Biorenovation 생물 전환 기법에 사용 된 Bacillus sp. iorenovation 생물 전환 기법에 사용된 Bacillus sp. JD3-7는 genistein을 기질로 하는 생물 전환 기반 스크리닝 방법을 통해 선발되었다. HPLC 분석을 위해 Shimadzu Spectro-Monitor 3200 digital UV/Vis detector와 Shim-pack GIS C18 column (\( 5 ~ \mu \mathrm{m} \) ODS, \( 250 \times 4.6 \mathrm{~mm} \) id)을 사용하였으며 이동상은 \( 0.1 \% \) trifluoroacetic acid (TFA, SAMCHUN, Pyeongtaek, Korea)가 함유된 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) (solvent A)와 acetonitrile (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA, solvent B)를 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>미생물 배양 및 biorenovation 반응</h2> <p>Biorenovation 생물 전환 기법에 사용 된 Bacillus sp. JD3-7는 genistein을 기질로 하는 생물 전환 기반 스크리닝 방법을 통해 선발되었다. 균주의 배양은 Luria-Bertani (LB, Difco, Franklin Lakes, NJ, USA) 배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), \( 200 ~ \mathrm{rpm} \)으로 18시간 동안 수행하였으며 원심 분리(\( 4000 ~ \mathrm{rpm} \), \( 15 \mathrm{~min} \))하여 회수한 pellet을 PG buffer (\( 50 ~ \mathrm{mM} \) Phosphate buffer, \( 2 \% \) Glycerin)로 2회 세척하여 실험에 사용하였다. 이후 pellet을 PG buffer \( 100 ~ \mathrm{mL} \)에 재 현탁 한 뒤 Luteolin \( 100 ~ \mathrm{mg} \)을 첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), \( 200 ~ \mathrm{rpm} \)에서 72시간 동안 유도체의 생성을 유도하였으며 동일한 조건에서 시료를 첨가하지 않은 pellet 현탁액을 대조군(JD3-7)으로 표기하였다. 반응 종료 후 원심 분리(\( 4000 ~ \mathrm{rpm} \), \( 15 \mathrm{~min} \))하여 회수한 상등액을 \( -110{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 동결 건조하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>Biorenovation 전환물의 분석 및 정제</h2> <p>HPLC 분석을 위해 Shimadzu Spectro-Monitor 3200 digital UV/Vis detector와 Shim-pack GIS C18 column (\( 5 ~ \mu \mathrm{m} \) ODS, \( 250 \times 4.6 \mathrm{~mm} \) id)을 사용하였으며 이동상은 \( 0.1 \% \) trifluoroacetic acid (TFA, SAMCHUN, Pyeongtaek, Korea)가 함유된 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) (solvent A)와 acetonitrile (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA, solvent B)를 사용하였다. 각 시료는 solvent B의 조성을 \( 10 \% \)에서 \( 50 \% \)가 되도록 설정하여 30분간 gradient 조건으로 분석하였으며 이동상의 유속을 \( 1.0 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \), column의 온도를 \( { 40 }^{\circ} \mathrm{C} \), 파장은 \( 254 \mathrm{~nm} \)로 하였다. LC-MS의 분석에는 HR-QTOF ESI/MS in Positive ion mode ACQUITY (UPLC, Waters Corp. Milford, MA, USA)와 SYNAPT G2-si column (Waters Corp)을 사용하였으며 정제에는 동일한 분석 조건하에 Shimadzu Prominence SPD-20A UV/VIS Absorbance detector와 Luna\( { }^{\circledR} \) \( 5 ~ \mu \mathrm{m} \) C18 (2) \( 100 \mathring{A} \), LC Column \( 250 \times 10 \mathrm{~mm} \)을 사용하였다.</p>