당 유도 유전자인 AtPGR 유전자와 병 저항성과의 상관관계를 분석하기 위해 2주 동안 자란 wild-type 식물체들에 \( 6 \% \) glucose, \( 100 \mu \mathrm { M } \) JA, \(100 \mu \mathrm { M } \) SA 및 DC3000 병원균이 함유된 MS 액체 배지에 옮긴 후 3시간 마다 처리후 total RNA를 추출하여 qPCR을 수행하였다. 그 결과, 병원균에 의한 AtPGR 유전자 발현은 SA 처리와 유사하였으며 AtPGR 발현양상은 glucose, JA 처리 시와 유사함을 알 수 있었다.
<h1>Total RNA 추출 및 Quantitative real-time PCR(qPCR) 분석</h1> <p>Total RNA는 MS 식물 배지에 2주 동안 자란 식물체들을 \( 6 \% \) glucose, \( 100 \mu \mathrm { M } \) JA, \(100 \mu \mathrm { M } \) SA 및 DC3000 \( \left (1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \right ) \)병원균이 함유된 MS 액체 배지에 옮긴 후, 0,3,6 및 12시간 동안 처리한 각 식물체들을 TRIzol reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 추출하였다. qPCR은 total RNA \( (100 \mathrm { ng } ) \) 을 이용하여 SensiMix One-Step kit(Quantance, London, UK)와 Rotor-Gene 6000 quantitative PCR apparatus (Corbett Research, Mortlake, NSW, Australia)를 사용하였다. qPCR에 사용된 primer는 AtPGR 유전자를 위하여 Forward primer (5'-TGGACTCGAAGCAGTCAGAA-3')와 Reverse primer (5'-AGGCAGCTAAGAGTCCTGCCTT-3')를, PDF1.2 유전자를 위하여 Forward primer (5'-TGCTTCCATCATCACCCTTA-3')와 Reverse primer (5'-CACACGATTTAGCACCAAAGA-3')를, PR1 유전자를 위하여 Forward primer (5'-TTCTTCCCTCGAAAGCTCAA-3')와 Reverse primer (5'-CGTTCACATAATTCCCACGA-3')를, Actins (ACT8) 유전자를 위하여 Forward primer (5'-TGCCTATCTACGAGGGTTTC-3')와 Reverse primer (5'-GTCCGTCGGGTAATTCATAG-3')를 사용하였다. 실험 결과는 RG6000 1.7 software (Corbett Research)에 의하여 Delta Delta CT method으로 분석하였고 3회 반복 실험을 통하여 검증하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>병원균 처리에 의한 AtPGR 유전자 발현 분석</h2> <p>당 유도 유전자인 AtPGR 유전자가 병 저항성에 관련 되어있는지를 알기 위하여 우선, 병원균 처리에 의하여 AtPGR 유전자의 발현 양상을 분석하였다. 2주 동안 자란 wild-type(WT)에 \( 6 \% \) glucose 또는 DC3000 \( \left (1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \right ) \) 병원균이 함유된 MS 액체 배지에서 0, 3, 6, 12 시간 동안 처리 후 total RNA를 추출하여 qPCR을 수행하였다. Fig.1A는 AtPGR 유전자가 glucose에 의하여 유도 발현함을 나타내는 대조구로써 사용하였고, AtPGR 전사체는 당 처리 6시간 후 최대 발현하였으며, 12 시간에는 감소함을 확인할 수 있었다. 병원균을 처리한 3 시간 후 AtPGR 유전자가 최대 발현하였으나 그 이후에는 감소함을 확인할 수 있었다. 또한, 식물체에서 JA와 SA 호르몬이 병원균 방어 기작과 관련되어진 바 WT에 \( 100 \mu \mathrm { M } \) JA와 \( 100 \mu \mathrm { M } \) SA 처리하여 AtPGR 유전자의 발현양상을 확인하였다. JA를 처리한 결과, AtPGR 전사체는 6 시간 동안 점차 발현이 증가하고 12 시간에는 감소한 반면, SA 를 처리 시 AtPGR 전사체는 처리 3시간 후 발현이 증가하고 그 이후에는 점차 감소함을 확인할 수 있었다. 즉, AtPGR 발현양상은 glucose 처리 시와 JA 처리 시 유사하였으며 병원균에 의한 AtPGR 발현은 SA 처리와 유사함을 알 수 있었다.</p>