화합물 1은 negative FAB-MS에 의해 분자량을 444로 결정하였으며 IR 스페트럼에 의해 수산기, 카보닐기, 이중결합이 있는 것으로 확인되었다. 또한 이 화합물은 sesquiterpene monoglycoside인 것과 육탄당의 당을 가지고 있다고 예상할 수 있다. 또한 이 화합물의 당이 \(\beta\)-glucopyranose임을 확인하였고 결과적으로 이 화합물은 cyclofarnesane sesquiterpene glucoside 이다.
<h2>\( \mathrm { AGS } \) 와 \( \mathrm { HepG } 2 \) 세포에 대한 세포독성 실험</h2> <p>위 연구에 대한 재료 및 방법은 이전 실험과 동일하게 실시하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <p>화합물 \(1 \)은 negative FAB-MS에서 \( \mathrm { m/z } ~443 \) \( \mathrm { [M } \)- \( \mathrm { H] } ^ { - } \) 의 분자이 온 peak가 관측되어 분자량을 444로 길정하였다. IR 스펙트럼으로부터 수산기 \( \left (3310 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \right ) \), 카보닐기 \( \left (1690 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \right ) \), 이중결합 \( \left (1620 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \right ) \)이 있는 것으로 확인되었다. \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)- \( \mathrm { NMR } \)( \(400 \mathrm { MHz } \), \( \mathrm { MeOD } , \delta_ {\mathrm { H } } \)) spectrum에서 세 개의 olefin methine proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } 7.83,1 \mathrm { H } , \mathrm { d } , J=16.0 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -4 ; \delta_ {\mathrm { H } } 6.35,1 \mathrm { H } \right . \), d, \( \left .J=16.0 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -5 ; \delta_ {\mathrm { H } } 5.80,1 \mathrm { H } , \mathrm { s } , \mathrm { H } -2 \right ) \)이 관측되었는데, 이 때 \( J=16.0 \mathrm { ~Hz } \)으로부터 trans 구조를 갖는 이중결합이 존재함을 예상하였다. 한 개의 oxygenated methine proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } \right . \) \( 4.23,1 \mathrm { H } , \mathrm { m } , \mathrm { H } -3 ^ {\prime } \) ), 한 개의 oxygenated methylene proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } 3.80,1 \mathrm { H } , \mathrm { d } , J=7.2 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -7 ^ {\prime } \mathrm { a } ; \delta_ {\mathrm { H } } ~3.72,1 \mathrm { H } \right . \), d, \( J=7.2 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -7 ^ {\prime } \mathrm { ~b } ) \), 두 개의 methylene proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~2.15 \right . \), \(1 \mathrm { H } \), dd, \( J=13.6,6.8 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -2 ^ {\prime } \mathrm { a } ; \delta_ {\mathrm { H } } ~1.95,1 \mathrm { H } \), overlapped, \( \left . \mathrm { H } -4 ^ {\prime } \mathrm { a } ; \delta_ {\mathrm { H } } ~1.83,2 \mathrm { H } , \mathrm { m } , \mathrm { H } -2 ^ {\prime } \mathrm { b } , 4 { } ^ {\prime } \mathrm { b } \right ) \), 세 개의 methyl proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~2.00,3 \mathrm { H } , \mathrm { s } , \mathrm { H } -6 ; \delta_ {\mathrm { H } } ~1.15,3 \mathrm { H } , \mathrm { s } , \mathrm { H } -9 ^ {\prime } ; \delta_ {\mathrm { H } } ~0.92 \right . \), \( \left .3 \mathrm { H } , \mathrm { s } , \mathrm { H } -10 ^ {\prime } \right ) \) 이 관측되었다 그 중 \( \delta_ {\mathrm { H } } ~2.00 \)에서 관측된 methyl기는 allyl methyl기로 예상하였다. 