세포의 성장과 cell viability를 확인하고 간세포 보호 효과 측정을 위해서, 분주된 HepG2 세포와 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물을 24시간동안 배양하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) in-cubator에서 3 시간 동안 반응시킨 후 460 nm 에서 흡광도를 측정하였다.
<h2>HepG2 세포 배양</h2> <p>실험에 사용한 간암 세포인 HepG2 세포는 한국세포주 은행(Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)에서 구입하였으며 세포의 배양을 위해 \( 10 \% \) heat-inactivated fetal bovine serum 및 \( 100 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) penicillin and \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) streptomycin이 첨가된 MEM (Cellgro by Mediatech, Inc., Manassas, VA, USA) 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 배양 하였다.</p> <h2>Cell viability 및 간세포 보호 효과 측정</h2> <p>세포의 성장과 cell viability를 확인하기 위해 96-well cell culture plate (SPL Lifesciences, Gyeonggi-do, Korea)에 HepG2 세포를 배지 \( 100 \mu 1 \) 에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well의 농도로 각 well에 분주하고 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물을 농도별로 동시에 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. 이후 EZ-Cytox cell viability assay solution WST-1 ( Daeil Lab Service, Seoul, Korea)을 각 well에 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) in-cubator에서 3 시간 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 \( 460 \mathrm { ~nm } \) 에서 훕광도를 측정하였다. 간세포 보호 효과 측정을 위해 96-well cell culture plate 에 HepG2 세포를 배지 \( 100 \mu 1 \) 에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well의 농도로 각 well에 분주한 다음 tacrine (Santa Cruz Biotechnology Inc., Dallas, TX, USA) 및 다양한 농도의 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물을 동시에 처리하여 24 시간 동안 배양하였다. 이후 EZ-Cytox cell viability assay solution WST-1 \( { } ^ {\circledR } \) 을 각 well에 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 3 시간 동안 반응시킨 다음 ELISA reader를 이용하여 \( 460 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p>