표고버섯에서 비타민 D2를 추출하고 이것의 항염증 효능과 항알레르기 효능을 검토하기 위해 대식세포를 이용한 항염증 활성 효과와 알레르기 반응의 주요 세포인 비만세포주를 이용하여 histamine의 탈과립을 확인하였다. 연구에서는 버섯 분말의 두께를 5mm이하로 하고, UV-B 램프를 약 20cm 높이로 설치한 1회당 8분동안 움직이는 컨베이어 벨트를 4회까지 이동시켜 자외선을 조사하였다. 자외선 조사된 버섯 분말은 비타민 D정량법에 준하여 시행하였으며 Ergosterol 및 ergocalciferol 분석은 Jasinghe와 Perera의 분석방법을 이용해 시행하였다.
<p>본 연구진에서는 국내에서 재배한 5종의 버섯을 미세 분말화하고 자외선 조사를 통해 비타민 D 전구체인 ergo-sterol이 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)로 전환되는 최적 전처리 조건 및 공정 확립을 위한 연구를 진행하여 표고버섯에서 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \) 함량이 크게 증가하는 결과를 확인하였다. 따라서 본 연구에서는 이전 연구를 통해 확립한 최적 자외선 전처리 조건을 통해 표고버섯(Lentinula edodes)에서 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)를 추출하고 이들의 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 검토하고자 대식세포를 이용한 항염증 활성 효과와 알레르기 반응의 주요 세포인 비만세포주를 사용하여 histamine의 탈과립을 확인하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 시약</h2> <p>본 연구에 사용된 자외선 조사 표고버섯(Lentinula ed-odes) 분말은 (주)네이처텍에서 생산공정 검토과정을 거쳐 버섯 분말의 두께를 \( 5 \mathrm { ~mm } \) 이하로 하고 UV-B 램프를 약 \( 20 \mathrm { ~cm } \) 높이로 설치한 컨베이어 벨트를 이동하면서 자외선(UV-B)을 조사하는 방법을 사용하였다. 컨베이어 벨트 이동은 1 회당 8분이 소요되며 이동 횟수는 4회까지 처리하였다. 표고버섯 분말의 추출 및 분석에 사용된 시약과 표준품은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)로부터 구입하여 사용하였다.</p> <h2>버섯추출물 제조</h2> <p>자외선 조사된 버섯 분말은 식품공전 일반시험법의 비타민 D 정량법에 준하여 실시하였다. 버섯 분말 \( 1 \mathrm { ~g } \)을 pyrogallol-ethanol 용액 \( 40 \mathrm { ~ml } \)를 혼합하고 \( 0.5 \mathrm { ~N } \mathrm { KOH } 10 \) \( \mathrm { ~ml } \)를 가한 후 환류냉각기를 부착하여 중탕으로 60분간 가열하여 비누화(saponification)하였다. 실온으로 냉각시킨 후 갈색 분액깔때기로 이동시키고, \( 0.01 \% \) dibutyl hy-droxy toluene이 함유된 hexane \( 50 \mathrm { ~ml } \)를 가하여 추출한 후 hexane층을 수거하고 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { KOH } 100 \mathrm { ~ml } \)를 가하여 15초간 진탕시켰다. Hexane층을 다시 중화가 될 때까지 세척하고 sodium sulfate, anhydrous로 탈수시키고 감압 농축하였다.</p> <h2>Ergosterol 및 ergocalciferol 분석</h2> <p>Ergosterol 및 ergocalciferol 분석은 Jasinghe와 Perera의 분석방법을 이용하였다. Supersil C18 컬럼 ODS-1 (particle size \( 5 \mathrm { ~um } , 4.6 \times 250 \mathrm { ~mm } \) )을 장착한 Dionex 3000 HPLC system (Thermo Fisher, Sunnyvale, CA, USA)을 이용하여 분석하였다. 시료는 \( 10 \mathrm { ~ul } \)를 주입하였고 이동상 용매는 A용매 acetonitrile과 B용매 methanol을 이용하여 gra-dient(0~5분 동안 B용매 \( 80 \% \), 20~30분 동안 B용매 \( 10 \% \))로 분석하였다. 유속은 \( 1.8 \mathrm { ~ml } / \mathrm { min } \)으로 실시하고 컬럼 온도는 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 측정파장은 UV 검출기 \( (282 \mathrm { ~nm } ) \)를 이용해 실시하였다.</p>