Pyrolysis Mass Spectrometry(PyMS)는 다양한 생물들을 화학적으로 분류하는 도구로서 광범위하게 이용되어 왔다. 이 연구에서는 공단페수로부터 분리한 효모 균주들의 PyMS 분석 결과를 28S rDNA 염기서열을 활용한 분류와 비교하였다. 이를 통해 PyMS를 효과적인 미생물 탐색방법으로 활용하려는 목적을 가지고 있다.
<h1>서 론</h1> <p>최근 생명공학의 발전과 더불어 연구의 기초가 되는 미생물 균주의 확보에 대한 중요성이 널리 인식되고 있으며, 미생물 탐색에 대한 관심과 필요성이 증대되고 있는 실정이다. 고도의 부가가치를 창출하는 유용한 미생물 대사 산물탐색 분야는 기존의 의약품을 변형시켜 경쟁력 있는 신규 유도체로 만드는 방법과 새로운 골격의 신물질을 발굴하여 이용하는 두 가지 방향으로 진행되어 오고 있는데, 최근 들어서는 다수의 연구자가 후자의 방법으로 선회하고 있는 실정이다.</p> <p>기존 물질과 전혀 다른 골격을 가진 신물질의 발굴은 생산 미생물의 신규성이 요구되며, 신규로 미생물을 효과적으로 찾기 위해서는 희소한 분류군을 target으로 하여 중복되지 않는 다양한 균주들을 분리하여 분석할 필요가 있다 \( [1,2,3] \). 그러므로 균주 탐색과정에서 분리된 균주들을 빠른 시간 안에 적은 비용과 노력으로, 각 서로 다른 분류군 별로 구별(differnciation)하는 것은 탐색과정을 효율적으로 수행하기 위하여 매우 중요하다.</p> <p>Pyrolysis Mass Spectrometry (PyMS)는 whole-organusm fingerprinting의 한 방법으로 다양한 세균 \( [4,5,5] \), 곰팡이[7,8]와 식물 [9]에서 속 (genus), 종 (species), 아종 (subspec-ies)들을 그룹화하는 화학분류학적 수단 (chemotaxonomic tool)으로 널리 이용되어져 왔다. 이와 같은 목적으로 이용되는 PyMS분석은 시료 준비의 간편성, 짧은 분석시간, 저럼한 분석비용 등 다양한 장점들을 가져 균주 탐색에 적용시 많은 시간과 비용을 절감할 수 있으리라 사료되며, Kurtz- man과 Roonett \( [10,11] \) 및 Fell 등 [12]은 효모 균주를 대상으로 large subunit rDNA D1/D2 영역의 뉴클레오타이드 염기서열을 분석하여 호모 균주 동정을 위한 데이터 베이스를 구축한 바 있다.</p> <p>본 연구는 공단페수로부터 효모 균주들을 분리하여 각 균주의 PyMS 결과를 분석하고, 이 결과를 28S rDNA의 부분염기서열을 이용한 균주 동정 결과와 비교, 분석함으로써 적은 비용으로 단시간에 탐색한 균주들을 동일한 분류군끼리 그룹화 할 수 있는 도구로써 PyMS 분석결과를 평가하여 효율적인 신규미생물 탐색방법으로 응용하려는 데 그 목적이 있다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>균주분리</h2> <p>실험에 사용한 균주 분리는 다음과 같이 실시하였다. 대구 공단의 3개 지역에서 채집한 5개의 폐수 시료 각 \(1 \mathrm { ml } \) 을 멸균한 생리식염수 9ml과 현탁한 후, \( 10 ^ { 4 } \) 까지 연차적으로 희석한 다음, 각각의 현탁액 0.1ml을 YM agar 배지 ( \(1 \% \) glucose, \( 0.5 \% \) peptone, \( 0.3 \% \) yeast extract, \( 0.3 \% \) malt extract, \( 2 \% \) agar)에 도발하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 배양하였다. 실험에 사용한 \( \mathrm { YM } \) agar 배지는 세균의 생육을 방지하기 위하여 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { HCl } \) 을 침가하여 \( \mathrm { pH } \) 를 3.8로 조정하여 사용하였다 [13]. 3일 후 배양된 균주 각각을 YM agar 배지에서 single colony isolation 방법으로 순수분리하고, 광학현미경 관찰을 통해 실험에 사용할 16 개의 효모 균주들을 선별하였다.</p>