생약재 에탄올 추출물의 항균 활성을 평가하기 위해 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Salmonella typhimurim 등의 그람 음성균과 Bacillus subtilis, Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus 등의 그람 양성균을 사용하였다. 또한, 항진균 활성 평가를 위해 Saccharomyces cerevisiae와 Candida albicans를 사용하였다. 항균활성의 대조군으로는 각각 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { disc } \) 농도의 ampicillin, streptomycin sulfate, miconazole, amphotericin B를 사용하였다. MIC 측정을 위해 전배양한 균액을 O.D. 0.2가 되도록 조정하고, 이를 LB 배지나 SD 배지에 \(0.5\%\)씩 접종하였다. 이후 시료 농도가 \(0,0.04,0.08,0.16,0.31,0.63,1.25,2.50, 5.00 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 되도록 처리한 후 48 시간 배양하여 생육이 나타나지 않는 농도를 육안 판정 및 현미경 검경으로 확인하였다.
<h2>항균 활성 측정</h2> <p>생약재 에탄올 추출물의 항균 활성을 평가하기 위해 그람 음성균으로 Escherichia coli KCTC 1682, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186, Proteus vulgaris KCTC 2433, Salmonella typhimurim KCTC 1926을, 그람 양성균으로는 Bacillus subtilis KCTC 1924, Listeria monocytogenes KACC 10550, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Staphylococcus aureus KCTC 1916를 사용하였다. 먼저 추출물 시료의 항균활성은 disc-diffusion법을 이용하여 평가하 였다. 균액의 제조는 LB 배지(Difco Co., USA)에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 20 \) 시간 배양한 후 멸균 증류수에 현탁하여 O.D. \( (600 \) \( \mathrm { nm } \) ) 0.1로 조정한 후 Nutrient agar (Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish \( (90 \times 15 \mathrm { ~mm } \), 녹십자, 한국 \( ) \) 에 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 도말하였다. 한편, 항진균 활성 평가를 위하여 Saccharomyces cerevisiae IFO 0233 및 병원성 효모 Candida albicans KCTC 7270을 사용하였다. 균액의 제조는 Sabouraud dextrose(SD, Difco Co., USA) 배지를 이용하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 시간 배양한 후, 멸균수로 희석한 균액을 동일 한 방법으로 SD agar 배지에 도말하였다. 이후, 각각의 시료 \( 5 \mu \mathrm { L } \) 를 가한 멸균 disc-paper(지름 \( 6.5 \mathrm { ~mm } \), Whatsman No. 2)를 올리고, 세균의 경우 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 24 \) 시간, 진균의 경우 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 48 시간 배양한 후 생육저지환의 크기를 \( \mathrm { mm } \) 단위로 측정하 여 항균활성을 나타내었다. 항균활성의 대조군으로는 항세 균제 ampicillin 및 streptomycin sulfate, 항진균제 miconazole 및 amphotericin \( \mathrm { B } \) 를 각각 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { disc } \) 농도로 사용하였다. 항균 활성이 우수한 시료들의 경우 각각 시료의 최소생육억제 농도(MIC, minimal inhibitory concentration)와 최소사멸농 도(MBC, minimal bactericidal concentration 또는 minimal fungicidal concentration)를 측정하였다. MIC 측정의 경우, 전배양한 균액을 O.D. \( (600 \mathrm { ~nm } ) 0.2 \) 가 되도록 조정하여 이를 LB 배지 또는 SD 배지에 \( 0.5 \% \) 씩 접종하고, 각각의 시료 농도가 \( 0,0.04,0.08,0.16,0.31,0.63,1.25,2.50 \) 및 \( 5.00 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 되도록 처리한 후 48 시간 배양하여 생육이 나타나지 않는 농도를 육안 판정 및 현미경 검경으로 확인하 여 시료의 MIC 로 결정하였다. MBC 및 MFC 경우에는 각각의 시료 농도로 처리된 세균 및 진균들을 시료가 없는 LB 배지 또는 SD배지에 도말하거나, 액체배양하여 생육이 나타나지 않는 최소의 농도를 설정하였다. 모든 실험은 3회 반복 시행하여 얻어진 결과의 대표값으로 나타내었다.</p>