당뇨는 6주령까지 순화된 실험쥐에 streptozotocin(STZ)을 이용하여 유발시켰다. 혈당을 측정하여 비공복 혈당이 \(300 \mathrm{mg} / \mathrm{dl}\) 이상인 것을 당뇨쥐로 선정하였다. 실험군은 정상군, STZ-당뇨군, 그리고 클로렐라 추출물 분말 \(3\%\) 및 \(6\%\) 첨가된 STZ+CE3군 및 STZ+CE6군으로 나누었다. 이들 실험군에 대해 4주간 실험을 수행하였으며, 6주령부터 매주 체중을 측정하고 일일 식이 및 음료 섭취량을 측정하여 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>옥외 배양장에서 생육속도가 빠른 클로렐라 균주를 순수 분리하여 최적 배지 조성과 배양 조건에서 대량 배양 한 후 M/F 농축기(Membrain Filter System, PHILOSEP RCM 60, PHILOSE Co., Ltd., Korea) 및 PHILOSEP RCM 60 내에 장착된 membrane filter를 통과시키면서 농축하였다. 클로렐라 농축액을 고압 멸균기(Autoclave)로 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 열처리한 후 규조토를 혼합하여 Filter Press (Korea Filter Co., Ltd., Korea)로 여과하였다. 여과된 추출물에 클로렐라 세포 파쇄물의 잔존여부를 확인한 후, 완전히 여과된 상태의 최종 클로렐라 열수 추출물을 진주 바이오 21센터에서 \( 100 \mathrm{~kg} \) 용량의 동결건조기(Freeze Dryer, IlShin-Lab, Busan, Korea)를 이용하여 열수추출물 건조 분말을 얻어 실험 재료로 사용하였다.</p><h2>실험 동물, 사육 조건 및 식이 조성</h2><p>실험 동물은 4주령 Sprague-Dawley계 수컷쥐를 효창사이언스(Daegu, Korea)로부터 구입하여 동물 사육실 온도 \(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \(50 \pm 5 \% \), 명암주기 12시간(명주기: 07:00~19:00)이 조절되는 동물 사육실에서 사육하였다. 당뇨 유발은 6주령까지 환경에 충분히 순화시킨 후 16시간 절식시키고 streptozotocin (STZ)을 \( 0.01 \mathrm{~M} \) citric acid 반응액 \( (\mathrm{pH} 4.5) \)에 \( 60 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \) B.W 농도로 용해하여 1회 복강 주사하여 당뇨를 유발시켰다. STZ 복강 주사 후 24시간째 꼬리 정맥에서 채혈하여 혈당 측정계(SureStep Plus\( { }^{\mathrm{TM}} \), LIFESCAN, Johnson & Johnson, USA)로 측정하여 비공복 혈당이 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{dl} \) 이상인 것만 당뇨쥐로 판정하고 각군의 평균 혈당이 비슷하도록 하여 6마리씩 실험군으로 각각 나누었다. 실험군은 일반 조제식이 투여 정상 N군 및 STZ-당뇨군, 클로렐라 추출물 분말 \( 3 \% \) 및 \( 6 \% \) 첨가 식이 투여 STZ+CE3군 및 STZ+CE6군으로 나누어 4주간 실험하였다. 실험식이 중 클로렐라 첨가 농도 수준은 간 독성 실험에서 \( 5 \% \) 및 \( 10 \% \) 투여, 고지혈증 유발쥐에서 Chlorella pyrenoidosa 분말 \( 1.8 \% \) 및 \(7.2\%\) 투여, STZ-당뇨쥐에 Chlorella pyrenoidosa 분말 \(7.3\%\) 투여 및 고콜레스테롤 실험쥐에 Chlorella pyrenoidosa 분말 \( 10 \% \) 투여 농도를 고려하였다. 실험 식이를 투여한 6주령부터 매주 1회씩 일정한 시간에 체중을 측정하였고, 식이 및 음료 섭취량은 매일 측정하여 급여량과 잔여량의 차이로 계산하였다.</p>