마른 볏짚에서 분리된 균주 Bacillus subtilis BK-17로부터 fibrinolytic enzyme (BK)를 분비하였다. BK는 에탄올 침전, 이온 교환, 겔 여과 등의 과정을 통해 분리 및 정제되었으며, 이는 plasminogen activator type보다는 fibrin에 직접 활성을 가지는 것으로 분석되었다. BK는 \(45\%\)의 EDTA에 대한 저해활성을 보였으므로 metallo enzyme로 판명되었다. 또한, BK의 활성은 \(20^{\circ}\mathrm{C}\)에서 약 \(62\%\)를 보여주며, \(50^{\circ}\mathrm{C}\)까지 지속적으로 증가하여 이 때 최대 활성을 나타냈다.
<h1>요 약</h1> <p>마른 볏짚으로부터 fibrinolytic enzyme (BK)을 분비하는 균주를 분리하여 동정한 결과, Bacillus subtilis속으로 분류되었다. 분리된 균주(Bacillus subtilis BK-17)를 배양하여 그 배양액으로부터 에탄올 침전, ion exchange, gel filtration 등의 과정을 거쳐 fibrinolytic enzyme (BK)를 분리 및 정제하였다. 이 정제된 효소를 SDS-PAGE gel 전기영동한 결과 분자량은 약 \( 31 \mathrm { kDa } \) 이었다. BK의 활성 및 안정성에 대한 \( \mathrm { pH } \) 의 영향을 조사해본 결과, \( \mathrm { pH } \) 6~8범위에서 매우 높았고, 최적 \( \mathrm { pH } \) 는 7과 8이었다. 본 효소의 활성 및 안정성에 대한 최적 온도는 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이었으며, \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서는 안정성이 그대로 유지되었지만 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서는 현저히 감소하여 5 \( 0 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 비해 \( 20 \% \sim 40 \% \) 의 활성을 보였다. BK에 대한 활성 역시 안정성과 비슷한 양상을 보였고, 다만 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 약 \( 62 \% \) 의 활성을 보였고, 그 이후 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 지속적으로 증가하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 최대의 활성을 보였다. 실험한 금속이온들 중 \( 1 \mathrm { mM } \) 의 \( \mathrm { Zn } ^ { 2 + } \) 와 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 에서 각각 \( 35 \% \) 와 \( 23 \% \) 의 저해활성을 보였지만 나머지 이온들에서는 의미 있는 영향이 없었다. 동일농도의 \( \mathrm { EDTA } \) 에 대해서는 \( 45 \% \) 의 저해활성을 보였기 때문에 \( \mathrm { BK } \) 는 metallo enzyme으로 생각된다. Fibrinogen-rich fibrin plate 와 plasminogen-free fibrin plate에서의 분해활성을 검토해 본 결과, 두 plate에서 비슷한 분해활성을 보였다. 따라서 본 효소는 plasminogen activator type 보다는 fibrin에 직접 활성을 가지는 것으로 생각된다.</p>