본 실험에서는 전국 각지에서 구한 35종의 해조류(갈조류 17종, 홍조류 11종, 녹조류 7종)로부터 이물질 제거와 세척, 음건 및 분쇄하여 건조분말을 제조하고 메탄올을 이용하여 추출하였다. 조제된 메탄올 추출물로부터 DMSO와 n-hexane, ethylacetate, butanol을 이용하여 항균 활성을 평가하였고, 사용한 균주는 그람음성 세균 42종과그람양성 세균 2종, 진균 3종으로 임상 분리균주가 항생제에 내성을 나타내는 기작에 대해서는 현재까지 알려진 바 없다.
<h2>실험재료 및 시료의 조제</h2> <p>본 실험에 사용된 해조류들은 갈조류 17종(불레기말, 쇠미역, 감태, 곰피, 대황, 톳, 넓패, 패, 다시마, 알송이모자반, 모자반, 짝잎모자반, 괭생이모자반, 지충이, 야마다모자반, 고리매 및 미역), 홍조류 11종(돌가시리, 진두발, 도박, 참도박, 개도박, 얼룩도박, 방사무늬김, 작은구슬산호말, 붉은까막살, 마디잘록이 및 코도니) 및 녹조류 7종(매생이, 청각, 잎파래, 납작파래, 구멍갈파래, 잘피 및 포도송이해초)의 35종으로 Table 1에 나타내었다. 이중 코토니는 인도네시아에서, 포도송이해초는 베트남에서 구입하여 사용하였으며, 그 외 33종은 국내 부산, 경남, 전남 등지에서 구입하여 사용하였다.각각의 해조류 메탄올 추출물은 이미 보고한 바와 동일하게 제조하였다. 즉, 준비된 해조류들은 이물질을 제거하고 수돗물로 세척한 후 실온에서 음건하고 이를 믹서기로 분쇄한 후 건조분말 해조류를 제조하였으며, 건조분말 \( 100 \mathrm { ~g } \)당 1리터의 메탄올을 가한 후 상온에서 2일 추출하고, 이를 4회 반복한 후 추출액을 모아 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 감압 농축하여 추출물을 제조하였다. 조제된 추출물은 dimethylsulfoxide(DMSO)를 이용하여 \( 100 \mathrm { ~mg } / \mathrm { mL } \) 농도로 조정하여 항균활성을 평가하였다. 한편 항균 활성이 우수한 패, 넓패, 알쏭이 모자반, 야마다모자반 감태, 곰피, 대황 및 톳의 8종의 경우, 메탄올 추출물로부터 n-hexane, ethylacetate, butanol을 이용하여 순차적 유기용매 분획물과 이후의 물 잔류물을 조제한 후, 각각의 분획물을 대상으로 항생제 내성 P. aeruginosa 및 Candida sp.에 대한 항균 활성을 평가하였다.</p> <h2>사용균주</h2> <p>본 실험에 사용한 균주는 그람음성 세균 4종(Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, E. coli H7:O157, Salmonella typhimurium), 그람양성 세균 2종(Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes) 및 진균 3종(Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger)을 사용하였다(Table 2). 그람음성 세균 중 P. aeruginosa는 항생제 내성균주를 포함한 7종류, 진균 중 Candida albicans는 항생제 내성균주를 포함한 7종류를 사용하였으며, 각각의 미생물들은 한국미생물자원센터(KCTC), 한국농용 미생물보존센터(KACC), 일본 Institute for Fermentation, Osaka (IFO) 및 한국 항생제 내성 균주은행(CCARM: Culture Collection of Antimicrobial Resistant Microbes)에서 분양 받아 사용하였다. P. aeruginosa CCARM 2010, 2020, 2030, 2200 및 2210 균주는 cefoperazone, gentamicin, norgloxacin, piperacillin, amikacin, aztreoman, ceftazidime, cefotaxime 및 imipenem의 항생제 중에서 적어도 2종 이상의 항생제에 대해 내성을 가지는 다제내성균이며, 사람으로부터 분리된 균주이다. 한편 C. albicans CCARM 14020 및 14021, Candida kruseis CCARM 14017, Candida gillermordi CCARM 14018, Candida tropicalis CCARM 14019는 amphotericin B, ita-conazole, flucytosine 및 fluconazole에 대해 다제내성을 나타내는 균주이다. 이들 임상 분리균주가 상기의 \( \beta \)-lactam계 (ceftazidime, cefotaxime 등), aminoglycoside계(gentamicin, amikacin 등), 세포막 파괴제(amphotericin B), nucleotide 유사체(flucytosine) 등의 항생제에 내성을 나타내는 기작에 대해서는 현재까지 알려진 바 없다.</p>