수증기 증류법, 핵산을 이용한 용매추출법, 그리고 초임계 추출법을 이용하여 추출한 계피 정유를 사용하여 유제 및 입제를 제조하였다. 실험에 사용된 잉어는 오창양어장에서 구입하여 건강한 개체를 선별하였고, 유화제로는 비이온계 계면활성제와 음이온성 계면활성제를 사용하였다. Zeolite를 사용하여 유제를 흡유시켜 입제를 제조하였으며, EPA LIST 3, 4에 농약의 보조제로서 사용가능한 담체를 사용하여, 농촌진흥청 환경생물 독성 시험 기준과 방법에 따라 계피원제의 잉어에 대한 급성 독성 실험을 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시험물질</h2> <p>시험에 사용된 계피 정유는 전북대학교 이희선 교수께서 수증기 증류법, 핵산을 이용한 용매추출법, 그리고 초임계 추출법을 이용하여 추출한 정유를 제공받아 사용하였다. 상용화된 계피 정유를 Mother and Daughters(포천, 경기도)사로부터 구입하여 사용하였다. 사용된 유화제로는 Castor oil, Tween \(80 \), Triton X- \( 100 \), Tergitol, Nonidet 등의 비이온계 계면활성제와 음이온성 계면활성제로서 Sodium dodecyl sulfate (SDS) 와 sodium dodecylbenzene sulfonate 등의 \( 2 \)종이 사용 되었으며 모두 Sigma-Aldrich사(St Louise, MO, USA)로 부터 구입하였다.</p> <h2>시험생물</h2> <p>본 어독성 실험에 사용된 잉어(Cyprimus carpio)는 오창양어장 (오창, 충북, 대한민국)으로 부터 구입하여 경북대학교 실험실에서 \(1 \)주일 이상 순화시킨 것으로 사용하였다. 실험에 사용된 잉어의 전장은 최소 \( 3-5 \mathrm { ~cm } \) 로 건강한 개체를 선별 하였다. 시험 실시 \(24 \)시간 전부터 잉어에 대한 먹이공급을 중단하고 사용된 물은 염소를 제거한 상태의 물을 사용하였다.</p> <h2>유제 및 입제의 제조</h2> <p>유제의 품질관리를 위해 정유의 비중들을 측정하였고 그를 바탕으로 유제의 비중들을 측정하였다. 정유 유제를 제형화하기 위하여 에탄올을 용제로 사용하였고 유화제와의 최종 제형 비를 \( 5:1:4 \) (정유 : 유화제 : 에탄올)로 설정하여 제조하였다. 비이온성 계면활성제는 이온성 계면활성제에 비하여 피부자극이 적고 유효성분에 영향을 끼치지 않는 것으로 알려져 있다. Tergitol를 선정하여 실험을 수행하였다. 계면활성제가 물과 기름에 대한 친화성 정도를 나타내는 값인 \( \mathrm { HLB } \) 값의 범위가 (8 \) 에서 \(15 \) 사이인 비이온성 계면활성제를 사용하였고, 선택한 계면활성제는 미국 \( \mathrm { EPA } \operatorname { LST } 3,4 \) 에 농약의 보조제로서 사용이 허가되어 있다.</p> <p>Zeolite를 사용하여 유제를 흡유시켜 입제를 제조 하였으며 입제의 입자별 중량과 흡유능을 고려하여 Zeolite의 적정 크기를 설정 하였다. 선택한 담체는 미국 EPA LIST \(3, 4 \) 에 농약의 보조제로서 사용가능 하였고, Zeolite의 흡유능에 따라 최종 제형 비를 \(1:9 \) (유제 : Zeolite)가 되도록 제조하였다.</p> <h2>계피정유 원제, 유제, 입제의 잉어에 대한 급성어독성 실험</h2> <p>농촌진흥청 환경생물 독성 시험 기준과 방법(제 \(5 \)조 제 \(1 \)항 제 \(4 \)호)에 따라 잉어에 대한 급성 독성 실험을 실시 하였다.계피원제의 잉어 급성 독성 실험을 위해 수증기, 핵산, 초임계 추출법을 이용하여 획득한 정유와 아세톤을 무게 비 \( 50: 50 \) 으로 혼합하였다. 추출법 별로 유효 성분이 \( 10 \mathrm { mg } \mathrm { L } ^ { -1 } \) 이 되도록 처리할 경우 사용되는 계면활성제 양을 계산 하여 Tergitol을 사용 하여 급성 독성 시험을 실시 하였다.</p>