미나리과에 속하는 돌미나리는 식용 식물로 사용되며 생리활성에 관한 연구가 진행되어 왔다. 돌미나리씨는 항균작용 및 고혈압과 같은 다양한 생리활성에 우수한 작용을 하는 것으로 인정받고 있다. 하지만, 돌미나리씨에 대한 항비만 활성에 대한 연구 보고는 아직 진행되지 않아 본 논문에서는 항비만 효과를 조사해보려고 한다. 이에 시료를 준비하고, 세포증식 속도를 측정하고자 한다.
<p>돌미나리(Oenanthe jawanica)는 미나리과에 속하는 여러해살이 쌍떡잎식물로 본래 계곡의 샘터나 들의 습지 또는 물가에서 야생하고 독특한 향미가 있어 김치, 나물 등 다양한 용도로 식용되고 있다. 또한, 혈압강하, 해열, 진정, 변비예방, 및 하혈 등에 효과가 있고, 항균작용과 고혈압에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 최근 여러 가지 채소류의 메탄올 추출물과 채소 즙에 대한 항돌연변이 효과 및 암세포증식 억제효과를 조사한 연구에서 돌미나리는 우수한 생리활성작용으로 그 효과를 인정받고 있으며, 다른 미나리과 산채 식물에 비하 여 조단백질의 함량과 총페놀의 함량이 높고 육가공품에 대해서 항산화 효과를 지니는 것으로 보고되었다. 이와 같이 돌미나리의 생리활성에 관한 연구보고는 있지만 돌미나리씨의 항비만 활성에 대한 연구는 아직 보고되지 않았다.</p> <p>이에 본 연구는 돌미나리씨 메탄올 추출물의 항비만 효과를 검토하기 위하여 지방세포 내의 세포독성 효과, lipid droplet의 변화, 지방세포 분화 관련 유전자의 단백질 발현 양상의 변화, growth arrest 효과와 세포주기 변화에 대하여 조사하였다.</p> <h2>재료 및 방법</h2> <h3>시료준비</h3> <p>돌미나리씨(Oenanthe jawanica seed) \( 100 \mathrm { ~g } \) 을 분쇄하여 분말화한 후, 메탄올 21 를 첨가하여 \( 75 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3시간 동안 3회 추출하였다. 이 추출액은 Whatman No.2 (Whatman international Ltd., England)에 여과하여 불순물을 제거하였고, 여과액을 Formalin을 완전히 제거한 다음 \( 60 \% \) isopropanol로 세척한 뒤 Oil Red O working solution을 넣고 실온에서 20분간 염색을 하였다. 염색 후 Oil Red \( \mathrm { O } \) working solution을 완전히 제거한 다음 증류수로 4 번 세척하고 현미경으로 세포의 염색 상태를 확인하였으며, 정량적 분석을 위하여 \( 100 \% \) iso-propanol에 지방을 용출시켜 spectrophotometer를 이용하여 \( 500 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h3>세포증식 속도 측정(trypan blue exclusion assay)</h3> <p>OJSE가 mitotic clonal expansion 단계에 어떤 영향을 미치는지 알아보기 위하여 세포증식 속도를 측정하였다. 3T3-L1 지방전구세포를 배양한 후 분화유도제인 MDI가 들어있는 배지로 교환할 때 OJSE를 농도별 \( (50,100,200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \)로 처리하였다. OJSE 처리 후 각각 \( 0,24,48 \) 시간 별로 세포를 회수한 후 trypan blue (Trypan blue solution 0.4 \%, SIGMA-Aldrich, St. Luis, MO, USA)와 세포현탁액을 \( 1: 1 \)로 처리하여 염색하였고 hemocytometer를 이용하여 생세포수를 측정하였다.</p>