이 연구에서는 전남 광주에서 생산된 2009년산 녹차를 사용하였다. 휘발성 향기 성분의 추출은 Likens and Nickerson형 동시증류추출장치를 이용하였고, 이를 Shimadzu GC-17A gas chromatography를 통해 분리하였다. 추출된 휘발성 성분은 mass spectral library data와 Wiley/NBS Registry of Mass Spectral Data, Eight Peak Index of Mass Spectra를 통해 정성분석 하였으며, 표준물질의 머무름 시간 \( t_{\mathrm{R}} \)를 활용하여 정성분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험의 재료로 사용된 녹차는 전남 광주의 H제다에서 생산한 2009년산 중작 녹차를 사용하였으며, 수확시기가 늦은 녹차를 증기로 쪄서 제조한 증제차이다. 온주밀감(C. unshiu)은 2009년 국내산(제주)을, 유자는 2009년 경남 거제지역에서 수확된 것을 부산소재의 대형 마트에서 구입하여 사용하였다. 밀감과 유자 생과는 여러 번 수세 후 얇게 슬라이스하여 dry-oven에서 밀감은 \( 50^{\circ} \mathrm{C}\)-14시간, 유자는 \( 50^{\circ} \mathrm{C}\)-24시간 동안 각각 건조한 후, \( -10^{\circ} \mathrm{C} \) 동결고에 보관하면서 실험에 사용하였다. 밀감-녹차 및 유자-녹차는 건조된 밀감 및 유자를 각각 녹차와 \( 1:1(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)로 혼합한 것을 사용하였다.</p> <h2>향기성분 농축물의 제조</h2> <p>휘발성 향기성분의 추출에는 Likens and Nickerson형 동시증류추출장치(SDE)를 사용하였다. 즉, 분쇄한 시료 각 \( 50 \mathrm{g} \)과 증류수 \( 1,000 \mathrm{ml} \)를 동시증류추출장치의 시료플라스크에 넣고 내부 표준물질로서 tridecane을 \( 3 \mathrm{\mu l}\) 첨가한 후 용매플라스크에는 정제한 diethyl ether \( 50 \mathrm{\mu l} \)와 비등석을 넣고, 1시간 30분 동안 가열◦환류하면서 휘발성 성분을 추출하였다. 추출 후 얻어진 에테르 추출물은 무수 황산나트륨을 가해 하룻밤 탈수 후, 상압 \( (38 \)-\(40^{\circ} \mathrm{C}) \)에서 diethyl ether를 제거, 농축한 후 휘발성성분 농축물을 얻었다.</p> <h2>향기성분의 분석 및 동정</h2> <p>동시증류장치에 의해 얻어진 휘발성 성분 농축물은 Shimadzu GC-17A (Osaka, Japan) gas chromatography에 의해 휘발성성분을 분리하였다. 휘발성 성분의 검출에는 FID(불꽃이온화 검출기), 칼럼은 HP-5MS capillary column (\( 30\mathrm{m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \text{ i.d.} \times 0.25 \mu \mathrm{m} \) film thickness : J \& W Scientific, USA)을 사용하였으며, 칼럼온도는 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 8분간 유지시킨 후 \( 220^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 2^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \)의 속도로 승온 하였으며, GC의 주입부는 \( 220^{\circ} \mathrm{C} \)를 유지하였다. 운반기체로는 질소가스를 칼럼 내 유속은 \( 1 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \)으로 유지하였다. GC-MS 분석 장치는 HP6890과 HP 5973 Mass Selective Detector (Palo Alto, interface 온도는 \( 200^{\circ} \mathrm{C} \), mass range는 \( 25 \)-\( 450 \mathrm{~m} / \mathrm{z} \), linear velocity는 \( 40 \mathrm{~cm} / \mathrm{sec} \), multiplier voltage는 \( 1500 \mathrm{~V} \), ionization voltage는 \( 70 \mathrm{eV} \)로 설정하고, 운반기체로는 헬륨가스를 사용하였으며, 그 이외 칼럼의 온도를 비롯한 분석조건은 GC의 분석조건과 동일하게 설정하였다. 휘발성성분의 동정은 mass spectral library data에 의한 검색, Wiley/NBS Registry of Mass Spectral Data, Eight Peak Index of Mass Spectra에 의한 문헌의 질량분석 데이터검색으로부터 물질을 추정하고, 표준물질의 머무름 시간 \( ( \left.t_{\mathrm{R}}\right) \)의 일치에 의해 정성분석 하였다.</p>