Bioreactor로 액체 배양된 청목노상 callus 추출물의 생육저해 실험에서 2,4-D와 BA를 혼합하여 배양했을 때 가장 강한 저해력이 나타났다. Callus 추출물의 phenolic compound 농도를 \(50 \\sim \ 200 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 조절하여 pylori 에 대한 저해력을 살펴보았는데 뽕잎 추출물보다 더 낮은 농도의 phenolic compound를 처리하였을 때도 pylori 저해효과가 상승하는 기작에 대한 연구가 진행될 것으로 판단된다. Helicobacter pylori 억제효과가 우수한 청목노상의 캘러스 배양을 위한 최적조건과 생장조절제로 배양 시 높은 캘러스 성장률을 확인할 수 있었고, 혼합처리구가 캘러스 형성율이 놓은 것으로 확인되었다. Helicobacter pylori 에 대한 억제효과는 최적조건에서 배양한 callus 추출물에서 가장 큰 저해율이 나타났다.
<h2>Bioreactor로 액체 배양된 청목노상 callus 추출물의 Helicobacter pylori 생육저해 측정</h2> <p>Callus 추출물의 phenolic compound 농도를 \(50 \\sim \ 200 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 조절하여 H. pylori에 대한 저해력을 살펴본 결과 청목노상 뽕잎 추출물과 비교하였을 때 callus 추출물이 뽕잎 추출물보다 더 낮은 농도의 phenolic compound를 처리하였을 때도 H. pylari 저해양상이 나타나는 것을 확인 할 수 있었다. Bioreactor로 액체 배양된 청목노상 callus 추출물의 H. pylori 생육저해 결과는 Fig. 6과 같이 다양한 생장조절제 처리에 의해 bioreactor로 액체 배양된 callus 추출물의 H.py-lori 생육저해 실험에서 2,4-D와 BA를 혼합하여 배양하였을때 H. pylori에 대하여 \( 200 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 의 phenolic 함량에서 \( 16.0 \mathrm { mm } \)의 clear zone이 나타나 가장 높은 저해율을 확인할 수 있어, 억제물질의 생산을 위한 callus의 최적 액체배양조건은 2.4-D 와 BA 를 각각 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { l } \) 의 농도로 처리하여 20 일간 배양하는 것이 최적이었다. 이상의 실험 결과에서와 같이 최적조건에서 배양된 callus의 추출물과 봉잎 추출물의 H. pylori에 대한 항균효과를 살펴본 결과 Fig. 1에서와 같이 \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 phe-nolic 함량에서 뽕잎의 clear zone \( 15 \mathrm { ~mm } \) 에 비하여 callus 추출 물은 \( 18 \mathrm { ~mm } \) 정도로 항균효과가 월등히 우수하였으며, callus 배양 최적조건인 2.4-D와 BA의 호르몬 혼합처리조건에서 H. pylori에 대한 억제효과가 최대의 clear zone으로 나타나 배양된 callus의 생체 중량에 비례하여 H. pyori에 대한 항균효과가 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 이는 청목노상 뽕잎과 뼝잎 callus 추출물에 존재하는 phenolic compound들의 profile이 다르게 나타나며, 뽕잎추출물과 달리 뽕잎 callus에서만 확인된 protocatecuic acid가 H. pylori에 대한 저해물질로 보고된 caffeic acid, rosmarinic acid 및 chlorogenic acid 등과의 상호 작용에 의해 H. pylori에 대한 저해효과가 상승하는 기작에 대해서도 향후 연구가 진행되어야 할 것으로 판단되었다.</p> <h1>초록 : 청목노상(Morus alba cv. Cheongmoknosang) callus의 배양조건에 따른 Helicobacter pylori 억제물질의 생산</h1> <p>Helicobacter pylori 억제효과가 우수한 청목노상의 캘러스 배양을 위한 최적조건은 MS 고체배지에서 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 20일간 배양하였을 때 \( 6.4 \mathrm { ~mm } \)의 크기로 가장 크게 자랐으며, 청목노상의 callus 형성에 미치는 생장조절제로는 NAA, 2,4-D, BA 및 kinetin 등을 \( 2 \mathrm { mg } / \mathrm { I } \)의 농도로 첨가하여 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20일간 배양했을 때 높은 캘러스 성장률을 확인 할 수 있었고, 생장조절제의 혼합처리구가 단독처리구 보다 캘러스 형성율이 높은 것을 확인 할 수 있다. 따라서 본 연구에 사용된 청목노상 품종의 평판기내 배양을 위한 direct callogenesis의 최적 조건은 생장호르몬으로 2,4-D/NAA를 \( 2 \mathrm { mg } / \mathrm { I } \)의 농도로 혼합 처리하여 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 20일간 배양이 최적조건이었다. 청목노상 callus로 부터 Helicobacter pylori 억제물질의 대량생산을 위한 방법인 biomass를 위한 bioreactor배양은 MS 액체배지에 호르몬으로 2,4-D와 BA 를 각각 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { I } \)의 농도로 처리하여 20일간 배양하였을 때가 최적조건이었다. 최적조건에서 배양한 callus 추출물의 Helicobacter pylori 에 대한 억제효과는 \( 16 \mathrm { ~mm } \)의 clear zone으로 가장 높은 저해율을 확인할 수 있었다.</p>