당근의 뿌리와 씨앗을 사용한 실험에는 1998년 수확 당근과 평균 체중 \( 150 \mathrm { ~g } \)의 Sprague-Dawley계 암컷 흰쥐가 사용되었다. 실험 시작 전 1주일 동안 동물들을 대조군 식이로 적응시킨 후, 난소를 절제하고 각 군의 평균 체중을 일치시키는 방식으로 4개 군으로 나누어 8주 동안 실험을 수행하였다. 실험 후 동물들은 ether 마취를 하여 혈청을 채취하였으며, 간장은 보관하였다. 또한, 건조된 당근 뿌리와 씨앗은 메탄올에 넣어 각각 3회씩 추출하고 동결건조하여 메탄올 추출물로 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>투여시료 제조방법</h2> <p>본 실험에 사용한 당근(Daucus carota L.)의 뿌리와 씨앗은 1998년에 수확한 것으로 씨앗은 동부한농종묘에서, 뿌리는 양산임기 당근밭에서 구입하였다. 시료로 사용한 당근은 흐르는 물에 깨끗이 씻고, 일정한 크기로 자른 후 그늘에서 건조시킨 후 분쇄하여 \( -30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 냉동고에 보관하였다. 건조된 시료 중 뿌리 \( (220 \mathrm { ~g } ) \)는 methanol \( 1.5 \mathrm { l } \)를 넣고 추출하였으며, 당근 씨앗 \( (975 \mathrm { ~g } ) \)은 methanol \( 1.5 \mathrm { l } \)를 가해 각각 3회씩 추출하여 evaporator로 농축한 후 동결건조하여 methanol 추출물로 사용하였다.</p> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 체중이 평균 \( 150 \mathrm { ~g } \) 되는 Sprague-Dawley계 암컷 흰쥐로 본 실험실에서 고형사료(삼양유지사료)로 사육하였고, 실험 시작 전 1주일 동안 대조군 식이로 적응시킨 후 난소를 절제한 뒤 동물의 체중에 따라 각 군의 평균 체중이 비슷해지도록 10마리씩 4군(대조군(Control), carrot seed extract 투여(S)군, carrot root extract 투여(R)군, es-trogen 투여(E)군)으로 나누어 8주간 실험하였다. 동물실험실의 사육조건은 온도 \( 24 + 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 습도 55 ~ 60 \( \% \)를 항상 유지시키며 물과 사료는 자유 급식시켰다.</p> <h2>난소절제시술</h2> <p>1주일 동안 주위환경에 적웅시켜 체중에 따라 난괴법 (Randomized Complete Block Design)에 의해 군을 나누어 난소절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 복부를 절개하여 난소를 제거하고 절개부는 봉합하였다. 3일 후부터 대조군은 \( 0.9 \% \) saline, carrot seed extract 투여군은 \( \mathrm { kg } \) 당 \( 100 \mathrm { mg } \)의 carrot seed extract를, carrot root extract 투여군은 \( \mathrm { kg } \) 당 \( 100 \mathrm { mg } \)의 carrot root extract를 이틀에 한번 두 달간 복강 내로 투여하였고, es-trogen 투여군에는 estrogen을 \( 50 \mu \mathrm { g } / \) day 같은 방법으로 투여하였다.</p> <h2>혈액 및 장기 적출</h2> <p>실험 종료 후 실험 동물을 ether 마취 하에서 개복한 후 심장에서 채혈하여 30분 후 \( 3000 \mathrm { rpm } \) 에서 10분간 원심분리하여 혈청을 분리하였으며, 간장은 적출하여 \( 0.9 \% \) 생리 식염수용액으로 세척하여 vial에 담아 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관하였다.</p>