iNOS는 인체 간세포, 혈관세포, 인체 성상신경묘 세포, 등에는 정상적으로 존재하지 아니하나, 이들 세포가 interleukin-1 beta (IL-1\(\beta \))에 의해 활성화되면 \(\mathrm{NO}\)가 생성된다. Muniyappa 등은 혈관 평활근세포에서 IL-\(1\beta\) 투여에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \)생성증가 및 iNOS 발현이 증가되고, 이 증가현상이 고농도의 포도당에 의해 억제되는데 이 작용이 protein kinase C (PKC) 활성에 기인한다고 하였고, Li 등은 lipopolysaccharide에 의한 \(\mathrm{NO}\)의 생성에 PKC의 역할이 큰 것으로 보고하였다. 본 실험은 PKC를 활성화시키는 상태를 지속하면 야기되는 세포 내 변화가 iNOS 생성에 영향을 주는지 검토하기 위하여, 혈관평활근세포에 PKC 활성제인 phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)로 전처리하여 interleukin-1\(\beta \)에 의한 \(\mathrm{NO}\)생성 및 RT-PCR을 이용하여 iNOS발현 여부 관찰을 실시하였다.
<h1>서 론</h1> <p>혈관내피세포에 혈관평활근을 이완시킬 수 있는 물질(endothelium-dependent relaxing factor, EDRF)의 발견으로 acetylcholine 및 histamine에 의한 혈관이완작용을 설명할 수 있게 되었을 뿐 아니라, 이 두 약물은 EDRF를 유리시키는 중요한 실험약물로 많이 이용되어 지고 있다. EDRF는 불안정한 산화질소(nitric oxide, NO)라는 것을 알게 되었고, 생체 내에서 생리학적 및 병리학적으로 중요한 역할을 담당하는 오타코이드(autacoid)의 일종으로 분류되어 있다. 이 물질은 신경, 심혈관 및 면역계의 다양한 생리학적반응을 나타내는 매개인자로서의 역할을 하며, 자간전증(preeclampsia), 고혈압, 폐혈성 충격(septicshock), 동맥경화증, 혈소판 유착과 응집억제작용 등과도 관련이 있다. iNO는 nirtric oxide synthase (NOS)에 의해 arginine으로 부터 생성되는데, 이 NOS는 칼슘이온 농도에 의존성을 가진 constitutive형(cNOS)과 lipopolysaccharide 및 cytokine 등에 의하여 활성화되는 inducible형(iNOS)이 있다. iNOS는 인체 간세포, 혈관세포, 인체 성상신경묘 세포, 등에는 정상적으로 존재하지 아니하나, 이들 세포가 interleukin-1 beta (IL-1 \( \beta \) )에 의해 활성화되면 \(\mathrm{NO}\)가 생성되어진다고 한다. 또한 천식, 류마치스성관절염, 간경화증 등의 질환에 \(\mathrm{NO}\)가 많이 생성된다는 점은 iNOS발현과 관련되고 있음을 의미한다.</p> <p>Muniyappa 등은 혈관 평활근세포에서 IL- \( 1 \beta \) 투여에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \)생성증가 및 iNOS 발현이 증가되고, 이 증가현상이 고농도의 포도당에 의해 억제되는데 이 작용이 protein kinase C (PKC) 활성에 기인되는 것 같다고 하였고, Li 등은 lipopolysaccharide에 의한 \(\mathrm{NO}\)의 생성에 PKC의 역할이 큰 것으로 보고하였다. 이는 PKC활성이 iNOS 발현에 상반되는 작용을 나타낼 수 있다고 본다. 즉 IL-1 \( \beta \), TNF (tumor necrosis factor) \( \alpha \) 와 IFN (interferon) 등과 같은 cytokine에 의한 iNOS발현은 TGF (transforming growthfactor) \( \beta \) , angiotensin, PKC, IL-10 등에 의해 억제된다고 한다. 또한 macrophage (대식세포)나 간세포에서 PKC활성제인 phorbol ester가 \(\mathrm{NO}\)생성을 촉진 한다고 하였으나, 사구체간질세포에서 IL- \( \beta \)에 의하여 야기되는 \(\mathrm{NO}\)생성은 PKC활성에 의하여 억제된다고 하였다. 이는 PKC의 작용이 세포종류에 따라 iNOS발현에 촉진적, 또는 억제적으로 반응할 수 있으며, 동일 세포라 할지라도 여러 가지 PKC 이성효소가 있을 경우, 각 이성효소의 활성상태의 변화에 의하여 iNOS발현에 영향을 줄 수 있을 것이다. 특히 혈관평활근세포에는 여러 가지의 PKC이성효소가 있어 혈관이완작용이나 수축작용이 야기될 수 있을 것이다.</p> <p>본 실험은 PKC를 활성화시키는 상태를 지속시켰을 때 야기되는 세포 내 변화가 iNOS 생성에 영향을 줄 수 있는지를 검토하기 위하여, 혈관평활근세포에 PKC 활성제인 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 로 전처리하여 interleukin-1 \( \beta \) (IL-1 \( \beta \) )에 의한 NO생성 및 RT-PCR을 이용하여 iNOS발현 여부를 관찰하였다.</p>