본 실험에서는 건조한 6년근 홍삼과 다양한 상업용 단백질 분해효소를 사용한다. 홍삼 분말은 증류수에 희석하고, 최적의 pH 조절 후 효소를 첨가하여 진당으로 가수분해한다. 효소 처리가 끝난 시료는 열처리로 효소를 제거하고, 원심분리로 상등액을 추출한다. 단백질 함량과 총탄수화물 함량은 각각 Lowry법과 phenol-sulfuric acid법으로 분석하며, 단백질 수율과 탄수화물 수율을 계산하여 비교한다. 마지막으로 유리 라디칼 소거활성은 DPPH 방법으로 측정한다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>실험에 사용한 홍삼은 건조한 \(6 \) 년근으로 우신산업(금산, 대한민국)에서 구입하여 \( 500 \mu \mathrm { m } \) 이하로 분셰하여 사용하였으며, 상업용 단백질 분해효소인 Alcalase, Flavoursyme, Neulrase, Protamex는 Novozyme (Bagsvacrd, Denmark)의 제품을 구입하였다.</p> <h2>호소 처리</h2> <p>홍삼 분말을 증류수에 \( 10 \%( \mathrm { w } / \mathrm { w } ) \) 로 현탁시킨 후 단백질 분해 효소의 반응 최적 \( \mathrm { pH } \) 로 조정한 다음 효소를 홍삼 중량 기준으로 \( 1 \% \) 첨가하고 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3시간 동안 진당으로 가수분해시켰다. 효소처리가 끝난 시로는 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 열처리하여 효소를 실환시킨 후 원심분리 \( \left (3,000 \times \mathrm { g } , 4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 15 \right . \) 분)로 상등액을 얻어 분석의 시료로 사용하였다.</p> <h2>단백질과 총탄수화물</h2> <p>호소 반응액의 단백질 함량은 bovine serum albumin을 표준물질로 하여 Lowry법으로, 총탄수화물 함량은 포도당을 표준물질로 하여 phenol-sulfuric acid법으로 분석하였다. 단백질 수율(protein yield, PY)과 탄수화물 수율(carbohydrate yield, \( \mathrm { CY } ) \) 를 다음과 같이 계산하여 비교하였다.</p> <p>PY \( ( \%) = \) 효소 반응액의 총 단백질량/총 홍삼중량 \( \times 100 \)</p> <p>CY \( ( \%)= \) 효소 반응액의 총 탄수화물량/총 홍삼중량 \( \times 100 \)</p> <h2>진세노사이드 함량</h2> <p>호소 반응액의 진세노시이드 조성과 함량은 Yu 등의 방법에 따라 효소 반응엑을 Sep-Pak C \(18 \)에 흡착시킨 후 메탄올로 용출시킨 다음 \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) syringe filter로 여과하여 HPLC를 이용하여 분석하였다.</p> <h2>항산화 활성</h2> <p>유리 라디칼 소거활성: DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl) radical의 소거혈성은 Blois의 방법으로 측정하였다. 효소 반응액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 와 \( 0.15 \mathrm { mM } \mathrm { DPPH } \) 용액 \( 3 \mathrm { ~mL } \) 를 혼합한 후 실온에서 \(30 \) 분간 반응시킨 다음 \( 525 \mathrm { ~nm } \) 에서의 흡광도를 측정하여 대조구와 비교하였다.</p>