POD활성은 Sigma Co.의 방법을 통해 측정하였고 PPO 의 활성은 기질과 조효소 추출액을 혼합하는 과정 후에 UV spectrophotometer를 통해 흡광도의 변화를 측정하였다. 튤립 꽃잎에서 protease 활성은 기질 casein을 사용하여 측정하였고 튤립 꽃잎의 무기성분은 토양화학분석법에 근거하여 P 는 ammonium meta vanadate법, \( \mathrm{Ca}, \mathrm{K}, \mathrm{Mg}, \mathrm{Fe} \), \( \mathrm{Mn}, \mathrm{Zn}, \mathrm{Cu} \) 는 원자흡광분광계(atomic absorption spec-trometer, Perkin Elmer 3,300)를 이용하여 측정 및 분석하였다.
<p>POD활성은 pyrogallol (Sigma Co.)을 기질로 사용하여 Sigma Co.의 방법에 준하여 측정하였다. 0.1M potassium phosphate \( \left(\mathrm{pH}\right. \) 7.0) 160 \( \mu \mathrm{L}, 0.147 \mathrm{M} \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} 80 \mu \mathrm{L}, 5 \% \) pyrogallol \( 160 \mathrm{\mu L} \) 와 증류수 \( 1.05 \mathrm{~mL} \) 을 혼합한 용액에 조효소액을 \( 50 \mu \mathrm{L}(10 \mu \mathrm{L}) \) 를 첨가하고 1 시간 동안 상온에서 방치한 후, 효소에 의한 변화를 UV spectrophotometer를 사용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \) 파장에서 측정하였다.</p> <p>PPO 의 활성은 기질로 사용하는 \( 0.02 \mathrm{M} \) catechol를 함유한 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium citrate buffer (pH 5.0) \( 750 \mu \mathrm{L} \) 를 조효소 추출액 \( 250 \mathrm{\mu L} \) 와 충분히 혼합하여 상온에서 반응시킨 후, UV spectrophotometer를 사용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \) 파장에서 매 10 초 간격으로 30 분간 흡광도의 변화를 측정하였다.</p> <p>튤립 꽃잎의 발달 과정 중에 변화하는 protease 활성은 기질 casein을 사용하여 측정하였다. \( 1.0 \% \) casein, \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.5) 600μL에 조효소액 \( 120 \mathrm{\mu L} \) 을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 반응시켰다. 그 후, \( 5 \% \) trichloroacetic acid 용액 \( 600 \mathrm{\mu L} \) 를 첨가하여 반응을 정지시키고 실온에 30 분간 방치하였다. 이 반응액을 원심분리(4 \( \left.{ }^{\circ} \mathrm{C}, 12000 \mathrm{rpm}, 25 \mathrm{~min}\right) \) 한 후, 상징액 \( 1 \mathrm{~mL} \) 을 취하여 UV spectrophotometer를 사용하여 \( 280 \mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다. 각 효소 1unit는 \( \mathrm{mg}^{-1} \cdot \mathrm{mL}^{-1} \cdot \mathrm{min}^{-1} \) 로 정의하였다.</p> <h2>식물체의 무기성분 분석</h2> <p>식물체 시료는 수돗물, \( 0.2 \% \mathrm{CH}_{3} \mathrm{COOH} \) 용액, 증류수의 순으로 3-4회 가볍게 세척한 후, 열풍건조기에서 완전히 건조(75 \( \left.{ }^{\circ} \mathrm{C}, 10 \mathrm{hour}\right) \) 하여 조제하였다. 분해액( \( \left(\mathrm{HClO}_{4}: \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}: \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4}\right. \) \( =18: 11: 1 \) ) \( 1.5 \mathrm{~mL} \) 이 담긴 \( 100 \mathrm{~mL} \) 삼각플라스크에 분쇄한 꽃잎 시료 \( 1.5 \mathrm{~g} \) 를 첨가한 후, 24 시간 방치하였다. 그 후 열판에 올려놓고 서서히 온도를 올리면서 가열하여 시료를 완전히 분해하였다. 분해한 시료는 냉각 여과한 후, \( 50 \mathrm{~mL} \) 로 정량하여 무기성분을 분석하였다. 튤립 꽃잎의 무기성분 분석은 토양화학 분석법(농촌진훙청, 1988)에 준하여, P 는 ammonium meta vanadate법을 이용하고, \( \mathrm{Ca}, \mathrm{K}, \mathrm{Mg}, \mathrm{Fe} \), \( \mathrm{Mn}, \mathrm{Zn}, \mathrm{Cu} \) 는 원자흡광분광계(atomic absorption spec-trometer, Perkin Elmer 3,300)를 사용하여 측정하였다.</p>