SDS-PAGE를 조성하여 발효 누에분말의 단백질 패턴을 분석하였으며 lysed zone으로 발효 누에분말의 혈전용해 효소 활성을, Blois의 방법으로 발효 누에분말의 항산화 활성을 측정하였다.
<h3>발효 누에분말의 SDS-PAGE에 의한 단백질 패턴비교</h3> <p>발효 누에분말의 단백질 패턴 분석은 Weber 및 Osborn방법[29]에 준하였는데, SDS-PAGE의 조성은 \( 10 \% \) acrylamide,\( 1.5 \mathrm{M} \) Tris-HCl buffer (pH 8.8), 0.4\% SDS (Sodium dodecylsulfate), \( 10 \% \) 과산화암모늄 및 \( 0.05 \% \) TEMED로 만들어 사용하였다. 농축 gel의 조성은 5\% acrylamide, \( 0.5 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \)buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.8), 0.4\% SDS, \( 0.05 \% \) TEMED 였다. 시료단백질의 SDS 처리는 최종농도 2\% SDS, \( 14.4 \mathrm{mM} \beta \)-mercaptoethanol,\( 60 \mathrm{mM} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.8), 25\% glycerol 및 \( 0.1 \% \) BPB혼합액에서 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 로 5 분간 열처리 하였다. 전기영동은Tris-glycine 완충액(25 mM Tris, \( 192 \mathrm{mM} \) glycine, \( \mathrm{pH} \) 8.3)하에서 130-150 mA/gel \( (\mathrm{cm}) \) 의 정전류를 통하여 1 시간 30 분 간 하였다. 전기영동 후 gel은 고정액(Methanol:Acetic acid:Water=10:10:80)에 \( 1 \% \) coomasie brilliant blue R-250을 첨가하고 10시간 염색한 후 탈색액(Methanol:Acetic acid:Water=10:10:80)으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 하였다.</p> <h3>발효 누에분말의 혈전용해 효소 활성 측정</h3> <p>발효 누에분말의 혈전용해 효소 활성은 fibrin plate 법[1]을 변형하여 lysed zone으로 측정하였다. 혈전용해 활성 측정에 사용된 fibrin, fibrinogen, thrombin은 Sigma Co. (St. Louis MO,USA ) 제품을 구입하여 사용하였다. Fibrin plate는 \( 0.06 \% \)fibrinogen을 \( 0.2 \mathrm{M} \) borate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 7.5)에 용해시킨 후 petri dish에 \( 10 \mathrm{ml} \) 씩 분주하고 thrombin (5,000 unit) 40 unit을 간일하게 섞이도록 가하면서 균일한 두께의 fibrin clot를 형성시킨후 실온에서 30 분간 방치한 후 사용하였다. 시료를 증류수에\( 1 \% \) 농도로 용출시킨 후 여과(Whatman filter paper No. 2)하여 fibrin plate 상에 \( 50 \mu 1 \) 씩 점적하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3시간 동안반응시킨 후 생성된 투명환 부위의 직경을 측정하였다. 직경은 서로 수직인 두 개의 지름을 측정하여 투명대의 면적을 구하여 unit/ml로 표시하였다.</p> <h3>발효 누에분말의 DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h3> <p>발효 누에분말의 항산화 활성은 Blois의 방법에 따라 측정 하였다[2]. 즉 DPPH (a,a'-diphenyl-ß-picrylhydrazyl) 용액은 \( 100 \mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 16 \mathrm{mg} \) 을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 를 혼합하여 여과지(Whatman filter paper NO. 2)로 여과시켜 만들 었다.DPPH 용액 \( 5 \mathrm{ml} \) 에 \( 0.1 \%(1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \) 시로 용액 1\( \mathrm{ml} \) 을 혼합하여 실온에서 30 분간 반응시킨 후 \( 528 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 대조구인 시판 항산화제 BHT 는 \( 0.05 \% \) 로 첨가하여 상기와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH free radical scavenging activity는 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율(\%)로 표시하였다.</p>