Tibbot과 Skadsen의 방법에 준하여 \( \alpha \)-glucosidase 저해효과를 측정하였다. 모든 실혐결과는 평균 \( \pm \) 표준편차(mean \( \pm \) standard deviation)로 표현하였다. 통계 분석은 최소 \(6\)개의 기술 복제몰에 수행된다. 실험에는 균주로 피부상재균을 사용하고자 한다.
<h2>\( \alpha \)-Glucosidase 저해효과 측정</h2> <p>Tibbot과 Skadsen의 방법에 준하여 \( \alpha \)-glucosidase 저해효과를 측정하였다. \( 50 \mathrm{mM} \) sodium succinate buffer \( (\mathrm{pH} 4.2) \) 에 \( \rho \)-nitrophenol- \( \alpha \)-D-glucopyranoside를 용해시켜 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도로 기질을 제조하였으며, 기질용액 \( 1 \mathrm{~mL} \) 와 효소액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 혼합하여 샘플군은 섬괴불나무 잎 추출물 \( 0.1 \mathrm{~mL} \), 대조군은 증류수 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 를 각각 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 반응시킨 후 발색시약인 \( 1 \mathrm{~N}\) \(NaOH\) \(0.1 \mathrm{~mL} \)를 첨가하였다. 효소반응에 의해 생성된 \( \rho\)-nitrophenol은 표준곡선을 통해 계산하였다.</p> <h2>항균 활성 측정</h2> <p>실험에 사용한 균주는 피부상재균으로 세균각막염과 안검결막염 등의 원인균인 Staphylococcus epidermidis의 표준균주 ATCC \(12228\), Staphylococcus aureus의 표준균주 ATCC \(12600\), 여드름 원인균 Propionibacterium acne의 표준균주 ATCC \911828\), 위, 십이지장궤양의 원인균인 Helicobacter pylori의 표준균주 ATCC \(43504\), 병원성 대장균인 Escherichia coli의 표준균주 ATCC \(9637\), 충치원인균인 Streptococcus mutans의 표준균주 ATCC \(700610\), 구강 내 세균인 Candida albicans의 표준균주 ATCC \(18804\)를 사용하였다. S. mutans와 C. albicans의 배양을 위한 액체배지로는 brain heart infusion 및 YM broth를 각각 사용하였으며, E. coli 및 S epidermidis의 액체배지로는 nutrient broth를 사용하였고, S. aureus의 액체배지로는 tryptic soy broth를 사용하였다. 고체배지는 상기 액체배지에 agar를 첨가하여 본 실험에 사용하였다. 미호기성 균은 조건을 유지시켜주기 위해서 \( 10 \% \) \(\mathrm{CO}_{2} \) incubator에 배양하였으며, incubator의 습도는 항상 \( 95 \% \) 이상으로 유지하였다. Agar plate상에서 배양은 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에 \(48\)-\(72\)시간 동안 배양하였으며, S. epidermidis, S. aureus, 및 E. coli 배양에는 nutrient medium을 사용하였으며, agar plate상으로 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 의 BOD incubator에서 \(24\)-\(48\)시간 동안 배양하였다. Disc method에 의한 항균활성 검색은 최적배지 agar plate에 준비한 균 배양액 \( 100 \mu \mathrm{L} \)를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말하고 멸균된 지름 \( 8 \mathrm{~mm} \) 크기의 disc paper를 올려놓고 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 제균한 섬괴불나무 잎 추출물 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 에 TPC 농도를 \( 50,100,150 \) 및 \( 200 \mu \mathrm{g} \)로 분주하였다. 대조구로는 멸균수 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 를 흡수시켜 \(24\)시간 동안 배양하여, disc 주위의 clear zone 생성 유무와 직경을 측정함으로써 항균활성을 계산하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실혐결과는 평균 \( \pm \) 표준편차(mean \( \pm \) standard deviation)로 표현하였다. 통계 분석은 최소 \(6\)개의 기술 복제몰에 대한 실험을 위해 SPSS \(25\) (Statistical Package for Social Science, Chicago, IL, USA)의 Duncan's multiple range test one way ANOVA를 사용하여 수행되었다. \( p<0.05 \)는 통계적으로 유의하다고 간주되었다.</p>