비염색 방법 및 그람 염색에서 분리된 HJ 47은 그람 음성균의 특성을 나타냈으며 곧은 간균의 형태를 가졌으며 그 중 몇 가지 생화학적 특성은 표 1과 같이 나타낼 수 있으며 생체고분자인 chitin도 분해하는 특성을 가진다. PCR 로 증폭 생산된 \( 1,507 \mathrm{~bp} \)의 16S rRNA gene으로부터 \( 833 \mathrm{~bp} \)의 염기서열을 결정하여 염기서열분석을 시도하면서 HJ 47의 동정과 계통적 유연관계를 알아보았다. 최적온도 이후에 약 \( 60 \% \)의 활성을 적절히 유지한 이후에 단백질의 변성으로 급격히 불활성화 되어지는 것을 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 실험을 통하여 관찰할 수 있었다.
<h2>분리균주의 형태 및 생리생화학적 특성</h2> <p>분리된 HJ 47은 그람 염색 및 비염색 방법 모두에서 그람 음성균의 특성을 나타냈으며(데이터 미제시) 곧은 간균의 형태를 가졌다. MBSA 배지 상의 콜로니는 베이지색으로 특이한 색소를 함유하지 않았고, \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5 일간 배양한 경우 직경이 \( 4 \sim 5 \mathrm{~mm} \)에 다다랐다. 몇 가지 생화학적 특성은 표 1과 같았으며 skim milk외 생체고분자인 chitin도 분해하는 특성을 보여주었다.</p> <h2>16S rRNA gene의 염기서열 분석 및 계통적 유연관계</h2> <p>분리된 균주 HJ 47의 동정과 계통적 유연관계를 알아보기 위하여 PCR 로 증폭 생산된 \( 1,507 \mathrm{~bp} \)의 16S rRNA gene으로부터 \( 833 \mathrm{~bp} \)의 염기서열을 결정하여 염기서열분석을 시도하였다. 먼저 National Center for Biotechnology Information (NCBI)의 Blastn 검색을 통해 유사도를 조사한 결과 분리균인 JH 47은 Pseudoalteromona ganghwensis와 \(100\%\) 일치하였으나 이 종의 특성에 관한 보고는 찾을 수 없었다. Pseudoalteromonas sp.은 해양미생물로 상기의 생리생화학적 결과와 같은 특성을 가지고 있으며, 인간에 대한 병원성에 대한 보고가 없으며 생육을 위해 해수를 필요로 하는 특성을 가지고 있다. 상기의 형태 및 생리생화학적 결과와 16S rRNA gene의 염기서열로 미루어 HJ 47은 Pseudoalteromonas sp.의 한 종으로 생각되었다. 결정된 염기서열과 Pseudoalteromonas sp.의 type strain들과의 유연관계를 조사한 결과 Pseudoalteromonas sp. JH 47은 Pseudoalteromonas prydyzensis와 가장 가까웠고, P. mariniglutinosa와 같이 계통학적인 클랜을 형성하였다.</p> <h2>효소활성에 대한 온도와 \( \mathrm{pH} \)의 영향</h2> <p>분리된 Pseudoalteromonas sp. HJ 47은 Fig. 1에서와 같이 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양 했을 때 최적의 활성을 보여 주어 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30 시간 배양한 조효소액을 사용하여 효소의 최적온도와 \( \mathrm{pH} \)를 조사하였다. 반응온도에 대한 효소의 활성은 \( 10^{\circ} \mathrm{C} \)부터 온도와 비례적으로 증가하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 최적의 활성인 약 \( 400 \mathrm{~unit} / \mathrm{ml}\)의 활성을 나타내었다. 최적온도 이후 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)까지 약 \( 60 \% \)의 활성을 유지하다가 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서는 단백질의 변성으로 급격히 불활성화 되는 것을 알 수 있었다.</p> <p>Pseudoalteromonas sp. HJ 47 유래 조효소액의 효소활성에 미치는 \( \mathrm{pH} \)의 영향을 검토하기 위하여 세 가지 완충용액에 기질을 녹여 \( \mathrm{pH} \)를 5에서 9까지 변화시켜 조효소 용액과 반응시켰다. \( \mathrm{pH} ~6\)에서 9까지 비교적 좁은 \( \mathrm{pH} \) 범위에서 높은 효소활성을 나타내었으며 이 효소의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 8로 나타나 중성 단백질분해효소의 특성을 보였다. 이와 같은 특성은 Yersinia ruckeri에서 보고된 체외단백질분해효소의 최적온도 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), 최적 \( \mathrm{pH} ~8\)과 유사한 특성을 보여주었고 Pseudoalteromonas sp.에서 보고된 최적온도 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), 최적 \( \mathrm{pH} ~8.8\)과는 다소 상이하였다.</p> <p>연구보고에 의하면 해양세균이 진핵의 단세포 조류(algae)와 상호작용하며 경우에 따라 조류를 죽이는 살조제(algicide)의 특성을 나타낸다고 한다. 본 연구에서 분리된 균주와 같은 Pseudoalteromonas sp.의 경우에도 살조제의 특성을 보이는 연구보고가 있으며 그 원인이 체외단백질분해효소와 연관이 있다는 보고가 있다. 분리된 Pseudoalteromonas sp. HJ 47도 현재 해양 오염을 심각하게 야기하고 있는 녹조 혹은 적조현상(harmful algal blooms)의 생물학적 방제 수단으로의 사용 가능성에 대해 앞으로 연구가 필요하다고 생각된다.</p>