본 연구에서는 UV-visible spectrophotometer, pH meter, 점도 측정기 등을 사용하였으며, 건조된 굴피나무 수피를 이용하여 추출물을 만드는 과정을 설명한다. 특히, 굴피나무 수피를 에탄올에 침적한 후 비극성 성분을 제거하고 ethyl acetate 분획을 통해 파우더를 얻었다. 이 때, 수득률은 약 \( 1.88\% \)였다. 또한, 총페놀 함량 분석을 위해 Folin-Denis법을 사용하였다. 이 방법은 페놀성 물질이 phosphomolybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 현상을 이용한다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>UV-visible spectrophotometer는 Varian(Australia)사의 Cary 50, \( \mathrm { pH } \) meter는 Istek(Korea), 점도 측정은 Brookfield(DV-E viscometer, USA)사의 기계를 사용하였다. 시료를 보관한 항온조는 JISICO(Korea)사의 J-HR01B를 사용하였으며, 굴피나무 추출 및 크림 제조에 사용한 증류수는 Barnstead, US/NANO PURE(USA)에 통과시킨 것을 사용하였다. \( \mathrm { pH } \) 표준 용액, 에탄올(EtOH), ethyl acetate(EtOAc) 등 각종 용매는 Dae Jung Chemical & Metals사 제품을 사용하였으며, Folin 시약은 Sigma Chemical Co.(USA)에서 구입하여 사용하였다. 굴피나무 수피(제주도)는 2006년 3월 경 경동시장에서 \( 1 \mathrm { ~kg } \) 구매하여 실험에 사용하였고, 그 중 \( 100 \mathrm { ~g } \)을 대조표본으로 보관하였다.</p> <h2>굴피나무 분획물 제조</h2> <p>건조된 굴피나무 수피 \( 50 \mathrm { ~g } \)을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 \( 500 \mathrm { ~mL } \)를 이용하여 일주일 동안 침적시킨 후 여과하였다. 이 여액을 감압 농축한 후 물과 hexane을 이용하여 비극성 성분을 제거하고 이후 ethyl acetate 분획을 감압-농축하여 파우더를 얻었으며 이 때 수득률은 약 \( 1.88 \% \) 였다.</p> <h2>총 페놀의 함량 분석법</h2> <p>총페놀 함량 분석에 널리 사용되는 Folin-Denis법은 페놀성 물질이 phosphomolybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 현상을 이용한 것으로 다음과 같이 실시하였다. Ethyl acetate 분획에 \( 60 \mathrm { uL } \)에 증류수 \( 960 \mathrm { uL } \)를 넣고 잘 혼합한 후, Folin 시약 \( 60 \mathrm { ~uL } \)와 탄산나트륨 포화용액 \( 120 \mathrm { ~uL } \) 를 넣는다. 이것을 잘 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 30 \mathrm { ~min } \)간 방치시킨 후 \(640 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 catechin을 이용하여 작성된 표준곡선으로부터 함량 \(( \%) \)로 환산되었다.</p> <h2>사용균주</h2> <p>본 실험에 사용된 균주는 여드름의 원인균인 Propionibac-terium acnes(P. acnes) ATCC6919와 비듬균인 Pityrosporum ovale(P. ovale) ATCC12078, 호기성 그람 양성 균주인 Staphylococcus aureus(S. aureus) ATCC6538는 한국 미생물 보존센터에서 분양 받아 사용하였다.</p> <h2>배지 및 배양조건</h2> <p>P. acnes의 배양 배지는 Reinforced clostridial(RC) 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 P. acnes는 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하면서 실험 \( 72 \mathrm { ~h } \) 전에 활성화 시켰으며, 균을 배양 배지에 접종한 후 anaerobic jar에서 Gaspack system(Merck Anaerocult \( ^ {\circledR } \) Gaspack system, Germany)을 이용하여 밀봉하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 72 \mathrm { ~h } \) 동안 혐기성 배양하였다. 호기성 균주인 S. aureus 는 Mueller-Hinton 배지(Merck, Germany)를 사용 하였으며 균을 접종한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양하면서 사용하였다. 또한 비듬균인 P. ovale는 Pityrosporum 배지(Malt extract agar \(6 \% \), ox-bile \( 2 \% \), tween \( 401 \% \), glycerol mono-oleate \( 0.25 \%) \)를 사용하였으며 균을 접종한 뒤 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양하여 사용하였다.</p>