투여 시료 제조 방법으로 막걸리 원액 실험에서 생막걸리는 알코올 함량을 3개로 분리하여 만들었고, 대조군은 에탄올과 같은 농도로 하여 만들어서 사용하였다. 간 독성 실험에서 생막걸리와 가열막걸리를 알코올 성분을 제거하기 위해 회전식 진공농축기로 감압 농축시켰고, 건조하여 분말을 만들어 증류수에 녹여 시료로 이용하였다. 실험동물은 막걸리 원액의 간 지표활성에 미치는 영향을 분석하기 위해, 동물의 체중에 따라 대조군 그리고 알코올 함유량에 따라 막걸리 투여군 3군과 동량의 알코올을 함유하는 에탄올 투여군 3군의 7군으로 나누었다. 혈액은 실험동물 해부하기전 절식시켜 마취하여 개복한 후 복부대동맥에서 채취하였고 원심 분리하여 분석 전까지 영하에서 보관하였다. 혈청중 ALP,AST,ALT HDL-cholesterol 및 중성지질 농도를 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>투여 시료 제조 방법</h2> <p>본 실험에 사용된 생막걸리와 가열막걸리는 부산탁주약주 협회에서 제공받아 사용하였다. 막걸리 원액을 이용한 실험에서는 생막걸리를 알코올 함량이 각각 0.02, 0.06 및 \( 0.12 \mathrm{~g} / \mathrm{ml} \) 되도록 조제하였고, 대조군으로 에탄올을 같은 농도로 조제하여 사용하였다. 한편, 막걸리 침전물을 이용한 간 독성 실험에서는 생막걸리와 가열막걸리를 회전식 진공농축기로 감압 농축시켜 알코올 성분을 제거한 후, 이 침전물을 각각 동결 건조하여 분말을 만들어 증류수에 녹여 시료로 사용하였다.</p> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 체중이 평균 \( 140 \mathrm{~g} \) 되는 Sprague-dawley계 수컷 흰쥐를 (주)오리엔트바이오로부터 구입하였으며, 실험시작 1주일 동안 고형사료(삼양유지)로 적응시킨 후 본 실험을 실시하였다. 막걸리 원액의 간 지표활성에 미치는 영향을 검토하기 위하여 동물의 체중에 따라 대조군, 막걸리 투여군 3군(알코올함유량 \( 0.02 \mathrm{~g} \) (MG1), \( 0.06 \mathrm{~g} \) (MG2) 및 \( 0.12 \mathrm{~g} \) (MG3))과 동량의 알코올을 함유하는 에탄올 투여군 3군(알코올 함유량 \( 0.02 \mathrm{~g} \) (ET1), \( 0.06 \mathrm{~g} \) (ET2) 및 \( 0.12 \mathrm{~g} \) (ET3))의 7군으로 나누었다. 실험 시료는 막걸리 원액을 희석하여 알코올 함량이 각각 \( 2 \%\), \(6 \% \)및 \( 12 \% \) 되도록 하여 매일 \( 1 \mathrm{ml} \) 씩 4주간 경구 투여 하였다. 간 독성에 대한 막걸리 침전물의 효능을 검토하기 위하여 대조군, 사염화탄소 대조군, 사염화탄소 막걸리 투여군 2군(생 막걸리, 가열 막걸리)의 4군으로 나누었다. 생막걸리와 가열막걸리는 감압건조 방법을 이용하여 알코올 성분을 제거하였고,농축에 의해 얻어진 생막걸리 및 가열막걸리 침전물 시료를 동결 건조한 후 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 조절하여 매일 \( 1 \mathrm{ml} \) 씩 4 주간 경구 투여하였다. 실험군에는 사염화탄소:올리브유를 \(1:1\)의 비율로 혼합한 용액을 \( 1 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \cdot \mathrm{bw} \cdot \mathrm{day} \) 씩 1 일 간격으로 2회 복강 내로 투여하여 쥐의 급성 간 장애를 유발하였다. 대조군에는 동량의 올리브유를 동일한 방법으로 투여하였다. 실험동물은 처치 전 12시간 동안 물만 주고 금식시켰으며, 마지막 사염화탄소 투여 24시간 후 채혈 하였다. 체중은 실험 사육기간 중에 격일로 일정 시간에 측정하였고, 동물 실험실의 사육조건은 온도 \( 24 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \(55-60\%\)를 유지 시키며 물과 식이 는 자유 공급하였다.</p> <h2>혈액 채취</h2> <p>혈액은 실험동물을 해부하기 전 24시간 절식 시킨 후 ether 마취 하에서 개복한 후 복부대동맥에서 채취하였고, 채취한 혈액은 실온에서 한 시간 방치 후 \( 3,000 \mathrm{rpm}\), \(4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 획득하였으며, 분석 전까지 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다.</p> <h2>혈청 중의 효소 활성 및 지질 농도 분석</h2> <p>혈청 중 Alkaline phosphatase (ALP), aspartate amino-transferase (AST)와 alanine aminotransferase (ALT)의 효소 활성과 혈청 중 콜레스테롤, HDL-cholesterol 및 중성지질 농도는 자동 측정용 slide (FUJIIIFLM, Japan)를 이용하여 Dry chemistry analyzer 3500 (Fuii, Japan)으로 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>연구결과 얻어진 자료를 SPSS 통계 프로그램을 사용하여 하위그룹 각각의 기술 통계치(mean, SD)를 산출하였다. 사후검증은 Tukey's test를 적용하였고 \( p<0.05 \) 수준에서 유의수준을 검증하였다.</p>