FPLC는 아세틸알긴산의 분해산물을 구별하기 위해 Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies, USA)을 사용하였다.1H-NMR 분석과 FPLC를 이용하여 P. aeruginosa ATCC 39324에서 얻은 아세틸알긴산의 분해산물을 분석하였다. NMR 스펙트럼은 Grasdalen 및 Zhang 등의 방법에 따라 해석하고, 알긴산 고분자를 산가수분해하여 중합도를 20~50으로 낮추어 저분자 아세틸알긴산으로 사용하였다. FPLC는 아세틸알긴산의 분해산물을 구별하기 위해 Agilent 1100 HPLC system을 사용하였다.
<h2>\( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR과 FPLC에 의한 세균 아세틸알긴산의 분해산물의 분석</h2> <p>\( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR 분석을 위한 시료의 준비는 Kam 등의 방법에 따랐다. 동결건조한 시료를 \( \mathrm { D_2O } \)에 녹여 \( 400 \mathrm { Hz } \) \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR spectroscopy (ECX-NMR, JEOL, USA)에서 측정하였으며 NMR 스펙트럼은 Grasdalen 및 Zhang 등의 방법에 따라 해석하였다. 내부 표준물질로 TMSP ( \(0.75 \% \) 3-(trimethyl-silyl)-2,2 ' ,3,3' -tetradeuteropropionic acid, \( \mathrm { Na } \) salt)를 사용하였으며 data 수집은 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 행하였다. 시료의 spinning, proton spectral width, scan 횟수, relaxation delay, proton pulse angle 및 data 수집시간 등은 각각 \( 15 \mathrm { Hz } \), \(-5 \sim15 \mathrm { ppm } \), \(64, 5 \mathrm { s } \), \( 90 ^ {\circ } \) 및 \(4.098 \mathrm { s } \)이었다.</p> <p>P. aeruginosa ATCC 39324 를 배양하여 얻은 아세틸알긴산 은 고분자로서 점성이 너무 높아 NMR 분석결과가 분명하지 않았으므로 알긴산 고분자를 산가수분해하는 표준방법에 따라 산가수분해하여 중합도를 20~50으로 낮추어 저분자 아세틸알긴산으로 사용하였다. 기질 및 효소분해 생성물들은 동결건조한 후 \( \mathrm { D_2 } \mathrm { O } \)에 녹여 다시 동결건조 시키고 소량의 \( \mathrm { D_2 } \mathrm { O } \)에 녹여 NMR 및 FPLC의 시료로 사용하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>P. aeruginosa ATCC 39324로부터 정제한 acetylalginate의 아세틸기 함량 분석</h2> <p>바이오필름을 형성하는대 사용하기 위하여 세포외 다당류들을 생성한다. 해조류 유래 알긴산은 a-L-gluronate와 \( \beta \)-D-mannuronate들로 이루어진 선상다당류인데 비하여 박테리아성 알긴산은 \( \mathrm { O } \)-2, \( \mathrm { O } \)-3번 또는 \( \mathrm { O } \)-2,3 위치에 \( \mathrm { O } \)-아세틸화(- \( \mathrm { OCOCH_3 } \)) 되어있으며 그 중 P. aeruginosa ATCC 39324가 생산하는 아세틸알긴산은 거의 D-mannuronate로만 구성된 아세틸알긴산이다. CF 환자의 가래로부터 분리한 P. aeruginosa ATCC 39324를 ATCC로부터 구입하여 PIA 고체배지에서 배양하고 세균이 분비한 아세틸알긴산을 분리정제하였다. 동결건조한 아세틸알긴산의 아세틸기를 hydroxamic acid 반응으로 분석한 결과 배양조건에 따라 조금씩 차이가 있었으나 28-30 \( \% \)의 아세틸기를 함유하고 있었다. Skjåk-Braek 등은 P. aeruginasa DE27은 \(37 \text { - } 57 \% \), P. mendocina 10541은 \(30 \% \), P. putida 1007은 \( 4 \% \)의 아세틸기를 함유하였으며 A. vinelandii TL은 \( 22 \% \), A. vinelandii IV는 \( 4 \% \)의 아세틸기를 함유하였다고 보고하였다.</p>