노르웨이의 토양시료를 멸균수에 넣어 진탕배양 후, Bacillus속의 균주 분리를 위해 열처리를 하였고 LB agar 배지에 단계희석법으로 도말하여 배양한 후, 증식한 균주들을 분리하고 고추탄저병균을 방제할 수 있는 균주 선발을 위해 PDA plate에서 대치배양을 실시하여 C. gloeosporioides의 생육을 방해하는 균주들을 선발하였다. 분리균주의 동정을 위해 형태학적, 배양학적, 생화학적 특성을 조사한 후 Bergey's manual of systematic bacteri-ology와 비교한 결과를 바탕으로 API kit을 선택하였다. 항진균 물질의 생산을 위해 LB broth에 단일 콜로니를 접종하고 전배양액을 제조하였으며, 각각의 삼각플라스크에 전배양액을 접종한 후, 배양하였다.
<p>이에 본 연구에서는 고추탄저병을 야기하는 C. gloeospor-ioides에 대하여 강한 항진균 활성을 나타내는 균주를 분리하여 길항균주가 생산하는 항진균 물질의 생산조건을 검토하고 고추탄저병을 방제할 수 있는 미생물제제의 개발을 위한 가능성을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>길항균주의 분리 및 선발</h2> <p>노르웨이 Oslo시 지역의 토양시료 10g을 멸균수 90ml에 넣어 37℃에서 10분간 진탕배양 후, Bacillus속의 균주들을 분리하기 위하여 80℃에서 30 분간 열처리를 하였다. LB agar(1.0% tryptone, 0.5% yeast extract, 1.0% sodium chlor-ide, 1.5% agar, pH 7.0±0.2)배지에 단계희석법으로 도말하여 37℃에서 3일간 배양한 후, 증식한 균주들을 분리하였다. 증 식한 균주들을 순수 분리한 후, 고추탄저병균인 Colletotrichum gloeosporioides KACC 40804를 방제할 수 있는 균주를 선발하기 위하여 PDA(potato dextrose agar, 2.0% dextrose, 0.4% potato starch, 1.5% agar, pH 5.6±0.2) plate에서 대치배양(pairing culture)을 실시하여 C. gloeosporioides의 생육을 저해하는 균주들을 일차적으로 선발하였다. 선발한 균주들을 대상으로 가장 높은 생육저지대를 형성하는 균주를 선발하기 위하여 작물병원성 곰팡이를 직경 6mm 크기의 culture disc에 접종하여 24℃에서 24 시간 배양한 후, 6cm 떨어진 곳에 선별한 균주를 획선 접종하고 24℃에서 7 일간 배양하면서 생육저지대를 조사하였다. 공시균주인 C.gloeosporioides는 농츤진흥청 농업생명공학연구원 한국농용 미생물보존센터(Korean Agricultural Culture Collection, KACC) 에서 분양 받아 사용하였다.</p> <h2>분리균주의 동정</h2> <p>항진균 활성을 나타내는 선발균의 분류학상 위치를 검토하기 위하여 형태학적, 배양학적, 생화학적 특성을 조사하였으며, 도출된 결과를 Bergey's manual of systematic bacteri-ology와 비교한 후, 그 결과를 바탕으로 API kit (bioMerieux, France)을 선택하여 동정하였다.</p> <h2>항진균 물질의 생산</h2> <p>항진균 물질의 생산을 위한 기본배지를 선택하기 위하여 LB broth (1.0% tryptone, 0.5% yeast extract, 1.0% sodium chloride), NB (nutrient broth, 0.5% peptone from meal, 0.3% meat extract), PDB (potato dextrose broth, 2.0% dex-trose, 0.4% potato starch), TSB (trypticase soybean broth, 1.7%digest of casein, 0.3% soytone, 0.5% sodium chloride, 0.25% dextrose), 그리고 YM broth (yeast malt broth, 0.3% yeast extract, 0.3 % malt extract, 0.5% peptone, 1.0% dextrose)를 제조하여 pH를 7.0으로 조정한 후, 121℃ 에서 15분간 멸균하여 사용하였다. LB broth에 단일 콜로니를 접종하고 30℃에서 24시간 배양하여 전배양액을 제조하였으며, 각각의 삼각플라스크에 전배양액 100 \( \mu l \)접종한 후, 30℃, 180 rpm에서 24시간 배양하였다. 항진균 활성을 조사하기 위하여 각각의 배양액을 10,000rpm, 10분간 4℃에서 원심분리 하여 균체를 침전시킨 후, agar diffusion method를 이용하여 공시균주를 미리 접종하여둔 PDA plate에 상등액 20 \( \mu \)를 점적한 paper disc \( ( \varnothing 6 \mathrm { ~mm } ) \) 를 얹고, 24℃에서 7일간 배양하면서 항진균 활성을 조사하였다.</p>