뇌조직의 산화적 스트레스 및 세포막 유동성에 미치는 영향을 평가하기 위해 랫트를 통해 실험용으로 조제한 사료를 6주간 투여하였다. 뇌조직의 분흭은 mitochondria 및 microsome흭분을 분획하여 사용했으며, 뇌조직의 mitochondria 및 microsome획분중의 세포막유동성(membrane fluidity)은 형광분광법에 따라 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물실험 및 사료조성</h2><p>한국화학연구소에서 구입한 Sprague Dawley계 랫트(male, \( 160 \pm 10 \mathrm{~g} \) )를 구입하여 본 대학 동물사육실에서 2주동안 예비사육한 다음, 7마리씩 3군으로 나누어 실험용 기본사료 (control group)로써 사육하면서 농촌진흥청 잠사연구부에서 제공한 1999년산 5령 3주의 동결 건조한 누에(Bombyx mori L.) 분말을 SD계 랫트에 하루 200 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW로 사료에 첨가하여 조제한 실험용 사료(SWP-200 및 SWP-400 groups)로써 6주간 투여한 다음, 뇌조직의 산화적 스트레스 및 세포막 유동성에 미치는 누에분말의 영향을 평가하였다. 동물사육실은 항온항습 \( \left(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 65+2 \% \mathrm{RH}\right) \)하에서 12시간 싸이클(06:00 18:00)로 명암이 자동 조절된다.</p><h2>조제사료의 조성</h2><p>본 실험에 사용한 사료조성은 전보와 같은 방법으로 탄수화물 \( 57.3 \% \) ( \( \alpha \)-com starch: \( 44.5 \%+ \) sucrose \( 13.3 \%) \), 단백질 \( 16.0 \% \) (sodium-free casein), 지질 \( 18.0 \% \) (lard), 비타민과 무기질(AIN-76 mixture) 각가 \( 1.0 \%, 3.5 \% \), 그리고 섬유질 \( 3.0 \% \), DL-methionine \( 0.3 \% \), choline chloride \( 0.2 \% \) 를 첨가하였으며, 여기에 cholesterol \( 0.5 \% \) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \) 를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였다. 실험그룹의 사료조성은 누에분말(SWP)을 하루에 각각 \(200\) 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW가 섭취되도록 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \) 의 SWP를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \) 씩 제외하고 조제하였다.</p><h2>뇌조직의 분획</h2><p>뇌조직의 분흭은 저자 등의 방법에 따라 균질 완충용액(\(1.15\%\mathrm{KCl}/10 \mathrm{mM}\) phosphate buffer/\(5\mathrm{ mM}\) EDTA, \(\mathrm{pH} 7.4\))을 사용하여 mitochondria 및 microsome흭분을 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 정량하였다.</p><h2>콜레스테롤의 함량 측정</h2><p>뇌조직에서 분획한 mitochondria 및 microsome획분중의 콜레스테롤의 함량은 Rudel 및 Morris의 방법에 따라 o-phthalaldehyde법으로 측정하여 표준 검량선에 의하여 측정하였다.</p><h2>세포막 유동성의 측정</h2><p>뇌조직의 mitochondria 및 microsome획분중의 세포막유동성(membrane fluidity)은 형광 probe로서의 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene(DPH) 율 사용한 Heron 등에 의한 형광분광법에 따라 측정하였다. \( 50 \mathrm{mM} \) 인산완충용액 \( (\mathrm{pH} 7.2\) , \( 2750 \mu \mathrm{l}) \), 증류수 \( (250 \mu \mathrm{l}) \), 시료 \( (100 \mu \mathrm{l}) \) 를 첨가 혼합하여 \( 37 { }^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 수조에서 5분간 방치한 다음, 세포막에 결합시키기 위해서 TMA 를 붙인 probe인 \( 0.167 \mathrm{mM} \) TMA-DPH[11-(4-trimethylammoniumphenyl)-6-phenyl-1,3,5-hexatriene, p-toluene-sulfonate] 용액을 \( 6.67 \mu \mathrm{J} \) 를 첨가-혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 수조에서 shaking하면서 30분간 반응시킨 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)을 유지하면서 형광광도계를 이용하여 \( 360 \mathrm{nm} \) (excitation)와 \( 430 \mathrm{nm} \) (emission)에서 측정하였다.</p>