본 연구에서는 젖산균의 염색체 DNA를 MRS 액체배지에서 배양하여 추출하였고, 16S rRNA 유전자의 증폭을 위해 특정 프라이머를 사용하였다. 자일로스 농도가 50 g/l인 MRS 배지에 젖산균을 접종하여 젖산 생산 능력을 평가하였으며, 선별된 균주들을 한백 과학 진탕배양기를 사용해 30℃에서 200 rpm으로 24 시간 배양하였다. 호기적과 혐기적 배양 모두 진행하였고, 자일로스 농도에 따른 젖산생산량을 측정하였다.
<p>분리한 젖산균의 염색체 DNA는 \( 5 \mathrm { ml } \) 의 MRS 액체배지에서 48 시간 배양한 후 Park 등의 방법으로 추출하였다. 분리한 젖산균의 16S rRNA 유전자의 증폭은 518F(5'-CCAGCAGCCGCGGTAATACG)와 800R(5'-TACCAGGGTATCTAATCC) 프라이머를 이용하였다. 증폭한 16S rRNA 유전자의 염기서열을 확보한 후 National Center for Biotechnology Information (NCBI, USA)의 BLAST를 사용하여 타 균주와의 유전자 단편의 상동성을 근거로 동정하였다.</p> <p>고농도의 자일로즈에서 젖산생산능이 우수한 균주를 선별하기 위하여 분리한 젖산균을 자일로스가 \( 50 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 로 함유된 \( 5 \mathrm { ml } \) 의 MRS배지에 접종하고 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 96 시간 동안 배양한 후, 젖산생산능을 평가하였다. 젖산생산능이 우수하였던 8점의 젖산균을 선발하여 이후의 실험을 진행하였다.</p> <p>자일로스가 \( 50 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 농도로 첨가된 \( 5 \mathrm { ml } \) 의 MRS 배지에 1 차 선별한 8 점의 균주를 접종하고, 진탕배양기(Hanbaek Scientific Co., Korea)를 이용하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 200 \mathrm { rpm } \) 으로 24 시간 동안 전배양하였다. 흡광광도계(GE Healthcare, Sweden)를 사용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하고 원심분리하여 적정량의 세포를 회수한 후 멸균 증류수로 3 회 세척하고 \( 50 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 의 자일로스가 첨가된 \( 100 \mathrm { ml } \) 의 MRS 배지에 초기 흡광도가 0.1 이 되도록 접종하였다. 호기적 배양은 baffled flask(DURAN, Germany)를 사용하여 \( 200 \mathrm { rpm } \) 으로 교반하였고, 혐기적 배양은 oxyrase (bioWORLD, USA)를 \( 2 \% \)( \( \mathrm { v } / \mathrm { v } \)) 의 농도로 첨가된 배지를 screw cap baffled flask(SPL, Korea)에 넣어 밀봉한 후 \( 50 \mathrm { rpm } \) 으로 교반하였다.</p> <p>최적 배양 온도를 설정하기 위하여 \( 25,30,37,42 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 50 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 의 자일로스가 첨가된 \( 200 \mathrm { ml } \) 의 MRS 배지를 사용하여 Lactobacillus buchneri를 혐기적으로 배양하고 젖산생산량을 측정하였다. 자일로스 농도에 따른 젖산생산량을 비교하기 위하여 자일로스가 각각 \( 20,50,100,150 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 의 농도로 첨가된 MRS 배지를 사용하였으며 일정 시간마다 배양액을 회수하여 균체농도 및 젖산 농도를 측정하였다.</p>