Terras 등에 의해 분리된 Rs-AFP는 항 곰팡이 활성은 나타내나 항 효모활성은 나타내지 않으므로 Baekwoon과 Chungwoon에서 나타난 항 곰팡이 단백질 특성은 기존의 RS-AFP와는 다른 단백질일 가능성을 시사하였는데, Chungwoon의 항 효모 및 항 곰팡이 활성은 조 단백 실험에서는 나타나지만 Rs-AFP 유전자를 주형으로 한 PCR 반응으로 확인되지 않아 단백질의 활성에 관한 추가 실험이 요구된다. 국내 시판 무와는 다르게 Palkwang무로 부터 언어낸 clone 은 Rs-AFP2와 동종의 항 진균 단백질로서 추정된다.
<p>PCR반응의 경우 약 \( 0.2 \mathrm { ~kb } \)의 product가 Myungsan과 Chungwoon을 제외한 모든 종자에서 검출 되었으며 항 효모 활성은 Myungsan과 Baekwoon에서만 검출되었다. 이와는 달리 각 시료의 항 곰팡이 (Botrytis cenerea) 활성은 항 효모와는 달리, 사용된 모든 시료에서 검출되었다. Terras등에 의해 분리된 Rs-AFP1, Rs-AFP2, Rs-AFP3, Rs-AFP4는 항 곰팡이 활성은 나타내나 항 효모활성은 나타나지 않은 것으로 알려져 있어 Myungsan과 Baekwoon 그리고 Chungwoon에서 나타난 항 곰팡이 단백질의 특성은 기존의 Rs-AFP와는 다른 단백질일 가능성을 시사하였으며 특히 Myungsan의 경우 본 실험에서 사용된 primer에 의한 RCR 반응에도 산물이 검출되지 않아 기존의 AMPs들과는 전혀 다른 것임을 시사하였다. 그러나 Chungwoon의 경우 항 효모 및 항 곰팡이 활성은 조 단백 실험에서 나타나나 기존의 Rs } -AFP유전자를 주형으로 한 PCR 반응이 나타나지 않아 단백질의 활성에 관한 추가 실험이 요구된다고 할 것이다.</p> <p>이렇게 확보한 \( 0.2 \mathrm { ~Kb } \)의 PCR산물 (5개 품종 에서만 PCR산물 검출) 을 pET-28a 의 cloning site에서 cloning한 후 이들 clones (약 30개) 중 무작위로 각 종자의 7개 Clone을 염기분석 하여 아미노산 서열을 다중 정렬한 결과를 Fig. 1에서 나타내었다.</p> <p>그림에서 보듯이 30잔기의 Signal peptide를 가진 총 80개의 아미노산으로 된 서열로 각 품종간의 유사성이 매우 높음을 나타내었다.</p> <p>지하부 작물인 무의 경우 많은 항 곰팡이 단백질의 유전자가 cloning되어 그들의 유전적 정보가 제공되고 있다. 이들의 유전적 다중적 서열을 Gene Bank상에서 확인 후, 본 연구에서 획득한 항 곰팡이 단백질의 유전자 염기서열에서 유추된 아미노산 서열을 pairwise alignment하여 상호 유연성(distance)를 관찰하기 위해 Clustal W program (http://www.ebi.ac.uk/clustalw)을 통해 분석하였다.</p> <p>그 결과, Palkwang무로 부터 언어낸 clone pRAP D1은 Rs-AFP2와 매우 유사한 경향을 보여 동종의 항 진균 단백질로서 추정되며 나머지는 0.01 이내의 distance를 보여 국내 시판 무의 항 진균 단백질은 Terras등에 의해 분리된 Rs-AFP 와는 다름을 시사 하였다.</p> <p>특히 본 연구에 사용된 primer에 의해 clone된 것들 중 항 효모 활성을 가지는 Baekwoon의 pRAP G3 clone은 항 효모 활성도 가지고 있어 기존에 발표된 항 곰팡이 단백질과는 그 유전적 특성이 매우 다름을 시사하여 향후 이들 단백질의 항 곰팡이 mechanism의 차이 또한 매우 흥미롭게 생각된다.</p>