BCNU 1030의 16S 리보좀 RNA 염기서열을 분석해보면 S. costaricanus, S. murinus 등과 \(99\%\) 비슷하고, 계통학적으로는 S. CO-staricanus의 subcluster에 속했다. MRSA, 그람 양성세균 및 그람 음성세균에 대한 BCNU 1030의 항균 활성을 조사한 결과 우수한 생육억제환이 나타났다. DCM 추출물은 MRSA 균주 저농도 생육을 저해하였으며 B. subtilis M. luteus에서도 특정 농도에서는 항균이 활성되는 효과를 보였다.
<h2>16S 리보좀 RNA 염기서열 분석</h2> <p>분리균주 BCNU 1030의 정확한 동정을 위하여 16S 리보좀 RNA 염기서열을 분석한 결과 S. costaricanus, S. murinus 등과 \( 99 \% \)상동성이 있음이 확인되었으며, 계통학적으로는 S. CO-staricanus의 subcluster에 속하는 균주로 확인되었다.</p> <h2>항균활성 측정 및 최적 생산조건 검토</h2> <p>MRSA, 그람 양성세균 및 그람 음성세균을 대상으로 BCNU 1030의 항균 활성을 조사한 결과, MRSA CCARM 3089, CCARM 3090, CCARM 3091, CCARM 3095에서 각각14 \( \mathrm { mm } , 16 \mathrm { ~mm } , 16 \mathrm { ~mm } , 18 \mathrm { ~mm } \)의 우수한 생육억제환을 나타내었다. 그람양성 세균인 B. subtilis와 M. luteus에 대해서는 10 \( \mathrm { mm } \)의 생육억제환을 나타내었으며 S. aureus에서는 \( 12 \mathrm { ~mm } \)의 생육억제환을 나타내었다. 그람음성 세균인 P.mirabilis와 P.vulgaris 에서는 \( 8 \mathrm { ~mm } \)의 다소 약한 생육억제환을 나타내었고, E.coli 에서는 생육억제환이 나타나지 않았다. 항균활성 측정 결과, BCNU 1030은 MRSA에 대한 저해활성이 뛰어남을 확인하였기에, MRSA를 대상으로 항균물질의 최적 생산 조건을 조사하기 위해 PDB, ISP, SCB, TSB 등의 배지에서 20일 동안 배양하면서 24시간마다 배양 상등액을 취하여 항균활성을 조사하였다. 그 결과 8일간의 배양액에서부터 MRSA에 대한 저해활성을 확인할 수 있었으며, 16일간 배양하였을 때 ISP 4 배지의 배양 상등액에서 MRSA에 대한 저해활성이 가장 뛰어난 것으로 나타났다. 이를 바탕으로 ISP 4 배지에 pH 및 온도를 달리하여 생산조건을 검토한 결과, pH 8.4, \(28 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10일간 배양하였을 때 MRSA 균에 대해 가장 뛰어난 항균활성을 나타내었다.</p> <h2>최소저해농도 조사</h2> <p>BCNU 1030의 배양 상등액에서 추출한DCM 추출물은 테스트 균주인 MRSA 균주에 대하여 \( 0.78 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 저농도에서 생육을 저해하였으며, 그람양성 세균인 B. subtilis M. luteus에 대해서도 \( 0.39 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 항균활성을 보였다. 그람음성 세균인 P. mirabilis, P. vulgaris 에 대해서는 \( 0.39 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 생육을 저해하였다. Peptide 추출물은 테스트 균인 MRSA 4 종의 균에 대하여 \( 5 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 생육을 저해하였으며, 그람양성 세균인 B. subtilis, M. luteus와 그람음성 세균인 P. mirabilis, P. vulgaris에 대해서 \( 1.25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 저해활성을 보였다. DCM 추출물과 peptide 추출물 모두 MRSA, 그람 양성세균 및 그람 음성세균에 대한해 항균활성을 보였으나 DCM 추출물이 상대적으로 더 우수한 활성을 나타냈다. BCNU 1030의 항균력 측정 시 저해활성이 전혀 없었던 E.coli에 대해서는 추출물 역시 항균활성을 보이지 않았으나, BCNU 1030 균주로 항균활성을 측정한 결과와 달리 두 추출물의 최소저해농도는 MRSA균주 보다 시험균주인 S. aureus, B. subtilis M. luteus, P. mirabilis 및 P. vulgaris 세균에 대하여 저해활성이 더 좋은 것으로 나타났다.</p>