추출한 베타-글루칸이 TNF- \( \alpha \) , IL-1 \( \beta \) , IL-6, IL12, 그리고 GM-CSF 등의 면역 조절 물질을 분비하여 면역활성을 조절하는 것이 확인되었다.꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸의 면역활성 효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포인 Raw 264.7 cell을 사용하여 베타-글루칸을 처리하였을 때 TNF-\(\alpha\), IL-1\(\beta\), IL-6, IL12, 그리고 GM-CSF 등의 면역 조절 물질을 분비하여 면역활성을 조절하는 것이 확인되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸의 면역활성 효과 검증</h2> <p>꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸의 면역활성 효과를 검증하기 위해 마우스 대식세포인 Raw 264.7 cell을 사용하여 베타-글루칸을 처리하였을 때 사이토카인인 TNF- \( \alpha \)와 interleukin-1 \( \beta \) IL-1 \( \beta \)자극을 받아 활성화되면 TNF- \( \alpha \) , IL-1 \( \beta \) , IL-6, IL12, 그리고 GM-CSF 등을 분비하여 면역 반응을 조절한다. TNF- \( \alpha \)는 종양괴사인자(Tumor Necrosis Factor)로 알려질 물질로 종양세포를 파괴시키는 사이토카인이며, IL-1 \( \beta \) 는 국소 염증반응을 매개하며 혈관 내피세포에 작용하여 백혈구의 부착을 매개하는 표면 분자의 발현을 증가시키는 사이토카인이다. 따라서 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸이 대식세포를 활성화시켜 이들 사이토카인의 분비에 어떠한 영향을 미치는지 확인하였다. 배양한 Raw 264.7 cell에 여러 가지 농도의 베타-글루칸을 처리한 결과 처리한 베타-글루칸의 농도에 비례하여 TNF- \( \alpha \)의 분비가 증가함을 알 수 있었으며, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 최대의 분비량을 나타냄을 확인하였다. IL-1 \( \beta \)의 분비 또한 처리한 베타-글루칸의 농도에 비례하여 증가하였으며, 200 \( \mathrm {\mu } \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 최대의 분비량을 나타냄을 확인하였다. 이와 유사한 실험으로 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸을 처리 후 TNF- \( \alpha \)와 IL-1 \( \beta \) 유전자의 발현이 증가되는지 RT-PCR을 통해 검증하였는데, \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 베타-글루칸을 처리하였을 때에도 TNF- \( \alpha \)와 IL-1 \( \beta \)의 mRNA가 증가됨을 확인할 수 있었다(Fig. 2). 이러한 결과들을 통해 꽃송이버섯 추출물뿐만 아니라 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸이 뛰어난 앞선 연구들에서 보고된 바와 같이 대식세포의 면역활성을 촉진시킬 수 있음을 확인할 수 있었다 .</p> <h2>꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸에 의한 NF-kB 활성 증가 확인</h2> <p>일반적으로 대식세포가 활성화될 때 외부자극에 의해 염증 반응의 전사인자인 NF-kB 가 활성화되어 우선적으로 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) , IL-6, 그리고 IL-8과 같은 주요 염증촉진 단백질들의 유전자 발현을 조절하는 것으로 알려져 있다. 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸에 의해 TNF- \( \alpha \)와 IL-1 \( \beta \) 의 분비가 증가함을 확인하였으므로, 이후에는 베타-글루칸에 의해 전사인자인 NF-kB가 활성화되는지 확인하고자 하였다. 이를 위해서는 NF-kB 가 활성화되어 핵으로 이동하였을 때 결합하는 DNA서열을 포함하고 있는 NF-kB Luciferase reporter construct를 이용하였는데, 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸을 대식세포인 Raw 264.7 cell에 처리하였을 때 Luciferase activity가 증가됨을 확인함으로 전사인자인 NF-kB가 활성화되었음을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 꽃송이버섯에서 추출한 베타-글루칸은 염증반응의 전사인자인 NF-kB의 활성화를 통해 TNF- \( \alpha \)나 IL-1 \( \beta \) 와 같은 사이토카인의 발현 및 분비를 촉진시킬 수 있음을 의미하는 것이다.</p>