본 연구에서는 충남 공주시 계룡산의 범부채 종자를 이용했다. 종자는 외종피 제거 후 이탄올과 하이포클로라이트로 살균 및 수세했다. 2,4-D와 BA의 다양한 농도를 포함하는 MS 기본배지에서 유도된 캘러스로부터 신초를 유도했고, 이는 \( 25 \pm 3 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 \( 50 \mathrm {\mu mol } \cdot \mathrm { m } ^ { -2 } \cdot \mathrm { sec } ^ { -1 } \) 광도 하에서 6주 동안 배양되었다. 신초 형성률과 캘러스 유도율은 생장조절제의 종류, 농도 및 유식물체의 부위에 따라 달라졌다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험의 재료는 충남 공주시 계룡산 일대에 자생하고 있는 범부채 (Belamcanda chinensis)의 종자를 채취하여 사용하였다. 종자의 외종피를 제거 한 후 \( 70 \% \) Ethanol로 5분간 침지하여 표면살균 후 \( 5 \% \) sodium hypochlorite로 20분간 살균하여 멸균수로 5회 수세하였다. 멸균된 filter paper로 종자 표면의 물기를 제거한 다음, 생장조절제를 첨가하지 않은 1/3 MS (Murashige and Skoog 1962) 배지에서 배양하였다. 배양조건은 \( 25 \pm 3 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 50 \mu \mathrm { mol } \cdot \mathrm { m } ^ { -2 } \cdot \mathrm { sec } ^ { -1 } \) 광도 (16시간 광주기)로 조절되는 배양실에서 배양하였다.</p> <h2>캘러스 유도에 미치는 생장조절제의 영향</h2> <p>생장조절제에 따른 캘러스 유도율을 조사하기 위하여, \( \mathrm { MS } \) 기본배지에 \( 1.0,3.0,5.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } 2,4- \mathrm { D } \)의 단독처리와 \( 1.0 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 2,4-D에 \( 0.1,1.0,3.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { BA } \) 를 혼합처리 한 배지를 사용하였다. 3주간 발아시킨 유식물체를 자엽, 뿌리줄기, 부리로 구분하여 \( 5 \times 5 \mathrm { ~mm } \) 크기로 잘라 각 배지에 절편을 치상하여 6주간 배양하였다. 배양조건은 \( 25 \pm 3 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 50 \mathrm {\mu mol } \cdot \mathrm { m } ^ { -2 } \cdot \mathrm { sec } ^ { -1 } \) 광도 (16시간 광주기)로 배양 6주 후에 생장조절제의 종류와 농도별 및 유식물체의 부위별에 따른 캘러스 유도율을 조사하였다.</p> <h2>식물체의 재분화</h2> <p>각 절편으로부터 유도된 캘러스에서 신초를 유도하기 위하여, \( \mathrm { MS } \) 기본배지에 \( 1.0,3.0,5.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 2,4-D와 BA의 단독처리와 \( 1.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 2,4-D에 \( 0.1,1.0,3.0 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { BA } \)를 혼합 처리 한 배지에 각각 치상하여 신초 형성률을 조사하였 다. 재분화된 신초는 2,4-D와 BA의 단독처리와 혼합처리 한 배지에서 2 주간 배양하고 생장조절물질을 첨가하지 않은 MS 기본배지로 이식하여 발근 및 뿌리의 생장을 유도하였다. 기내에서 재분화된 식물체는 버미큐라이트와 펄라이트를 \( 2: 1 \)로 혼합한 소형 폿트로 이식하였다.</p>