실험어의 어체중 측정은 3주마다 하였으며 측정 24 시간 전에 절식시킨 후 실험어 전체 무게를 측정하여 증중량을 구하였고 실험어 각각의 전장을 확인한 후 평균을 측정하였으며 간수치 측정을 위해 넙치의 미부정맥에서 채혈한 후 혈청을 분리하고 간수치 측정을 위해 실험에 사용하였다. 넙치의 혈청 라이소자임 측정을 위해서 turbidimetric method를 이용하였으며 백혈구 활성을 위해 넙치의 신장에서 두신을 분리한 후 세포 현탁액을 준비하고 원심분리로 분리된 백혈구의 viability를 확인 한 후에 식세포를 준비하여 고정시키고 2M KOH 용액과 DMSO를 첨가한 각 well에서 흡광도를 측정하였다 .
<h2>성장도조사, 채혈방법 밎 혈액학적 성분 분석</h2> <p>실험어의 어체중 측정은 실험 시작 후 3주마다 측정을 하였으며, 측정 24 시간 전에 절식시킨 후, 각 실험구에서 무작위로 12마리를 선발하여 실험어 전체 무게를 측정하여 증중량을 구하였고, 실험어의 전장은 각각의 개체의 전장을 확인한 후, 평균을 측정하였다. 간수치 측정을 위한 채혈 방법으로는 채혈 24 시간 전부터 절식을 시킨 후, 마취제를 사용하지 않고 각 실험구에서 무작위로 10 마리를 선발한 후, \(1 \mathrm { ml } \) 주사기를 사용하여 넙치의 미부정맥에서 \(1 \mathrm { ml } \) 채혈하였다. 채취된 혈액은 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2 시간 보관 후에 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 원심분리기를 이용하여 \( 3000 \mathrm { rpm } \) 에서 혈청을 분리하였다. 분리된 혈청은 간수치 측정을 위해 실험에 사용하였으며, 남은 시료의 경우 \( -60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 따로 보관하였다. 혈청 중의 성분에 대해서는 9가지 항목을 조사하였는데, Glutamic pyruvic transaminase (GPT), Glutamic oxalacetic transaminase (GOT), Total pro-tein, LDH, Glouse 그리고 TG의 성분 조사는 혈액자동분석기을 이용하며 측정하였다</p> <h2>혈청 라이소자임 활성 조사</h2> <p>넙치의 혈청 라이소자임 측정을 위해서 turbidimetric method를 이용하였다. \(0.066 \mathrm { M } \) Phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } 6.2 \))에 부유시킨 Micrococcus lysodeikticus ( \(0.2 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)) 부유액 \( 950 \mu \) 와 미부 혈관에서 채혈한 혈액 유래의 혈청 \( 50 \mu \mathrm { l } \) 를 혼합하여 \( 25 ^ {\circ } { C } \) 에 30 초 와 4분 30초의 흡광도의 변화를 \(530 \mathrm { nm } \)서 측정하여 분당의 0.001 의 홉광도 감소치를 라이소자임의 활성 1단위로 표시하였다.</p> <h2>백혈구 활성</h2> <p>넙치의 신장에서 두신을 분리한 후에 L-15 medium ( \(2 \% \) fetal calf serum (FCS), \(1 \% \) penicillin/streptomycin 및 \(0.2 \% \) heparin)과 함께 nylon mesh 에 통과 시켜서 세포 현탁액을 준비하였다. \(54 \% \) percoll 에 중층 시킨 후, 450 xg 에서 30분간 원심 분리 하였다. 그 후, \(0.1 \% \) tryphan blue 로 분리된 백혈구의 viability 를 확인 한 후에 \( 2 \times 10 ^ { 6 } \) cell/ \( \mathrm { ml } \) 농도로 조정하여 96 well tissue culture plate 에 분주하고 \( 18 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2시간 부착시켜 상징액을 제거한 후 3회 세척하여 식세포를 준비하였다. 식세포가 부차된 well 에 FCS 로 옵소닌화 (opsonin) zymosan 을 nitroblue tetrazolium (NBT) 용액에 현탁시킨 부유액을 100ul 씩 첨가하고 \( 18 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응시킨 다음 \(100 \% \) methanol로 세포를 고정시켰다. 2M KOH 용액 \(120 \mathrm { ul } \)와 dimethyl suphoxide (DMSO) \(140 \mathrm { ul } \) 를 각 well 에 첨가한 후 \(630 \mathrm { nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다 . 2M KOH 와 DMSO 흔합액을 blank 로 사용하였다.</p>