2012년 국순당에서 생산된 고구마 소주 주박을 이용한 실험을 수행했다. 주박은 \( 95 \% \) ethanol에 10배 무게 비율로 잠긴 후, 상온에서 24시간 동안 3번 반복 추출하였다. 추출액은 필터 종이를 통과시킨 후 감압 농축을 통해 분말화 하였다. 주박의 항균 활성은 기존 방법으로 평가하였으며, 대조구로는 ampicillin과 miconazole을 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{disc} \) 농도로 사용하였다. 생육저지환 크기는 육안으로 평가하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험에 사용된 주박은 2012 년 (주)국순당에서 생산된 고구마 소주 주박을 공급받아 사용하였으며, 주박의 ethanol 추출물 제조를 위해서는 주박 시료 무게에 대해 10배의 \( 95 \% \) ethanol (Daejung Chemicals \& Metals, Korea)을 가한 후 상온에서 24시간, 3회 반복 추출하였으며, 추출액은 filter paper (Whatsman No. 2)로 거른 후 감압 농축(Eyela Rotary evaporator N-1000, Tokyo Rikakikai, Japan)하여 분말로 조제하였다. 열수 추출물 제조를 위해서는 주박 시료 무게에 대해 5배의 증류수를 가한 후 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 고온 추출하였으며, 이후 추출액은 상기와 동일한 방법으로 분말로 조제하였다. 조제된 분말시료들은 DMSO에 적당한 농도로 녹여, 항균, 항혈전 활성 및 적혈구 용혈활성 평가에 사용하였다. 사용시약은 시약급 이상으로 Sigma (MO, USA)의 제품을 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 주박 시료는 안동대학교 식품영양학과에서 보관하고 있다(voucher specimen2012-KSD-8).</p> <h2>항균 활성</h2> <p>고구마 소주 주박시료의 항균 활성은 기존의 보고된 방법과 동일하게 평가하였다. 항균 활성평가를 위한 그람 양성세균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Listeriamonocytogenes KACC 10550, Bacillus subtilis KCTC 1924를, 그람 음성세균으로 Escherichia coli KCTC 1682, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186, Proteus vulgaris KCTC 2433, Salmonella Typhimurium KCTC 1926, 진균으로는 Candida albicans KCTC 1940및 Saccharomycescerevisiae IF0 0233를 사용하였다. 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth (Difco, USA)에 각각의 세균을 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 동안 배양한 후, 각 균주를 \( \mathrm{OD}_{600} 0.1 \) 로 조정하여 Nutrient agar (Difco, USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish \( (90 \times 15 \mathrm{~mm} \), Green Cross, Korea)에 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 도말하고, 각각의 시료 \( 5 \mu \mathrm{l} \) 를 멸균 disc-paper (지름 \( 6.5 \mathrm{~mm} \), Whatsman No.2)에 가하여, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균 경우에는 Sabouraud dextrose (Difco, USA)를 이용하여 동일한 방법으로 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 ampicillin과 항진균제인 miconazole (Sigma, MO, USA)을 각각 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{disc} \) 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 \( \mathrm{mm} \) 단위로 측정하였고, 3 회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.</p>