Fig. 5에서 Methylobacterium sp. HJM27 균주는 알긴산 농도가 \(1.0\%\)까지 증가할 때 효소 활성이 증가하고, \(1.5\%\)에서 급감한다. 또한, \(20\)에서 \(40^{\circ}\mathrm{C}\) 범위에서의 효소 활성은 \(25^{\circ}\mathrm{C}\)에서 최대이다. Fig. 6은 반응 온도에 따른 알긴산 분해 활성을 보여주며, Streptomyces sp. MET 0515와 B. licheniformis AL-755 균주는 각각 pH 7.5와 6에서 최고의 알긴산 분해 활성을 보인다.
<h2>알긴산 농도에 따른 균주증식과 알긴산 분해효소 활성</h2> <p>Fig. 5는 Methylobacterium sp. HJM27 균주가 서로 다른 알긴산 농도에서 보이는 세포성장(bar)과 효소활성을 나타내는 결과이다. 전반적으로 세포성장은 알긴산 농도가 \( 0.5 \% \) 이상이면 큰 차이를 보이지 않았다. 효소활성은 알긴산 농도가 \( 1.0 \% \)까지는 유의하게 증가하다가 \( 1.5 \% \)에서 급격한 감소하였다. 이는 알긴산 농도가 높아짐에 따라 배지의 점도가 높아지고 일정 수준에 이르러서는 분비되는 효소의 양을 오히려 저해하는 요소로 작용할 수 있다는 것을 의미하였다. 알긴산이 전혀 없는 경우에도 활성을 보여 알긴산 분해효소는 알긴산 유무에 상관없이 항시적으로 발현되는 것으로 판단되었다. 알긴산의 농도가 \( 1.0 \% \)일 때 알긴산 분해능이 가장 높았지만, 효소활성을 세포성장으로 나눈 값은 \( 0.7 \% \)와 \( 1.0 \% \)가 오차범위내에서 \( 1.0 \% \)가 우수한 것으로 나타났다. 이러한 결과는 B. licheniformis가 \( 2.0 \% \) 알긴산에서 효소활성과 세포성장이 최대였고 \( 1.0 \% \) 까지만 균주의 성장과 효소활성이 증가한 Yonemoto 등의 보고와 차이를 보이는 것이었다. 이후 연구에서는 알긴산 농도를 \( 1.0 \% \)로 하였다.</p> <h2>반응온도에 따른 알긴산 분해효소 활성</h2> <p>Fig. 6은 조효소액이 반응 온도별로 나타내는 알긴산 분해 활성을 나타내는 것이다. \( 20 \sim 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 효소활성을 비교하니 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 가장 높았다. 한편 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 이상의 온도에서는 알긴산 분해 활성이 급격히 낮아지는 것을 확인하였다. 보고된 다른 균주가 나타내는 효소활성에 대한 최적 온도와 비교하면 해양에서 분리한 Vibrio와 Enterobacter 속 세균은 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)와 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)였으며 B. licheniformis는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)였고 Streptomyces sp. MET 0515의 경우 최적 활성 온도가 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \)였다.</p> <h2>알긴산 분해활성에 대한 pH의 영향</h2> <p>Fig. 7은 알긴산 분해활성에 영향을 미치는 pH의 결과를 나타낸 것이다. 완충용액은 \( 200 \mathrm{mM} \) sodium acetate(pH 3~6), \( 40 \mathrm{mM} \) sodium phosphate(pH 6~8), \( 100 \mathrm{mM} \) glycine-NaOH(pH 8~11) 완충용액을 사용하였다. 알칼리성 영역인 pH 9에서 분해 활성이 최대였다. \( 300 \mathrm{mM} \) GTA(3,3-dimethylglutarid acid, Tris(hydroxymethyl) aminomethane, 2-amino-2-methyl-1,3-propanediol, pH 3 10) 완충용액에서도 유사한 결과를 얻었다(data not shown). 알긴산 분해 효 소의 활성에 대한 pH의 영향은 균주별로 차이를 보였는데 Streptomyces sp. MET 0515 균주 유래 효소는 pH 7.5에서 가장 높은 알긴산 분해활성을 나타냈으며 B. lichenifomis AL-755 균주 유래 효소는 pH 6에서 가장 높은 활성을 나타내어 본 연구 결과와 차이를 보였다.</p>