위의 결과에서는 piceatannol이 apoptosis 유도에 관여하는데, extrinsic pathway와 intrinsic pathway가 동시에 중요한 역할을 할 수 있는 가능성을 보여주었습니다. 또한, caspase-8와 -9가 이들 pathway의 초기 활성화에 중요하며, caspase-3은 최종적인 apoptosis 유도를 위한 effector caspase로 작용합니다. piceatannol은 extrinsic 및 intrinsic pathway에 관여하는 initiator caspase (-8 /-9)의 활성을 증가시켜 effector caspase (-3)의 활성을 유도함으로써 세포 내에서 다양한 단백질의 단편화를 유발하고 piceatannol 처리에 의한 A549 세포의 증식 억제와 관련된 apoptosis 유발에는 NO 생성 억제가 동반되고 있음을 알 수 있었습니다.
<h2>Piceatannol에 의한 caspase의 활성 증가 및 기질 단백질 단편화</h2> <p>이상의 결과에서 piceatannol에 의한 apoptosis 유도에 extrinsic 및 intrinsic pathway가 동시에 관여할 가능성을 보여 주었기에, 두 pathway의 초기 활성화에 중요한 caspase-8 및 -9와 이들 두 caspase의 활성에 의하여 최종 apoptosis 유도를 위한 effector caspase로서 작용하는 caspase- 3 의 발현 및 활성에 미치는 piceatannol의 영향을 조사하였다. 먼저 caspase의 발현 정도를 확인한 결과, Fig. 4A에서 나타난 바와 같이 piceatannol의 처리 농도 증가에 따라 이들 세 가지 caspase의 pro-form 발현의 감소가 관찰되었다. 이러한 pro-form의 발현 감소가 active-from의 발현 증가와 연관이 있는지를 조사하기 위하여 in vitro caspase activity assay를 실시한 결과, piceatannol의 처리에 따라 이들 caspase의 활성이 모두 농도 의존 적으로 증가하였다.</p> <p>다음으로 활성화된 caspase-3/-7에 의하여 특이하게 분해 가 일어나는 몇 가지 기질 단백질의 발현에 미치는 piceatannol의 영향을 조사하였는데, Fig. 4A에서 볼 수 있듯이 pi-</p> <p>ceatannol의 처리에 의하여 DNA repair와 genomic stability에 관여하는 poly (ADP-ribose) polymerases (PARP) 단백질과 세포내 골격 유지와 부착성 세포의 전사 조절에 중요한 역할을 하는 \( \beta \)-catenin 단백질의 발현이 모두 감소되었다. 또한 세포의 증식에 중요한 조절인자인 phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate를 protein kinase C activator인 diacylglycerol 및 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 조절에 중요한 역할을 하는 inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3)로 가수분해되는 PLC- \( \gamma 1 \)도 caspase-3의 기질 단백질의 일종이며, piceatannol의 처리에 의하여 처리 농도 의존적으로 감소되었다. 한편 apoptosis 유도 동안 genomic DNA 단편화의 결정적인 조절인자 중의 하나가 caspase-activated DNase (CAD; DNA Fragmentation Factor 40, DFF40)인데, 활성화된 caspase-3/-7은 inhibitor of CAD (ICAD)의 단편화를 유도하며 활성형 CAD nuclease는 핵 내로 이동되어 염색질 응축을 촉진시키는 역할을 하는데, Fig. 4A의 결과에서 알 수 있듯이 piceatannol의 처리에 의하여 이들 단백질의 발현이 매우 감소되었음을 알 수 있었다. 따라서 piceatannol은 extrinsic 및 intrinsic pathway에 관여하는 initiator caspase (-8 /-9)의 활성을 증가시켜 effector caspase (-3)의 활성 유도를 통하여 세포의 증식에 필수적인 세포 내 다양한 단백질들의 단편화를 유도시킴으로서 apoptosis를 유도하였음을 알 수 있었다.</p> <h2>Piceatannol에 의한 iNOS 발현 및 NO 생성의 감소</h2> <p>최근 들어 NO는 암의 발생과 진행에 영향을 미치는 가장 중요한 인자 중의 하나로 인식되어지고 있는데, 특히 NO는 지속적인 염증의 진행에 의한 종양의 형성을 촉진하는 인자중의 하나로 인식되어지고 있다[26,34]. 이러한 과정에 관여하는 NO의 생성은 현재까지 일려진 4 가지의 NO 생성 효소 중 iNOS의 발현 증가와 연관성이 크기 때문에 NO의 생성 억제는 암의 예방 및 진행 억제의 새로운 표적이 될 수 있다. 따라서 본 연구에서는 piceatannol의 처리에 의한 A549 세포의 apoptosis 유발에 NO 생성의 억제가 연관되어 있는지의 여부를 조사하였다. Fig. 5의 결과에서 알 수 있듯이 NO 생성에 결정적인 역할을 하는 iNOS의 발현이 piceatannol 처리 농도 의존적으로 전사 및 번역 수준에서 모두 감소되었음을 알 수 있었다. 그리고 piceatannol의 처리에 따라 NO의 생성 역시 유의적으로 감소되었는데(Fig. 5B), 이는 iNOS의 발현 감소에 의한 것임을 알 수 있었다. 따라서 piceatannol 처리에 의한 A549 세포의 증식억제와 연관된 apoptosis 유발에 NO의 생성 억제가 동반되고 있음을 알 수 있었다.</p>