조직배양 단계에서의 효율성 강화를 위해서 배양기간 및 배양의 난이도와 재분화율이 높은 특성을 가진 국화품종을 선발하고자 하였다. 형질전환을 위해서 뽑힌 품종의 유전적인 특성에 따른 배양 및 배지조건을 설정하려고 배양부위 및 기본배지, 탄소원 및 농도, 배지응고제원 및 농도를 정하는 연구를 했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>형질전환을 위한 국화 적정 품종 선발</h2> <p>형질전환의 기초단계인 조직배양 단계에서 효율성 강화를 목적으로 배양기간 및 배양의 난이도와 높은 재분화율 특성을 가진 국화품종을 선발하기 위하여 원예작물 전문육종기관인 원예연구소와 예산국화시험장 그리고 화훼자원연구소로부터 국내외 육성 품종 28종을 수집하여 기내증식 하여 조직배양의 재료로 사용하였다. 수집된 품종 중 5종은 대국 (standard type) 이었고 나머지 23종은 소국 (spray type) 이었다.</p> <h2>배양 및 배지조건 설정</h2> <p>형질전환을 위하여 선발된 각 품종의 유전적 특성에 따른 배양 및 배지조건을 설정하기 위하여 배양부위 및 기본배지, 탄소원 및 농도, 배지응고제원 및 농도를 정하는 연구를 수행하였다. 조직배양을 위하여 생장조절제를 단용 또는 혼용으로 처리 하였는데 auxin 계열로 NAA, 2, 4-D, IAA가 사용되었고 cytokinin 계열로 BA, kinetin, 2ip, TDZ 등이 \( 0.1 \sim 5.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 농도로 첨가되었다. 적절한 배양 부위를 정하기 위하여 배양재료를 크게 잎, 줄기, 엽병으로 구분하여 배양하고 신초 분화율 및 분화기간을 관찰함으로서 배양의 효율성을 비교하였으며 MS, B5, White, SH, LS 등 5종을 공시하여 기본배지를 설정하고 탄소원으로는 sucrose와 fructose 그리고 lactose를 \( 1.5 \%\) , \( 3 \% \), \( 6 \% \)로 공시하여 캘러스형성율과 기관분화 정도를 조사하였다. 배지응고제 선발을 위하여 agar와 phy-tagel을 일정량씩 배지에 투입하였는데 agar는 \( 0.8 \% \), \(1.0 \% \), \( 1.2 \% \) 농도로 투입하였고 phytagel은 \( 0.2 \% \), \( 0.3 \% \), \(0.4 \% \) 를 첨가하였다.</p> <h2>식물체 재분화율 향상을 위한 polyamine과 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 처리</h2> <p>식물체 분화에 효과가 있다고 알려진 polyamine과 \( \mathrm{AgNO}_{3} \)을 선발된 국화 5품종을 대상으로 조직배양 배지에 첨가하여 신초분화율과 신초수 형성 정도를 관찰하였다. Polyamine은 putrescine, spermidine, spermine 3종을 사용하였고 처리농도는 polyamine과 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 공히 \( 5,10,15,20, 25,50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 이었다.</p>