대조구와 KCCM43059 균주를 37도에서 24시간 동안 배양 후 얻은 상등액으로, 서로 다른 반응 온도와 pH에서 효소 활성을 평가하였다. 완충용액의 pH를 7.5로 조절하고 반응 온도를 달리한 실험 결과, 두 균주 모두 25도에서 가장 낮은 효소활성을 보였다. 반응온도가 증가함에 따라 KCCM43059 균주의 효소활성이 상승하였으며, 60도에서 최대값을 달성하였다. 또한, 60도에서 pH에 따른 효소활성 변화를 측정한 결과, KCCM43059 균주는 pH 6에서 대조구보다 높은 효소활성을 나타내었다.
<h2>효소활성 평가</h2> <p>대조구 및 KCCM43059 균주를 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 동안 배양하여 원심분리한 후 얻은 상등액을 이용하여 다양한 반응 온도 및 \( \mathrm { pH } \) 에서 효소활성을 측정하였다. 완충용액의 \( \mathrm { pH } \) 를 7.5로 고정하고 반응온도를 달리하여 효소활성을 측정한 결과 대조구 및 KCCM43059 균주는 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 각각 \( 33.41 \pm \) \( 8.38,58.61 \pm 9.80 \mathrm { U } / \mathrm { mg } \) protein 으로 가장 낮은 단백질 분해 효소활성을 나타내었다(Fig. 2A). 반응온도가 증가할수록 KCCM43059 균주의 효소활성이 유의적으로 증가하였으며 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 가장 높은 효소활성(367.64±33.07 U/mg protein) 을 나타내었다. 반응온도 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( \mathrm { pH } \) 에 따른 효소활성의 변화를 측정한 결과 KCCM43059 균주의 효소활성은 \( \mathrm { pH } 6 \) 에서 \( 429.37 \pm 18.65 \mathrm { U } / \mathrm { mg } \) protein로 대조구 균주(313.74± \( 11.41 \mathrm { U } / \mathrm { mg } \) protein)보다 높은 효소활성을 나타내었다(Fig. 2B). 그러나 \( \mathrm { pH } 7 \) 부터 효소활성이 현저히 감소하여 \( \mathrm { pH } 10 \) 에서 \( 63.59 \pm 3.12 \mathrm { U } / \mathrm { mg } \) protein으로 대조구인 KCTC13112 균주(72.51±7.56 U/mg protein)보다 유의적으로 낮은 효소 활성을 나타내었다. 이러한 결과로부터 B. subtilis KCCM43059 균주는 반응온도 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } , \mathrm { pH } 6 \) 조건에서 가장 높은 단백질 분해 효소활성을 나타내는 것으로 판단되었다.</p> <p>Bacillus sp. JE 375 균주가 생산하는 단백질 분해 효소의 경우 최적 반응조건은 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } , \mathrm { pH } 6.5 \) 로, 본 연구의 단백 질 분해 효소와 유사한 특성을 나타내었다. Bacillus sp.이 생산하는 단백질 분해 효소들의 온도에 대한 활성은 알칼리 효소가 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 중성 효소는 \( 30-37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 최적 활성을 나타낸다고 보고되어, 본 연구에서 분리한 KCCM43059 균주가 생산하는 단백질 분해효소 경우 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 최적 활성을 나타내는 알칼리 효소라고 판단하였다.</p>