yakuchinone-A은 울금의 curcumin과 매우 유사한 특징이 있다. \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에 TNF- \( \alpha \) 및 yakuchinone-A을 동시 치리한 후 세포독성을 관찰한 결과, \( 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도부터 세포독성이 확인되어 yakuchinone-A의 최대 농도값을 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)로 설정하였다. Yakuchinone- \( \mathrm{A} \) 의 효능을 확인하기 위해 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주를 yakuchinone-A를 농도별로 처리한 뒤에 Th17 세포의 활성 촉진에 중요한 TNF- \( \alpha \) cytokine, IL-6/8 뿐만 아니라 건선 유발 chemokine의 일종인 CCL20의 mRNA 발현 변화를 실험하였다. 실험결과, 우리는 yakuchinone-A 가 앞선 요인들의 mRNA 발현을 억제함을 확인하였다.
<h2>결 과</h2> <h3>\(\mathrm{TNF}- \alpha \) 유도된 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에서 yakuchinone-A의 세포독성</h3> <p>익지인의 유효성분 중 하나인 yakuchinone-A은 울금(Curcuma longa)의 curcumin과 매우 유사한 구조직 특징을 가진다(Fig.1A). 따라서 yakuchinone-A의 피부염증 개선 효능을 확인하기 위해 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에 미치는 세포독성을 CCK-8 assay를 통해 확인하였다.먼저 \( \mathrm{HaCaT} \)세포에 미치는 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 세포독성은 최대 \( 50 \mathrm{ng} / \mathrm{mL} \) 농도까지 세포독성이 전혀 나타나지 않았으나, 선행 연구결과들을 고려하여 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 는 \( 20 \mathrm{ng} / \mathrm{mL} \) 로 설정하였다. 이후 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에 \(\mathrm{TNF}- \alpha \) 및 yakuchinone-A을 동시 치리한 후 세포독성을 관찰한 결과, yakuchinone-A \( 10 \mu \mathrm{g}/ \)\( \mathrm{mL} \) 농도 조건까지는 세포독성이 관찰되지 않았으나, \( 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도부터 세포독성이 관찰되어 yakuchinone-A의 최대 농도값을 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)로 설정하여 이후 모든 실험에 작용하였다(Fig. 1C).</p> <h3>Yakuchinone-A에 의한 염증성 cytokine 및 CCL20 발현 억제</h3> <p>피부 염증반응에서 yakuchinone- A의 항염증 효능을 확인하기 위해 제일 먼저 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 에 의해 활성화된 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포주에 yakuchinone-A를 농도별로 치리하여 Th17 세포의 활성 촉진에 중요한 IL-6/8, \(\mathrm{TNF}- \alpha \) cytokine 및 건선 유발 chemokine 중 하나인 CCL20의 mRNA 발현 변화를 관찰하였다. 먼저 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 를 치리한 결과, \( \mathrm{IL}-6 \) 의 mRNA 발현은 무처리군 대비 약 \( 3.4 \pm 0.3 \) 배까지 증가하였고, yakuchinone-A를 각각 \( 2.5 \), \( 5,10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도로 치리한 시험군에서 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 치리군 대비 각 \( 13.4 \pm 8.3,56.9 \pm 6.5,61.4 \pm 7.5 \% \) 수준으로 유의성 있게 감소하여 yakuchinone-A가 농도의존직으로 IL-6의 mRNA 발현을 억제하는 것을 알 수 있었다(Fig. 2A). 그러나 yakuchinone-A에 의한\( \mathrm{IL}-8 \) 발현량 변화는 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 치리군에서 약 \( 7.2 \pm 0.7 \) 배로 정상직으로 증가됨이 관찰되었으나, yakuchinone-A를 농도별로 처리했을 때 저농도에서는 변화가 없었고, \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 농도조건에서만 TNF- \( \alpha \) 치리군 대비 약 \( 23.6 \pm 1.5 \% \) 로 억제되었다(Fig. 2B). 또한 \( \mathrm{HaCaT} \) 세포에서 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 에 의해 활성화된 후 yakuchinone-A에 의한 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 의 mRNA 발현량을 관찰한 결과, \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 처리군 대비 약 \( 26.6 \pm 9.2,39.1 \pm 3.1,46.0 \pm 4.8 \% \) 수준만큼 감소되었다(Fig. 2C). 마지막으로 건선 푀부염 발병에 밀접한 관련이 있는 CCL20 chemokine의 mRNA 발현을 확인하였다. TNF- \( \alpha \) 처리군에서 CCL20의 mRNA 발현은 \( 102.7 \pm 23.7 \) 배 증가하였고, 이때 yakuchinone-A을 처리한 결과 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 처리군 대비 \( 2.5 \) \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 의 저농도 조건에서 약 \( 46.6 \pm 12.3 \% \) 수준으로 유의성 있게 감소되었다(Fig. 2D). 따라서 위 결과로부터 우리는 yakuchinone-A 가 건선 유발 cytokine인 , \( \mathrm{IL}-6/8 \), \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 뿐만아니라 CCL20 chemokine의 mRNA 발현을 억제함을 알 수 있었다.</p>