본 연구에서는 균의 생육도와 단백질 정량을 분광광도계를 통해 각각 \( 600 \mathrm { nm } \)과 \( 280 \mathrm { ~nm } \)에서의 홉광도로 측정하였으며, Lowry법 역시 활용하였다. 배양과정에서는 초기 배양액을 \(2-3 \% \)의 균배양액에 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 6-7시간 배양한 후, 원심분리를 통해 침전물을 생성하였다. 이 침전물은 생리식염수로 2회 세척한 후, \( 20 \mathrm { mM } \)의 인산 완충액에서 재부유하였다. 이후 초음파쇄기를 이용해 균체를 파쇄하고 원심분리하여 상등액을 균체 파쇄액으로 사용하였다.
<h2>균의 생육도 및 단백질 정량</h2> <p>균의 생육도는 분광광도계 (Shimadzu UV-160A)로 \( 600 \mathrm { nm } \)에서 흡광도로 측정하였고 단백질 정량은 분광광도계를 사용하여 \( 280 \mathrm { ~nm } \)에서의 홉광도를 측정하는 방법과 Lowry법을 사용하였다.</p> <h2>균체 파쇄액</h2> <p>전배양액을 \(2-3 \% \) 균배양액에 첨가한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 6-7시간 배양하여 그 배양액을 원심분리하여 ( \( 8,000 \mathrm { rpm } \), \( 10 \mathrm { min } \), \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)) 침전물을 생리식염수로 부유액을 만들어 다시 원심분리 한 뒤 생리 식염수로 2회 세척하였다. 이를 \( 20 \mathrm { mM } \) 인산 완충액 \( ( \mathrm { pH } \) \(7.0) \)으로 재 부유시켜 한번 더 세척한 다음 초음파쇄기(Sonifer 250, Branson)를 이용하여 균체를 파쇄한 후 원심분리 ( \( 12,000 \mathrm { rpm } \), \( 10 \mathrm { ~min } \), \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \))하고 상등액을 균체 파쇄액으로 사용하였다.</p> <h2>Urease 생산 조건</h2> <p>증식용 기본배지인 LB 배지를 사용하여 여기에 urease 생산에 영향을 미치는 인자를 조사하기 위하여 urea를 농도별로 첨가하였고 탄소원으로는 xylose, fructose, lactose, arabinose, cellobiose, sorbitol, glucose, galactose, accharose, mannitol, maltose을 이용하였고, 인산염은 \( \mathrm { NaH_2PO_4 } \), \( \mathrm { Na_2-HPO_4 } \), \( \mathrm { K_2HPO_4 } \), \( \mathrm { KH_2PO_4 } \), \( \mathrm { (NH_4)_2HPO_4 } \), \( \mathrm { NH_4H_2PO_4 } \) 그리고 무기염으로는 \( \mathrm { MgSO_4 } \), \( \mathrm { Pb(NO_3)_2 } \), \( \mathrm { HgCl_2 } \), \( \mathrm { ZnSO_4 } \), \( \mathrm { CuSO_4 } \), \( \mathrm { AgNO_3 } \), \( \mathrm { MnSO_4 } \), \( \mathrm { CaCl_2 } \), \( \mathrm { CoCl_2 } \), \( \mathrm { FeSO_4 } \)등을 사용하였다. 배양조건은 초기 \( \mathrm { pH } \) 그리고 배양온도를 조사하였다. 각각의 조건과 배지에서 시간별로 배양한 다음 균체를 수집하여 초음파 파쇄기로 파쇄한 다음 상등액을 회수하여 urease 생산력을 조사하였다.</p>