본 연구에서는 28 품종의 콩을 이용하여 genotype에 따른 식물체 재분화 능력을 검증하였다. pCAMBIA3301을 이용한 형질전환 실험을 수행하였고, 재분화 능력이 뛰어난 '단백콩', '은하콩', 'Jack', 'Peking' 종자를 선택하여 식물체의 아그로박테리움 형질전환을 진행하였다. 이후 여러 단계의 배양 과정을 거친 후 6주 후에 신초신장용 배지로 이동시켰다. 이 과정은 품종에 따른 식물체 재분화 능력을 검증하는 데 사용되었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>식물체</h2> <p>Genotype에 따른 식물체 재분화 능력을 확인하기 위하여 대립종 16 품종, 나물공 5 품종, 유색콩 7 품종 총 28 품종의 콩을 사용하여 식물체 재분화 능력을 검정하였다. 재분화에 이용-된 배지의 조성은 Zhang (2004)의 방법을 이용하였다.</p> <h2>Agrobacterium strain</h2> <p>pCAMBIA3301을 EHA105와 KYRT1에 각각 형질전환하여 비교실험에 이용하였다. Rifampicin \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 과 kanamycin \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 이 첨가된 YEP 고체배지에서 형성된 single 콜로니를 취하여 YEP 액체배지로 옮기고 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 120 \mathrm{rpm} \) 으로 진탕 배양하여 아그로박테리움의 농도를 \( \mathrm{OD}_{600}=0.6 \) 로 조절하여 형질전환에 이용하였다.</p> <h2>자엽 마디를 이용한 콩 형질전환</h2> <p>재분화 능력이 뛰어난 것으로 확인된 '단백콩', '은하콩', 'Jack', 'Peking' 종자를 염소가스법을 이용하여 16 시간 표면 살균 후 \( 3 \% \) sucrose와 \( 0.8 \% \) agar가 첨가된 MS기본배지에 10개씩 치상하였다. 배양 5 일후 발아된 식물체로부터 자엽마디를 분리하여 준비된 아그로박테리움에 30 분간 침지 후 공배양용 배지 (B5, \( 3 \% \) sucrose, \( 20 \mathrm{mM} \) MES, \( 3.3 \mathrm{mM} \) L-Cysteine, \( 1.67 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \mathrm{BA}, 0.1 \mathrm{mM} \) acetosyringone, \( 0.8 \% \) plant agar, \( \mathrm{pH} \) 5.4)에 옮겼다. 5일간 공배양후에 자엽마디를 신초유도용 배</p> <p>지 (B5, 3\% sucrose, \( 3 \mathrm{mM} \) MES, \( 1.67 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \mathrm{BA}, 250 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) cefotaxime, \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) vancomycin, \( 0.8 \% \) plant agar, phosphinothricin, \( \mathrm{pH} \) 5.7)에 옮겨 2주마다 계대배양을 하고 6 주후 신초신장용 배지 (MS, \( \3 \)% sucrose, \( 3 \mathrm{mM} \) MES, \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \mathrm{GA}, 50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) asparagine, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) zeatin, \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) IAA, \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) cefotaxime, \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) vancomycin, 0.8\% plant agar, phosphinothricin, \( \mathrm{pH} \) 5.7)로 옮겨 계대배양 하였다. 재분화된 식물체는 발근용 배지 (MS, \( 3 \% \) sucrose, \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) NAA, \( 0.8 \% \) plant agar, \( \mathrm{pH} \) 5.7)로 옮겨 뿌리를 발생시키고 이후 토양에서 순화시킨 식물체를 온실로 옮겨 재배하였다.</p>