\( \beta \)-Secretase 저해활성은 \(10 \mu \mathrm { L } \) 의 \( \beta \)-secretase, 전처리한 시료 \( 10 \mu \mathrm { L } \), \( 10 \mu \mathrm { L } \) 의 50 \( \mathrm { mM } \) 초산나트륨 완충용액 그리고 \(10 \mu \mathrm { L } \)의 기질을 섞어 60분간 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 반응시켜 흡광도 특정을 통해 계산했다.
<p>Butyrylcholinesterase 저해활성은 butyrylcholinesterase와 butyrylcholine을 사용하여 위의 acetylcholinesterase 저해활성 측정방법과 동일하게 측정하였다.</p> <p>\( \beta \)-Secretase 저해활성 : \( \beta \)-Secretase 저해활성은 \( 10 \mu \mathrm { L } \) 의 50 \( \mathrm { mM } \) 초산나트륨 완충용액 \( ( \mathrm { pH } 4.5), 10 \mu \mathrm { L } \) 의 \( \beta \)-secretase \( (1.0 \) \( \mathrm { U } / \mathrm { mL } ), 10 \mu \mathrm { L } \) 의 기질(750 nM Rh-EVNLDAEFK-Quencher) 그리고 위와같이 전처리한 시료 \( 10 \mu \mathrm { L } \) 을 섞은 후 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 60 분간 반응시킨 다음 excitation \( 530 \mathrm { ~nm } \), emitted \( 590 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 아래식으로 저해활성을 계산하였다.</p> <p>\( \beta \)-Secretase 저해활성 \( ( \%)= \) \[ \left [1- \frac {\text { 효소와 기질, 시료혼합액의 } 60 \text { 분 반응후 흠광도-대조구 훕광도 } } {\text { 효소와 기질의 } 60 \text { 분 반응후 홉광도-대조구 홉광도 } } \right ] \times 100 \]</p> <p>Angiotensin 전환효소(ACE) 저해활성 : \( \mathrm { ACE } \) 저해 활성은 Cushman 등의 방법을 일부 변형시켜 다음과 같이 측정 하였다. 즉, 동결건조시킨 시료 \( 1 \mathrm { mg } \) 을 \( 50 \mu \mathrm { L } \) 의 중류수에 녹인 다음 rabbit lung powder에서 추출한 ACE효소액 150 \( \mu \mathrm { L } \) 와 기질 용액 \( ( \mathrm { pH } 8.3 \) 의 \( 100 \mathrm { mM } \) borate 완충용액 \( 2.5 \mathrm { ~mL } \)에 \( 25 \mathrm { mg } \) Hip-His-Leu을 녹인 것) \( 50 \mu \mathrm { L } \) 을 섞은 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응시킨 다음 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { HCl } 250 \mu \mathrm { L } \) 로 반응을 정지 시켰다. 이 반응액에 유리되어 나오는 hippuric acid의 양을 \( 228 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 산출하였고 시료를 첨가하지 않은 것을 대조구로 하여 아래식으로 저해활성을 계산하여 비교하였다.</p>