흑마늘은 남해보물섬마늘영농조합법인에서 제조된 흑마늘은 진공추출기로 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 열수 추출하였고 추출물은 동결건조 분말화하였으며 in vitro에서 항산화 활성 및 in vivo에서 실험동물의 사료에 첨가하였다. 총 페놀 함량은 시료액에 동량의 Foline-ciocalteau 시약을 혼합한 이후 3분간 반응시킨 후 \( 10 \%\) \( \mathrm{Na_2} \mathrm{CO_3} \)용액을 가하여 실온의 암실에서 1시간 반응시켜 \( 700 \mathrm{nm} \)에서 시료 무첨가구를 대조로 흡광도를 측정하였고 이를 계산하기 위하여 Gallic acid을 이용하여 총 폐놀 함량을 계산하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 시료의 제조</h2> <p>흑마늘은 남해보물섬마늘영농조합법인에서 제조된 것으로 진공추출기(COSMOS 660, Kyungseo Machine Co., Incheon, Korea)로 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 열수 추출하였다. 생약재 5종은 상황버섯(Phellinus linteus), 황금(Scutellaria baicalensis Georgi), 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge), 뽕잎(Morus alba L.) 및 작약(Paeonia lactiflora Pall.)으로 각 시료의 수율을 고려하여 동일한 수율이 되도록 각각 \( 100 \mathrm{g}\), \(13.5 \mathrm{g}\), \(13.4 \mathrm{g}\), \(21.2 \mathrm{g}\) 및 \( 37.6 \mathrm{g}\)씩 혼합한 후 총 시료 중량에 대해 10배의 물을 첨가하여 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간씩 3회 반복하여 열수 추출하였다. 추출물은 동결건조 분말화하였으며, 이때 생약재 추출물의 추출 수율은 \( 20.03 \pm 0.87 \% \)였다.</p> <p>흑마늘 추출물은 시판되는 흑마늘 음료의 농도인 \(7 \sim 10 \mathrm{brix}\)와 유사한 맛을 내는 농도로써 \( 5 \% \)로 조정하였으며, 생약재 추출물은 전보에서 개똥쑥 추출물의 농도인 0.7 \( \mathrm{brix}\)와 유사한 농도로써 \( 1 \% \)를 기준으로 하였다. 흑마늘과 생약재 혼합물 추출물의 복합물(흑마늘 복합물)은 관능평가에 따라 \(70:30\)(\( \mathrm{v} / \mathrm{v} \))의 비율로 혼합한 경우 흑마늘의 맛은 다소 완화되며, 생약재의 맛이 가미된 것으로 나타나 이를 성인( \( 70 \mathrm{kg} \))을 기준으로 1일 1회 섭취량으로 하였다(BHF1). BHF2는 1일 3회 섭취량으로 하였으며, 이를 각각 동결건조 분말화하여 in vitro에서 항산화 활성 및 in vivo에서 실험동물의 사료에 첨가하였다.</p> <h2>흑마늘과 생약재 혼합물의 항산화 활성</h2> <p>흑마늘과 생약재 혼합물의 in vitro에서 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 라디칼 소거활성은 시료액에 동량의 \( 0.005 \% \) (\(\mathrm{w} / \mathrm{v}\)) DPPH 메탄올 용액을 혼합하여 실온에서 10분간 반응시킨 후 \( 517 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가구에 대한 시료 첨가구의 흡광도비로 계산하였다. ABTS[2,2-azinobis-(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulphonate)] 라디칼 소거활성은 potassium persulfate를 \( 2.4 \mathrm{mM} \)이 되도록 용해한 ABTS 용액의 흡광도가 \( 415 \mathrm{nm} \)에서 1.5가 되도록 조정한 ABTS 기질용액에 시료액을 혼합하여 실온에서 5분간 반응시킨 후 \( 415 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 환원력은 FRAP(ferric reducing antioxidant power)법에 따라 \( 300 \mathrm{mM} \) acetate 완충용액 (\( \mathrm{pH} 3.6 \)), \( 10 \mathrm{mM} \) TPTZ (2,4,6-tripyridyl-S-triazine)-\( \mathrm{HCl} \) 용액 및 \( 20 \mathrm{mM}\) \( \mathrm{FeCl} \cdot 6 \mathrm{H_2O} \)를 각각 \(10:1:1\) (\( \mathrm{v} / \mathrm{v} / \mathrm{v} \))의 비율로 혼합한 기질용액에 추출물을 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4분간 반응시킨 후 \( 593 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 환원력은 \( \mathrm{FeSO_4} \cdot 7 \mathrm{H_2O} \) 당량으로 산출하였다.</p> <p>총 페놀 함량은 시료액에 동량의 Foline-ciocalteau 시약을 혼합하여 3분간 반응시킨 후 \( 10 \%\) \( \mathrm{Na_2} \mathrm{CO_3} \)용액을 가하여 실온의 암실에서 1시간 반응시켜 \( 700 \mathrm{nm} \)에서 시료 무첨가구를 대조로 흡광도를 측정하였다. Gallic acid (Sigma Co., St. Louis, MO, USA)에 의한 검량선으로 총 페놀 함량을 계산하였다.</p>