꿀풀 추출액을 농도별로 첨가하여 어류 병원성 미생물균에서 배양한 lactic acid bacteria 배양액의 항균활성을 측정하였다. Lactobacilli MRS broth 배지에서 lactic acid bacteria를 배양하였다. 꿀풀 잎과 꽃 추출액을 첨가하여 배양한 시료에서 강한 항균 활성이 나타났다. 꿀풀 추출액을 농도별로 첨가하여 배양한 lactic acid bacteria 배양액의 전체적으로 높은 항균활성도 측정되었다.
<p>이상의 결과로 보았을 때 lactic acid bacteria만을 배양 하였을 때나 꿀풀 추출액을 농도별로 첨가하여 배양하였을 때 모두 48시간이 최적 배양시간임을 확인할 수가 있었다. 또한 Lactobacilli MRS broth 배지에서 lactic acid bacteria만을 배양하였을 때 보다 자생식물 추출물을 첨가하여 배양하였을 때 균수가 증가하는 결과를 볼 수 있다.</p> <h2>항균활성 측정</h2> <p>어류 병원성 미생물인 그람 양성균 1종과 그람 음성균 12종에 대하여 꿀풀 잎과 꽃 추출액을 \( 10 \% \) 첨가하여 배양한 lactic acid bacteria 배양액을 가지고 항균활성을 측정하였다. 그 결과를 살펴보면 꿀풀 잎과 꽃 추출액을 첨가한 시료에서 모든 항균실험 균주에 대하여 강한 항균 활성을 나타내고 있다. 그 중에서도 추출액을 첨가하여 배양한 L. plantarum 시료에서 가장 강한 항균활성을 나타내었다. 다음으로 L. rhamnosus, E. faecium, P. pentosaceus 순으로 나타났다. 특히 꿀풀 꽃 추출액을 첨가한 시료에서는 꿀풀 잎 추출액을 첨가하여 배양한 시료보다 전체적으로 높은 항균활성을 나타내었다. Min 등의 꿀풀 열수 추출물을 가지고 실험한 결과보다 높은 항균활성을 나타내었다. 이는 꿀풀 추출액이 lactic acid bacteria 발효에 영향을 미쳐 항균활성을 증가시켰다고 사료되어진다.</p> <h2>DPPH radical 소거활성 측정</h2> <p>채집된 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액을 첨가하여 48시간 배양한 lactic acid bacteria 배양액의 항산화능을 DPPH에 대한 전자공여능(electron donating ability, EDA ( \( \% \)))으로 측정 하였다. 일반적으로 특정 물질에 대한 항산화 활성을 측정하는 방법에는 여러 가지가 있으나 그 중에서도 DPPH radical 소거활성법은 비교적 간단하면서 여러 개의 샘플을 동시에 측정할 수 있는 방법으로 흔히 이용되고 있다. DPPH 는 자신이가지고 있는 흘수의 전자 때문에 \( 518 \mathrm { ~nm } \)에서 강한 흡수 band를 보이나 phenolic 화합물과 같이 수소에 전자를 제공해주는 전자공여체와 반응을 하게 되면 전자나 hydrogen radical을 받아 phenoxy radical을 생성하게 된다. 따라서 흡수 band도 사라지게 되고 안정한 분자가 된다. 또한 공여된 전자는 비가역적으로 결합하며 그 수에 비계하여 진보라색의 DPPH의 색깔은 점점 옅어지게 되고 흡광도도 감소하게 된다. 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액을 농도별로 첨가하여 48시간 배양한 4종의 lactic acid bacteria 배양액에 전자공여능(EDA)을 측정하였다. 또한 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액 자체의 효과를 Fig. 2에 나타내어 추출물 자체의 효과인지 추출물에 의해서 lactic acid bacteria가 영향을 받아 효과를 나타내는지를 비교하였 다. 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액 자체의 전자공여능을 측정한 결과에서는 \( 20 \% \) 농도에서 꿀풀 꽃 추출액이 가장 높은 활성 \( 65 \% \)을 나타내었고 반면 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액을 농도별로 첨가하여 48시간 배양한 L. plantarum, L. rhamnosus, E. faecium, P. pentosaceus 배양액에서는 꿀풀 잎과 꽃 열수 추출액 자체만을 측정한 결과보다 훨씬 높은 전자공여능을 나타내었다. 각 추출액을 \( 5 \% \) 첨가하였을 때부터 높은 활성을 나타내기 시작하였으며 추출액을 \( 10 \% \)를 첨가하였을 경우 가장 높은 전자공여능을 나타내었다. 그 중에서도 꿀풀 꽃 추출액을 첨가하여 배양한 L. plantarum, L. rhamnosus 배양액의 전자공여능을 합성 항산화제인 BHA와 BHT의 전자공여능과 비교하였을 때 BHA( \( 90 \% \))와는 유사하거나 조금 높은 활성을 BHT( \(81 \%) \)보다는 높은 라디칼 소거활성을 나타내었다. 추출액을 첨가하여 배양한 E. faecium, P. pentosaceus 배양액에서도 L. plantarum, L. rhamnosus 배양액 보다는 못하지만 식물 자체의 전자공여능 보다는 높은 활성을 나타내었다. Joo 등의 열수추출물 항산화 활성 시험결과와 비교하였을 때 본 연구에서 측정한 꿀풀 추출물 자체의 전자공여능은 낮았으나 꿀풀 추출물을 lactic acid bacteria에 첨가하여 배양한 배양액을 추출하여 시험한 결과에서는 높은 전자공여능을 나타내었다. 이와 같은 결과로 L. plantarum, L. rhamnosus에 꿀풀 꽃 추출액을 첨가할 경우 전자공여능이 높게 나타났으며 이는 꿀풀 꽃 추출액이 lactic acid bacteria 발효에 영향을 미치는 것으로 생각되어진다.</p>