본 연구에서는 18종의 균주 중 우량 균주 선발을 위한 액체 배양 생장량 조사를 수행하였다. 비교적 높은 균사 생장량을 보여주는 KGFS08 균주를 대상으로 액체 배양에서 생장량이 최대가 될 때까지의 기간을 측정하였다. 또한, 균사체 생장에 따른 배지의 \( \mathrm { pH } \) 변화를 조사하기 위해 KGFS08과 KFRI746 균주를 사용하였다.
<p>분석된 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 염기서열은 미국 국립생물정보센터 'NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)'의 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)에서 뉴클레오타이드 데이터베이스를 이용하였다. 또한, 분석된 8종간에 염기서열 유사성은 'ClustalW2(http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/)'와 'Multalin(http:// bioinfo.genotoul.fr/multalin/)'에서 검토하였다.</p> <h2>균주 선발</h2> <p>본 연구에 사용될 우량 균주를 선발하기 위하여 18종의 균주를 대상으로 균주별 액체 배양 생장량 조사를 하였다. 배지는 자체 제작한 \( 300 \mathrm { ml } \) 목긴 삼각플라스크에 \( 100 \mathrm { ml } \) PDB 배지(Difco 사)를 넣고 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { ~HCl } \) 또는 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { ~NaOH } \)로 \( \mathrm { pH } 5.0 \)으로 조절하여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 가압 멸균하였다. 접종원 균주는 4주간 정치 배양된 균사체를 무균 여과하여 생체량 \( 3 \mathrm { ~g } \)씩을 준비된 배지에 접종하였다. 접종된 균사체는 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 40일 동안 정치 배양하고 필터페이퍼(Whatman 사, No.5)로 감압여과하여 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 건조하고 건조중량을 측정하였다.</p> <h2>균사체 생장 기간 조사</h2> <p>균사체 생장량 조사는 균주 선발 조사에서 균사 생장량이 비교적 높게 나타난 KGFS08 균주를 대상으로 액체 배양에서 생장량이 최대가 될 때까지 소요되는 기간을 측정하였다. 접종원 균주는 4주간 정치 배양된 균사체를 무균 여과하여 생체량 \( 3 \mathrm { ~g } \)씩을 \( 100 \mathrm { ml } \) PDB 배지에 접종하였다. 접종된 균은 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 150 \mathrm { ~rpm } \)으로 진탕 배양하면서 10일 마다 수거하여 측정값이 일정한 정체기에 도달하면 측정을 완료하였다. 10일 마다 수거된 균사체는 여과하여 건조 중량을 측정하였다.</p> <h2>균사체 생장에 따른 배지 \( \mathrm { pH } \) 변화</h2> <p>균사체 생장에 따른 배지의 \( \mathrm { pH } \) 변화를 조사하기 위하여 우량 균주로 선발된 KGFS08과 KFRI746을 사용하였다. 각 균주는 4주간 전 배양하고 \( \mathrm { pH } 5.5 \)로 조절된 \( 100 \mathrm { ml } \) PDB 배지에 균총을 \( 8 \mathrm { ~mm } \) cork-borer로 3개씩 접종하였다. 접종된 균은 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 51일 동안 정치 배양하면서 3일 마다 배지의 \( \mathrm { pH } \)를 측정하고 수거된 균사체는 동결 보존하면서 실험 완료 시에 건조중량을 측정하였다.</p>