C . butyricum KCTC 1785를 KTCC로부터 분양 받아 사용하고, Clostridium acetobu-tylicum (CAB)배지를 사용하여 균주의 성장을 촉진하였다. 30종류의 천연산물을 소화에 도움되는 처방 중에서 생체를 보하는 기능, 해독작용, 수렴, 조혈 작용, 항균작용을 가지는 것으로 선택해 사용했다. 천연산물에 3차 증류수를 넣고 열수 추출한 후 농축해 추출액을 만들었고, 여러 천연산물을 조합할 때는 각각의 천연산물을 같은 비율로 조합한 혼합액을 사용한다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주</h2> <p>장내 유용 균주로는 C. butyricum KCTC 1785를 KTCC로부터 분양 받아 사용하였다.</p> <h2>재료 및 시약</h2> <p>균주의 성장에 필요한 배지로서는 Clostridium acetobu-tylicum (CAB)배지 (yeast extract \( 4.0 \mathrm { ~g } \), tryptone \( 1.0 \mathrm { ~g } \), \( \mathrm { K } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } ~1.5 \mathrm { ~g } \), asparagine \( 0.5 \mathrm { ~g } , 0.2 \% \) resazurin \( 1.0 \mathrm { ~mL } \), \( \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 ~ \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~0.1 \mathrm { ~g } , \mathrm { MnSO } _ { 4 } \cdot \mathrm { H } 2 \mathrm { O } ~0.1 \mathrm { ~g } , \mathrm { NaCl } ~0.1 \mathrm { ~g } \), glucose \( 30 \mathrm { ~g } \), distilled water \( 1.0 \mathrm { ~L } , \mathrm { pH } ~5.4 \))를 사용하였고, \( 250 \mathrm { ~mL } \)의 flask에 \( 100 \mathrm { ~mL } \)의 배양액을 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \(150 \mathrm { rpm } \)으로 교반하면서 배양하였다.</p> <h2>천연산물의 선별</h2> <p>천연산물의 선별은 동의보감(東醫寶鑑), 증맥 - 방약합편(證脈·方藥合編), 한방처방의 구성과 적용(韓方處方의 構成과 適用), 도해상용한방처방(圖解 常用漢方處方), 현대한방강좌(現代韓方講座), 현대생약학(現代生藥學) 등의 여러 고서에 수록된 고처방으로 부터 소화기계에 많이 사용되는 처방 중에서 생체를 보하는 기능, 해독작용, 수렴, 조혈 작용, 항균작용을 가지는 천연산물의 역할을 바탕으로 30종류를 선택하여 사용하였다.</p> <h2>천연산물의 추출 및 조합</h2> <p>천연산물의 시료는 각각의 천연산물 \( 300 \mathrm { ~g } \)에 3차 증류수 \( 1500 \mathrm { ~mL } \)를 넣어 1시간동안 열수 추출한 여액을 \( 500 \mathrm { mL } \)로 농축하여 사용하였다. 한가지의 천연산물을 사용할 때는 각 천연산물 추출액을 사용하였고, 두가지의 천연산물의 조합은 각각의 천연산물을 \(1:1 \)로 조합한 흔합액을, 세 가지의 천연산물의 조합은 각각의 천연산물을 \( 1: 1: 1 \)로 조합한 혼합한 액을, 네가지의 천연산물의 조합은 각각의 천연 산물을 \(1:1:1:1 \)로 조합한 혼합액을 실험의 시료로 하고 필요한 량에 따라 사용하였다.</p>