본 논문에서는 제조된 추출물의 안전성 평가의 일환으로 인간 적혈구를 \(96\text{-}\mathrm{well}\) microplate에 가하고 시료용액을 가한 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 반응시켰으며, 이후 10분간 원심분리\( (1,500 \mathrm { rpm } ) \)하여 헤모글로빈 유출 정도를 \( 414 \mathrm { nm } \)에서 측정하여 용혈활성을 계산하였으며, 국내 시중에서 유통되는 한방 생약재 61종과 사인, 고본, 백출, 금은화, 구기자, 황백 및 형개의 경우 원산지가 서로 다른 생약재를 사용하여 14종의 추출물을 조제하여, 총 68종의 에탄올 추출물의 항균활성을 평가하였다.
<h2>인간 적혈구 용혈 활성 평가</h2> <p>제조된 추출물의 안전성 평가의 일환으로 인간 적혈구( \( 4 \% \))를 이용하여 용혈 활성을 평가하였다. PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 를 96-well microplate에 가하고 각각 \( 100, 250 및500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도의 시료용액 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 를 가한 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응시켰으며, 이후 반응액을 10 분간 원심분리 \( (1,500 \mathrm { rpm } ) \) 하여 상등액 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 \( 414 \mathrm { nm } \) 에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO ( \( 2 \% \)), 적혈구의 \( 100 \% \) 용혈을 위한 실험 대조구로는 triton \( \mathrm { X } -100(0.1 \%) \) 을 사용하였다. 용혈활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.</p> <p>\( \% \) hemolysis \[ = [( \text { Abs. S } - \text { Abs. C) } /( \text { Abs. T } - \text { Abs. C) } ] \times 100 . \]</p> <ul>Abs. S: 시료 첨가구의 흡광도</ul> <ul>Abs. C: DMSO 첨가구의 흡광도</ul> <ul>Abs. T: triton X-100 첨가구의 흡광도</ul> <h1>결과 및 고찰</h1> <p>국내 시중에서 유통되는 한방 생약재 61종을 대상으로 에탄올 추출물을 조제하였다. 사인, 고본, 백출, 금은화, 구기자, 황백 및 형개의 경우 원산지가 서로 다른 생약재를 사용하여 14 종의 추출물을 조제하여, 총 68 종의 추출물을 조제하였다. 사용한 생약재는 중국산 46 종, 국내산 14 종, 북한산 5종, 베트남산 3종의 순으로 국내에서 일반적으로 유통되는 생약재의 상당부분이 중국산임을 알 수 있었으며, 추출에 사용된 부위는 부리 27 종, 열매 10 종, 껍질 7 종, 줄기 6 종, 잎 5 종, 종자 5 종, 꽃 4 종, 균핵 3 종, 꽃가루 1 종의 순으로 뿌리와 열매가 \( 62 \% \) 이상을 차지하였다(Table \( 1 \)). 생약재의 평균 수분함량은 \( 7.10 \% \) 로, 속단(중국산)이 \( 0.79 \% \) 로 가장 낮았으며, 마황(중국산)이 \( 31.46 \% \) 로 가장 높았다. 한편 추출효율은 개자 (중국산)가 \( 0.12 \% \) 로 가장 낮았으며, 오배자 (중국산)가 \( 74.28 \% \) 로 가장 높았다. 오배자, 감국(중국산, \( 68.30 \%) \), 오가피 (중국산, \( 63.21 \% \) 를 제외한 경우 평균 추출율은 \( 6.75 \% \) 를 나타내었다(Table \( 1 \)). 조제된 68 종 에탄올 추 출물에 대한 항균활성을 평가한 결과는 Table \( 2 \) 에 나타내었다. 