본 연구는 tacrine으로 독성을 유발한 간암 세포 유래의 HepG2 세포주를 대상으로 황칠나무 잎과 줄기 추출물의 세포생존율에 대한 증가 여부를 관찰하고 HepG2 세포주에 미치는 독성 및 간 보호 효과를 확인하기 위해 tacrine이 HepG2 세포에 미치는 효과를 측정한 후 tacrin과 황칠나무 추출물을 함께 처리하였을 때 세포 생장율을 측정하였다. 그 결과, 황칠나무 잎과 줄기 추출물은 총 폴리페놀 함량과 \mathrm { DPPH }DPPH radical 소거능이 높은 것으로 나와 tacrine 및 알코올로 증가된 활성산소를 효율적으로 억제할 뿐만 아니라 알코올 분해 및 acetaldehyde 분해 효과를 통해 알코올에 의한 간 보호 효과도 기대할 수 있어 천연물을 이용한 기능성 소재로 사용될 수 있을것이다.
<h2>Cell viability</h2> <p>황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 세포 독성 평가를 위해 \( 20 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 와 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } , 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } , 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } , 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 및 \( 1,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 시료를 HepG2 세포에 처리하여 세포 생존율을 측정한 결과(Fig. 4), 각각의 농도에서 \( 103.46 \) \( \%, 101.10 \%, 88.40 \%, 85.93 \%, 79.08 \% \) 및 \( 37.65 \% \) 로 나타났다. 따라서 이후 진행된 세포 실험은 대조군과 유의적인 차이가 없는 것으로 나타난 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도로 진행 하였다.</p> <h2>간세포 보호 효과</h2> <p>본 연구에서는 HepG2 간암 세포주를 이용하여 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 간세포 보호 효과를 확인하였다. Tacrine은 알츠하이머 치료제로 사용되었으나 간 독성을 나타내어 현재는 간세포 보호 효과 실험에 사용되고 있다. 따라서 본 연구에서는 tacrine으로 독성을 유발한 간암 세포 유래의 HepG2 세포주를 대상으로 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 세포생존율에 대한 증가 여부를 관찰하고 HepG2 세포주에 미치는 독성 및 간 보호 효과를 확인하였다. 먼저, tacrine이 HepG2 세포에 미치는 효과를 측정한 후 tacrin과 황칠나무 추출물을 함께 처리하였을 때의 세포 생장율을 측정하였다. 그 결과(Fig. 5) tacrine만을 처리하였을 때의 세포 생장율은 \( 54.42 \% \) 로 나타났고, tacrine과 \( 10,30,50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 황칠나무 물 추출물을 함께 처리하였을 때의 세포 생장율은 각각 \( 59.52 \%, 71.95 \% \), \( 78.39 \% \) 로 tacrine만을 처리하였을 때보다 세포 생장율이 각각 \( 9.37 \%, 31.97 \%, 44.05 \% \) 증가하였다 \( (p<0.05) \). Park 등은 \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \) 를 처리한 \( \mathrm { HepG } 2 \) 간세포에 대한 황칠나무 잎열수 추출물의 세포 생장율을 확인한 결과 \( 0.4 \% \) 의 \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \) 를 단독 처리했을 때의 세포 생장율은 \( 40.9 \%, 10 \sim 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 황칠나무 잎 열수 추출물을 함께 처리했을 때의 세포 생장율은 \( 49.2 \sim 69.6 \% \) 로 황칠나무 잎 열수 추출물의 간세포 보호 효과가 우수한 것으로 보고하였고, Lee 등은 \( t \)-butyl hydroperoxide를 처리한 HepG2 간세포에 대한 황칠나무 부리 에탄올 추출물은 간세포 내에서 ROS 생성 억제 및 간세포 보호 효과가 있는 것으로 보고하였다. ROS는 반응성이 강한 산소를 함유한 분자로 특히 간에서 산화적 스트레스를 유발하는 물질이다. 에탄올 대사과정에서 생성된 \( \mathrm { ROS } \) 는 항산화시스템을 억제함으로써 생체 내 세포 손상을 야기하는 것으로 알려져 있다. 본 연구결과에서 황칠나무 잎과 줄기 추출물은 총 폴리페놀 함량과 \( \mathrm { DPPH } \) radical 소거능이 높은 것으로 나타났기에 tacrine 및 알코올에 의해 증가된 활성산소를 효과적으로 제어할 뿐만 아니라 알코올 분해 및 acetaldehyde 분해 효과를 통해 알코올에 의한 간 보호 효과도 기대할 수 있기에 천연물을 이용한 기능성 소재로서 활용될 수 있을 것으로 판단된다.</p>