또한 당에서 유래한 하나의 hemiacetal proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~4.35,1 \mathrm { H } , \mathrm { d } , J=8.0 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -1 " \right ) \)과 네 개의 oxygenated methine proton signal \( \left ( \delta_ { H } ~3.34,1 \mathrm { H } \right . \), overlapped, H-3; \( \delta_ {\mathrm { H } } ~3.32,1 \mathrm { H } \), overlapped, H-5; \( \delta_ {\mathrm { H } } ~3.31 \), \(1 \mathrm { H } \), overlapped, H-4; \( \delta_ {\mathrm { H } } ~3.10,1 \mathrm { H } \), dd, \( J=7.6,7.6 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } - \) \( 2) \), 하나의 oxygenated methylene proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~3.86,1 \mathrm { H } \right . \), dd, \( J=12.0,5.6 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } -6 " \mathrm { a } ; \delta_ {\mathrm { H } } ~3.67,1 \mathrm { H } \), dd, \( J=12.0,5.6 \) \( \mathrm { Hz } , \mathrm { H } -6 ^ {\prime \prime } b \) )이 관측되었다. 이를 통해 이 화합물을 sesquiterpene monoglycoside로 예상 할 수 있었으며, 당은 육탄당으로 예상하였다. \( { } ^ { 13 } \mathrm { C } - \mathrm { NMR } \left (100 \mathrm { MHz } , \mathrm { MeOD } , \delta_ {\mathrm { C } } \right ) \) spectrum에서 총 탄소수가 21개임을 확인하였으며, 이를 통해 탄소 수 15 개의 sesquiterpene에 육탄당이 하나 결합되어있는 배당체 임을 확인하였다. 당의 chemical shift \( \delta_ {\mathrm { c } } ~103.1 \left ( \mathrm { C } -1 ^ {\prime \prime } \right ), 78.1 \left ( \mathrm { C } -3 ^ {\prime \prime } \right ), 78.0 \) (C-5"), \( 75.1 \left ( \mathrm { C } -2 ^ {\prime \prime } \right ), 71.7 \left ( \mathrm { C } -4 ^ {\prime \prime } \right ), 62.8 \left ( \mathrm { C } -6 ^ {\prime \prime } \right ) \) 와 anomer proton signal 의 결합정수 \( (J=8.0 \mathrm { ~Hz } ) \)로부터 이 당이 \( \beta \)-glucopyranose임을 확인하였다. 비당부에 있어서 하나의 carboxyl \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~166.4, \mathrm { C } -1 \right ) \), 하나의 olefin quaternary \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~145.3, \mathrm { C } -3 \right ) \), 세 개의 olefin methine \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~132.6, \mathrm { C } -4 ; \delta_ {\mathrm { C } } ~132.2, \mathrm { C } -5 ; \delta_ {\mathrm { C } } ~124.5, \mathrm { C } -2 \right ) \), 두 개의 oxygenated quaternary \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~49.3, \mathrm { C } -1 ^ {\prime } ; \delta_ {\mathrm { C } } ~83.2, \mathrm { C } -8 ^ {\prime } \right ) \), 하나의 oxygenated methine \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~74.0, \quad \mathrm { C } -3 ^ {\prime } \right ) \), 하나의 oxygenated methylene \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } \right . \) 77.2, \( \left . \mathrm { C } -7 ^ {\prime } \right ) \), 하나의 quaternary \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } \right . \) 87.6, \( \left . \mathrm { C } -5 ^ {\prime } \right ) \), 두 개의 methylene \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~42.9, \mathrm { C } -2 ^ {\prime } ; \delta_ {\mathrm { C } } ~42.8, \mathrm { C } \right . \) - \( \left .4 ^ {\prime } \right ) \), 세 개의 methyl \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~20.8, \mathrm { C } -6 ; \delta_ {\mathrm { C } } ~19.7, \mathrm { C } -9 ^ {\prime } ; \delta_ {\mathrm { C } } ~16.3 \right . \), \( \mathrm { C } -10 ^ {\prime } \) ) carbon signal 들을 확인하였다. 