Cystine knot scaffold platformProvided are non-naturally occurring cystine knot peptides (CKPs) that bind to VEGF-A. Additionally, provided are methods of using non-naturally occurring CKPs that bind to VEGF-A, including diagnostic and therapeutic compositions and methods. Non-naturally CKPs that bind low density lipoprotein receptor-related protein 6 (LRP6) are also provided.One kind combines the non-naturally occurring cystine knot peptide (ckp) of vascular endothelial growth factor a (vegf-a), wherein described ckp includes cystine supporting structure：z1c1l1c2l2c3l3c4l4c5l5c6z2wherein：z1and z2it is arbitrary amino acid；l1 is ring 1 and has the structure selected from the group consisted of：x1x2x3x4x5x6(seq id no:2)、 x1x2x3x4x5x6x7(seq id no:3)、x1x2x3x4x5x6x7x8(seq id no:4)、x1x2x3x4x5x6x7x8x9(seq id no:and x 5)1x2x3x4x5x6x7x8x9x10(seq id no:6), wherein x1-x10in each be arbitrary amino acid；l2 is ring 2 and has structure：x1x2x3x4x5(seq id no:7), wherein x1–x5in each be arbitrary amino acid or alpha-non-natural amino acid；l3 is ring 3 and has structure：x1x2x3, wherein x1–x3in each be arbitrary amino acid or alpha-non-natural amino acid；l4 is ring 4 and has structure：x1, wherein x1it is arbitrary amino acid or alpha-non-natural amino acid；l5 is ring 5 and has structure：x1x2x3x4x5(seq id no:7), wherein x1–x5in each be arbitrary amino acid or alpha-non-natural amino acid；wherein described alpha-non-natural amino acid is selected from the group consisted of：l- propargylglycines-peg6-, l- sulfo groups tyrosine, l- nor-leucines, l-1- naphthylalanines, l-2- naphthylalanines, l-2- chloros tryptophan, l-3- fluorotyrosines, l-4- fluorine phenylalanine, γ-benzyl-l-proline, γ-(the fluoro- benzyls of 4-)-l-proline, 4-oh-l- proline, the fluoro- l- dried meat ammonia of 4- acid, 4- [4- (trifluoromethyl)-benzyl]-l-proline, bis- fluoro- l-phenylalanines of 3,4-, 3,4- dichloro-l-phenylalanines, 4- chloro- l-phenylalanine, 3-f, 4-cl-l- phenylalanines, 2- pyridones (nh contrapositions)-l-alanine, pyridone (nh metas)-l- alanine, 3- (1-n- methyl indols)-l-alanine, 3- (1-n- ethylindoles)-l-alanine, 3- (1-n- isopropyls yin diindyl)-l-alanine, 3- (5- azepines-indoles)-l-alanine, 4- methyl l-phenylalanines, 2- naphthyls-l-alanine, l-4, 4 '-biphenyl alanine, 3- (3- quinolyls)-l-alanine, 3- (2- quinolyls)-l-alanine, 3- (2- quinoxalinyls)-l- alanine, 4- methyl -2- pyridine radicals-alanine, 4- ethyls -2- pyridine radicals-l-alanine, benzothiazole-l-alanine, benzo thiophene-l-alanine, 3- isoquinolyls-l-alanine, the tert-butyl group-l-alanine (also referred to as l- neopentyls glycine), 3- rings butyl-l-alanine, cyclopenta-l-alanine, tri- fluoro- l-leus of 5,5,5-, the tert-butyl group-l- glycine (also referred to as l- tert-s leucine), l- cyclopentylglycines, l- cyclobutyl glycine, 3,4- dihydroxy-l-phenylalanines, the fluoro- l-phenylalanines of 3,4-, 3- fluorine, the chloro- l-tyrosine of 4-oh-l- phenylalanines, 2-, 2- methyl-l-tyrosines, 2- ethyls-l-tyrosine, 4- (naphthalene -1- phenol)-l-alanine, d-ser, l- β-homoserine, l- beta-alanines, n- alpha-methyls glycine, glycine amide, glycerine glycinate, ethylene glycol glycinate, oxetanes -3- bases glycinate and glycine morpholino amide；wherein described ckp is with 500pm or more preferably affinity combination vegf-a.
