퇴비에서 분리한 호기성, 포자형성 세균 중 50여 종류를 순수 분리하고, 이 중 10 종류가 폴리글루탐산(PGA)를 생산하는 것을 확인하였다. 이들 중 가장 PGA 생산성이 높은 균주의 생화학적 특성을 조사하였고, Bacillus sp. 동정 kit과 16s rRNA 염기서열 분석 결과, 이 균주는 Bacillus subtilis로 동정하였으며, 이를 Bacillus subtilis CH-10으로 명명하였다.
<h2>\( \mathrm { PGA } \)의 분자량 측정</h2> <p>\( \mathrm { PGA } \)의 분자량은 \(SDS-PAGE \)와 \(FDNB \)법을 사용하여 측정하였다. 정제한 \( \mathrm { PGA } \)는 \( 10 \% \) \(acrylamide \) 농도의 \(SDS-PAGE \) 상에서 \(high molecular weight marker (Amersham Biosci-ences) \)와 함께 전기영동 하였다. 전기영동 후 \(gel \)은 \(Coomassie Brilliant Blue (R-250) \)로 염색한 후 \( 7 \% \) acetic acid \( 10 \% \) \(methanol \) 용액으로 탈색하였고 \( 0.5 \% \) \(methylene blue \) \( 3 \% \) \(acetic acid \)로 다시 염색한 후 증류수를 사용하여 탈색하였다. \( \mathrm { PGA } \)의 평균 분자량은 \(FDNB \)법에 따라 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>PGA 생산 균주의 분리 및 동정</h2> <p>퇴비에서 호기성, 포자형성 세균을 분리하기 위하여 먼저 퇴비를 가열처리하여 포자를 형성하지 않는 세균들은 제거하였다. 순수 분리된 세균 콜로니 약 \( 50 \) 여 종류는 각각 \(LB medium \)에서 전 배양을 하고 \( \mathrm { PGA } \) 생산용 배지에서 \( 72 \)시간 본 배양하여 \( \mathrm { PGA } \) 생산 정도를 검토하였다. 순수 분리된 \( 50 \)여 종류의 균주 중에서 \( 10 \) 종의 균주만이 PGA생산이 확인되었다. \( \mathrm { PGA } \) 를 생산하는 \( 10 \) 종의 균주 중 가장 생산성이 눞은 균주를 선택하여 생화학적 특성을 검토하였다. 최종 선발된 균주는 그람 양성의 간균이고 운동성이 없으며 내열성의 포자를 형성하였고 그 외 생리 생화학적인 특성은 \(Table 1 \) 과같다. 이 균주를 동정하기 위하여 \(Bacillus sp. \) 동정 \(kit \) (API \( 50 \mathrm { CH } ) \)를 이용하여 분석한 걸과 \(Bacillus subtilis \)로 판명되었다. 또한 \( 16 \mathrm { ~s } \) \(rRNA \) 염기서열을 분석하여 다른 균주와의 상동성을 검색한 결과, \(Bacillus subtilis BFAS \)와 \( 99.4 \% \), \(Bacillus vallismortis \)와 \( 99.1 \% \), \(Bacillus licheniformis \)와 \( 98.8 \% \) 의 상동성을 나타내었다. 따라서 본 최종 선발 균주는 \(Bacillus subtilis \)로 동정하고 \(Bacillus subtilis \) \( \mathrm { CH } -10 \) 로 명명하였다.</p>