과산화지질의 정량은 간조직 \( 1 \mathrm{~g} \)당 5배량의 \( 1 / 20 \mathrm{M} \) phos-phate buffer(pH 7.4) 용액을 더하여 빙냉하에서 마쇄한 후 이 마쇄 균질액을 \( 0.5 \mathrm{ml} \)씩 triple로 획득한다. SOD 활성도는 Oyanangui법에 준하여 시료를 조제한 후 UV visible spectorscopy를 이용하여 \( 550 \mathrm{~nm} \)에서의 흡광도 변화를 2분 동안 검사한다. 혈청의 GOT 및 GPT 활성은 Reitman-Frankel법으로 측정하고, 총 cholesterol, TG, HDL-C농도는 Kits를 사용하여 효소비색법으로 분석한다. 본 연구에 대한 모든 결과는 평균치와 펴준편차로 나타내고, 통계적 유의성을 상호 비교한다.
<h2>분석 시료의 조제 및 분석 방법</h2> <h3>1. 간 조직 중의 과산화지질 정량 및 단백질 함량 분석</h3> <p>과산화지질의 정량은 간조직 \( 1 \mathrm{~g} \)당 5배량의 \( 1 / 20 \mathrm{M} \) phos-phate buffer(pH 7.4) 용액을 가하여 빙냉하에서 마쇄한 후 이 마쇄 균질액을 \( 0.5 \mathrm{ml} \)씩 triple로 취하였다. TBA(Thio-barbituric acid)변법으로 \( 7 \% \) SDS로 가용화시켜 여기에 \( 0.67 \) \( \% \) acetic acid를 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 50분간 가온 후 즉시 급냉시켜 butanol \( 5 \mathrm{ml} \)로 추출하고, \( 3000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리한 후 상등액을 취하여 Elisa률 이용하여 535\( \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 단백질의 정량은 Lowry 등의 방법에 의해서 \( 750 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하고 표준 단백질 시료로서 bovine serum albumin을 이용하여 같은 방법으로 측정한 후 단백질량을 산출하였다.</p> <h3>2. 간 조직 중의 superoxide dismutase(SOD), catalase 및 \( \mathrm{GSH} \)-peroxidase(GPx)의 활성 측정</h3> <p>SOD 활성도는 Oyanangui법에 준하여 Fig. 1에 나타낸 방법으로 시료를 조제한 후 UV visible spectorscopy를 이용하여 \( 550 \mathrm{~nm} \)에서의 흡광도 변화를 2분 동안 측정하였다. 시료의 효소활성도를 알아보기 위한 표준액으로서는 Sigma사의 superoxide dismutase standard를 사용하였다. Catalase 활성도는 Chance법에 준하여 phosphate buffer (0.05 M pH 7.0) \( 1.9 \mathrm{ml} \)에 sample (간 homogenate를 3000 rpm에서 20 분간 원심분리하고 그 상등액 \( 100 \mu 1 \)를 buffer로 80배 희석) \( 0.1 \mathrm{ml} \)와 과산화수소 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 \( 240 \mathrm{~nm} \) 에서 1분 30초 동안 흡광도 감소 측정을 하였다. GPx 활성은 Fig. 2에 나타낸 방법에 의해 \( 340 \mathrm{~nm} \)에서 1분 30초간 흡광도 감소 측정을 하였다.</p> <h3>3. 혈청 중의 GOT, GPT 및 지질농도 분석</h3> <p>분리한 혈청의 GOT 및 GPT 활성은 Reitman-Frankel법으로 측정하였고, 총 cholesterol, TG, HDL-C농도는 Kits(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)를 사용하여 효소비색법(enzymatic colorimetric method)으로 분석하였다. 혈청 LDL-C 농도는 Friedwald법에 의하여 산출하였고, LDL-C/HDL-C 및 TC/HDL-C ratio는 실험을 통해 얻은 혈액 지질 측정치들을 이용하여 계산으로 구하였다.</p> <h3>4. 통계처리</h3> <p>본 연구에 대한 모든 실험 결과는 평균치와 표준편차로 나타내었고, 통계적 유의성은 student's t-test를 이용하여 상호 비교하였다.</p>