본 논문에서 Apoptosis 유발은 intrinsic pathway와 extrinsic pathway로 구분할 수 있다. 아울러 Bcl-2 family에 속하는 유전자들의 경우 EAHF에 의해 유발되는 apoptosis에 어떤 영향을 주는지를 보면, anti-apoptotic Bcl-2 및 Bcl-\(\mathrm{X_{L}}\)의 발현에는 큰 변화가 나타나지 않았지만 Bax의 경우는 두 세포주 모두에서 EAHF 처리에 의하여 유의적으로 증가함을 관찰했다.
<p>Apoptosis 유발은 mitochondrial pathway라고 알려진 intrinsic pathway 및 death receptor pathway라고 알려진 extrinsic pathway로 크게 구분할 수 있는데, extrinsic pathway의 경우는 death receptor들의 상호작용에 의하여 조절되며 caspase-8은 이 과정의 중요한 initiator caspase로 작용한다. Apo-2 ligand로 알려진 TRAIL은 두 가지 death domain-containing agonistic receptor인 DR4 및 DR5와 결합함으로서 여러 종류의 암세포에서 apoptosis를 유발하는 것으로 알려져 있다. 하지만 osteoprotegerin, DcR1 (TRAIL-R3) 및 DcR2 (TRAIL-R4)와 같은 세 종류의 decoy receptor와 결합을 하게 되면 TRAIL signaling이 억제된다. 한편 tumor necrosis factor (TNF) receptor superfamily에 속하는 Fas(CD95/Apo-1)에 FasL(CD95L) 또는 agonistic anti-Fas 항체가 결합하면 Fas clustering, Fas-associated death domain protein(FADD) 및 procaspase- 8 이 death-inducing signaling complex(DISC)를 형성하게 되어 caspase-8의 활성화에 의한 caspases cascade에 의하여 apoptosis를 유발하게 된다. 따라서 EAHF 처리에 의한 apoptosis 유발에 death receptor에 속하는 유전자들이 관여하는지를 확인하기 위하여 death receptor와 연관성이 매우 높은 몇 가지 유전자들의 발현 변화를 RT-PCR 및 Western blot analysis 방법으로 조사하였다. 그 결과 MDA-MB-231 및 MCF-7 세포 모두에서 death receptor에 속하는 여러 유전자의 발현에는 유의적인 변화가 나타나지 않았다. 이는 EAHF의 처리에 의한 apoptosis 유발에 있어서 최소한 Fas, FasL, TRAIL, DR4 및 DR5 등이 관여하지 않는다는 것을 의미하며, mitochondrial pathway의 관련 가능성이 높음을 보여주는 것이다.</p><p>한편 Bcl-2 family에 속하는 단백질들은 네 가지의 Bcl homology (BH) domains (BH1-BH4) 중 최소한 한 개의 domain을 포함하고 있으며, 미토콘드리아 기능의 보존과 미토콘드리아에 의해 유도되는 apoptosis를 조절하는 중요한 조절자이다. 이 단백질들은 Bcl-2 및 Bcl-\(\mathrm{X_{L}}\)과 같이 apoptosis를 억제하는 anti-apoptotic 인자와 Bax, Bad 및 Bid와 같이 apoptosis를 유발하는 pro-apoptotic 인자로 구성되어 있다. 이러한 anti-apoptotic 및 pro-apoptotic member들 사이의 비율에 의하여 생리적 및 병리적인 조건 하에서 세포의 생존 및 죽음이 결정되는데, 이 member들 간의 균형이 깨어지게 되면 mitochondria로부터 cytosol로 cytochrome c가 방출되어 cysteine-related proteases인 caspases, 종양억제 유전자인 p53, DNA의 단편화와 연관된 endonuclease 등의 활성을 조절하여 apoptosis가 유발되는 것으로 알려져 있다. 이러한 Bcl-2 family에 속하는 유전자들이 EAHF에 의해 유발되는 apoptosis에 있어서 어떠한 영향을 미치는지를 확인한 결과, anti-apoptotic Bcl-2 및 Bcl-\(\mathrm{X_{L}}\)의 발현에는 큰 변화가 나타나지 않았지만 대표적인 pro-apoptotic member인 Bax의 경우는 두 세포주 모두에서 EAHF 처리에 의하여 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다. 특히 apoptosis가 강하게 나타났던 MDA-MB-231 세포에서 Bax의 발현 증가가 더욱 높게 나타났으므로 EAHF 처리에 의한 apoptosis 유발에 있어서 pro-apoptotic Bax의 증가가 중요한 요인으로 작용하는 것으로 추정된다.</p>