본 실험에서 식물재료로는 옥수수를 사용하였으며, 배양 용액에 시약 처리는 \(\mathrm{CsCl}\), \(\mathrm{KCl}\) stock 용액을 시험할 정도로 희석하였다. 뿌리의 관찰에 관해서는 무게, 길이는 자와 저울을 이용하였으며, 뿌리 정단으로부터 \( 7 \mathrm{mm} \) 떨어진 부위의 지름과 근단 분열조직을 분석에는 해부현미경 및 분석 프로그램를 이용하였다. 다음으로 ZmKUP1의 RT-PCR에서는 옥수수를 녹인 용액의 RNA 농도를 측정한 후 각각 total RNA를 M-MLV reverse transcriptase를 이용하여 cDNA를 제작하는 과정과 f-Taq을 이용하여 수행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료</h2><p>옥수수(Zea mays cv. Golden Cross Bantum 70) 종자를 증류수에 세척한 후 증류수에 넣고 실온의 진탕기에서 4시간 이상 침지시킨 후 paper roll에 파종한 후 이를 말아 \( 60\mathrm{ml} \)의 배양 용액이 담겨있는 \( 100 \mathrm{ml} \) 비이커에 세우고 이를 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)가 유지되는 생장상에 옮겨 2일간 키웠다(낮 16시간; 밤 8시간).</p><h2>시약의 처리</h2><p>준비된 paper roll을 비이커에 담그기 전에 배양 용액에 1 \( \mathrm{M} \) 또는 \( 2 \mathrm{M} \)의 \(\mathrm{CsCl}\), \(\mathrm{KCl}\) stock 용액을 시험할 최종 농도로 희석하여 처리하였으며, 이 때 첨가되는 부피만큼 증류수를 미리 제거하여 대조군과 용액의 총량이 동일하도록 준비하였다.</p><h2>뿌리의 관찰과 측정</h2><p>발아 후 2일된 뿌리의 전체 길이는 자를 이용하여 해부 현미경 하에서 \( \mathrm{mm} \) 단위로 측정하였다. 뿌리 정단으로부터 \( 7 \mathrm{mm} \) 떨어진 부위의 지름은 해부현미경으로 이미지를 촬영하여 이미지 분석 프로그램(ITPro \( { }^{\mathrm{TM}} \) Sometech, Korea)을 이용하여 측정하였다. 뿌리의 무게는 건조되지 않도록 증류수로 적신 여과지 위에 올려 저울(Scientech, USA)을 이용하여 소수점 셋째 자리까지 측정하였다. 근단 분열조직은 \( 70 \% \) 에탄올에 고정된 뿌리를 배경 조명하에 생성되는 음영을 이용하거나 Fuelgen 반응으로 염색한 후 해부현미경으로 촬영하여 영상 분석 프로그램(ITPro \( { }^{\mathrm{TM}} \), Sometech, Korea)으로 측정하였다. Fulegen 반응은 뿌리 끝 절편을 \( 70 \% \) 에탄올에 2시간 고정한 후 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)의 \(1\mathrm{N}\) \(\mathrm{HCl}\)에 15분간 담가 두었다가 Schiff's reagent(Merck, USA)에 넣고 붉은 색이 나타날 때까지 30분간 어둠 속에서 반응시켰다.</p><h2>ZmKUP1의 RT-PCR</h2><p>측정이 끝난 옥수수 뿌리의 정단 \( 7 \mathrm{mm} \) 부위를 절단하고 액체질소 존재하에 막사사발로 파쇄하여 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 튜브에 준비된 RNA 추출용액(easy-Blue \( { }^{\mathrm{TM}} \), iNtron, Korea) \( 1 \mathrm{ml} \)에 넣고 잘 섞은 후 공급자의 표준 프로토콜에 따라 RNA를 분리하여 \( 30 \mu \mathrm{l} \)의 증류수에 녹였다. RNA 농도를 spectrophotometer(DU 7500, Beckman, USA)를 이용하여 측정한 후 각각 \( 2 \mu \mathrm{g} \)의 total RNA를 M-MLV reverse transcriptase(Promega, USA)를 이용하여 cDNA를 제작하였다. PCR은 f-Taq(Solgent, Korea)을 이용하여 수행하였는데, 단 \( 10 \mathrm{x} \) 완충용액은 f-Taq과 함께 공급된 것을 사용하지 않고 별도의 조성(\(670 \mathrm{~mM} \) Tris, \( \mathrm{pH} 8.8 \), \( 167 \mathrm{mM}\left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4}, 0.7 \% \) \( \beta \)-mercaptoethanol, \( 67 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{MgCl}_{2} \))으로 제작하여 사용하였다. ZmKUP1(GeneBank FN257301)의 primer는 다음과 같다.</p><p>Forward primer: GCC TTC CGT CAG AGT TCA AG</p><p>Reverse primer: TTG GTT CTG CCA CCA CAT TA</p>