AQP4 cDNA sequence에서 예상된 phosphoylation consensus sequence 중에서 특히 loop B의 phosphoylation site는 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent kinase의 영향을 받을 수 있다. 이를 통해 AQP4 water channel의 활성 조절이 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent kinase에 의해 이루어질 수 있음을 탐색하였다. 실험에서는 세포 내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 농도를 변화시켜 보았고, 그 결과 BAPTA/AM 전처리 후 AQP4 cRNA가 표현된 oocyte에서의 수분 투과도가 \( 100 \mu \mathrm { M } \)에서는 약 50%, \( 500 \mu \mathrm { M } \)에서는 약 70% 감소함을 확인하였다.
<p>AQP4 cDNA sequence에서 예견되는 phosphoylation consensus sequence 중 특히 loop B에 있는 phosphoylation site는 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin-dependent kinase의 작용을 받는 부위일 가능성이 높다. 따라서 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } / \) calmodulin- dependent kinase가 AQP4 water channel의 활성 조절에 관여하는 지를 알아보기 위헤 먼저 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 농도를 변화시켜 보면서 \( \mathrm { Ca } ^ { 2- } \) 농도변화가 oocyte swelling의 초기속도를 변화시키는지 관찰하였다. 즉, \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \)-free solution에서 세포내로 들어가 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 을 chelating 시키는 BAPTA/AM을 처리하여 세포내의 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 을 고갈시켜 보면서 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 농도가 AQP4 water channel의 활성에 미치는 효과를 알아 보았다(Fig. 4). BAPTA/AM (1,2-bis (2-aminophenoxy) ethan -N, N, N', N'-tetraacetic acid) \( 100 \mu \mathrm { M } \) 을 30분간 전처치한 경우 AQP4 cRNA expressed nocyte의 수분 투과도가 \( 50 \% \) 정도 억제되었으며, BAPTA/ AM 농도를 \( 500 \mu \mathrm { M } \) 까지 중가시킴에 따라 수분 투과도가 \( 70 \% \) 로 억제됨을 관찰하였다. 이와 같이 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2- } \) 이 고갈됨에 따라 AQP4 water channel을 퉁한 수분 투과도가 감소되는 결과는 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 농도가 AQP4 water channel의 활성에 유의한 영향이 있음을 시사한다. 한편 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) 함유하고 있는 용액에 \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } \) ionophore인 ionomycin ( \( 4 \mu \mathrm { M } \)) 을 10분전처치 하여 세포내 \( \mathrm { Ca } ^ { - + } \)농도를 증가시킬 경우 AQP4 water channel을 통한 수분 투과도가 증가됨으로써 이와 같은 사실을 더욱 뒷받침해 주었다(Fig. 6).</p>