각 실험군 및 대조군의 흡광도를 측정한 후 viability \( ( \%)=( \mathrm { T } - \mathrm { B } ) /( \mathrm { C } - \mathrm { B } ) \times 100 \)를 계산하여 비장세포의 증식에 미치는 영향을 확인하였다. Ohno 등의 방법에 따라 B 임파구의 표면에 반현되는 alkaline phosphatase를 측정하여 마우스의 B 임파구 활성화에 미치는 영향을 확인하였다.
<p>Viability \( ( \%)=( \mathrm { T } - \mathrm { B } ) /( \mathrm { C } - \mathrm { B } ) \times 100 \)</p> <ul> <li>\( \mathrm { T } \) : 실험군의 평균 흡광도</li> <li>\(\mathrm{C}\): 대조군의 평균 흡광도</li> <li>\(\mathrm{B}\): Blank</li></ul> <h2>비장세포의 증식에 미치는 영향</h2> <p>\(20\sim 25\mathrm {g}\)의 ICR 계열 웅성 마우스로부터 무균적으로 비장을 적출하여 100 mesh 망 위에서 분쇄하고 이 세포 부유액에 2배 부피의 lymphocyte separation medium을 첨가하여 원심분리 하였다. 단핵 세포층만 조심스럽게 취하여 3회 세척한 후 세포수가 \( 2 \times 10 ^ { 5 } \) cells/ml이 되도록 조정하여 96 well plate에 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 분주하였다. \( 0.05,0.2,0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 희석한 각각의 조다당류와 양성 대조군으로 사용한 \( 0.005,0.05 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도의 lipopolysaccharide (LPS)를 \( 100 \mu \) μ씩 처리하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 48시간 배양하고 위의 MTT 법과 동일한 방법으로 처리한 후 합광도를 측정하였다.</p> <h2>마우스의 B 임파구 활성화에 미치는 영향</h2> <p>Ohno 등(1986)의 방법에 따라 분화된 B 임파구의 표면에 반현되는 alkaline phosphatase를 측정하였다. 준비된 비장 세포를 \( 1 \times 10 ^ { 6 } \mathrm{cells/ml}\)의 농도로 조정하여 well 당 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 씩 분주하고 \( 0.005,0.2,0.5 \mathrm { mg } / mathrm { ml } \) 의 조다당류와 양성 대조군으fh \( 0.005,0.05 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 LPS (lipopolysaccharide) 를 가함으로써 최종 부피가 \( 200 \mu \mathrm { l } \) 가 되도록 하였다. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \)배양기에서 48 시간 배양한 후., 세포 배양액을 원심분리하고침 전물에 \( 1 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 2 \) 를 포함한 \( 50 \mathrm { mM } \) sodium carbonate buffer ( \( \mathrm { pH } \) - 9.0)에 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 p-nitrophenyl phos- phate를 첨가한 용액을 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 가한 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 1시간 반응시켰다. 차가운 \( 0.3 \mathrm { ~N } \mathrm { NaOH } \) 용액 \(50  \mu \mathrm{l}\) 를 가하여 반응을 종결시킨 후 \( 405 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정한 후 alkaline phosphatase activity를 다음 식에 따라 계산하였다.</p>