바나나 잎을 열수추출과 재추출을 통하여 바나나 잎 추출 물을 재료로 사용하였다. 세포독성 실험은 5가지 바나나 잎 추출물을 증류수로 농도를 조절하여 분주 및 배양과정을 통해 진행되었다. 인슐린 분비 실험은 Hamster pancreas \( \beta \) cell HIT-T15가 사용되었다. 생후 주의 쥐 120마리를 대상으로 동물실험이 진행되었고 1주일 동안 실온 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 상대습도 \( 55 \pm 5 \% \) 조건에서 낮과밤의 환경이 조성된 상태로 진행되었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>본 실험에서 사용한 바나바(Lagerstroemia speciosa Pers.)잎 추출물은 \( 90 \% \) 에탄올 추출물인 일본산(한국, Wellness banaba사로부터 구입)과 \( 70 \% \) 에탄올 추출물인 미국산(미국, New Direction Aromatics사로부터 구입)을 사용하였고, 바나바 잎을 열수(hot water)로 한번 추출 후 다시 \( 100 \% \) 에탄올로 재추출과정을 반복한 후 두 추출물을 혼합 건조한 제품(한국, (주)트리플엔사로부터 구입)을 사용하였다. 또한 바나바 열수추출과 \( 100 \% \) 에탄올 추출물을 각각 얻기 위하여 필리핀 마닐라 지역에서 재배된 5년생 이상의 바나바 잎(필리핀, Carica herbal health products, inc/Carica Green life co. 로부터 수입)을 사용하였다. 사용된 에탄올은 Aldrich사의 제품을 사용하였다.</p> <h2>세포 독성 실험</h2> <p>HIT-T15 Cell을 각 well 당 \( 5 \times 10^{3} \)개로 24well에 분주한 후 포도당을 제거한 RPMI 1640 배양액에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\) \( 5 \% \) \( \mathrm{CO}_{2} \) incubator 조건으로 24시간 동안 배양하였다. 앞에서 준비한 5가지 바나바잎 추출물에 증류수를 이용하여 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 조정한 후 extract 당 3개씩의 well에 분주하여 다시 24시간 동안 배양시켰으며 바나바 추출물을 처리하지 않은 3개의 well을 control로 사용하였다. 각 well의 인슐린 농도는 인슐린 측정 Kit를 이용하여 반응시킨 후 \( 450 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 산출하였다.</p> <h2>\( \beta \) cell 인슐린 분비 실험</h2> <p>인슐린 분비 실험을 위해 Hamster pancreas \( \beta \) cell인 HIT-T15를 Korean Cell Line bank (서울, Korea)로부터 구입하였으며 사용된 미디어는 RPMI 1640 (Gibco BRL Life Technology, USA) \(10\%\) fetal bovine serum (Gibco BRL Life Technology, USA)과 \( 1 \% \) penicillin/ streptomycin (Gibco BRL Life Technology, USA)을 첨가하여 사용하였고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)\( 5\%\mathrm{CO}_{2} \) 하에서 배양에 사용하였다.</p> <p>인슐린 분비 측정은 Rats Insulin ELISA Kit (Shibayagi, Gunma, Japan)을 이용하였으며 Sunrise Remote Control (TECAN, Salzburg, Austria)로 결과를 reading하였다.</p> <h2>바나바 잎 추출물들의 성분비 측정</h2> <p>\( 90 \% \) 에탄올 추출물 \( (90 \% \mathrm{EtOH}) \)과 열수에탄올 추출물(Water-\(\mathrm{EhOH}\)), 열수 추출물(Water)의 성분비 측정은 한국기능식품연구원에 의뢰하여 측정하였다. 측정항목으로는 탄수화물(\(\%\)), 조단백질(\(\%\)), 조지방(\(\%\)), 수분(\(\%\)), 불용성식이섬유(\(\%\)), 수용성식이섬유(\(\%\)), 폴리페놀(\(\%\)), 코로소린산(corosolicacid)(\(\%\)) 등이다.</p> <h2>실험 동물</h2> <p>실험을 위해 사용된 실험 동물은 생후 6주된 Wistar Hannover male 쥐 120마리를 Samtako Experiment Animal(Samtako Bio, Kyung Gi-Do, Korea)로부터 구입하였으며 실험을 위해 1주일 동안 left to acclimatize 하였다. 이들은 실온 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \) 상대습도 \( 55 \pm 5 \% \) 그리고 12시간 낮과 12시간 밤의 조건으로 관리되었으며 실험기간동안 standard pellets(Samtako Bio, Kyung Gi-Do, Korea)와 water에 대해 free access하였다.</p>