N-bromosuccinimide에 의한 저해방식을 알아본 결과, 경쟁적 저해방식이 나타났다. Carbodiimide에 의한 효소 활성 저해 효소에 여러가지 농도의 carbodiimide를 반응한 결과 시간이 흐름에따라 효소 활성이 소실됨이 나타났으며, pseudo first-order kinetics 양상을 띄었다. carbodiimide에 의해 수식된 효소를 Line-weaver-Burk plot 으로 측정한 결과, N-bromosuccinimide에 의한 수식보다 낮은 수준으로 나타났다.
<p>또한 N-bromosuccinimide에 의한 저해방식을 알아보기 위하여 N-bromosuccinimide의 농도를 달리하여 반응속도를 측정한 후 Dixon plot을 작성한 결과 xylanase는 N-bromosuccinimide에 의해 경쟁적 저해방식에 의해 저해됨을 알 수 있었고 저해상수 \( K_ {\mathrm { i } } \)는 \( 0.6 \mathrm { ~mM } \)로 계산되었다. 이상의 결과로부터 xylanase는 기질 결합부위에 1개의 tryptophan 잔기가 관여하는 것을 알 수 있었다.</p> <h2>Carbodiimide에 의한 효소활성저해</h2> <p>효소를 여러 가지 농도의 carbodiimide와 반응하였을 때 시간이 지남에 따라 효소활성이 소실됨을 알 수 있었고 효소실활은 carbodiimide의 농도에 따라 pseudo first-order kinetics의 양상을 나타내었다. Carbodiimide의 농도와 inhibition rate \( K_ {\mathrm { i } } \)와의 관계를 도식화하였을 때 Fig. 4(B)와 같이 직선관계를 나타내 carbodiimide에 의한 효소의 수식은 단순 이분자반응임을 알 수 있었으며 carbodiimide에 의한 수식반응의 second-order rate constant는 \( 27.5 \mathrm { ~min } ^ { -1 } \mathrm { M } ^ { -1 } \)로 계산되었다. \( \log ~K_ {\text { iobs } } \)와 \( \log [ \mathrm { carbodiimide } ] \)와의 관계로부터 carbodiimide의 농도에 대한 반응차수는 1.86으로 계산되었는데 이로부터 효소 \( 1 \mathrm { ~mol } \) 당 \( 2 \mathrm { ~mol } \)의 carbodiimide가 반응함을 알 수 있었다.</p> <p>한편 carbodiimide에 의해 수식된 효소의 \( K_ {\mathrm { m } } \) 값을 Line-weaver-Burk plot으로 측정한 결과 \( 13.32 \mathrm { ~mg } / \mathrm { ml } \)로 계산되어 N-bromosuccinimide에 의해 수식된 효소의 \( K_ {\mathrm { m } } \)값과 비교하였을 경우 7배 정도 낮은 수준임을 알 수 있었다(data not shown). 이는 tryptophan 잔기의 경우와 비교하였을 때 산성 아미노산 잔기는 기질에 대한 결합능력이 매우 낮기 때문인 것으로, 산성 아미노산 잔기가 기질 결합부위에 관여하지 않는다는 것을 말해준다.</p> <p>또한 carbodiimide에 의한 저해방식을 알아보기 위하여 carbodiimide의 농도를 달리하여 반응속도를 측정한 후 Dixonplot을 작성한 결과 xylanase는 carbodiimide에 의해 비경쟁적 저해방식에 의해 저해되는 것으로 나타나 aspartic acid나 glutamic acid는 기질결합부위가 아닌 것으로 확인되었다. 저해상수 \( K_ {\mathrm { i } } \)는 \( 2.0 \mathrm { ~mM } \)로 계산되었다.</p>