분리균주의 종 간의 염기서열의 유사성 검정 결과 E. oligosperma와 100% 상동성을 보여, 본 논문에선 Exophiala sp.로 표기하기로 한다. 배지의 pH 및 기질농도 변화에 따른 분리균주의 성장을 관찰한 결과, 진탕배양 시 배지의 pH가 4,5,6,7인 환경 모두에서 시간 경과 시 미생물 성장이 증가되었으며, 기질 농도 증가에 따라 pH는 감소되었다. 중금속의 첨가량이 200ppm이상인 경우 건조중량이 감소하는 것으로 보아, 고농도의 중금속 첨가는 균체의 성장을 방해함을 알 수있다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>중금속 제거능율 보이는 곰팡이의 순수 분리 및 동정</h2> <p>클로닝 된 유전자는 556 bp로 밝혀졌으며(Fig. 1), 종 간의 염기서열의 유사성 검정은 NCBI(The National Center for Biotechnology Information, http://www.ncbi.nlm.nih)에서 제공하는 Advanced Blast search를 이용한 결과 Exophiala와 높은 상동성을 보였고 그 중에서 E. oligosperma와 \( 100 \% \) 상동성을 보였다. 보다 자세하게 동정하기 위해서는 다른 유전자(rDNA-ITS, Beta-tubulin, actin, calmodulin 등) 의 염기서열을 분석 비교하고 형태적으로 자세하게 관찰을 해야겠지만 본 논문의 목적은 중금속을 제거하는 균주의 제거 특성을 알아보는 것이기 때문에 Exophiala \( \mathrm{sp} \).로 표기하고자 한다.</p> <p>Fig. 2 는 Exophiala sp. LH2를 현미경(BX41TF, OLYMPUS, Japan)으로 1,000 배에서 관찰한 사진이다. 균체는 PDA에서 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 일간 배양한 것을 멸균수에 현탁한 후 관찰한 것으로 단균사는 직경이 \( 0.9 \sim 1.3 \mu \mathrm{m} \) 으로 관찰되었다.</p> <h2>분리균주 Exophiala sp. LH2의 생장 특성</h2> <p>배지의 \( \mathrm{pH} \) 및 기질농도 변화에 따른 Exophiala sp. LH2의 성장을 관찰하였다. 초기 \( \mathrm{pH} \) 값을 각각 \( 4,5,6,7 \) 로 설정 하였으나 중금속의 농도가 증가할수록 초기 \( \mathrm{pH}_{ㅄ} \) 이 낮게 나타났다. 이는 배지에 첨가되는 중금속이 황산염의 형태로 있기 때문에 농도가 증가될수록 \( \mathrm{pH} \) 를 감소시켜주는 문제점이 있었다. 그러나, 첨가되는 중금속의 농도가 \( 10 \sim 200 \mathrm{ppm} \) 으로 증가될 경우에 균주의 성장에는 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 진탕배양 시 배지의 \( \mathrm{pH} \) 가 \( 4,5,6,7 \) 인 환경 모두에서 전반적으로 시간이 지남에 따라 미생물 성장이 증가됨을 알 수 있었으며, 기질 농도가 증가함에 따라서 \( \mathrm{pH} \)가 감소되는 것을 확인 할 수 있었다. 배지의 \( \mathrm{pH} \) 를 6,7 로 설정한 후 중금속의 농도를 달리하여 성장하는 균주의 흡광도 및 \( \mathrm{pH} \) 를 측정한 결과를 Fig. 3 에서 나타내었다. 균주의 성장을 간접적으로 알 수 있는 지표 중의 하나인 흡광도의 증가 경향을 분석한 결과 \( \mathrm{pH} \) 6인 환경에서 균주의 성장이 조금 더 활발하게 나타났다(Fig. 3). 그러나 본 실험의 경우 중금속이 함유된 배지이며 배양 균주가 균사체를 만드는 곰팡이이기 때문에 흡광도의 변화가 균주의 생장을 반드시 의미하지는 않는다. 따라서 실험이 종료된 5 일째 배양액을 회수하여 건조중량을 측정 하였다. 각각의 중금속의 첨가량이 \( 10 \sim 150 \mathrm{ppm} \) 으로 증가될 경우 균체의 건조중량(50 70 mg)에는 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났으나, 첨가량이 \( 200 \mathrm{ppm} \) 이상으로 중가할 경우 건조중량이 절반이하로 나왔고 이는 고농도의 중금속 첨가로 균체의 성장이 저해받았음을 의미한다.</p> <p>\( \mathrm{pH} \) 가 6,7 인 환경에서 정치배양 할 경우 시간이 지날수록 균체성장이 감소되는 것을 관찰할 수 있었으며, \( \mathrm{pH} \) 가 현저히 떨어지는 것을 관찰할 수 있었다(data not shown). 위의 결과를 종합적으로 균주는 호기적 성장을 하는 것으로 사료된다. 이후 모든 실헙은 Shaking condition(진탕배양)으로 수행하였다.</p>