Mycoplasma pneumoniae 표준 균주를 대조군으로 사용하여 서울과 부산의 종합병원 1곳과 3곳, 소아과 의원과 가정의학과 의원 3곳에 내원하는 호흡기 질환자의 가검물을 멸균된 면봉으로 채취하여 Chanock's glucose 배지 내에 \( 10 ^ { -1 } -10 ^ { -5 } \)까지 계단 희석하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3주간 배양했다. 각 항생물질의 최저발육저지농도, 최저살균농도의 판정은 항생물질이 없는 대조군 계열에서 균이 증식한 시기에 각 항생물질이 존재하는 계열에서 증식이 억제되는 최저농도를 MIC로, 접종 3주후 균의 증식이 억제된 최저농도를 MBC로 판정했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주</h2> <p>Mycoplasma pneumoniae (ATCC 29342) 표준 균주를 대조군으로 사용하였다.</p> <h2>환자의 가검물 채취</h2> <p>서울의 종합병원 1곳과 부산시내에 있는 종합병원 3곳의 내과와 소아과 및 일차 진료기관인 소아과 의원과 가정의학과 의원 3곳에 내원하는 호흡기 질환자의 상기도로부터 가검물을 멸균된 면봉으로 채취하여 \( 2 \mathrm { ml } \)의 Chanock's glucose 배지내에 충분히 씻어 떨어뜨린 후 면봉은 바로 버리고 이것을 가검물 원액으로 하였다.</p> <h2>M. pneumoniae의 분리 배양 및 동정</h2> <p>상기의 가검물 원액 \( 20 \mu \mathrm { l } \)를 \( 2 \mathrm { ml } \)의 Chanock's glucose 배지가 들어있는 24 well plate에서 \( 10 ^ { -1 } -10 ^ { -6 } \)까지 계단 희석하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3주간 배양하였다. 배지의 색깔을 매일 확인하여, 배지의 색깔이 투명하고, 적색에서 황색으로 변하였으면 M. pneumoniae가 증식된 것으로 추정하고, 색깔이 변한 최대희석배수의 역지수를 색깔변화단위(color change unit: CCU)로 하였다. M. pneumoniae가 배양된 것으로 추정된 균액을 다시 24 well plate에서 \( 10 ^ { -1 } -10 ^ { -6 } \)까지 계단 희석하고, 각각의 희석액을 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 취하여 Chanock's glucose 한천배지에 접종하여 가습상자에 넣어 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3주간 배양하면서 집락의 형성 유무를 현미경(100x)으로 확인 하였다. 형성된 집락은 닭 적혈구홉착시험 양성이고, arginine 이용 시험 음성이고, M. pneumoniae 항혈청에 대한 대사저지시험 양성인 것을 M. pneumoniae로 동정하였다.</p> <h2>분리된 M. pneumoniae의 항생물질에 대한 감수성</h2> <p>호흡기 질환 환자로부터 분리 동정된 M. pneumoniae 60균주를 \( 10 \mathrm { ml } \)의 Chanock's glucose 배지에 3일간 배양하여 균수가 \( 10 ^ { 6 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \)되도록 조정한 후에 각 항생물질이 함유된 \( 2.0 \mathrm { ml } \)의 배지에 각각 \( 20 \mathrm {\mu l } \)씩 접종하여 3주간 균의 증식 유무를 확인하였다. 항생물질은 erythromycin (Sigma, USA), tetracycline (Sigma, USA), minocycline (Cheil Food \& Chem. Co., Seoul), sparfloxacin (Cheil Food \& Chem. Co., Seoul), ofloxacin (Cheil Food \& Chem. Co., Seoul), ciprofloxacin (Cheil Food \& Chem. Co., Seoul), josamycin (Yamanouchi Pharm. Co., Tokyo)를 사용하였으며, 각 항생물질은 최고 농도가 \( 32 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)되도록 녹인 후에 각 배지에는 \( 16, 8, 4, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.062, 0.031, 0.015 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)되도록 첨가하였다.각 항생물질의 최저발육저지농도(MIC)와 최저살균농도(MBC)의 판정은 항생물질이 들어있지 않는 대조군 계열에서 균이 증식한 시기(접종 4~7일후)에 각 항생물질이 함유된 계열에서 증식이 억제되는 최저농도를 MIC로, 접종 3주후 균의 증식이 억제된 최저농도를 MBC로 판정하였다.</p>