함초의 채취시기에 따른 아미노산 분석은 아미노산 자동분석기를 통해 분석하였으며, mineral 함량 측정은 고주과 플라즈마법으로 측정되었다. 다음으로 betaine 함량 측정은 HPLC system 조건과 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 이용하였다. 마지막으로 물 추출물의 DPPH법에 의한 항산화 활성 측정에서는 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 감소량이 이용되었다.
<h2>함초의 채취시기에 따른 아미노산 측정</h2><p>채취 시기별 함초의 유리 아미노산 분석은 분말시료 \( 1 \mathrm{~g} \)을 \( 20\) \( \mathrm{ml} \)로 정용하여 \( 30^{\circ}\mathrm{C} \) 항온수조에서 20분 진탕한 후 \( 16,000 \mathrm{rpm} \)에서 20분간 원심분리 하여 얻은 상등액 \( 10\) \( \mathrm{ml} \)에 sulfosallicylic acid \( 25\) \( \mathrm{mg} \)을 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 방치한 후 원심분리 하여 얻은 상등액을 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과하여 아미노산 자동분석기(Pharmacia Biotech Biochrom 20 , USA)를 이용하여 분석하였다. 구성 아미노산 분석은 분말 시료 \( 200\) \( \mathrm{mg} \)을 가수분해용 시험관에 취하여 \( 6 \mathrm{~N}-\mathrm{HCl} \) \( 2 \sim 3 \mathrm{ml} \)을 가하여 탈기한 후 질소가스로 충진 시키면서 밀봉하여 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 가수분해 시키고, 반응이 종료된 시료를 개관하여 염소를 제거 시키고 \( 0.2 \mathrm{~N} \)-sodium citrate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 2.2)에 용해시켜 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과하여 아미노산 자동분석기를 이용하여 분석하였다. Betaine 정량 분석을 위한 HPLC system은 pump (Waters 510), manual injector (Rheodyne 7725), column oven (Waters CHM), RI detector (Waters 410)로 구성하였으며, carbohydrate column \( (7.8 \mathrm{~mm} \times 300 \mathrm{~mm} \), Bio-rad \( ) \)을 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 사용하여 분석하였고, 이동상 용매는 물을 사용하여 유속 \( 1.0 \) \( \mathrm{ml} / \mathrm{min} \), 시료 주입량은 \(10\mu \mathrm{m} \)로 측정하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 mineral 함량 측정</h2><p>함초의 채취 시기별 미네랄 함량은 고주과 플라즈마법으로 측정하였다. 즉, 함초 각 분말 시료를 회분 처리한 후 \( \mathrm{HNO}_{3}\) \(3 \mathrm{ml} \) 과 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\) \(0.1 \mathrm{ml} \) 를 테프론 가압용기에 넣고 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 동안 산 분해 시킨 후 산을 제거하여 약 \( 1 \sim 5 \% \) 정도의 \( \mathrm{HNO}_{3} \) 농도로 만들어 ICP-MS spectrometry SPQ 9000 (Inductively Coupled Plasma, Jobin Yvon Co., France)으로 측정하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 수용성 추출물의 betaine 함량 측정</h2><p>함초의 각 채취 시기별 분말을 증류수에 \( 10 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 농도로 첨가한 후 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 1시간 동안 진탕한 후 \( 12,000 \mathrm{rpm} \) 에서 20분간 원심분리 하여 상등액을 얻고, 이를 \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) syringe filter로 여과하여 Table 1과 같은 HPLC system 조건으로 betaine을 정량하였다. 이때 betaine 표준 용액은 \( 0.125 \%, 0.25 \%, 0.5 \% \) 및 \( 1.0 \% \) 농도로 하여 직선상의 검량선을 작성하였고, 함초 수용성 추출물의 betaine 함량은 표준용액의 betaine 유지시간과 일치하는 peak의 면적을 적분하여 정량하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 물 추출물의 DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2><p>DPPH (\(\alpha\),\(\alpha\)\({'}\)-diphenyl-\(\beta\)-picrylhydrazyl) 용액의 조제는 에탄올 \( 100 \mathrm{~ml} \)에 DPPH \( 16 \mathrm{mg} \) 을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 에 여과(Whatman filter paper NO. 2)시켜 제조하였다. 이 용액 \( 5 \mathrm{ml} \)에 각 시료 \( 2 \% \) 추출 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)을 혼합한 후 실온에서 30분간 반응시킨 다음 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 이때 대조구인 BHT는 \( 0.05 \% \) 농도로 첨가하여 위에서와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH를 이용한 전자공여능(EDA: electron donating activ-ity은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율(\(\%\))로 표시하였다.</p><p>\[\operatorname{EDA}(\%)=\{1-(\text { Abs } / \mathrm{Abc})\} \times 100\]</p><p>Abc : Absorbance of control treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p><p>Abs : Absorbance of sample treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p>