정상세포주와 각 암세포주에 발효 및 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도 처리 후 생육과 행태변화를 관찰하였다. 정상세포주는 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도 처리구에서 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 보였다. 대장암세포주는 각각의 농도 처리구에서 가장 낮은 세포 생육도가 나타났으며, 자궁경부암세포주는 \( 0.5 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{ml} \) 농도 처리구에서 세포 생육 저해에 영향이 미미했고, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 각각의 농도 처리구에서 \( 27 \% \) 저해 효과를 보였다. 다음으로 유방암세포주의 경우 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 20 \% \), \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 첨가에서 약 \( 40 \% \)로 증식 억제되었으며, 위암세포주는 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서 증식억제 효과는 미비했고, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 처리구에서 발효 차가버섯 추출물 \( 37 \% \), 비발효 차가버섯 추출물 \(53\%\)로 세포증식이 억제 되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1><h2>정상세포주의 생육 및 형태변화</h2><p>발효 및 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리하여 위상차 현미경을 이용하여 NIH3T3 세포의 형태변화를 Fig. 1에 나타내었다. 각 시료를 처리하지 않는 대조군의 세포는 군집을 형성하며 자랐고, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가 농도에서도 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었고, 특이적인 변화는 관찰되지 않았다. 이전의 실험에서도 차가버섯 조성물의 추출물을 \( 1.6 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 첨가하였을 때 NIH3T3 세포가 \( 80 \% \)의 생존율을 보여 가장 적절한 항종양 활성 농도로 설정한 바 있다.</p><h2>대장암세포주의 생육 및 형태변화</h2><p>최근의 조사에서 우리나라의 경우 식생활이 서구화 되어감에 따라 대장암이 성인 남녀 모두에서 많이 발생되고 있는 점을 감안하여 인체 유래 대장암 세포주 HCT-15를 선택하여 발효 차가버섯의 항종양 효과를 검토하였다. 발효 및 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 대장암세 포주인 HCT-15 세포의 형태변화를 Fig. 3에 나타내었다. 발효 및 비발효 차가버섯 추출물의 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도 처리구에서 각각 가장 낮은 세포 생육도를 나타내어 차가버섯이 대장암세포에 상당히 효과적인 것으로 사료되었다. 특히 발효 차가버섯 추출물에서 대장암 세포주 HCT-15에 대해 강한 증식억제 효과가 있음을 확인한 후 추출물의 낮은 첨가 수준에 따른 증식억제 효과를 검토한 결과 첨가량이 많아질수록 세포증식이 억제되었고, \( 0.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서도 \( 50 \% \) 이상의 효과를 나타내어 차가버섯이 대장암 치료제 개발에 응용해볼 수 있음이 시사되었다.</p><p>Hwang 등은 차가버섯 \( 12.5 \% \) 열수 추출물을 대장암 세포주 HT-29에 1.5, 6 및 \( 12 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가시 배양시간과 첨가 수준이 높아질수록 증식억제 효과가 강하다고 하여 본 실험의 결과와 일치하였다. 한편, Hwang 등은 대장암 세포HT-29와 Caco-2에 표고버섯과 새송이버섯 수용성 추출물을 \( 6 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 또는 \( 12 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 처리하였을 때 유의적인 세포 생육 감소 효과가 있었다고 하였으나, 위암 세포주 SNU484에 대해서는 이들 농도에서 별다른 영향을 미치지 못하였다고 하였다. 