대조구로 사용된 ampicillin은 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { disc } \) 농도에서 \( P. aeruginosa \)를 제외한 세균에, stereptomycin sulfate는 \( S .aureus \), \( S. typhimurium \)및 \( P. aeruginosa \)를 제외한 세균에 우수한 항균 효과를 나타내었으며, amphotericin B와 miconazole은 동일농도에서 \( C. albicans \)와 \( S. cerevisiae \)에 대해 우수한 항진균 활성을 나타내었다. 조제된 추출물들은 \( 0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 농도에서 다양한 병원성 및 식품부패균에 대해 \( 7.0 \sim 21.0 \mathrm { ~mm } \)의 생육억제환을 나타내며 각기 다른 항균 스 나타내었다. 먼저 L. monocytogens에 대해서는 고본(중국산), 팔각향, 등심초, 노근, 오배자, 단삼, 정향 및 괄 루인이 항균효과를 나타내었고, 그 중 등심초가 \( 13.0 \mathrm { ~mm } \) 생 육저지환을 나타내어 비교적 강한 항균활성을 보였다. \( B. subtilis \)에 대해서는 석창포, 고본(중국산), 천남성, 인진, 팔 각향, 등심초, 구기자(국내산), 오배자, 단삼, 정향 및 옥촉서예 11 종의 생약재가 항균성을 나타내었고, 천남성과 등심초의 항균력이 특히 강하게 나타났다. \( S. epidermidis \) 를 대상으 로 항균력을 검사한 결과 고본(중국산), 백출, 팔각향, 등심 초, 신이, 오배자, 단삼, 정향, 유근피에서 항균활성을 나타 내었고, 특히 등심초와 단삼 추출물의 경우 매우 강력한 항균력 \( (21.0 \mathrm { ~mm } ) \) 을 나타내었다. S. aureus에 대해서는 백출 (북한산), 토사자, 구기자(국내산), 오배자, 단삼, 정향, 유근 피가 항균성을 나타내었다. S. typhimurim에 대해서는 고본 (중국산), 팔각향, 등심초, 구기자(국내산), 오배자, 정향의 추출물에서 항균활성 \( (8.0 \sim 18.0 \mathrm { ~mm } ) \) 을 나타내었으며 특히, 오배자가 비교적 강한 항균 활성을 보였다. E. coli에 대해서 는 석창포, 고본(국내산), 팔각향, 등심초, 건지황, 오배자, 정 향, 괄루근이 항균활성을 나타내었다. \( P. vulgaris \)에 대해서는 초오, 석창포, 사인(중국산), 고본(중국산), 저령, 팔각향, 등심초, 금은화(북한산), 길경, 건지황, 오배자, 단삼, 정향, 괄루근, 괄루인, 관동화, 조구등, 옥촉서예 18 종의 생약재가 항균 활성을 보였으며, 그 중 팔각향과 등심초의 항균 활성 이 우수했다 \( (21.0 \mathrm { ~mm } ) \). P. aeruginosa에 대한 항균활성은 추 출물 전체에서 매우 약하게 나타났으며, 석창포, 고본(중국 산), 지각, 팔각향, 등심초, 오배자, 정향에서 항균 효과를 확인할 수 있었다. 따라서 오배자 및 팔각향 등의 생약재는 항 생제 저항성 P. aeruginosa의 제어에 효율적으로 이용될 수 있음을 추측할 수 있었다. 캔디다증 피부 감염균의 일종인 C. albicans에 대해서는 초오, 사인(베트남), 고본(중국산), 천남성, 자완, 백출(중국산), 계지, 향부자, 저령, 팔각향, 등심초, 신이, 박하, 속단, 원지, 오배자, 정향, 포황, 창이자가 항균활성을 나타내었고, 그 중 향부자, 등심초, 오배자가 비교적 강한 항균 활성을 보였다 \( (10.5 \sim 15.0 \mathrm { ~mm } ) \). 발효효모 \( S. cerevisiae \)에 대해서는 등심초, 구기자(국내산), 정향에서 미약한 활성이 나타났다. 한편 고본 및 구기자의 경우 국내산과 중국산의 항균 스펙트럼의 차이가 인정되었는데, 이는 재배지에 따른 차이인지 또는 식물종의 미세한 차이에 따른 활 성차이인지 차후 검토가 필요하리라 판단된다.</p>