DPPH법에 의한 황산화 활성 측정 과정은 다음과 같다. DPPH 용액 \( 5 \mathrm{~ml} \)에 일정농도 \( (0.025 \%, 0.05 \%, 0.1 \%) \)의 시료용액 \( 1 \mathrm{~ml} \)을 혼합한 후 실온에서 30분간 반응시킨 다음 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 측정하였다. Thiocyanate에 의한 항산화 활성 조사는 다음과 같이 진행하였다. 시험관에 혼합용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)을 넣고 \(70\%\) ethanol \( 3 \mathrm{~ml} \)과 ammonium thiocyanate 용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \), ferrous chloride 용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)를 혼합한 후 3분이 지난 다음에 \( 500 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. TBA에 의한 항산화 활성 조사 과정은 다음과 같다. centrifuge tube에 시료액 \( 0.5 \mathrm{~ml} \), \(35\%\) trichloroacetic acid \( 0.25 \mathrm{~ml} \)와 \( 0.75 \% \) aqueous TBA \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 혼합한 후에 boiling water bath에 15분간 shaking 한다. 흐르는 물에 냉각시킨 다음 \( 70 \% \) trichloroacetic acid \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 넣고 20분이 지난 후에 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 15분간 원심분리하고, 그 상징액 \( 532 \mathrm{~nm} \)에서 흡강도를 측정하였다.
<h2>DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH (\(\alpha, \alpha^{\prime} \)-diphenyl- \( \beta \)-picrylhydrazyl) 용액은 \( 100 \mathrm{~ml} \) 에탄올에 DPPH \( 16 \mathrm{~mg} \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 Whatman filter paper NO. 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 \( 5 \mathrm{~ml} \)에 일정농도 \( (0.025 \%, 0.05 \%, 0.1 \%) \)의 시료용액 \( 1 \mathrm{~ml} \)을 혼합한 후 실온에서 30분간 반응시킨 후 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 이때 대조구인 BHT는 \( 0.05 \% \) 농도로 첨가하여 위에서와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH를 이용한 전자공여능(electron donating ability; EDA)은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율(%)로 표시하였다.</p> <p>EDA (\(\%\))\(=\{1-(\mathrm{Abs} / \mathrm{Abc})\} \times 100 \)</p> <p>Abc: Absorbance of control treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p> <p>Abs: Absorbance of sample treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p> <h2>Thiocyanate에 의한 항산화 활성 조사</h2> <p>Ohkawa의 방법에 따라 먼저 linoleic acid \(25 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) in EtOH), ferrous chloride (\(2.45 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) in \( 3.5 \% \) hydrochloric acid), ammonium thiocyanate \( \left(0.3 \mathrm{~g} / \mathrm{ml}\right. \) in \( \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\right) \), \( 0.2 \mathrm{~M} \) phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 7.0)를 조제하여 이들을 stock solution으로 사용하였다. 혼합용액은 시료용액 \( 0.2 \mathrm{~ml} \), linoleic acid \( 0.2 \mathrm{~ml} \)을 시험관에 넣고 혼합한 후 phosphate buffer \( 0.4 \mathrm{~ml} \)와 증류수 \( 0.2 \mathrm{~ml} \)를 가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 incubation하면서 일정간격으로 측정하였다. 측정방법은 혼합용액에서 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)을 취하여 시험관에 넣고 \(70\%\) ethanol \( 3 \mathrm{~ml} \)과 ammonium thiocyanate 용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \), ferrous chloride 용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)를 혼합한 후 정확히 3분 후에 \( 500 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 BHT를 \( 0.05 \% \) 농도로 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.</p> <h2>TBA (2-thiobarbituric acid)에 의한 항산화 활성 조사</h2> <p>시료용액 \( 1.0 \mathrm{~ml} \), linoleic acid \( (25 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) in EtOH) \( 1.0 \) \( \mathrm{~ml} \)을 시험관에 넣고 흔합한 후 \( 0.2 \mathrm{~M} \) phosphate buffer (\(\mathrm{pH}~7.0 \)) \( 2 \mathrm{~ml} \)와 증류수 \( 1.0 \mathrm{~ml} \)를 가하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 incubation 하면서 일정간격으로 측정하였다. 측정 방법은 시료액 \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 centrifuge tube에 넣고 \(35\%\) trichloroacetic acid \( 0.25 \mathrm{~ml} \)와 \( 0.75 \% \) aqueous TBA \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 가하여 혼합한 후 boiling water bath에서 가끔 shaking하면서 15분간 처리하여 흐르는 물에 냉각시킨 후 \( 70 \% \) trichloroacetic acid \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 가한 다음 20분 후 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 15분간 원심분리하고, 그 상징액을 \( 532 \mathrm{~nm} \)에서 흡강도를 측정하였다.</p>