자귀나무 껍질로부터 얻은 saponin인 Julibroside Ⅲ의 함량을 분석용 HPLC로 조사하였고, 그 결과 추출물 내 saponin 함량은 \(16\%\)였다. 해당 추출물의 생식소 억제 효과를 조사하기 위해, 추출물을 사료에 흡착시킨 후 송사리에 공급하는 실험을 실시하였다. 생식소의 성숙 상태는 생식소체중비를 이용하여 측정하였으며, 생식세포의 발달 상태는 이중 염색 방법을 이용하여 평가하였다. 또한 간의 상태는 간체중비를 통해 조사하였고, 적출된 간 조직에 대해 동일한 방법으로 조직학적 분석을 수행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료로부터 조 saponin 분획 분리</h2> <p>자귀나무 (A. julibrissin)의 껍질(합환피)은 현대약업사(Busan, Korea)에서 구입하였으며, 이 약재에 대한 진위여부는 동의대학교 한의과대학에 의뢰하여 확인하였다. 시료를 건조하여 분말로 만든 후 분말 (\(3.0 \mathrm{~kg}\))에 methanol (\(\mathrm{MeOH}\)) 101를 넣어 \( 65^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 동안 3회 반복하여 추출하였다. \( \mathrm{MeOH} \) 추출물로부터 saponin이 함유된 분획물을 얻기 위해 Won et al.이 saponin이 함유된 추출물(\( \mathrm{HaBC} \))을 분리한 것과 동일한 방법으로 \( \mathrm{MeOH} \) 추출물을 \( \mathrm{n}-\mathrm{BuOH} \)로 분획시킨 다음, Diaion HP 20, Silica gel, Sephadex LH-20을 이용하여 saponin이 함유된 분획물인 \( \mathrm{HaBC} \)를 얻었다. \( \mathrm{HaBC} \) 내의 합환피 saponin인 Julibroside Ⅲ의 함량은 분석용 HPLC (Waters 510, \(\mu \)-Bondapak C18 column, \( 216 \mathrm{~nm} \))를 사용하여 조사하였으며, 본 실험에 사용한 추출물, \( \mathrm{HaBC} \) 내의 saponin 함량은 \( 16 \% \)였다.</p> <h2>시험어의 사육</h2> <p>실험에 사용한 송사리(Oryzias latipes)는 미국 Carolina TM Science & Math에서 연중 산란을 하도록 개발된 것으로 화학연구원 안전성평가 연구소로부터 구입하였다. 송사리는 \( 45 \mathrm{~cm}^{\mathrm{L}} \times 36 \mathrm{~cm}^{\mathrm{H}} \times 30 \mathrm{~cm}^{\mathrm{W}} \)의 유리 수조들을 장치하고 실험 종류에 따라 12마리에서 40마리씩 수용하였으며, 암수는 \( 3: 1 \)의 비율로 넣어주었다. 모든 수조는 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)로 일정하게 유지하였다. 광주기는 15L9D로 장일 조건으로 조정하였으며, 먹이는 Tetra사의 사료를 체중의 \(5\%\)가 되도록 하루에 2회 공급하였다.</p> <p>Saponin이 함유된 추출물의 생식소 억제 효과를 조사하기 위해 사료에 추출물을 일정한 양으로 흡착시킨 사료를 송사리에 공급하면서 사육 실험을 하였다.</p> <h2>산란양 조사</h2> <p>송사리의 생식소 성숙 억제 효과를 조사하기 위한 방법으로 송사리의 산란양을 조사하였다. 채란을 원활하게 수행하기 위해 수조 내에 스폰지를 넣어주었으며, 매일 스폰지를 수거하여 산란된 양을 조사하였다.</p> <h2>생식소 성숙 및 조직학적 조사</h2> <p>생식소의 성숙상태는 생식소체중비(GSI: gonadosomatic index=(gonad weight/body weight)\(\times 100 \))를 산출하여 나타냈으며, 적출된 생식소는 Bouin's액에 고정한 후 탈수하여 상법인 paraffin 절편법에 의해 \( 5 \sim 6 \mu \mathrm{m} \) 두께로 연속 절편하여 hansen' hematoxylin과 eosin으로 이중 염색하여 생식세포의 발달 상태를 조사하였다. 간에 대해서는 간체중비(HSI: hep-atosomatic index=(liver weight/body weight)\( \times 100 \))를 산출하였으며, 적출된 간에 대해서도 생식소와 동일한 방법으로 조직학적 조사를 하였다.</p>