본 연구에서는 주형으로 사용하는 cDNA를 합성하고 희석한 후에 capsaicin을 다른 농도로 처리하였다. 그 결과 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 와 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 의 capsaicin 처리 시험군에서 대조군에 비해 생존율이 각각 \( 76. 8 \% \) 와 \( 13. 6 \% \) 로 유의미하게 감소하였다. 또한, capsaicin 처리가 유전자 발현에 미치는 영향을 분석한 결과, 2배 이상 증가된 유전자는 103개, 감소된 유전자는 153개로 확인되었다.
<p>주형으로 사용하는 cDNA는 RT-PCR시 수행한 과정과 같은방법으로 합성하고, 합성된 cDNA에 DNase-free water \( 180 \mu \mathrm { l } \)를 첨가하여 희석한 후 사용하였다. PCR mixture는 Power SYBR \( ^ {\circledR } \) Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, USA)를 사용하였으며, 반응 조건은 첫 번째 step으로 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2 분, \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 반응시키고, 두 번째 step으로 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15초, \( 54 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 초, \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 33초의 cycle을 40 번 반복하여 수행하였다. 결과는 ABI Prism 7500 SDS software program(Applied Biosystems, USA)을 이용하여 분석, 정량하였으며 분석법으로는 comparative Ct (threshold cycle) method를 이 용하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Capsaicin 처리에 의한 대장암 세포주 생존율 감소</h2> <p>파이토케미칼 capsaicin이 대장암 세포주 HCT116의 생존율에 미치는 영향을 확인하기 위하여 다양한 농도 \( (0,25,50 \), \( 100 \mu \mathrm { M } ) \) 의 capsaicin을 처리한 후, 세포 생존율 연구를 수행하였다. 그 결과, \( 25 \mu \mathrm { M } \) 와 \( 50 \mu \mathrm { M } \) 의 capsaicin 처리군에서는 대조군과 비교해 보았을 때 큰 변화를 보이지 않은 반면, \( 100 \mu \mathrm { M } \) 와 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 의 capsaicin을 처리한 경우 각각 \( 76.8 \% \) 와 \( 13.6 \% \) 의 생존율을 보여주었다. 이러한 세포생존율에 근거하여 대조군에 비해 \( 76.8 \% \) 의 생존율을 보여주는 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 의 농도 를 선정하여 실험을 진행하였다.</p> <h2>Oligo DNA microarray를 이용한 유전체 전체 수준에서의 유전자 발현 분석</h2> <p>Capsaicin에 의한 차별적으로 발현되는 유전자군을 선별하기 위하여, HCT116 세포주에 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 의 capsaicin을 24 시간동안 처리한 후, oligo DNA microarray 실험을 수행하였다.Capsaicin의 처리에 의해 발현되는 유전자 분석 결과, 2 배 이상 발현이 증가된 유전자는 103 개, 2배 이상 발현이 감소되는 유전자는 153개로 선별되었다(data not shown). 발현이 2배 이상 증가되는 유전자 중 일부를 Table 1에 나타내었다. 발현이 2 배 이상 증가되는 유전자 중 4 개의 유전자NAG1, DDIT3, GADD45A, PCK2 를 선택하여 실험을 진행하였다.</p>