가지 수확기에 총 3곳의 하우스에서 구역을 임의로 정한 뒤 구역내의 가지 전주수에 대한 이병주율을 조사하였다. 잎과 열매 병반으로부터 얻은 균주들 중 가장 강한 병원성을 띠는 E12 균주를 모든 실험에 공시하였다. 배지 종류에 따른 균총의 형태, 분생포자의 크기 등 배양적 특성을 조사하기 위해 병원균의 균총 절편을 여러 종류의 배지에서 배양하였다. 이후, 분생 포자의 효과적인 포자부유액을 고르기 위해 병원성 검정 또한 진행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>병징 및 발병율 조사</h2> <p>1998년 12월부터 1999년 5월 중순까지 경남 김해시 한림면과 부산시 강서구 대저동의 가지재배 하우스내에서 본 병징을 수시로 관찰하였다. 발병 정도는 가지 수확기인 1월 중순 김해시 한림면에서 2개 하우스와 3월 중순 부산시 대저동 일대에서 1개 하우스에서 한 하우스당 5개의 구역, 구당 \( 500 \times 100 \mathrm{~cm} \) (10주)를 임의로 선정하고 구역내의 가지 전주수에 대한 이병주율을 조사하였다.</p> <h2>병원균의 분리 및 공시균주</h2> <p>가지 재배 하우스내의 잎과 열매 등에서 갈색의 소형 점무늬가 형성되고 부정형의 대형 병반이 형성되며 잿빛의 포자가 관찰되는 병반을 채집하여 병원균을 분리하였다. 병든 조직 절편을 \( 5.25 \% \) sodium hypochlorite 용액에 약 45초간 표면 살균한 후 멸균수로 3회 세척하여 Potato dextrose agar (PDA) 평판배지에 놓고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \), 암조건하에서 배양하였다. 신장한 균사를 PDA평판 배지에 이식하고 배양하였는데, 이 과정을 수회 반복하여 병원균을 순수 분리하였다. 잎과 열매 병반으로부터 E1등 12균주를 분리하여 그 중 병원성이 가장 강한 E12 균주를 모든 실험에 공시하였다.</p> <h2>병원균의 형태 및 배양적 특성</h2> <p>배지 종류에 따른 균총의 형태, 분생포자의 크기와 형태 및 분생포자 형성량을 조사하기 위해 병원균의 균총 절편율 Corn meal agar (CMA), V8-juice agar (V8A), Czapek's agar, Richard's agar 및 Sabouraud's agar배지에 각각 이식하고 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 7일간 배양하였는데 암조건만 처리한 것과 3일 암처리 후 4일간 자외선 (UV)을 조사한 것으로 조건을 각각 달리하여 조사하였다. 분생포자 형성량 조사는 위와 같은 방법으로 배양한 각각의 배지 한 petridish에 멸균수 \( 10 \mathrm{m \ell} \)을 넣어 포자부유액으로 만들고 그 중 \( 1 \mathrm{m \ell} \)을 채취하여 혈구계산기를 사용해 각각 3반복으로 조사하였다.</p> <h2>병원성 검정 밎 분생포자 접종원의 부유액 선발</h2> <p>병원성 검정에서는 접종원으로서 분생 포자의 효과적인 포자부유액을 선발하기 위해 PDB, \(30\%\) 토마토 쥬스를 공시하고 여기에 앞서의 분생포자 형성에 양호한 것으로 선발된 배지에서 3일간 암처리한 후 UV을 4일간 처리하여 배양한 E12 균주의 분생포자를 \( 10^{6} ~ \mathrm{conidia}/ \mathrm{ml} \)농도로 첨가하여 접종원으로 하였다. 처리당 5주씩 3반복으로 각각의 가지 잎에 처리하여 상대습도 \( 90 \% \)이상, \( 20 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 생육상에 보관하면서 처리 24시간 후부터 발병도를 조사하였다. 가지 열매에서의 병원성 검정에서는 가지 열매 표면에 가위표 모양으로 \( 2 \mathrm{~cm} \) 크기의 상처를 내고 직경 \( 1 \mathrm{~cm} \) 크기의 균사절편을 상처낸 부위에 부착하여 접종하고 잎에서 처리한 것과 같은 조건의 생육상에 보관하면서 발병정도를 조사하였다.</p>