무균발아로 얻은 석곡 식물체의 줄기를 \( 0.5 \mathrm{cm} \)로 잘라 MS 기본배지에 각종 첨가제를 넣은 3가지 배지에 배양했다. 배지에서 증식한 석곡 줄기를 약 \( 0.5 \mathrm{cm} \) 정도로 잘라 무균적으로 바이오리액터로 옮겨 MS기본배지 (1배)의 농도를 1/2, 1/3, 1/4배로 줄인 MS액체배지에서 배양하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>석곡종자의 무균 발아</h2> <p>수분 후 150 여일 된 석곡 종자 꼬투리를 \( 70 \% \)알콜에 30 분간 소독한 후 sodium hypochlorite로 15 분간 침지 소독하였다. 살균액 제거와 종자 흡수를 돕기 위하여 멸균수로 3~4차례 수세하고 1시간 동안 침지한 후 배지가 \( 200 \mathrm{mL} \)씩 분주된 \( 500 \mathrm{mL} \) 플라스크에서 파종하였다. 파종용 배지는 Hyponex 배지에 \( 2 \mathrm{g} / \mathrm{L} \) peptone (Duchefa사)과 시중에서 판매되는 것으로 고온 살균에 의해 제조한 바바나액 \( 30 \mathrm{g} / \mathrm{L} \), 감자액 \( 20 \mathrm{g} / \mathrm{L} \), 사과액 \( 10 \mathrm{g} / \mathrm{L} \) 를 첨가하고 배지 고형제로 \( 0.8 \% \) agar를 첨가한 후 \( \mathrm{pH} \) 는 5.8으로 조정하였다. 종자 발아기간 중에는 간접 형광등하 \((300\sim 400 \mathrm{Lux}) \) 에서 \( 23 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 를 유지하였고, 종자 발아 후에는 \(2,000 \mathrm{Lux}\) 16시간 일장으로 명배양을 실시하였다.</p> <h2>석곡 유식물체 절편의 고체배지에서 배양</h2> <p>기내에서 무균발아에 의해 얻어진 석곡 식물체의 줄기 (약 \( 3 \mathrm{cm} \) 크기)를 \( 0.5 \mathrm{cm} \) 정도로 절단하여 MS 기본배지(Murashige and Skoog 1962)에 \( 2 \mathrm{g} / \mathrm{L} \) pepton과 \( 25 \mathrm{g} / \mathrm{L} \) sucrose, \( 0.4 \% \) gerlite 첨가된 배지와 생장조절제 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\) NAA와 BA 첨가한 배지, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\) BA를 첨가된 배지에 배양하였다. 난의 특성을 고려하여 배양시 접종체를 1개, 2개, 3개 이상 군락으로 양을 달리하여 접종하였고 배양 8주후 난 과 식물의 분열조직인 원시구경 (또는 원괴체, protocorm)의 형성율을 조사하였다. 온도는 \( 23 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 를 유지하였고 \(2,000 \mathrm{Lux}\) 16시간 일장으로 명배양을 실시하였다.</p> <h2>석곡 절편체 바이오리액터 배양기의 액체배지에서 배양</h2> <p>한천배지에서 증식시킨 석곡 줄기를 약 \( 0.5 \mathrm{cm} \) 정도로 잘라 무균적으로 바이오리액터에 옮겨 생장조절물질이 첨가되지 않은 MS기본배지 (1배)의 농도를 1/2배, 1/3배, 1/4배로 줄인 MS액체배지 조건에서 배양하였다. 유리 바이오리액터 안으로 공기의 주입은 수족관용 에어펌프 (LP-60 air-pump) 를 사용하여 용기 밑에서 계속해서 뿜어지도록 장치하고 무균 공기의 주입을 위해 구멍크기 \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) 필터 (Midisart 2000, Sartorius사, 독일)를 통과하도록 하였다. 배양환경은 \( 23 \pm 1{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 의 온도와 자연광이 드는 밝은 장소 또는 형광등 빛으로 \(2,000 \mathrm{Lux}\) 정도의 밝기로 하였다.</p>