Bacillus sp. GJY에서 CMCase와 xylanase의 활성을 알아보기 위해 \(0.4\%\) birchwood xylan 또는 \(0.4\%\) CMC을 담고 있는 SDS-PAGE 분석을 실시했습니다. Bacillus subtilis strain T30 (CP011051.1)의 게놈 분석에서는 \( \beta 1,4 \)-beta-xylanase (AJW87205.1) homologue 유전자가 존재하는 것으로 확인되었습니다. AJW87205.1유전자가 Bacillus sp. GJY에서 Xylanase의 활성을 담당하고 있는 가능성이 높지만, 유전자 클로닝과 재조합단백질 생산에 대한 추가 연구가 필요할 것으로 보입니다.
<h2>CMCase와 xylanase의 zymogram 분석</h2> <p>\( 0.4 \% \) birchwood xylan 또는 \( 0.4 \% \) CMC을 담고 있는 SDS-PAGE 분석방법은 Bacillus sp. GJY에서 CMCase와 xylanase의 활성을 책임지고 있는 단백질을 알아보기 위하여 사용하였다. Bacillus sp. GJY을 \( 2 \mathrm { mL } \) 의 LB배지에 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 12시간 이상 배양 하여 원심분리로 회수한 조효소액과, 세포를 분리하여 실험에 사용하였다. 전기영동을 위하여 변성시킨 단백질은 단백질의 전개가 끝난 후 CMCase 또는 xylanase의 활성을 확인하기 위하여 단백질을 refolding 시킨 후 효소반응을 실시하였다. 각각의 효소 반응이 끝난 SDS 겔은 \( 0.5 \% \) congo red 용액으로 염색을 실시하고, \( 0.5 \% \mathrm { NaCl } \) 용액으로 SDS 겔을 탈색하였다. Fig. 2B 에서 보는 바와 같이 CMC zymogram분석에서 조효소액과 cell pellet에서 동일하게 약 \( 28 \mathrm { kDa } \) 부근에 하나씩의 밴드가 생성되었다. \( 16 \mathrm { S } \) rRNA 분석에서 Bacillus sp. GJY와 Bacillus subtilis strain T30 (CP011051.1)의 게놈은 \(99 \% \) 이상의 높은 상동성을 보였다. 게놈 분석에 의하면 Bacillus subtilis strain T30은 총 2개의 glucanase 유전자(AJW87252.1, AJW 87391.1)를 가지고 있었다. AJW87252.1 유전자는 \( 1500 \mathrm { bp } \)의 open reading frame (ORF)를 가지며, 약 \( 55.5 \mathrm { kDa } \)의 단백질을 코딩하고 있는 것으로 나타났다. 그에 반하여 AJW87391.1는 약 \( 732 \mathrm { bp } \)의 ORF를 가지며 약 \( 27.4 \mathrm { kDa } \)의 단백질을 코딩하고 있었다. Signal IP프로그램(http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)을 이용한 signal peptide 분석에서 두 유전자는 모두 세포외부로 방출되는데 필요한 peptide를 가지고 있었다. Zymogram의 결과와 비교해 보면 AJW87391.1가 CMCase의 활성을 책임지고 있을 가능성이 높아 보인다. AJW87391.1가 Bacillus sp. GJY에서 CMCase의 활성에 책임지고 있는지에 대하여 알아보기 위하여 유전자의 클로닝, 재조합 단백질을 생산 등의 향후의 연구가 필요할 것으로 보인다. Xylanase의 zymogram분석에서 조효소액과 cell pellet에서 동일하게 약 \( 20 \mathrm { kDa } \)의 부근에 각각 밴드 하나씩이 나타났다. Bacillus subtilis strain T30 (CP011051.1)의 게놈의 분석에서 하나의 \( \beta 1,4 \)-beta-xylanase (AJW87205.1) homologue 유전자가 존재하는 것으로 나타났다. AJW87205.1는 \( 699 \mathrm { bp } \)의 ORF와 \( 25.7 \mathrm { kDa } \)의 단백질을 코딩하고 있었다. AJW87205.1유전자가 Bacillus sp. GJY에서 Xylanase의 활성을 책임지고 있을 가능성이 높아 보이지만, 향 후 유전자 클로닝과 재조합단백질 생산에 대한 연구가 필요할 것으로 보인다.</p>