인체 헐구암세포주 U937, 생쥐 대식세포주 RAW 264.7, 생쥐 신경아종세포주 NB41A3, 인체 간암세포주 HepG2, 큰쥐 신경교세포주 C6는 RPMI 1640 또는 DMEM 배지에 10% FBS와 penicillin-streptomycin을 포함하여 37\(^\circ \mathrm{C}\), 5% CO2 조건에서 배양하였다. 갈파래(Ulva lactuca)는 증류수로 수세, 정선 및 탈수과정을 거친 후 80% ethanol로 8시간 추출하여 Whatman NO.3 여과지로 2회 여과하여 농축하여 분획물을 제조하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>세포주, 배지 및 배양</h2> <p>인체 헐구암세포주 U937과 생쥐 대식세포주 RAW 264.7은 \( 10 \% \) feal bovine serum (Bio Whittaker, Walkersville, MD, USA)과 penicillin-streptomycin (100 units/ml, Bio Whittaker)을 포함하는 RPMI 1640 (Bio Whittaker)배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 에서 배양하였다. 생쥐 신경아종세포주 NB41A3, 인체 간암세포주 HepG2, 큰쥐 신경교세포주 C6는 \( 10 \% \) feal bovine serum (Bio Whittaker)과 penicillin-streptomycin (100 units/ml)을 포함하는 Delbecco's modified eagle medium (DMEM) 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 에서 배양하였다.</p> <h2>분획물의 제조</h2> <p>갈파래(Ulva lactuca)는 부산 광안동 수변공원에서 채취하여 증류수로 수세, 정선 및 탈수과정을 거쳐서 건조시킨 후 분쇄한 시료 무게의 10 배량 \( ( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) 의 \( 80 \% \) ethanol로 약 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 8 시간 동안 추출을 행하였으며, 추출액은 Whatman NO.3 여과지(Whatman International Ltd., Maidstone, England)로 2회 여과하였다. 이를 butanol, ethyl ether, hexane, methanol, \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 등을 이용하여 Fig. 1에 나타낸 방법 으로 분획을 행한 후, 농축하여 분획물을 제조하였다.</p> <h2>MTT 분석법을 통한 암세포에 대한 세포독성 측정</h2> <p>MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MI, USA) 제품을 이용하였다. 배양된 인체 혈구암세포주 U937, 생쥐 신경 아종세포주 NB41A3, 인체 간암세포주 HepG2, 큰쥐 신경교세포주 C6를 96-well plate (Roche Inc., Indianapolis, IN, USA)에 \( 180 \mu \) 씩 분주하고, 갈파래 분획물들을 phosphate-buffered saline (PBS, Bio Whittaker)에 희석하여 \( 20 \mu \) 씩 첨가하였다 (최종농도: 0.5, \( 0.1,0.01 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) ). 대조군은 갈파래 분획물 대신 동량의 \( \mathrm { PBS } \) 를 가하였다. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 에서 48시간 추가 배양한 후 배양액을 제거하고 MTT \( (5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) in \( \mathrm { PBS } ) \) 용액을 \( 100 . \mu \mathrm { l } \) 씩 가하고 \( ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 에서 4 시간 동안 배양하였다. 이 후 DMSO \( 100 \mu \ell \) 를 넣고 \( 37 ^ {\circ } mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 에서 \( 10 \sim 15 \) 분 동안 반응시킨 후 발색정도를 Synergy HT Multi-detection microplate reader (Biotek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA)를 이용하여 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 의 파장에서 OD값 으로 측정하였다.</p>