분리된 화합물 4종을 검량 곡선을 사용해 정량했고 간암 세포 \( \mathrm { HepG } 2 \)세포는 \( 10 \% \)FBS를 첨가한 DMEM 배지와 \( 37,5 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \), \(95 \% \) humid air로 조절된 배양기를 사용하여 배양했다. 4종의 Malonyl ginsenoside의 세포독성 실험은 MTT colorimetricassay 방법을 이용했고 실험 결과는 mean \( \pm \mathrm { SD } \) 로 나타냈다.
<h3>화합물의 정량</h3> <p>분리된 화합물 4종을 검량 곡선을 이용하여 정량 하였다. 각 물질을 메탄올 수용액에 용해시켜 만들었으며 \( -4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하였다. 직선성은 \( 0.1-1 \mathrm { ppm } \) 사이의 4-5 농도에서 평가하였다.</p> <h3>세포배양</h3> <p>인간 간암 세포인 \( \mathrm { HepG } 2 \) (KCLB, Seoul, Korea) 세포는 \( 10 \% \) (v/v) FBS를 첨가한 DMEM 배지 (Lonza, Basel, Switzerland) 와 \( 37,5 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \), \(95 \% \) humid air로 조절된 배양기를 사용하여 배양하였다.</p> <h3>세포 생존율 시험</h3> <p>4종의 Malonyl ginsenoside의 세포독성 실험은 MTT colorimetricassay 방법을 이용하여 사용하였다[14]. HepG2 세포를 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \text { cells } / \mathrm { mL } \) 의 농도로 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 씩 96 well plate에 분주하여 배양하였다. 분주 12 시간 후에 인삼 화합물을 농도별로 처리하고 24시간 후 \( 50 \mu \mathrm { L } \) 의 MTT [5 mg/mL in phosphate buffered saline]시약을 첨가하여 다시 2시간 동안 배양하였다. 배양이 종료된 후, 배지를 제거하고 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 의 \( \mathrm { DMSO } \) 를 첨가하여 형성된 formazan을 용해하고 Microplate reader (Bio-Tek, Vermont,VT, USA)를 이용하여 \( 550 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 분리된 화합물들의 에탄올 독성 억제효과를 측정하기 위해 \( \mathrm { HepG } 2 \) 세포를 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \mathrm { cells } / \mathrm { mL } \) 의 농도로 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 씩 96 well plate에 분주하고 12 시간 후에 \( 1 \mathrm { M } \) 의 에탄올과 화합물을 농도 별로 동시에 처리하였다. 처리 24시간 후 위와 같은 방법으로 MTT assay를 수행하였다. 세포의 생존율은 다음과 같이 계산하였다.</p> <p>\( \text { Cell viability } ( \%) \\ = [ \mathrm { OD } ( \text { compound } )- \mathrm { OD } ( \text { Blank } )/ \mathrm { OD } ( \text { control } )- \mathrm { OD } ( \text { Blank } ) ] \times 100 \)</p> <h3>통계처리</h3> <p>모든 실험 결과는 mean \( \pm \mathrm { SD } \) 로 나타내었고 \( (n=3) \), 각 실험군 간 차이의 통계적 유의성은 Graph-pad prism 5 software를 이용하여 ANOVA 분산분석과 Tukey's multiple comparison test로 유의성 검정을 시행하였다 \( (p<0.05) \).</p>