본 실험에서는 pancreatic lipase의 활성 저해물질을 식용 및 약용식물의 추출물에서 탐색한다. 대부분의 추출물에서 chloroform 분획에 활성이 있고 buthanol 분획에서 또한 활성이 나타난다. 이러한 결과로 lipase에 대한 활성이 높은 식물들을 대상으로 pancreatic lipase에 대한 저해활성 연구를 진행한다. 추가로 Pancreatic lipase 저해활성 물질을 백자인으로부터 분리할 수 있다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Pancreatic lipase 저해활성 물질의 탐색 및 선정</h2> <p>본 실험실에서 보유하고 있는 식용 및 약용식물의 추출물을 대상으로 pancreatic lipase의 활성 저해물질을 탐색하였다. 각각의 식물은 methanol로 추출하여 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이 되도록 제조한 후, pancreatic lipase 용액과 섞어 3분간 반응시킨 후, tributylin을 함유한 평판배지의 구멍에 넣고 4 시간 후 투명환(clear zone)의 크기를 측정하여 pancreatic lipase의 activity를 측정하여 투명환의 크기가 작은 시료를 1 차 탐색하여 13종의 식물을 선정하였다. 선정한 각각의 식물추출물을 methanol, chloroform, buthanol, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 층으로 용매분획하여 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도가 되도록 시료를 제조하여 pancreatic lipase에 대한 저해능을 조사하였다. 그 결과 methanol 추출물의 경우, pancreatic lipase에 대한 저해 효과는 Arecae pericarpium(대복피), Mucunae Caulis(계 혈 등), Rhus javanica(오배자), Thujae orientalis(백자인)이 우수한 저해활성을 나타냈다. 대부분의 추출물은 chloroform 분획에 활성이 있는 것으로 나타났으며, 오배자 등은 buthanol 분획에서도 활성이 있었다.</p> <p>Table 1의 결과에 따라 lipase에 대한 저해활성이 우수한 대복피, 계혈등, 오배자, 백자인의 methanol 추출물과 orlistat를 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 제조하여 각 시료가 Chemobacterium sp., Candida sp., Trichoderma sp., Rhizopus sp., 기원의 lipase나 porcine pancreatic lipase에 대한 선택적 저해활성 여부를 조사하였다. Orlistat의 경우, Candida sp. 유래 lipase와 porcine pancreatic lipase에 대해 상대적으로 강한 활성을 나타냈으며, 미생물에서 유래하는 lipase의 종류에 따라 제어활성의 차이를 나타내지만, 선택적 제어활성은 크지 않은 것으로 판단된다. 그러나 본 실험에서 선정한 대복피의 경우에 서는 미생물유래 lipase보다는 porcine pancreatic lipase에 대하여 강한 저해활성을 나타냄으로써 선택적 제어효과가 있는 것으로 사로된다. 또한 복분자 추출물의 경우에서는 Chemobacterium sp. 와 porcine pancreatic lipase에 서, 백자인의 경 우에서는 Chemobacterium sp., Candida sp. 유래 lipase와 porcine pancreatic lipase에서 상대적으로 우수한 저해효과를 나타내었다. 이와 같은 결과를 근거로 본 실험에서는 lipase에 대한 활성이 가장 우수한 것으로 판단되는 백자인을 대상으로 pancreatic lipase에 대한 저해활성 연구를 진행하였다.</p> <h2>Pancreatic lipase 저해활성 물질의 탐색</h2> <p>백자인으로부터 pancreatic lipase 활성물질을 분리하기 위하여 Fig. 1에서 나타낸 바와 같이 백자인 \( 200 \mathrm{~g} \) 을 6 일 동안 메탄올 \( 1 \mathrm{~L} \) 에 침지하여 3회 추출하고 진공회전농축기로 감압, 농축하여 \( 39.6 \mathrm{~g} \) 를 회수하고 이를 chloroform, buthanol, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 로 각각 분획하였다. Panreatic lipase에 대해 강한 저해활성을 나타내는 chloroform 층을 감압농축하여 \( 21.7 \mathrm{~g} \) 를 획득한 후, 이를 \( n \)-hexane/chloroform \( (1 / 1, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 조건에서 silica gel column chromatography(Kiesegel 60, paticle size : \( 0.040 \sim 0.063 \mathrm{~nm} \) )를 실시하여 활성물질 \( 2.4 \mathrm{~g} \) 을 용출하였다. 얻어진 활성분획을 chloroform / \( n \)-hexane/methanol(2/3/1)의 용매조건으로 Sephadex LH-20 column chromatography를 수행하여 활성분획 \( 0.74 \mathrm{~g} \) 을 획득하였다. 활성물질의 순도를 높이기 위하여 HPLC(YMC, ODS-H80, \( 250 \times 20 \mathrm{~mm} \), \( 30 \% \mathrm{CH}_{3} \mathrm{CN}(0.01 \% \) TFA), flow rate \( 2 \mathrm{ml} / \mathrm{min}) \) 를 수행하여 최종적으로 활성물질 TF-1, Tf-2, TF-3 각각 \( 3.5 \mathrm{mg}, 24 . \mathrm{mg} \), \( 1.3 \mathrm{mg} \) 을 분리하였다.</p>