붉나무 에틸아세테이트 분획물의 총 페놀 함량과 gallic acid 화합물을 HPLC 분석을 통해 동정한 결과, 페놀 화합물의 함량은 각각 62.9, 70.3, 73.9 mg/g로 정량되었고 HPLC를 통한 gallic acid의 동정 결과 gallic acid의 함량은 각각 \( 21.5,30.6,27.7 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 정량되었다. RAW264.7 세포에 대한 시료의 독성은 100\(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\) 이하 농도에서 발견되지 않았다.
<h2>총 페놀 화합물 함량 및 HPLC를 통한 gallic acid 화합물 동정</h2> <p>붉나무 에틸아세테이트 분획물의 총 페놀류 화합물의 함량 및 HPLC 분석을 통한 gallic acid 화합물의 분석 및 동정을 위해 표준품과 비교하여 정량 분석하였다. 총 페놀 함량을 확인하기 위해 농도 별로 희석한 tannic acid 표준품의 정량 곡선을 통해 환산하였다. 정량 곡선은 \( \mathrm { y } =0.0127 \mathrm { x } + 0.1012 \) 로 나타났으며, 직 선성은 0.9884 였으며, 이를 통해 환산한 총 페놀 화합물의 함량은 각각 \( 62.9,70.3,73.9 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 정량되었다(Table 1). 표준품과 비교하여 HPLC를 통한 gallic acid를 분석 및 동정한 결과(Fig. 2), Choromatogram 상에서 retention time은 8.01분으로 나타났으며 \( 210 \mathrm { ~nm } \) 에서 \( 400 \mathrm { ~nm } \) 의 spectrum 비교를 통해 gallic acid의 최대흡광도인 \( 271 \mathrm { ~nm } \) 와 유사성을 확인하였으며, pattern의 유사성을 통해 gallic acid로 동정되었다. 표준품의 정량 곡선은 \( \mathrm { y } =25049 \mathrm { x } + 36374 \) 로 나타났으며, 직선성은 0.9981 였으며, 이를 통해 붉나무 잎, 줄기, 뿌리 에틸아세테이트 분획물에서 환산한 gallic acid의 함량은 각각 \( 21.5,30.6,27.7 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 정량되었다.</p> <h2>세포 생존율</h2> <p>붉나무 잎, 줄기, 뿌리 에틸아세테이트 분획물의 세포 생존률을 확인한 결과(Fig. 3), 붉나무 잎, 줄기, 뿌리 에틸아세테이트 분획물 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도에서 \( 110.4 \pm 4.2,114.8 \pm 3.0,116.2 \pm 0.3 \% \) 로 나타났다. 따라서 붉나무 잎, 줄기, 뿌리 에틸아세테이트 분획물의 RAW264.7 세포에 대한 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 이하 농도에서 시료의 독성은 확인되지 않았다.</p> <h2>항염증 활성</h2> <p>항염증 활성을 확인하기 위해, Nitric oxide (NO) 생성량 확인 및 iNOS 및 COX-2 단백질 및 mRNA 수준을 확인하였다. 붉나무 에틸아세테이트 분획물의 NO 수준을 확인한 결과(Fig. 4), LPS 처리에 의해 증가된 NO 는 처리된 시료에 의해 감소하였다. 붉나무 에틸아세테이트 분획물 잎, 줄기, 뿌리의 NO 생성량은 \( 449.1 \pm 5.3,222.2 \pm 1.0,208.0 \pm 0.9 \% \) 로 나타났다. 붉나무 에틸아세테이트 분획물의 iNOS 및 COX-2 단백질 발현을 확인한 결과(Fig. 5), iNOS 단백질 발현은 모두 감소하였다. 잎, 줄기, 뿌리 처리군 각각 iNOS 발현량은 LPS 처리군 \( (100 \%) \) 에 비해 \( 55.4 \pm 3.1,76.4 \pm 7.1,17.1 \pm 4.4 \% \) 로 나타났다. COX-2 단백질 발현 또한 모두 감소하였다. 잎, 줄기, 뿌리 처리군 각각 COX-2 발현량은 \( 86.5 \pm 4.1,93.9 \pm 3.8,35.6 \pm 6.6 \% \) 로 나타났다. 붉나무 에틸아세테이트 분획물의 iNOS 및 COX-2 mRNA 발현을 확인 한 결과(Fig. 6), iNOS mRNA 발현은 잎과 부리 처리군에서 감소하였다. 잎, 줄기, 뿌리 처리군 각각iNOS 발현량은 \( 92.6 \pm 2.2,110.2 \pm 1.1,37.4 \pm 4.8 \% \) 로 나타났다.COX-2 mRNA 발현 또한 모두 감소하였다. 잎, 줄기, 부리 처리군 각각 COX- 2 발현량은 \( 58.2 \pm 4.2,90.1 \pm 3.2,4.5 \pm 3.2 \% \) 로 나타났다.</p>