DNA hypomethylation 상태에서는 dedifferentiation이 강하게 나타나며, 특정 상황에서는 탈색 현상이 관찰되었다. Yamamoto 등이 제시한 연구에서는 체세포 배발생 동안의 5-azaC의 영향을 살펴보아, DNA methylation의 중요성을 확인하였다. 특히, demethylation 물질인 5-azaC가 첨가된 상태에서는 정상적인 캘러스 형성과 재분화가 이루어지지 않았다. 이로부터, DNA methylation이 식물 세포의 분화와 발달 과정에서 중요한 역할을 하는 것으로 판단되며, 특히 일부 유전자들의 methylation이 중요하다는 가설을 제시하였다.
<p> DNA hypomethylation 일 때는 0 와 NO line에서 강한 dedifferentiation-을 나타냈고 DD line에서는 탈색 현상을 보였다고 하였다. 또한 Yamamoto등 (2005)은 당근의 표피세포로부터 체세포 배발생 단계 중 어느 과정이 5-azaC에 민감한지를 알아보기 위하여 체세포 배발생 동안의 여러 단계에서 5-azaC의 영향을 조사하여 DNA methylation의 역할을 알아보았다. 5-azaC를 2, 4-D와 같이 24 시간 동안 배축에 처리한 결과 대조구와 비슷하게 체세포배 발생 빈도가 있었다. 2, 4-D로 24시간 처리 후 3일동안 5-azaC를 처리하면 체세포 배형성이 심하게 억제되었다. 이 기간 동안에 DcLEClc 유전자 발현도 억제되었다.2,4-D 처리 후 3일부터 4일동안 5-azaC를 처리한 경우에도 체세포 배발생이 억제되었다. 2, 4-D 처리 후 7일부터 7일 동안 azaC 를 처리 한 경우에는 체세포 배발생에 전혀 영향이 없었다. 이러한 결과로 2, 4-D를 24시간 처리 후 7일 동안에 DNA methylation이 체세포에서 배상체 세포로 변화하는데 필수적이라고 하였다. 시베리안 인삼에서 체세포 배발생 동안에 cytosine methylation의 정도와 양상을 본 결과 비배상체 캘러스의 게놈에서 5'-CCGG-3' 자리의 \( 16.99 \% \) 가 cytosine methy-lation이 일어난 반면, 배상체 캘러스의 경우에는 \( 11.20 \% \) 였다고 보고하였다. 장미의 경우 체세포 배발생 (somatic embryogenesis) 과정 동안에 DNA methy-lation 수준은 미분화된 캘러스에서 가장 높았고 배상체 캘러스, 배상체 캘러스로부터 재분화된 식물체 순으로 가면서 낮아지는 것으로 나타났다. Shoot organo-genesis 동안에도 미분화된 캘러스가 organogenesis를 받는 동안에 DNA methylation 변화가 있었으며 기관분화를 통한 재분화체에서는 원래의 수준으로 회복하는 것을 보였다. 이러한 모든 조직배양 과정에서 일어나는 DNA methylation 양상을 그룹화 하여 본 결과 기관분화와 기내 배양 식물체, 배상체와 배상체로부터 재분화된 식물체에서 비슷한 methylation 양상을 보였으며 미분화된 캘러스와 organogenic callus에서 비슷한 methylation 수준을 나타내었다. 특이한 것은 배상체로터 재분화된 식물체와 기관분화를 통한 재분화체에서 DNA methylation 양상이 다르게 나타났다는 것이다.호박의 체세포배 발생과정에서 가장 높은 DNA methylation은 2, 4-D 첨가 배지와 질소원으로 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} \) 이 첨가된 배지에서 배양된 preglobular 와 globular 단계의 배에서 나타났으며 그 후 호르몬이 없는 배지나 5-azaC가 첨가된 배지에서 형성되는 heart와 torpedo 단계의 배로 발달하는 배에서는 DNA methylation이 상당히 감소하였다 (Leljak-Levanic et al. 2004). 이러한 methylation의 수준에 따라 세포의 형태적 특성 및 기관형성능이 변형될 수 있고 methylation이 배상체 세포 형성에 필수적이라는 결과는 본 연구결과에서도 유사하다고 할 수 있었다. 즉, 캘러스 형성 및 재분화 배지에 demethylation 물질인 5-azaC를 첨가 시에는 정상적인 배상체 캘러스 형성과 재분화가 일어나지 않았다. 따라서 DNA methylation은 캘러스 형성 및 이후의 재분화 과정 등 식물 세포 분화 및 발달 과정 동안에 적기 적소에서 유전자 발현을 조절하여 식물체가 정상적으로 분화 발달하도록 하는데 매우 중요한 기작이라고 할 수 있으며 일부 유전자들의 methylation이 중요한 역할을 할 것으로 사료된다.</p>