마디풀 추출물의 플라보노이드 성분 분석을 위해 TLC, HPLC, LC/ESI-MS/MS 및 NMR 등의 방법을 사용하여 분석하였다. TLC 및 HPLC를 이용하여 전개용매는 에틸 아세테이트 분획과 아글리콘 분획을 사용하여 색상 등으로 성분 확인하였고, HPLC 분리조건은 acetic acid와 acetonitrile를 사용하였다.
<h1>마디풀 추출물의 성분분석</h1> <p>마디풀 추출물의 플라보노이드 성분을 동정하기 위하여 TLC, HPLC, LC/ESI-MS/MS 및 NMR을 이용하여 분석하였다.</p> <p>TLC 및 HPLC를 이용한 마디풀 추출물의 플라보노이드 분석: TLC 분석에서 전개용매는 에틸 아세테이트 분획의 경우 ethyl acetate:chloroform:formic acid:distilled water = 8: 1: 1: 1, 그리고 아글리콘 분획의 경우 n-hexane: ethyl acetate:acetic acid =21: 14: 1 을 사용하였다. 성분 확인은 플라보노이드 표준물질의Rf 수치와 발색법을 이용한 색상 등으로 확인하였다. HPLC 분석은 \( 2 \% \) acetic acid와 \( 0.5 \% \) acetic acid ( \( 50 \% \) acetonitrile)을 기울기 용리법으로 분리하였고, 이때, HPLC 분리조건은 Table 1 에 나타내었다. 또한, 마디풀 추출물의 성분 분석을 위하여 TLC로 분리된 각각의 띠를 긁은 후 \( 50 \% \) 에탄올로 추출, 여과한 뒤 감압 농축하여 파우더를 얻었다. 이 때 얻어진 파우더 중 일부는 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter (Millipore, \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) ) (Chemco Scientific, Japan)로 여과하여 HPLC 분석에 사용 하였다.</p> <p>HPLC 및 LC/ESI-MS를 이용한 마디풀 추출물의 플라 보노이드 분석: LC 분석에 Agilent Model 1100 (Waldbronn, Germany)을 사용하였다. 컬럼은 Pursuit XRs C18 ( \( 2 \times \) \( 50 \mathrm { ~mm } , 3 \mu \mathrm { m } \) ) (Varian, USA)을 사용하였다. 이동상은 \( 0.5 \% \) formic acid (distilled water): \( 50 \% \) formic acid (MeOH: Acetonitrile \( =5: 5)=2: 8 \) 로 하였으며, 유속은 \( 200 \mu \mathrm { J } / \mathrm { min } \) 으로 하였다. MS/MS 분석은 ionspray source을 사용하였고, negative ion model로 capillary voltage 는 \( -3500 \mathrm { ~V } \), nebulizer gas \( \left ( \mathrm { N } _ { 2 } \right ) 10 \) (arbitrary units), collision gas \( \left ( \mathrm { N } _ { 2 } \right ) \) 그리고 ion source temperature는 \( 400 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 행하였다. H-NMR 기기 분석은 Mercury 400 (Varian, USA)를 사용하였으며, 분석 용매는 deuterated methanol \( \left ( \mathrm { CD } _ { 3 } \mathrm { OD } \right ) \) 를 사용하였으며, 내부 표준물질로는 tetramethylsilane (TMS)를 기준점 \( \left ( \mathrm { Si } \left ( \mathrm { CH } _ { 3 } \right )_ { 4 } , \delta=0 \right ) \) 으로 하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실험은 3 회 반복하였고 통계분석은 \( 5 \% \) 유의수준에서 Student's t-test를 행하였다.</p>