함초 조추출물인 Crude \( S \). herbacea polysaccharide extract(CSP)를 sephadex G-50으로 충전된 칼럼에 주입하여 gel filtration chromatography로 다당체 분흭을 확인하고, CSP를 \( 1 \mathrm{kD} \) membrane을 사용하여 한외 여과하여 S. herbacea polysaccharide I(SP I)과 Ⅱ(SP Ⅱ)를 얻었다. SP I과 SP Ⅱ군은 비장 세포 증식능이 효과적으로 높아지는 것으로 나타났고, 다당체가 B 및 T 세포 증식을 촉진하여 면역능을 증진시키는 것으로 사료된다. 비장 지수는 비장의 무게를 표준으로 측정지표로 여겨 비장의 무게에 대한 체중의 비로 나타내고, 식이 섭취가 생체내에 미치는 영향을 알고자 증식능을 측정하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>함초로부터 조추출물 및 다당체 추출</h2> <p>함초 조추출물인 Crude \( S \). herbacea polysaccharide extract(CSP)를 sephadex G-50으로 충전된 칼럼에 주입하여 gel filtration chromatography로 다당체 분흭을 확인하였으며, 이 분흭은 페놀-황산법으로 총 당량을 측정하여 \( 16 \sim 30 \mathrm{KDa} \)와 \(250\sim 3300\mathrm{Da}\)의 분자량으로 추정되었다. 상기의 분자량을 포함한 다당체 혼합물을 얻기 위하여 CSP를 \( 1 \mathrm{kD} \) membrane을 사용하여 한외 여과시킨 후 \( S \). herbacea polysaccharide I(SP I)을 얻었으며, CSP를 gel filtration chromatography시킨 후 다당체로 추정되는 해당 분획을 수집하여 S. herbacea polysaccharide Ⅱ(SP Ⅱ)를 얻었다. 함초 추출물의 SPI 활성은 선행 연구 결과에서 보고한 바와 같이 항당뇨 및 지질 대사 개선 등의 효과가 있음이 확인된 바 있다.</p> <h2>시료의 첨가가 비장 세포 증식능에 미치는 영향</h2> <p>비장 세포의 증식: 비장(spleen)은 혈액에서 유래되는 항원에 대한 주된 보호 면역 반응 부위로 B 및 T 림프구의 성숙과 항원의 자극에 의한 림프구의 분화가 이루어지는 주요 림프 기관으로 비장 내 림프구의 증식은 면역 시스템에서 매우 중요한 의미를 갖는다. 비장 세포의 증식반응을 알아 보기 위하여, 분리한 비장 세포를 \( 5 \times 10^{5} \mathrm{cells} / \) well로 넣고 시료를 농도별로 첨가하여 24,48 및 72시간 배양하여 증식 정도를 비교한 결과는 Fig. 3과 같다. 함초 추출물을 첨가하여 배양한 경우 추출물을 첨가하지 않은 대조군에 비해 농도 의존적으로 비장 세포의 증식 반응이 나타났다. 함초 추출물에 의한 비장 세포 증식능의 변화를 살펴보면, \( 4 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 농도에서 24시간 배양한 경우 CSP, SP I, SP Ⅱ군 모두 세포 증식능이 205.01,320.62,307.32 수준으로 향상되어 유의적인 수치를 나타내었다. 특히 SP I과 SP Ⅱ군이 CSP군보다 세포 증식능이 효과적이었다. 다당체와 관련하여 Kim 등은 상백피로부터 분리한 다당체의 경우 면역 세포인 B 및 T세포의 중식을 최대 6.7배 촉진시키는 효과가 있음을 보고하였고, Kang 등은 큰느타리버섯 조다당체가 비장 세포 및 B세포 증식을 직접적으로 유도한다고 보고하였다. 이상의 결과와 본 연구의 결과로 판단하면 함초 추출물 중 특히 SP I과 SP Ⅱ가 비장 세포를 자극하여 T 세포와 B 세포 증식을 촉진하여 면역능을 증진시키는 것으로 사료된다.</p> <p>T 세포의 증식: 위 실험에서 함초 추출물이 비장 세포의 증식을 유도하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 이때, 증식하는 비장 세포는 T 세포 또는 B 세포 중 하나일 가능성이 높다. Dutton 등이 보고한 바와 같이 우리 몸의 전체 림프구 중 비장에 분포되어 있는 림프구는 T 세포가 \( 60 \%\), B 세포가 \( 30 \% \) 정도로 T세포의 비율이 높다. 