HT1080 세포에서 상등액에서 흡광도를 측정하여 지질과산화 정도는 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 \( \% \) 값으로 환산하였다. Fenton반응에 의해 발생된 hydrxyl radical에 노출된 DNA 산화는 DNA \( 1 \mu \mathrm{g} \)을 포함하는 혼합물에 agarose gel에 전기영동한 후 LAS3000\( ^{\circledR} \) image analyzer (Fujifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 촬영하였다.
<h2>세포에서 지질과산화에 대한 항산화 활성</h2> <p>6-well plate에 배양한 HT1080 세포에 \( \mathrm{ABGE} \) 를 \( 1,5,10 \), \( 50 \) 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 후에 \( 80 \mathrm{mM} ~ \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 및 \( 80 \mathrm{mM} ~ \mathrm{FeSO}_{4} \)를 혼합한 용액 \( 40 \mu \mathrm{l} \)를 처리하여 \( 5 \mathrm{hr} \) 후 PBS로 2번 세척하였다. Trypsin-EDTA를 처리하여 세포를 회수하여 각 well에 DMEM \( 500 \mu \mathrm{l} \) 를 넣어 현탁 후 새 튜브에 옮긴고 \( 1,000 \times \mathrm{g} \)에서 \( 5 \mathrm{~min} \) 동안 원심분리 하였다. 상등액을 버리고 \( 1.2 \% \) KCl을 \( 30 \mu \mathrm{l} \) 넣고 혼합한 후 \( 1\% \) SDS \( 50 \mu \mathrm{l} \), acetic acid \( \left(\mathrm{pH}\right. 3.7 \)) \( 375 \mu \mathrm{l}, ~ 0.8 \% \) TBA \( 375 \mu \mathrm{l} \)를 첨가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 2 \mathrm{hr} \) 동안 반응시킨 후 실온에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 동안 반응시켰다. 그 다음 15:1 비율의 n-butanol : pyridine 용액 \( 500 \mu \mathrm{l} \)를 첨가한 후에 \( 1,000 \times \mathrm{g} \)에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 동안 원심분리한 후, 상등액을 \( 532 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 지질과산화 정도는 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 \( \% \) 값으로 환산하였다.</p> <h2>Hydroxyl radical에 의한 DNA 손상을 전기영동법으로 분석</h2> <p>Fenton반응에 의해 발생된 hydroxyl radical에 노출된 DNA의 산화는 기존의 방법에 따라 수행하였다. 먼저 \( 100 \mu \mathrm{l} \)의 DNA 용액에 시험농도의 ABGE, 최종농도가 각각 \( 200 \mu \mathrm{M} ~ \mathrm{FeSO}_{4}, 1 \mathrm{mM} ~ \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 및 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)인 genomic DNA를 첨가하였다. 반응 혼합물을 \( 30 \mathrm{~min} \) 동안 상온에서 반응시킨 후 최종농도가 \( 10 \mathrm{mM} \)이 되도록 EDTA를 첨가하여 반응을 종결시켰다. DNA \( 1 \mu \mathrm{g} \)을 포함하는 \( 20 \mu \mathrm{l} \)의 반응 혼합물을 \( 1 \% \) agarose gel에서 \( 100 \mathrm{~V} \)로 \( 30 \mathrm{~min} \) 동안 전기영동한 후 Gel은 LAS3000\( ^{\circledR} \) image analyzer (Fujifilm Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 촬영하였다.</p>