실험에 사용된 검체는 경상남도 창원의 새우, 가재, 바지락, 홍합 등 80건, 사천, 통영, 거제, 하동 지역 해변에서 멸균병으로 채수한 해수 20건을 검체로 사용하였다. Listeria 속의 분리는 Difco Lab 사 제품의 LEB, \(\mathrm{LiCl}\)-Pheny-lethanol-Moxalactam Agar(LPM), Tryptic Soy Agar(TSA) 배지를 사용하여 검출하였고, 양성 대조 구로는 L monocytogenes ATCC 19111, CAMP test 지표균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Rodococcus equi KCTC 9082를 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>검체</h2><p>실험에 사용된 검체는 경상남도 창원의 지역시장에서 유통되는 새우(20건), 가재(20건), 바지락(20건), 홍합(20건) 등의 해산물 80건과 사천, 통영, 거제, 하동 지역 해변에서 멸균병으로 채수한 해수(20건)를 검체로 사용하였다.</p><h2>표준 균주</h2><p>양성 대조 구로 사용한 표준균주는 L. monocytogenes ATCC 19111이며, CAMP test 지표균주는 Staphylococcus aureus ATCC 25923, Rodococcus equi KCTC 9082를 사용하였다.</p><h2>배지 및 시약</h2><p>해수와 해산물에서의 Listeria 속의 분리는 Difco Lab. 사 제품의 Listeria Enrichment Broth (이하 LEB), \(\mathrm{LiCl}\)-Pheny-lethanol-Moxalactam Agar (이하 LPM), Tryptic Soy Agar(Broth) \( +0.6 \% \) Yeast Extract (이하 \( 0.6 \% \) TSA-YE, TSB-YE), Triple Sugar Iron Agar (이하 TSI), Gram 염색시약 (Gram stain set)과 Unipath Ltd. 제품의 Listeria Selective Agar base (이하 Oxford)를 사용하였다. 1차 생화학시험 배지로는 Purple Broth (\( 1 \% \) D-Xylose와 \( 1 \% \) L-Rhamnose, \( 0.5 \% \) Salicin과 \( 1 \%\) \(\alpha \)-Methyl-D-mannoside를 따로 멸균 후 첨가)배지와 혼합하여 사용하였다. \( \beta \)-Hemolysis 시험을 하기 위해 제품화된 \( 5 \% \) Sheep Blood Agar평판배지(이하 \( 5 \% \) BAP, 아산제약)를 사용하였으며, 2 차 생화학시험을 하기위하여 bioMérieux sa 제품의 API 20E와 Rapid ID 32 STREP, API LISTERIA Kit를 사용하였다.</p><h2>분리 및 동정</h2><p>Listeria 속을 분리하기 위하여 Lovett 등의 방법과 Weagant 등의 방법을 변용하였다. 각 해산물을 \( 25 \mathrm{~g} \)씩 취하여 멸균된 소량의 LEB를 넣어 균질기(homogenizer, Nihonseiki Co., Japan)로 2 분간 처리하여 LEB를 가하여 최종량이 \( 225 \mathrm{ml} \)가 되게 하였다. 각 해수는 \( 100 \mathrm{ml} \)씩 여과 \( (0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter, Whatman)하여 멸균된 \( 50 \mathrm{ml} \) LEB가 들어있는 \( 100 \mathrm{ml} \)의 삼각플라스크에 넣어 이후의 실험을 실시하였다. 양성 대조구인 L. monocytogenes ATCC 19111는 \(0.6\%\) TSB-YE배지에 접종시켜, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 2회 계대 배양하여 균을 활성화시킨 후 검체와 동일한 배양 방법으로 활성화시킨 배양액 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 멸균된 LEB \( 9 \mathrm{ml} \) 에 가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1일\(\sim\)7일간 증균 배양하면서 Fig. 1과 같은 실험을 하였다.</p>