BK는 부탄올 농축, 투석, 에탄올 침전, DEAE Sephadex A-50 chromatography, 그리고 Sephadex \( G-75 \) gel filtration을 이용하여 정제하였으며 BK의 활성 및 안정성에 미치는 \( \mathrm { pH } \)의 영향을 조사하기위해 \( \mathrm { pH } 4.0 \) 10.0까지 조정한 반응액을 이용하여 활성 및 안정성을 검토한 결과, BK의 활성은 \( \mathrm { pH } 7 과 8 \)에서 최대였다.
<h2>분자량 측정</h2> <p>BK는 부탄올 농축, 투석, 에탄올 침전, DEAE Sephadex A-50 chromatography, 그리고 Sephadex \( G-75 \) gel filtration을 이용하여 정제하였다. 이 정제된 효소를 SDS-PAGE 전기영동 결과 단일 band롤 화인 할 수 있었으며, 그 분자량은 약 \( 31 \mathrm { kDa } \) 이었다(Fig. 2). Bacillus subtilis BK-17 균주가 생산하는 fibrinolytic enzyme(BK)의 분자량은 지금까지 알려진Bacillus subtilis k-54(29 kDa)와 Bacillus sp. CK11 \( 4(28 \) \( \mathrm { kDa } \) 이 생산하는 fibrinolytic enzyme과 유사하였으나, \( \mathrm { Ba } \) cillus subtilis \( \mathrm { KCK } -7(45 \mathrm { kDa } ) \), Bacillus amyloiquefaciens \( \mathrm { K } 42 \) \( (45 \mathrm { kDa } ) \) 가 분비하는 혈전분해 효소의 분자량보다 작았다.</p> <h2>효소활성과 안정성에 대한 pH의 영향</h2> <p>BK의 활성 및 안정성에 미치는 \( \mathrm { pH } \) 의 영향을 조사하기위해 \( \mathrm { pH } 4.0 \) 10.0까지 조정한 반응액을 이용하여 활성 및 안정성을 검토한 결과, BK의 활성은 \( \mathrm { pH } 7 과 8 \) 에서 최대였다. \( \mathrm { pH } 7 및 8 \) 에서의 활성을 \( 100 \% \) 로 하였을 때, \( \mathrm { pH } 4,5,6 \) 에서 각각 \( 50 \%, 75 \%, 95 \% \) 의 활성을 유지했으며 \( \mathrm { pH } 9 \) 와 10 에서는 각각 \( 85 \% \) 와 \( 80 \% \) 의 활성을 나타내었다. 따라서 BK는 산성에서보다 알칼리에서 더 좋은 활성을 유지하였다. 이 결과는 양등이 보고한 멸치액젓 유래의 MK와 백등이 보고한 Bacillus subtilis KCK-7 가 분비하는 fibrinolytic en-zyme과 비슷한 양상을 보였다. BK 의 \( \mathrm { pH } \) 에 대한 안정성은 활성이 보인 양상과 비슷하였다. 결론적으로 BK의 최적 활성 및 안정성을 보여주는 \( \mathrm { pH } 7과 8 \)로 나타났다.</p> <h2>효소의 활성 및 안정에 대한 온도의 영향</h2> <p>BK의 활성 및 안정성에 미치는 온도의 영향을 검토하기위해 반응온도를 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서 \( 10 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 간격으로 30 분 동안 반응시켜 BK의 상대활성 및 안정성을 표시한 결과, BK는 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 반응최적 온도를 보였다. \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 BK의 활성은 점진적으로 증가되었으며, 그 이상의 온도에서는 급격히 감소하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( \mathrm { BK } \) 의 활성을 \( 100 \% \) 로 보았을 때, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 40 \%, 80 \) 에서 \( 20 \% \) 의 활성을 보였다. 이 결과는 윤등이 보고한 Bacillus amyloliquefaciens K42가 생산하는 fibrinolytic enzyme과 백등이 보고한Bacillus subtilis KCK-7이 분비하는 fibrinolytic enzyme과 비슷한 양상을 보였다. BK의 열에 대한 안정성은 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서 아주 놓았으며, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서는 급격히 감소되었다. 이 결과 역시 윤등, 백등이 보고한 결과와 유사하였다. BK의 최적 활성 및 안정성의 온도는 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이었다.</p>