본 논문에서는 흑마늘 추출물의 농도에 따른 항스트레스 활성 평가를 위하여 농도별로 흑마늘 추출물을 넣지 않은 대조군과 2 brix 흑마늘추출물 급이군(RT1), 7 brix 흑마늘 추출물 급이군(RT2), 14 brix 흑마늘추출물 급이군(RT3)으로 나누어 준비하였다. 혈당분석에서 함량은 혈액 중 지질 함량분석에서는 총 콜레스테롤, 중성지방 및 high density lip-oprotein cholesterol (HDL-C) 함량은 각각의 해당 kit를 이용하였고, GOT와 GPT 활성도, 총 단백질 및 알부민 함량측정에서는 해당 측정용 kit와 총 단백질 측정용 kit 시약을 이용하였다. 혈액 중의 총 지질(total lipid) 함량은 Frings 등의 방법에 따라 혈청 \( 20 \mu \ell \)에 phospho-vanillin 시약을 첨가한 후 파장 \( 540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였고, 기타 혈당분석은 혈액분석기을 통해서, 알부민의 함량은 BCG법에 따라 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>실험에 사용한 흑마늘은 경남 남해군에서 재배 수확된 마늘을 이용하여 새남해농협흑마늘가공사업소에서 생산된 것을 진공추출기로 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 추출하여 각각 2, 7 및 14 brix로 농도 조정된 것을 제공받아 사용하였다.</p><h2>실험동물의 사양관리</h2><p>실험동물은 생후 4주된 \( 160 \pm 10 \mathrm{~g} \)의 Sprague-Dawley계 수컷 성장기 흰쥐를 (주)샘타코(Seoul, Korea)로부터 분양 받아, 온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 명암주기 12시간(07:00~19:00)이 자동설정 된 동물 사육실에서 1주간 시판 고형사료(Rat chow, Samyang Co. Ltd.)로 적응시켰다. 기본식이로 1주일간 예비사육한 후 외관상 건강한 \( 180 \pm 10 \mathrm{~g} \) 흰쥐를 체중에 따른 난괴법으로 6마리씩 그룹으로 나누어 사육 상자에 한 마리씩 넣어 4주 간 실험식이를 급이하면서 사육하였다.</p><h2>실험식이의 조성</h2><p>흑마늘 추출물의 농도에 따른 항스트레스 활성 평가를 위하여 비구속정상군(Normal group, C), 구속군은 대조군(Control group, RC), 2 brix 흑마늘추출물 급이군(RT1), 7 brix 흑마늘 추출물 급이군(RT2), 14 brix 흑마늘추출물 급이군(RT3)으로 나누어 Table 1과 같은 식이 조성에 따라 식이에 혼합 급이하였다.</p><h2>식이섭취량, 식이효율 및 체중측정</h2><p>실험기간 동안 식이는 매일 오후 5시에 급이하였고 다음날 오전 10경에 식이섭취량을 조사하였다. 식이섭취량의 오차를 최소화하고자 손실량을 보정하였다.</p><p>물은 수도수를 공급하였으며 매일 신선하게 공급하였다. 체중은 1주일에 한번씩 일정한 시간에 측정하였다. 식이효율은 실험기간 동안의 체중 증가량을 같은 기간 동안의 총 식이섭취량으로 나누어 산출하였다.</p><h2>스트레스 부과 및 실험동물의 처리</h2><p>4주간의 실험식이를 거친 흰쥐의 스트레스 부과를 위하여 24시간 동안 절식시킨 다음 구속케이지 \( (15 \mathrm{~cm} \times 15 \mathrm{~cm} \times 20 \) \( \mathrm{cm}) \)에 한 마리씩 넣고 실온 \( \left(24 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에서 24시간 절식절수 상태로 방치하였다.</p><p>24시간 구속스트레스를 가한 흰쥐는 에테르로 가볍게 마취시켜 심장에서 채혈하였다. 채혈된 혈액은 빙수 중에서 30분 간 냉각시킨 후 원심분리기(Mega 17R, Hanil, Korea)로 \( 1,008 \mathrm{g} \)에서 15분간 원심분리 시켜 혈청을 얻어 \( -70{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관해 두고 분석용 시료로 사용하였다.