본 실험은 Microcystis의 무균분리를 관찰하였다. 무균화 전처리 방법에서 멸균 증류수를 이용한 세정법에만 3개의 무균 M. aeruginosa 균주를 얻을 수 있었다. cell dissociation방법에서는 vortex, homogenize 순으로 많은 집락이 형성되었으며 lysozyme 처리에서는 집락이 형성되지 않았음을 확인했다. 또한 시간별 M. aeruginosa 집락 형성에서는 vortex 2분 처리를 할 때 가장 많은 집락을 형성한다. 이후 세균제거 및 무균상태를 계속 유지하기 위해 ampicillin 및 neomycin만의 MNLC 농도들을 섞어 만든 antibiotic cock-tail을 배지에 첨가하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>시료수의 수질</h2> <p>시료를 채수한 시점의 이화학적 조사 결과 수치가 대부분 오염정도가 높은 경향을 보였다. 수온은 평균 \( 25.2^{\circ} \mathrm{C}\), \(\mathrm{pH}~ 8.6 \)으로서 남조류가 증식하기에 알맞은 조건을 갖추고 있는 것으로 나타났다. 수질오염의 대표적인 지표인 BOD, \(\mathrm{NH_3}\)-\(\mathrm{N} \)는 각각 \( 4.7\), \(0.07 \mathrm{mg} / \ell \) 범위로 나타나 유기물의 오염이 악화되었음을 보여 주었다. 이는 남조류에 의한 수화현상이 어느 정도 진행되었기 때문인 것으로 생각된다. 특히 현미경 관찰에 의한 조류 우점종은 M. aeruginosa가 대부분이었으며(약 \(97\%\)), 그 외 Anabena속, Oscilliatoria 속 등이 드물게 관찰되었다.</p> <h2>M. aeruginosa의 무균분리</h2> <p>Microcystis의 증식에 영향을 미치는 요인은 온도, 조도, \( \mathrm{pH} \), 교반상태, 인, 질소 등이 있다. Microcystis는 자연계에서 군체 형성을 하는 특징을 가지고 있으나, 실내에서 플라스크 배양시 군체의 형성능을 상실하여 군체 배양이 어렵다고 알려져 있다. 그러나 본 실험의 물금에서 분리한 Microcystis는 플라스크 배양시에도 군체를 형성하였다.</p> <p>Yagi와 Sudo에 의하면 Microcystis의 증식 조건을 검토해 보았을 때 먼저 온도가 \( 25 \sim 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서의 비증식속도 (specific growth rate) \( u=0.25 \) day \( ^{-1} \)로 높게 나타났으며, 또한 교반 조건에서는 \( 70 \mathrm{rpm} \) 진탕배양시 \( u=0.25 \mathrm{day}^{-1} \)로 정치배양시 \( u=0.18 \mathrm{day}^{-1} \)보다 높게 나타났다. 그리고 조도의 경우 광포화점 이상인 \( 40 \mu \mathrm{mol}\) \( \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \)에서의 \( u=0.5 \) day \( ^{-1} \)로 높게 나타났는 것으로 보고되었다. 본 실험에서는 이들 조건에 대한 영향을 고려하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, 40 \mu \mathrm{mol}\) \( \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1}, 70 \mathrm{rpm} \) 조건으로 배양하였다.</p> <p>무균화를 위한 전처리 방법에서는 멸균 증류수를 이용한 세정법에서만 3개의 무균 M. aeruginosa 균주를 얻을 수 있었으며, 그 외 방법에서는 분리하지 못했다. 많은 수의 집락이 형성될 수 있도록 하기 위한 cell dissociation방법에서는 vortex, homogenize 순으로 집락이 많이 형성되었으며, lysozyme 처리에서는 집락이 형성되지 않았다. 시간별 M. aeruginosa 집락 형성에서는 vortex 2분 처리가 가장 많은 수의 집락을 형성하는 것으로 나타났다.</p> <p>세균제거 및 무균상태를 계속 유지하기 위하여 8종의 항생물질을 처리하여 Microcystis에는 영향을 주지 않고 일반 세균들은 생육하지 못하는 농도를 결정하기 위하여 우선 Microcystis에 대한 각 항생물질들의 MNLC, \(\mathrm{LC}_{50} \) 및 \( \mathrm{MLC} \) 농도 실험을 한 결과는 Table 3과 같다. 실험 결과에서 Microcystis가 높은 내성을 나타낸 항생제인 ampicillin 및 neomycin만의 MNLC 농도들을 섞어 만든 antibiotic cock-tail (ampicillin \(150 \mu \mathrm{g}/\mathrm{m \ell}\), neomycin \(25 \mu \mathrm{g}/\mathrm{m} \ell \))을 배지에 첨가하여 세균제거 및 무균상태 유지를 위해 사용하였다.</p>