표준 한천평판배양법을 이용하여 프로바이오틱과 신비오틱 요구르트의 유산균수를 측정했다. \( 25 \mathrm{~g} \)의 요구르트를 \( 0. 85 \% \mathrm{~NaCl}~225 \mathrm{~mL} \) 와 혼합해 균질화 시킨 후, MRS broth에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 동안 배양하였다. 위산과 담즙산 처리 후의 생존율을 측정했으며, 동시에 Caco-2 세포에 대한 유산균의 부착능을 평가했다.
<h2>생균수 측정</h2> <p>발효된 요구르트를 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 7일간 저장하는 동안 유산균수를 표준한천평판배양법으로 측정하기 위해 probiotic 및 synbiotic 요구르트 \( 25 \mathrm{~g} \) 을 \( 0.85 \% \mathrm{~NaCl}~225 \mathrm{~mL} \) 와 혼합 균질화하여 10배씩 단계적으로 희석한 후 MRS agar (Difco Co. 를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 48시간 배양한 다음 형성된 집락을 colony forming unit \( (\mathrm{CFU} / \mathrm{mL}) \) 로 환산하여 계수하였다.</p> <h2>위산과 담즙산에 대한 저항성</h2> <p>요구르트 발효 스타터의 위산에 대한 저항성을 확인하기 위해 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \) 을 사용하여 pH 2.5 로 조정하고 1,000unit의 pepsin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 첨가한 MRS broth에 발효 직후와 7일간 저장한 요구르트를 \( 1 \%(\mathrm{w} / \) v) 접종한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2시간 동안 배양하였다. 위산 내에서 배양한 후 곧 바로 bovine bile (Sigma-Aldrich) \( 1 \% \)와 pancreatin (Sigma-Aldrich) \( 0.1 \% \) 가 첨가된 MRS broth 내에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) , 6시간 배양한 다음 배양액은 \( 0.85 \% \) NaCl 용액으로 십진 희석하여 MRS agar 상에서 생성된 집락을 계수한 다음 위산 및 담즙산을 처리하지 않은 대조구에 대한 처리 후 잔존하는 균수를 측정하여 생존율을 조사하였다.</p> <h2>Caco-2 cell에 대한 부착능</h2> <p>요구르트의 발효 스타터의 장관 상피세포에 대한 부착능을 확인하기 위해 Korean Cell Line Bank (KCLB)로부터 분양받은 Caco-2 cell은 \( 10 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) fetal bovine serum (FSB, Gibco, Rockville, MD, USA), \( 2 \mathrm{mM} \) glutamine, \( 1\mathrm{mM} \) sodium pyruvate, 100 units penicillin 및 \( 50 \mu \mathrm{g} \) streptomycin이 첨가된 Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM, Gibco)를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{~CO}_{2} \) 하에서 배양하였다. 6 well plate 내에서 배양된 Caco-2 monolayer에 probiotic과 synbiotic 요구르트 \( 2 \mathrm{~g} \) 을 접종한 후 \( 5 \% \mathrm{~CO}_{2} \) 하에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 2 \) 시간 동안 배양하였다. 그런 다음 각 well 내에 있는 cell은 phosphate buffer solution (PBS, pH 7.2)으로 2회 세척한 후 overnight 동안 \( 2 \% \) formalin으로 고정시키고 \( 2 \% \operatorname{~eosin} \mathrm{Y} \)로 염색하고 나서 \( 1 \% \) acetic acid로 2회 세척하고 난 다음 \( 570 \mathrm{~nm} \) 에서 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reader (Spectrocount, Packard Instruments, Meriden, CT, USA)로 흡광도를 측정하였다. 이때 Caco-2 cell에 부착된 유산균은 요구르트를 처리하지 않은 대조구와 비교하여 부착율을 조사하였다.</p>