그림 2를 통해 볼 수 있듯이, \(20 \mu \mathrm{M}\)의 caffeic acid는 T-47D 세포에서 unmethylated p16 유전자를 대략 \(100\%\) 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 동일한 농도인 \(20 \mu \mathrm{M}\)의 chlorogenic acid 또한 T-47D 세포에 6일 동안 처리하여 관찰한 결과, 비슷한 수준으로 unmethylation 상태의 p16 유전자가 증가하였다. 그러나 이들은 DAC만큼의 효과를 내지 못했으나, coffee 폴리페놀이 DNA demethylation을 유도하는데 있어서 중요한 효과를 나타냈다는 것을 알 수 있다. 또한, 녹차 추출물인 EGCG를 T-47D 유방암 세포에 2일 동안 처리한 결과, \(5 \mu \mathrm{M}\)의 EGCG는 unmethylated p16 유전자를 대략 \(29\%\) 증가시키는 반면, \(20 \mu \mathrm{M}\)의 EGCG는 unmethylation된 p16을 대략 \(100\%\) 증가시켰다.
<h1>결 과</h1> <h2>Caffeic acid와 chlorogenic acid가 T-47D 세포의 \( p 16 \) 유전자 methylation 상태에 미치는 영향</h2> <p>본 연구에서 coffee에 다량으로 함유되어 있는 caffeic acid와 chlorogenic acid를 유방암 세포인 T-47D 세포에 6일간 처리하였다. 그림 2에서 보는 바와 같이 \( 20 \mu \mathrm { M } \) 의 caffeic acid는 T-47D 세포내의 세포주기 조절 인자인 p16 유전자 중 unmethylated p16을 약 \( 100 \% \) 정도 증가시켰다. 또한 \( 20 \mu \mathrm { M } \)의 chlorogenic acid를 T-47D 세포에 6일간 처리한 결과 unmethylation 상태의 p16 유전자가 caffeic acid로 처리하였을 때와 비슷한 수준으로 증가되었다. 이미 강력한 DNA methylation 억제제로 알려진5-aza-2'-deoxycytidine (DAC) \( 5 \mu \mathrm { M } \)을 positive control로서 T-47D 세포에 처리한 결과 caffeic acid와 chlorogenic acid로 처리했을 때보다 더 강력히 p16 유전자의 demethylaiton을 촉진하였다. 한편 methylation이 일어나 있는 상태의 p16 유전자는 caffeic acid와 chlorogenic acid의 처리에 의해 각각 \( 20 \%, 40 \% \) 정도 유의하게 감소하였다. 이러한 결과는 이미 임상적으로 널리 압 치료에 사용되고 있는 DAC에는 비록 못 미치는 정도지만 coffee 폴리페놀이 DNA의 demethylation을 유도하는데 있어서 유의한 효과를 보였다.</p> <h2>EGCG가 T-47D 세포의 p16 유전자 methylation 상태에 미치는 영향</h2> <p>녹차 추출물인 EGCG롤 T-47D 유방암 세포에 2일간 처리한 후 p16 유전자의 methylation 상태를 살펴본 결과, 그림 3에서 보듯이 \( 5 \mu \mathrm { M } \) 의 EGCG는 unmethylated p16 유전자를 약 \( 29 \% \) 정도 증가시켰으며, \( 20 \mu \mathrm { M } \) 의 EGCG는 control에 비해 unmethylation된 p16을 약 \( 100 \% \) 증가시켰다. 하지만 본 연구에서 사용한 가장 높은 농도인 \( 50 \mu \mathrm { M } \) 의 EGCG는 \( 20 \mu \mathrm { M } \) 의 EGCG를 처리하였을 때에 보다 더 부가적으로 unmethylated p16 유전자를 증가시키지는 못하였다. Methylated p16 유전자는 5, 20, \( 50 \mu \mathrm { M } \) 의 EGCG를 2일간 처리한 결과 control \( \mathrm { p } 16 \) 유전자에 비해 각각 약 \( 13,22,50 \% \) 정도 농도 의존적으로 감소되었다.</p>