\( \mathrm { p } 56 \)의 발현으로 hepatoma cell line인 Huh7 cell에 cap mediated translation과 HCV IRES mediated translation level이 모두 감소하지만 \( \mathrm { p56 } \)이 \( \mathrm { IFN } \)을 완전히 대신할 수는 없기 때문에 효과는 미미하다. NS5B의 expression 양에 따라 \( \mathrm { p56 } \)에 의해서 감소된 translation level이 dose dependent manner로 다시 회복되지만 GST를 expression 시켰을 경우에는 변화가 없다.
<p>Hepatoma cell line에서 p56의 발현에 의한 cap mediat-ed translation과 HCV IRES mediated translation의 조절</p> <p>In vitmo에서의 TNT assay와 마찬가지로 hepatoma cell line인 Huh7 cell에 reporter plasmid와 \( \mathrm { p } 56 \)이 expression 되는 plasmid를 cotransfection한 후 luciferase activity를 측정하여 translation에 있어서의 \( \mathrm { p } 56 \)의 영항을 보았다. Fig. 5A에서 보듯이 in vitro에서보다는 \( \mathrm { p } 56 \)에 의한 영향이 적지만 cell에서도 \( \mathrm { p } 56 \)의 발현에 의해서 cap mediated translation과 HCV IRES mediated translation level이 모두 감소하였다. 또한 앞서와 같은 방법으로 competitive RT-PCR을 수행해 본 결과 luciferasc의 RNA level에는 변화가 없음을 확인하였다. 이는 \( \mathrm { p } 56 \)이 translation level에서 luciferase의 activity에 영향을 주었음을 의미한다. In vitro와 비교하여 cell에서 \( \mathrm { p } 56 \)의 효과를 보기 힘든 이유는 IFN은- \( \mathrm { p } 56 \) pathway 뿐만 아니라 PKR이나 다른 pathway를 통해서도 영항을 주므로 \( \mathrm { p56 } \)이 \( \mathrm { IFN } \)을 완전히 대신할 수는 없기 때문이라 생각된다.</p> <p>In vitro에서 p56에 의한 translation down-regulation에 NS5B가 미치는 영향</p> <p>앞선 실험에서 in vitro 상에서 p56 protein이 reporter의 cap mediated translation과 HCV IRES mediated transla-tion을 down-regulation 하는 것을 보았다. 다음으로는 \( \mathrm { p56 } \)에 의한 translation down regulation이 \( \mathrm { NS5B } \)에 의해 다시 회복될 수 있는지를 알아보고자 하였다. 앞의 실험에서와 같은 방법으로 in vitro 상에서 rabbit reticulocyte에 dual reporter plasmid와 \( \mathrm { p56 } \), NS5B가 expression되는 plasmid를 넣어주고 control로 GST가 expression되는 plasmid를 넣어주어 반응을 시킨 후 luciferase activity를 측정하였다. 그 결과 \( \mathrm { p56 } \)에 의해서 감소된 translation level이 NS5B의 expression 양에 따라 dose dependent manner로 다시 회복되는 것을 볼 수 있었다. HCV IRES mediated transla-tion은 \( 100 \% \)에 가깝게 회복이 되었으며, cap mediated translation은 \( 70 \% \)정도 회복되었다. 반면 GST를 expression 시켰을 경우에는 translation level에 변화가 없음을 화인하였다. 이는 \( \mathrm { NS } 5 \mathrm { ~B } \) 가 over expression되어 \( \mathrm { p56 } \)과 \( \mathrm { p } 48 \) 과의 interaction을 방해하기 매문에 \( \mathrm { p } 48 \) 이제 기능을 할 수 있기 때문이라 생각된다.</p>