galactosidase는 Sigma Chemical사에서 매입하였다. 전자현미경은 JEO사에서 매입하였으며, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, radical 소거능 측정 실험 및 미백 활성억제 측정 실험에 사용된 시약과 L-3,4-dihydroxy-phenyl-alanine, mushroom tyrosinase 등은 Sigma-Aldrich사에서 매입하여 사용하였다. Wako Pure Chemical Industries사 및 Sigma Chemical사 등에서 매입하였다. 단백질 발현 효과 측정 실험에 사용된 1 차 항체인 galactosidase는 Sigma Chemical사에서 매입하였으며, 전자현미경은 JEOL사에서 매입하였다.
<h2>시약 및 기기</h2> <p>전자공여능 측정 실험에는 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)과 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)radical 소거능 측정 실험에는 potassium persulfate 시약을 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입 후 사용하였고, 2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzothia-zoline-6-sulphonic acid) 시약은 Wako Pure Chemical In- dustries. Ltd. (Japan)에서 구입 후 사용하였다. 미백 활성억제 측정 실험의 L-3,4-dihydroxy-phenyl-alanine (L-DOPA), mushroom tyrosinase 시약 등은 Sigma Chemical Co. (St.Louis, MO, USA)에서 구입하였다. 단백질 발현 효과 측정 실험에 사용된 1 차 항체인 \( \beta \)-actin, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinase와 2차 항체인 anti-mouse는 Santacruz (CA, USA)에서 구입 후 사용하였다. RT-PCR에 사용된 MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinase와 GAPDH primer는 Bionics (Seoul, Korea)에서 제작하여 구입 후 사용하였다. ATCC (USA)사에서 멜라노마 세포인 B16F10을 구입 후 사용하였다. 세포 배양을 위해 Thermo Scientific Hyclone (USA)에서 penicillin/streptomycin, fetal bovine serum (FBS), trypsin, dulbecco's modified eagle medium (DMEM), phosphate buffered saline(PBS) 을 구입 후 사용하였으며, 세포 독성 측정 실험에 사용된 dimethyl sulfoxide (DMSO)는 BioShop(Canada)에서 구입 후 사용하였다. 3-[4,5-dimethylthiazol]-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) 시약은 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입 후 사용하였다. 실험에 사용된 기기는 Davinch-Chemi \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) Imager CAS-400 SM System (Davinch-K Co., Korea), pH meter (Mettler-Toledo AG, Switzerland), UV transilluminator (BioTop, Switzerland), \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator (Vision Scientific, Korea), freeze drier(ILShin BioBase Co., Korea), microplate reader (Tecan, Austria), microscope (Olympus, Japan), digital shaker (Daihan Scientific, Korea), centrifuge (Hanil Science Industrial Co., Korea), Mini-PROTEAN \( { } ^ {\mathbb { R } } \) tetra cell (Bio-Rad, USA), micro centrifuge (Gyrozen, Korea), rotary vacuum evaporator (EYELA, Japan), Mini Trans-Blot \( { } ^ {\mathbb { R } } \) Cell (Bio-Rad, USA), autoclave (JS Research Inc., Korea), vortex (Scientific Industries, Inc., USA), PCR (ASTEC Co., Japan)을 사용하였다.</p> <h1>실험방법</h1> <h2>전자공여능 측정</h2> <p>전자공여능(EDA: electron donating abilities) 측정을 위해 Blois의 방법을 변형하여 실험을 진행하였다. 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) \( 60 \mu l \) 와 추출물을 \( 120 \mu l \) 씩 넣어 혼합 후 15 분간 반응시켜 microplate reader를 이용해 \( 517 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료용액의 첨가구과 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p>