free radical은 생체의 노화를 촉진할 수 있는 물질로 이를 제거할 수 있는 천연물질에 대한 연구가 활발히 진행되고 있어 TMP1 열수, 에탄올과 TMP2 열수, 에탄올 추출물의 항산화 효과 측정하였는데 TMP2 에탄올 추출물이 가장 높은 항산화활성을 나타냈다. 대장균 lipopolysaccharide (LPS)는 염증을 유발하는 물질로써 면역세포에 \(\mathrm{NO}\) 합성을 유도시키는 것으로 나타나 TMP1과 TMP2 열수, 에탄올 추출물을 대식세포에 처리하여 \(\mathrm{NO}\) 활성에 미치는 영향을 조사하였고 그 결과 시료를 농도별로 첨가하였을 때 점차적으로 감소하였다.
<h2>DPPH에 의한 항산화 활성</h2><p>인체 내의 free radical은 지질, 단백질등과 반응하여 생체의 노화를 촉진할 수 있는 물질로., 이러한 free radical을 제거할 수 있는 천연물질에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 특히 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) radical 소거법은 항산화물질의 전자공여능을 이용한 항산화 측정법으로써 주로 pheonlic 구조와 aromatic amine 화합물에서 많이 사용되는 방법이다. 이에 본 연구에서 TMP1 열수, 에탄올과 TMP2 열수, 에탄올 추출물의 항산화 효과를 DPPH radical 제거 정도를 측정하여 나타내었는데 그 결과 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도에서 각각 \( 81.0\),\(94.0\),\(82.3\),\(96.2 \% \)로 나타났다. 즉, TMP2 에탄올 추출물이 가장 높은 항산화활성을 나타냈다. 이는 일반적으로 이용되는 positive control인 비타민C \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 전자소거능 \( 96.5 \% \) 와 비슷한 수준으로 보이고 있어 그 이용가치가 높음을 시사하고 있다. 지금까지 약용식물 추출물의 전자소거능에 대한 보고에 의하면 감초, 녹차, 박하, 국화, 오미자, 구기자 추출물에서 \(39.3, 94.1\), \(26.3, 51.2\), \(49.4, 29.8\%\)로 나타났는데, 이는 본 연구의 시료인 약용식물 복합 추출물 TMP2의 높은 항산화능을 뒷받침 하고 있다. 이에 반하여 TMP1은 TMP2보다 훨씬 다양한 약재를 추가하여 추출하였지만, TMP2와 유사한 항산화력을 나타내고 있으므로 그 생리활성의 정도가 약용식물의 가지 수와는 무관함을 확인 할 수 있었다.</p><h2>항염증 효능 및 cell viability</h2><p>대장균 lipopolysaccharide (LPS)는 염증을 유발하는 물질로써 면역세포에 \(\mathrm{NO}\) 합성을 유도시킨다. 따라서, TMP1과 TMP2의 항염증 효능을 분석하기 위해 대식세포에 LPS를 처리하여 \(\mathrm{NO}\)를 유도시킨 다음 TMP1과 TMP2 열수, 에탄올 추출물을 대식세포에 처리하여 \(\mathrm{NO}\) 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, LPS에 의하여 유도된 대식세포의 \(\mathrm{NO}\) 합성은 각각의 시료를 농도별로 첨가하였을 때 점차 감소하였다. 즉, \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 TMP1 열수, 에탄올 추출물과 TMP2 열수, 에탄올 추출물을 처리함으로써 LPS에 의해 생성된 \(\mathrm{NO}\) 량을 각각 \( 55\),\(82\),\(48,87 \% \) 감소시켰다. 과량의 NO는 분비조직과 세포의 기능에 악영향을 미치며, 세포성 면역계의 주된 역할의 하나로 세포 독성이나 성장 억제 작용을 하는 것으로 보고 되어 있는데, 본 연구 결과는 TMP1과 TMP2로 부터의 성분들이 \(\mathrm{NO}\) 생성을 억제 함으로써 항염증 효능을 나타내고 있음을 보여준다. 지금까지 연구된 LPS에 의한 약용식물의 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해효과는 Seo 등이 \( 50 \% \) 이상의 \(\mathrm{NO}\) 생성 저해능을 \( 100 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 봉선화, 금불초, 산옥잠화, 모시풀등과 같은 약초의 메틸 추출물에서 보고하였다. 이는 본 연구에서 이용된 TMP2 에탄올 추출물과 유사한 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율을 나타내고 있다. Ahn 등은 본 연구결과와 유사한 도라지의 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율을 보고하였는데, 우수한 \(\mathrm{NO}\) 합성 저해율로 차세대 염증질환 치료제와 예방약으로 활용할 수 있을 것으로 판단하고 있다. 이는 역시 본 연구에서 분석된 TMP2의 활용도를 대변하고 있다. 즉, TMP2 에탄올 추출물이 열수 추출물보다 항염증 효능이 높은 것으로 보여지고 있으며 TMP1 보다 약용식물의 가지 수가 적음에도 불구하.고 유사한 항염증 효능을 보여주고 있으므로 추출용매에 따라 그 생리활성의 정도는 달라질 수 있지만 약용식물의 가지 수와는 무관함을 확인 할 수 있었다.</p><p>추출물에 대한 세포독성은 MTT 분석을 통해서 측정하였는데, 그 결과 시료를 처리한 대식세포의 세포생존율이 \( 90 \% \) 정도를 나타내는 바 본 연구에서 사용된 시료에 대한 세포독성은 없는 것을 알 수 있었다. 따라서, 실험결과에 나타난 NO의 생성량의 변화가 추출물의 세포독성에 의한 영향과는 무관한 것으로 판단 할 수 있었다.</p>