NAG-1은 Baek 등이 최초로 항암유전자로 보도한 유전자로, 다양한 NSAIDs와 파이토케미칼에 의해 발현이 증가하여 다양한 생리활성 기능을 갖는 것으로 알려져 있다. 그러나 capsaicin에 의한 NAG-1 유전자의 발현에 대한 연구는 미흡하다. 본 연구에서는 capsaicin 처리된 샘플에서 NAG-1 단백질 발현을 확인하기 위해 NAG-1 antibody를 사용하여 Western blot analysis를 수행하였고, capsaicin의 농도가 증가할수록 NAG-1 단백질의 발현이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.
<p>NAG-1유전자는 Baek 등에 의해 처음 보고된 항암유전자로서, 여러 가지 Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs (NSAIDs)와 파이토케미칼에 의해 발현이 증가되어 여러 가지 생리활성 기능을 가지는 것으로 보고되었다. 그러나 capsaicin에 의한 NAG-1유전자의 발현 및 발현조절에 관한 보고는 아직까지 없다. DDIT3와 GADD45A 유전자는 nonivamide (pseudocapsaicin)에 의해 유전자 발현이 증가되고, DDIT3 유전자는 세포 사멸과 관련이 있다는 보고가 있었다. 마지막으로 PCK2 유전자는 gluconeogenesis에 관련한 효소로서, 아직까지 capsaicin에 의한 발현과 조절에 대한 보고는 없다.</p> <h2>RT-PCR과 Western blot analysis를 통한 microarray 실험 결과의 검증</h2> <p>DNA microarray 실험 결과를 검증하기 위하여 2 배 이상 증가되는 유전자 중 4 개 NAG-1, DDIT3, GADD45A, PCK2 를 선택하여 RT-PCR을 수행하였다. Fig. 2에서 보는 바와 같이 모든 유전자의 발현이 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 의 capsaicin에 의해 up-regu-lation 되는 것을 확인할 수 있었고, 반면에 control로 사용한 GAPDH 유전자의 발현 변화는 관찰되지 않았다.Capsaicin에 의한 NAG-1의 발현을 단백질 수준에서 확인하고자, 대장암 세포주 HCT116에 capsaicin을 농도별 \( (0,25 \), \( 50,100 \mu \mathrm { M } ) \) 로 24 시간 동안 처리하였다. 처리한 샘플에서 NAG-1 단백질의 발현을 확인하기 위하여 NAG-1 antibody를 이용하여 Western blot analysis를 수행한 결과, capsaicin의 처리 농도가 증가됨에 따라 NAG-1 단백질의 발현이 농도 의존적으로 증가됨을 확인할 수 있었다.</p> <h2>Capsaicin에 의한 tumor suppressor gene p53의 발현</h2> <p>대장암 세포주에서 capsaicin에 의한 전사조절인자인 p53 유전자의 발현을 확인하고, 또한 p53 유전자의 조절하에 있는 전사조절 대상을 확인하는 것은 p53의 세포사멸과 capsaicin에 의한 항암 기전을 이해하는데 매우 중요할 것으로 생각된다. Capsaicin에 의한 p53 의 발현 증가를 확인하기 위하여 대장암 세포주 HCT116에 capsaicin을 농도별 \( (0,25,50,100 \mu \mathrm { M } ) \)로 처리한 후, RT-PCR을 수행하였다. 그 결과 \( 25 \mu \mathrm { M } \) 와 50 \( \mu \mathrm { M } \) capsaicin의 처리에 의해서는 p53 유전자의 발현이 보이지 않았고, \( 100 \mu \mathrm { M } \) capsaicin의 처리에 의해서만 p53 유전자가 발현됨을 확인할 수 있었다. 또한 capsaicin에 의한 p53의 발현 증가를 정량적으로 확인하기 위하여 real-time PCR을 수행하였다.</p>