생체조직을 butylated hydroxy toluene를 함유한 메탄올로 교반하여 균질화하고, 균질물을 chloroform과 NaH2PO4를 넣고 교반하여 원심분리하여 지질층을 얻었다. 이 방법을 1번 더 진행하여 질소가스를 이용해 지질층의 유기용매를 완전히 날려 지질을 얻었다. 지방산 분석을 휘해 추출한 지질을 지방산 분석용 VARIAN CP-3380 gas chromatography에 주입하여 지방산을 분석하였다. 지방산 분석은 표준용액의 retention time 시간과 비교하여 정성하였으며 총 지방산은 내부 표준물질을 이용하여 정량하였고 전체 peak area의 퍼센트를 이용하여 개개의 지방산을 산출하였다.
<p>\( \text { LDL-cholesterol } = \text { total cholesterol } -( \text { HDL-cholesterol } + \text { triglyceride } /5) \)</p> <h2>조직의 지방산 추출</h2> <p>지방산 분석은 Folch 등을 변형하여 실시하였으며 간단히 요약하면 다음과 같다. 생체조직을 butylated hydroxy toluene (BHT)를 함께 함유한 메탄올로 교반하여 균질화하였다. 균질물을 \( 1 \mathrm { ~ml } \) 취한 후 chloroform \( 2 \mathrm { ~ml } \)와 \( 0.2 \mathrm { ~M } \) \( \mathrm { NaH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \) \( 1.4 \mathrm { ~ml } \)를 넣고 교반하여 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \(3,000 \mathrm { ~rpm } \)에서 3분간 원심분리 후 지질층을 얻었다. 이와 같은 방법을 한 번 더 진행한 뒤 최종적으로 질소가스를 이용하여 서서히 지질층의 유기용매를 완전히 날린 다음 지질을 얻었다. Morrison과 Smith의 방법에 따라 추출된 지질에 methylation용 시약인 boron trifluoride \( \left ( \mathrm { BF } _ { 3 } \right ) \) methanol \( 1 \mathrm { ~ml } \)와 hexane \( 0.4 \mathrm { ~ml } \)를 가한 후 1시간동안 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 가열하였다. 1시간 후 실온까지 충분히 냉각시킨 다음 hexane \( 2 \mathrm { ~ml } \)와 증류수 \( 2 \mathrm { ~ml } \)를 가한 후 다시 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \(3,000 \mathrm { ~rpm } \)에서 3분간 원심분리 후 상등액을 얻었다.</p> <h2>Gas Chromatograph를 이용한 지방산 분석</h2> <p>상등액을 질소가스 하에서 조금 날린 후, 상등액 \( 1 ~ \mu \mathrm { l } \)를 취하여 지방산 분석용 VARIAN CP-3380 gas chromatography (Varian Inc. Walney Creek, USA)에 주입하여 지방산을 분석하였다. 지방산 분석에 사용한 표준용액은 미국 Supelco사의 supelco 37 comp. (Supelco Inc. Bellefonte, USA)를 사용하였다. 사용된 column은 \( \mathrm { SP } ^ {\mathrm { TM } } \)-2560 fused silica capillary column ( \(100 \mathrm { ~m } \times 0.25 \mathrm { ~mm } \) inner diameter \( \times 0.2 ~ \mu \mathrm { m } \) film thickness)(Supelco Inc. Bellefonte, USA)이다. 기기의 분석조건은 detector (FID) \( 280 ^ {\circ } \mathrm { C } \), oven (initial \( 180 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 분당 증가율은 \( 230 ^ {\circ } \mathrm { C } \)까지 \( 3 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \)), injector \( 250 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 그리고 carrier gas는 헬륨를 사용하였다. 지방산 분석은 표준용액의 retention time 시간과 비교하여 정성하였고 내부 표준물질(22:3n-3 methyl ester)을 이용하여 총 지방산을 정량하였으며 개개의 지방산들은 전체 peak area의 퍼센트로 산출하였다.</p>