뇌조직의 분획과 함량 측정, 세포막 유동성 측정을 Lowry, Rudel, o-ph-thalaldehyde법, fluorescence polarization 방법 등의 방법에 따라 측정하였으며, 뇌조직 획분에서 산화적 스트레스(oxidative stress)의 유무를 확인하기 위해서 DCF-DA ( 2 ′ , 7 ′ (2 ′ ,7 ′ -dichlorofluorescein diace-tate)을 probe로 이용한 간장세포의 mitochondria와 micro-some획분의 기초활성산소(basal oxygen radical : BOR)의생성량의 측정은 Lebel 등의 방법에 따라 측정하였다.
<h2>뇌조직의 분획</h2> <p>뇌조직의 분획은 저자 등의 방법에 따라 균질 완충용액 \( (1.15 \% \mathrm { KCl } / 10 \mathrm { mMf } \) phosphate buffer/5 \( \mathrm { nLV } \) EDTA, pH7.4)을 사용하여 mitochondria, microsome 및 cytosol회분을 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 정량하였다.</p> <h2>콜레스테훌의 함량 측정</h2> <p>뇌조직예서 분획한 mitochondria 밋 microsome획분중의 콜레스테롤의 함량은 Rudel 등의 방법에 따라 o-ph-thalaldehyde법으로 측정하여 표준검량선에 의하여 이들 획분중의 콜레스테롤의 함량을 측점하였다.</p> <h2>세포막 유동성의 측정</h2> <p>뇌조직의 mitochondria 및 microsome 획분중의 세포막 유동성(membrane fluidity)은 형광 probe로서의 1,6-diphe-nyl-1,3,5-hexatriene (DPH])을 사용한 Heron 등에 의한 형광분광법에 따라 측정하였다. 50 mM 인산완충용액(pH 7.2,2750 ul), 증류수(250 ul), 시료(100 ul)를 첨가◦혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온 수조에서 5 분간 방치한 다음, probe인 \( 0.167 \)mM TMA-DPH[1-(4-trimethylammoniumphenyl)-6-phenyl- \( 1,3,5 \)-hexatriene, p-toluene-sulfonate] 용핵을 \( 6.67 \mathrm { ul } \) 를 첨가 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온 수조에서 shaking하면서 30 분간 반응시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 을 유지하면서 형광광도계를 이용하여 360 \( \mathrm { nm } \) (excitation)와 \( 430 \mathrm { ~nm } \)(emission)에서 측정하였다.</p> <h2>기초 및 유도산소라디칼의 정량</h2> <p>뇌조직 획분에서 산화적 스트레스(oxidative stress)의 유무를 확인하기 위해서 DCF-DA \( \left (2 ^ {\prime } , 7 ^ {\prime } \right . \)-dichlorofluorescein diace-tate)을 probe로 이용한 간장세포의 mitochondria와 micro-some획분의 기초활성산소(basal oxygen radical : BOR)의생성량의 측정은 Lebel 등의 방법에 따라 측정하였다. \( \mathrm { BOR } \) 의 측정은 기저상태와 라디칼 생성을 유도하가 위해 ascorbic acid와 \( \mathrm { FeSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 로 자큭한 유도상태의 두 가지 조건에서 비괴 측정하였다. 기저상태와 라디칼 유도의 경우 모두 시료 500 ul를 완충용액(40 mM Tris-HCl buffer \( \mathrm { pH } \)7.4)으로 10 배 회석하고, probe인 5 uM DCF-DA (Mole-cular probe, USA) 12 ul를 첨가, \( 10,000 \mathrm { rpm } 8 \) 분간 원심분리한다. 잔사를 \( 40 \mathrm { mM } \) Tris-HCl \( 3.0 \mathrm { ml } \) 에 녹인 후 라디칼 유도상태의 경우에는 \( 1 \mathrm { mM } \) ascorbic acid (300 ul)와 \( 100 \mathrm { uM } \) \( \mathrm { FeSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } (150 \mathrm { ull } ) \) 를 혼합하였고 기저상태의 경우는 아무것도 첨가하지 않았다. 이후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 유지하면서 형광 강도의 변화롤 혐광광도계를 이용하여 \( 488 \mathrm { ~nm } \) (excitation)와 \( 525 \mathrm { ~nm } \) (emssion)에서 측정하였다. 이 때 분광형광광도의 변화롤 \( 2 ^ {\prime } , 7 ^ {\prime } \)-dichlorofluore-scein diacetate (DCF-DA)을 표준품으로 해서 표준검량선에 의하여 생성된 DCF의 양(nmol \( / \mathrm { mg } \) protein \( / \mathrm { min } ) \) 으로 환산하고, 이 양으로써 BOR 및 유도산소라디칼(induced oxy-gen radical : TOR)의 산소라디칼 생성량으로 정량하였다.</p>