본 논문에서는 Vibrio 종 동정에 관한 16S rDNA의 PCR- RFLP방법을 다시 평가했다. 6종의 제한효소를 이용하여 만들어진 제한효소패턴에 근거하여 Vibrio 표준 균주들과 G. hollisae의 16S rDNA의 RFLP type을 분석한 결과 Vibrio의 RFLP type은 Vibrio 종의 구분에 Hae Ⅲ와 Alu I이 우수하다는 걸 확인했다. 반면 Cfo I, Msp I, Dde I, Rsa I의 경우 종 동정에 대한 변별력은 낮지만 6종의 효소를 사용한 제한효소패턴을 조합했을 때 서로 다른 RFLP type (a-f)으로 나뉘어 Vibrio 균주의 PCR-RFLP는 본 실험에 사용된 Vibrio 종의 동정에 유용함을 확인했다.
<p>Alu I 를 이용한 경우 실험한 6종의 Vibrio 종에 대하여 서로 다른 6개의 RFLP type (1-6)이 관찰되었다.</p> <p>참고 균주로 사용한 Grimontia hollisae의 경우, 본 실험에서 사용한 모든 제한 효소에서 Vibrio종의 그것과는 확연히 구분되는 RFLP type을 나타내었다.</p> <h2>덴드로그램 작성</h2> <p>6종의 제한 효소를 이용한 Vibrio종의 RFLP 분석을 위해 FPQuest \( ^ {\mathrm { TM } } \) (Bio-Rad, Belgium) software를 이용하여 덴드로그램을 작성한 결과 Vibrio core group으로 알려진 V. algindyticus 와 V. parahaemolyticus는 similarity \( 90 \% \) 이상에서 1개의 cluster로 구분되었으며, \( 85 \% \) 이상 유사도에서는 V. protedyticus와 V. vulnificus를 포함하여 하나의 cluster를 형성하였다. V. fluvialis 및 V. mimicus는 \( 60 \% \) 이상에서 다른 Vibrio 세균종과 cluster를 형성하였다. 반면 참고 균주로 사용한 G. hollisae는 가장 먼 유연 관계를 나타내었다.</p> <h1>고 찰</h1> <p>Vibrio속의 세균은 주로 수서 환경에 분포하며 사람 혹은 어류 등에 병원성을 나타내는 세균으로 신속한 동정이 매우 중요함에도 불구하고 표현형적, 유전형적 구분이 어려운 경우가 많아 빠른 동정이 어려운 것으로 알려져 있다. 특히 Vibrio core group 균주들은 DNA-DNA relatedness 혹은 16S rDNA 염기서열에 있어서도 일반적으로 종을 규정하는 범위 내에 여러 종들이 연속적으로 분포하는 특성을 보이고 있다. 따라서 본 논문에서는 일반적으로 세균 종의 동정과 계통학적 위치의 고찰에 황금율로 적용되고 있는 16S rDNA gene을 이용하여 Vibrio 종 동정에 대한 16S rDNA의 PCR- RFLP방법을 재평가하고자 하였다. 실험에 사용한 Vibrio 균주는 현재 core group 균주로 간주되는 V.alginolyticus, V. parahaemolyticus의 2 균주와 이전의 논문에서 core group으로 간주되었던 V. protedyticus와 V. vulnificus를 포함시켰으며 2003년 Vibrio속에서 Grimontia속으로 옮겨진 G. hollisae 를 포함하여 분류학적 특성에서 매우 유사한 균주들과 분류학적 특성에서 좀더 차이를 나타내는 균주를 대상으로 하여 Vibrio 균주 간의 PFLP type의 차이를 분석하고자 하였다.</p> <p>6 종의 제한효소를 이용하여 생성된 제한효소패턴에 근거하여 Vibrio 표준 균주들과 G. hollisae의 16S rDNA의 RFLP type을 분석한 결과, Vibrio의 RFLP type은 각각 Cfo I와 Msp I의 경우 2 개, Dde I 와 Rsa I 의 경우 3 개, Hae Ⅲ, 5 개, Alu I 를 이용한 경우 6 개의 type을 나타내어, 6 종의 제한 효소 중 Vibrio 종의 구분에 Hae Ⅲ와 Alu I 이 우수함을 알 수 있었다. 특히 Alu I 의 경우 실험한 6 종의 Vibrio 세균 종에 대하여 6 개의 종 특이적 RFLP type을 나타내어 Vibrio 종의 동정과 일치함을 알 수 있었다. 반면 Cfo I, Msp I, Dde I, Rsa I 의 경우 종 동정에 대한 변별력은 낮았으나 6 종류의 효소를 이용한 제한효소패턴을 조합한 결과 Vibrio 6 종에 대하여 총 6 개의 서로 다른 RFLP type (a-f)으로 구분되어, Vibrio 균주의 PCR-RFLP는 본 실험에 사용된 Vibrio 종의 동정에 유용함을 알 수 있었다.</p>