혈청 내 중성지방, 총콜레스테롤, \( \mathrm { HDL } \)-콜레스테롤, \( \mathrm { LDL } \) 콜레스테롤 함량과 동맥경화지수(AI)를 측정하기 위해 효소법을 사용하여 kit (Asan Co., Gyeonggi, Korea)를 이용하여 \(550\mathrm{nm}\) 과 \(500\mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하고, 간조직의 총지질, 중성지방 및 총콜레스테롤 함량은 Folch 등의 방법과 Sale 등의 수정된 방법으로 측정하고, 변의 총 지질 배설량은 Pearson 등의 방법으로 정량하고, 혈중 total bile acid 농도는 rat total bile acid elisa kit 를 이용하여 FLUO star OPTIMA 제품의 BMG LABTECH ELISA reader 장비로 측정하였다.
<h2>혈청의 중성지방, 총콜레스테롤, \( \mathrm { HDL } \)-콜레스테롤, \( \mathrm { LDL } \) 콜레스테롤의 함량과 동맥경화지수(atherogenic index, Al) 측정</h2> <p>혈청 내 중성지방 함량은 표준 효소법에 의한 kit (Asan Co., Gyeonggi, Korea)를 사용하여 \(550\mathrm{nm}\)에서 홉광도를 측정하여 계산하였다. 총콜레스테롤 함량은 표준 효소법에 의한 kit(Asan Co., Gyeonggi, Korea)를 사용하여 \(500\mathrm{nm}\) 에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 그리고 HDL-콜레스테롤 함량은 \(2\%\) dextron sulfate 용액과 \(1\mathrm{M}\) 의 \( \mathrm { MgCl } _ { 2 } \) 침전액을 1:1로 혼합하여 \(12,000\mathrm{rpm}\)에서 8 분간 원심분리하여 그 상층액을 표준 효소법에 의한 kit (Asan Co., Gyeonggi, Korea)를 사용하여 (500\mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하여 함량을 계산하였다. 혈청 LDL-콜레스테롤 함량은 Friedewald의 계산법으로, 혈청 동맥경화지 수(AI)는 Fiordaliso의 계산법으로 각각 산출하였다.</p> <h2>간조직의 총지질, 중성지방 및 총콜레스테롤 함량 측정</h2> <p>간조직의 총지질의 함량은 Folch 등의 방법에 의해 추출하여 정량하였고, 간조직 지질의 정량에서는 Sale 등의 수정된 방법으로 측정하였다. 중성지방과 콜레스테롤 측정용 효소시액에 유화제로서 \(0.5\%\) Triton X-100과 \(3\mathrm{nM}\) sodium cholate를 혼합하여 발색 시 일어나는 탁도(turbidity)를 제거하여 간조직의 triglyceride와 cholesterol 농도를 \(550\mathrm{nm}\)와 \(500\mathrm{nm}\)에서 각각 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>분변의 총콜레스테롤과 중성지질 함량 측정</h2> <p>실험 전 마지막 3일간의 변의 wet 무게를 측정한 후 동결건조기 (\(-70\mathrm{°C}\)) 에서 함량에 도달할 때까지 냉동 건조시킨 뒤 건조 중량을 측정하여 변 중의 수분함량을 계산하였다.</p> <p>변의 총 지질 배설량은 Folch 등의 방법에 의해 정량하였고, 콜레스테롤은 Pearson 등의 방법에 의해 \(550\mathrm{nm}\)에서 정량하였다.</p> <h2>혈청 중의 total bile acid 농도 측정</h2> <p>혈중 total bile acid (TBA) 농도 측정은 rat total bile acid elisa kit (Cusabio, USA)를 이용하여 FLUO star OPTIMA 제품의 BMG LABTECH ELISA reader 장비로 측정하였다.</p> <h2>간의 UDP-glucuronyl transferase 활성 측정</h2> <p>간 microsome 에서 UDP-glucuronyl transferase 활성도는 Reinke 등의 방법으로 측정하였다. 시험관에 working substrate용액(\(0.05\mathrm{M}\) phosphate buffer (\(\mathrm{pH}\) 7.0) \(3\mathrm{mL}\), \(15\mathrm{mM}\) UDP-glucuronic acid \(1\mathrm{ mL}\), \(10\mathrm{ mM}\) \( \mathrm { MgCl } 2 \cdot \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 1ml, 0.2% bovin albumin \(1\mathrm{ mL}\), \(0.5\%\)(v/v) Triton X-100 \(1\mathrm{ ml}\)) \(0.8\mathrm{ mL}\)을 가하여 3분간 preincubation 시킨 후 0.15 M KCl로 현탁시킨 micosome 시료와 증류수 \(0.2\mathrm{ mL}\)를 가하여 37℃에서 20 분간 반응시킨다. 그 후 0.3 N perchloric acid \(0.5\mathrm{ mL}\)를 가하여 \(2000\mathrm{rpm}\)에서 15 분간 원심분리하여 상층액 \(0.5\mathrm{ ml}\)를 취하여 1.6 M glycine buffer (\(\mathrm{pH}\) 10.3) \(2\mathrm{ mL}\)를 가하여 \(436\mathrm{ nm}\)에서 흡광도를 측정하였다.</p>