수세 후 급속 냉동한 딸기를 실험 재료로 사용하여 phenol성 물질 함량, 플라보노이드 함량, 전자공여능(Electron donating abilities, EDA), ABTS radical cation decolorization, Xanthine oxidase 저해활성, SOD 유사활성 등을 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료 및 시료의 추출</h2><p>농가의 선별기준에 따라 구분한 딸기(보기조생 품종, 하품)를 수세한 후 \( -25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 급속 냉동시킨 후 \( -25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3, 6개월 냉동 저장하면서 실험에 사용하였다. 딸기 \( 100 \mathrm{~g} \)를 파쇄하여, 딸기즙은 Waterman No. 2 여과지로 감압여과한 후 이 여액을 시료로 이용하였고, 열수추출물은 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 추출하여 각각 \( 100 \mathrm{ml} \)로 정용하여 사용하였다.</p><h2>총 phenol성 물질 함량 측정</h2><p>추출된 각 phenol성 물질의 함량 측정은 Rhee 등의 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 각 phenol성 시료용액 \( 0.2 \mathrm{ml} \)에 \( 2 \% \mathrm{~Na}_{~2} \mathrm{CO}_{3} 2 \mathrm{ml} \)를 가하여 충분히 혼합하고 2분후에 \( 50 \% \) Folin-Ciocalteu's reagent \( 0.2 \mathrm{ml} \)를 가하여 상온에서 30분 동안 방치한 후 \( 750 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 함량은 gal-lic acid \( (0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)를 표준물질로 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 구하였다.</p><h2>flavonoid 물질 함량 측정</h2><p>총 플라보노이드 함량은 시료용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 diethylene gly-col \( 10 \mathrm{ml}, 1 \mathrm{~N} \mathrm{~NaOH} ~1 \mathrm{ml} \)를 넣고 강하게 진탕한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온기에서 1시간 정치한 후 \( 420 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 총 플라보노이드 함량은 naringin \( (0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)을 표준물질로 사용하여 표준곡선을 통하여 계산하였다.</p><h2>전자공여능(DPPH radical 소거능) 측정</h2><p>추출물의 전자공여능 (Electron donating abilities, EDA)은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 각 시료용액 1 \( \mathrm{ml} \) 에 \( 0.2 \mathrm{mM} \) 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) \( 1 \mathrm{ml} \)를 넣고 교반한 후 30분간 방치한 다음 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여 효과는 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p><h2>ABTS radical cation decolorization 측정</h2><p>ABTS radical cation decolorization의 측정은 Pellegrin 등의 방법에 의해 측정하였다. 즉, \( 7 \mathrm{mM} \) ABTS[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)] \( 5 \mathrm{ml} \) 와 \( 140 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{S}_{2} \mathrm{O}_{8}~ 88 \mu \mathrm{l} \) 를 섞은 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 와 ethanol \( 88 \mathrm{ml} \)를 흔합한 ABTS 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)와 시료용액 \( 50 \mathrm{ul} \)를 혼합하여 30초간 진탕한 후 2.5분간 incubation하고 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. ABTS radical cation decolorization 효과는 percentage inhibition(\(\%\))으로 나타내었다.</p><h2>Xanthine oxidase 저해활성 측정</h2><p>Xanthine oxidase 저해활성 측정은 Stirpe와 Corte의 방법에 따라 측정하였다. 각 시료 용액 \( 0.1 \mathrm{ml} \)와 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 7.5) 0.6 \mathrm{ml} \)에 xanthine \( (2 \mathrm{mM}) \)을 녹인 기질액 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 xanthine oxidase \( (0.2 \mathrm{unit}/\mathrm{ml}\)) \( 0.1 \mathrm{ml} \)를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \) \( \mathrm{HCI} ~1 \mathrm{ml} \)를 가하여 반응을 종료시킨 다음 반응액 중에 생성된 uric acid를 흡광도 \( 292 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Xanthine ox-idase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p><h2>Superoxide dismutase(SOD) 유사활성 측정</h2><p>SOD 유사활성은 Marklund의 방법에 따라 실시하였다. 각 시료용액 \( 0.2 \mathrm{ml} \)에 Tris-\(\mathrm{HCl}\)의 완충용액 \( 50 \mathrm{mM} \) Tris \( +10 \mathrm{mM} \) EDTA, \(\mathrm{pH} 8.5\)) \( 2.6 \mathrm{ml} \)과 \( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 0.2 \) \( \mathrm{ml} \) 가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCI} ~0.1 \mathrm{ml} \)를 가하여 반응을 정지시키고 반응액 중 산화된 pyrogallol의 양을 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. SOD 유사활성은 시료용액의 실험구와 대조구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p>