는 platycodin D에 의한 apoptosis 유발 은 Bcl-2의 발현 차이와는 관련이 없다는 것을 알 수 있다. 도라지 뿌리에서 유래된 sub-G1기에 속하는 세포들의 빈도를 조사해보면,platycodin D 처리 농도가 증가할수록 sub-G1기의 세포의 빈도가 증가하게되고 고농도 처리군에서 현저하게 증가한다.이러한 현상은 platycodin D 처리에 의한 인체 혈구암세포인 U937 세포가 생존율이 감소되고, 증식 억제 및 형태변화는 apoptosis 유발하여 발생한다.
<h2>Platycodin D에 의한 U937 세포의 생존율 억제에 미치는 \( \mathrm { BCl } -2 \) 의 영향</h2> <p>Platycodin D의 처리에 의한 U937 세포의 증식억제에 미치는 Bcl-2의 영향을 비교하기 위하여 Bcl-2가 과발현된 \( \mathrm { U } 937 / \mathrm { Bcl } -2 \) 세포주의 Bcl-2 단백질 발현의 정도를 U937/ vec-tor 세포주와 먼저 비교하였다. Fig. 5A에 나타낸 Western bot-ting의 결과에서 알 수 있듯이 U937/Bcl-2 세포에서의 Bcl-2 단백질의 발현은 U937/vector 세포보다 약 5 배 이상 과발현되어 있음을 확인하였다. 다음은 이와 같은 \( \mathrm { Bcl } -2 \) 발현의 차이가있는 두 세포주에서 platycodin \( \mathrm { D } \) 의 세포증식 억제의 정도를 MTT assay와 DAPI 염색을 통해서 확인한 결과 U937/Bcl-2에 서도 U937/vector와 유사한 정도의 억제를 나타내었다. 이러한 결과는 platycodin D에 의한 apoptosis 유발 은 Bcl-2의 발현 차이와는 무관하다는 것을 의미한다.</p> <h1>고 찰</h1> <p>본 연구에서는 도라지 뿌리에서 유래된 platycodin D에 의해당하는 sub-G1기에 속하는 세포들의 빈도를 조사한 결과, platycodin \( \mathrm { D } \) 를 처리하지 않았을 경우에는 약 \( 4 \% \) 의 apoptosis 유발 빈도가 나타났으나 platycodin D 처리 농도가 증가할수 록 sub-G1기의 세포의 빈도가 증가하여 고농도인 \( 15 \mu \mathrm { M } \) 처리 군에서는 약 \( 30 \% \) 에 해당하는 세포가 sub-G1기로 관찰되어 고농도 처리군에서 현저하게 증가한다는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과에서 platycodin D 처리에 의한 인체 혈구암세포인 U937 세포의 생존율 감소, 증식 억제 및 형태변화는 apoptosis 유발에 의하여 일어나는 현상이라는 것을 알 수 있었다.</p> <p>미토콘드리아는 apoptosis의 intrinsic pathway에서 가장 중요한 역할을 하는 기관으로 Bcl-2 family에 속하는 인자들의 발현 변화에 의하여 미토콘드리아 막의 전위가 조절된다고 알려져 있다. Bcl-2 family는 apoptosis를 억제하는 an-ti-apoptotic 인자(Bcl-2 및 Bcl-xL 등)와 apoptosis를 유발하는 pro-apoptotic 인자(Bax 및 Bad 등)로 구성되어 있으며 이들은 서로 dimer의 형태로 결합을 할 수 있다. 하지만 세포 내스트레스나 세포 독성에 의해 mitochondria의 막 전위가 변화 되면, 이 균형은 깨어지고 mitochondria에서 ytochrome \( c \) 와 같은 apoptosis 유발 인자들이 세포질로 방출된다. 방출되어 진 cytochrome \( c \) 는 apoptotic protease activating factor (Apaf)-1과 caspase-9에 결합함으로써 apoptosome을 형성하 여 caspase-9를 활성화시키며, 결과적으로 caspase-3을 활성화시킴으로써 apoptosis를 유발시키는 것으로 알려져 있다. 또한 antagonist로 작용하는 IAP family의 발현 변화 역시 cas-pase 활성을 억제함으로서 apoptosis 억제 조절인자로 작용한다 \( [10,20] \). 더불어 PARP와 \( \beta \)-catenin과 같은 단백질들의 단편화는 caspase의 활성화와 연관된 apoptosis가 유발되었음을 보여주는 지표 단백질로 활성화된 caspase-3의 표적 단백질로 알려져 있다. 많은 선행 연구들의 결과에서와 부분적으 로 유사하게 RT-PCR과 Western blot 분석의 결과에서 알 수 있듯이 platycodin D가 처리된 배지에서 배양된 U937 세포에 서 이들 유전자들은 매우 다양한 발현 양의 변화를 보여주었 는데, apoptosis를 유도하는 Bax가 증가하는 반면, apoptosis 를 억제하는데 관여하는 XIAP와 cIAP-2가 감소하였으나, Bcl-2, Bcl-xL 및 cIAP-1은 아무런 변화가 보이지 않았다(Fig.</p>