덩굴용담의 종자를 표면살균하기 위해 종자를 수돗물과 에탄올, 멸균 증류수로 세척과 소독한 후 적절한 배양환경에서 배양한다. 배양된 종자 중 적절한 배지를 이용한 실험으로 MS 배지를 기내배양배지로 선정한다. MS 배지를 활용하여 기외삽목을 실시한 줄기 증식 관련 실험을 실행한다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>표면살균</h2><p>제주도 난대림연구소에서 분양 받은 덩굴용담의 종자를 60 개 정도 \( 100 \mathrm{ml} \) 삼각후라스크에 넣은 다음 Tween 20을 \(2\sim 3\)방울 첨가 후 흔들어 주면서 30분 정도 수돗물로 세척하였다. 다음 무균상 (clean bench)에서 \( 70 \% \) 에탄올로 1분간 세척한 후 다시 \( 2 \% \) 차아염소산나트륨( \( \mathrm{NaClO}) \) 용액을 종자가 잠기게 붓고 Triton X-100 용액 \( 2 \sim 3 \) 방울 첨가하여 10분 정도 흔들어 주면서 소독하였다. 그 후 소독액은 버리고 멸균 증류수로 5회 세척한 다음 \( 1 / 2 \) MS배지 (Murashige and Skoog 1962)에 치상하였다. 배지의 탄소원으로는 \( 3 \% \) sucrose, 경화제로는 \( 0.3 \% \) gelrite를 사용하였다. 배지는 조제 후 \( \Phi 2.5 \times 15 \mathrm{~cm} \) 크기의 유리 시험관에 \( 30 \mathrm{ml} \) 정도 분주하여 상온에서 하롯밤 정도 굳힌 후 사용하였다. 배양환경은 \( 25 \pm 1{ }^{\circ} \mathrm{C}\),\(40 \mu \mathrm{M} \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) 의 냉백색 형광등하에서 16 시간 광배양 하였고, 배양 5 주 후 발아율을 조사하였다. 이하의 실험에서 배양환경은 동일하게 유지하였다.</p><h2>적정 배지선정</h2><p>적정배지의 선정을 목적으로 종자 유래 유식물체의 신초를 절편으로 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962), MS 배지의 염류를 1 / 2 로 반감시킨 1 / 2 MS 배지, GD 배지 (Gresshoff and Doy 1972), SH 배지(Schenk and Hildebrandt 1972), WPM 배지 (Lloyd and McCown, 1980) 및 DKW 배지 (Driver and Kuniyuki 1984)를 사용하여 줄기의 증식효과를 비교하였다. 배지의 탄소원으로는 \( 3 \% \) sucrose를, 경화제로는 \( 0.3 \% \) gelrite를 사용하였다.</p><h2>증식 및 발근유도</h2><p>배지 시험을 통해 MS 배지를 덩굴용담의 기내배양 적정배지로 선정하였다. MS 배지를 기본으로 줄기 증식에 미치는 BA, kinetin 및 thidiazuron (TDZ) 농도별 효과를 조사하였다. 줄기의 신장을 촉진시키기 위하여 gibberellic acid (GA3)의 농도별 \( (0,0.5,2.0,5.0,7.0 \) 및 \( 10.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L}) \) 로 배지내 처리하였다. 줄기의 증식과정 중 특별한 처리 없이도 발근이 잘 되기 때문에 기내 발근시험은 필요치 않았다. 다만, 토양이식 등 배양과정의 성력화를 위해 기외삽목을 실시하였다. 기외삽목은 \( 3 \sim 5 \mathrm{cm} \)으로 자란 줄기를 택하여 기부에 \( 100 \mathrm{ppm} \) IBA 를 탈크 (Talc)에 섞어 반죽의 형태로 기부에 처리하고, 인공상토 (peatmoss + perlite \( 1: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v} \) )에 삽목 하였다. 삽목 후 충분히 관수하고 배양실에서 6주 간 순화하였다. 배양실은 온도 \( 24 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 와 광도 \( 20 \mu \mathrm{M} \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) (16시간 명배양)로 유지하였다.</p>