약재 HK, HC, HS, HSC 추출물이 배양한 대뇌세포의 신경가지돌기 길이성장에 미치는 영향을 조사한 결과, HK, HC, HS,HSC를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 축삭의 길이가 각각 증가하였으며, HK의 경우 유의한 증가, 그리고 HC,HS,HSC의 경우 매우 유의한 증가를 보였다. 또한 DIV 3~17에 생성되는 연접후 신경가지돌기가시(dendritic spine)를 관찰하였으며, 이러한 결과를 통해 추출물들이 신경세포의 연접생성을 촉진하는 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
<h3>HK,HC,HS,HSC 이 신경가지돌기의 길이성장에 미치는영향</h3> <p>약재 추출물이 신경가지돌기의 길이성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물이 첨가된 뉴로베이잘 배지에 \( \mathrm { E } _ { 18 } \) 대뇌세포를 배양하고 24 시간 후에 관찰하였다. 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 돌기의 길이가 증가하였는데 통계(현미경 시야 수 \( = 20 \), 세포 수 \( =400 \)내지 600, 4회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 4). HK, HC, HS,HSC를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 축삭의 길이가 각각 \( 133.3 \pm 41,150 \pm 30,158 \pm 37,158 \pm 43 \% \) 로 증가하였으며, HK 의 경우 유의한 \( ( \mathrm { p }<0.05) \) 증가, 그리고HC,HS,HSC 의 경우 매우 유의한 \( ( \mathrm { p }<0.01) \) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포의 초기 축삭의 길이성장을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p> <h3>배양한 대뇌신경세포에서 연접의 발생</h3> <p>연접은 DIV 3에 생성되기 시작하여 DIV 17 에 거의 최고에 도달하며, DIV 7 내지 DIV 10 에 가장 활발히 생성된다. DIV 14 의 신경세포를 PSD95와 synaptophysin (SYN) 항체로 이중 염색하여 관찰하였다(Fig. 5). 연접후세포막 표지단백질인 PSD95(붉은색)와 연접전세포막 표지단백질인 SYN (초록색)은 신경가지돌기를 따라 분포하고 있었으며, 대부분 서로 가까이 접하고 있거나(화살표), 중첩하고 있음(노란색, 화살표머리)을 보여준다. 이는 DIV 14일에 점박이(puncta)로 보이는 \( \mathrm { PSD } 95 \) 의 대부분은 이미 축삭말단과 접촉하여 연접을 생성한 연접후 신경가지돌기가시(dendritic spine)임을 의미한다.</p> <h3>HK,HC,HS,HSC 이 연접생성에 미치는 영향</h3> <p>약재 추출물이 연접생성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 연접이 가장 활발히 생성되는 시기인 DIV 7에 추출물을 첨가 하고 DIV 10에 신경세포를 PSD95 항체로 염색하여 형광현미경으로 관찰하였다(Fig. 6). 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 신경가지돌기의 가시 수가 증가하였는데 통계(현미경 시야 수=20, 세포 수=20 내지 30,4 회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 6B). HK, HC, HS,HSC를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 신경가지돌기가시의 수가 각각 \( 123 \pm 16,140 \pm 17,143 \pm 22,161 \pm 14 \% \) 로 증가 하였으며, 모든 실험군에서 매우 유의한( \( \mathrm { p }<0.01 \), Mann-Whitney U test) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포 의 연접생성을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p>