뇌 조직의 납 농도는 atomic absorption spectrometry 방법으로 측정하였고, Folch 등을 변형하여 실시한 지방산 분석은 butylated hydroxy toluene (BHT)를 함유한 chloroform:methanol \((2:1)\)로 교반하였다. 균질화하고 가열한 후 gas chromatography에 주입해 지방산을 분석하였고 표준용액은 462 standard를 이용하였고, carrier gas 는 수소를 사용해 표준 용액의 retention 시간과 비교해 정성하였고 내부 표준물질을 이용해 정향화하고 개개의 지방산들은 전체 peak area의 퍼센트로 산출했다.
<h2>뇌 조직의 납 농도 및 gas chromatography를 이용한 뇌 조직의 지방산 측정</h2> <p>뇌 조직의 납 농도는 시중 회사 Antech Diagnostics에 의뢰하여 atomic absorption spectrometry 방법에 따라 측정하였다. 실험쥐를 희생시킨 후 뇌를 취하였으며 뇌의 무게를 재고 \( -80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관하고 실험에 사용하였다. 지방산 분석은 Folch 등을 변형하여 실시하였으며 간단히 요약하면 다음과 같다. 생체조직을 butylated hydroxy toluene (BHT)를 함유한 chloroform:methanol \((2:1) \)로 교반하여 균질화하였고 균질물을 일정 양 취한 후 클로로포름 \( 2 \mathrm { ml } \) 와 \( 0.2 \mathrm { M } \mathrm { NaH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \) \( 1.4 \mathrm { ml } \) 를 넣고 교반하여 \( 3000 \mathrm { rpm } \) 에서 5 분간 원심분리 후 지질층을 얻었다. 최종적으로 질소가스를 이용하여 서서히 지질층의 유기용매를 완전히 날린 다음 지질을 얻었다. Morrison과 Smith의 방법에 따라 추출된 지질에 methylation용 시약인 boron trifluoride methanol \( 1 \mathrm { ml } \) 와 hexane \( 0.4 \mathrm { ml } \) 를 가한 후 1시간동안 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 가열 하였다. 실온까지 충분히 냉각 시킨 다음 hexane \( 2 \mathrm { ml } \) 와 증류수 \( 2 \mathrm { ml } \) 를 가한 후 다시 \( 3000 \mathrm { rpm } \) 에서 5 분간 원심분리 후 상등액을 얻었다. 상등액 을 질소가스 하에서 조금 날린 후, 상등액 \( 1-2 \mu 1 \)를 취하여 지방산 분석용- HP-5890B gas chromatography (Agilent, Palo Alto, CA)에 주입하여 지방산을 분석하였다. 지방산 분석에 사용한 표준용액은 미국 \( \mathrm { Nu } - \mathrm { Chek } \) 사의 462 standard를 이용하였다. 이용된 칼럼은 silica capillary column (DBFFAP, \( 30 \mathrm { ~m } \times 0.25 \mathrm { ~mm } \) inner diameter \( \times 0.25 \mu \mathrm { m } \) film thickness, J and W Scientific, Folsome, CA) 이었으며 기가의 분석 조건은 detector (FID) \( 250 ^ {\circ } \mathrm { C } \), oven (initial \( 130 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 분당 증가율 \( 175 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } , 250 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 \( 1 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } , 210 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 3 \( 0 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \), final \( 245 ^ {\circ } \mathrm { C } \) ), injector \( 250 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 그리고 carrier gas 는 수소를 사용하였다. 지방산 분석은 표준용액의 retention 시간과 비교하여 정성하였고 내부 표준물질 (22:3n-3 methyl ester)을 이용하여 총 지방산을 정량하였으며 개개의 지방산 들은 전체 peak area의 퍼센트로 산출하였다.</p>