조지방 함량과 지방산 조성 그리고 아미노산 함량에 사용된 시료는 일반성분분석과 동일한 방법으로 저장한 후 실험 시 해동하여 사용하였다. 지방산 분석은 Folch법을 이용한 조지방 시료를 지방을 녹인 후 \( 0.5 \mathrm{~N}\) \(\mathrm{NaOH} \)를 첨가하여 saponification시켰다. 아미노산 함량은 TCA solution 과 ethyl ether를 감압 건조하여 증발시킨 후 농축액과 Lithium citrate loading buffer를 희석시킨 후 여과하여 자동 아미노산 분석기에 주입하여 분석하였다. 시험을 통해서 분산분석을 실시한 후, 유의성 검정을 실시하였다.
<h2>조지방 함량 및 지방산 조성</h2> <p>조지방 함량 및 지방산 조성 그리고 아미노산 함량에 사용된 시료는 일반성분분석과 동일한 도축방법, 저장방법으로 \( -21^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동고에 저장한 후 실험 시 해동하여 사용하였다. 조지방은 Folch법을 이용하여 함량을 구하였다. 세절한 시료 (A) \( 3 \mathrm{~g} \) (오차허용기준: \( 3.00 \pm 0.03 \mathrm{~g} \))을 \( 50 \mathrm{ml} \) conical tube에 넣고 Folch I 인 혼합 solvent (chloroform: methanol(\(2:1\)))를 \( 15 \mathrm{ml} \)를 첨가한 다음 Homogenizer를 이용하여 \( 2,500 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 균질화시켰다. homogenizer에 묻은 지질 조각을 Folch I \( 5 \mathrm{ml} \)를 이용하여 \( 50 \mathrm{ml} \) conical tube에 모은 후 균질화된 시료에서 조지방의 추출액이 완전히 빠져 나오도록 하기 위해 2시간 동안 항온실에 방치하였다. 방치 후 추출액을 \(100 \mathrm{ml} \) 메스실린더에 설치된 여과지(Whatman No 1.)에 여과시켰고, \( 50 \mathrm{ml} \) conical tube에 남아있는 지질 조각도 포함시키기 위해 Folch I \( 5 \mathrm{ml} \)을 \( 50 \mathrm{ml} \) conical tube에 넣고 세척시켜 함께 여과시켰다. 여과지에 다시 Folch I 를 골고루 \( 5 \mathrm{ml} \) 넣어 조지방 추출을 유도한 후 메스실린더에 \( 0.88 \% \) \(\mathrm{NaCl} \)를 총 여액의 \( 1 / 3 \) 정도 첨가하여 shaking시켜 상층(methanol, 증류수,\( \mathrm{NaCl} \))과 하층(조지방, chloroform)을 분리시켰다. 분리된 하층의 높이(B)를 측정한 후 aspirator (VE11, JEOTECH, Korea)를 이용하여 연결된 모세관으로 상층액을 버리고 하층(lipid layer)만을 취하였다. lipid layer에서 \( 10 \mathrm{ml}(\mathrm{C}) \)를 dish에 넣고 dry oven \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 이상에서 30분 동안 chloroform을 완전히 건조시켰다. 건조시킨 dish무게에서 dish무게를 빼 조지방 무게(D)를 구했다. 조지방은 다음의 공식에 의하여 산출하였다.</p> <p>조지방 \( (\%)=(\mathrm{D} \times \mathrm{B}) / \mathrm{C} / \mathrm{A} \times 100 \)</p> <p>닭고기 중 지방산 분석은 Folch법을 이용한 조지방 시료를 methylene chloride \( 1 \mathrm{ml} \)로 지방을 녹인 후 \( 0.5 \mathrm{~N}\) \(\mathrm{NaOH} \) (in methanol)을 \( 1 \mathrm{ml} \) 첨가하여 heating block하에 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 saponification시켰다. 