카카오 분획물의 lipoxygenase 저해활성 실험 결과, 클로로포름 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 100 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 80%, 90%의 저해율을 나타냈고, 분획물의 농도가 증가할수록 활성도도 증가하였으며 macrophage 세포의 독성을 MTT assay에 의해 확인한 결과 Fig. 7에 나타내었다.
<h2>카카오 분획물의 lipoxygenase 저해활성 확인</h2> <p>카카오 분획물의 lipoxygenase 저해활성 실험을 linolenic acid를 기질로 하여 soybean lipoxygenase에 의한 과산화 반응을 조사한 결과 Fig. 6과 같이 나타났다. 클로로포름 분획물의 경우 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 \( 80 \% \)이상의 저해율을 나타내 었으며, 에틸아세테이트 분획물의 경우 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 \( 90 \% \)이상의 저해활성을 나타내었다. 이는 대조군인 카테킨의 100 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 \( 75 \% \)의 저해율과 비교할 때 클로포름 및 에틸아세테이트 분획물의 활성이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한 분획물의 농도가 증가할수록 활성이 증가하는 경향을 나타내었다. 또한 lipoxygenase를 \( 50 \% \)저해하는 농도 \( \left ( \mathrm { IC } _ { 50 } \right ) \)를 측정한 결과 에틸아세테이트 분획물은 \( 9.1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \), 클로로포름 분획물은 \( 309 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \), 부탄올 분획물은 \( 554.3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \), 물 분획물은 \( 728.8 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)을 나타내어 에틸아세테이트 분획물의 \( \mathrm { IC } _ { 50 } \)값이 가장 낮게 나타났다. 이는 Choi등의 들깨박으로부터 분리된 플라보노이드에서 lipoxygenase의 \( \mathrm { IC } _ { 50 } \)을 측정한 결과 apigenin이 \( 19.14 \pm 0.15 \mu \mathrm { M } \), luteolin이 \( 9.09 \pm 0.08 \mu \mathrm { M } \), quercetin은 \( 12.92 \pm 0.11 \mu \mathrm { M } \), kaempferol이 \( 30.14 \pm 0.21 \)를 나타내어 카카오 에틸아세테이트 분획물의 lipoxygenase 저해능이 우수함을 확인할 수 있었다.</p> <h2>카카오 분획물에 의한 대식세포(RAW 264.7)의 독성 확인</h2> <p>카카오 분획물에 의한 macrophage 세포의 독성을 MTT assay에 의해 확인한 결과 Fig. 7과 같이 나타내었다. 즉 카카오 분획물이 lipopolysaccharide (LPS)로 유도된 nitric oxide의 생성을 감소시킨 것인지, 카카오 분획물의 세포독성으로 인한 cell population의 저하에서 기인하는 것인지를 측정한 결과, 카카오 부탄올 분획물을 제외하고 모두 \( 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)까지 \( 20 \% \)이하의 세포 독성을 나타내었으며, 부탄올 분획물은 vitamin C와 비교 시 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)부터 농도 의존적으로 높은 세포 독성율을 보였고, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 \( 20 \% \)이상의 독성을 나타내어 가장 높은 세포 독성을 나타내었다.</p>