본 실험에서 ABGE가 세포 독성이 있는지 실험한 결과 ABGE는 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서 HT 1080 세포에 대해 안전하며, Fenton 반응과 H2O2-induced oxidative stress에 대해 항산화 효과를 나타내는 것이 관찰되었다. 또한 ABGE가 항산화 효과가 있는지 실험한 결과 ABGE는 지질과산화 반응을 억제하여 항산화 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.
<h2>세포독성에 미치는 ABGE의 영향</h2> <p>본 실험에서는 ABGE가 세포성장에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 세포 독성 유무를 조사하였다. MTT assay를 이용하여 ABGE의 세포독성 효과를 조사하였으며, Fig. 3에서 보여지는 바와 같이 HT1080세포에서 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서 대조군과 비교하여 어떠한 독성 효과도 없는 것으로 판정되었다. 따라서, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서 ABGE는 본 연구에서 사용된 HT 1080 세포에 대하여 안전하다는 것을 나타낸다.</p> <h2>In vitro 및 세포 수준에서 지질과산화에 대한 ABGE의 항산화효과</h2> <p>In vitro에서 지질과산화에 대한 ABGE에 의한 항산화 효과를 조사하기 위하여 linolenic acid를 Fenton반응으로 발생시킨 hydroxyl radical에 노출시켰다. 양성 대조군으로는 친유성 항산화제인 \( 0.1 \% \) vitamin E를 사용하였다. ABGE의 지질과산화에 대한 항산화 효과를 조사한 결과, Fig. 4A에서 보는 바와 같이 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 ABGE는 hydroxyl radical에 의한 linolenic acid의 과산화에 대한 억제효과가 없었으나, \( 50 \mu \mathrm { g } } / \mathrm { ml } \) 이상의 ABGE에서는 지질과산화를 억제 효과가 관찰되었다. 세포수준에서 지질과산화에 대한 ABGE의 항산화 효과를 조사한 결과, Fig. 4B에서 보는 바와 같이 in vitro에서와는 달리 \( 1 \mathrm { ~kg } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도에서 ABGE는 지질과산화를 유의성 있게 억제시켰다.</p> <h2>사람 섬유아육종세포에서 MMP-2 및 MMP -9에 대한 억제효과</h2> <p>본 연구에서는 ABGE가 MMP-2 및 MMP-9의 활성에 대한 억제효과를 조사하기 위하여 암전이에 널리 이용되는 HT1080 세포를 이용하여 MMPs의 분비를 자극시키는 phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA)를 ABGE 전처리 후에 \( 72 \mathrm { hr } \) 동안 처리한 후, 세포배양 상등액을 이용하여 gelatin zymography를 수행하였다. Fig. 5에서 보는 바와 같이 PMA로 자극하지 않은 공시험군에 비하여 PMA로 자극한 대조군에서는 pro-MMP-2의 불활성 형태가 활성인 형태의 MMP-2로 전환되는 것을 관찰할 수 있었으나, pro-MMP-9 band에서는 MMP-9와 결합되어 나타나 구분할 수 없었다. ABGE의 처리군에서는 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도에서 MMP-2와 MMP-9의 활성이 모두 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 더욱이 ABGE의 농도가 증가함에 따라 MMP-2와 MMP-9의 활성이 비례적으로 억제되는 것을 알 수 있었다.</p> <h2>사람 섬유아육종세포에서 MMP-2 및 MMP-9의 단백질 발현 억제효과</h2> <p>Gelatin zymography 실험에서 확인된 ABGE의 MMP-2 및 MMP-9의 활성에 대한 억제효과가 단백질 발현의 수준에서 조절되는 지를 연구하기 위하여 western blot을 시행하였다. Fig. 6에서 보여지는 바와 같이 PMA 처리군에서는 MMP-2와 MMP-9의 단백질 발현이 증가되는 것으로 나타났다. 그러나 PMA에 의하여 증가된 MMP-2와 MMP-9 단백질의 발현수준이 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도 이상의 ABGE에 의하여 뚜렷하게 억제되는 것으로 나타나, ABGE는 MMP-2 and MMP-9의 단백질 발현을 억제시키는 것으로 판정되었다. 한편 ABGE가 항산화 효소의 발현을 조절하는데 가장 중요한 전사인자인 Nrf2와 널리알려진 항산화 효소의 하나인 SOD-1의 단백질 발현을 조사하였다. 하지만, ABGE는 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서는 Nrf2와 SOD1의 레벨을 증가시키지 않았으므로, 기대와는 달리 ABGE는 직접적으로 활성산소를 억제하나 항산화 효소계의 발현에는 영향을 주지 않는 것으로 나타났다.</p>