조효소와 정제 효소의 활성은 20℃에서 점진적으로 증가하여 40℃에서 최대를 찍는다. 키틴 분해효소 F1과 F2는 40℃에서 최대 활성을 보였으며, Bacillus 종이 생산하는 키틴 분해효소는 대부분 40-50℃에서 최대 활성을 보였다. 키틴 분해활성은 1mM의 Mn²⁺, Zn²⁺, Co²⁺에 의해 약 70% 감소하며, Mg²⁺와 Ca²⁺에 의해 80-90% 감소했다.
<h2>최적반응 온도 및 온도 안정성 측정</h2> <p>조효소액과 정제한 키틴 분해효소의 최적 온도와 온도 안정성에 대한 측정 결과는 Fig. \( 3 \mathrm{C} \) 와 Fig. 3D에 나타내었다. 조효소액과 정제한 효소액에 대한 온도의 영향은 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \) 부터 효소활성이 점차 증가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 최대활성을 나타내었다 (Fig. 3C). 조효소액은 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 사이에서 온도에 대한 안정성을 나타내었으나 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 이상부터는 효소활성이 급격히 감소하여 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \) 이상에서는 활성이 소실되었다. 정제한 효소액은 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 약 \( 70 \% \) 이상 효소활성이 유지되었고 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \) 이상부터는 효소활성이 급격히 감소하여 소실되었다(Fig. 3D).</p> <p>Wang 등이 분리한 B. amyloliquefaciens V656이 생산한 두 개의 항진균성 키틴 분해효소 \( \mathrm{F} 1 \) 와 \( \mathrm{F} 2 \) 는 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 최대 활성을 나타내었다고 보고하였으며, B. licheniformis \( \mathrm{Mb}-2 \) 가 생산한 키틴 분해효소는 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 최대활성을 나타내었으며 \( 75^{\circ} \mathrm{C} \) 이상부터는 효소활성이 감소하였다고 보고하였다. B. licheniformis SK-1이 생산하는 키틴 분해효소는 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 최대활성을 나타내었고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 까지는 매우 안정하며 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에서의 효소활성은 90 분마다 \( 50 \% \) 씩 감소하였다고 보고하였다. Bacillus 속(이) 생산하는 키틴 분해효소는 대부분 \( 40-50^{\circ} \mathrm{C} \) 사이에서 최대활성을 나타내었으며 \( 60-70^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 온도안정성을 나타내었다. 따라서 B. licheniformis GA9이 생산한 키틴 분해효소는 기존의 연구결과들과 유사한 결과를 나타내었다.</p> <h2>금속이온에 대한 영향</h2> <p>정제한 키틴 분해효소의 금속이온에 대한 영향을 조사하기 위하여 각각의 금속이온을 최종농도가 \( 2 \mathrm{mM} \) 과 \( 10 \mathrm{mM} \) 이 되도록 조정하여 측정한 결과는 Table 3 에 나타내었다. \( 10 \mathrm{mM} \mathrm{Co}{ }^{2+} \) 금속이온 존재시 효소활성은 \( 118.3 \% \) 로 증가하였으며, \( 2 \mathrm{mM} \mathrm{Fe}{ }^{2+} \) 과 \( \mathrm{Cu}^{2+} \) 금속이온 존재시 효소활성은 각각 \( 4.1 \% \) 와 \( 61.3 \% \) 로 감소하였고 \( 10 \mathrm{mM} \) 의 경우는 각각 \( 10 \% \) 와 \( 31.6 \% \) 로 감소하였다.</p> <p>B. licheniformis B-6839가 생산하는 키틴 분해효소는 \( 1 \mathrm{mM} \) 의 \( \mathrm{Mn}^{2+}, \mathrm{Zn}^{2+} \) 그리고 \( \mathrm{Co}^{2+} \) 에 의해 키틴 분해활성이 약 \( 70 \% \) 이하로 감소하였으며 \( \mathrm{Mg}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 에 의해서는 효소활성이 80-90\% 감소를 나타내었다. 또한 Gomaa 에 따르면 B. licheniformis NM120-17이 생성하는 키틴 분해효소는 \( 5 \mathrm{mM} \mathrm{Cu}{ }^{2+} \) 이 존재할 때 잔존활성이 \( 98.9 \% \) 로 감소하였으며 금속이온 농도가 \( 10 \mathrm{mM} \) 로 증가하였을 때, 85.4\%로 더 감소하였다고 보고하였다. 또한, \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 존재시 \( 84.7 \% \) 에서 \( 77.1 \% \) 로 금속이온의 농도가 증가할수록 잔존 효소활성이 감소한다고 보고하였다. 정제한 키틴 분해효소 활성에 영향을 미치는 금속이온과 \( \mathrm{EDTA} \) 를 혼합하였을 때, 효소 활성이 크게 감소되었던 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Cu}^{2+} \) 는 \( \mathrm{EDTA} \) 존재시 효소활성이 회복되었으며, \( \mathrm{Co}^{2+} \) 금속이온은 \( \mathrm{EDTA} \) 가 존재할 때, 증가되었던 효소활성이 감소하는 결과를 나타내었다.</p>