총 플라보노이드는 Zhuang등의 방법을 변형하여 그 함량은 quercetin 용액 표준곡선을 이용하여 나타내고 시료의 안토시아닌 정량은 Hosseinian 등의 \(\mathrm{pH}\) differential method에 따라 측정했다. 측정된 흡광도는 Ascorbic acid를 표준품으로 이용하여 만든 표준검량곡선에 대입 나타냈다. DPPH radical scavenging 활성은 DPPH radical scavenging activity \( (\%)=(1-(sample + DPPH absorbance-sample + ethanol absorbance / DW + DPPH absorbance) \times 100 \)로 나타낸다.
<h2>총 플라보노이드 함량</h2> <p>총 플라보노이드는 Zhuang등의 방법을 변형하여, 시료 \(0.2 \mathrm{ml}\)에 ethanol \(0.8 \mathrm{ml}\)를 넣고 혼합한 후 \(2\%\) 의 \(\mathrm{AlCl}_{3}\) 용액을 \(1\mathrm{ml}\) 첨가하고 \(1\)시간 반응시킨 후 \(420\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였으며 플라보노이드 함량은 quercetin 용액 표준곡선을 이용하여 나타내었다.</p> <h2>총 안토시아닌 함량</h2> <p>시료의 안토시아닌 정량은 Hosseinian 등의 \(\mathrm{pH}\) differential method에 따라 측정하였다. 시료 \(1\mathrm{ml}\)에 \( 0.025\mathrm{M}\) Potassium chloride buffer(pH\(1.0\)) \(1\mathrm{ml}\) 혹은 \(0.4 \mathrm{M}\) sodium acetate buffer(pH \(4.5\)) \(1 \mathrm{ml}\)을 각각 혼합하여 반응액의 흡광도 값을 \(510\mathrm{~nm}\) 와 \(700 \mathrm{~nm}\)에서 측정한 후 cyanidin-\(3\)glucoside의 몰흡광계수 \( \left(\varepsilon=26,900 \mathrm{M}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 를 이용하여 아래의 식에 의해 안토시아닌 함량을 산출하였다.</p> <p>Total anthocyanin contents \( (\mathrm{mg} / \mathrm{l})= \)\[ (\mathrm{A} \times \mathrm{MW} \times \mathrm{D} \times 1000) /(\varepsilon \times \mathrm{V}) \]</p> <p>\( \mathrm{A} \) (absorbance value): \( \left(\mathrm{A}_{510 \mathrm{~nm}}-\mathrm{A}_{700 \mathrm{~nm}}\right)_{\mathrm{pH}} 1.0 \)\[ -\left(\mathrm{A}_{510 \mathrm{~nm}}-\mathrm{A}_{700 \mathrm{~nm}}\right)_{\mathrm{pH} 4.5}\]</p> <p>MW (molecular weight of cyanidin-3-glucoside): \( 449.2 \)</p> <p>D (dilution factor): dilution ratio of sample</p> <p>\( \varepsilon \) (cyanidin-3-glucoside molar absorbance): 26,900 \( \mathrm{M}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1} \)</p> <p>\( \mathrm{V} \) : final volume of sample</p> <h2>FRAP 측정</h2> <p>FRAP assay는 Benzie \& Strain의 방법을 사용하였다. FRAP 실험을 위해 반응액은 acetate buffer(pH 3.6,\( 300 \mathrm{mM}) \) : \( 10 \mathrm{mM} \)의 TPTZ(\(2,4,6\)-tripyridyl-s-triazine, Sigma, USA):\( 20 \mathrm{mM}\)의 \( \mathrm{FeCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)를 \(10: 1: 1 \)의 비율로 혼합하여 사용 하였으며, 반응용액과 시료를 혼합하여 \(30\)분 반응시킨 후, \( 593 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. 측정된 흡광도는 Ascorbic acid를 표준품으로 이용하여 만든 표준검량곡선에 대입하여 Ascorbic acid equivalent \( \mathrm{mM} \)로 표시하였다.</p> <h2>DPPH radical scavenging 활성</h2> <p>\( \mathrm{DPPH} \) radical에 대한 소거활성 측정은 Blois 등의 방법을 변형하여 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( 60 \mu \mathrm{M} \mathrm{DPPH(1,1-diphenyl-2-} \) picrylhydrazyl) 용액 \( 1.5 \mathrm{ml} \)를 가하여 \(30\)분간 반응시킨 후 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하고 DPPH 첨가구와 ethanol 첨가구의 흡광도 차이를 비교한 후, 아래의 식을 이용하여 계산하였다.</p> <p>DPPH radical scavenging activity \( (\%)=(1-(\mathrm{A}-\mathrm{B}) / \mathrm{C}) \times 100 \)</p> <p>A: sample + DPPH absorbance</p> <p>B: sample + ethanol absorbance</p> <p>C: DW + DPPH absorbance</p> <h2>통계조사</h2> <p>실험결과는 모두 \(3\)회 반복하여 평균과 표준편차로 나타내었으며, 통계처리는 SPSS \(21.0\)(Statistical Package for theSocial Sciences, Spss Inc., Chicago, IL, USA) 프로그램을 이용하여 실시하였다. 각 군에 따른 유의성은 분산분석 (analysis of variance, ANOVA) 후, Duncan's multiple range test를 실시하여 \( p<0.05 \) 수준에서 검증하였다.</p>