본 연구에서는 항진균 활성 테스트를 위해 액체 배지에서 배양한 균주의 탁도를 조절하고 Potato Dextrose Agar (PDA) 배지에 대체하여 배양하였다. BCNU 315 균주는 식물병원균에 대한 강력한 항진균 활성을 보여주며, 약 \( 5 \mathrm{~mm} \)의 환을 형성하였고, 계통 분석 결과로서 BCNU 315는 Pandoraea norimbergensis와 \(99\%\)의 유사성을 보여주어 Pandoraea sp. BCNU 315로 명명하였다. 실험에서는 다양한 탄소원 중에서 sucrose가 최적의 생육 원료로 나타났으며, lactose는 다른 탄소원에 비해 생육이 다소 저하되었다. 생리-생화학적 특성을 비교-분석한 결과, BCNU 315 균주는 Pandoraea norimbergensis와 매우 유사하여 Pandoraea sp.로 동정하였다.
<h1>결 과</h1> <h2>균주의 항진균 활성능</h2> <p>분리 시 항진균 활성능이 뛰어난 균주를 중심으로 선별하였다. 항진균 활성 테스트는 18~24시간 동안 액체 배지에서 배양한 균주의 탁도를 \(0.7\)~\(0.8\)로 맞추고, Potato Dextrose Agar (PDA) 배지에 대치 배양하였다. 대상으로 한 식물병원균주 Rhizoctoria solani AG2-1, Botrytis cenerea, Fusarium oxysporum을 대치시켜 놓고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 환이 생길 때까지 관찰하였다. BCNU 315균주는 식물병원균주에 대한 항진균 활성이 뛰어났으며 접종 균사체로부터 약 \( 5 \mathrm{~mm} \)의 환을 보였다.</p> <h2>분리 균주의 생리 및 생화학적 동정</h2> <p>선발된 균주의 생리 및 생화학적 성질은 Table 1에 정리하여 놓았다. 균주는 그람 음성이며, catalase 활성이 있으미, phe-nylacetate 자화능이 있고, alkaline phosphatase 활성도 양성으로 나타나 기존에 발표된 논문에서 보여주는 Pandoraea sp.의 생리-생화학적 성질과 유사한 특성을 가지고 있는 것을 알 수 있었다. 발표된 논문에 의하면 Pandoraea norimbergensis의 특징은 \( 42^{\circ} \mathrm{C} \)에서 생육하지 않으며, King's B medium에서 형광을 띄지 않으며, 탈질 반응 음성이며, acetamide 또는 \( 4.5 \% \) \( \mathrm{NaCl} \)에서 생육하지 않는 점이다. 그리고 maltose, adipate 또는 sucrose 자화능 음성, cysteine arylamidase와 phosphoami-dase 활성 음성이다. 생리-생화학적 성질을 비교-분석 하였을 때 BCNU 315 균주는 Pandoraea norimbergensis와 매우 유사하므로 Pandoraea sp.으로 동정하였다.</p> <h2>선별균주의 16S rDNA 염기서열에 기초한 동정</h2> <p>분자유전학적으로 동정하기 위하여 분리 균주의 16S rDNA 염기서열을 NCBI BLAST를 통해 상동성을 조사하였고, ClustalX program을 이용하여 bootstrap consensus tree를 작성하였다. 그 결과, Fig. 2에 나타낸 바와 같이, BCNU 315는 Pandoraea norimbergensis와 \(99\%\) 상동성을 보였으며, 계통수에서도 같은 위치를 점하고 있음을 알 수 있었기에 Pandoraea sp. BCNU 315로 명명하였다.</p> <h2>최적 질소원과 탄소원</h2> <p>선발균주의 생육에 미치는 질소원의 영향을 조사하기 위하여 최소배지를 기본배지로 하여 각종 질소원을 \( 0.5 \% \) 되도록 첨가하여 배양한 후 균체의 증식을 조사하였다. 실험에 사용한 여러 가지 질소원 중에서 tryptone이 증식을 위한 최적 진소원이었으며, urea나 malt extract에서는 균체 외 증식이 거의 일어나지 않았다.</p> <p>균주의 증식에 미치는 탄소원의 영향을 조사하기 위하여 최소배지에 최직 질소원인 \( 0.5 \% \) tryptone을 고정하여 여러 가지 탄소원을 \(1\%\) 되도록 첨가하여 배양한 후 탁도를 측정하였다. 실험에 사용한 각종 탄소원 중에서 sucrose가 생육을 위한 최적 반소원이었으며, lactose는 다른 탄소원들에 비해 생육도가 다소 떨어지는 현상을 나타내었다.</p> <h2>최적 \( \mathrm{pH} \) 및 온도</h2> <p>초기 \( \mathrm{pH ~3, 4, 5, 6, 9, 10}\)으로 조정한 후 Pandoraea sp. BCNU 315를 접종 배양하여 생육도를 검토한 결과 Pandoraea sp. BCNU 315 균주는 Fig. 3과 간이 초기 \( \mathrm{pH} 7 \), \( \mathrm{pH} \mathrm{8} \)에서의 생육이 크게 다를게 없이 줗았던 반면 초기 \( \mathrm{pH ~3, 4, 5, 6, 9, 10}\)에서는 생육도가 떨어졌다.</p>