Protease, Glucoamylase의 활성을 측정하기 위한 다양한 시약과 버퍼를 사용하여 실험하였다. 이 중 Protease의 활성 측정을 위해 우유 카세인을 이용하였고, 반응 결과를 tyrosine의 양으로 표현하였다. Glucoamylase의 활성은 가용성 전분을 이용한 반응 후 DNS법으로 환원당량을 측정하여 나타내었다. 각각의 실험은 특정 온도와 시간에서 반응을 진행하였으며, 효소의 활성은 해당 조건에서 생산되는 특정 물질의 양으로 표현되었다.
<h2>효소 활성</h2> <p>Protease 활성측정을 위한 기질용액은 milk casein \( 1.8 \mathrm { ~g } \)을 sodium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } 7.2) 300 \mathrm { ml } \)에 용해하여 사용하였다. 효소활성 측정은 조효소액 \( 1 \mathrm { ml } \)에 기질용액 \( 5 \mathrm { ml } \)을 넣고 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10 분간 반응시킨 다음, \( 0.4 \mathrm { M } \) trichloracetic acid (TCA) \( 5 \mathrm { ml } \)을 넣어 30분간 방치하여 반응을 중지시켰다. 반응 중지액을 원심분리하여 얻은 상징액 \( 2 \mathrm { ml } \) 에 \( 0.5 \mathrm { M } \) \( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } 5 \mathrm { ml } \)와 1 / 3 농도로 희석한 foline phenol 시약 \( 1 \mathrm { ml } \)을 첨가하여 발색 시킨 후 \( 660 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 tyrosine \( ( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \)의 양으로 나타내었다. Protease 1 unit는 조효소액 \( 1 \mathrm { ml } \)가 1 분간 \( 1 \mu \mathrm { g } \)의 trosine을 생성하는 효소의 양으로 나타내었다. \( \beta \)-Glucosidase 활성은 조효소액을 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분간 미리 활성화시켜 사용하였다. \( 5 \mathrm { mM } p \) - nitro-phenyl - \( \beta \) - D - glucopyranoside (sigma chemical Co., USA)를 함유한 \( 50 \mathrm { mM } \) potassium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 6.0) \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 조효소액 \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 가하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm { ml } \) 의 sodium tetraborate 포화용액으로 반응을 중지시켜 유리되는 p-nitrophenol의 양을 \( 405 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 효소 활성 1 unit는 1분 동안에 \( p \)-nitro-phenol 1 μmole을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. Glucoamylase 활성은 시험관에 \( 0.05 \mathrm { M } \)acetate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 4.8)에 \( 1 \% \)가용성전분을 녹인 기질용액을 \( 5 \mathrm { ml } \)와 조효소액 \( 1 \mathrm { ml } \)을 첨가 한 후 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응 시키고 그 반응액 \( 1 \mathrm { ml } \)을 취하여 환원당량을 DNS법으로 측정하였다. 효소 활성 1 unit는 1분 동안에 \( 1 \mu \) mole의 glucose를 생산하는 효소량으로 나타내었다.</p>