본 연구에서는 혈청 AST와 ALT 활성을 Reitman-Frankel 방법을 사용하여 측정하였다. AST의 경우, 시험관에서 가열한 후 혈청과 혼합하여 반응시키는 과정을 거쳤으며, ALT 측정은 AST와 동일한 방법을 사용하되, 반응시간만 30분으로 설정하였다. 단백질의 정량은 Lowry 방법을 통해 UV spectrophotometer를 이용하여 측정했으며, Bovine Serum Albumin (BSA)을 표준으로 삼아 단백질 함량을 계산했다. 실험 결과는 평균과 표준편차로 표현되었으며, 통계적 유의성은 Student's t-test를 사용하여 검정되었다.
<h2>혈청 Aspartate (AST)와 Alanine (ALT) aminotransferase 활성 측정</h2> <p>혈청 AST, ALT 활성 도는 Reitman-Frankel method를 이용해 다음과 같이 실시하였다.</p> <h3>1) AST 측정</h3> <p>AST 기질액 \( 1.0 \mathrm{m \ell} \)를 시험관에 취하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3분간 가온 하였다. 여기에 \( 0.2 \mathrm{m \ell} \)의 혈청을 가하여 섞은 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 60분간 반응시킨 뒤, \( 1 \mathrm{m \ell} \)의 발색 액을 가하여 잘 흔합한 후 UV spectrophotometer(UVIKON 933)로써 파장 \( 505 \mathrm{nm} \)에서 D.D.W를 Blank로 하여 홉광도를 측정하였다.</p> <h3>2) ALT 측정</h3> <p>ALT 측정은 ALT 기질액을 사용하였고, 혈청과 혼합 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 수조(Water bath) 내에서의 반응시간이 30분인 것을 제외하고는 AST 측정법과 동일하게 측정하였다.</p> <h2>간 조직중의 단백질 함량 분석(Protein Assay)</h2> <p>단백질의 정량은 Lowry 등의 방법에 의하여 UV spectrophotometer (UVIKON 933)를 이용하여 \( 750 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였고, Bovine Serum Albumin (BSA)을 표준으로 하여 단백질 함량을 계산하였다.</p> <h2>간 조직중의 Superoxide Dismutase (SOD)의 활성 측정</h2> <p>\(0.2\mathrm{M}\) \(\mathrm{K}\)-phosphate buffer를 \( 672 \mu \ell, 1 \mathrm{mM} \) xanthine \( 100 \mu \ell \), \(1\%\) Sodium deoxychlorate(DOC) \( 30 \mu \ell\), \(1.5 \mathrm{mM} \) KCN \( 30 \mu \ell \), \( 0.2 \mathrm{mM} \) cytochrome C \( 150 \mu \ell \)를 넣고 Sample \( 5 \mu \ell \)를 섞은 후, xanthine oxidase 원액을 \( 10 \mu \ell \)를 넣어 섞은 후, UV spectrophotometer (UVIKON 933)를 이용하여 \( 550 \mathrm{nm} \)에서의 흡광도 감소를 2분 동안 측정하였다. Sample의 효소 활성도를 알아보기 위한 표준물질로서는 Sigma사의 Superoxide Dismutase를 사용하였다.</p> <h2>간 조직중의 Catalase의 활성 측정</h2> <p>Phosphate Buffer \( 1.9 \mathrm{m \ell} \)에 간 조직 Sample \( 0.1 \mathrm{m} \ell \)와 과산화수소 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 UV spectrophotometer(UVIKON 933)를 이용하여 \( 240 \mathrm{nm} \)에서 1분 30초 동안 흡광도 감소 측정을 하였다.</p> <h2>간 조직중의 GSH(Glutathione Reduced Form), GSSG(Glutathione Oxidized Form)의 정량</h2> <p>간 Homogenate \( 100 \mu l \)에 \( 25 \% \mathrm{HPO}_{3} 25 \mu l \)를 섞어 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \), \( 12000 \times \mathrm{g} \)에서 10분간 원심 분리하여 Sample를 준비하였다.</p> <h3>1) GSH</h3> <p>형광분석기(Flourimeter)로 Sample 상등액 \( 80 \mu \ell \)와 Phosphate Buffer \( 1600 \mu \ell \)와 OPT (O-Phthaladehyde) \( 80 \mu \ell \)를 15분 흔든 후 Flourimeter (Jenway, Jenway 6200)로서 Ex.350, Em.420에서 측정하였다.</p> <h3>2) GSSG</h3> <p>형광분석기(Flourimeter : Jenway, Jenway 6200)로 Sample 상등액 \( 200 \mu \ell \)와 NEM (N-Ethyleneamide) \( 80 \mu \ell \)를 섞은 후 20분 방치하고, \( 0.14 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} 1720 \mu \ell \)를 가하여 혼합 한 후 앞에서 혼합한 Sample \( 200 \mu \ell \)와 OPT (O-Phthaladehyde) \( 80 \mu \ell \)를 15분 흔든 후 Ex.350, Em. 420에서 측정하였다.</p> <h2>간 조직 중 GPx (GSH-Peroxidase)의 활성 측정</h2> <p>\( 0.1 \mathrm{M} \) PB (Phosphate buffer) \( 400 \mu \ell\), \(0.01 \mathrm{M} \mathrm{NaN}{ }_{3} 70 \mu \ell \), \( 0.01 \mathrm{M} \) GSH \( 70 \mu \ell\), \(1.5 \mathrm{mM} \) NADPH \( 70 \mu \ell\), \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 360 \mu \ell \), GSSH-Reductase \( 20 \mu \ell \), Sample \( 10 \mu \ell \)를 혼합하여 상온에서 1분간 방치 한 후 \( 2 \mathrm{mM} \)의 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} 100 \mu \ell \)를 가해 잘 섞은 후 UV spectrophotometer (UVIKON 933)를 이용하여 \( 340 \mathrm{nm} \)에서 1분 30초간 흡광도 감소 측정을 하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>본 실험에 대한 모든 실험 결과는 평균치와 표준편차로 나타내었고, 통계직 유의성은 Student's t-test에 의해 검정하였다.</p>