HPLC 열은 \( \mu \) BondaPak \( C_ { 18 } \) 열을 이용하여 각 GA를 \( 1 \% \) 아세트산이 포함된 \( 28 \% \) 메탄올과 \( 100 \% \) 메탄올 용액의 농도로 분리하였다. 무수 디클로로메탄으로 녹인 시료를 HP-1 capillary column이 장착된 GC-MS에 주입하였다. 이를 통해 hydrocarbon standard를 이용한 KRI 값을 구하고, 이를 바탕으로 GA와 GA 내부 표준물질의 3가지 주요 이온 질량을 비교하여 정량하였다.
<h3>High-performance liquid chromatography (HPLC) 분석</h3> <p>HPLC column은 \( \mu \) BondaPak \( C_ { 18 } \) column \( (3.9 \times 300 \mathrm { ~mm } ) \)을 사용하였으며 각 GA는 \( 1 \% \) acetic acid를 포함한 \( 28 \% \) methanol과 \( 100 \% \) methanol 용액의 농도구배로 분리하였다. 유속은 분당 \( 1.5 \mathrm { ml } \)로 유지하였으며 \( 1.5 \mathrm { ml } \)씩 총 50분획으로 나누었다. 각 GA의 정확한 머무름 시간은 각 분획당 소량(15 \(ul \))을 취하여 liquid scintillation counter를 이용(Beckman, 1801)하여 \( { } ^ { 3 } \mathrm { H } - \mathrm { GA } \) 표준물질의 유무를 확인하여 결정하였다.</p> <h3>Gas Chromatography/Mass Spectrometer (GC-MS) 분석</h3> <p>건조시킨 각각의 GA 분획들을 \( 100 \% \) methanol에 용해시킨 후 동일 GA를 포함한 분획을 합하여 \( 1 \mathrm { ml } \)의 reaction vial로 옮긴 후 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 질소가스로 건조시켰다. GA 분획 중 불순물을 많이 함유한 분흭은 \( \mathrm { NH } _ { 2 } \) PreSep extraction cartridge를 사용하여 GA의 불순물을 제거한 후 reaction vial로 옮겼다. 각 GA는 2차례 ethereal diazomethane을 사용하여 methyl ester로 유도한 후 질소가스로 건조하였다. Silylation이 필요한 GA는 \( 35 \mathrm { ul } \)의 pyridine과 \( 35 \mathrm { ul } \)의 N, D-Bis(trimethyl silyl)-trifluoroacetamide( \(1 \% \) TMCS 포함)로 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30 분간 반응시킨 후 질소가스로 건조하였다. 시료는 무수 dichloromethane으로 녹인 후 \( 1 \mathrm { ul } \)를 \( 30 \mathrm { ~m } \times 0.25 \mathrm { ~mm } \)(i.d.), \( 0.25 \) um film thickness HP-1 capillary column(J & W)이 장착된 GC-MS에 주입하였다.</p> <h3>내부 GAs의 정량</h3> <p>5973 Network Mass Selective Detector (Hewlett Packard)가 부착된 GC-MS를 사용하였으며 data는 HP5970C chemstation (Hewlett Packard)을 사용하여 처리하였다. 정성과 정량분석을 위해 hydrocarbon standard를 이용하여 KRI 값을 구하였으며, 각 GA와 GA internal standards(obtained from Prof. Lewis N. Mander, Australian National University, Canberra, Australia)의 3개의 주요 ion mass를 비교하여 정량하였다.</p>