실험재료로 사용된 표고버섯과 영지버섯의 건조품 및 느타리버섯은 진주시 버섯 재배 농장에서 구입하였으며 이것을 세절 또는 분쇄한 후 각각 \( 10 \% \) 농도로 3시간 동안 열수 추출하여 발효유를 제조했다. 폴리페놀 화합물의 총 함량은 Folin-Denis법을 약간 변형시켜 측정하였으며 DPPH 용액은 \( 100 ~\mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 16~ \mathrm{mg} \)을 녹인 다음 증류수 \( 100~ \mathrm{ml} \)를 혼합하여 whatman filter paper No.2에 여과시켜 만들었다. 실험의 결과치는 평균치와 표준오차 \( (mean \pm S.E.) \)로 표시했으며, 각 실험 군간의 유의성은 Duncan's multiple range test로 검정했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 발효유 제조 방법</h2> <p>실험재료인 표고버섯과 영지버섯의 건조품 및 느타리버섯은 경남 진주시 인근 버섯 재배 농장에서 직접 구입하여 사용하였다. 이들 버섯을 세절하거나 분쇄한 후 각각 \( 10 \% \) 농도로 3시간 동안 열수 추출하여 발효유 제조에 사용하였다. 또한, 버섯 추출물 투여군을 위한 열수 추출액은 백설탕을 가하여 당도를 \( 5 \% \)로 조정하여 냉장 보관하면서 시료로 사용하였다. 유산균 발효유는 탈지분유 \( 8 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 와 백설탕 \( 5\%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 함유 살균액에 시판 유산균으로 널리 사용되고 있는 Lactobacillus bulgaricus를 전배양 시킨 starter를 첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 발효시켜 유산균 발효유를 제조하였다. 버섯 추출물 함유 유산균 발효유는 열수 추출물 \( 50 \%~(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)에 탈지분유 \( 8 \% \)와 백설탕 \( 5 \% \)를 첨가하고 나머지는 시판 생수로 채워 살균한 배양액에 전배양 시킨 Lactobacillus bulgaricus의 starter를 첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 배양하여 버섯 추출물 함유 유산균 발효유를 제조하였다.</p> <h2>버섯 추출물의 Total Polyphenol 화합물 함량 측정</h2> <p>총 폴리페놀 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomolybdate와 반응하여 청색을 나타내는 현상을 이용한 Folin-Denis법을 약간 변형시켜 측정하였다. 본 실험에 사용한 각각의 \( 10 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 농도의 표고버섯, 영지버섯, 느타리버섯 열수 추출물에서 총 폴리페놀 화합물을 측정하였다. 이때 총 폴리페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.</p> <h2>DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH 용액은 \( 100 ~\mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 16~ \mathrm{mg} \)을 녹인 후 증류수 \( 100~ \mathrm{ml} \)를 혼합하여 whatman filter paper No. 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 \( 5 ~\mathrm{ml} \)에 버섯 추출물과 유산균 발효유 및 버섯 추출물 함유 유산균 발효유의 상등액 \( 1 ~\mathrm{ml} \)를 혼합한 후 \( 528 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 감소를 측정하여 전자공여능(EDA)으로 나타내었다. 이때 대조구인 BHT는 \( 0.05 \% \)의 시료와 동일 농도로 첨가하여 위에서와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. EDA는 시료첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율로 표시하였다.</p> <h2>실험동물, 사육조건 및 식이 조성</h2> <p>실험동물은 \( 180 ~\mathrm{g} \) 전후의 SD계 암컷 흰쥐를 경상대학교 의과대학 동물실험실에서 분양 받아 온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 명암주기 12시간 (명주기: 07:00~19:00)이 자동 설정된 동물 사육실에서 1주일간 시판 고형식이로 사육한 후, 다시 정상 기본 식이로 4일간 예비 사육하여 환경에 적응시킨 후, 평균체중이 동일하게 6마리씩 5군으로 나누어 본 실험을 시작하였다. 실험 식이군은 정상 식이군 (ND), ND에 \( 0.5 \% ~(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \) 콜레스테롤과 \( 0.125 \% ~(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \) 콜산나트름을 첨가한 콜레스테롤 식이군 (CD), CD에 유산균 발효유를 \( 5 \% \) 첨가한 실험군 (CDFM), 버섯 추출물 \( 5 \% \) 첨가한 실험군 (CDMP) 및 버섯 추출물 함유 유산균 발효유를 \( 5 \% \) 첨가한 실험군 (CDFMMP)으로 구성하였다. 이렇게 조제한 실험 식이와 음료수는 4주간 자유급여(ad libitum) 시켰으며 체중은 1주일에 한번씩 측정하였다.</p> <h2>분석시료의 조제</h2> <p>실험 최종일 실험동물을 12시간 절식시킨 후 에테르로 가볍게 마취시켜 복부 대동맥으로부터 채혈하여 탈혈사 시킨 후 각 조직을 적출하여 미리 냉각된 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 충분히 세척하고 물기를 제거한 다음 무게를 측정하고, 과산화지질 농도 분석에 제공하였다.</p> <h2>각 조직 획분의 조제 및 과산화지질 농도 정량</h2> <p>적출한 각 조직은 \( 1.15 \% ~\mathrm{KCl} \) \(10 ~\mathrm{mM} \) phosphate buffer \( (\mathrm{pH} ~ 7.4) \)를 가하여 homogenizer로 균질화 시켰다. 이 용액의 일부를 homogenate 획분으로 하고, 나머지 용액으로부터 microsome 획분과 mitochondria 획분을 분리하였다. 각 조직의 과산화지질 농도는 전보의 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 각 조직 homogenate, microsome 및 mitochondria 획분 용액 \( 1 ~\mathrm{ml} \)에 각각 thiobarbituric acid (TBA) 시약 \( 2 ~\mathrm{ml} \)을 가하여 잘 혼합하고, 수욕조상에서 15분간 가열한 후 냉각시켜 3,000 rpm에서 15분간 원심분리 한 후 상층액을 \( 535 ~\mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 각 조직의 과산화지질 농도는 malondialdehyde를 \( \mathrm{nmol} / \mathrm{g} \) 으로 나타내었다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>실험으로부터 얻어진 결과치는 평균치와 표준오차 \( (mean \pm S.E.) \)로 표시하였으며, 각 실험 군간의 유의성 검정은 \( p< 0.05 \) 수준에서 Duncan's multiple range test로 하였다.</p>