트롬빈 타임 측정을 통한 항혈전 활성평가에서, DMSO는 평균 33.0초의 응고시간을 보였으며, 이는 3회 이상 반복 실험의 평균치로 표현되었다. 패모 메탄올 추출물 및 분획물의 항산화 활성은 DPPH 라디칼 소거능, SOD 유사활성 및 환원력 측정으로 평가하였다. 또한, 회수된 상등액은 신선하게 조제된 \(0.1\%\) ferric chloride 용액과 \(5:1 (\mathrm{v/v}\)) 비율로 혼합하고, \(700 \mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하여 평가하였으며, 이때 대조구로는 BHT가 사용되었다. 총 flavonoid의 함량은 기존에 보고된 방법에 따라 측정되었으며, 시료를 18시간 동안 메탄올에 교반 추출하고, 추출검액에 diethylene glycol과 \(\mathrm{NaOH}\)를 첨가한 후 \(37^\circ\mathrm{C}\)에서 1시간 반응 후 \(420 \mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하였다.
<h2>항혈전 활성</h2><p>항혈전 활성은 시료의 트롬빈 타임을 측정하여 평가하였다. 트롬빈 저해 활성은 기존의 보고한 Amelung coagulometer KC-1A (Japan)를 이용하여 혈액 응고시간을 측정하여 평가하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 0.5 \mathrm{U} \) 트롬빈(Sigma Co., USA) \( 50 \mu \mathrm{l} \)와 \( 20 \mathrm{mM~} \mathrm{CaCl~}\) \(25 \mu \mathrm{l} \), 다양한 농도의 시료 추출액 \( 10 \mu \mathrm{l} \)를 coagulometer의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였으며, 시료 대조군으로는 아스피린(Sigma Co.)을, 용매 대조군으로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 평균 33.0초의 응고시간을 나타내었으며, 트롬빈 저해 활성은 3회 이상 반복한 실험의 평균치를 나타내었다.</p><h2>항산화 활성 평가</h2><p>패모 메탄올 추출물 및 분획물의 항산화 활성은 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) radical 소거능, superoxide dismutase (SOD) 유사활성 및 환원력 측정에 의해 평가하였다. 먼저 DPPH 소거능의 경우, 다양한 농도로 희석한 시료 \( 20 \mu \mathrm{l} \)에 \( 99.5 \% \) 에탄올에 용해시킨 \( 2 \times 10^{-4} \mathrm{M} \) DPPH 용액 \( 380 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분 동안 반응시킨 후 \( 516 \mathrm{~nm} \)에서 microplate reader (Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. 대조구로는 butyl hydroxytoluene (BHT), vitamin C 및 vitamin E (Sigma Co., USA)를 사용하였다. DPPH free radical 소거능은 시료첨가구와 비첨가구의 백분율로 표시하였으며, \( \mathrm{IC}_{50} \)는 \( 50 \% \) 소거능을 나타내는 농도로 계산하였다. SOD 유사활성 평가는 superoxide와 반응하여 갈변물질을 만드는 pyrogallol 자동산화를 측정하는 Marklund와 Marklund의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉 시료용액 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 에 Tris-\(\mathrm{HCl}\) buffer (50 \( \mathrm{mM} \) tris, \( 10 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm{pH}8.5 \) ) \( 3 \mathrm{ml} \)와 \( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 0.2 \mathrm{ml} \)를 가하고, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl}\) \( 1 \mathrm{ml} \)로 반응을 정지시켜 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 첨가군과 무첨가군과의 흡광도비로 나타내었다. 한편 환원력 평가는 Oyaizu 등의 방법을 변형하여 측정하였다. 에탄올에 용해한 시료 \( 2.5 \mathrm{ml} \)에 \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 6.6 \)) \( 2.5 \mathrm{ml} \)와 \( 10 \% \) potassium ferricyanide \( 2.5 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 반응시킨 후 \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( 2.5 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 반응을 종료하고 \( 4,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수한 상등액은 증류수로 2배 희석한 후, 신선하게 조제된 \( 0.1 \% \) ferric chloride 용액과 \( 5: 1\) \((\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 비율로 혼합하고 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 평가하였으며, 대조구로는 BHT를 사용하였다.</p><h2>기타 분석</h2><p>총 flavonoid의 함량 측정은 기존의 보고한 방법에 따라 측정하였으며, 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고 여과한 추출검액 \( 400 \mu \mathrm{l} \)에 \( 90 \% \) diethylene glycol \( 4 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 다시 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~NaOH}\) \(40 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 반응 후 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 총 polyphenol 함량은 추출검액 \( 400 \mu \mathrm{l} \)에 \( 50 \mu \mathrm{l} \)의 Folin-ciocalteau, \( 100 \mu \mathrm{l} \)의 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총당 정량의 경우에는 phenol-sulfuric acid법을, 환원당 정량의 경우에는 DNS 변법을 이용하였다.</p>