제조된 추출물 시료는 실험군과 blank에 각각 농도별로 96-well plate에 seeding하였고, 실험군에는 60 \(\mu M\)의 DPPH를 첨가하였다. 실험동물로는 체중 200-205g의 7주령 암컷(Sprague-Dawley) 쥐 40마리를 사용하였고, 난소절제 수술을 진행한 후에 대조군으로 나누었다. 대조군은 비 난소절제 대조군(SHAM), 난소절제 대조군 (OVX-CON), 난소절제 후 대황 추출물을 각각 50mg/kg, 200mg/kg 투여한 OVX-EB50, OVX-EB200 그룹으로 나누어져 있으며, 이들에게 매일 1ml의 시료를 경구로 투여하며 6주 동안 사육하였다.
<h2>항산화활성 측정(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) 라디칼 소거능 측정)</h2> <p>추출물의 시료를 제조한 후에 96-well plate에 실험군과 blank에 추출물을 농도별( \(500, 100, 50, 25, 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \)로 100 \( \mu \mathrm { l } \) 씩 각각 6 개씩 seeding한 다음 실험군에는 60 \( \mu \mathrm { M } \mathrm { DPPH } \) 100 \( \mu \mathrm { l } \)를 첨가하였다. 또한 control에는 추출물 대신에 \( \mathrm { MeOH } \) 100 \( \mu \mathrm { l } \)를 seeding한 다음 DPPH 100 \( \mu \mathrm { l } \)를 첨가하고 blank에는 DPPH 대신에 EtOH 100 \( \mu \mathrm { l } \)를 첨가하였다. 실온에서 30분을 방치한 후 \( 540 \mathrm { ~nm } \)에서 microplate reader로 흡광도를 측정하여 DPPH 의 환원에 의한 흡광도를 조사하였다. 대조군은 기존의 항산화제인 L-ascorbic acid와 비교 하였다. 시료 첨가구와 대조군의 흡광도차를 백분율로 표시하였다. DPPH radical 저해율은 아래 계산식에 따라 나타내었다.</p> <p>DPPH radicals scavenging activity \( ( \%) = (1-A / B) \times 100 \)</p> <p>A: Absorbance of sample</p> <p>B: Absorbance of blank</p> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 체중이 200-205 \( \mathrm { g } \)인 7 주령의 암컷(Sprague-Dawley) 쥐 40마리를 (주)오리엔트바이오에서 분양 받아 1주일간 적응시킨 후, 난소절제 수술(ovariectomy)을 하였고 비난소절제 대조군에게는 sham-operation을 실시하였다. 수술 후 1주일간 고형 사료를 주어 상처가 회복되면, 난괴법 (randomized complete block design)에 의해 군을 나누었다. 즉 실험동물은 비 난소절제 대조군(SHAM), 난소절제 대조군 (OVX-CON), 난소절제 후 대황 추출물 \( 50 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 투여군 (OVX-EB50), 난소절제 후 대황 추출물 \( 200 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 투여군 (OVX-EB200)으로 각 10마리씩 4군으로 나누어 \( 1 \mathrm { ml } \)의 시료를 매일 경구 투여하며, 6주간 사육하였다. 실험기간 동안 식이섭취량과 체중은 매일 일정한 시간에 측정하였다. 동물실험실의 사육조건은 온도 \( 24 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 습도 \( 50-55 \% \)를 유지시켰고, 물과 식이는 제한을 두지 않고 제공하였으며, 실험 시료는 증류수로 용해하거나 현탁시켜 대조군은 동일 용량의 증류수를 투여 하였다.</p>