항균물질의 내열성 조사를 위해 MRS Broth, LB Broth, TSA Broth를 통해 분리균을 배양하고 원심분리하여 가열하여 활성측정시료로 사용하였다. 또한 병원성균을 24시간 배양하고 glass bead를 사용하여 배지 위에서 회전하면서 전면에 균 배양액을 골고루 도말하고 paper disc에 \( 100 \mu \mathrm { ~l } \)를 집적하여 병원성 세균의 적정 생육온도에서 24 시간 배양하여 항균 효과를 확인하였다. 또한 유산균의 생육 중 \( \mathrm { pH } \) 변화를 조사하고 분리 균을 동정하기 위해 streaking하고 \( 16 \mathrm { ~s } \) rDNA 염기순서를 통해 동정하였다.
<h2>항균물질의 내열성 조사</h2> <p>생균제의 가공을 위해서 항균 물질의 열 안정성을 조사하였다. 분리균을 MRS Broth (MERCK, Germany)에 48 시간 동안 혐기적 조건하에서 배양한 배양액을 원심분리(15,000 \( \mathrm { rpm } \), 5 \( \mathrm { min } \) )하여 상등액을 분리하였다. 이를 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 0,5,10,30 \), \( 60( \mathrm { min } ) \)을 가열하여 활성측정시료로 사용하였다. 병원성균을 LB Broth, TSA Broth에 24 시간 배양하여 멸균 된 glass bead 를 사용하여 배지 위에서 회전하면서 전면에 균 배양액을 골고루 도말하고 가열한 상등액은 paper disc \( (8 \mathrm { ~mm } ) \) 에 \( 100 \mu \mathrm { ~l } \)를 집적하여 병원성 세균의 적정 생육온도에서 24 시간 배양 하였다. 생성된 억제환의 크기로 항균 효과를 확인하였다.</p> <h2>생육 중의 \( \mathrm { pH } \) 조사</h2> <p>유산균은 일반적으로 생육 중에 여러 가지 산을 생성 시킨다. 따라서 생육 중에 산 생성량을 \( \mathrm { pH } \) 변화로 조사하였다. \(100 \mathrm { ml } \mathrm { MRS } \) broth에 전 배양 된 배양액을 MRS broth \( 100 \mathrm { ml } \) 에 각각 \( 10 \% \) 를 접종하여 총 48 시간 동안 혐기적 조건하에서 배양하면서 12 시간 간격으로 \( \mathrm { pH } \) 를 측정하였다.</p> <h2>16s rDNA sequence</h2> <p>분리 균을 동정하기 위하여 분리 균을 MRS 배지에 streaking 하여 24 시간 배양 후 (주) MACROGEN에 의뢰하여 \( 16 \mathrm { ~s } \) rDNA 염기순서를 통하여 균 동정을 실시하였다.</p> <h2>분리균의 산란계 급이를 통한 계분 악취 감소 효과</h2> <p>실험 산란계는 M&M BIO 에서 사육 중인 산란계 10 마리 이용하였으며 비급이구(대조구) 5 마리, 급이구(실험구) 5 마리로 구분하여 실험하였다. 실험사료는 시판 중인 닭 사료에 \( 10 \% \)의 탈지분유와 \( 1 \% \)의 글루코스가 함유된 배지에서 배양된 유산균 \( \left (3.2 \times 10 ^ { 10 } \right . \) cells \( \left ./ \mathrm { ml } \right ) \) 을 \( 10 \% \) 가 되도록 시판 중인 닭사료에 첨가하여 1 일 1 회 \( (200 \mathrm { ~g } / \) 마리/일) 씩 급이하고 물은 수시로 공급하였다. 기 서식하고 있는 닭의 장내 유산균이 대처하기 위하여 1 달간은 실험사료를 급이하였고 30 일 후부터 계분을 채취하여 밀폐시료 챔버 내에서 12 시간 보관 후 악취물질(암모니아, 황화수고, 메틸메르캅탄, 황화메틸, 이황화메틸, 트리메틸아민 등) 농도를 보건복지부지정 진주산업대학교 공기질 검사센터에 의뢰하여 조사하였다. 그 외에 닭의 외형적 변화, 달걀의 무게, 노른자의 색도 등을 조사하였다.</p>