지방세포 배양한 배지를 계피 초임계 추출물(SFC, SFM, ME) 종류와 농도를 달리하여 처리하고 세포의 생존율과 지방 축정 저해능를 측정하였다. SFC을 \( 100 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml }\)으로 처리할 때 다른 대조군과 비교하여 낮은 생존률을 보였으며 SFC가 다른 추출물에 비하여 높은 지방 축적 저해능을 보였다.
<p>Real-time \( \mathrm { PCR } \) 은 초기변성 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 30초, 변성은 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 5초, an-nealing은 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } 15 \) 초, 신장반응은 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \) 초로 하여 40 cycle을 진행했다. 용해 곡선은 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 시작하여 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 를 종말점으로 \( 0.5 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 씩 상승시키며 80 번을 반응하여 원하는 형광 값을 검출하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 결과는 평균±표준편차로 나타내었으며, 유의성 검사는 SPSS \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) version \( 17.0 \) (SPSS Inc., Chicago, USA)을 이용하여 one-way ANOVA를 실시하였고, 대조구인 분화 Control에 대한 시료 처리구의 통계적 유의성은 Turkey's HSD test로 검증하였다. \( p<0.05 \) 이상일 때만 통계적 유의성이 있는 것으로 판단하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>계피 초임계 추출물의 지방세포 생존율 및 lipid droplet에 미치는 영향</h2> <p>각 well 당 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well 의 밀도로 분주한 96 well을 24시간 배양 후 배지를 교체하고 SFC, SFM, ME를 최종농도 \( 10,50,100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 로 24 시간 처리하였다. 그 결과 SFC 100 \( \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 대조구와 비교하였을 때 \( 60 \% \) 의 생존율로 독성을 나타냈으며, 나머지 농도에서는 모두 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었다(Fig 1). 따라서 시료 처리 농도를 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 을 최고 농도로 설정하여 실험하였다.</p> <p>지방세포의 Lipid droplet은 지방전구세포의 분화 및 adi-pogenesis 과정에 의하여 지방세포의 세포 내 triglyceride 축적으로 발생되는데, SFC, SFM, ME를 각각 \( 50 \mathrm { ~kg } / \mathrm { ml } \) 농도로 처리하고 분화 완료 후 Oil Red O 염색을 하여 현미경으로 관찰한 결과 \( \mathrm { SFC } \) 가 다른 추출물에 비하여 높은 지방 축적 저해능을 보였다(Fig. 2).</p>