분리균 UJ03의 생화학적인 특성을 종합하면 arabinose, L-pyrrolydonyl-ar-ylamidase, surcrose 등에서는 양성 반응을 보였고, kanamycin, oleandomycin, polymixin B 등의 항생제에서는 감수성을 보였다. 또한 TLC와 HPLC의 결과를 종합했을떄 분리균 UJO30이 생산하는 항균물질은 iturin A와 유사한 것으로 추정할 수 있다.
<p>결과 분리균은 B. subtilis와 B. amyloliquefaciens를 포함하는 B. subtilis group과 \( 98.7 \% \) 의 probability을 나타내었으며 VITEK 2 system에 의한 분석결과에서는 B. amyloliquefaciens, B. atro-phaeus, B. subtilis와 유사한 생화학적 특성을 나타내었다. Bacillus ID kit와 VITEK 2 system에 의한 분리균 UJ03의 생화 학적인 특성을 종합하면 arabinose, L-pyrrolydonyl-ar-ylamidase, sucrose, tyrosine arylamidase, adonitol, ala-phe-pro arylamidase, methyl-D-glucoside, meth-yl-A-D-glucopyranoside acidification, citrate, D-mannitol, cellobiose, \( \beta \)-glucosidase, D-glucose, salicin, esculin hydrol-ysis, trehalose, ONPG, raffinose, xylose, arginine, nitrate, \( \beta \)-xylosidase, leucine-arylamidase, phenylalanine arylamidase 등에 대해 양성반응을 보였으며 kanamycin, oleandomycin, polymixin B 등의 항생제에 대해서는 감수성을 나타내었다.</p> <p>분리균의 계통학적 유연관계를 조사하기 위하여 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과 분리균 UJ03은 B. amylolique-faciens와 \( 98.9 \% \) 의 상동성을 나타내었으며 생리적.생화학적 특성과 16S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통학적 유연관계를 종합하여 분리균 UJ03은 Bacillus sp. UJ03으로 동정되었다. 분리균의 16S rDNA 염기서열에 근거한 계통도는 GeneBank에 등록된 균주들의 16S rDNA 염기서열을 비교하여 작성하였으며 그 결과는 Fig. 3에 나타내었다. Shivaji 등은 B.altitudinis 41KF2bT(AJ831842), B.stratosphericus 41KF2aT(AJ831841), B. aerophilus 28KT(AJ831844)를 포함하는 Bacillus 속은 다양한 환경에서 포자를 생성하여 생존할 수 있기 때문에 환경에 따라 종 다양성이 큰 세균으로 16S rDNA 염기서열에서 \( 100 \% \)의 상동성을 나타내더라도 서로 다른 종으로 분류 될 수 있다고 보고하였으며 분리균 UJ03도 16S rDNA 염기서열 분석에서는 이미 보고된 B. amyloliquefaciens와 \( 98.9 \% \)의 상동성을 보였지만 생리적.생화학적 특성에서는 차이를 나타내 었다.</p> <h2>분리균 UJO30 생산하는 항균물질의 특성</h2> <p>분리균 UJ03이 생성하는 항균물질은 분리균을 No. 3 배지에서 액체 배양한 다음 산 침전한 후 메탄올에 추출하여 얻었으며 항균물질의 TLC 분석은 iturin A를 reference 물질로 사용하여 수행하였다. Reference 물질로 사용한 iturin A는 대부분의 Bacillus 속 균주가 생성하는 펩타이드성 항균물질 중 하나이다. 분리균이 생성하는 항균물질은 TLC 상에서 chloroform/methanol/water (6.5 / 2.5 / 0.5)를 전개용매로 사용하여 \( 10 \% \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 으로 발색하였을 때 분홍색을 띄었다. \( 10 \% \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \)에서 분홍색으로 발색되는 물질의 Rf치는 0.36, 0.70,0.77이었으며 reference 물질인 iturin A의 Rf치(0.34)와 비교하였을 때 유사한 Rf치를 나타내었다. TLC에서의 결과를 근거로 C18 reverse column를 이용하여 HPLC 분석을 수행한 결과에서도 분리균의 메탄올 추출물은 3.765분, 4.333분, 4.448분에서 분리되었으며 iturin A는 3.974분, 4.562분, 4.682분에서 분리되어 두 물질이 유사한 retention time에서 분리됨을 확인할 수 있었다. Reference 물질로 사용한 iturin A를 보고한 Peypoux 등에 의하면 Bacillus 속은 지방산의 탄소수가 다른 isomer를 가진 iturin을 분비한다고 보고하였으며 분리균의 메탄올 추출물도 HPLC 분석 결과 retention time이 다른 3개의 peak를 나타내었다. 따라서 TLC와 HPLC 결과를 종합하면 분리균이 생성하는 항균물질은 iturin A와 유사한 것으로 추정된다.</p>