백선에서 세포핵을 추출하여 백선 DNA 함량 측정하였으며, 잿빛곰팡이에 대한 살균효과를 측정하였다.
<p>실험에 사용한 공시 재료는 동아대학교 주변 승학산 기숡에 자생 군락지화 되어 있는 백선을 2004년 2월 10일경부터 7욀 31일까지 100개체를 관찰 및 채취하여 사용하였다. 체세포 분열 중기의 염색체 관찰을 위하여 야외에서 채집한 백선의 왕성하게 자라는 뿌리에서 채취한 근단을 끝에서 \(1\sim2 \mathrm{cm}\) 정도를 취하여, 방추사 형성 억제를 통한 중기 염색체를 지닌 세포 수의 증가를 위하여 전 처리를 하였다. 얼음과 차가운 물 \( \left(4^{\circ} \mathrm{C}\right) \)을 작은 용기에 채우고 근단을 넣어 냉장고에서 24시간 동안 전 처리를 하여 염색체의 응축을 진행시켰다. 염색체 고정을 위하여 매회 새로 제조한 카노이 용액 I (빙초산 \( 1 \mathrm{vol}\), \(100 \% \) 에탄올 \( 3 \mathrm{vol}) \)에 \( 1 \mathrm{~g} / 10 \mathrm{ml} \) 정도의 염화철 \( \left(\mathrm{FeCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\right) \)을 가하여 24시간 염색체를 고정 시켰다. 염색체의 모양과 구조를 관찰하기 위하여 아세트산 카민 염색액(카민 \( 1 \mathrm{~g} \), 빙초산 \( 45 \mathrm{ml} \), 증류수 \( 55 \mathrm{ml} \))을 꿇인 후 실온에서 식힌 다음 여과하여 사용 하였다.</p><p>백선 잎의 세포핵은 Lee et al.의 방법을 이용하여 추출하였다. 간단히 설명을 하면, 약 \( 2 \mathrm{~g} \) 정도의 백선 어린잎을 수술용 칼을 이용하여 세포핵 추출 용액 \( 50 \mathrm{mM} \mathrm{~KCl}\), \(10 \mathrm{mM} \mathrm{~MgSO} 4\), \(5 \mathrm{mM} \mathrm{~K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\), \(5 \mathrm{mM} \) Hepes, \( 2 \mathrm{mM} \) dithio-threitol, \( 0.2 \% \) Triton \( X-100,100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) propidium iodide)에서 잘게 썬 후 \( 100 \mu \mathrm{m} \) 나일론 매쉬를 이용하여 여과 한 후 약 30분 동안 얼음물에서 염색을 한 뒤 FACScan flow cy-tometry (Becton Dickinson, USA)로 2C DNA 함량을 분석하였다. 각각 10개의 개체에서 세포핵을 추출 한 후 각각 샘플에서 약 2,000개의 G1 핵을 분석하여 DNA 함량을 측정하였다. 백선 DNA 함량 측정을 위하여 콩의 세포핵의 DNA 함량\((2.5 \mathrm{pg} / 2 \mathrm{C})\) 을 기준으로 하여 계산을 하였다.</p><p>잿빛곰팡이 (Botrytis cinerea)에 대한 살균 효과를 실험하기 위하여 신선한 \( 30 \mathrm{~g} \)의 백선 뿌리에서 약 \( 2 \mathrm{ml} \)의 즙을 내어 원액, 10배액, 100배액으로 희석하여 potato dextrose agar (PDA) 배지에서 배양한 곰팡이에 살포하여 살균 효과를 측정하였다. 배양한 곰팡이를 가로 세로 \( 1 \mathrm{~cm} \) 절편을 떼어 내어 PDA 배지가 들어 있는 petri-dish 가장자리에서 \(3 \mathrm{cm} \) 되는 곳에 놓아 둔 후, 백선 추출액을 농도별로 \( 30 \mu \mathrm{l} \)씩 paper disk에 을려놓고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에 일주일간 배양한 후 항균 효과를 관찰 했다.</p>