박테리아의 인공담즙 내성은 oxgall 미첨가 MRS broth에서의 흡광도를 기준으로 백분율로 표시하였다. 항균능은 agar-well diffusion법을 이용하여 측정하였고, 분리된 균주는 16S rRNA gene 염기서열을 기반으로 분류하였다. 각 시료는 CaCO3를 함유한 MRS 평판배지에 접종하여 78종의 형태가 다른 균주를 순수 분리하였다.
<h2>인공담즙 내성 조사</h2> <p>인공담즙은 MRS broth에 oxgall을 각각 \( 0.1 \% \) 및 \( 0.3 \% \) 첨가한 후, \( 0.5 \mathrm { ~N } \mathrm { ~NaOH } \) 를 이용하여 \( \mathrm { pH } 6.8 \) 로 조정하여 조제하였다. 분리균주를 인공담즙에 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 동안 배양한 후, \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서의 흡광도를 측정하였다. 인공담즙 내성은 oxgall이 첨가되지 않은 MRS broth ( \( \mathrm { pH } \) 6.8)에서의 흡광도와 비교하여 백분율로 나타내었다.</p> <h2>항균능 조사</h2> <p>분리균주를 MRS broth에서 48시간 동안 배양한 후, 원심분리(10,000 \( \times g \), 10분)하여 상등액을 회수하였다. \( 0.5 \mathrm { ~N } \mathrm { ~NaOH } \)를 이용하여 상등액의 \( \mathrm { pH } \) 를 6.8로 조정한 것과 조정하지 않은 것을 항균능을 조사하기 위한 시료로 사용하였다. 항균능 측정은 agar-well diffusion법을 이용하여 다음과 같이 조사하였다. 피검균주인 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus 및 Listeria monocytogenes를 BHI 평판배지에 도말하고, 직경 \( 0.8 \mathrm { ~mm } \) 의 구멍을 뚫은 후, 시료 \( 200 \mu l \) 를 분주하였다. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 동안 배양한 후, 생육 저해환의 직경으로 항균능을 평가하였다.</p> <h2>16S rRNA gene 염기서열 분석 및 계통분류</h2> <p>분리균주의 16S rRNA gene 염기서열에 기초한 분자계통학적 분석을 통하여 동정을 실시하였다. 16S rRNA gene을 증폭하기 위하여 사용된 primers는 \( E. coli \) 16S rRNA gene의 con-served sequence를 기초로 하여 합성된 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3') primer와 1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3') primer이었다. 16S rRNA gene 염기서열을 결정한 후, GenBank 데이터베이스의 유사균주들과 비교하였다. 또한 염기서열을 Clustal X (version 1.81) pro-gram package를 이용하여 정렬한 후, Neighbor-joining method에 의거하여 각 균주들의 계통분류학적 위치를 결정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>분리균주의 ACE 저해능 및 항산화능</h2> <p>각 시료를 젓산균 선택배지인 \( \mathrm { CaCO } _ { 3 } \) 가 함유된 MRS 평판배지에 접종하여 콜로니의 형태가 서로 상이한 78 균주를 순 수분리하였다.</p>