건조 마 추출물과 그 분획물들의 인체 암세포 증식 억제효과를 조사를 목적으로 MTT assay를 실시하였다. 저온진공건조방법을 통해서 각각의 분획물들을 농도별로 처리하였을 때의 결과를 요약하면 HT1080 세포와 유사하게 건조 마 분획물들 중 water 분획물을 제외하고 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제하였으며, 특히 \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물에 의한 활성이 가장 높은것으로 보였다. Park 등은 4종류의 한약재를 물과 에탄올로 추출하여 인체 유방암 세포와 인체 폐암세포에 대한 증식억제효과를 살펴본 결과, 산약의 경우 에탄올 추출물보다 물 추출물이 증식억제효과가 높았으나 유의적인 차이가 없다고 하였으며, 시료 전처리와 추출 용매 및 방법 등에 따라 연구결과와 차이가 있다고 생각한다. 연구 결과, 분획물들 중 \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물에 의한 암세포 증식 억제 효과와 세포 내 활성 산소 종 생성 억제가 굉장히 높았기 때문에 건조 마의 생리활성 물질인 flavonoids 및 polyphenols류가 있을것으로 생각된다.
<h2>암세포 증식 억제효과</h2> <p>건조 마 추출물과 그 분획물들의 인체 암세포 증식 억제효과를 조사하기 위해 MTT assay를 행하였다. Fig. 3은 건조 마의 A+M 추출물과 \( \mathrm{MeOH} \) 추출물을 0.05 에서 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 여러 농도로 인체 섬유육종세포(HT1080)에 처리했을 때 인체 암세포 증식 억제효과를 나타낸 것이다. 저온진공건조방법으로 건조된 마 분말의 A+M 추출물은 0.5 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{m} \) 의 첨가농도에서 \( 90 \% \) 이상의 높은 억제효과를 나타내었으며( \( \mathrm{p}<0.05)\), \(\mathrm{IC}_{50} \) 농도는 \( 0.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었다. \( \mathrm{MeOH} \) 추출물의 경우, 0.5 및 \(1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 첨가농도에서 A+M 추출물과 마찬가지로 \( 90 \% \) 이상의 암세포 증식 억제효과를 나타내었고( \( \mathrm{p}<0.05)\), \(\mathrm{IC}_{50} \) 농도도 \( 0.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 HT1080 세포에 대한 증식억제 효과가 A+M 추출물과 유사하게 나타남을 알 수 있었다. 저온진공건조 마 추출물을 n-hexane, \( 85 \% \) aq. \(\mathrm{MeOH}\), n-\(\mathrm{BuOH}\), water로 다시 추출하여 얻어진 각각의 분획물들을 농도별로 처리하였을 때, 건조 마 분획물들 중 water 분획물을 제외하고 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제하였으며, 특히 \( 85 \% \mathrm{aq.} \mathrm{~MeOH} \) 분획물에 의한 활성이 높았다. \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물의 경우 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이상의 농도에서 \( 90 \% \) 이상의 높은 암세포 증식 억제 효과를 나타내었으며 \( (\mathrm{p}<0.05) \), \(\mathrm{IC}_{50} \) 농도는 \( 0.27 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었다. n-Hexane 분획물의 경우, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 농도에서 \( 90 \% \) 이상의 암세포 증식 억제효과를 나타내었고( \( p<0.05) \), n-\(\mathrm{BuOH} \) 분획물도 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이상의 농도에서 \( 90 \% \) 이상의 암세포 증식 억제효과를 나타내었으며(p<0.05), n-hexane 및 n-\( \mathrm{BuOH} \) 분획물의 \( \mathrm{IC}_{50} \) 농도는 각각 \( 0.53,0.72 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었다. Water 분획물의 경우, 다른 시료들과 동일한 첨가농도에서 암세포 증식 억제 효과를 나타내지 않았다. Fig. 5은 인체 결장암세포(HT-29)에 대한 결과를 나타낸 것으로, A+M 추출물은 0.5 