금속 이온 \( \mathrm { Mg } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Mn } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Zn } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Fe } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Cu } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Co } ^ { 2 + } \)의 첨가로 효소 활성이 100%, 100%, 65%, 77%, 77%, 82%, 95%로 증가하였고, EDTA의 첨가로 45%의 활성 저해가 나타났다. 이는 natto, 청국장, 된장에서 분리한 fibrinolytic enzyme의 활성에 대해 금속 이온의 영향을 알 수 있게 한다. 또한, 혈전용해요소는 크게 2가지로 나눌 수 있는데, Plasmin이 혈전을 분해하는 타입과 효소가 직접 혈전을 분해시키는 타입이 있다.
<h2>효소활성에 대한 금속 이온의 영향</h2> <p>금속이온이 첨가되지 않았을 때의 활성을 \( 100 \% \) 로 하여 그 상대적인 활성을 측정하였을 때, \( 1 \mathrm { mM } \) 의 \( \mathrm { Mg } ^ { 2 + } \) 와 \( \mathrm { Mn } ^ { 2 + } \) 에 \( 100 \% \) 활성을 유지 하였으며, \( \mathrm { Zn } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Fe } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Cu } ^ { 2 + } \), \( \mathrm { Co } ^ { 2 + } \) 에 대해서는 각각 \( 65 \%, 77 \%, 77 \%, 82 \%, 95 \% \) 의 활성을 나타내었다. 반면 동일농도의 EDTA에 의해서 \( 45 \% \) 의 활성저해를 보였다. 이러한 사실은 기존의 대두발효식품인 natto와 청국장, 된장에서 분리한 fibrinolytic enzyme이 대부분 ser-ine enzyme인 것인데 반해 본 연구의 B. subtilis BK-17이 생산하는 fibrinolytic enzyme은 metallo enzyme인 것으로 생각된다.</p> <h2>기질에 대한 특이성</h2> <p>혈전용해효소는 fibrin을 분해하는 양상에 따라 2가지로 나눌 수 있다. 그 중 하나는 혈액 중 plasminogen을 active type 인 plasmin으로 변화시켜 plasmin으로 하여금 혈전(fibrin)을 분해하도록 하는 plasminogen activator type과 이와 상관없이 효소자체가 직접 혈전을 분해시키는 direct active type이 있다. 이를 확인하기 위하여 plasminogen-rich fibrin plate와 plasminogen-free fibrin plate를 사용하였다.그 결과 본 정제효소는 plasminogen-rich fibrin plate에서 뿐만 아니라 plasminogen이 제거된 plasminogen-free fibrin plate에서도 비슷한 fibrin 분해 활성을 보였다. 그러므로 본 효소는 plasminogen을 plasmin으로 activation하여 plasmin에 의하여 혈전(fibrin)을 분해하도록 하는 plasmi-nogen activator type이라기 보다는 fibrin에 직접 활성을 가지는 것으로 생각된다. Fig. 5에 나타난 것처럼, plasminogen rich plate에서 약 \( 10 \% \) 의 활성이 더 높은 것으로 보아 다소의 plasminogen activator 역할도 할 것으로 사료된다. 첨가적으로 다양한 종류의 기질을 포함한 fibrin plate, red blood agar plate, gelatin plate, skim milk plate, casein plate등을 이용한 효소활성을 검토한 결과, Fig. 6 에 나타난 것과 같이 본 정제 효소는 fibrin plate에서만 clear zone이 형성되었지만, 나머지 plate에서는 전혀 활성을 보이지 않았다. 따라서 BK는 Fig. 6에 나타난 것처럼 fibrin을 특이적으로 분해함이 밝혀졌다.</p>