PRMV 반응을 검증하기 위해, LAMP 증폭 산물의 염기서열 내의 제한효소 Pvu II (CAG/CTG) 부위를 확인하였다. 이 연구에서 개발된 검사법은 관련 식물에 적용 후 충분히 검토되어, PRMV를 신속하게 모니터링할 수 있는 도구로 활용될 수 있다. 특히 이 LAMP 진단 방법은 관련 식물로부터의 빠른 모니터링이 가능함을 보여준다.
<p>최종적으로 PRMV에 대한 반응을 검증하기 위하여, 최초 LAMP 증폭 산물의 염기서열 안쪽에 포함되어 있는 제한효소 Pvu II (CAG/CTG) 부위를 확인하였다. PRMV 주형 cDNA \( 1 \mu \) l, LAMP outer primers [F3 및 B3 (10 pmole)] 각각 \( 1 \mu \mathrm { l } \), HS Taq-polymerase (2.5 unit/ul, GeneAll, Korea) \( 0.1 \mu \mathrm { l } \), dNTP (10 mM) \( 2 \mu \mathrm { l } \), 10X buffer \( 2.5 \mu \mathrm { l } \) 및 멸균증류수 \( 17.4 \mu \mathrm { l } \) 로 총 \( 25 \mu \mathrm { l } \) 를 사용하였으며, \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \) 분, 35 회 반복 ( \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } 45 \) 초, \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } 1 \) 분 및 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } 1 \) 분) 후 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } 5 \) 분간 PCR 반응하여 \( 264 \mathrm { bp } \) 의 밴드를 확인하였다(Data not shown). 증폭산물 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 및 \( P v u \mathrm { II } 10 \) unit을 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2 시간 동안 반응하여 전기영동 한 결과, 두 단편(207 + \( 57 \mathrm { bp } ) \)으로 잘라졌으며(Fig. 2), 이 방법을 통하여 올바른 LAMP 증폭을 검증할 수 있었다.</p> <p>이번 연구에서 개발한 검사법은 관련 식물에서 적용되어 사후관리를 위해 충분한 검토한 후, 관련 기관 등에서 PRMV를 신속하게 모니터링 하는데 활용될 수 있을 것이라고 기대된다.</p> <h1>요 약</h1> <p>Peach rosette mosaic virus (PRMV)는 1933년 복숭아에서 처음 보고되었으며, 복숭아, 자두, 블루베리, 민들레, 벚나무 등에 감염되는 식물바이러스이다. PRMV는 한국에서 보고된 적이 없으나, 식물검역에서 관리병(control viruses) 으로 지정되어 있다. 이번 연구에서는 PRMV를 더욱 신속하고 특이적으로 진단하기 위하여 Loop-mediated isothermal amplification 분석법을 적용한 진단법을 개발하였다. LAMP 방법은 기존의 PCR 방법(RT-PCR 및 nested PCR)과 같은 검출 강도를 가지고 있다. 또한 LAMP 반응을 확인하기 위해 PRMV cDNA을 outer primer sets (Product size \( 264 \mathrm { bp } \) ) 로 PCR 한 뒤, Pvu II (CAG/CTG) 제한효소를 처리하였다. 제한효소 처리 결과 2 개의 digestion fragments \( (207 + 57 \mathrm { bp } ) \)가 확인되었다. PRMV의 LAMP 진단 방법은 관련 식물로부터 더욱 신속한 모니터링이 가능할 것으로 기대된다.</p>