본 연구에서는 ConA로 활성화한 Jurkat cells에 HKSMM50 시료 첨가해 NFAT protein의 cytosol과 nuclear 분포를 측정하였으며, Con A 처리와 HKSMM50 시료 처리로 protein이 cytosol로부터 nuclear로 옮겨 같음을 확인하였다. 한편 ConA가 Jurkat cells의 TCR에 결합하면 \(\mathrm{IL-2}\) 및 \(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) mRNA 등의 발현이 유도되는데, 본 연구에서는 이를 확인하기 위해 ConA로 활성화한 Jurkat cells에 HKSMM50 시료를 3시간 및 6시간 배양후 \(\mathrm{IL-2}\) 및\(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) 함량과 COX-2 활성을 측정하였다.
<h2>Jurkat cells의 NFAT protein 활성화에 대한 HKSMM50의 영향</h2><p>ConA가 Jurkat cells의 TCR에 결합하면 NFAT, NF-kB와 AP-1이 활성화되어 \(\mathrm{IL-2}\) 및 \(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) mRNA 등의 발현을 유도한다. 따라서 \(\mathrm{IL-2}\)및 \(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) 등의 생성은 면역 증진의 지표로 활용되고 있다. 따라서 Jurkat cells에서 NFAT protein의 cytosol과 nuclear 분포를 측정하기 위하여 ConA로 활성화한 Jurkat cells에 HKSMM50 시료 \( (0,25,50 \) 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 및 AHCC \((100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)를 처리하여 3시간 및 6시간 배양하고 세포를 회수하여 cytosol과 nuclear에 함유된 NFAT protein 함량을 Western blotting으로 측정하였다</p><p>Fig. 4는 cytosolic NFAT/ \( \beta \)-actin비는 Control에서 \(1.7\) 이었으나 ConA 처리로\( 1.3\) 으로 감소 하였다. 이것은 Con A 처리로 NFAT protein이 cytosol로부터 nuclear로 옮겨 갔음을 의미한다. HKSMM50 시료 \(25\)\( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리에 의한 이 함량 비는 ConA 처리와 비슷하였지만 HKSMM50 시료 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리는 그 함량비를 유의성 있게 감소시켰다 \( (p<0.001)\) . AHCC \(100 \mu \mathrm{g} / \) \( \mathrm{ml}) \) 처리 효과는 동일한 농도의 HKSMM50 시료 처리 효과와 유사하였다. 따라서 이 결과는 HKSMM50 시료 처리가 NFAT protein을 cytosol로부터 nuclear로 이동하였음을 의미한다.</p><p>Fig. 5는 nucleic NFAT/ \( \beta \)-actin 비를 나타내고 있다 이비는 Control에서 \(1.1 \)이였으나 ConA 처리로 \(1.7)로 크게 증가하였는데, 이것은 ConA 처리로 NFAT protein이 cytosol 로부터 nuclear로 이동하였음을 의미한다. 이 비는 HKSMM50 시료 처리 농도 의존적으로 증가되었다 \( (p<0.05) \). 그러나 이들 비는 ConA 처리보다는 낮았지만 \( (p<0.05 \sim 0.001) \), Control 보다는 높았다 \( (p<0.05) \). AHCC \( (100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 처리 효과는 HKSMM50 \( (100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 처리 효과와 유사하였다. 이 결과는 HKSMM50 처리로 NFAT protein을 cytosol에서 nuclear로 이동되었음을 의미한다.</p><h2>Jurkat cells의 \(\mathrm{IL-2}\)와 \(\mathrm{IFNI-}\)- \( \gamma \) 함량 및 COX-2 활성에 대한 HKSMM50의 영향</h2><p>ConA로 활성화한 Jurkat cells에 HKSMM50 시료 처리 는 cytosol의 NFAT를 nucleus로 이동시켰음을 확인하였다. 