일반적인 배양에는 YEPG 배지가 사용되었고, 특정 화합물의 성장 조사를 위해 특정 화합물을 유일한 탄소원으로 함유한 mineral salt medium (MSM)를 사용했다. 비교적 성장이 원활한 균주 중에서 Phenanthrene spray plate 방법을 통해 양성 반응을 나타낸 균주를 선별하고, 이 균주를 순수하게 분리하여 3Y라고 명명하였다. 3Y 균주의 석유계 탄화수소 분해 특성을 조사하기 위해 Phenanthrene spray plate 방법을 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>오염부지</h2> <p>본 연구에 사용된 균주가 분리된 곳은 경유로 15년간 오염된 국내의 한 군부대내 지역으로서 이곳은 지하 \( 3.5 \mathrm{~m} \)부터 오염층이 존재하였다. 오염토양은 \( \mathrm{pH} 6.5 \)의 사질 식양토로 약 \( 10,000 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \)의 TPH로 오염되어있었다. 토양 유기물과 물의 함량은 각각 \( 4.3 \pm 0.3 \%(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)과 \( 7.8 \pm 0.4 \%(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)이었다.</p> <p>오염부지의 토양에 존재하는 종속영양형태를 나타내는 총생균수는 \( 6.3 \times 10^{7} \mathrm{CFU} / \mathrm{g} \) soil 이었으며 한편 경유성분인 phenanthrene과 hexadecane을 분해하는 세균 수는 각각 \( 1.3 \times 10^{7} \mathrm{CFU} / \mathrm{g} \) soil와 \( 9.5 \times 10^{6} \mathrm{CFU} / \mathrm{g} \) soil인 것으로 나타났다. Phenanthrene과 hexadecane은 석유계 방향족과 지방족 탄화수소를 대표하는 화합물로 사용되었다. 본 연구에 사용된 토양시료에 존재하는 토착세균 중에서 phenanthrene spray plate 법에 의해 양성을 나타낸 세균들은 대부분 노란색의 집락을 형성하였다. Phenanthrene spray plate 법에 의해 양성을 나타낸 균주 중에서 비교적 성장을 잘하고 phe-nanthrene spray plate 법을 실시하였을 때 투명환이 큰 균주를 순수 분리하여 3Y라고 명명하고 석유계 탄화수소분해특징을 조사하였다.</p> <h2>균주와 화합물</h2> <p>본 연구에 사용된 균주 3Y는 지하 \( 3.5 \mathrm{~m} \) 오염층에서 채취한 토양시료에서 분리하였다. 채취한 토양은 \( 0.1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v})\) py-rophosphate buffer에서 vortex 처리한 후 연속 희속하여 YEPG agar 배지에 도말한 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4일 배양하였다. Colony가 형성된 agar 배지에 phenanthrene spray plate as-say를 실시하여 colony 주위에 투명환을 형성하는 균주는 phennathrene 분해능이 있을 가능성이 큰 것으로 간주하고 순수 분리하여 본 연구에 사용하였다.</p> <p>YEPG 배지는 일반적인 배양에 사용되었고, 한편 특정 화합물에 대한 성장조사에는 mineral salt medium (MSM)에 특정 화합물을 유일 탄소원으로 공급하였다. MSM 배지 조성은 다음과 같다(1 당): \( 4 \mathrm{g} \mathrm{~NaNO}_{3}\), \(1.5 \mathrm{g} \mathrm{~KH}_{2} \mathrm{PO}_{4}\), \(0.005 \mathrm{g} \mathrm{~FeCl}_{3} .6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \( 0.2 \mathrm{g} \mathrm{~MgSO}_{4} .7 \mathrm{H} 2 \mathrm{O}\), \(0.01 \mathrm{g} \mathrm{~CaCl}_{2} .2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(0.5 \mathrm{g} \mathrm{~Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\), \( \mathrm{pH} 7.2 \). 본 연구에 사용된 화합물은 Aldrich Chemical Company, Inc. (Milwaukee, WI, USAS)로부터 구입하였으며 가장 순도가 높은 것이었다.</p>