본 연구에서는 반응액을 원심 분리한 후 첨가물을 혼합하고, 흡광도를 UV/Visible spectrophotometer로 측정했다. 총 페놀성 화합물 분석은 Folin-Denis 방법, \( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA의 산화적 스트레스 손상 억제 활성은 Jung과 Surh의 방법으로 측정했다. 실험 결과는 3번 이상 반복하여 얻었으며, SPSS를 이용한 통계분석을 통해 실험의 유의성을 확인했다. 또한, 반응물과 DNA를 혼합하여 반응시킨 후, agarose gel 전기영동을 수행하고 사진을 촬영했다.
<h2>Reducing power</h2> <p>Reducing power는 Oyaizu의 방법을 참고하여 측정하였다. 각 농도별 추출물 \( 100 \mu \mathrm{L} \)에 \( 0.2 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.6) \( 250 \mu \mathrm{L} \)과 1 \( \% \) potassium hexacyanoferrate (III) \( 250 \mu \mathrm{L} \)을 혼합한 후, \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 20 \)분 반응시킨 후 찬물로 냉각하여, trichloroacetic acid \( 250 \mu \mathrm{L} \)를 첨가하였다. 위 반응액을 \( 2000 \mathrm{~g} \)에서 \( 5 \)분간 원심 분리하여 상등액 \( 400 \mu \mathrm{L} \)에 증류수 \( 400 \mu \mathrm{L} \)와 \( 0.10 \% \) ferric chloride \( 16 \mu \mathrm{L} \)를 첨가하여 혼합한 후, UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>총 페놀성 화합물 분석</h2> <p>총 페놀성 화합물 분석은 Folin-Denis의 방법을 참고하여 측정하였다. 건조시료 \( 1 \mathrm{~g} \)에 \( 1 \% \) acetic acid/diethyl ether \( 100 \mathrm{~mL} \) 혼합하여 \(5 \)분간 추출 후 상등엑을 제거하였다. 잔여물과 \( 70 \% \) acetone을 혼합하여 \( 50 \mathrm{~mL} \)를 만든 후 \( 2 \)시간 동안 교반 추줄하였다. 상등액을 filter paper로 걸려낸 후, \( 70 \% \) acetone으로 \( 50 \mathrm{~mL} \)까지 정용하였다. 주줄물 \( 50 \mu \mathrm{L} \)와 증류수 \( 950 \mu \mathrm{L} \), folin \( 500 \mu \mathrm{L} \)를 혼합한 후, \( 20 \% \) sodium carbonate \( 2.5 \mathrm{~mL} \)를 넣어 \( 40 \)분간 실온에서 반응시켰다. 반응물을 흔들지 않고 맑은 액체를 UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Standard는 tannic acid를 사용하였고, 정량 직선방정식을 시용하였다.</p> <h2>\( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA 산화적 스트레스 손상 억제 활성</h2> <p>\( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA 산화적 스트레스 손상 억제 활성은 Jung과 Surh의 방법(Jung and Surh 2001)을 참고하여 측정하였다. Ferric chloride \( \left(\mathrm{FeCl}_{2}\right) \)을 통한 산화적 스트레스는 각 농도별 추출물 \( 40 \mu \mathrm{L} \)와 \( 4.5 \mathrm{mM} \) \(\mathrm{FeCl} \) \( 60 \mu \mathrm{L} \)와 증류수 \( 700 \mu \mathrm{L} \)를 넣은 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 15 \)분 반응하였다. 반응물 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 와 \( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA \( 5 \mu \mathrm{L} \)를 넣고, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 3 \)분간 반응한 후, \( 10 \mathrm{X} \) loading buffer와 혼합한 후 \( 1 \% \) agarose gel로 전기 영동을 실시한 후 UV하에서 사진 촬영하였다. Ferrous sulfate \( \left(\mathrm{FeSO}_{4}\right) \)을 통한 산화적 스트레스는 각 농도별 추출물 \( 40 \mu \mathrm{L} \)와 \( 1.5 \mathrm{mM} \mathrm{~FeSO} \mathrm{F}_{4} \)와 \( 1.5 \mathrm{mM} \) hydrogen peroxide \( \left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \) 를 \( 1: 1 \)로 혼합한 용액을 \( 760 \mu \mathrm{L} \)을 첨가한 뒤 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 15 \)분간 반응하였다. 반응물 \( 20 \mu \mathrm{L} \)와 \( \phi \)X-174 RF I plasmid DNA \( 5 \mu \mathrm{L} \)를 넣고, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 3 \)분간 반응한 후, \( 10 \mathrm{X} \) loading buffer와 혼합한 후 \( 1 \% \) agarose gel로 전기영동을 실시한 후 UV하에서 사진 촬영하였다.</p> <h2>통계학적 분석</h2> <p>모든 실험 결과는 \( 3 \)번 이상 수행하였으며, 통계분석은 SPSS \( 18.0 \) (Statistical Package for the Social Sciences) 을 이용하여 각 실험의 평균과 표준편차를 계산하였고, ANOVA 를 통한 \( p<0.05 \) 수준에서 Duncan 다중검정법(duncan's multiple range test)으로 사후 검정하여 각 실험의 유의성을 검증하였다.</p>