천문동 추출물의 항균활성 검사를 위하여 well diffusion methods 법을 변형하여 실험하였다.항균활성이 나타난 추출물의 최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)을 측정하기 위해 항균력 측정과 동일한 방법으로 실행하여 생장 저해환이 \( 8 \mathrm{~mm} \) 이상을 나타내 것을 최소저해농도로 정하였다.천문동 추출물의 항산화 효과는 Sanchez-Moreno C의 방법으로 측정하였다.추출물의 폴리페놀 함량은 Folin-Denis 법에 의해 측정하였다.Nieva Moreno법을 변형하여 플라보노이드의 함량을 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>항균력 측정</h2> <p>천문동 추출물의 항균활성 검사를 위하여 well diffusion methods 법을 변형하여 실험하였다. 각 균주들은 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 TSB 액체배지에 2 회 계대배양 하였으며 UV-spetrophotometer (Optizen POP, Mecasys Co., Ltd., Daejeon, Korea)를 이용하여 \(O.D._{650 \mathrm{~nm}}=0.4 \) 농도로 일정하게 조정한 후 항균실험에 사용하였다. 일정한 농도로 조정한 균을 MHA 배지에 (\(0.8\%\) agar) \( 1 \% \) 접종 후 균일하게 섞은 후 petri dish에 \( 20 \mathrm{ml} \) 분주하였다. 실온에서 응고시킨 후 pateur pipette을 이용하여 직경 \( 6 \mathrm{~mm} \) well을 만들어 각각의 추출물 \( 70 \mu \mathrm{l} \)를 주입하였고 negative control로는 각각의 추출용매를 주입하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 일정 시간 배양 후 well 주위의 생장 저해환 직경 \( (\mathrm{mm}) \) 을 측정하였다.</p> <h2>최소저해농도 측정</h2> <p>항균활성이 나타난 추출물의 최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)을 측정하기 위해 항균력 측정과 동일한 방법으로 실행하여 생장 저해환이 \( 8 \mathrm{~mm} \) 이상을 나타내 것을 최소저해농도로 정하였다.</p> <h2>DPPH radical 소거활성</h2> <p>천문동 추출물의 항산화 효과는 Sanchez-Moreno C의 방법으로 측정하였다. \( 0.1 \mathrm{mM} \) DPPH \( 1 \mathrm{ml} \) 와 농도별 추출물 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 가하여 잘 섞고, 30 분간 암실에서 방치한 다음 \(517 \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 이때 추출물 대신 메탄올을 가하여 대조구로 하였고 시료와 흡광도의 차이를 백분율로 하여 radical 소거능을 나타내었으며, 직선회귀식을 구한 후 \( 50 \% \) 소거능을 나타내는 시료 농도를 \( \mathrm{IC}_{50} \) 으로 결과를 나타내었다. 양성 대조구로는 L-ascorbic acid를 사용하여 활성을 비교하였다.</p> <p>Radical-scavenging activity \( (\%)=\left[\left(\mathrm{A}_{\mathrm{DPPH}}-\mathrm{A}_{\mathrm{Extr}}\right) / \mathrm{A}_{\mathrm{DPPH}}\right] \times 100\\ \) \(\mathrm{A_{DPPH}}\): Control absorbance at \( 517 \mathrm{~nm}\\ \) \(\mathrm{A_{Extr}}\): Sample absorbance at \( 517 \mathrm{~nm}\\ \)</p> <h2>총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 측정</h2> <p>추출물의 폴리페놀 함량은 Folin-Denis 법에 의해 측정하였다. 추출물을 농도별로 제조한 후, 농도별 추출물 \( 0.2 \mathrm{ml} \), 증류수 \( 1.8 \mathrm{ml} \), Folin-Ciocaltue's phenol 시약 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 을 섞은 후 3 분간 반응시켰다. 반응시킨 용액을 \( 0.4 \mathrm{ml} \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 포화용액과 증류수 \( 1.4 \mathrm{ml} \) 을 첨가하고 1 시간 동안 암실에서 반응 후 \( 725 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 폴리페놀 화합물은 표준물질 tannic acid(TA, Sigma Co., St. Louis, Mo, USA)를 \( 0,25,50,100,250,500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 조정한 후 흡광도를 측정하여 작성한 표준곡선으로부터 총 폴리폐놀 함량을 구하였다.</p> <p>플라보노이드의 함량은 Nieva Moreno 법을 변형하여 측정하였다. 각 농도별 추출액 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 에 \( 80 \% \) ethanol을 \( 0.4 \mathrm{ml} \) 을 혼합한 후 \( 10 \% \) aluminum nitrate \( 0.1 \mathrm{ml}, 1 \mathrm{M} \) potassium acetate \( 0.1 \mathrm{ml}, 80 \% \) ethanol \( 4.3 \mathrm{ml} \) 을 첨가하였다. 혼합액은 상온에서 40 분간 반응시킨 후 \( 415 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 플라보노이드 함량의 표준곡선은 quercetin (Sigma Co.)을 \( 0,25,50,100,250,500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 조정한 후 흡광도를 측정하여 작성하였다.</p>