이동상 조성을 사용하여 0~60분까지 농도 구배를 주었고, 1ml/min 유속, 10\(\mu\mathrm{l}\) 시료 주입량, 330nm 파장으로 분석한 결과 41-43분대에 peak가 나타났고, 2 fold dilution하여 Wegner 등의 방법에 따라 Gram 양성세균과 음성세균을 대상으로 분석한 결과 불순물이 없었다.이 시료를 2 fold dilution하여 Wegner 등의 방법에 따라 Gram 양성세균과 음성세균을 대상으로 MIC를 측정하였는데 Schwyn와 Neilands의 방법에 따라 관찰하였으며, Reeves 등의 방법에 따라 catechol형 siderophore 임을 확인하였고, Gillam 등의 Csaky test를 실시한 결과 hydroxamat형은 없었다.
<p>이동상 조성은 0 분에서 20 분까지는 \( 80 \% \) acetonitrile로, 20 분에서 40 분까지는 acetonitrile과 \( 0.1 \% \) formic acid를 동량으로, 40 분에서 60 분까지는 acetonitrile과 \( 0.1 \% \) formic acid를 각각 \( 90 \% \) 와 \( 10 \% \) 로 하여 단계적으로 농도 구배를 주었다. 유속은 \( 1.0 \mathrm{ml} \) \( \mathrm{min} \), 시료 주입량은 \( 10 \mu \mathrm{l} \), 검출기(SPD-M20A, Shimadzu, Japan) 파장은 \( 330 \mathrm{~nm} \) 로 하여 분석한 자료는 Fig. 2 에서 보는 바와 같이 거의 불순물이 없었고 주된 peak는 41-43분대에 나타났다. 이 시료를 2 fold dilution하여 Wegner 등의 방법에 따라 Gram 양성세균과 음성세균을 대상으로 MIC (minimum inhibitory concentration)를 측정하였다(Table 2). Gram 양성세균이 음성세균에 비하여 낮은 농도에서 생장 억제를 보였는데, 이는 P. aeruginosa 균주가 생산하는 pyochelin의 생장 억제 pattern과 유사하였다. 시판되고 있는 기존의 항생제와 비교하기 위하여 \( S \). aureus KCTC 1261 균주를 대상으로 PS 시료, ampicillin, chloramphenicol, streptomycin를 각각 \( 0.8 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 씩 cylinder에 가하고 배양하여 Fig. 3(1)와 같은 결과를 얻었으며, PS 균주가 생산한 항생물질은 기존의 항생제와 비교하여 유사하거나 더 뛰어난 생장 억제능을 보였다. 형광성의 pseudomonad 세균들이 생산하는 2 차 대사산물들은 매우 다양하며 그 중에 상당수는 방향족의 소수성 화합물이다. PS 항생물질이 방향족 화합물인지 알아보기 위하여 PS 시료의 흡광 pattern을 UV-visible spectrophotometer (UV-\( 1650 \mathrm{PC} \), Shimadzu)로 조사한 결과 방향족화합물의 특징적인 \( 210 \mathrm{~nm} \) 와 \( 280 \mathrm{~nm} \) 부근의 peak가 보였으며 \( 330 \mathrm{~nm} \) 부근에서 또 다른 peak가 나타났다. 추출물의 색은 노란색을 띠었으며, \( \mathrm{FeCl}_{3} \) 를 가했을 때 적갈색을 나타냈고 반대로 \( \mathrm{EDTA} \) 처리로 탈색됨으로 보아 \( \mathrm{Fe}(\mathrm{III}) \) 이온과 반응함을 알 수 있었다. 철이 부족한 환경에서 다양한 세균들이 생산하는 siderophore들은 방향족의 phenolate 및 catecholate type과 그 외에 hydroxamate 그리고 carboxylate type 등으로 나뉘는데, PS 균주가 생산하는 항생물질이 siderophore로서의 역할도 하는지 알아 보았다. Schwyn와 Neilands의 방법에 따른 CAS (chrome azurol S) 평판배지에 PS 항생물질을 \( 50 \mu \mathrm{l} \) 가하여 24 시간 후 나타난 주황색의 halo를 관찰하였으며, Reeves 등의 방법에 따라 Hathway 반응을 적용한 결과 PS 항생물질은 3,4-dihydroxybenzoic acid과 유사한 pattern을 보여서 catechol형 siderophore 임을 확인하였고, Gillam 등의 Csaky test를 실시한 결과 hydroxamat형은 없었다.</p>