PCR 프라이머는 computer program을 사용하였으며, 각각은 염색체상 위치에 따라 선발하였다. 이후 제작한 PCR product의 digestion pattern과 관련하여 자외선에 대한 반응 등과 관련해 연관관계와 교차율을 분석하였다. 그 결과, uvs mutant와 교배시 자외선에 저항성을 띄며 모두 trichome을 가지고 있었으며 이상의 결과로부터 uvs mutant의 UV-B에 대한 감수성은 저항성에 대해 열성이며 단일 유전자에 의해 지배되고 있다는 것을 알 수 있었다.
<p>PCR primer는 [1]과 같이 computer program을 이용하였고 각각은 염색체상의 위치를 고려하여 선발하였다. 염색체의 종류에 따른 각 primer와 그들의 염기서열을 table1과 같다. 즉 1 번 염색체와의 연관유무를 밝히기 위한 primer로서는 CAT3와 ADH유전자의 염기서열을 이용하였다. \( 0.2 \mu \mathrm { g } \) 의 primer, 2.5unit의 taq polymerase, \( 50 \mathrm { mg } \) 의 DNA를 혼합시킨 용액 \( 10 \mu l \) 에 PCR반응을 일으켰다. ADH의 경우 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분, \( 54 ^ {\circ } \mathrm { C } 1 \) 분 중합반응을 위하여 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 분간하여 50 cycle을 반응시켜 DNA를 증폭시켰다. \( 76 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분 등으로 했으나 annealing 온도는 primer의 종류에 따라 달리했다. 각 PCR product에 대하여 제한효소 처리를 하였는데 이때 각 PCR산물들은 특정제한 효소에 의하여 Lansberg와 Columbia즉 uvs의 product를 uvs의 product를 구별할 수 있는 것으로 하였다.</p> <h2>제한효소처리와 PCR product 분석</h2> <p>\( 3.5 \mu \mathrm { l } \) 의 PCR product와 \( 1 \mu \mathrm { l } \) 의 \( 10 X \) buffer, 1~3 unit의 제한효소를 섞어 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 가 되게 한 다음 효소반응을 시키고 이들을 \( 1.5 \% \) agarose gel에 전기영동하여 각 \( \mathrm { F } _ { 2 } \) group에 따라 각 PCR product의 digestion pattern과 관련한 자외선에 대한 반응등과 관련하여 연관관계 및 교차율등을 분석하였다. \( \mathrm { F } _ { 2 } \) 중 Lansberg에 해당하는 것은 2계급 hetero라고 된 것은 1계급으로 하여 교차율을 계산하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <p>Arabidosis thaliana에서 columbia 자외선에 저항성을 나타내며 잎의 표면에 trichome이 있는, Lansberg와 uvs 자외선 감수성이며 trichome가 없고 uvs mutant와 교배한 결과 \( \mathrm { F } _ { 1 } \) 을 자외선에 저항성이며 모두 trichome을 가지고 있었다. 또한 \( \mathrm { F } _ { 1 } \) 을 자가교배한 결과 자외선 저항성 및 trichome를 가지고 있는 것, 자외선 저항성 및 trichome가 없는 것, 자외선 감수성 및 trichome가 있는 것, 자외선 감수성 및 trichome가 없는 것 등의 분리비가 167,68,60,24 여서 Mendel의 독립의 법칙의 9:3:3:1의 분리비에 부합되는 것으로 나타났다( \( \mathrm { P }<0.05) \). 이상의 결과로서도 uvs mutant의 UV-B 에 대한 감수성은 저항성에 대하여 열성이며 단일유전자에 의하여 지배되고 있다는 것을 알수 있다. 이들로부 터 DNA를 추출하였고 각 CAPS maker의 primer들을 이용 하여 PCR 을 수행한 결과 각각에서 PCR product를 얻을 수 있었다. PCR 산물들에 대하여 제한효소를 처리한 결과 각 각의 PCR product는 Columbia 혹은 Lansberg의 특징적인 pattern을 나타냈다.</p>