TBTCl 및 BPA의 잔류농도는 균질화한 시료로부터 적절한 유기용매를 사용하여 화합물을 추출하고, florisil-column으로 세정한 후 가스크로마토그래피로 분석하여 검출한계는 \(0.1 ^ {\sim } 6 \) \( \mathrm { ng } / \mathrm { g } \)였고 회수율은 \( 67 ^ {\sim } 108 \% \)였다. 조직학적 관찰을 위해 오른쪽 정소 및 부정소는 paraformaldehyde와 gluta-raldehyde의 혼합고정액에 24시간 전고정하고, 1.3% OsO4로 1시간 30분 동안 후고정하여 epon 812혼합액으로 포매 중합하여 광학현미경과 투과전자현미경으로 관찰하였다. TBTCl과 BPA의 단기투여가 체중에 미치는 영향을 알아보기 위해 4개월간 관찰한 결과 유의적 차이가 없었다.
<h2>TBTCl 및 BPA의 잔류농도 측정</h2> <p>실험 종료 후 TBTCl 및 BPA를 투여한 실험군들로부터 조직학적 관찰을 위해 오른쪽 정소 및 부정소를 적출하고, 나머지 시료는 분석을 위하여 냉동 \( \left (-70 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \)시켰다. 이후 분석을 위하여 모든 시료를 일본 에히메 대학의 환경과학연구소 (Laboratory of Environmental Science)로 보내어, 일본 환경성에 명기된 방법에 의하여 TBTCl 및 BPA의 잔류 농도를 분석하였다. 분석 조건 및 실험방법은 Table 1에 제시하였다. 각 시료를 균질화 하여, 이 중 \( 3 ^ {\sim } 5 \) (습중량)의 시료를 취한 후, 각각 검출하고자 하는 화합물질에 대한 적절한 유기용매를 사용하여 화합물을 추출하고, florisil-column으로 세정한 후, 가스크로마토그래피(6890 GC, 5973MSD; Agilent Technologies)를 이용하여 분석하였다. 검출한계는 \( 0.1 ^ {\sim } 6 \) \( \mathrm { ng } / \mathrm { g } \) 이었으며, 회수율은 \( 67 ^ {\sim } 108 \% \)였다.</p> <h2>조직학적 관찰</h2> <p>등줄쥐로부터 적출한 오른쪽 정소 및 부정소를 \( 1 \mathrm { ~mm } ^ { 3 } \)의 크기로 세절하여 \( 2 \% \) paraformaldehyde와 \( 2.5 \% \) gluta-raldehyde의 혼합고정액 \( ( \mathrm { pH } \) 7.4)에서 24시간 전고정한 후, \( 1.3 \% \mathrm { OsO } _ { 4 } \) 로 1시간 30 분 동안 후고정하였다. 이후 알골 탈수와 아세톤 치환과정을 거쳐 epon 812혼합액으로 포매 중합하였다. 초미세 박절기(LKB2088)로 \( 10 \mu \mathrm { m } \) 정도의 두께로 자른 후 \( 0.5 \% \) toluidine blue로 염색하여 광학현미경으로 관찰하였고, \( 60 \sim 90 \mathrm { ~nm } \)의 두께로 잘라 uranyl acetate와 lead citrate로 이중 염색하여 투과전자현미경(JEOL100s)으로 관찰하였다.</p> <h1>결 과</h1> <p>TBTCl과 BPA의 단기투여가 체중에 미치는 영향을 알아보기 위하여 투여 개시부터 실험 종료까지 약 4개월간의 체중의 증가량을 비교한 결과 암수 모두 대조군과 유의적인 차이를 나타내지 않았다(Table 2). TBTCl과 BPA 투여실험 종료 후 유기주석 화합물(MBT, DBT 및 TBT)과 BPA의 수컷 체내 잔류 농도는 TBTCl \(300 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { kg } / \mathrm { day } \) 투여군에서 TBT가 대조군에 비해 높은 농도로 검출되었으나, 나머지 실험군에서는 대조군과 유의적인 차이를 보이지 않았고(Table 3), 생식소중량지수(GSI)는 모든 실험군에서 평균 \( 3.0 \% \) 이상 \( (3.00 \sim 3.46 \% \))으로써, 대조군 \((3.21 \%) \)과 유의적인 차이를 보이지 않았다. 