UV-visible spectrophotometer, pH meter, HPLC, TLC 등 기기와 시판 특급 시약을 사용하여 며느리배꼽 500g를 50% 에탄올 5L로 일주일 동안 침적시킨 후 여과하고 감압 농축하여 파우더를 얻었고 quercetin, isoquercitrin, isovitexin, apigenin, kaempferol, caffeic acid는 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하였고 ethyl acetate 분획으로부터 aglycone 제조를 위해 \( \mathrm { I } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 및 acetone 용액을 넣고 4h 동안 중탕 가열하면서 환류 냉각시킨 후 \( 5 \% \) KOH-MeOH 용액으로 중화 적정하고 ethyl acetate 층을 분획하고 감압 농축하여 aglycone 파우더를 얻었다.
<h1>재료 및 실험</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>UV-visible spectrophotometer는 Varian(Australia)사의 Cary 50, pII meter는 Istek(Korea)사의 pH213 Micro processor pH Meter를 사용하였고 Iligh performance liquid chroma-tography는 Dionex(USA)사의 HPLC 900 lseries를 사용하였다. pH표준용액 그리고 ethanol(EtOII), methanol(MeOII), ethyl acetate (EtOAc), acetic acid, acetonitrile 등 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 플라보노이드의 분석에 사용한 thin layer chromatography(TLC)는 aluminum sheet silica gel \( 60 \mathrm { ~F } 254(0.2 \mathrm { ~mm } ) \) 로 Merck(USA)에서 구입하였다. 비교물질로 사용한 quercetin, isoquercitrin, isovitexin, apigenin, kaempferol, caffeic acid는 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하였다. 실험에 사용한 며느리배꼽은 2008년 12월 청량리 경동시장에서 구입하여 사용하였다.</p> <h2>며느리배꼽의 분획 및 추출</h2> <p>건조된 며느리배꼽 \( 500 \mathrm { ~g } \) 을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 5 \( \mathrm { L } \) 를 이용하여 일주일 동안 침적시킨 후 여과하고 이 여액을 감압 건조하여 파우더를 얻어서 이를 실험에 사용하였다. 또한 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 농축한 후 물과 n-hexane을 이용하여 클로로필 등의 비극성 성분을 제거하고 이후 ethyl acetate 분획을 감압 농축하여 파우더를 얻었다.</p> <p>Ethyl acetate 분획으로부터 aglycone 제조: ethyl acetate 파우더 일정량에 \( \mathrm { I } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 및 acetone 용액을 넣고, 4h 동안 중탕 가열하면서 환류 냉각시킨다. 환류시킨 용액을 \( 5 \% \) KOH-MeOH 용액으로 중화 적정한다. 중화 적정 후 다시 ethyl acetate 층을 분획하고 이를 감압 농축하여 얻은 aglycone 파우더(deglycosylated 분획)를 실험에 사용하였다.</p> <h2>며느리배꼽 추출물의 항균 활성 측정</h2> <p>사용균주: 본 실험에 사용된 균주는 한국 미생물 보존센터에서 분양 받은 여드름의 원인균인 Propionibacterium acnes ATCC6919와 호기성 Gram \( ( + ) \) 균주인 Staphylococcus aureus ATCC6538, 호기성 Gram(-) 균주인 Escherichia coli ATCC23736를 사용하였다.< /p> <p>배지 및 배양조건: P. acnes의 배양 배지는 Reinforced clostridial(RC) 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 \( P \). acnes는 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하면서 실험 72h 전에 활성화 시켰으 며, 균을 배양 배지에 접종한 후 anaerobic jar에서 Gaspack system(Merck Anaerocult Gaspack system, Germany)을 이용하여 밀봉하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에시 72h동안 혐기성 배양하였다. 호기성 균주인 S. aureus와 E. coli는 Mueller- Ilinton 배지 (Merck, Germany)를 사용하였으며 균을 접종한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에시 \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양하면서 사용하였다.</p>