MTT assay를 이용해 B16F1세포에 대한 매실의 세포 독성을 조사한 결과, 매실의 \(1\%\) 이하 농도에서는 독성효과가 없음을 확인하였다. 또한, 매실추출물이 DPPH radical, hydroxyl radical, hydrogen peroxide의 소거능력 및 환원력과 연관되어 있음을 보여주었다. B16F1 세포로부터 분리한 genomic DNA를 이용하여 hydroxyl radical에 의한 DNA의 산화적 손상에 대한 매실추출물의 항산화 효과를 조사하였으며, 매실이 항산화 효소인 Nrf2와 SOD-1, SOD-2의 단백질 발현을 조절하는데 영향을 미치는지 살펴보았다.
<h1>결과</h1> <h2>세포성장에 대한 매실추출물의 효과</h2> <p>이 세포 독성에 미치는 농도를 조사하기 위하여 MTT assay를 수행하였다. B16F1세포에 대한 매실의 세포 독성을 측정한 결과, Fig. 1에서 보는 바와 같이 매실의 \( 1 \% \) 이하의 농도에서 비교하였을 때 어떠한 독성효과도 없는 것으로 나타났다.</p> <h2>DPPH radical, hydrogen peroxide, superoxide anion 및 reducing power에 대한 매실추출물의 효과</h2> <p>생체 내 산화적 스트레스와 관련되어 있는 DPPH radical, hydroxyl radical, hydrogen peroxide의 소거능력 및 환원력에 대하여 매실추출물의 효과를 조사하였다. DPPH radical 소거법은 항산화 물질에 의한 DPPH radical의 탈색 정도를 지표로 하여 산화억제 정도를 예측할 수 있다. Fig. 2A에서 보는 바와 같이 매실추출물은 농도가 증가함에 따라 DPPH radical에 대한 소거능이 비례하여 증가하는 것으로 나타났다. Fig. 2B에서는 매실추출물을 처리했을 때 \( 1 \% \)의 농도에서 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 소거능이 나타나는 것을 확인 할 수 있었다. Fig. 2C에서는 양성 대조군인 superoxide dismutase (SOD)의 superoxide anion 소거능을 관찰 할 수 있었고, 매실추출물의 경우에는 \( 0.125 \% \) 이상의 농도에서 superoxide anion 소거능이 관찰되었다. Fig. 2D에서 보는 바와 같이 매실추출물의 환원력은 농도에 따라서 증가하는 것으로 나타났다. 매실추출물이 \( 1 \% \) 농도에서는 양성대조군으로 사용된 \( 0.01 \% \)의 vitamin C와 환원력이 유사한 것으로 나타났다.</p> <h2>Hydroxyl radical에 의한 genomic DNA 산화에 대한 매실추출물의 보호효과</h2> <p>B16F1 세포로부터 분리한 genomic DNA를 이용하여 Fenton 반응에 의하여 발생된 hydroxyl radical에 의한 DNA의 산화적 손상에 대한 매실추출물의 항산화 효과를 조사하였다. 본 실험에서 매실의 존재 및 부재의 조건에서 DNA 전기영동을 이용하여 \( 200 \mu \mathrm { M~ } \mathrm { Fe } \)(Ⅱ) 및 \( 2 \mathrm { mM~ } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 사용한 Fenton반응에 의하여 발생된 hydroxyl radical에 노출된 DNA의 산화적 손상을 조사하였다. \( 30 \mathrm { ~min } \) 반응 후 대조군의 genomic DNA는 Fig. 3에서 보여지는 바와 같이 분해되는 것을 확인 할 수 있었다. 그러나 매실추출물을 첨가한 군에서는 농도에 따라 DNA의 산화적 손상에 대한 보호효과가 증가하였으며, \( 0.25 \% \) 이상의 농도에서는 ge-nomic DNA의 산화적 손상이 완전히 억제되는 것으로 관찰 되었다.</p> <h2>In vitro 지질과산화(TBARS)에 대한 매실추출물의 효과</h2> <p>In vitro에서 지질과산화에 대한 매실추추물의 항산화 효과를 조사하기 위하여 linolenic acid를 Fenton반응으로 발생시킨 hydroxyl radical에 노출시켰다. 먼저 hydroxyl radical에 의한 지질과산화를 확인하기 위하여 기존에 알려진 친유성 항산화제인 vitamin E의 지질과산화에 대한 억제효능을 관찰한 결과, Fig. 4에서 보여지는 바와 같이 지질과산화 억제효과를 관찰 할 수 있었으나, 매실추출물은 지질과산화에 대한 억제효과가 없는 것으로 나타났다.</p> <h2>세포 내 melanin 생성에 대한 매실추출물의 효과</h2> <p>Melanoma 세포에서 tyrosinase가 tyrosine을 기질로 하여 DOPA를 DOPA quinine으로 산화시킴으로서 melanin이 합성된다. B16F1 세포에서 매실추출물의 멜라닌 생성 억제효과를 알아보기 위하여 B16F1 세포에 각 농도별로 처리하고 세포</p> <h2>B16F1 세포에서 항산화 효과와 관련된 단백질의 발현에 대한 매실추추물의 효과</h2> <p>매실이 항산화 효소의 발현을 조절하는데 가장 중요한 전사 인자인 Nrf2와 진 항산화 효소 중에서 가장 중요한 Superoxide dismutase (SOD)인 SOD-1과 SOD-2 의 단백질 발현을 조사하 였다. Fig. 6에서 보는 바와 같이 매실추출물은 대조군에 비하여 \( 0.5 \% \) 이상의 농도에서 Nrf2, SOD-1 및 SOD-2의 단백질 발현이 감소되는 것으로 관찰되었다.</p>