ICR 수컷 마우스를 사용하여 실험을 진행했다. 대조군은 생리식염수를 투여하고, 나머지 4개의 그룹은 항진균조추출물을 다른 농도로 경구투여했다. 이후 마우스를 부검하여 혈액을 채취하고 혈구계수기를 사용하여 백혈구의 수를 측정했으며, 심장에서 얻은 혈청을 사용하여 혈액 생화학적 검사를 진행했다. pH와 온도에 대한 안정성을 조사한 결과, pH 6.0부터 8.0까지는 안정성이 동일했으며, pH 3.0에서는 활성이 낮았고, pH 4.0 및 pH 5.0에서는 용해되었지만 항진균 활성이 감소하는 경향을 보였다. 또한, 고온에서도 항진균 활성이 안정하게 유지되었습니다. TLC를 통해 항진균물질의 성분을 확인한 결과, ninhydrin 용액에서 자주색이 나타났지만 aniline 용액에서는 발색되지 않았다.
<h3>혈액 중 백혈구 수 와 혈액 생화학적 검사</h3> <p>4 주령의 ICR 수컷 마우스(20~25 g)를 사용하였으며, 대조군은 생리식염수를 경구투여하고, 나머지 4군은 항진균조추출물을 \( 500, 1,000, 2,500, 5,000 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도로 stomach tube를 이용하여 경구투여 한 후, 부검하여 심장 채혈한 혈액을 \( \mathrm { K } _ { 2 } \) ethylenediamineteraacetic acid(EDTA)가 포함된 CBC용기(Becton Dickinson Co., USA)에 넣어 잘 섞은 다음 Turk's solution으로 염색한 후 혈구계수기로 백혈구 수를 측정하였다. 항진균물질이 간, 신장, 담관 등의 장 기능에 영향이 미치는 지를 알아보기 위하여 심장 채혈한 다음 원심 분리하여 혈청을 얻은 후 혈액 생화학적 검사 자동분석장치(200FR, Toshiba, Japan)로 혈액 생화학적 검사를 하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>항진균물질의 특성 분석</h2> <p>항진균물질의 특성분석을 위하여 유기용매에 대한 용해성, pH와 온도에 대한 안정성을 C. gloeosporioides를 대상으로 항진균 활성을 실험하였다.</p> <p>항진균물질이 methanol에 용해되어 나타난 활성을 \( 100 \% \)로 하여 극성이 높은 용매인 water, acetic acid에서 항진균 활성을 보였으며, 극성이 낮은 용매인 acetone, chloroform, di-chloromethane과 비극성 용매인 hexane에서는 항진균 활성을 보이지 않았다. 그러므로 항진균물질은 극성물질인 것으로 입증되었다(Table 1).</p> <p>또한 pH에 대한 안정성은 pH 7.0을 \( 100 \% \)로 하여 pH 6.0~8.0까지는 동일한 안정성을 나타냈으나, pH 3.0에서는 용해가 잘 되지 않아 활성이 낮았으며, pH 4.0, pH 5.0에서 용해는 되었지만 항진균 활성이 감소하는 경향을 나타냈다(Table 2). 온도에 대한 안정성은 낮은 온도에서 나타난 항진균 활성과 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1시간, \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 15분, 121에서 30분 동안 열 처리하여 확인된 항진균 활성 정도가 동일하게 나타났으므로 높은 온도에도 매우 안정하다는 것을 확인할 수 있었다(Table 3). 이는 Bacillus spp.가 생산하는 iturin이 열, 산 및 알칼리에 안정한 물질이며, 식물병원 진균 및 세균에 효과가 있다는 연구 보고와 유사한 것으로 나타났다. 또한 고열에 대한 항진균물질의 안정성은 미생물제제화 공정 과정 중에서 열을 가하여 건조시킬 경우에 발생될 수 있는 항진균력의 감소를 극복할 수 있다고 판단된다.</p> <h2>항진균물질의 성분 분석</h2> <p>항진균물질을 TLC를 이용하여 성분을 확인한 결과 Table 4와 같이 ninhydrin용액에서는 자주색을 나타내었으나, ani-line용액에서는 발색되지 않았다. \( \alpha \)-아미노산, 펩타이드 및 단백질들은 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 근처에서 ninhydrin과 반응하여 자주색의 착색물질을 만든다는 사실로 보아 항진균물질은 아미노산으로 구성되어 있다는 것을 알 수 있었으며, aniline에는 발색되지 않았기 때문에 구성요소 중 당은 함유되어 있지 않은 것으로 확인되었다.</p>