SB의 세포증식을 억제하고 사멸을 유도하는 효과는 여타 암세포에서도 \( \mathrm{mM} \) 수준 농도에서만 효력이 있어, 유사 억제제(더 낮은 농도에서 작용)를 개발하거나 다른 항암제와 공동처리 전략을 개발해야 한다. SB가 폐암세포에 노출당하면 세포사멸 관련 단백질이 발생하면서 아포토시스가 생기고 고농도 독성을 일으켜 괴사를 유발할 수 있다. SB의 처리로 인한 세포증식 억제현상은 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \) 정지현상과 연관되며, SB 노출로 인한 세포사멸은 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \)기가 축적되어 일어날 가능성이 크다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Sodium butyrate 처리에 의한 생존율의 변화</h2> <p>HDACI인 sodium butyrate (SB)의 비소세포폐암 세포주 \( \mathrm{H} 460 \)에 독성효과를 조사하기 위하여 다양한 농도의 SB를 48시간 동안 노출하였다. 실험결과 SB는 \( \mathrm{mM} \) 수준의 농도에서 세포독성을 나타내었으며, \( 2 \mathrm{mM} \) 이하의 농도에서는 세포생존율을 거의 감소시키지 않았다. 세포생존율은 \( 2.5 \mathrm{mM} \) 처리 시 \( 15 \% \) 전후로 감소하는 경향을 보였으며 \( 7.5 \mathrm{mM} \) 과 \( 20 \mathrm{mM} \) 처리 시에는 세포생존율이 유의한 수준으로 감소하였다. 반복된 실험결과 \( 20 \mathrm{mM} \) 처리군에서 세포생존율 \( 50 \% \) 이하를 나타내는 빈도가 높았다. SB의 세포증식 억제 및 사멸유도 효과는 기 보고된 다른 종류의 암세포에서도 \( \mathrm{mM} \) 수준의 농도에서만 유효하게 나타낸 것으로 미루어 보아, 보다 낮은 농도에서 작용하는 유사 억제제의 개발 또는 다른 항암제와의 효과적 공동처리 전략 등의 개발이 요구되고 있는 것으로 생각된다.</p> <h2>Sodium butyrate가 유발한 세포사멸 유형의 검정</h2> <p>SB에 의해서 유도된 비소세포폐암 세포주 \( \mathrm{H} 460 \)의 세포사멸의 유형을 확인하기 위하여 Annexin- \( \mathrm{V} \) 염색과 이에 대한 조사를 유세포측정기를 사용하여 수행하였다. 간략히, 세포를 Annexin- \( \mathrm{V} \)에 생염색하면 생존세포(live), 초기 아포토시스 단계 세포(early apoptotic), 후기 아포토시스 단계 세포(late apoptotic) 및 괴사세포(necrotic)로 구분되어 질 수 있으며 이는 유세포측정기에 의해 각각 단계의 비율을 조사할 수 있다. 세가지의 농도에 48시간 동안 노출된 \( \mathrm{H} 460 \) 세포를 수획하여 Annexin- \( \mathrm{V-FITC} \)와 propidium iodide에 형광염색한 후 유세포측정기로 각 유형의 세포사멸을 분석하였다. SB의 처리는 \( \mathrm{H} 460 \) 비소세포 폐암세포에서 아포토시스와 괴사를 동시에 유발하는 것으로 나타났다. 초기단계의 아포토시스 세포는 처리군에서 대조군에 비해 거의 차이가 없는 상태를 보였는데, 이는 처리군에서 SB 노출 후 48시간이 경과한 상태여서 이미 이 단계는 보다 앞선 처리 시간대에 통과한 것이기에 나타나는 현상으로 생각된다. SB의 처리는 \( \mathrm{H} 460 \) 세포의 아포토시스를 농도의존적으로 증가시켰으며, 이와 같은 양상은 괴사의 발생에 있어서도 동일하게 나타났다. SB의 폐암세포에의 노출은 세포사멸 관련 단백질의 발현에 따른 아포토시스의 발생과 더불어 고농도 독성에 의한 괴사를 동시에 유발할 가능성이 제시되었다.</p> <h2>Sodium butyrate 노출 세포의 세포주기 변화와 세포사멸율 조사</h2> <p>비소세포폐암 세포주인 \( \mathrm{H} 460 \)에 SB가 노출되었을 때 나타나는 세포주기상의 변화를 조사하는 것은 암세포의 증식 억제기전의 이해뿐 아니라 세포사멸발생의 세포기전을 해석하는데 있어 중요한 의미를 갖는다. 따라서 본 연구에서는 SB 처리 후 48시간에 나타난 세포주기의 변화와 세포사멸율을 유세포 측정을 통해서 조사하였다. SB 처리군에서는 대조군에 비해 농도의존적으로 증가하는 세포사멸율을 세포주기분석에서 sub-G1을 측정함으로써 확인할 수 있었다. 즉, 대조군, SB \(2.5\mathrm{mM} \) 처리군, \( 7.5 \mathrm{mM} \) 처리군, \( 20 \mathrm{mM} \) 처리군에서 각각 \( 0.9 \%, 6.6 \%, 18.7 \%, 23.6 \% \)의 sub-G1 비율을 보였다. 각 세포주기의 변화를 조사한 결과 SB 처리군의 세포는 대조군에 비해 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \)기의 정지(arrest)가 유의하게 증가하는 것으로 나타났다. 이는 SB의 처리에 의한 세포증식의 억제현상은 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \) 정지현상과 관련이 있으며, SB 노출로 유발된 세포사멸은 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \)기 축적현상에 기인할 가능성이 높다는 사실을 시사하였다. SB 노출에 의한 \( \mathrm{G} 2 / \mathrm{M} \)기 정지현상에 대해서는 갑성선암세포, 자궁암세포, 신경종양세포 등 다른 여러 유형의 암세포에서도 거의 유사하게 나타난 바 있다.</p>