시험균을 접종하고 희석한 크림을 배지에 도말하여 균 수와 사멸 정도를 확인했다. 이때 플라보노이드류를 많이 포함한 에틸아세테이트 분획과 \( 50 \% \) 에탄올 추출물을 사용했다. Disc diffusion assay로 6가지 피부 상재균에 대해 원산지별 감초 추출물의 항균 활성을 확인했고, B. subtilis, E. coli, 그리고 P. acnes와 P. aeruginosa에 대하여 에틸아세테이트 분획이 항균 활성을 보임을 확인했다. 그중 그람음성균인 E. coli 그리고 P. aeruginosa에 대한 저해효과가 상대적으로 더 뛰어나며, 에틸아세테이트 분획이 에탄올 추출물보다 더 높은 항균활성을 띰을 확인했다.
<p>하였고, 대조군으로 방부제를 첨가하지 않은 크림과, 메틸 파라벤 \( 0.20 \% \) 함유한 크림을 제조하여 사용하였다(Table 2). 시험균은 감초 추출물 에틸아세테이트 분획에서 항균활성을 나타낸 B. subtilis, P. acnes, E. coli, P. aeruginosa 을 사용하였고, 균 수는 \( 10 ^ { 6 } \sim 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 로 맞추어 크림에 접종하였다. 시험균이 접종된 크림은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 100 \mathrm { rpm } \) 으로 조정된 shaking incubator에서 보관하여 실험에 사용하였다. 각각의 시험균이 접종된 크림을 \( 1 \mathrm { ~g } \) 씩 취해 멸균된 증류수로 희석하고 고체배지에 도말하여 1 일 후 균 수를 측정하고, 7 일 후 균 수가 처음 균 수보다 \( 99.90 \% \) 사멸하는지를 확인하였다. 그 후 1 주마다 균 수를 측정하여 4 주까지 균 수를 확인 하였다. 실험은 방부제의 유효성 측정에 대한 시험방법의 법규 중 CTFA법을 기준으로 시행하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>원산지별 감초 추출물의 수득률</h2> <p>한국, 중국, 우즈베키스탄 감초 각 \( 100 \mathrm { ~g } \) 을 \( 50 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm { ~L } \) 에 24 시간 동안 침적시킨 후 여과 및 감압하여 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 파우더를 얻었고, 이때 수득률은 한국 감초 \((19.24 \%) \), 중국 감초 \((18.34 \%) \), 우즈베키스탄 감초 \( (17.33 \%) \) 이었다. 에틸아세테이트 분획은 \( 50 \% \) 에탄올로 추출한 것을 헥산으로 비극성 물질을 제거한 뒤 에틸아세테이트로 분획하여 추출하였고, 감압하여 파우더를 얻었다.</p> <p>원산지별 감초 추출물 에틸아세테이트 분획의 수득률은 한국 감초 \( (2.22 \%) \), 중국 감초 \( (2.43 \%) \), 우즈베키스탄 감초 \((2.07 \%) \)이었다. 에틸아세테이트 분획은 플라보노이드류를 많이 함유하고 있으며, 본 연구에서는 \( 50 \% \) 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획을 실험에 사용하였다.</p> <h2>Disc diffusion assay에 의한 항균활성</h2> <p>원산지별 감초 추출물의 disc diffusion assay에 의한 항균 활성: 원산지별 감초 추출물에 대한 항균활성은 3 종의 그람 양성균(S. aureus, B. subtilis, \( P \). acnes), 2 종의 그람 음성균(E. coli, \( P \). aeruginosa)과 지루성피부염과 비듬을 유발하는 균인 P. ovale을 포함한 총 6 종의 피부 상재균을 disc diffusion assay로 실시하였으며 결과는 Table 3 에 나타내었다. 원산지별 감초의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 공통적으로 그람 양성균인 B. subtilis와 P. acnes에 대하여 항균활성을 나타내었다. \( 50 \% \) 에탄올 추출물의 B. subtilis에 대한 항균활성은 한국, 중국, 우즈베키스탄 감초 모두 \( 2.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 농도에서 clear zone이 \( 14 \mathrm { ~mm } \) 로 동일한 항균활성을 나타내었다 P. acnes에 대한 항균활성은 한국 감초와 우즈베키스탄 감초가 \( 2.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 농도에서 clear zone이 \( 13 \mathrm { ~mm } \) 로 동일한 항균활성을 나타내었고 중국 감초보다 높은 항균활성을 나타내었다. 원산지별 감초 추출물의 에틸아세테이트 분획에 대한 항균활성은 그람 양성균인 B. subtilis, P. acnes와 그람 음성균인 E. coli, P. aeruginosa, 총 4종의 균에 대하여 항균활성을 나타내었다. 원산지별 감초 추출물의 에틸아세테이트 분획의 B. subtilis에 대한 항균활성은 한국, 중국, 우즈베키스탄 감초 모두 \( 2.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 농도에서 clear zone이 \( 18 \mathrm { ~mm } \) 로 동일한 항균활성을 나타내었다. 여드름균인 P. acnes 에 대한 에틸아세테이트 분획의 항균활성은 한국 감초가 \( 2.5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 농도에서 clear zone이 \( 18 \mathrm { ~mm } \) 로 중국 감초와 우즈베키스탄 감초가 같은 농도에서 clear zone이 \( 15 \mathrm { ~mm } , 14 \mathrm { ~mm } \) 인 것과 비교해서, 한국 감초가 중국, 우즈베키스탄 감초 보다 P. acnes에 대한 항균활성이 우수함을 확인하였다. 병원성균인 E. coli와 방부제에 대한 내성이 강하여 화장품산업에서 주의해야 하는 균인 P. aeruginosa에 대한 원산지별 감초 추출물 중 에틸아세테이트 분획의 항균활성 모두 한국 감초가 중국, 우즈베키스탄 감초 보다 우수한 항균활성을 나타냄을 disc diffusion assay를 통해 확인하였다. 원산지별 감초의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획의 항균활성 비교결과를 통해 \( 50 \% \) 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획으로 그람 음성균인 E. coli와 P. aeruginosa, 두 균을 더 저해함을 확인하였고, 에틸아세테이트 분획은 \( 50 \% \) 에탄올 추출물보다 항균활성을 나타내는 플라보노이드 성분이 다수 포함되어 있어 더 우수한 항균활성을 나타내는 것으로 판단된다.</p>