육계 시호 복합 추출물 중 시호 추출물을 얻기 위해 열수추출한 후, 여과 및 농축, 완전 건조를 거쳤다. TNBS에 의한 대장염 유발 동물실험은 정상군, TNBS를 처치한 대조군, 30sulfa 투여군, 60sulfa 투여군, SCB 30 투여군으로 분류하여 진행하였다. 마우스에 대장염 유발을 위해 24시간 절식 후 TNBS를 주입하였다. 그 후 마우스들의 몸무게를 측정하고, 혈변/점액변의 유무, 행동의 변화를 관찰하였으며, 심장에서 혈액을 채취하여 혈청을 분리하였다.
<h2>시료제조</h2> <p>실험에 사용된 육계 시호 복합 추출물 중 시호 추출물을 얻기 위하여 시호 \( 100 \mathrm { ~g } \)에 \( 10 \) 배수의 증류수를 가한 뒤 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 2 \)시간 동안 열수추출 하였다. 추출하여 얻은 액을 여과 후 감압추출장치로 농축한 후 동결 건조기를 이용하여 완전 건조시켜 시호 추출물을 제조하였으며 수율은 \( 26 \% \) 였다. 이를 냉동 \( \left (-80 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 보관하면서 실험 직전에 증류수에 희석하여 사용하였다. 육계 \( 10 \) 배수의 \( 50 \% \) 에탄올을 가하여 상온 추출하였다. 이후 \( 50 \% \) 에탄올 추출물을 Whatman (No. \( 1 \), GE healthcare, Arlington Heights, \( \mathrm { IL } , \mathrm { USA } ) \) filter paper로 여과하고, 이를 감압 농축하였으며, 실험시까지 냉동보관하였다.</p> <h2>TNBS에 의한 대장염 유발 동물실험</h2> <p>실험은 아무런 처치를 하지 않은 정상군, TNBS를 \( 1.6 \mathrm { mg } / 80 \mu \mathrm { L } \) 로 처치한 대조군, sulfasalazine \( 30 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 을 처리한 \( 30 \mathrm { sulfa } \) 투여군( \( 30 \)Sulfa), sulfasalazine \( 60 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 을 처리한 \( 60 \mathrm { sulfa } \) 투여 군( \( 60 \)Sulfa), 그리고 Sulfasalazine \( 30 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 와 육계(Cinnamomi cortex) 와 시호(Bupleuri radix) 복합물 \( 30 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } ( \mathrm { SCB } 30) \) 을 처리한 SCB \( 30 \) 투여군, 총 \( 5 \)그룹으로 분류하였으며, 각 군에 \( 12 \)마리씩 배정하였다. Sulfasalazine과 육계 시호 복합물은 표기한 용량에 따라 \( 1 \)일 \( 1 \)회 총 \( 7 \)일간 경구 투여하였다. 마우스에 대장염을 유발하기 위해 \( 24 \)시간 절식시킨 뒤, isoflurane으로 가볍게 마취시킨 후 존대를 사용하여 saline ( \(0.9 \% \) \( \mathrm { NaCl } \) , \( \mathrm { pH } 7.4 \) )에 희석한 \( 1.6 \mathrm { mg } / 80 \mu \mathrm { L } \) 의 TNBS를 항문으로부터 \( 4 \mathrm { ~cm } \) 기기로 주입하였다. 주입 후 \( 30 \) 초간 꼬리를 위로 세워서 정치시켜 대장염을 유발시켰다. 모든 마우스들은 매일 몸무게를 측정하고 혈변, 점액변의 유무, 행동의 변화를 살펴보았으며 실험 \( 8 \)일 째, 절식을 \( 24 \)시간 한 후, isoflurane으로 흡입마취하여, 심장에서 혈액을 채취하였고 즉시 원심분리기를 이용해 혈청을 분리하였다. 그 후에, 대장과 비장을 적출한 뒤 무게를 측정한 후, 분석 전까지 \( -80 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 급속 냉동하여 보관하였다. 실험동물의 체중은 전자체중계로 \( 1 \)회/ \( 1 \)일으로 동일 시간 동일 조건에서 측정하였고, 실험종료일 체중에서 실험 개시 전 체중을 빼서 체중증가량 \( \{\) body weight gain \( ( \mathrm { g } ) \} \)을 산출하였다.</p>