ethanol을 추출용매로 하여 phenol성 물질의 용출량을 측정한 결과 60\( \% \) ethanol 농도에서 용출량이 가장 높게 나타났다. H. pylori 평판 최적배지 plate에서 항균활성을 측정한 결과 0 ~ 30\( \% \) ethanol 추출물에서 clear zone이 나타나지 않았으며 40\( \% \) ethanol 추출물 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 을 주입하였을 때부터 13mm의 저해환이 나타나기 시작하였고, 60\( \% \) ethanol 추출물 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 를 주입할 때 가장 높은 항균력 22mm을 보였다. 진달래꽃 \( 500 \mathrm{~g} \) 을 60\( \% \) 에탄올로 추출한 후, Sephadex LH-20 column chromatography를 이용하여 ethanol : distilled water \( (1: 6, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 로 용출시키고, 용출액은 silica TLC plate를 이용하여 전개 후 10\( \% \mathrm{~H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 로 발색시켜 확인한 결과 A, B, C, D, E, F 로 6 개의 분획물을 얻었으며, fraction D에서 H.pylori균에 대한 억제효과를 보였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Ethanol 농도에 따른 phenol성 물질의 용출량</h2> <p>진달래꽃 추출물의 추출 조건을 확립하기 위하여 \( 0 \sim 100 \% \)까지 다양한 농도의 ethanol을 추출용매로 하여 phenol성 물질의 용출량을 측정하였다. 그 결과 Fig. 1 과 같이 \( 60 \% \) ethanol 농도에서 용출량이 가장 높게 나타났다. 이는 가든세이지의 phenol성 물질의 추출수율이 \( 60 \% \) 에탄올에서 가장 높았다는 Cho 등의 보고와 유사하였다.</p> <h2>Ethanol 농도에 따른 진달래꽃 추출물의 H. pylori 항균활성 측정</h2> <p>H. pylori 평판 최적배지 plate에서 항균활성을 측정한 결과 Table 1에서와 같이 \( 0 \sim 30 \% \) ethanol 추출물에서 clear zone이 나타나지 않았으며 \( 40 \% \) ethanol 추출물 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 을 주입하였을 때부터 \( 13 \mathrm{~mm} \) 의 저해환이 나타나기 시작하였으며, \( 60 \% \) ethanol 추출물 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 를 주입하였을 때 가장 높은 항균력 \( (22 \mathrm{~mm}) \) 을 나타내었다.</p> <h2>진달래꽃 추출물의 정제 및 분획물의 항균효과</h2> <p>진달래꽃 \( 500 \mathrm{~g} \) 을 \( 60 \% \) 에탄올로 추출한 후, Sephadex LH-20 column chromatography (Pamarcia. Co)를 이용하여 ethanol : distilled water \( (1: 6, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 로 용출시키고, 용출액은 silica TLC plate를 이용하여 전개시킨 후 \( 10 \% \mathrm{~H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 로 발색시켜 확인한 결과 Table 2와 같이 A, B, C, D, E, F 로 6 개의 분획물을 얻었으며, fraction D에서 H. pylori균에 대한 억제효과가 확인되었다. 항균활성성분인 D fraction을 모아 농축, 동결건조 한 후 ethyl acetate, butanol, aqueous를 이용하여 용매 분획한 결과 Table 3, Fig. 3과 같이 ethyl acetate 층과 butanol층에서 각각 \( 14,18 \mathrm{~mm} \) 의 H. pylori균에 대한 저해환을 나타내었다. 이 분획물들을 \( \mathrm{CHCl}_{3}: \mathrm{BuOH}: \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}: \) Acetic acid : \( \mathrm{MeOH}=50: 30: 10: 5: 15 \) 전개용매 조건으로 thin layer chromatography를 한 결과 ethyl acetate와 butanol 층에서 동등한 RT값을 나타내는 물질이 활성 물질인 것으로 추정되었으며, butanol 층의 항균활성이 가장 높아 butanol 층을 Sephadex LH 20 column으로 \( 100 \% \) ethanol에서 \(0\%\)까지 추출 용매로 하여 gradient로 elution 하였다. 그 결과 Fig. 4 와 같이 fraction 1에서 fraction 5까지 5가지 분획물을 얻을 수 있었으며, 각 분획물을 농축하여 항균활성을 측정한 결과 fraction 3 과 fraction 4 에서 항균활성을 나타내어 이 두 분획물을 선택하여 구조적 이성질체 phenol류 분리가 용이한 MCI-gel을 이용하여 reverse phase type인 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \rightarrow \mathrm{EtOH} \) 로 농도를 증가시키며 용출한 결과 compound A, B 및 C 등 3 종류의 com-pound를 분리하였으며, \( \mathrm{CHCl}_{3}: \mathrm{BuOH}: \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) : Acetic acid \( : \mathrm{MeOH}=50: 30: 10: 5: 15 \) 전개 용매 조건으로 thin layer chro-matography를 한 결과 Fig. 5 와 같이 단일 물질로 확인되었다.</p>