소라의 내장 1g 당 호기성 세균은 평균 1.8 x 10^5, 혐기성 세균은 0.4 x 10^10으로 계산되었다. 이 연구에서 소라 장내세균 연구에 적합한 배지는 MA로 확인되었으며, 소라 내장에서 분리한 세균은 16S rDNA 염기서열 분석을 통해 4문 12과 26속 67종으로 분류되었다. 그 중 Proteobacteria문이 가장 우세하였고, Firmicutes문, Actinobacteria문, Bacteroidetes문이 뒤를 이었다. 이 연구에서 발견된 일부 세균 종은 이전에 제주 연안 유래 해양 동물의 장내세균과 동일하게 존재하는 것으로 확인되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>소라 장내세균 분리</h2> <p>각각의 평판배지상에서 생육한 집락의 모양, 색상 등 형태학적 특징을 육안으로 구분 및 순수 분리하여 각 배 지별 \( \mathrm{CFU} \cdot \mathrm{g}^{-1} \)으로 나타내었다(Table \(1\)). 소라의 내장 \( 1 \mathrm{~g} \)당 평판배지상 호기성 세균은 평균 \( 1.8 \times 10^{5} \)으로 나타났으며, 혐기성 세균은 평균 \( 0.4 \times 10 \)으로 나타났다. 호기 배양시 최대 집락 개수는 \( 4.4 \times 10^{5} \)으로 MA 배지에서 관찰되었으며 이후 염기서열 분석 결과 또한 MA 배지에서 가장 다양한 종류의 균주가 나타났다.</p> <p>혐기 배양은 \( 0.7 \times 10 \mathrm{CFU} \cdot \mathrm{g}^{-1} \)으로 \( 1 \% \mathrm{NaCl} \)가 첨가된 BHIA 배지로 나타났다.</p> <p>소라 장내세균 다양성 연구에 최적인 배지는 MA로 나타났으며 이러한 결과는 이전 보고된 해양 동물 유래 세균의 배양학적 결과와 같았다.</p> <h2>\(16\)S rDNA 염기서열의 계통학적 분석</h2> <p>소라의 내장으로부터 분리한 세균 군집으로부터 도출된 \(16\)S rDNA 염기서열을 바탕으로 NBLAST program을 분석한 결과, \(4\)문(phyla) \(12\)과(Families) \(26\)속(Genera) \(67\)종 (Species)으로 분류되었다(Fig. \(2\)). Proteobacteria (Class: \( \alpha \) -proteobacteria \( 13 \%, \gamma \)-proteobacteria \( 26 \% \) )문이 가장 우점 하였으며, Firmicutes문 \( 34 \% \), Actinobacteria문 \( 21 \% \), Bacteroidetes문 \(6\%\)로 각각 나타났다(Table. \(2\)).</p> <p>본 연구결과에서 출현한 일부 세균군(Shewanella sp., Ruegeria sp., Vibrio sp., Bacillus sp., Mycobacterium sp.)은 이전 보고된 제주 연안 유래 해양 동물의 장내세균과 공통적으로 존재하는 것을 확인할 수 있었다.</p> <p>Proteobacteria문 중 \( \alpha \)-proteobacteria강 은 Labrenzia sp., Nitratireductor sp., Pseudoruegeria sp., Pseudovivbrio sp., Rulegeria sp., Tateyamaria sp. 총 \(9\)개 균주로 분류 되었다. 표준균주와 염기서열 상동성을 확인한 결과, \( 95-99 \% \)의 유사율을 보였다. 그 중 Pseudoruegeria sp., Ruegeria sp.는 우리나라 전 연안에 존재하는 해양 유래 세균 속으로 주로 불가사리, 오분자기, 전복에서 우점종으로 나타났으며, 본 실험에서 분리된 MS-\(19\) (P. limi, \(95\%\)), MS\(24\) (R. conchae, \(97\%\)), MS-\(94\) (R. arenilitoris, \(97\%\)) 각각 표준균주와 낮은 유사율로 나타났다.</p> <p>\( \gamma \)-Proteobacteria강 은 Agarivorans sp., Shewanella sp., Photobacterium sp., Vibrio sp. 총 \(17\)개 균주로 분류되었다. 표준균주와 \( 94-99 \% \) 유사율 범위를 보였으며, 그 중 Vibrio \( \mathrm{sp} \). 는 총 \(11\)개 균주가 분리되어 가장 우점하였다. Vibrio \( \mathrm{sp} \). 는 대부분이 해양 동물들의 주요 질병원이며, 수중 전역에 넓게 분포되어 있어 모든 해양 동물 장내세균군에서 흔히 발견된다. 특히, V. harveyi는 해양무척추동물 장내세균군의 한 종류로 출현범위가 넓고, 기회감염 을 일으키는 병원균이나 아직 소라에서 병원성 감염 사례는 보고된 바 없다. 본 실험에서 분리된 MS-\(98\)은 표준균 주 V. hanveyi와 유사율이 \( 94 \% \) 미만으로 매우 낮게 나타났다. 소라의 장내세균 중 Proteobacteria문의 우점은 해양동물 유래 세균의 대부분이 Proteobacteria문에 속하는 연구 결과와 일치한다.</p> <p>Bacteroidetes 문은 Biziomia sp., Olleya sp., Winogradskyella sp. 총 \(4\)개 균주로 모두 Flavobacteria과로 해양 유래 세균군으로 나타났다. 모두 표준균주와 \( 99 \% \)의 유사율을 보였다. Actinobacteria문은 Oerskovia sp., Mycobacterium sp., Mycolicibacterium sp., Nocardia sp., Rhodococcus sp., Streptomyces sp. 총 \(14\)개 균주로 분리되었다. 표준균주와 \(98-100 \%\)의 유사율을 보였다.<p>Firmicutes문은 Bacillus sp., Brevibacterium sp., Lysiniba-cillus sp., Paenibacillus sp. 총 \(23\)개 균주로 분리 됐으며, 표준균주와 \(93-100\%\)의 유사율을 보였다. 그 중 Bacillussp.가 15 개 균주로 가장 우점하였으며 \(96-100\%\)의 유사율을 보였다. Lysinibacillus sp.는 기존 Bacillus sp.에서 새로 분리된 속(genus)으로 아직 해양과 관련된 정보는 미비하다. 본 실험에서 분리된 MS-\(91\)균주는 발효식품에서 최초 분리된 Lysinibacillus chungkukjangi와 유사도가 \( 95 \% \)로 가장 가깝게 나타났다.</p>