청목노상 잎 시료로부터 callus를 얻어 bioreactor에서 배양하여 대량확보하였다. 추출물의 페놀성 화합물 농도를 조절하여 H. pylari에 대한 저해를 측정한 결과 전 농도 범위에서 저해효과가 매우 높음을 확인할 수 있었다. 페놀성 화합물은 식물계에 널리 분포되어 있으며 다양한 구조와 분자량으로 인해 성질 및 기능도 다양하고 많은 생리활성을 가지고 있다. 청목노상 callus 추출물의 H. pylari에 대한 항균활성 물질을 분획하여 그 중 \( \mathrm{F} \) fraction을 확보하고 column chromatography로 정제한 결과 5가지 순수한 화합물을 분리하였고, TLC와 HPLC를 이용하여 단일 물질임을 확인하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>청목노상 callus유도를 위한 spot 배양 및 bioreactor 배양</h2> <p>청목노상 잎 시료를 Murashige와 Skoog의 방법과 같이 MS고체배지를 이용하여 1개월간 배양한 결과 Fig. 1과 같이 잎으로부터 유도된 청목노상의 callus를 얻을 수 있었으며, 청목노상의 callus의 대량확보을 위한 bioreactor 배양은 \( \mathrm{MS} \) 액체 배지를 사용하여 Fig. 2와 같이 배양하여 청목노상의 callus를 대량 확보할 수 있었다.</p> <h2>청목노상 callus 추출물의 H. pylori 생육저해 효과 측정</h2> <p>청목노상 callus 추출물의 \( H \) pylori 생육저해 결과는 Fig.3과 같이 나타났다. Callus 추출물의 phenolic compound 농도를 \( 50 \sim 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 농도로 조절하여 H. pylari에 대한 저해를 측정한 결과 전농도 범위에서 \( 12 \sim 14 \mathrm{~mm} \) 의 선명한 clear zone이 형성되어 H pylori 저해효과가 매우 높은 것을 확인할 수 있었다. 조 등은 쇠비름 추출물이 H. pylori에 대한 저해연구에서 \( 13 \mathrm{~mm} \) 내외의 clear zone을 얻은 것으로 보고 하였다. 본 연구에 사용된 청목노상 callus 추출물의 H pylori에 대한 억제 효과는 방부작용을 하는 것으로 알려진 쇠비름 보다 우수한 항균활성을 가지는 것으로 확인되었다.</p> <h2>Callus 추출물의 phenol성 물질의 함량</h2> <p>페놀성 화합물은 식물계에 널리 분포되어 있는 2차 대사산물의 하나로써, 다양한 구조와 분자량을 가지며, 이에 따라 이화학적 성질 및 생리적 기능도 매우 다양하게 나타난다. 한 개 또는 두 개 이상의 수산기로 치환된 방향족 고리를 공통적으로 갖는데, 이러한 phenolic hydroxyl group 때문에 단백질, 효소 단백질 및 기타 거대 분자들과 결합하는 성질이 있으며, 2가 금속 이온과의 결합력도 갖는다. 이러한 성질로 인하여 페놀성 화합물은 항 종양작용, \( \mathrm{ACE} \) 활성 저해작용, 항균작용 등 많은 생리활성을 가짐이 밝혀지고 있다. 배양된 callus 추출물이 가지는 phenol성 물질의 함량을 측정한 결과 Table 2와 같이 callus추출물의 phenol성 물질의 함량은 \( 15.3 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{g} \) 으로 나타났다.</p> <h2>청목노상 callus 추출물로 부터 column chromatography 이용한 H. pylori 생육저해 물질의 정제</h2> <p>청목노상으로부터 유도된 callus 추출물의 H. pylori에 대한 항균활성 물질을 정제하기 위하여 Fig. 4 와 같이 Sephadex LH-20 column으로 \( 80 \% \) ethanol을 용매로 사용하여 분획하고 항균활성을 측정한 결과 Fig. 5에서와 같이 1 차 분획물 중 \( \mathrm{F} \) fraction을 확보한 후 저분자 phenol류 분리에 효과가 탁월한 Sephadex LH-20 dextran gel과 구조적 이성질 phenol류 분리가 용이한 MCI-gel을 이용하여 normal phase type과 reverse phase type으로 \( \mathrm{EtOH} \) 과 \( \mathrm{MeOH} \) 을 이용한 column chroma-tography를 이용하여 정제한 결과 callus 추출물로 부터 5가지의 순수한 compound를 분리하였고, TLC와 HPLC를 이용하여 단일 물질임을 확인하였다.</p>