본 논문에서 실험 재료는 와송의 지상부를 열풍건조, 천일건조 및 동결건조하여 에탄올로 추출한 뒤 감압농축을 하여 얻었다. 다음으로 유지에 대한 항산화력 측정을 위해 대두유 및 돈지에 와송 열풍건조 에탄올추출물을 첨가해 측정용 시료를 얻었다. 이러한 시료를 바탕으로 와송 추출물의 항산화능 측정은 thiocyanate법 및 TBARS 측정법으로 측정되었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>와송(Orostachys japonicus A. Berger)은 경남 산청 지역의 산에 자생하고 있는 것을 2006년 7월부터 3개월간 채취하여 와송의 지상부를 열풍건조, 천일건조 및 동결건조하였다. 열풍건조는 열풍건조기 \( (\mathrm{L} \times \mathrm{W} \times \mathrm{H}=540 \times 540 \times 760 \mathrm{~mm} \) CF-21WF, Jeiotech, Korea)를 사용하여 \( 5 \mathrm{~m} / \mathrm{hr} \) 의 유속으로 공기순환하여 내부온도 \( 70 \sim 80^{\circ} \mathrm{C} \) 으로 유지하여 7~9시간, 천일건조는 22 \( \sim 25^{\circ} \mathrm{C} \) 의 실온에서 8~10일간 건조시켰고, 동결건조는 동결 건조기(PVTFD 100R, Ilshinlab, Korea)를 사용하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 진공도 \( 10 \mathrm{~mm}\ Torr\) 의 조건으로 동결건조하였다. 건조된 와송 \( 100 \mathrm{~g} \) 에 10배의 증류수 및 \( 95 \% \) 에탄올을 각각 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕 상에서 3시간 동안 환류냉각하면서 2회 반복 추출한 후 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 감압농축하여 완전 건조물을 얻었으며, \( -40^{\circ} \mathrm{C} \) 동결고에 보관해 두고 실험에 사용하였다.</p><h2>유지에 대한 항산화력 측정용 시료의 제조</h2><p>시판 대두유(CJ Corp., Korea) 및 돈지(동광농산(주), Korea) 각 \( 100 \mathrm{~g} \) 에 와송 열풍건조 에탄올추출물을 각각 \(0.1, 0.5,1.0 \mathrm{~g} \) 의 농도로 첨가한 후, 저장 시료는 \( 60 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 의 항온기에 4주간 보관하면서 1주일 간격으로, 가열저장 시료는 \( 180 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 의 oil bath에서 보관하면서 12,24,36 및 48시간에 일정량의 시료를 취하여 각 분석에 사용하였다. 이때 와송 추출물을 첨가하지 않은 유지를 대조군(control)으로 하였으며, 시료 대신에 \( 0.02 \mathrm{~g} \) 의 BHT를 유지에 첨가한 것을 positive control로 하여 동일한 방법으로 분석하여 비교하였다.</p><h2>와송 추출물의 항산화능 측정</h2><p>와송 추출물의 항산화능은 linoleic acid emulsion 상에서 thiocyanate법 및 oil emulsion상에서 TBARS 측정법으로 평가하였다. Thiocyanate법은 Osawa 와 Kim 등의 방법에 따라 시료 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 linoleic acid emulsion 및 \( 0.2 \mathrm{M} \) phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.0\)) \( 2 \mathrm{ml} \) 를 흔합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1일 및 7일 동안 저장한 후 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 취하여 \( 75 \% \) 에탄올 \( 4.7 \mathrm{ml} \), \( 30 \% \) ammonium thiocyanate \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 차례로 첨가한 후 10분간 실온에 정치시킨 후 \( 500 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 시료 대신에 linoleic acid emulsion을 첨가하였으며, 항산화 활성은 시료 첨가 전.후의 흡광도 비로 나타내었다.</p><p>TBARS 측정 법에 따른 항산화력 측정은 Buege와 Aust의 방법에 따라 maleic acid buffer ( \( \mathrm{pH} 6.5\)), Tween 20, \( 0.1 \) \( \mathrm{N} \ \mathrm{HCl} \) 로 제조한 oil emulsion \( 0.5 \mathrm{ml} \), 금속이온 \( \left(\mathrm{FeCl}_{2}\right. \) 및 \( \left.\mathrm{CuSO}_{4}\right) 0.1 \mathrm{ml} \) 및 시료 추출물 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 최종 반응물을 \( 1 \mathrm{ml} \) 로 하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 동안 반응시켰다. 여기에 \( 7.2 \% \) BHT \( 50 \mu 1 \)와 trichloroacetic acid/thiobarbituric acid (TCA/TBA) 용액을 \( 2 \mathrm{ml} \) 가하고 15분간 가열 후 냉각한 다음 \(3,000 rpm\)에서 15 분간 원심분리한 상층액을 \( 531 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. TBARS값은 1당 반응 혼합물에 대해서 \(\mathrm{mg}\) malondialdehyde (MDA)로 표시하였다.</p>