통성혐기성 균주 \(422\)주, 혐기성 균주 \(60\)주로부터 \( \alpha \)-galactosidase 와 \( \beta \)-glucosidase 효소활성이 높은 균주 48 주를 선발했다. 그 후 효소 활성이 높은 김치의 isolate K-M1-4을 최종선발해 효소특성을 비교하였다. 현미경으로 관찰한 결과 Gram 양성 간균이었으며 당이용성 검토를 위해 동정한 결과 Weissella cibaria LMG17699 \( { }^{\mathrm{T}} \) 와 가장 가까운 유연 관계로 보였다. 이를 Weissella cibaria K-M1-4이라고 명명하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>시료로부터 미생물의 분리 및 선발</h2> <p>미생물 분리시료에서 각각 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 채취하여 멸균 생리식염수로 연속 희석을 하였다. \( 0.005 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) bromocresol purple을 첨가한 soy plate agar에 각종 희석액 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 씩 도말하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간동안 배양한 후에 산이 생성되어 노란색으로 변한 colony의 형태가 서로 다른 미생물 491주를 분리하였다. 이 중 통성혐기성 균주는 422 주이고 혐기성 균주는 69주이었다. \( \alpha \)-Galactosidase 및 \( \beta \)-glucosidase가 기질인 PNPG를 분해하면 \( \rho \)-nitrophenol(PNP)이 분리되면서 노란색을 나타내므로 역가가 높을수록 진한 노란색을 나타낸다. 통성혐기성 균주 422 주와 혐기성 균주 69 주의 효소활성은 \( \rho- \) nitrophenol의 표준곡선에서 정량하였으며, \( \alpha \)-galactosidase 및 \( \beta \)-glucosidase 효소활성이 높은 균주 192 주를 1 차 선발 하였고 동일한 방법으로 1 차 선발균주들의 효소활성을 비교하여 균주 48 주를 2차 선발하였다(Data not shown). 3 차 선발은 채소류에서 분리한 isolate 89 , virginal tract에서 분리한 isolate V13-4, 김치에서 분리한 isolate K-M1-4 및 isolate K-AP3, 유아분변에서 분리한 isolate BF-BW-31, 청국장에서 분리한 isolate \( \mathrm{CMB} 16 \) 및 isolate \( \mathrm{S} 2 \mathrm{C} 5 \) 등 분리 균주 7주를 선발하였는데(Table 1), 그 중에서 \( \alpha \)-galac-tosidase 활성 \( (26.3 \mathrm{unit} / \mathrm{mL}) \) 및 \( \beta \)-glucosidase 활성(27.1 \( \mathrm{unit} / \mathrm{mL} \) )을 나타낸 isolate K-M1-4을 최종선발하여 \( \alpha- \) galactosidase 및 \( \beta \)-glucosidase 효소특성을 비교하였다. 대부분의 균주들이 intracellular 효소활성보다는 extracellular 효소활성이 더 높은 것으로 나타났다.</p> <h2>선발미생물의 동정</h2> <p>효소활성이 가장 높은 isolate K-M1-4를 현미경으로 관찰한 결과 Gram 양성 간균이었으며 당이용성 검토를 위하여 API \( 50 \mathrm{CHL} \) kit test를 실시하여 동정한 결과 Lactobacillus coprophilus와 \( 92.3 \% \) 의 상동성을 나타내었다(Data not shown). 보다 더 정확한 동정을 위하여 선발미생물의 \( 16 \mathrm{~S} \) ribosomal DNA 분석을 실시하였다. \( 16 \mathrm{~S} \) rDNA gene sequence를 BLASTN의 뎨이터와 비교하여 분자 생물학적 연관성을 나타내는 계통도를 얻었다. 이 결과에 따르면 선발미생물은 Weissella cibaria LMG17699 \( { }^{\mathrm{T}} \) 와 가장 가까운 유연 관계로 보였다. 따라서 선발미생물을 Weissella cibaria로 동정하고 Weissella cibaria K-M1-4이라 명명하였다.</p>