실험동물을 배합사료로 적응시킨 후, 난괴법에 따라 분리하여 사육하여 실험군의 식이효율을 계산하였다. 실험동물 처치 전 절식한 후 가볍게 마취한 다음 개복하고 채혈하여 원심분리된 혈청을 활성 측정으로 사용하였으며, 이때 간을 급속동결하여 항산화 관련 효소 활성 및 항산화 능력 측정에 사용했다. 혈청 중 효소 활성과 지질 함량의 측정은 혈액생화학적 검사 자동분석기를 사용하였다. 간 조직 중 항산화 효소계의 활성 측정은 Aebi의 방법, GSH-Px 활성은 Flohe 등의 방법으로 측정하였다.
<h2>실험동물 및 실험식이</h2> <p>실험동물은 평균 체중 200 210 g 정도의 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐를 1 주일 동안 일반 배합사료로 적응시킨 후, 난괴법(randomized block design)에 따라 각 처리 군 당 6마리씩 4군으로 나누어 stainless steel wire cage에 한 마리 씩 분리하여 사육하였다. 본 실험에 사용된 식이는 Table 2에서와 같이 AIN-93 정제식이 조성을 변형하여 사용하였으며, 실험식이는 정상군(N), 고콜레스테롤군(HC), 고콜레스테롤과 대두분말식이군(SHC) 및 고콜레스테롤과 DJI 된장분말식이군 \( ( \mathrm { DHC } ) \) 으로 나누어 4 주간 사육하였다. 각 실험 식이는 Table 1 에서와 같이 건조분말 시료의 일반성분 분석 자료를 기초로하여 열량, 당질, 지방, 단백질 및 식이섬유소 함량을 동일하도록 조정하였다. 물과 식이는 제한 없이 공급하였고, 사육실 환경온도는 \( 18 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 상대습도는 \( 65 \pm 5 \% \) 로 유지하였으며, 명암은 12시간 주기(08:00 20:00)로 조절하였다. 체중과 식이섭취량은 1 주일 간격으로 같은 시각에 측정하였으며 사육기간의 체중증가량을 동일 기간의 식이섭취량으로 나누어 각 실험군의 식이효율을 계산하였다.</p> <h2>실험동물 처치</h2> <p>실험동물은 처치 전 12 시간 이상 절식시킨 후 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) 로 가볍게 마취시킨 다음, 개복하고 복부 대동맥에서 채혈하여 \( 4,500 \times g \)에서 20 분간 원심분리 후 분리한 혈청을 AST, ALT, ALP 및 \( \mathrm { LDL } \) 활성 측정에 사용하였다. 간은 적출하여 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 남아 있는 혈액 및 기타 부착물질을 제거하고 여지로 수분을 제거한 후 효소 활성 저하를 예방하기 위하여 급속동결하여 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 deep freezer에 보관하면서 항산화 관련 효소 활성 및 항산화 능력 측정에 사용하였다.</p> <h2>혈청 중 효소 활성과 지질 함량 측정</h2> <p>혈청 중 aspartate transaminase (AST), alanine trans-aminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP) 및 lactate de-hydrogenase (LDH) 활성과 중성지방(TG), 총콜레스테롤(TC) 및 HDL-콜레스테롤 함량은 혈액생화학적 검사 자동분석기(Fuii Dri-Chem 3500, Fuififilm, Japan)를 사용하여 측정하였다. LDL-콜레스테롤 함량은 Friedwald식 \{ 총콜레스테롤-(HDL-콜레스테롤-중성지방/5) \} 에 의하여 계산하였다.</p> <h2>간 조직 중 항산화 효소계의 활성 측정</h2> <p>간 조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 과 4 배량의 \( 0.25 \mathrm { M } \) sucrose buffer ( \( \mathrm { pH } \) 7.5)를 가하고 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 ultra turax homogenizer (Janke \& Kunkel, Staufen, Germany)로 10,000× \( g \) 에서 2분간 마쇄하였다. 마쇄액은 \( 600 \times g \) 에서 10 분간 원심분리하여 핵과 미마쇄 부분을제거한 다음 상징액을 다시 한번 더 15,000× \( g \) 에서 20 분간 원심분리하였다. 상징액을 취하여 catalase 및 glutathione per-oxidase (GSH-Px) 활성 측정을 위한 효소원으로 사용하였다. Catalase 활성은 Aebi의 방법[1], GSH-Px 활성은 Flohe 등의 방법으로 측정하였다. 단백질의 정량은 bovine serum al-bumin을 표준 단백질 용액을 사용하여 Lowry 등의 방법을 이용한 protein assay Kit (Sigma, USA)를 사용하여 비색 정량하였다.</p>