동결 건조된 시료에 \( \mathrm { ACE } \) 정제효소를 가한 후 preincubation 하였다. 여기에 용해한 \( 5 \mathrm { mM } \) 의 hippuryl-histidyl-leu- cine 용액을 가해 다시 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분 반응시킨 후 \( 10 \% \) trifluoroacetic acid (TFA) \( 20 \mu 1 \) 를 가하여 반응을 정지시켰다.
<h2>Angiotensin I converting enzyme (ACE)의 저해능</h2> <p>동결 건조된 시료 \( (10 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } ) 15 \mu 1 \mathrm { l } \) 에 \( \mathrm { ACE } \) 정제효.스(60 \( \mathrm { mU } / \mathrm { ml } \), Sigma A6778, USA) \( 50 \mu 1 \) 를 가한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 preincubation 하였다. 여기에 sodium borate buffer \( ( \mathrm { pH } 8.3 \), \( 300 \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } \) 함유)에 용해한 \( 5 \mathrm { mM } \) 의 hippuryl-histidyl-leu- cine 용액 \( 125 \mu 1 \) 를 가하여 다시 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분 반응시킨 후 \( 10 \% \) trifluoroacetic acid (TFA) \( 20 \mu 1 \) 를 가하여 반응을 정지시켰다. \( \mathrm { ACE } \) 저해율은 반응용액 \( 20 \mu 1 \) 를 HPLC column (watchers 120 ODS-AP 250 X \( 4.6 \) (5 uns)), HPLC solvent de-livery pump (Model L-2130, HITACHI), column oven (Model UV-8010, TOSOH), detector (Model Agilent 1100 ser-ies, Agilent)를 이용하여 용출속도는 \( 1 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \), 이동상으로는 \( 0.1 \% \mathrm { TFA } \) 를 함유한 \( \mathrm { CH } _ { 3 } \mathrm { CN } \) 용액 \( (0 \sim 60 \%, 16.5 \mathrm { ~min } ) \) 을 사용하여 선형상 농도 구배법으로 기질로부터 유리된 hippuric acid \( ( \mathrm { HA } ) \) 를 \( 228 \mathrm { ~nm } \) 에서 검출하여, 시료 첨가 전후 생성량을 백분율로써 나타내었다. 이때, 시료 용액 대신 증류수를 음성 대조 군으로, 고혈압에 대한 강압작용에 관여하는 주요한 성분인 valyl-tyrosine (Sigma-aldrich Co, Louis, USA)를 양성 대조군으로 사용하였다.</p>