조직의 lipid peroxide 함량의 측정을 위해 신장 및 폐조직으로 malondialdehyde양을 측정하였다. 신장에서의 Xanthine oxidase, aldehyde oxidase, aniline hydroxylase, superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase, catalase, Aminopyrine N-demethylase의 활성을 측정하였다.
<h2>조직의 lipid peroxide 함량의 측정</h2> <p>Ohkawa 등의 방법을 변경하여 신장 및 폐조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 당 4배량의 \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 7.4)를 가해 마쇄한 후 같은 양의 buffer를 가하여 3시간 preincubation시킨 후 \( 8.1 \% \) sodium dodecyl sulfate와 \( 20 \% \) acetate buffer ( \( \mathrm { pH } 3.5 \) ) 및 발색의 목적으로 \( 0.8 \% \) thiobarbituric acid를 가 한 후 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1시간 동안 반응시켜 실온에서 냉각 후에 n-buthanol:pyridine \((15:1) \)을 첨가하여 15분간 원심분리하여 생성된 홍색의 n-buthanol : pyridine 층을 취하여 파장 532 \( \mathrm { nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 표준곡선에서 그 함량을 간 조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 당 존재하는 malondialdehyde양을 nmole로 표시하였다.</p> <h2>신장 조직에서의 효소활성</h2> <p>Xanthine oxidase 활성의 측정은 Stirpe과 Della의 방법에 따라, aldehyde oxidase 활성의 측정은 Rajagopalan 등의 방법에 따라, aniline hydroxylase 활성 측정은 Bidlack과 Lowry의 방법에 따라, superoxide dismutase (SOD) 활성의 측정은 Marklund와 Marklund의 방법에 따라, glutathione peroxidase 활성 측정은 Paglia와 Valentine의 방법에 따라, catalase 활성의 측정은 Aebi의 방법에 따라 시행하였다.</p> <p>Aminopyrine N-demethylase 활성측정은 Nash의 방법을 약간 변경하여 반응액 \( 2.0 \mathrm { ml } \) 에 \( 0.1 \mathrm { M } \mathrm { Na } + / \mathrm { K } ^ { + } \)buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.5)에 \( 2 \mathrm { mM } \) aminopyrine \( \mathrm { HCl } , 0.5 \mathrm { mM } \mathrm { NADPH } , 10 \) \( \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } _ { 2 } , 150 \mathrm { mM } \mathrm { KCl } , 1 \mathrm { mM } \) semicarbazide 및 효소액 (300-400 \( \mu \mathrm { g } \) protein)을 가하였다. 이 반응액을 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 분간 반응시킨 후 \( 15 \% \mathrm { ZnSO } _ { 4 } 2.0 \mathrm { ml } \) 와 포화 \( \mathrm { Ba } ( \mathrm { OH } )_ { 2 } 2.0 \mathrm { ml } \) 를 가하여 반응을 종료시키고 5분간 방치한 다음 10분간 원심분리하였다. 여기서 얻은 상층액 \( 5.0 \mathrm { ml } \) 에 발색의 목적으로 Nash reagent \( 2.0 \mathrm { ml } \) 를 첨가하고 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응시킨 후 다시 원심분리하여 상층액을 취하였다. 이 상층액을 파장 \( 415 \mathrm { ~nm } \) 에서 홉광도를 측정하고 표준검량선에 근거하여 활성도를 산정하였다. 효소활성의 단위는 1분당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 생성하는 formaldehyde의 양을 nmole로서 표시하였다.</p>