호접란(Phalaenopsis)은 열대아시아, 인도네시아, 오스트레일리아 북부 및 필리핀이 원산지인 다년생 식물로, 우리 농가의 고소득 수출 화훼작목으로 위치하고 있다. 품종의 시장성을 위해 전통적인 교배조합을 통해 다양한 품종을 만들어내고 있으나, Agrobacterium을 이용한 형질전환법이 체계적으로 확립되어 있지 않아 효율성이 떨어지며, PLB를 이용한 형질전환도 변이체가 많이 생기는 문제가 있다. 따라서 호접란의 형질전환 효율을 높이기 위해 배양 조건이 PLB의 증식율에 미치는 영향과 형질전환 효율 증대를 위한 실험을 수행하고 있다.
<h1>요 약</h1> <p>호접란(Phalaenopsis)은 난초과의 다년생 식물로 열대아시아, 인도네시아, 오스트레일리아 북부 및 필리핀이 원산지이다. 현재 우리 농가의 고소득 수출 화훼작목으로 위치를 굳혀가고 있으며 매년 재배농가와 생산량 및 시장규모가 증대되고있다. 난 종류는 새로운 형태의 꽃, 색깔 및 병저항성 등이 소비자의 소비나 품종의 시장성에 있어 매우 중요한 요인이며,대부분 전통적인 교배조합을 통해 다양한 품종을 만들어내고 있다. 그러나 이러한 전통적인 교잡육종법은 Agrobacterium을이용한 형질전환법에 비해 목적 유전자를 선별적으로 도입하는데 시간이 많이 걸리기 때문에 상대적으로 효율성이 떨어지게 된다. 세계시장 규모 등을 고려할 때, 형질전환에 의한 다양한 신품종육성이 필요하지만, 아직 형질전환 기술이 체계적으로 확립되어 있지 않은 실정이다. 특히 호접란은 외떡잎 식물로서 Agrobacterium을 이용한 형질전환에 어려움이 있다. 지금까지 몇몇 연구자들이 호접란 형질전환 실험을 수행하였다. Belarmino and Mii 가 2000년에 최초로 화경에서 유도된 세포로부터 Agrobacterium 을 이용한 호접란의 형질전환에 성공하였으나 형질전환에 적합한 식물재료를 얻기가 상대적으로 어렵고, Chai 등은 PLB (Protocorm-like body)를 이용한 형질전환에 성공하였으나 이 또한 호접란의 종류에 따라 형질전환 효율에 큰 차이를 보여 안정적인 형질전환방법으로 사용하기에는 어려움이 있다. 최근 Mishiba 등이 종자를 이용하여 PLB를 유도하고 여기에 형질전환을 하는 방법을 확립하였다. 그러나 형질전환 효율이 아직 낮고, 특히 종자로부터 유도되는 PLB는 변이체가 많이 생겨 상품화하기에는 많은 문제를 안고 있다. 또한, 호접란의 형질전환 효율을 높이기 위해서는 상태가 양호한 PLB를 유도하는 것이 매우 중요하며, 활성탄소, sucrose 및 thiamine 등의 처리가 형질전환체의 재분화에 효과적인 것으로 알려져 있다.</p> <p>따라서 본 연구에서는 Agrobacterium을 이용한 호접란의 효율적인 형질전환법을 확립하기 위하여, 몇 가지 배양 조건이 PLB의 증식율에 미치는 영향과 형질전환 효율 증대를 위한 실험을 수행하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>식물 재료 및 배양 조건</h2> <p>형질전환에 필요한 PLB를 얻기 위하여 호접란 화경의 측아를 이용하였다. 측아를 조심스럽게 때어 낸 다음 핀셋으로고정시킨 뒤 scarpel을 이용하여 위로부터 \( 1 / 3 \) 지점을 잘라내고, 배지에 치상하여 PLB를 유도하였다. 유도된 PLB는 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양실에서 12시간 광조건에서 \( , 0.8 \% \)의 Agar가 함유된 \( \mathrm { pH } \mathrm { 5.6 } \)의 하이포넥스 배지를 기본으로 하여 1주일마다 계대 증식시켰다.</p>