웰빙 열풍의 영향으로 건강보조식품 시장이 급속히 확대되고 있는데 특히 홍삼의 경우 간편하게 복용할 수 있는 파우치 포장 제품의 개발로 소비가 증대되고 있다. 본 연구는 열수추출법으로 제조된 홍삼 추출액의 품질관리를 위해 제품으로 부터 분리한 변패원인균의 세균학적 특성을 확인하였다. 자연변패된 제품의 변패균주를 분리하여 시료로 사용하였고 시료를 배양하여 얻은 콜로니를 평판배지에 도말하여 분리한 순수 콜로니를 실험하였다.
<h1>서 론</h1> <p>웰빙 열풍의 영향으로 인삼, 홍삼, 동충하초 등의 건강보조식품 시장이 급속히 확대되고 있다. 그 중에서도 특히 홍삼의 경우, 사포닌 및 갈변색소의 효능이 과학적으로 입증되고 있으며, 소비자들이 간편하게 복용할 수 있는 파우치 포장 제품의 개발로 소비가 증대되고 있는 추세이다.</p> <p>다양한 파우치 포장 제품 개발을 위한 훙삼 추출액의 추출방법에 대한 다각적인 연구가 이루어지고 있는 가운데, 현재 사용되고 있는 홍삼 추출액의 추출방법은 대부분 물이나 에탄올을 용매로 사용하는 방법이다. 추출과정 중 전분이 다량 추출되면 추출액 제조 후 침전이 발생되고, 홍삼 추출액 중에 함유된 다량의 다당류 및 단당류는 세균과 같은 미생물이 쉽게 이용할 수 있는 탄소원이 되기 쉽다. 이 때문에 가열 추출 후에 미생물의 영양세포나 내열성 포자가 잔존하는 경우 제품의 품질 저하 및 유통기간 단축의 문제가 발생하기도 한다. 실제로 포장공정이 완전 무균상태로 이루어지기는 힘든 조건이고, 전체공정이 장시간 열처리함에 따라 일반 부패세균은 사멸하나 고온에서도 생존하는 내열성 세균이 차후 제품의 변패를 유발하기 때문에 그 원인균을 규명하는 것이 시급히 해결해야 할 과제이다.</p> <p>본 연구에서는 열수추출법으로 제조된 홍삼 추출액의 품질관리방법을 모색하고자, 자연변패 된 홍삼 추출액 제품으로부터 변패원인 세균을 분리동정하고, 이들 변패원인균의 세균학적 특성을 규명하고 병원성의 유무를 확인하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 및 시약</h2> <p>변패원인세균 검출 및 배양용 배지는 GIBCO BRL사, pGEM \( ^ {\circledR } \)-T Vector 및 DNA polymerase는 Promega사, Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit은 Perkin Elmer사, 기타 각종 시약은 Sigma Co. (USA)로부터 각각 구입하여 사용하였다.</p> <h2>균주의 분리</h2> <p>변패균주 분리의 시료로 사용된 홍삼 추출액은 (주)오리엔탈바이오텍에서 생산하는 제품 중에서 자연변패된 것을 사용하였다. 자연변패 된 홍삼 추출액 일정량을 10진 희석한 후, Brain Heart Infusion (BHI) 한천 평판배지에 도말하고, \(37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 배양하여 콜로니를 언었다. 나타난 모든 콜로니를 다시 한번 한천 평판배지에 도말 배양하여 단일 콜로니를 순수 분리한 후, 사면배지에 보관하면서 실험하였다.</p> <h2>16S rDNA 염기서열 분석에 의한 분리균주의 동정</h2> <p>16S rDNA 염기서열 분석에 의한 분리균주의 동정은 기존의 방법에 따라 실시하였다. 균주로부터 추출한 DNA를 주형으로, primer 6F (5'-GRAGTTTGATCMTGGC-3'; corre-sponding to positions 6 to 23 of Escherichia coli 16S rDNA) 와 1492R (5'-GGTTA CCTTGTTACGACTT-3'; corresponding to positions 1472 to 1492 of E. coll) 를 사용하여 PCR반응을 실시하였다.PCR산물은 pGEM \( ^ {\circledR } \)-T Vector System에 cloning되었고, 16S rDNA gene의 염기서열 분석은 ABI 310 Automatic Sequencer (Perkin Elmer Co., U.S.A.)와 Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit을 사용하여 실시하였다. 확보된 염기서열은 NCBI (National Centerfor Biotechnology Information)에서 제공하는 Blast DNA Database Search Service (blastn 2.0)를 이용하여 비교 검색하 여 분리주의 계통발생학적 위치를 추정하였다.</p>