항세균 및 항진균 활성 평가는 disc-diffusion방법을 이용하여 Nutrient agar, Sabouraud dextrose agar 배지상에 5\(\mu\mathrm{L}\)의 시료를 멸균 disc-paper에 가한 후 24~48시간 동안 배양하여 생육억제환의 크기를 측정하여 평가하고 Asepergillus niger에 대한 항균 활성은 Potato dextrose broth를 이용하여 균사체 생육억제 활성을 평가하였다. 또한, 인간 적혈구를 이용하여 용혈 활성을 평가하였다.
<h2>항균 활성 평가</h2> <p>항세균 및 항진균 활성 평가는 기존의 보고한 disc-diffusion방법과 동일하게 이용하였으며, 세균의 경우 Nutrient agar(Difco Co., USA), 진균의 경우 Sabouraud dextrose agar(Difco Co. USA) 배지상에서 다양한 시료 \(5 \mu \mathrm { L } \)를 멸균 disc-paper(Whatsman No. 2, 지름 6.5 mm)에 가한 후 세균의 경우 24시간, 진균의 경우 48시간 배양 후, 생육억제환의 크기를 측정하여 평가하였다. 특히 Asepergillus niger에 대한 항균 활성은 Potato dextrose broth(Difco Co., USA)를 이용하여 균사체 생육억제 활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 ampicillin 및 항진균제인 miconazole(Sigma Co., USA)를 각각 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { disc } \) 농도로 사용하였으며, 3회 이상 평가 후 생육억제환 지름의 대표 결과를 \( \mathrm { mm } \) 단위로 나타내었다.</p> <h2>인간 적혈구 용혈 활성 평가</h2> <p>해조류 추출물의 실제적 이용가능성 평가의 일환으로 인간 적혈구 \( (4 \% \) \( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \)를 이용하여 용혈 활성을 평가하였다. PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 \( 100 \mu \mathrm { L } \)를 96-well microplate(Greiner Bio-one, flat bottom, Germany)에 가하고 시료용액 \( 100 \mu \mathrm { L } \)를 가한 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 반응시켰다. 이후, 반응액을 10분간, \( 1,500 \mathrm { rpm } \)으로 원심분리(HA-1000-3, Hanil Science Ind. Ltd. Korea)하여 상등액 \( 100 \mu \mathrm { L } \)를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 microplate reader기(Sunrise-Basic, Tecan, Austria)를 이용하여 \( 414 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO \((2 \%) \), 실험 대조구로는 triton \( \mathrm { X } -100 \) \((0.1 \%) \)을 사용하였다. 용혈활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.</p> <p>\(( \%) \) hemolysis \( = [( \text { Abs. } \mathrm { ~S } - \mathrm { Abs } . \mathrm { ~C } ) /( \text { Abs. } \mathrm { ~T } - \mathrm { Abs } . \mathrm { ~C } )] \times 100 . \)</p>