계대배양으로 preadipocyte 상태의 3T3-L1를 실험에 사용하였고, 24 well plate에 동일한 수의 cell을 seeding 하였다. 각 식물 추출물을 \( 25 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도로 분화유도 배지에 첨가하여 유도된 세포에 지방축적 효과를 조사하였고, 이 과정에서 식물추출물은 배양액을 교환할 때 2일 간격, 3회 처리하였다. 가슴부착용 팩은 3T3-L1 세포실험에서 지방활성을 나타내는 5가지 각 추출물을 0.6%씩 첨가하였고, 추출물 중량의 3%를 맞췄고, 팩 타임을 겔타입이고 주식회사 아토즈바이오에서 제조하였다. 실험 대상은 B컵 이하 23-41세의 건강한 여성이며 생리주기, 결혼 유무, 피부타입을 조사한 후, 식물추출물을 함유한 팩을 부착해 가슴크기를 조사하였다.
<h2>지방축적과 세포성장</h2> <p>계대배양으로 preadipocyte 상태인 3T3-L1을 이용하여 24 well plate에 동일한 수 \( \left (2 \times 10 ^ { 4 } \right ) \)로 cell을 seeding하였다. 3T3-L1 cell이 well 밑바닥을 덮을 정도로 배양을 한 후, 분화유도 물질인 \( 0.25 ~ \mu \mathrm { M } \) dexamethasone (DEX), \( 0.5 \mathrm { ~mM } \) methyliso-butylxanthine (MIX)과 \( 10 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) Insulin을 첨가한 배양액으로 4일간 배양하여 분화를 유도하였으며, DEX, MIX, insulin은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO. USA)에서 구입하여 사용하였다. 유도된 세포에 지방축적 효과를 조사하기 위하여 각 식물추출물을 \( 25 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도로 분화유도 배지에 첨가하여 배양하였으며, 식물추출물은 배양액을 교환할 때 2일 간격으로 3회 처리하였다. 10일간 배양 후 배양액을 제거하고 PBS로 세척, \( 10 \% \) formalin으로 고정시킨 후 Oil Red O (Signa-Aldrich (St. Louis, MO. USA))를 처리하여 염색하였다. 염색 후 도립현미경을 이용하여 지방의 생성과 축척을 관찰하였고, 염색된 지방들을 isopropanol에 녹여 96 well plate에 옮긴 후 \( 490 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 지방의 량을 측정하였다. 식물추출물을 3회 처리한 이후 well에 Trypsin/EDTA (Sigma-Aldrich(St. Louis, MO. USA))를 처리하여 세포를 분리하고, trypan blue를 처리하고 세포현탁액을 만든 다음 hemocytometer를 이용하여 세포 수를 측정하였다.</p> <h2>팩 제조</h2> <p>가슴부착용 팩은 3T3-L1 세포실험에서 지방합성 활성을 나타내는 Q. acutissima, C. lanceolata, P. mirifica, P. bambusoides, S. repens의 각 추출물을 \( 0.6 \% \) 씩 첨가하여 추출물을 중량의 \( 3 \% \) 되게 첨가하였으며, 팩은 겔타입으로 (주) 아토즈바이오에서 제조하였다. 팩 제조에 첨가한 주요성분은 Table 1에 나타냈다.</p> <h2>임상실험</h2> <p>식물추출물을 함유한 팩을 부착하여 가슴의 크기변화를 조사한 시험은 B컵 이하인 23~41세(평균연령 \( 30.6 \pm 6.3 \) 세)의 건강한 여성 피험자 15명을 대상으로 하여, 피험자별 생리주기와 결혼 유무, 피부 타입을 조사하였다. 병력이 없는 피부로 제외기준 및 선정기준에 맞는 여성으로, 6개월 동안 생리주기가 일정한 사람을 기준으로 실험하였다.</p> <p>시험기간 동안 생리주기로 인하여 가슴 크기 변화에 대한 영향을 최소화하기 위해 생리가 끝난 시점에서 실험을 시작하였다. 샤워 후 5일간 1일 1 회(저녁) 식물추출물이 함유된 천연팩을 12시간 착용 후 제거하도록 하였고, 그 이후 천연 팩의 효능이 유지되는 기간을 조사하였다.</p>