crystal violet 염색 실험으로 24 well plate에 cells/well 농도로 단백질량을 분주하고, incubator에서 2시간을 배양한 후 0.5% 용액을 추가하여 incubator에 1시간을 방치한 후 홉광도를 측정하여 Quinone reductase 활성측정을 하였다. 그 결과, 군소내장의 hexane층 1.44%, methanol층 4.36%, butanol층 2.88% 과 aqueous층 46.87%를 수득하게 되었다.
<p>단백질량은 동일한 set의 well plate에 대한 crystal violet 염색 방법으로 정량하였다. 24 well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well 농도로 분주하고, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 2시간 배양한 후 증류수로 2분간 세척하였다. 각 well에 0.5% SDS (in 50% \( \mathrm { EtOH } ) \) 용액을 \( 1 \mathrm { ml } \)씩 가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에 1시간 방치한 후 \( 610 \mathrm { ~nm } \) 에서 홉광도를 측정하였다.</p> <p>Quinone reductase 활성측정 \( ( \mathrm { nmol } / \mathrm { min } / \mathrm { mg } \) protein \( ) \) 은 다음과 같이 하였다.</p> <p>* Specific quinone reductase \( ( \mathrm { QR } ) \) activity \[ = \frac {\text { absorbance change of } \mathrm { MTT } / \mathrm { min } } {\text { absorbance of crystal violet } } \times 3345 \mathrm { nmol } / \mathrm { mg } \]</p> <h2>통계처리</h2> <p>본 실험에 대한 실험결과는 세 번 실험하여 얻어진 평균치 및 표준편차를 나타내었고, 그룹간의 통계적 차이는 student's t-lest를 이용하여 분석하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>군소내장의 각 용매별 분획물 수율</h2> <p>군소내장은 동결 건조 후 메탄올을 \( 1: 5 \) (W/V)의 비율로 첨가한 후 상온에서 2회 추출하고, 극성과 비극성으로 선별물질을 추출하기 위하여 다시 메탄올과 다이클로로메탄 \( \left ( \mathrm { CH } _ { 2 } \mathrm { Cl } \right ) \)을 1:1로 섞은 용매에 2회 추출하여 군소내장 추출물(AKM) \( 23.62 \) \( \mathrm { g } \)을 얻고, 이 추출물을 분획하여 hexane층(AKMH) \( 1.44 \% \), methanol층(AKMM) \( 4.36 \% \), butanol층(AKMB) \( 2.88 \% \) 및 aqueous층(AKMA) \( 46.87 \% \)를 수득하였으며, 각 시료의 용매별 수득율은 Table 1 과 같다.</p>