효과적인 효모 균주 탐색법을 개발하고자 본 논문은 적은 비용과 노력으로 다수의 시료의 빠른 분석이 가능한 PyMS 방법을 적용하여 균주 그룹화 성능을 평가하였다. 공단 폐수물 시료로 분리한 16개의 효모 균주들의 PyMS와 large subunit rDNA D1/D2 영역의 뉴클레오타이드 임기서열을 분석한 결과, 균주들이 세 그룹으로 나누어졌으며, 각 그룹 내 소그룹들은 동일 분류군의 균주들로 구성되었고, 뉴클레오타이드 염기서열로 작성한 효모 균주들간의 진화적 관계를 나타내는 계통수는 PyMS 결과를 도식화한 dendrogram 결과와 상응하였다. 이와 같은 실험 결과를 바탕으로 PyMS 분석법이 여러 균주들을 빠르게 분류군대로 그룹화할 수 있는 유용한 수단임을 확인하였다.
<p>Y16 균주는 D1 / D2 영역의 염기배열 분석결과를 데이터 베이스와 비교해 보았으나 \( 99 \% \) 이상의 염기배열 유사도를 나타내는 균주를 찾지 못하였다. \( Y 17 \) 균주를 동정하기 위하여 현미경관찰과 형태 밎 생리적 특성을 조사해 본 결과 yeast-like fungi중 하나인 Trichosporonoides속 [19]의 특성들과 부합되어 Trichosporonoides속 균주로 동정되었다.</p> <h3>Pyrolysis Mass Spectrometry</h3> <p>공단 폐수 시료로부터 분리한 16개의 효모 균주에 대한 PyMS 결과를 토대로 작성한 균주들 사이의 연관관계는dendrogram으로 나타내었다(Fig. 1). 분석걸과 16개의 효모 간주들은 PyMS 결과의 유사도 0.7을 기준으로 3개의 그릅으로 나누어젔다.</p> <p>첫 번째 그룹은 Rhodotork!a Miilaginosn로 동정된 5균주를 포함하고 있었고, 두번째 그룹은 Pichia giilliemondii, Trichosporon asalii, Dipodascus capitatus, Candida rugosa 등 10 균주의 다양한 분류군을 포함하고 있었으며, 세번째 그룹은 Yeast-like fungi에 속하는 1균주로 구성되어 있었다.</p> <p>PyMS 분석결과와 동정결과를 비교해 보면, 염기 배열 분석으로 같은 분류군으로 동정된 균주들이 PyMS 결과로 작성한 dendrogram에서도 말접이 연관되어 있음을 알 수 있었다(F1g. 1). 이와 같은 결과는 PyMS 분석으로 Candida 종 밎 brewing yeast들올 그룹화한 Timmins등 \( [7,8] \)의 결과와 Carnobacterin 균주들을 대상으로 실험한 Manches-ter등[20]의 결과와 동일하게 pyroiysis mass spectrum이 각 균주의 분류학적 특성을 반영할 수 있음을 나타내며, 다양한 호모 균주를 대상으로 하는 PyMS 분석이 이들을 유사한 분류군으로 그릅화 할 수 있음을 시사하였다.</p> <h3>계통수 분석</h3> <p>Large subunit rDNA D1/D2 영역의 뉴클레오타이드 염기배열 분석으로 나타난 균주틀 사이의 연관관계는 Fig. 2의 계통수 (phylogenetic tree)로 나타내었다. Fig. 2에서 16 개의 효모 균주는 PyMS 결과와 유사하게 3그룹으로 분리되었으나, Trichosporon asahii로 동정된 \( \mathrm { Y } 6 \) 과 \( \mathrm { Y } 7 \) 균주들은 yeast-like fungi인 \( \mathrm { Y } 17 \) 균주와 가깝게 위치하여 PyMS결과로 나타낸 dendrogram과 차이를 보였으나, 진화적관계를 반영하는 계통수에서 보여지는 소그룹 (subgroup)들 내에 각 균주들의 연관관계는 PyMS분석 결과와 일치하였다. 그러므로 다양한 균주를 효과적으로 확보를 위해서는 PyMS결과를 도식화한 dendrogram에서 나타난 소그룹(subgroup)을 기준으로 실험균주를 선별할 필요가 있음을 알 수 있었다.</p> <p>분석결과를 종합헤 본 결과 PyMS 분석을 통한 효모균 주의 분별 (differenciation)은 단시간 내에 저렴한 비용으로 분류학적으로 같은 균주를 찾아내어, 효율적인 탐색을 가능케하는 유용한 균주탐색 방법임을 알 수 있었다.</p> <h1>요약</h1> <p>효과적인 효모 균주의 탐색방법을 개발하기 위하여, 적은 비용과 노력으로 단시간 내에 다수의 시료를 분석할 수 있는 PyMS방법을 적용하여, 다양한 탐색 균주들을 같은 분류군으로 그룹화 할 수 있는지 평가해 보았다.</p> <p>이를 위하여 공단 폐수물 시료로 실험에 이용할 16개의 효모 균주들을 분리하였고, 이들의 PyMS 결과와 large subunit rDNA D1/D2영역의 뉴클레오타이드 임기서열을 분석하였다. 분리한 효모 균주들의 동정은 염기서열결과를 NCBI에 수록된 뉴클레오타이드 데이터베이스와 비교하여 결정하였다. PyMS 분석결과 16개 효모 균주들은 3가지 그룹으로 나누어졌으며, 각 그룹 (group)내 소그룹(subgroup)들은 동일한 분류군에 속하는 균주들로 구성되어 있었다. 또한 Large subunit rDNA D1/D2 영역 뉴클레오타이드 염기서열로 작성한 효모 균주들 사이의 진화적 관계를 나타내는 계통수는 PyMS결과를 도식화한 dendrogram 결과와 상응하였다.</p> <p>결론적으로 효율적인 균주 탐색을 위한 수단 (tool)으로 PyMS 분석 방법을 평가해 본 결과, 다양한 균주들을 단시간 내에 같은 분류군으로 그룹화할 수 있는 유용한 수단임을 알 수 있었다.</p>