DNCB의 적정량을 결정하기 위해 생쥐 복부에 항원을 바르고 이에 대한 T 세포 반응을 측정한다. 결과로 T 세포는 DNBS 농도에 의존적으로 증가하는 양상을 보였다. 피하에서의 Langerhans 세포는 DNCB를 인지하고 DNCB를 T 세포에 전달하여 활성화시킨다. 이때 걸리는 시간을 측정하여 시간을 결정한다. 추가로 실험 결과 \( 300 \mathrm{\mu g} / \mathrm{m} \) 에서 최대 증식 반응이 나타난 것으로 UVB의 조사량을 결정하고 자외선 조사량에 따른 억제량도 분석한다.
<h2>DNCB 항원의 농도 결정</h2> <p>항원으로 사용하는 DNCB의 적정량을 결정하기 위하여, 농도별로 생쥐 복부에 바르고 5일 후에 림프절을 분리하여 림프구를 회수하고, 항원에 대한 T 세포의 반응을 측정하였다. DNCB 에 대한 T 세포의 증식반응을 측정한 결과, \( 0.5 \% \) DNCB를 피부에 발랐을 때 가장 큰 증식반응 \( (0.866 \pm 0.02) \) 이 유도되었다. 즉 분리한 림프구에 불용성인 DNCB 대신에 유사한 구조를 가지는 수용성 DNBS를 농도별로 첨가하고 3일간 배양하여 DNBS에 대해 증식하는 T 세포의 반응을 측정하였다. T 세포의 증식반응은 DNBS 농도에 의존적으로 증가하였고, \( 300 \mathrm{\mu g} / \mathrm{m} \) 에서 최대 증식반응이 나타났다. DNCB \( 0.5 \% \) 일 때 DNBS \((100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 에 대한 IL-2 생산량 \( (187.7 \pm 1.8 \) \( \mathrm{pg} / \mathrm{ml}) \) 이 대조군 \( (18.7 \pm 1.2 \mathrm{pg} / \mathrm{ml}) \) 에 비해 약 10 배정도 증가하였고, \( 0.25 \%\) DNCB에 대해서는 약 5.4배로 증가하였다. IFN-r 생산량도 DNCB 농도가 증가할수록 증가하였고, \( 7 \% \) DNCB일 때 DNBS \((100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 에 대해서 실험군 \( (248.7 \pm 16.5 \) \( \mathrm{pg} / \mathrm{ml}) \)은 대조군 \( (32.0 \pm 16.5 \mathrm{pg} / \mathrm{ml}) \) 에 비해 약 7.8배 정도 증가하였다. 따라서 이 후 실험은 최대 T 세포 증식반응과 IL−2 생산량을 유도하는 DNCB \(0.5 \% \) 농도를 사용하였다.</p> <h2>DNCB 항원 제시에 걸리는 시간 결정</h2> <p>피하에 있는 항원전달세포인 Langerhans 세포가 DNCB를 인지하고 포획하여 림프절로 이동한 후에, DNCB를 T 세포에 전달하여 활성화시키는데 걸리는 시간을 측정하기 위해, 피부 도말 후 각각 4 일, 5일, 6 일에 림프구를 분리하여 T 세포의 반응을 측정하였다. 그 결과 \( 0.5 \%\) DNCB 를 피부에 바르고 4 일 후에 림프절를 분리하였을 때, DNBS항원에 대해 가장 높은 T 세포의 증식반응 \( (0.520 \pm 0.02) \) 이 나타났다. 이 때 증식반응은 DNBS 농도에 의존적으로 증가하였고, IL-2 생산량 \((252.75\pm5.30)\)은 DNBS \( 300 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 일 때 6 일 후에 가장 많았지만, IFN-r 생산량 \((690.00\pm21.21)\)은 4일 후에 가장 많게 나타났다. 즉 \( 0.5 \%\) DNCB 를 피부에 바르고 4 일 후에 DNBS에 대한 T 세포의 반응이 가장 높게 나타났다.</p> <h2>UVB 조사량 결정</h2> <p>항원전달세포인 Langerhans 세포가 T 세포의 반응을 최대로 유도하는 조건에서, \( 100,300,1,000 \mathrm{~mJ} / \mathrm{cm}^{2} \) 의 자외선을 조사하고 T 세포의 반응을 측정하였다. 그 결과 자외선 조사량이 증가함에 따라 DNBS에 대한 T 세포의 증식반응이 억제되었다. 특히 \( 1,000 \mathrm{~mJ} / \mathrm{cm}^{2} \) 자외선을 조사하였을 때는 T 세포의 증식반응이 거의 측정되지 않았고, \( 300 \mathrm{~mJ} / \mathrm{cm}^{2} \) 자외선을 조사한 경우에는 대조군에 비해 약 \( 40 \% \) 정도 억제되는 것으로 나타났다. 또한 IL-2와 IFN-r 생산량도 자외선을 조사하지 않은 대조군과 비교하였을 때 자외선 조사량이 증가함에 따라 감소하는 것으로 나타났다. 이상의 실험 결과, 300 \( \mathrm{mJ} / \mathrm{cm}^{2} \) 의 자외선을 조사한 2 시간 후에 \( 0.5 \%\) DNCB를 피부에 바르고, 4 일 후에 림프절을 분리하여 DNBS에 대한 T 세포의 반응을 관찰하였을 때, T 세포의 증식반응과 IL-2, IFN-r의 생산량이 유의하게 감소하는 것으로 나타났다. 따라서 동일한 조건에서 자외선에 의해 억제된 피부 Langerhans 세포의 항원 전달기능을 방호하는 HemoHIM의 효과를 확인하였다.</p>