장내 유용세균의 활성을 증가시키는 천연 산물군의 탐색을 위하여 다양한 천연 산물의 조합 시료를 배양하고, 6시간 간격으로 질소 가스를 불어 넣어 탈기시킨 후 흡광도를 측정하여 세균의 성장 정도를 비교하였다. 또한, linoleic acid과 tween40 용액을 \(100\mathrm{mL}\) flask에 넣고 천연산물을 열수 추출한 시료를 첨가하고 DO meter를 사용하여 항산화력을 측정하였다. 그리고 Hydroxyl radical 소거 활성은 2-deoxyribose oxidation method를 이용하여 측정하였다.
<h2>장내 유용세균 C. butyricum의 활성을 증가시키는 천연 산물군의 탐색</h2> <p>C. butyricum의 배양은 \( 250 \mathrm { ~mL } \) 삼각 플라스크에 한가지, 두가지, 세가지 및 네가지 종류의 천연산물의 조합 시료 \(3 \mathrm { mL } \)와 CAB 배지를 \( 97 \mathrm { ~mL } \) 첨가하여 전체량을 \( 100 \mathrm { ~mL } \)로 하여 멸균한 후, 질소 가스로 충진된 glove box (Jisco, J -926)내에서, 제균 필터가 부착된 needle로 배양액 내로 질소를 불어 넣어 탈기시키고, 전배양한 균주를 \( 0.1 \% \) 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 혐기 배양하면서 6시간 간격으로 질소 가스가 충진된 glove box 내에서 시료를 채취한 후 20배 희석하여 spectrophotometer (Shimadzu, UV-2101PC)를 이용하여 \( 660 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였고, 세균의 성장 정도가 천연산물을 넣지 않은 대조군보다 높은 천연산물을 선택하였다.</p> <h2>용존산소분석법(D.O. analysis method)에 의한 항산화 활성의 측정</h2> <p>용존산소분석법에 의한 항산화력의 측정은 \( 100 \mathrm { ~mL } \)의 flask에 linoleic acid \( 1 \mathrm { ~g } \)과 tween40 용액을 \( 2 \mathrm { ~mL } \) 넣고 천연산물을 열수 추출한 시료 \( 3 \mathrm { ~mL } \)를 첨가하고 증류수로 최종량을 \( 30 \mathrm { ~mL } \)로 조정한 후, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 항온조에서 \( \mathrm { Fe } ^ { 2 + } \)을 첨가하고 D.O. meter (TPS, Model WP -82, Australia)를 사용하여 D.O.의 감소에 따른 AUC (area under curve)를 구하여 항산화력을 비교하였다.</p> <h2>Hydroxyl radical 소거 활성 측정</h2> <p>Hydroxyl radical 소거 활성은 2-deoxyribose oxidation method, 즉, 시험관에 \( 0.1 \mathrm { mM } \mathrm { ~FeSO } { } _ { 4 } \) /EDTA 용액 \( 0.2 \mathrm { ~mL } , 10 \mathrm { mM } \) 2-deoxyribose \( 0.2 \mathrm { ~mL } \), 항산화 추출 시료액 \( 0.2 \mathrm { ~mL } \)와 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } ~7.4) \) \( 1.2 \mathrm { ~mL } \), \( 10 \mathrm { mM } ~ \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } ~0.2 \mathrm { ~mL } \)를 가하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 항온조에서 4시간 반응시킨 후, \( 2.8 \% \)의 TCA (trichloroacetic acid) 용액 \( 1 \mathrm { ~mL } \)를 가하여 반응을 중지시키고, 생성되는 malondialdehyde를 \( 1.0 \% \)의 TBA (thiobarbituric acid) 용액 \( 1 \mathrm { ~mL } \)를 가하여 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 가열시킨 후 급속 냉각하고 \( 532 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p>