본 실험에서는 NC/Nga 생쥐로 PGA-HM과 PGA-LM의 아토피 피부염 억제작용을 확인하였는데, 양성대조군에는 FK506를 등 부위에 도포하고 실험군에는 PGA-HM과 PGA-LM를 경구 투여하여 4주 후 피부염 지수를 측정했다. 그 결과 PGA-LM은 피부염을 억제하는 효과가 있었으며, 다른 실험의 결과에서는 PGA-HM보다 IgE의 발현 효과도 뛰어남을 알 수 있었다. 따라서 PGA-LM은 IgE 매개형 아토피 피부염에 효과적일 것이다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>NC/Nga 생쥐의 아토피 피부염 억제 효과</h2> <p>아토피 동물모델인 NC/Nga 생쥐의 얼굴, 코와 등피부에 나타나는 임상 증상은 사람의 아토피 피부염과 매우 유사한 홍반, 태선화, 부종, 짓무름이 나타나며 심한 가려움을 동반한다.</p> <p>본 실험에서는 PGA-HM과 PGA-LM의 아토피 피부염 억제작용을 확인하기 위하여 NC/Nga 생쥐를 이용하여 실험하였다. 제모한 NC/Nga 생쥐의 피부에 BMAC를 도포하여 아토피 피부발진을 유발하였다. 양성대조군에는 FK506(tacrolimus) \( 0.3 \% \)를 등 부위에 도포하였고, 실험군에는 PGA-HM과 PGA-LM을 매일 \( 2 ~ \mathrm{mg} / 25 \mathrm{~g} / \mathrm{day} \)의 농도로 경구 투여한 후 4주 후 피부염 지수를 측정하였다. Fig. 2A는 12주령이 된 NC/Nga 생쥐의 등부위를 깨끗하게 제모한 사진이며, Fig. 2B는 제모한 후 BMAC를 1주간 도포한 후 사진으로 가피가 모두 벗겨지고 피부 염증이 나타나기 시작하였다. BMAC를 3주간 도포한 결과 피부염과 긁는 행동이 심화되었다. Fig. 2C는 \( 0.3 \% \)의 FK506을 도포한 것으로 대조군에 비하여 현저하게 피부 발진이 줄어 정상군에 가깝게 억제되었다. 또한 Fig. 2D는 PGA-LM을 12주부터 15주간 경구 투여한 실험군은 대조군에 비하여 긁는 행동 및 피부염 또한 현저하게 감소하였다. 그러나 PGA-HM은 상대적으로 긁는 행동은 감소하였지만 피부염은 크게 감소하지 않았다(Data not shown).</p> <p>Fig. 2E는 보는 바와 같이 BMAC를 NC/Nga mouse에 3주간 도포하고 최종 5주 후 등피부에 나타난 소양행동을 동반한 흥반, 부종, 인설, 가피, 태선화 등의 단계를 0(none), 1 (mild), 2(moderate), 3(severe)로 개체마다 평가 기록하여 피부발진 점수로 평가한 결과 대조군의 skin clinical score는 \( 5.8 \pm 0.85 \)로 BMAC를 도포하지 않은 정상군(NC/Nga-WT)의 \( 0.3 \pm 0.25 \)에 비하여 5배 이상 skin clinical score 값이 증가하였고, FK506 \( 0.3 \% \) 도포군은 \( 1 \pm 0.41 \)로 대조군에 비해 4배 이상 유의성 있게 감소하였다(\( \mathrm{p}<0.001 \)). 또한 PGA-LM을 투여한 실험군도 \( 3.2 \pm 0.71 \)로 대조군에 비해 2배 이상 유의성 있게 감소하였다(\( \mathrm{p}<0.05 \)). 그러나 PGA-HM 투여군은 \( 5.1 \pm 0.48 \)로 대조군에 비하여 약간 감소를 나타내었으나 통계학적 유의성은 없었다.</p> <h2>혈청중 immunoglobulin 측정</h2> <p>아토피는 Th2의 활성화에 기초를 둔 면역 시스템으로 특징지어진다. 즉, 미분화된 Th cell이 Th2 cell로의 분화가 과다 촉진되면서 발생한다. 이때 Th2 cell은 IL-4, IL-5, IL-13, IL-9과 IL-10 등을 생산 한다. 이중에 IL-4와 IL-13이 mouse에서는 IgE와 IgG1의 합성을 촉진하고, 인간의 경우에서는 IgE와 IgG4의 합성을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 아토피 피부염 발생시 알레르기 유발 물질을 가장 먼저 인지하는 것은 피부에 존재하는 IgE이다.</p> <p>본 연구에서 Fig. 3은 혈청내 IgE의 양과 혈장내 IgG1를 측정한 결과이다. Fig. 3A는 혈청의 IgE 양을, B는 혈장내 IgG1을 측정한 것이다. Fig. 3A에서 IgE의 양은 8주령 이후 NC/Nga 생쥐에서 자연적으로 증가되고, BMAC를 도포한 대조군은 15주에서 \( 293.5 \pm 21.2(\mu \mathrm{gg} / \mathrm{mL}) \)를, BMAC를 도포하지 않은 정상군은 \( 283.2 \pm 5.3(\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)과 큰 차이 없이 증가되었다. 그리고 3주간 FK506과 PGA-HM과 PGA-LM을 투여한 양성대조군과 실험군들은 12주 이후 감소하여 15주에는 대조군에 비하여 FK506은 \( 201.3 \pm 2.2(\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)를, PGA-LM 투여군은 \( 232.9 \pm 16.1(\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)로 혈장내 IgE 수준이 유의성 있게 감소하였다(\( \mathrm{p}<0.05 \), \( \mathrm{p}<0.01 \)). PGA-HM은 \( 265.6 \pm 30.7(\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)로 대조군과 큰 차이가 없었다. Fig. 3B에서 나타난 혈장내 IgG1의 수준(level)은 B세포가 IL-4의 반응으로 분화되어 IgE가 분비될 때 같이 증가되는 Ig로 혈장내 IgG1의 수준은 양성대조군인 FK506 도포군이 대조군에 비하여 약 3배 이상 유의성 있게 감소하였다(\( \mathrm{p}<0.01 \)). 또한 PGA-LM투여군은 대조군에 비해 IgG1 수준이 통계학적으로 유의성 없는 감소가 나타났다. PGA-HM은 대조군과 차이가 없었다.</p> <p>최근 Kotani, Matsumoto 등의 연구에서 persimmon leaf extract(감잎)과 그 추출 성분인 astragalin을 아토피성 피부발진 NC/Nga 생쥐에 투여하여 혈중 IgE와 IgG1이 현저하게 감소하였고, 조직학적, Th2 cytokine 등의 감소로 탁월한 항아토피 효과가 있다고 보고하였다. 본 실험의 결과도 PGA-HM보다 PGA-LM이 아토피 피부염의 관능평과와 더불어 IgE의 발현도 유의적인 효과를 나타내었다. 이는 PGA-LM이 IgE 매개형 아토피 피부염에 효과적일 것이라 생각된다.</p>