본 연구에서 이용된 감태로부터 열수 추출을 진행하고, 이를 농축한 다음 동결건조해서 본 실험의 시료로 이용했다. 이 시료를 이용해서 전자공여능을 DPPH에 대한 수소공여 효과로 측정했다. 또한 SOD유사활성을 알아보기 위해 pyrogallol의 생성량을 측정해서 나타내었다. 두 가지 모두 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 백분율로 나타냈다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료</h2><p>본 실험에 사용한 감태 \( ( \) E. cava Kjellman \( ) \)는 제주 해초식품에서 구입하여 깨끗이 씻은 후 일주일 동안 음지에서 자연건조 시켰다. 이후 믹서기(HMF-1000A, Hanil Electronics, Korea)로 분쇄한 감태 시료 \( 50 \mathrm{~g} \) 에 증류수 1 l를 가하고, \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12 시간 동안 추출하였다. 추출한 다음은 Whatman No. 2 filter paper로 여과한 후 rotary evaporator (EYELA N-1000, Rikakikai CO., LTD., Tokyo, Japan)에서 농축하고 다시 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 동결건조한 것을 시료로 사용하였다. 각 생리활성 측정 시 시료는 증류수에 농도별로 용해한 후 측정하였다.</p><h2>DPPH 라디칼 소거능 측정</h2><p>감태 열수 추출물의 전자공여능은 Blois의 방법에 따라 DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)에 대한 수소공여 효과로 측정하였다. \( \mathrm{DPPH} \) 용액은 \( 100 \mathrm{ml} \) 에탄올에 \( \mathrm{DPPH} 1.5 \times 10^{4} \) \( \mathrm{M} \) 을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 혼합하여 Whatman filter paper No. 2로 여과하여 만들었다. 96 well plate에 시료와 DPPH용액을 \( 1: 4 \) 비율로 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 반응시킨 후, ELISA reader를 이용하여 \( 520 \mathrm{~nm} \) (Molecular Device, VersaMax Microplate Reader, Calfornia, USA)에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donating ability, \( \mathrm{EDA}) \) 은 \( \mathrm{EDA}(\%)= \) (대조구흡광도-시료 첨가구흡광도)/대조구흡광도 \( \times 100 \) 으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다.</p><h2>SOD 유사활성(Superoxide dismutase-like activity:SODA) 측정</h2><p>SOD 유사활성은 Marklund와 Marklund의 방법에 따라 활성 산소종을 과산화수소 \( \left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \)로 전환시키는 반응을 촉매하는 pyrogallol의 생성량을 측정하여 나타내었다. 시료를 농도별로 희석하여,\( 10 \mu 1 \) 씩 96 well plate에 첨가한 후, Tris- HCl Buffer (50 mM Tris aminomethane, \( 10 \mathrm{mM} \) EDTA, pH 8.0) \( 150 \mu 1 \) 와\( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 10 \mu 1 \을 첨가하여, 실온에서 10분간 반응시키고, \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} 50 \mu \mathrm{l} \)을 첨가하여 반응을 정지시킨 후 ELISA reader를 사용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도 차이를 백분율(\%)로 나타내었다.</p><p>\( \operatorname{SODA}(\%)=\left(1-\frac{A}{B}\right) \times 100 \)</p><p>\( \mathrm{A} \) : 시료 첨가구의 흡광도, \( \mathrm{B} \) : 시료 무첨가구의 흡광도</p>