In vitro 지질과산화에 대한 항산화 활성에 관한 실험에서는 실험용액을 실온에서 10분동안 반응시킨 후 pyridine 용액을 \( 500 \mu l \) 첨가하고 \( 1,000 \times g \)에서 10분 동안 원심분리한 후 상등액을 \(532\mathrm {nm}\)에서 흡광도를 측정하여 지질과산화 정도는 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 %값으로 환산하여 구했다. DNA 산화는 Fenton반응에 의하여 발생된 하이드록실 라디칼에 도출되었다.
<h2>In vitro 지질과산화에 대한 항산화 활성</h2> <p>ABEE를 \( 0.000625,0.00125,0.0025,0.005,0.01 \% \)의 농도로 linolenic acid emulsion과 흔합한 후에 \( 0.8 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 및 \( 1.6 \) \( \mathrm { mM } \mathrm { FeSO } _ { 4 } \)를 혼합한 용액을 5 시간 동안 반응 후 \( 0.4 \% \)TBA를 첨가하고 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 2시간 동안 반응시킨 다음 실온에서 10분 동안 반응시켰다. 그 다음 \( 15: 1 \) 비율의 n-butanol : pyridine 용액을 \( 500 \mu l \) 첨가하고 \( 1,000 \times g \)에서 10분 동안 원심분리한 후 상등액을 \( 532 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하여 지질과산화 정도는 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 %값으로 환산하여 나타내었다. 양성대조군으로는 \( 0.1 \% \)의 vitamin E를 사용하였다.</p> <h2>DNA oxidation 측정</h2> <p>Genomic DNA는 약간 변형된 표준 과정에 따라 EA-HY-926 세포로부터 추출하였다. Fenton반응에 의하 여 발생된 hydroxyl radical에 도출된 DNA 산화는 기존에 실험된 방법에 따라 수행되었다. 먼저 \( 100 \mu 1 \)의 DNA 용액에 시험농도의 ABEE, \( 200 \mu \mathrm { M } \mathrm { ~FeSO } _ { 4 } , 1 \mathrm { mM } \mathrm { ~H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 및 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) genomic DNA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 상온에서 반응시킨 후 \( 10 \mathrm { mM } \) EDTA를 첨가하여 반응을 종결시켰다. \( 1 \mu \mathrm { g } \)의 DNA를 포함하는 \( 20 \mu l \)의 반응혼합물을 \( 1 \% \) agarose gel에서 \( 100 \mathrm { ~V } \)로 30 분 동안 전기영동 하였다. Gel은 1 \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) ethidium bromide로 염색하여 물로 세척하여 UV로 LAS3000 \( { } ^ {\circledR } \) image analyzer(Fuifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 관찰하였다.</p>