p-nitrophenol glucoside(NPG)를 이용하여 팥 시료의 \( \alpha \)-glucosidase 저해활성을 측정하였다. 특정 조건에서 팥 시료와 \( \alpha \)-glucosidase, NPG를 반응시킨 후 흡광도를 측정하여 저해율을 계산하였다. 또한, 트롬빈 타임(TT), 프로트롬빈 타임(PT), 에이피티 타임(aPTT)을 측정하여 항혈전 활성을 평가하였다. 트롬빈 저해 효과는 시료와 표준혈장을 첨가한 후 응고시간을 측정하여 결정하였다.
<p>\( \text { 저해율 } ( \%) = [1-( \text { 시료 첨가구 효소활성 } / \text { 대조구 첨가구 효소활성 } )] \times 100 \)</p> <p>\( \alpha \)-glucosidase 저해활성은 p-nitrophenol glucoside (NPG; Sigma Co., USA)를 이용하여 평가하였으며, 팥 시료 \( 2.5 ~ \mu \mathrm { l } \)와 \( 50 ~ \mathrm { mM } \) Sodium acetate buffer \( ( \mathrm { pH } ~5.6) \)로 희석한 \( \alpha \)-glucosidase \( (0.25 ~ \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) ~25 ~ \mu \mathrm { l } \)를 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 preincubation하고 \( 1 ~ \mathrm { mM } \) NPG 용액 \( 25 ~ \mu \mathrm { l } \)를 가하여 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응하였다. 이후 \( 1 ~ \mathrm { M } ~ \mathrm { NaOH } ~25 ~ \mu \mathrm { l } \)를 가하여 반응을 정지시키고, \( 405 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 저해율을 계산하였다.</p> <h2>팥의 항혈전 활성</h2> <p>항혈전 활성은 기존에 보고된 방법에 따라 트롬빈 타임(Thrombin Time, TT), 프로트롬빈 타임(Prothrombin Time, PT) 및 에이피티 타임(activated Partial Thromboplastin Time, aPTT)을 측정하여 평가하였다. 혈장은 표준혈장(MD Pacific Co., China)을 구입하여 사용하였으며, 기타 시약은 Sigma사(Sigma Co., USA)의 제품을 구입하여 사용하였다. 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.</p> <p>TT: \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 0.5 ~ \mathrm { U } \) 트롬빈 (Sigma Co., USA) \( 50 ~ \mu \mathrm { l } \)와 \( 20 ~ \mathrm { mM } ~ \mathrm { CaCl } _ { 2 } ~50 ~ \mu \mathrm { l } \), 다양한 농도의 시료 추출액 \( 10 \mu \mathrm { l } \)를 Amelung coagulometer KC-1A (Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 표준혈장(MD Pacific Co., China) \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \)를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 32.1초의 응고시간을 나타내었다. 트롬빈 저해 효과는 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 시료 첨가 시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.</p>