then discarding the residual washing liquid by suction; B-4) a step of adding a salt releasing agent for the sugar chain capturing agent on beads to the captured sugar chain sample, and then discarding the salt releasing agent by suction; B-5) a step of adding a protective agent to the captured sugar chain sample to thereby place the captured sugar chain under a reaction condition; B-6) a step of adding an acid to the captured sugar chain sample, and discarding the acid by suction; B-7) a step of adding an organic reaction solvent to the captured sugar chain sample; B-8) a step of removing the solvent and the moisture in the bead; B-9) a step of adding an alkyl esterifying agent to the captured sugar chain sample to thereby place the captured sugar chain sample under a reaction condition, and alkylating the carboxylic acid of sialic acid; B-10) a step of adding the organic reaction solvent to the captured sugar chain sample, and discarding the organic reaction solvent by suction; B-11) a step of washing the captured sugar chain sample, and subsequently discarding the residual washing liquid by suction; B-12) a step of releasing a sugar chain sample from the captured sugar chain sample, wherein when an analysis requiring tagging is conducted, the sugar chain in the captured sugar chain sample is tagged with a labeling reagent and is released from the bead; and B-13) a step of dissolving the released sugar chain sample to produce a sugar chain sample solution; C) when performing mass spectrometry using a plate, a step of producing a plate for mass spectrometry having the captured sugar chain dotted thereon, the step comprising: C-1) a step of disposing the tagged sugar chain sample solution obtained in the step (B) on a plate for recovery; and, the step optionally comprising the steps (C-2) to (C-6): C-2) a step of disposing the tagged sugar chain sample solution from the plate for recovery and the organic solvent, on a plate for mixing so as to obtain a concentration at which the sugar chain adsorbs to a solid phase; C-3) a step of providing a solid phase carrier-enclosed plate; C-4) a step of activating the solid phase carrier-enclosed plate according to the phase of the solid phase carrier-enclosed plate, and washing the solid phase carrier-enclosed plate; C-5) a step of adding the tagged sugar chain sample solution to the solid phase carrier-enclosed plate, and conditioning the tagged sugar chain sample solution to a solvent having a polarity appropriate for the phase of the solid phase carrier-enclosed plate; C-6) a step of recovering the tagged sugar chain sample solution by suction from the solid phase carrier-enclosed plate to a second plate for recovery; and when subjecting the tagged sugar chain sample solution to MALDI-TOF MS, comprising the following step (C-7): C-7) a step of mixing the tagged sugar chain sample solution with a matrix for mass spectrometry, and dotting the mixture on a plate for determination; and D) a step of conducting an analysis of the sugar chain to be determined.
