0.5% 난용성 인산염이 첨가된 sucrose minimal 배지에 균주를 접종하고, 180rpm으로 96~108시간 동안 배양하며 12시간 마다 유리 인산 농도와 pH 변화를 측정하고, 원심분리 후 mo-lybdate reagent와 ascorbic acid를 첨가하여 50\(^\circ \mathrm{C}\)에 20분간 반응시킨 뒤 820nm에서 유리 인산의 양을 측정하였다.
<h2>인산가용화능 측정</h2> <p>\( 300 \mathrm { ml } \) 삼각 풀라스크에 각종 난용성 인산염이 \( 0.5 \% \) 첨가된 sucrose minimal \( \left ( \mathrm { SM } \right . \) )배지 (sucrose \( 10 \mathrm { ~g } , \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } 0.27 \)g, \( \mathrm { KCl } 0.2 \mathrm { ~g } , \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 0.1 \mathrm { ~g } , \mathrm { MnSO } _ { 4 } \cdot 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 1 \mathrm { mg } \), \( \mathrm { FeSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 1 \mathrm { mg } \), yeast extract \( 0.1 \mathrm { ~g } \), per liter) \( 100 \mathrm { ml } \) 에전 배양한 균주를 접종한 후, \( 96 \sim 108 \) 시간동안 180 rpm으로 진탕배양하면서 배양 상등액내의 유리 인산 농도와 \( \mathrm { pH } \) 변화를 12 시간 마다 측정하였다. 균체배양액 \( 1 \mathrm { ml } \) 을 eppendorf tube에 옦겨 담은 후 소형원심분리기로 \( 5,500 \mathrm { rpm } , 5 \) 분간 실 온에서 원심분리하였다. 원심분리 후 일정량의 상등액에 멸균수를 첨가하여 총 200 ul가 되게 한 후, 여기에 신선한 mo-lybdate reagent \( \left (6 \mathrm { ~N } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } : 2.5 \% \right . \) ammonium molybdate: \( 10 \% \) ascorbic acid: \( \left . \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } = 1: 1: 1: 2 \right ) 800 \mu 1 \) 를 첨가하여 \( 50 \mathrm { C } \) 에 서 20 분간 반응시킨 다음, UV-VIS spectrophotometer (Ultrospec 2100 pro, Amersham)를 이용하여 흡광도 820 \( \mathrm { nm } \) 에서 유리 인산의 양을 측정하였다.</p>