본 실험에서 시료로 사용한 청각은 가덕도산이며 동결건조기를 사용하여 건조한 후 \( 50 \mathrm{mesh} \) 이하로 분쇄한 것을 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동보관하면서 분석하였다. 청각추출물의 젖산균에 대한 생육 측정은 Lactobacillus plantarum KCTC3105 의 젖산균을 사용하였고, 특정 물질을 DMSO에 녹인 추출물을 농도별로 첨가하고 젖산균을 접종하여 일정 온도에서 24시간 배양 후 흡광도를 측정하였다. CMC를 기질로 하여 효소 반응 이후 유리된 환원당을 DNS 방법을 활용해 Cellulase 활성을 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 및 시료의 추출</h2> <p>청각은 가덕도산으로 동결건조기로 건조하여 \( 50 \mathrm{mesh} \) 이하로 분쇄한 것을 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동보관하면서 분석을 위한 시료로 사용하였다. 시료의 메탄올 추출물을 얻기 위하여 건조시료 일정량에 20배의 methanol (Hayman, England)을 가하여 \( 65^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2회 반복 추출하여 Whatman 여과지로 여과한 후 여과액을 rotary vacuum evaporator (EYELA, Japan)로 감압 농축하여 사용하였다. 추출물 \( 5 \mathrm{~g} \)을 \( 80 \% \)의 methanol에 녹여 hexane, ether, ethyl acetate, n-butanol을 이용하여 순차적으로 분획 하였으며 각 분획물의 항산화 실험결과 ethyl acetate에서 가장 높은 활성을 나타내어 모든 항산화 실험은 ethyl acetate추출물로 하였다.</p> <h2>청각추출물의 젖산균 생육 측정</h2> <p>청각추출물의 젖산균에 대한 생육 측정은 Lactobacillus plantarum KCTC3105 의 젖산균을 사용하였으며, MRS broth(peptone \( 10.0 \mathrm{~g} \), beef extract \( 10.0 \mathrm{~g} \), yeast extract \( 5.0 \mathrm{~g} \), glu-cose \( 20.0 \mathrm{~g} \), tween \( 801.0 \mathrm{ml}\), \(\mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4} ~2.0 \mathrm{~g} \), sodium acetate \( 5.0 \mathrm{~g} \), triammonium citrate \( 2.0 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MgSO}_{4}\cdot7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} ~0.2 \mathrm{~g} \), \( \mathrm{MnSO}_{4} \cdot 4 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} ~0.2 \mathrm{~g} \), distilled water \( 1.0 \mathrm{~L} \))에 DMSO에 녹인 청각 \( \mathrm{MeOH} \) 추출물을 농도별로 \( (\mathrm{\mu g} / \mathrm{ml}) \) 첨가하고 젖산균을 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양한 후 \( 600 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>청각추출물의 cellulase 활성 저해 측정</h2> <p>Cellulase 활성은 CMC를 기질로 하여 효소 반응 후에 유리된 환원당을 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) 방법으로 측정하였다. 증류수에 현탁시킨 \( 1.0 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}\)) CMC 용액 \( 0.5 \mathrm{ml} \)과 \( 200 \mathrm{mM} \) sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 7.0)\) \(0.25 \mathrm{ml} \), 효소용액 \( 0.25 \mathrm{ml} \)과 청각 ethyl acetate추출물을 농도별로 10 \( \mu \mathrm{l} \) 씩 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분 동안 반응시켰다. DNS 시약 \(1 \mathrm{ml} \)을 첨가하여 반응을 정지시키고 끓는 물에서 5분 동안 방치하여 발색시킨 후 \( 540 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하고 추출물 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도 차이를 백분율 (\(\%\))로 나타내었다.</p>