분리균 YB-1105는 형태적, 생화학적 특성 및 \( 16 \mathrm { ~S } \) rDNA 서열이 B. licheniformis와 99.9% 유사하며, 차이점은 sorbitol 이용능력이 없다는 것이다. 이에 따라 YB-1105는 청국장 발효 주요 미생물인 B. licheniformis로 판단되었다. 또한, 이 분리균은 LB 액상배지에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24 시간 배양 후 배양액과 균체파쇄액에서 \( \beta \)-galactosidase 활성을 보여주었는데, 이 활성은 대부분 균체 내부에서 나타났다.
<p>분리균 YB-1105는 포자를 형성하는 그람양성 간균이며 API \( 50 \mathrm { CHB } \)와 \( 20 \mathrm { E } \) kit를 사용하여 생화학적 특성을 조사한 결과 B. licheniformis와 유사도가 \( 99.9 \% \)로 가장 높게 나타났고 당 이용성 중 sorbitol 이용능만이 차이가 있었으며 분리균은 이를 이용하지 못하였다. 또한 분리균은 arginine dehydrolase, gelatinase, oxidase와 nitrate 환원 활성을 보였으며, lysine decarboxylase, ornithine decarboxylase, urease, tryptophane deaminase 등의 활성과 citrate 이용능력이 없고 acetoin, indole과 황화수소를 생성하지 못하였다. 또한 분리균의 16S rRNA 유전자를 PCR로 증폭한 후 \( 1,430 \mathrm { bp } \)크기의 염기서열(Genbank accession No. JQ292848)을 결정하였으며, 이를 미국 \( \mathrm { NCBI } \) 의 BLAST 검색방법을 사용하여 기존 에 등록된 세균들의 상응하는 염기서열과 비교한 결과, 우유 로 끓인 죽이나 분유에서 분리된 B. licheniformis 균주들의 염기서열(FJ641025, HQ850703)과 동일하였다. 따라서 분리균 YB-1105는 형태적, 생화학적 특성 및 \( 16 \mathrm { ~S } \) rDNA 서열로 볼 때 B. licheniformis로 판단되는뎨 청국장 발효 미생물 중 에 B. licheniformis는 주요 발효균으로 보고된 바 있다.</p> <h2>B. licheniformis의 균체내·외로 생산된 \( \beta \)-galactosidase의 반응특성</h2> <p>B. licheniformis YB-1105를 LB 액상배지에 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 약 24 시간 배양 후 \( \mathrm { pNP } - \beta \mathrm { Gal } \) 을 기질로 하여 배양상등액과 균체파쇄상등액에 존재하는 \( \beta \)-galactosidase활성을 조사한 결과 배양액 부피기준으로 \( 30 \mathrm { mU } / \mathrm { mL } \)과 \( 450 \mathrm { mU } / \) \( \mathrm { mL } \) 로 각각 나타나, 분리균이 생산하는 \( \beta \)-galactosidase는 대부분이 균체내에 존재하며 소량의 활성이 균체외에서 관찰되었다. 균체외에서 관찰된 효소가 분비된 효소인지 배양 중용균된 균체에서 유래된 것인지는 확실하지 않은 상태이나, B. coagulans \( \mathrm { RCS } 3 \) 의 경우 5 개의 isozyme 중 한 개가 배양상등액에서 관찰된 바 있으며 대부분의 \( \beta \)-galactosidase는 B. stearothermophilus, B. megaterium ATCC 14581, B. subtiis KL88에서 균체내 효소로 보고되었다.</p>