\( \mathrm { ABTS } ^ { + } \) decolorization assay 방법을 사용해 항산화력을 측정했다. ABTS+ radical 소거능\(\%\)은 \(1- \) 시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도) \( \times 100 \) 으로 나타났다. tyrosinase 저해활성 측정을 통해 미백 활성을 확인하였다. 저해율(%)은 (1- 시료첨가구의 흡광도/ 무첨가구의 흡광도) x 100으로 나타났다. 본 실험에 사용된 B16F10세포는 DMEM 배지를 사용해 배양하였고 incubator에 적응시키며 계대 배양 하였다.
<p>전자공여능 \( ( \%) = (1- \) 시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도) \( \times 100 \)</p> <h2>\( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)radical scavenging activity assay 측정</h2> <p>ABTS radical을 이용하여 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)decolorization assay방법에 의해 항산화력을 측정하였다. \( 2.45 \mathrm { mM } \) potassium persulfate와 \( 7 \mathrm { mM } \) 2,2-azino-bis-(3-ethyl-benthiazoline-6-sulfonic acid)를 혼합한 뒤 실온에서 24시간 동안 반응시켜 라디칼의 생성을 유도한 후 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)를 형성시킨다. 이 후 에탄올에 희석한 후 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } 100 \mu 1 \) 에 시료를 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 첨가하여 \( 700 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>\( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)radical 소거능(%) \( =(1 \) - 시료첨가구의 흡광도/ 무첨가구의 흡광도 \( ) \times 100 \)</p> <p>Tyrosinase 저해활성 측정</p> <p>미백 활성을 확인하기 위해 tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법에 따라 실험을 진행하였다. \( \mathrm { pH 6.8 } \)인 \( 67 \mathrm { mM } \) sodium phosphate buffer \( 80 \mu \mathrm { l } \) 를 이용해 \( 10 \mathrm { mM } \) L-DOPA (Sigma, USA)를 용해한 기질 액 \( 40 \mu l \) 와 시료용액 \( 40 \mu \mathrm { l } \) 의 혼합 용액에 \( 200 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) mushroom tyrosinase (Sigma, USA) \( 40 \mu l \) 를 첨가시켜 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 반응시킨다. 그후 생성된 DOPA chrome을 흡광도 \( 492 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였으며, tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가구과 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>저해율 \( ( \%)=(1- \) 시료첨가구의 흡광도/무첨가구의 흡광도) \( \times 100 \)</p> <h2>세포주 및 세포 배양</h2> <p>본 실험에 사용된 멜라노마 세포인 B16F10 의 배양은 \( 1 \% \) 의 penicillin/streptomycin \( (100 \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) \) 와 \( 10 \% \) 의 FBS를 첨가한 DMEM 배지를 사용하였으며, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에 적응시키며 계대 배양하였다.</p>