실험을 통해 calmidazolium의 농도에 비례하여 oocyte의 수분투과도가 감소하는 양상을 보였다. 또한 수분 투과도의 조절에 있어서 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) /calmodulin-dependent protein kinase의 관련 사실을 확인하고자 했으며 다음으로는 calmidazolium의 억제효과가 type 1A protein phosphatase inhibitor인 calyculin에 의해 역전되는지를 관찰했다. 그리고 Fig. 7에서는 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent protein kinase 외의 protein kinase가 AQP4 water channel 활성 조절에 관여 여부를 확인하고자 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)가 AQP4 cRNA를 주입한 oocyte의 수분 투과도에 미치는 효과를 관찰하였다.
<p>Fig. 4에서와 같이 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 농도가 AQP4 water channel을 통한 수분 투과도에 영향을 미침을 관찰하였으므로 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) /calmodtulir-dependent protein kinase가 직접 이러한 작용을 매개하는지를 알아보기 위해 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent protein kinase의 선택적 억제제로 알려진 calmidazolium이 AQP4 water channel을 통한 수분투과도에 미치는 효과를 관찰하였다. Fig. 5는 calmidazolium의 농도를 변화시키면서 30 분간 전처치한 후 oocyte의 수분투과도를 측정한 것으로서, calmidazolium의 농도를 \( 1 \mathrm {\mu M } \)에서 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 로 증가시킴에 따라 농도에 비례하여 수분투과도는 감소하였으며 calmidazolium \( 200 \mu \mathrm { M } \) 처치시 수분투과도는 대조군에 비해 \( 92 \% \) 감소하였다.</p> <p>AQP4 water channel을 통한 수분 투과도의 조절에 있어서 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) /calmodulin-dependent protein kinase의 관련 사실을 더욱 확인하기 위해서 calmidazolium의 억제효과가 type 1A protein phosphatase inhibitor인 calyculin에 의해 역전되는지를 알아 보았다(Fig. 6). \( 100 \mu \mathrm { M } \) calmidazolium 단독으로 30분간 전처치한 경우 AQP4 water channel을 통한 수분 투과도를 \( 90 \% \) 감소시켰으며, calyculin \( 0.1 \mu \mathrm { M } \) 을 \( 100 \mu \mathrm { M } \) calmidazolium과 함께 동시에 30분 전처치하였을 때는 calmidazolium에 의한 수분 투과 억제효과가 상쇄되어 대조군의 수분 투과도의 \( 85 \% \)로 회복됨을 관찰하였다. Calyculin 단독 처치시 대조군에 비해 수 분 투과도가 \(23 \% \) 증가됨으로써 constitutive phosphorylation이 어느 정도 존재하고 있음을 알 수 있었다. 이상의 결과는 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent protein kinase에 의한 phosphorylation이 AQP4 water channel의 수분 투과도를 촉진시킬 수 있음을 의미한다.</p> <p>\( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent protein kinase 이외에 또다른 protein kinase가 AQP4 water channel 활성 조절에 관여하는지를 알아보기 위해 protein kinase C를 활성화시키는 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)가 AQP4 cRNA를 주입한 oocyte의 수분 투과도에 미치는 효과를 관찰하였다(Fig. 7). PMA \( (100 \mathrm { nM } ) \) 를 10분 전처치할 경우 AQP4 cRNA expressed oocyte에서 수분 투과도가 control에 비해 \( 21 \% \) 증가하였으며, 훙미롭게도 PMA를 \( 1 \mu \mathrm { M } \)이상으로 증가시켰을 때는 수분 투과도가 오히려 \( 35 \% \) 감소되는 PMA의 biphasic effect를 관찰할 수 있었다.</p>