Bcl-2 면역조직화학 분석은 조직 처리, 씻기, 항체 처리, 염색 등의 과정을 거쳐 진행되었다. 조직 내에서 Bcl-2 발현이 가장 높은 지점의 세포수를 측정하였다. 자료는 SPSS를 사용하여 통계분석되었고, 실험군과 대조군 간의 효과 차이와 시기별 효과 차이를 알아보기 위해 분산분석을 사용했다. 결과적으로 BBB 척도를 통해 운동기능의 회복을 측정하였고, 실험군에서는 유의한 효과가 나타났으며, 대조군에서는 그렇지 않았다. 이는 수영과 미노싸이클린이 척수내 운동시스템 작용을 돕고 신경세포의 기능회복에 효과가 있다는 것을 시사한다.
<h3>Bcl-2의 면역조직화학 분석</h3> <p>탈파라핀 과정을 거쳐 \( 0.01 \mathrm { ~mol } / l \) citrate buffer \( \mathrm { pH } 6.0 \)에 담궈 Water bath에 중탕하여 40분간 끓인 다음 실온에서 10분간 식혔다. 그 후 조직슬라이드를 \( \mathrm { pH } 7.6 \) TBS buffer에 씻은 다음 3% hydrogen peroxide/PBS에 10분간 처리한 후 TBS buffer로 수세했다. 그 후 1 차 항체 Bcl-2 (santacruz, 1:10)로 2시간 처리한 후 TBS buffer로 씻고 2차 항체(Envision, DAKO) 처리 후 다시 수세했다. DAB (diaminobenzidine)으로 염색하고 증류수로 씻은 후 Hematoxylin으로 대조 염색하였다. 손상조직 내의 척수 앞뿔 부위에서 Bcl-2의 발현이 가장 많이 일어난 곳의 세포수를 측정하였다.</p> <h3>자료 분석</h3> <p>본 연구의 자료 통계분석은 SPSS/window (version 12.0)을 이용하여 통계 처리 하였다. 각 실험군과 대조군의 측정시기에 따른 효과 차이와 그룹 간 효과 차이를 알아보기 위해 반복 측정 분산분석을 하였고, 각 시기변 그룹 간 효과 차이를 알아보기 위해 일원배치 분산분석을 하였으며 통계적 유의수준 \( \alpha \)는 0.05로 하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>신경학적 행동 검사</h2> <p>BBB 척도는 총 21점으로 구성되어 있으며, 다리에서 발까지 관절의 움직임을 점수화 한 것으로 현재 척수손상 된 횐쥐의 운동기능에 관한 척도로 일반적으로 사용되고 있다. 평가는 열린 평면공간 위에서 보행하는 횐쥐의 동물 뒷발의 기능 회복을 보기 위함이다. 이 검사는 세 단계로 구성 되어있다. 초기 회복 단계(initial recovery stage), 충간 회복 단계(intermediate recovery stage), 후기 회복 단계(late recovery stage)의 총 21 점으로 구성 된다. 초기 회복 단계는 다리에서 반까지의 관절의 움직임을 점수화하고 있으며, 중간 회복 단계는 걸음걸이(step)의 회복 여부를, 마지막 단계는 사지 걸음걸이의 전체적인 조화와 고리의 회복 상태를 점수화하는 것이다. BBB 척도의 변화는 척수손상 후 1, 4, 7, 10, 14일에 실시하여 운동기능의 회복을 측정하였다. 실험기간에 따른 그룹 간 BBB 값의 비교는 Mauchly의 구형성 가정에서 유의한 차이가 있었고 개체내 효과 검정으로 분석한 결과 측정시간에 따라 유의한 차이가 있었고, 측정시간과 그룹간의 상호작용이 있었다. 각 실험군파 대조군의 개체간 효과 검정에서도 유의성이 있었다. 시기에 따른 그룹 간 비교에서 BBB 값이 1일과 4일째에는 통계적으로 유의성이 없었고, 7일, 10일, 14일째 측정에서는 통계정으로 유의성이 있었다. 그룹에 따른 시기별 비교에서는 Ⅰ군에서는 1일에 \( 0.57 \pm 0.53 \)점에서 14일째 \( 3.42 \pm 0.78 \)점으로, Ⅱ군에서는 1일째에 \( 0.42 \pm 0.53 \)점에서 14 일에 \( 8.42 \pm 1.27 \)점으로, Ⅲ군에서는 1일에 \( 0.57 \pm 0.53 \)점에서 14일에 \( 8.14 \pm 2.26 \)점으로, Ⅳ군에서는 1일째 \( 0.57 \pm 0.53 \)점에서 14일째 \( 11.57 \pm 0.97 \)점으로 실험군 2군, 3군 및 4군에서 통계적 유의성이 있었고, 대조군에서는 통계적 유의성이 없었다. 이는 수영과 미노싸이클린이 시간이 지남에 따라 척수내의 운동시스템이 원활한 작용을 하여 신경세포의 기능회복에 효과가 있다고 생각되며, 쥐에 타박손상을 가한 후 자발적인 은동을 시행하여 BBB의 기능적인 회복을 관찰되었다는 보고와 일치하였다.</p>