참나물은 2003년 전남 나주시에 위치한 전라남도 농업기술원에서 재배한 전초를 시료로 사용하였다. 항산화지수의 측정 조건은 시료를 반응용기에 취하고 증류수를 측정용기에 넣은 후 산화 안정성을 비교하였다. 실험식이는 AIN-93을 기준으로 조제하였으며, 실험군은 정상군, 대조군 참나물 에탄올 추출물 단독투여군, 알코올과 참나물 에탄올 추출물 저용량 병합투여군, 알코올과 참나물 에탄올 추출물 고용량 병합투여군으로 분류하였다. 실험기간 중 흰쥐를 관찰하며 사육기간 중 체중증가량을 동일 기간의 식이섭취량으로 나눈 후 각 실험군의 식이효율을 구하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>참나물 추출물의 제조 및 다용매 분획추출</h2><p>참나물(Pimpinella brachycarpa)은 2003년 4월 전남 나주시 소재 전라남도 농업기술원에서 재배한 전초를 수세하고 음건한 것을 분쇄한 후 시료로 사용하였다. 참나물 \( 100 \mathrm{g} \) 과 \( 80 \% \) 에탄올 \( 500 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 blender(Braun MR 350, CA, USA)로 조분쇄하고 \( 65^{\circ} \mathrm{C} \)에서 환류냉각기를 부착하여 3시간씩 3회 추출한 후 Whatman filter paper(No. 2)로 여과하였다. 여액을 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕 상에서 rotary vacuum evaporator(R-144, Buchi, Switzland)로 용매를 제거하고 감압·농축한 후 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에 냉동 보관하면서 시료로 사용하였다. 참나물 에탄올 추출물은 separating funnel에 의한 용매별 분획으로 n-hexane, chloroform, ethylacetate 및 n-butanol로 연속 추출한 후 각 분획물을 농축하여 in vitro 항산화활성 측정용 시료로 하였다.</p><h2>Rancimat에 의한 항산화지수(antioxidant index, Al) 측정</h2><p>항산화지수는 Joo 등의 방법에 의하여 Rancimat(Metrohm 679, Herisan, Switzerland)을 이용하여 측정하였는데, 분획에 포함된 용매를 완전히 제거한 후 각 분획의 함량이 \( 600 \mathrm{ppm} \)이 되도록 soybean oil(Sigma Co., USA)에 첨가하고 초음파(Ultrasonic processor, UCX-750, USA)를 이용하여 시료 추출물과 유지가 잘 혼합되도록 하였다. 항산화지수의 측정 조건은 시료 \( 3.0 \mathrm{g} \)를 반응용기에 취하고 증류수 \( 70 \mathrm{ml} \)을 측정용기에 넣은 후 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \)에서 air flow rate를 \( 201 / \mathrm{hr} \)로 하여 산화 안정성을 비교하였다. 항산화지수(antioxidant index, AI)는 분획을 첨가한 실험구의 유도시간을 분획을 첨가하지 않은 대조구의 유도시간으로 나눈 값으로 구하였고, 모든 측정치는 3회 반복 시험하여 얻은 값의 평균치로 표시하였다. 기존의 상업용 합성항산화제인 butylated hydroxytoluene(BHT)를 참나물 에탄올 분획들과 동일하게 유지에 첨가하여 비교 실험하였다.</p><h2>실험동물 사육 및 식이</h2><p>조선대학교 실험동물센터에서 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 공급받아 실험 전 1주일간 고형 배합사료(삼양사료)와 물로 적응시킨 후, 체중 \( 90 \sim 130 \mathrm{g} \)인 것을 난괴법(randomized complete block design)에 의하여 Table 1과 같이 각 군당 8마리씩 5군으로 분류하였다. 실험식이는 AIN-93을 기준으로 조제하였으며, 실험군은 정상군(NOR), 대조군(\(35\%\) 알코올 \( 10 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \) of b.w./day, CON, 알코올 투여군) 참나물 에탄올 추출물 (\( 200 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{kg} \) of b.w./day) 단독투여군(P1), 알코올과 참나물 에탄올 추출물 저용량\( (200 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{kg} \) of b.w./day) 병합투여군(P2), 알코올과 참나물 에탄올 추출물 고용량(\(400 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{kg} \) of b.w./day) 병합투여군(P3)으로 분류하였다. 흰쥐는 cage에 1마리씩 넣어 6주동안 사육하였다. 참나물 에탄올 추출물 투여 용량은 예비 실험을 토대로 독성이 나타나지 않은 수준인 흰쥐 체중 \( \mathrm{kg} \)당 \( 200 \mathrm{mg} \)과 \( 400 \mathrm{mg} \)이 함유되도록 생리식염수에 조제한 시료를, 알코올은 Fujji 등의 방법에 준하여 \( 35 \% \) 알코올을 체중 \( \mathrm{kg} \)당 \( 10 \mathrm{ml} \)을 투여하였으며, 정상군은 동일한 양의 생리식염수를 6주간 경구 투여하였다. 실험기간 중 동물의 상태를 관찰하면서 체중은 1주일 간격으로, 식이섭취량은 2일 간격으로 측정하였고 사육기간의 체중증가량을 동일 기간의 식이섭취량으로 나누어 각 실험군의 식이효율을 구하였다.</p>