\( f d x A \) 유전자의 비활성화가 \( f r x A \) 와 \( r d x A \) 유전자의 발현에 미치는 영향과 비활성화에 의한 over/under-expressed protein을 검색하였다. 본 연구의 목적은 위장질환의 원인균인 H. pylori를 퇴치하기 위한 기본바탕을 마련하는 것이다. 연구 결과 \( f d x A \) 유전자 비활성화에 의해 \( f r x A \) 유전자의 발현양이 증가하고 \( f d x A \) 가 H.pylori의 생존에 중요한 역할임을 확인하였으며, nifU-like protein 등의 over-expressed protein이 발견되었다.
<h2>\( f d x A \) 의 비할성화에 의한 \( f r \times A \) 유전자의 발현 조사</h2> <p>\( f d x A \) 유전자의 비활성화가 \( f r x A \) 와 \( r d x A \) 유전자의 발현에 어떤 영향을 미치는지를 보기 위하여 northern hybrid-ization을 수행하였다. Fig. 3A에서 보는바와 같이 wide-type \( 26695 \)에서는 frxA 유전자가 거의 발현되지 않지만, 이 균주에서 \( f d x A \) 유전자가 비활성화되면 발현양이 증가함을 볼 수 있었다. \( r d x \) A 유전자 또한 wide-type \( 26695 \) 에서 이미 발현되 고 있지만 \( f d x A \) 의 비활성화에 의하여 발현양이 탆이 증가함을 볼 수 있었다(Fig. 3B). 이는 \( f d x A \) 가 frxA와 \( r d x A \) 유전자의 발현을 조전하여 metronidazole 내성에 영향을 미친다는 중요한 자료이다. \( f d x A \) 유전자의 비활성화가 metronidazole 내성에 미치는 영향을 보기위하여 항생제 내성 정도(minimal inhibitory concentration (MIC))를 측정한 결과 wild-type은 \( \mathrm { MIC } \) 가 \( 3 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 을 나타낸 반면 \( f d x A \) 비활성화된 균주의 \( \mathrm { MIC } \) 는 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 을 보여 주었다(data not shown). 이는 fdxA의 비활성화로 metronidazole에 hyper-susceptible하게 된 것으로 Fig. 3A 에서 보는 것과 같이 frxA의 발현이 증가하여 나타나는 현상으로 생각된다.</p> <h2>\( f d x A \) 유전자의 비활성화에 의해 조절 받는 유전자의 검색</h2> <p>\( f d x A \) 유전자의 H. pylori 내에서의 역할 규명 및 유전자 발현 조절에 대한 연구를 위하여, 그리고 \( f d x A \) 유전자에 의해 조전 받으며 metronidazole 내성에 관여하는 새로운 유전자를 검색하기위해서 2-D electrophoresis와 MALDI-TOP-MS을 이용하여 \( f d x A \) 유전자의 비활성화에 의해 over-expressed protein과 underexpressed protein을 검색하고자 하였다. Fig. 4 는 2-D electrophoresis의 결과를 나타낸 것이며 그림 A 에서 원으로 나타낸 spot (1-3번)은 \( f d x \mathrm { ~A } \) 유전자의 비활성화에 의채 under-expressed protein이며 그림 B에서 원으로 나타낸 spot (4-7번)은 \( f d x A \) 유전자의 비활성화에 의해 over-expressed protein을 나타내었다. MALDI-TOP-MS의 결과 over-expressed protein으로 nifU-like protein (HP 0221), frxA (HP 0642), nonheme ferritin (HP 0653)과 아직 기능이 밝혀지지 않은 hypothetical protein (HP 0902) 등이 발견되었다(Table 1). 그리고 5'-methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteine nucleosidase (HP 0089), (3R)-hydroxymyristoyl ACP dehy-dratase (HP 1376) 과 thioredoxin (HP 1458)등이 under-ex-pressed protein으로 발견되었다(Table 2). 본 실험의 결과로 \( f d x A \) 는 \( r d x A \) 와 \( r d x A \) 뿐만 아니라 다른 주요. 대사과정에 필요한 유전자들의 발현도 조절하고 있다는 것을 알았다.</p> <h1>요 약</h1> <p>본 연구는 H. pylori에서 metronidazole 내성에 관여하는 유전자를 발견하고 이들 유전자들의 상호 조절 기전을 밦힘으로서 위장질환의 원인균인 H. pylori를 퇴치하기 위한 기본바탕을 마련하고자 수행 되었다. 우선적으로 metronidazole 내성을 조절하는 유전자인 \( f d x A \) (ferredoxin)에 의한 metronidazole 내성 조절 기전을 반히기 위하여 다음의 연구를 수행하였다. Type I 균주인 26695 균주의 \( f d x \) A 유전자에 chloramphenicol 내성 유전자를 삽입하여 결손돌연변이주를 구축하였다. \( f d x A \)의 비활성화에 의한 \( r d x A \) 및 \( f r x A \) 유전자의 발현을 알아보기 위하여 2-D electrophoresis와 MALDI-TOP- MS을 이용하여 \( f d x A \) 유전자의 비활성화에 의해 over-expressed protein과 un-der-expressed protein을 검색하였다. 본 실험의 결과로 type Ⅰ 균주인 26695 에서 \( f d x A \) 유전자를 비활성화시킨 결과 \( f r x A \) 유전자의 발현양이 증가함을 northern으로 확인하였으며, 또한 \( f d x \mathrm { ~A } \) 유전자의 downstream에 의치한 유전자들이 H. pylori의 생존에 중요한 역할은 한다는 것을 알 수 있었다. 또한 2-D electrophoresis와 MALDI-TOP-MS을 이용하여 \( f d x A \) 유전자의 inactivation에 의 해 over-expressed protein으로 nifU-like protein (HP 0221), frxA (HP 0642), nonheme ferritin (HP 0653) 와 아직 기능이 밝혀지지 않은 hypothetical protein (HP 0902) 등이 발견되었다. 그리고 5'-methylthioadenosine/S-adeno-sylhomocysteine nucleosidase (HP 0089), (3R)-hydroxymyr-istoyl ACP dehydratase (HP 1376)과 thioredoxin (HP 1458) 등이 under-expressed protein으로 발견되었다.</p>