췌장 조직의 면역 조직학적 관찰을 위하여, Duncan's multiple range test를 기준으로 하여, 실험 동물의 췌장을 이용하여 혈청 분석, 경구 당내성 검사를 이용한 혈당 측정, 뇨당 측정을 수행하였다.
<h2>분석 시료의 조제</h2><p>실험 식이 투여 4주 후 최종일에 실험 동물을 12시간 이상 절식시킨 후 디에틸 에테르로 가볍게 마취시켜 복부 대동맥으로부터 채혈하였다. 얻어진 혈액은 약 30분간 실온에서 방치시킨 후 \(3,000 \mathrm{rpm} \)에서 15분간 윈심분리 하여 혈청을 얻어 혈청생화학 분석에 사용하였다. 췌장은 적출 한 후 냉각된 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 충분히 세척하고 물기를 제거한 다음 지방 등을 깨끗하게 정리하여 무게를 측정하고, 조직 검사에 제공하였다.</p><h2>혈청 생화학적 분석</h2><p>인슐린 농도는 실험 최종일의 혈청에서 TIA법(면역현탁 침전법)에 따라 측정하였고, 최근 몇 주일 동안의 혈당 조절 능력을 반영해주는 검사 지표인 fructosamine 농도는 혈액 분석전문 기관인 Neodin의학연구소(Seoul, Korea)에 의뢰하여 측정하였다.</p><h2>혈당 농도 측정</h2><p>실험동물의 혈당은 비공복 시(non-fasting blood glucose) 및 공복 시(fasting blood glucose)로 나누어서 측정하였다. 비공복시 혈당은 실험시작과 실험식이 투여 후 1주 간격으로 꼬리로부터 전혈을 이용하여 혈당 측정계로 측정하였다. 공복 시 혈당 측정은 실험 식이를 마지막 투여한 후 12시간 이상 절식시킨 상태에서 해부 시 얻은 혈액으로 측정하였다.</p><h2>경구 당내성 검사(Oral glucose tolerance test, OGTT)</h2><p>실험식이 투여 3주째에 12시간 이상 절식시킨 후 꼬리정맥에서 채혈하여 공복시 혈당을 측정한 후 glucose \( (1 \mathrm{~g} / \mathrm{kg} \) B.W.) 용액을 경구투여기로 투여하고 30, 60, 90, 120 및 150분에 꼬리정맥에서 채혈하여 혈당 측정계(SureStep Plus\( { }^{\mathrm{TM}} \), LIFESCAN, Johnson & Johnson, USA)를 이용하여 혈당을 측정하였다.</p><h2>뇨당 측정</h2><p>실험식이 투여 최종 전일에 케이지부터 수집된 뇨로부터 뇨당 농도를 Hexokinase/G6P-DH assay법에 의해 조제된 시판 kit (Boehringer Mannheim, Germany)로 측정하였다.</p><h2>췌장 조직의 면역 조직학적 관찰</h2><p>췌장 조직을 적출하여 \( 4 \% \)의 paraformaldehyde를 사용하여 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 췌장 조직으로부터 \( 12 \mu \mathrm{m} \) 두께의 조직절편을 작성하고, 이들 절편을 free-fat slide에 부착시켰다. 이들을 \( 33^{\circ} \mathrm{C} \) 조직 신전기에서 2시간 동안 조직을 말린 후 이들 슬라이드 표본을 Harris hematoxlyin에 2분간 염색한 후 흐르는 수돗물에 수세하였다. \( 1 \% \mathrm{~HCl} \)에 1초간 침적 시켰다가 재빨리 꺼내 흐르는 물에 수세한 후, 암모니아수로 30초간 중화시킨 후 다시 흐르는 물에 5분간 수세하였다. 탈수과정으로 \(95\%\) alcohol에 2회에 걸쳐 2분씩 반응시킨 후, \(100\%\) alcohol에 2회에 걸쳐 2분씩 반응시켰다. 투명 과정으로 Xylene 2단계를 2분씩 거친 후, 통상적인 방법에 따라 영구 표본을 제작하여 광학현미경으로 검경한 후 사진을 촬영하였다.</p><h2>통계 처리</h2><p>실험으로부터 얻어진 결과치는 one-way ANOVA에 의한 평균치와 표준오차(mean\( \pm \)S.E.)로 표시하고, 각 실험 군간의 유의성은 \(p<0.05\) 수준에서 Duncan's multiple range test로 검정하였다.</p>