다양한 항산화 활성 중에서 활성산소에 의한 안정화 효과 또는 전자를 주는 능력을 환원이라고 하고 흡광도는 시료의 환원력을 직접 반영하며, 흡광도 값이 높을수록 환원력이 높다는 것을 의미합니다. 따라서 플라보노이드, 페놀산 및 안토시아닌을 포함한 페놀 화합물의 총 함량은 물질의 항산화 활성을 결정하는 데 중요한 역할을 합니다. DNA 손상은 산화 스트레스와 밀접한 관련이 있으며, 암 초기 단계에서 발생하는 DNA 손상은 암의 발달과 관련이 있습니다. 일반적으로 \( 83 \% \)를 초과하는 강한 상관관계가 있어 개시 단계에서 DNA 손상을 억제하는 것이 항암 활동에 중요함을 나타냅니다.
<p>항산화 활성 중에서 활성산소 또는 전자 공여능으로 인한 안정화 작용은 환원이라고 할 수 있다. 결과적으로 강한 환원력을 가진 물질은 뛰어난 전자 공여능을 똣하는 것으로 지질과산화 과정과 같은 산화적 기작에서 2 차적인 항산화제의 역할을 수 행할 수 있다. 환원력 평가는 potassium ferricyanide reduction method를 이용하여 ferric-ferricyanide \( \left(\mathrm{Fe}^{3+}\right) \) 혼합물이 수소를 공여하여 유리라디칼을 안정화시켜 ferrous \( \left(\mathrm{Fe}^{2+}\right) \)로 진환하는 환원력을 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서의 흡광도 값으로 표현한 것이다. 환원력에서의 흡광도는 자체적으로 시료의 환원력을 나타내며 높은 환원력을 가질수록 흡광도의 수치가 높게 측정 된다. 느티나무 잎의 에틸아세테이트 분획물과 열수 추출물의 Reducing power는 에틸아세테이트 분획물보다 열수 추출물의 활성이 높았으며, 특히 열수 추출물은 L-ascorbic acid와 비교하였을 때 유사한 환원력을 가진 것으로 보아 강한 항산화제로 평가된다(Table \( 3 \)). \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 킬레이팅 활성은 철 이온에 대한 시료의 킬레이팅 반응을 통해 산화반응을 일으키는 금속이온과 결합하여여 금속이온의 그 반응성이나 결합성을 제어하는 역할을 한다. 생체 내의 철(Iron, \( \mathrm{Fe}) \) 이온의 과잉으로 야기될 수 있는 hydrogen peroxide와의 fenton reaction에 의한 단백질 발현에 대한 직접적인 손상과 DNA 산화적 스트레스, 세포의 노화와 손상을 야기하는 hydroxyl radical의 억제를 위한 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 킬레이팅 반응을 이용한 것이다. 대조구로는 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 칼레이트화 반응을 통해 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 과다 환자 치료에 사용되어 온 deferoxamine으로 비교 분석하였다. 느티나무 잎의 에틸아세테이트 분획물과 열수 추출물의 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 킬레이팅 활성을 측정한 결과, 각 추출물의 농도가 높을수록 킬레이팅 활성이 높았으며, 추출물 농도 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)에서 deferoxamine \( 95.40 \% \)과 비교하여 에털아세테이트 분획물 \( (73.96 \%) \)과 열수 추출물(72.42 \%)로 에틸아세테이트 분획물의 활성이 더 우수한 것으로 나타났다(Table \( 4 \)).</p> <h2>충 폐놀성 화합물 함량 분석</h2> <p>활성산소종은 일반적으로 인체 내 세포에 손상을 입힘으로써 질병을 유발하고 노화를 촉진시킨다. 이러한 산화를 방지하기 위하여 천연 항산화제인 페놀성 화합물을 넌리 이용하고 있다. 따라서 페놀성 화합물인 플라보노이드나 페놀산 그리로 안투시아닌 등의 총량인 페놀성 화합물 함랑은 항산화 활성에서는 중요한 인자로 작용한다. 일반적으로 항산화 활성이 증가함에 따라 총 페놀성 화합물의 함량도 증가 한다.</p> <p>느티나무 잎의 에틸아세테이트 분획물과 열수 추출물의 총 페놀성 화합물 함량을 분석한 결과(Fig. 1), 에틸아세테이트 분획물 \( (56.63 \pm 0.9 \mathrm{mg} / \mathrm{g}) \), 열수 추출물 \( (51.62 \pm 0.9 \mathrm{mg} / \mathrm{g}) \)으로 에틸아세테이트 분획물의 총 페놀성 화합물의 함량이 높았다. 총 페놀성 화합물의 함량은 농도별로 희석한 tannic acid의 표준곡선을 통해 함량을 계산하였다.</p> <h2>산화적 스트레스에 의한 DNA 손상 억제 활성</h2> <p>DNA 손상 억제 활성은 \( \mathrm{FeCl}_{2} \) (ferric chloride)로 인한 산화적 스트레스와 \( \mathrm{FeSO}_{4} \) (ferrous sulfate)와 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)의 fenton 반응에의한 산화적 스트레스로 평가하였으며, \( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA cleavage assay로 평가하였다. 특히 DNA의 손상은 산화적 스트레스에 깊은 관련이 있으며, 암의 initiation 단계에서 발생되는 DNA 손상은 암발생과 \( 83 \% \) 이상의 높은 상관성을 나타내므로 initiation 단계에서의 DNA 손상 억제는 항암활성에 있어서 중요한 역할을 한다.</p> <p>느티나무 잎의 에틸아세테이트 분획물과 열수 추출물의 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)에 의한 DNA 손상 억제 활성은 대조구와 비교하였을 때 추출물 농도별 \( (200,40,8,1.6,0.32 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \) 에틸아세테이트 분획물과 열수 추출물 모두 DNA 손상 억제 활성이 있는 것으로 나타났다(Fig. 2). 특히 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도에서 열수 추출물의 억제성은 \( 85.8 \% \)로 높게 나타났다. 상대적으로 Ferrous sulfate\( \left(\mathrm{FeSO}_{4}\right) \)를 이용한 산화적 스트레스에 의한 DNA damage는 대조구와 비교하였을 때 DNA 손상 억제 활성이 낮게 나타났다(Fig. 3).</p>