추출물들의 흡광도와 검량선을 비교하여 폴라보노이드의 총량을 구하였다.메탄올에 녹인 각각의 시료들을 농도별 희석액과 메탄올에 녹인 DPPH용액을 가하여 실온 방치 후 측정한 흡광도로 DPPH radical에 대한 각 시료의 환원력을 측정하였다.Student's t-test로 실험결과에 대한 통계를 처리하였으며 그 후의 p 값이 0.01미만일 경우에 유의성이 있다고 보았다.
<h2>총 플라보노이드 함량</h2> <p>총 플라보노이드 함량은 Moreo 등의 방법에 의해 측정하였다. 각 시료 추출물 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 와 \( 80 \% \) ethanol \( 0.9 \mathrm { ml } \) 을 혼합한 혼합물 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 \( 10 \% \) aluminium nitrate와 1M potassium acetate \( 0.1 \mathrm { ml } \) 그리고 \( 80 \% \) ethanol \( 4.3 \mathrm { ml } \) 을 가하여 실온에 40 분 방치한 뒤 \( 415 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 각 추출물의 흡광도를 표준물질로 사용한 quercetin 검량선과 비교하여 총 플라보노이드의 함량을 구하였다. Quercetin을 이용한 표 준곡선은 5,10,25,50,75 \( \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \)가 되도록 하여 위와 같은 방법으로 \( 415 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.</p> <h2>a-a-diphenyl-3-picrylhydrazyl (DPPH) radical 소거활성</h2> <p>DPPH radical에 대한 각 시료의 환원력을 측정하기 위해<p>\( 99 \% \) 메탄올에 각 시료를 녹여 농도별로 희석한 희석액 800 \( \mu 1 \)와 메탄올에 녹인 \( 0.15 \mathrm { mM } \) DPPH용액 200 \( \mu 1 \)를 가하여 실온에 30분 방치한 후 \( 517 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료 추출물의 유리 라디칼 소거활성은 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도를 \( 1 / 2 \) 로 환원시키는데 필요한 시료의 농도인 \( \mathrm { RC } _ { 50 } \) 값으로 나타내었다. 이때 활성비교를 위하여 ascorbic acid를 사용하였으며 시료농도의 \( 1 / 10 \) 이 되도록 첨가하여 같은 방법으로 항산화 효과를 측정하였다.</p> <h2>통계학적 분석</h2> <p>대조군과 추출물 처리군의 실험결과에 대한 통계처리는 Student's t-test로 비교하였다. 통계처리 후 \( p \) 값이 0.01미만일 경우 \( (p<0.01) \) 통계적인 유의성이 있다고 판정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>가자, 라벤더, 강향이 nitric oxide 생성능에 미치는 영향</h2> <p>활성산소종(reactive nitrogen species)의 하나이며, 최근 염증반응의 중요한 작용인자로 알려진 nitric oxide (NO) 저해에 대한 24 종 천연물 추출물의 효과를 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서 검색해 본 결과, Table 2 와 같이 나타났다. LPS에 의해 RAW \( 264.7 \) cell로부터 생성되는 NO는 약 \(40-50 \mu \mathrm { M } \)이었다. 다른 추출물에 비해, No. 3(가자), 12(라벤더), 24(강향)에서 우수한 효과를 나타냈다. 하지만 강향의 세포 생존율이 \( 52.67 \) \( \pm 5.66 \% \) 인 것으로 나타나 세포독성으로 인한 NO 저해로 보여지므로 농도를 낮춰 다음 실험을 진행하였다. 가자, 라벤더, 강향의 농도별 NO생성을 측정 결과는 Fig. 1에 나타내었다. 최고농도인 50, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 가자와 라벤더는 LPS대조구에 비해 NO 생성량이 20-30 \( \% \)로 감소하였으며(Fig. 1A, 1B), 강향은 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 NO 생성능이 약 \( 30 \% \) 로 다른 시료에 비해 낮은 농도에서 높은 NO 저해활성을 나타내었다(Fig. 1C). 또한, 이들 모든 농도에서 \(95 \% \) 이상의 세포 생존율을 보여 추출물의 항염증 효과는 세포 생존율의 감소와는 관계없음을 보여준다.</p>