가솔린 오염 토양에서 LP03 세포의 변화와 이에 따른 탄화수소 분해 정도를 검사하였다. 8일간 LP03 세포 수가 증가하다가 이후 급격히 감소하였으며, 이는 분해 효소 Iturin의 유전자 발현 양과 일치하였다. 이로부터 8일이 LP03의 탄화수소 분해능력의 정점이라는 결과를 얻었으며, 이는 오염 토양에서의 균수 감소와 관련이 있는 것으로 보였다. 이러한 결과는 오염 토양에서 LP03의 적용 가능성을 시사한다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Hydrocarbon 분해측정 및 균의 증식</h2> <p>Gasoline 오염토양(\(2\%\))에서의 LP03 cell의 변화와 이에 따른 hydrocarbon분해 정도를 측정한 결과를 Fig. 1에서 나타내었다. 그림에서 보듯이 LP03의 cell수는 8일 동안 증가하였고 그 후 급격히 감소하였다. 이와 동시에 hydrocarbon의 감소 또한 cell수의 증가와 함께 감소됨을 보이고 있다. Bacteria를 처리하지 않은 토양에서 이 기간 동안 hydrocarbon 감소는 좀처럼 보이지 않았지만, 서서허 감소함을 보였으며 이는 혼합된 gasoline의 자연증발에 의한 결과인 것 같이 보이나 이에 대한 고찰은 좀더 상세한 실험에 의해야 할 것으로 사료된다. 특이한 것은 8일을 정점으로 LP03 cell의 수는 급격히 감소 하고 있음을 보어주는 것으로 이는 LP03이 gasoline 오염 토양 내에서 hydrocarbon 감소와 더불어 우점종의 위치를 상실한 것으로 사료되며 이러한 결과는 8일 이후의 hydrocarbon 감소가 거의 나타나지 않은 결과에서 예측할 수가 있다. 위의 결과는 도말한 plates의 각 colonies를 계수 한 후 colonies를 다시 PCR에 의해 Bacillus sp. LP03임을 확인 하여 통계 처리한 결과이다. 따라서 LP03 처리에 의한 hydrocarbon 감소 8일째 되는 날을 정점으로 감소가 빠르게 진행됨을 확인 하였으며 hydrocarbon오염 토양애서의 본 균의 적용 가능성을 시사하였다.</p> <h2>Gasoline 오염 토양에서 hydrocarbon 분해효소(계면활성제)의 유전자발현</h2> <p>Gasoline오염된 토양에서 LP03을 처리하여 접종하였고, \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10일 동안 배양한 후 격일로 total RNA를 토양 \(1 \mathrm{g} \)에서 추출하여 biotinylated probe로 itu gene 발현을 검출하였다. Fig. 2에서 보듯이 hydrocarbon분해효소 Iturin유전자의 발현양은 토양 \( 1 \mathrm{g} \) 속의 균의 양이 증가함에 따라 유전자의 발현양은 배양 후 8일째에 정점에 달했으며 10일 이후에는 유전자의 발현 양이 급격히 감소함을 알 수 있었다. 이는 Fig. 1의 결과와도 일치하는 것으로 LP03의 hydrocarbon 분해 능이 8일을 기준으로 급격히 감소함은 오염토양에서 균수의 감소에 따른 것으로 확인 할 수 있었다.</p> <h2>Gasoline 오염토양에서의 작물생육에 미치는 LP03의 효과</h2> <p>오염된 토양에서 LP03균이 작물의 생육에 미치는 영향을 확인하기 위해 gasoline이 각각 \(1\%\), \(2\%\)로 오염된 토양에 균을 배양하여, 증류수에 현탁 하고 시험작물로서 선택한 완두콩을 심은 pots에 분무하여 13일 동안 재배한 후 이들의 생육상태를 확인한 결과를 Fig. 3에 나타내었다.</p> <p>Fig. 3 (B)에서 보듯이 \(2\%\)의 오염된 토양에서는 시험작물인 완두콩이 거의 생육 하지 못하고 있음을 알 수 있었다. 그러나 LP03을 처리한 구에서는 발아를 시작하여 성장 가능성을 보여 주었으며 1%의 오염된 토양(A)에서는 LP03을 처리한 구에서의 발아성장이 월등함을 알 수 있었다. 이는 Fig. 1에서 보았듯이 오염된 gasoline이 제거 되어 작물의 발아성장이 가능 함은 시사 하며 이러한 결과는 \(2\%\)의 오염된 토양에서 13일이 지난 후에 시험작물이 썩어 있는 결과에서도 확인할 수 있었다.</p> <p>이상의 결과는 본 균의 hydrocarbon 오염토양에서 hydrocarbon을 분해 한 후 작물의 생장을 가능케 함으로서 본 균의 적용과 사용을 확인 할 수 있었다.</p>