영실 추추물의 용매분획은 Table 3과 같이 phenol성 물질의 함량이 ml 당 aqueous층에서 가장 높은 것으로 나타났으며, 각 용매 분획물의 H.pylori균에 대한 항균활성을 측정한 결과 aqueous층 분획물에서 13 mm의 저해환이 관찰되었다. 각 compound를 일정비율로 혼합하여 항균활성을 실험한 결과 Table 6과 같이 200 \(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\)의 농도에 두개 이상 compound가 함께 존재할 때 8mm이상의 저해환을 나타냈고 3개의 compound를 조합 한 com-pound 1 + 2 + 5및 1 + 3 + 5가 혼합되었을 때 비교적 높은 향균활성을 나타내 com-pound1,2,3,5의 4가지 물질 구조를 동정하기로 했고 정체물질의 구조동정 결과 Table7과 같이 Compound 1은 melting point가 195∼196\(^\circ \mathrm{C}\)이며 negative FAB-MS에서 분자량 154를 얻었다.
<h3>영실 추출물의 용매분획</h3> <p>1차 분획물 중 D 분획물을 이용하여 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \), ethylacetate, bu-tanol 등으로 용매분획하여 각 분획물의 생리활성을 측정하였다. 그 결과 Table 3과 같이 phenol성 물질의 함량이 \( \mathrm { ml } \) 당 aqueous층에서 가장 높은 것으로 나타났으며, 각 용매 분획물의 H. pylori균에 대한 항균활성을 측정한 결과 aqueous층 분획물에서 \( 13 \mathrm { ~mm } \)의 저해환이 관찰되었다.</p> <h3>영실 추출물로 부터 H. pylori에 대한 생육저해 물질의 분리 및 정제</h3> <p>영실 추출물에서 H. pylori에 대한 비교적 높은 항균 활성을 나타내는 물질을 Fig. 4와 같이 분리하였다. 앞의 실험 결과와 같이 H. pylori에 대한 항균활성이 가장 높게 나타난 aqueous층을 Sephadex LH-20을 이용하여 에탄올 \( 100 \% \rightarrow \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)의 용매 조건과 \( \mathrm { C } _ { 18 } \) cartridge 컬럼을 이용하여 ACE \( 10 \% \)와 formic acid \( 90 \% \)의 조건으로 용출, 정제하여 compound 15와 같이 5개의 compound를 얻었으며, 각 compound를 이용하여 H. pylori에 대한 항균활성을 측정한 결과, Table 5와 같이 compound 4를 제외한 모든 compound에서 \( 200 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 \( 8 \mathrm { ~mm } \)의 저해환을 나타내었다. 정제물의 항균활성이 추출물의 항균활성보다 낮은 결과를 나타내어 각 compound의 시너지 효과를 알아보기 위해 각 compound를 일정비율로 혼합하여 항균활성을 실험하였다. 그 결과 Table 6과 같이 \( 200 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 두개 이상의 compound가 함께 존재 할 때 \( 8 \mathrm { ~mm } \) 이상의 저해환을 나타내었으며 3개의 compound를 조합 한 com-pound \( 1 + 2 + 5 \) 및 compound \( 1 + 3 + 5 \)가 혼합되었을 때 비교적 높은 항균활성을 나타내어 compound 1,2,3,5의 4가지 물질 구조를 동정하기로 하였다.</p> <h2>정제 활성 물질의 구조 동정</h2> <p>정체물질의 구조동정 결과 Table 7과 같이 Compound 1은 melting point가 \(195 \sim 196 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이며, negative FAB-MS에서 분자량 154를 얻었다. IR spectrum은 \( 3240 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 OH기가 \( 1680 \mathrm { cm } ^ { -1 } \)에서 \( \mathrm { C } = \mathrm { O } \) 및 1600에서 aromatic의 \( \mathrm { C } = \mathrm { C } \)가 확인되었으며, 또한 \( 6.80 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =8 \mathrm { ~Hz } ) \), aromatic 영역의 \( 7.32 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { dd } \), \( \mathrm { J } =2,8 \mathrm { ~Hz } ), 7.38 \mathrm { ~ppm } \) \( ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =2 \mathrm { ~Hz } ) \) 및 \( 7.70 \mathrm { ~ppm } \) (brs, ar-omatic-H) 등의 H-NMR spectrum과 C-NMR의 spectrum은 Irwin과 Pearl의 보고와 같아 protocatechuic acid로 동정하였다. Compound 2는 melting point가 \( 208 