Xanthine oxidase 활성 측정은 Zweier의 방법에 따라 준비한 cell lysate에 xanthine를 첨가하여 마이크로플레이트리더기로 흡광도를 측정하였고, Antioxidant enzyme 활성 측정은 \(\mathrm{KCl}\)이 포함된 칼륨인산염 완충액을 cell lysate에 첨가하여 원심분리 후 상등액을 Aebi의 방법에 따라 흡광도 \(240\mathrm{~nm}\)에서 감소되는 \(\mathrm{H}_{2}\mathrm{O}_{2}\)의 초기 가상 계수반응상수를 정하여 이 상수로 catalase 활성을 계산하였다.
<h2>Xanthine oxidase 활성 측정</h2> <p>Xanthine oxidase의 활성도를 측정하기 위해 cell lysate를 Zweier의 방법에 따라 준비하였다. 요산(uric acid)의 생성은 Zweier의 방법에 따라 \( 60 ~ \mu \mathrm { mol } /1 \)의 xanthine을 cell lysate에 첨가하여 흡광도 \( 290 \mathrm { ~nm } \)하에서 마이크로플레이트리더기로 측정하였다. 효소활성은 단백질 \( 1 \mathrm { mg } \)에 대해 1 unit으로 나타내었으며, 이때 1 unit은 1분 동안 요산으로 환원되는 기질의 \( 1 ~ \mu \mathrm { mol } \)과 동일하게 표시하였다.</p> <h2>Antioxidant enzyme 활성 측정</h2> <p>항산화효소인 catalase를 측정하기 위해 \( \mathrm { KCl } (140 \mathrm { ~mM } ) \)이 포함되어 있는 칼륨인산염 완충액(potassium phosphate buf-fer, \( 25 \mathrm { ~mM } \), \( \mathrm { pH } 7.4 \))을 cell lysate에 첨가하여 \(600 \times g \)의 속도로 10분간 원심분리하였다. 원심분리 후 상등액을 Aebi의 방법에 따라 catalase를 측정하는데 사용하였다. 흡광도 \( 240 \mathrm { ~nm } \)에서 감소되는 hydrogen peroxide \( \left ( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \right ) \)의 초기 가상 계수반응상수(pseudofirst order reaction constant, \( \kappa ^ {\prime } = \kappa \) [CAT])를 정하였고 \( 1 \mu \mathrm { g } \)의 단백질에 대한 \( 1 \mathrm { pmol } \) 농도의 catalase 활성을 \( \kappa=4.7 \times 10 ^ { 7 } / \mathrm { Ms } \)의 상수를 이용하여 계산하였다. Glutathione peroxidase (GPx)와 Superoxide dismutase (SOD)를 측정하기 위해 \( 600 \mathrm { ~g } \)의 속도로 10분간 원심분리한 상등액을 \(9,000 \times g \)의 속도로 10분간 다시 원심분리하였다. GPx와 SOD를 측정하기 위해 \( BIOXYTECH ^ {\circledR } \) \(GPx-340 ^ { TM } \) (OXIS International)과 \(BIOXYTECH ^ {\circledR } \) \(SOD-525 ^ { TM } \) (OXIS International) kit를 각각 사용하여 제조사의 사용설명서에 따라 실험을 수행하였다. \(BIOXYTECH ^ {\circledR } \) \(SOD-525 ^ { TM } \)의 경우 Mn-SOD를 비활성화시키기 때문에 에탄올-클로로포름 추출이 권장되었으며, \( \mathrm { Cu } - \mathrm { Zn } - \) \(SOD \)에 특이적으로 반응한다.</p>