소포자 배양 후 사용된 배지가 자가독소를 함유하고 있어 배의 발생이 저하되거나 비정상인 배가 생기는 경우가 있으므로, 새 배지로 교환하거나 새 배지를 첨가하여 배양하는 방법을 취하고 있다. 유채와 순무의 경우 배양 1~3일 후 새 배지로 교환하면 배의 발생이 2~8배 증가한다. 옥수수의 경우 배양 18일 후 기존 배지에 새 배지를 첨가하고, 유채의 경우 배양 12일 후 새 배지를 첨가하여 배양하는 방법을 취하고 있다. 배양용기의 크기별로 살펴보면 \( 3.5 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \) 크기보다 \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \) 크기에서 약 2.5배 많은 배가 생겼다.
<p>소포자를 배양한 후의 배지 내에는 자가독소가 함유되어 있으며 이로 인해 소포자 배의 발생이 저하될 뿐만 아니라 배의 발달에도 영향을 미쳐 생장이 멈추게 되거나 비정상인 배가 생기게 된다 (Kott et al. 1988). 이를 극복하기위해 배양 후 사용한 배지를 새 배지로 교환하거나 또는 새 배지를 첨가한다. 유채에서는 배양 1 일 후 사용한 배지를 새 배지로 교환하면 자엽배의 발생이 약 2 배정도 증가하며 (Kott et al. 1988), 순무의 경우에도 배양 3 일 후 새 배지로 교환하면 품종에 따라 차이는 있으나 배의 발생이 2-8배 이상, 자엽배의 발생은 최대 3 배 이상 증가한다 (Hansen and Svinnset 1993). 한편 옥수수의 소포자 배양 시에는 새 배지로 교환하는 대신 배양 18 일 후 기존의 배지에 새 배지를 첨가하여 배양하며 (Nägeli et al. 1999), 유채의 소포자 배양 시에도 배양 12 일 후 새 배지를 첨가한 후 진탕하면서 배양하면 \( 75 \% \) 이상의 배가 정상 어뢰형 배로 발달한다 (Swanson et al. 1987). 본 연구에서도 배양 2 ,3 주 후에 새 배지를 첨가하는 실험을 수행 하였으나 배의 발생이나 발생한 배의 발달 모두 큰 변화가 없었다. 이와 같은 결과에 대한 원인으로 여러 가지를 고려 할 수 있으나 새 배지의 첨가시기에 따라서 배의 발생이 달라질 것으로 생각된다. 실제로 유채의 경우 배양 직후부터 비발생적 소포자 (non-embryogenic microspore)에서 자가독소가 생성되어 배지로 방출되며 독소의 제거 시기가 늦을수록 배의 발생이 감소하는데 배양 1 일 후 사용한 배지를 새 배지로 교환하면 배의 발생과 발달이 크게 증가한다 (Kott et al. 1988). 따라서 고추의 소포자 배양 시 새 배지를 첨가하는 경우 좀 더 빠른 시기에 하는 것이 배의 발생과 발달에 효과적일 것으로 생각된다.</p> <h2>배양용기의 크기가 배의 발생에 미치는 영향</h2> <p>배양 용기가 배의 발생에 미치는 영향을 조사하기 위해 배양 배지 내 소포자 밀도가 약 \( 10 \times 10 ^ { 4 } / \mathrm { mL } \)이 되도록 조정한 후 크기가 \( 3.5 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \) 와 \( 6.0 \times .15 \mathrm { ~cm } \)인 용기에 각각 \( 1 \mathrm { mL } \)과 \( 2.5 \mathrm { mL } \)씩 분주하여 4주 후에 배의 발생 및 발달을 조사하였다. 한 개의 용기에서 발생한 배의 전체 수는 \( 3.5 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \) 크기의 것을 사용한 경우 19.2개 이었으나, \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \) 크기의 것을 사용한 경우에는 48.7개로 약 2.5배 많았다. 그러나 \( 3.5 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \)와 \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \)인 용기에 각각 \( 1 \mathrm { mL } \) 과 \( 2.5 \mathrm { ml } \)씩 분주하였으므로 치상한 소포자 수에 따른 비율로 볼 때 배의 발생에는 큰 차이가 없는 것으로 나타났다.</p>