담쟁이덩굴을 열수추출물과 \( 80 \% \) 에탄올 추출물을 농축하여 동결 건조하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다. Folin-Ciocalteu법을 이용하여 tannic acid의 최종농도가 \(30,60,90,120\) 및 \(150\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)가 되도록 조절하여 측정한 표준곡선으로부터 담쟁이 추출물에 함유된 총 polyphenol 함량을 산출하였다. 그리고 시료의 첨가여부에 따른 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료조제</h2><p>본 실험에 사용한 담쟁이덩굴 (P. tricuspichtat)은 고려식품연구원으로부터 구입하여 시료로 사용하였다. 건조시킨 당쟁이덩굴을 \( 100 \mathrm{~g} \) 에 10배의 용매를 가하여 추출하였다. 열수추출물은 autoclave로 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2시간씩 2회 추출하였으며, 에탄올 추출물은 \( 80 \% \) 에탄올을 상온에서 24시간씩 shaking 하여 2회 추출하였다. \( 80 \% \) 에탄올 추출물의 분획제조는 에탄올 추출물을 물 \( 200 \mathrm{ml} \)에 용해시켜 분액깔때기에 넣고 \( 200 \mathrm{ml} \)의 n-hexane으로 3회 반복 추출하여 n-hexane 분획을 얻었으며, 이와 같은 방법으로 n-butanol 분획을 얻었다. 추출물은 Whatman No. 2 filter paper로 여과한 후 rotary evaporator (EYELA N-1000, Rikakikai Co., Tokyo, Japan)로 농축하였다. 추출물들은 동결 건조하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하면서 본 실험에 사용하였다.</p><h2>폴리페놀 함량 측정</h2><p>총 polyphenol 함량은 Folin-Ciocalteu법을 약간 변형시켜 측정하였으며 표준물질로서 tannic acid (Sigma Chemical Co., USA)를 사용하여 계산하였다. 일정농도의 담쟁이 추출물 \( (1 \mathrm{mg} / 1 \mathrm{ml}) \)을 시험관에 취하고 Folin-Ciocalteu reagent \( 1 \mathrm{ml} \)을 가하여 잘 혼합한 나음 3분간 실온에서 반응시켰다. 혼합물에 \( 10 \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \)용액 \( 2 \mathrm{ml} \)을 가하여 혼합하고 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 40분간 발색시킨 후 \( 760 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로 tannic acid의 최종농도가 \(30,60,90,120\) 및 \(150\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)가 되도록 조절하여 위와 동일한 방법으로 측정한 표준곡선으로부터 담쟁이 추출물에 함유된 총 polyphenol 함량 \( (\mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)을 산출하였다.</p><h2>DPPH 라디칼 소기능 측정</h2><p>담쟁이 추출물의 전자공여능은 Blois의 방법에 따라 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. DPPH 용액은 \( 100 \mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 1.5 \times \) \( 10^{-1} \mathrm{M} \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 혼합하여 Whatman filter paper No. 2로 여과하여 만들었다. 96 well plate에 시료와 DPPH용액율 \( 1: 4 \) 비율로 흔합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 반응시킨 후, ELISA reader를 이용하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) (Molecular Device, VersaMax Microplate Reader, California, USA)에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donating ability, EDA)은 EDA \( (\%)=( \) 대조구흡광도-시료첨가구흡광도)/대조구흡광도\( \times 100 \)으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다.</p>