부분 구조는 2D-NMR (gCOSY, NOESY, gHSQC and \( \mathrm { gHMBC } \) )를 통해 결정되었다. 인접한 수소와 탄소의 correlation을 보여주는 gHMBC 데이터에서는 두 개의 olefin methine proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~7.83 \right . \), H-4; \( \left . \delta_ {\mathrm { H } } ~6.35, \mathrm { H } -5 \right ) \)이 oxygenated quaternary carbon signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } \right . \) 83.1, C-8')과 cross peak를 보여 하나의 vinyl group이 C-8'에 연결되어 있음을 알 수 있었다. 또한 하나의 olefin methine proton signal \( \left . \delta_ {\mathrm { H } } ~6.35, \mathrm { H } -5 \right ) \)이 olefin quaternary carbon signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~145.3, \mathrm { C } -3 \right ) \)과 cross peak를 보이고, 하나의 olefin methine proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~5.80, \mathrm { H } -2 \right ) \)이 olefin methine carbon signal ( \( \delta_ {\mathrm { C } } \) 132.6, C-4)과 cross peak를 보임에 따라 두개의 olefin methine이 공역화 되어 있음을 알 수 있었다. 하나의 oxygenated methylene proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~3.80, \mathrm { H } -7 ^ {\prime } \mathrm { a } \right ) \)이 각각 oxygenated quaternary carbon \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~49.3, \mathrm { C } -1 ^ {\prime } \right ) \), oxygenated quaternary carbon signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~83.2, \mathrm { C } -8 ^ {\prime } \right ) \), methylene carbon signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~42.8, \mathrm { C } -4 ^ {\prime } \right ) \) 과 cross peak를 보여 oxygenated methylene이 \( \mathrm { C } -5 ^ {\prime } \) 에 연결되어있고, \( O \)-linkage로 \( \mathrm { C } -1 ^ {\prime } \)에 연결되어 있음을 확인하였다. 이를 통해 이 화합물이 cyclofarnesane sesquiterpene glucoside임을 알 수 있었다. 또한 anomer proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~4.35, \mathrm { H } -1 ^ {\prime \prime } \right ) \)이 oxygenated methine carbon \( \left ( \delta_ {\mathrm { C } } ~74.0, \mathrm { C } -3 ^ {\prime } \right ) \)과 cross peak를 보임에 따라 \( \beta \)-glucopyranose가 C- \( 3 ^ {\prime } \)에 연결되어있음을 확인하였다. NOESY spectrum에서는 methyl proton signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~2.00, \mathrm { H } -6 \right ) \)이 olefin methine signal \( \left ( \delta_ {\mathrm { H } } ~5.80 ~ \mathrm { H } -2 \right ) \)과 cross peak를 보이지 않음에 따라 C-2와 C-3의 이중결합을 \( E \)구조로 결정하였다. 화합물 1에 대한 \( \mathrm { CD } \) 값을 측정하였으며, 그 결과 \( 263 \mathrm { ~nm } \) 에서 positive cotton effect (CE) 가 나타났으며, \( 246 \mathrm { ~nm } \) 에서 negative \( \mathrm { CE } \) 가 나타났다. 따라서 화합물 1의 절대구조를 같은 구조의 문헌값과 비교해 \( 1 ^ {\prime } R, 3 ^ {\prime } S \), \( 5 ^ {\prime } R, 8 ^ {\prime } S, 2 E, 4 E \) 로 확인하였다. 위의 data들을 종합하여 최종적으로 화합물 1을 \( (1 ^ {\prime } R, 3 ^ {\prime } S \), \( 5 ^ {\prime } R, 8 ^ {\prime } S, 2 E, 4 E) \)-dihydrophaseic acid \( 3 ^ {\prime } \)- \( O \)- \( \beta \)-D-glucopyranoside로 구조 동정 하였다. 이 화합물은 2011년 연꽃의 씨앗으로부터 치음 분리 보고 되었으며, 꼬리겨우살이 \((L. \) tanakae \() \)로부터는 이번 실험에서 처음 분리 되었다. 이 화합물에 대한 활성은 아직까지 보고된 바 없다.</p>