본 연구는 대두와 아가콩 3, 4호의 발효산물을 이용해 염증 반응을 억제하는 기능을 확인하였다. 이를 위해, PMA로 유도된 COX-2의 발현, PGE2의 생성 및 NF-KB의 활성 증가에 미치는 영향을 살펴보았다. U937 인체 혈구세포를 사용하였으며, 콩은 수세 후 24시간 침지한 후 가압중자로 처리하고 Bacillus sp. sm26을 접종하여 배양하였다. 배양 후 EtOH로 추출하고 불순물을 제거한 후 배양을 진행하였다. 그 결과를 96 well plate에서 ELISA reader를 이용해 흡광도를 측정하였다.
<p>본 연구에서는 대두, 아가콩 3 호 및 4 호의 발효산물에 의한 항염증효능을 조사하기 위하여 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 처리에 의해 유도된 COX-2의 발현, prostaglandin \( \mathrm { E } _ { 2 } \) \( \left ( \mathrm { PGE } _ { 2 } \right ) \) 의 생성 및 \( \mathrm { NF } - \mathrm { KB } \) 의 활성 증가에 미치는 영향을 비교하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>세포배양</h2> <p>본 연구에 사용된 U937 인체 혈구세포는 한국생명공학연구 소(KRIBB, Taejeon, Korea)에서 분주 받았으며, 세포의 배양을 위해 \( 90 \% \) 의 RPMI- 1640 배지(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA), 10 \% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL)에 \( 1 \% \) 의 pen- icillin 및 streptomycin (Gibco BRL)이 포합된 배지를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 조건 하에서 배양하였다.</p> <h2>시료준비 및 처리</h2> <p>본 실험에 사용된 시료는 시중에서 판매되는 대두와 경북대학교에서 품종 육성되어진 아가콩 3호(노란 아가콩) 및 4호(검정 아가콩)를 제공받아 사용하였다. 시료 준비를 위해 콩들을 수세하고 24 시간 침지시킨 뒤 가압중자한 후 실험실에서 따로 분리되어진 Bacillus sp. sm26을 \( 50 \mathrm { ~g } \) 당 \( 1 \mathrm { ml } \) 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 72 시간 배양하였고, 그 후 \( 70 \% \mathrm { EtOH } \) 로 추출 [extracts of fer-mented soybean (FS), black agabean (FBA) and yellow aga-bean (FYA)]하여 필터로 불순물을 제거한 후 놓축시켜 사용하였다.</p> <h2>MTT assay에 의한 세포 성장억제 여부 조사</h2> <p>6 well plate에 U937 세포를 \( 7.5 \times 10 ^ { 4 } \) 개/ml로 분주하고 6 시간 동안 배양 FS, FBA 및 FYA를 처리한 후 배지에 tetrazolium bromide salt (MTT, Amersco, Solon, Ohio, USA)를 \( 0.5 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 희석하여 \( 200 \mu 1 \) 씩 분주하고 2시간동안 배양하였다. 배양이 끝난 후 MTT 시약을 제거하고 dimethylsulf-oxide (DMSO, Amresco)를 \( 1 \mathrm { ml } \) 씩 분주하여 well에 생성된 formazan을 모두 녹인 후 96 well plate에 \( 200 \mu \) ㅣ씩 읆겨서 ELISA reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 측정은 모두 세 번을 하였 으며 그에 대한 평균값과 표준오차를 Microsoft Excel 프로그램으로 구하였다.</p>