Lee 등 (2008)의 연구를 토대로 Sweet Yellow 장미 기내 식물체 뿌리를 2,4-D 5 혹은 \( 11 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 가 함유된 Schenk & Hildebrandt(SH) 배지로 2~8주 배양한 후 Marchant 등 (1996)에 의해 연구된 배발생 및 2차 배발생캘러스유도 배지로부터 시료를 선발하여 아그로박테리움 매개 GUS 생성 방법을 사용하였다.
<h2>재료 및 방법</h2> <h3>실험 재료</h3> <p>Lee 등 (2008)에 의해 보고된 것처럽 국립원예특작작과학원에서 육성된 장미 품종 'Sweet Yellow' 의 기내 식물체 뿌리를 2,4-D 5 또는 \( 11 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 가 첨가된 Schenk & Hildebrandt(SH) 배지 (Schenk and Hildebrandt 1972)에서 2~8주 배양한 후 식물생장조절제가 첨가되지 않은 \( \mathrm { SH } \) 배지를 경유하거나 직접 Marchant 등 (1996)에 의해 보고된 배발생 및 2차 배발생캘러스유도 배지에서 배양하여 획득된 후 계대배양중인 체세포배발생캘러스로부터 Figure \( 1 \mathrm { ~A } \) 와 같이 체세포배 (배밥생 캘러스 포한) (이하 시료로 칭함)를 선발하여 재료로 사용하였다.</p> <h3>아그로박테리움 매개 GUS유전자 전이</h3> <p>유전자는 특정 작물의 형질전환 기슬을 확립하고자 할 때 표식유전자로서 널리 이용되고 있는 intron-GUS (이하 GUS로 칭함) 유전자를 Han 등 (2005)으로부터 pCAMBIA 3301벡터에 삽입되어 Agrobacterium tumefaciens AgL1내 삽입되어 있는 균주 상태로 분양밭아 증식 후 사용하였다. \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉동고에서 보관증인 균주 저장액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 을 \( 50 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) kanamycin과 \( 50 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) rifampicin이 첨가된 Luria-Bertani (LB) 액체배지 (tryptone \( 10 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \), yeast \( 5 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } , \mathrm { NaCl } 10 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) )에 첨가 후 \( 28 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 회전 인큐베이터에서 \( 170 \sim 200 \mathrm { rpm } \) 의 속도로 \( O . D_ { 600 } = 0.7 \sim 1.6 \) 정도가 될 때까지 배양하였다. 배양된 균은 \( 6,000 \mathrm { rpm } \) 으로 7분간 원심분리하여 배양 배지와 분리한 후 균 침강 덩어리를 acetosyringone \( 50 \mu \mathrm { M } \) 을 첨가한 \( \mathrm { SH } \) 액체 배지와 균질하게 섞은 균 현탁액에 미리 준비 된 시료 \( 10 \mathrm { ~mL } \) 을 30분간 감염시켰다. 멸균 된 filter paper 상에서 시료에 묻어 있는 균액을 제거한 후 acetosyringon,</p>