활성화된 Saccharomyces klutveri DJ97(KCTC 8842P)를 대추 및 포도의 착즙액에 접종하여 알코올 발효를 수행하였으며, 그 결과 도수가 \(3-4\%\) 및 \(8-9^{\circ} \) brix를 나타났다. 이어서 이 알코올 발효액에 Acetobacter pasteurianus KFC 819(KCTC 10173BP)를 접종하여 초산 발효를 수행, \( 3-4 \% \) 및 \( 7-8^{\circ} \) brix의 초산 함량을 보였다. 이들 발효액은 농축 및 동결건조하여 시험재료로 사용하였고, 항균효과 측정은 paper disc 방식을 이용하였다. 또한, 실험에 사용된 여러 시약들은 Sigma Chemical Co.에서, 대식세포인 RAW 264.7과 멜라노마 세포인 B16F10은 Korean Cell Line Bank에서 구입하여 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>알코올 발효 및 초산 발효 방법</h2> <p>본 실험에 사용된 대추(Zizyphus jujuba Miller)와 포도(Vitis vinifera L.)는 경상북도 경산시 자인면에서 생산되는 품종을 이용하였다. 이를 이용한 알코올 발효의 경우 전배양과 본배양을 거쳐 활성화된 Saccharomyces klutveri DJ97(KCTC 8842P)를 대추 및 포도의 착즙액 (\( 18^{\circ}\) brix)에 \( 5 \% \) 용량이 되도록 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4일간 정치배양하면서 알코올 발효를 수행하여 알코올 발효액이 알코올 도수가 \(3-4\%\) 및 \(8-9^{\circ} \) brix를 나타내었을 때 이를 농축 및 동결건조하여 시험재료로 사용하였다. 또한 초산 발효의 경우 상기에 기술한 알코올 발효액을 살균처리하여 활성화된 Acetobacter pasteurianus KFC 819(KCTC 10173BP)를 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10일간 정치배양하여 초산의 함량이 \( 3-4 \% \) 및 \( 7-8^{\circ} \) brix를 나타내는 것을 이용하여 농축 및 동결건조하여 시험재료로 사용하였다.</p> <h2>재료 및 시약</h2> <p>생리활성 측정 실험에 사용된 시약인 1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), xanthine, xanthine oxidase, nitro blue tetrazolium (NBT), mushroom tyrosinase, tyrosine과 L-3,4-dihydroxyphenyl-alanine (L-DOPA) 및 griess reagent 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였으며, 세포 독성에 측정에 사용된 세포주는 대식세포인 RAW 264.7와 멜라노마세포는 B16F10을 Korean Cell Line Bank (KCLB)에서 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정 시약은 Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM), fetal bovine serum, penicillin/streptomycin, trypsin 250, \( 0.4 \% \) trypan blue stain은 Gibco BRL Co.(Grand Island, USA)에서 구입하여 사용하였으며, 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium-bromide(MTT)는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. 항균력 실험에서 사용한 공시 균주는 피부상재균으로서 Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Escherichia coli KCTC 1039 및 여드름유발균으로서 Propionibacterium acnes KCTC 3314를 계대 배양하여 사용하였다. 전 배양 및 본 배양을 위한 액체 배지는 nutrient broth, tryptic soy broth를 Difco Lab. (Sparks, MD., USA) 및 Gifu anaerobic medium (GAM, Nissui Co. Japan)를 구입하여 사용하였으며, 생육 저해환 측정을 위한 고체배지는 상기 액체배지에 agar를 첨가하여 본 실험에 사용하였다.</p> <h2>항균효과 측정</h2> <p>항균효과 측정은 paper disc 법을 이용하여 측정하였다. 즉, 평판 배지에 배양된 각 균주를 1 백금이 취해서 액체 배지 \( 10 \mathrm{ml} \)에서 18-24시간 배양하여 활성화시킨 후 다시 액체 배지 \( 10 \mathrm{ml} \)에 균액을 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 접종하여 3-6시간 본 배양한 후 평판배지 1 개당 균 수가 약 \( 1 \times 10^{7} \) cells이 되게 접종하여 멸균 면봉으로 균일하게 도말하였다. 멸균된 filter paper disc (\( 8 \mathrm{~mm} \), Tokyo, Japan)를 고체 평판배지에 올려놓은 다음 \( 0.05 \mathrm{ml} / \mathrm{disc} \)가 되도록 시료를 농도별로 흡수시켜 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18-24시간 배양하여 disc 주위의 clear zone \( (\mathrm{cm}) \)의 직경을 측정하였다.</p>