Chondromyces 속에 속하는 점액세균은 다른 점액세균에 비해 소수의 균주가 야생으로 순수 분리되었다. 특히 Chondromyces crocatus는 동반 세균 없이 완전히 순수 분리된 것으로 확인된 균주가 극소수이나, 이러한 균주들로부터 여섯 종류 이상의 생리활성물질이 분리되었다. Chondromyces 속에 속하는 점액세균의 분리에 대한 보고가 국내에 전무하여, 본 연구에서는 국내 여러 지역에서 채취한 토양으로부터 Chondromyces 속 균주로 보이는 균주를 분리하고자 하였고, 그 결과 동반 세균이 완전히 제거된 C. crocatus KYC2823을 최종적으로 순수 분리하였다.
<h1>서 론</h1> <p>점액세균은 다세포 자실체를 형성하는 그람음성 토양세균으로 다양한 생리활성물질을 생산하는 것으로 잘 알려져 있다. 점액세균은 종에 따라서 다양한 형태의 다세포 자실체를 형성하는데, Chondromyces crocatus는 점액세균 중에서도 가장 복잡하고 아름다운 다세포 자실체를 형성하는 종이다. 전 세계적으로 Chondromyces 속에 속하는 점액세균들은 Myxococcus, Corallococcus, Sorangium 등의 점액세균에 비해 소수의 균주가 야생으로부터 순수 분리되었으며, 특히 C. crocatus의 경우에는 분리하는 과정에서 Sphingobacterium과 유사한 동반 세균이 항상 함께 분리되는 까닭에 분리된 균주들 중에서도 동반 세균 없이 완전히 순수하게 분리된 것으로 확인된 균주들은 극소수이다. 이중 C. crocatus의 새로운 표준균주로 제안된 균주 Cm c5는 1988년 독일 연구팀에 의해 브라질 이과수 부근의 열대우림에서 채취된 토양에서 분리된 균주로 성장에 동반 세균을 필요로 하지 않는다. 분리된 균주 수는 많지 않아도 C. crocatus에 속한 균주들로부터 ajudazol, chondramide, chondrochloren, crocacin, crocapeptin, thug-gacins 등 여섯 종류 이상의 생리활성물질이 분리되었다. 이 중, ajudazol과 crocacin는 진핵생 물의 전자전달계 저해제이며, thuggacin은 Mycobacterium tuberculosis에 항균활성을 갖는 항생 물질이고, chondramide는 진핵생물의 actin cytoskeleton의 기능에 영향을 미치는 물질이다. 이러한 물질의 중요성이 인식되면서 최근에 ajudazol, chondramide, chondrochloren의 생합성 유 전자들이 클로닝되었다.</p> <p>국내에서는 그 동안 C. crocatus 을 포함하여 Chondro-myces 속에 속하는 점액세균의 분리에 대한 보고가 전무하였다. 따라서 본 연구에서는 국내 여러 지역에서 채취한 토양으로부터 Chondromyces 속 균주로 보이는 균주를 분리하고자 하였으며, 그 결과로 동반 세균과 함께 존재하는 여섯 균주의 C. crocatus 추정 균주들을 분리할 수 있었다. 그리고 여러 분리 단계를 거쳐 이들 중 동반 세균이 완전히 제거된 C. crocatus KYC2823을 최종적으로 순수 분리할 수 있었다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용 배지 및 배양 조건</h2> <p>C. crocatus의 분리를 위해서 ST21 평판배지 표면에 Escherichia coil MC4100 생균을 도말한 배지(STE)를 사용하였으며, 자실체 형성 유도를 위해서는 WC 배지 표면에 E. coli 생균을 도말한 배지(WCE)를 사용하였다. 일반적인 배양에는 CY 평판배지를 사용하였고, 배양은 \( 32 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 이루어졌다.</p> <h2>Chondromyces 균주들의 분리</h2> <p>전국 각지에서 채취한 소량의 토양시료를 cycloheximide가 \( 300 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \)의 농도로 들어있는 STE 평판배지(STEX) 위에 올려놓고 \( 32 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 한 달간 배양한 후, 배지 상에 형성된 C. crocatus 특유의 자실체를 멸균된 바늘로 새 STE 배지로 옮기고, \( 32 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 2주간 배양함으로써 균주들을 일차적으로 분리하였다. 이때, 일차 분리된 균주가 동반 세균 이 외의 다른 미생물들에 오염되어 있는 경우에는 이 과정을 1회 더 반복하였다. 이후, 일차 분리된 균주의 집락 모서리 세포를 새로운 STE 배지에 옮김으로써 동반 세균을 제거하고자 하였으며, 동반 세균이 제거된 균주를 CY 배지에서 단일 집락으로 분리함으로써 최종적으로 순수 분리된 균주를 얻을 수 있었다. 일차 분리된 균주들과 최종 분리된 균주는 점액세균은행 (www.myxobank.or.kr)에서 보관 관리되고 있다.</p>