HPLC를 통해 식중독균에 의한 BAs의 생성량과 CFS 처리 후 BAs 함량을 정량적으로 분석하였다. sodium hydroxide, sodium bicarbonate, dansyl chloride, acetone, ammonium hydroxide를 사용하여 유도체화했다. 여분 dansyl chloride의 제거를 위해 유도체화 한 시료에 \( 25 \% \) ammonium hydroxide를 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 첨가하여 반응시키고 HPLC를 통해 식중독균에 의한 BAs의 생성량,BAs 함량등을 정량분석하였다.
<p>HPLC (LC-20AD series, Shimadzu, Japan)를 통해 식중독균에 의한 BAs의 생성량(control)과 CFS 처리 후 BAs 함량(감소량)을 정량적으로 분석하였다. 시료 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 \( 2 \mathrm { M } \) sodium hydroxide \( 200 \mu \mathrm { l } \) 와 sodium bicarbonate \( 300 \mu \mathrm { l } \) 를 혼합한 후, \( 1 \% \) 의 dansyl chloride를 첨가한 acetone 용액을 \( 2 \mathrm { ml } \) 혼합하고 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 60 분 동안 유도체화 하였다. 여분의 dansyl chloride를 제거하기 위해 유도체화 한 시료에 \( 25 \% \) ammonium hydroxide를 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 첨가하고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분 동안 반응시켰다. Acetonitrile을 통해 혼합물의 총 부피를 \( 5 \mathrm { ml } \) 로 조정한 뒤 원심분리 \( \left (3,000 \times g, 5 \mathrm { ~min } , 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 하여 \( 0.2 \mu \mathrm { m } \) 필터로 여과한 후, HPLC 분석에 이용하였다. HPLC는 오븐 온도를 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 설정하였고 ODS C18 \( (250 \times 4.6 \) \( \mathrm { mm } , 5 \mu \mathrm { m } \), Kanto Chemical Co., Inc., Japan) 컬럼을 사용하였다. 이동상은 \( 0.1 \mathrm { M } \) ammonium acetate (A)와 acetonitrile (B)을 이용하였으며 농도구배는 50 : 50 으로 시작하여 19 분에 \( 10: 90 \) 의 비율로 전개하였다. 유속은 \( 1 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \) 이며 시료는 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 를 주입하여 \( 254 \mathrm { ~nm } \) 에서 모니터링하였다. 된장에서 분리된 한 균주는 \( 16 \mathrm { ~S } \) 리보솜 RNA 염기서열을 분석한 결과 B. tequilensis와 \( 98 \% \) 상동성을 가지고 있는 것으로 확인되었으며, 이는 포자를 형성하는 그람 양성의 간균으로, B. subtilis와 밀접한 관계가 있으며 Bacillus 속 유용 미생물로 알려졌다. 선별된 균주를 BCNU 9171로 명명하였고 \( 16 \mathrm { ~S } \) 리보솜 RNA 염기서열을 토대로 phylogenetic tree를 작성하였다. 아민 생성 세균이 HDB에서 histamine을 생성하며 이어서 선별된 균주의 배양 상층액의 첨가로 인한 histamine 함량의 변화를 HPLC로 관찰하였다. E. coli, L. monocytogenes, S. aureus 및 S. typhimurium이 생성한 histamine에 대해 Bacillus sp. BCNU 9171의 분해율을 계산한 결과, 4 개의 식중독균에 대하여 모두 약 16.8-87.3%의 감소율을 확인할 수 있었다. 특히, E. coli에서 CFS \( 75 \% \) 의 농도가 \( 87.3 \% \) 로 가장 많이 분해하였고, 이어서 \( 50 \% \) 농도에서 \( 68.1 \% \) 의 감소율을 나타내었다. 먼저 E. coli 등 병원균의 BAs 생성률을 조사하였고 이어서 \( 10 \%, 25 \%, 50 \% \) 및 \( 75 \% \) 네 가지 농도의 Bacillus sp. BCNU 9171 배양 상층액의 histamine 외 tryptamine, putrescine, cadaverine, tyramine 및 spermine 생성에 대한 저해(분해)율을 측정하였다.</p>