positive clone들은 주로 내부에 존재하는 exon 유무를 조사해 목적 유전자의 분리 가능성을 파악했다. 게놈 전반적으로 산재한 반복서열과 Universal hook이 재조합 여부를 판단할 수 있게 한다. TAR cloning 법으로 얻은 positive clone들이 \( 40 \mathrm { ~Kb } \) 이상의 크기를 갖으며 9개의 전체 exon 영역을 지니고 있음을 확인했다.
<h2>완전한 크기의 \( \mathrm { mHPRT } \) 유전자의 확인</h2> <p>본 실험을 통하여 얻어진 \(positive clone \)들은 주로 내부에 존재하는 \(exon \)의 유무를 조사하여 목적 유전자의 분리 가능성 여부를 확인하였다. 이전의 연구에서 \( h H P R T \) \(radial TAR vector \)를 통하여 얻어진 클론에 대하여 분리된 \(YAC DNA \)의 크기가 다양하게 나타나, \(Alu-Universal hook \)을 사용한 경우 다양한 크기의 클론이 분리될 수 있음이 보고되었다[8]. 이는 게놈 전반적으로 산재한 반복서열과 \(random \)하게 \(Universal hook \)이 재조합이 일어남을 보여주는 것으로 인간의 \(Alu \) 반복서열을 이용하여 확인되었다. 본 실험에서는 마우스의 \(B1-Universal hook \)을 이용한 것으로 이에 대한 확인을 수행하였다. \( m H P R T + B 1 \) 이 삽입된 \(TAR vector \)를 사용하여 얻은 \(8 \)개 클론 중 \(4 \)개 클론 \((lane 1-4, Fig. 2B) \)과 \(lhHPRT + B1 \)을 사용하여 얻은 \(7 \)개 클론 중 \(4 \)개 \((lane 5-8, Fig. 2B) \)를 사용하여 삽입된 크기를 먼저 조사하였다. \(Fig. \) \( 2 \mathrm { ~A } \) 에서 보여주는 것과 같이 \(8 \)개의 \( \mathrm { YAC } \) 클론 모두에서 \( m H P R T \) 유전자 전체 크기에 해당되는 \( 40 \mathrm { ~kb } \) 이상의 크기를 나타내었다. 이와 더불어가 \( positive \) 클론들이 유전자 내부에서 결손 등을 나타내지 않고 완전한 크기의 유전자를 포함하고 있는가를 조사하기 위하여 \( m H P R T \) 내의 존재하는 \(9 \)개의 \(exon \)에 대해 \(Table 2 \)에서 나타낸 \(primers \)를 사용하여, 각각 \(exon1 \)에서 \(exon9 \) 영역에 대해 \(PCR \)을 수행하여 전체 \(exon \) 영역이 존재함을 확인하였다. 이러한 결과는 \(TAR cloning \) 법으로 얻은 각 \(positive clone \)들이 \( 40 \mathrm { ~Kb } \) 이상의 크기를 갖는 동시에 \(9 \)개의 전체 \(exon \) 영역을 지니고 있음을 확인된 것으로, 이 방법이 매우 효과적으로 유전자를 분리해낼 수 있음을 보여준다. 이는 기존의 복잡한 \(library \) 제작 방법과는 단리, 전체 크기의 목적 유전자를 전체 게놈으로부터 빠르고 정확히 분리될 수 있음을 보여주는 좋은 예이다. 그러므로 이 결과는 다른 종의 유전정보를 이용한 \(TAR cloning \)법으로 이종 간의 \(orthologue \) 유전자 분리가 정확하고 효과적으로 수행 될 수 있음을 보여주며, 나아가 이 방법으로 한 종에서 여러 개 존재하는 상동 유전자인 \(paralogue \)의 분리에도 사용될 수 있음을 시사한다.</p>