직접흡연과 간접흡연의 결과를 관찰하기 위해 수컷 흰쥐를 27마리를 실험군과 대조군으로 나눈 후, 1일, 2일, 3일, 5일 군으로 나누어 담배를 폭로시켰다. 실험 쥐의 등쪽 피부를 절취하여 포매된 조직을 연속 절펀으로 만든 후 피지샘의 조직학적 구조를 hematoxylin-eosin 염색과 periodic acid Schiff 반응법으로 관찰하였다. 피부 피지샘 glycoconjugates의 당잔기를 검색하기 위해 탈 파라핀한 조직을 TB와 PBS에 세척한 후 Mayer's hematoxylin으로 대조 염색한 후 poly-mount로 봉입하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 동물의 사육 및 처치</h2><p>실험동물은 자유 급식법으로 사육한 체중 \(200\sim 250\) \( \mathrm{g} \)의 성숙한 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐 27마리를 대조군과 실험군으로 나누어 사용하였다. 대조군은 수컷 흰쥐 3마리를 상면의 4부위에 공기구멍이 뚫린 \( 60 \times 30 \times 30 \mathrm{~cm} \) 상자 속에 10분간 방치한 후 사용하였다. 직접흡연군은 대조군과 동일한 크기의 상자에 긴 관을 부착하여 이 관을 통해 88 Light 담배(개피 당 \( \operatorname{tar}\) \(7.7\mathrm{mg} \), nicotine \( 0.65\mathrm{mg} \) 함유)를 1개피의 전체 길이 \(8.5 \mathrm{~cm} \)가 \( 4\mathrm{~cm} \) 가 되도록 3개피를 연소시킨 연기를 통과시켜 상자 내에 주입하며 10분간 방치하였다. 간접흡연군은 대조군과 동일한 크기의 상자에 흰쥐 3마리를 넣고 88 Light 담배 1개피의 전체 길이 \( 8.5\mathrm{~cm} \)가 \( 4\mathrm{~cm} \)가 되도록 3개피를 고무펌프를 이용하여 흰쥐와 분리하여 연소시킨 뒤 연기를 통과시켜 10분간 방치하였다. 직접흡연과 간접흡연은 1일군, 2일군, 3일군 및 5일군으로 나누어 담배를 폭로시키고 각 군에는 수컷을 3마리씩 배정하였다.</p><h2>조직학적 구조</h2><p>대조군과 실험군의 흰쥐를 ether로 마취시켜 등쪽 피부를 절취하여 \(10 \% \) 중성 formalin 용액에 24시간 고정하였다. 수세와 각급 alcohol에 탈수과정을 거쳐 paraplast (융점 \( 56\left.^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에 포매하였으며 포매된 조직을 \(5\sim 6\) \(\mu \mathrm{m} \)의 두께로 연속 절편을 만든 후 피지샘의 조직학적 구조를 hematoxylin-eosin (H-E) 염색과 periodic acid Schiff (PAS) 반응법으로 관찰하였다.</p><h2>Glycoconjugates의 조직 화학</h2><p>대조군과 실험군의 피부 피지샘 glycoconjugates의 당잔기를 검색하기 위해 탈 파라핀한 조직을 \(3\%\) methanolic hydrogen peroxide에 실온에서 30분간 처리하고, PBS(phosphate buffer saline, \(0.01 \mathrm{~M}\), \(\mathrm{pH} \ 7.4\)용액으로 10분간 3회 세척한 후 비특이성 반응을 없애기 위하여 \( 1\% \) bovine se-rum albumin (BAS)용액에 실온에서 30분간 두었다가 압지로 부드럽게 용액을 제거한 후 \(4^{\circ} \mathrm{C} \)의 습실에서 9종류의 bio-tinylated lectin (Vector Lab., Burlingame, CA, USA) 중 DBA, SBA, PNA, BSL-1, WGA 및 UAE-1은 Hepes buffer(10 \(\mathrm{mM}\) Hepes, \( \mathrm{pH~}\ 7.5\), \( 0.15\mathrm{M} \mathrm{NaCl}\), \( 0.1\mathrm{mM}\) \({Ca}^{2+}\), \(0.04\% \) sodium azide, LCA와 Con A는 상기 Hepes buffer에 \( 0.01\mathrm{mM} \)의 \( \mathrm{Mn}^{2+} \)이 첨가된 용액에 \( \mathrm{RCA}-1 \)은 phosphate buffer(10 \( \mathrm{mM} \) phosphate buffer, \( \mathrm{pH}\ 7.5\) , \(0.15\mathrm{M}\) \(\mathrm{NaCl}\), \( 0.08\% \) sodium azide)에 Table 1과 같은 농도로 희석하여 24시간 동안 반응시켰다. PBS로 세척한 후 ABC kit (avidin-bio-tin-peroxidase complex, Vetor Lab.)시약에 실온에서 60분간 반응시켰다. 다시 PBS로 세척한 후 TB (Tris buffer, \( 0.05\mathrm{~M} \), \( \mathrm{pH~}\)\(7.6\))에 \(0.02\)\( \%\) \(3,3^{\prime} \)-diaminobenzidinetetrahydrochloride(Sigma)와 \(0.01\)\( \%\) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 혼합한 용액에 실온에서 약 10분간 발색시켰다. TB와 PBS에 각각 10분간 세척한 후 증류수로 세척하여 Mayer's hematoxylin으로 대조 염색한 후 poly-mount (polyscience, USA)로 봉입하였다.</p>