Xanthine oxidase 저해활성 측정은 Stirpe와 Corte의 방법, Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법, Collagenase 저해활성 측정은 Wünsch 등의 방법, Astrigent 활성 측정은 Lee 등의 방법에 따라 측정하였다. 각 실험은 3회 반복하여 실시하였고, 각각의 평균 및 표준편차 계산 후 결과를 오차막대로 표시하였다.
<h2>Xanthine oxidase 저해활성 측정</h2> <p>Xanthine oxidase 저해활성은 Stirpe와 Corte의 방법에 따라 측정하였다. 각 시료용액 \( 0.1 \mathrm{ml} \)와 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 7.5)\) \( 0.6 \mathrm{ml} \)에 xanthine \( (2 \mathrm{mM}) \)을 녹인 기질액 \( 0.2 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 xanthine oxidase \( (0.2 \mathrm{U} / \mathrm{ml}) 0.1 \mathrm{ml} \)를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} ~1 \mathrm{ml} \)를 가하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액 중에 생성된 uric acid의 양을 \( 292 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Xanthine oxidase 저해활성은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>저해율 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 uric acid 생성량 }}{\text { 무첨가군의 uric acid 생성량 }}\right) \times 100 \)</p> <h2>Tyrosinase 저해활성 측정</h2> <p>Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법에 따라 측정하였다. \( 67 \mathrm{mM} \) sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 6.8) \) \( 80 \mathrm{\mu l} \)에 \( 10 \mathrm{mM} \) L-DOPA를 녹인 기질액 \( 40 \mathrm{\mu l} \) 및 시료용액 \( 40 \mathrm{\mu l} \)의 혼합액에 mushroom tyrosinase \((200 \mathrm{U/ml})\) \( 40 \mu \mathrm{l} \)을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 \( 475 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>저해율 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 무첨가군의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p> <h2>Collagenase 저해활성 측정</h2> <p>Collagenase 저해활성 측정은 Wünsch 등의 방법에 따라 측정하였다. 즉 \( 0.1 \mathrm{M} \) tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer \( (\mathrm{pH} 7.5) \)에 \( 4 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{CaCl}_{2} \)를 첨가한 용액 \( 250 \mathrm{\mu l} \)와 4-phenylazobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg \( (0.3 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)을 녹인 기질액 \( 125 \mu \mathrm{l} \) 및 시료용액 \( 50 \mathrm{\mu l} \)의 혼합액에 collagenase \( (0.2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \) \( 75 \mathrm{\mu l} \)를 첨가하여 실온에서 20분간 방치한 후 \( 6 \% \) citric acid \( 250 \mathrm{\mu l} \)을 넣어 반응을 정지시킨 후, ethyl acetate \( 1.5 \mathrm{ml} \)을 첨가하여 \( 320 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Collagenase 저해활성은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>저해율\((\%)\) \( =\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 무첨가군의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p> <h2>Astringent 활성 측정</h2> <p>Astringent 활성 측정은 Lee 등의 방법에 따라 측정하였다. 피부 단백질과 유사한 혈액 단백질(hemoglobin)을 사용하여, 원심분리 관 용기에 각각의 시료용액과 헤모글로빈 용액을 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 씩 1:1로 넣어서 진탕 혼합한 다음 \( 1,500 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 원심분리 후 \( 576 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Astringent 활성 측정은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>Astringent 활성능 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 무첨가군의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p> <h2>통계 처리</h2> <p>모든 실험은 3회 반복하여 실시하였고, 평균과 표준편차 계산 후 그 결과를 비교하여 오차막대로 표시하였다.</p>