본 실험에서는 S. paucimobilis AS-1 균주를 배양한 후 chromatography를 이용하여 효소를 정제하였다. 정제 결과, agarase의 분자량은 \( 30 \mathrm { ~kDa } \)에서 \( 100 \mathrm { ~kDa } \)까지 다양하였다. Agarase의 활성에 온도가 어떤 영향을 미치는지 측정하였는데, \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 최대 활성을 보였다. 대부분 agarase의 최적 활성은 비교적 넓은 안정성을 보일 것으로 예측된다.
<h2>Agarase의 정제 및 분자량</h2> <p>S. paucimobilis AS-1균주는 MB배지에서 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } , \) \(180 \mathrm { ~rpm } \)에서 3일간 배양한 후 배양액을 \( 70 \% \) ammonium sulfate에 침전시킨 후, HiPrep 16/10 DEAE FF column으로 ion exchange chromatography (Fig. 2) 및 HiPrep \( ^ {\mathrm { TM } } ~ 26 / 60 \) Sephacryl \( ^ {\mathrm { TM } } \) S-200 HR column으로 gel filtration chromatography (Fig. 3)하여 효소를 정제하였다. 정제된 효소의 specific activity는 \( 114.4 \mathrm { ~units/mg } \) 으로 104배 정제되었다(Table 1). 정제된 agarase의 SDS-PAGE 결과 분자량이 약 \( 80 \mathrm { ~kDa } \)의 band를 얻었다(Fig. 4). 정제된 agarase효소의 molecular weight는 작은 것은 \( 30 \mathrm { ~kDa } \)에서 \( 100 \mathrm { ~kDa } \)가 넘는 것 까지 균주에 따라 다양한 것으로 밝혀져 있으며, 본 연구에서 정제된 효소와 비슷한 분자량을 가지는 것은 Alteromonas E-1로 분자량이 \( 82 \mathrm { ~kDa } \) 의 \( \beta \)-agarase 효소를 함유하였다.</p> <h2>효소활성 최적조건 및 안정성</h2> <p>Agarase의 활성이 미치는 온도효과를 측정하기 위하여 온도를 \( 20 \sim 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)까지 변화시키면서 효소활성을 측정하였다. 본 연구에서 분리된 agarase는 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 최대 활성을 나타내었으며, 측정된 온도범위 내에서 \( 70 \% \) 이상의 높은 활성을 유지하였다(Fig. 5). Kang 등은 해양미생물인 Pseudomonas sp.에서 agarase 효소 최적 활성은 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 였으며, \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이상에서 급격히 효소활성이 감소하였으며, Ohta 등은 해양미생물인 Microbulbifer salipaluids 로부터 온도에 안정한 \( \beta \)-agarase 효소를 분리하였는데 최적효소활성은 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 였으며, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이상에서 급격히 효소활성이 감소하는 것으로 보고하였다. 대부분의 agarolytic 균주의 agarase의 최직 활성은 \( 30- 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)사이에 존재하였으며, 본 연구에서 분리된 균주는 온도에 비교적 넢은 안정성을 나타내고 있는 것으로 생각된다.</p>