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이며, negative FAB-MS에서 354의 분자량을 얻었다. IR spectrum은 \( 3250 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 OH기가 \( 1710 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 COO기가 확인되었으며, 선광도는 -35.2를 나타내었다. H-NMR spectrum은 \( 2.10 \mathrm { ~ppm } \) ( \( \mathrm { br } \)), \( 2.12 \mathrm { ~ppm } \) ( \( \mathrm { m } ), 2.26 \mathrm { ~ppm } \) ( \( \mathrm { dd } , \mathrm { J } =3, 8 \mathrm { ~Hz } ) \), \(3.76 \mathrm { ~ppm } \)( \( \mathrm { br } \)), \( 5.08 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { br } ), 6.29 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =16 \mathrm { ~Hz } ), 6.77 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =8 \) \( \mathrm { Hz } ), 6.98 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { dd } , \mathrm { J } =2,8 \mathrm { ~Hz } ), 7.03 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =2 \mathrm { ~Hz } ) \) 및 \( 7.42 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =16 \mathrm { ~Hz } ) \) 등으로 Barnes 등이 보고한 결과와 같아 chlorogenic acid로 동정하였다. Compound 3은 compound 2의 구조 분석 data와 일치하여서 동일물질로 규명하였다. Compound 5는 황색의 crystal을 형성하였고 melt-ing point는 \(313 \sim 314 ^ {\circ } \mathrm { C } \)였으며, FAB-MS spectrum상에서 분자량이 303을 나타내었다. IR spectrum에서는 \( 3382 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 OH기가, \( 1667 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 unsaturated ketone기가 검출되었으며, \( 1615 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \) 및 \( 1509 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)에서 aromatic \( \mathrm { C } = \mathrm { C } \)가 관찰되었다. H-NMR spectrum에서는 \( 6.16 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =2 \mathrm { ~Hz } ), 6.39 \mathrm { ~ppm } \) \( ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =2 \mathrm { ~Hz } ), 6.82 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { d } , \mathrm { J } =16 \mathrm { ~Hz } ), 7.56 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { dd } , \mathrm { J } =2,8 \mathrm { Hz } ), 7.71 \mathrm { ~ppm } \) ( \( \mathrm { d } , \mathrm { J } =8 \mathrm { ~Hz } ) \) 및 \( 12.71 \mathrm { ~ppm } ( \mathrm { brs } ) \)이 확인되었고, C-NMR에서 \( 178 \mathrm { ~ppm } \) (C-4), \( 164 \mathrm { ~ppm } \) (C-7), \( 160 \mathrm { ~ppm } \) (C-5), \(156 \mathrm { ~ppm } \) (C-9), \( 146 \mathrm { ~ppm } \) (C-4'), \(148 \mathrm { ~ppm } \) (C-2), \( 145 \mathrm { ~ppm } \) (C-3'), \(136 \mathrm { ~ppm } \) (C-3), \( 122 \mathrm { ~ppm } \) (C-1'), \( 116 \mathrm { ppm } \) (C-5'), \( 115 \mathrm { ~ppm } \) (C-2'), \( 103 \mathrm { ~ppm } \) (C-10), \( 98 \mathrm { ~ppm } \) (C-6) 및 \( 94 \mathrm { ~ppm } \) (C-8) 등이 관찰되었다. 이상의 결과가 treatise on asian herbal medicines에 나오는 분석결과와 일치하여 compound \( \mathrm { C } \)는 quercetin으로 동정하였다.</p>