본 실험은 완도 및 제주 부근 해안에서 채집된 해조류를 염분 제거한 후 음건 과정을 거친 뒤 분쇄해 분석용 재료 및 용매 추출용 시료로 사용하였다. 용매 추출 시료는 각각의 음건 된 해조류 추출물을 합하여 회전식 진공농축기로 농축했고, 완전히 건조된 시료를 3차 증류수에 녹여 일정 농도로 제조 후 항산화 실험에 사용했다.
<h1>재료 및 실험방법</h1><h2>실험재료</h2><p>완도 및 제주 부근의 해안에서 갈래곰보(Meristotheca pap-ulosa (Montagne) Kylin), 진두발(Chondrus ocellatus, Holmes), 꼬시래기(Gracilaria verrucosa (Hudson) Papenfuss) 및 돌가사리(Gigartina tenella, Harvey)를 채집한 즉시 염장하여 실험실로 운반한 후 물에 2시간 이상 침지시킨 후 흐르는 물에 3회 이상 세척하였다. 염분이 제거된 해조류는 음건하여 분쇄한 후 분석용 재료 및 용매 추출용 시료로 사용하였다.</p><p>용매 추출 시료는 음건한 해조류 각각에 5배의 \( 70 \% \) 에탄올을 가하고 24시간 상온에서 방치한 후 여과하는 과정을 2회 반복하고 추출물을 모두 합하여 회전식 진공농축기를 이용하여 농축하였다. 완전 건조된 시료의 무게로부터 수율을 측정한 다음 3차 증류수에 녹여 일정농도로 만들어 항산화 실험에 사용하였다.</p><h2>일반성분의 분석</h2><p>일반성분은 건조된 해조류를 분쇄기로 분쇄하여 상법에 따라 수분은 상압가열 건조법, 회분은 직접 회화법, 조지방은 soxhlet추출법, 조단백은 semi-micro Kjeldahl법으로 정량하였다. 조섬유는 AOAC법에 따라 분석하였다.</p><h2>수용성 페놀화합물의 정량</h2><p>수용성 페놀화합물은 시료의 물추출물 \( 5 \mathrm{~ml} \)에 \( 0.2 \mathrm{~N} \) Folin-Ciocalteu's phenol 시약 \( 0.5 \mathrm{~ml} \)와 포화 무수탄산나트륨용액 \( 5 \mathrm{~ml} \)를 가한 다음 잘 혼합하여 30분간 방치한 후 \( 765\mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Caffeic acid를 농도별로 제조하여 동일한 방법으로 시험하고 얻은 표준검량곡선으로부터 정량하였다.</p><h2>안토시아닌의 함량 측정</h2><p>시료 건조 분말 \( 2 \sim 3 \mathrm{~g} \)에 추출용매(ethanol : water : \( \mathrm{HCl} \) =85: 13: 2) \(40 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 anthocyanin을 추출한 후 여과하여 그 여액을 \( 200 \mathrm{~ml} \)로 만든 다음 실온의 암소에서 2시간 방치 후 분광광도계로 \( 535 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하고 아래의 식에 따라 total anthocyanin의 함량을 계산하였다.</p><p>Total anthocyanin \( (\mathrm{mg} / 100 \mathrm{~g})= \) O.D. \( \times 200 / \mathrm{W} \times 100 \times 1 / 65.1 \)</p><p>(O.D. : 시료의 흡광도, \(\mathrm{W}\) : 시료량, \( 65.1 \) : 흡광계수)</p><h2>총 플라보노이드의 함량</h2><p>총 플라보노이드 함량은 Moreno 등의 방법에 의해 측정하였다. 즉 추출물 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)에 \( 80 \% \) 에탄올 \( 0.9 \mathrm{~ml} \)를 가하여 이 혼합액 \( 0.5 \mathrm{~ml} \)에 \( 10 \% \) aluminum nitrate \( 0.1 \mathrm{~ml}\), \(1 \mathrm{~M}\) po-tassium acetate \( 0.1 \mathrm{~ml} \) 및 \( 80 \% \) 에탄올 \( 4.3 \mathrm{~ml} \)를 각각 가하였다. 위 반응액을 상온에서 40분 방치한 후 \( 415 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값을 측정하였으며 표준물질로 quercetin을 사용하여 함량을 계산하였다.</p><h2>무기물의 분석</h2><p>분해용 플라스크에 시료 \( 2 \mathrm{~g} \)을 취하고 진한 황산과 진한 질산을 각각 \( 10 \mathrm{~ml} \)씩 차례로 가하여 hot plate상에서 무색으로 변할때까지 분해한 후, \( 100 \mathrm{~ml} \)로 정용\(\cdot\)여과하여 Inductively Coupled Plasma(Atom Scan 25, Thermo Jorell Ash Co., France)로 분석하였고, 이때, RF power는 \(1,150\mathrm{W}\), pump rate는 \( 100 \mathrm{~rpm} \), nebulizer pressure는 \( 30 \mathrm{~psi} \), ob-servation height는 \( 15 \mathrm{~mm} \)로 하였다.</p><h2>구성 아미노산의 분석</h2><p>분쇄한 해조류 각 \( 5 \mathrm{~g} \)에 \( 6 \mathrm{~N}-\mathrm{HCl} ~3 \mathrm{~ml} \)를 가하고 질소가스를 7분간 충전시킨 후 \( 110 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \)의 heating block에서 24시간 가수분해한 다음 여과(whatman No. 6)하여 회전진공증발기로 감압\(\cdot\)농축하였다. 농축한 시료를 \( \mathrm{pH} ~2.2 \) 구연산 완충액으로 \( 10 \mathrm{~ml} \) 로 만들어 일정량을 membrane filter \( (0.2 ~\mu \mathrm{m}) \) 및 sep-pak \( \mathrm{C}_{18} \) cartridges에 차례로 통과시킨 다음 아미노산 자동 분석기(Amino acid analyzer 835, Hitachi)로써 분석\(\cdot\)정량하였다.</p>