폐글리세롤로 대체한 배지를 사용하여 균주를 배양하였고, 이를 IPTG로 조절하였다. 균주는 24시간 동안 지연 없이 성장하고 \( \mathrm { OD } _ { 600 } \)가 \( 4.9( \pm 0.2) \)에 이르렀다. 트레할로스 생합성이 시작되어 세포 생장이 멈춘 후 36시간 만에 \( 321( \pm 45) \mathrm { mg } / \)의 최대치를 기록하였다. 지수생장기간 동안 세포 생장과 트레할로스 생합성에 글리세롤이 사용되었으며, 지수생장기 후반기에는 세포생장이 멈추어 글리세롤이 트레할로스 생합성에만 사용된 것으로 분석되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>전처리 폐글리세롤을 포함하는 배지에서 otsBA를 발현하는 재조합 대장균의 세포 생장 및 트레할로스 생산</h2> <p>기존 연구에서 제시된 배지에 순수글리세롤을 전처리 폐글리세롤로 대체하여 생산균주를 배양하고 IPTG로 induction하며 균주의 생산특성을 조사하였다. Fig. 1은 시간에 따른 세포 밀도, 글리세롤 잔류농도 및 균주가 생산하는 트레할로스 농도를 나타낸다. 생산균주는 지연기 없이 생 장을 시작하여 24 시간 만에 \( \mathrm { OD } _ { 600 } \) 가 \( 4.9( \pm 0.2) \) 에 도달한 후 생장을 멈추었다. 균주의 생장과 함께 트레할로스 생합성이 시작되었고 세포 생장이 멈춘 후에도 지속적으로 생합성 되어 배양 36시간만에 최대치인 \( 321( \pm 45) \mathrm { mg } / \) 에 도달하였다. 배양액의 \( \mathrm { pH } \) 는 배양 시작 \( 7.0 \) 에서 시작하여 배양 종료 후 \( 6.0 \)으로 배양기간 동안 큰 변화가 없었다. 생산균주는 배양 48시간 만에 첨가된 글리세롤의 \( 85 \% \) 를 소모하였는데, 배양 단계별로 글리세롤의 소모속도가 달랐다. 글리세롤 속모 속도는 지수 생장기 \( ( \sim 25 \mathrm { ~h } ) \) 에서 \( 0.5 \mathrm { ~g } ^ { -1 } \mathrm { l } ^ { -1 } \mathrm { ~h } ^ { -1 } \) 였고 지수생장 후반기(25-36 h)에는 \( 0.3 \mathrm { ~g } ^ { -1 } \mathrm { l } ^ { -1 } \mathrm { ~h } ^ { -1 } \) 로 감소하였고 배양말기(36 h이후)에는 \( 0.06 \mathrm { ~g } ^ { -1 } \mathrm { l } ^ { -1 } \mathrm { ~h } ^ { -1 } \) 로 더욱 감소하였다. 세포의 지수생장 기간 동안 글리세롤 소모속도가 가장 높은 반면 지수생장 후반기에 소모속도가 감소한 것은 생산균주가 지수생장 기간 동안 세포 생장과 트레할로스 생합성에 글리세롤을 사용한 반면 지수생장기 후반기에는 세포생장이 멈추어 글리세롤이 트레할로스 생합성에만 사용되었기 때문인 것으로 판단된다. 또한 배양 말기에는 생산균주가 더 이상 트레할로스를 생합성하지 않고 세포생존을 위한 대사유지활동(maintenance)에만 글리세롤을 사용하는 것으로 여겨진다.</p>