UV-visible spectrophotometer, Spectronic 20D, 화학발광기, pH meter 등의 기기 및 \( (+)-\alpha \)-Tocopherol, L-ascorbic acid, arbutin, EDTA, luminol, heparin, rose-bengal, DPPH radical 등의 시약을 구매하여 사용하였다. 건조된 비수리를 이용하여 파우더를 얻고 Ethyl acetate 분획으로부터 제조한 aglycone을 이용하여 ethyl acetate층을 분획하고 이를 감압·농축하여 실험에 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>UV-visible spectrophotometer는 Varian(Australia) 사의 Cary 50, 적혈구 광용혈에 사용한 Spectronic 20D는 Milton Roy Co. (USA) 제품, 화학발광기는 Berthold(Germany) 사의 6-channel LB9505 LT를, pH meter는 Istek(Korea) 사제품을 사용하였다.</p> <p>\( (+)-\alpha \)-Tocopherol(1,000 IU vitamin E/g), L-ascorbic acid, arbutin, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), luminol, heparin, 증감제로 사용된 rose-bengal, free radical 소거활성에 사용한 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical은 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하여 사용하였다. 기타 \( \mathrm{FeCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 는 Junsei Chemical Co.(Japan) 제품을, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)는 Dae Jung Chemical \& Metals(Korea)사 제품을 사용하였다. 완충용액제조에 사용된 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4} \cdot 12 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4} \) -\( 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, \mathrm{NaCl} \), trizma base, \( \mathrm{HCl} \) 그리고 ethanol \( (\mathrm{EtOH}) \), methanol \( (\mathrm{MeOH}) \), ethyl acetate (EtOAc), octanol 등 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 기질로 사용된 L-tyrosine과 \( N \)-succinyl-(Ala) \( )_{3}-p \)-nitroanilide, 효소로 사용된 tyrosinase (9.3 mg solid, 5,370 units \( / \mathrm{mg} \) solid), elastase (4.5 \( \mathrm{mg} \) protein \( / \mathrm{mL}, 6.5 \) units \( / \mathrm{mg} \) protein)는 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 비수리 재료는 2009년 4월 경동시장에서 구입하여 사용하였다.</p> <h2>비수리의 분획 및 추출</h2> <p>건조된 비수리 \( 100 \mathrm{~g} \) 을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 \( 2 \mathrm{~L} \) 를 이용하여 일주일 동안 침적시킨 후 여과하였다. 이 여액을 감압 - 건조하여 파우더를 얻고 이를 실험에 사용하였다. 또한 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 - 농축한 후 물과 hexane을 이용하여 비극성 성분을 제거하고 이후 ethyl acetate 분획을 감압·농축하여 파우더를 얻었다.</p> <p>Ethyl acetate 분획으로부터 aglycone을 제조하였다. ethyl acetate 분획에서 얻은 파우더 일부는 산 가수분해 반응을 이용하여 당을 제거시킨 후 얻은 aglycone 파우더를 실험에 사용하였다. 실험 방법은 ethyl acetate 가용분 일정량에 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 및 acetone 용액을 넣고, \( 4 \mathrm{~h} \) 동안 중탕 가열하면서 환류-냉각시킨다. 환류시킨 용액을 \( 5 \% \mathrm{KOH}-\mathrm{MeOH} \) 용액으로 중화 적정한다. 중화 적정 후 다시 ethyl acetate층을 분획하고 이를 감압·농축하여 실험에 사용하였다.</p>