BPV는 소에게 흔히 감염되는 바이러스 중 하나로, 생물의약품 및 세포치료제 등의 소유래 물질에서 BPV 안전성 확보가 필요하다. 이에 따라, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BPV를 정량적으로 검출하고, 제조 과정에서 BPV 제거를 검증하기 위한 실시간 PCR 시험법을 개발하였다. 이 시험법의 특이성과 재현성이 우수함이 확인되어 신뢰성이 보장되었다.
<p>Real-time PCR을 활용한 바이러스 정량 검출 방법은 크로마토그래피 공정과 같은 단백질 분리 정제 공정에서 미량의 바이러스를 실시간에 정량화 할 수 있기 때문에, 생물의 약품 제조공정에서 바이러스 제거 검증 실험 시 감염역가시험과 함께 적용할 수 있는 유용한 평가기술일 뿐만 아니라, 감염역가시험으로는 분석할 수 없는 크로마토그래피 세척공정에서의 바이러스 안전성 검증에 활용할 수 있는 적절한 방법이다. 본 연구를 통해 확립된 BPV real-time 시험법도 세포배양 유래 생물의약품 제조 공정에서 바이러스 제거 검증과 크로마토그래피 세척 검증에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.</p> <h1>요 약</h1> <p>소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등은 생물의약품과 조직공학 제제, 세포치료제의 원료로 널리 사용되고 있다. 소유래 물질을 원료로 사용한 제제의 경우 소유래 원료 물질에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성검증이 필수적이다. BPV는 소에게 가장 흔하게 감염되는 바이러스 중의 하나이다. 소유래 물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BPV 안전성을 확보하기 위해, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BPV를 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BPV 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 BPV real-time PCR 시험법을 확립하였다. BPV에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 BPV DNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time PCR 민감도는 \( 1.3 \times 10 ^ { -1 } \mathrm { TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \) 이었다. 확립 된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성(specificity)과 재현성(reproduci-bility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 BPV를 오염시킨 CHO 세포주와 소유래 콜라겐에서 BPV 검출 시험을 실시하였다. BPV를 감염시킨 CHO 세포에서 세포변병효과를 관찰할 수 없었지만, 세포와 세포배양 상청액에서 BPV 를 정량적으로 검출할 수 있었다. 소유래 콜라겐에서도 \( 1.3 \times 10 ^ { 0 } \mathrm { TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \) 까지 정량적으로 검출할 수 있었다.</p>