열처리 온도에 따라 바이러스 제거 효율을 조사한 결과, 36\(^\circ \mathrm{C}\) 처리구에서는 3~4주 후 모든 신초의 중간부와 상단부에서 바이러스가 제거되었고, 38\(^\circ \mathrm{C}\) 처리구에서는 모든 신초의 전 구간에서 바이러스가 검출되었다. 40\(^\circ \mathrm{C}\) 처리구에서는 모든 폿트묘의 신초에서 바이러스가 검출되었고, 36\(^\circ \mathrm{C}\) 처리 후 4주 후 26\(^\circ \mathrm{C}\)로 옮겨 생육한 결과 2주 후 75%, 3주 후 100%의 바이러스 재감염률이 나타났다. 열처리는 바이러스의 복제와 이동을 억제하기때문에 식물 생장을 저해하지 않는 최적의 온도가 필요하다. 경정 접목에 의한 무병묘를 만들기 위해 육묘한 결과 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서의 생존률은 \( 94.2 \% \)이고 \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서의 생존률은 \( 50 \% \)이었는데 이는 갈변 진행때문에 낮게 나타났다.
<h2>열처리를 통한 바이러스 제거 효율</h2> <p>열처리 온도에 따른 바이러스 제거율을 조사하였으며 열처리 과정에서 신장된 신초는 경정부분에 위치한T (상단부)와 신초의 가운데에 위치한 M (중간부), 그리고 주지와 근접한 B (하단부) 3구간으로 구분하여 바이러스 제거율을 조사하였다. \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구는 열처리 3주 및 4 주 후의 모든 신초의 하단부에서 바이러스가 검출되었으나 중간부와 상단부에서는 바이러스가 제거되었다. 반면 \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서는 모든 신초의 전 구간에서 바이러스가 검출되었다(Table 2).</p> <p>높은 열처리 온도는 바이러스의 이동과 복제를 억제하는 데 효율적이지만 식물 생장에도 영향을 미쳐 식물의 생존율과 신초의 분화 및 생장에 대한 저해 요인으로 작용한다(Hu et al. 2015b; Uchanski et al. 2004). 따라서 효율적으로 무병묘를 생산하기 위해서는 바이러스의 복제와 이동을 억제하며 동시에 식물 생장을 저해하지 않는 최적의 온도가 요.구된다. \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리는 열처리에 의해 바이러스의 복제와 이동 제한되어 신장된 신초의 중간부와 상단부는 바이러스에 감염되지 않았으며, 하단부는 신초 생장이 시작되기 전 또는 바이러스 감염 부위와 근접하여 바이러스 로 보인다. \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리는 열처리 스트레스로 인해 낮은 신초 생장률을 보였으며, 열처리 3주부터 4주까지 모든 신초의 전 구간에서 바이러스가 검출되었다. Hu 등(2015b)는 열처리 후 정단부 신초 보다 생장이 활발한 액아에서 발생한 신초의 정단부의 사용이 무병화 효율이 높아짐을 보고하였는데, \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서 신장한 신초는 낮은 생장률에 의해 상단부와 하단부가 근접하여 바이러스가 제거되지 않은 것으로 보인다. \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구는 일부 신초가 발생되었으나 생장이 정지되어 상단부, 중간부, 하단부가 구분되지 않았으며, 모든 폿트묘의 신초에서 바이러스가 검출되었다. 따라서 바이러스에 감염된 조직에 존재하는 바이러스는 열처리에 의해 제거되지 않았으며, 바이러스의 복제와 이동이 제한되며 신초의 생장이 활발한 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리에서 3주 이상 열처리한 신초의 경정 부위는 바이러스가 \( 100 \% \) 제거되었다.</p> <p>열처리에 의해 바이러스가 제거된 조직이 열처리를 제거하였을 경우 바이러스에 재감염 되는 시기를 조사하기 위해 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 온도에서 4 주 열처리 후 \( 26^{\circ} \mathrm{C} \) 로 옮겨 생육한 결과, 2 주 후 신초의 경정부위에서 바이러스 재감염률은 \( 75 \% \) 였으며, 3 주 후 바이러스 재감염률은 \( 100 \% \) 였다.</p> <p>경정 접목에 의한 무병묘를 만들기 위해 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 4 주간 처리된 경정부위를 \( 1 \sim 2 \mathrm{~cm} \) 절취하여 무병대목 MM111에 접목하였으며, 수분손실에 의한 고사를 방지하기 위하여 경정접목 부위를 플라스틱 캡 으로 밀봉한 후 7일 간 육묘하였다. 접목 7일 후 캡을 제거하고 \( 26^{\circ} \mathrm{C} \) 온도에서 2 개월 동안 육묘하여 접목묘의 생존율과 바이러스 제거율을 조사하였다. \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서 평균 \( 94.2 \% \) 생존율을 보였으며, \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서는 열처리 스트레스에 의해 경정 부위의 갈변이 진행되었으며 \( 50 \% \) 생존율을 보였다. Hu 등(2015a)는 열처리 후 신장된 신초의 경정 접목 생존율이 평균 \( 41.2 \% \) 로 보고하였으며, \( \mathrm{Hu} \) 등 (2019)는 경정 접목 생존율이 평균 \( 66.7 \% \) 로 보고하였는데, 경정 접목 생존율의 차이는 경정 부위의 열처리에 의한 피해 정도와 접목 방법 및 접목 부위의 수분 손실에 따른 고사에 의한 차이로 보여진다.</p> <p>경정 접목 2 개월 후 접목묘의 바이러스 제거율을 조사한 결과, \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구의 바이러스 제거율은 평균 \( 19.7 \% \) 였다. 열처리 후 생장한 신초의 경정 부위의 바이러스 제거율은 \( 100 \% \) 였는데, 경정 접목 후 폿트묘에서 바이러스가 검출된 것은 열처리 후 신초의 경정부위에 존재하는 바이러스 농도가 낮아 PCR에 검출되지 않았으며, 경정접목 후 육묘과정에서 바이러스가 증식하여 PCR에 검출된 것으로 보인다. \( 38^{\circ} \mathrm{C} \) 처리구에서는 바이러스가 제거되지 않았는데, 이러한 결과는 접목을 위헤 채취한 경정부위가 바이러스 감염 조직과 근접하여 나타난 결과로 생각된다. 따라서 무병화 효율을 높이기 위해 높이기 위해서는 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 이상의 열처리 온도에서 신초가 생장하는 조건과 \( 1 \mathrm{~cm} \) 보다 작은 크기의 경정을 접목할 수 있는 미세접목 기술이 확립되면 효율적인 무병묘 생산이 가능할 것으로 판단된다.</p> <p>본 연구에서는 ASGV에 감염된 폿트묘를 이용해 열처리 온도와 기간에 따른 바이러스 제거율에 대하여 조사하였으며, 열처리 후 신장된 신초의 경정을 이용한 경정접목을 통해 무병묘를 획득하였다. Lee et al. (2013)은 기외에서 폿트묘 열처리 후 기내에서 경정배양을 통해 무병묘를 생산하였는데, 본 연구의 경정접목을 이용한 무병묘 생산은 무병화 과정을 간략화 하여 무병묘 생산을 가능하게 한다. 하지만 열처리와 항바이러스제치리 또는 초저온동결처리 등과의 복합처리 보다 바이러스 제거율이 떨어진다(Hu et al. \( 2015 \mathrm{~b} \); Zhao et al. 2018). 따라서 더욱 효율적인 무병화 시스템을 개발하기 위헤서는 높은 열처리 온도에서 신초 생장이 가능한 시스템 개발이 수행되어야 할 것이다.</p>