바이러스 백신이 개발에서 잠재적인 바이러스 오염으로부터 안전하게 관리되기 위한 방법을 제시한다. 동물세포 배양 유래 생물의약품에서 PTGV 안전성을 위해 전과정에서 PTGV를 검출해서 생물의약품 제조공정의 신뢰도를 높여야 한다.
<h1>서론</h1> <p>동물세포주를 숙주로 이용한 바이러스 백신이 개발된 이래로 동물세포주는 유전자 재조합 의약품과 항체의약품 등 치료 및 예방용 생물의약품 생산을 위한 숙주로 사용되어 왔다. 세포배양 유래 생물의약품은 생체에서 유래한 복잡한 분자구조를 가진 물질로 최종제품에 대한 물리·화학적 분석만으로는 제품의 안전성과 유효성을 평가하기 어렵다. 또한 생물의약품 생산에 사용되는 동물세포주는 바이러스와 같은 내인성 및 외래성 오염물질에 오염될 가능성이 크기 때문에 안전성 보증을 위한 다양한 방법이 모색되고 있다. 세포주를 이용하여 생산하는 생물의약품의 바이러스 오염을 방지하기 위해 생물의약품 생산을 위해 사용되는 세포주의 특성분석에 관한 미국 FDA의 가이드라인이 1993년에 발표된 이래로 세계 각국의 규제기관에서는 바이러스 안전성 평가 관련 가이드라인을 제정하고 안전성 관련 규제를 강화하여왔다. 현재까지 세포배양 유래 생물의약품에 의한 바이러스 감염이 문제가 된 적은 없지만, 바이러스 오염은 심각한 임상결과를 가져올 가능성이 있기 때문이다.</p> <p>세포주를 이용하여 생산되는 생물의약품의 잠재적인 바이러스 오염을 관리하기 위해 아래에 같은 상호 보완적인 세 가지 접근방법들이 필요하다. 첫째, 바이러스가 오염되지 않도록 세포주 및 배지 성분을 포함하는 원료들의 적절한 선택 및 검사. 둘째, 세포주 내재 또는 혼입 가능 외래성 바이러스에 대한 제거 및 불활화 공정이 포함된 검증된 분리 정제 방법으로 의약품의 생산. 셋째, 생산 공정 중 적절한 단계에서 오염 가능한 바이러스들의 검사.</p> <p>외래성 바이러스 주요 오염원은 세포배양을 위해 사용하는 소 유래 혈청과 돼지 유래 trypsin이다. 미국과 유럽의 가이드라인에서는 생물의약품 생산용 마스터 세포주 (Master Cell Bank)에서 소 유래 혈청으로부터 오염이 가능한 Bovine viral diarrhoea virus (BVDV), Bovine adenovirus type 5 (BAV5), Bovine parvovirus (BPV), Bluetongue virus (BTV), Bovine respiratory syncytial virus (BRSV), Bovine rabies virus (BRV), Reovirus type 3 (REO-3), Bovine Parainfluenza type 3 virus (BPIV-3)와 같은 소 특이적 바이러스 검출 시험을 수행하도록 하고 있다. 또한 Porcine parvovirus (PPV), Porcine adenovirus (PAV), Porcine tansmissible gastroenteritis virus (PTGV), Porcine haemagglutinating encephalomyelitis virus (PHEV)와 같은 돼지 특이적인 바이러스 검출 시험을 수행하도록 하고 있다.</p> <p>PTGV는 Coronaviridae 과에 속하는 외피보유 바이러스 (enveloped virus)로 positive-sense single-stranded RNA genome을 갖고 있다. PTGV는 모든 연령의 돼지에게 급성 장내 바이러스성 질병을 유발시킨다. 형광항체법 (Fluorescent antibody test), ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) 시험법, PCR 시험법 등 PTGV 검출 시험법 확립에 대한 연구는 지금까지 주로 돼지의 바이러스성 장염의 원인이 되는 PTGV 진단 또는 Porcine epidemic diarrhea virus와의 비교 진단을 위해 개발되었다. 따라서 생물의약품 제조공정에서 바이러스 검출 시험법으로 사용하기에는 민감도가 떨어지는 단점이 있다. 본 연구에서는 동물세포 배양 유래 생물의약품에서 PTGV 안전성을 확보하기 위해, 세포주, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 PTGV를 검출하고, 제조공정에서 PTGV 제거 검증을 위한 정량시험법으로 활용이 가능한 민감도와 특이도가 우수한 TaqMan probe real-time RT-PCR 시험법을 확립하고자 하였다. 확립된 real-time PCR 시험법을 활용하여 인위적으로 PTGV 를 감염시킨 CHO (Chinese hamster ovary) 세포에서 PTGV를 정량적으로 검출하여 바이러스 안전성 검증 시험법으로의 활용 가능성을 평가하였다.</p>