본 연구에서는 높은 성능의 액체 크로마토그래피용 methanol, petroleum ether, ethyl acetate, chloroform, acetonitrile, dimethyl sulfoxide 등의 화학물질을 Merck에서, 세포 배양 및 실험에 필요한 물질들은 Hyclone에서 구매했다. 붉나무 잎, 줄기, 부리의 에틸아세테이트 분획물의 수율은 각각 \( 2. 8,1. 1,2. 2 \% \) 로 계산되었다. 다양한 농도의 추출물에 DPPH 솔루션을 첨가한 후, UV/Visible spectrophotometer를 사용하여 흡광도를 측정하였다. 추출한 에틸아세테이트 분획물은 감압 환류 냉각장치로 농축하고, dimethylsulfoxide를 사용하여 용해하여 실험에 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 연구에 사용된 붉나무(Rhus javanica)는 충북 괴산군 청천면 거봉리에서 채취하였고, 중원대학교 생약자원개발학과에서 건조 및 동정하여 시료로 사용하였다. 본 연구에 사용된 high-performance liquid chromatography grade의 methanol, petroleum ether, ethyl acetate, chloroform, acetonitrile, dimethyl sulfoxide는 Merck (Frankfurter, Darmstadt, Germany) 제품을 사용하였다. 세포배양 및 실험을 위한 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), fetal bovine serum, penicillin/streptomycin, trypsin은 Hyclone (Logan, UT, USA) 제품을 사용하였다. 나머지 시약은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 제품을 사용하였다. 모든 항체는 abcam (Cambrige, MA, USA)의 제품을 사용하였다. 기타시약 및 기기는 별도 표기하였다.</p> <h2>시료 추출 및 용매 분획</h2> <p>붉나무의 잎, 줄기, 뿌리 에틸아세테이트 분획물은 각 건조 시료 \( 500 \mathrm { ~g } \) 을 분쇄한 후, \( 80 \% \) methanol \( 500 \mathrm { ~mL } \) 로 7일간 침지한 후 Whatman filter paper (GE Healthcare Life Sciences, Amersham Place, Little Chalfont, Buckinghamshire, England)로 여과하였다. 메탄올 추출물을 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치 \( ( \mathrm { N } - \) \( 1110 \mathrm { ~S } , \mathrm { EYELA } \), Tokyo, JAPAN)로 농축한 후 분별 깔대기를 이용하여 petroleum ether, ethyl acetate 순으로 3회 용매분획 하였다. 수득한 에틸아세테이트 분획물을 감압 환류 냉각장치로 농축하여 실험 전까지 \( -27 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관하였고, dimethylsulfoxide으로 용해하여 시료로 사용하였다. 붉나무 잎, 줄기, 부리 에틸아세테이트 분획물의 수율은 각각 \( 2.8,1.1,2.2 \% \) 로 나타났다.</p> <h2>DPPH 라디칼 소거활성</h2> <p>1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)를 이용한 전자 공여능은 Bondet 방법[21]을 참고하여 측정하였다. DPPH solution은 \( \mathrm { DPPH } \) 를 \( 515 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도 값이 \( 1.00 \) 이 되도록 에탄올을 이 용하여 희석 준비하였다. 각 농도 별 추출물 \( (0.32,1.6,8,40 \), \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) )에 DPPH solution를 첨가한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 분 반응시켜 UV/Visible spectrophotometer (Human Cop, Xma- \( 3000 \mathrm { PC } \), Seoul, Korea)를 이용하여 \( 515 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정 하였다.</p>