따라서, 비장 세포에서 T 세포만을 따로 분리하여 함초 추출물을 첨가한 후 에 직접적으로 증식 반응을 유도하는지를 알아보았다. Nylon wool을 이용하여, 비장세포 중에서 부착성을 가진 B 세포와 대식 세포를 제거한 다음, 순수한 T세포만을 분리하여 \( 5 \times 10^{5} \)cells/well을 넣고 시료를 농도별로 첨가하여 24, 48 및 72 시간 배양하여 증식 정도를 측정하였다. Fig. 4에 나타난 것과같이, 분리된 T 세포는 함초 추출물을 첨가하여 배양한 경우 추출물을 첨가하지 않은 대조군에 비해 농도의존적으로 세포 증식 반응이 나타났으며, 함초 추출물에 의한 T 세포 증식능의 변화를 살펴보면, \( 4 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \)농도에서 24시간 배양 한 경우 CSP, SP Ⅰ, SP Ⅱ군 모두 세포 중식능이 176.76, 350.39, 330.08 수준으로 향상되어 유의적인 수치를 나타내었다. 특히 SP I과 SP Ⅱ군이 CSP군보다 세포 증식능이 효과적이었다. 적응 면역이는 B 세포에 의해 생성되는 체액성 면역과 T 세포에 의해 매개되는 세포성 면역의 두 유형이 있는데, 함초 추출물 중 특히 SP I과 SP Ⅱ가 T 세포를 자극하여 세포 증식을 촉진시킨 것으로 보아 세포성 면역에 자극효과가 우수함을 확인할 수 있었으나, B 세포와 관련이 있는 체액성 면역과 T 세포와 관련이 있는 세포성 면역 중 어떤 반응을 더 효과적으로 유도하는지에 대해서는 알 수 없었다. 이와 관련하여 보다 구체적인 것은 추후 실험을 수행하여야 할 것으로 사료된다.</p> <h2>시료의 경구투여가 비장 세포 증식능에 미치는 영향</h2> <p>체중 및 장기 무게의 변화: 실험 기간 동안 실험 동물의 체중 증가량을 관찰한 결과는 Fig. 5와 같다. 체중 증가량은 함초 추출물을 공급하지 않은 대조군과 함초 추출물을 공급한 실험군 간에 유의적 차이는 없었으나 실험 기간 동안 실험군의 체중이 계속적으로 증가하는 경향을 보였다. Jo 등의 연구에 의하면 함초 추출액 투여 시 투여량이 증가할 수록 체중 증가율이 감소되어 함초가 체중 증가 억제에 영향을 미친다고 보고한 것과 달리 본 실험 결과에서 체중 증가 경향을 보인 것은 실험군의 식이 조성이 양호하고 실험 마우스의 성장 발육이 활발한 시기 때문으로 사료된다. 이는 함초 첨가 식이군이 정상식이군에 비해 체중 증가량을 보인 Cho 등의 보고와 유사하다. 그리고 각 실험군의 장기 중량을 관찰할 결과는 Table 1과 같다. 즉, 간장 중량, 신장 중량 및 흉선 중량은 각 군간에 다소 차이는 있으나 유의성있는 변화는 관찰되지 않았으며, 비장 중량은 대조군\( (0.077 \pm 0.006)\), CSP군\( (0.097\pm 0.021) \), SP I군\( (0.095\pm 0.021) \), SP Ⅱ군\( (0.080\pm 0.014) \)으로 나타나 정상 대조군에 비해 함초 추출물 투여군이 다소 증가 경향은 보였으나 유의적 차이는 없었다.</p> <p>비장 무게: 비장 지수(spleen weight index)는 비장의 무게를 표준으로 환산하여 측정지표로 삼는 것으로 비장의 무게에 대한 체중의 비로 나타낸다. 세포 매개성 면역반응인 GVH반응(graft-versus-host reaction)에서는 비장의 비정상적인 증대가 양성 반응의 지표로 활용되므로 spleen index가 1.3 이상일 때 양성 반응으로 결정하기도 하고, 각 실험군마다 spleen weight index를 구하여 대조군의 값과 비교하여 이상 유무를 판단하기도 한다. 본 연구에서 측정한 대조군과 실험군의 spleen weight index 및 spleen index는 Table 2와 같다.</p> <p>비장 세포 증식능 측정: 식이 섭취가 생체 내에 미치는 영향을 알아보기 위한 방법으로 장기 또는 혈액을 채취하여 시 험관 내 실험을 하는 연구가 다양하게 진행되고 있다. 이 중 비장 세포는 혈액에서 유래된 항원에 대한 면역 반응이 개시되고 발전되는 부위로서 말초 림프 기관에 속하며,</p>