Native-PAGE는 Davis 방법에 따라 slab-type poly-acrylamide gel을 사용하여 단백질 패턴비교하였고, SDS-polyacrylamide gel은 Weber 및 Osbom 방법에 따라 단백질 패턴비교를 하였다.
<h2>Native-PAGE (Nondenaturring polyacrylamide gel electrophoresis)에 의한 단백질 패턴비교</h2> <p>Native-PAGE는 Davis 방법에 따라 slab-type poly-acrylamide gel을 사용하였다. Gel의 농도는 \( 7.5 \% \)를 사용하였다. 즉 분리 gel은 \( 30 \% \) acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \( 1.5 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (\( \mathrm{pH~} 8.8\)), \( 0.05 \% \) TEMED 및 \( 10 \% \) 과산화암모늄을 혼합하여 \( 1 \mathrm{~mm} \) 두께로 만들어 사용하였다. 분리 gel 위에는 \( 5 \% \) 농축 gel [\( 30 \% \) acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \( 0.5 \mathrm{~M} \) Tris-\( \mathrm{HCl} \) buffer \( (\mathrm{pH} 6.8 \))을 만들어 5\(\times \) sample buffer(\( 312.5 \mathrm{mM} \) Tris-\( \mathrm{HCl} \), \( \mathrm{pH~} 6.8\), \( 50 \% \) glycerol, \( 0.05 \% \) bromophe-nol blue] 용액에 혼합한 시료를 농축 gel내에 성형된 홀에 일정량씩 주입하였다. 전기영동은 Tris-glycine 완충액( \( 25 \mathrm{mM} \) Tris, \( 192 \mathrm{mM} \) glycine, \( \mathrm{pH~} 8.8 \)) 하에서 \( 1.5 \mathrm{~mA} / \mathrm{gel} \) (\(\mathrm{cm}\))의 정전류를 통하여 행하고, 저온(\( 4^{\circ} \mathrm{C} \))에서 2시간 통전시켰다. 영동이 완료된 gel은 \( 7 \% \) 초산액에 용해한 \( 1 \% \) coomassie bril-liant blue R-250으로 염색한 후 \( 7 \% \) 초산액으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 하였다.</p> <h2>SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel electrophoresis)에 의한 단백질 패턴비교</h2> <p>SDS-polyacrylamide gel은 Weber 및 Osbom 방법에 준하였다. 분리 gel의 조성은 \( 10 \% \) acrylamide, \( 1.5 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (\( \mathrm{pH} \) 8.8), \( 0.4 \% \) SDS (Sodium dodecyl sulfate), \( 10 \% \)과 산화암모늄 및 \( 0.05 \% \) TEMED로 만들어 사용하였다. 농축 gel의 조성은 \( 5 \% \) acrylamide, \( 0.5 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (\(\mathrm{pH} 6.8 \)), \( 0.4 \% \) SDS, \( 0.05 \% \) TEMED 였다. 시료단백질의 SDS 처리는 최종농도 \( 2 \% \) SDS, \( 14.4 \mathrm{mM} \) \( \beta \)-mercaptoethanol, \( 60 \mathrm{mM} \) Tris-\( \mathrm{HCl} \) buffer (\( \mathrm{pH~} 6.8 \)), \( 25 \% \) glycerol 및 \( 0.1 \% \) BPB 혼합액에서 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 로 5분간 열처리 하였다. 전기영동은 Tris-glycine 완충액(\( 25 \mathrm{mM} /) Tris, \( 192 \mathrm{mM} \) glycine, \( \mathrm{pH~} 8.3 \)) 하에서 130-150 \( \mathrm{mA} / \mathrm{gel}(\mathrm{cm}) \)의 정전류를 통하여 1시간 30분간 하였다. 전기영동 후 gel은 고정액(Methanol : Acetic acid : Water = 10:10:80)에 \( 1 \% \) coomassie brilliant blue R-250을 첨가하고 10시간 염색한 후 탈색액(Methanol : Acetic acid : Water = 10:10:80)으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 하였다.</p>