본 연구에서는 한약재의 항혈전효능을 검증하기 위해서 fibrin plate법을 이용하여 fibrin의 용해 활성을 실험하였다. 그 결과 하고초가 혈전용해, 응고시간, 혈소판 응집능 실험에서 항혈전 효과가 있음을 확인하였다. 이때 하고초는 역리학적으로 간세포 보호와 항결핵작용이 있는 것으로 알려져 있어 앞으로 혈전 질환 치료제 개발에 효과적으로 사용될 것으로 기대된다. 또한, 약재에 들어있는 saponin 성분인 oleanolic acid이 하고초의 혈전 형성 억제 효능과의 관련성을 위해 연구가 필요할 것으로 보인다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <p>혈전은 한의학에서의 어혈 의미와 유사하며, 어혈과 밀접한 병기를 갖는 기울, 혈열, 한습, 양허와도 관련성이 높다. 동의보감에서는 어혈을 혈체라는 순환기능의 장애라는 개념으로 이해하고 있다. 그에 따른 치료는 활혈거어의 효능을 가진 본초가 주로 사용되며, 병리에 따른 기전에 따라 이기해울\(\cdot\)보양온리\(\cdot\)청열양혈 등의 효능을 가진 본초들과 함께 사용된다. 현재 식이조절, 약물요법, 운동요법 등으로 혈관계 질환을 유발하는 혈전의 예방과 치료방법이 있으며, 약물요법에는 현재 aspirin, dipyridamole, ticlopidine 등의 혈소판응집 억제제와 streptokinase (SK), urokinase (UK), aminocaproic acid 등의 혈전용해제, heparin, warfarin, dicumarol 등의 항응고제가 보편적으로 사용되고 있다. 하지만 생체 내에 혈전용해제를 투여했을 때 과량으로 생성된 plasmin에 대한 면역반응으로 혈전 용해 작용이 감소가 발생된다. 그리하여 이러한 약품들은 urokinase를 제외하고는 경구투여가 불가능하다는 단점이 있다. 또한, 일반적으로는 fibrin만을 용해시키는 선택적인 용해작용이라기보다 다른 단백질도 분해하는 넓은 범위의 protease의 성질을 가지는 것이 대부분이다. 이러한 성질을 가지는 protease를 혈전증 치료의 목적으로 장기간 또는 다량으로 사용할 경우에는 혈관벽이나 혈액성분등 다른 단백질을 함께 용해하기 때문에 매우 심각한 부작용이 있을 수 있다.</p> <p>따라서 본 연구에서는 위 약물요법의 단점을 보완하도록 한약재로 항혈전 효능 검증을 하고자, 혈전 용해 활성을 검색하는 가장 기본적인 실험 방법인 fibrin plate법을 이용하여 fibrin의 용해 활성을 조사하였다. 혈전용해도 측정에 대해 하고초를 농도별 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(2.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(1.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)로 처리하여 15시간 후 fibrin plate가 용해되어 형성된 투명환의 넓이를 측정하는 실험을 진행한 결과 Fig. 1A에서 나타난 것처럼 \( 10, 5, 2.5,1.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이 각각 \( 6.85 \mathrm{~mm}^{2}\), \(2.89 \mathrm{~mm}^{2} \), \( 0.00 \mathrm{~mm}^{2}\), \(0.00 \mathrm{~mm}^{2} \) 로 혈전용해도가 농도의존적으로 효능을 나타냄을 알 수 있다. 다음으로 혈액 응고 cascade에 미치는 영향을 알아보기 위해 혈액 응고 시간 지연 및 단축 효과를 확인하고자 하고초의 APTT와 PT에 미치는 영향을 조사한 결과 Fig. 2에서 나타난 것처럼 PT 의 경우 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 경우에는 각각 \( 550.00 \%\), \(116.49 \% \) 로 대조군보다 탁월한 지연효과를 보였으며 \( 2.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(1.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 은 \( 89.01 \%\), \(85.28 \% \) 로 혈액 응고시간 단축효과를 보였다. APTT의 경우 Fig. 3에서 나타난 것처럼 \(10,5,2.5,1.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 는 각각 \( 550.00 \% \), \( 550.00 \%\), \(227.30 \%\), \(166.57 \% \) 로 대조군보다 매우 우수한 지연효과를 보였다. 혈소판 응집에 대한 작용을 살펴보기 혈소판의 응집에 따라 형성되는 두 전극 사이에 형성된 전기적 저항의 변화로 나타나는 실험을 시행한 결과 하고초의 농도별 \(10,5 ,2.5,1.25\mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 가 Fig. 4 에 나타났듯이 ADP는 각각 \( 100 \% \), \( 98.11 \%, 100 \%\), \(37.33 \% \) 이고 collagen에서는 \( 100 \%\), \(100 \%\), \(100 \% \), \( 86.36 \% \) 로 매우 뛰어난 응집억제 활성을 보였다. 그 결과 하고초가 혈전용해, 응고시간(PT, APTT), 혈소판 응집능 실험에서 공통적으로 대조군과 비교하여 항혈전 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 특히 APTT평가에서 실험한 각 농도에서 모두 탁월한 혈액응고지연 효과가 나타남을 알 수 있었다.</p> <p>약리학적으로 하고초는 saponin 성분인 oleanolic acid를 함유해 간세포에 보호효과, 항결핵작용이 있는 것으로 나타났다. 또한 ursolic acid는 oleanolic acid와 함께 간세포보호효과를 가지며, nitric oxide의 생성을 억제하는 항염증, 항바이러스 작용 및 암세포에도 항암 효과 등이 있는 것으로 보고됐다. 그리고 flavonoid계 색소인 anthocyanin을 함유해 노화를 예방할 수 있는 항산화 효능이 있다. 또한 flavonoid 배당체와 수용성 potassium chloride를 함유하고 있어 혈압강하 작용과 이뇨 작용이 있는 것으로 보고되었으며, tannin 성분은 숙주세포 안으로 침입하는 것을 저해하여 항HIV 기능을 나타내는 것으로 규명되었다. 특히, 2a-hydroxy-oleanolic acid는 우수한 thrombin 저해활성을 나타내어, 혈전 생성을 효율적으로 억제할 수 있으며, 혈행개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용한다는 결과를 통해 하고초의 혈전 형성 억제효능이 약재에 포함된 saponin 성분인 oleanolic acid 와의 관련성을 명확하게 하기 위해 연구가 필요할 것으로 보인다. 따라서 하고초를 향후에 혈전 질환의 치료제 개발에 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 동물모델에서의 깊이 있는 효능 연구와 관련 작용기전에 대한 체계적인 연구, 구성성분의 분석 및 함량 분석을 토대로 한 유효성분 도출 연구 등이 필요하며, 추출물의 적정 용량 산정 및 최적의 투여방법 개발, 안전성 평가 등의 연구도 지속적으로 이루어져야 할 것으로 판단된다.</p>