투여량은 실험군 benzophenone, 대조군 EtOH를 각각 투여, 유정란(밀양) \(90\%\) 이상의 발생율을 보였고, benzophenone을 내분비 교란물질로 사용하였다. Chicken incubator는 일정한 온도와 상대습도를 유지하였고, 3 대조군으로 나누어 실험하였으며, 용매 대조군은 \(15\%\) EtOH 투여군을 두었다. 시험군은 4일째 air sac에 500\(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\) benzophenone, 대조군에는500\(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\) EtOH를 투여하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 동물</h2> <p>Chick embryo 발생실험을 위해 사육 중인 White Leghorn품종의 유정란(밀양)을 구입하여 사용하였다. 유정란은 \( 52 \sim 63 \mathrm { ~g } \)의 것을 사용하였으며, 발생율은 \( 90 \% \) 이상이었다.</p> <h2>실험 재료</h2> <p>실험을 위한 내분비 교란물질은 benzophenone을 사용하였으며, 이를 비롯하여 본 실험에서 사용한 모든 시야들은 Sigma Co. (USA) 제품을 구입하였다. Epp. tube와 tip, petrid-ish, \( 1 \mathrm { ml } \) disposable syringe 등은 일회용품을 사용하였다. 실험에 사용된 모든 초자기구와 해부용 가위, 해부용 핀셋 등은 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 고압증기멸균한 뒤 사용하였다.</p> <h2>Chicken incubator 조건</h2> <p>온도와 상대습도를 조절할 수 있고, 공기순환과 난황을 회전시키는 교반시설이 있는 chicken incubator를 사용하였다. Chicken incubator의 적정조건은 온도 \( 37 \pm 1.0 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 상대습도 \( 65.5 \pm 5 \% \)를 유지하였다.</p> <h2>시험군 설정</h2> <p>무처치 대조군과 용매 대조군, 실험군으로 나누어 실험하였으며, 용매 대조군은 \( 15 \% \) EtOH 투여군을 두었다.</p> <h2>시험물질 투여</h2> <p>시료의 투여를 위해서 유정란의 air sac 부근에 해부용 가위로 두들겨서 약 \( 1 \mathrm { ~mm } \) 정도의 구멍을 만든 후 chicken in-cubator에 넣고 발생시켰다. Benzophenone을 투여하지 않은 대조군을 발생 1일에서 4일째까지 깨어보고 혈관의 형성이 왕성한 시기인 4일째에 benzophenone과 EtOH을 주사기를 이용하여 air sac에 투여하였다.</p> <p>무처치대조군은 발생 1, 2, 3, 4, 6, 9, 12, 15, 18, 21 \)일에 각각 깨어 보았다. 발생 4 일째에 용매 대조군에는 \( 15 \% \) EtOH \( 100 \mu \mathrm { l } \) 를, 실험군에는 1, 20, 40, 60, 80, 100, 200, 300, 400 및 500 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 benzophenone 용액을 투여하였으며, 배아 관찰은 대조군 및 실험군 모두 6, 9, 12, 15, 18 및 21일에 관찰하였다. Petridish에 생리식염수를 부은 후, 난황막이 손상되지 않도록 주의하여 수정란을 깨뜨리고 흰자위와 난황이 생리식염수에 빠지도록 하였다. 난황을 천천히 회전시키는 방법으로 배반이 위로 향하도록 한 후 배반을 분리한 후 관찰하였다. 검사는 발생의 유무와 외형검사를 실시하였고, 기형발생도 관찰하였다. 6일 이후부터는 체장 \( ( \mathrm { mm } ) \)도 조사하였다.</p>