\( \beta \)-Glucan 함량을 구하기 위해 , \(Total~glucan (\% \mathrm{w} / \mathrm{w})=\Delta \mathrm{E} \times \mathrm{F} / \mathrm{W} \times 90 \), \( \alpha -glucan (\% \mathrm{w} / \mathrm{w})=\Delta \mathrm{E} \times \mathrm{F} / \mathrm{W} \times 9.27 \) 식에 따라 총 glucan함량을 구했다. 총 glucan 함량과 \( \alpha \)-glucan 함량을 각각 따로 측정한 후, 총 glucan 함량에서 \( \alpha \)-glucan 함량을 감하여 \( \beta \)-Glucan함량을 구하였다.
<h2>\( \beta \)-Glucan 함량</h2><p>\( \beta \)-Glucan함량은 Mushroom and Yeast Beta-Glucan Kit (Megazyme, Ireland)을 이용하여 아래와 같이 총 glucan 함량과 \( \alpha \)-glucan 함량을 각각 측정한 후 총 glucan 함량에서 \( \alpha \)-glucan 함량을 감하여 구하였다. 먼저 총 glucan 함량은 시료 \( 0.1 \mathrm{~g} \)에 \( 37 \% \) \(\mathrm{HCl}\) \( 1.5 \mathrm{~mL} \)를 첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 45분간 진탕 시킨 후 \( 10 \mathrm{~mL} \)의 증류수를 첨가하고 다시 진탕 시켰다. \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)의 끓는물에서 2시간 동안 다시 반응시키고 실온에서 냉각시킨 후 \( 2 \mathrm{~N}\) \( \mathrm{KOH}\) \( 10 \mathrm{~mL} \)를 첨가한 후 \( 200 \mathrm{~mM} \) sodium acetate buffer(\( \mathrm{pH} 5.0\))를 이용해 \( 100 \mathrm{~mL} \)로 정용 하였다. 이 반응액을 \( 1,500 \mathrm{~rpm} \)에서 10분간 원심분리한 다음 상등액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 exo-1,3- \( \beta \)-glucanase \( (20 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \)와 \( \beta \)-glucosidase \( (4 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \)가 혼합된 용액 \( 0.1 \mathrm{~m} \)에 첨가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 60분 동안 반응시킨 후 glucose oxidase/peroxidase(GOPOD) 용액을 \( 3 \mathrm{~mL} \) 첨가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 20분간 더 반응시켰다. Spectrophotometer(Du 800, Beckman coulter)를 이용해 \( 510 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정한 후 아래 식에 따라 총 glucan함량을 구하였다.</p><p>\( \alpha \)-Glucan 함량은 시료 \( 0.1 \mathrm{~g} \)에 \( 2 \mathrm{~M}\) \( \mathrm{KOH} \) \( 2 \mathrm{~mL} \)를 첨가하여 냉수욕조에서 20분간 교반한 다음 \( 1.2 \mathrm{~M} \) sodium acetate buffer \( 8 \mathrm{~mL} \)를 넣고 amyloglucosidase \( (1,630 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \)와 invertase \( (500 \mathrm{U} / \mathrm{mL}) \) 혼합 용액 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)를 넣어 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 30분간 반응시켰다. 다시 \( 1500 \mathrm{~rpm} \)으로 10분간 원심분리한 후 \( 10.3 \mathrm{~mL} \)로 정용하고 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 취해 \( 200 \mathrm{~mM} \) sodium acetate buffer(\( \mathrm{pH} 5.0 \)) \( 0.1 \mathrm{~mL} \)와 GOPOD 용액 \( 3 \mathrm{~mL} \)를 혼합하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 20분간 반응시켰다. Spectrophotometer를 이용하여 \( 510 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하고 blank와 비교하여 아래 식에 따라 정량하였다.</p><p>\(Total~glucan (\% \mathrm{w} / \mathrm{w})=\Delta \mathrm{E} \times \mathrm{F} / \mathrm{W} \times 90 \), \( \alpha -glucan (\% \mathrm{w} / \mathrm{w})=\Delta \mathrm{E} \times \mathrm{F} / \mathrm{W} \times 9.27 \)</p><p>[ \( \Delta \mathrm{E}= \) 시료 반응액의 흡광도 - 대조구의 흡광도, \( \mathrm{F}=\mathrm{D}- \) glucose standard \( 100 \mu \mathrm{g} \)/D -glucose standard \( 100 \mu \mathrm{g} \)에 대한 GOPOD의 흡광도, \( \mathrm{W}= \) 시료의무게]</p>