4주 동안 성장한 쓴메밀에 PEG 6000 \(10\%\)을 적용하여 가뭄 스트레스 상황을 만들어 cyclitols 변화를 분석하였다. 스트레스 조건이 설정된 후 1일에서 이미 쓴메밀 잎의 수분이 탈수되기 시작하였고, 3일 이후에는 대다수의 수분이 탈수되었다. 또한, 스트레스 후 3일 동안 myo-inositol의 농도는 5배, D-pinitol은 11배, 그리고 D-chiro-inositol은 약 9배 증가한 것으로 나타났다.
<h1>결 과</h1><h2>Cyclitols의 정체시간 측정</h2><p>\( 1 \mathrm{mM} \) 의 D-chiro-inositol, D-pinitol, D-ononitol, myo-in-ositol의 정체시간을 측정하였다. 단일 피크로 측정되어 불순물이 없는 것으로 확인되었고 물질별로 정확한 정체시간과 정량분석을 위한 표면적을 얻을 수 있었다. 또한 서로 중첩되지 않고 분리되어 D-chiro-inositol, D-pinitol, D-ononitol, myo-inositol의 변화량을 정확히 측정할 수 있었다.</p><h2>쓴메밀에 가뭄 스트레스 처리 시 변화되는 cyclitols 측정</h2><p>4주 동안 키운 쓴메밀에 PEG 6000 \( 10 \% \) 를 처리하여 가뭄 스트레스에 노출시킨 후 cyclitols의 변화량을 확인하였다. 스트레스 처리 후 1일이 지난 후부터 쓴메밀 잎에서 수분이 탈수되는 것을 관찰할 수 있었고 3일이 지난 후에는 거의 대부분의 수분이 탈수되는 것을 확인하였다. 가뭄 스트레스 시 식물은삼투압 조절을 위하여 삼투물질이 축적되는데 그 중에서 sugar alcohol인 D-chiro-inositol, D-pinitol, D-ononitol, myo-inositol의 변화량을 하루 간격으로 GC-FID를 이용하여 측정하였다. 스트레스 처리 후 3 일 만에 myo-inositol의 양은 약 5배 증가하였고 D-pinitol은 약 11배, D-chiro-inositol은 약 9배 증가하는 것으로 측정되었다. 대두를 이용한 실험에서는 D-pinitol 합성의 전구물질인 ononitol이 측정되었지만 쓴메밀을 이용한 실험에서는 전혀 측정되지 않았다.</p><h2>쓴메밀에 염 스트레스 처리 시 변화되는 cyclitosl 측정</h2><p>4주 동안 키운 쓴메밀에 \( 100 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{NaCl} \) 를 처리하여 염 스트레스에 노출시킨 후 가뭄 스트레스 처리 시와 동일하게 D-chi-ro-inositol, D-pinitol, D-ononitol, myo-inositol의 변화량을 하루 간격으로 GC-FID를 이용하여 측정하였다. 쓴메밀의 상태는 가뭄 스트레스처럼 잎의 변화가 크지는 않았지만 스트레스 처리 후 3일이 지난 후 가뭄 스트레스를 처리한 것처럼 잎이 말라가기 시작했다. 스트레스 처리 후 3일 만에 myo-inositol의 양은 약 4배 증가하였고 D-pinitol은 약 4배, D-chiro-inositol은 약 4배 증가하는 것으로 측정되었다. 이 경우도 가뭄 스트레스와 마찬가지로 D-pinitol의 전구물질인 ononitol은 전혀 측정되지 않았다.</p><h2>쓴메밀의 explant 상태에서 myo-inositol feeding 시 cyclitols 변화 측정</h2><p>쓴메밀의 explant에 D-chiro-inositol 합성에서 기질 역할을 하는 myo-inositol을 첨가함으로써 D-chiro-inositol량이 증가됨을 나타내는지 확인하였고 다른 cyclitols의 변화량도 확인하였다. 쓴메밀의 explant에 myo-inositol을 첨가하지 않은 대조군과 myo-inositol을 첨가한 실험군으로 나누어 하루 간격으로 조직을 채취 하였고 채취된 조직에서 변화되는 cyclitols의 양을 GC-FID를 이용하여 측정하였다. myo-Inositol이 첨가되지 않은 대조구에서는 cyclitols의 변화가 거의 없었으며 외부에서 첨가된 myo-inositol은 쓴메밀 내에 흡수되어 3일 까지는 함량이 증가하였으나 그 이후로는 함량이 감소하는 것으로 측정되었다. D-chiro-inositol과 D-pinitol 함량은 꾸준히 증가하는 것으로 측정되었다. 이 경우에도 ononitol양은 매우 적은 양이 측정되었고 3일 이후 myo-inositol양이 감소함과 동시에 D-chiro-inositol양과 D-pinitol양이 동반해서 증가되는 것을 확인 하였다.</p>