라디칼 소거활성(\(\%\))은 \([1-(시료 첨가구의 흡광도/대조구의 흡광도)] \times 100\)으로 나타내었고, DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), ABTS[2,2-azinobis-(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulphonate)], Nitric oxide의 세 가지 측정을 진행했다. 아질산염 소거활성은 시료 무첨가구에 대한 시료첨가구의 흡광도 비(\(\%\))로 나타내었다. \(\alpha\)-Glucosidase 저해활성은 효소액을 첨가하지 않은 실험구의 흡광도 \((\mathrm{B_{OD}}\)) 및 시료 무첨가구의 흡광도 \((\mathrm{C_{OD}})\)를 각각 측정하여 Inhibition activity \( (\%)=\left(1-\frac{\mathrm{ SOD }-\mathrm{BOD}}{\mathrm{COD}}\right) \times 100 \) 식에 따라 저해활성을 계산하였다. 각 실험 결과는 5회 이상 반복하여 각각의 시료에 대해 평균\(\pm\) 표준편차로 나타냈고, 각 시료군에 대한 분산분석 후 \(p<0.05\)수준에서 Student t-test 및 Duncan's multiple range test를 실시하며 유의차 검정을 수행했다.
<h2>라디칼 소거활성 측정</h2> <p>DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 라디칼 소거활성 측정은 Blois의 방법에 따라 시료의 전자공여 활성으로 측정하였다. 즉, 일정농도의 시료 추출물 \(2\mathrm{~ml}\)에 \(10\mathrm{~mg} /100\mathrm{~ml}\)의 DPPH 용액 \(2\mathrm{~ml}\)를 가하여 상온에서 10초간 진탕 교반한 후 20분간 반응시켜 \(517\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. ABTS[2,2-azinobis-(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulphonate)] 라디칼 소거활성은 Re 등의 방법에 따라 \(7\mathrm{~mM}\) ABTS 용액에 potassium persulfate를 \(2.4\mathrm{~mM}\)이 되도록 용해시킨 다음 암실에서 12~16시간 동안 반응시켰다. 이를 \(415\mathrm{~nm}\)에서 흡광도가 1.5가 되도록 증류수로 희석시킨 후 \(3\mathrm{~ml}\)를 취하고, 시료액 \(1\mathrm{~ml}\)를 혼합한 후 실온에서 10분간 반응시켜 \(415\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. Nitric oxide 소거활성은 Song과 Moon의 방법에 따라 시료액 \(0.5\mathrm{~ml}\)에 \(10\mathrm{~mM}\) sodium nitroprus-side 용액 \(0.5\mathrm{~ml}\)를 가하여 \(25^{\circ}\mathrm{C}\)의 수욕조상에서 150분간 반응시켰다. 여기에 \(0.3\mathrm{~ml}\)의 Griess reagent를 가한 후 \(542\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. Griess reagent는 \(2\%\) sulfanilamide를 함유하는 \(4\%\) 인산용액과 \(0.2\% \) naphthylethylenediamide 용액을 사용직전에 \(1:1(\mathrm{v/v})\)로 혼합하여 사용하였다. 라디칼 소거활성(\(\%\))은 \([1-(시료 첨가구의 흡광도/대조구의 흡광도)] \times 100\)으로 나타내었다.</p> <h2>아질산염 소거활성 측정</h2> <p>아질산염 소거활성은 Kim 등의 방법에 따라 \(1\mathrm{~mM}\) \(\mathrm{NaNO}_{2}\) 용액 \(1\mathrm{~ml}\)에 시료액 \(1\mathrm{~ml}\)를 가하고 \(0.1\mathrm{~N}\mathrm{HCl}\) 과 0.2\(\mathrm{~M}\) 구연산 완충액(\(\mathrm{pH} ~2.5\))를 가하여 총 부피를 \(10\mathrm{~ml}\)로 하였다. 이 용액을 \(37^{\circ} \mathrm{C}\)에서 1시간 반응시킨 후 반응액 \(1\mathrm{~ml}\)를 취하여 \(2\%\) 초산용액 \(3\mathrm{~ml}\)와 Griess reagent \(1\%\) sulfanilic acid \(1\% \) naphthylamine \( =1: 1, \mathrm{v}/\mathrm{v})\) \(0.4\mathrm{~ml}\)를 차례로 가한 후 진탕 혼합하여 실온에서 15분간 정치한 후 \(520\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. 아질산염 소거활성은 시료 무첨가구에 대한 시료첨가구의 흡광도 비(\(\%\))로 나타내었다.</p> <h2>\(\alpha\)-Glucosidase 저해활성 측정</h2> <p>\(\alpha\)-Glucosidase 저해활성은 \(0.1\mathrm{~M}\) phosphate 완충용액 \((\mathrm{pH} ~6.8\))에 용해한 \(2.5\mathrm{~mM}\)의 p-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside \(100~\mu\mathrm{l}, 0.2\mathrm{~unit/ml}\)의 \(\alpha\)-glucosidase \(50~\mu\mathrm{l}\) 및 추출물 \(50~\mu\mathrm{l}\)를 혼합하여 \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 20분간 반응시킨 다음 \(0.1\mathrm{~M}\) \(\mathrm{NaOH}\) \(100~\mu\mathrm{l}\)로 반응을 정지시킨 후 \(405\mathrm{~nm}\)에서 흡광도(\(\mathrm{S_{OD}}\))를 측정하였다. 각 효소 저해활성은 효소액을 첨가하지 않은 실험구의 흡광도 \((\mathrm{B_{OD}}\)) 및 시료 무첨가구의 흡광도 \((\mathrm{C_{OD}})\)를 각각 측정하여 다음의 식에 따라 저해활성을 계산하였다.</p> <p>Inhibition activity \( (\%)=\left(1-\frac{\mathrm{ SOD }-\mathrm{BOD}}{\mathrm{COD}}\right) \times 100 \)</p> <h2>통계처리</h2> <p>각 실험은 5회 이상 반복실험을 통하여 결과를 얻었고 SPSS 12.0을 사용하여 통계처리 하였으며, 각각의 시료에 대해 평균\(\pm\) 표준편차로 나타내었다. 각 시료군에 대한 유의차 검정은 분산분석을 한 후 \(p<0.05\)수준에서 Duncan's multiple range test 및 Student t-test를 실시하였다.</p>