본 논문에서는 어류에서 히스타민을 생성하는 미생물의 동정에 대해 논의한다. TLC 분석을 이용하여 15개의 균주를 동정하고 그들의 16 srDNA 서열을 분석하여 계통발생학적 분류를 결정하였다. 락토코커스, 클렙시엘라, 모르가넬라, 비브리오, 하프니아를 포함한 많은 다른 종류의 박테리아가 물고기에서 히스타민을 생성한다고 보고되었다. 본 논문 또한 고성능 액체 크로마토그래피와 액체 크로마토그래피를 이용한 어류의 히스타민 생성량 측정에 대해 논의한다. 히스타민 생성 균주 7개의 생체아민 함량을 분석한 결과 Klebsiella pneumonlae가 403.01ppm으로 히스타민 농도가 가장 높았으며, Morganella morganii는 48.5ppm으로 나타났다. H. alvei와 M. morgani는 어류에서 스콜로이드 중독을 유발할 수 있는 미생물로 확인되었으며, 고품질의 어분을 제조하기 위해 참치 부산물에서 히스타민 생성 미생물을 제어하는 방법이 필요한 실정이다.
<h3>\( 16 S \) rRNA 염기서열 비교에 의한 histamine 생성 미생물 동정</h3> <p>TLC 분석에 의해 양성으로 확인된 15 종의 균주는 \( 16 S \)rRNA 염기서열을 분석한 후 계통분류학적으로 어떠 divi- sion에 속하는지 확인하기 위해 \( \mathrm { NCBI } \) 에서 제공하는 BLAST 을 이용하여 비교하였다. 본 분석결과 Lactococcus sp. 3종, Klebsiella sp.1종, Morganella sp. 1종, Vibrio sp. 1종, Hafniasp. 1 종을 포함한 충 7 종의 서로 다른 균주가 확인되었다. 이들 균주는 L. garvieae 36 (AY946285)와 98 \%, L. lactis subsp.lactis IL1403 (AE006456)와 99 \%, Klebsiella pneummoniae(EF197996)와 99 \%, Morganella morganii CPD30 (AY464464) 와 98 \%, Vibrio olivaceus HC010916A-1 (AY827492)와 99 \%,Hafnia alvei 718 (AY572428)와 99 \%, L. garvieae NRIC 0612 \( ( \mathrm { AB } 267905 \) 와 \( 99 \% \) 의 상동성을 보였다.</p> <p>한편 \( H \). alvei, M. morganii와 \( K \). pneummoniae 는 scombroid중독 발생에 있어 히스타민이 주원인이 되는 균주로 알려져있으며, Klebsiella spp.는 다량의 histamine을 생산할 능력있는 균주로 보고되었다. 이들뿐 아니라 다른 여러 어류 내에서도 다양한 박테리아 종이 히스타민을 생산할 수있는 것으로 확인되었다. 어류의 장내 히스타민 생성균으로 Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Enterobacter aero-genes, Enterobacter cloacae, Serratia fonticola, Serratia liquefa-ciens, Raoultella (formerly Klebsiella) planticola, Raoultella or-nithinolytica, Citrobacter freundii, Clostridium spp., Vibrio algi-nolyticus, Acinetobacter lowffi, Plesiomonas shigelloides,Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas spp.,및 Photobacterium spp. 등이 보고되고 있다.또한 Fig. 2에서 나타낸 바와 같이 \( 16 \mathrm { ~s } \mathrm { rDNA } \) 염기서열에 의한 계통도 분석결과 각기 미생물들이 다른 계통임을 보여주며 biogenic amines를 생성하는 그람 양성균과 음성균으로 분류될 수 있다.</p> <h3>Biogenic amine 생성량 측정</h3> <p>Histamine 분석을 위한 가장 적절한 방법으로는 특정 전문<p>기술과 장시간 분석시간이 요구됨에도 불구하고, high-per-formance liquid chromatography (HPLC)와 liquid chroma-tography를 이용하는 것이 가장 적절한 것으로 제시되고 있다. HPLC는 biogenic amines 및 biogenic in-dex로 사용되고 있는 histamine, putrescine, cadaverine을 동시에 정성 - 정량 분석이 가능하다. 16s rRNA 염기서열을통해 분석한 7종의 histamine 생성균주의 biogenic amines 함량을 OPA 유도체를 이용하여 분석하였다. Histamine, methylamine, ethylamine, tyramine, phenylethyamine, pu-trescine 및 cadaverine의 retention time은 각기 23.9, 30.4, 36.6, 39.9, 52.6, \( 56.6 \) 및 \( 64.3 \) min으로 나타났다. 이 표준 곡선을 바탕으로 7 종의 histamine 농도를 측정한결과 K. pneumonlae가 \( 403.01 \mathrm { ppm } \) 으로 가장 높은 농도를 나타냈었으며 M. morganii 는 \( 48.5 \mathrm { ppm } \) 이었다. Histamine을 포함한 methylamine, ethylamine, tyramine, phenylethyamine,putrescine 등 biogenic amines의 함량도 K. pneumonlae가장 높은 농도를 보였다. Lopez-Sabater 등[21]은 Klebsiella spp. \( 1,000 \mathrm { ppm } \) 이상의 히스타민을 생성한다고 보고하였으며, 이 중 참치에서 추출한 Klebsiella. oxytoca 및 Klebsiella. pneumo-niae 는 \( 1 \% \) histidine이 첨가된 TSB 배지에서 \( 1,000 \mathrm { ppm } \) 이상의 히스타민을 생산한다고 보고하였다. 그러나 저염 처리된 멸치에서 분리한 Klebsiella. oxytoca의 histamine 농도는6.7ppm으로 분리한 종마다 차이가 있는 것으로 보고되었다. 게다가 본 연구에서 동정한 H. alvei, M. morganii 는 생선 식중독의 주원인이 되는 scombroid를 생성하는 미생물로 반혀져 있다. 따라서 질 좋은 어분을 제조하기 위해서는 참치 부산물 내 히스타민 생성 미생물을 제어하기 위한 방안이 필요할 것으로 사료된다.</p>