염증성 질환 환자에게 고농도로 발견되는 저분자 HA를 저해하는 hyaluronidase 저해제의 개발은 항염증 치료제 연구 분야에서 중요한 목표이다. 따라서 본 논문은 카카오 분획물이 HA를 분해하는 HAase를 저해할 수 있는지 알아보기 위해 다양한 농도에서 효소 저해 효과를 측정해보았다. 그 결과, 기존에 연구로 밝혀진 감태나 석창포 분획물의 저해능보다 카카오 분획물의 저해능이 유의미하게 좋다는 것을 확인할 수 있었다.
<h2>카카오 분획물의 hyaluronidase 저해활성 확인</h2> <p>히아루론산(hyaluronic acid, HA)은 결합조직의 세포 외 기질에 존제하는 다당체이며, 진피에 존재한다. 고분자 HA는 대식세포의 식작용을 억제하여 염증반응을 조절하는 작용을 하고 있으며, hyaluronidase는 고분자 HA를 분해하여 저분자 HA로 변형하는 효소이다. 저분자 HA는 류마티스 관절염 등 염증성 질환 환자에게서 고농도로 발견된다. 따라서 항염 증 치료제의 연구에서 hyaluronidase 저해제의 개발은 중요한 연구목표이다. 특히 아토피성 피부염 치료제 등의 연구에서 hyaluronidase 저해제는 관심을 끌고 있다. 카카오 분획물이 HA를 분해하는 HAase를 저해할 수 있는지 알아보고자 다양한 농도에서 효소 저해 효과를 측정하여 Fig. 5와 같이 나타내었다. 카카오 클로로포름 분획물의 경우 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 61.37 \% \), 에틸아세테이트 분획물의 경우 \( 500 \mu\mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 54.54 \% \), 부탄올 분획물의 경우 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 53.04 \% \), 물 분획물의 경우 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 56.86 \% \)의 저해 효과가 나타났고, \( \mathrm{IC}_{50} \)값은 각각 \( 281.43 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(280.46 \mu\mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(86.0 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(270.73\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 나타났다. 대조군인 vitamin C의 경우 \( 1,000 \mu \mathrm{g} \mathrm{ml} \)에서 \( 19.72 \% \)의 저해능이 나타났다. 또한 분획물의 hyaluronidase 저해활성의 경우 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도까지만 증가하는 경향을 보이다가 그 이후의 농도에서는 부탄올을 제외한 나머지 분획물에서는 활성의 변화를 확인할 수 없었다. 이는 농도가 증가할수록 효소와 반응한 분획물의 색이 짙어져 흡광도 수치가 높아지면서 정확한 값을 즉정하기 어려웠으며, 이후 세포를 통한 메커니즘 분석에서 정확한 효능을 확인해야할 것으로 사료된다. 타 논문과 비교한 결과 Bu 등의 감태에서 분리한 6개의 탄닌 화합물 \(\mathrm{IC}_{50} \)값에서 eckol \( (36.1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), eckstolonol \( (77.9 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), triphlorethol \( (28.9 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), dieckol\((14.9 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), phlorofucofuroeckol A \( (63.3 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \), ursolic acid \( (12.3 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)을 나타내었고, Cha 등의 석창포 분획물 중 에틸아세테이트 분획물의 \( \mathrm{IC}_{50} \)값이 \( 91.1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)을 비교 시 유의한 효과를 나타냄을 확인하였다.</p>