H. pylari에 대한 추출물들의 항균활성은 disc agar dif-fusion method를 이용해 확인하였으며, 각 추출물에 존재하는 phenolic compound의 profile에 따라 H. pylori의 저해 양상이 다를 것으로 판단하였다. 청목노상 뽕잎에서는 조직배양기술을 이용해 callus를 제조하여 유용물질을 분리하고 이를 산업화에 활용하는 것이 H. pylori 저해제 개발에 유리하다고 결론짓고, 이를 위해 H. pylori 억제물질 생산을 극대화할 수 있는 callus의 배양 최적조건을 규명하는 것이 중요하다고 주장하였다.
<h2>뽕잎 및 뽕잎 callus 추출물의 Helicobacter pylori 항균 활성 검색</h2> <p>H. pylari에 대한 추출물들의 항균활성 검색은 disc agar dif-fusion method로 실시하였다. Disc agar diffusion 법은 H. pylori 최적배지 plate에 H. pylori균 \( 100 \mu I \)를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말한 다음, 멸균된 disc paper \( ( \phi 8 \mathrm { ~mm } ) \)를 올리고 \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) membrane filter로 제균한 각 추출물을 vacuum evaporator로 농축한 후 멸균수로 희석하여 뽕잎과 뽕잎 cal-lus 추출물속에 phenolic compound 함량이 \( 50 \sim 200 \mu \mathrm { g } / 100 \) \( \mu \mathrm { l } \) 가 되도록 조절한 후 각 추출물 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 를 disc paper에 흡수시키고, 대조구로는 멸균수를 흡수시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 미 호기성 조건에서 48 시간 동안 incubation한 다음, disc 주위의 clear zone 생성 유무를 확인하였다.</p> <h2>Phenolic content 정량</h2> <p>Phenolic content의 정량은 시료 \( 1 \mathrm { ml } \)에 \( 95 \% \)ethanol \( 1 \mathrm { ml } \)와 증류수 \( 5 \mathrm { ml } \) 를 첨가하고 1 N Folin-ciocalteu reagent \(0.5 \mathrm { ml } \)를 넣어 잘 섞어주고, 5분간 방치한 후, \( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } 1 \mathrm { ml } \)를 가한 후, 흡광도 \( 725 \mathrm { ~nm } \)에서 1 시간 이내에 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로부터 양을 환산하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>청목노상 뽕잎과 callus 추출물에 존재하는 항균 phenolic compounds profile의 비교</h2> <p>뽕잎 속에 존재하는 phenolic compound를 만성 위, 십이지장 질병과 관련이 있는 것으로 알려진 H. pylori에 대한 저해제로 활용하기 위한 연구의 일환으로, 청목노상 뽕잎 추출물과 청목노상 뽕잎 callus 추출물의 H. pylori에 대한 저해양상을 비교한 결과에서와 같이 청목노상 뽕잎이 나타내는 clear zone \( 15 \mathrm { ~mm } \)의 H. pylori에 대한 항균력보다 청목노상 뽕잎의 callus 추출물에 의한 항균력이 \( 18 \mathrm { ~mm } \)의 clear zone으로 훨씬 우수한 것을 알 수 있었다. 이는 Cho 등이 청목노상 뽕잎추출물에서 H. pylori에 대한 저해제로 caffeic acid, ros-marinic acid 및 chlorogenic acid의 혼합물에 의한 저해양상이 나타난다고 보고한 것과 Yoon 등이 뽕잎에서는 발견되지 않은 물질이지만 청목노상 뽕잎의 callus에 다량으로 존재하는 것으로 밝혀진 protocatecuic acid가 항균역할을 수행하는 것으로 보고한 것을 미루어 짐작하면 각 추출물속에 존재하는 phenolic compound의 profile에 의하여 H. pylori의 저해 양상은 달라질 것이라 판단되었다. 본 연구에서 동량의 phenolic content를 함유하는 뽕잎과 뽕잎 callus 추출물의 phenolic compound profile의 HPLC 분석결과 Fig.2 에서와 같이 뽕잎 callus의 경우 H. pylori 억제 양상에 중요한 역할을 수행하는 것으로 보고된 caffeic acid의 함량은 뽕잎과 뽕잎 callus의 두 추출물에서 비슷하게 측정되었으나, 뽕잎 callus에서 chlorogenic acid의 함량이 약간 감소한 반면에 protocatecuic acid가 다량으로 존재하여 H. pylori의 저해 양상을 나타내는 caffeic acid, rosmarinic acid 및 chlorogenic acid 등의 phenolic compound들과의 synergy effect에 의해서 저해효과가 향상되는 것으로 추측하였다. 따라서 청목노상 뽕잎의 경우 H. pylori에 대한 저해제로 개발하기 위해서는 뽕잎 그 자체에서 유용물질을 분리하기 보다는 조직배양기술을 이용하여 callus 를 제조한 후 유용물질을 분리하여 산업화에 적용하는 것이 더 유리할 것으로 판단하였으며, H. pylori 저해효과를 가지는 callus의 배양 최적조건을 규명하여 H. pylori 억제물질의 생산을 최대화 하는 것이 산업적으로 유리할 것으로 판단되었다.</p>