CJP와 PTP가 MCF-7 세포의 세포사멸을 유발함에 있어 세포주기에 있어 어떤 단계에 관련하는지를 알아보기 위하여 각각 농도별로 처리하여 48시간 배양한 후 세포주기를 분석하였다.그 결과 CJP와 PTP가 MCF-7 세포의 sub-G1기를 지연 증가 시켜 사멸을 유도하는 것으로 생각되는 결과를 도출했다.내분비 교란물질로 알려진 bisphenol A와 estradiol은 여성 호르몬인 estrogen과 경쟁적으로 결합하여 progesteron 수용체의 발현을 유도하는 것으로 알려져 있으며 MCF-7 유방암 세포의 증식을 유도하는 물질로 알려져있다.본 연구에서는 CJP와 PTP가 bisphenol A와 estradiol에 의해 유도된 MCF-7 세포의 증식 억제 효과에 대하여 알아보았는데 그 결과 CJP와 PTP는 estrogen 유사물질로 내분비 교란 물질인 bisphenolA 와 estradiol에 의해 발생할 수 있는 유방암의 발병을 유의하게 감소시킴을 확인할 수 있었다.
<h2>세포주기 분석</h2> <p>CJP와 PTP가 MCF-7 세포의 세포사멸을 유발함에 있어 세포주기에 있어 어떤 단계에 관련하는지를 알아보기 위하여 각각 농도별로 처리하여 48 시간 베양한 후, P.I. (propidium iodide) staining하여 flow cytometery로 세포주기를 분석하였다. 먼저, CJP를 농도별로 첨가한 결과, sub-G1기는 농도에 의존하여 증가하였으며 반대로 G1기는 미세한 감소를 보였으며, 세포분열이 일어나는 S기는 500 \( \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서 감소를 보였으며, G2/M 기는 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서 급격히 증가함을 알았다. 또한, PTP를 농도녈로 처리한 결과, sub-G1기는 농도에 의존하여 급격한 증가를 보였으며 G1 기는 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 까지는 증가를 보이다 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 부터는 감소하여 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 급격한 감소를 나타냈다.S기와 G2/M에 있어서는 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도에서 2 배 정도 낮은 값을 보였고 이러한 현상은 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 와 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서도 관측되었다. 이상의 격과로 CJP와 PTP를 MCF-7 유방암 세포주에 처리할 경우, 농도 의존적으로 sub-G1기가 증가함을 알 수 있었다. 즉, CJP 의 경우, 대조구와 비교하여 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 20 베 정도의 급격한 증가율을 나타내었고 PTP는 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 100 배 이상의 증가를 보여 추출물 첨가 농도에 따라 급격후 sub-G1기가 증가함을 알 수 있었다. Yi등도 텡자 열수 추출물이 전골수성 백혈병세포에서 농도에 비례하여 sub-G1기가 증가하였으며, \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서는 \( 88.66 \% \) 의 sub-G1기가 나타나 sub-G1기 증가에 의한 세포사멸을 보고하고 있다. 본 연구에서도 CJP와 PTP가 MCF-7 세포의 sub-G1기를 지연 증가 시켜 사멸을 유도하는 것으로 생각된다.</p> <h2>Caspase-3 활성</h2> <p>Caspase는 세포사멸 시 활성화되는 중요한 단백질 분해효소로 이 효소를 측정하여 자가사멸의 정도를 파악할 수 있다. Caspase-3활성을 측정하는 분석법은 세포내에서 자가사멸이 유도되어 단백분해효소가 활성화 되면, caspase-3효소는 세포내의 \( p \)-nitroanilide와의 기질 결합체인 LEHD-pNA를 분해하여 푸른빛의 pNA와 LEHD를 형성하는 것을 이용하였다. CJP와 PTP에 의해 세포사멸이 유도된 MCF-7 세포에서의 caspase-3 활성을 Fig. 6에 나타내었다. CJP와 PTP를 첨가 하였을 경우 모두 농도 의존적으로 caspase-3 활성이 증가하였으며, CJP에 있어서는 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 대조군의 3 배 이상의 caspase- 3 활성이 나타났고 PTP에 있어서는 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 11 배에 가까운 caspase- 3 활성 증가를 나타내어, PTP의 caspase-3 활성이 CJP에 비해 3 배 이상 높게 caspase-3 효소 활성을 유도함을 알 수 있었다. 이는 CJP와 PTP가 MCF-7 세포주의 증식을 억제하고 세포사멸을 유도함에 있어서 적어도 caspase-3 활성에 의존적으로 일어남을 확인할 수 있었다.</p> <h2>환경호르몬에 의해 유도된 암세포의 성장 억제 효과</h2> <p>내분비 교란물질로 알려진 bisphenol A와 estradiol은 여성 호르몬인 estrogen과 경쟁적으로 결합하여 progesteron 수용체의 발현을 유도하는 것으로 알려져 있으며, MCF-7 유방암 세포의 증식을 유도하는 물질로 알려져 있다. 본 연구에서는 CJP와 PTP가 bisphenol A와 estradiol에 의해 유도된 MCF-7 세포의 증식 억제 효과에 대하여 알아보고 그 결과를 Fig. 7에 나타내었다. MCF-7 세포에 \( 1 \% \) cFBS와 bisphenol A 또는 estradiol 만을 첨가한 경우, 흡광도가 각각 0.53과 0.50으로 나타나 대조구와 비교하여 MCF-7 세포는 약 2 배 의 세포 증식을 나타내어 이들 환경호르몬이 유방암 세포를 증식시키는 것으로 나타났다. 그러나 이들 환경호르몬에 CJP와 PTP를 농도별로 첨가하여 세포 증식에 대하여 조사한 결과, 두 시료 모두 농도 의존적으로 MCF-7 세포 증식 억제효과를 나타내었다. 즉, CJP로 처리한 경우, \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서 각각 \( 0.05 \) 와 \( 0.06 \) 으로 급격히 감소되어 환경호르몬에 의해 증식되는 MCF-7 세포의 세포증식을 억제함을 알 수 있었으며, PTP에 있어서는 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서 0.19와 0.17을 나타내어 강한 세포 증식을 저해함을 알 수 있었다. 또한 PTP가 CJP 보다 환경호르몬에 의한 MCF-7 세포 증식을 더 강하게 억제하고 있는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 통해 CJP와 PTP는 estrogen 유사물질로 내분비 교란 물질인 bisphenol \( \mathrm{A} \) 와 estradiol에 의해 발생할 수 있는 유방암의 발병을 유의하게 감소시킴을 확인할 수 있었다. 현재, CJP와 PTP의 활성 성분에 대한 연구가 진행 중이다.</p>