본연구에서 원형질체의 형성율은 효모마다 세포벽의 구성성분이 약간씩 다른 것을 확인할 수 있는데 이는 효모의 원형질체 효묘의 종류에 따라 달라지기 때문이다. 균주의 원형질체 융합율은 Kim이 보고한 것보다 높은 원형질체 융합율은 보였다. 원형질체 융합과정에서 얻은 융합체를 모균주와 비교하여 알코올 생성능이 가장 높은 FA 776을 선발하였고 FA 776은 유전적으로 안정적이었다. 두 효모의 융합 유무를 확인하기 위해서 FA 776와 융합과정에 사용된 효모의 DNA함량을 구하였다.
<h2>원형질체 형성</h2> <p>영양요구성 marker를 보유한 선발균주의 원형질체 형성율은 증류수 같은 삼투압이 매우 낮은 용액내에서는 원형질체가 용균된다는 사실에 근거한 Yamamura의 방법을 사용 하여 계산하였다. Kim은 Saccharomyces cerevisiae 균주의 원형질체 형성율을 \( 95 \% \)로 보고하였는데 본 실험에서는 Saccharomyces diastaicus KCTC 1804 균주의 원형질체 형성율은 \(97.7 \% \)로 원형질체 형성율이 높았고 Saccharomyces cerevisiae KH-12 균주의 원형질체 형성율은 \( 90.5 \% \)로 확인되었다. Calleja는 효모마다 원형질체 형성율이 다른 이유를 일반적으로 양조 효모의 세포은 glucan \( 40 \% \), mannan \( 40 \% \), protein \( 12 \% \), lipid \( 6 \% \) 그리고 chitin과 phosphate로 구성되어 있는뎨 효모마다 세포벽의 구성성분이 약간씩 달라지기 때문이라고 보고하였다.</p> <h2>원형질체 융합</h2> <p>원형질체 융합율은 삼투안정제가 포함된 SD배지에서 생성된 colony 수를 삼투안정제가 포함된 YPD 배지에서 생성된 colony 수와의 비율로 계산하였고, 그 결과 원형질체 융합율은 \( 1.79 \times 10 ^ { -4 } \)로 관찰되었다. 이 결과는 Kim이 보고한 \( 6 \times 10 ^ { -6 } \)보다 더 높은 원형질체 융합율을 나타내었다.</p> <p>원형질체 융합과정을 통해 총 1,000 주의 융합체를 획득하였고, 흭득한 융합체의 전분 분해능을 모균주인 Saccharomyces diastaticus KCTC 1804 균주와 비교하여 전분분해능이 모균주와 비슷하거나 흑은 높아진 효모 10주를 1차 선발하였다(data not shown). 1차 선발된 융합체 10주의 알코올 발효능을 각각의 모균주인 Saccharomyces diastaticus KCTC 1804 균주, Saccharomyces cerevisiae KOY-1 균주와 비교하여 최종적으로 전분배지에서의 알코올 생성능이 가장 우수한 융합체인 FA 776을 선발하였다.</p> <h2>효모융합체의 유전적 안정성 및 특성</h2> <p>효모 융합체를 YPD 배지에서 2일간 배양한 것을 1세대로 하여 10세대 동안 반복한 뒤, YPD 고체배지와 SD 고체 배지에 각각 도말하여 나타난 colony 수의 비율로써 융합체의 유전적 안정성을 조사한 결과, 선발된 융합체 FA 776은 10세대 계대 배양시 \( 4.64 \% \)의 비율로 revertant로 복귀하여 비교적 유전적 안정성이 유지되는 것으로 사료되었다.</p> <p>효모의 total DNA 함량의 비교를 통해 두 효모간 융합 유무를 관찰하였다. 선발융합체의 colony를 취하여 total DNA 함량을 비교한 결과, Saccharomyces cerevisiae 균주로부터 분리된 단수체 효모 KH-12는 \( 26.56 \mathrm { fg } / \mathrm { cell } \), Saccharomyces diastaticus KCTC 1804 균주는 \( 25.40 \mathrm { fg } / \) cell의 DNA 함량을 나타내었다. 이들을 사용해서 얻어진 융합체인 FA 776의 DNA 함량은 \( 42.67 \mathrm { fg } / \) cell로 나타났으며 이를 통하여 세포 융합의 유무를 관찰하였다.</p>