Enteroviruses는 무균성수막염의 가장 중요한 원인 바이러스로, Nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)를 사용하여 RNA를 검출하기 위해 고안되었고, 현재 real-time NASBA는 Escherichia coli, Mycoplama pneumoniae, rabies, Hepatitis A virus등을 진단하는데 다양하게 시도되고 있다. 본 연구에서는 292건의 임상검체를 대상으로 real-time NASBA, 5'-NCR 2 step RT-PCR, 세포배양 시험을 실시하여 각 시험의 검출율, 특이도, 소요시간 등을 확인하였고, real-time NASBA가 가장 민감도가 높은 시험법임을 알 수 있었다. 따라서 real-time NASBA 시험은 enterovirus 검출에 빠르고 민감하고 특이적인 진단기술로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
<h1>고 찰</h1> <p>Enteroviruses는 무균성수막염의 가장 중요한 원인 바이러스이며, 가벼운 비특이적 열에서부터 일반적인 상기도 감염증, 심한 심근염, 뇌염, 마비성척수염(paralytic poliomyelitis)등의 매우 광범위한 질환의 원인이 되는 바이러스이며, 구강 항문 루트로 전퐈되어 혈관을 통해 목적장기로 이동한다. Enteroviruses는 보통 높은 유병율과 낮은 치명율을 특징으로 하는 self-limited disease의 원 인이 된다. Enteroviruses 감염증을 다른 세균감염과 신속하게 구별하여 진단하는 것은 다른 진단 검사의 불필요, 입원기간의 단축과 항생제 남용을 예방할 수 있어 중요하다.</p> <p>Nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)는 avian myeloblastosis virus reverse transcriptase, RNase H, T7 RNA polymerase등의 효소가 일정한 온도에서 동시에 반응하는 하는 원리를 사용하여 RNA를 검출하기 위하여 고안 되었고, 이후로 특이적인 molecular beacon probe를 사용하여 별도의 전기영동 없이 증폭되는 과정을 실시간으로 볼 수 있다는 장점을 가진 real-time NASBA로 발전되었다. 현재 real-time NASBA는 Escherichia coli, Mycoplama pneumoniae, rabies, Hepatitis A virus등을 진단하는데 다양하게 시도되고 있다. 한편, enterovirus의 경우 무균성수막염 환자의 뇌척수액에서 RNA 검출을 위하여 real-time NASBA시험법을 적용한 결과 RT-PCR 시험법과 비슷한 민감도를 나타낸다는 보고와 바이러스 배양법보다 민감도가 높다는 보고 등이 알려져 있다.</p> <p>본 연구에서는 무균성수막염이 의심되는 환자의 뇌척수액 외 대변, 인후도찰물 등의 다양한 검체에서 real-time NASBA 시험법을 적용하고 현재 enterovirus 진단에 많이 사용되는 \( 5 ^ {\prime } \)-NCR 2 step RT-PCR 시험 및 세포배양 시험을 비교 실험하여 각 시험의 검출율, 특이도, 실험수행 시 편리성, 시험 소요시간, 교차오염 가능성 등을 확인하였다. 본 연구에서는 대변 197 건, 뇌척수액 69건, 인후도찰물 26건을 포함하여 총 292건 임상검체를 대상으로 시험하였으며 그 결과 real-time NASBA에서 145건, 세포배양에서 101건, 5'-NCR 2 step RT-PCR에서 86건이 양성으로 나타나 real-time NASBA가 가장 민감도가 높은 시험법임을 알 수 있었다. 모든 5'-NCR 2 step RT-PCR 양성검체와 세포배양 양성검체는 real-time NASBA에서도 양성으로 나타났고 46건의 검체에서는 모든 실험에서 양성으로 나타났다.</p> <p>세포배양과 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험결과를 비교하면 2 step RT-PCR에서 양성이고 세포배양에서는 음성인 검체는 40건이었다(Table 3). 이에 유전자형 확인을 위하여 VP1 re-gion을 target으로 하는 RT-PCR 산물로 염기서열을 분석하였다. 그 결과 세포배양에서는 잘 자라지 않는 특성을 가진 cox-sackievirus CA4형 1건과 \( \mathrm { CB } 3 \) 2건, \( \mathrm { CB } 5 \) 4건, echovirus \( \mathrm { E } \) 9형 3건, E18형 27건, E30형 1건, untypable enterovirus 2건으로 각각 나타났다. 이는 검체의 취급과정 중에 바이러스의 vital-ity가 떨어져 세포배양에서는 자라지 않으나 2 step RT-PCR 시험은 바이러스의 활력과 관계없이 RNA가 증폭되는 특성의 차이로 사료되어진다.</p>