GNUM08120 균주의 Chemotaxonomic 특징을 ASW-YP평판배지에서 배양 후 분석하였다. 다양한 항생제를 함유하는 paper disc를 올려 놓고 성장 억제환의 직경을 측정하였다. 또한, ASW-YP 액체배지에 다양한 탄수화물을 첨가하여 성장 및 agarase 생산을 관찰하였다. 이 모든 과정은 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 수행되었다.
<h2>화학적 계통분류</h2> <p>Chemotaxonomic 특징은 GNUM08120 균주를 ASW-YP평판배지에서 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 48시간 배양 후 균체를 회수하여 분석하였다. 주요 respiratory quinones은 reverse phase HPLC로 분석하였고, 균체의 지방산은 Miller and Berger의 방법에 준하여 Methyl ester화 시켰으며, 전 처리된 fattyacid methyl esters (FAME) mixture의 분석은 MicrobialIdentification system (MIDI)의 지침에 따라 gas chroma-tography 분석법에 의해 수행되었다. DNA \( \mathrm { G } + \mathrm { C } \) content는 reverse phase HPLC를 이용한 Mesbah 등의 방법에 따라서 분석하였다.</p> <h2>항생제 내성시험</h2> <p>GNUM08120 균주를 ASW-YP 평판배지에 골고루 도말 한 후, 각각의 항생제 [thiostrepton \( (50 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), kanamycin \( (50 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), neomycin \( (30 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), ampicillin \( (50 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), apramycin \( (50 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), chloramphenicol \( (25 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } ) \), nalidixic acid \( (25 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { I } )] \) 를 \( 30 \mu \mathrm { I } \) 씩 함유하는 paper disc를 올려 놓은 후 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 배양하여 paper disc 주변에 형성되는 투명한 성장 억제환의 직경을 측정하였다.</p> <h2>GNUM08120 균주의 세포 성장 및 agarase 생산</h2> <p>균주의 성장 및 agarase 생산을 관찰하기 위해서, ASW-YP 액체배지에 0.3% glucose, 0.3% sucrose, 0.3% starch를각각 첨가하여 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 진탕 배양하면서 3시간 간격으로 샘플을 채취하였다. 균체 성장곡선은 spectrophotometer(Genesys 8, Spectronic Unicam, England)를 이용하여 600nm에서 흡광도를 측정하여 결정하였고, agarase 활성은 샘플을 원심분리(15.000 rpm, 10 min)하여 균체를 제거한 상등액을 이용하여 0.2% agarose를 기질로 하는 3,5-dini-trosalicylic acid (DNS) 법으로 540 nm에서 측정하였다.</p>