Sephadex G-100 연속거동 분리하여 \( \alpha \)-galactosidase, \( \beta \)-glucosidase 효소를 분리하였다. 대두의 발효를 통해 이소플라본 aglycone 함량을 높이기 위해 \( \beta \)-glucosidase와 난소화성 oligosaccharides를 분해하기 위해 \( \alpha \)-galactosidase 효소를 생산하는 Weissella cibaria K-M1-4 미생물을 탐색하였다. 그 결과 18시간 배양한 후 \( \alpha \)-galactosidase, \( \beta \)-glucosidase 효소를 분리할 수 있었다.
<h1>요 약</h1> <p>대두의 발효를 통하여 생리활성을 가지고 있는 이소플라본 aglycone 함량을 높이기 위한 \( \beta \)-glucosidase와 대두에 다량 함유되어 있는 stachyose, raffinose와 같은 난소화성 oligosaccharides를 분해하기 위해 \( \alpha \)-galactosidase 효소 분비 미생물을 김치로부터 \( \alpha \)-galactosidase와 \( \beta \)-glucosidase를 생산하는 미생물을 탐색하였다. 탐색과정을 위해서 선별한 미생물을 \( 16 \mathrm { ~S } \) rDNA sequencing 동정한 결과, Weissella cibaria로 동정되어 Weissella cibaria K-M1-4로 명명하였다. Weissella cibaria K-M1-4를 대두 액체배지에서 18시간동안 배양한 후, 생산한 효소는 배양액을 에탄올 침전, DEAE sepharose, sephacryl S-100HR column chromatography를 통하여 \( \alpha \)-galactosidase의 경우, 정제도 5.3배, 수율 3.5 \% 그리고 \( \beta \)-glucosidase의 경우, 정제도 4.4 배, 수율 2.9% 로 정제되었다. \( \alpha \)-Galactosidase 효소특성은 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 최대 활성을 나타내었으며, \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분 처리시 43% 잔존활성을 보였다. \( \mathrm { pH } \) 8.0에서 최대 활성을 나타내었으며, \( \mathrm { pH } \) 5.0-9.0에서 안정하였다. 금속이온에 대한 영향에서 \( \mathrm { Fe } ^ { 2 + } \) 과 \( \mathrm { Cu } ^ { 2 + } \) 을 첨가하였을때 효소 활성이 증가하였다. \( \rho \)-Nitrophenyl- \( \alpha \)-D-galacto-pyranoside (PNPG) 기질에 대한 \( K \mathrm { ~m } \) 은 \( 0.98 \mathrm { mM } \) 이었고, Vmax는 \( 1.81 \mu \mathrm { mole } / \mathrm { min } \) 이었다. \( \beta \)-Glucosidase 효소 특성은 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 최대 활성을 나타내었으며, \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분 처리시 46%잔존활성을 보였다. \( \mathrm { pH } 7.0 \) 에서 최대 활성을 나타내었으며, pH 5.0-9.0에서 안정하였다. 금속이온에 대한 영향에서 \( \mathrm { Fe } ^ { 2 + } , \mathrm { Co } ^ { 2 + } , \mathrm { Cu } ^ { 2 + } \) 을 첨가하였을때 효소 활성이 증가하였다. \( \rho \)-Nitrophenyl- \( \beta \)-D-gluco-pyranoside (PNPG)에 대한 \( K \mathrm { ~m } \) 값은 \( 1.24 \mathrm { mM } \) 이었고, \( \operatorname { Vmax } \) 는 \( 6.81 \mu \mathrm { mole } / \mathrm { min } \) 이었다.</p>