Bcl 2 분자는 apoptosis의 발생을 억제하고 Bax 분자는 apoptosis의 발생을 촉진하는데, 길경 추출물의 처리 농도가 높아질수록 Bax 단백질 발생은 증가하고 Bcl 2 단백질 발생은 감소한다. 이 때 길경 추출물의 처리 농도가 높아질수록, apoptosis의 발생에 주요한 영향을 미치며 Bcl-2 Bax family 발생의 변화에 의해 활성화가 조절되는 caspase-3 단백질 중 불활성형 단백질의 발생은 감소, 활성형 단백질의 발생은 증가한다. 이는 길경 추출물의 처리에 따른 apoptosis 발생이 Bcl 2/Bax family의 발생 변화에 따른 casepase 3의 활성화에 영향을 받음을 보여준다.
<h2>Bcl/Bax family의 발현에 미치는 길경 추출물의 영향</h2><p>상기의 결과들에서 알 수 있듯이 길경 추출물이 함유된 배지에서 자란 폐암세포의 성장 억제는 apoptosis 유발과 밀접한 연관성이 있음을 알 수 있었다. 따라서 길경 추출물 처리에 의한 apoptosis 유발에 관여하는 유전자의 탐색을 위하여 apoptosis와 연관성을 가지는 대표적인 유전자 산물들의 발현 변화여부를 조사하였다. 그중 Bcl/Bax family의 대표적 유전자인 Bcl-2는 anti-apoptotic 분자로서 apoptosis의 유발을 억제하는 기능을 가지며, Bax는 pro-apoptotic 분자로 apoptosis의 유발과 관계가 있다. 이들 두 유전자 산물은 세포 내 소기관 중 mitochondria로부터의 cytochrome \( c \) 를 유리시켜 cysteine-related protease인 caspases 및 DNA의 단편화와 연관된 endonuclease 등의 효소 활성을 조절한다. 이들은 서로 dimer의 형태로 존재하며 그들의 발현 수준에 변화가 초래되면 apop-tosis가 유발되는 것으로 알려져 있다. Fig. 4A 는 Western blotting법에 의한 Bax 및 Bcl-2 단백질의 발현에 미치는 길경 추출물의 영향을 조사한 것으로, 결과에서 알 수 있듯이 길경 추출물의 처리 농도가 증가할수록 A549 폐암세포의 Bax 단백질 발현이 증가됨을 알 수 있었으나 Bcl-2 단백질의 경우는 처리 농도 의존적으로 발현이 감소되었다. 이들 단백질의 발현 변화는 Fig. 4B 에 나타낸 RT-PCR법에 의한 결과에서 알 수 있듯이 길경 추출물의 처리에 의한 Bax 유전자의 전사 수준 증가 및 Bcl-2 유전자의 전사 수준 억제에 의한 결과로 사료된다.</p><h2>길경 추출물에 의한 caspase-3의 활성화</h2><p>한편 ICE/CED-like protease family인 caspase는 apoptosis 유발 경로에 중요한 조절인자로서 작용하는데, 이들 family에 속하는 많은 단백질들은 세포에서 핵과 mitochondria의 외막에 존재하며, Bcl-2/Bax family 발현의 변화에 따라 이들의 활성화가 조절되는 것으로 알려져 있다. 따라서 지금까지 알려진 caspase 중 대부분의 apoptosis가 유발된 세포에서 높은 활성도를 보여주는 caspase-3 (CPP32)의 발현 정도를 서로 다른 농도의 길경 추출물이 처리된 폐암세포를 대상으로 조사하였다. Caspase-3가 활성화된 형태로 관찰되려면 불활성 형태인\( 32 \mathrm{kDa} \)의 상대적 발현이 줄어들거나 그들의 활성형인 17 또는 \( 19 \mathrm{kDa} \) 분자량을 가지는 활성형의 단백질 발현이 증가되어야한다. Fig. 5A의 결과에서 볼 수 있듯이 길경 추출물의 처리에 의하여 caspase-3의 mRNA의 발현에는 큰 영향 없이 불활성형인 pro-caspase-3 단백질의 발현은 길경 추출물 처리 농도 의존적으로 감소되었으나 active-caspase-3의 발현은 상대적으로 증가되어 길경 추출물의 처리에 의한 폐암세포의 apoptosis 유발은 Bcl-2/Bax family의 발현 변화에 의한 caspase- 3의 활성화와 관련이 있었음을 알 수 있었다.</p>