녹차를 용질로한 용액을 온도를 유지시키면서 시료를 추출하며 실험을 진행한다. perchloric acid 분해법을 통해 미네랄을 분석하고 갈색도, 플라보노이드는 spectrophotometer를 통해 함유량을 분석한다. 추가로 유리당, 카테킨과 Vitamin C 또한 HPLC를 통해 시료의 양을 분석한다.
<h1>재료 및 방법</h1> <p>녹차의 시료는 1998년도에 시판되었던 태평양화학의 한라 증제차를 구입하여 사용하였다. 녹차 \( 1 \mathrm{~g} \) 에 온도(50, 70, \( \left.90^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 을 맞춘 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 을 넣어 시간 \( (1,3,5 \) 분)별로 추출조건에 따라 추출한 수용추출액을 시험용액으로 사용하였다. 실험이 진행되는 동안의 외부 온도변화에 따른 실험 오차를 최소화하기 위해서 항온수조의 온도를 추출액의 온도와 동일한 온도로 계속 유지시키면서 항온수조 내에서 추출하여 시험용액으로 사용하였다.</p> <h2>미네랄, 수용성 고형분 및 \( \mathrm{pH} \) 변화 측정</h2> <p>미네랄 함량의 변화는 perchloric acid 분해법으로 조사하였으며, 수용성 고형분 및 \( \mathrm{pH} \) 변화는 일반적인 방법에 준하여 측정하였다.</p> <h2>갈색도, 플라보노이드, 총 페놀성 성분 및 항산화능의 변화측정</h2> <p>갈색도는 \( 420 \mathrm{~nm} \) 에서, flavonoid는 \( 1 / 5 \) 로 희석시킨 추출 용액을 \( 345 \mathrm{~nm} \) 에서 HITACHI U-1100 spectrophotometer로 각각 흡광도를 측정하였다.</p> <p>녹차의 총 페놀성 성분은 원료와 그 가공품의 고미와 관련된 성분의 하나로써 Folin-ciocalteau 시약에 의해 비색정량하였다. 즉, 시험용액 \( (1 \mathrm{~g} / 100 \mathrm{~m} \ell) \) 을 \( 1 / 20 \) 배 희석한 검액 \( 5 \mathrm{~m} \) 에 Folin-ciocalteau 시약 \( 5 \mathrm{~m} \ell \) 를 가하여 혼합한 후 \( 10 \% \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} 5 \mathrm{m \ell} \) 를. 넣어 1시간 실온에서 방치하여 \( 760 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 검액대신 증류수를 넣어 동일하게 처리하였다. 이 때 표준물질로는 gallic acid를 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \) 을 기준으로 조제하여 검량곡선의 작성에 사용하였다.</p> <p>시험용액의 수소공여능 시험은 \( \alpha, \alpha^{\prime} \)-diphenyl- \( \beta \)-picry-hydrazyl (DPPH)를 이용한 방법으로 측정하였다. 즉 DPPH \( 15 \mathrm{mg} \) 을 \( 100 \mathrm{~m} \ell \) absolute ethanol에 용해한 후 증류수 100 \( \mathrm{m} \) 로 정용하여 DPPH 시약으로 사용하였다. 수소공여능의 측정은 이 시약 \( 3 \mathrm{ml} \) 에 시험용액 \( 30 \mu \ell \) 을 가하여 혼합하고 30초 후 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 DPPH 시약 의 홉광도를 1로 조정하고 시료첨가 후 홉광도와의 차이를 구한 뒤 여기에 100을 곱하여 수소공여능으로 표시하였다.</p> <h2>유리당의 분석</h2> <p>추출조건에 따른 추출액을 rotary evaporator로 감압 농축한 후 증류수 일정량으로 정용한 다음 활성탄으로 색소를 제거하고 pre-filter 및 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과하고 \( \mathrm{C}_{18} \) sep-pak cartridge를 통과시킨 여액을 유리당 분석 시료로 사용하여 HPLC (High Performance Liquid Chroma-tography)로 Table 1 과 같은 분석조건으로 분석하였다.</p> <h2>카테킨의 분석</h2> <p>녹차 수용성 추출물의 catechin 함량은 Tetsuhisa 등의 분석법을 변형하여 HPLC (Shimadzu LC-10AD)로 (A) water-acetonitrile-85\% phosphoric acid (95.45:4.5:0.05, v/v),(B) water-acetonitrile-85\% phosphoric acid (49.95:50.0:0.05, \( \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 의 용매계로 CLC-ODS (M) column을 사용하여 분석하였다. 분석시의 oven 온도는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지하였으며 분당 \( 0.8 \) \( \mathrm{m \ell} \) 씩 용출시켜 \( 231 \mathrm{~nm} \) 에서 (-)-epicatechin (EC), (-)-epicate-chin gallate (ECg), (-)-pigallocatechin (EGC), (-)-epigallo-catechin gallate (EGCg)의 표준물질 (Sigma사)과 비교하여 분석하였다.</p> <h2>Vitamin C의 측정</h2> <p>Ascorbate의 측정은 Bolin and Book (1974) 방법에 따라 추출조건에 따른 sample solution \( 5 \mathrm{ml} \) 에 \( 0.03 \% \) 2,6- dichlorophenolindophenol sodium용액, \( 2 \% \) methaphosph-oric acid 및 2\% 2,4-dinitrophenylhydrazine용액을 넣은 후 항온 water bath에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 3시간 방치한 다음, \( 85 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 와 2,4-dinitrophenylhydrazine용액을 넣은 후 총 vitamin의 양을 측정하였으며, 산화형Vitamin C의 양은 DCP용액이 들어가지 않도록 하여 총 vitamin C양의 측정법과 동일하게 처리, 측정하였다. 환원형 Vitamin C의 양은 총 vitamin C의 양에서 산화형 Vitamin C의 양을 감하여 산출하였다. 이 때 L-(+)-ascorbic acid를 \( 0.1 \sim 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \) 를 기준으로 검량곡선의 작성에 사용하였다.</p>