U2OS 세포에 코발트 염을 처리하여 생산된 XOR의 활성이 HDL에 의해 저해되는 것을 확인하였다. 코발트 염 처리 후 XOR의 활성은 대략 \(245 \pm 11\) \( \mathrm { units/mg } \)이었지만, HDL 처리 후에는 약 \(156 \pm 8\) \( \mathrm { units/mg } \)로 감소하였다. 또한, HDL은 항산화 효소인 SOD, CAT, GPx의 활성에 영향을 미치는 것으로 파악되었다.
<h2>HDL의 xanthine oxidase (XO) 활성 저해 효과</h2> <p>미토콘드리아의 전자전달계, NADPH 산화효소 복합체 (NADPH oxidase complex), 그리고 XO 등은 ROS의 생성 조절기전에 관여하는 것으로 보고되고 있다. 이 중 XO는 생체 내 퓨린대사에 관여하는 효소로써 xanthine 또는 hypo-xanthine으로부터 요산을 형성한다. 또한 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)는 XO의 활성을 증가시키고 일산화질소 합성효소(nitric oxide synthase, NOS)를 저해하는 것으로 알려져 있다. 이러한 보고를 바탕으로 U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 처리하여 XO의 활성을 증가시킨 후, 증가한 XO의 활성에 대해 HDL의 저해효과를 확인하였다. U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 6시간 동안 함께 처리하여 XO의 활성을 측정한 결과 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 활성이 증가되었던 XO가 HDL에 의해 농도 의존적으로 감소하였다(Fig. 2B). U2OS 세포에 \( 200 ~ \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 처리하였을 경우 \( 245 \pm11 \) \( \mathrm { units/mg } \)의 활성을 나타내었던 XO가 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL에 의해 \( 156 \pm 8 \) \( \mathrm { units/mg } \)으로 활성이 감소하였다 (Fig. 2B). 이상의 결과 HDL의 항산화 효과는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 생성된 XO의 활성 저해를 통해서임을 알 수 있었다.</p> <h2>HDL의 antioxidant enzymes (SOD, CAT, GPx) 활성에 대한 효과</h2> <p>Free radical로부터 세포를 보호하는 항산화 효소로서 SOD, catalase (CAT), 과산화효소 및 GPx 등 내인성 항산화 효소가 알려져 있으며, 또한 glutathione, 토코페롤 등의 항산화 물질은 세포 내에서 생성되는 free radical을 제거하는 ROS scavenger로 알려져 있다. HDL이 항산화 효소의 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해 U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \) 및 HDL을 처리하여 SOD, CAT, 그리고 GPx 각각에 대한 효소 활성을 측정하였다.</p> <p>\( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 등의 ROS를 제거하여 세포의 항상성을 유지하는 CAT는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 \( 2 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)와 \( \mathrm { O } _ { 2 } \)로 가수분해하는 효소로 알려져 있다. U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 생성이 증가되었던 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)가 HDL에 의해 감소하였는데, 이 과정에서 CAT의 활성이 조절 되었는지를 Aebi의 방법에 따라 측정하였다. CAT의 활성은 1 초당 단백질 \( 1 \mathrm { mg } \)에 대해 분해되는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 양을 pmole 단위로 표기하였다. U2OS 세포에 \( 200 ~ \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 농도 별로 12시간 동안 함께 처리한 결과 HDL의 농도 의존적으로 CAT의 활성이 증가하였으며, \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 \( 35 \% \) 감소되었던 CAT의 활성이 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL에 의해 \( 12 \% \)의 감소율을 보였다. 이 결과는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 감소된 CAT의 활성이 HDL에 의해 증가하여 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 가수분해를 촉진하는 것으로 사료된다(Table 1).</p>