향진균 물질의 생산에 대한 연구를 위해 배양온도는 24,30,37,45\(^\circ \mathrm{C}\)로 PH는 3.0~10.0으로 배양했으며 물질의 생산에 대한 탄소원 및 질소원의 영향을 분석하기 위해 각각 기본배지에 다양한 탄소원과 질소원을 1.0% 첨가하여 높은 향진균 활성을 나타낸 pH를 조정후 사용했고 24시간 마다 향진균 활성을 조사했다. 물질의 활성을 검사하기 위해 원심분리를 이용하여 회수했고 조사를 위해 대조구에 동량의 pH8.0를 첨가해 연구해 조사한 작불 병원성 곰팡이를 찾아냈다.
<h2>항진균 물질의 생산에 대한 배양온도 및 pH의 영향</h2> <p>배양온도의 변화에 따른 영향을 조사하기 위하여 앞에서 조사된 기본배지에 전배양한 선발균을 접종한 후 24,30,37, 그리고 45℃에서 180rpm으로 24시간 배양하여 균의 생육 및 항진균 활성을 조사하였다.</p> <p>초기 pH의 변화에 따른 영향을 조사하기 위하여 기본배지의 pH를 3.0~10.0으로 각각 조정하여 동일한 방법으로 배양하여 조사하였다.</p> <h2>항진균 물질의 생산에 대한 탄소원 및 질소원의 영향</h2> <p>탄소원의 첨가에 따른 항진균 물질의 생산에 대한 영향을 조사하기 위하여 arabinose, fructose, glucose, glycerol, lac-tose, maltose, mannitol, soluble starch, sorbitol, 그리고 su-crose를 기본배지에 각각 1.0%씩 첨가하고 가장 높은 항진균 활성을 나타낸 pH로 조정한 후 사용하였다.</p> <p>질소원의 영향을 조사하기 위하여 앞에서 조사된 탄소원 1.0%를 기본배지에 첨가한 후, 질소원으로 ammonium chloride, ammonium phosphate, ammonium sulfate, beef extract, bactopeptone, bactotryptone, corn steep liquor(CSL), malt extract, polypeptone, urea, 그리고 yeast extract를 각각 1.0%씩 첨가하고 pH를 조정하여 동일한 방법으로 조사하였다.</p> <h2>항진균 물질생산에 미치는 배양시간의 영향</h2> <p>24 72시간동안 선별한 균주를 배양한 후, 24 시간마다 배양액을 sampling 하여 배양시간에 따른 항진균 활성을 조사하였다.</p> <h2>조정제한 항진균 물질의 활성</h2> <p>선발된 균주의 항진균 활성을 조사하기 위하여 앞에서 조사되어진 항진균 물질 생산배지 300ml을 제조하고 선발된 균주를 앞에서 조사한 최적조건에서 배양한 후, 10,000rpm, 4℃에서 20분간 원심분리를 하여 상등액을 회수하였다. 항진균 활성을 나타내는 물질율 회수하기 위하여 ammonium sulfate를 0~30%와 30~60% 농도로 첨가한 후, 4℃에서 12시간 정치하면서 항진균 물질을 침전시켜 4℃에서 10,000rpm, 20분간 원심분리하여 회수하였다. 회수한 물질을 소량 의 100 mM Tris-HCl buffer pH 8.0로 현탁하고 4℃에서 24시간 동안 투석하였다. C. gloeosporioides의 포자현탁액 \( \left (5.52 \times 10 ^ { 6 } \right . \) spores/ml)을 50ml의 PDB에 접종하고 동량의 회수한 물질을 각각 첨가하여 항진균 활성을 조사하였으며 대조구에는 동량의 Tris-HCl buffer (pH 8.0)를 첨가하였다.</p> <p>다양한 작물병원성 곰팡이를 대상으로 하여 선발된 균이 나타내는 항진균 활성을 조사하였다. 항진균 활성을 조사하기 위하여 앞의 실험과 동일조건으로 200ml 배양한 후, 배양액을 원심분리 하여 균체를 제거하고 상등액에 2 배 vol-ume의 butanol을 첨가하여 항진균 물질을 용매충으로 이행시키고 용매를 회수하고 50℃ 이하에서 감압농축 한 후, 항진균 활성을 조사하였다. 조사한 작물 병원성 곰팡이는 토마토 시들음병을 야기하는 Fusarium oxysporum KACC 40037, 마른썩음병을 야기하는 F. oxysporum KACC 40052, 벼 잎집무늬마름병을 야기하는 Rhizoctonia solani AG-1(IA) KACC 40101, 참외 줄기썩음병을 야기하는 R.solani AG-4 KACC 40142, 사과나무 역병을 야기하는 Phytophthora camvibora KACC 40160, 토마토에 질병을 야기하는 Fusarium oxy-sporum KACC 40537, 장미 잿빛곰팡이병을 야기하는 Botrytis cinerea KACC 40573, 참외 탄저병을 야기하는 Colletotrichum orbiculare KACC 40808, 수박 덩굴쪼김병을 야기하는 F. oxysporum KACC 40902, 수박에 질병을 야기하는 Monosporascus cannonballus KACC 40940, 잠두 붉은점무늬병을 야기하는 Botrytis fabae KACC 40962, 보리에 질병을 야기하는 Fusarium graminearum KACC 41040, 그리고 Botrytis aclada KACC 41297 등을 사용하였다.</p>