실험에 사용된 고추잎은 일반 시장에서 구입한 후 건조하여 잎과 줄기 부분으로 분리하였고, 양의감작 적혈구, 혈청 등은 Bio test사, 한국 성인의 혈액에서 얻었다. 또한, 다양한 화학 물질과 시약은 Pharmacia사와 Sigma사의 제품을 사용하였다. 총당 함량, 산성당 함량, 단백질 합량은 각각 arabinose와 galactose의 혼합물, B-D-galacturonic acid, bovine serum albumin을 표준물질로 사용하여 phenol-sulfuric acid법, m-hydroxydiphenyl법, Lowry법으로 측정하였다.
<h2>재료 및 방법</h2> <h3>재료</h3> <p>본 실험 재료인 고추잎(leaf of Capsicum annuum L.)은 일반 재래시장에서 구입하여 세척 후 건조하여 잎부분과 줄기부분으로 분리하여 사용하였다.</p> <h3>시약</h3> <p>양의 감작 적혈구(IgM hemolysin sensitized sheep ery-throcyte, EA cell)는 일본 Bio test사로부터 구입하였고, 혈청(normal human serum)은 건강한 한국 성인의 혈액으로 부터 제조하여 사용하였다. DEAE Sepharose CL-6B, Sep-harose CL-6B는 Pharmacia사 제품을, Dowex-1 resin, pronase, standard dextran(T-2000, T-500, T-70, T-40, T-10)은 Sigma사 제품을 사용하였다. TLC plate(cellulose coated plastic sheet, 5577)와 5,5'-diethyl barbituric acid sodium salt는 Merck사 제품을, trifluoroacetic acid와 sodium per-iodate는 Aldrich사에서 구입하여 사용하였으며 그 외 기타 시약은 시판 일급 혹은 특급 시약을 사용하였다.</p> <h3>시료성분의 정량 분석</h3> <p>총당 함량은 arabinose와 galactose를 1:1로 섞은 것을 표준물질로 사용하여 phenol-sulfuric acid법으로, 산성당 함량은 B-D-galacturonic acid를 표준물질로 사용하여 m-hydroxydiphenyl법으로, 단백질 합량은 bovine serum albumin을 표준물질로 사용하여 Lowry법으로 각각 정량하였다.</p> <h3>구성당 분석</h3> <p>다당의 구성당 분석은 시료 1~3 mg 을 2M trifluoro-acetic acid에 녹여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서1.5 시간 가수분해한 시료를 cellulose-coated plastic sheet에서 ethyl acetate, pyridine, water, acetic acid(5:5:1:3,v/v)를 전개용매로 사용하여 전개시킨 후, 환원당 분석에는 alkaline silver nitrate로, 산성당 분석에는 p-anisidine으로, 아미노당 분석에는 ninhy-drin으로 발색시켜 rhamnose, arabinose, xylose, mannose, galactose, glucose, galacturonic acid, galactosamine과의 \( R_ { f } \) 값을 비교하여 분석하였다. 가수분해물의 중성당과 산성당은 sodium borohydride를 사용하여 중성당은 alditol 로, 산성당은 aldonic acid로 각각 환원시키고 Dowex-1 (anion exchange resin, acetate form)으로 분리하였다. Aldonic acid는 sodium borohydride로 다시 alditol로 환원시킨 후 acetic anhydride를 이용하여 각각 alditol acetate 유도체로 전환시켜 gas liquid chromatography법으로 구성당을 분석하였다. Gas liquid chromatography 분석은 fused silica capillary column(Supelco, \( \mathrm { SP } ^ {\mathrm { TM } } \) 2380, 15mX0.25 mm ID, 0.2 um film thickness)을 사용하여 \( 210 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 flame ionization detector(FID)로 표준물질의 retention time과 비교하여 시료 중의 구성당을 분석하였다. 구성당의 mo-lar ratio는 각 peak들의 면적비와 구성당들의 alditol acetate 유도체 분자량으로부터 계산하였다.</p>