Moniliella 속과 Trichosporonoides 속은 매우 유사한 분류학적 특성을 나타내고 있지만, 형태학적 특성인 blastic conidia의 크기에 근거하여 서로 다른 속으로 구분되어 왔다. 한편, 분자분류학의 발전에 따라, 분석결과의 재현성이 높고 데이터베이스 확립이 용이한 분자분류학적 결과를 토대로 하는 새로운 분류 및 동정 체계가 정착되고 있다. 본 연구는 Moniliella 속과 Trichosporonoides 속 균주들을 대상으로 분자분류학적 방법을 적용하여 그 결과를 생리학적 결과와 비교 분석하고, 두 속의 분류학적 연관관계를 제고하고자 한다.
<h1>서론</h1> <p>Moniliella 속[2]과 Trichosporonoides 속[3]은 답자성 yeast-likc fungi에 속하며 매우 유사한 분류학적 특성을 나타내고 있다. 이러한 특성의 예로는 arthroconidia와 blastoconidia 의 생산, urea 분해, diazonium blue B 염색의 양성 반응, multilamellar 형태의 cell wall 구조와 dolipore septa 구조 등이 보고되어 있다. 또한 Walker가 실헙한 55 염 기서열 분석 결과에서도 Moniliella acetobutans와 Trichosopor-onoides oedocephalis는 같은 분류군을 형성하였다. 그러나 두 속(genus)은 형태학적 특성인 blastic conidia의 크기에 근 거하여 서로 다튼 속으로 구분(differenciation)되어 왔으며, 일반적으로 blastic conidia의 크기가 \( 10 \mu \mathrm { m } \) 이상인 경우는 Moniliella 속으로 \( 10 \mu \mathrm { m } \) 이하익 겅우는 Trichosoporonoides 속으로 동정하고 있다.</p> <p>한편 Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) pattern 분석, Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) 분석과 특정 유전자의 염기서열분석 등 다양한 분자생물학적 기법을 응용하는 분자분류학이 발전되면서, 균주 (strain)에 따라 다른 결과를 나타내기도 하는 생리 - 생화학적 특성 차이에 근거하는 분류 및 동정이 지양되고, 분석결과의 재현성이 높고 data base 확립이 용이한 분자분류학적 결과를 토대로 하는 새로운 분류 및 동정 체계가 정착 되어가고 있다.</p> <p>본 연구는 이러한 미생물 분류관련 연구방법의 변화를 yeast-like fungi 분류에 적용하여, 형태적 분류결과에 기초하여 서로 다른 분류군으로 나누어져 있는 Moniliella속과 Tichosoporonoides속 균주들을 대상으로 효모의 분자분류학적 key로 최근 널리 이용되고 있는 large subunit rDNA D1/D2 변이 영역의 엽기서열을 분석하여 그 결과를 data base화하고 이를 동정을 위한 key로 이용하고자 하며 또한 두 속에 포함되어 있는 균주들의 분자분류 결과와 형태 및 셍리학적 결과를 비교 분석하여 두 속의 분류학적 연관관계를 제고해 보고자 한다.</p> <h1>재료 및 밤법</h1> <p>Moniliella속 및 Trichosporonoides속 균주들 사이에 존재하는 분자 분류학적 연관관계를 알아보기 위하여 두 속에 속하는 9개 종과 yeast-like fungi에 속하는 4속 (Aureobasidium, Exophiala, Phaeococcomyces, 및 Rhinocladiella속)의 균주 6종을 선발하였다. 실험에 사용한 15개의 균주는 도두 Centraal-bureau voor Schimmelcultures (CBS)에서 구입하였으며 Table 1에 명시하였다. 이들 중 Moniliella속 5층과 Tricho-sporonoides속 4종은 모두 표준 균주를 사용하였다.</p> <p>염기서열분석에 이용할 염색체 DNA를 분리하기 위하여 Malt extract agar (DIFCO Laboratories, Detroit, USA)에 균주를 점종하고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 일간 배양하였다. 배양된 균체로부터 Kurtzman과 Robnett의 방법으로 DNA롤 분리하여 large subunit rDNA의 D1/D2 영역을 증폭하였다.PCR 로 증폭한 단편들은 QIAquick PCR purification kit (Qiagen Inc., Germany)를 사용하여 정제하고 ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit (PE Biosystems, USA)를 사용하여 sequencing 반응을 수행하였으며, 생산된 DNA 단편들은 ABI 310 DNA sequencer (PERKIN ELMER, New Jersey, (SA)를 이용하여 분석하였다.</p>