Ginsenosides 분석, Phenolic acids 함량, 라디칼 소거 활성 등, 영양소 화합물과 항산화 활성에 관한 분석은 3회 측정된 평균 값을 바탕으로 통계 분석 시스템을 통해 진행되었다.
<h2>Ginsenosides 유도체 함량 분석</h2> <p>Ginsenosides 분석은 Jin 등의 방법을 약간 변형하여 HPLC 로 분석하였다. 시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 에 \( 70 \% \) 메탄올 \( 20 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 70 \( { }^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 1 시간 추출 후 원심분리하여 상등액을 0.45 \( \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과하였다. 이 과정을 1 회 더 반복하여 얻은 추출물을 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 감압 농축한 후 \( \mathrm{HPLC} \) water \( 2 \mathrm{~mL} \) 로 용해하여 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과해 분석하였다. 유속은 \( 1.0 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 로 유지하였고 시료 주입량은 \( 10 \mu \mathrm{L} \), TSKgel ODS- \( 100 \mathrm{z}(4.6 \times 250 \mathrm{~nm}, 5 \mu \mathrm{m} \), Tosoh Corporation, Tokyo, Japan) column과 diode array detector (DAD, HPLC 1200 series, Agilent Co., Santa Clara, CA, USA) 검출기를 사용하였다. 이동상 용매는 용매 A (HPLC water)와 용매 B(Acetonitrile)를 사용하였으며, 용매 B 기준으로 10min-\(19\%\), 15min-\(80\%\), 40min-\(77\%\), 90min-\(10\%\) 조건으로 \(203\mathrm{nm}\)에서 분석하였다.</p> <h2>Phenolic acids 및 flavonols 화합물 분석</h2> <p>Phenolic acids 함량은 Hwang 등의 방법을 약간 변형하여 분석하였다. HPLC (HPLC Agilent 1200 series Co., Forest Hill, Vic, Australia) 기기와 분석 칼럼은 \( \mathrm{Xbridge}^{\mathrm{TM}} \mathrm{C} 18 \) \( (4.6 \times 250 \mathrm{~nm}, 5 \mu \mathrm{m} \), Water Corporation, Milford, MA, USA) 를 사용하였고 칼럼 온도는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였다. 유속은 \(1 \mathrm{mL/min}\) 을 유지하였고, 시료의 주입량은 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 로 하였다. 분석 용매는 용매 A(0.2% acetic acid in HPLC water)와 용매 B (\(0.2\%\) acetic acid in acetonitrile)를 사용하였다. 이동상 조건은 용매 B 기준으로 0 min-\(0\%\), 5 min-\(5\%\), 10 min-\(15\%\), 19 min-\(10\%\), 20 min- \(15\%\), 28min-\(30\%\), 32min-\(40\%\), 37min-\(30\%\), 40 min-\(50\%\), 45min-\(60\%\), 55min-\(80\%\), 60min- \(90\%\) 및 65 min-\(100\%\) 로 유지하였으며 검출기는 DAD를 사용하여 UV \( 280 \mathrm{~nm} \)에서 분석하였다. Flavonols 함량은 UV \( 270 \mathrm{~nm} \)조건을 제외한 나머지는 phenolic acids 분석방법과 동일한 조건으로 분석을 진행하였다.</p> <h2>라디칼 소거활성 측정</h2> <p>라디칼 소거 활성은 Hwang 등의 방법을 변형하여 측정하였다. \( 1.5 \times 10^{-4} \) M DPPH 용액(in methanol) \( 0.8 \mathrm{~mL} \) 과 추출물 \( 0.2 \mathrm{~mL} \) 를 시험관에 분주하여 혼합 후 암실에서 30 분 정치시킨 후 분광 광도계를 사용하여 \( 525 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. ABTS 라디칼 소거 활성 또한 Hwang 등의 방법에 준하여 측정하였다. \( 7 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{ABTS}^{+} \)와 \( 2.45 \mathrm{mM} \)\( \mathrm{K}_{2} \mathrm{~S}_{2} \mathrm{O}_{8} \) 를 1: 1 비율로 섞어 암실에서 12-16시간 반응시킨 후 메탄올과 1:88 비율로 섞어 \( 732 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도 값이 \( 0.7 \pm 0.02 \) 가 되도록 조절한 \( \mathrm{ABTS}^{+} \) 용액을 사용하였다. 적당히 희석된 추출물 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 와 \( \mathrm{ABTS}^{+} \)용액 \( 0.9 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 혼합한 후 3 분간 정치 후 즉시 \( 732 \mathrm{~nm} \) 에서 분광광도계를 사용하여 흡광도를 측정하였다. Hydroxyl 라디칼 소거활성은 Ahn 등의 방법을 조금 변형하여 측정하였다. \( 10 \mathrm{mM} \)\( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}-\mathrm{EDTA} \), \( 10 \mathrm{mM} \)\( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 및 \( 10 \mathrm{mM} \) 2-deoxyribose를 각각 \( 0.2 \mathrm{~mL} \) 씩 시험관에 분주한 후 각 추출물 \( 1.4 \mathrm{~mL} \) 를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 4 시간 반응시켰다. \(2.8\%\) TCA와 \( 1 \% \mathrm{TBA} \) 를 각각 \( 1 \mathrm{~mL} \) 씩 분주하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 의 항온수조에서 2 시간 발색하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) 의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 활성 값은 실험구와 음성대조구의 흡광도를 백분율(\(\%\))로 나타내었다. 각 실험의 음성대조구는 시료 대신에 추출 용매를 이용하여 실험을 진행하였다. FARP 환원력은 Hwang 등의 방법을 약간 변형하여 측정하였다. \( 30 \mathrm{mM} \) acetate buffer \( (\mathrm{pH} \) 3.6), 20 \( \mathrm{mM} \mathrm{FeCl}{ }_{3} \) 및 TPTZ 시약(in \( 40 \mathrm{mM} \) HCL)을 10: 1: 1\( (\mathrm{v} / \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 의 비율로 혼합한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 15 분간 예비 반응을 시켜 FRAP 측정 시약을 준비하였다. 추출물 \( 0.05 \mathrm{~mL} \) 과 FRAP 측정 시약 \( 0.95 \mathrm{~mL} \) 를 시험관에 분주하여 교반 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 15 분간 반응시켜 \( 593 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>통계 분석</h2> <p>영양소 화합물과 항산화 활성은 3 회 측정의 평균 \( \pm \mathrm{SD} \) 로 표시하였다. 단, 길이와 무게는 50 개체를 측정한 후 평균 \( \pm \mathrm{SD} \) 로 표시하였다. 샘플 간의 유의미한 차이는 통계 분석 시스템(SAS) 소프트웨어(ver. 9.4; SAS institute, Cary, NC, USA)를 사용하는 Tukey의 다중 테스트 \( (p<0.05) \) 에 의해 결정되었습니다.</p>