국립대전현충원에서 채집된 HCW0811은 암녹색을 띈 남조류로, 광학현미경으로 확인한 결과 원형의 세포가 다수 연결된 trichome으로 구성되어 있으며 점액질에 둘러싸여 커다란 군체를 형성하는 것을 확인하였다. HCW0811의 DNA 단편은 1,289 bp로 상동성 검색을 통해 Nostoc commune HK-02, N. commune YK-04, N. commune ACT709와 높은 유사성을 보였다. HCW0811은 Violetonostoc의 체색이 보라색이거나 Minunostoc의 세포 형태가 원통형인 것과는 다르게 암녹색이고 동그란 형태의 세포로 구성되어 있다. 이에 따라 HCW0811은 이형세포를 가지는 Nostocales에 속하며, N. commune과 유전적으로 가장 가까워 일본지역에서 서식하는 N. commune로 동정되었다. 그리고 MTT assay를 이용하여, HCW0811이 LPS에 의해 자극된 RAW264.7 세포의 생존에 어떤 영향을 미치는지 조사하였다.
<h2>통계처리</h2> <p>모든 실험은 3회 반복하여 측정하였으며 그 결과는 평균값 \( \pm \) 표준편차로 나타내었다. 또한 통계적 분석은 각 처리 구간의 유의성 \( \left ( { } ^ { * } p<0.05 ; { } ^ { * * } p<0.01 \right . \) )을 검증을 위해 분산분석(analysis of variance, ANOVA)후 student's t-test로 다중 비교를 시행하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>남조류의 동정 결과</h2> <p>국립대전현충원에서 채집한 HCW0811은 암녹색을 띈 남조류로 구분되며 광학현미경으로 원형의 세포가 여러 개 연결된 다수의 trichome이 점액질에 둘러싸여 몇 \( \mathrm { cm } \) 에 달하는 커다란 군체를 형성하는 것을 확인하였다. 또한 이러한 trichome 중에는 일반 세포보다 크기가 큰 이형세포(heterocyst)가 관찰되어 Nostocales (구슬말목)의 특징을 보였다. 남조류의 특이적 프라이머로 증폭된 약 \( 1.3 \mathrm { ~kb } \) 의 DNA 단편으로부터 확보된 HCW0811의 1,289 bp의 염기서열 정보를 토대로 NCBI database에서 상동성 검색을 수행한 결과, 일본에서 보고된 Nostoc commune HK-02와 N. commune YK-04 (GenBank no. AB694928), 멕시코에서 보고된 N. commune ACT709 등과 각각 \( 99.77,99.54,98.37 \% \) 의 높은 상동성을 보였다. HCW0811과 Nostoc 속의 종들 N. flagelliforme CCNUN1, N. sphaeroides CCNUN1 (CP024785), N. edaphicum CCNUC (CP045226)과는 pairwise distance가 약 \( 2 \% \) 내의 차이를 보여 Nostoc 속의 종 간에는 \( 16 \mathrm { ~S } \) 유전자의 변이가 매우 적었다. HCW0811는Nostocaceae (구슬말과)에 최근 새로 보고 된 속인 Violetonostoc minutum CHAB5840 (MN400069)과는 pairwise distance가 \(5.5 \% \), Minunostoc cylindricum CHAB 5843 (MH918062)와는 \( 7.1 \% \) 로 속간에는 종간에 비해 유전적으로 뚜렷이 구분되었다. 체색이 보라색인 Violetonostoc, 세포 형태가 원통형인 Minunostoc에 비해 HCW0811는 암녹색이고 동그란 형태의 세포 모양으로 뚜렷한 차이가 있었다. 따라서 HCW0811는 이형세포를 가지는 Nostocales에 속하며 커다란 군체를 형성하고 동그란 세포가 연결된 trichome으로 가득 차 있으며 N. commune과 유전적으로 일본지역에 서식하는 N. commune와도 가장 가까워 HCW0811를 남조류 Nostoc commune Vaucher ex Bornet & Flahault로 동정하였다. NCBI database에 등록한 16S 유전자 서열명은 Nostoc commune HCW20200728이고, 실험에 사용된 시료명은 HCW0811이다 (GenBank no. OL679911).</p> <h2>세포 독성 비교 측정</h2> <p>LPS에 의해 유도된 RAW264.7 세포에서 HCW0811이 세포 생존에 미치는 영향을 조사하기 위해 MTT assay를 시행하였다. HCW0811를 \( 12.5,25,50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 처리하여 24 시간 배양 한 후 세포 생존율을 조사한 결과, 모든 테스트 농도에서 \( 85 \% \) 이상의 세포 생존율이 확인되었다. 따라서 추후 실험은 \( 12.5,25,50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도를 사용 하여 진행하였다.</p>