분리된 균주를 \( 5 \mathrm { ml } \) 의 \( \mathrm { TSB } \) 배지에 접종하여 염색체 DNA를 추출였는데, API 50 CHB Kit (BioMérieux, France) 및 API ZYM kit (BioMérieux, France)를 제조사에서 제시한 방법을 사용했다. 그 후 비성장속도 측정, 내염성 평가를 위한 작업을 실행했으며, 모든 측정은 3회 반복 하였고, 통계처리는 SPSS Statistics을 사용하였다.
<h2>균주 동정</h2> <p>분리된 균주를 \( 5 \mathrm { ml } \) 의 \( \mathrm { TSB } \) 배지에 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 배양한 후 Sim과 Kim [36] 방법으로 염색체 DNA를 추출하였다. 염색체 DNA를 주형으로 \( 27 \mathrm { ~F } \left (5 ^ {\prime } \right . \)-AGAATTTGATCM TGGCTCAG-3')와 \( 1492 \mathrm { R } \left (5 ^ {\prime } \right . \)-GGTTACCTTGTTACGACTT-3') 프라이머를 이용하여 중합효소 연쇄반응을 수행한 후 증폭한 \( 16 \mathrm { ~S } \) rRNA 유전자의 염기서열을 확보하였다. BLAST (NCBI, USA)를 이용하여 기존에 보고된 균주와의 상동성을 근거로 동정하였다.</p> <h2>생리학적 특성</h2> <p>탄소원 대사 및 균주가 보유한 효소계의 특성을 조사하기 위하여 API 50 CHB Kit (BioMérieux, France) 및 API ZYM kit (BioMérieux, France)를 제조사에서 제시한 방법에 따라 사용하였다.</p> <h2>비성장속도 측정</h2> <p>균주의 생육특성을 조사하기 위하여 TSB 배지에 초기 세포흡광도 \( \left ( \mathrm { OD } _ { 600 } \right ) \) 가 \( 0.1 \) 이 되도록 접종한 후 다양한 온도에서 배양하여 대수 증식기에서 비성장속도를 측정하였다. 배지의 \( \mathrm { pH } \) 변화가 균체성장에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 완충용액을 사용하여 배지의 \( \mathrm { pH } \) 를 조정한 후 최적 배양온도에서 비성장속도를 측정하였다.</p> <h2>내염성 평가</h2> <p>숙성 김치의 염도를 고려하여 \( 0,1,2,3 \% \) 의 \( \mathrm { NaCl } \) 이 함유된 TSB 배지를 사용하여 균주를 배양하였다[33, 34]. 대수기로 성장하고 있는 균주 배양액을 적정배수로 희석한 후 TSA 평판배지에 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 를 점적하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 동안 배양하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 측정은 3 회 반복하였으며 통계처리는 SPSS Statistics (v. 22, IBM, USA)를 사용하여 Duncan의 다중범위검정법으로 유의성을 검정하였다[35].</p>