Western blot 분석을 위해 쏘가리 골격근 조직의 LDH에 여러 과정을 거친 후 Chloronaphtol과 혼합액으로 반응시키고 증류수로 세척하여 반응을 정지시킨 다음 밴드를 확인했다. 쏘가리 각 조직에서 LDH의 효소활성이 높게 나타난 순서는 골격근, 심장, 신장, 뇌, 눈, 간 조직 순이다. 조직 내 단백질의 양은 골격근, 신장, 간 조직이 유사하게 나타났고, 심장 조직은 \(23.99\mathrm{mg}/\mathrm{g}\)으로 나타났으며, 눈과 뇌 조직이 유사하게 나타났다.
<h2>Western blot analysis</h2> <p>쏘가리 골격근 조직의 LDH를 native-PAGE한 후 gel상의 단백질을 semidry blotting system (Trans-blot SD, Bio-rad)에서 \( 15 \mathrm { mM } \) Tris-glycine buffer ( \( \mathrm { pH } \) 8.3)를 사용하여 \( 25 \mathrm { ~V } \) 에서 30분 동안 nitrocellulose membrane에 transfer시켰다. Membrane을 \(5 \% \) skim milk/TBS (0.01 \( \mathrm { M } \) Tris buffered saline, \( \mathrm { pH } \) 7.5) 용액에 넣고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1시간 동안 blocking시킨후 TBS용액에서 10분간씩 3회 세척하였다. \(5 \% \) Skim milk/TBS를 사용하여 \(1:1,000 \)으로 희석한 1차 항체 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소에 대한 항체)용액에 membrane을 넣고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1시간 동안 shaking 시킨 후 TBS용액으로 10분간씩 2회 세척하여 membrane에 결합하지 않은 1차 항체를 씻어주었다. Anti-rabbit \( \operatorname { IgG } \) (2차 항체)를 \(5 \% \) skim milk/TBS를 사용하여 \(1:2,000 \)으로 희석시킨 용액에 membrane을 넣고 1시간 동안 shaking 시킨 후 항원과 결합하지 않은 2차 항체를 TBS용액으로 10분간씩 3회 세척하였다. Chloronaphtol 및 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 의 혼합액으로 반응시킨 후 증류수로 세척하여 반응을 정지시킨 다음 밴드를 확인하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>쏘가리 조직의 LDH 활성 및 단백질 정량</h2> <p>쏘가리 각 조직에서 LDH의 효소활성을 측정한 결과 골격근, 심장, 신장, 뇌, 눈 및 간 조직의 순서로 효소활성이 높게 나타났다. 조직 내 단백질의 양은 골격근, 신장 및 간 조직이 각각 31.30, 33.98 및 \( 33.11 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 유사하게 나타났고, 심 장 조직은 \( 23.99 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 나타났으며, 눈 및 뇌 조직이 각 각 11.16 및 \( 12.73 \mathrm { mg } / \mathrm { g } \) 으로 유사하게 나타났다(Table 1). 골격근 조직에서 LDH 활성이 가장 크게 나타난 점은 모래무지, 열대성 catfish 및 풀망둑의 결과와 같았다.</p>