12시간 동안의 절식 후 에테르 마취한 동물에서 복부 대정맥에서 혈액을 채취하여 부고환지방, 복부지방, 간과 근육을 분리하고 무게를 측정했다. 이후 측정된 조직을 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하고 필요 시에 분석했다. HDL-C 및 LDL-C는 각각의 측정시약을 사용하여 혈청 및 표준의 흡광도를 측정하여 농도를 구했다. TBARS는 assay kit를 사용하여 혈청 내의 함량을 분석했다.
<h2>분석시료수집</h2> <p>실험동물은 식이 섭취 조건을 동일하게 하기 위해 희생시키기 전 12 시간 동안 절식시킨 후 에테르로 마취한 다음 복부를절개하여 1회용 주사기를 이용하여 복부 대정맥에서 혈액을 채취하였다. 채취된 혈액은 SST tube에 담은 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 1,500 \( \mathrm { rpm } \) 에 30 분간 원심분리를 하여 혈청을 분리하였다. 채혈한 다음 부고환지방, 복부지방, 간과 근육을 분리해 낸 후 각각의 무게를 측정한 후 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관 후 필요 시에 분석하였다.</p> <h2>혈중지질 분석</h2> <p>TG, T-C, HDL-C 및 LDL-C의 분석은 Hitachi 7150 (Tokyo, Japan)을 사용하여 효소법으로 분석 하였으며, TG는 Sicdia L TG reagent를 사용하였고, T-C는 Sicdia L T-CHO reagent를 사용하여 검체 및 표준의 흡광도를 측정하여 파장 \( 500 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하고, 생성된 자색 퀴논(qinone)색소의 흡광도를 측정하여 농도를 구하였다. \( \mathrm { HDL-C } \) 는 측정시약 Wako L-Type HDL-C, LDL-C는 Wako L-Type LDL-C를 사용하여 검체 및 표준의 흡광도를 각각 파장 \( 593 \mathrm { ~nm } , 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하고, 생성된 자색 퀴논 색소의 흡광도를 측정하여 농도를 구하였다.</p> <h2>산화적 스트레스 분석</h2> <p>혈청의 thiobarbiturate reactive substances (TBARS) 함량은 assay kit (zeptometrix, 0801192, USA)를 이용하여 Ohkswa 등의 방법으로 분석하였다. 혈청 TBARS 수준측정은 혈청 100 ul에 sodium dodecyl sulfate (SDS) 용액 100 \( \mathrm { ul } \) 를 혼합한 후 \( 4 \mathrm { ml } \) color reagent 가한 후 shaking하였다.Water bath에서 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } , 1 \) 시간 동안 가열한 후 얼음 속에서 10분간 방치한 후 원심분리 \( \left (1,600 \times g, 4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 10 \right . \) 분)하여 30 분간 실온에서 방치한 후 150 ul를 96-well plate에 취한 후 spec-trometer reader를 이용하여 흡광도 \( 450 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정 후 TBARS의 농도는 standard curve를 이용하여 농도를 산출하였다.</p>