Disc diffusion assay를 이용하여 감초의 50% 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획의 항균활성을 측정하였다. 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 1,2-hexanediol을 대조군으로 사용하였고, agar-dilution method을 참고하여 최소저해농도(MIC)를 측정하였다. 한국산 감초 추출물 에틸아세테이트 분획과 중국산 감초 추출물 에틸아세테이트 분획을 0.20% 함유한 크림을 제조하여 challenge test를 시행하였다.
<h2>Disc diffusion assay에 의한 항균활성 측정</h2> <p>원산지별 감초의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획의 항균활성은 시험균주를 대상으로 disc diffusion assay로 측정하였다. 대조군으로는 화장품 방부제로 사용되는 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 1,2-hexanediol을 사용하였다. 배양된 균주는 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 으로 조절한 후 본 실험에 사용하였다. 평판배지에 배양된 각 균주를 멸균 면봉을 이용하여 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 도말하여 준비하였고, 시료를 disc 당 \( 0.5, 2.5 \mathrm { mg } \)이 되도록 paper disc (diamerter \( 8 \mathrm { ~mm } \), Roshi kaisha. Ltd., Tokyo, Japan)에 천천히 흡수시킨 뒤, 건조과정을 거쳐 용매를 휘발시켰다. 각각의 시료가 흡수된 paper disc를 균주가 도말한 평판배지 위에 밀착시킨 상태로 배양한 후 disc 주변에 생성된 저해환(clear zone, mm)을 측정하여 항균활성을 비교하였다.</p> <h2>최소저해농도(Minimum inhibitory concentration, MIC) 측정</h2> <p>Disc diffusion assay에서 낮은 농도 \( (0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } ) \) 에서도 항균 활성을 보인 원산지별 감초의 \( 50 \% \) 에탄올추출물 및 에틸아세테이트 분획에 대한 정확한 최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)를 측정하기 위하여 agar-dilution method을 참고하여 진행하였다. 각각의 균주는 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 로 조절한 후 본 실험에 사용하였다. 화장품 방부제로 사용되는 메틸 파라벤, 프로필 파라벤은 대조군으로 사용되었다. 시료는 2 배 희석법을 이용하여 DMSO로 농도를 희석한 후에 사용하였다. 그 후에 시료를 \( 2 \mathrm { ml } \) 씩 함유한 배지 \( 20 \mathrm { ml } \) 를 Petridish에 주입하였고, 시험균을 평판배지 위에 \( 100 \mu \mathrm {\mu } \) 씩 도말하여 배양하였다. 배양 후, 육안으로 관찰하였을 때, 각각의 균들이 증식되지 않는 농도를 MIC로 결정하였다.</p> <h2>감초 추출물의 challenge test</h2> <p>감초 추출물의 challenge test를 시행하기 위하여 원산지 별 감초의 항균활성 비교에서 우수한 항균활성을 나타낸 한국산 감초 추출물 에틸아세테이트 분획과 중국산 감초 추출물 에틸아세테이트 분획 각각 \( 0.20 \% \) 를 함유한 크림을 제조</p>