충청권에서 수집한 전통누룩 16점을 분리원으로 사용하였으며, 균 분리는 직접분리와 희석평판분리 두 가지 방법을 사용하였고 누룩 표면의 서로 다른 균을 needle로 Malt extract agar (MEA: Malt extract \(3\%\), Mycological peptone \( 0.5 \% \), Agar \( 1.5 \% \) )배지에 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 일 동안 배양하여 서로 다른 균사를 순수 분리하였다. 이를 통해 분리된 균주는 MEA 혹은 OA배지 등에 접종하여 배양 후, 균총의 형태와 색상, 균사의 특징 등을 관찰하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>전통누룩의 수집</h2> <p>충청권역인 아산시 외 7 개 시 - 군의 재래시장에서 시판되는 누룩과 농가에서 직접 제조한 누룩 16 점을 수집하였다 (Table 1).</p> <h2>우수 곰팡이 탐색 및 분리</h2> <p>충청권에서 수집한 전통누룩 16점을 분리원으로 사용하였으며, 균 분리는 직접분리와 희석평판분리 두 가지 방법을 사용하였다.</p> <p>균 분리는 누룩 표면의 서로 다른 균을 needle로 Malt extract agar (MEA: Malt extract 3\%, Mycological peptone \( 0.5 \% \), Agar \( 1.5 \% \) )배지에 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 일 동안 배양하여 서로 다른 균사를 순수 분리하였다.</p> <p>분쉐한 누룩 \( 10 \mathrm{~g} \) 을 \( 0.1 \% \) peptone \( 90 \mathrm{~mL} \) 에 현탁한 후, 단계적으로 \( 10^{-2} \sim 10^{-7} \) 배로 희석하였다. 희석액 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 를 분리용 평판배지에 도말하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 일간 배양한 후, 나타난 곰팡이 colony를 순수 분리하였다. Dichloran-glycerol agar(DG18 : Peptone 0.5\%, Glucose 1\%, \( \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 0.1 \% \), \( \mathrm{MgSO}_{4} 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.05 \% \), Dichloran \( (0.2 \% \) in ethanol) \( 1.0 \mathrm{~mL} \), Chloramphenicol \( 0.01 \% \), Agar \( 1.5 \% \) )배지와 Dichloran rose bengal chloramphenicol agar(DRBC: Peptone 0.5\%, Glucose \( 1 \%, \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 0.1 \%, \mathrm{MgSO}_{4} 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 0.05 \% \), Dichloran (0.2\% in ethanol) \( 1.0 \mathrm{~mL} \), Rose bengal \( 0.0025 \% \), Chloramphenicol \( 0.01 \% \), Agar \( 1.5 \% \) )배지를 사용하였다.</p> <h2>분리균의 배양</h2> <p>분리한 곰팡이 균주는 MEA 사면배지에 보존하였으며, 배양은 멸균수 \( 3.5 \mathrm{~mL} \) 를 첨가한 호화 밀기울 \( 10 \mathrm{~g} \) 에 포자 현탁액 \( \left(1.0 \times 10^{9}\right. \) spores \( \left./ \mathrm{mL}\right) 300 \mu \mathrm{L} \) 를 각각 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 7일 배양하였다.</p> <h2>분리균의 형태학적 특성</h2> <p>순수 분리한 균주는 MEA, PDA 또는 OA배지 등에 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 일간 배양한 후, 균총의 형태와 색상, 균사의 특징 등을 관찰하였고 미세구조는 광학현미경(Karl Zeiss, Axioskop A2)을 사용하여 균사 및 포자의 형태 등을 관찰하였다. 분리균의 형태적 동정은 The Identification of Fungi(Dugan, 2006), Identification of common Aspergillus species(Klich, 2002), Introduction to Food-and Airborne Fungi Seventh Edition(Samson et al., 2004) 및 Atlas of Clinical Fungi(de Hoog et al., 2000) 등 의 서적을 참조로 하였다.</p>