본 연구에서는 혈전용해, SOD-유사활성, 항산화, 항통풍성 Xanthine oxidase, 항비만성 \(\alpha\)-Glucosidase의 흡광도를 시료 무첨가 대조구의 흡광도와 각각 비교함으로써 각 기질의 저해활성도를 관찰하였다.
<p>\( \mathrm{ACE} \) 저해활성 \( (\%)=[\{\mathrm{C}( \) 대조구 흡광도 \( )-\mathrm{T}( \) 시료 처리구 흡광도) \( \} /\{\mathrm{C} \) (대조구 흡광도)-B(기질 처리구 흡광도) \( \}] \times 100 \)</p><p>혈전용해 활성은 \( 0.6 \% \) fibrinogen을 \( 10 \mathrm{mM} \) sodium phophate buffer( \( \mathrm{pH} 7.0 \) )에 용해시킨 후 petri dish에 넣고 thrombin (Sigma, USA) 20 unit를 가하여 균일한 평판을 제조한 후 여기에 시료 \( 50 \mu \mathrm{L} \)를 흡수시킨 원형 paper disk(Toyo Roshi, Japan)을 놓고, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10시간 반응시켰다. 반응 후 형성된 투명환의 직경을 측정하여 활성으로 표시하였다.</p><p>SOD-유사활성은 시료액 \( 20 \mathrm{~mL} \)에 \( 55 \mathrm{~mM} \) Tris-cacodylic acid buffer(TCB, \( \mathrm{pH} 8.2 \))를 가한 후 균질화하고 원심분리하여 얻은 상등액을 \( \mathrm{pH} 8.2 \)로 조정한 후 TCB를 사용하여 \( 50 \mathrm{~mL} \)로 정용한 후 시료액으로 사용하였다. 시료액 \( 950 \mu \mathrm{L} \)에 \( 50 \mu \mathrm{L} \)의 \( 24 \mathrm{mM} \) pyrogallol을 첨가하여 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 초기 2분간의 흡광도 증가율을 측정하여 시료액 무첨가구와 비교하였다.</p><p>항산화 활성은 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)의 환원력을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 시료 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)에 DPPH 용액(DPPH \( 12.5 \mathrm{~mg} \)을 \( \mathrm{EtOH} \ 100 \mathrm{~mL} \)에 용해) \( 0.8 \mathrm{mL} \)을 가한 후 10분간 반응시키고 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가 대조구와 활성을 비교하였다.</p><p>항통풍성 Xanthine oxidase 저해 활성은 각 시료용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)와 \( 0.1 \mathrm{~M}\) potassium phosphate buffer\( (\mathrm{pH} 7.5) \) \( 0.6 \mathrm{~mL} \)에 xanthine \( 2 \mathrm{mM} \)을 녹인 기질액 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)를 첨가하였다. 여기에 Xanthine oxidase \( (0.2 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \) \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 반응시키고 여기에 \( 1 \mathrm{~N} \) \( \mathrm{HCl} \) \( 1 \mathrm{~mL} \)를 가하여 반응을 정지 시킨 후, 반응액 중에 생성된 uric acid를 \( 292 \mathrm{~nm} \)의 흡광도에서 측정하였다. Xanthine oxidase 저해 활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율을 백분율(\(\%\))로 나타내었다.</p><p>항비만성 \( \alpha \)-Glucosidase 저해활성은 \( 0.1 \mathrm{~M} \) 인산완충용액 (\( \mathrm{pH} 6.8 \))으로 \( 0.2 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \)로 희석한 표준 \( \alpha \)-Glucosidase 효소액 \( 50 \mu \mathrm{L} \)와 막걸리 건조고형물 현탁액 \( 50 \mu \mathrm{L} \)를 96-well plate에 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 반응시킨 후 역시 \( 0.1 \mathrm{M} \) 인산완충용액(\( \mathrm{pH} 6.8 \))을 이용하여 \( 5 \mathrm{~mM} \)로 희석한 기질 p-nitro-phenyl- \( \alpha \)-D-glucopyranoside(Sigma N1377) \( 50 \mu \mathrm{L} \) 첨가한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 25분간 반응시켰다. 반응 후에 \( 0.1 \mathrm{~M} \) sodium carbonate \( 100 \mu \mathrm{L} \) 넣어 반응 정지 시킨 다음 \( 405 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였고 대조구는 시료를 제외한 것을 동일하게 반응시켜 측정하였다.</p><p>\( \alpha -Glucosidase\) 저해 활성 (\(\%\)) \( =(\mathrm{C} \) (대조구) \( -\mathrm{T}( \) 시료구 \( )) / \) \( \mathrm{C} \) (대조구) \( \times 100 \)</p>