이 연구에서는 식물섬유를 alkaline isomerization로 합성한 CLA의 색깔에 대한 세포독성을 연구하기 위해 시판 다이어트용 CLA(safflower seed oil로부터 합성)을 구입하여 CLA 색깔의 인체암세포와 정상세포에 대한 독성을 조사하였고, 황색 CLA 시료(c-CLA)를 감압증류하여 CLA를 제거(distilled CLA;d-CLA)하고 남은 황갈색 CLA (residual CLA; r-CLA)에 대한 세포독성을 d-CLA와 비교하였다.
<p>본 연구에서는 식물섬유를 alkaline isomerization로 합성한 CLA의 색깔에 대한 세포독성을 연구하였다. 다이어트용으로 시판되는 CLA제품(safflower seed oil로부터 합성)을 구입하여 CLA 색깔의 인체암세포와 정상세포에 대한 독성을 조사하였다. CLA 색소의 분리가 쉽지 않아 황색 CLA 시료(crudeCLA; c-CLA)를 감압증류하여 CLA를 제거(distilled CLA;d-CLA)하고 남은 황갈색 CLA (residual CLA; r-CLA)에 대한 세포독성을 d-CLA와 비교하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>황색 CLA 시료(c-CLA)는 시판 다이어트용 CLA (safflowerseed oil로부터 alkaline isomerization 하여 합성)를 구입하였다. 인체암세포인 유선암세포(MCF-7), 폐암세포(A-549), 직장암세포(HT-29), 전립선암세포(PC-3)와 정상세포인 인체신경모세포(SK-N-SH)는 한국세포주은행(Korea Cell Line Bank,Seoul, Korea)에서 구입하였다. Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640, Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham'F-12 nutrient mixture (DMEM/F-12), fetal bovine serum (FBS), penicillin \( (10,000 \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) / \) streptomycin \( (10,000 \mathrm { Lg } / \mathrm { ml } ) \), phosphate buffer saline (PBS), 0.25 \% trypsin-EDTA, fatty acid-free bovine serum albumin (BSA), 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)는 Amresco (Solon, OH)에서 구입하였고, dimethyl sulfoxide (DMSO), heptadecanoic acid (C17:0)는 SigmaAldrich (St. Louis, MO)에서 구입하였다. Cell culture dish 또는 plate는 Nunc (NY, USA)에서 구입하였다. CLA 증류는 경상대학교 공과대학 분리공정연구실의 감압회분증류 장치를 사용하였다. 그 외 시약은 1급 또는 특급을 사용하였다.</p> <h2>CLA의 감압회분증류</h2> <p>CLA의 증류는 내압을 \( 10 \sim 20 \mathrm { mmH } \mathrm { g } \)로 설정하고 내부온도를 \( 220-260 ^ {\circ } \) 조정하여 각 조건에서 30분 증류하였다. c-CLA시료로부터 d-CLA를 제거하고 r-CLA시료를 얻었다.</p> <h2>CLA 조성분석</h2> <p>CLA 시료에 함유된 이성체는 park 등[22]의 방법에 준하여 분석하였다. CLA \( (50 \mathrm { mg } ) \)를 internal standard인 heptadeca-noic acid \( (5 \mathrm { mg } ), 1.0 N sulfuric acid/methanol 용액 \( 3 \mathrm { ml } \)와 혼합한 후 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분 반응하여 methylation 시켰다. CLAmethyl ester는 FID와 fused silica capillary columnSupelcowax-10 ( \( 60 \mathrm { m } \) \( \times 0.32 \mathrm { ~mm } \), id. \( 25 \mu \mathrm { m } \) film thickness)이 장착된 GC (Hewlett-Packard 5890)로 분석하였다. Oventemperature는 \( 2 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \) 로 \( 180 ^ {\circ } \mathrm { C } -200 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 등온시키고 30분간 유지시켰다. Injection port 와 detector temperatures는 각각 \( 240 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 와 \( 260 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이었다. Nitrogen \( (99.9 \%) \)의 flow rate를 \( 2 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \)로 하여 carrier gas로 사용하였다. CLA 이성체는 CLA standard 이성체의 relative retention time과 비교하여 분석하였다.</p>