본 실험에서 딱지꽃은 정선과 진주 영농조합법에서 수급하여 사용하였다. 딱지꽃 추출물의 HPLC 분석 및 정제. 딱지꽃 뿌리 추출물을 추출용매에 따른 주요성분을 HPLC로 분석하였다. 정제된 딱지꽃 뿌리 주출물 주요 피크를 동결건조 시킨 후 연한 노란색의 파 우더를 확보한 다음 CDCl3 에 녹여NMR 분석을 수행하였다. Mass spectrometry 분석은 정제된 딱지꽃 뿌리 추출물 주요 피 크를 동결건조 시킨 후 연한 노란색의 파우더를 확보한 다음 MALDI-TOF MS로 분석을 수행하였다.
<h2>재료 및 방법</h2> <h3>실험재료</h3><p>본 실험에 사용된 딱지꽃은 정선 배서영농존합과 진 주 영농조합법인 이노플랜트 두 곳에서 수급하여 사용하였다.</p><h3>시약 및 기기</h3><p>딱지꽃의 HPLC 분석은 waters \( 1525 \mu \) binary HPLC pump, waters 996 photodiode array detector를 사용하였고, 사용된 컬럼은 gemini C18 \( (5 \mu \mathrm{m}, 4.6 \times 250 \mathrm{~nm} \), phenomenex, Madrid Avenue Torrance, CA, USA) column을 사용하였다. 그리고 주요성분을 분리정시에는 waters \( 600 \mathrm{E} \) system, waters 484 detector, phenomenex C18 \( (5 \mu \mathrm{m}, 20.2 \times 300 \mathrm{~mm}) \) column 을 사용하였다. NMR 분석은 Bruker사의 \( 400 \mathrm{MHz} \mathrm{NMR} \) 을 사용하였다. 그리고 Mass 분석은 MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight)를 이용하였으며 Perseptive Biosystem 사의 Voyager-De STR의 모델을 사용하였으며 matrix로 \( \alpha \)-cyano-4-hydroxycinnamic acid를 사용하였다.</p><h3>딱지꽃 뿌리 추출 방법</h3><p>추출을 위하여 딱지꽃 시료를 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에 서 2 일 동안 건조하였고, 각각 정제수 \( (2 \mathrm{~L}) \), 메탄올 \( (2 \mathrm{~L}) \), 아세트 산에틸(2 L), 헥산( \( 2 \mathrm{~L}) \) 을 사용하여 추출하였다. 추출 시 농도는 \( 2 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) 로 추출한 후, 여과하여 그 액을 실험에 사용하였다.</p><h3>딱지꽃 추출물의 HPLC 분석 및 정제</h3><p>딱지꽃 뿌리 추출물을 추출용매에 따른 주요성분을 HPLC로 분석하였다. 분석 조건은 \( 0.1 \% \) 삼불화아세트산(trifluoroacetic acid, TFA)를 포함한 정제 수 \( ( \) 용매 \( \mathrm{A}) \) 와 아세토나이토릴(용매 \( \mathrm{B}) \) 를 사용하였고 \( 1 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) (분석시) 흑은 \( 5 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) (분라몽정시) 유속으로 \( 254 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분석하였다.</p><h3>NMR (Nuclear Magnetic Resonance) 분석</h3><p>정제된 딱지꽃 뿌리 주출물 주요 피크를 동결건조 시킨 후 연한 노란색의 파 우더를 확보한 다음 \( \mathrm{CDCl}_{3} \) 에 녹여 분석을 수행하였다. 화합물 (1) (400 MHz NMR, \( \left.\mathrm{CDCl}_{3}\right) \delta 4.40(\mathrm{~s}, 3 \mathrm{H}), 4.22 \) (s, 3H), \( 4.10(\mathrm{~s}, 3 \mathrm{H}), 7.55(\mathrm{~s}, 1 \mathrm{H}), 7.75(\mathrm{~s}, 1 \mathrm{H}) \)</p><h3>Mass spectrometry 분석</h3><p>정제된 딱지꽃 뿌리 추출물 주요 피 크를 동결건조 시킨 후 연한 노란색의 파우더를 확보한 다음 메탄올에 녹인 후 \( \alpha \)-cyano-4-hydroxycinnamic acid와 섞고 MALDI-TOF MS를 이용하여 분석을 수행하였다. 화합물 (1) MALDI-TOF \( \mathrm{MS} \) calcd for \( \mathrm{C}_{17} \mathrm{H}_{12} \mathrm{O}_{8}\left[\mathrm{M}+\mathrm{H}]^{+}=345.8\right. \), found \( 345.8 \).</p>