CK214 균주의 agar 분해 활성과 swarming 운동성에 관한 성질과 \( \mathrm { CK } 214 \) 균주를 동정하기 위한 연구들을 실시하였다. 그로 인해, CK214 균주가 Paenibacillus 속의 여러 균주들과 상당히 밀접한 연관성을 보이는 사실을 알 수 있었다.
<h2>CK214 균주의 동정</h2> <p>CK214 균주의 agar 분해 활성과 swarming 운동성에 관한 특성을 보다 자세히 연구하기 위하여 CK214 균주를 동정할 필요가 있어 연구를 수행하였다. 연구하는 것과 동시에 \( \mathrm { CK } 214 \) 균주를 동정하기 위한 연구들을 수행하였다. 우선 그람염색법으로 CK214 균체를 염색한 후 광학 현미경으로(Carl Zeiss, Primo Star) CK214 균주의 형태 및 그람 염색성을 관찰하였다. CK214 균주는 그람양성의 간균으로 Bacillus subtilis와 비교하여 그 형태와 크기가 매우 비슷하였다(Data not shown). 생화학적 특성에 따른 CK214 균주의 동정을 위해 API 분석과 vi-tek2 분석을 부산광역시 보건환경연구원(Busan, Korea)에 의뢰하였다. API 분석 결과, CK214 균주는 Bacillus circulans, Paenibacillus lautus, Paenibacillus macerans와 각각 69.6 \%, \( 16.1 \%, 13.9 \% \) 의 유사성을 나타내었다. 또한 vitek2 분석에 의한 동정 결과 Paenibacillus amylolyticus와 \( 94 \% \) 의 유사성을 보이는 것으로 나타났다(Table 1). 생화학적 테스트 결과만으로 종 수준의 동정을 결정하기에는 무리가 있었기 때문에, 우리는 최종적으로 \( 165 \mathrm { rDNA } \) 염기서열분석에 기초한 계통발생학적 분석법을 이용하여 \( \mathrm { CK } 214 \) 의 동정을 수행하였다. CK214의 \( 16 S \) rRNA를 암호화하는 \( \mathrm { DNA } \) 는 universal primer B27F와 \( \mathrm { U } 1492 \mathrm { R } \) 를 사용하여 PCR 증폭하였다. 업체에 분석 의뢰하여 얻은 CK214의 \( 16 \mathrm { ~S } \mathrm { rDNA } \) 의 염기서열을 이용하여 BLAST 분석한 결과, Paenibacillus lactis strain MB 2035 (AY257870)와 \( 99 \% \) 의 가장 가까운 유사성을 보이는 것을 확인할 수 있었다 (Data not shown). CK214 균주의 계통발생학적 위치를 확인하기 위해 \( 16 S \mathrm { rDNA } \) 염기서열을 기초로 한 계통수를 작성하였다. CK214 균주를 포함한 BLAST 결과에서 유사성을 보였던 균주들의 \( 16 \mathrm { ~S } \mathrm { rDNA } \) 염기서열들을 CLUSTAL W2 Multiple Sequence Alignment 프로그램을 통해 비교하였다. 계통수는 Tree View (1.6.6) 소프트웨어를 이용하여 작성하였으며, 그 결과 CK214 균주가 Paenibacillus 속의 여러 균주들과 매우 가까운 연관성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3).</p>