절편체는 미숙배를 사용하여 배발생 조직을 유도하고, 수종에 따라 배지를 사용하며, 생장조절제를 처리하여 배발생 조직을 유도하고, 이를 계대배양하여 증식하고, 오옥신을 제거하여 체세포배를 유도하고, ABA를 첨가하여 발아를 유도하는 과정을 거친다. 수종에 따라 polyethylene glycol을 처리하거나 아미노산을 첨가하기도 한다.
<p>절편체는 대부분 유시성 (juvenility)이 높은 미숙배로부터 배발생 조직을 유도하고 있다. 절편으로 미숙배를 사용하는 것은 침엽수 혹은 활엽수종에서 동일한 현상으로 나타나지만 기내배양이 까다로운 침엽수종에 있어서는 미숙배의 발달시기 중 특정한 기간에만 배발생이 가능한 time window가 있다. 따라서 수분과 수정이 된 다음 일정한 시기별로 배양을 실시하여 배발생이 가능한 적정시기를 찾아야 한다. 한편 활엽수종에 있어서도 절편은 배발생능이 높은 미숙배를 사용하고, 수종에 따라서는 화기 조직이나 유묘의 신초를 사용하고 있다. 두릅나무는 배발생능이 좋아서 유묘의 신초나 동아 (winter bud)로부터 배발생이 가능하였으며, 최근에는 약 \(50 \) 년생 모수의 근맹아지로부터 캘러스 및 배발생 캘러스를 유도하여 묘목을 생산한 바 있다. 배지는 주로 MS 배지를 사용하고 있으며, 백합나무에서는 \(1/2 \) LM 배지를, 그리고 소나무 및 리기테다소나무에서는 \( 1 / 2 \) Lepoivr 혹은 P6 배지를 사용하였다. 적정배지는 수종, 유전자형, 배양절편에 따라 다를 수 있다. 배발생 조직의 유도에 있어 생장조절제의 처리는 필수적이다. 대 부분의 활엽수종은 2,4-D의 단독처리가 주효하며, 수종에 따라서는 저농도의 싸이토키닌을 혼용 처리한다. 멀구슬나무는 특이하게 BA 단독처리로 배발생 조직이 유도되었으며 (Moon and Kim 1996), 상수리나무의 미숙배로부터 배발생조직의 유도는 BA와 IBA의 혼용처리로 가능하였다 (Kim et al. 1997).</p> <p>일단 배발생 조직이 얻어지면 계대배양을 통해 배발생능이 있는 조직만을 유지, 증식하는 것이 매우 중요하다. 이러한 배발생 조직은 세포계통에 따라 체세포배의 유도, 발아 및 식물체 형성이 다르게 나타나므로 다른 세포주와 섞이지 않도록 주의 깊게 다루어야 한다. 배발생 조직이 증식된 다음의 단계는 이러한 조직으로부터 체세포배를 유도하는 것이다. 일반적으로는 배발생 조직의 유지에 첨가시킨 오옥신을 제거한 기본배지로 옮겨 체세포배를 유도하지만 침엽수종의 경우 고농도의 ABA 를 첨가하는 것이 보통이다.</p> <p>ABA 는 체세포배의 조기발아를 억제하고, 균일한 체세포배를 유도시켜 준다. 많은 경우 체세포배는 자엽이 붙어있는 것, 단자엽 혹은 다자엽으로 형성된 것, epicotyl이 형성되지 못한 것 등이 나타나는바 \( \mathrm { ABA } \) 의 처리는 이러한 기형의 체세포배 유도를 억제한다. 또한 ABA 의 처리와 함께 보통 고농도의 삼투압제를 사용하고, 기본배지에 glutamine 등의 아미노산을 첨가하기도 한다. 수종에 따라서는 polyethylene glycol (PEG)를 첨가하며 PEG \(4000 \)으로 농도범위 \(7 \% \)~ \( 10 \% \)을 주로 사용한다. 체세포배가 유도되면 다음의 단계는 체세포배를 정상적으로 발아시켜 식물체로 유도하는 것이다. 활엽수종의 체세포배, 특히 오갈피류의 체세포배 발아시에는 \( \mathrm { GA } _ { 3 } \) 의 처리가 효과적으로 보고되고 있으며, 음나무 및 땃두릅나무의 체세포배발아에 있어서도 \( \mathrm { GA } _ { 3 } \) 처리가 필수적이었다(Fig. 1H).</p>