굴 효소 가수분해물의 기능성 확인을 목적으로 하여 향산화능을 측정하였고 굴 효소 가수분해물내에 있는 아미노산의 분석을 실시하였다. 제조된 가수 분해물은 여과 및 감압 건조하고 구연산나트륨 완충액을 통해 아미노산 자동 분석계로 분석하였다. 제조과정 중 굴 효소 가수분해물의 기능성 손상을 최소화를 목표로 두고, 유기용매 또는 유화법을 이용하여 알긴산 캡슐을 만들었다. 제조된 캡슐의 수율 측정은 Bradford의 단백질 정량법을 통해 측정하였다.
<h2>항산화 능의 측정</h2> <p>굴 효소 가수분해물의 기능성 확인을 위해 항산화 능을 측정하였다. 항산화 능은 ferricthiocyanate 법으로 측정하였다. 항산화 능의 측정을 위해 ethanol을 용매로 하는 \(50 \mathrm{mM} \) linoleic acid \( 1 \mathrm{ml} \)를 제조하여, 여기에 굴 효소 가수 분해물 \( 0.25 \mathrm{ml} \), 증류수 \( 0.25 \mathrm{ml}, 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer\((\mathrm{pH} 7.0)\) \(1 \mathrm{ml} \)를 넣고 혼합하였다. 이것을 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 shaker (Orbital shaker, Forma scientific, USA)를 이용하여 섞은 후, 24시간 동안 저장하였다. 제조된 산화물 용액은 산화물용액 \( 50 \mu \mathrm{l}\), \(75 \% \) ethanol \( 2.35 \mathrm{ml}\), \(30 \% \) ammonium thiocyanate \( 50 \mu \mathrm{l} \) 와 \( 20 \mathrm{mM} \) ferrous chloride solution \( 50 \mu \mathrm{l} \)를 혼합하여, 3분간 반응시키고 spectrophotometer(UV-1601, Shimadzu Corporation, Tokyo, Japan)롤 이용하여 \( 500 \mathrm{~nm} \)에서 홉광도를 측정하였다. 항산화 능의 계산은 측정된 홉광도를 이용하여 아래 식으로 계산하였다.<p>\(\text{Antioxidant activity} (\%)=[1 -(\text{abs. of sample}/\text{abs. of reference}] \times 100 \)</p> <h2>아미노산 분석</h2> <p>굴 효소 가수 분해물에 함유된 아미노산의 분석을 시행하였다. \( 50 \mathrm{mg} \)의 시료에 \( 6 \mathrm{~N} \) 염산 \( 2 \mathrm{ml} \)을 가하고, \( 110^{\circ} \mathrm{C} \)의 heating block (HF21, Yamato, Japan)에서 24시간 동안 가수 분해 하였다. 제조된 가수 분해물은 glass filter로 여과 및 감압 건조한 후 구연산나트륨 완충액( \( (\mathrm{pH} 2.2\))으로 정용하여 아미노산 자동 분석계(Pharmacia bioteck biochrom 20, England)로 분석하였다.</p> <h2>캡슐 제조 방법</h2> <p>제조과정 중에 굴 효소 가수분해물의 기능성에 손상을 최소화하기 위해 유기용매나 열을 사용하지 않는 유화법을 이용하여 굴 효소가수분해물이 함유된 알긴산 캡슐을 제조하였다. 알긴산 \( 1.25 \mathrm{~g} \)과 가소제인 SPAN 80 \(0.75 \mathrm{~g} \)에 농도를 달리한 굴 효소가수 분해물과 증류수를 첨가하여 총 \( 100 \mathrm{~g} \)의 알긴산 용액을 제조하였다. 제조된 알긴산 용액은 교반기를 이용하여 15분간 \( 1,300 \mathrm{rpm} \)에서 교반 흔합하였다. 이 유화액을 일정 농도의 염화칼슘 용액 \( 100 \mathrm{~g} \)에 첨가하였다.</p> <p>유화액을 첨가하는 방법은 펌프에 튜브를 장착하고 \( 10\mathrm{rpm} \)의 속도로 염화칼슘 용액 \( 100 \mathrm{~g} \)에 굴 효소 가수분해물이 용해된 알긴산 용액을 첨가하고, 상온에서 교반 속도를 달리 하면서 2.5시간 동안 경화시켰다. 경화된 캡슐은 Whatman No. 1 filter를 이용하여 상층액과 분리하고 냉동 \( \left(-15^{\circ} \mathrm{C}\right) \)하여 보관하였다.</p> <p>굴 효소 가수분해물의 농도, 염화칼슘 농도, 교반 속도의 제조 조건은 Table 1에 나타내었다.</p> <h2>캡슐의 수율 측정</h2> <p>제조된 캡슐의 수율 측정 방법은 Bradford의 단백질 정량법을 응용하여 실시하였다. 캡슐 제조 후 분리된 상층액 내의 단백질을 정량, 캡슐 제조 전 단백질 양과의 차이를 통해 캡슐의 수율을 계산하였다. 단백질 정량법은 시료 \( 20 \mu \mathrm{l} \)를 증류수 \( 980 \mu \mathrm{l} \)와 흔합하여 희석한 뒤, 제조된 희석용액 \( 800\mu \mathrm{l}\)와 Biorad protein assay (Bio-Rad Laboratories. Inc., California, U.S.A.) \( 200 \mu \mathrm{l} \)를 혼합한 뒤 상온에서 5 분간 반응시켰다. 반응이 끝난 용액은 UV-visible spectrophotometer(UV-1201, Shimadzu Corporation, Tokyo, Japan)를 이용하여 \( 595 \mathrm{~nm} \)에서 홉광도를 측정하였다.</p> <p>함유된 단백질 양을 계산하기 위해 BSA (Bovine serum albumin)의 농도별 홉광도를 위와 동일한 방법으로 측정한 뒤 standard curve를 작성하였고, 이것을 이용하여 상층액에 함유된 단백질 양을 정량하였다.</p>