본 논문에서 복합적인 알러지 질환을 보이느 사람들의 경우, 우선적으로 염기서열 분석을 했고 이들을 주의하여 SNP 및 유전자 분석을 실행했으며, 서론에서 언급된 바와 같이 알러지 반응에 중요한 역할을 하는 IL-4와 IL-4Ra에 대해 알러지와 관련되었을 것으로 추정되는 SNP를 선정했다.
<p>hME 반응은 총 \( 2 \mu \) 쏘로 맞추고, DDW \( 1.512 \mu \mathrm { l } \), hME Ex-tend Mix \( 0.2 \mu \mathrm { l } \), extension에 사용하는 hME Primer(20μM) \( 0.27 \mu \mathrm { l } \), Thermo Sequenase \( 0.018 \mu \mathrm { l } \)을 첨가하고 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \mathrm { sec } \), \( 52 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \mathrm { sec } , 72 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \mathrm { sec } \) 를 40 cycle을 수행한다.</p> <h1>실험결과 및 고찰</h1> <h2>알러지 병력에 관한 조사</h2> <p>과학영재학교 1학년 재학생(만 14-16세) 138명을 대상으로 알러지 병력에 관한 설문조사를 실시하였다. 설문조사는 알러지 보유 여부(현재, 과거), 알러지의 종류(천식, 아토피, 비염), 알러지의 심한 정도 및 보유 연수, 알러지 유발 물질, 가족력 등을 포함하였다. 현재 알러지를 보유한 사람들 중 알러지 비염이 \( 38 \% \) 로 가장 많았고 천식 \( 18 \% \), 아토피 \( 8 \% \), 약물이나 음식에 대한 기타 알러지 질환이 \( 21 \% \) 그리고 이들 알러지 질환이 복합적으로 나타나는 사람이 \( 15 \% \) 의 비율로 나타났다. 본 연구의 관심 대상은 현재 알러지를 앓고 있는 사람으로 정했으며 알러지의 종류에 대해서는 실험 초기에 감안하지 않기로 하였다. 복합적인 알러지 질환을 나타내는 사람들은 우선적으로 염기서열 분석을 하였으며 이들을 주의하여 SNP 및 유전자 분석을 실행하였다. 실험에 참여할 자원자 96 명(현재 환자군 31 , 과거 알러지 환자군 12 명, 정상 대조군 53명)의 모근을 수집했다.</p> <h2>후보 SNP 선정</h2> <p>서론에서 언급된 바와 같이 알러지 반응에 중요한 역할을 하는 IL-4와 IL-4Ra에 대해 알러지와 관련되었을 것으로 추정되는 SNP를 선정하였다. IL-4Ra는 염색체 16p11.2-12.1 에 걸쳐 존재한다. IL-4Ra genomic DNA의 크기가 매우 크기 때문에 (약 \( 130 \mathrm { ~kb } ) \) 보다 확실한 변화를 가져오는 exon에 대해서만 SNP를 조사하기로 했다. Q576R은 IL-4Ra의 11 번째 exon에 있는 SNP로 T가 C로 변이가 일어나 Glu을 생산하던것이 Arg 을 생산하게 하며 천식의 심한 정도와 관련이 있다는 보고가 있다. I75V는 IL-4Ra의 5 번째 exon에 있는 SNP 로 A 가 G 로 변이가 일어나 생산단백질이 Ile에서 VAL 으 로 바뀌게 되며 아토피에 관여한다는 보고가 있다. IL-4Ra 11 번째 exon 자리에 밀집되어 있는 E375A, C406R, S411L 3 개의 SNP가 아토픠, 천식과 관련이 있으며, 같은 exon의 뒷부분에 있는 S727A, S761P 2가지 SNP는 샘플 수가 적어 확실하진 않지만 관련 가능성이 있다는 보고가 있다. 앞의 3가지를 mid, 뒤의 2가지를 ter라는 영역으로 통합하여 염기서열 분석 및 SNP 분석 실험을 했다.</p>