질소원의 종류에 따른 배양액의 항산화 활성은 DPPH법에 의해 전자공여능으로 측정하였고 또한 질소원 농도를 \( 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 4.0 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)로 달리하여서 실험을 수행하였다. 최적 무기염류를 선별하기 위해 배양액을 다시 원심분리하여 얻은 상등액을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. DPPH에 의한 항산화 활성의 비교를 위해 천연 항산화제인 a-tocopherol, BHA, BHT를 \( 0.05 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)으로 조절하였다.
<h2>질소원 종류 및 농도에 따른 배양액의 항산화 활성</h2> <p>질소원의 종류에 따른 배양액의 항산화 활성 측정은 DPPH법에 의한 전자공여능으로 측정하였다. 균주 배양은 기본배지인 Marine broth 배지에 최적탄소원인 maltose를 \( 2.5 \% \) 농도로 첨가한 후, peptone, yeast extract, tryptone, \( \mathrm{NaNO}_{3} \),\( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4},\left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{HPO}_{4} \), malt extract, \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{NO}_{3}, \mathrm{KNO}_{3} \)를 각각 \( 0.5 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)의 농도로 각각 첨가하였으며, 전 배양된 분리균주를 각각 \( 2 \%~(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 접종하여 초기 \(\mathrm{pH}\)를 동일하게 7.8로 조정한 후, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양한 후, \( 600 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도로 생육도를 측정하고, 원심분리하여 얻은 상등액을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 또한 선발된 최적 질소원 농도를 \( 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 4.0 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)로 달리하여 질소원 선발 실험 조건과 같은 방법으로 수행하였다. 이때 Marine broth에 함유된 peptone과 yeast extract는 탄소원 및 다른 질소원과 동일한 실험조건은 만들어주기 위하여 첨가랑을 고려하지 않고 실험을 진행하였다.</p> <h2>무기염류 종류에 따른 배양액의 항산화 활성</h2> <p>최적 무기염류를 선발하기 위하여 Marine broth를 기본 배지로 하여 최적 탄소원과 질소원 실험 결과로 선발된 maltose \( 2.5 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \), yeast extract \( 1.5 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)를 각각 첨가한 후, \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, \mathrm{MgCl}_{2} ,\mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} \)의 농도를 각각 \( 0.05 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)가 되도록 첨가하고 \(\mathrm{pH}\)를 7.8로 조절하였으며, 접종원을 \(2\%\) \((\mathrm{v}/\mathrm{v}\))로 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간동안 배양한 후, \( 600 \mathrm{~nm} \)에서 생육도를 측정하였으며 배양액을 다시 원심 분리하여 얻은 상등액을 가지고 항산화 활성을 측정하였다.</p> <h2>최적배지에서의 항산화 활성 비교</h2> <p>최적 배양 조건 및 영양성분 선발 시험 결과로부터 얻어진 \( 2.5 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) maltose, \( 1.5 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) yeast extract, \( 0.05 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)\( \mathrm{~KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} \)를 \( 50 \mathrm{~ml} \) Marine broth가 첨가된 \( 250 \mathrm{~ml} \) 삼각 플라스크에 첨가한 후, \(\mathrm{pH}\)를 7.8로 조절한 다음, \( 121^{\circ} \mathrm{C}\), 15분간 고압 멸균하였다. 그 후, \( 2 \%~(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)정도의 농도로 균을 최적배지 접종한 다음, \( 25^{\circ} \mathrm{C}\), 24시간 동안 \(200 \mathrm{~rpm}\)에서 배양한 후, 최종적으로 항산화 활성을 측정하였다. 또한 천연 항산화제인 a-tocopherol, 합성 항산화제인 BHA, BHT의 농도를 \( 0.05 \%~(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)로 조절한 후 DPPH법에 의한 방법으로 항산화 활성을 비교하였다.</p>