본문에서는 protease 활성을 측정하는 방법에 대해 설명하고 있다. Folin & Ciocalteu 방법을 이용하여 반응물을 분석하였으며, 이 과정에서 반응물을 이용해 여러 물질과 혼합 후 흡광도를 측정하여 효소의 활성을 산출하였다. 이때, Protease 활성 1 unit은 1분동안 1μg의 tyrosine을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. 또한 균주 FBL-1의 표현형질에 대한 동정을 위해 Biolog test와 API 50CHB test를 수행하였으며, 그 결과는 Table 1과 Table 2에 나타내었다.
<p>반응물은 Folin \& Ciocalteu 방법을 이용하여 protease 활성을 분석하였다. 반응물 \( 500 \mu \mathrm { l } \) 를 \( 500 \mathrm { mM } \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } 25 \mathrm { ml } \)와 충분히 혼합한 후, Folin \& Ciocalteu's Phenol Reagent (Sigma Aldrich Co.)를 \( 20 \% \) 로 희석한 용액 \( 500 \mu \mathrm { l } \) 를 넣고 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 반응시켜 \( 660 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정한 흡광도를 U/ \( \mathrm { ml } \) 로 산출하였다 \( [3,5] \). Protease 활성 1 unit은 반응시간 1분 동안 \( 1 \mu \mathrm { g } \) 의 tyrosine을 생성하는 효소의 양으로 정의 하였다.</p> <h2>통계 처리</h2> <p>모든 실험은 3회 반복으로 수행하여 평균값과 표준편자로 나타내었고, 유의성은 SPSS \( 23.0 \) software (SPSS Inc., IL, USA)를 이용하여 유의수준 \( p<0.05 \) 에서 분산분석을 통하여 검증하였으며, Duncan's multiple range test를 통하여 차이를 확인하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>형태학적, 배양학적 및 생리학적 특성</h2> <p>경상북도 경산시에 위치한 영남대학교 내 토양에 서식하는 protease 생산 미생물 한 종을 선발하여 FBL-1으로 명명하여 실험을 진행하였다. 균주 FBL-1은 skim milk를 포함한 TSB 고체배지에서 하얀색을 띄며 약간 울퉁불퉁한 표면을 갖는 colony를 형성하였고(Fig. 1A), 평판고체배지 상에서 투명환을 크게 생성하여 강한 단백질 분해활성을 나타냈다. 주사전자현미경(SEM)으로 관찰한 결과, FBL-1 균주는 긴 막대 모양의 단일 세포이며 약 \( 3 \mu \mathrm { m } \) 길이의 간균 형태를 나타냈다(Fig. 1B).</p> <p>균주 FBL-1의 표현형질에 대한 1 차적인 동정을 위하여 Biolog test와 API 50CHB test를 수행하였으며 그 결과를 각각 Table 1과 Table 2 에 나타냈다. Biolog test를 사용한 생리학적 특성 분석 결과, dextrin, inulin, \( N \)-acetyl-D-glucosamine, D-fructose, \( \alpha \)-D-glucose, maltotriose, D-mannose, \( \beta \)-methyl-D-glucoside, palatinose, D-psicose, D-ribose, sucrose, D-trehalose, L-malic acid, pyruvic acid, L-alanyl-glycine, L-glutamic acid, L-pyroglutamic acid, inosine, thymidine, uridine, thymidine-5'-mono phosphate에 대한 assimilation 반응에서 양성으로 관찰되었다. API \( 50 \mathrm { CHB } \) kit를 사용한 생리학적 특성 분석 결과, Table 2 에서 보는 바와 같이 FBL-1 균주는 glycerol, L-arabinose, ribose, galactose, glucose, fructose, inositol, mannitol, sorbitol, \( \alpha \)-methyl-D-glucoside, N-acetyl-glucosamine, maltose, melibiose, sucrose, trehalose, inulin, raffinose,</p>