독립적으로 세 번 이상 수행된 실험에서 Cisplatin에 대한 HEI-OC1 세포의 독성이 조사되었으며, 그 결과는 평균과 표준편차로 표현되었다. 통계 처리는 Student's t-test와 One-way ANOVA 분석을 사용하였고, 유의성 검정은 \( p<0.05 \)를 기준으로 하였다. Cisplatin의 농도에 따라 세포 독성이 달라짐을 확인하였으며, 특히 \( 10 ~ \mu \mathrm { M } \)에서 약 \( 17 \% \)의, \( 20 ~ \mu \mathrm { M } \)에서 약 \( 50 \% \)의 세포 죽음이 발생하였다. 또한, \( 20 ~ \mu \mathrm { M } \) cisplatin 처리 후 18시간부터 세포 생존율이 감소하기 시작하였으며, 처리 24시간 후에는 약 \( 50 \% \)로 뚜렷하게 감소하였다.
<h2>통계 처리</h2> <p>표시된 결과는 3번 이상의 독립적인 실험결과이며, 이들의 평균(mean)과 표준편차(standard deviation, S.D)를 산출하여 결과를 표시하였다. 실험결과의 통계처리는 Student's t-test와 One-way ANOVA 분석을 통하여 처리하였으며 p-value가 최대치 \( 0.05(p<0.05) \) 미만인 경우를 유의한 것으로 판정하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>Cisplatin이 청각세포주 HEl-OC1 세포생존율에 미치는 영향</h2> <p>Cisplatin에 대한 HEI-OC1세포의 세포독성을 조사하기 위하여 다양한 농도의 cisplatin을 24시간 처리 후 MTT 방법으로 세포생존율을 측정하였다. 그 결과 cisplatin은 \( 10 ~ \mu \mathrm { M } \)의 농도에서 약 \( 17 \%, 20 ~ \mu \mathrm { M } \)의 농도에서 약 \( 50 \% \)의 세포 죽음을 유도하여 처리 농도에 의존적인 세포독성을 나타냈다. 또한 세포생존율은 \( 20 ~ \mu \mathrm { M } \) cisplatin을 다양한 시간 처리한 결과, 처리 18시간 후부터 감소하기 시작하여 처리 24시간 후 현저히 감소하여 약 \( 50 \% \) 의 세포생존율을 나타냈다. 이상의 결과에서 cisplatin에 의한 세포독성은 HEI-OC1세포에서 농도 및 시간 의존적으로 증가함을 관찰할 수 있었다. 또한, \(20 ~ \mu \mathrm { M } \) 농도의 cisplatin을 24시간까지 처리한 후 시간에 따른 염증성 사이토카인 mRNA 발현 변화를 RT-PCR 방법으로 측정하였다. 염증성 사이토카인 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6의 mRNA는 cisplatin 처리 12시간에 관찰 할 수 있었으며, 처리 시간에 비례하여 발현양이 증가하였다. 그러나 이들 사이토카인의 발현 시기는 사이토카인의 종류에 따라 차이가 있었다(미발표 결과).</p> <h2>염증성 사이토카인 중화(neutralization)에 의한 cisplatin 세포독성 예방 효과</h2> <p>Cisplatin에 의해서 생성된 염증성 사이토카인의 기능을 확인하기 위하여 HEI-OC1세포에 anti-TNF- \( \alpha \), anti-IL-1 \( \beta \) 및 anti-IL-6 항체 \( 1.5 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)과 \( 20 ~ \mu \mathrm { M } \) cisplatin을 24시간 처리한 후 세포생존율을 MTT 방법으로 조사하였다. Anti-TNF- \( \alpha \) 항체의 전처리는 cisplatin 세포독성을 예방하여 세포생존율이 cisplatin 단독 처리군의 \( 50 \% \) 수준에서 \( 70 \% \)로 증가하였다. 그러나 anti-IL-13 및 anti-IL-6 항체의 전처리는 cisplatin에 의한 HEI-OC1 청각세포의 생존율 회복에 유의한 변화를 나타내지 않았다. 또한, 이들 염증성 사이토카인 모두를 중화할 수 있는 anti-TNF- \( \alpha \), anti-IL-1 \( \beta \) 및 anti-IL-6 항체를 동시 전처리한 실험군의 cisplatin 세포독성 억제효과는 anti-TNF- \( \alpha \) 항체만을 단독 전처리한 실험군과 유의한 차이가 없었다. 이상의 결과에서 염증성 사이토카인 TNF- \( \alpha \) 가 cisplatin에 의한 청각세포 손상의 중요한 인자로 작용하고 있음을 확인할 수 있었다.</p>