추출 색소의 광학특성을 알기위해 가시광선 영역( \(400 700 \) \( \mathrm { nm } ) \) 의 흡수파장 \( \left ( \lambda_ {\max } \right ) \) 을 측정하여 스펙트럼의 흡수대를 통하여 간접적으로 색소 추출물의 광학특성 및 물질을 추측하였다. 분석에 사용한 HPLC(Waters Co. USA)는 Waters 2690이었으며 JE-34 및 Serratia marcescens의 색소추출액을 시료용액으로 사용하였으며 Prodigiosin 생성은 Goldschmidt와 Williams의 방법을 이용하여 측정하였다.
<p>\( X = \frac { X } { X + Y + Z } \quad Y= \frac { Y } { X + Y + Z } \)</p> <p>추출 색소의 광학특성을 알기위해 가시광선 영역( \(400 700 \) \( \mathrm { nm } ) \) 의 흡수파장 \( \left ( \lambda_ {\max } \right ) \) 을 측정하여 스펙트럼의 흡수대를 통하여 간접적으로 색소 추출물의 광학특성 및 물질을 추측하였다.</p> <h2>색소추출액의 HPLC 분석조건</h2> <p>분석에 사용한 HPLC(Waters Co. USA)는 Waters 2690이었으며 JE-34 및 Serratia marcescens의 색소추출액을 시료용액으로 사용하였다. 분석에 사용한 column은 XTerra MS \( C_ { 18 } (5 \mu \mathrm { m } 2.1 \mathrm { ~mm } \times 150 \mathrm { ~mm } \), Waters, USA)이었으며, 이동상의 유속을 \( 0.3 \mathrm { ~mL } / \mathrm { min } \) 으로 하고 \( 100 \% \) methanol과 증류수를 이용하여 농도구배법 (10 100 \% methanol \( 60 \mathrm { ~min } ) \) 으로 두 시료의 peak를 비교분석하였다.</p> <h2>Prodigiosin-like pigment의 생성측정</h2> <p>Prodigiosin 생성은 Goldschmidt와 Williams의 방법을 이용하여 측정하였다. \( 1 \mathrm { ~mL } \) 의 배양액에 \( 2 \mathrm { ~mL } \) 의 acetone과 \( 2 \mathrm { ~mL } \) 의 산성메탄(4 mL \( 1 \mathrm { M } \mathrm { HCl } \) 과 \( 96 \mathrm { ~mL } \) methanol)을 가한 다음 \( 10,000 \times g \) 에서 \(20 \)분 동안 원심분리한 후, 상층액을 취하여 \(534 \) 와 \( 655 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>\(534 \)와 \( 655 \mathrm { ~nm } \) 에서의 두 흡광도 값의 차이 \(1 \)을 \( 19.3 \mu \mathrm { g } \) prodigiosin/mg protein으로 정의하였으며, bovine serum albumin(BSA)를 표준단백질로 이용하여 Bradford의 방법으로 정량하였다.</p> <h2>배양 특성</h2> <p>배양시간 및 배양온도에 따른 prodigiosin-like red pigment 생성균주인 JE-34의 배양 및 색소생산에 미치는 영향을 검토하기 위하여 액체배지에 전배양액을 \( 1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 로 접종하여 \( 4,15,20,25,30,35,40,50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 각각 배양하였으며, 초기 \( \mathrm { pH } \) 의 영향을 알아보기 위해 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { HCl } \) 혹은 \( 3 \mathrm { M } \mathrm { NaOH } \) 를 가하여 각각 \( \mathrm { pH } 3 \sim 12 \) 로 조정한 배지에 동일비율로 접종하여 생육도와 prodigiosin 합성량을 측정하였다. 배지조성에 의한 균생육과 prodigiosin 합성량을 측정하기 위해 기본배지인 \( \mathrm { MB } \) (marine broth, Difco. Co. USA)에 \( \mathrm { NaCl } \) 를 0 10 \% 까지 첨가하여 배양하였고, 탄소원(chitosan, soluble starch, fructose, glucose, lactose, mannitol, sorbitol, sucrose, xylose)를 각각 \( 1 \% \) 첨가하여 균성장 및 색소생산성을 관찰 하였다. 질소원은 malt extract, peptone, yeast extract, \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { NO } _ { 3 } , \mathrm { NaNO } _ { 3 } , \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { HPO } , \mathrm { KNO } _ { 3 } , \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 들을 각각 \( 0.5 \% \) 첨가하였고, 무기염류의 경우 \( \mathrm { BaCl } _ { 2 } , \mathrm { CaCl } _ { 2 } , \mathrm { CuSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { FeCl } _ { 2 } , \mathrm { HgCl } _ { 2 } , \mathrm { KCl } , \mathrm { MgCl } _ { 2 } , \mathrm { NiCl } _ { 2 } , \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } , \mathrm { ZnCl } _ { 2 } \) 를 각각 \( 0.1 \% \) 첨가한 실험구에 동일조건으로 접종하여 관찰하였다.</p>