세포 내 ROS 소거활성 평가를 위해 fluorescence를 측정하였고 HaCaT 세포에 UVB를 조사하여 ROS를 생성시킨 후 fluorescence ELISA reader를 이용하여 형광의 세기를 측정하였다. 지모 뿌리의 추출물 성분 분석을 위해 극성 TLC 분석을 진행하였으며, 전개시킨 TLC 크로마토그램을 vanillin 발색시약과 자외선을 통해 띠의 색상 등을 비교하여 HPLC 크로마토그램에서 표준물질의 peak retention time과 UV-Visible 흡수스펙트럼을 비교분석하였다.
<p>세포 내 ROS 소거활성 평가: 세포 내 ROS 소거활성 평가를 위하여 2',7-dichlorodihydrofluorescein diacetate \( \left ( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { DCF } \right . \) - \( \mathrm { DA } ) \) 를 사용하여 fluorescence를 측정하는 방법을 이용하였다. HaCaT 세포를 96-well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 분주하여 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양한 후, \( \mathrm { PBS } \) 를 이용하여 세포를 2 회 세척하였다. \( 20 \mu \mathrm { M } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { DCF } - \mathrm { DA } \) 로 \( 30 \mathrm { ~min } \) 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 처리 한 후, CL-1000 ultraviolet crosslinker를 이용하여 PBS 상태에서 \( 400 \mathrm { ~mJ } / \mathrm { cm } ^ { 2 } \mathrm { UVB } \) 를 조사하여 세포 내 ROS를 생성 시킨 후, 농도 별로 희석한 시료를 처리하여 \( 1 \mathrm { ~h } \) 후 fluorescence ELISA reader (excitation, \( 490 \mathrm { ~nm } \); emission, \( 530 \mathrm { ~nm } \) ) 기기를 통하여 형광의 세기를 측정하였다.</p> <h2>지모 뿌리 추출물의 성분분석</h2> <p>TLC 및 HPLC를 이용한 성분분석: 지모 뿌리의 에틸아세테이트 분획을 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter (Milopore \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) )를 이용하여 여과시키고 이 여액을 극성 TLC (normal phase)분석을 위한 시료로 사용하였다. TLC 분석시 사용된 전개 용매는 Table 1 에 나타내었다. TLC로 분리된 여러 띠를 긁어 \( 100 \% \) 에탄올로 추출한 후 여과-농축하여 파우더를 얻었다.</p> <p>성분확인은 표준물질과 같이 전개시킨 TLC 크로마토그램을 vanillin 발색시약과 자외선(UV-254 nm)을 통해 띠의 색상, \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) value를 비교하여 \( \mathrm { HPLC } \) 크로마토그램에서 표준물질의 peak retention time과 UV-Visible 흡수스펙트럼을 비교하여 분석하였다. HPLC 분석은 \( 2 \% \) acetic acid 및 \( 0.5 \% \) acetic acid의 \( 50 \% \) acetonitrile 용액을 기울기 용리법으로 분리하였고, 이때 HPLC 분리조건은 Table 2 에 나타내었다.</p>