작물에서 모잘록병을 발생시키는 병원 미생물 중 채소류 모잘록병균은 주로 R solani때문에 많은 피해를 본다. R solani는 담자균류에 들어가며 대부분 일년생 작물에 병을 일으키고 짙은 갈색이며 불규칙한 균핵을 구성하는 특징을 갖는 병원균이다.본 연구는 길항미생물 B ehimensis YJ-37을 \( 500 \mathrm{~m}\ell \)플라스크 배양, \(5 \ell\) jar fermenter배양 및 \( 2,000 \ell \)대형탱크 배양 조건에서의 길항물질 생성능과 균의 발육을 조사를 하였기에 리포트를 하려고 한다. 본 실험에서 사용된 공시균주는 흙에서 분리 동정한 Bacillus ehimensis YJ-37을 사용했고 균수는 균원시료\( 1 \mathrm{m} \ell \)를 \( 0.85 \%\) \(\mathrm{NaCl} \)용액에서 삼단희석 후 2가지 방법으로 연산한 다음 평균값으로 나타냈다.
<h1>서 론</h1><p>일반적으로 작물에서 모잘록병을 일으키는 병원 미생물로는 Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, P. aphanidermatum, P. echinocarpum, P. butleri, Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae 등이 알려져 있으며, 채소류 모잘록병균은 주로 R. solani에 의해 많은 피해를 보고 있다. R. solani 는 담자균류에 속하며 완전세대는 Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk로 대부분 일년생 작물에 병을 일으키는 것으로 불규칙하고 짙은 갈색의 균핵을 형성하는 특징을 가지고 있는 병원균이다. R. solani는 현재 11개의 균사융합군으로 분류되어 있으며, 각 균사융합군 간에는 다소간의 기주특이성이 존재하며 이들 AG group들 중 AG4에 속하는 균주는 작물에 뿌리썩음병(root rot), 모잘록병(damping-off) 등의 매우 파괴적이고 진전이 빠른 식물병을 일으키는 것으로 알려져 있다.</p><p>최근 길항미생물을 이용한 생물학적 방제가 좋은 효과를 거두고 있음이 보고되고 있으며, 지금까지 Trichoderma harzianum, T. viride, Gliocladium virens 등의 진균류와 Streptomyces lydicus, Actinomyces spp. 등 방선균류, Pseudomonas aeruginosa 7NS K2, P. cepacia, P. fluo-rescens DR54, Enterobacter agglomerans, Stenotropho-monas maltophillia W81, Paenibacillus polymyxa, Bacillus pumilus 등의 세균류가 보고되었다.</p><p>전보에서 채소류 모잘록병균 R. solani AG4와 Pyth-ium ultimum에 길항하는 미생물 Bacillus ehimensis YJ-37을 토양으로부터 분리 동정하여 보고하였다.</p><p>본 연구는 길항미생물 B. ehimensis YJ-37을 \( 500 \mathrm{~m}\ell \) 플라스크 배양, \(5 \ell\) jar fermenter 배양 및 \( 2,000 \ell \) 대형탱크 배양 조건에서의 균의 생장 및 길항물질 생성능을 조사하였기에 보고하고자 한다.</p><h1>재료 및 방법</h1><h2>공시균주</h2><p>본 실험에 사용한 공시균주는 토양에서 분리 동정한 Bacillus ehimensis YJ-37을 사용하였다. 공시균의 보관은 tryptic soy broth (TSB) 영양배지 (\(\mathrm{pH} 6.0 \sim 7.0\))에서 \(30 \sim 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(3\sim5\)일 동안 진탕 배양시킨 후 미생물 세포의 수가 \( 1 \mathrm{~m} \ell \) 당 콜로니 형성단위 (colony forming unit; cfu)로서 \( 10^{8} \)개 포함되어 있는 배양액을 \(4^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하거나 동결건조기로 건조하여 분말상태로 보관하면서 사용하였다. 모잘록병균 Rhizoctonia solani AG4는 PDA (potato dextrose agar) 배지에 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)로 \(4 \sim 10\)일간 배양한 다음 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \), 또는 살균 증류수에서 보관하면서 사용하였다.</p><h2>R. solani에 대한 길항력 조사</h2><p>길항력조사는 PDA 배지에서 키운 모잘록병 균체 덩어리 \( (0.5 \times 0.5 \mathrm{~cm}) \)를 PDA 배지 중앙에 올려놓고 가장자리 4곳에 살균된 paper disc (\(5\mathrm{mm}\))를 올려놓은 다음 여기에 여러 가지 배양조건에 따라 배양한 B. ehimensis YJ-37 배양 무균 상등액 \( 50 \mu \ell \)를 적시고 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(7 \sim 10\)일간 배양한 후 모잘록병균의 균사체의 생장억제 정도 (inhibition zone)를 조사하여 생성된 clear zone (\(\mathrm{mm}\))의 크기로 판정하였다.</p><h2>균수 및 건조 균체량 측정</h2><p>균수는 균원시료 \( 1 \mathrm{m} \ell \)를 \( 0.85 \%\) \(\mathrm{NaCl} \) 용액에서 삼단 희석하여 2가지 방법으로 계수한 후 그 평균값으로 나타내었다. 첫째, 각종 미생물분리용 배지에 상기 희석액을 \( 0.1 \mathrm{m} \ell \) 도말하여 배양한 후 형성된 colony를 계수한 것, 둘째, 균수 측정 kit (3M Co., Petrifilm\(^{\mathrm{TM}} \) plate)를 이용하여 상기 희석액을 \( 1 \mathrm{~m} \ell \) 도말하여 배양한 후 계수한 것을 평균하여 \( \mathrm{cfu} / \mathrm{m} \ell \)으로 나타내었다. 균체 농도는 균체를 증류수로 세척하고 적당량의 증류수로 희석한 다음 \(80^{\circ} \mathrm{C}\)에서 24시간 건조시킨 후 항량을 측정하여 건조 균체량을 계산하여 g-dry cell weight (\(\mathrm{g}-\mathrm{DCW}\)\( /\ell \))로 나타내었다.</p>