시스틴 노트 스캐폴드 플랫폼VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)이 제공된다. 추가로, 진단 및 치료 조성물 및 방법을 포함하여 VEGF-A에 결합하는 비-자연 발생 CKP을 사용하는 방법이 제공된다. 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 6 (LRP6)에 결합하는 비-자연 CKP가 또한 제공된다.혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)에 결합하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP)로서, 상기 CKP는 시스틴 스캐폴드 구조를 포함하는 비-자연 발생 시스틴 노트 펩타이드 (CKP): Z1C1L1C2L2C3L3C4L4C5L5C6Z2여기서: Z1 및 Z2은 임의의 아미노산이고; L1은 루프 1이고, X1X2X3X4X5X6 (서열식별번호: 2), X1X2X3X4X5X6X7 (서열식별번호: 3), X1X2X3X4X5X6X7X8 (서열식별번호: 4), X1X2X3X4X5X6X7X8X9 (서열식별번호: 5), 및 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10 (서열식별번호: 6)로 구성된 군으로부터 선택된 구조를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X10은 임의의 아미노산이고; L2는 루프 2이고, 구조 X1X2X3X4X5 (서열식별번호: 7)를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고; L3은 루프 3이고, 구조 X1X2X3를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X3은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고; L4는 루프 4이고, 구조 X1을 가지며, 여기서 X1은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고; L5은 루프 5이고, 구조 X1X2X3X4X5 (서열식별번호: 7)를 가지며, 여기서 각각의 X1 - X5은 임의의 아미노산 또는 비천연 아미노산이고; 상기 비천연 아미노산은 하기로 구성된 군으로부터 선택되고: L-프로파르길글리신-PEG6-, L-설포티로신, L-노르류신, L-1-나프틸알라닌, L-2-나프틸알라닌, L-2-클로로트립토판, L-3-플루오로티로신, L-4-플루오로페닐알라닌, 감마-벤질-L-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-L-프롤린, 4-OH-L-프롤린, 4-플루오로-L-프롤린, 4-[4-(트리플루오로메틸)-벤질]-L-프롤린, 3,4-디플루오로-L-페닐알라닌, 3,4-디클로로-L-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, 3-F,4-Cl-L-페닐알라닌, 2-피리돈(NH 파라)-L-알라닌, 피리돈(NH 메타)-L-알라닌, 3-(1-N-메틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-에틸 인돌)-L-알라닌, 3-(1-N-이소프로필 인돌)-L-알라닌, 3-(5-아자-인돌)-L-알라닌, 4-메틸-L-페닐알라닌, 2-나프틸-L-알라닌, L-4,4'-바이페닐알라닌, 3-(3-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀리닐)-L-알라닌, 3-(2-퀴녹살리닐)-L-알라닌, 4-메틸-2-피리딜-알라닌, 4-에틸-2-피리딜-L-알라닌, 벤조티아졸-L-알라닌, 벤조티오펜-L-알라닌, 3-이소퀴놀리닐-L-알라닌, t-부틸-L-알라닌 (L-네오펜틸 글리신으로도 공지됨), 3-사이클로부틸-L-알라닌, 사이클로펜틸-L-알라닌, 5,5,5-트리플루오로-L-류신, t-부틸-L-글리신 (L-tert-류신으로도 공지됨), L-사이클로펜틸글리신, L-사이클로부틸글리신, 3,4-하이드록시-L-페닐알라닌, 3,4-플루오로-L-페닐알라닌, 3-플루오로,4-OH-L-페닐알라닌, 2-클로로-L-티로신, 2-메틸-L-티로신, 2-에틸-L-티로신, 4-(나프탈렌-1-올)-L-알라닌, D-세린, L-베타-호모세린, L-베타-알라닌, N-알파-메틸 글리신, 글리신 아미드, 글리세롤의 글리신 에스테르, 글리콜의 글리신 에스테르, 옥세탄-3-일의 글리신 에스테르, 및 글리신 모폴린 아미드;상기 CKP는 500 pM 이상의 친화도로 VEGF-A에 결합한다.