특정병원체부재 C57BL/6 생쥐(8~12주)를 실험동물로 사용하였고, 세포 배양에 필요한 시약으로는 RPMI-1640, FBS, 항생제 및 DNCB, DNBS, 2ME, OVA, MMC 등을 사용하였다. 생약재인 당귀, 천궁, 백작약 3종에서 생약복합조성물 HemoHIM을 제조하였고, 시료는 복강에 투여하거나 경구투여한 후에 UVA를 조사하여 효과를 관찰하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 (주)대한바이오링크(충청북도 음성군, 대한민국)에서 특정병원체부재(specific pathogen free) C57BL/6를 공급받아 실험동물 사육실에서 사육상자당 5 개체의 밀도를 유지하며 사육하였다. 생쥐는 일정한 온도 \( \left (24 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 에서 물과 사료를 충분히 공급하고, 낮과 밤의 주기를 12 시간씩 조절하면서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하면서, 생후 8~12주 사이의 생쥐를 실험에 사용하였다.</p> <h2>사용시약</h2> <p>세포 배양에 필요한 RPMI-1640, FBS (Fetal Bovine Serum), 항생제(antibiotic-antimycotic)는 Gibco BRL (Grand Island, NY, USA)제품을 사용하였으며, 접촉성과민반응의 유도에 필요한 DNCB (1-Chloro-2, 4-Dinitrobenzene), DNBS (2, 4-Dinitrobenzen-sulfonic acid dihydrate)와 olive oil, 그리고 2ME (2-mecaptoethanol), OVA (ovalbumin), MMC (Mitomycin C), sodium bicarbonate \( \left ( \mathrm { NaHCO } _ { 3 } \right ) \), acetone은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)제품을 사용하였다. 세포의 증식반응을 측정하는데 사용한 Cell titer \( 96 ^ {\mathbb { R } } \) Aqueous One Solution Cell proliferation Assay은 Promega (Madison, WI, USA) 제품을 사용하였고, recombinant mouse GM-CSF와 IL-4는 R \&D제품을 사용하였다.</p> <h2>생약복합조성물( \( \mathrm { HemoHIM } ) \) 및 분획의 제조</h2> <p>생약복합조성물(HemoHIM)은 아래와 같은 방법으로 제조한 시료를 (주)선바이오텍에서 제공받아 사용하였다. 서울 경동 한약재 시장에서 구입한 생약재 3종, 즉 당귀(Danggui, Angelica gigas Nakai)의 뿌리, 천궁(Chuanxiong, Cnidium officinale Makino)의 근경, 백작약(Baishaoyao, Paeonia japonica Miyabe)의 뿌리를 동일한 무게비율로 혼합한 후, 혼합 생약재 \( 100 \mathrm { ~g } \) 당 증류수 \( 1,000 \mathrm { ml } \)을 가하고 4 시간 열탕 추출하였다. 추출물의 고형분을 제거하고 감압농축하여 생약복합물 HIM-I을 얻었다. HIM-I의 일부를 취하여 4 배 부피의 \( 100 \% \) 에탄올 주정을 첨가하고(최종 에탄올 농도 약 \( 80 \%), 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이하에서 16 시간 정치한 후, 원심분리하여 침전된 조다당 분획 (HIM-I-P)과 상층의 에탄올 분획(HIM-I-E)을 수거하였다. 수거한 조다당 분획의 일부를 이에 해당하는 HIM-I에 첨가하여 생약복합조성물 HemoHIM을 제조하였다. 제조한 HemoHIM은 동결건조하여 냉동저장하였으며, 실험 직전에 증류수에 녹여 사용하였다.</p> <h2>시료의 처리</h2> <p>시료는 다음과 같이 두 가지 방법으로 처리하고 그 효과를 관찰하였다. 즉 HemoHIM을 UVB을 조사하기 24 시간 전과 조사 후 30분 이내에 복강으로 \( 1 \mathrm { mg } \) 씩 투여하거나, 먹는 물에 첨가하여 3주 동안 경구투여 (0.5~1 \( \mathrm { mg } /day \) )한 후 UVB를 조사하였다.</p>