기존 보고된 유채 형질전환의 효율은 17.5%로 나타났으며, 국외에서는 종자를 이용한 형질전환방법도 소개되어 4~16%의 효율을 보였다. 그러나 국내 유채 품종의 형질전환 효율이 비교적 높은 것을 확인하였다. 이러한 유채 형질전환 식물체는 배제하여 형질전환 효율에는 적용하지 않았고 재분화가 일어나는 과정에서 gene 일부가 소실된 것으로 생각되며 국내에서는 유채 형질전환에 다양한 절편체를 사용한 보고가 없지만 국외에선 보고가 되고 있고 국내보다 국외 품종의 형질전환 효율이 높은 것을 확인하였고 본 연구에 사용한 방법이 국내에 적합하다는 사실을 의미한다. 토양으로 순화되어 성장과 발달 과정을 거쳐 각 계통마다 약 150개체씩 파종하였으나 그 결과는 멘델의 유전 분리비와 유사했고, 이는 단기간 내 후대 종자를 획득하기 위한 영양 생식기간을 충분히 두지않아 초래된 문제이다.
<p>기존에 보고된 유채 자엽을 이용한 형질전환 사례에서는 explant 당 shooting된 형질전환 효욜이 \( 17.5 \% \) 임이 확인되었다. 그러므로 형질전환 효율에서 근소한 차이를 보이는 데, 이는 기존 보고에서는 내한 품종이 본 연구에서는 한라 품종이 사용되었으므로 서로 다른 유채 픔종에 대한 형질전환 효율의 차이일 가능성이 있다. 또한 기존의 보고에서는 항생제를 kanamycin을 사용한 반면, 본 연구에서는 제초제 저항성 유전자를 사용하였기 때문에 형질전환체 선별 마커의 상이성에 의해서도 형질전환 효율에 영향을 끼칠 수도 있을 것이다. 그리고 본 연구에서는 제초제에 대해 저항성을 갖는 형질전환이 된 유채 식물체 중에서 PAT 유전도입에 대한 PCR 분석을 하였을 때, 증폭된 DNA band를 확인할 수 있었으나 GUS 발색반응이 나타나지 않는 경우를 관찰 하였는데, 이러한 유채 형질전환 식물체는 배제하여 형질전환 효율에는 적용하지 않았다. 이러한 현상은 T-DNA 도입 초기에 식물체 내로 gene의 일부만 삽입되었거나 혹은 온전히 삽입되었더라도 재분화가 일어나는 과정에서 gene 일부가 소실된 것으로 생각된다.</p> <p>현재 국내에서는 유채 형질전환에 다양한 절편체를 사용한 보고가 없지만, 국외에서는 여러 조직의 절편체를 이용한 유채 형질전환이 보고가 되었다. 유채의 하배축를 이용한 경우 Australian Brassica napus cv. BLN \(1239 \) 품종으로 형질전환체 효율이 \( 0.9 \% \), Brassica napus Westar 품종으로 \( 0.4 \sim 2.5 \mathrm { ~ } \% \)를 보였고, 자엽을 이용한 경우 Brassica napus winter rape 품종으로 형질전환체 효율이 \( 0.01 \% \) 를 나타내었다. 최근 종자를 이용한 형질전환방법도 소개되었는데, 그 효울은 Bassica napus Youyan \(10 \) 품종에서 \( 4 \sim 16 \mathrm { ~ } \% \) 효율을 보였다. 국내 유채 품종의 형질전환 효율이 국외 품종에 비해 비교적 높은 것을 확인하였고, 이것은 본 연구에 사용한 형질전환 방법이 국내 유채품종의 형질전환에 매우 적합하다는 사실을 의미한다.</p> <h3>형질전환 유채의 후대검정</h3> <p>토양으로 순화되어 성장과 발달 과정을 거친 \(38 \)개 형질전환 식물체 중에서 위의 그림 3에서 제시된 \(7 \)개체의 \( \mathrm { T } _ { 1 } \) 종자를 파종하고 제초제를 살포하여 분리비와 도입된 유전자의 후대 식물체로의 유전을 확인하였다. 각 계통마다 약 \(150 \)개체의 종자를 파종하였으며 발아된 개체를 대상으로 파종 후 \(2 \)주가 지난 뒤 잎이 \(4-6 \)엽 정도 되었을때 \( 0.3 \% \) 의 바스타 액제를 살포하여 제초제에 민감성과 저항성을 보이는 개체의 분리비를 조사하였다. 형질전환 식물체 \(2 \)번의 경우에는 single copy로 삽입되었을 확률이 높게 나타났으며, 형질전환 식물체 \(1 \), \(3 \) , 그리고 \(7 \) 번의 경우에는 double copy가 삽입되었을 확률이 높다. 이러한 연구 결과는 도입된 \( P A T \) 유전자의 발현이 후대 식물체로 정상적으로 유전되었음을 의미하며, 그 결과는 멘델의 유전 분리비와 매우 유사함을 확인하였다. 각 계통마다 약 \(150 \) 개체씩 파종했으나, 발아하지 않은 종자클 확인하였는데 이는 단기간 내에 후대 종자를 획득하기 위하여, 영양 생식기간을 충분하지 않아서 초래된 문제일 수도 있다.</p>