한국 종균협회에서 구입한 병원성 균주를 LB, TSA 배지에 24시간 배양하여 \(37{}^{\circ}\mathrm{C}\)에서 항균활성을 paper disc법으로 측정하였다. 25종의 유산균을 MRS broth에 48시간 동안 배양한 배양액을 centrifuge하여 상등액만 분리 후 항균활성 측정용으로 사용하였고, paper disc에 \(100\mu\mathrm{l}\)을 집적하여 \(37{}^{\circ}\mathrm{C}\)에서 24시간 배양하여 생성된 억제환으로 항균 활성 효과를 측정하였다.
<h2>병원성 세균</h2> <p>본 실험에 사용된 병원성 균주는 한국 종균협회에서 구입한 Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella typhimurium, Escherichia coli \( \mathrm { O } 157 \) 균주를 \( \mathrm { LB } \) ( \( \mathrm { NaCl } 10 \mathrm { ~g } \), Tryptone \( 10 \mathrm { ~g } \), Yeast extract \( 5 \mathrm { ~g } \) per Liter) 및 TSA (Pancreatic digest of casein \( 17 \mathrm { ~g } \), Pancreatic digest of soybean meal \( 3 \mathrm { ~g } , \mathrm { NaCl } \) \( 5 \mathrm { ~g } , \mathrm { K } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } 2.5 \mathrm { ~g } \), glucose \( 2.5 \mathrm { ~g } \) per Liter BD, USA) 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 배양하며, 항균활성 측정용으로 사용하였다.</p> <h2>항균활성 측정</h2> <p>장내 질병 미생물에 대한 항균활성 측정은 paper disc 법을 이용하여 측정하였다. 유아분변에서 분리한 25종의 유산균을 MRS broth에 48 시간 동안 혐기적으로 배양한 배양액을 centrifuge \( (15,000 \mathrm { rpm } , 5 \mathrm { ~min } ) \) 하여 상등액만을 분리하여 활성측정시료로 사용하였다. 먼저 병원성균을 LB Broth, 또는 TSA broth에 24 시간 배양하여 멸균된 glass bead를 사용하여 LBAgar, TSA Agar에 회전하면서 전면에 병원균 배양액을 골고루 도말하였다. 항균측정용 시료액은 paper disc \( (8 \mathrm { ~mm } ) \) 에 \( 100 \mu \mathrm { ~l } \) 를 집적하여 \( 37 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 배양하였다. 생성된 억제환(직경 \( \mathrm { mm } \) )으로 항균 활성 효과를 측정하였다. 이 중 가장 큰 항균 효과를 가진 유산균을 선발하였다.</p> <h2>항생제 저항성 조사</h2> <p>분리된 유산균을 오랫동안 특성을 유지시키며 보존하기 위하여 항생제 저항성 조사를 실시하였다. 유아분변과 김치에서 분리한 유산균을 48 시간 배양한 현탁액을 Kanamycin, Ampicillin, Tetracyclin, Streptomycin이 첨가 된 MRS 한천 배지에 도포하였다. 혐기성상태의 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양기에 넣고 배양하였을 때 해당 항생제 함유 배지의 균주 생육상태를 조사하였다.</p>