단백질 분비 억제제 BFA는 자극을 받지 않은 상태나 세포사멸을 억제하는 상태에서도 호중구의 세포사멸을 유발하며, LPS, GM-CSF, IL-8, dexamethasnone 및 db-cAMP는 호중구의 세포사멸을 지연시킨다. 단백질 이동 억제로 인해 세포사멸이 증가하는 것이 확인되었고, 다른 자극제에 의한 세포사멸은 별도 경로를 통해 조절됨을 시사한다. BFA 처리로 세포사멸이 증가하는 과정에서 PI 염색이나 DNA 전기영동에서 DNA 조각의 증가로 보아, BFA에 의한 endonuclease 활성화가 확인되었다.
<h1>고 찰</h1><p>본 연구는 단백질 분비의 억제제인 BFA가 자극을 받지 않은 상태에서나 세포사멸을 억제시키는 상태에서 호중구의 세포사멸을 유도한다는 것을 보였다. BFA는 골지체에서 저분자 GTP결합 단백질인 ARF-1의 guanine핵산의 치환능을 억제하는 물질인데 호중구에서 ARF-1은 세포질 분획에 존재하는 것이 증명되었다. 본 연구의 결과는 낭포의 이동이 BFA에 의하여 억제되는 경우와 단백질의 분비 과정이 손상을 받는 경우, 이들에 의하여 호중구의 세포사멸이 영향을 받을 수 있을 가능성을 제시하였다.</p><p>호중구의 세포사멸은 염증성 매개물질을 포함한 여러 인자들에 의하여 조절 받는다. 그러나 아직 어떠한 기작에 의하여 이들 물질이 호중구의 생존 기간에 영향을 주는가는 밝혀져 있지 않다. LPS, GM-CSF, IL-8, dexamethasnone 및 db-cAMP 등은 호중구의 세포사멸을 지연시켰다. BFA는 LPS나 GM-CSF에 의한 호중구 세포사멸의 지연을 억제하였으나 이들 물질들 중에서 db-cAMP에 의한 세포사멸은 BFA에 영향을 적게 받았다. 이들 결과는 단백질 이동을 억제함으로써 세포사멸이 증가한다는 것을 보여주고 있으며 다른 자극제에 의한 세포사멸은 다른 경로에 의하여 조절을 받고 있다는 것을 암시하고 있다. 어떤 일정한 조건에서 호중구는 세포사멸을 억제한다고 알려진 GM-CSF나 IL-8 등을 생성하고 분비한다. 따라서, BFA가 이들 사이토카인의 분비를 억제하여 세포사멸에 영향을 줄 가능성이 있다고 추측할 수 있다. 그러나 본 연구에서 이들 사이토카인들을 첨가하였을 때 BFA에 의한 세포사멸 유도는 억제되지 못하였다.</p><p>BFA에 의한 세포사멸의 기작에 대한 연구에서 Jurkat T-세포를 BFA로 처리하였을 때 caspase-3의 활성증가가 관련이 있을 것이라고 제안되었다. 본 연구에서도 BFA를 처리한 호중구는 세포사멸의 증가과정에서 PI 염색이나 DNA 전기영동에서 DNA 조각이 증가함을 보임으로써 BFA에 의하여 endonuclease가 활성화된다는 것을 알 수 있다. 그러나, caspase-3의 억제제는 BFA에 의한 호중구의 형태 변화, annexin V의 결합양상, DNA 조각의 증가 등에 대하여 영향을 미치지 못하였다. 활성화된 호중구에서는 caspase와는 다른 endonuclease 활성이 있음이 보고된 것과 위의 결과는 비교될 수 있다. 또한, 단백질 분해효소의 억제제인 3,4-dichloroisocoumarine이나 N-1-tosylamide-demethyl-chloromethyl ketone이 HL-60 세포에서 BFA에 의한 DNA의 절단을 억제한다고 하였는데 이는 BFA에 의한 DNA의 절단은 단백질 분해 효소에 의하여도 영향을 받을 수 있음을 보여주고 있다. Pongracs 등은 caspase- 3에 의한 PKC- \( \delta \)의 활성화가 호중구의 세포사멸에 중요하다고 하였다. 그러나 본 연구에서는 BFA에 의한 세포 사멸은 PKC- \( \delta \)에 대한 특이적인 억제제인 rottlerin에 의하여 영향을 받지 않았다. 이러한 결과로써 우리는 BFA에 의한 세포사멸은 caspase-3를 통하지 않는 단백질 분해효소에 의하여 일어난다는 것을 추측할 수 있으나 아직 어떠한 인자에 의한 것인지는 밝히지 못하였다. 최근, 소포체에 대한 BFA의 장기간 처리에 의하여 세포사멸이 일어나는 것은 caspase-7을 통한 caspase-12의 활성 때문이라고 보고된 바 있다. 세포사멸 동안 일어나는 미토콘드리아의 transmembrane potential (\( \Delta \Psi \mathrm{m} \)), 세포질에서 미토콘드리아로의 Bax의 전이, cytochrome c의 분비 및 미토콘드리아에서 apoptosis inducing factor (AIF)의 분비와 같은 미토콘드리아에서의 변화는 caspase의 억제제에 의하여 영향을 받지 않기 때문에 미토콘드리아가 caspase-의존형과 caspase-비의존형의 세포사멸의 교차물질로서 역할을 할 것이라고 가정할 수 있다. BFA가 미토콘드리아에 직접적으로 변화를 일으켜서 세포사멸을 유도하는가를 알기 위하여 앞으로 더 많은 연구가 필요하다.</p>