DPPH를 이용한 EDA 측정에 의한 항산화 활성은 Blois 방법에 따랐으며, DHHP 용액을 \( 528 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 활성 측정을 위해 ammonium thiocyanate 용액을 이용해 \( 500 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였고, 활성의 비교를 위해 BHT 첨가구를 이용하였다.
<h2>DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH \( \left ( \alpha, \alpha ^ {\prime } \right . \)-diphenyl- \( \beta \)-picrylhydrazyl)를 이용한 전자공여능(electron donating ability; EDA) 측정에 의한 항산화 활성은 Blois 방법에 따랐다. 즉, DPPH 용액은 \( 100 \mathrm { ml } \) 에탄올에 DPPH 16 \( \mathrm { mg } \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm { ml } \)를 혼합하여 Whatman filter paper No. 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 \( 5 \mathrm { ml } \)에 일정농도 \( (0.1 \%) \)의 시료용액 \( 1 \mathrm { ml } \)을 혼합한 후 실온에서 30분간 반응시킨 후 \( 528 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 이때 대조구인 BHT도 \(0.1 \% \)농도로 첨가하여 위에서와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH를 이용한 전자공여능 (electron donating ability; EDA)(Blois MS. 1958)은 시료 첨가구와 무첨가구의 홉광도차를 백분율(%)로 표시하였다.</p> <p>EDA \( ( \%)= \{ 1-( \mathrm { Abs } / \mathrm { Abc } )] \times 100 \)</p> <p>Abc: Absorbance of control treatment at \( 528 \mathrm { ~nm } \)</p> <p>Abs: Absorbance of sample treatment at \( 528 \mathrm { ~nm } \)</p> <h2>Thiocyanate에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>Ohkawa의 방법에 따라 먼저 linoleic acid \( (25 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)in EtOH), ferrous chloride \( (2.45 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \ in \( 3.5 \% \)hydrochloric acid), ammonium thiocyanate \( \left (0.3 \mathrm { ~g } / \mathrm { ml } \right . \)in \( \left . \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \right ), 0.2 \mathrm { M } \) phosphate buffer( \( \mathrm { pH } \)7.0)를 조제하여 이들을 stock solution으로 사용하였다. 혼합용액은 시료용액 \( 0.2 \mathrm { ml } \), linoleic acid \( 0.2 \mathrm { ml } \)을 시험관에 넣고 흔합한 후 phosphate buffer \( 0.4 \mathrm { ml } \)와 증류수 \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 가하여 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 incubation하면서 일정간경으로 측정하였다. 측정방법은 혼합용액에서 \( 0.1 \mathrm { ml } \)을 취하여 시험관에 넣고 \(70 \% \)ethanol \( 3 \mathrm { ml } \)과 ammonium thiocyanate 용액 \( 0.1 \mathrm { ml } \), ferrous chloride 용액 \( 0.1 \mathrm { ml } \)를 혼합한 후 정확히 3분 후에 \( 500 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 BHT를 \( 0.05 \% \)농도로 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.</p>