장염비브리오와 다른 비브리오 균종을 감별하거나 분리 동정을 진행할 때, 생화학적 성상만으로 수행하는 것에서 많은 문제점이 지적되어 왔었으나, 최근 개발된 유전학적 기법을 사용한 검충 방법은, toxR 유전자 검출로 장염비브리오 동정에 특화된 PCR 방법이다. 본 연구에서는 균의 최종 확정 동정법으로 toxR 유전다 검출을 활용하였고, 실험 결과를 분석했을 때 실험균주 전부 해당 유전자를 보유하고 있었다. 더불어, 장염비브리오 인자를 확인하기 위해 PCR 법과 DNA probe법으로 유전자 검출을 실시하여 결과를 얻었다.
<p>장염비브리오와 다른 비브리오 균종의 감별 및 분리 동정에 있어서 생화학적 성상만으로는 많은 문제점이 지적되어 왔다. 최근에 유전학적 기법을 이용한 장염비브리오의 검출에 Kim 등은 toxR 유전자의 검출로 장염비브리오의 동정에 특이적인 PCR법을 개발하였다. toxR 유전자는 콜레라 독소 오페론의 조절유전자로 처음으로 발견된 이후 대부분의 비브리오 균종에 분포하는 광범위한 조절유전자로서 잘 보존되어 있으며, 장염비브리오에서도 toxR 유전자가 조절유전자로 밝혀졌다. 장염비브리오와 콜레라균에서는 16S rRNA유전자의 상동성은 \( 91 \% \) 이지만 toxR유전자의 경우에는 \(55 \)%이므로 Kim 등은 toxR 유전자를 표적으로 하여 본 균의 정확하고 신속한 검출을 위한 PCR법은 최근에 새로이 개발된 방법이다. 본 연구에서는 실험균주를 생화학적 성상 및 혈청형 시험 이후에 본 균의 최종 확정 동정법으 로 toxR 유전자 검출을 이용하였으며, 그 결과 실험균주 27균주 전부가 toxR 유전자를 보유하고 있었다.</p> <p>처음으로 장염비브리오에서 섬유상 파지 V6의 수평적인 유전자 전달에 대하여 보고된 이후 Chang 등은 Vf12와 Vf33 파지의 유전자 구조 및 비브리오균종에서 분포 및 Kanagawa 현상과의 관련성에 대해 보고하였으며 Nasu 등은 범세계적 유행균주인 장염비브리오 혈청형 O3:K6에서 섬유상 파지 f237을 분리하여 파지 f237이 O3:K6 균주의 감염증과 관련성이 있다고 보고하였다. 파지 f237은 이미 알고 있는 DNA 염기배열과 상동성을 나타내지 않은 독특한 open reading frame인 ORF 8을 갖는 10 open reading frames을 보유하며 O3:K6은 콜레라균의 콜레라 장독소가 갖는 ctxAB 대신에 ORF 8를 보유하는 것이 증명됨에 따라 새롭게 출현한 혈청형 O4:K68 및 O1:KUT 균주가 감염률이 높은 원인으로 ORF 8이 병원성의 역할을 하는 것임을 시사하였다. 즉, ORF 8의 존재를 알아보기 위하여 PCR법을 실시한 결과, 최근에 분리된 O3:K6뿐만 아니라 O4:K68, O1:KUT 분리균주에서도 발견되었으며 혈청형 O4:K68, O1:KUT 균주는 새롭게 나타난 O3:K6으로부터 진화되었음이 분자역학적 연구로 규명되었다. 본 연구에서 ORF 8의 보유 유무를 확인한 결과, 병원성 장염비브리오 O3:K617 균주 전부에서 증폭되었으며 2000년도 분리된 한국 유래 혈청형 O6:K46 4균주와 2002년도 분리된 일본 유래 혈청형 O4:K681 균주에서도 양성을 나타내는 반면, non O3:K6 혈청형 O4:K9, O3:K57, O5:K5, O4:K12, O1:K38 5균주에서는 검출되지 않았다.</p> <p>본 연구에서 장염비브리오의 병원성 인자를 확인하기 위해 PCR법과 DNA probe법의 두 가지 방법으로 tdh, trh1과 trh2 유전자 검출을 실시한 결과, 공시균주 27균주 중에서 26균주 \( (96.3 \%) \)가 tdh 유전자 양성이었으며 1균주 \( (3.7 \%) \) 만이 trh2 유전자 양성이었고 trh2 유전자 양성 균주의 생화학적 성상에서 urease를 생산하는 비전형적인 성상을 나타내었다. 장염비브리오의 urease 생성성에 대하여 1980년 Lam 등의 보고 이후, urease 생성 장염비브리오에 의한 식중독 사례가 보고되어 병원성과의 연관성에 대하여 주목하게 되었고, 이러한 장염비브리오의 비전형적 성상에 대하여 Park 등은 임상 분리균주 TH3996의 염색체로부터 urease 유전자군과 trh 유전자를 갖는 15,754 bp DNA영역을 클론화 함으로써 ure 유전자는 ureD, A, B, C, D, E, F, G와 ureR으로 구성되어 있고 trh 유전자와 근접하고 있으므로 trh 와 urease 생성성과의 관련성을 규명하였다. Suthienkul 등의 보고에서는 임상분리주 중에서 약 \( 8 \% \) 정도가 urease 양성이면서 trh 유전자를 보유하고 있다고 보고하였다. 그리고 urease 생성성과 혈청형과의 연관성은 Kim의 보고에서 2001년도 환자유래 균주 중 urease 양성균주의 혈청형은 O4:K8, O4:KUT, O6:K18로 이들 균주는 모두 trh 양성균주임을 보고하였다. Suzuki 등은 O1:K69, O3:K72, O6:K18 및 O6:K46이 \(100 \%, \) O1:KUT가 \( 91.7 \% \)의 높은 비율로 urease를 생성하였다고 보고하였으며, 특히 urease 생성성과 K항원의 연관성에 대하여 K1, K18, K46이 urease 생성과 관련이 있다고 보고하였다. 이상 여러 연구자의 보고에 의하면 trh 유전자와 urease 생성성과의 상관성은 유전학적으로 확인되었으며 trh 유전자검출은 urease 생성성을 지표로 trh 유전자를 확인하는 것이 임상 검사실에서는 좀더 효율적인 방법으로 사료된다.</p>