본문에서는 2가지 실험 결과를 나타내었는데 먼저 단일물질로 \( \mathrm{A}, \mathrm{B}, \mathrm{C}, \mathrm{D} \), \( \mathrm{E} \)을 반응시켰을 때와, compound \( \mathrm{A}+\mathrm{C} \), compound \( \mathrm{A}+\mathrm{E} \), compound \( \mathrm{C}+\mathrm{D} \), compound \( \mathrm{C}+\mathrm{E} \), com-pound \( \mathrm{D}+\mathrm{E} \) 로 혼합했을 때 나타난 H pylari에 대한 항균효과를 비교를 통해 확인하였고, 두 번째 실험은 네 가지 물질의 정제물의 항균효과가 높은 구조 동정 실험을 통해 청목노상 callus의 항균효과와 관련해 H. pylari이 청목노상 뽕잎보다 더 뛰어난 것을 확인하였다.
<h2>청목노상 뽕잎 callus 정제물의 H. pylari에 대한 항균 효과</h2> <p>정제한 compound \( \mathrm{A}, \mathrm{B}, \mathrm{C}, \mathrm{D} \) 및 \( \mathrm{E} \) 를 사용하여 H pylari에 대한 항균효과를 알아보기 위해 disc method로 측정한 결과 Table 3과 같이, compound \( \mathrm{A}, \mathrm{B}, \mathrm{C}, \mathrm{D} \)를 단일물질로 반응시 켰을 때 항균활성이 매우 낮게 나타났으나, compound \( \mathrm{A}+\mathrm{C} \), compound \( \mathrm{A}+\mathrm{E} \), compound \( \mathrm{C}+\mathrm{D} \), compound \( \mathrm{C}+\mathrm{E} \), com-pound \( \mathrm{D}+\mathrm{E} \) 등으로 혼합하여 실험하였을 때, 각각 \( 11 \mathrm{~mm} \), \( 11 \mathrm{~mm}, 12 \mathrm{~mm}, 12 \mathrm{~mm}, 13 \mathrm{~mm} \) 의 clear zone을 관찰할 수 있었으며, 항균활성을 나타넨다고 판단되는 compound \( \mathrm{A}, \mathrm{B}, \mathrm{C}, \mathrm{D} \) 및 \( \mathrm{E} \)를 모두 같이 혼합하여 실험한 결과, clear zone이 16 \( \mathrm{mm} \) 로 저해활성이 매우 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 항균활성을 가지는 compound 물질을 2 가지 이상 섞었을 때 H. pylari에 대한 항균 synergy effect가 있는 것으로 판단된다. Oregano 등 spice의 추출물에 존재하는 simple phenol 등이 단일 물질에 의한 H. pylari 저해보다는 synergy effect에 의해 그 효과가 높다고 보고한 Chun 등의 결과와 유사하였다.</p> <h2>정제 화합물의 구조 동정</h2> <p>정제물의 항균효과가 가장 높은 4가지 물질에 대한 구조 동정 결과는 Table 4와 같이 나타났다. Purified compound\( \mathrm{A} \) 는 melting point가 \( 195 \sim 196^{\circ} \mathrm{C} \) 이며, negative FAB-MS에서 분자량 154 를 얻었다. IR spectrum은 3240에서 \( \mathrm{OH} \) 기가 1680에서 \( \mathrm{C}=\mathrm{O} \) 및 1600 에서 aromatic의 \( \mathrm{C}=\mathrm{C} \) 가 확인되었으며, 또한 \( 6.70 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}) \), aromatic 영역의 \( 7.30 \mathrm{ppm}(\mathrm{dd}, \mathrm{J}=2 \), \( 8 \mathrm{~Hz}), 7.38 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=2 \mathrm{~Hz}) \) 및 \( 7.69 \mathrm{ppm} \) (brs, aromatic-H) 등의 \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) spectrum과 \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR} \) 의 spectrum은 Irwin과 Pearl 의 보고와 같아 compound \( \mathrm{A} \) 는 protocatechuic acid로 동정하였다. Compound \( \mathrm{C} \) 는 melting point가 \( 208^{\circ} \mathrm{C} \) 이며, negative FAB-MS에서 354 의 분자량을 얻었다. IR spectrum은 3250 에서 \( \mathrm{OH} \) 기가 1710 에서 \( \mathrm{COO} \) 기가 확인되었으며, 선광도는 \( -35.2 \) 를 나타내었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) spectrum은 \( 2.10 \mathrm{ppm} \) (dd, \( \mathrm{J}=10,12 \mathrm{~Hz}), 2.12 \mathrm{ppm}(\mathrm{m}), 