효소액을 첨가한 후 37도에서 1시간 동안의 효소반응을 고찰하였으며, AsA의 농도에 따른 효소활성 영향을 조사하였다. 여기에 AsA, GSH, ErA, 3,4-dihydroxybenzoate를 첨가하여 효소활성을 측정하였고, 과산화수소에 catalase를 첨가해 생성되는 용존 산소의 함량을 측정하였다. 이를 통해 효소반응과 첨가 물질의 영향에 대해 규명하였다.
<h2>효소활성의 측정</h2> <p>효소액을 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 0 \sim 1 \) 시간 동안의 효소반응을 고찰하였다. 본 효소반응에 의해 생성된 과산화수소는 산소전극을 사용하여 과산화수소계(Olidector-Model 5, Oriental 전기주식회사, Japan)로 측정하였다.</p> <h2>반응조건</h2> <p>반응혼합액을 조제하여 효소액 첨가와 동시에 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 0 \sim 1 \) 시간 반응시켰다. 각 실험 군에는 장시간 반응에 의한 세균번식을 막기 위해 \( 2 \sim 3 \) 방울의 toluene을 표층에 가하였다. 효소 활성에 미치는 AsA의 농도별 영향을 측정하기 위하여 모델 반응계에 lysyl oxidase \( 2 \mu \mathrm { g } \)과 AsA를 \(2 \), \(0.2 \), \( 0.02 \) \( \mu \mathrm { M } \) 되도록 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 60분 incubation하여 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 발생량을 경시적으로 관찰하였다. AsA 및 GSH, ErA, 3,4-dihydroxybenzoate를 최종농도 \( 0.2 \mu \mathrm { M } \) 되도록 첨가하여 효소활성을 측정하였다. 대조군은 모델 반응계에 효소만을 첨가하여 측정하였다.</p> <h2>과산화수소의 측정</h2> <p>과산화수소에 catalase를 첨가하여( \( \left . \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \rightarrow \frac { 1 } { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } + \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \right ) \) 생성되는 용존 산소의 함량을 산소전극으로 검출하였다(ORITECTOR MODEL III, Oriental Electric Co. Japan).</p> <p>측정방법은 셀에 시료 \( 2 \mathrm { mL } \)을 넣고 stirrer로 각반하면서 질소 gas를 가하여 시료용액 중의 용존산소를 제거하여, 산소전극의 출력의 변화를 기록계 상에서 읽은 후 안정한 시점에서 0 점으로 조정하여 catalase 용액 \( 20 \mu \mathrm { L } \)를 첨가한 다음, 과산화수소의 분해에 의해 발생한 산소를 산소전극 출력에 의해 나타난 peak의 높이를 측정하여 과산화수소의 함량을 계산하였다.</p>