동결 건조한 동충하초 분말에 증류수를 가하고 70\(^\circ \mathrm{C}\)에서 1시간 추출한 후 실온에서 30분 동안 초음파 처리하여 HPLC(Prekin-Elmer 200 series system)로 분석하여 cordycepin 함량을 계산하였다. 실험동물은 6주령 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 사용하여 10일간 자유섭취 시켰고, 식이 섭취량과 체중을 측정하여 실험을 진행하였다.
<h2>Cordycepin 추출 및 함량 분석</h2> <p>동결 건조한 동충하초 분말에 중량 대비 10 배량의 증류수를 가하고 \( 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 시간 추출한 후 실온에서 30 분 동안 다시 초음파 \( (40 \mathrm { KHz } ) \) 처리하였다. 추출물을 원심분리 \( (8,000 \mathrm { rpm } ) \)하여 얻어진 상등액을 \( 0.45 \mathrm { ~mm } \) membrain filter로 여과하여 HPLC (Prekin-Elmer 200 series system, USA)의 분석 시료로 사용하였다. Column은 X Bridge \( C_ { 18 } (250 \mathrm { ~mm } \times 4.6 \mathrm { ~mm } \mathrm { ID } ) \) 를 사용하였으며, 검출기는 UV Detector \( (260 \mathrm { ~nm } ) \) 를 사용하였다. 이때 Sigma 사(St. Louis, MO, USA)의 코디세핀 표준품을 이용하여 검량선을 작성하였으며, 시료의 코디세핀 피크 면적비로부터 추출물의 cordycepin 함량을 계산하였다.</p> <h2>식이조성 및 실험군</h2> <p>실험 식이의 조성은 Table 1 과 같으며, 정상군 \( ( \mathrm { N } ) \), 오르트산 투여 대조군(C), 오르트산 + 3 \% (w/w) P. japonica 투여군(PJ), 오르트산 + 3 \% C. militaris 투여군(CM), 오르트산 + 3 \% cordyce-pin 고함유 C. militaris JLM0636 투여군(CMa)으로 나누어 실험을 진행 하였다. 동충하초 분말의 식이 첨가량 결정은 전보의 방법[20]에 준하였으며, 식이 중에 첨가한 동충하초 분말은 탄수화물원인 corn starch로 대체하였고, OA는 sucrose로 대체하여 첨가하였다.</p> <h2>실험 동물 및 사육 조건</h2> <p>실험동물은 효창사이언스(대구, 한국)로부터 6주령의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 구입하여 일주일간 시판 고형 사료를 급여하면서 환경에 적응시킨 후 본 실험에 사용하였다. 본 실험은 체중이 동일하게 난괴법(randomized complete block design)으로 분류하여 사육실 온도 \( \left (22 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 와 습도 \( (50 \pm 5 \%) \) 및 명암주기(명주기: 07:00 19:00)가 조절되는 동물 사육실에서 사육하였다. 실험동물은 각 군마다 6마리씩 나누고, 식이와 물은 10 일간 자유섭취 시켰다. 사육 기간 중 식이 섭취량은 매일 측정하였고, 체중은 3 일에 한번씩 일정한 시간에 측정하였다.</p> <h2>동물실험, 시료 채취 및 분석시료 조제</h2> <p>동물실험은 10 일간 각 군별로 조제사료를 급여하면서 사육한 후, 실험 최종일 12 시간 이상 절식시킨 후 에테르로 가볍게 마취시켜 해부하였다. 개복 후 복부 대동맥으로부터 채혈하여 혈액을 채취하고, 약 30 분간 실온에 방치시킨 후 3,000 rpm에서 20 분간 원심분리 하여 혈청을 얻어 혈청 생화학적 분석에 제공하였다. 채혈 후 간 및 지방 조직을 적출하여 차가운 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 세척하고 여과지로 물기를 제거한 후 무게를 측정하고 분석시료로 제공하였다.</p>