GA의 정성\(\cdot\)정량 분석은 hydro\(-\)carbon standard를 이용하여 KRI value를 나타냈으며, 각 GA와 \( \left[{ }^{2} \mathrm{H}_{2}\right]\) GA internal standards 3개의 ion mass를 정량적으로 비교하였다. 내생진균의 genomic DNA를 추출하고, PCR 반응을 위하여 ITS1과 ITS4를 사용하여 rDNA-ITS 영역을 증폭하였다. PCR로 증폭된 반응 산물은 \( 1.5 \% \) Agarose gel로 전기영동을 수행하였다.
<h2>GAs의 정량 분석</h2> <p>GC/MS는 5973 Network Mass Selective Detector (Hewlett Packard)가 설치된 것을 사용하였고, GC/MS 데이터의 분석은 HP5970C Chemstation (Hewlett Packard)을 사용하여 분석하였다. 그리고 GA의 정성과 정량 분석은 hydro-carbon standard를 이용하여 KRI value를 나타냈으며, 각 GA와 \( \left[{ }^{2} \mathrm{H}_{2}\right]\) GA internal standards (obtained from Prof. Lewis N. Mander, Australian National University, Canberra, Australia) 3개의 ion mass를 비교하여 정량 분석하였다.</p> <h2>Genomic DNA의 추출과 PCR 반응조건</h2> <p>내생진균의 genomic DNA의 추출을 위하여 DNeasy Plant mini kit (QIAgen, USA)를 사용하여 추출하였다. 추출된 genomic DNA는 PCR 반응을 위하여 universal primer인 ITS1 (5'-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3')과 ITS4 (5'-GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G-3')를 사용하여 rDNA-ITS 영역을 증폭하였다. 그리고 PCR 반응을 위하여 최종농도 \( 10 \mathrm{mM} \) Tris-HCl \((\mathrm{pH} \) 8.5), \( 40 \mathrm{mM} \mathrm{~KCl}, 1.5 \mathrm{mM} \mathrm{~MgCl}_ {2} \), \( 200 \mathrm{nM} \) dNTPs, \( 10 \mathrm{pmol} \) 의 primer 및 \( 0.1\mathrm{unit} \)의 Ex-Taq DNA polymerase (Takara, Japan)를 사용하여 PCR 반웅을 진행하였다. PCR 조건은 predenaturation \( \left(95^{\circ} \mathrm{C}, 1 \mathrm{~min}\right) \), denatura-tion \( \left(95^{\circ} \mathrm{C}, 30 \mathrm{sec}\right) \), annealing \( \left(54^{\circ} \mathrm{C}, 1 \mathrm{~min}\right) \), extension \( \left(72^{\circ} \mathrm{C}, 1\mathrm{~min}\right. \)), total cycles ( 35 cycles) 및 final extension \( \left(72^{\circ} \mathrm{C}, 7\right. \) \( \mathrm{min}) \) 으로 수행하였으며, 증폭된 PCR 반응 산물은 \( 1.5 \% \) Agarose gel을 사용하여 진기영동을 수행하였다. 그리고 전기영동 agarose gel을 ethidium bromide (EtBr)을 사용하여 15분 염색하였고, UV transilluminator에서 벤드를 확인하였다. 그리고 중폭된 단편들은 QIAquick PCR purification kit (Qiagen, Germany)를 사용하여 정제하였고, ABI PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit (PE Biosystems, USA)와 ABI 310 DNA sequencer (Perkin Elmer, New Jersey, USA를 사용하여 염기서열을 결정하였다. 그리고 ClustalX 프로그램으로 다중정렬을 수행하였고, Lasergene 7과 BioEdit 프로그램을 사용하여 염기서열을 정리하였다. 내생진균 계통분석은 MEGA 4.1프로그램 Neighbor-Joining (NJ) 방법을 사용하였고, 처리조건은 Kimura 2-parameter에 따라 분석하였다.</p> <p>염생식물에서 분리한 내생진균의 동정을 위하여 rDNA-ITS 영역의 염기서열을 blastn 프로그램을 이용하여 분석하였고, GenBank database와 비교하여 균류들을 분석하였다.</p>