1-OHP standard \( 10\mathrm{ng} /\mathrm{ml} \)와 전처리가 끝난 소변 시료를 HPLC에 주입하여 1-OHP를 정량측정 하였으며, 모든 시료의 측정은 2회 반복하여 평균값을 사용하였다. 연구결과는 SPSS 12.0 통계 프로그램을 이용하여 분석진행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>초미세 나노박막 코팅 bead 제작 방법</h2> <p>\( 100 \mathrm{mM} \mathrm{Ti}\left(\mathrm{O}-{ }^{\mathrm{n}} \mathrm{Bu}\right)_{4} \) 와 \( 5 \mathrm{mM} \) 1-hydroxypyrene을 에탄올:톨루엔(1:1,v/v) 혼합용액에 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 6시간 이상 교반하며 복합착체를 제조하였다. 상기 복합 착체 \( 20 \mathrm{ml} \) 를 \( 10 \mathrm{~g} \) 의 고분자 bead와 혼합하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3시간 교반 후, \( 2 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 질소 가스를 5시간 흘려주어 용매를 모두 제거함으로서 폴리머비드의 표면을 복합착체로 코팅하였다. 이것을 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \), \( 90 \% \) 습도의 항온, 항습기에서 12시간 이상 가수분해 시킨 후, \( 10 \% \)ethanol과 \( 2 \% \)acetic acid가 함유된 acetonitrile 용액으로 밤새 교반하면서 주형분자를 제거하였다. 3-4시간 간격으로 용액을 교환해주었고 HPLC의 방법으로 용액에서 1-OHP가 더 이상 검출되지 않을 때까지 제거하였다.</p> <h2>1-OHP-\(\mathrm{TiO}_{2} \) 전처리 과정</h2> <p>1-OHP-\(\mathrm{TiO}_{2} \)-Bead를 \( 50 \mathrm{mg} \) 씩 \( 2 \mathrm{ml} \) tube에 넣은 후 \( 50 \% \) methanol \( 1 \mathrm{ml} \)로 conditioning하였다. 비직업적 노출이 없는 건강인 지원자 12명으로부터 일시뇨를 채취한 후 소변 600\( \mu 1 \) 을 취하고 여기에 메탄올 \( 600 \mu 1 \)을 넣고 10분 동안 잘 섞어 주었다. 그런 후,1-OHP-\(\mathrm{TiO}_{2} \)-Bead가 담긴 튜브에 넣고 하루 밤 동안 반응시켰다. 반응물은 \( 50 \% \) methanol로 washing을 한 후 추출용액[acetic acid \( (5 \%) \) : acetone \( (80 \%) \) : ethanol \( (10 \%)] \) 을 이용하여 2시간 추출한 후 HPLC로 측정하였다.</p> <h2>HPLC 조건</h2> <p>1-OHP standard \( 10\mathrm{ng} /\mathrm{ml} \)와 전처리가 끝난 소변 시료를 TOSOH TSKgel ODS-80TM(5\( \mu \mathrm{m}, 150\times 4.6\mathrm{~mm})\)역상 column과 형광 검출기가 부착된 HPLC에 주입하여 1-OHP를 정량측정 하였다. 모든 시료의 측정은 2회 반복하여 그 평균값을 측정값으로 사용하였으며 두 측정값이 큰 차이를 보이는 경우는 재측정하여 유사한 두 값의 평균값을 이용하였다. HPLC는 Hitach (Tokyo, Japan) Model L-2300 column oven이 부착된 L-2130 pump, L-7485 형광 검출기, 그리고 L-7200 지동시료주입기로 구성된 것을 사용하였다. 이동상은 \( 80\% \) methanol 용액을 사용하였으며, 분당 \( 0.8\mathrm{ml} \)의 속도로 흘려 주었다. 형광 검출 파장은 excitation \( 242\mathrm{~nm}\), emission \( 388\mathrm{~nm}\)를 사용하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>시행한 연구 결과를 SPSS 12.0 통계 프로그램을 이용하여 분석하였다. 상관분석을 이용하여 Person 상관계수를 산출하였으며 \( p<0.05 \)일 때 유의한 것으로 판정하였다.</p>