수컷의 정소 내 생식세포들은 정상적인 정자형성과정을 나타내고 있었고, 지지세포의 핵, 세포막 등도 대조군과의 사이에서 차이점을 나타내지 않았다(Fig.1). 또한, 부정소 내의 정자의 첨체, 미토콘드리아 및 세포막 등의 미세구조에서도 이상은 발견되지 않았다. 암컷의 임신비율은 양 화합물 투여군 모두 대조군보다 약간 낮은 비율을 나타내었으나 유의적인 차이는 없었다(Table 4). 즉 대조군의 경우 암컷 4개체 중 1개체(CON-2)가 1회 임신에 성공하였으나(평균 임신율 \( 25 \% \), TBTCl 투여군에서는 \( 300 \mu \) \( \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \) 투여군 암컷 5개체(T300-1~5) 중 2개체(T300-2, -4)와 \(3,000 μg/kg/day \) 투여군 암컷 5개체(T3000-1~5) 중 1개체 (T3000-2)가 각각 2회씩의 임신에 성공하였고 \( (0 \sim 40 \% \), 평균 임신율 \( 20 \% \)), BPA \( 500 \mu \) \( \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \) 투여군 암컷 4개체(B500-1~4) 중에서는 각각 1개체씩(B500-4, B5000-3)이 임신에 성공하여 이들의 임신율 \( (0 \sim 25 \% \), 평균 \(17 \%) \)은 대조군보다 약간 낮았다. 한편 출산율 및 새끼(F1)의 생존율은 양 화합물 투여군 모두 대조군보다 현저히 낮았고, 특히 BPA투여군의 생존율 \( \left (0 ^ {\sim } 67 \% \right . \), 평균 \(17 \% \)은 TBTCl 투여군의 생존율 \(67 \sim100 \% \), 평균 \(87 \% \)에 비해 현저히 낮았다. 즉 TBTCl 투여군의 경우, \( 300 \mu \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \) 투여군 중 임신한 T300-2개체는 2회에 걸쳐 7개체의 새끼를 낳아 모두 살아 남았고, T300-4 개체의 경우도 2회에 걸쳐 7개체의 새끼를 낳았으나, 한 마리가 어미에게 먹혀 6개체가 살아남았다. TBTCl \( 3,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \) 투여군 중 T3000-2 개체의 경우 첫 회 태어난 6개체와 두 번째 태어난 3개체 중 각각 1개체씩이 죽어 어미에게 먹혔고 7개체만이 생존했다. BPA 투여군 중 \( 250 \mu \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \)를 투여한 4개체는 모두 임신에 실패했고, \( 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \)를 투여한 B500-4 개체는 임신에는 성공했지만 출산에 실패하였고(14개의 자궁 내 배아 확인), \( 5,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { kg } / \mathrm { day } \)를 투여한 B5000-3개체의 경우는 첫 회 출산 시 태어난 6개체 중 2개체가 출산 즉시 죽어 4개체가 생존했고, 두 번째 수태된 개체들은 모두 유산되어(4개의 자궁 내 배아 확인), 새끼의 생존율이 TBTCl 투여군보다 더 낮았다. 한편, 수컷 새끼들이 성 성숙한 후 측정한 생식소중량지수는 \(3.34 \sim4.44 \% \)( \( \mathrm { N } = 16) \)로써 대조군에서 태어난 수컷 새끼의 생식소중량지수 \( (3.16 \%, 2.93 \%, \mathrm { ~N } =2) \)와 유의적인 차이를 나타내지 않았다(Table 4). 더욱이 F1세대 수컷 생식소의 광학 및 전자현미경상도 투여군과 대조군 사이에 차이가 보이지 않았다.</p>