녹조의 세포벽은 셀룰로스 및 펙틴이 구성물질이나 홍조와 갈조의 세포벽은 복합 다당류 등으로 구성되어 있어 세포벽을 완전히 분해하는데 어려움이 있다. 현재 성게, 전복, 군소 등의 해산 조식동물의 소화관으로 부터 얻어진 효소 또는 해조를 분해하는 세균이 분비하는 효소를 이용하여 해조의 원형질체 분리 연구가 진행되고 있으며 조직 연화를 통한 원형질체 분리 촉진하는 papain 전처리는 효과가 거의 없는 것으로 나타났다.
<h1>고찰</h1> <p>효소처리에 의한 해조류의 원형질체 분리는 Millner et al 가 고등식물에 사용한 갆은 효소를 이용하여 녹조에서 원형질체를 분리한 것이 처음으로 보고되어져 있으며, 그 후, 같은 방법으로 녹조의 많은 종에서 성공하였다. 그러나, 홍조 및 갈조에서의 원형질체 분리는 상대적으로 쉽지 않다. 이것은, 녹조의 세포벽이 고둥식물의 세포벽 구성물질인 셀룰로스 및 펙틴을 주요 구성성분으로 하고 있는데 반하여, 홍조와 갈조의 세포벽은 고등식물과는 다른 다양한 복합 다당류등으로 구성되어 있으며 분류군 및 생활사에 따라서도 서로 다른 다당류가 주요 구성성분으로 되어 있어 세포벽을 완전히 분해하는데는 많은 어려움이 있기 때문이다. 현재까지 성게, 전복, 군소 등의 해산 조식동물의 소화관으로부터 얻어진 효소 또는 해조를 분해하는 세균이 분비하는 효소를 이용하여 해조의 원형질체을 분리하는 연구가 진행되고 있다.</p> <p>조식동물의 소화호소인 전복류의 cellulase에 대한 효능에 관한 외국의 연구로는 소수의 연구가 있다. 국내에서는 Choi et al 의 연구에서 조제한 전복 소화효소의 아세톤분말을 효소로 사용하여 오카무라돌김에서 원형질체를 분리한 바 있다. \( 25 \mathrm{mM} \) MES 완충용액 \( \mathrm{pH} 6.0,0.5 \mathrm{M} \) 만니톨을 사용하였을 때, 분리된 원형질체가 김 생체량 \( 1 \mathrm{~g} \) 당 \( 8.7 \times 10^{5} \) 개로 나타나 본 연구의 \( 10.2 \times 10^{5} \) 개와 약간의 차이를 보였다. 이러한 차이는 전복아세톤분말에 함유된 lipase와 protease 등 원형질체 세포막을 분해하는 불순물이 함유되어 있기 때문인 것으로 사료되며, 본 실험에서는 정제된 시판효소를 사용함으로서 좀더 높은 원형질체 분리수율을 얻을 수 있었다. Butter et al 은 \( \mathrm{pH} \) 가 높아질수록 원형질체의 생산이 낮아진다고 하였는데, 본 연구에서도 유사한 결과를 나타내었다. 조직 연화를 일으켜 원형질체 분리를 촉진한다고 알려진 papain 전처리는 Choi et al 그리고 Waaland et al 의 연구 결과에서 효과가 거의 없는 것으로 나타나 본 실험에서는 처리하지 않았다. Fujita and Saito 에 따르면 긴잎돌김에서 \( 4.2 \times 10^{5} \) 개가 만들어 진다고 보고하고 있어 본 연구에서와 많은 차이를 보이고 있다. 이러한 차이는 사용되어진 효소와 삼투압안정제 및 완충용액 종류를 달리하였기 때문으로 생각되어진다. Chen(1989)은 P. linearis에서 고농도의 cellulase 처리가 원형질을 생산하는데 효과석이라고 하였다.</p> <p>Fujita and Migita 은 방사무니김의 세포융합 연구에 PEG 4000 와 6000 을 사용하였으며, 본 연구에서 사용된 PEG 8000 과 비교했을때 원형질체들이 모여드는 시간과 접합시간은 거의 같았다. 이러한 PEG의 화과는 엽체의 종류와는 관계가 없는 것으로 생각된다.</p>