2.26 \mathrm{ppm}(\mathrm{ddd}, \mathrm{J}=2,4,12 \mathrm{~Hz}) \),\( 3.76 \mathrm{ppm}(\mathrm{dd}, \mathrm{J}=2,9 \mathrm{~Hz}), 4.22 \mathrm{ppm}(\mathrm{m}) \) 및 \( 5.38 \mathrm{ppm} \) (ddd, \( \mathrm{J}=4,9,10 \mathrm{~Hz}), 6.29 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=16 \mathrm{~Hz}), 6.87 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}) \). \( 7.02 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=12 \mathrm{~Hz}) \) 및 \( 7.18 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=2 \mathrm{~Hz}) \) 등으로 Barnes 등이 보고한 결과와 같아 purified compound \( \mathrm{C} \) 는 chloro-genic acid로 동정하였다. Compound \( \mathrm{D} \) 는 melting point가 \( 161 \sim 164^{\circ} \mathrm{C} \) 이며, negative FAB-MS에서 분자량 180을 얻었다. \( \mathrm{IR} \) spectrum은 3440에서 \( \mathrm{OH} \) 기가 1646 에서 \( \mathrm{COOH} \) 가 확인되었으며, 또한 \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) spectrum은 \( 6.08 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=16 \mathrm{~Hz}) \), aromatic 영역에서 \( 3 \mathrm{H} \) 분의 \( 6.73 \sim 6.97 \mathrm{ppm}(\mathrm{m}) \) 및 \( 7.39 \mathrm{ppm} \) \( (\mathrm{d}, \mathrm{J}=16 \mathrm{~Hz}) \) 등의 \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) spectrum과 \( { }^{13} \mathrm{C}-\mathrm{NMR} \) 의 spectrum은 Kelley 등의 보고와 같아 compound D는 caffeic acid로 동정하였다. Compound \( \mathrm{E} \) 는 melting point가 \( 204^{\circ} \mathrm{C} \) 이고 선광도는 \( +145^{\circ} \) 이며, negative FAB-MS에서 360 의 분자량을 얻었다. \( { }^{1} \mathrm{H}-\mathrm{NMR} \) spectrum은 \( 2.18 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}), 5.08 \mathrm{ppm} \)</p> <p>\( (\mathrm{m}), 6.14 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=16 \mathrm{~Hz}), 6.52 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}), 6.63 \mathrm{ppm} \)\( (\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}), 6.69 \mathrm{ppm}(\mathrm{s}), 6.74 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}), 6.83 \mathrm{ppm} \)\( (\mathrm{d}, \mathrm{J}=8 \mathrm{~Hz}), 6.98 \mathrm{ppm}(\mathrm{s}) \) 및 \( 7.42 \mathrm{ppm}(\mathrm{d}, \mathrm{J}=16 \mathrm{~Hz}) \) 등으로 Kelly 등이 보고한 결과와 같아 compound \( \mathrm{E} \)는 rose-marinic acid로 동정하였다.</p> <p>이상의 실험 결과로 보아 청목노상 callus가 청목노상 뽕잎 보다 H. pylari에 대한 항균효과가 더 우수함을 확인할 수 있었으며, 이러한 결과는 조 등이 청목노상 뽕잎에 존재한다고 보고한 H. pylori 억제물질인 chlorogenic acid, caffeic acid 및 rosemarinic acid 등의 3종류의 항균물질뿐만 아니라 청목노상뽕잎 callus에는 protocatechuic acid가 더 존재하는 것으로 확인되었고, 그 함량도 매우 높은 것으로 측정되어, 같은 조건에서 청목노상 뽕잎 callus의 Hy pylori 억제효과가 청목노상 뽕잎보다 더 높은 이유는 protocatechuic acid의 존재 때문인 것으로 확인되었다. 이러한 물질군의 차이는 callus 제조 시 생산되는 이차대사산물의 변화에 기인하는 것으로 판단되며, 뽕잎에서는 거의 발견되지 않는 protocatechuic acid가 H. pylari의 세포벽에 어떠한 방식으로 작용하는지에 대해서는 향후 연구를 통하여 밝혀내어야 할 것으로 판단되었다.</p>