종료 후 10분간 냉각하고, \( \mathrm{BF}_{3} \) (boron trifloride methanol solution)를 \( 1 \mathrm{ml} \) 첨가시키고, 다시 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 methylation시켰다. Methylation이 끝난 glass tube 에 hexane \( 3 \mathrm{ml} \)와 증류수 \( 8 \mathrm{ml} \)를 넣고 섞은 후 원심분리기에서 원심분리 (\(1,000 \mathrm{rpm}\), \(10 \mathrm{~min}\))를 해주었다. \( 2 \mathrm{ml} \) test tube를 준비해서 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{SO}_{4} \)를 소량 넣고, 상층(지방산 추출물)에서 \( 1.5 \sim 2 \mathrm{ml} \) 채취하여 수분을 제거한 후 상층을 유리 syringe에 filter-\( \operatorname{ing}\left(0.2 \mu \mathrm{m}\right. \) filter)시키면서 GC분석용 vial병에 넣어 \( -21^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다. GC 분석 시 vial병에서 \( 1 \mu \)를 \( 10 \mu 1 \) syringe에 취하여 GC에 주입 후 지방산을 분리 정성, 정량 하였다. 이때 GC 분석은 Agilent 6890 (Agilent Technologies, Inc., USA)를 사용하였으며, MSD (mass selective detector)는 Agilent 5973를 이용하였다. Column은 HP-5MS (30 \( \mathrm{m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \times 0.25 \mu \mathrm{m}\))을 사용하였으며, oven온도는 \( 170^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3분간 정치시켰으며, 분당 \( 15^{\circ} \mathrm{C} \)씩 증가시켜 \( 280^{\circ} \mathrm{C} \)에서 7분간 정치시켰다. 주입 및 접촉온도 조건은 \( 260^{\circ} \mathrm{C} \)로 설정하였으며, 이온화 전압은 \( 70 \mathrm{eV} \), 그리고 이동상 가스는 \( \mathrm{He} \) (통과율: \( 1 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) )를 사용하였다.</p> <h2>아미노산 함량</h2> <p>세절한 시료 \( 10 \mathrm{~g} \)을 증류수 \( 50 \mathrm{ml} \)와 혼합하여 homogenizer에서 약 \( 1,400 \mathrm{rpm} \)으로 5분간 균질화시킨 다음 slurry를 cen-trifuging (\(4,000 \mathrm{rpm} / 20 \mathrm{~min}\))시켜 whatman No. 2 로 여과시켰다. 여과액에 \( 12 \% \) TCA solution을 증류수와 같은 동량 \( 50\mathrm{ml} \)을 첨가시켜 침전시킨 다음 냉건소에서 1시간 침전 시켰다. 침전된 것을 균형을 바르게 하기 위해 centrifuging (\(4,000 \mathrm{rpm} / 20 \mathrm{~min}\)) 시킨 후 상등액을 분별깔때기에 넣고, 상등액에 athyl ether \( 50 \mathrm{ml} \)를 가하여 TCA와 lipid를 제거하기 위해 3회 반복하여 하층을 재 추출하였다. 이렇게 회수한 하층을 evap-orator \( \left(40^{\circ} \mathrm{C}\right) \)로 혹시나 남아있을 \( 12 \% \) TCA solution 과 ethyl ether를 감압 건조하여 증발시킨 후 농축액 \( 3 \mathrm{ml} \)와 \( 0.2 \mathrm{M} \) Lithium citrate loading buffer (\(\mathrm{pH} 2.2\)) \( 7 \mathrm{ml} \)를 희석시켜 \( 10\mathrm{ml} \)를 만든 후 membrane filter (\(0.45 \mu \mathrm{m}\))로 여과하여 자동 아미노산 분석기(Biochrom 30, Pharmacia Biotech., UK)에 \( 40 \mu \mathrm{l} \)를 주입하여 분석하였다. Buffer는 Lithium citrate buffer를 이용하였으며, 온도범위는 \( 40 \sim 145^{\circ} \mathrm{C} \)로 설정하였으며, column은 \(20 \sim 99^{\circ} \mathrm{C} \)로 설정하여 사용하였다.</p> <h2>통계 분석</h2> <p>시험 및 분석 등을 통해서 얻어진 성적들은 SAS package의 ANOVA Procedure로 분산분석을 실시하였고, Duncan's New Multiple Range Test를 이용하여 유의성 검정을 실시하였다.</p>