뇌조직줌의 과산화지질 함량은 분광광도계를 사용하여 TBA법으로 MDA의 함량을 측정하여 LPO의 함량으로 정량하였다. 또한, 뇌획분으로서의 mitochondria와 microsome에서 OP의 생성량은 carbonyl group의 생성량을 측정하였다. GSHPx의 활성은 Laurence 등의 방법에 따라 340 nm에서 NADPH의 감소를 측정하는 방법으로 뇌조직의 cytosol획분에서 측정하였다.
<h2>산화적 스트레스의 분석</h2> <p>뇌조직줌의 과산화지질의 함량은 저자 등이 사용한 방법에 따라 분광광도계를 사용하여 TBA법으로 말론디알데힝드(malondialdehyde: MDA )의 함량을 측정하여 과산화지질(lipid peroxide : LPO)의 함량으로 정량하였다. 뇌획분으로서 mitochondria와 microsome의 산화단멕질(oxidized protein: OP)의 생성량은 Levine 등의 방법에 따라 carbonyl \( \operatorname{group}(>\mathrm{C}=\mathrm{O}) \) 의 생 성량을 측정하였다. \( 0.1 \mathrm{ml} \) 의 시료에 \( 30 \% \mathrm{TCA} \) (trichloroacetic acid)를 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 혼합, 3,000 rpm 에서 10 분간 원심분리한 후 상층액흔 제거한 뒤 잔사에 10 \( \mathrm{mM} \) DNPH (dinitrophenyl hydrazine) \( 0.5 \mathrm{ml} \) 첨가, 15 분마다 혼합하며 1 시간 동안 실온에 방치 후 \( 3,000 athrm{rpm} \) 에서 10분간 원심분리하였다. 상층핵을 제거한 후 잔사에 ethanol/ ethyl acetate (v/v 1:1) 3.0ml를 침가하여 실온에서 10 분 방치한다. 다시 \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 에서 10 분간 원심분리 후 잔사를 얻은 뒤, \( 6 \mathrm{M} \) guanidine( \( 20 \mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer, \( \mathrm{pH} \) 2.3) \( 1.0 \mathrm{ml} \) 첨가-흔합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 의 항온 수조에서 15 분간 가온한 후, \( 3,500 \mathrm{rpm} \) 에서 10 분간 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이때 carbonyl group의 양은 \( 360 \mathrm{~nm} \) 와 \( 370 \mathrm{~nm} \) 사이에 있는 흡광도의 파장에서 분자흡광계 수 \( (E \) \( =22,000) \) 를 이용하여 계산하였다.</p> <h2>활성산소종 제거효소의 활성 측정</h2> <p>Oyanagui 등의 방법을 일부 수정하여 수퍼옥시드 디스무타아제(superoxide dismutase : SOD)의 활성은 간장의 mitochondria 및 cytosol획분을 인산완충용액( \( \mathrm{pH} \) 8.2)으로 30 베로 희석한 용액 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 에 증류수 \( 0.5 \mathrm{ml}, \mathrm{A} \) 시약 (52.125 \( \mathrm{mg} \) of hydroxylamine \( +102.1 \mathrm{mg} \) of hypoxanthine \( / 250 \mathrm{ml} \) D.W) \( 0.2 \mathrm{ml}, \mathrm{B} \) 시야 ( \( 20 \mathrm{ul} \) of xanthine oxidase \( +0.9939 \) \( \mathrm{mg} \) ethylene diaminetetraacetic acid \( / 26.7 \mathrm{ml} \) phosphate buffer, \( \mathrm{pH} \) 8.2) \( 0.2 \mathrm{ml} \) 를 첨가·혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 40 분간 가온한 후 C시약 \( (300 \mathrm{mg} \) of sulfanilic acid \( + \) N-1-naphthylethyene diamine acid \( / 500 \mathrm{ml} \) of \( 16.7 \% \) acetic acid) \( 2.0 \mathrm{ml} \) 를 첨가.흔합하여 실온에서 20 분간 방치한 후 분광광도계를 사용, \( 550 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 표준검량선에 의해 \( \mathrm{Mn}-\mathrm{SOD} \) 맟 \( \mathrm{Cu} / \mathrm{Zn}-\mathrm{SOD} \) 활성(unit/mg protein)을 측정하였다. 글루타치온 퍼윽시다아제(glutathione peroxidase : GSHPx)의 활성은 Laurence 등의 방법에 따 라 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 \( \mathrm{NADPH} \) 의 감소를 측정하기 위한 방법으로 뇌조직의 cytosol획분에서 측정하였다.</p> <h2>분석결과의 통계처리</h2> <p>본 연구의 모든 실험결과는 통계 처리하여 평균치와 표준편차를 계산하였으며, 각 실험군간의 유의성 검정은 Student's t-test로 실시하였다.</p>