뽕나무(Morus alba)는 전국에 재식하며 동아시아에 널리 분포하며, 거풍, 청열, 명목의 효능이 있고, 발열, 두통, 목적, 구갈을 치료하는데 사용되고 있다. Asano는 N-containing sugars를 분리, 동정하였고, 청목노상 뽕잎 callus 에서 Helicobacter pylori에 대한 억제물질이 생산되며, 항균효과가 뛰어나다고 보고하였다. 뽕나무의 유용물질을 얻기 위해 대량생산이 필요하여 생리활성이 우수한 청목노상 뽕잎의 기능성 물질의 대량생산을 위한 연구를 하려고 한다.
<h1>서 론</h1> <p>뽕나무(Morus alba)는 전국에 재식하며 일본, 만주, 중국, 몽골 등 동아시아에 널리 분포한다. 잎은 상엽이라고 하며, 거풍, 청열, 명목의 효능이 있고, 발열, 두통, 목적, 구갈을 치료하는데 예로부터 이용되어 오고 있는 것으로 전해진다. 또한 뽕나무는 풍으로 인한 소양증과 건조, 각기 풍기, 사지 경련, 숨이 막히는 증상을 치료하고 음식을 소화하며, 소변이 잘 나오게 하는 약리효과를 가지고 있다. 그리고 뽕나무 잎에는 flavones, steroids, triterpenes, amino acids, vitamin 및 다량의 미네랄 성분이 존재하고 있으며, 또한 전통 생약으로 당뇨병을 예방, 치료하며 갈증을 해소시키는 것으로 알려져 있다. Asano는 봉나무 잎으로부터 N-containing sugars를 분리, 동정 하였으며 뽕잎의 혈당강하효과에 대한 영향을 발표하였다. 그 와 더불어 뽕나무 껍질은 예로부터 우리나라에서 상백피라는 약재로써 고혈압 치료 등에 쓰여 왔다. 본 연구팀은 현재 국내에 보존되어오고 있는 뽕잎 108 종의 기능성 및 Helicobacter pylori 억제력을 검토한 바 있고, 그 중 청목노상 품종의 뽕잎에서 항산화 및 항염증 작용이 우수한 것으로 보고하였다 .</p> <p>식물은 식량자원으로의 역할 이외에도 기내에 함유된 유용물질을 직접 추출하여 얻으나, 외부 인자에 의한 영향에 의해 안정된 공급이 힘들고, 유용물질의 함량이 낮고 생장 속도가느려 대량생산하기가 어렵다. 식물세포배양공학을 이용한 유용물질 생산기술은 생명과학분야에서 식물자원생산 이용 기술로서 식물생물공학 분야의 근간을 형성하고 있다. 이 기술은 식물유래 유용물질의 생산을 안정적으로 대량 생산할수 있는 것을 특징으로 하며, 세포배양기술, 생리효과 연구,분리정제기술, 대량배양기술 등으로 이루어져 있다. 윤 등은 청목노상 뼝 잎 callus 에서도 Helicobacter pylori에 대한 억제물질이 생산되며, 항균효과가 뛰어나다고 보고한 바 있다. 따라서 본 연구에서는 생리활성이 우수한 청목노상 뽕잎의 기능성 물질의 대량생산 방안을 위한 연구의 일환으로 청목노상 세포배양을 이용하여 Helicobacter pylori 억제물질의 대량생산을 위한 연구의 일환으로 Helicobacter pylori에 대한 억제 효과를 가지는 청목노상 뽕잎 callus의 biomass를 위한 배양최적 조건을 규명하여, Helicobacter pylori 억제에 기인하는 기능성 물질의 대량 생산 가능성을 연구하고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>실험재료인 청목노상 뽕잎은 경상북도 상주시 잠사시험장에서 5 월에 수집한 어린잎을 세척한 후 물기를 제거하고 \( 4 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \)냉장고에 보관하면서 사용하였다.</p> <h2>Spot 접종, 배양 및 callus 유도</h2> <p>Spot 접종은 채취한 청목노상 잎 시료를 24시간 이내에 70% 에탄올을 사용하여 10 초간 3회 표면 살균 후 \(1\%\) sodium hypochlorite로 20 분간 살균하고, 멸균수로 수회 세척하여 가로×세로 약 \( 1 \mathrm { ~cm } \)정도의 크기로 잘라 내어 고체배지에 spot 접종하였다. 이때 사용된 고체 배지는 MS 배지를 사용하였으며, \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \)암소에서 30 일간 평판 배양하였다. Callus의 유도는 MS배지에 탄소원으로 saccharose를 \( 30 \mathrm { g } / \mathrm { l } \)의 농도로 처리하였으며, 생장조절제로서 naphthalene acetic acid (NAA), 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D), 6-benzylaminopurin (BA)와 kinetin 같은 plant growth regulator를 \( 10 \mu \mathrm { M } \)의 농도로 처리된 배지에 시료를 치상하고 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 암배양 하였다. Callus 형성배지에서 형성된 callus는 4 주 간격으로 계대 배양하였다.</p>