피부에 있어서 활성산소의 생성은 과산화질소를 생성하여 유전정보를 변화시켜 노화를 촉진시키는데 DPPH를 통해 활성산소 활성의 지표를 나타낸다. 주박은 DPPH radical의 소거 효과가 있는 것을 확인하였고 피부 섬유아세포에 처리된 주박은 세포의 독성이 없고 동시에 세포의 증식을 유도하는 것을 확인하였고, 궁극적으로는 피부세포의 분화 및 재생에 관여하고 주박의 효과는 elastase의 활성 억제기작에는 연관이 없음을 알 수 있었다.
<p>1 분씩 22 cycles 수행하였고, PCR 산물은 \( 2 \% \) agarose gel로 전기영동을 한 후, ethidium bromide을 첨가하여 밴드를 가시화하였다. 사용된 primer는 다음과 같다. MMP-1 forward 5'-TGGGAGCAAACACATCTGA-3'; MMP-1 reverse 5'-ATCACTTCTCCCCGAATCGT-3'; TIMP-1 forward 5'-TTCCGACCTCGTCATCAGGG-'3; TIMP-1 reverse 5'-ATTACGGCTATCTGGGACCGC-3'; 3 -actin forward \( 5 ^ {\prime } \)GAGACCTTCAACACCCCAGCC-3'; \( \beta \)-actin reverse5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGTC-3'.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실험 결과는 평균 \( \pm \) 표준편차(means \( \triangle \mathrm { SEM } \) )로 나타내었다. 통계처리는 Dunnett's test로 검정하였고 정상 대조군과 비교하여 \(<0.05 \) 이하의 경우 유의적인 차이가 있다고 판정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>주박에 의한 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)radical 소거 효과</h3> <p>피부에 있어서 활성산소의 생성은 과산화질소를 생성하여 세포변성 및 DNA를 손상시켜 유전정보를 변화시켜 노화를 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 이러한 활성산소 활성의 지표로 이용되는 DPPH는 지질과산화 반응 중에 전자를 받아 산화·환원 반응에 따라 색을 띄는 radical로, 일반적으로 free radical의 소거 반응을 보기 위한 실험방법 중 하나이다.<p>박의 항산화 효과를 알아보기 위해 DPPH를 이용하여 그 소거능을 확인하였다(Fig. 1). 농도별로 처리된 주박의 경우 \( 250 \mathrm { gg } / \mathrm { ml } \) 에서 \( 43 \% \) 의 free radical 소거활성을, \( 500 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 에서 \( 40 \% \) 의 소거활성을 나타내었다. 본 결과로부터 주박은 \( \mathrm { DPPH } \) radical의 소거 효과가 있는 것을 확인하였다.</p> <h2>주박에 의한 피부 섬유아세포 증식 효과</h2> <p>피부 섬유아세포에서 주박의 처리가 세포증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여 Ez-cytox enhanced cell viability kit를 이용하여 세포 증식 효과를 조사하였다. Fig. 2의 결과에서,주박의 처리에 의해 피부 섬유아세포가 농도의존적으로 증가함을 알 수 있었다. 즉, 피부 섬유아세포에 처리된 주박은 세포의 독성이 없다는 것과 동시에 세포의 증식을 유도하는 것을 확인하였고, 궁극적으로는 피부세포의 분화 및 재생에 관여되는 것으로 판단할 수 있었다.</p> <h3>주박에 의한 elastase 활성 저해 효과</h3> <p>Elastin은 피부 진피층의 약 \( 3-4 \% \) 정도를 차지하는 기질 단백질로써, 피부의 탄력을 유지하는 기능을 한다[2]. Elastin의 분해는 인체의 중성구 과립구 내에 존재하는 elastase에 의해 일어난다. Elastase는 elastin과 더불어 중요 기질 단백질인 collagen도 분해할 수 있는 비특이적 가수분해혀소이다. 이러한 elastase의 활성은 기질 단백질을 분해시켜 피부의 세포기저 층의 그물망 구조를 끊어줌으로써 주름을 유발하는 주원인 효소로 이상조직에서는 그 활성이 높아져 직접적으로 조직을 파괴하여 피부의 주름을 유발하게 된다. 따라서, elastase의 활성 억제 효과를 확인하기 위해 Tris- \( \mathrm { HCl } \) 과 혼합된 다양한 농도의 주박을 elastase 효.소와 기질을 결합하여 elastase의 활성 억제현상을 측정하였다(Fig. 3). 주박을 처리하지 않은 비처리군의 elastase의 활성과 비교하였을 때, 농도별로 처리된 주박 처리군은 비처리군과 마찬가지로 활성의 억제 효과를 나타내지 않았다. 따라서, 주박의 효과는 elastase의 활성 억제기작에는 연관이 없음을 알 수 있었다.</p>