AGS 세포주에 H. pylori를 감염시킨 후 배양해 분리한 상층액을 10배씩 희석시켜 실험군을 만들었고, Student t-test와 SPSS 프로그램 및 Sigma Stat 프로그램을 이용해 One way ANOVA로 검정했다. 질환에 따른 IL-8 유도능은 통계적으로 유의한 차이가 없었다. cagE PCR 결과물은 MboI 제한효소에 의해서 5개의 유전자형 중 3개의 빈도가 높았고, NlaIII 제한효소에 의해서는 9개 유전자형 중에서 3개의 빈도가 높았다.
<h3>IL-8 사이토카인 정량</h3> <p>96 well에 AGS 세포주를 분주한 다음 일정 시간 동안 배양한 후, 항생제를 첨가하지 않은 새로운 배지를 분주 하여 H. pylori를 감염시켜 6시간 동안 배양시킨 후 \(1000 \mathrm { ~g } \) 에서 15분간 윈심분리 한 다음 상층액만을 분리한 후 Calibrator Dil-uent RD5P (1X) (quantikine human IL-8 immunoassay kit, R \&D systems, USA)로 10 배씩 희석시켜 각각의 실험군을 만들었다. 이때 사용된 표준용액으로는 Calibrator Diluent RD5P (1X) \( 5 \mathrm { ~mL } \) 로 녹인 \(10 \mathrm { ng } \) IL-8 표준용액으로 연속적 희석법에 의해 표준 정량화 하였다. 최소 측정 농도는 10 \( \mathrm { pg } / \mathrm { mL } \) 이었다. 각 well에 각각의 시료를 \(50 \mathrm { ul } \) 씩 분주한 후 밀봉하여 커버로 덮은 다음 2시간 동안 실온에서 배양시켰다. 수세용액으로 4번씩 수세한 다음 IL-8 Conjugate 용액을 분주하여 1시간 반응시킨 후 다시 4번 수세하고 기질용액을 넣어 다시 30분간 반응 시킨 후 정지용액을 첨가한 후 30분이내에 \(450 \mathrm { ~nm } \) 와 \(540 \mathrm { ~nm } \) 로 Microplate (ELISA) reader를 사용하여 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>대상 환자간의 연렁비교 및 성비는 Student t-test를 사용하였으며, 제한효소에 의해 분류된 그룹과 IL-8 유도능과의 연관성은 SPSS 프로그램 및 Sigma Stat 프로그램을 이용하여 One way ANOVA로 검정 하였으며, 통계적 유의성은 \( P \) 값이 0.05미만일 때로 인정하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>질환에 따른 IL-8 유도능</h2> <p>각기 질환에서 분리된 H. pylori 균주를 AGS 세포주에 감염시킨 후 IL-8 유도능을 측정한 결과 59균주(79.7 \%)에서 양성이었으며, 15균주는 IL-8 분비량이 \(200 \mathrm { pg } / \mathrm { mL } \) 미만으로 음성으로 판단하였다. cagE 유전자가 결핍된 3균주에서는 IL-8 분비량이 \(80 \mathrm { pg } / \mathrm { mL } \) 미만이었다.</p> <p>질환에 따른 IL-8 유도능을 검토한 결과 질환에 따라 다소 차이는 있었으나 통계적으로 유의한 차이는 보이지 않았다.</p> <h2>cagE다양성에 따른 IL-8 유도능</h2> <p>cagE 유전자는 십이지장궤양 환자에서 분리한 H. pylori 3개의 균주를 제외한 모든 균주에서 확인되었다. PCR-RFLP 방법에 의한 분석은 cagE유전자의 다형성을 나타냈다. 즉 \(1,520- \mathrm { bp } \)의 cagE PCR 결과물은 MboI제한효소에 의해 5개의 유전자형을 나타냈으며, 이중에 3개의 유전자형의 빈도가 높았다. A형은 960-, 470- 그리고 90-bp로 절편화 되었고, B형은 556-, 517-그리고 447-bp로 절편화 되었으며, C형은 964- 및 556-bp의 길이로 절편화되었다. 한편 제한효소 NlaIII에의한 cagE 유전자의 절단은 9개의 유전자형을 보였으며 이중에서 3개 유전자형의 빈도가 높았다. C형은 527-, 371-, 358-, 128-, 96-, 36- 및 \(4 \mathrm { bp } \)의 절편으로 염기서열 분석결과로부터 예측되어졌으며, \( \mathrm { D } \) 형은 530-360,320,130및 90-bp 그리고 E형은 443-, 371-, 358-, 132-, 96-, 84- 및 36-bp로 예측되어졌다. 가장 작은 전편들은 전기영동 후에는 거의 보이지 않았다.</p>