인체 혈구암세포 U937에서는 약 50%의 증식억제 효과를 보였던 반면, HL-60 세포, 인체 간암세포, 대장암세포에서는 각각 약 30%, 30-40%, 10-20%의 증식억제 효과를 보여주었다. 특히 platycodin D의 경우, 시간 및 농도에 따른 의존적인 증식억제 효과를 U937 세포에서 감지할 수 있었다.
<h2>Mitochondrial membrane potential (MMP, \( \Delta \Psi m \) ) 변 화의 측정</h2> <p>Platycodin D 처리에 따른 apoptosis 유발과정에서 미토콘 드리아막 전위(MMP)의 변화 여부를 조사하기 위하여 du-al-emission potential-sensitive probe인 5,5 V, 6,6 V-tetra-chloro-1,1 V,3,3 V-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide (JC-1,<p>Sigma) 염색을 실시하였다. 이를 위하여 정상 및 platycodin \( \mathrm { D } \) 이 처리된 배지에서 배양된 세포들을 원심분리를 이용하여 모으고, PBS로 수세 후, \( 2 \mathrm { mg } / 1 \) 의 JC-1을 배지에 희석하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 분간 염색하고 수세 후, flowcytometer를 이용하 여 분석하였다.</p> <h2>In vitro caspase-3의 activity 측정</h2> <p>Caspases-3의 활성 정도가 platycodin \( \mathrm { D } \) 처리에 의하여 어떠한 변화를 유발하는지 알아보기 위하여 정상 및 platycodin \( \mathrm { D } \) 가 처리된 배지에서 48 시간 배양된 세포를 모은 뒤 상기와 동일한 방법으로 단백질을 추출하고 정량하였다. \( 150 \mu \mathrm { g } \) 의 단백질이 함유된 \( 50 \mu 1 \) 의 sample에 기질 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 이 함유된 re-action buffer [40 mM HEPES (pH 7.4), 20 \% glycerol (v/v), \( 1 \mathrm { mM } \) EDTA, 0.2 \% NP-40 and \( 10 \mathrm { mM } \) DL-DTT] \( 50 \mu \) 쓸 혼합하여 각 sample 당 총 volume이 \( 100 \mu 1 \) 가 되게 하였다. 여기에 caspase-3에 따른 기질 \( 5 \mu 1 \) 를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 암실에서 3 시간 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 \( 405 \mathrm { ~nm } \) 의 흡광도 를 이용하여 반응의 정도를 측정하였다. 실험에 사용된 기질은 Asp-Glu-Val-Asp (DEVD)-p-nitroaniline (pNA)였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>Platycodin D가 여러 암세포의 증식에 미치는 영향</h2> <p>Platycodin D (Fig. 1A)의 처리에 따른 암세포 생존율 및 증식에 미치는 영향을 알아보기 위하여 다양한 암세포들을 대상으로 MTT assay를 통하여 조사한 결과, Fig. 1B에서 볼 수 있듯이 조사된 모든 종류의 암세포에서 platycodin D 처리 농도 의존적으로. 증식억제 효과를 보였으며, \( 12 \mu \mathrm { M } \) 처리군에 서 인체 혈구암세포인 U937에서 약 \( 50 \% \) 이상의 증식억제 효과가 있었으나 HL-60 세포에서는 약 \( 30 \% \) 정도의 증식억제를 보였다. 또한 인체 간암세포에서는 약 30-40 \%, 대장암세포에서는 약 \( 10-20 \% \) 정도의 증식억제를 보여주었다. 또한 platyco- \( \operatorname { din } \mathrm { D } \) 처리시 시간 의존적으로 세포 증식억제 효과를 보였으 며(Fig. 1C), platycodin D는 특히 인체 혈구암세포인 U937 세포에서 농도 및 시간 의존적으로 감수성이 높게 나타났음을 알 수 있었다.</p>