SMYEE의 항염증 효과를 검증하기 위해 in vivo 실험을 진행하였다. 모든 결과는 SAS software를 사용하여 통계 처리하였고, SMYEE는 \( 0. 1-100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 범위에서 세포 생존율에 영향을 주지 않아 독성이 없음이 확인되었다. 이를 바탕으로 해당 농도에서의 염증 억제 활성을 확인하였다. 이 결과는 큰잎모자반 에탄올 추출물의 세포독성 실험 결과와 일치한다.
<h2>귀부종 측정 및 조직 관찰</h2> <p>SMYEE의 항염증 효과를 in vivo 상에서 알아보기 위하여 Kim 등와 Saraiva 등의 방법으로 귀부종 측정 실험을 실시하였다. 생후 8 주령의 수컷, ICR 마우스 ( \(n=5 \)) 에 SMYEE 를 10,50 및 \( 250 \mathrm { mg } / \mathrm { kg·body·weight } \) 농도로 \( 200 \mu \mathrm { l } \) 씩 단회 경구 투여하고 한 시간 후, 오른쪽 귀에 \( 2.5 \% \) croton oil을 \( 20 \mu \mathrm { l } / \mathrm { ear } \) 농도로 도포하였다. 도포 5 시간 후 귀 두께를 측정하였고 croton oil의 처리로 귀 두께가 증가한 것을 부종의 형성으로 간주하였다. 귀 조직 관찰은 ICR 마우스의 오른쪽 귀에 에탄올 추출물을 \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 \( 20 \mu \mathrm { l } \)씩 도포하고 15 분 뒤, \( 5 \% \) croton oil을 \( 20 \mu \) 씩 도포하였다. 6시간 뒤, diethylether로 마취사 시키고, 귀 조직을 절제하여 \( 10 \% \) formaldehyde에 72 시간 고정하였다. 고정 후 파라핀 블록을 만들어 박편을 제조하고 hematoxylin-eosin과 toluidine-blue 염색을 하여 조직을 관찰하였다. 부종 생성율은 다음과 같은 식에 의해 계산하였다.</p> <p>Inhibition of edema ( \( \% \) of control) = Sample의 귀 두께 / Control의 귀 두께 \( \times 100 \)</p> <h2>통계 처리</h2> <p>모든 실험 결과에 대한 유의차 검정은 SAS software (ver.9.3, SAS Institute, Inc., USA)에서 평균값을 분산분석 한 후, Duncan's multiple range test 법에 따라 \( p<0.05 \) 수준에서 검정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>RAW 264.7에 미치는 에탄올 추출물의 세포독성</h2> <p>SMYEE가 RAW 264.7 세포에 미치는 세포독성을 알아보기 위하여 농도에 따라 \( (0.1,1,10,50,100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 추출물을 처리하고 세포 생존의 변화여부를 MTT assay를 이용해 측정하였다. 그 결과, \( 0.1-100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도까지 PBS 처리군과 비교 시 유의적인 차이가 없음을 확인하였다. 이를통해 SMYEE는 \( 0.1-100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 세포 생존율에 영향을 미치지 않아 독성이 없는 것으로 사료되어 이 농도에서 염증 억제 활성을 확인하기 위한 실험을 진행하였다. 이는 큰잎모자반 에탄올 추출물의 세포독성 실험 결과, 농도 의존적으로 세포독성이 나타나지 않은 결과와 유사하다.</p>