부산 해운대 해안의 미역 고형분을 일주일간 정치한 후 채취한 샘플들로부터 분리한 균주 중 알긴산 분해효소 활성이 가장 높은 균주를 선택하여 조사하였다. 이 균주는 막대형의 그람-음성균으로, 콜로니는 평평하고 밝은 노란색이었다. 전자현미경으로 확인한 크기는 직경이 0.3-0.7µm이고 길이는 0.8-2.5µm이었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주의 분리 및 최적 생장 온도, \(\mathrm{pH}\) , \(\mathrm{NaCl} \) 농도</h2> <p>부산 해운대 해안에서 미역 고형분을 일주일 동안 정치 후, 채취한 샘플들로부터 분리한 균주로부터 알긴산 분해효소 활성이 가장 좋은 균주를 선택하여 조사하였다. 선택 균주는 광학현미경과 그람염색에 의해 막대형(rod)의 그람-음성균이었으며, 배지 상에 자라난 콜로니는 평평하고 밝은 노란색이었다. 전자현미경을 통해 확인한 크기는 직경이 0.3-0.7 \(\mu \mathrm{m} \)이고, 길이는 \( 0.8-2.5 \mu \mathrm{m} \)이었다. 또한 비운동성(nonmotility)이었고, 포자(spore)를 형성하지 않았다. 균주의 최적 생장 온도는 영양 배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 이었으며, \( 10^{\circ} \mathrm{C} \) 이하 또는 \( 42^{\circ} \mathrm{C} \) 이상에서는 전혀 생장하지 않았다(Fig. 1). 해양 세균의 경우 일반적으로 \( \mathrm{NaCl} 3 \% \) 내외에서 최적 생육조건이나, 분리한 균주의 생장을 위한 최적 \( \mathrm{NaCl} \)의 농도는 \( 0.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \) 인 것으로 조사되어 해양에서 분리하였지만 전형적인 해양 세균은 아니었으며, \( 8 \% \) 까지도 생장은 가능하나 그 이상의 농도에서는 생장하지 않았다(Fig. 2). 최적 생장 \( \mathrm{pH} \) 는 8 인 것으로 조사되었으며, \( \mathrm{pH} 4 \) 이하와 \( \mathrm{pH} 10 \) 이상에서는 생장이 억제되었다(Fig. 3).</p> <h2>표현형적 특성(phenotypic characteristics)</h2> <p>분리한 균주는 생장을 위한 탄소 및 에너지원으로 조사한 기질에서 Table 1 과 같은 결과를 얻었다. 또한, 아르기닌 가수분해(arginine hydrolase) 반응에 양성 반응을, 노바바이신 (novobiocin), 페니실린에는 내성을 가지며, 우레아제 (urease) 반응에서는 음성으로 나타났다. 분리한 균주의 대사는 호기성으로 조사되었다.</p> <h2>16S rDNA 서열 분석 및 DNA 염기 조성</h2> <p>분리한 균주의 16S rDNA 염기서열을 확보하기위하여 PCR에 의한 16S rDNA의 \( 1530 \mathrm{bp} \) 염기서열을 NCBI GenBank 데이터베이스의 BLASTN을 이용하여 분석하였다(Fig. 4). 그 결과, 다양한 Pseudomonas 속 미생물 중에서도 Pseudomonas flavescens \(\mathrm{B}62^{\mathrm{T}} \), Pseudomonas straminea IAM \( 1598^{\mathrm{T}} \)와 각각 \( 97.3 \% \)와 \( 96.9 \% \)의 높은 상동성을 나타내어, 분리된 균주의 16S rDNA의 염기서열은 Pseudomonas 속으로 조사되었다. 이에 분리된 균주를 Pseudomonas sp. N7151-6라 명명하였다. 또한 계통수를 통해 Pseudomonas 속에 속한 종들과 비교하였다(Fig. 5). 현재 Pseudomonas 속에서는 학명으로 인정된 종으로는 Pseudomonas aeruginosa 에서 알긴산 분해효소가 생성된다는 것이 보고되어 있는데, Pseudomonas aeruginosa는 병원성 균주로 인식 되어 있어 알긴산 분해효소를 산업적으로 생산하기에는 가능성이 떨어지며, 분리된 Pseudomonas sp. N7151-6 균주와 Pseudomonas aeruginosa의 16S rDNA 염기서열의 상동성은 \( 95.6 \% \)로 조사되었다. 또한 생화학적 특성을 비교시에도 분리한 균주는 Pseudomonas aeruginosa 종이 아닌 알긴산 분해효소를 생산하는 신균주로 조사되었다. 그 외 DNA \( \mathrm{G}+\mathrm{C} \) 조성은 \( 63.5 \% \)로 조사 되었다.</p>