방제력이 높은 간장발효 균주로 최종적으로 NG 06, NG 16 를 선발하였다. 방제거리를 확인 결과와, clear zone을 확인한 결과 두 균주 모두 S. sanguis에 방제력을 보였다. S. salivarius에 대한 방제거리 측정 결과, NG 06은 방제력이 나타나지 않았고, NG 16은 방제력이 보였으며, 균체량 확인 결과는 두 균주 모두 방제력을 보였다. S. mutans에 대해 균체량 차이를 관찰한 결과 NG 06, NG 16 모두 방제력을 나타내었다. 따라서 두 균주를 활용하여 구강질환 방제용 치약이나 구강제품으로 활용 가능성이 크다 생각된다.
<h1>결과 및 고찰</h1><h2>재래간장 발효균 분리</h2><p>대구, 경북지역의 일반 가정에서 채취한 간장 6종을 희석해서 NA 배지에서 순수 분리한 결과 육안으로 관찰하여 형태적으로 다른 25종의 균주들을 single colony으로 분리했다.</p><h2>구강질환 방제미생물의 1차 선발</h2><p>재래 간장에서 분리한 25종의 분리균 중에서 구강질환 원인균 Streptococcus sanguis, S. salivarius, S. mutans 들에 대한 길항균의 선발을 발육저지측정법을 이용해서 생육을 억제하는 clear zone을 크게 형성하는 방제균을 선발하였다. 그 결과 Table 1에서 보는 바와 같이 S. sanguis, S. salivarius에 대해서 길항력이 높은 방제균을 선발할 수 있었다.</p><h2>구강질환 원인균 방제미생물의 최종 선발</h2><p>1 차, 2차 선발의 결과로 방제력이 높은 간장발효 균주로 최종적으로 NG 06, NG 16 를 선발하였다. Streptococcus sanguis에 대한 방제력은 획선을 이용한 발육저지 측정법과 원판확산(paper disc)법을 이용한 clear zone의 크기를 관찰하였다. 방제거리를 확인한 결과 S. sanguis에 대해서는 두 균주 NG 06, NG 16 모두 방제력이 보였고, S. sanguis에 대한 상등액의 clear zone을 확인한 결과 두 균주 모두가 방제력이 보였다.</p><p>S. salivarius에 대한 방제력은 발육저지 측정법으로 실험하였으나 BHI agar 배지에서 잘 자라지 않아 실험 결과의 정확성을 위해 BHI 액체배지에서 대조군과 분리균의 균체량 차이를 관찰하였다. S. salivarius에 대한 방제거리 측정 결과 NG 06은 방제력이 크게 나타나지 않았고 NG 16은 방제력이 보였다. S. salivarius에 대한 균체량 확인 결과 모두 방제력이 보였다.</p><p>S. mutans에 대한 방제력은 발육저지 측정법으로 실험하였으나 BHI agar 배지에서 잘 자라지 않아 실험 결과의 정확성을 위해 BHI 액체 배지에서 대조군과 분리군의 균체량 차이를 관찰하여 방제력을 나타내는 균주를 선발하였다. S. mutans는 BHI 액체배지에서 균체량 차이를 관찰한 결과 NG 06, NG 16 모두 방제력을 나타내었다. 따라서 한국재래 간장에서 분리한 두 균주는 치아우식 등 구강질환을 예방할 수 있는 길항력이 있음을 확인하였으며, 향후 활용방법 등을 연구하면 좋은 구강질환 방제용 치약이나 구강제품으로 가능성이 크다고 생각되어진다.</p><h2>선별 구강질환 방제미생물의 동정</h2><p>선별균의 동정을 위해 그람염색과 포자염색을 실시한 결과 NG 06, NG 6은 그람양성의 간균으로 Bacillus sp.과 근연성을 보였으며, 또한 Bergey's manual of systematic bacteriology의 세균분류 동정표에 의해 각종 동정에 필요한 배양학적, 형태학적, 그리고 생화학적 특성을 시험한 결과와 Biolog사의 세균동정시스템(MicroLogTM 3)을 이용하여 검정 실험한 결과 NG06은 Bacillus racemilacticus로 NG 16은 B. amyloliquefaciens로 최종 확인, 동정되었다.</p>