점액세균을 배양할 때는 ST21P 또는 VY/2 평판배지를 사용하였고, 이차대사산물 생산을 위해서는 CSG /1 배지를 사용하였다. C. albicans를 액체배양할 때는 Sabouraud Dextrose Broth를 사용하였고 고체배양의 경우 nutrient agar를 사용하였다. 여러 물질을 통해 배지를 제조하고, 세균은 \( 32^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 배양, 액체 배양은 \( 200 \mathrm{rpm} \)으로 진탕하면서 배양하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용 균주</h2><p>본 연구에 사용된 점액세균들은 21C 프론티어 미생물유전체활용기술개발사업을 통해서 분리되었으며, 국가지정연구소재은행의 하나인 점액세균은행을 통해서 관리되고 있는 균주들이다. 항진균 활성조사를 위해서는 Candida albicans KCTC7121과 선문대학교 윤성철 교수팀에 의해 분리된 Colletotrichum acutatum ACYSJ001을 사용하였다.</p><h2>사용 배지 및 배양 조건</h2><p>점액세균의 일반적인 배양에는 ST21P 또는 VY/2 평판배지를 사용하였으며, 이차대사산물 생산을 위해서는 CSG /1 배지를 사용하였다. 그리고 C. albicans의 액체배양에는 Sabouraud Dextrose Broth(SDB)를 사용하였고 고체배양은 nutrient agar(NA)를 사용하였다.</p><p>ST21P 배지는 \( 0.1 \% \mathrm{~K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\), \(0.002 \% \) yeast extract, \( 0.1 \% \) \( \mathrm{KNO}_{3}\), \(0.1 \% \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(0.1 \% \mathrm{CaCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(0.02 \% \) \( \mathrm{FeCl}_{3}\), \(0.01 \% \mathrm{MnSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(0.1 \% \) 미량원소용액, \( 1 \% \) 한천을 함유한 배지(ST21)위에 멸균한 여과지(AVANTEC No.1)를 올려놓아 준비하였다. 이때 미량원소용액은 리터당 \( 100 \mathrm{mg} \mathrm{MnCl}_{2} \cdot 4 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(20 \mathrm{mg} \mathrm{CoCl}{ }_{2}, 10 \mathrm{mg} \mathrm{CuSO}{ }_{4}\), \(10 \mathrm{mg} \) \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{MoO}_{4} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(20 \mathrm{mg} \mathrm{ZnCl}{ }_{2}\), \(5 \mathrm{mg} \mathrm{LiCl}\), \(5 \mathrm{mg} \mathrm{SnCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(10 \mathrm{mg} \mathrm{H} \mathrm{H}_{3} \mathrm{BO}_{3}\), \(20 \mathrm{mg} \mathrm{KBr}\), \(20 \mathrm{mg} \mathrm{Kl} \), 그리고 \( 8 \mathrm{~g} \) EDTA Na-Fe \( { }^{3+} \) salt(trihydrate)를 넣어 제조하였다. VY/2배지는 \( 0.5 \% \) Baker's yeast, \( 0.1 \% \mathrm{CaCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(500 \mathrm{ng} / \mathrm{L} \) cyanocobalamine을 넣어 제조하였다. CSG/1 배지 \( (\mathrm{pH} 7.4\))는 한국생명공학연구원 손광희 박사연구팀에서 고안한 배지로 리터당 glucose \( 0.5 \mathrm{~g} \), soluble starch \( 3 \mathrm{~g} \), raffinose \( 1 \mathrm{~g} \), casitone \( 2 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.5 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{CaCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 1 \mathrm{~g} \), \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4} 0.25 \mathrm{~g} \), vitamin \(\mathrm{B}_{12}\) \(0.5 \mathrm{mg} \), 미량원소용액 \( 4 \mathrm{~mL} \) 을 넣어 준비하였다. 이때 미량원소용액은 리터당 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) \( 10 \mathrm{~mL}\), \(\mathrm{FeCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 14.6 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{ZnCl}_{2} 2.0 \mathrm{~g}, \mathrm{MnCl}_{2} \cdot 4 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 1.0 \mathrm{g}\), \(\mathrm{CuCl}_{2} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.43 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{H}_{3} \mathrm{BO}_{3} 0.31 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{CaCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \quad 0.24 \mathrm{g}\), \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{MoO}_{4} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.24 \mathrm{~g} \)을 넣어 제조하였다.</p><p>점액세균은 모두 \( 32^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 배양하였으며, 액체 배양은 \( 200 \mathrm{rpm} \)으로 진탕하면서 배양하였다.</p>