세리신 추출은 절각견에 물을 첨가하여 가열, 여과한 뒤 잔사를 제거하여 여과액을 만든다. 이 여과액에 Flavourzyme 500 MG 등의 단백질 분해 효소를 첨가해 가열 및 용해 처리 후, 여과하여 세리신 용액을 얻는다. 효소 불활성화를 위해 세리신 용액을 고온에서 처리한 후, 여과, 농축, 동결건조하여 분말 상태로 만든다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>세리신의 제조</h2> <p>세리신의 추출은 Lee 등의 방법을 약간 수정하여 조제하였다. 정선된 절각견에 30배 중량의 물을 첨가하고 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5시간 가열한 후 여과하여 잔사를 제거하고 여과액을 얻었다. 이 여과액에 단백질 분해 효소인 Flavourzyme 500 MG(Novo Nordisk, batch No: HP2 02013, Denmark) 등을 \(0.1 \sim 1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)를 첨가하여 \( 50 \sim 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 6~12시간 동안 용해 처리시킨 다음 여과하여 세리신 용액을 얻었다. 사용한 효소의 불활성화를 위하여 세리신 용액을 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \)의 고온에서 0.5~1시간 정도 처리한 후 여과, 농축, 동결건조하여 분말을 얻어 본 실험에 사용하였다.</p> <h2>아미노산 조성 분석</h2> <p>총아미노산 분석용 시료는 산가수분해법으로 분해하였다. 즉, 단백질 함량으로 \( 30 \mathrm{mg} \) 정도의 세리신 분말을 cap tube에 취하고 \( \beta \)-mercaptoethanol \( 0.04 \% \)를 함유한 6 N HCl을 단백질량의 1,000배 이상 가하고 질소 가스를 8분간 충전하여 탈기시킨 다음, \( 110^{\circ} \mathrm{C} \) sand bath 상에서 24시간 가수분해한 후, 농축 건고하여 잔사를 0.2 N sodium citrate buffer (pH 2.2)로써 \( 50 \mathrm{ml} \)로 정용하여, 아미노산 자동분석기(Hitachi model 835, Japan)로 분석하였다. Tryptophan은 Hugli와 Moore의 방법에 의하여 알칼리 가수분해법으로 분해시켜 \( 550 \mathrm{nm} \)에서 비색 정량하였다.</p> <h2>분자량 분포 분석</h2> <p>표준시약(polyethylene glycol kit, type PEG-10; Sigma, St.Louis, USA) 및 제조한 실크 세리신 시료 \( 0.01 \mathrm{g} \)을 정칭하여 증류수(DW), 아세토니트릴(ACN) 및 트리플루오로초산(TFA)의 혼합 용매(DW:ACN:TFA=55:45:0.1, v/v/v)에 용해시켜 실온에서 하룻밤 방치한 후, \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter (Sigma, St. Louis, USA)로 여과한 것을 표준 및 시험용액으로 사용하였다. 표준시약을 HPLC에 주입하여 검량선을 작성한 다음, 검체에 대하여 TSK Gel G2500PW column (Ф \( 7.8 \times 300 \) \( \mathrm{mm} \), TOSOH CO.)을 사용하여 size exclusion chromatog-raphy (SEC) 방법에 따라 검체의 분자량 분포를 GPC pro-gram Water 510 (Waters Co., Ltd, Boston, Massachusetts, USA)을 이용하여 분석하였다.</p> <h2>실험동물</h2> <p>평균 체중이 \( 60 \pm 5 \mathrm{g} \)인 4주령 된 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐(충북 음성군 DAE HAN BIOLINK Co., LTD, Korea)를 구입하여, 5% 옥수수유(신동방(주), pure refined corn salad oil, Korea)를 함유하는 기초식이로 9일간 예비사육하여 적응시킨 후 난괴법(Randomized Complete Block Design)에 의해서 6마리씩 3군으로 metabolic cage (JD-C-71, 정도산업, 한국)에 나누어 5주간 실험 사육하였다. 사육실의 온도는 \( 20 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 습도는 \( 50 \pm 10 \% \)로 유지시켰고, 명암은 12시간(07:00 19:00) 주기로 조명하였다.</p>