대추 및 포도의 발효물들의 세포 배양을 위해 DMEM 배지를 사용하였고, 세포 독성 측정은 Carmichael 등의 방법에 따라 측정하였으며, 항산화 활성효과를 측정하여 평가하였다.
<h2>세포 생존율 측정</h2> <p>대식세포(RAW 264.7) 및 멜라노마세포(B16F10)는 한국세포주은행(KCLB)에서 분양 받았으며, 세포배양을 위해 \( 10 \% \) fetal bovine serum과 \( 1 \% \) penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지를 사용하였다. 세포는 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 조건에서 배양하였으며, 세포 독성 측정은 Carmichael 등의 방법에 따라 측정하였다. 이 방법은 MTT가 formazan으로 전환되는 것을 측정하는 것으로, RAW 264.7 세포와 B16F10세포 \( 0.6 \sim 0.8 \times 10^{3} \) cells \( / \mathrm{ml} \)를 96 well plate에 분주하고 대추 및 포도의 발효물을 농도별 \( (0.01-5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)로 24시간 동안 처리하였다. Well당 \( 20 \mu \mathrm{l} \)의 MTT용액을 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 4시간 동안 반응시킨 후, microplate reader를 이용하여 \( 540 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포생존율을 백분율로 표시하였다.</p> <h2>항산화 효과 측정</h2> <p>대추 및 포도의 발효물들의 항산화 활성은 DPPH anion scavenging activity, superoxide anion radical scavenging activity, ABTS\(^+\) cation scavenging activity를 측정하여 평가하였다. 먼저 DPPH anion scavenging activity에 대한 실험은 기존에 보고된 방법을 변형하여 96 well plate에 맞게 수정하여 측정하였다. 각 시료용액 \( 800 \mu \mathrm{l} \)에 \( 0.15 \mathrm{mM} \)의 DPPH 용액 \( 200 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 교반한 후 30분간 방치한 다음 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며, 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다. Superoxide anion radical scavenging activity의 경우, NBT 환원방법에 의해 측정하였다. 각 시료 용액 \( 100 \mu \mathrm{l} \)와 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.5)\) \(400 \mu \mathrm{l} \)에 xanthine \( (0.4 \mathrm{mM}) \)을 녹인 기질액 \( 400 \mu \mathrm{l} \)와 \( \mathrm{NBT}(0.24 \mathrm{mM}) \)를 첨가하고 xanthine oxidase \( (0.2 \mathrm{U} / \mathrm{ml}) 100 \mu \mathrm{l} \)를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 반응 시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} 1 \mathrm{ml} \)를 가하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액 중에 생성된 superoxide anion radical의 양을 \( 560 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 또한, ABTS\(^+\) cation scavenging activity 측정은 \( 7 \mathrm{mM} \) 2,2-azino-bis (3-ethyl-benthiazoline-6-sulfonic acid)와 \( 2.4 \mathrm{mM} \) potassium persulfate를 혼합하여 실온에서 24시간 동안 방치하여 ABTS\(^+\)를 형성시킨 후 ethanol로 희석하여 ABTS\(^+\)\( 100 \mu \mathrm{l} \)에 시료 \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 가하여 1분 동안 방치한 후 \( 732 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p>