이 연구는 여러종류의 식물에서 phytoestrogen을 함유하는 추출물을 얻고, 지방세포에 처리하여 지방세포의 분화와 지방축적에 대한 활성을, 활성이 나타난 추출물들을 첨가하여 팩을 제조하여 가슴크기 변화에 미치는 영향을 조사했다. 재료와 방법을 살펴보면 세포실험에 사용할 시료는 DMSO를 이용하여 \( 10 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)로 녹여 stock solution을 만든 후, 적정 농도로 희석하여 사용하였다. 제조한 DMEM를 사용하여 3-4일 간격으로 계대배양하였다.
<p>따라서 본 연구에서는 콩과식물을 비롯한 몇 종류의 식물체로부터 phytoestrogen을 함유하는 추출물을 얻고, 지방세포에 처리하여 지방세포의 분화와 지방축적에 대한 활성을 조사하였으며, 활성이 나타난 추출물들을 첨가하여 팩을 제조하고, 가슴크기변화에 미치는 영향을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>식물체 및 물질추출</h2> <p>지방세포의 분화와 지방의 축적을 확인하기 위하여 사용된 식물은 검정콩(Glycine max.(L.) Merrill), 더덕(Codonopsis lan-ceolata (Siebold \& Zucc.) Trautv.), 도토리(Quercus acutissima Carr.), 밤(Castanea crenata Sieb. et Zucc.), 질경이(Plantago asi-atica L.), 차전자(Psyllium, Plantago asiatica L. seed), 레드클로버(Trifolium pratense L.), 지모(Anemarrhena asphodeloides Bunge), 왕대(Phyllostachus bambusoides Siebold et Zucc.), 소나무 (Pinus densifflara S. et Z.), 푸에라리아(Pueraria mirifica), 톱야자(Serenoa repens) 등 12종을 구입하여 물질추출에 사용하였다. 각 식물체는 세절하고 음건한 후 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \), ethanol, ethyl ace-tate 순으로 순차적 용매추출을 실시하였다. 사용한 ethanol과 ethyl acetate는 Fisher (Scientific Korea Ltd.)사의 제품을 사용하였다. 식물체를 건조시킨 후 \( 20 \mathrm { ~g } \)씩 취하고, 물을 \( 200 \mathrm { ~ml } \)가하여 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 4시간 환류추출하여 \( 20 \sim 700 \mathrm { ~mg } \)의 추출물을 얻었다. 열수추출 후 식물체는 건조시킨 다음, ethanol \(100 \mathrm { ~ml } \)씩 가하여 상온에서 \( 200 \mathrm { ~rpm } \)으로 진탕 추출하여 \( 5 \sim 80 \mathrm { ~mg } \)의 추출물을 얻었으며, ethyl acetate추출은 ethanol 추출과 같은 방법을 사용하여 \( 1 \sim 20 \mathrm { ~mg } \)의 추출물을 얻었다. 열수추출물은 동결건조하고, 용매추출물은 감압 농축하여 추출물을 제조하였다. 세포실험에 사용할 시료는 DMSO (Dimethyl sulf-oxide, Sigma-Aldrich, Molecular biology grade)를 이용하여 \( 10 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)로 녹여 stock solution을 만든 후, 적정 농도로 희석하여 사용하였다.</p> <h2>세포배양</h2> <p>실험에 사용한 3T3-L1 세포는 KCLB (Korea Cell Line Bank)에서 구입하여, \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \)에서 \( 10 \% \) BS (Bovine Serum, Gibco, USA), \(1 \% \) PS (Penicillin and strep-tomycin, ThermoFisher, USA)가 포함된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, ThermoFisher, USA)를 사용하여 배양하였다. 3~4일 간격으로 계대배양을 시켜가며 실험에 사용하였다.</p>