Probiotis 균주 선택은 발효 TMR 사료의 제조에 중요하게 작용하며, 이는 TMF 사료의 물리적, 화학적 특성과 온도, 산소, 성장률 등을 고려해 이루어진다. 8개 처리구에서는 총 144개의 TMR bag을 제조하여 처리구에 배치하였고, 이는 노출기간(1, 3, 5, 7, 14, 및 21일) 별로 3회 반복하였다. 모든 배양은 혐기상태에서 진행되었으며, 혐기 배양장치는 여러 연구자의 방법을 따라 제작하였다.
<p>각각의 구체직인 미생물명과 Prebiotics의 종류와 함량 및 delivery system은 특허 관련상의 문제로 본 논문에서 생략하고자 한다. 발효 TMR 사료의 제조에 사용된 Probiotis 균주는 TMF 사료의 물리적 화학적 특성과 최종 TMF 사료의 온도 및 산소 그리고 성장률 등을 고려하여 선발하였다. 선발된 곰팡이는 Difco \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) Potato Dextrose Broth 배지에 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 배양하였고, 박테리아는 Difco \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) Lactobacilli MRS Broth 배지에 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 배양하였으며, 효모는 Difco \( { } ^ {\mathrm { TM } } \mathrm { YM } \) Broth 배지를 이용하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 배양하였다. 곰팡이와 효모는 3일에 1회씩 계대 배양 하였고 박테리아는 2일에 1회씩 계대 배양하였다. 모든 배양은 혐기상태에서 이루어 졌으며 혐기 배양장치는 Holdman 등, Ogimoto와 Imai 및 Mitsuoka의 방법에 준하여 제작하였다. 8 처리구에 대해 개농 후 노출기간(1, 3, 5, 7, 14, 및 21일)별 3반복으로 총 144 개( 8 처리 \( \times 6 \) 노출시간 \( \times 3 \) 반복)의 TMR bag을 제조하여 처리구에 배치하였다.</p> <h2>시험 사료의 제조 및 시료 채취</h2> <p>기본 사료는 옥수수 flake, 맥주박, 대두피, 파쇄보리, 전지 면실, 볏짚, 페레니얼라이그라스 등 총 18종류의 단미사료 및 첨가제로 구성되어 있는 비육후기용 습식 TMR을 이용하였다. 시험 사료는 기변 사료인 TMR을 vinyl bag 가로 \( 43 \mathrm { ~cm } \) \( \times \) 세로 \( 58 \mathrm { ~cm } ) \) 에 먼저 \( 1.5 \mathrm { ~kg } \)을 다져 넣은 후, 공시된 균주액(무처리구에는 증류수) \( 100 \mathrm { ml } \) 을 고르게 접종하고, 상부에 \( 1.5 \) \( \mathrm { kg } \) 을 채워 넣고, 잘 섞은 다음, 진공 포장기[AZ-450, (주)인트라즈, Korea]를 이용하여 공기를 배제한 후, heat sealing하여 실온에서 7일 동안 발효시켜 제조하였다. 발효기간은 일반 발효사료의 경우, 약 7일간의 유통기간임을 감안하여 설정하였다. 공시균주의 접종액은 각 미생물이 최대 성장률을 나타내는 시간대로서 박테리아와 효모는 24시간대, 곰팡이는 36시간 계대배양액을 사용하였다.</p>