원형질체 배양에 의해 재분화된 신초들의 생장상이나 엽형태에 있어서 홍진조생과 길전네블오렌지와 비교하였을 때 전혀 차이가 없었다. 따라서 온주밀감 원형질체를 이용한 식물체 재생체계가 확립되어 체세포잡종체 생산 뿐만 감귤 근연속과의 융합에 의해 우량 대목용 품종육종의 수단으로 활용 가능할 것으로 기대된다.
<h2>배유기 배지</h2><p>Nodular calli의 형태로 생장한 캘러스로부터 배를 유기시키기 위한 적정 배지 선발 시험을 수행하였다. MT macro, MT micro, MT vitamin, \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}\) malt extract, \(\ 0.146 \mathrm{M} \) sucrose(EME), MT macro, MT micro, MT vitamin, \( 1.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \) malt cxtract, \(\ 0.146 \mathrm{M} \) sucrose (1500 EME), MT basic medium, MT vitamin, \( 0.1 \mathrm{M} \) galactose, \( 0.1 \mathrm{M} \) sorbitol, \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) \(\mathrm{GA}_{3} \)( MT\(+\)gal/sor/ \(\mathrm{GA}_{3}) \) 3가지 배지에 원형질체로부터 재생된 캘러스를 각 배지별로 \( 1 \mathrm{~g} \) 씩 배양해 본 결과 홍진조생의 경우 1500( EME) 배지에서 197개로 가장 많은 자엽형 배를 얻을 수 있었으나 길전네블오렌지의 경우는 ( MT\(+\)gal/sor/ \(\mathrm{GA}_{3}) \) 배지에서 많은 자엽형 배를 얻을 수 있었다 (Table 2). 오렌지를 비롯하여 대부분의 감귤류에 있어서 배형성 캘러스로부터의 배형성은 배유기 배지에 첨가하는 sucrose를 galactose, lactose, raffinose, maltose, glycerol 등의 당으로 바꾸어 주어야만 정상적인 배형성 과정이 이루어진다는 보고가 있다 (Button 1978, Kochba et al. 1982, Ben-Hayyim et al. 1983). 온주밀감에 있어서도 품종에 따라 배유기에 적합한 당의 종류는 달랐으며 배유기에 있어서 당의 역할이 중요함을 알 수 있는데 (Kunitakeet al. 1991), 본 연구에서는 malt extract의 효과에 의해서도 정상적인 형태의 자엽형 배를 유기시킬 수 있다는 결과를 얻었다.</p><h2>신초 재분화 배지</h2><p>유기된 자엽형 배를 신초 재분화 배지로 읆긴 후 \(20\sim30\)일부터 어린 신초들이 재분화되기 시작하였다. 적정 신초 재분화배지 선발에서는 홍진조생과 길전네블오렌지 모두 SI-2 배지에서 가장 많은 신초가 재생되었다 (Table 3). SI-2 배지에서 재분화된 대부분의 신초들은 건강한 뿌리와 함께 정상적인 생육을 보였으나, 지상부가 약간 황화 현상을 보이고 신초 줄기가 가늘며 약한 신초들이 재분화되는 경우도 있었다 (Figure 3). 조직 내 오옥신과 사이토키닌 간의 농도 또는 비율이 기관분화에 적합할 때에 지베렐린을 첨가하면 대부분의 식물에서 기관형성이 억제되나 기관의 생장은 촉진된다 (김규원 등 1987). 그러나, 감귤과 같이 내생 오옥신의 함량이 높은 겅우 지베렐린의 첨가로 인하여 정상적인 신초와 발근형성이 촉진됨과 동시에 생장이 촉진되어 연약한 신초가 재분화되는 것으로 생각되어진다. 따라서, 이러한 신초는 신초가 정상적으로 재분화되는 즉시 생육배지로 옮겨주어 건강한 식물체로 생육할 수 있게 해 주어야 한다.</p><p>원형질체 배양 후 배유기 및 신초 재분화과정을 거쳐 재분화된 신초들은 순화과정을 거쳐 온실에서 육묘중에 있으며 (Figure 4), 원형질체 배양에 의해 재분화된 신초들의 생장상이나 엽형태 (모양, 색깔, 두께)에 있어서 실험재료로 사용한 원 홍진조생과 길전네블오렌지와 비교하였을 때 전혀 차이가 없음을 알 수 있었다.</p><p>본 연구의 결과에 따라 온주밀감 원형질체를 이용한 식물체 재생체계가 확립되었으므로 감귤 이종속간의 원형질체융합에 의한 우수한 형질이 도입된 체세포잡종체 생산 뿐만 아니라 감귤 근연속과의 융합에 의해 우량 대목용 품종육종의 수단으로 활용이 가능할 것으로 기대된다.</p>