건조된 진달래꽃을 시료로 선정하고 다양한 농도의 추출물을 조제하여 페놀 화합물을 Folin-Denis 방법으로 측정하였으며, H. pylori 항균활성 측정을 하였다. 그리고 Column chromatography에 의한 정제를 하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료의 선정</h2> <p>본 실험에 사용한 진달래꽃은 2007년 5월 경북 상주시 갑장산에서 채취하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 저온저장 하면서 이용하였다.</p> <h2>추출물의 조제</h2> <p>건조된 진달래꽃에 \( 0 \sim 100 \% \) 까지 다양한 농도의 ethanol을 가하여 실온에서 24 시간 추출한 후 원심분리 \( (10,000 \mathrm{rpm}\), \(15\mathrm{min}) \) 하여 상징액과 침전물을 얻었고 이 침전물은 다시 최적 추출조건인 \( 60 \% \) ethanol을 가하여 위와 같은 추출과정을 2회 반복하였다. 각각의 상징액을 모아 농축하여 rotary evapo-rator로 농축한 후 ethanol 추출물로서 분획을 위한 시료로 사용하였다.</p> <h2>Phenol 화합물 정량</h2> <p>총 페놀 화합물은 Folin-Denis 방법으로 측정하였으며, 시료 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 \( 95 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{ml} \) 와 증류수 \( 5 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 \(1\mathrm{N}\) Folin-ciocalteu reagent \( 0.5 \mathrm{ml} \) 를 넣어 잘 섞어주고, 5 분간 방치한 후, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} ~1 \mathrm{ml} \) 를 가한 후, 흡광도 \( 725 \mathrm{~nm} \) 에서 1 시간 이내에 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로부터 양을 환산하였다.</p> <h2>H. pylori 항균활성 측정</h2> <p>실험에 사용한 균주는 위, 십이지장 궤양 원인균인 H. pylori로서 표준균주인 ATCC 43504 를 사용하였다. 균의 배양에는 최적배지(special peptone \( 0.5 \mathrm{~g} \), agar \( 0.75 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{NaCl}\) \(0.25 \mathrm{~g} \), yeast extract \( 0.25 \mathrm{~g} \), beef extract \( 0.2 \mathrm{~g} \) 및 pyruvic acid \( 0.025 \mathrm{g} \))를 사용하였으며 미호기성 조건을 유지시켜주기 위해서 \( 10 \%\) \(\mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 습도는 \( 95 \% \) 이상으로 유지하며 배양하였으며, agar plate상에서 배양은 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 \( 48 \sim 72 \) 시간 동안 실시하였다. 또한 항균 활성 측정은 H. pylori 최적배지 plate에 균분산액 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말한 다음, 멸균된 disc paper \( (\varphi 8 \mathrm{~mm}) \) 를 올리고 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 제균한 각 추출물을 vacuum evaporator로 농축한 후 멸균수로 희석하여 phenol 함량이 \( 50 \sim 200 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 가 되도록 조절한 후 각 추출물 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 를 disc paper에 흡수시키고, 대조구로는 멸균수를 흡수시킨 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 의 미 호기성 조건에서 48시간 동안 incubation한 다음, disc 주위의 clear zone 생성 유무를 확인하였다.</p> <h2>Column chromatography에 의한 정제</h2> <p>Sephadex LH-20 column을 충진한 후 흡착성의 성질에 의해 분리하였다. 용출용매는 \( 60 \% \) EtOH 및 normal phase type 으로서 \( \mathrm{EtOH} \rightarrow \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(100 \rightarrow 0 \%) \) 의 순으로 분당 \( 20 \mathrm{ml} \) 의 유속으로 용출하여 TLC 상에서 phenol성 물질의 유무 및 종류를 확인하고 농축, 건조하였다. MCI-gel column은 다공성 poly-styren gel로써 흡착성을 이용하였으며, 용출용매는 일반적인 revers type인 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \rightarrow \mathrm{MeOH}(0 \rightarrow 100 \%) \) 로 용출하여 TLC 상에서 phenol compound의 분리 정도를 확인하였다.</p>