간 조직 중 GSH 함량은 Tietze 방법으로 \( 0.1 \ {~g}\)의 간 조직에 sulfosalicylicacid \( 2 \ { ml } \) 를 첨가하여 마쇄하고 원심 분리한 후 상징액을 사용하였고, 과산화지질함량은 Buege와 Aust의 방법을 변형하여 protein assay Kit를 써서 비색 정량하여 측정하고, 과산화지질 함량은 TBA법을 써서 MDA함량으로 정량하였다.
<h2>간 조직 중 GSH 함량 측정</h2> <p>간 조직 중 GSH 함량은 Tietze의 방법을 변형하여 측정하였는데 간 조직 \( 0.1 \mathrm { ~g } \) 과 10 배 \( ( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) 의 \( 5 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) sulfosalicylicacid \( 2 \mathrm { ml } \) 를 첨가하여 마쇄한 다음 \( 10,000 \times \mathrm { g } \) 에서 10 분간 원심 분리한 후 상징액을 \( \mathrm { GSH } \) 함량 측정을 위하여 사용하였다. 시험관에 working buffer \( 700 \mu \) l, 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoicacid \( 100 \mu 1,20 \mu 1 \) 시료액 및 \( 180 \mu 1 \) 증류수를 가하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 분간 방치한 후 GSSG reductase 용액 5 씨를 첨가하고 412 \( \mathrm { nm } \) 에서 1 분 동안 변화되는 흡광도를 측정하였다. \( 0.04 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { GSH } \) 를 제조하여 standard curve를 그린 후 흡광도에 대한 농도를 환산하였다.</p> <h2>간 조직 중 과산화지질 함량 측정</h2> <p>과산화지질(thiobarbituric acid reactive substances, TBARS) 함량은 Buege와 Aust의 방법[5]을 변형하여 측정하였다. 간 조직 중 항산화 효소계 활성 측정을 위하여 제조한 균질액의<p>일부를 취하여 단백질 함량을 protein assay Kit (Sigma, USA)를 이용하여 비색 정량하여 측정하였다. 단백질 함량으로 1 \( \mathrm { mg } \) 함유한 균질액 \( 1.0 \mathrm { ml } \) 에 \( 0.2 \mathrm { ~N } \mathrm { HCl } \) 용액 내 \( 0.357 \% \) thio-barbituric acid를 함유한 시약 \( 1.0 \mathrm { ml } \) 에 butylated hydrox-ytoluene의 최종 함량이 \( 0.01 \% \) 가 되도록 첨가한 후 잘 혼합한 다음 \( 98 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 15 분간 가열하였다. 즉시 냉각시켜 \( 1,500 \times g \) 로 15 분간 원심분리한 후 \( 535 \mathrm { ~nm } \) 에서 상징액의 흡광도를 측정하였는데, 과산화지질 함량은 TBA법을 사용하여 malondialde-hyde (MDA) 함량으로 정량하였다.</p>