페놀 화합물은 Folin-Denis 방법으로 측정하였고, 이를 위해 시료에 에탄올, 증류수, Folin-ciocalteu 시약 등을 첨가하고 흡광도를 측정하여 갈산을 통한 양을 환산하였다. H. pylori는 최적배지를 이용하여 미호기성 조건을 유지하며 배양되었고, 배양은 특정 온도와 시간 동안 실시하였다. 추출물의 H. pylori에 대한 항균활성 검사는 표준 균주 ATCC 43504를 사용하여 실시하였다. 검사는 최적배지 plate에 H. pylori를 분주하고, 멸균된 disc paper에 각 추출물을 흡수시켜 배양한 후 clear zone 생성 여부를 확인하였다.
<h2>총 Phenol 화합물 정량</h2> <p>총 페놀 화합물은 Folin-Denis 방법으로 측정하였으며, 시료 \( 1 \mathrm { ~ml } \)에 \( 95 \% \) ethanol \( 1 \mathrm { ~ml } \)와 증류수 \( 5 \mathrm { ~ml } \)를 첨가하고 \( 1 \mathrm { ~N } \) Folin-ciocalteu reagent \( 0.5 \mathrm { ~ml } \)를 넣어 잘 섞어주고, 5분간 방치한 후, \( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \) \(1 \mathrm { ~ml } \)를 가한 후, 흡광도 \( 725 \mathrm { ~nm } \)에서 1시간 이내에 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로부터 양을 환산하였다.</p> <h2>Helicobacter pylori 배양</h2> <p>실험에 사용한 균주는 위, 십이지장궤양 원인균인 H. pylori로서 표준균주인 ATCC 43504를 사용하였다. H. pylori의 배양에는 최적배지(special pepton \( 0.5 \mathrm { ~g } \), agar \( 0.75 \mathrm { ~g } \), \( \mathrm { NaCl } \) \(0.25 \mathrm { g } \), yeast extract \( 0.25 \mathrm { ~g } \), beef extract \( 0.2 \mathrm { ~g } \) 및 pyruvic acid \( 0.025 \mathrm { ~g } / 50 \mathrm { ml } \) )를 사용하여 미호기성 조건을 유지시켜주기 위해서 \( 10 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator를 이용하였으며, incubator의 습도는 항상 \( 95 \% \) 이상으로 유지하였고, agar plate상에서 배양은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 \(48 \sim 72 \)시간 동안 실시하였다.</p> <h2>추출물의 H. pylori 항균활성 검색</h2> <p>H. pylori 최적배지 plate에 H. pylori \(100 ~ \mu \mathrm { l } \)를 분주하여 멸균 유리봉으로 도말한 다음, 멸균된 disc paper ( \( \Phi ~8 \mathrm { ~mm } ) \)를 올리고 \( 0.45 ~ \mu \mathrm { m } \) membrane filter로 제균한 각 추출물 \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \)을 흡수시키고, 대조구로는 멸균수를 흡수시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 미호기성조건에서 24시간 동안 배양한 다음, disc 주위의 clear zone 생성 유무를 확인하였다.</p>