실험에서 LPS를 처리한 RAW 264.7세포에 참치 심장 dichloromethane 분획물을 넣었을 때 항염증 효과를 보았다. 그 결과, LPS의 처리에 의한 염증 반응에 있어 iNOS, COX-2 및 NF-KB p65 발현이 억제됨을 관찰하였다. 염증반응 시 IκB kinase가 활성화되고 IκB로 유리되고 핵 내로 이동하여 iNOS, COX-2 그리고 pro-inflammatory cytokine의 발현을 증진하게 된다. 또한 dichloromethane 분획물의 처리가 LPS에 의해 유도된 MAPKs와 NF-KB의 인산화를 억제시켜 전염증성 cytokine을 억제시킨다.
<h2>Dichloromethane 분획물의 iNOS, COX-2 및 NF-KB p65 발현 억제 효과</h2> <p>염증반응이 일어나게 되면 iNOS와 COX-2는 NO와 염증매개 물질인 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \)를 분비시키게 되며 이로 인해 조직 및 신경 손상과 함께 부종 등의 염증 반응을 촉진시키게 된다. 특히, \( \mathrm { NF } - \kappa B \) 는 iNOS와 \( \mathrm { COX } -2 \) 의 발현을 조절하는 전사인자로써 염증반응 시 IкB kinase가 활성화되어 IкB로 유리되어 핵 내로 이동하여 iNOS, COX-2 그리고 pro-inflammatory cytokine의 발현을 촉진하게 된다[19]. 따라서 본 실험에서는 LPS로 자극한 RAW 264.7세포에서 참치 심장 dichloro-methane 분획물을 처리하였을 때 항염증 효과를 확인하였다. 그 결과, LPS의 처리에 의한 염증 매개인자 (iNOS, COX-2 및 NF-кB p65)의 발현이 dichloromethane분획물을 처리시, iNOS는 \( 10-100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 농도 의존 적으로 감소하였으며, 특히 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 60 \( \% \) 이상의 발현이 감소되는 것으로 나타났다. COX-2의 경우, 50 과 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 유의적인 발현량 감소를 나타내었지만, 발현량 감소 효과는 크지 않았다. NF-кB p65의 발현량은 10-100 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 유의적인 감소효과를 나타내었고, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 40 \( \% \) 이상의 발현량 감소를 나타내었다. 따라서, NO와 전염증성 cytokine의 분비량은 iNOS와 \( \mathrm { NF } - \kappa B \)발현 조절을 통해 항염증 효과를 나타냄을 확인하 였다.</p> <h2>Dichloromethane 분획물의 MAPKs 발현 억제 효과</h2> <p>Mitogen-activated protein kinase (MAPKs)는 다양한 유전자의 발현과 분화 및 세포 생존, 사멸과 염증 반응을 조절하는 것으로 알려져 있다. ERK, JNK 및 p38와 같은 MAPKs는 염증반응에 있어서 인산화를 통해 신호전달을 함으로써 NF-KB의 활성화에 중요한 역할을 한다. 따라서 본 연구에서는 참치 심장 dichloromethane 분획물의 MAPKs (ERK, JNK 및 p-38)의 발현량 조절여부를 western blot을 통해 확인하였다. LPS로 유도된 RAW 264.7 세포에서의 대조군에서는 ERK, JNK 그리고 \( \mathrm { p } 38 \)의 인산화를 확인하였고, dichloromethane 분획물을 각 농도별로 처리한 실험군에서는 인산화된 p-38과 p-JNK의 발현이 농도 의존적으로 인산화가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, LPS에 의해 증가된 인산화된 p-38의 발현량이 58 \( \% \) 및 67 \( \% \) 정도 감소되는 것으로 나타났다. p-JNK의 경우, dichloromethane 분획물을 50 및 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도 처리시, 35 \( \% \)와 40 \( \% \) 정도 발현량이 감소되는 것으로 나타났다. 반면, p-ERK의 경우, 50및 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 유의적인 발 현량 감소를 나타내었으며, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 발현량 감소가 가장 크게 나타났다. 이를 통해, dichloromethane 분획물의 처 리가 LPS에 의해 유도된 MAPKs와 NF-KB의 인산화 억제 를 통해 전염증성 cytokine의 생성이 억제됨을 알 수 있다.</p>