Sarcoma 180을 부유시킨 ICR 마우스의 복강에 이식하여 복수 암을 유발시키고, 조다당류를 생리식염수에 용해시켜 투여하여 Sarcoma 180 최종 투여 후 32일까지 관찰하여 평균 수명 일수를 계산하여 수명 연장 효과를 \( \mathrm { ILS } = [( \mathrm { T } - \mathrm { C } ) / \mathrm { C } ] \times 100 \) 식으로평가하였다. 또한 정상세포는 마우스 섬유아세포 \( \mathrm { NIH } 3 \mathrm { ~T } 3 \), 암세포는 마우스 육종암세포 Sarcoma 180, 인간 간암세포 HepG2, 인간 대장암세포 HT-29 로 Denizot와 Lang 의 방법에 따라 세포독성 실험을 실시하였다.
<h2>수명 연장 실험</h2> <p>Sarcoma 180 을 \( 5 \times 10 ^ { 6 } \) cells/ml이 되도록 부유시켜 \( 0.2 \mathrm { ml } \) 씩(1 \( \times 10 ^ { 6 } \) cells/mouse) ICR 마우스의 복강에 이식하여 복수 암을 유발시키고 Sarcoma 180 을 이식한 24시간 후부터 20 \( \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도로 추출한 조다당류를 생리식염수 에 용해시켜 \( 0.22 \mu \mathrm { m } \) 의 membrane filter로 여과시킨 후 각각 의 추출물을 매일 1회 10 일간 복강 내에 \( 0.2 \mathrm { ml } \) 씩 투여하였다. 대조군에는 같은 기간, 동량의 생리식염수를 투여하였으 며, Sarcoma 180 최종 투여 후 32일까지 관찰하여 평균 수명 일수를 계산하고 아래의 식으로 수명연장[increase of life span (ILS)]을 계산하여 버섯에서 추출한 조다당류가 암세포 의 성장을 억제시킨 효과를 평가하였다.</p> <p>\( \mathrm { ILS } = [( \mathrm { T } - \mathrm { C } ) / \mathrm { C } ] \times 100 \)</p> <ul> <li>C: 대소군의 평균 수명(일)</li> <li>\( \mathrm { T } \) : 실힘군의 평균 수명(일)</li></ul> <h2>세포 독성 실험</h2> <p>실험에 사용한 정상세포는 마우스 섬유아세포 \( \mathrm { NIH } 3 \mathrm { ~T } 3 \), 암세포는 마우스 육종암세포 Sarcoma 180, 인간 간암세포 HepG2, 인간 대장암세포 HT-29이었다. 세포독성 실험은 Denizot와 Lang [6]의 방법에 따라 수행하였다. NIH3T3, HepG2 및 HT-29 세포는 \( 1 \times 10 ^ { 5 } \) cells/ml의 세포를 96 well microtiter plate에 \( 100 \mu 1 \) 씩 주입한 후. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기 에서 24시간 동안 배양하였다. 각 추출물의 농도가 \( 0.01 \sim 2.0 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 조정한 후 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 세포에 처리하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 24 시간 동안 배양한 후 \( 5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) solution \( 10 \mu 1 \) 를 각 well에 첨가한 후 4 시간 동안 암 상태로 배양하였다. 푸른색의 MTT formazan이 생성되면 dimethylsulfoxide (DMSO) \( 100 \mu l \) 에 용해시켜 ELISA plate reader를 이용하여 \( 570 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정 하였다. Sarcoma 180 은 \( 2 \times 10 ^ { 5 } \) cells/ml의 세포를 96 well mi-crotiter plate에 \( 50 \mu \) 씩 주입하고 각각의 조다당류 최종 농 도를 \( 0.01 \sim 2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 암세포에 처리하여 최종 용 적이 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 가 되도록 하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 24 시 간 배양하였다. \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 2,3-bis (2-methoxyl-4-nitro-5-sulfo-phenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT) solution 당 \( 25 \mu \mathrm { M } \) phenazine methosulfate가 포함된 용액을 well 당 30 \( \mu \mathrm { l } \) 씩 처리하여 암 조건에서 2 시간 베양한 후 ELISA plate비교하여 구하였다.</p>