본 논문에서 진행한 동물 실험은 Sprague-Dawley계 랫트를 실험체로 선정하였으며, 실크 피브로인(silk fibroin : Mw 500)을 각각 \( 2.5 \) 및 \( 5.0 \mathrm{~g} / \mathrm{kg} B W \) 가 되도록 사료에 첨가하여 사육실험을 진행하였다. 사료의 조성에는 cholesterol \( 0.5 \% \) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \) 를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였으며, 이후 뇌세포의 분획에는 균질 완충용 핵(\(1.15\%\) \(\mathrm{KCl}\)/ \( 10 \mathrm{mM} \) phosphate buffer/\( 5 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm{pH} \) 7.4)을 사용하였다. 활성산소 생성량의 측정은 aldehyde가 산성용액에서 thiobarbituric acid와 반응하여 발색되는 것을 이용하여 진행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>동물실험 및 사료조성</h2> <p>한국화학연에서 구입한 Sprague-Dawley계 랫트(male, \( 160 \pm 10 \mathrm{~g} \) )를 구입하여 본 대학 동물사육실에서 2주동안 예비사육한 다음, 7 마리씩 3군으로 나누어 실험용 기본사료(control group)로써 사육하면서 농촌진홍청 잠사연구부에서 할애받은 실크 피브로인(silk fibroin : Mw 500)을 각각 \( 2.5 \) 및 \( 5.0 \mathrm{~g} / \mathrm{kg} B W \) 가 되도록 사료에 첨가한 실험그룹(SFP-2.5 및 SFP-5.0 groups)으로 하여 6주간 사육실험을 행하여 뇌조직중의 활성산소의 생성 및 제거효소의 활성에 미치는 실크 피브로인(SFP)의 영향을 평가하였다. 동물사육실은 항온항습 \( \left(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 65 \pm 2 \% \mathrm{RH}\right) \) 하에서 12 시간 싸이클(06:00 18:00)로 명암이 자동 조절된다.</p> <h2>조제사료의 조성</h2> <p>본 실험에 사용한 사료조성은 전보와 같이 탄수화물 \( 57.8 \% \) ( \( \alpha \)-corn starch: \( 44.5 \%+ \) sucrose \( 13.3 \%) \), 단백질 \( 16.0 \% \) (sodium-free casein), 지질 \( 18.0 \% \) (lard 18.0\%), 비타민과 무기질(AIN-76 mixture) 각가 \( 1.0 \%, 3.5 \% \), 그리고 섬유질 \( 3.0 \% \), DL-methionine \( 0.3 \% \), choline chloride \( 0.2 \% \) 를 첨가하였으며, 여기에 cholesterol \( 0.5 \% \) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \) 를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였다. 실험그룹의 사료조성은 실크 피브로인(SFP)를 하루에 각각 \( 2.5 \) 및 \( 5.0 \) \( \mathrm{g} / \mathrm{kg} \mathrm{BW} \) 가 섭취되도록 \( 2.5 \% \) 및 \( 5.0 \% \) 의 SFP 를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 2.5 \% \) 및 \( 5.0 \% \) 씬 제외하고 조제하였다.</p> <h2>뇌세포 획분의 분획</h2> <p>뇌세포의 분획은 저자 등의 방법에 따라 균질 완충용 핵(1.15\% KCl/ \( 10 \mathrm{mM} \) phosphate buffer/5 mM EDTA, \( \mathrm{pH} \) 7.4)을 사용하여 mitochondria, microsomes 및 cytosol 획분을 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 정량하였다.</p> <h2>활성산소의 생성량 측정</h2> <p>뇌조직획분의 히드록시 라디칼 \( (\cdot \mathrm{OH}) \) 의 함량은 deoxy-ribose의 파괴정도에 따라 hydroxyl radical 생성 정도를 측정하는 방법으로서, 뇌조직획분의 산소대사산물에 의해 deoxy-ribose가 파괴되어 aldehyde가 생성되며, 이 aldehyde는 산성용액에서 thiobarbituric acid와 반응하여 발색되는 것을 이용한 Halliwell 등의 방법에 따라 측정하였다. 뇌조직획분중의 수펴옥시드 라디칼(superoxide radical : \( \mathrm{O}_{2}{ }^{\prime} \) )의 생성량은 McCord 등과 Chan 등의 방법에 따라 superoxide dismutase를 억제할 수 있는 ferricytochrome C 의 환원속도를 측정하였다. \( 0.1 \mathrm{mM} \) EDTA를 함유한 인산완충용액(pH 7.8) \( 420 \mu \Downarrow \) 에 cyanide의 농도가 \( 50 \mu \mathrm{M} \) 이 되도록 \( 20 \mathrm{mM} \) cyanide 용액을 가한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 분간 가온하였다. 이 용액에 cytosol \( 300 \mu \) 쏴와 \( 0.1 \mathrm{mM} \) cytochrome C \( 50 \mu \) 를 넣어 분광광도계를 사용 \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 홉광도를 시간에 따라 측정하였다. 이때 cytochrome C 의 양은 분자흡광계수 \( 19,500 \mathrm{M}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1} \) 로 계산하였다.</p>