브로콜리 새싹을 이용하여 파장 범위의 청색광원에서 조사시키고 각각 적색, LED 광원에서도 진행한다. 항산화 효과 측정에서는 미백 및 주름억제 효과가 있는 tyrosinase, collagenase 및 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg 를 사용한다. 전자공여능 측정을 위해 Blois의 방법을 기반으로 변형하여 측정을 진행한다. 마지막으로 Superoxide dismutase의 유사활성을 측정하기 위해 Marklund의 방법으로 흡광도를 측정한다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 추출</h2> <p>본 실험에 사용된 브로콜리 새싹은 (주)미스바알텍의 식물공장에서 \( 430 \mathrm{~nm} \) 내지 \( 460 \mathrm{~nm} \) 파장 범위의 LED 청색광원을 발아 2일(암조건), 4일 동안 하루에 10시간씩 조사시켰으며, 적색광원은 \( 650 \mathrm{~nm} \) 내지 \( 680 \mathrm{~nm} \) 범위의 LED 광원, 적색+청색 LED광원, 일반 LED광원을 사용하였다. 온도 범위는 \( 21 \sim23^{\circ} \mathrm{C} \), 습도는 \( 45 \sim 60 \% \)로 조절하여 브로콜리 새싹을 재배하였으며, 수분이 많아 신선한 상태로 장기저장이 어려운 문제점이 있어 저온열풍건조기 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 건조한 후 \( 200 \mathrm{mesh} \)로 분쇄하였다. 이렇게 분쇄한 브로콜리 새싹에 에탄올을 10배 가량 넣고 실온에서 24시간 침지하여 3회 반복하여 추출액을 얻었으며, 이 추출액을 여과지를 사용해 여과한 다음 감압 농축기를 사용하여 농축하고 동결건조하여 본 실험의 시료로 사용하였다.</p> <h2>실험 시약</h2> <p>항산화 효과 측정에 사용된 시약인 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), pyrogallol, xanthine oxidase와 미백 및 주름억제 효과 측정에 사용된 시약인 tyrosinase, collagenase 및 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.</p> <h2>전자공여능 측정</h2> <p>전자공여능(EDA: electron donating ability)은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 각 시료용액 \( 120 \mu \mathrm{l} \)에 \( 0.2 \mathrm{mM} \)의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) \( 60 \mu \mathrm{l} \) 넣고 15분간 실온에서 방치한 다음 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>전자공여능 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 무첨가군의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p> <h2>Superoxide dismutase (SOD) 유사활성 측정</h2> <p>SOD 유사활성은 Marklund의 방법에 따라 측정하였다. 각 시료용액 \( 20 \mu \mathrm{l} \)에 tris-\( \mathrm{HCl} \) 완충용액(\(50 \mathrm{mM} \) tris-\( \mathrm{HCl} \) buffer, \( \mathrm{pH} 8.5 \)) \( 130 \mu \mathrm{l} \)와 \( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 20 \mu \mathrm{l} \)를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10분간 반응시킨 후 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료용액의 첨가 군과 무 첨가 군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>SOD 유사활성능 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 무첨가군의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p>