분주 받은 AGS 위암세포를 \( 10 \% \) FBS와 1 \( \% \) penicillin 및 streptomycin이 포함된 RPMI-1640 배지로 배양하고, 제공받은 흑마늘 열수추출물은 AGS 세포를 24시간 동안 안정화시킨 후 ABG를 48시간 동안 처리하였다. MTT assay를 통해 3시간 동안 배양한 후 ELISA reader로 \( 540 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 세포 성장억제 조사와 ABG 처리에 의한 AGS 세포의 이동성에 미치는 영향을 wound healing 방법으로 비교하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>AGS 위암세포의 배양 및 시료의 처리</h2> <p>AGS 인체 위암세포는 한국생명공학연구소에서 분주 받았으며, \( 10 \% \) fetal bovine serum (FBS)에 1 \( \% \)의 penicillin 및 streptomycin (Biofluids, Rockville, MD, USA)이 포함된 RPMI-1640 배지(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 조건 하에서 배양하였다. 흑마늘 열수추출물(water extract of aged black garlic, ABG) 은 인제대학교 식품영양학과 김정인 교수연구실에서 제공받았으며, ABG 의 처리를 위하여 AGS 세포를 6 well에 \( 1 \times 10 ^ { 5 } \) 개 \( / \mathrm { ml } \) 정도 분주하여 24시간 동안 안정화시켰다. ABG는 세포에 처리하기 직전 적정 농도로 배지에 첨가하여 녹인 후 주사기용 필터유닛을 사용하여 미생물 및 불순물을 걸러낸 다음, 배지를 갈아 주면서 직접 처리하였다.</p> <h2>MTT assay에 의한 세포 성장억제 조사</h2> <p>24시간 동안 안정화시킨 AGS 세포에 48시간 동안 ABG를 처리한 후 배지를 제거하고 tetrazolium bromide salt (MTT, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)를 \( 0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 희석하여 \( 200 \mathrm {\mu l } \)씩 분주하고 3시간 동안 배양하였다. 배양후 MTT 시약을 제거하고 dimethylsulfoxide (DMSO, Sigma)를 \( 100 \mathrm {\mu l } \)씩 분주하여 well에 생성된 formazin을 모두 녹인 후 ELISA reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 \( 540 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>세포이동성(Cell motility assay) 조사</h2> <p>ABG 처리에 의한 AGS 세포의 이동성에 미치는 영향을 wound healing 방법으로 비교하였다. 이를 위하여 rat tail collagen \( (20 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \), BD Biosiences, Bedford, MA, USA)이 코팅된 \( 30 \mathrm { ~mm } \) culture dish에 AGS 세포를 confluency를 이룰 때까지 배양한 후 serum free 배지로 희석한 ABG를 처리하고 pipette tip으로 scratch를 만들었다. 그 후 시간의 결과에 따른 wounded area로의 세포 이동성의 변화 정도를 도립현미경 (Carl Zeiss, Germany, 40 배) 하에서 관찰하였다.</p>