확립된 MVM DNA정량법의 신뢰성을 보증하려고 실험법의 재현성과 민감도등을 검증했으며 시험에 사용한 바이러스의 titer는 각 \( 9.4 \times 10 ^ { 5 } \) \( \mathrm { ~IU } / \mathrm { mL } \),\( 10 ^ { 6 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \), \( 1 ^{ 6 } \mathrm {~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \), \( 10 ^ { 6 } \mathrm {~TCID } _ { 50 } / \mathrm {mL}\)였다.
<p>Titer를 측정하고자 하는 시료들과 함께 Titer가 \( 6 \times 10 ^ { 4 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)인 MVM을 순차적으로 \( 6 \times 10 ^ { -2 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)까지 10단계 희석한 후 real-time PCR을 수행하여 정량을 위한 표준곡선을 작성하였다. 시료 속에 들어있는 MVM DNA의 양을 표준곡선에 대입하여 정량하였다. 표준곡선은 MVM의 농도에 따라 real-time PCR에 의해 검출되는 crossing point 값을 \( \mathrm { TCID } _ { 50 } \mathrm { ~equivalent } / \mathrm { mL } \)로 전환하여 작성하였다. Crossing point는 PCR cycle이 exponential phase로 들어가는 cycle 수를 나타낸다.</p> <h2>Real-time PCR의 신뢰성 검증</h2> <p>확립된 MVM DNA 정량법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 확립된 실험법의 민감도(sensitivity), 재현성(reproducibility) 등을 검증하였다. 민감도를 측정하기 위해 titer가 \( 6 \times 10 ^ { 4 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)인 MVM을 순차적으로 \( 6 \times 10 ^ { -2 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)까지 10단계 희석한 후 real-time PCR을 수행하였다. 재현성 검증을 위해 titer가 \( 6 \times 10 ^ { 4 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)인 MVM을 순차적으로 \( 6 \times 10 ^ { -2 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)까지 10단계 희석한 표준시료를 서로 다른 날에 3회 정량 분석하여 crossing point 값을 비교하였다. 특이성 검증을 위해 human parvovirus B19(BBI Diagnostics, USA), bovine parvovirus(ATCC VR 767), porcine parvovirus(ATCC VR 742), bovine herpesvirus type 1(ATCC VR-188)에 대한 cross-reactivity를 측정하였다. 시험에 사용한 바이러스의 titer는 각각 \( 9.4 \times 10 ^ { 5 } \) \( \mathrm { ~IU } / \mathrm { mL } \), \( 10 ^ { 6 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \), \( 10 ^ { 6 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \), \( 10 ^ { 6 } \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \) 이었다.</p>