합성된 여러 항경련제의 활성은 MES 또는 PTZ test 중 하나에만 보인다. 동아대학교 화학과의 도움으로 합성된 항경련 화합물을 사용하여 그 작용기전, 항경련 화합물의 구조활성 상관관계를 근거로 PTZ 및 MES 유발 경련의 1 차 항경련 활성검색 및 신경독성 평가를 수행하여 nNOS 단백질 발현에 미치는 효과를 조사하였다. 실험을 위해 male NIH Swiss mouse \(25 \sim 30 \mathrm { ~g } \)에 대조군, PTZ 투여군, PTZ 투여 15분전 tropinone 유도체 전처치군과 대조군, MES test군, MES test 15분전 tropinone 유도체 전처치군으로 분류해 이들에게 경련을 유발 시켜 반응을 살펴보았다.
<p>현재 합성된 여러 항경련제 역시 항경련 동물시험에서 MES 혹은 PTZ test 중 한가지의 test에만 활성을 보인다고 보고되었다. 따라서 실제 임상적용시 일부 경련에만 억제 효과를 보일 뿐 경련의 제 중상을 일반적으로 억제시키기에는 아직 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구는 기존의 항경련제보다 그 적용범위가 넓고 항경련활성이 우수한 신규 항경련성 화합물을 개발하고자 동아대학교 화학과의 도움으로 합성된 항경련 화합물을 사용하였다. 이들의 작용기전 및 항경련 화합물의 구조활성 상관관계를 근거로 하여 이들 활성물질에 대한 PTZ 및 MES 유발 경련의 1 차 항경련 활성검색 및 신경독성 평가로 뇌조직의 neuronal nitric oxide synthase (nNOS) 단백질 발현에 미치는 효과를 조사하였다.</p> <p>본 연구인 항경련 효과의 생체 평가 결과는 신경독성이 적게 나타나며 항경련 효과가 높은 약물을 선별한 후 새로운 유도체 합성에 대한 자료로 제시되어 향후 새로운 항경련 약물의 합성 진행에 대한 방향을 제시하고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>1. 실험동물</h2> <p>실험동물로는 male NIH Swiss mouse \( (25 \sim 30 \mathrm { ~g } ) \) 을 사용하였다. 독립된 케이지에서 사육하며 12 시간씩 주간과 야간을 구분하여 조명을 비추며, 사료와 물은 충분히 공급하였다. 실험동물을 대조군, PTZ 투여군, PTZ 투여 15분전 tropinone 유도체 전처치군과 대조군, MES test군, MES test 15분전 tropinone 유도체 전처치군으로 나누어 경련을 유발시켰다. 각 군의 뇌를 적출하여 해마부와 피질부를 분리하여 nNOS의 변화를 Western blot을 이용하여 비교하였다. 각 군에서 PTZ에 의한 경련은 최초의 myoclonic jerk가 나타내는 시간을 경련시작시간(latent period)으로하고 seizure scale (표 1)에 의한 경련의 정도와 형태를 기록하였다. MES에 의한 경련에서는 경련의 정도와 경련지속시간을 측정하여 항경련 효과를 비교하였다.</p> <h2>2. Tropinone 유도체</h2> <p>합성된 tropinone 유도체들의 화학명칭 및 구조는 표 2와 같다. 약물의 명칭을 간략히 사용하기 위하여 T-1: 2,4-dipyrrolylmethenylnortropinone, T-2: 2,4-diphenylmetheny-Inortropinone, T-3: 2,4-difurfurylmethenylnortropinone, T-4: 2,4-dimethoxyphenylmethenylnortropinone 등으로 약어를 사용하였다. 실험에 사용한 약물들은 동아대학교 화학과에서 합성하였으며 methenylnortropinone에 서로 다른 작용기가 결합되어 있는 형태이다. 항경련효과 실험시 분말 형태의 시약을 제공받아 증류수에 녹여 \( 2.5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 만들어 생쥐의 복강내로 투여하였다.</p> <h2>3. 항경련 효과 검사</h2> <lis>(1)PTZ 경련 검사</lis><p>항경련제의 PTZ에 의한 유발 경련 억제효과는 Swinyard 등의 방법[19]에 따라 진행하였다. 본 연구에서 PTZ를 투여하여 항경련 효과를 관찰한 과정은 그림 1-A와 같다. 실험동물의 복강내 항경련제 투여하고 15 분 후 피하에 PTZ를 \( 80 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 주사하고 30 분간 관찰한다. 5 초 이상 지속되는 clonic spasm이 나타나지 않으면 항경련효과가 있는 것으로 판정한다.</p>