실험동물은 BALB/c 마우스를 공급받아 사용하였으며, 이를 대조군 ,온수 훈련군, 냉수 훈련군 세그룹으로 나누어 환경적응 및 수영적응 훈련을 진행하였다. 그 후 일정한 시간에 체중을 측정하였으며, 10주간의 수영 트레이닝 후 림프구에서 분비하는 INF-8의 반응을 보기 위하여 훈련 종료 48시간이 경과한 후 해부를 실시하였다. 실험 결과는 서로 다른 세 그룹간에서 INF-y 및 폐와 비장에서의 결핵균 수를 비교하기 위해 일원분산분석법을 사용하여 결과를 도출하였다.
<h1>연구 방법</h1> <h2>실험동물</h2> <p>본 연구에 사용한 실험동물은 특정병원채 부재동물(SPF; specific pathogen free)로서 평균체중이 \( 26.2 \sim 27.1 \mathrm{g} \) 되는 6주령의 BALB/c 마우스를 공급받아 대조군, 온수 훈련군 및 냉수 훈련군의 세 그룹으로 구분하여 사용하였다. 공급받은 마우스를 의과대학 임상의학 연구센터의 통제된 환경(온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 55 \pm 5 \% \), 조명 12 시간 light-dark cycle, 소음 \( 40 \sim 50 \mathrm{Phon} \)이하)에서 사육 하였다. 실험에 사용된 각 그룹별 신체적 특성과 체중의 변화는<Table 1>에 나타나 있다.</p> <h2>수영 훈련방법</h2> <p>실험군은 대조군과 온수 훈련군 및 냉수 훈련군으로 나누고, 훈련군은 1주간의 환경적응과 1주간의 수영적응 훈련\( (30 \mathrm{min} / 5 \mathrm{day} / \mathrm{week}) \) 을 거친 후 적응여부를 가려 선정하였다. 선정한 마우스는 8주간의 본 훈련을 실시하였고\( (1 \mathrm{hr} / 5 \mathrm{day}/ \mathrm{week}) \), 이 운동 강도는 Sheperd와 Gollnick의 연구를 고려할 때 최대산소 섭취량의 \( 40 \sim 50 \% \) 정도 되는 중간 강도의 운동이라 할 수 있다. 이 때 대조군은 온수 훈련군과 같은 온도의 수조에 상체만 잠기도록 하였다. 수영훈련에 사용한 수조는 용적이 \( 25 \times 18 \mathrm{inch} \), 깊이 \( 10 \mathrm{inch} \)이며, 이 때 온수 훈련군은 실험동물이 수영하기에 적당한 수온인 \( 29 \sim 33^{\circ} \mathrm{C} \)에서 훈련을 실시하도록 하였고, 냉수 훈련군은 \( 21 \sim 23^{\circ} \mathrm{C} \)에서 실시하였다. 체중은 Computingscale (CAS사)을 이용하여 매주 1회 훈련 마지막 날 일정한 시간에 측정하였으며, 체중의 변화는<Fig. 1>에 나타나 있다.</p> <h2>비장세포의 분리 및 INF-y의 측정</h2> <p>BALB/c 마우스를 대상으로 10주간의 수영 트레이닝 후 림프구에서 분비하는 INF-8의 반응을 보기 위하여 훈련 종료 48시간이 경과한 후 해부를 실시하였다. 우선 대조군과 수영 훈련군을 \( \mathrm{CO}_{2} \) gas로 마취 시킨 후 복부 대정맥에서 전혈 채혈을 실시하였고, 무균 처리된 해부 도구를 가지고 비장을 적출한 후 무게를 측정하였으며, 이것을 RPMI 1640 \( (2 \mathrm{mM} \) L-glutamine, \( 2.2 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) sodium bicarbonate, \( 100 \mathrm{units}/ \mathrm{ml} \) penicillin, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) streptomycine, 및 \( 2 \mathrm{mM} \) HEPES buffer)이 담겨진 tissue culture dish (Becton Dickinson, USA)에서 멸균된 두장의 micro slides (frosted end)로 가볍게 압착하여 비장세포를 유리시키고, ACK lysis buffer를 이용하여, 림프구를 분리하고 \( (5 \mathrm{ml} \) in \( 10 \% \) RPMI\( ) \), trypan blue 염색액(Gibco, USA)으로 염색한 후 cell count를 실시하였다. cell count 후 분리한 림프구는 \( 10 \% \) FCS RPMI 1640 배지에 부유시켰다. 부유된 림프구 \( 100 \mu \mathrm{l}\left(2 \times 10^{5} \mathrm{cells}\right) \) 를 96-well round bottomed tissue culture microplate (Becton Dickinson, USA)에 분주하고, 준비된 림프구에 Thle을 유도하는 culture fil-tration protein (CFP)를 사용하였다. 6일간 배양 후에 배양 상층액을 수거하여 유리된 INF-y의 농도를 측정하였다. INF-y의 농도는 면역학적 방법을 이용한 Sandwitch ELLSA (enzyme-linked immunosorbant assay) 법을 이용하여 측정하였으며(Pharmingen, San Diego), INF-y Opti-EIA kit를 사용하였다.</p> <h2>감염 및 균 카운트(Infection and bacterial enumeration)</h2> <p>동결 보존되어 있는 \( \left(-70^{\circ} \mathrm{C}\right) \) Mycobacterium tuberculosis H37Rv(ATCC 27294)를 꺼내어 녹인 후 대조군과 10주간의 수영 훈련군에게서 각각 Inhalation device (Glas-Col, Terre Haute, Ind.)를 이용하여 각 마우스 당 \( 40 \mathrm{CFU} \) 정도가 들어가도록 감염시켰다(aerosol infection). M. tuberculosis로 감염시킨 3주후 마우스로부터 허파와 비장을 적출하여 7H11배지(Difco, Detroit, MI)에 4주간 배양한 후 집락수(colony)를 조사하였다.</p> <h2>자료처리방법</h2> <p>본 십험의 결과는 SPSS 통계 package (win 10.0)를 이용하여, 기술통계량을 산출하고, 서로 다른 세 그룹간에서 INF-y 및 폐와 비장에서의 결핵균 수를 비교하기 위해 일원분산분석법(one-way ANOVA)을 사용 하였으며, 가설검증의 유의수준(a)은 \( 0.05 \)로 설정하였다.</p>