본 실험에서는 한국산으로 알려진 표고버섯(Lentinus edodes) 조미료를 사용하였습니다. 이 조미료는 전라남도 강진군 청림농원에서 자체 재배한 표고버섯\( (30.3 \% \)을 주원료로 사용하고, 이에 멸치가루(18.1%, 한국산), 다시마가루, 새우가루, 녹차가루 등을 첨가하여 생산한 과립 형태의 조미료를 시료로 활용하였습니다. 시료 \( 1 \mathrm{~g} \)을 (Lithium citrate \( \mathrm{pH} \) 2.2로 조성된 아미노산 분석기 loading buffer에 2.2에 \( 5 \mathrm{ml} \)넣고 초음파 추출을 30분 동안 수행한 후, 0.45μm 필터로 여과하였습니다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>분석재료</h2> <p>본 실험에 사용한 표고버섯(Lentinus edodes) 조미료는 전라남도 강진군 청림농원에서 직접 재배한 포고버섯 \( (30.3 \% \), 한국산)을 이용하여 멸치가루(18.1\%, 한국산), 다시마가루, 새우가루, 녹차가루 등을 첨가하여 생산한 조미료(과립)를 시료로 사용하였다.</p> <h2>무기성분의 분석</h2> <p>식품공전의 미량영양성분시험법[4]에 따라 시료 \( 7.5 \mathrm{~g} \) 에 증류수 \( 500 \mathrm{ml} \) 을 가하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 가열 교반하여 여과하였다. 여과 후 용액화된 시료의 주원소 및 미량원소의 농도를 측정할 수 있는 flame and furnace, 4-lamp turret, Quadline background correction, GFTV로 된 원자 흡광 분광분석기(UNICAM 989, UK)를 이용하여 분석을 하였다.</p> <h2>구성아미노산의 분석</h2> <p>표고버섯 조미료의 구성 아미노산 분석을 위한 시료의 전처리는 Tarr[21]의 방법으로 하였다. 시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 아미노산 분석기 loading buffer (Lithium citrate \( \mathrm{pH} \) 2.2) \( 5 \mathrm{ml} \)에 넣고 초음파 추출을 30 분간 시행한 후 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) filter로 여과한 후 \( 10 \% \) SSA (5-sulphosalicylic acid) \( 1 \mathrm{ml} \)과 위 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)을 혼합한 후 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1 시간 방치하여 침전된 단백질을 제거한 후 여과 하였다. 이 중 \( 10 \mathrm{ml} \) 을 취하여 PICO-tag 방법[22]을 이용하여 PITC labeling한 후 얻은 시료 \( 400 \mu \mathrm{l} \)중에서 \( 50 \mu \mathrm{l} \)을 취하여 HPLC (Waters 510, USA)를 이용하여 분석하였다. Column은 High Resolution Column Bio 20 PEEK Lithium이며 유속은 buffer은 \( 250 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), ninhydrin \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \) 이고 압력은 buffer 55 bar, ninhydrin 12 bar의 조건으로 구성 아미노산 분석을 하였다.</p> <h2>유리아미노산의 분석</h2> <p>시료 \( 200 \mathrm{mg} \)을 absolute ethanol \( 1 \mathrm{ml} \)에 첨가하여 혼합한 후 상온에서 24시간 동안 교반하여 유리아미노산을 추출하였다. 혼합액을 원심분리한 상층액 \( 0.5 \mathrm{ml} \)을 취하여 Dowex \( 50-X 8 \) resin(200-400 mesh) column(made in a Pasteur pipette)을 통과 시킨 다음 \( 10 X \) column volumn의 증류수와 무수 ethanol을 순차적으로 이용하여 protein, phenolic compound, carbohydrates, lipid를 제거했으며, \( 2 \mathrm{N} \) ammonium hydroxide로 유리아미노산을 용출하였다. Column 용출액은 rotary evaporator를 이용하여 건조시킨 다음 lithium citrate buffer \( (\mathrm{pH} 2.2 \) )에 녹이고 \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) filter로 여과한 여액을 시액으로하여 HPLC (Waters 510, USA)로 분석하였다.</p> <p>이 중 \( 20 \mu 1 \) 을 취하여 column은 High Resolution Column Bio 20 PEEK Lithium, 유속은 buffer \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), ninhydrin \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), 압력은 buffer 75 bar, ninhydrin 14 bar의 조건으로 유리 아미노산 분석을 하였다.</p>