OVA/alum 으로 감작 유발시킨 생쥐군을 대조군 (OVA/CT)으로 사용하였으며 OVA/alum으로 감작 유발시킨 후 BSEO를 흡입시킨 생쥐군을 실험군으로 지정하여 처음 1회만 각 에센셜 오일을 5분간 흡입시킨 다음 10분 후 기도저항수치 (PenH)를 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>알러지성 천식 생쥐 모델</h2> <p>6 주령 체중 \( 20 \pm 2 \mathrm{~g} \) 의 BALB/c 마우스를 대상으로 Kung등의 방법을 수정하여 실행하였다. 인산완충생리식염수 (phosphate buffered saline, PBS)에 용해한 난알부민(OVA,chicken egg ovalbumin; Grade Ⅳ) \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 을 동일 부피의 \( 10 \% \mathrm{(w/v)}\) aluminum potassium sulfate(Alum; Sigma)와 혼합하여, 난알부민 용액을 제조하였다. 이 혼합물을 \( 10 \mathrm{~N} \mathrm{~NaOH} \)를 사용하여 \( \mathrm{pH} 6.5\)로 조정하고 상온에서 1시간 동안 방치하고 \( 750 \mathrm{G} \) 에서 5분 동안 원심분리하였다. 이 OVA/Alum 침전물을 증류수를 가하여 용해한 후 OVA\((0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) 200 \mu \mathrm{L} \) 를 실험 시작 1일에 복강 내로 주사하여 전신감작을 시켰다</p> <p>실험 시작 14일에 \( 10 \% \) chloral hydrate(Fluka, USA)로 생쥐를 마취하고 OVA\((0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) 100 \mu \mathrm{L} \) 를 기도 투여하여 면역 유발시켰다. 또한 실험 시작 21일부터 \( 250 \times 300 \times 250 \mathrm{~mm} \) 의 polycarbonate 재질 chamber(DJ-435, Daejon Inc., Republic of Korea)안에서 8주 동안, 1주일에 3회, 1회에 30분 Buxco Aerosol Delivery System(NE-CT10, Buxco Co., USA)을 이용하여 1~4주간은 \( 2.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) OVA/PBS 용액, 그리고 5~8주간은 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) OVA/PBS 용액을 aerosol화하여 분무하여 흡입시키고 12주째 살처분하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>아로마 에센셜 오일 흡입</h2> <p>본 실험에 사용한 아로마 오일은 프랑킨센스(Boswellia sacra), 캐모마일(Matricaria chamomilla), 마조람(Thymus mastichina), 버가못(Citrus bergamia), 유칼립투스(Eucalyptus globulus) 로 Tisserand(Aromatherapy Products Ltd. Brighton, England가 생산한 오일을 사용하여 beta-2 agonist 효능 실험을 수행하였고, 이 후 실험은 프랑킨센스 에센셜 오일 (Boswellia sacra essential oil; BSEO)을 대상으로 실험하였다. OVA/Alum \( (0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL}) \) 으로 전신 감작시킨 후 21일부터 8주간 \( 0.3 \% \)BSEO 를 1주일에 3회, 1회 30분씩 분무하여 흡입시켰다. 대조군에는 PBS를 동량 사용하였으며 12주째 살처분하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>실험군 지정</h2> <p>본 실험에서는 실험 1일에 alum을 PBS\((0.2 \mathrm{~g} / \mathrm{L} {} \mathrm{~KC} 1\), \( 0.2 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{~~KH}_{2} \mathrm{PO}_{4}, 8 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{~~NaC}1, 1.2 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{~Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, \mathrm{pH} 7.4\)) 에 용해한 후 \( 200 \mu \mathrm{L} \) 를 복강 주사하고, 14일에는 PBS만을 기관내 투여한 후 21일부터 8주간, 1주일에 3회, 1회 30분간 PBS만을 흡입시킨 정상 생쥐군을 음성대조군(Nr)으로 지정하였다.</p> <p>OVA/alum 으로 감작 유발시킨 생쥐군을 대조군 (OVA/CT)으로 사용하였고, OVA/alum으로 감작 유발시킨 후 지속성 베타 2 항진제로 사용되는 formoterol \( (1 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \) 을 흡입시킨 생쥐군을 양성대조군(OVA-FT)으로 사용하였으며 OVA/alum으로 감작 유발시킨 후 \( 0.3 \%\) BSEO를 흡입시킨 생쥐군을 실험군으로 지정하여 총 4군, 각 6마리로 나누어 실험하였다.</p> <h1>기도의 과민반응 측정</h1> <p>본 실험에서는 BSEO군의 폐기능 검사를 위하여 12주째 마지막 분무를 실시하고 24 시간 후에 전신 체적변동기록(Whole body plethysmographs, Biosystem XA; Buxco research system, Wilmington, NC, USA) 장비를 사용하여 Hamelmann 등의 방법에 따라 메타콜린에 의한 기도 협착을 유발시켜 기도의 과민반응(airway hyperresponsiveness; AHR)을 측정하였다.</p> <p>메타콜린(Sigma. USA) 분말을 PBS에 녹여 \( 3.125,6.25 \),\( 12.5,25,50 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 점차 증가시키면서 nebulizer로 생쥐에 흡입시킨 후, 각각의 농도에 대한 기도의 반응성을 10분간 연속적인 모니터링으로 측정하였다.</p> <p>에센셜 오일들의 beta2-agonist 효능 스크리닝은 처음 1회만 각 에센셜 오일을 5분간 흡입시킨 다음 10분 후 기도저항수치 (PenH)를 측정하였다. Penh 값은 Biosystem XA software(Buxco Research System, Wilmington, USA)를 이용하여 분석하였고, Hamelmann 등의 다음의 공식에 의하여 측정하였다.</p> <p>Penh \( = \) Pause \( \times \) PIF \( / \) PEF, Pause \( =( \) Te-Tr \( ) / T r \)</p> <p>PIF, peak inspiratory flow; PEF, peak expiratory flow; Te, expiratory time; Tr, relaxation time.</p>