균원시료로 경상도 일대에서 일반적으로 재배되고 있는 가지, 토마토, 고추 등 가지과 작물의 뿌리를 수집하고 이용하여 근원미생물은 뿌리를 잘 세척하고 순수 독립 colony만을 분리하였다. 길항균을 얻기 위해 사용한 병원균은 가지과 작물에서 공통적으로 발생되는 겹무늬병균, 잿빛곰팡이병균, 잘록병균, 역병균, 균핵병균 등의 병원성 곰팡이 균을 이용하였다. 미생물은 Bergey's manual of systematic bacteriology의 방법으로 준하여 조사하고 16S rDNA sequence 법으로 동정하였으며, 고추의 생육 촉진미생물은 상기 근권 · 길항미생물 중에서 고추의 초기 생육을 촉진하는 미생물로 선별했으며, 고추 재배시험은 미생물제제를 첨가한 상토와 첨가하지 않은 상토로 나누어 각각 최아시킨 고추를 파종하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>근권미생물의 분리 및 보관</h2><p>균원시료로는 경상도 일원에서 일반적으로 재배되고 있는 가지, 토마토, 고추 등 가지과 작물의 뿌리를 수집하여 이용하였다. 근권미생물은 뿌리를 잘 세척하고 크기가 \(1 \mathrm{mm} \)가 되게 절단한 균원시료 \( 1 \mathrm{g} \)에 \( 0.85 \%~ \mathrm{NaCl} \) 멸균수 \( 10 \mathrm{mL} \)를 첨가하고 3단 희석한 후 Nutrient agar (NA) 배지나 Tryptic soy broth (TSB) 배지에 \( 100 \mu \mathrm{m} \)씩 도말한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3일간 배양하고 순수 독립 colony만을 분리하였다. 근권미생물의 보관은 NA 배지나 TSB 배지(\(\mathrm{pH} 6.0-7.0 \))에서 3-5일 동안 \( 30-37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 진탕 배양시킨 후 미생물 세포의 수가 \( 1 \mathrm{~mL} \)당 콜로니 형성단위(colony forming unit; cfu)로서 \( 10^{8}-10^{9} \)개 포함되어 있는 배양액을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하거나 동결건조기로 건조하여 분말상태로 보관하면서 사용하였다.</p><h2>병원균의 배양 및 길항력 조사</h2><p>길항균을 얻기 위해 사용한 병원균은 가지과 작물에서 공통적으로 발생되는 겹무늬병균(Alternaria solani), 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea), 잘록병균(Fusarium oxysporium), 역병균(Phytophthora capsici), 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum) 등의 병원성 곰팡이들을 이용하였고, 이들은 농촌진흥청과 KCTC (유전자은행) 등에서 분양 받아 PDA(potato dex-trose agar) 배지에서 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)에서 7일 이상 배양하여 \( 4{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하면서 실험에 사용하였다. 길항력은 근권미생물과 병원균의 대치배양(pair plate culture)에 의해 조사하였으며, PDA 배지에서 키운 병원균체 덩어리를 새로운 PDA 배지 중앙에 올려놓고 가장자리 4곳에 순수분리한 근권미생물을 한 백금이씩 접종하여 \( 28^{\circ} \mathrm{C} \)에서 7~10일간 배양한 후 병원균의 균사체의 생장억제 정도(inhibition zone)를 조사하여 생성된 clear zone의 길이로 결정하였다.</p><h2>생육촉진미생물의 선발</h2><p>고추의 생육 촉진미생물은 상기 근권 · 길항미생물 중에서 고추의 초기 생육을 촉진하는 미생물로 선별하였다. 공시 작물인 고추(녹광, 세미니스코리아)는 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 25분간 침지하여 온탕소독하고, \( 28^{\circ} \mathrm{C} \) 내외에서 2일간 최아시킨 후 살균된 샬레(petri dish, \( 9 \mathrm{cm} \))에 여과지를 2겹 깔고 증류수 \( 4 \mathrm{mL} \)와 길항미생물 배양액 \( 1 \mathrm{mL} \)를 각각 넣고 여기에 최아시킨 고추종자를 파종하여 5일간 배양한 후 생체중량을 측정하여 증류수만 들어 있는 대조구에 비해 생육이 촉진된 구간의 미생물을 생육촉진미생물로 선발하였다.</p><h2>미생물의 동정</h2><p>미생물은 Bergey's manual of systematic bacteriology의방법에 준하여 미생물의 형태학적, 배양학적, 생리 · 생화학적 특성을 조사하고 16S rDNA sequence 법으로 동정하였다. 이때 PCR primer는 R14 (5'-ACg ggC ggT gTg TAC-3')와 R15(5'-gCC AgC AgCC CgC ggT A-3')를 이용하였고 sequencing data는 ribosomal database(http://rdp.cme.msu. edu/html/analyses.htmt)에서 상동성을 검색하여 동정하였다.</p><h2>미생물제제 첨가 상토의 제조</h2><p>미생물제제는 흡착제(담체)로는 훈탄을 100mesh이하로 분쇄하고 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 살균하여 이용하였고, 미생물 배양액 \( \left(2.0 \times 10^{9} \mathrm{cfu} / \mathrm{mL}\right) 1 \mathrm{~L} \)에 담체 \( 3 \mathrm{~kg} \)을 넣고 혼합하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양시켜 건조기\( \left(40^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에서 48시간 건조하여 수분의 함량이 \( 20 \% \) 미만인 미생물제제를 제조하였다. 상토는 상용적으로 많이 사용하고 있는 원료를 이용하여 일반적인 제조법에 따라 코코피트 \( 44 \% \), 피트모스 \( 29 \% \), 펄라이트 \( 16 \% \), 버미큘라이트 \( 11 \% \) 를 혼합하여 제조한 후 상기 제조한 미생물제제를 \( 4 \% \) 혼입하여 제조하였다.</p><h2>고추 재배 시험</h2><p>고추 재배시험은 가온 비닐하우스 육묘장에서 미리 준비된 40공 트레이에 상기 제작한 미생물제제를 첨가한 상토와 첨가하지 않은 상토로 나누어 각각 최아시킨 고추를 파종하였다. 2002년 11월 13일 파종하여 2003년 1월 17일 까지 67일간 재배하여 초장(plant height), 경경(stem di-ameter), 뿌리의 길이, 생체중량 등 초기 생육도를 조사하였다. 시험구 배치는 난괴법 3반복으로 하여 제반 생육을 조사하였다</p><h2>Gibberellin \( \left(\mathrm{GA}_{1}\right) \) 의 분석</h2><p>지베렐린의 추출과 분석은 Foster와 Morgan(1995), Lee (1998) 등의 방법에 준하여 행하였다. 내부표준물질(Inter-nal standard, ISTD)은 \( { }^{2} \mathrm{H}_{2} \mathrm{GA}_{1} \)을 사용하였다. HPLC (Table 1)로 \( \mathrm{GA}_{1} \) 활성분위를 분획하였고, \( \mathrm{GC/MS} \) SIM (Table 2)으로 \( \mathrm{GA}_{1} \) 의 함량을 조사하였다.</p>