또한, 이들 버섯 추출물의 처리시간에 따른 실험에서 72시간 배양까지는 세포수 감소가 없다가 96시간 배양에 표고버섯 추출물 \( 24 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 과 새송이버섯 추출물 \( 48 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가에서 각각 \( 40 \% \)와 \( 50 \% \) 수준으로 감소한 것으로 보고하였다. 본 실험에서 발효 또는 비발효 차가버섯 추출물의 첨가량이 이들 실험에 사용한 농도보다 훨씬 낮음에도 불구하고 효과면에서는 오히려 더 좋은 것으로 나타나 버섯종류 또는 발효와 같은 처리에 의한 영향이 큰 것으로 사료된다.</p><h2>자궁경부암세포주의 생육 및 형태변화</h2><p>발효 및 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 자궁경부암세포주 HeLa의 형태 변화률 Fig. 6에 나타내었다. 발효 또는 비발효 차가버섯 추출물의 \( 0.5 \mathrm{mg} / \) \( \mathrm{ml} \) 농도 처리구에서는 세포 생육 저해에 거의 영향을 미치지 못하였으나, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도 처리구에서 각각 \( 27 \% \) 정도의 저해 효과를 나타내어 본 실험에 사용한 세포주 중에서는 상당히 약한 항종양 효과를 보였다.</p><h2>유방암세포주의 생육 및 형태변화</h2><p>발효 또는 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 유방암세포주 MCF-7의 형태 변화를 Fig. 7에 나타내었다. 최근 국내산 버섯을 소재로 하여 항종양 활성을 가지는 성분 탐색에 관한 다수의 연구에서 대부분 항종양 활성은 버섯 자실체 또는 균사체 배양에서 얻어지는 다당류에 기인하는 것으로 보고 되는 가운데, 차가버섯 추출물 다당류에서도 인간 유방암 세포주 MCF-7에 대하여 비표적 높은 암세포 성장 억제효과가 보고 된 바 있다. 또한, 차가버섯의 inotodiol, lanosterol, ergosterol, butulin과 같은 triterpen류 성분이 유방암 세포주인 MCF-7 및 혈액암 세포 주인 P388에 대해서도 세포독성을 나타낸다고 하였다.본 실험에서도 MCF-7에 대한 차가버섯 추출물의 세포증식 억제효과는 차가버섯의 발효에 의한 영향은 거의 없는 것 으로 나타났다. 그러나 발효 및 비발효 차가버섯 추출물의 첨가농도 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 20 \% \) 정도의 억제는 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 첨가에서 약 \( 40 \% \) 정도로 높게 나타나 첨가량이 많을수록 증식이 억제되었다.</p><h2>위암세포주의 생육 및 형태변화</h2><p>발효 및 비발효 차가버섯 추출물을 \( 0.5 \) 및 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 위암세포주인 AGS 세포의 형태변화를 위상차 현미경을 이용하여 Fig. 8에 나타내었다. 발효 및 비발효 차가버섯 추출물의 첨가농도 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서는 위암세포의 증식억제 효과는 미미하게 나타났으나, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 첨가농도에서는 발효 및 비발효 차가버섯 추출물에서 각각 \( 37 \% \) 및 \(53\%\)의 세포증식 억제 효과가 나타났다. 이러한 결과는 이전의 어성초 첨가 차가버섯 조성물에서도 유사한 효과가 확인된바 있다.</p><p>Hwang 등은 차가버섯 추출물을 \( 1.5 \sim 24 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도별로 첨가하여 48시간 배양한 결과, \( 1.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가구의 세포수가 \( 9.2 \times 10^{5} \)으로 무첨가 대조구의 \( 19.5 \times 10^{5} \)에 비해 유의적으로 감소하였고, 최고 첨가 농도인 \( 320 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 세포가 거의 관찰되지 않았다고 하였다. Ham 등도 위암세포주 AGS의 성장저해 효과에 대해 차가버섯의 저분자물질, 수용성 분획물 및 수용성 다당체의 \( 4 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가 농도에서 각각 57.9, 59.6 및 \( 61.4 \% \)의 세포 성장 억제효과가 있다고 하였다. 이들 분획물은 인체 정상 신장세포 293에 대한 세포 생육을 \( 40 \% \) 정도까지 억제시킨 것으로 나타나 정상세포에 대해서도 상당한 세포독성이 있음을 제시하였다. 그러나 위암 세포주 생육에 미치는 효과는 본 연구 결과와 비슷하였지만 Ham 등이 사용한 차가버섯 추출물 농도는 본실험에서 사용한 농도보다 4배 정도 높았을 뿐만 아니라 정상세포에 대해서도 본 연구결과 보다 더 높은 독성을 나타내었다.</p>