실험에 사용된 육계는 전라북도 전주시 약재시장에서 구입해서 시료제조에 사용하였고, 시호는 본초원(영천시, 경상남도, 대한민국)에서 공급받아 사용하였다. 생후 \(8\)주령의 체중 \(25\mathrm{g}\) 내외의 수컷 \(\mathrm{Balb}/\mathrm{C}\) mice (오리엔트, 경기도, 대한민국)를 구입하였으며, 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 \(22\pm2{}^ {\circ}\mathrm{C}\), 습도 \(50\pm 5\%\), 명암주기는 \(12\)시간 주기로 조절하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>실험에 사용된 육계(Cinnamomi Cortex)는 전라북도 전주시 약재시장에서 구입하여 시료제조에 사용하였고, 시호(Bupleuri radix)는 본초원(영천시, 경상남도, 대한민국)에서 공급받아 사용하였다.</p> <h2>시약</h2> <p>TNBS Solution (2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid \( 5 \% \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \)과 단백질 정량을 위한 \( \mathrm { BCA } \) protein assay kit는 Thermo Scientific (Rockford, IL, USA)에서 구입하였고, sulfasalazine (purity \( \geq 98 \% \), phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)는 Sigma-Aldrich (St, Louis, MO, USA)에서 구입하였다. Nitrocellulose membranes는 Amersham GE Healthcare (Little. Chalfont, UK)에서 구입하였으며, tumor necrosis factor alpha (TNF- \( \alpha \) ), interleukin- \( 6 \) (IL- \( 6 \), interleukin- \( \beta \) (IL-1 - \( \beta \)), monocyte chemoattractant peptide \( 1 \) (MCP- \( 1 \)), bax, cytochrome \( \mathrm { C } \), cysteine aspartyl-specific proteases- \( 3 \) (caspase- \( 3 \)), \( \beta \)-actin과 \( 2 \)차 항체인 rabbit anti-goat, goat anti-rabbit, goat anti-mouse \( 2 \)는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, Dallas, CA, USA)로부터 구입하였으며, dimethylsulfoxide, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka. Japan)에서 구입하였다. 또한, \( 2',7' \)-Dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)와 dihydrorhodamine \( 123 \)은 Molecular Probes (Eugene, OR, USA)에서 ECL Western Blotting Detection Reagents는 GE Healthcare로부터 구입하여 사용하였다.</p> <h2>실험 동물</h2> <p>생후 \( 8 \) 주령의 체중 \( 25 \mathrm { ~g } \) 내외의 수컷 \( \mathrm { Balb } / \mathrm { C } \) mice (오리엔트, 경기도, 대한민국)를 구입하였으며, 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 \( 22 \pm 2 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \), 습도 \( 50 \pm 5 \% \), 명암주기 (light-dark cycle)는 \( 12 \)시간 주기로 조절하였다. 사료는 고형사료(조단백질 \( 22.1 \% \) 이상, 조지방 \( 8.0 \% \) 이하, 조섬유 \( 5.0 \% \) 이하, 조회분 \( 8.0 \% \) 이하, 칼슘 \( 0.6 \% \) 이상, 인 \( 0.4 \% \) 이상, 삼양사, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하였다. 모든 실험은 대구한의대학교 동물실험 윤리위원회의 승인(DHU2017-053)을 얻어 시행하였으며 동물관리 규정을 준수하였다.</p>