구입한 현미는 분쇄 후 메쉬 표준체를 통과시켜 냉동고에 보관하며, 분말 상태인 현미로 현미 열수 추출물을 만들어 동결 건조한 후 시료로 사용한다. Gray와 Dugan의 방법을 변형하여 아질산염 소거능을, MBT 환원법으로 Xanthine oxidase 저해 효과를, Xue의 방법으로 전분의 소화율을 측정했다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료</h2><p>본 실험에 사용된 현미는 시중에서 구입하였으며 분말 제조시 열변성(탈습, 전분호화, 단백질 변성 등)을 방지하기 위하여 dry ice를 첨가한 고속 mill-type grinder (IKA-Labortechnik,Type A 10, JANKE & KUNKEL GMBH & Co. KG)로 분쇄한후 90 메쉬 표준체(Chung Gye Industrial Mfg. Co., Korea)를통과시켜 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동고에 보관하며 사용하였다.</p><p>열수 추출물은 분말상태의 현미 \( 50 \mathrm{~g} \)에 증류수 \( 500 \mathrm{ml} \)를 가하여 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 동안 추출하였고, 에탄올 추출물은 현미 각각 \( 50 \mathrm{~g} \)에 \( 80 \% \) 에탄올 \( 500 \mathrm{ml} \)를 넣고 상온에서 24시간동안 추출하였다. 추출물은 Whatman No. 2 filter paper로 여과하고, rotary evaporator (EYELA N-1000, Rikakikai CO LTD., Tokyo, Japan)를 사용하여 \( 37 \mathrm{C} \)에서 농축한 후 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 동결 건조한 후 시료로 사용하였다.</p><h2>아질산염 소거능 측정</h2><p>시료의 아질산염 소거능은 Gray와 Dugan의 방법을 변형하여 측정하였다. 아질산염 용액에 시료 용액을 가하고 여기에 0.1 N HCl (pH 1.2) 및 0.2 M 구연산 완충용액(pH 3.0과 6.0)을 사용하여 반응 용액의 pH를 각각 1.2, 3.0 및 6.0으로 조정하여 반응용액을 준비하였다. 반응물용액은 \( 37 \mathrm{C} \)에서 1시간 동안 반응시킨 후, \( 520 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 잔존하는 아질산염을 구하였다. Blank 시험은 Griess 시약 대신 증류수를 가하여 시료와 동일하게 반응시켰으며 아질산염 소거능은 다음 식에 의해 계산하였다.</p><p>아질산염 소거능\( (\%) \)=[1-(A-C)/B]×100</p><h2>Xanthine oxidase 저해효과 측정</h2><p>Xanthine oxidase 저해활성은 MBT환원법에 따라 다음과 같이 측정하였다. 반응은 \( 50 \mathrm{mM} \) phosphate buffer (pH 7.5)에 xanthine \( 2 \mathrm{mM} \)을 녹인 기질 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 및 효소 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)와 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)를 첨가하였으며, 대조구는 \( 50 \mathrm{mM} \) phosphatebuffer (pH 7.5)에 xanthine \( 2 \mathrm{mM} \)을 녹인 기질 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 및 효소 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)와 증류수를 \( 1 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5분간 반응시킨 후 \( 20 \% \) trichloroacetic acid \( 1 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 반응을 종료시켰다. 그 다음 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심 분리하여 단백질을 제거하고 반응 용액 중에 생성된 uric acid를 \( 292 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며. 효소의 저해효과는 백분율로 나타내었다.</p><h2>전분의 소화율 측정</h2><p>전분의 소화율은 Xue의 방법에 따라 건조시료 \( 50 \mathrm{mg} \)을 \( 0.2 \mathrm{M} \) phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 6.9) 2.0 \mathrm{ml} \)에 녹여 시료 현탁액을 만든 뒤, 여기에 pancreatic amylase (Sigma, 90 units \( / \mathrm{mg} \) ) 20 \( \mathrm{mg} \) 을 \( 0.2 \mathrm{M} \) phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 6.9) 50 \mathrm{ml} \) 에 녹여 만든 amylase buffer \( 0.5 \mathrm{ml} \)을 첨가하였다. Amylase를 첨가한 시료 buffer액을 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2시간 배양한 후 3-5 dinitrosalicylic acidreagent \( 4 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 5분간 가열한 다음 냉각하여 증류수로 \( 25 \mathrm{ml} \) 정량한 뒤 여과하여 \( 550 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며, blank는 시료가 없는 buffer액으로 대체하였다. Maltose(JUNSEI, Japan)를 standard로 한 표준곡선을 그린 후 이를 사용하여 시료 \( 50 \mathrm{mg} \)에서 분해되어 나온 maltose의 양(mg)을계산하였다.</p>