라트를 에테르로 마취하고 개복하여 복대동맥에서 채혈한 후, 3.2%의 나트륨 시트르산 용액과 혼합해 원심 분리를 통해 혈소판 풍부 혈장(PRP)를 얻었다. 이후, EDTA를 포함하는 washing buffer로 혈소판을 세척하고, 두 차례에 걸친 원심 분리를 통해 혈장을 제거하였다. 마지막으로 suspending buffer로 혈소판을 재현탁시키고, 추가적인 원심 분리를 통해 혈소판을 최종 조제하였다.
<h2>난소절제시술</h2> <p>1 주일 동안 주위환경에 적응시켜 난괴법에 의해 군을 나누어 난소 절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심 마취기에 이르면 대퇴부를 절개하여 난소를 제거하고 절개부는 봉합하였다. 시술 후 3 일부터 매일 각 오디 시료를 경구투여 하였다.</p> <h2>혈액 채취</h2> <p>혈액은 실험동물을 해부 전 24 사간 절식 시킨 후 ether 마취 하에서 개복한 후 대동맥에서 채취하였고, 혈청 중의 효소활성 및 지질 농도는 실온에서 한 시간 방치 후 3,000 \( \mathrm { rpm } \), 4 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 원심 분리하여 분석에 사용하였다.</p> <h2>혈소판 응집실험</h2> <p>Rat을 ether로 마취하고 개복하여 복대동맥으로부터 채혈하여 3.2 \( \% \) sodium citrate용액과 1:5의 비율로 혼합한 뒤 1,100 \( \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 원심 분리하여 상층의 PRP(platelet rich plasma)률 취하고, 3,000 \( \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 더 원심분리하여 상층에 혈장을 제거한 후 EDTA를 포함하는 washing buffer(138 \( \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NaCl } \), 2.7 \( \mathrm { mM } \mathrm { KCl } \), 12 \( \mathrm { mM } \mathrm { NaHCO } 3 \),0.36 \( \mathrm { mM } \mathrm { NaH } { } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \), 5.5 \( \mathrm { mM } \) glucose, 1 \( \mathrm { mM } \) EDTA, \( \mathrm { pH } \)6.5) 5 \( \mathrm { ml } \)를 가하고 섞어주어 혈소판을 재 현탁시켰다. 이 혈소판을 다시 3,000 \( \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 원심분리 한 후, 세척액을 버리고 잔사인 혈소판을 위의 방법으로 한번 더 세척하였다. 세척 후 suspending buffer (138 \( \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } \), 2.7 \( \mathrm { mM } \mathrm { KCl } \), 12 \( \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NaHCO } _ { 3 } \), 0.36 \( \mathrm { mM } \mathrm { NaH } { } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \), 5.5 \( \mathrm { mM } \) glucose, 0.49 \( \mathrm { mM } \) \( \mathrm { MgCl } _ { 2 } \), 0.25 \( \% \) Gelatin, \( \mathrm { pH } \)7.4) 로 재 현탁 시켜 3,000 \( \mathrm { rpm } \), 10분간 원심분리한 후 다시 suspending buffer로 현탁시켜 washed platelet을 조제하였다. Washed platelet는 suspend-ing buffer로 희석하여 혈소판 수가 5 \( \times \) 10 \( ^ { 8 } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 하였고, 응집유도제로 collagen을 2.5 \( \mathrm { μl } \) 가하여 5분간 반응시켜, Whole blood lumi-aggregometer(Chrono-log, U.S.A)를 사용하여 37 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 혈소판 응집을 측정하였다.</p>