경북지역에서 채취하여 \( 40 \% \) 프로폴리스를 제조하였으며 이를 실험동물 수컷마우스 190마리에 사용하였다. 방사전은 종양치료에 사용하는 선형가속기 X-선을 이용하여 방사선 조사하였으며, 광학현미경 관찰을 진행한 경우, 적출한 정소 조직을 paraffin method에 따라 표본을 제작하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>프로폴리스의 정제 및 추출</h2><p>프로폴리스는 경북 북부지역의 예천, 청송지역에서 채취한 양봉 봉교를 \( 80 \% \) ethanol에 녹여 교반한 다음 60일간 숙성과정을 거친 후 추출하였다. 추출물은 왁스성분을 제거하기 위하여 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 48시간 냉동 보관 후, 24시간마다 4회 반복 여과하여 얻은 추출물을 프로폴리스 농도 측정기(PROEM, HB-62, Korea) 를 이용하여, \( 40 \% \) 프로폴리스를 제조하여 본 연구에 사용하였다.</p><h2>프로폴리스의 투여 및 방사선 조사</h2><p>본 연구에 사용한 실험동물은 체중 \( 20-25 \mathrm{g} \)의 3-4 개월 된 ICR계 수컷 마우스 190마리를 사용하였다. 이중 130마리의 마우스는 프로폴리스 섭식 실험군에 사용되었고, 90마리는 프로폴리스 복강 투여 실험군에 사용되었다. 프로폴리스 섭식 실험군의 경우 방사선 조사 전에 프로폴리스를 사료에 섞어 직접 섭식토록 하였다. 사료는 \( 8 \% \) 프로폴리스가 함유되게 제조하여 사용하였으며, 물에도 \( 0.05 \% \) 프로폴리스를 넣어 자유롭게 수분 섭취토록 하였다. 프로폴리스 복강 투여 실험군에는 방사선 조사 전에 \( 20 \% \) 프로폴리스 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 직접 복강에 투여하였다.</p><p>방사선은 임상에서 종양치료에 사용하고 있는 선형가속기 (Clinac 21 EX, USA)의 X-선을 이용하였다. 방사선 조사는 마우스를 가로 \( 20 \mathrm{cm} \times \) 세로 \( 20 \mathrm{cm} \) 크기의 특수 제작한 아크릴 case에 넣은 다음 마취를 하지 않은 상태로 전신 방사선 조사를 하였다. 프로폴리스 섭식 실험군의 방사선조사는 Depth \( 1.3 \mathrm{cm} \), Field Size \( 25 \mathrm{cm} \times 25 \mathrm{cm} \), SSD \( 97.5 \mathrm{cm} \) 로 1문 조사를 하였다. 방사선 에너지는 \( 1 \mathrm{Gy}(92.6 \mathrm{MU}), 5 \mathrm{Gy} (462.8 \mathrm{MU)}, 10 \mathrm{Gy}(925.6 \mathrm{MU}) \) 로 조사하였다. 프로폴리스 복강 투여 실험군의 방사선조사는 Depth \( 2.5 \mathrm{cm} \), Field Size \( 25 \mathrm{cm} \times 25 \mathrm{cm}\), SSD \( 97.5 \mathrm{cm} \) 로 대향 2문 조사를 하였으며, 방사선 에너지는 \( 5 \mathrm{Gy}(229.2 \mathrm{MU}) \) 를 조사하였다.</p><h2>정소의 형태학적 관찰</h2><p>실험동물은 해부하기 전 4시간동안 절식시킨 다음 diethyl ether로 전신 마취를 시행한 후, 복강을 절개하여 정소 조직을 적출하였다. 광학현미경을 이용한 관찰의 경우, 적출한 정소 조직을 일반적인 paraffin method에 따라 표본을 제작하였다. 적출한 조직은 PBS (\( \mathrm{pH} 7.2 \))에 세척하여 \( 10 \% \) FAA 용액에 넣어 24시간 고정하였다. Ethyl alcohol을 이용하여 탈수하였고, xylene으로 치환한 후 paraffin block을 만들었다. 각 block은 \( 8 \mu \mathrm{m} \) 로 section하여 표본을 제작하였고, 표본은 hematoxylene 과 eosin으로 이중염색을 한 후 관찰하였다. 전자현미경에 의한 조직 관찰의 경우, 적출된 정소 조직을 glutaraldehyde에서 3시간 동안 전고정하였고, osm-mium tetraoxide로 1시간 30분 동안 후고정 하였다. Ethyl alcohol을 사용하여 계대 탈수과정을 행하였으며, propylene oxide로 치환하였다. 그리고 epon resin에 포매하여 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 48시간 중합하여 block을 제작하였다. Ultra microtome을 이용하여 \( 80 \mathrm{nm} \) 로 박절 후 uranyl acetate와 lead ni-trate로 이중 염색하여 투과전자현미경(H-7000, Hitachi, Japan)을 통하여 관찰하였다.</p>