Oszinc626 유전자 영역 및 Ds 전이인자 영역을 이용하여 homo 계통을 선발하고 GUS 활성 분석한 결과 Ds 전인인자에 의해 Oszinc626 유전자가 knock-out된 개체에서만 GUS 발현이 나타났다. Southern blot 분석과 RT-PCR을 통해 Oszinc626 유전자는 single copy로 존재하고 종자, 줄기 및 뿌리에서 높게 발현됨을 확인하였으며 Oszinc626 유전자는 식물의 발육 및 생장에 관여하는 유전자로 생각된다.
<h2>선발 변이계통의 Genotyping과 GUS 발현 분석</h2> <p>Figure 1 과 같은 표현형을 보인 변이체 중 homo 계통을 선발하기 위해 Oszinc626 유전자 영역 및 Ds 전이인자 영역을 이용하여 genotype PCR분석한 결과 wild type에는 \( 500 \mathrm { bp } \) 크기의 단일 band, hetero type에는 \( 500 \mathrm { bp } \) 와 \( 400 \mathrm { bp } \) 크기의 두 개의 band 그리고 homo type에서는 \( 400 \mathrm { bp } \) 크기의 단일 밴드를 얻어 homo 개체를 선발하였다 (Figure 4-A). Genotype이 확인된 각각 개체들의 뿌리를 이용하여 GUS 활성 분석한 결과 \( 400 \mathrm { bp } \) 크기의 단일밴드가 나온 개체에서는 GLS의 활성이 뿌리 전체에 강하게 발현하였으며, wild type과 hetero type의 개체와 현저하게 구분 할 수 있었다 (Figure 4-B). 이 결과 Ds 전인인자에 의해 Oszinc626 유전자가 knock-out된 개체에서만 GUS 발현이 되었음을 알 수 있었다.</p> <h2>Oszinc626 유전자의 copy 수 및 발현 분석</h2> <p>벼 게놈 상에서 Oszinc626 유전자의 copy 수를 알아보기 위해 동진 벼 잎을 채취해서 cDNA의 염기서열 중 벼의 다른 zinc-finger protein과 상동성이 낮은 \( 3 ^ {\prime } \) 말단 \( 500 \mathrm { bp } \) 의 특정 염기서열부위를 probe로 하여 Southern blot 분석한 결과 사용된 4개의 제한효소에서 모두 single band로 보였다 (Figure 5-A). 벼의 기관별 Oszinc626 유전자의 발현 양상을 분석하기 위해 해당유전자의 특이 primer를 작성하고 RT-PCR을 수행한 결과 잎을 제외하고 종자, 줄기 및 뿌리에서 높게 발현됨을 알 수 있었다 (Figure 5-B). 따라서 Oszinc626유전자는 벼 게놈 내에 single copy로 존재하며 조직 별 GUS 발현분석 및 RT-PCR을 통한 기관별 발현 양상으로 보아 기관분화와 관련한 생장점에 주로 발현하는 유전자로 종자의 발육 및 식물생장에 관여하는 유전자로 생각된다.</p> <h2>GUS 활성분석을 통한 Oszinc626 유전자 promoter 해석</h2> <p>Oszinc626 유전자가 knock-out된 Ds 삽입 변이 계통을 이용하여 꽃 조직에서 GUS 발현 양상을 관찰한 결과 꽃밥, 수술세포 및 외피의 inner layer에서 강한 발현을 보였다 (Figure 6). 따라서 Oszinc626 유전자 promoter는 수분 수정 시 직접적으로 영향을 미치는 꽃밥 및 수술에서 강하게 발현을 조절하며, 종자 형성 시 종자의 크기에 영향을 주는 외피의 inner layer 발현에도 관여함을 알 수 있었다. 이와 같은 결과는 한 등 (1999)이 \( A c / D s \) system을 이용한 유용 유전자의 분리 및 유전자 promoter 기능해석 등과도 일치하는 결과를 얻었다.</p>