생장조절제 종류에 따른 캘러스 형성을 조사하기 위해 MS 기본배지에 다양한 조합의 오옥신류, 2,4-D, NAA, 및 BA를 사용하여 배지를 조제하였다. 배양은 일정한 온도와 광도 조건에서 이루어졌으며, 이후 8주 동안 배양한 캘러스에서 신초와 뿌리의 성장을 조사하였다. 또한, 등근잎꿩의비름에 대해 2,4-D와 NAA를 BA와 혼합한 배지에서 화뢰와 잎 절편체를 이용하여 캘러스 분화양상을 조사한 결과, 걸편체에 따라 캘러스의 분화 시기에 차이가 있음을 확인하였다.
<h2>캘러스 유도</h2> <p>생장조절제의 종류에 따른 캘러스 형성을 조사하기 위하여, MS 기본배지에 오옥신류의 \( 1.0,2.0,3.0 \mathrm { mg/L } \) 2,4-D와 1.0, \( 2.0 \mathrm { mg/L } \) NAA, 그리고 사이토카이넌류인 \( 0.1,1.0 \mathrm { mg/L } \) BA의 단독처리와 이들 농도의 2,4-D와 NAA를 BA와 흔합처리한 18종의 배지를 이용하였다. 화뢰는 세로로 2등분하여 절단면이 배지에 닿도록 접종하였고, 잎은 \( 5 \times 5 \mathrm { ~mm } \) 크기로 잘라 앞면이 위쪽이 되도록 접종하였다. 배양조건은 \( 25 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 서 50 \( \mu \mathrm { mol } \cdot 1 \mathrm { ~m } ^ { -2 } \cdot \sec ^ { -1 } \) 광도 (16시간 광주기)로 조절되는 배양실에서 배양하였다. 캘러스의 유도율은 절편을 각 배지에 접종하고 4주 후에 캘러스가 유도된 화뢰와 잎의 수를 조사하여 전체 치상 수에 대한 백분율로 나타내었다.</p> <h2>식물체 재분화</h2> <p>유도된 캘러스를 MS 기본고체배지에 \( 1.0,2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) \( 2,4- \mathrm { D } , 1.0,2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { ~NAA } , 1.0,2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) LAA, \( 1.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) BA 의 단독처리와 이들의 혼합처리 한 10종의 배지를 조제하여 각 절편 유래 캘러스의 증식 및 재분화 식물체를 유도하였다. 4주 간격으로 계대배양하면서 각 배지에서 8주간 배양한 후에 캘러스로부터 유도된 신초와 뿌리 수를 조사하였다. 배양조건은 \( 25 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 50 \mu \mathrm { mol } \cdot \mathrm { m } ^ { -2 } \). \( \sec ^ { -1 } \) 광도 (16시간 광주기)로 조절되는 배양실에서 배양하였다. 재분화된 식물체는 생장조절제를 첨가하지 않은 MS 기본배지에 읆겨 배양 후 버미큐라이트와 펄라이트를 2 : 1로 혼합한 인공배양토로 채운 화분에 이식하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>캘러스 형성에 미치는 생장조절물질의 영향</h2> <p>등근잎꿩의비름 (Sedum rotundifolium)의 캘러스 형성에 미치는 생장조절물질의 영향을 구명하기 위하여, 화뢰와 잎 절편체를 2,4-D와 NAA를 BA와 혼합조제 한 MS 배지에 치상하여 캘러스 분화양상을 조사한 결과, 걸편체에 따라서 캘러스의 분화시기에 차이를 보였다. 화뢰 절편체는 배양 1주일 후부터 화경을 비롯하여 화뢰 전체가 팽대해지기 시작하여 2주일 후에는 짙은 녹색의 축촉하고 부드러윤운 캘러스가 형성되었으나(Fig. 1A), 잎 절편체의 경우에는 치상된 절편체의 절단면이 배양 10일 후부터 팽대되기 시작하여 30 일경에는 잎 절편체의 절단면으로부터 부스러지기 쉬운 캘러스롤 형성하였다 (Fig. 1B). 또한 잎 절편체의 경우 화뢰 절편체에 비하여 전체적으로 캘러스의 유도율이 높았다. 참시호의 경우에서도 잎과 화뢰의 유조직에서 캘러스의 유도가 잘 되었으나, 유엽에서 \( 65 \% \)로 화뢰의 \( 44 \% \)보다 양호하였다.</p>