ABTS 라디칼 소거 평가는 ABTS solution으로 종자 추출물을 20배 희석하여 microplate reader로 734nm에서 반응액의 흡광도를 측정했다. 무첨가구는 ABTS solution과 DMSO를 섞어 흡광도를 측정했다. 이 후 ABTS 라디칼 소거능을 계산한 후 \( \mathrm { EC } _ { 50 } \)값을 구했다. FRAP 평가는 FRAP solution으로 종자 추출물을 21배 희석하여 microplate reader로 593nm에서 반응액의 흡광도를 측정했다. FRAP value는 표준물질로 ferrous sulfate heptahydrate를 희석하여 검량선을 만들고 \( \mathrm { Fe } ( \mathrm { II } ) \) 의 용량으로 나타내었다.
<h2>ABTS 라디칼 소거활성 평가</h2> <p>2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) ABTS radical 소거활성은 Miller 등의 연구를 변형하여 평가하였다. 증류수 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 에 \( 140 \mathrm { mM } \) potassium persulfate \( \left ( \mathrm { K } _ { 2 } \mathrm { ~S } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 8 } \right . \), Acros oragnics, Geel, Belgium) \( 88 \mu \mathrm { L } \) 를 가한 혼합 수약에 ABTS diammonium salt (Sigma Chemical Co.) \( 20 \mathrm { mg } \) 을 넣어 \( 7.1 \mathrm { mM } \) ABTS 수용액을 만들어 암실에 14-16시간 방치시킨 후, 이를 에탄올로 희석하여 \( 734 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정한 흡광도 값이 \( 0.70 \pm 0.02 \) 가 되도록 조절한 ABTS solution을 시약으로 사용하였다. 종자 추출물 10 \( \mu \mathrm { L } \) 와 ABTS soultion \( 190 \mu \mathrm { L } \) 를 96-well plate에 분주한 후 2분 30초간 반응시킨 후 microplate reader로 \( 734 \mathrm { ~nm } \) 에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. 무첨가구는 종자 추출물을 처리하지 않고 추출물 희석 용매인 \( \mathrm { DMSO } \) 를 첨가한 것으로 하여 위와 같은 방법으로 흡광도를 측정하였다. ABTS 라디칼 소거활성은 아래의 식에 따라 백분율로 나타낸 후 \( 50 \% \) 의 소거능을 나타내는 종자 추출물 농도인 \( \mathrm { EC } _ { 50 } \) 값을 구하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid (Fujifilm Wako pure chemical co., Osaka, Japan)을 사용하였다.</p> <p>APTS 라디칼 소거능( \%) \( = \left (1- \frac {\text { 추출물 첨가구의 흡광도 } } {\text { 무첨가구의 흡광도 } } \right ) \times 100 \)</p> <h2>Ferric Reducing Antioxidant power (FRAP) 평가</h2> <p>FRAP 평가는 Molina-Díaz 등의 연구[23]를 변형하여 평가하였다. FRAP solution은 \( \mathrm { pH } 3.6 \) 의 \( 300 \mathrm { mmol } / \mathrm { L } \) Acetate buffer (Samchun, Pyeongtaek-si, Korea)와 \( 40 \mathrm { mmol } / \mathrm { L } \mathrm { HCl } \) (Fujifilm Wako Pure Chemical Co., Osaka, Japan)에 녹인 \( 10 \mathrm { mM } / \mathrm { L } \) 2,4,6-tris(2-pyridyl)-S-triazine (TPTZ, Sigma Chemical Co.)와 \( 20 \mathrm { mM } / \mathrm { L } \) ferric chloride (Sigma Chemical Co.)를 10:1:1 비율로 실험 직전에 만들어 사용하였다. 종자 추출물 \( 10 \mu \mathrm { L } \) 와 FRAP solution \( 200 \mu \mathrm { L } \) 를 혼합한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4분간 반응시긴 후 microplate reader로 \( 593 \mathrm { ~nm } \) 에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. FRAP value는 표준물질로 ferrous sulfate heptahydrate (Sigma Chemical Co.)을 희석하여 검량선을 만들어, \( \mathrm { Fe } ( \mathrm { II } ) \) 의 용량으로 나타내었다.</p>