양파를 진주 중앙시장에서 구입하여 수세, 탈피 및 탈수과정을 거친 후 분쇄하고 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉동고에 보관한 후 증류수로 3회 8시간 추출하여 여과 및 농축한 다음 동결건조하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉동고에 보관한 시료를 사용하여 총 페놀의 함량 분석을 Folin-Denis방법에 따라 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료제조</h2> <p>본 실험에 사용된 양파(Allium cepa L.)는 진주 중앙시장에서 구입하여 실험실로 운반한 후, 수세, 탈피 및 탈수과정을 거쳐 동결건조한 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료는 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉동고에 보관하면서 시료로 사용하였다. 양파 \( (100 \mathrm { ~g } ) \) 에 증류수 \( (500 \mathrm { ml } , 3 \) 회 \( ) \)를 가하여 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 8시간 3회 추출 한 후, 여과하였으며, 이것을 회전증발기에서 농축한 다음 농축물을 다시 동견건조한 후 포장하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관하면서 시료로 사용하였다. 이후의 분석결과는 각 시료 당 3회 반복 실시하여 그 평균값으로 나타내었다.</p> <h2>시약 및 균주</h2> <p>실험에 사용한 quercetin, myricetin, \( \beta \)-carotene, dimethyl sulfoxide (DMSO), caffeic acid, pencreatin, pepsin, a, a -diphenyl- \( \beta \)-picrylhydrazyl (DPPH), polyoxyethylene sorbitan monopalmitate (tween 40), potassium phosphate, potassium ferricyanide는 Sigma사 (USA), sodium phosphate, L-ascorobic acid는 Sinyo (Japan)사, N-m-ethyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), IQ (2-amino-3-methlimidazo [4,5-f] quinoline)는 Wako사(Japan), Salmonella typhimurium TA98과 TA100은 한 국생명공학연구원 생물자원센터 (KCTC) 로부터 구입하였으며, 용매 및 기타 시약은 특급 또는 1급을 사용하였다.</p> <h2>총 페놀 측정</h2> <p>총 페놀의 함량 분석은 Folin-Denis방법에 따라 시험관에 양파 추출물 \( 0.01 \mathrm { ~g } \) 에 Folin-Denis 시약 \( 5 \mathrm { ml } \) 를 넣어 흔합한 후, 증류수로 \( 100 \mathrm { ml } \) 정용한 다음 실온에서 30분 방치하여 \( 760 \mathrm { nM } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준곡선은 caffeic acid를 이용하여 작성하였으며, caffeic acid의 농도는 \( 1 \sim 5 \mathrm { mg } / 100 \mathrm { ml } \) 였다.</p> <h2>총 플라보노이드 측정</h2> <p>Davis 변법을 이용하여 각각 저장중인 양파 추출물 \( 0.01 \mathrm { ~g } \) 에 증류수 \( 60 \mathrm { ml } \) 를 가한 후 \( 90 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 추출하였으며, 여과하여 \( 100 \mathrm { ml } \)로 정용하였다. 여과액을 일정량 취하여 시험관에 옮긴 후 \( 90 \% \) diethylene glycol \( 10 \mathrm { ml } \) 과 \( 1 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { NaOH } 0.75 \mathrm { ml } \) 를 혼합하여 \( 420 \mathrm { nM } \) 에서 홉광도를 측정하였다. 이때 표준곡선은 quercetin (Sigma Co., USA)의 농도를 \( 0 \sim 0.5 \mathrm { mg } \) 범위가 되도록 제조하였으며, 검량 선으로부터 양파 추출물 중 플라보노이드 함량을 계산하였다.</p>