본 연구의 결과 Lipase 생산의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)이다. 또한 금속이온중 \( \mathrm{Mg}^{2+} \)와 \( \mathrm{Mn}^{2+} \)은 효소 생산에 좋고, \( \mathrm{Co}^{2+}\), \(\mathrm{Fe}^{2+}\), \( \mathrm{Ni}^{2+}\), \(\mathrm{Cu}^{2+} \)는 효소 생산을 저해한다. 그리고 계면활성제 중에서 효소 생산을 향상시키는 것은 triton X-100으로 나타났다.
<h2>최적 pH 및 온도</h2> <p>Lipase 생산을 위한 최적 \( \mathrm{pH} \) 를 확인하기 위하여 \( \mathrm{pH}\) 4-11의 범위에서 서로 다른 완충용액을 사용하여 효소활성을 측정하였다. \( \mathrm{pH}\) 4.0-5.5는 \( 0.05 \mathrm{M} \) sodium acetate buffer, \( \mathrm{pH}\) 6.0-7.0은 \( 0.05 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer, \( \mathrm{pH}\) 8.0-9.0은 \( 0.05 \mathrm{M} \) Tris-\(\mathrm{HCl}\) buffer, \( \mathrm{pH}\) 10.0-11.0은 \( 0.05 \mathrm{M} \) glycine- \( \mathrm{NaOH} \) buffer를 이용하여 배지의 \( \mathrm{pH} \)를 조정하였고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 36시간 배양한 후 조효소액을 취하여 효소활성을 측정하였다. Fig.4의 결과와 같이 미생물 생장에 있어서는 \( \mathrm{pH} 8.0 \)에서 가장 높은 생장을 보였으나 낮은 \( \mathrm{pH} \)에서는 미생물 생장이 좋지 않았다. 한편 \( \mathrm{pH}\) 5.5-7.0 범위에서 배양한 시료에서 비교적 높은 효소활성을 나타냈고, 그 중 \( \mathrm{pH} 6.0 \)에서 가장 높은 값을 나타내어 효소 생산을 위한 최적 \( \mathrm{pH} \)는 6.0으로 확인하였다. 효소 생산을 위한 최적 온도를 측정하기 위하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C}\), \(37^{\circ} \mathrm{C}\), \(50^{\circ} \mathrm{C} \), \( 55^{\circ} \mathrm{C}\), \(60^{\circ} \mathrm{C}\), \(70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양한 후 효소 활성을 측정하였다. 그 결과 미생물 생장은 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 가장 높은 생장을 보였고, 효소 활성에 있어서는 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)가 가장 높아 효소 생산을 위한 최적 온도는 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)로 나타났다.</p> <h2>효소생산에 대한 금속이온의 효과</h2> <p>G. kaustophilus의 lipase 생산에 있어 금속이온이 미치는 효과를 알아보기 위하여 최소배지에 \( 2 \mathrm{mM} \)의 금속이온을 첨가하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 36시간 배양한 후 조효소액을 취하여 lipase 활성을 측정하였다. Table 1 에서와 같이 금속이온 중에서 \( \mathrm{Mg}^{2+} \)와 \( \mathrm{Mn}^{2+} \)을 배지에 첨가한 경우, 금속이온을 넣지 않은 대조구에 비해 각각 \( 247 \% \)와 \( 157 \% \)로 효소 활성이 증가하여 두 가지 금속은 효소 생산에 좋은 영향을 미치는 것으로 나타났다. 반면, \( \mathrm{Co}^{2+}\), \(\mathrm{Fe}^{2+}\), \( \mathrm{Ni}^{2+}\), \(\mathrm{Cu}^{2+} \)는 효소 생산을 저해시키는 것으로 나타났다.</p> <h2>효소생산에 대한 triton X-100의 효과</h2> <p>여러 가지 계면활성제(tween 20, tween 80, triton X-100)를 배지에 첨가하여 lipase 활성을 측정한 결과, triton X-100이 G. kaustophilus의 효소 생산을 향상시키는 것으로 나타났다 (data not shown). 배양 배지에 triton X-100을 \( 0-1.0 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)까지 다양한 농도로 첨가하여 배양한 후 조효소액을 취하여 효소 활성을 측정하였다. 그 결과 \( 0.1 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) triton X-100의 농도에서 배양했을 때 가장 높은 효소생산율을 보였고 균의 생장도 높게 나타났다. 그러나 \( 0.3 \% \) 이상의 농도에서는 균의 생장 및 효소 생산 모두 저해 되는 것으로 나타났다. Triton X-100에 의한 효소 생산의 증가는 plasma membrane의 투과성을 변형시켜 세포의 compounds 흡착능이 촉진되기 때문인 것으로 생각된다.</p>