본 연구에서는 간 특이적인 \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소와 칠성장어 간조직 LDH가 염기성에서 안정하다는 것을 발견하였다. 특히, 칠성장어 간조직 LDH의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 7.5로 중성과 염기성에서 활성이 높았다. 반면, 칠성장어 골격근 LDH의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 5.5로 염기성에서 활성이 감소하였다. 이를 바탕으로 칠성장어 간조직 LDH의 동위효소 구성 및 진화상 위치를 확인하기 위해 liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \), eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \), \( \mathrm{A}_{4} \)에 대한 항혈청을 사용하여 항원-항체 반응을 실시하였다.
<h2>LDH 동위효소의 최적 \( \mathrm{pH} \)</h2><p>Liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \)동위효소의 활성은 산성에서 급격히 감소하고 염기성에서 높은 활성을 보이며 최적 \( \mathrm{pH} \)는 8.5로 나타났다. Eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \)의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 8.5, testis \( \mathrm{C}_{4} \)는\( \mathrm{pH} 9.0 \)으로 본 논문의 결과와 유사하였고, Gadus morhua\( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 7.1, 청어 정자의 \( \mathrm{A}_{4}\), \(\mathrm{A}_{2}\mathrm{B}_{2}\), \(\mathrm{B}_{4} \)의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 7.1, 7.25, 7.6으로 본 논문의 결과와 약간의 차이를 보이나 \( \mathrm{pH} \) 6.5-9.0에서 안정하므로 큰 차이는 볼 수 없었다. 칠성장어 간조직 LDH 동위효소의 최적 \( \mathrm{pH} \) 는 7.5이며 중성과 염기성에서 높은 활성을 나타냈으나 칠성장어 골격근 LDH 동위효소의 최적 \( \mathrm{pH} \) 는 5.5이고 염기성으로 갈수록 활성이 감소하였으며, PAGIEF에서의 \(\mathrm{pI}\) 값과 유사하였다. 따라서 liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소와 칠성장어 간조직 LDH는 염기성에서 안정하였고, 칠성장어 간조직 LDH는 골격근 LDH와 차이가 있는 것으로 사료된다.</p><h2>항원-항체 반응</h2><p>칠성장어 간조직 LDH의 동위효소 구성 및 진화상에서의 위치를 확인하고자 칠성장어 간조직의 정제된 LDH와 chromatofocusing에 의해 정제된 \( \mathrm{pH} 7.45 \) 분획의 LDH 동위효소에 대해 liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 에 대한 항혈청과 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 와 \( \mathrm{A}_{4} \)에 대한 항혈청을 사용하여 항원-항체 반응을 실시하였다.</p><p>칠성장어 간조직 정제액과 정제된 \( \mathrm{pH} 7.45 \) 분획의 LDH 동위효소는 \( \mathrm{LDH} \mathrm{A}_{4} \)에 대한 항혈청 \( 25 \mu \mathrm{l} \)를 가했을 때 모두 복합체를 형성하였고, liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \)와 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \)에 대한 항혈청과는 복합물을 형성하였지만 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \)에 대한 항혈청과는 복합물을 매우 적게 형성하였다.</p><p>칠성장어 LDH와 hagfish \( \mathrm{B}_{4} \) 동위효소는 대구(Pseudophycis barbata)의 \( \mathrm{LDH} \mathrm{~B}_{4} \) 보다 \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소에 유사하므로 \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소를 LDH 동위효소의 조상유전자로 보고하였고 본 실험결과의 대구 간조직 LDH가 liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소와 유사한 것으로 나타난 결과와 일치하였다. 칠성장어 간조직의 LDH 동위효소는 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 보다 liver-specific\( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소에 대한 항혈청과 더 많은 복합물을 형성하므로 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소가 liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소보다 더 빠르게 진화되었고, 꺽지 \( \mathrm{A}_{4} \) 에 대한 항혈청과 복합물을 형성하므로 Ldh-A는 보존적인 것으로 확인되었다. Liver-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소는 하부단위체 A의 구조와 유사하게 진화된 것으로 보이며 칠성장어 간조직의 LDH 동위효소는 단일 밴드로 나타나지만 하부단위체 A, B 뿐 아니라 하부단위체 C도 포함하는 것으로 사료 된다.</p><p>LDH 동위효소의 각 유전자들은 생리적 기능에 따라 진화가 이루어지므로 하부단위체들의 분자적 구조를 연구하는데 있어서 비교군으로 어떤 종을 선택할 것인지가 중요하다. LDH 동위효소의 진화적 유연관계가 최근에 이르기까지 논란이 되고 있는 것은 일부 비교군 선택에 한정되었기 때문이라고 생각된다.</p>