과산화수소 및 아스코브산, 디하이드로아스코브산 함량을 측정하기 위해 각 0.5g의 시료를 추출하고 원심분리하였다. 과산화수소의 함량은 인산완충액과 1MKI으로 발색시킨 후, 흡광도를 측정하고 표준곡선을 통해 환산하여 측정하였고, 아스코브산의 함량은 인산완충액으로 희석한 후의 흡광도와 아스코브산 산화효소를 첨가한 후의 흡광도의 차이를 표준곡선을 통해 계산하여 측정하였으며, 디하이드로아스코브산의 함량은 총 아스코브산의 함량에서 아스코브산의 함량을 뺀 값으로 나타냈다.
<h2>과산화수소의 함량</h2> <p>과산화수소의 함량의 측정은 시료 \( 0.5 \mathrm { ~g } \)을 액체질소를 넣고 마쇄한 후 10배 부피의 \( 0.1 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) trichloroacetic acid (TCA)로 현탁하여 추출하고 원심분리(12,000× \( g, 15 \) 분)하였다. 상징액을 \( 10 \mathrm { mM } \) 인산완충액( \( \mathrm { pH } 7.0) \)과 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { KI } \)를 첨가하여 발색시킨 후 \( 390 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하고 표준곡선에 의해 과산화수소의 함량을 \( \mu \mathrm { mol } \cdot \mathrm { gfw } ^ { -1 } \)단위로 환산하였다.</p> <h2>아스코브산과 디하이드로아스코브산의 함량</h2> <p>아스코브산과 디하이드로아스코브산 함량의 측정은 Foyer 등과 Yoshimura 등의 방법을 혼용하여 사용하였다. 시료 \( (0.5 \mathrm { ~g } ) \)를 액체질소를 넣고 마쇄한 후 10배 부피의 \( 6 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) \( \mathrm { HClO } _ { 4 } \)용액으로 추출한 후 \( 12,000 \times g \)에서 원심분리하였다. 아스코브산의 함량은 수집한 상징액을 인산완충액 \( ( \mathrm { pH } 12.7) \)으로 10배 희석한 직후 \( 265 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하고, 동일한 상징액에 아스코브산 산화효소(ascorbate oxidase 5 units)를 첨가하고 동일한 파장에서 측정한 흡광도 차이를 표준곡선에 의하여 계산하여 측정하였다. 디하이드로아스코브산의 함량은 총 아스코브산의 함량에서 아스코브산의 함량을 뺀 값으로 나타내었다. 총 아스코브산의 함량은 추출액 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 \( 1.2 \) \( \mathrm { M } \mathrm { K } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \)를 첨가하여 최종 \( \mathrm { pH } \) 를 \( 6.0 \)으로 조정한 반응액에 10 \( \mathrm { mM } \) dithiothreitol (DTT)을 넣고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응시켜 아스코브산의 측정방법과 동일하게 측정하였으며 각각의 함량은 \( \mu \mathrm { mol } \cdot \mathrm { gfw } ^ { -1 } \)단위로 나타내었다.</p>