본문은 섬바디나물 추출물이 활성산소 \( \mathrm { NO } \) 생성에 미치는 영향에 대한 연구를 보고하고 있다. LPS 처리군은 높은 \( \mathrm { NO } \) 발현량을 보였으나, 섬바디나물 추출물 처리군은 이를 감소시켰다. 또한, 섬바디나물 추출물은 LPS에 의해 증가된 iNOS와 COX-2 단백질 및 mRNA 발현량을 감소시키는 것으로 확인되었다. 특히, 섬바디나물 추출물은 대조군인 Vit. C보다 iNOS와 COX-2 발현을 더욱 억제하는 경향을 보였다.
<p>따라서 이하의 western blot 및 RT-PCR을 이용한 단백질 및 mRNA 발현 억제 실험은 대조군인 Vit. C의 세포 독성을 고려하여 Vit. C에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생존율을 보인 \( 50,100,500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도에서 실험을 진행하였다.</p> <h2>Nitric oxide (NO) 저해활성 측정 결과</h2> <p>본 연구에서는 활성산소 중 하나이며 염증 유발에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 \( \mathrm { NO } \) 생성에 대한 섬바디나물 추출물의 효과를 알아보았다. 그 결과 Fig. 2와 같이 LPS 처리군은 LPS 무처리군에 비해 높은 \( \mathrm { NO } \) 발현량을 나타내었으며, 섬바디나물 추출물을 처리한 군은 \( \mathrm { NO } \) 발현을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 가장 높은 농도인 \( 1,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 \( 31.4 \% \)의 저해율을 나타낸 것을 확인하였으며, 대식 세포주에서의 염증발현을 억제시키는 것에 섬바디나물 추출물이 효과가 있음을 확인할 수 있었다.</p> <h2>Western blot을 통한 iNOS 및 COX-2 단백질 발현 억제 효과 측정</h2> <p>염증유발 인자인 iNOS, COX-2 단백질 발현 억제 효과를 측정하기 위하여 western blot을 이용하여 실험하였다. 이때 세포의 여러 조건에서도 그 발현 정도의 차이가 거의 없는 house keeping gene인 \( \beta \)-actin을 positive control로 사용하였다. 그 결과 Fig. 3, 4과 같이 LPS에 의해 증가된 iNOS와 COX-2 단백질 발현양이 감소된 것을 확인할 수 있었으며, 대조군인 Vit. C와 비교하였을 때 대조군 Vit. C보다 섬바디나물 추출물에서 iNOS와 COX-2 단백질 발현이 더 억제되었음을 확인할 수 있었다.</p> <h2>RT-PCR을 통한 iNOS 및 COX-2 mRNA 발현 억제 효과 측정</h2> <p>염증유발 인자인 iNOS, COX-2 mRNA 발현 억제 효과를 측정하기 위하여 RT-PCR을 이용하여 실험하였다. 이때 세포의 여러 조건에서도 그 발현 정도의 차이가 거의 없는 house keeping gene인 GAPDH을 positive control로 사용하였다. 그 결과 Fig. 5,6과 같이 LPS에 의해 증가된 iNOS와 COX-2 mRNA 발현양이 감소된 것을 확인할 수 있었으며, 대조군인 Vit. C와 비교하였을 때 대조군 Vit. C보다 섬바디나물 추출물에서 iNOS와 COX-2 mRNA 발현이 유사하거나 억제되었음을 확인할 수 있었다.</p>