MDA의 분석은 sample과 sample blank에 \( 200 \mu \mathrm { l } \)씩 검체를 분주하였으며 증류수(D.W) \( 200 \mu \mathrm { l } \) Tlor 분주,\( 0.5 \mathrm { M } \) butylated hydroxytoluene을 \( 10 \mu \mathrm { l } \)씩 분주, 희석된 \( \mathrm { R } 1 \) reagent을 분주한 후 혼합하여 배양하였다.
<p>간조직은 dry ice에서 \( 300 \mathrm { mg } \)을 조각낸 후, falcon tube로 옮겨 buffer A ( \( 10 \mathrm { mM } \\mathrm { HEPES } \\mathrm { pH } 7.8 \), \(10 \mathrm { mM } \\mathrm { KCI } \), \(2 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { MgCl } _ { 2 } \) \(1 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { DTT } \), \( 0.1 \mathrm { mM } \\mathrm { EDTA } \) , \( 0.1 \mathrm { mM } \\mathrm { PMSF } \\mathrm { DW } \)) \( 1 \mathrm { ~ml } \)넣고 polytron을 이용하여 균질화 하였다. ice에 20분간 방치하여 \( 125 \mathrm { ul } \) \(10 \% \) \( \mathrm { NP } \)-40 buffer를 첨가한 후 15초간 잘 섞어 \(12,000 \mathrm { rpm } \) 에 10분간 \( \left (4 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 원심분리하여 상등액은 사이토졸 분획으로 하고 액체질소로 급속 냉동시켜 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하였다.</p> <p>MDA의 분석은 Oxis사(미국)의 BIOXTECHLPO-586 kit을 사용하여 sample 및 sample blank에 \( 200 \mu \mathrm { l } \)씩 검체를 분주하고 reagent blank에 증류수(D.W) \( 200 \mu \mathrm { l } \) Tlor 분주한 후 \( 0.5 \mathrm { M } \) butylated hydroxytoluene을 \( 10 \mu \mathrm { l } \)씩 sample, standard, re-agent blank에 분주하고 희석된 \( \mathrm { R } 1 \) reagent을 \( 650 \mu \mathrm { l } \)을 sam-ple, standard, reagent blank에 각각 분주한 후 혼합하여 \( 36 \% \) \( \mathrm { HCL } \) \( 150 \mu \mathrm { l } \)을 넣고 tube의 마개를 닫은 후 \( 45 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 60분간 배양하였다. 배양액을 ice bath에서 식인 후 \( 2,000 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 원심분리하여 얻은 상층액의 흡광도를 \( 586 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다.</p>