제주도에 위치한 (주) 대우 환경에서 합성배지로 복합 배양한 상황버섯과 운지버섯 균사체 액체 배양액을 실험에 사용했다. 이 실험에서는 Potato Dextrose Broth와 YM 배지를 기본 배지로 사용했다. 또한, 실험어로서 제주도에서 육성된 평균 어체중 \( 116 \pm 20 \mathrm { ~g } \), 전장 \( 22 \pm 1. 2 \) \( \mathrm { cm } \) 인 넙치를 콘크리트 수조에서 4500마리씩 무작위 배치하여 실험하였다. 처음에는 유수량을 시간당 7회전으로 조절하였지만, 성장에 따라 시간당 10회전으로 증가시켰다.
<h1>재료 밎 방법</h1> <h2>사용시료</h2> <p>실험에 사용된 버섯균사체 액체 배양액 시료는 제주도내에 소재한 (주) 대우 환경에서 일반 합성배지에서 상에서 액상으로 복합 배양된 상황버섯 (Phellinus linteus)과 운지버섯 (Coriolus versicolor) 균사체 혼합배양액을 사용하였다. 균주보관은 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉장실에 20ml 시험관에 Potato Dextrose Agar (PDA; Difco. Co. USA). YM (Dextrose 1%, Peptone 0.5%, Malt extract 0.3%, Yeast extract 0.3%, Agar 1.8%) Slant로 보관하면서 펄요할 때마다 같은 배지의 8.5 mm 평판배양기에 이식하여 확대 배양을 하였으며, 균사체 직경이 5 cm 이상 자랐을 때 균사체 가장자리에서 Cork borer (5 mm 로 때어서 접종하였다.</p> <h2>플라스크배양 및 Carboy 배양</h2> <p>기본 실험배지는 Potato Dextrose Broth (Difco. Co. USA) 와 YM 배지를 사용하였다. 배지는 300 ml 삼각 flask 에 100 ml 씩 분주하여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 20분 도안 고압 멸균하였다. 공시균주 접종원을 Cork borer \( (5 \mathrm { ~mm } ) \) 로 5 개씩 떼어서 접종하였다. 배양은 \( 120 \mathrm { rpm } \) 의 회전수에 온도는 \( 24 \sim 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 사이에서 회전진탕 배양기에서 균에 따라 7일에서 15일까지 배양하였다. 본 배양의 영양원으로 감귤농축액 첨가 배지를 사용하였는데 대량 배양에 흔히 사용되는 방법인 carboy 배양방법을 이용하였으며, 감귤농축액배지 \( (10 \%) \) 는 21 의 병에 증류수를 첨가한 후, 감귤농축액의 농도 \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 로 배지를 조제하여 \( 121 \mathrm { C } \) 에서 30분간 가압 살균하여 배지를 조제하였으며, 접종원은 균질기로 균진화한 후 \( 2 \% \) 접종비로 무균적으로 접종하였다. \( 25 \pm 1 \mathrm { C } \) 의 항온시설에서 통기량 \( 0.2 \mathrm { vvm } \) (volume of air added to liquid volume per mimute)으로 7~10일간 통기 배양하였다. 배양액을 바로 실험에 사용하였다.</p> <h2>실힘어 및 사육수조</h2> <p>본 실험에 사용된 실험어는 제주도내 소재 육상 수조식배양 장에서 육성되어진 평균 어체중 \( 116 \pm 20 \mathrm { ~g } \), 전장 \( 22 \pm 1.2 \) \( \mathrm { cm } \) 인 넙치 (Paralichthys olivaceus)를, 콘크리트 수조 (11m,1.2톤)에서 4500 마리씩 무작위 배치하였다.각각의 실험 수조는 유수식으로 처음에는 유수량을 시간당 7회전으로 조절하였으며, 성장함에 따라 시간당 10 회전으로 유수량을 증가시켰다. 넙치 생리리듬을 안정화시키기 위하여 양식 전 기간 동안 검은색 차광망을 설치하였고 실험기간 중의 해수 온도는 \( 18 \pm 1.5 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 염분은 \( 30 \%_ { 0 } 32.6 \%_ { 0 } \) 이었고 용존산소 (DO)는 6~7.25였다.사료 제작을 위하여 생사료 (전갱이, 정어리, 고등어 등의 소형잡어)에 복합 상황버섯과 운지버섯 균사체 배양핵을 각각 \( 1 \% \) 첨가한 후, 제작한 사료롤 매일로 2회 (AM; 8hr, PM; 5hr) 12 주 동안 투여하였다. 대조구는 생사로만을 투여하였으며, 총 실험기간은 2006년 8월14일부터 11월 14일 까지 총 14 주 동안 실험을 실시하였다.</p>