</p><p>실험동물의 장기(간장, 심장, 신장, 비장, 고환)는 채혈 후 즉시 분리시켰으며, 생리식염수로 혈액을 씻은 다음 흡수지로 물기를 제거하였고, 간은 탈혈하여 흡수지로 물기를 제거하고 무게를 측정한 후 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하였다.</p><h2>혈당분석</h2><p>혈당 함량은 glucose 측정용 kit시약(AM 201-k, Asan, Korea)으로 측정하였다. 즉 효소시약을 효소시약 용해액에 용해시킨 후 혈청 \( 20 \mu \ell \)에 조제한 효소시약 \( 3 \mathrm{ml} \)를 첨가한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 배양한 후 시료 무첨가구를 대조로 하여 파장 \( 500 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 혈당 함량은 표준검량선에 의해 \( \mathrm{mg} / \mathrm{dl} \)로 표시하였다.</p><h2>혈액 중 지질 함량 분석</h2><p>혈액 중의 총 지질(total lipid) 함량은 Frings 등의 방법에 따라 혈청 \( 20 \mu \ell \)에 phospho-vanillin 시약을 첨가한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 배양한 후 시료 무첨가구를 대조로 하여 파장 \( 540 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 혈액 중의 총 콜레스테롤(total cholesterol), 중성지방(triglyceride) 및 high density lip-oprotein cholesterol (HDL-C) 함량은 각각의 해당 kit를 사용하여 측정하였다. 즉, 총 콜레스테롤 측정용 kit 시약(AM 202-k, Asan, Korea), 중성지방 측정용 kit시약 AM 157S-k, Asan, Korea) 및 HDL-C 측정 용 kit시약(AM 203-k, Asan, Korea)을 사용하여 혈청중의 함량을 측정하였다.</p><p>LDL (Low density lipoprotein) 콜레스테롤은 Friedewald 등의 방법에 따라 총콜레스테롤 함량에서 HDL 콜레스테롤과 중성지질/5를 합한 값을 제하여 줌으로써 산출하였다. VLDL (Very Low density lipoprotein) 콜레스테롤 함량은 혈청 총 콜레스테롤 \(- (\mathrm{HDL}-\mathrm{C}+\mathrm{LDL}-\mathrm{C}) \)의 식으로 산출하였다. 동맥경화지수(atherogenic index, AI)는 Haglund 등의 방법에 따라 (Total cholesterol \(- \mathrm{HDL}-\mathrm{C})/ \mathrm{HDL}-\mathrm{C}\)식에 의하여, 심혈관 위험지수(cardiac risk factor, CRF)는 Kang 등의 방법에 따라 총콜레스테롤 함량을 HDL 콜레스테롤 함량으로 나눈 값으로부터 산출하였다.</p><h2>GOT (glutamic oxaloacetic transaminase)와 GPT (glutamic pyruvic transaminase) 활성도, 총단백질 및 알부민 함량 측정</h2><p>GOT 측정용 kit (PⅢ 3150, Fugi, Japan) 및 GPT 측정용 kit (PⅢ 3250, Fugi, Japan)를 이용하여 혈액분석기(DRI-Chem 3500I, Fugi, Japan)에서 분석하였으며, 혈청 \( 1 \mathrm{ml} \)당 Karmen unit로 표시하였다.</p><p>혈중 총 단백질 함량은 총 단백질 측정용 kit (AM54-1011, Asan, Korea) 시약으로, 알부민의 함량은 BCG법에 따라 albumin 측정용 kit (AM 127, Asan, Korea) 시약으로 측정하였다.</p>