본 연구에서는 분리된 유산균이 생산하는 물질이 그람 양성균을 주로 저해하는 단백질성 항균물질인지를 조사하기 위해 pH 6.5와 natural pH에서의 항균력, 열처리 및 단백질 분해효소 처리를 통해 확인하였으며 그 결과 Bifidobacterium 균이 생산하는 배양상등액 내의 항균물질의 단백질성 항균물질의 여부를 조사하기 위해 열처리 또는 단백질 분해효소처리를 하였고, S. Gallinarum, S .Enteritidis, S. Typhimurium에 대한 항균력이 우수한 8균주를 선별하였다.
<h2>저해물질의 단백질성 여부 확인</h2> <p>분리된 유산균이 생산하는 물질이 그람 양성균을 주로 저해하는 단백질성 항균물질인가의 여부를 조사하기 위하여그람양성균인 S. aureus, L. monocytogenes에 대한 naturalpH와 pH 6.5에서의 유산균 배양상등액의 항균력을 조사하였다. 10 ml cMRS에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 3일간 배양된 각 균주의 배양액을 10분간 원심분리한 후 5 N NaOH로 pH를 6.5로 조절하였다. pH를 조절하지 않은 배양상등액(natural pH)과 pH를 6.5로 조절한 배양상등액을 0.45 μm syringe filter(celluolose acetate, Advantec MFS Inc., Japan)로 각각 여과하였다. 그리고 그 여과액을 그람양성균인 S. aureus, L.monocytogenes가 중층된 agar plate에 100 μl씩 loading하여 형성된 저해환의 지름을 측정하였다.<p/><p>또한 본 연구에 사용된 Bifidobacterium 균이 생산하는 배양상등액 내의 항균물질의 단백질성 항균물질의 여부를 조사하기 위하여 열처리 또는 단백질 분해효소처리를 하였다.cMRS에서 3일간 배양된 유산균 배양액을 열처리 경우 유산균 배양액의 여과액을 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 1시간 동안 boiling하였고, 단백질 분해효소 처리 경우 pepsin과 trypsin (Sigma, USA)을유산균 배양상등액의 여과액에 1 mg/ml가 되도록 처리하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3시간 동안 반응시킨 후 S. Typhimurium이 중층된 YM agar plate상의 penicylinder에 50 μl씩 loading하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 12시간 배양한 후 저해환의 지름을 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>인수공통전염병 세균들에 대한 항균효과</h2> <p>여러 가축시료로부터 65주의 혐기성 유산균 후보균을 분리하였고, S. Gallinarum에 대한 항균력이 우수한 21주를 선별하였다. 이들 균주들을 S. Enteritidis, S. Typhimurium등에 대한 항균력도 조사하여 항균활성이 우수한 8균주를선별하였는데 이들의 S. Gallinarum, S. Enteritidis, S.Typhimurium에 대한 항균 활성을 Table 2에 나타내었다. S.Gallinarum에 대한 항균력이 있는 유산균들은 다소간의 차이는 있었지만 모두 S. Enteritidis와 S. Typhimurium에도 항균력을 나타내었다. 한편 이들 3가지 Salmonella 균에 대한 항균력이 L. pentosus K34보다 공통적으로 우수한균주는 R4, R5, R9, 3균주로 나타났는데 이들은 모두 젖소제1위에서 분리된 Bifidobacterium으로 간주되는 균주들이었다.</p> <p>Salmonella에 대한 항균력이 우수한 8균주를 ETEC, S.aureus, L. monocytogenes, C. jejuni, C. perfringens 등5종류의 다른 인수공통전염 병원균에 대한 항균력을 조사하였고 그 결과를 Table 3에 나타내었다. 여기에서도 마찬가지로 Salmonella에 항균력을 나타낸 균주들은 다소간의 차이는 있었지만 모두 Salmonella가 아닌 다른 인수공통 장내병원성 세균들에도 항균성을 나타내었다. 시험한 병원균 모두에 대해 공통적으로 L. pentosus K34보다 우수한Bifidobacterium으로 간주되는 균주로는 JS, R5, R9이었다. 조사한 균주 중에서 5가지 인수공통전염병균 모두에 가장 높은 항균력을 나타낸 균주는 R5와 R9이었는데 이들 2균주는 3종류의 Salmonella에도 역시 매우 높은 항균력을 나타내었다.</p>