배양환경은 온도 25\(\pm\)1\(^\circ \mathrm{C}\), 광도 2,000 lux, 광주기 16/8시간으로 목초액 0~3ml/L의 농도로 처리한다. 배지조절은 hyponex 3g/L, peptone 2g/L, NAA 0.5\(\mathrm{mg}/\mathrm{L}\), kinetin 1.0\(\mathrm{mg}/\mathrm{L}\), sucrose 30g/L, plant agar 7g/L로 pH 5.2로 한 상태에서 16주 동안 배양한다. 이후 GA 유사물질 활성 검정을 목적으로 분리·추출한 후 paper chromatography를 실시하며 벼 '단은방주'를 30\(^\circ \mathrm{C}\)에서 2주간 생육함으로써 상대 생장률을 추출하였다.
<p>배양에 사용된 배지는 hyponex \( 3 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \) 와 peptone \( 2 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \)를 혼합한 배지에 생장조절물질로는 NAA \( 0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 와 kinetin \( 1.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \)를 첨가하였고, sucrose \( 30 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \), plant agar \( 7 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \)를 첨가하여 \( \mathrm { pH } \)는 5.2로 조절하였다.</p> <p>목초액 처리는 위와 같은 조성의 기본 배양 배지에 목초액(거성 바이오, 한국) 0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 \( \mathrm { ml } / \mathrm { L } \)의 농도로 각각 처리하였다.</p> <p>배양환경은 온도 \( 25 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 광도 \( 2,000 \mathrm { lux } \), 광주기 명 16 , 암 8시간으로 각각 처리하였으며, 생육조사 및 내생물질 활성 및 함량 분석은 초기배양으로부터 16주 후 실시하였다.</p> <h2>GA 유사물질 활성 검정</h2> <p>GA 유사물질의 활성검정을 위하여 목초액 처리배지에서 16주 배양된 유묘의 지상부 및 지하부를 각각 \( 10 \mathrm { ~g } \)씩 채취해서 Badr 등의 방법에 의하여 분리◦추출하였다. 각 분획별로 paper chromatography (Toyo No. 51)를 실시하였으며 각각의 분획을 상온에서 여과지에 loading한 후 밀폐된 용기에 넣어 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 암상태에서 5시간 전개 { 전개용매 ; iso-pro-panol: ammonia water \( (28 \%): \) water \( = 10: 1: 1( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \} \) 하였다. GA 유사물질의 활성검정을 위한 생물검정은 벼 '단은방주'를 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3일간 배아시킨 종자를 관병에 Rf치 별로, 각각 잘게 자른 여과지를 넣은 다음, 멸균수 \( 5 \mathrm { ~ml } \)를 넣고 여기에 배아된 종자를 넣은 후 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 14일 동안 생육시킨 후 제 2 엽초의 길이를 조사하여 상대 생장률을 환산하였다.</p>