건선 유발 사이토카인으로 알려진 IL-17A에 의한 신호조절에서 quercetin의 관여를 확인한 결과 quercetin은 IL-17A로 유도된 HaCaT 세포주에서 IkB\(\alpha\)mRNA 발현 및 STAT3 단백질의 인산화를 유의성 있게 억제하는 것을 알 수 있고, TNF-\(\alpha\) 및 IL-17A를 동시 처리하여 활성이 유도 된 HaCaT 세포주에 quercetin의 사이토카인 발현 조절 기능을 관찰한 결과에서도 quercetin이 염증성 사이토카인 및 케모카인의 유전자 발현이 유의적으로 억제함을 보여준다.
<h3>\( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 신호 기작에서 quercetin에 의한 IKB \( \alpha \) 및 STAT3 조절</h3> <p>\( \mathrm{TNF}-\alpha \) 와 함께 건선 유발 사이토카인으로 알려진 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)에 의한 신호조절에서 quercetin의 관여하는지 확인하고자 하였다. 먼 저, CCK-8 assay를 통해 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 및 quercetin에 의한 세포 독성을 확인하였다. \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주에 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)를 \( 100 \mathrm{ng} / \mathrm{mL} \) 농도로 처리했을 때 무 처리군 대비 \( 112.4 \pm 2.07 \% \) 세포 생존율을 보였으며, \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 와 quercetin \( (10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \) 을 동시 처리한 시험군에서는 무처리군 대비 \( 119.4 \pm 0.57 \% \) 세포 셍존율을 확인하여 추후 실험에 직용하였다. 건선 유발 사이토카인으로 알려진 IL-17<p>은 NF-kB 및 STAT3 기삭을 포함하는 신호 전달을 통해 각질 형성세포가 다양한 케모카인, 사이토카인 및 다른 염증성 매개체를 생성하도록 자극한다. 따라서 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리 조건에서 quercetin에 의한 \( \mathrm{IkB \alpha} \mathrm{mRNA} \) 변화를 관찰하였다. \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군은 무처리군 대비 \( 1.4 \pm 0.09 \) 배 증가하였고, \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 및 quercetin \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 동시 처리한 결과 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 단독 처 리군 대비 각각 \( 55.8 \pm 5.28 \% \) mRNA 발현이 감소하였다(Fig. 3B). 또한 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)로 유도된 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주에서 quercetin에 의한 STAT3 인산화 조절 여부를 관찰한 결과, 무처리군 대비 IL-\( 17 \mathrm{~A} \) 처리군에서 STAT3 단백질 인산화가 유도된 것을 확인하였고, quercetin은 유의성 있게 STAT3 단백질의 인산화를 억제하였다 (Fig. 3C). 인산화된 STAT3 단백질 정량 분석 결과, quercetin \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리군에서 약 \( 36.3 \pm 6.81 \% \) STAT3 단백질 인산화를 억제하였다(Fig. 3D). 따라서 quercetin은 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)로 유도된 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주에서 \( \mathrm{IkB \alpha} \mathrm{mRNA} \) 발현 뿐 아니라 STAT3 단백질의 인산화를 유의성 있게 억제하는 것을 알 수 있다.</p> <h3>\( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 로 동시 유도된 HaCaT 세포주에서 quercetin에 의한 염증성 사이토카인 역제</h3> <p>마지막으로 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주에 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 및 \(\mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)를 동시 처리하여 활성을 유도한 후, quercetin의 사이토카인 발현 조절 기능을 관찰하였다. \( \mathrm{IL}-1 \alpha \mathrm{mRNA} \) 발현랑을 확인한 결과, \( \mathrm{TNF}-\alpha \) \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군은 무처리군 대비 \( 2.5 \pm 0.07 \) 배 증가하였으며 quercetin \( 2.5,5,10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리군은 \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군 대비 각각 \( 30.6 \pm 8.43,30.6 \pm 5.87,10.3 \pm 6.51 \% \) 감소하였다 IL-1 \( \beta \)유전자 발현은 \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군에서 무처리군 대비 \( 2.0 \pm 0.21 \) 배 증가하였고, quercetin을 농도별로 처리한 결과 \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군 대비 각각 \( 35.7 \pm 5.67,39.0 \pm 5.48 \), \( 39.2 \pm 2.44 \% \) 감소하였다(Fig. 4B). IL-6 mRNA 발현량은 quercetin 단독 처리군에서 무처리군 대비 \( 13.5 \pm 0.68 \% \) 감소하였고, \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군은 무처리군 대비 \( 3.8 \pm 0.44 \) 배 증가하였다. 이때 quercetin \( 2.5,5,10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리군은 각각 \( 27.2 \pm 7.00,13.3 \pm 4.16,16.1 \pm 5.30 \% \) 감소하였다(Fig. 4C). TNF-\( \alpha \mathrm{mRNA} \) TNF- \( \alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군에서 무처리군 대비 \( 4.6 \pm 0.30 \) 배 상향 조절되었다. 동시에 quercetin \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도 처리군에서는 \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군 대비 \( 14.5 \pm 5.63 \% \) 감소하였지만 통계적 유의성은 나타나지 않았다(Fig. 4D). 마지막으로 CCL20 \( \mathrm{mRNA} \) 발현랑을 확인하였을 때, \( \mathrm{TNF}-\alpha / \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \) 처리군에서는 무처리군 대비 \( 8.7 \pm 0.53 \) 배로 발현이 증가하였고, 이때 quercetin을 농도별로 처리한 결과 \( 2.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도에서는 CCL20 \( \mathrm{mRNA} \) 발현 감소가 나타나지 않았으나 \( 5,10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도에서 각각 \( 34.0 \pm 2.23,54.6 \pm 0.81 \% \) 감소되었다(Fig. 4E). 이러한 결과들은 quercetin이 TNF- \( \alpha \) 또는 \( \mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)단독 처리 조건에서 나 타난 결과와 마찬가지로 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) / \(\mathrm{IL}-17 \mathrm{~A} \)유도 \( \mathrm{HaCaT} \)서 염증성 사이토카인 및 케모카인의 유전자 발현이 유의적으로 억제함을 보여준다.</p>