생물 계면활성제의 성분을 조사하기 위해, 용매추출 및 소량의 methylene chloride:methanol:acetic acid (7: 1: 1 %( v/v ))의 혼합용매를 이용하여 silica gel column 및 TLC plate를 이용하여 전개하였고 Shim과 Park은 생물 계면활성 제 생산능력이 우수한 균주인 Psudomanas sp G314를 분리, 이 균주의 특성을 조사하였고 온도에 대한 안정성, pH에 의한 생육 안정성 등 여러 가지 특성도 뛰어나 오염된 토양이나, 담수 그리고 해수에 적용시켜 환경정화에 사용하기에 적합한 균주 임을 확인되었다.
<h2>생물 계면활성제의 성분조사</h2> <p>생물 계면활성제의 성분을 조사하기 위해, 용매추출을 통하여 얻어진 부분 정제된 시료를 소량의 methylene chlor-ide:methanol:acetic acid \( (7: 1: 1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } )) \)의 혼합용매에 용해시킨 후 동일 용매로 평형화 된 silica gel 60 (Merck Co., mesh \( 230-400) \) column \( (2.5 \mathrm { ~cm } \times 30 \mathrm { ~cm } ) \) 에 흡착시켜 용출시켰다. 그리고 용출된 분획 중 표면장력 활성이 가장 우수한 분획을 silica gel \( \mathrm { G } \mathrm { F } _ { 254 } \) plate (Merck, Germany, \( 20 \mathrm { ~cm } \times 20 \mathrm { ~cm } \) )를 이용하여 thin layer chromatography (TLC) 전개 실험을 실시하였다.</p>이때 전개 용매로는 methylene chloride:meth-anol:acetic acid \( (7: 1: 1 \%) \), methylene chloride:meth-anol:ammonia water (100:10:1), chloroform:methanol: \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) (65:25:4), chloroform:methanol:acetic acid (65:25:4), chloro-form:methanol:5 \( \mathrm { M } \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { OH } \) (65:30:5), hexane:isopropyl alco-hol:methanol (70:35:15), chloroform:aceton:methanol:acetic acid: \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) (7:8:2:2:1) 등 다양한 용매 조합으로 전개를 실시한 후, 분리 상태가 가장 우수하게 나타난 methylene chlor-ide:methanol:acetic acid \( (7: 1: 1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } )) \)의 조건으로 모든 실험 을 실시하였다. 그리고 TLC plate 상에서 전개된 spot은 UV lamp (VL-6, vilber, EEC)로 \( 254 \mathrm { ~nm } \) 와 \( 365 \mathrm { ~nm } \) 의 파장으로 확인하였다. 또 TLC상에서 발견된 spot의 생화학 반응은 당의 발색시약으로는 Bial's reagent (orcinol-ferric chloride), 아미노산의 발색시약으로 ninhydrin, 단백질 발색시약으로 pyr-idine, 그리고 지질의 발색시약으로 rhodamin \( 6 \mathrm { G } \) 를 이용하여 분석하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Psudomonas sp. G314 균주의 특성</h2> <p>Shim과 Park은 유류로 오염된 토양에서 생물 계면활성 제 생산능력이 우수한 균주인 Psudomanas sp. G314를 분리하고 이 균주의 특성을 조사하였다. Shim과 Park이 분리한 Pseudomanas sp. G314가 생성하는 생물 계면활성제의 표면장력은 Pseudomanas fluorescens와 Bacillus licheniformis , Bacillus subtilis가 생산하는 27 \( \mathrm { dyne } / \mathrm { cm } \), Pseudomonas aeruginosa가 생산하는 25-30 \( \mathrm { dyne } / \mathrm { cm } \), Ustilago maydis와 Carynelacterium lepus이 생산하는 \( 30 \mathrm { dyne } / \mathrm { cm } \)보다 우수하고, critical micelle concentration (CMC) 값도 20 \( \mathrm { mg } / \mathrm { l } \)를 나타내, 지금까지 연구된 다른 생물 계면활성제에 비해 표면장력 활성이 매우 우수한 것으로 확인되었다. 또 온도에 대한 안정성, \( \mathrm { pH } \)에 의한 생육 안정성 등 여러 가지 특성도 뛰어나 오염된 토양이나, 담수 그리고 해수에 적용시켜 환경정화에 사용하기에 적합한 균주 임을 확인되었다. 뿐만 아니라 추후 본 실험에 사용된 LB배지 대신 계면활성제 생성을 증가할 수 있는 적합한 배지를 개발한다면 더욱 많은량의 계면활성제를 생성할 수 있을 것으로 생각된다.</p>