섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물의 독성을 MTT assay로 확인한 결과, 20% 이하의 세포 독성을 나타났다. lipopolysaccharide(LPS)로 유도된 nitric oxide의 생성을 측정한 결과, 에틸아세테이트 분획물은 50\(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\) 농도에서 25.9%의 NO 생성을 억제하였다. 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물 LPS로 유도된 Raw cell NO 생성 억제능이 가장 나은것을 볼 수 있다.
<h2>대식세포(Raw 264.7)의 독성 확인</h2> <p>섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물에 의한 macrophage 세포의 독성을 MTT assay에 의해 확인한 결과 Fig. 6과 같이 나타내었다. 즉 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물이 lipopolysaccharide(LPS)로 유도된 nitric oxide의 생성을 감소시킨 것인지, 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물의 세포 독성으로 인한 cell population의 저하에서 기인하는 것인지를 측정한 결과, 전 농도에서 \( 20 \% \) 이하의 세포 독성을 나타내었다. 따라서 본 실험에서는 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물의 농도를 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 이하의 농도에서 nitric oxide량을 측정하였다.</p> <h2>Nitric oxide 저해활성 확인</h2> <p>내독소로 잘 알려진 lipopolysaccaride(LPS)는 그람 음성균의 세포외막에 존재하며, Raw \( 264.7 \) 세포와 같은 macro-phage 또는 monocyte에서 tumor necrosis factor-alpha(TNF-undefined</p> <p>flammatory cytokine을 증가시키는 것으로 알려져 있다. Raw \( 264.7 \) cell의 NO 생성억제 정도를 측정하기 위하여 섬쑥부쟁이 분획물을 농도별로 세포에 처리하여 생성되는 \( \mathrm { NO } \)량을 측정한 결과 Fig. 7과 같이 나타내었다. LPS를 첨가하지 않은 군에서는 10 12 \%의 \( \mathrm { NO } \) 를 생성하였고, 에틸아세테이트 분획물은 농도 의존적으로 \( \mathrm { NO } \) 의 생성을 억제하였으며, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 에서 \( \mathrm { NO } \) 의 생성을 \( 25.9 \% \) 를 억제하였다. 이는 Byun 등 의 현삼 메탄올 추출물과 Kim 등의 상황 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 추출물의 LPS로 유도된 Raw cell의 \( \mathrm { NO } \) 생성 억제능 에 미치는 결과와 비교하여 보면 섬쑥부쟁이 분획물 중 에틸아세테이트 분획물의 \( \mathrm { NO } \) 생성 억제능이 가장 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.</p> <h2>\( \mathrm { iNOS } \) 단백질의 발현 측정 결과</h2> <p>자극에 유도된 \( \mathrm { iNOS } _ {\text { 는 } } \) 오래 기간 동안 다량의 \( \mathrm { NO } \) 를 생성하게 되고, 생성된 \( \mathrm { NO } \) 는 guanylyl cyclase의 활성과 동시에 주위 조직에 세포독성을 나타낸다. 즉 LPS로 유도되어진 Raw \( 264.7 \) cell에서 iNOS의 protein level의 감소에 의해 항염증 효과를 기대할 수 있나. 섬쑥부쟁이 에털아세테이트 분획물이 \( \mathrm { iNOS } \) 를 저해하는 효과가 있는지 알아보기 위하여 Raw \( 264.7 \) cell에 \( \operatorname { LPS } (10 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { L } ) \) 을 처리 하고 1 시간 뒤, 섬쑥부쟁이 에털아세테이트 분획물을 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 로 처리 한 후 24시간 배양한 후 iNOS, protein의 발현 변화를 western blotting으로 확인하였다. 이때 세포의 여러 조건에서도 그 발현정도의 차이가 거의 없는 house keeping gene인 GAPDH에 데한 섬숙부쟁이 \( \mathrm { EtOAc } \) 분획물의 iNOS protein 발현율 \( \therefore 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 을 처리한 능도에서 \( 81.5 \% \) 을 감소시켜 우수한 활성이 관찰되었나(Fig. 8). 본 연구에서는 섬숙부쟁이 분획물을 이용하여 항산화 효과와 항염증 효과를 동시에 가지는 활성을 탐색하였으며, 그 중 가장 우수한 활성을 나타낸 섬쑥부쟁이 에털아세테이트 분획물을 이용하여 pro-inflammation 및 anti- inflammation 등 다양한 메커니즘 내의 in vitro 검색법을 수행하였다. 결론적으로, 섬숙부쟁이 에털아세테이트 분획물의 항염증 활성은 관련 분야의 활용 가치로서 이용 가능성이 크다고 판단된다. 추가적인 연구로, 분획물 내 어떠한 화합물이 우수한 항염증 활성을 나타내는지를 확인하여 아토피 유발 \( \mathrm { NC } \) Nga mice를 이용한 항아토피 연구와 같은 in vivo test를 제안한다. 또한, 향후 기능성 화장품, 연고제 등의 산업적 가치를 고려했을 때, 제재 첨가 시에 따른 안정성 및 안전성 등에 관한 추가적인 연구가 필요하다고 사료된다.</p>