한방복합물의 항산화능을 평가하기 위해 DPPH radical 소거 활성, ABTS 소거능, 그리고 xanthine oxidase 저해활성을 조사하였다. DPPH와 ABTS의 소거 활성은 한방복합물의 농도에 따라 증가하는 경향을 보였으며, 한방복합물은 xanthine oxidase의 저해활성도를 나타내었다. 이러한 결과로부터 마황, 창출, 석고, 카카오닙스를 포함한 한방복합물은 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 높은 항산화능을 나타내며, 각 실험에서 \( 75.0 \% \) 이상의 높은 radical 소거능을 보여줌으로써 항산화 효과가 우수함이 확인되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1><h2>한방복합물의 항산화능</h2><p>DPPH는 짙은 자색을 띄는 비교적 안정한 radical로, 항산화 물질에 의해 환원되면 자색이 노란색으로 탈색되는 성질을 이용한 방법이다. 한방복합물의 DPPH radical 소거 활성을 측정한 결과를 Fig. 1 A에 나타내었다. 한방복합물 10,100 및 1,000 \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 DPPH radical 소거 활성을 보았을 때 농도가 증가할수록 소거 활성이 증가하는 것을 확인하였고, \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 75.0 \% \) 의 소거 활성을 보였다. ABTS\(^{+} \)는 cation radical를 갖는 화합물로서, ABTS와 potassium persulfate 간의 반응으로 생성된다. 추출물의 항산화 활성에 의하여 ABTS\(^{+} \)가 소거되면서 특유의 색인 청록색이 탈색되고, 이것을 흡광도 값으로 나타내어 소거활성을 측정할 수 있다. ABTS radical 소거활성 결과는 Fig. 1B에 나타내었다. 추출물의 농도가 증가할수록 ABTS 소거능도 증가함을 확인하였고, 추출물 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 100.8 \% \)로 양성대조군인 Vitamin C와 유사한 소거 활성을 나타내었다. Xanthine oxidase는 생체 내에서 purine 대사에 관여하는 효소로서, xanthine 또는 hypoxanthine에서 urate를 형성하고, 혈장 내에 urate가 증가하게 되면 통풍과 신장질환을 일으키는 효소로 알려져 있다. Xanthine oxidase 저해활성 측정은 Fig. 1C에 결과를 나타내었다. 한방복합물의 xanthine oxidase 저해능은 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 79.5 \% \)로 나타났고, 추출물의 농도가 증가함에 따라 저해활성도 증가함을 확인하였다. 창출이 함유된 한방복합물인 창출금련탕의 경우 DPPH radical 소거능이 \( 72.5 \% \)로 나타나 본 실험의 한방복합물이 효능이 더 우수한 것을 확인하였다. 마황, 창출, 석고, 카카오닙스를 활용한 한방복합물의 항산화능을 DPPH, ABTS\(^{+} \) radical 소거 활성 및 xanthine oxidase 저해활성으로 확인한 결과 세가지 실험 모두 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 75 \% \) 이상의 높은 radical 소거능을 보여 한방복합물의 항산화능이 우수한 것으로 확인되었다.</p><h2>한방복합물의 세포 생존율 측정 및 지방세포 분화 억제 효능</h2><p>3T3-L1 세포에 대해 한방복합물의 농도에 따른 세포 생존율을 확인하고, 세포 내 지질 축적에 미치는 영향을 확인하기 위해 Oil red O로 염색을 진행하였다. 한방복합물의 세포독성은 \( 0 \sim 300 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 범위에서 독성확인을 진행하였고 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 90 \% \) 이상의 세포생존율을 나타내어 이후의 실험은 한방복합물 25, 50 및 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 진행하였다. 한방복합물 25, 50 및 \(75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)을 3T3-L1 cell에 처리하여 세포내 지방 생성에 미치는 영향을 확인한 결과 지방세포로 분화시키지 않은 MDI 무처리군에서는 한방복합물에 의한 지방 축적이 확인되지 않았고, MDI를 처리하여 지방세포 분화를 유도한 세포군에서는 지방의 축적이 관찰되었다. MDI를 처리하여 유도된 지방세포 분화 세포군에 한방복합물 25,50 및 \(75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)를 농도별로 처리하였을 때, 각 군에서 농도의존적으로 지방 축적이 감소됨을 확인하였고, 한방복합물 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리군에서 약 \( 61.2 \% \)의 억제율을 보였다. 이를 통해 한방복합물이 세포 생존율에는 영향을 주지 않는 범위의 농도에서 3T3-L1 세포에 대한 지질 축적 억제 효과를 확인하였다. 선행 연구에서 고지방식이로 비만을 유도한 마우스 모델에 마황 추출물을 투여하였을 때 간조직 내의 지질입자의 크기 감소와 지질 분포도가 감소하였다고 보고되었고, 고지방식이로 유도한 당뇨병 동물 모델에서 창출을 포함한 혼합추출물을 투여할 시 혈당 감소 및 간, 췌장 조직에서 lipid droplets이 유의적으로 감소함을 확인하였다. 따라서 각 생약이 가지고 있는 항비만 효과가 혼합물로 제조하였을 때도 비만 예방의 가능성을 나타냄을 시사하였으며 향후 동물시험군에서도 확인할 필요성이 있다.</p>