본 연구에서는 선발된 두 균주 중 생육상내 포트 검정을 통해 최상의 방제효과를 가진 N4 균주를 최종선발하였다. 그리고 이 균주의 예방효과와 치료효과를 규명하기 위해 병원균 접종 전 각 시점에서 N4 균주의 세균부유액을 들깨 잎에 접종하고, 병원균의 발병도를 조사하였다. 이 균주의 동정을 위해 여러 생리 및 생화학적 특성 조사와 API 20E, \( 50 \mathrm { CHB } \) kit를 이용하였으며, 제제화를 위해 \( \mathrm { NB } \) 배지에 N4 균주를 접종하여 3일간 배양하였다.
<p>일차로 선발한 두 균주를 생육상내 포트 검정을 통해 방제효과가 가장 높은 균주를 우수길항균으로 최종선발하였다. 이때, 방제효과 검정은 NB (Nutrient Broth, Difco, USA)배지에서 1 일간 진탕배양하여 \( 10 ^ { 7 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \) 로 조정한 세균부유액을 들깨 잎의 앞, 뒷면에 골고루 분무접종하고, 접증 1 일후 PDA 평판배지에서 1 주일간 배양한 직경 \( 8 \mathrm { ~mm } \) 의 공시병원균의 균사절편을 잎의 뒷면에 부착하여 상대습도 \( 90 \% \) 이상, \( 20 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 생육상에서 보관하면서 접종 1 일 후 균사절편을 떼어내고 2일 후부터 발병도를 조사하였다. 각 처리구는 5포트씩 5반복으로 3회 조사되었으며, 이하의 모든 실험에서 방제가는 다음과 같이 환산하였다[17].<h2>선발 길항균에 의한 발병예방 및 치료효과 검정</h2> <p>우수 길항균으로 최종 선발되어 병원균에 대해 발병 억제효과가 가장 큰 것으로 확인된 N4 균주의 예방효과 및 치료효과를 규명하였는데, 먼저 길항균 \( \mathrm { N } 4 \) 균주의 세균부유액을 병원균 접종 3 일, 2일, 1 일, 0 일 전에 각각 포트에 재식한 들깨 잎의 앞, 뒷면에 골고루 분무접종하고, 병원균의 균사절편을 부착하여 접종한 후 발병도를 조사하여 예방효과를 검정하였다. 반면, 치료효과는 병원균 접종 후 0 일, 1 일, 2 일, 3 일 후에 각각 세균부유액을 처리하여 발병도를 조사하였다. 접종방법은 앞서의 생육상내 포트검정과 동일하게 수행하였다.</p> <h2>길항균 동정</h2> <p>선발된 길항세균을 동정하가 위해 배양, 생리 및 생화학적 톡성을 Bergey's manual에 따라 조사하였고, 형태는 \( 1 \% \) PTA Negative staining하여 투과전자현미경(Transmission electron microscopy, TEM)으로 관찰하였으며, 아울러 API 20E와 \( 50 \mathrm { CHB } \) kit를 동정에 이용하였다.</p> <h2>공시 길항세균의 제제화</h2> <p>선발된 길항세균의 제제화를 위해서 \( 7 \mathrm { ~L } \) 발효기에 \( \mathrm { NB } \) 배지 \( 4 \mathrm { ~L } \) 을 넣고 종균배양된 \( \mathrm { N } 4 \) 균주 \( 400 \mathrm { ml } \) 을 접종하여 3일간 배양 \( \left (30 ^ {\circ } \mathrm { C } 300 \mathrm { rpm } \right ) \) 하였다. 배양액 \( 1 \mathrm { ~L } \) 당 예비실험에서 선발된 옥수수전분, 밀가루, 콩가루, 쌀가루 등의 고분자 재료 중 방제효과가 확인된 옥수수전분 \( 200 \mathrm { ~g } \), 밀가루 \( 200 \mathrm { ~g } \), dextrose \( 4.0 \mathrm { ~g } , \mathrm { CaCO } _ { 3 } 2.0 \mathrm { ~g } , \mathrm { FeSO } 4 \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 0.1 \mathrm { ~g } , \mathrm { MnCl } _ { 2 } \). \( 4 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 0.02 \mathrm { ~g } \) 을 첨가하여 잘 섞은 다음, 철판에 엷게 깔고 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48 시간 동안 건조 후 블라인더로 분쇄하여, 수화제형 미생물농약인 \( \mathrm { N } 4 \) 제제를 제조하였다.</p>