조제된 브로콜리의 추출물 및 이의 분획물의 항균 활성과 총 flavonoid의 함량 측정은 기존의 보고된 방법으로, One solution cell proliferation assay kit을 이용하여 브로콜리 꽃송이 및 줄기 시료들의 대장암세포 HCT-116 세포주의 생육에 미치는 영향, 적외선 수분측정기를 이용하여 브로콜리 꽃송이 및 줄기의 수분함량, sucrose를 표준물질로 하여 phenol-sulfuric acid법으로 총당 정량, glucose를 표준물질로 하여 DNS 변법을 이용하여 환원당 정량을 측정하였으며, 이들 결과는 SPSS 21.0 버전으로 mean \( \pm \)SD로 나타내어, ANOVA로 분석하며 각 군간의 차이를 Duncan 다중비교 검증법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다.
<h2>항균 활성</h2> <p>조제된 브로콜리의 추출물 및 이의 분획물의 항균 활성은 기존의 보고된 방법과 동일하게 평가하였다. 항세균 활성 평가를 위한 그람 양성세균으로는 Staphylococcus aureus KCTC1916, Listeria monocytogenes KACC10550, Bacillus subtilis KCTC1924를 사용하였으며, 그람 음성세균으로 Escherichia coli KCTC1682, Pseudomonas aeruginosa KACC10186, Proteus vulgaris KCTC2433, Salmonella typhimurium KCTC1926, 항진균 활성 평가를 위해서는 Candida albicans KCTC1940 및 Saccharomyces cerevisiae IF00233를 사용하였다. 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth (Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양한 후, 각 균주를 \( \mathrm{OD}_{600} 0.1 \)로 조정하여 Nutrient agar (Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish \( (90 \times 15 \mathrm{mm} \), Green Cross Co., Ltd. Korea) \( 100 \mu \mathrm{l} \)도말하고, 각각의 시료 \( 5 \mu \mathrm{l} \)를 멸균 disc-paper(지름 \( 6.5 \mathrm{mm} \), Whatsman No.2)에 가하여, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균의 경우에는 Sabouraud dextrose (Difco Co., USA)를 이용하여 동일한 방법으로 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 ampicillin과 항진균제인 miconazole (Sigma Co., USA)을 각각 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{disc} \) 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 \( \mathrm{mm} \) 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.</p> <h2>대장암세포 생육억제 활성</h2> <p>인간유래 대장암세포 HCT-116 세포주의 배양 및 계대에는 Dulbecco's Modified Egle Medium (Gibco-BRL Inc., USA)를 사용하였으며, \( 10 \% \) fetal bovine serum (Gibco-BRL Inc., USA), \(1\%\) penicillin 및 streptomycin (WelGene Inc., Deageon, Korea)을 첨가하여 사용하였다. 브로콜리 꽃송이 및 줄기 시료들의 HCT-116 세포주의 생육에 미치는 영향은 One solution cell proliferation assay kit(Promega, USA)을 이용하여 평가하였다. 즉, 96 well plate에 well당 \( 3 \times 10^{3} \)개의 세포를 접종하고 24시간 배양한 후 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 브로콜리 추출물 및 분획물들을 각각 처리하고 24시간 동안 반응시킨 후 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxphenyl)-2-(sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS; Promega, USA) 용액을 각 well 당 \( 20 \mu \)씩 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) incubator에서 4시간 동안 반응 시켰으며, 반응 종료 후 96 well plate reader (Expert 96 UV ASYS Hitech, Austria)를 이용하여 \( 490 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하여 성장률을 계산하였다. 결과 수치는 4개의 독립적인 well에서 수행한 값을 평균과 편차 값으로 나타내었다.</p> <h2>기타 분석</h2> <p>브로콜리 꽃송이 및 줄기의 수분함량은 적외선 수분측정기(HG53 Halogen Moisture Analyzer, Mettler-Toledo International Inc., Zurich, Switzerland)로 측정하였으며, 각각의 추출물 및 분획물의 총 flavonoid의 함량 측정은 기존의 보고한 방법에 따라 측정하였으며, 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고 여과한 추출검액 \( 400 \mu \mathrm{l} \)에 \( 90 \% \) diethylene glycol \( 4 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 다시 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} 40 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 반응 후 \( 420 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 총 polyphenol 함량은 추출검액 \( 400 \mu \mathrm{l} \)에 \( 50 \mu \mathrm{l} \)의 Folin-ciocalteau, \( 100 \mu \mathrm{l} \)의 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 \( 725 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총당 정량의 경우에는 sucrose를 표준물질로 하여 phenol-sulfuric acid법을, 환원당 정량의 경우에는 glucose를 표준물질로 하여 DNS 변법을 이용하여 측정하였다. 각각의 분석결과는 3회 반복한 실험의 평균과 편차로 나타내었다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>실험 결과는 SPSS 21.0 버전을 사용하여 mean \( \pm \)SD로 나타내었으며, 각 군간의 차이는 ANOVA로 분석하였으며, Duncan 다중비교 검증법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다. 유의수준은 \( p<0.05 \)로 하였다.</p>