Fig2는 AQP4 cRNA \( (4 \mathrm { ng } ) \) 또는 동량( \( 50 \mu \ma thrm { l } \) )의 무선 시료로 실험을 진행한 결과를 나타낸다. 실험에 사용된 시약은 Molecular Probes, Ambion, Promega, Calbiochem, Sigma 사에서 구입하여 사용하였다.
<p>실험에 사용된 시약은 다음과 같다 : BAPTA/AM (1,2-bis (2-aminophenoxy) ethan -N, N, N', N'-tetraacetic acid)는 Molecular Probes (Eugene, OR)사에서, mMessagemMachine T3 Kit는 Ambion (Austin, TX)사에서 Xba I, Bgl II, Hind III 및 Bam H I은 Promega (Madison, WI)사에서, calmidazolium, calyculin 및 W-7은 Calbiochem (La Jolla, CA)사에서, PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate), staurosporine 및 나머지 시약은 Sigma (St. Louis, MO)사에서 구입하여 사용하였다.</p> <h1>결과</h1> <p>Fig. 2는 AQP4 cRNA \( (4 \mathrm { ng } ) \) 혹은 동량 ( \( 50 \mu \mathrm { l } \))의 물을 주입한 후 3일 경과한 oocyte에 3 배의 hypotonic shock \( (70 / 200 \mathrm { mosm } \) )을 가한 뒤 videomicroscope 를 이용하여 oocyte의 크기 변화를 기록한 것으로 \( 50 \mathrm { nl } \) 의 물만 주입한 경우 oocyte의 크기 번화가 전혀 관찰되지 않았으나(Fig.2b), AQP4 cRNA를 주입한 oocyte는 3배의 hypotonic shock 노출시 그 크기가 계속 증가하여 90초 경과시 처음 크기의 \( 1.15 \) 배 정도로 증가되는 것을 볼 수 있었다(Fig.2a). AQP4 cRNA를 주입한 oocyte의 겅우 2~3분 경과 후에는 과도한 부피 증가로 대부분 파열되는 깃을 관찰할 수 있었다(자료 미제시). 이후 모든 자료는 이와 같이 기록한 oocyte 형태의 변화를 computer program을 이용하여 방법에서 설명한 바와 같이 수분 투과도 \( \left ( \mathrm { P } _ {\mathrm { f } } \right ) \) 로 전환하여 나타내었다.</p> <p>이미 밝혀진 AQP4 cDNA의 염기서열과 그에 따른 아미노산 서열을 볼때 AQP4 water channel은 loop B, loop D에 multiple phosphorylation consensus sequence를 가지고 있어 AQP4 water channel이 여러 protein kinase들에, 의한 phosphorylation을 통헤 그 활성이 조절받을 가능성올 시사하고 있다. AQP4 water channel의 활성도 조절에 어떤 특정 protein kinase가 관여하는지를 알아보고자 먼저 protein kinase A가 AQP4 water channel을 통한 수분 투과도에 미치는 효과를 관찰하였다. Fig. 3은 forskolin \( (10 \mu \mathrm { M } ) \) 을 10 분 전처치한 후 3배의 hyposmotic shock 노출시 시간 경과에 따른 aocyte swelling의 초기속도를 기록한 것으로, AQP4 cRNA를 주입한 oocyte에서 forskolin을 전처치한 경우 전처치 하지 않은 군에 비해 수분 투과도의 유의한 변화는 관찰되지 않았으므로 AQP4 water channel의 활성조절에 있어서 protein kinase A의 관련성은 배제하였다.</p>