1차 생화학 시험에서 Listeria 속에 대해 \( \beta \)-Hemolysis 시험을 통해 생성되는 \( \beta \) 용혈소 여부에 따라 균주를 구별하였다. \( \beta \)-Hemolysis시험에서 \( \beta \) 용혈이 생기고, 생화학 시험에서 균주에 대해서로 분류하고 정의한 것에 대해서 CAMP test를 실시하여 용혈 상승작용을 관찰하고, 실험방법에 따라 분리된 L.monocytogenes 균주를 균 현탁액으로 만든 후 혈청형을 분류시켰다.
<h2>\( \beta \)-Hemolysis test</h2><p>1차 생화학 시험에서 Listeria 속으로 추정되는 균주에 대하여 상품화된 \(5\%\) BAP상에서 \( \beta \)-Hemolysis 시험을 통해 \( \beta \) 용혈소 생성여부에 따라 L. monocytogenes와 L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii 등을 구별하였다. Listeria 속으로 추정되는 균주를 \( 0.6 \% \) TSA-YE 평판배지에 계대한 후 1 백금이를 취하여 \( 0.6 \% \) TSB-YE \(9 \mathrm{ml}\)에 접종한 후 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 6시간 배양 후 배양액을 \( 5 \% \) BAP에 획선 도말하여 Sodokawa 등과 같이 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 96시간 혐기배양한 후 Listeria 속의 용혈 유무를 관찰하였다.</p><h2>CAMP test</h2><p>\( \beta \)-Hemolysis시험에서 \( \beta \) 용혈을 나타내고, 생화학 시험에서 L. monocytogenes, L. ivanovii로 동정된 균주의 용혈 상승작용을 관찰하기 위하여 CAMP test를 실시하였다. CAMP 시험용 배지로는 Tryptic Soy Agar (이하 TSA)와 Columbia Blood Agar base (이하 CBA, Difco Lab.)를 사용하였고, 지표균주로는 S. aureus ATCC 25923 과 R. equi KCTC 9082를 사용하였다. 먼저 \( 100 \mathrm{ml} \)의 CBA를 이용하여 평판배지를 제조 건조시킨 후 \( 46^{\circ} \mathrm{C} \)로 보온한 TSA에 \( 7 \% \)가 되게 적혈구를 혼합하여 기초배지 위에 \( 8 \mathrm{ml} \)를 중층하여 CAMP 시험용 배지를 만들었다. 지표균인 S. aureus ATCC 25923과 R. equi KCTC 9082를 사용 1일 전에 계대하여 활성화시킨 후 \( \beta \)-Hemolysis시험에서 용혈성을 나타낸 분리균주를 지표균에 대해 직각으로 거리 간격을 \( 1 \sim 2 \) \( \mathrm{mm} \) 떨어지게 각각 접종하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양하여 용혈상승작용을 관찰하였다.</p><h2>혈청형 시험</h2><p>L. monocytogenes로 밝혀진 분리균에 대하여 Lovett 등의 실험방법에 따라 \( 0.6 \% \) TSB-YE배지 \( 9 \mathrm{ml} \)에 접종하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(5 \sim 6\)시간 배양하였다. 이후 \( 0.6 \% \) TSA-YE평판 배지에 획선 도말하여 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 약 \(18 \sim 24\)시간 2회 계대배양한 후 FA buffer(Difco Lab.) \( 3 \mathrm{ml} \)가 든 screw 시험관( \(13 \times 100 \mathrm{~mm}) \)에 현탁하여 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온수조에서 1시간 처리한 후, 원심분리기에서 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)으로 3분간 원심 분리시켜 \( 2.2 \mathrm{ml} \)의 원심여액을 제거하고 나머지 부분을 다시 현탁시켰다. Bacto Listeria O antiserum (Difco Lab.) Serotypes 1,4(Poly)와 Serotype 1과 Serotype 4를 멸균된 \(0.85\%\) 생리 식염수로 각각 \(1: 20\)으로 희석하였다. 균 현탁액을 슬라이드 글라스에 1방울씩 가하고 그 위에 상기 항혈청 1방울을 가해 응집여부에 따라 혈청형을 분류하였다.</p><p>분리 검출된 Listeria 속에 대한 상기이외의 각종 생리학적 생화학적 실험법은 Lovett 등의 방법과 Sodo-kawa 등의 방법에 따라 실시하였다.</p>