본 연구에서는 혈액, 간장 및 신장에 있는 지질과산화물의 함량을 측정하고 항산화 활성을 측정하였다. 이때 혼합용액을 원심분리 후 침전물에 TBA 시약을 가하여 60분간 반응시켰고 부탄올을 다시 가하고 원심분리를 진행했다. 이후 상층액을 취하여 흡관도를 측정했다.
<h2>혈액, 간장 및 신장 중 지질과산화물의 함량 측정</h2> <p>혈청 중 지질과산화물 함량은 혈청 \( 100 \mu{l}\)에 \( 1 / 12 \mathrm{~N} \) 황산용액 \( 4 \mathrm{ml}, 10 \% \) phosphotungstic acid \( 0.5 \mathrm{ml} \)를 차례로 가하고 잘 흔합한 5분간 반응시킨 후 \( 4,000 \mathrm{rpm} \) 에서 10분간 원심분리 시켰다. 원심분리 후 침전물에 증류수 및 TBA (thiobarbuturicacid) 시약을 \( 1 \mathrm{ml} \) 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 60분간 반응시켰으며, 여기에 butanol을 \( 3 \mathrm{ml} \) 가하여 다시 \( 4,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 532 \( \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>간과 신장 조직의 지질과산화물 함량은 Uchiyama와 Mihara의 방법과 Lee 등의 방법에 따라 간과 신장 조직 각 \( 1 \mathrm{~g} \)에 \( 1.5 \% \mathrm{KCl} \) 용액을 가하여 homogenizer로 마 쇄하여 \( 10 \% \) 균질액을 만든 다음, 이를 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 취하여 \( 3 \mathrm{ml} \)의 \( 1 \% \) phosphoric acid와 \( 1 \mathrm{ml} \)의 \( 0.6 \% \) TBA 를 넣어 잘 혼합하였다. 이것을 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 45분간 가열한 뒤 \( 4 \mathrm{ml} \)의 butanol를 가하여 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리한 후 butanol층으로 이행된 발색물질을 추출한 다음 흡광도(532\( \mathrm{nm} \))를 측정하였다. 조직 중 TBARS 함량은 표준용액으로 1,1,3,3-tetraethoxypropane (TEP)을 사용한 표준 검량선으로부터 산출하였다.</p> <h2>혈액과 간장 및 신장의 항산화 활성 측정</h2> <p>혈청의 항산화 활성은 Lim 등의 방법에 따라 혈청 \( 100 \mu{l}\)에 tris-HCl 완충액(100 \({mM}\), \( \mathrm{pH} \) 7.4)을 \( 1 \mathrm{ml} \) 가하여 혼합하였으며, 간장 및 신장 조직의 항산화 활성은 각 조직 \( 1 \mathrm{~g} \)에 \( 1.5 \% \)KCl 용액으로 \( 10 \% \) 균질액을 제조한 다음 이를 \( 100 \mu{l}\) 취하였다. 여기에 \( 0.5 \mathrm{mM} \) 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 가한 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 암실에서 15 분간 반응시켰다. 이어 chloroform \( 2 \mathrm{ml} \)를 가해 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리 시킨 다음 chloroform층을 취하여 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 활성은 시료첨가구와 무첨가구의 흡광도 비로 나타내었다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>각 실험 결과는 SPSS 12.0을 사용하여 통계처리 하였으며, 각각의 시료에 대해 평균\(\pm\)표준편차로 나타내었다. 각 시료군에 대한 유의차 검정은 분산분석을 한 후 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple test에 따라 분석하였다.</p>