거창에서 생산된 초피를 이용해 균주를 배양하였으며, 이 균주에는 Sta. aureus ATCC 13301, B. subtilis ATCC 9372, Sal. typhimurium, E. coli O157:H7 KSC 059 및 V. par-ahemolyticus ATCC 33844 등이 포함되었다. 초피간장은 봄과 가을에 각각 제조되었으며, 이는 메주를 충분히 발효시킨 후 건져내어 새로운 항아리에 넣고 소금을 뿌려 추가 발효를 진행하는 방법을 사용하였다. 최종적으로 발효된 제품은 진공회전 농축기를 통해 농축된 후 실험에 사용되었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>초피</h2> <p>본 실험에 사용한 초피(Z. piperitum) 는 경남 거창의 산지 개발연구소 재배단지에서 생산된 것을 이용하였다. 봄에 담근 간장과 된장에 사용한 것은 전년도 8월에 수확한 것으로 음건한 후 \( 70 \% \) 탈립 시킨 과피를 사용했고, 가을에 담근 간장과 된장에 사용한 것은 8월에 수확하여 생초피를 그대로 사용하였다.</p> <h2>사용균주 및 세포</h2> <p>실험에 사용한 균주는 경상대학교 환경생명화학과에서 분양받아 사용했으며, 그람양성균으로서는 Sta. aureus ATCC 13301과 B. subtilis ATCC 9372를 사용하였고, 그람음성균으로서는 Sal. typhimurium, E. coli O157:H7 KSC 059 및 V. par-ahemolyticus ATCC 33844를 사용하였다. 균 생육배지는 nutrient agar를 사용하였으나, V. parahemolyticus 의 경우에는 nutrient agar배지에 \( 3 \% \) NaCl을 첨가하여 사용하였다.</p> <p>항암활성에 사용한 세포는 사람의 백혈병세포주 U-937을 \( 10 \% \) FBS를 첨가한 RPMI-1640에 \( 5 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \), \(37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 세포를 계대배양하며 실험에 사용하였다.</p> <h2>초피간장과 된장 제조</h2> <p>초피간장의 제조는 봄철과 가을철에 각각 제조를 하였다. 봄철 초피간장은 4월달에 제조를 하였으며, \( 60 \mathrm { l } \) 간장독에 물 \( 50 \mathrm { l } \), 소금 \( 17 \mathrm { ~kg } \), 메주 \( 6 \mathrm { ~kg } \)을 넣고, \( 70 \% \) 종자를 제거한 과피를 \( 4 \% \)(w/w) 첨가한 것을 2독, \( 2 \% \)(w/w) 첨가한 것을 2독, \( 1 \% \)(w / w)첨가한 것을 2독해서 총 6독을 담궜다. 그리고 가을철의 초피간장은 10월달에 제조를 하였으며 메주와 소금의 첨가량은 봄철과 동일하게 했고, 생초피를 각각 \( 16 \% \)(w/w) 첨가한 것을 2독, \( 8 \% \)(w/w) 첨가한 것을 2독, \( 4 \% \)(w/w) 첨가한 것을 2독해서 6독을 제조하였다. 충분히 발효를 시킨 다음, 메주를 건져내어 새로운 항아리에 넣고, 위에 소금을 뿌리고 발효를 시켰다.</p> <h2>물질추출</h2> <p>초피간장 6종을 각각 \( 200 \mathrm { ml } \)씩 취해 Hexane \( 1 \mathrm { l } \)로서 1 차 추출을 하고, 남은 여액은 Ethylacetate \( 1 \mathrm { l } \)로서 2차 추출을 실시했다. 추출용매는 진공회전 농축기로 농축을 한 다음 실험에 이용했다. 초피된장으로부터 물질추출은, 초피 된장 6종을 각각 \( 200 \mathrm { ~g } \) 씩 취해 Hexane \( 1 \mathrm { l } \)를 가해 180 rpm으로 24시간 진탕추출 하고, 잔존물은Ethylacetate \( 1 \mathrm { l } \)를 가해 Hexane과 동일한 방법으로 추출을 실시했다. 추출용매는 진공회전 농축기로 농축을 한 다음 실험에 이용했다.</p>