생체 유해 균주를 배양한 후 이 시료를 각각의 천연산물에 열수 추출 및 농축한다. 고추장 제조 및 ORP system value에 의한 항산화력 측정하였다. 그리고 Disk법에 의한 비브리오의 저해력 측정도 하여 그 이후 통계처리하였다.
<h1>재료 밎 방법</h1> <h2>사용균주 및 배양</h2> <p>생체 유해 균주 V. parahaemolyticus KCTC 2471를 KCTC로부터 분양 받아 marine broth 2216\( \left(\mathrm{pH}\right. 7.6) \)으로 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 150 \mathrm{~rpm} \)으로 교반하면서 24시간 배양하였다.</p> <h2>천연산물의 추출 및 조합</h2> <p>시료를 각각의 천연산물 \( 300 \mathrm{~g} \)에 3차 증류수 \( 1500 \mathrm{~ml} \)를 넣어 1시간동안 열수 추출한 여액을 \( 500 \mathrm{~ml} \)로 농축하여 실험의 시료로 사용하였다. 김이 발표한 Vibrio parahaemolyticus KCTC 2471에 대한 항산화 천연산물의 성장 억제 효과에 대해 보고한 내용을 바탕으로 비브리오 제어효과가 있는 단미제를 선별하여, 각 성분을 같은 비율로 두 종류, 세 종류, 네 종류로 조합하여 제어효과가 있는 A 및 B조합을 구성하고 이 조합들로 고추장을 제조하였다.</p> <h2>고추장 제조</h2> <p>전라남도 전통 재래식 방법을 중심으로 맥아 추출물 대신 황백 \( 40 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), 오미자 \( 80 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), 녹차 \( 40 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \), 황금 \( 40 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \)으로 구성된 A 조합을 1시간 동안 열수 추출한 여액과 A 조합에 오가피 \( 33 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \)을 첨가한 B 조합을 열수 추출한 여액 \( 1 \mathrm{~L} \)에 찹쌀가루 \( 35 \mathrm{~g} \)를 넣고 끓여 호화시킨 후 \( 70 \sim 75^{\circ} \mathrm{C} \)로 냉각하여 고춧가루 \( 75 \mathrm{~g} \), 정제염 \( 35 \mathrm{~g} \), 아스파탐 \( 0.2 \mathrm{~g} \)을 차례로 첨가하면서 교반하였다. 위와 같은 방법으로 제조한 고추장에 메주를 \( 30 \mathrm{~g} \) 첨가한 고추장, 마늘을 \( 15 \mathrm{~g} \) 첨가한 고추장을 따로 제조하여 소독된 옹기에 담아 햇빛과 공기가 잘 통하는 곳에서 30일 동안 숙성시킨 후 실헙하였다. 또한 같은 방법으로 중량비율이 고추장과 식초가 1 : 2가 되도록 식초를 첨가하여 식초고추장을 제조하였고, 항균력이 높은 것으로 알려진 chitosan을 농도별로 식초에 첨가한 chitosan 고추장도 제조하여 항 비브리오 효과를 A 및 B조합으로 제조된 고추장과 비기하였다.</p> <h2>ORP system value에 의한 항산화력 측정</h2> <p>각각의 천연산물과 천연산물 조합은 Kim등의 방법에 따라 \( \mathrm{pH} \)에 따른 ORP (Oxidation-Reduction Potential)를 측정하여 linear regression 한 후 기울기를 절편으로 나눈 값(ORP System value)을 나타내었다.</p> <h2>Disk법에 의한 비브리오의 저해력 측정</h2> <p>Clear zone에 의한 제어력의 측정은 clear zone의 직경을 disk의 직경으로 나눈 값을 IZD (inhibition zone divided by the disk diameter)으로 정의하여 사용하였으며, 액체배지에서 배양된 V. parahaemolyticus 균주를 marine broth의 고체배지에 도말한 후, 이 평판배지 위에 \( 8 \mathrm{~mm} \) paper disk를 올려놓고 천연산물 및 천연산물 조합 추출액은 각각 \( 20 \mathrm{~\mu L} \)씩 흡수시켰고, 농도를 달리한 겨자눈(O사), 연와사비(O사), 고추장, 초고추장 그리고 농도별 chitosan을 함유한 초고추장은 paper disk 없이 \( 0.2 \mathrm{~g} \)씩 평판배지 위에 놓고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양 후 clear zone을 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>각각의 실험은 3회 실시하였으며 실험결과는 평균표준오차(mean \( \pm SE) \)로 표시하였다. 유의성 검정은 one way ANOVA 및 Student's t-test를 이용하였으며 유의성은 \( P<0.01 \) 및 \( P<0.05 \)로 나타내었다.</p>