본 논문에서는 랫트를 7마리씩 3군으로 나누어 실험을 진행하였다. 기본사료에 누에분말을 200, 400mg/kg BW로 첨가하여 조제한 실험용 사료를 6주 동안 투여하여 간장조직의 산화적 스트레스와 세포막 유동성에 미치는 누에분말의 영향력을 평가했다. 사료는 탄수화물 57.8%, 단백질 16.0%, 지질 18.0%, 비타민 1.0%, 무가질 3.5%, 섬유질 3.0%, DL-methionine 0.3%, choline chloride 0.2%로 이루어져 있으며, cholesterol 0.5%, sodium chloride 0.2%를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였다. 간장조직의 분획은 HEPES완충용핵을 사용하여 mitochondria, microsome 및 cytosol획분으로 분획하여 단백질의 함량을 Lowry 등의 방법에 따랐고, 세포막 유동성은 형광광도계를 이용하여 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>동물실험 및 사료조성</h2> <p>한국화학연구소에서 구입한 Sprague Dawley계 랫트(male, \( 160 \pm 10 \mathrm{~g} \) )를 구입하여 본 대하 동물사육실에서 2주동안 예비사육한 다음, 7 마리씩 3 군으로 나누어 실험용 기본사료 (control group)로써 사육하면서 누에(Bombyx mori L.) 분말을 SD계 랫트에 하루 200 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW로 사료에 첨가하여 조제한 실험용 사료(SWP-200 및 SWP-400 groups)로써 6주간 투여한 다음, 간장조직의 산화적 스트레스 및 세포막 유동성에 미치는 누에분말의 영향을 평가하였다. 동물사육실은 항온항습 \( \left(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 65 \pm 2 \% \mathrm{RH}\right) \) 하에서 12 시간 싸이클(06:00~18:00)로 명암이 자동 조절된다.</p> <h2>조제사료의 조성</h2> <p>본 실헙에 사용한 사료조성은 전보[8]와 같은 방법으로 탄수화물 \( 57.8 \% \) ( \( \alpha \)-corn starch: \( 44.5 \%+ \) sucrose \( 13.3 \% \) ), 단백질 \( 16.0 \% \) (sodium-free casein), 지질 \( 18.0 \% \) (lard \( 18.0 \% \)), 비타민과 무가질(AIN-76 mixture) 각각 \( 1.0 \%, 3.5 \% \), 그리고 섬유질 \( 3.0 \% \), DL-methionine \( 0.3 \% \), choline chloride \( 0.2 \% \)를 첨가하였으며, 여기에 cholesterol \( 0.5 \% \) 및 sodium chlo-ride \( 0.2 \% \) 를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였다. 실험그룹의 샤료조성은 누에분말(SWP)을 하루에 각각 200 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW가 섭취되도록 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \) 의 SWP를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \) 씩 제외하고 조제하였다.</p> <h2>간장조직의 분획</h2> <p>간장의 분획은 Laganiere 등의 방법에 따라 HEPES완충용핵(10 \( \mathrm{mM} \) HEPES, 10 \mathrm{mM} \mathrm{KCl}, 280 \mathrm{mM} \) sucrose, \( \mathrm{pH} \) 7.4)을 사용하여 mitochondria, microsome 및 cytosol획분으로 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 측정하였다.</p> <h2>콜레스테롤의 함량 측정</h2> <p>간장조직에서 분획한 mitochondria 및 microsome획분 중의 콜레스테롤의 함량은 Rudel 등의 방법에 따라 o-phthalaldehyde법으로 측정하여 표준검량선에 의하여 이들 획분중의 콜레스테롤의 함량을 측정하였다.</p> <h2>세포막 유동성의 측정</h2> <p>간장의 mitochondria 및 microsome획분중의 세포막 유동성(membrane fluidity)은 혐광 probe로서의 1,6 -diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH)을 사용한 Heron 등에 의한 형광분광법에 따라 측정하였다. \( 50 \mathrm{mM} \) 인산완충용핵 \( (\mathrm{pH} \) 7.2,\( 2750 \mathrm{\mu l}) \), 증류수(\(\mathrm{250 \mu l}\)), 시료(\(\mathrm{100 \mu l}\))를 첨가-혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 수조에서 5 분간 방치한 다음, probe인 \( 0.167 \mathrm{mM} \)TMA-DPH[1-(4-trimethylammoniumphenyl)-6-phenyl-1,3,5-hexatriene, p-toluene-sulfonate] 용핵을 \( 6.67\mathrm{\mu l}\) 를 첨가·혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온 수조에서 shaking하면서 30 분간 반응시킨 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 을 유지하면서 형광광도계를 이용하여 \( 360 \mathrm{~nm} \) (excitation)와 \( 430 \mathrm{~nm} \) (emission)에서 측정하였다.</p>