다당분해 효소를 생산 하는 미생물을 분리하기 위하여 총 200여 균주를 대상으로 실험해본 결과 colony 주변위에 0.2%\((\mathrm{W}/\mathrm{V})\) KI-I2용액으로 염색하여 clear zone이 생기는 균주만을 amylase 분해능이 있는 균주로 확인되어, 총 10균주를 선별하 였으며, 이들 중 가장 amylase 활성이 좋은 균주를 선정하여 각각 ST-63, ST-140라 명명하였다. 분리균주 ST-140의 염기서열 분석결과 Pseudoalteromonas marina FJ200648, Pseudoalteromonas agarivorans FJ200640 균주와 99%의 상동성을 보였으며, 최종적으로 BIOLOG의 생화학적 특성 및 염기서열 분석결과를 기초로하여 Pseudoalteromonas sp. ST-140으로 명명하였다. 또한 분석된 염기서열 데이터들은 Genbank에 각각 등록한 후, 분리균주 Bacillus sp. ST-63는 FJ595989, Pseudoalteromonas sp. ST-140은 FJ595990으로 Accession number를 부여받았다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>다당분해 효소 생산 미생물의 분리 및 동정</h2> <p>다당분해 효소를 생산 하는 미생물을 분리하기 위하여 총 200여 균주를 대상으로 실험해본 결과 colony 주변위에 \( 0.2 \% \)\((\mathrm{W}/\mathrm{V})\) KI-I2용액으로 염색하여 clear zone이 생기는 균주만을 amylase 분해능이 있는 균주로 확인되어, 총 10균주를 선별하 였으며, 이들 중 가장 amylase 활성이 좋은 균주를 선정하여 각각 ST-63, ST-140라 명명하였다.</p> <p>분리된 효소생산 균주의 생화학 특성을 조사한 결과를 Table 1, Table 2에 나타내었다. 분리균주 ST-63은 \( \beta \)-cyclodextrin, dextrin, tween 40, glycogen, arbutin, D-cellobiose, D-fructose, genfiobiose, maltose, maltotriose, D-mannitol, D-mannose, palatinose, D-psicose, salicin, D-sorbitol, sucrose 및 turanose, 등의 탄수화물이 대사됨을 확인하였다. 또한 분리균주 ST-140은 dextrin, glycogen, arbutin, D-cellobiose, D-fructose, gentiobiose, \(\alpha\)-D-glucose, palatinose, D-sorbitol, thymidine 등의 탄수화물이 대사됨을 확인하였다. 최종적으로 분리균주 ST-63은 BIOLOG 분석 결과에서 Bacuillus amyloiquefaciens 균주와 가장 유사한 생화학적 특성 을 보이는 것으로 나타났으며,분리균주 ST-140은 Alteromonas sp. 종들과 Pseudoalteromonas marina의 생화학적 특성이 가장 유사하게 나타났다. 분리균주의 확실한 동정을 위해서 16S ribosomal DNA 염기서열 분석을 실시하였으며, 분리균주 ST-63, ST-140의 계통학적 분석결과를 Fig. 2, Fig. 3에 나타내 었다. 일반적으로 리보솜 RNA (rRNA)는 전 생물에 보편적으로 존재하는 보존성이 높은 핵산분자이며, 미생물의 진화계 통의 연구에 가장 유용한 분자마커로 이용되고 있다. 특히 범용성이 높은 분자는 small subunit rRNA (AAU rRNA)로서 분류에 이용되는 16S 및 16S유사(18S) rRNA가 이에 속한다. 현재 미생물의 분류체계는 SSU rRNA의 정보를 근거로 재구축되어 있으며, 이 방법은 미생물 분류학에 필수적인 것으로 인식되기에 이르렀다. 특히 미지의 분리균주의 계통학적 위치를 알기위한 최초의 실험단계에서 SSU rRNA 분석은 필수적이다.</p> <p>분리균주 ST-63, ST-140의 16S rRNA PCR 증폭을 통해 얻은 염기서열을 National Center Biotechnology Information (NCBI)의 Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)를 이용하여 수행한 결과 균주 ST-63은 Bacillus velezensis FJ426275, Bacillus amyloliquefaciens NC009725 균주와 유전적 \(99\%\) 상동성을 보였으며, 분리균주 ST-63을 BIOLOG의 생화학적 분석 결과 및 염기서열 분석결과를 종합했을 때 Bacillus sp.로 동정 되었으며, 최종적으로 Bacillus sp. ST-63으로 명명하였다. 또한 분리균주 ST-140의 염기서열 분석결과 Pseudoalteromonas marina FJ200648, Pseudoalteromonas agarivorans FJ200640 균주와 \( 99 \% \)의 상동성을 보였으며, 최종적으로 BIOLOG의 생화학적 특성 및 염기서열 분석결과를 기초로하여 Pseudoalteromonas sp. ST-140으로 명명하였다. 또한 분석된 염기서열 데이터들은 Genbank에 각각 등록한 후, 분리균주 Bacillus sp. ST-63는 FJ595989, Pseudoalteromonas sp. ST-140은 FJ595990으로 Accession number를 부여받았다.</p>