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 첨가농도에서 \( 90 \% \) 이상의 높은 억제효과를 나타내었으며 \( (\mathrm{p}<0.05)\), \(\mathrm{IC}_{50} \) 농도는 \( 0.28 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었다. \( \mathrm{MeOH} \) 추출물의 경우, 0.5 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 첨가농도에서 각각 \( 24,73 \% \) 의 암세포 증식 억제효과를 나타내었고, \( \mathrm{IC}_{50} \) 농도는 \( 0.70 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 각 추출물들은 HT 1080 세포의 결과와 비교했을 때 암세포 증식 억제효과가 낮은 것을 알 수 있었다\((p<0.05)\). Fig. 6에는 각각의 분획물들을 농도별로 처리하였을 때 결과를 나타낸 것으로, HT1080 세포와 유사하게 건조 마 분획물들 중 water 분획물을 제외하고 농도 의존적으로 암세포의 증식을 억제하였으며, 특히 \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물에 의한 활성이 높았다. \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물의 경우 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이상의 농도에서 \( 90 \% \) 이상의 높은 암세포 증식 억제효과를 나타내었으며\((p<0.05)\), \( \mathrm{IC}_{50} \) 농도는 \( 0.15 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었다. n-Hexane 및 n-\(\mathrm{BuOH}\) 분획물의 \( \mathrm{IC}_{50} \) 농도는 각각 \( 0.33,0.46 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이었으며, water 분획물을 제외한 분획물들은 HT 1080 세포와 비교하여 더 높은 암세포 억제효과를 나타내었다. Lee 등은 마 추출물의 돌연변이원에 대한 억제효과를 알아보기 위해 산마와 재배마를 가지고 조리시 형성된 변이원 및 화학적으로 유도된 순수변인원인 2-AF (2- ami-nofluorene), benzo(a)pyrene, sodium azide에 대해 Ames test를 실시한 결과 변이원 중 2-AF에 대한 산마 \( \mathrm{CHCl}_{3} / \mathrm{MeOH} \) 추출물이 plate 당 \( 10 \mathrm{mg} \) 농도에서 억제활성이 \( 91.5 \% \) 로 나타났으며, plate 당 \( 1 \mathrm{mg} \) 농도에서도 \( 67 \% \) 의 높은 억제효과를 나타내 추출물 중에서 억제효과가 가장 높은 것으로 나타났다고 보고하였다. Shin 등은 마 식이섬유의 항돌연변이 효과를 보기 위해 총 식이섬유(total dietary fiber, TDF), 불용성 식이섬유인 a-cellulose, 수용성 식이섬유인 pectin을 추출하여 MNNG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine)와 2-AF에 대한 억제 효과를 검토한 결과, 산마의 총 식이섬유가 2-AF와 MNNG에 대해서 각각 \( 12.4 \%\), \(18.7 \% \), 재배마는 \( 33.2 \%\), \(49.1 \% \) 의 억제효과를 나타내었고, 산마와 재배마에서 추출한 a-cellulose와 pectin은 2-AF에 의해 유발되는 돌연변이원성에 비해 MNNG에 의해 유발되는 돌연변이원성을 더 효과적으로 억제한다고 보고하였다. Park 등은 산약, 행인, 산사자, 지실 등 4 종류의 한약재를 물과 에탄올로 추출하여 인체 유방암 세포(MDA- MB-231)와 인체 폐암세포(A549)에 대한 증식억제효과를 살펴본 결과, 산약의 경우 에탄올 추출물보다 물 추출물이 증식억제효과가 높았으나 유의적인 차이가 없다고 보고하였으며, 시료 전처리와 추출 용매 및 방법 등에 따라 본 연구결과와 차이가 나타나는 것으로 생각된다. Kim 등은 건조 마로부터 메탄올 추출물들을 조제하고 이로부터 분획물들을 조제하여 항균, 항산화 및 항혈전 효과를 검토한 결과 마의 메탄올 추출물에서는 항혈전 활성이 높았고 에틸아세테트 분획물은 항세균 및 항산화 활성이 높았다고 보고하였고 총 polyphenols 및 총 flavonoids 함량은 에틸아세테이트 분획에서 가장 높게 나타났다고 보고하였다. 본 연구 결과로부터 분획물들 중 \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물에 의한 세포 내 활성 산소 종 생성 억제 및 암세포 증식 억제 효과가 높았으므로 이 분획물에 건조 마의 생리활성 물질인 flavonoids 및 polyphenols류가 함유되어 있을 것으로 추정된다.</p>