Postmitochondria 분획과 gel loading buffer(구성 요소: \(0.125 \mathrm { M }\) Tris-Cl, pH 6.8, 4 \% SDS, 10 \% 2-mercaptoethanol, 0.2 \% bromphenol blue)를 동량으로 섞어 5분간 가열했다. 실험 데이터는 SPSS Ver 120를 통해 처리되었고, paired t-test 및 one-way ANOVA를 사용하여 각 그룹 내부와 그룹 간의 평균치 변화를 조사했다. 사후 검증에는 duncan 방법을 사용하였고, 유의수준은 \( a<0.05 \)로 설정하였다.
<h2>Akt량 분석</h2> <p>Postmitochondria 분획을 동량의 gel loading buffer \( (0.125 \mathrm { M } \) Tris-Cl, pH 6.8, 4 \% SDS, 10 \% 2-mercaptoethanol, 0.2 \% bromphenol blue)와 혼화한 후 5분간 끓였다. 각각의 sample \( (100 \mu \mathrm { g } ) \)을 10-15 \( \% \) sodium dodecyl sulphate (SDS)- poly-acrylamide mini-gel에서 1시간 30분간 \( 15 \mathrm { ~V } \)에서 전기영동 시켰다. Towbin buffer (25 mM Tris-Cl, \( 192 \mathrm { mM } \) glycine, 20 \( \% \)( \mathrm { MeOH } \) )를 이용하여 polyvinylidene difluoride (PVDF) mem-brane에 transfer시키고, 비특이적 단백결합을 차단하기 위해 membrane을 5 \( \% \) non-fat milk를 함유하는 washing buffer (10 \( \mathrm { mM } \) Tris-Cl, pH 7.5, \( 100 \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } , 0.1 \% \) tween- 20)에서 1시간 동안 shaking을 시킨 후 washing buffer로 1번 세척을 하고 각각의 1차 항체와 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. Washing buffer로 3회 세척하고 horseradish-peroxidase가 결함된 2차 항체와 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. washing buffer로 4회 세척 후 ECL detection reagent를 가하여 생성되는 인광을 hyperfilm에 감광시켜 현상하여 signal을 확인하였다. pre-stained blue protein markers (Bio-rad)를 이용하여 분자량을 각각 산출하였다.</p> <h2>자료 처리</h2> <p>본 실험의 자료는 SPSS Ver 120 (statistical package for so-cial science)봉계 package를 이용하였으며, 각 변인들 간에 평균값 및 표준핀차를 산출한 후 집단 내 변화는 paired t-test를 실시하고, 집단 간 평균치 김증은 one-way ANOVA를 실시했다. 사후검증은 duncan방법을 이용하고, 유의수준은 \( a<0.05 \) 수준으로 검증하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>혈중 지질의 변화</h2> <p>혈중지질의 경우에 Table 3에서 보는 바와 같이 TG의 농도는 N, DCE군이 DC, D군보다 유의하게 낮게 나타났다( \(P<0.05 \)). T-C의 농도는 다른 군에 비하여 D군, DCE군이 높게 나타났으나 유의한 차이는 없었다. HDL-C은 DCE군은 DC군에 비해 유의하게 높았으며( \(p<0.001 \)), LDL-C은 DC군에서13.40±1.14 \( \mathrm { mg/dl } \)로 가장 낮았으나 유의한 차이는 없었다.</p> <h2>항산화 효소와 ROS의 변화</h2> <p>Table 4에서 보는 바와 같이 CAT는 D군에 비해 N군, DC군이 유의하게 높게 나타났고(p<0.01), SOD는 D군, DCE군에비해 DC군, DE군이 유의하게 높은 것으로 나타났으며(p<0.01), 이중 DE군은 N군보다 유의하게 높게 나타났다(p<0.01).</p>