본 연구에서는 ( \( 12.4 \% \))의 M pneumoniae 균주가 분리되었고. Erythromycin \( 1.0 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도에 저항성 균주들을 배양하고 원심하여 그 상층액을 PCR 반응에 사용하여 각 primer 부위 PCR 산물의 유전자 염기서열을 분석에 따라 돌연변이 부위를 확인을 위해 erythromycin에 감수성인 M pneumoniae M129균주와 비교 분석하였다.
<h2>PCR 법에 의한 erythromycin 저항성 변이 균주의 확인</h2> <p>Erythromycin \( 1.0 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도에 저항성 균주들을 각각의 MIC농도의 배지 \( 5 \mathrm { ml } \)에 배양한 후 \( 12,000 \mathrm { rpm } \)으로 15분간 원심한 다음 인산완충액(PBS)으로 2번 세척하였다. 침사의 최종부피를 \( 50 \mu \mathrm { l } \)로 조정하여 \( 110 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 가열한 후 \( 12,000 \mathrm { rpm } \)으로 15분간 원심하여 그 상층액을 PCR 반응에 사용하였다. 추출한 DNA 용액에 Taq polymerase (TaKaRa Taq, Japan)와 10X PCR buffer, deoxynucleotide triphosphates, \( 1.5 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { MgCl } _ { 2 } \)를 첨가하고, 해당 primer를 각각 가한 후에 MiniCycler (MJ Research, U.S.A)에서 반응시켰다. 먼저 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 10분간 전 처리한 후 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1분, \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1분, \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1분의 시간으로 30회 반복 반응 시키고 마지막에 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 연장 반응시켰다. 이 산물을 \( 1.5 \% \) 아가로즈 겔에서 전기영동한 후 ethidium bromide에서 염색하여 결과를 관찰하였다. 각 primer 부위 PCR 산물의 유전자 염기서열을 분석하여 erythromycin에 감수성인 M. pneumoniae M129균주와 비교 분석하여 돌연변이 부위를 확인하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>M. pneumoniae 균주 분리</h2> <p>2002년 12월부터 2005년 2월 현재까지 부산 A병원에 내원한 성인환자 450명의 호홉기 도말물로부터 M. pneumonie의 분리율은 79명 ( \( 17.6 \% \))이었으며, Y병원에 내원한 성인환자 99명에서는 7명 ( \( 7.1 \% \))이었으며, G병원의 49명의 환자에서는 3( \( 6.1 \% \))이었으며, K병원 57명과 H병원 33명에서는 균이 분리 되지 않았다. 성인환자 688명 중 89명 ( \( 12.9 \% \))에서 균이 분리되었다. S병원에 내원한 소아환자 161명의 가검물중에서 34명 ( \( 21.1 \% \))에서 M. pneumonie가 분리되었으나, K병원의 97명, Ys병원 48명중에서는 균이 분리되지 않았다. 소아환자 306명 중에서 34명( \(11.1 \% \))에서 균이 분리되었다. 본 연구에서 총 994명 중에서 123명 ( \( 12.4 \% \))에서 M. pneumoniae 균주가 분리되었다.</p>