임신 초기 SD 횐쥐 20마리를 두 군으로 나누어 n-3 지방산 결핍 및 DHA 첨가 실험을 진행하였다. 실험 동안 비디오카메라를 이용해 횐쥐들의 움직임을 30분 간 측정하였으며, 4일 연속으로 동일 시간에 측정하였다. 이 때, A 지역을 지나가는 횟수를 기준으로 공간 기억력을 판단하였으며, 지역 구분 없이 무작위로 움직이는 경우 기억력이 떨어진다고 판단하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물의 사육 및 실험식이</h2> <p>본 실험에서는 임신 2일된 암컷 Sprague Dawley (SD)계 횐쥐 20 마리를 Charles River 실험실 (Portage, MI)로부터 구입하여 각각 10마리씩 두 군으로 나누어 n-3 지방산이 결핍된 식이군(Def group)과 DHA가 첨가된 식이(Def +DHA group)로 임신기간 및 수유기동안 사육하였다. 신생 쥐가 이유기가 되었을 때 각각 암컷 쥐로부터 1마리씩의 수컷쥐를 취하여 어미쥐의 식이와 동일한 식이로 10 주령까지 사육하였다. 실험에 사용된 식이는 지방산의 양이 변형된 AIN-93G 표준식이이고 실험식이와 음용수는 실험기간동안 자유 섭취방법으로 급여하였다. 적정 환경은 온도 \( 23 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도, 명암 12 시간 주기였다. N-3 지방산이 결핍된 식이군 (n-3 Deficient group)의 지방산 조성은 \( 17.6 \% \) linoleic acid (LA), \( 0.08 \% \) linolenic acid (LNA)이며 DHA는 함유되어 있지 않았고 DHA 첨가 식이군의 경우는 \( 17.5 \%\) LA, \(0.08 \%\) LNA 및 \( 10.2 \% \) DHA를 함유하였다.</p> <h2>일반적인 동물 행동 양상 검사 실험 (Motor activity test)</h2> <p>실험동물들이 10주령이 되었을 때 일련의 동물 행동 학습 실험들이 행해졌다. 먼저 motor activity 실험을 행하여 동물들의 자발적인 운동성을 측정하였다. 각각 실험쥐들을 bed-ding이 깔려져 있는 쥐용 case \( (25 \mathrm{cm} \times 45 \mathrm{cm} \times 20 \mathrm{cm}) \)에 넣고 비디오카메라를 이용하여 이들의 moving distance와 moving time를 30분간 측정하였고 이러한 실험은 4일 연속 같은 시간에 측정하였다.</p> <h2>Morris water maze 실험</h2> <p>Morris water maze test는 쥐의 공간 기억 학습 능력을 평가하는 방법으로 널리 사용되어 왔다. 물탱크를 임의로 4 등분하여 즉 A, B, C, D의 지역으로 나누고 서로 다른 두 개의 시작 포인트를 정하였고 벽면에 있는 은박지와 전기코드가 쥐에게 방향성에 대한 신호로 작용하였다. 물의 온도는 \( 21^{\circ} \mathrm{C} \) 가량이며 1일째는 수영 훈련기간으로 실험쥐를 자유수영시켰고 2일째 가시형태의 플래트폼을 A 지역 중앙에 수위보다 \( 1 \mathrm{~cm} \) 높게 두어 실험쥐가 수영하면서 가시형태의 플래트폼이 보이도록 하였다. 실험쥐가 수영해서 목적지까지 걸리는 시간과 swimming speed를 videomax를 이용하여 측정하였다. 3일째부터는 A 지역 중앙에 가시형의 platform 대신에 보기 힘든 플래트폼(hidden platform)으로 치환하였고 수면에서 약 \( 1 \mathrm{~cm} \)가량 아래의 높이에 두었으며 실험쥐가 목적 플래트폼까지 걸리는 시간을 측정하였다(escape latency). 실험쥐가 성공적으로 목적 플래트폼에 도착하면 30초간 그 곳에서 휴식시간을 주고 만약 90초 내에 도착하지 못하면 손으로 목적지까지 안내해 주어 30초간 휴식하게 하였다. 이러한 실험은 하루에 두 번, 다른 시작 포인트에서 측정되었고 4일 연속 진행되었다(learning trial). 실험 마지막 날에는 기존에 있었던 플래트폼을 제거하고 플래트폼이 있었던 A 지역에 대한 기억력을 지나가는 횟수로 측정하였다(memory retention trial). 즉 다른 지역인 B, C, D와 비교했을 때 A 지역을 지나가는 횟수가 많을수록 공간 기억력이 우수한 것으로 판정하였고 A, B, C, D 지역의 구별 없이 무작위로 수영하는 경우 공간 기억력이 떨어지는 것으로 판단하였다. 또한 목적 플래트폼까지 걸린 시간인 escape latency를 다시 swimming time과 resting time롤 나누어 실험동물의 전반적인 운동력을 측정하였고, swimming distance와 swimming speed도 아울러 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>실험결과는 Mean \( \pm \) SEM (Standard Error of Mean)으로 나타내었고 분석된 실험 데이터는 Statistica program (Statsoft, Tulsa, OK)을 이용하여 repeated measures one-way ANOVA를 실시하여 유의성이 있을 경우에 post-hoc test로 Tukey's HSD (Honest Significant Difference) test를 실시하여 유의성을 검증하였다.</p>