담배 종자를 무균하게 배양한 후, \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } \)의 농도를 다르게 하여 배양하고, 16시간 light, 8시간 dark 광주기와 \( 26\(\pm\)2 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 온도로 7주간 배양한 후, chlorophyll 합량과 rubisco와 rubisco activase의 함량 및 활성을 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>식물 재료, 배양 및 생장 측정</h2> <p>본 실험을 위하여 살균 처리한 담배(Nicotiana tabacum L.) 종자를 사용하였으며, 암모늄염으로서는 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } \)를 사용하였다. MS 배지에서 발아시킨 후, 무균적으로 배양된 담배줄기를 \( 1 \mathrm { ~cm } \)의 동일한 크기로 절단하여 \( 0.2 \mathrm { mM } \mathrm { CdCl } \)◦ \( 2.5 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)와 각각 \( 20.61,40,60,80,100 \mathrm { mM } \) 의 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } \)가 함유된 배지에 치상하여 배양하였다. 16시간의 light (photo flux denaity \( 800 \mu \mathrm { M } \mathrm { m } ^ { -2 } \) s \( ^ { -1 } \) )와 8시간의 dark 상태의 광주기, 그리고 \( 26±2 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 온도를 유지하였다. 7주 후 Cd과 각 농도의 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } \) 에 따른 생장을 비교하였으며, 이때의 잎을 채취하여 이를 chlorophyll 합량 및 rubisco와 rubisco activase의 함량 및 활성 측정에 사용하였다.</p> <h2>Chlorophyl|의 함량 측정</h2> <p>Chlorophyll 함량의 측정은 Inskeep와 Bloom의 방법에 의해, 담배 잎을 \( 80 \% \) DMF로 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 overnight시켜 chlorophy \|l을 추출한 후 \( 8,000 \times 8 \) 에서 5 분간 원심분리된 상등액을 \( 664.5 \mathrm { ~nm } \)와 \( 647 \mathrm { ~nm } \)에서 이들의 흡광도들 측정하였다. 아래의 식으로부터 chlorophyll a와 b 및 total chlorophyll의 함량을 계산하였다.</p> <p>Chlorophyll a ( \( \mathrm { mg/g fr. wt. } \)) = \(12.70 \mathrm { ~A } _ {\text { 664.5 } } \)- \( 2.79 \mathrm { ~A } _ { 647 } \)</p>