이 연구에서는 \(1 \mathrm{ml}\) 시료에 대해 여러 화학 물질을 첨가하고, 반응을 진행한 후, 원심분리하여 지질과산화 정도를 측정하였다. 반응 조건은 \( \mathrm{pH} 6. 6 \)의 인산 완충용액 및 potassium ferricyanide를 첨가하고, \(50^{\circ} \mathrm{C}\)에서 \(20 \mathrm{min}\) 동안 반응하는 것이다. 또한, 양성 대조군으로는 vitamin C와 vitamin E를 사용하였다. 추가로, HT1080 세포에 대한 ABGE의 세포 독성은 MTT 방법을 사용하여 측정하였다.
<h2>환원력 Assay</h2> <p>Oyaizu의 방법에 따라 측정하였다. 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( \mathrm{pH} 6.6 \)의 \( 200 \mathrm{mM} \) 인산 완충용액 및 \( 1 \% \)의 potassium ferricyanide를 각 \( 1 \mathrm{ml} \)씩 차례로 가하여 교반한 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)의 수욕상에서 \( 20 \mathrm{min} \) 동안 반응시켰다. 여기에 \( 10 \% \mathrm{~TCA} \) 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 가하여 \( 13,500 \times g \)에서 \( 15 \mathrm{~min} \) 동안 원심분리하여 얻은 상등액 \( 1 \mathrm{ml} \)에 증류수 및 ferric chloride 각 \( 1 \mathrm{ml} \)를 가하여 혼합한 후 \( 700 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로 \( 0.01 \% \) vita-min C를 사용하였다. 시료의 환원력은 시료 첨가군와 대조군의 흡광도 비를 \( \% \) 값으로 환산하여 나타내었다.</p> <h2>MTT assay</h2> <p>HT1080 세포는 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 및 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 95 \% \) 이상의 습도가 유지되는 배양기에서 \( 10 \% \) fetal bovine serum, \( 2 \mathrm{mM} \) gluta-mine, \( 10,000 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) penicillin \( / 10,000 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) streptomycin을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다. Hansen의 방법에 따라 HT1080세포에 대한 ABGE의 세포 독성을 MTT (3-(4,5- dimethyl-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)방법을 이용하여 측정하였다.</p> <h2>In vitro 지질과산화에 대한 항산화 활성</h2> <p>\( \mathrm{ABGE} \) 를 \( 10,50,100 \) 및 \( 500 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 linolenic acid emulsion과 혼합한 후에 \( 0.8 \mathrm{mM} ~ \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 및 \( 0.8 \mathrm{mM} ~ \mathrm{FeSO}_{4} \)를 혼합한 용액을 \( 5 \mathrm{hr} \) 동안 반응 후 \( 0.4 \% \) TBA를 첨가하고 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 2 \mathrm{hr} \) 반응시킨 다음 실온에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 동안 반응시켰다. 그 다음 15:1 비율의 \( \mathrm{n} \)-butanol : pyridine 용액을 \( 500 \mu 1 \) 첨가하고 \( 1,000 \times g \)에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 동안 원심분리한 후 상등액을 \( 532 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하여 지질과산화 정도는 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 \( \% \) 값으로 환산하여 나타내었다. 양성 대조 군으로는 \( 0.1 \% \) vitamin E를 사용하였다.</p>