Rahnella는 Enterobacteriaceae에 속하는 그람음성 간균이며, 이는 자연에 널리 분포되어 있다. 본 연구에서는 연구실에서 분리한 Rahnella aquatilis AY2000을 항효모성 물질 생산균주로 사용하였다. 항효모 활성을 측정하기 위한 대상 효모로는 Saccharomyces cerevisiae ATCC2120 균주가 사용되었다.
<h1>서 론</h1> <p>Rahnella속의 균은 Enterobacteriaceae(장내세균과)에 속하는 그람음성 간균이다. 이 Rahnella속의 균들은 자연에 널리 분포되어 있지만, Gavini 등에 의해 처음으로 보고되었으며, 그 후에 많은 Rahnella속의 균주들이 토양이나 물에서 분리되었다. 일반적으로 Rahnella속의 균들은 식물의 뿌리 근처에 존재하고 있다고 알려져 있지만, 식물의 여러 부위 즉 잎이나 열매와 종자 등에서도 발견되었다. Rahnella속의 균은 가끔 식품에서도 발견되며 낮은 온도에서 식품을 부패시킬 수도 있고, 인체 감염은 거의 일어나지 않지만 극소수의 예가 보고되어 있다. 또한, Rahnella 속의 균들은 질소고정이나 hydroxyapatite를 용해하여 식물이 이용할 수 있는 인산으로 전환시킬 수 있으며, 농업에 유용한 미생물자원으로 IAA(indole-3-acetic acid)생산과 식물 병원균인 Erwinia amylovora와 Xanthomonas campestris에 대해 효과가 있는 길항세균(antagonists)으로도 알려져 있다.</p> <p>본인 등이 분리한 R. aquatilis AY2000균주는 Rahnella속의 균들 중에서 지금까지 보고된 적이 없는 항효모 활성을 가지는 독특한 특성을 가지고 있다. 그러나 AY2000균주가 생산하는 항효모성 물질(Anti-yeast substance; AYS)은 고체배지에서는 항상 안정한 항효모 활성을 가졌지만, 액체 배지에서는 배양조건에 따라 항효모 활성이 나타나지 않는 경우가 종종 있었으며, 또한 시료의 보관 중에도 항효모 활성이 급격히 약화되는 경향이 있었다. 이런 현상은 AY2000균주가 생산한 AYS 자체가 불안정한 물질인 경우와 AY2000균주의 생리적인 특성을 잘 모르기 때문에 액체배양에서 AYS를 생산하는 조건에 문제가 있을 경우가 있다고 생각하였다. 따라서 본 실험에서는 우선 AY2000균주가 액체배양에서 항상 항효모 활성을 가진 AYS를 생산할 수 있도록 여러 가지 배양조건을 달리하여 S. cerevisiae에 대한 최소생육저해농도(minimal inhibitory concentration)를 측정함으로써 항효모 활성이 있는 AYS생산을 위한 최적조건을 검토하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주</h2> <p>본 연구실에서 분리한 Rahnella aquatilis AY2000균주가 항효모성 물질(Anti-yeast substance; AYS) 생산균주로 사용되었으며, 항효모 활성을 측정하기 위한 대상 효모는 본 연구실에 보관중인 Saccharomyces cerevisiae ATCC2120 균주가 사용되었다.</p> <h2>배지 및 배양방법</h2> <p>PYG 배지와 YM 배지의 조성은 전보에서 기술한 바와 같고, Malt 배지는 \( 1.5 \% \) malt extract(Difco사)에 \( 0.5 \% \) sucrose가 첨가하여 사용하였으며, 또한 MYCS 배지[ \(0.3 \% \) malt extract, \( 0.3 \% \) yeast extract, \( 0.5 \% \mathrm { NH } _ { 4 } \)-citrate, \( 1 \% \) sucrose; \( \mathrm { pH } \) 5.4]가 사용되었다. 본 실험에 사용된 R. aquatilis AY2000균주는 특별한 언급이 없는 한 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양을 행하였으며, 배양방법을 간단히 기술하면 다음과 같다. 즉, 먼저 \( 100 \mathrm { ~mL } \)용 삼각 flask에 \( 20 \mathrm { ~mL } \)의 액체배지를 넣고 AY2000균주를 1백금이 접종시킨 후 하룻밤 동안 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 전 배양을 행하였다. 전 배양된 AY2000균주는 미리 준비된 \( 100 \mathrm { ~mL } \)의 액체배지가 함유된 \( 500 \mathrm { ~mL } \)용 삼각 flask에 액체배지의 \( 1.0 \% \)(v/v)가 되도록 접종하고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 진탕 배양하였다.</p>