PH의 농도 변화와 분리균주의 항균물질의 각종 효소에 따라서 이것들이 배양 상등액에 미치는 영향을 알아보기 위해서 각각 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4시간 동안 처리와 \( \mathrm { pH } \) 7.0에 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 처리한 후의 항균 활성을 측정하였다.
<p>\( \mathrm { pH } \) 에 대한 영향을 알아보기 위하여 배양상등액을 \( 5 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { HCl } \) 과 \( 5 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { NaOH } \) 를 사용하여 \( \mathrm { pH } \) 3.0~9.0으로 조정한 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 시간 동안 처리한 후 항균 활성을 측정하였다.</p> <p>분리균주의 항균 물질의 각종 효소에 대한 영향을 알아보기 위하여 배양 상등액에 proteinase K(EC 3.4.21.64, Sigma Co., U.S.A.)는 \( 10 \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } \) \( 50 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NaCl } \) \( 5 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { EDTA } \) \( ( \mathrm { pH } \) 7.5), protease(type I, Sigma) 및 trypsin(EC 3.4.23.1, Sigma)은 \( 10 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { citrate } \) \( ( \mathrm { pH } \) 6.0), \( \alpha \)-chymotrypsin (EC 3.4.21.1, type I-S, Sigma)은 \( 10 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { phosphate } \) \( ( \mathrm { pH } \) 7.0), lipase(EC 3.1.1.3, type VII, Sigma)는 \( 50 \mathrm { mM } \) Tris \( \mathrm { HCl } 10 \mathrm { mM } \mathrm { CaCl } 2( \mathrm { pH } \) 7.0), \( \alpha \)-amylase(EC 3.2.1.1, Type VIII, Sigma)는 \( 50 \mathrm { mM } \) sodium phosphate \( 10 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NaCl } \) \( ( \mathrm { pH } \) 7.0)에 \( 4 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 의 농도로 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 처리한 후에 잔존하는 항균 활성을 측정하였다. 이때 대조구로서는 동일한 반응조건에서 효소만을 제외한 것으로 삼았다. 잔존하는 항세균 및 항진균 활성 측정은 paper disk method를 사용하여 감수성 세균으로 B. subtilis ATCC 6633을 감수성 곰팡이로는 A. petrakii PF-1을 사용하였다.</p>