본 연구는 흰쥐를 대상으로 노화유도, 고지방식이, L-arginine 투여, 운동의 4가지 요소를 12주 동안 실시한 후 혈액을 채취한다. 고지방식이를 위한 사료는 지방이 전체 칼로리의 \(60\%\)를 차지하는 것을 사용하였다. 노화유도는 D-galactose를 사용해 산화적 스트레스생성증가를 유발하였고, L-arginine는 체중 kg당 \(150\)ml를 매일 \(1\)회 투여하였다. 운동은 설치류 전용 트레드밀을 사용해 주 \(6\)회 \(60\)분간 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>연구대상</h2> <p>본 연구의 실험동물은 (주)샘타코로 부터 6주령 Sprague-Dawley 계의 수컷 흰쥐 50마리를 분양 받아 1주간의 환경적응을 거친 뒤 무선배정을 통하여 본 실험을 하였다. 실험집단은 총 4그룹으로 분류하였으며, 한 집단에 8마리씩 각각 다음과 같이 분류하였다.</p> <p>(1) 노화유도-고지방 사료 집단(aging-high fat diet; AG+HF, (2) 노화유도-고지방 사료+L-arginine 투여 집 (AG+LA), 노화유도-고지방사료+운동집단 (AG+EX), (3) 노화유도-고지방사료+L-arginine+운동집단 (AG+LA+EX)으로 실험기간 동안 식이와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다. 사육실의 온도 \( \left(22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C}\right) \), 습도 \( (60 \pm 3 \%) \) 그리고 조명 (12시간light/dark cycle)은 자동조절에 의해 운영되었다.</p> <h2>고지방식이 섭취</h2> <p>본 연구를 위한 식이섭취는 지방이 전체 칼로리의 \( 60 \% \)를 차지하는 고지방식이사료를 섭취하였다. 각각의 실험동물은 고지방 식이로 사육하기 전 1주일간 고형배합사료로 환경에 적응시킨 후 실험용 고지방 식이사료 Table 1로 12주간 사육하였다.</p> <h2>노화유발</h2> <p>노화유도는 Lei 등의 방법을 인용하였으며, 산화적 스트레스생성증가로 노화를 유발하기 위해 D-galactose (D-gal) (Sigma, USA)를 생리식염수에 녹여 \( 50 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \)의 용량을 복강 내 투여하였다. Con그룹은 동일한 량의 생리식염수를 투여하였으며, 1일 1회, 총 12주간 투여하였다.</p> <h2>L-arginine 투여</h2> <p>L-arginine (No. W381918; Sigma, USA) 투여 방법은 Adriâo 등의 방법을 응용하였으며, 투여방법은 L-arginine (Sigma, USA)을 생리식염수에 혼합하여 체중 \( \mathrm{kg} \)당 \( 150 \mathrm{~mg} \)을 1일 1회 일정한 시간대와 순서로 12주간 경구 투여하였고, HF 집단과 EX 집단에게는 동일한 량의 생리식염수를 같은 방법으로 경구 투여하였다.</p> <h2>운동방법</h2> <p>운동 처치는 Chang 등의 방법을 인용하였으며, 설치류 전용 트레드밀에서 경사도 \( 0 \% \)에서 운동 적응기 1주를 거친 후 주 6회 \( 20 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \) 속도에서 60분간 총 12주간 실시하였다.</p> <h2>혈액채취 및 분석</h2> <p>12주간의 실험을 마친 실험 쥐들은 종료 2시간 후 pento-barbital sodium \( (50 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg}) \)을 복강 내로 투여하여 마취시킨 뒤 개흥하여 좌심실로부터 1회용 주사기로 \( 6 \mathrm{~ml} \)의 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 원심분리기(KM 70 Germany)로 10분간 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 원심 분리하여 혈청을 획득한 뒤 분석시까지 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다.</p> <p>GH, IGF-I, IGFBP, somatostatin분석은 면역방사측정법 (Immuno Radiometric Assay)을 이용하였다. 각각의 혈청 농도는 측정용 RIA kit (Daiichi, Japan)를 사용하여 8 counter COBRA-II (PACKARD, USA)로 측정하였고, 혈중 혈관염증 관련인자로는 fibrinogen은 PT-fibrinogen (삼일, 한국) 시약을 이용하여 Photo-optical Coagulation System 방법으로 측정하였다. 또한 plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) 농도는 효소면역측정법(enzyme immuno-assay) kit (Biopool Unea, Sweden)을 이용하여 측정하였다.</p> <h2>통계방법</h2> <p>모든 실험결과는 평균과 표준편차를 산출하였으며, 통계프로그램 SPSS Ver. 17.0을 이용하여 유의성을 검정하였다. 각각의 변인에 대한 처치 그룹간의 차이는 일원변량분석(one-way ANOVA)을 실시하였으며, 사후 검증으로 Tukey's multiple range test를 이용하였다. 각 분석 시 유의수준은 \( p<0.05 \) 로 설정하였다.</p>