Beauveria bassiana Bb08의 살충성 대사산물 생산을 위한 최적 배양조건을 Box-Behnken 실험설계와 반응표면분석을 이용하여 최적화하였다. B. bassiana Bb08 균주는 \( -80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 20 \% \) 글리세롤 용액에 보관하였다. 액체 배양에는 7일간 PDA에서 배양한 mycelia를 사용하였으며, 이를 \( 1 \times 1 \mathrm { ~cm } \) 크기로 잘라 액체배지가 담긴 Erlenmyer flask에 접종하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5일간 배양하였다. 이때, 액체배지로는 potato dextrose broth, corn meal, corn steep powder, rice bran, chitin, starch, soybean flour, dextrose, yeast extract, \( \mathrm { KH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \), \( \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)을 사용하였다.
<p>본 연구에서는 Beauveria bassiana Bb08에서 분비하는 살충성 대사산물을 연구하기 위해 살충성 대사산물을 최대로 생산할 수 있는 배양조건을 Box-Behnken 실험설계로 설계하였으며 반응표면분석을 사용하여 최적화하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>균주</h2> <p>B. bassiana Bb08 균주를 \( 20 \% \) glycerol 용액에 혼합하여 \( -80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하였다. 균배양액의 접종균 준비를 위해 potato dextrose agar(PDA)에서 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , \) 7-10일간 배양 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 저장하여 사용하였다.</p> <h2>목화진딧물 (Aphis gossypii)</h2> <p>실험에 사용된 목화진딧물은 농촌진흥청 작물보호과에서 분양받아 온도 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 광조건 \( 16 \mathrm { ~L } : 8 \mathrm { D } \), 상대습도 \( 70 \% \) 조건으로 사육하였다.</p> <h2>균 액체배양</h2> <p>액체 배양액을 준비하기 위해서는 potato dextrose \( \operatorname { agar } (PDA)에서 7일간 배양한 것을 사용하였으며 mycelia \( \mathrm { plug } \)를 \( 1 \times 1 \mathrm { ~cm } \) 크기로 잘라 \( 100 \mathrm { ml } \) 액체배지를 담은 \( 250 \mathrm { ml } \) Erlenmyer flask에 접종하고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 rotary shaking incubator에서 \( 200 \mathrm { rpm } \)의 속도로 5일간 배양하였다. 여기에서 사용된 액체배지로는 potato dextrose broth (PDB); \(3 \% \) corn meal, \( 2 \% \) corn steep powder, \( 2 \% \) rice bran(CCR); CCR \( + 0.2 \% \) chitin (Sigma, C7170); 3 \% starch, \( 1 \% \) soybean flour, \( 1 \% \) dextrose, \( 0.1 \% \) yeast extract, \( 0.2 \% \) \( \mathrm { KH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } , 0.1 \% \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) (CDS)의 4종류이었다.</p>