Palmitic acid에 따른 간세포 사멸 효과는 \(50\mu\mathrm{M}\) 이상의 농도로 MTT assay 및 LDH assay를 통해 확인되었고, pJNK 활성 및 p38 MAPK 활성은 palmitic acid 처리 시 15분 이상에서 시간에 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 그리고 포화 지방산인 palmitic acid를 랫트 간세포에 처리하였을 때 불포화 지방산 보다 포화 지방산이 간세포 사멸에 관련되어 있음을 알 수 있었다.
<h1>결 과</h1> <h2>간세포의 세포 생존율 및 LDH assay에 대한 palmiticacid의 효과</h2> <p>간세포 사멸에 대한 palmitic acid의 효과를 알아보기 위하여, palmitic acid를 농도별 \( (0-500 \mu \mathrm { M } ) \) 로 처리 후 MTT assay를 실시하였다. 실험결과 Fig. 1A에서와 같이 palmitic acid를 50 \( \mu \mathrm { M } \) 이상 처리 시 세포 생존율은 감소하였다. 아울러 세포 손상 지표 효소인 LDH를 분석한 결과에서도 palmitic acid를 \( 50 \mu \mathrm { M } \)이상 처리 시 유의성 있게 증가하였다. 따라서 본 실험에서는 아치사 농도인 palmitic acid \( 100 \mu \mathrm { M } \)을 24시간 처리하였다.</p> <h2>Palmitic acid에 의한 간세포 사멸 효과에 대한 p38 MAPK 및 JNK 활성화의 관련성</h2> <p>Palmitic acid에 의한 간세포 사멸 과정에 p38 MAPK 및 JNK 활성이 관여하는지를 알아보기 위하여 palmitic acid 처리 30 분전에 p38 MAPK 억제제인 SB203580 및 JNK 억제제인 SP600125를 처리하였다. Fig. 2에서 보이듯이 palmitic acid 처리시 증가되었던 간세포 사멸 및 LDH activity는 SB203580 및 SP600125 처리에 의해 선택적으로 차단되는 것으로 나타났다. 세포 사멸 억제 단백질인 Bcl-2는 감소하였고 Bax는 증가를 하였으며 이러한 작용은 SB203580 및 SP600125 처리에 의해 선택적으로 차단되는 것으로 나타났다.</P><P>산화성 스트레스와의 관련성을 알아보기 위하여 산화성 스트레스 지표인 lipid peroxide를 측정한 결과 palmitic acid 처리 시 현저하게 증가하였으며 이러한 작용은 SB203580 및 SP600125 처리에 의해 선택적으로 차단되었으나 PD98059에 의해서는 차단되지 않는 것으로 나타났다. GSH 함량을 측정한 결과 palmitic acid 처리군에서 감소되었며 이러한 작용은 SB203580 및 SP600125 처리에 의해 선택적으로 차단되었으나 PD98059에 의해서는 차단되지 않는 것으로 나타났다.<p>실제로 palmitic acid를 처리 시 p38 MAPK 및 INK 활성이 증가하는지를 확인한 결과 pJNK 활성 및 p38 MAPK 활성은 palmitic acid 처리 시 15분 이상에서 시간 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다.</p> <h1>고 찰</h1> <p>지방간은 간에서 지방대사의 장애로 인해 중성지방이 간에 축적되는 상태이며, 간의 지방산 축적이 지방간을 일으키는 것으로 최근 보고되고 있다. 특히 지방산에 의한 지방간의 병변 변화에는 불포화 지방산이 아닌 포화 지방산에 의한 간세포의 사멸이 관련되는 것으로 여러 문헌에 의해서 알려져 있다. 본 실험에서는 불포화 지방산에 대한 결과는 시도되지 않았지만 포화 지방산인 palmitic acid를 랫트 간세포에 처리하였을 때 간세포의 세포 사멸이 인정되는 것으로 나타나 기존 가설을 뒷받침 해주고 있다.</p>