KCLB로부터 획득한 3T3-L1 전구지방세포는 10% bovine serum과 1% P/S를 포함하는 DMEM 배지에서 5% CO2와 37°C 조건에서 배양하였다. 이후, 25, 50 및 100 μg/ml의 시료를 10 μl씩 추가하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 세포 생존율은 대조군에 비한 처리군의 흡광도 비로 표현하였고, 각 실험은 3회 독립적으로 반복하여 평균값을 도출하였다.
<h3>Lipase 활성 저해능</h3><p>Lipase 저해효과 측정은 Saisuburamaniyan 등의 방법을 변형하여 사용하였다. 각 천연식물류 추출물 \( 0.25 \mathrm{ml}\), \(800 \mathrm{unit}/\mathrm{ml}\) lipase \( 0.5 \mathrm{ml}\), \(0.05 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer\( (\mathrm{pH} 6.5) \) \(0.5 \mathrm{ml} \)을 차례로 가한 후 혼합하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 전 처리한 다음 \( 10 \% \) isooctane에 용해시킨 olive oil \( 1.25 \)\( \mathrm{ml} \)을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 진탕배양 하였다. Acetone \( 5 \mathrm{ml} \)로 반응을 정지시킨 후 \( 5 \% \) cupric acetate \( 1 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 혼합한 뒤 상온에서 정치하여 상층액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 \( 720 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Lipase 저해효과(\(\%\))는 \( \{1-( \) 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도\(-\)시료를 첨가한 반응군의 흡광도\(-\)시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도 \( \} \times 100 \) 식으로부터 산출하였다.</p><h3>3T3-L1 세포를 이용한 항비만 활성 측정</h3><p>실험에 사용한 3T3-L1 전구지방세포는 한국세포주은행(KCLB)으로부터 분양 받았으며, \( 10 \% \) bovine serum (GIBCO,Rockville, MD, USA)과 \(1\%\) P/S (Penicillin/streptomycin)이 포함된 DMEM (Dulbecco's Modification of Eagle's Medium, GIBCO, Rockville, MD, USA) 배지를 가하여 \( 5 \% \mathrm{CO}_{2}\), \(37^{\circ} \mathrm{C} \) 조건의 incubator (3517-02, Shellab Co., Cornelius, USA)에서 배양하였다.</p><h3>세포독성 평가</h3><p>3T3-L1 전지방세포를 \( 5 \times 10^{4} \mathrm{cell} / \mathrm{ml} \)이 되도록 현탁하여 96 well plate에 \( 90 \mu \mathrm{l}\)씩 분주하고 \(5\%\) \( \mathrm{CO}_{2}, 37^{\circ} \mathrm{C} \) 조건의 incubator에서 24시간 동안 배양한 다음, 배지를 모두 제거하고 혈청이 포함되지 않은 배지를 \( 90 \mu \mathrm{l} \)씩 첨가하였다. 여기에 최종 농도가 25, 50 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)이 되도록 배양액에 희석한 시료를 \( 10 \mu \mathrm{l} \)씩 가한 뒤 24시간 동안 배양하였다. 그 후, CCK-8(Colorimetric Cell Counting kit-8, Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan) 용액을 \( 10 \mu \mathrm{l} \)씩 분주하여 3시간 동안 배양한 후 ELISA reader (Victor \( { }^{\mathrm{TM}} \) X3, Perkin Elmer, USA)를 이용하여 \( 450\mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군의 흡광도 값에 대한 시료 처리군의 흡광도 값의 비로 나타내었으며, 각 실험은 독립적으로 3회 반복 실행하여 평균치를 구하였다.</p>