저산소증에서 AGR에 의하여 apoptosis 관련 유전자 중 표현이 증가된 유전자는 7종이고 가장 많이 증가한 유전자는 testis-enhanced gene transcript 이였다. 감소된 유전자는 6종이였고 가장 많이 감소된 유전자는 death-associated protein kinase으로 나타났다. 스트레스 반응 관련 유전자 표현 변화에서 저산소증에서 \( \mathrm{AGR} \) 에 의하여 9종류의 표현이 증가되었으며 16종류는 감소되었고, 저 산소증에서는 신호전달 관련 유전자 중 25종류는 표현이 증가, 26종류는 감소되었다.
<h1>결 과</h1><h2>저산소증에서 \( \mathrm{AGR} \) 에 의한 유전자표현 변화의 개요</h2><p>저산소증에서 AGR의 신경세포 보호 기전을 알아보기 위하여 microarray 기법으로 \( A G R \)가 유전자 표현에 미치는 영향을 조사하였다. 본 연구에 사용한 흰쥐 대뇌신경세포는 저산소증 유발 후 1 일에는 거의 영향을 받지 않다가 3일 후부터 급격히 사망하기 시작한다. 따라서 저산소증 유발 후 1 일경에는 많은 유전자의 표현이 달라질 것으로 예상되어, 본 실험에서는 DIV12의 배양세포에 AGR \( 10 \mathrm{ug} / \mathrm{ml} \) 를 처리하고 DIV14에 저산소증을 유발하였으며, DIV15에 세포로부터 guanidinium thiocyanate 방법으로 total RNA를 분리하였다. 분리한 total RNA를 capillary electrophoresis로 전기영동하고(Fig. 1A, left panel) scan하여(BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, California) RNA 품질을 조사한 결과 대조군과 실험군 모두 RNA 분해가 거의 일어나지 않았으며, rRNA ratio(28S/18S)가 \( 2.0 \) 이상으로 매우 좋은 상태임을 확인할 수 있었다.</p><p>Microarray 전문회사인 Digital Genomics(서울)에 의뢰하여 TwinChipTM Rat-5K microarray chip을 형광사진으로 분석하였다. 대조군의 \( \mathrm{cDNA} \) 는 \( \mathrm{Cy} 3 \) 형광물질(green)로, 실험군은 Cy5 형광물질(red)로 표지하였다. TwinChip의 upper array와 lower array의 형광이미지가 매우 유사하여 재현성이 높음을 알 수 있었다(Fig. 1B). MA plot에서 보면[M = \( \log 2(\mathrm{R} / \mathrm{G}), \mathrm{A}=\{\log 2(\mathrm{R} \times \mathrm{G})\} / 2] \), 대부분의 \( \mathrm{M} \) 값이 \( -0.5 \) 에서 \( +0.5 \) 사이로서 \( 40 \% \) 정도 이내의 증감을 나타내었다.</p><p>이 가운데 Global M 값이 \( +0.2 \) 이상 즉, \( 14 \% \) 이상 표현이 증가된 유전자는 750여 종, \( -0.2 \) 이하 즉, \( 14 \% \) 이상 표현이 감소된 유전자는 700여 종이었다.</p><h2>Apoptosis 관련 유전자 표현 변화</h2><p>저산소증에서 AGR에 의하여 apoptosis 관련 유전자 중 Global M 값이 \( \pm 0.2 \) 이상 즉, \( \pm 14 \% \) 이상 표현이 증감된 유전자는 13종류로, 그 중 7종류는 표현이 증가되었고, 6종류는 감소되었다(Table 1). 표현이 증가한 유전자 중 testis-enhanced gene transcript (TEGT) 가 가장 많이 증가하였다 (Global M = 0.43). 다른 증가한 유전자로는 Retinoic acid receptor al-pha(RARa, Global \( \mathrm{M}=0.36 \) ), aryl hydrocarbon re-ceptor(AhR, Global \( M=0.35 \) ), transforming growth factor- \( \beta \) (TGF \( \beta \) )-inducible early response gene (TIEG, Global \( M= \) \( 0.32 \) ), defender against death(Dad, Global \( M=0.27) \), tumor protein p53(Global M = 0.24), 그리고 Akt1(Global M =0.22) 등이 있었다. 반면에 AGR에 의하여 Global M 값이 \( 0.2 \) 이상으로 표현이 감소되는 유전자 중 가장 많이 감소된 유전자는 death-associated protein kinase (DAPK)로 나타났다(Global M \( =0.55) \). 이 밖에도 caspase 2 , programmed cell death \( 8(p d c d 8) \)유전자의 포현이 감소하였다(각각 Global \( \mathrm{M}=0.26 \) 및 \( 0.28 \) ).</p><h2>세포주기 관련 유전자 표현 변화</h2><p>저산소증에서 AGR에 의하여 세포주기 관련 유전자 중 11 종류의 표현이 증가되었으며 6종류는 감소되었다(Table 4). 이 중 Akt2가 가장 많이 증가되었다(Global \( M=0.62) \).</p><h2>스트레스 반응 관련 유전자 표현 변화</h2><p>저산소증에서 \( \mathrm{AGR} \) 에 의하여 9종류의 스트레스 반응 관련 유전자는 표현이 증가되었으며 16종류는 감소되었다(Table 5).</p><h2>신호전달 관련 유전자 표현 변화</h2><p>저산소증에서 AGR에 의하여 신호전달 관련 유전자 중 25종류는 표현이 증가되었으며(Table VI), 26종류는 감소되었다(Table 6).</p><h2>Transcription 관련 유전자 표현 변화</h2><p>저산소증에서 AGR에 의하여 transcription 관련 유전자 중 15종류는 표현이 증가되었으며, 6종류는 감소되었다(Table 7).</p>