당쇄 자동 전처리 장치본 발명은 생체 샘플(시료), 특히 혈청 안에 포함되는 당쇄를 분석하기 위한 자동 분석 장치를 제공하는 것으로, 시료 중의 당쇄를 분석하는 방법을 제공한다. 이 방법은 아래의 공정: A) 시료 중의 당쇄를 유리시키는 당쇄 유리 공정; B) 상기 유리된 당쇄를 검출용으로 제조하는 검출 시료 제조 공정; 플레이트에 의한 질량분석을 실시하는 경우, 아래의 C 공정, C) 상기 포착 당쇄 시료가 점착된 질량분석용 플레이트를 생성하는 공정으로서; B 공정에서 얻어진 태그화 당쇄 시료 용액을 회수용 플레이트에 배치하는 공정; 그리고 필요에 따라 고체상 담체 밀봉 플레이트에서의 작업을 실시하여, 질량분석용 플레이트를 생성하는 공정; 및 D) 측정될 당쇄의 분석을 실행하는 공정을 포함한다.샘플 중의 당쇄 분석 방법으로서, 하기의 공정: A) 샘플 중의 당쇄를 유리시키는 당쇄 유리 공정으로서, 아래의 공정: A-1) 샘플을 반응용 플레이트에 제공하는 공정; A-2) 가용화제를 상기 샘플에 첨가하고, 상기 샘플을 반응 조건하에 두는 공정; A-3) 환원제를 상기 샘플에 첨가하고, 상기 샘플을 반응 조건하에 두는 공정; A-4) -SH 보호제를 상기 샘플에 첨가하고, 상기 샘플을 반응 조건하에 두는 공정; A-5) 단백질 분해 효소를 상기 샘플에 첨가하고, 반응 조건하에 두는 공정; A-6) 상기 단백질 분해 효소를 불활성화시키는 공정; 및 A-7) 당쇄 유리 효소를 상기 샘플에 더하여, 당쇄를 유리시키는 공정; 을 포함하는 당쇄 유리 공정;B) 상기 유리된 당쇄를 검출용으로 제조하는 검출 샘플 제조 공정으로서, 아래의 공정: B-1) A)공정에서 제조한 샘플을 당쇄 포착 비즈와 접촉시켜서 상기 샘플 중의 유리 당쇄와 상기 비즈가 결합하는 조건하에 놓고 포착 당쇄 시료를 생성하는 공정; B-2) 단백질 변성제를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 상기 포착 당쇄 시료를 반응 조건하에 두는 공정; B-3) 상기 포착 당쇄 시료를 세정하고, 그 후 세정 잔액을 흡인에 의해 폐기하는 공정; B-4) 비즈 위의 당쇄 포착제의 염 유리제를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 그 후 상기 염 유리제를 흡인에 의해 폐기하는 공정; B-5) 보호화제를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 상기 포착 당쇄 시료를 반응 조건하에 두는 공정; B-6) 산을 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 상기 산을 흡인에 의해 폐기하는 공정; B-7) 반응 유기 용매를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하는 공정; B-8) 상기 비즈의 수분 및 용매를 제거하는 공정; B-9) 알킬에스테르화제를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 상기 포착 당쇄 시료를 반응 조건하에 두고, 시알산의 카르복실산을 알킬화하는 공정; B-10) 상기 반응 유기 용매를 상기 포착 당쇄 시료에 첨가하고, 상기 반응 유기 용매를 흡인에 의해 폐기하는 공정; B-11) 상기 포착 당쇄 시료를 세정하고, 그 후 세정 잔액을 흡인에 의해 폐기하는 공정; B-12) 상기 포착 당쇄 시료로부터 당쇄 시료를 유리시키는 공정으로서, 여기서 태그화가 필요한 분석을 하는 경우, 상기 포착 당쇄 시료 중의 당쇄를 표지 시약에 의해 태그화하고, 비즈로부터 유리시키는 공정; B-13) 상기 유리된 당쇄 시료를 용해하여 당쇄 시료 용액을 생성하는 공정; 을 포함하는 검출 샘플 제조 공정; C) 플레이트에 의한 질량분석을 하는 경우, 상기 포착 당쇄 시료가 점착된 질량분석용 플레이트를 생성하는 공정으로서, C-1) B)공정에서 얻어진 태그화 당쇄 시료 용액을 회수용 플레이트에 배치하는 공정; 그리고 필요에 따라 C-2) 내지 C-6)의 공정을 실시하고, C-2) 유기 용매를 당쇄가 고체상에 흡착하는 농도가 되도록, 상기 회수용 플레이트로부터 상기 태그화 당쇄 시료 용액 및 상기 유기 용매를 혼합용 플레이트에 배치하는 공정; C-3) 고체상 담체 밀봉 플레이트를 제공하는 공정; C-4) 상기 고체상 담체 밀봉 플레이트의 상에 따라서 상기 고체상 담체 밀봉 플레이트를 활성화하고 세정하는 공정; C-5) 상기 고체상 담체 밀봉 플레이트에 상기 태그화 당쇄 시료 용액을 첨가하고, 상기 고체상 담체 밀봉 플레이트의 상에 따른 극성을 가지는 용매로 순화시키는 공정; C-6) 상기 고체상 담체 밀봉 플레이트로부터 제2회수용 플레이트로 상기 태그화 당쇄 시료 용액을 흡인에 의해 회수하는 공정; 상기 태그화 당쇄 시료 용액을 MALDI-TOF MS에 제공하는 경우, 아래의 C-7)을 실시하여, C-7) 상기 태그화 당쇄 시료 용액을 질량분석용 매트릭스와 혼합하고 측정용 플레이트에 점착시키는 공정; 을 포함하는 질량분석용 플레이트를 생성하는 공정; 그리고D) 측정될 당쇄의 분석을 실행하는 공정; 을 포함하는 방법.