본 논문에서는 진두발 에탄올 추출물의 처리를 했을 경우의 인산화된 MAPKs의 발현량을 실험한 결과, RAW 264.7 cell에서 LPS를 통해 생성된 p-p38, p-ERK, p-JNK이 농도 의존적으로 감소한 것을 확인 할 수 있었다. 이는 진두발 에탄올 추출물 속 COHEE가 NF-KB의 활성 억제를 통해 MAPKs의 인산화를 억제한 것으로 염증 매개성 물질들의 발현을 조절하여 항염증 효과를 증명한 것이다. 또한 진두발 에탄올 추출물을 통해 귀 부종의 완화 여부를 확인한 결과, 모든 농도에서 유의적으로 귀 두께가 감소함과 동시에 합성 스테로이드제인 prednisolone을 경구 투여했을 때와 유사한 결과를 나타내었다.
<h2>MAP kinase (JNK, ERK, p-38) 발현 억제 효과</h2> <p>MAPKs는 지금까지 잘 알려진 세포 내 신호전달체계 중 하나인데 그 경로들 중 ERK, JNK/stress-activated protein kinase (SAPK), p38 MAPK가 주요한 기전으로 밝혀져 있다. 외부 자극에 반응해서 상위 MAPK kinases에 의해 인산화가 일어남으로써 활성화된다. MAPKs는 LPS나 \( \mathrm{TNF}-\alpha \) 와 같은 염증자극에 반응해 활성화되어 다른 kinase, 전사인자들이 활성화 되도록 하고 세포의 성장, 분열, 스트레스나 cytokine에 의한 세포반응을 조절한다. 이러한 인산화된 MAPKs의 발현량을 분석한 결과, RAW 264. 7 cell에서 LPS로 유도된 p-p38, p-ERK, p-JNK의 발현이 진두발 에탄올 추출물의 처리에 의해 농도 의존적으로 감소하였다. 이는 COHEE가 NF-KB의 활성 억제와 함께 MAPKs의 인산화를 억제함으로써 염증 매개성 물질들의 발현을 조절하여 항염증 효과를 나타냄을 시사한다.</p> <h2>귀부종 억제 효과 및 조직 관찰</h2> <p>진두발 에탄올 추출물이 염증반응의 하나인 부종의 완화 효과 및 조직 내의 mast cell 침윤 억제효과를 확인하기 위해 10,50 및 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 농도로 경구 투여한 후 croton oil로 염증을 유발하고 귀 두께를 측정하였다. 피부는 외부 환경에 의해 손상 된 부위를 복구시키기 위해 염증반응을 일으켜 혈 관확장, 부종 등의 대표적인 생리 현상이 발생하고 세포질 내 과립을 다량 가진 비만세포는 활성화되어 protease나 histamine 등과 같은 혈관확장 물질들을 분비한다. Croton oil은 강력한 피부 자극제로서, phorbal esters, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)와 같은 물질을 함유하고 있어 피부에 도포하면 즉각적으로 강한 급성 염증 반응을 유도하게 된다. 이와 같은 물질은 \( \mathrm{PGE}_{2} \) 및 leukotriene \(\mathrm{B}_{4}\left(\mathrm{LTB}_{4}\right) \) 의 생성을 증가시키며, 조직 내로 mast cell이나 백 혈구들의 침윤을 도와 피부의 급성염증 반응에 관여한다. 특히 혈관이 확장되고 조직 내로 면역세포들이 침윤되는 현상은 protein kinase C (PKC)의 활성에 의해 자극되는데, 이는 phospholipase A2 (PLA2)의 활성을 증가시켜 arachidonic acid의 분비를 증가시키고 prostaglandin 및 leukotriene과 같은 대사산물을 분비시킨다. 또한 면역세포로부터 pro-inflammatory cytokine 및 chemokine의 생성에 관여함으로써 피부의 급성 염증반응을 일으키게 된다. 따라서 진두발 에탄올 추출물을 도포하여 croton oil로 유발된 귀 부종의 완화 정도를 관찰한 결과, croton oil 만을 처리하여 부종이 발생한 대조군과 비교 시 COHEE 처리에 의해 모든 농도에서 유의적으로 귀 두께가 감소하였으며, 특히, 현재 사용되고 있는 합성 스테로이드제인 prednisolone을 50 \( \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 농도로 경구 투여했을 때와 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) body weight로 경구 투여 했을 때의 귀 부종 억제효과가 \( 30 \% \) 로 유사한 정도를 나타내었다. 이러한 결과는 조직 관찰 결과와 유사하였는데 조직 관찰 결과, croton oil로 부종을 유발한 마우스 귀 조직에 COHEE를 처리하였을 때 prednisolone 처리구와 유사한 정도로 경피 및 진피 두께가 얇아졌다. 또한 COHEE가 toluidine-blue 염색한 진피에서 mast cell의 침윤을 눈에 띄게 억제하였음을 확인하였다. 이는 잔가시 모자반, 외톨개 모자반을 이용한 항염증 효과에서 추출물 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) body weight 처리구에서 대조구인 prednisolone \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) body weight와 비슷한 귀부존 억제 및 조직학적으로 mast cell 침윤 억제 및 경피/진피 두께 감소 결과와 유사하다. 이 외에도 비틀대 모자반 에탄올 추출물의 항염증 효과에서 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) body weight 처리구에서 약 \( 46 \% \) 의 귀부종 완화 효과를 보고한 바 있다.</p>