Preparative native-PAGE를 이용하여 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \를 분리한 결과, 파랑볼우럭의 경우 10 32번 (4.5~16 ml) 분획에서 분리되었으며, 쥐노래미는 \( 5 \% \) gel에서 분리, 큰입우럭은 35~65번(17~32.5 \( \mathrm { ml } \)) 분획에서 분리되었고, 가물치의 경우 9~15번 분획(16~30 \( \mathrm { ml } \))에서 얻었다. 파랑볼우럭의 경우 LDH 활성도 높고 acrylamide gel의 농도도 잘 조절되어 이 중 수득률이 가장 높은 것으로 나타났다.
<h2>Preparative native-PAGE에 의한 LDH eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \) 동위효소의 분리</h2> <p>Eye-specific \( C_ { 4 } \) 동위효소를 분리하기 위해서 Preparative native-PAGE을 실시하였다. 파랑볼우럭의 경우, \( 5 \% \) acrylamide gel로 실시한 결과 10 32번(4.5~16 \( \mathrm { ml } \)) 분획에서 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \)가 분리되었으며, 시료의 LDH 활성 38.58 units로부터 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \) 17.11 \( \mathrm { units } \)를 얻어 수득률이 \( 44.35 \% \)이었고. 208~211번에서 \( \mathrm { A } _ { 4 } \), 270 번에서 \( \mathrm { A } _ { 2 } \mathrm { ~B } _ { 2 } \) 350번에서 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위 효소가 확인되었다. 쥐노래미 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \)와 같이 \( 4 \% \) acrylamide gel로 분리한 경우 bromophenol blue와 eye-specific \( C_ { 4 } \) 가 동일 분획에서 함께 용출되어 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \) 동위효소를 분리하기가 어려웠으므로 \( 5 \% \) gel에서 분리하였다. 큰입우럭 eye-specific \( C_ { 4 } \) 동위효소는 \(5 \% \) acrylamide gel로 분리한 경우 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \) 동위효소와 인접하게 위치한 동위효소가 함께 용출되므로 \(6 \% \) acrylamide gel로 분리하였으며, 35~65번(17~32.5 \( \mathrm { ml } \)) 분획에서 분리되었다. 정제 후 분획을 native-PAGE하여 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } , \mathrm { ~A } _ { 4 } \) 및 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위 효소를 확인하였으며. 큰입우럭 눈조직의 LDH 활성 9.16 units로부터 eye-specific \( C_ { 4 } \) 동위효소 0.46 \( \mathrm { units } \)를 얻어 수득률은 \( 5.05 \% \)로 파랑볼우럭의 수득률에 비해 낮았으며, 이는 인접하여 위치된 \( \mathrm { AC } _ { 3 } \) 동위효소로 인해 분리가 어려웠기 때문이다. 가물치 eye-specific \( C_ { 4 } \) 동위효소의 경우 \( 4 \% \) acrylamide gel로 Prep cell을 실시하여 \( 2 \mathrm { ml } \)씩 분획할 때 9~15번 분획(16~30 \( \mathrm { ml } \))에서 얻어 수득률이 \( 0.7 \% \)였고, 쥐노래미 eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \)는 \( 4 \% \) acrylamide gel에서 10~12번(18~24 \( \mathrm { ml } \))에서 용출되어 수득률이 \(2.4 \% \)라는 보고와 비교하면 파랑볼우럭 LDH eye-specific \( \mathrm { C } _ { 4 } \)의 경우 LDH 활성도 높고 acrylamide gel의 농도도 잘 조절되어 수득률이 높은 것으로 사료 된다.</p>