Northern blot 분석은 Flamingo, Red Sea, Bristol Fairy 어린 꽃봉오리로부터 total RNA를 추출하고 전기영동하여 DFR cDNA의 1.3kb 절편을 32P로 labeling하여 probe로 사용하여 hybridization을 Denhardt's solution을 이용하여 42\(^\circ \mathrm{C}\)에서 수행하였다. DFR 효소 활성의 측정은 Heller 등(1985)의 방법에 의하여 수행하였고, 기본적인 효소활성의 측정을 위해 25\(^\circ \mathrm{C}\)에서 30분간 항온기에서 반응을 유도하고 ethyl acetate로 추출하여 TLC analyzer를 사용하여 분석하였다.
<h2>Northern blot 분석</h2> <p>Northern blot 분석을 위해서는 핑크색인 'Flamingo'와 'Red Sea' 및 백색인 'Bristol Fairy'의 어린 꽃봉오리로부터 total RNA를 추출하였고 (Logemann et al. 1987), 전기영동은 \( 1.2 \% \) formaldehyde agarose gel 상에서 수행하였으며 Sambrook 등(1989)의 방법에 준하여 안개초의 DFR cDNA의 \( 1.3 \mathrm { ~kb } \) 절편을 \( { } ^ { 32 } \mathrm { P } \)로 labeling하여 probe로 사용하였다. Hybridization은 \( 50 \% \) formamide, \( 5 \mathrm { ~X } \mathrm { ~SSC } , 0.05 \mathrm { ~mol } \) phosphate buffer, Denhardt's solution을 이용하여 \( 42 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 수행하였다.</p> <h2>DFR 효소 활성의 측정</h2> <p>DFR 효소활성 측정은 Heller 등(1985)의 방법에 의하여 수행하였다. 기본적인 효소활성의 측정을 위해서 전체 용량을 \( 50 \mathrm {\mu l } \)로 하였으며 자세한 조성은 \( 5-50 \mu l \) 효소 추출액, \( 0.04 \mathrm { nM } \) 방사성기질 \( \left ( \left [ { } ^ { 14 } \mathrm { C } \right ] \right . \)-dihydrokaempferol, \( \left .167 \mathrm { ~Bq } \right ) \), \( 250 \mathrm { nM } \) NADPH, \( 2.8 \mathrm { mM } \) 2-mercaptoethanol을 첨가한 \( 0.1 \mathrm { M } \) Mcllvaine buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.8) 그리고 \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) glycerol 등 이다. 이 혼합물을 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30 분간 항온기에서 각각의 반응을 유도한 후 즉시 2 번 \( (50,30 \mu \mathrm { l } ) \) 반복하여 ethyl acetate로 추출한 후 추출액은 thin layer chromatography (TLC)를 통하여 분석하였고 여기에 사용된 solvent system은 chloroform/ acetic \( \operatorname { acid } / \) water \( (10: 9: 1) \)로 혼합하였다. TLC 위의 방사선의 정량분석은 TLC analyzer (Berthold, Germany)을 사용하여 수행하였다.</p>