따라서 HKSMM50 시료가 Jurkat cells에서 immunostimulatroy cytokine인 \(\mathrm{IL-2}\)와\(\mathrm{ IFN-}\) \( \gamma \)의 생성 증가를 확인하기 위하여 ConA로 활성화한 Jurkat cells에 HKSMM50 시료 \( (0,25,50 \) 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)를 처리하고 3시간 및 6시간 배양한 후의\(\mathrm{IL-2}\) 및\(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) 함량과 COX-2 활성을 측정 하였다. Positive control로서 AHCC는 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리하였다.</p><p>\(\mathrm{IL-2}\) 함량은 3시간 및 6시간 배양 처리에서 ConA 및 HKSMM50 시료 처리 는 Control 처리보다 증가하였다 \( (p<0.05)\) \(\mathrm{IL-2}\) 함량을 ConA 처리와 비교하였을 때, 3시간 처리의 경우 HKSMM50 시료 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)까지 농도 의존적으로 \(\mathrm{IL-2}\) 함량이 증가 하였지만 \( (p<0.05 \sim 0.01)\), \(25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서는 유의성이 없었다. 또한 HKSMM50 시료 6시간 처리서도 농도의존적으로 \(\mathrm{IL-2}\)함량이 증가하였는데 \( (p<0.01 \sim 0.001) \), 그 증가 효과는 3시간 처리의 경우보다 다소 높았다. AHCC \( (100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)처리의 \(\mathrm{IL-2}\) 함량 증가 효과는 ConA 처리와 차이가 없었지만, 동일 농도의 HKSMM50 처리보다 낮았다 \( (p<0.05) \). 이 결과는 HKSMM50 이\(\mathrm{IL-2}\)함량을 증가시켰음을 의미 한다.</p><p>Fig. 7은 \(\mathrm{IFN-}\)\( \gamma \) 함량 증가를 나타내고 있다. 3시간 및 6시간배양에서 ConA 및 HKSMM50 시료 처리에 의한 \(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) 증가는 Control에 비해 높았다 \( (p<0.05) \). \(\mathrm{IFN-}\) \( \gamma \) 함량을 ConA 처리와 비교하 였을 때, 3시간 처리시에 HKSMM50 시료 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)까지 농도 의존적으로 \( \mathrm{IFN}-\gamma \) 함량이 증가하였지만 \( (p<0.01 \) \( 0.001), 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서는 유의성이 없었다. 또한 HKSMM50 시료 6시간 처리시 농도 의존적으로 \( \mathrm{IFN}-\gamma \) 함량이 증가하였는데 \( (p<0.001) \), 그 증가 효과는 3시간 처리와 비슷하였다. AHCC \( (100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 처리에 의한 \( \mathrm{IFN}-\gamma \) 증가는 동일한 농도의 HKSMM50 처리와 크게 차이가 없었다. 이 결과는 HKSMM50 처리가 IFN- \( \gamma \) 함량을 증가시켰음을 의미한다.</p><p>Fig. 8은 ConA로 활성화한 Jurkat cells에서 HKSMM50 시료를 3시간 및 6시간처리한 후의 COX-2 효소 활성 감소를 나타낸다. 이들 두 처리에서 ConA 처리는 Control에 비해 COX-2 활성을 증가시켰다 \( (p<0.05) \). 그러나 ConA에 의해 증가된 COX-2 활성은 HKSMM50 시료 처리로 감소되었는데 \( (p<0.05 \sim \) \( 0.001), COX-2 효소활성 감소 효과는 3시간 처리와 6시간 처리에서 서로 비슷하였다. HKSMM50 시료 6시간 처리 시 농도 \( (25,50,100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 의존적으로 COX-2의 활성이 감소되었지만 \( (p<0.05 \sim 0.001), 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서는 그 감소 효과가 다소 낮았고 \( (p<0.05)\), \(50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)과 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리 농도 간에는 차이가 없었다. AHCC \( (100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 처리에 의한 COX-2 활성도 동일한 농도의 HKSMM50 시료 처리와 유사한 결과였다. 이 결과는 HKSMM50 처리가 COX-2 활성을 감소시켰음을 의미한다.</p>