본 연구는 22계통의 차조기 종자를 각 지방에서 수집하였다. RAPD 분석을 위해 어린잎을 -70\(^\circ \mathrm{C}\)에 보관하였다. 급냉시킨 액체질소를 유발에 넣어 마쇄한 0.2g 어린잎에 DNA extraction buffer를 이용하여 DNA를 추출하였다. 추출된 DNA는 0.8% agarose gel 상에서 전기영동하여 genomic DNA를 조사 및 관찰하였으며, 흡광도를 측정한 후 농도와 순도를 확인하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시험재료와 DNA의 추출 및 정제</h2> <p>본 연구에 사용된 차조기 (P. f. Brit. var. acutakudo) 종자는 각 지방에서 수집된 22계통으로 이들 차조기의 생육특성은 Table 1에 나타내었다. 그리고 RAPD 분석을 위하여 어린잎을 채취하였으며, 이들 잎은 DNA 추출 시까지 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하였다.</p> <p>DNA의 추출을 위해 차조기의 어린잎 \( 0.2 \mathrm { ~g } \)을 액체질소로 급냉시킨 후 유발에 넣어 마쇄하였으며, DNA extraction buf- fer ( \(100 \mathrm { ~mM } \) Tris \( \mathrm { pH } 8.0 \), \( 50 \mathrm { ~mM } \) EDTA \( \mathrm { pH } 8.0 \), \( 500 \mathrm { ~mM } \) \( \mathrm { NaCl } \), \(10 \mathrm { ~mM } \) mercaptoethanol) \( 10 \mathrm { ml } \)과 \(20 \% \) SDS \( 700 \mu \mathrm { l } \)를 넣어 혼합한 다음 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 방치하였다. 여기에 \( 5 \mathrm { ~M } \) potassium acetate \( 4 \mathrm { ~ml } \)를 넣고 \( 0 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 20분간 둔 다음 원심분리( \(12,000 \mathrm { ~rpm } \), 20분, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \))한 후 상등액을 취하였다. 이 상등액에 isopropanol \( 10 \mathrm { ~ml } \)를 넣고 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 방치한 후 원심분리 ( \(12,000 \mathrm { ~rpm } \), 10분, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \))하여 상등액을 취하고 다시 \( 50 \mathrm { ~mM } \) Tris와 \( 10 \mathrm { ~mM } \) EDTA를 각각 \( 0.7 \mathrm { ~ml } \) 씩 넣고 10분간 \( 10,000 \mathrm { ~rpm } \)에서 원심분리 하였다. 원심분리후 상등액에 \( 3 \mathrm { ~M } \) sodiun acetate \( 75 \mu \mathrm { l } \)와 isopropanol \( 0.5 \mathrm { ml } \)을 넣고 원심분리 ( \(12,000 \mathrm { ~rpm } \), 10분, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \))하여 DNA를 회수하였다. 여기에 \( 80 \% \) ethanol로 세척한후 TE buffer에 용해시켰다. 추출된 DNA는 \( 0.8 \% \) agarose gel에서 전기영동하여 genomic DNA를 관찰하였으며, 아울러 \( 260 \mathrm { ~nm } \)와 \( 280 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 농도 및 순도를 확인하였다.</p>