TBARS (2-thiobarbituric acid reactive substance)는 불포화 지방산이 자동산화하는 과정에서 생성되는 지방산화의 2차 산물인 malondialdehyde (MDA)의 양을 측정하는데 사용되며, MDA는 매우 반응성이 높습니다. 인체의 중성구 내에 존재하는 엘라스타제는 피부의 탄력을 유지하는 데 중요한 역할을 하는 단백질인 엘라스틴을 분해하는 효소로 알려져 있으며, 비특이적으로 콜라겐과 같은 다른 중요한 기질 단백질도 분해할 수 있는 효소입니다. 현재까지 개발된 일부 피부노화 억제제는 그 효능과 부작용에 대해 명확한 검증이 이루어지지 않았으며 캄보디안 상황버섯 추출물은 뛰어난 항산화 활성뿐만 아니라 피부 주름을 개선하는 데에도 탁월한 효과를 보여주기 때문에, 이러한 효능을 가진 기능성 화장품 원료로서 매우 유망하다고 생각됩니다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>지방산패 억제능 측정 확인</h2> <p>TBARS (2-thiobarbituric acid reactive substance)는 불포화 지방산이 자동산화하는 과정 중 지방산화의 2차 산물인 malo-naldehyde (MDA)가 발생하며, 이는 높은 반응성을 가지고 있다. 이러한 malonaldehyde (MDA)는 2-thiobarbituric acid (TBA)시약과 반응하는 주된 물질이며, \( 531 \mathrm{~nm} \)에서 분홍빛형 광을 갖는 물질을 만든다. 생체 내에서 세포막에 존제하는 인지질 및 당지질과 혈관에 존재하는 지질은 산소와 결합하여 과산화물을 만들고 이들의 연속반응에 의하여 alcohol류, al-dehyde류, ketone류 등을 생성하여 생체 내에서 DNA를 손상시켜 암을 유발하기도 하며, 세포의 노화와도 관련이 있는 것으로 알려져 있다.</p> <p>이러한 지방산패의 억제능을 측정하기위해 산화촉진제인 \( \mathrm{Fe}^{2+}, \mathrm{Cu}^{2+} \)이온첨가에 따른 지방산패 억제능 측정 결과를 Fig.1과 2에 나타내었다. 상황버섯 열수 추출물의 경우 산화촉진제인 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)에 대한 지방산패 억제능을 측정한 결과 \( 0.5 \mathrm{mg} /\mathrm{ml} \)의 농도에서 \( 57 \% \)를 나타내었으며, 상황버섯 에탄을 추출물의 경우 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 \( 85 \% \)의 지방산패 억제능을 나타 내었다. 또한, \( \mathrm{Cu}^{2+} \)이온첨가에 의한 지방산패 억제능을 측정한 결과 \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 상황버섯 열수 추출물이 \( 10 \% \) 미만의 낮은 지방산패 억제능을 나타내었으나 상황버섯 에탄올 추출물 \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 69.4 \% \)의 높은 억제능을 나타내었다.</p> <p>이는 대조군 butylated hydroxytoluene (BHT)와 비교하였을 때 매우 우수한 결과를 나타내었다. 산화촉진제인 \( \mathrm{Fe}^{2+} \) 또는 \( \mathrm{Cu}^{2+} \)이온첨가에 따른 지방산패 억제능을 측정한 결과, \( \mathrm{Cu}^{2+} \)이온보다는 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)에 대한 지방산패 억제능이 더 우수했으며 상황버섯 열수 추출물보다 상황버섯 에탄올 추출물의 지방 산패 억제능이 우수함을 알 수 있었다.</p> <h2>Elastase 저해 활성 측정 확인</h2> <p>인체의 중성구 과립구 내에 존재하는 elastase는 진피 내 피부탄력을 유지하는데 중요한 기질 단백질인 elastin을 분해 하는 효소이며, 다른 중요한 기질 단백질인 콜라겐을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 elastase 저해제는 피부 주름을 개선하는 작용을 나타내며, urosolic acid 등이 elastase 저해제로 이용되고 있다. 또한 체내의 elastin을 분해하는 백혈구 과랍 효소 중의 하나로 이상조직에는 그 효소 활성이 극히 높아 조직 파괴에 직접적인 원인이 되어 피부의 주름 및 탄력성 소실을 유발한다.</p> <p>상황버섯 추출물을 이용한 elastase 저해 활성 측정 결과는 Fig. 3과 같다. 상황버섯 열수 추출물은 모든 농도에서 \( 10 \% \)미만의 매우 낮은 저해 활성을 나타내었지만, 상황버섯 에탄올 추출물은 \( 0.01 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 \( 50.7 \% \)의 저해활성을 나타내었으며, 통계적으로 유의적인 차이를 보였고 농도 의존적으로 저해율이 증가하였다. 특히 에탄올 추출물의 elastase 저해활성은 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)농도에서 대조군으로 사용된 urosolic acid 보다 \( 20 \% \) 높은 elastase 저해활성을 나타내었다. 이상의 결과에서 주름개선효과에는 상황버섯 열수 추출물 보다 에탄올 추출물에서 elastase 저해 활성이 우수함을 알 수 있었다.</p> <h2>Collagenase 저해활성 측정 확인</h2> <p>세포 외 기질의 주요 구성 성분인 collagen은 피부의 섬유아 세포에서 생성되는 주요 기질 단백질이다. Collagen의 주된기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결함력, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화의 유도 등이 알려져 있다. Collagen은 피부, 골, 인대, 연골 및 치아 등에 높은 농도로 존재하며, 이러한 collagen은 트립신 등의 단백질 분해효소의 작용을 받지 않으나 collagenase에 의해 분해된다는 보고 가 있어, 상황버섯 열수 및 에탄을 추출물의 colla-genase 저해활성을 Fig. 4와 같이 나타내었다.</p> <p>열수 추출물은 \( 0.05 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \sim 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 3.4 \% \sim \) \( 6.8 \% \)로 collagenase 저해활성 효과가 나타나지 않았으나, 에탄을 추출물은 \( 33.4 \% \sim 89.6 \% \)로 통계적으로 유의적인 차이를 보였으며, 농도 의존적으로 저해활성이 높게 나타났다. 특히 에탄올 추출물의 경우 collagenase 저해활성에서 대조군으로 사용된 epigallocatechin gallate (EGCG)보다 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도를 제외하고는 약 \( 10 \% \)높은 저해활성을 나타내어 상황버섯 열수 추출물 보다 에탄을 추출물이 collagenase의 활성을 저해함으로서 collagen의 분해를 막아 피부의 주름을 개선 할 것 으로 사료된다. 현재까지 개발되어 일부 이용되고 있는 피부노화 억제제는 그 효능과 부작용이 확실히 검증되지 않았고 있다. 캄보디안 상황버섯 추출물은 항산화 활성은 물론 피부 주름개선에 우수한 효과를 나타내고 있으므로 이러한 효능이 우수한 기능성 화장품 소재로서 이용 가능성이 높을 것으로 사료된다.</p>