각종 유기산들을 기본 배지에 5mM (v/v)로 최종 농도를 보정한 후 산도 7.2로 660nm의 흡광도 0.5로 배지에 첨가하여 생합성 실험을 수행하였고 배양하는 동안 동일한 광도850nm에 노출시켜 균주의 성장을 측졍하였으며 나머지는 1ml를 원심분리하여 상등액을 분취하고 알라모의 농도를 측정하는 실험을 하였다. 850nm파장의 LED 빛에 동일하게 노출하면서 3번의 반복 실험을 거치면서 정량적인 평가를 하였으며 성장력과 생산량을 최종 산출할 수 있었다.
<h2>다양한 유기산 전구체 첨가에 따른 \( ALA \) 의 생산량 분석</h2> <p>\( ALA \) 생합성 전구체로 사용되는 다양한 유기산 \((acetic \) \( acid, \) \( butyric \) \( acid, \) \( propionic \) \( acid, \) \( pyruvic \) \( acid, \) \( succinic \) \( acid, \) \( sulfuric \) \( acid) \)을 \((Sigma-Aldrich \)사 \((St. Louis, \) \( MO, \) \( USA) \)에서 구입하여 기본배지에 최종 농도가 \( 5 \mathrm { mM } ( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 되게 첨가한 후 \( 1 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { NaOH } \)를 이용하여 \( \mathrm { pH } \) \( 7.2 \) 까지 보정한 후 \( R. \) \( sphaeroides \)를 \( 660 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도 \( 0.5 \)가 되도록 접종하였다. 배지의 최종 \( \mathrm { pH } \)는 \( \mathrm { pH } \) \( paper \) \( (Sigma Aldrich, \) \( St. Louis, \) \( USA) \) 를 사용하여 확인하였다. 접종 후, \( 72 \)시간 배양하여 배양액의 \( \mathrm { ALA } \)의 농도와 건조체 질량당 \( \mathrm { ALA } \) 생산량 측정하기 위하여 위에서 기술한 방법데로 건조체 질량을 측정하였다. 배양하는 동안 동일한 광도로 \( 850 \mathrm { ~nm } \) 파장의 \( LED \) 빛을 조사하였다. 정량적 평가를 위해 \( 3 \)회 반복 실험하여 최종 \( \mathrm { ALA } \) 생산랑을 결정하였다.</p> <h2>\( Glucose \)농도에 따른 \( R. \) \( sphaeroides \)의 성장변화와 \( ALA \) 생산량 분석</h2> <p>\( 1 \mathrm { M } \) \( glucose \) 용액을 \( vaccum \) \( filter \) \( system \) \( (pore \) \(size: \) \( 0.22 \mu \mathrm { m } , \) \(Corning, \) \( Glendale, \) \(AZ, \) \( USA) \)을 통해 멸균 후 최종농도가 \( 5,10,20,40,80 \) 및 \( 160 \mathrm { mM } \)이 되도록 기본배지에 넣고, \( \mathrm { 5mM } \)의 \( pyruvic \) \( acid, \) 첨가 후 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { NaOH } \)로 \( \mathrm { pH } \)를 \( 7.2 \)로 보정하였다. \( Glucose \) 및 \( pyruvic \) \( acid, \) 첨가와 \( \mathrm { pH } \) 보정이 모두 끝난 기본배지에 \( R. \) \( sphaeroides \)를 \( 660 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도 \( 0.5 \) 가 되도록 접종한 다음 \( 72 \)시간 배양하고 그 배양액 \( 2 \mathrm { ~mL } \) 를 분취하여 \( 1 \mathrm { ~mL } \)는 \( UV-VIS \) 분광광도계 \( (Libra \) \(S22) \)를 사용하여 균주의 성장을 위의 방법으로 측정하였다. 나머지 배양액 \( 1 \mathrm { ~mL } \)는 원심분리 후 상등액을 분취하여 위에서 언급한 방법대로 \( \mathrm { ALA } \) 의 농도를 측정하였다. 건조체 질량을 측정하기 위해 상등액을 제거한 원심분리 \(tube \)를 위에서 언급한 데로 \(dry \) \(oven \)에서 건조한 후 질량을 측정하여 \( R. \) \( sphaeroides \)의 건조체 질량을 측정하였다. 배양하는 동안 동일한 광도로 \( 850 \mathrm { ~nm } \) 파장의 \( LED \) 빛을 조사하였고 정량적 평가를 위해 \( 3 \)회 반복 실험하여 \( R. \) \( sphaeroides \) 성장력과 \( ALA \) 생산량을 최종 결정하였다.</p>