맥문동탕의 구성약재는 (주)휴먼허브에서 구입하여 사용하였으며, 맥문동, 진피, 반하, 백출, 복령, 소맥 등 다양한 약재를 이용하여 제조하였다. 특정 양의 약재와 10 배의 물을 섞어 3시간 동안 추출하는 과정을 3회 반복하여 추출물을 확보하였고, 확보된 추출물 중 \(10 \mathrm{~g}\)를 이용하여 n-hexane, ethyl acetate, butanol, water 등의 분획물을 만들었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 및 시약</h2> <p>본 연구에서 사용한 효능 측정 시약은 n-succinyl-(L-Ala) \( { } _ { 3 } \)-p-nitroanilide, collagenase from Clostridium histolyticum, potassium persulfate, L-ascorbic acid, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), 1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), 3-[4,5-dimethyl-thiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT)를 Sigma chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고, 맥문동탕의 구성약재는 2016년 2월 (주)휴먼허브(Gyeongsan-si, Korea)에서 구입하여 실험에 사용하였다. 지표성분의 경우 hesperidin(Sigma)에서 구입하였으며 narirutin은 한약진흥재단 천연물 물질은행에서 분양받아서 사용하였다. 세포 배양을 위한 시약으로는 penicillin/streptomycin, fetal bovine serum (FBS), dulbecco's modified eagle medium (DMEM)을 gibco BRL Co. (Grand Island, New York, USA)에서 구입하였으며, 주름억제 활성 측정을 위한 시약으로 위한 human tumor necrosis factor- \( \alpha \) with carrier, sterile \( ( \mathrm { TNF } - \alpha) \) 를 Cell Signaling사(Danvers, MA, USA)에서 구입하였고, 미백활성 검증에는 forskolin (Sigma)을 사용하였다. Primary antibody 및 secondary antibody는 Santa cruz biotechnology Inc. (Santa cruz, CA, USA)에서 구입하여 사용하였다. 주름 개선활성 측정을 위해 procollagen type I C-peptide kit (Takara Shuzo, Kyoto, Japan), 항산화활성 측정은 ROS-Glo \( ^ {\mathrm { TM } } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) assay kit (Promega, Madison, WI, USA)를 구입하였다.</p> <h2>시료 추출 및 용매 분획</h2> <p>맥문동탕 시료 제조는 맥문동(來門冬) \( 8 \mathrm { ~g } \), 진피(陳皮), 반하(龵夏), 백출(白尤), 복령(茯苓), 소맥(小來)을 각각 \( 4 \mathrm { ~g } \), 인삼(人䒧), 감초(甘草), 생강(牛盢)을 각각 \( 2 \mathrm { ~g } \), 오매(烏梅) 1개 준비하는 것을 1회 분량으로 하였다. 여기에 10 배의 물을 넣고 3시간씩 추출하는 방법으로 3회 반복하였다. 이 방법으로 3회 추출하고 \( (111 \mathrm { ~g } ) \) 시료 \( 37.28 \mathrm { ~g } \) 을 얻었으며 수율은 \( 33.6 \% \) 로 확인되었다. 확보된 추출물 중 \( 10 \mathrm { ~g } \) 으로 용매분획법을 통해 n-hexane \( (0.35 \) \( \mathrm { g } ) \), ethyl acetate \( (0.29 \mathrm { ~g } ) \), butanol (1.42 g) water (7.74 \( \mathrm { g } ) \) 분획물을 확보하였다.</p>