제한효소 패턴을 분석해 생성한 덴드로그램은 core group에 속하는 V. algindlyticus와 V. parahaemolyticus가 90% 이상의 높은 유사성을 가짐을 보여주었다. 이는 지방산 분석, rpoB gene, 그리고 MLSA 방법의 결과와 일치했다. 종 동정이 어려운 16S rRNA gene에 대한 이질성 문제를 해결하기 위해, 복수 유전자를 이용한 MLSA 방법이 추천되었다. V. flunialis와 V. mimicus는 Vibrio 종 중에서 비교적 먼 유연관계를 보여주며, 이는 다른 표현형과 유전형 특징의 동정 결과와 일치했다.
<p>제한효소패턴에 근거하여 덴드로그램을 작성한 결과 현재 core group 균주로 간주되는 V. algindlyticus, V. parahaemolyticus는 \( 90 \% \) 이상의 매우 밀접한 similarity를 나타내었으며 이는 지방산 분석, rpoB gene 및 MLSA 방법의 결과와 유사한 결과였다. 이전의 논문에서, V. algindyticus, V. parahaemolyticus와 함께 core group으로 간주되었던 V. proteolyticus와 V. vulnificus는 각각 \( 87 \%, 85 \% \) 이상의 similarity로 cluster를 형성하여 16S rRNA 염기서열 및 DNA-DNA 상동치에 근거한 결과와 마찬가지로 core group 균주들과 밀접한 유연관계를 나타내었다. 또한 V. flunialis 및 V. mimicus는 실험된 Vibrio종 중에서는 비교적 먼 유연관계를 나타내었으며 이는 다른 표현형적, 유전형적 특징들에 의한 동정 결과에 상응하는 결과였다.</p> <p>참고 균주로 사용한 G. hollisae의 경우 본 실험에서 사용한 모든 제한 효소에서 Vibrio종과는 분명히 다른 RFLP type을 나타내었으며, 덴드로그램 상에서 Vibrio종과는 가장 먼 유연 관계를 나타내어 16S rRNA의 PCR- RFLP 방법이 여전히 Vibrio종의 동정에 유용함을 알 수 있었다.</p> <p>Urakawa 등에 의한 HhaI, Dde I, Rsa I, SauBA I, Msp I의 4종의 제한 효소를 이용한 Vibrionaceae의 \( 16S rRNA PCR-RFLP의 결과에 따르면 V. algindyticus, V. parahaemdyticus, V. proteoIyticus, V. vulnificus 의 제한효소패턴이 동일하게 나타났다. 따라서 Vibrio 균주의 구분에 있어 16S rRNA PCR-RFLP는 변별력이 매우 낮은 것으로 지적된 바 있으나, 본 실험 결과에 따르면 6 종의 Vibrio 균주가 6 개의 RFLP type을 나타내어 종의 구분에 매우 유용하였다. 이러한 연구 결과는 Photobacterium과 Vibrio 의 구분에 있어 Hha I 을 이용한 PCR-RFLP가 유용하다는 연구 결과와 유사하다.</p> <p>Vibrio속의 16S rRNA gene은 높은 염기서열 유사성을 갖는 multi copy gene으로 이를 이용한 Vibrio 종의 동정이 용이하지 않음에도 불구하고 본 논문에서 실험된 16S rRNA의 PCR-RFLP 방법은 Vibrio종의 구분에 있어, 적절한 제한 효소의 선택과 결과의 조합에 의해 Vibrio종의 동정에 유용함을 알 수 있었다.</p> <p>16S rRNA gene을 이용하는 경우, 염기서열의 높은 유사성과 multi copy gene에 기인한 이질성으로 인하여 세균 그룹에 따라 종의 동정이 어려운 경우가 보고되어 온 바, 정확한 종의 동정을 위하여 MLSA 방법 등 특정 유전자를 복수로 이용하는 방법 등이 권유되고 있다. 이는 16S rRNA gene과 같이 단일 유전자(single gene)가 아닌 복수 유전자(multiple gene)를 이용하는 경우이므로 보다 정확한 종 동정의 결과를 도출할 수 있을 것이다. 그러나 실제적으로 임상에서와 같이 빠른 동정이 필요한 경우, PCR-RFLP에 의해 16S rRNA gene과 같은 단일 유전자를 대상으로 하여 종의 동정이 가능하다면 PCR-RFLP는 보다 실질적인 Vibrio 종의 동정 및 검출 방법으로 이용할 수 있을 것이다. 나아가 Vibrio 종의 많은 균주를 대상으로 동정에 유용성을 갖는 제한 효소를 선별하는 실험을 수행하고 그 결과 특정 Vibrio 종의 구분에 유용한 특정 제한 효소를 찾을 수 있다면, 종 특이적(species specific) primer 제작에 이용되는 16S rRNA gene의 신호서열과 같이, 특정 제한 효소를 이용한 PCR- RFLP는 Vibrio 종의 동정에 있어 보다 유용한 방법이 될 수 있을 것이다.</p>