CLGT 시료의 인체암세포에 대한 독성효과는 apoptosis를 유도하였고, 인체 정상세포에 대해서는 시료 최대 처리 농도까지 증식 저해효과는 나타나지 않았으며, \(\mathrm{SC}_{50}\) 값을 통한 항산화활성은 GTL 시료가 다소 높게 나타났으나 유의차는 없었고, caffeine함량은 EGC, catechin, EC, EGCG, GCG 및 ECG의 함량이 감소되었으며, 함유된 휘발성 성분을 분석하였을 때에 Roasting에 의해 증가되었거나 생성된 화합물도 있었고, 감소되었거나 없어진 화합물도 있었다.
<h1>결 과</h1> <h2>RGT의 관능평가</h2> <p>GTL과 RGT시료를 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 물로 추출한 침출액에 대한 관능검사는 15명의 관능평가 요원을 구성하여 평가하였다. Roasting 효과를 측정하기 위해 여러 조건에서 roasting한 RGT 물 추출물에 대해 향미를 5점 법으로 평가하였다. 먼저 향은 녹차향 1점, 녹차향에 가까움 2점, 녹차향과 커피향이 비슷하게 남 3점, 커피향에 가까움 4점, 커피향 5점을 부여하여 평가하였고, 맛도 향과 같은 방법으로 평가하였다. GTL을 \( 240^{\circ} \mathrm{C} \)에서 60분간 roasting한 RGT에서 커피와 가장 유사한 향미를 나타내어 \( 240^{\circ} \mathrm{C} \)에서 60분간 roasting한 RGT 시료를 CLGT로하여, 여러 가지 실험에 사용하였다.</p> <h2>CLGT의 인체 암세포 및 정상세포 독성</h2> <p>GTL과 CLGT의 물 추출물이 인체암세포인 MCF-7과 PC-3의 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 이들 세포에 GTL과 CLGT 시료를 농도 별로 처리하고 48시간 후 생존 세포를 측정한 결과, 두 시료 모두 농도가 증가할수록 세포 수는 현저히 감소하였고, GTL과 CLGT 시료는 MCF-7 세포와 PC-3 세포 성장에 농도 의존적으로 세포증식 억제효과가 있음을 알 수 있었다. 그러나 두 시료 GTL과 CLGT간의 세포 증식억제 효과에는 유의적인 차이가 없어 roasting에 의한 세포독성은 없었다.</p> <p>인체 정상세포인 SK-N-SH와 쥐 심근세포인 H9c2 증식에 대해 GTL과 CLGT 시료를 농도 별로 처리한 결과 GTL과 CLGT 시료 최대 처리량인 \( 500 \mu\mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 증식 저해효과는 나타나지 않았다. 또한 이들 두 시료의 SK-N-SH 세포와 H9c2 세포 증식에 대한 효과는 유의적인 차이가 없어 roasting 효과는 없었다.</p> <p>Caspase-3는 세포의 mitochondrial dysfunction에 따른 apoptosis 유도에 executive 역할을 하는 효소로 핵과 mitochondria의 외 막에 불활성 상태로 존재하다가 유도 자극에 의하여 활성화 되어 apoptosis를 유도한다. 따라서 GTL과 RGT 시료 모두가 인체암세포인 MCF-7과 PC-3에 대해 apoptosis를 유도하는지를 조사하기 위해 cytosol의 caspase-3 효소 protein 농도를 측정하였다. MCF-7 세포와 PC-3 세포에서 GTL과 CLGT 시료 처리에 따른 농도 의존적으로 caspase-3 protein 함량이 증가하였고, 두 시료의 효과 차이는 없었다. 이 결과는 GTL과 CLGT 시료가 MCF-7 세포와 PC-3 세포에 대한 독성효과는 apoptosis를 유도하였음을 의미한다.</p> <h2>CLGT의 항산화능 및 catechin 함량</h2> <p>Table 3에는 GTL과 CLGT 시료의 항산화능을 vitamin C로 환산(vitamin C\(\mathrm{~mg} /\mathrm{g} \) )하여 DPPH radical 소거능(\(\mathrm{SC}_{50}\))을 나타내었다. GTL과 CLGT 시료의 \(\mathrm{SC}_{50}\) 값은 각각 \( 14.1 \mathrm{mg} \) vitamin C/\(\mathrm{g} \)과 \(11.6 \mathrm{mg} \) vitamin C/\(\mathrm{g}\)로 GTL 시료가 다소 높은 항산화활성을 나타내었지만 유의차는 없었다. 또한 GTL과 CLGT 시료의 total phenol 함량은 각각 \(90.9 \mathrm{~mg} \)과 \(86.2 \mathrm{~mg} \) GAE/\(\mathrm{g} \)로 유의적인 차이는 없었다. GTL과CLGT 시료의 total sugar의 함량(glucose \(\%\))은 각각 \( 6.5 \% \)와 \( 5.6 \% \)로 roasting에 의해 감소되었지만 유의차는 없었고, total protein 함량은 각각 \( 4.9 \% \)와 \( 2.8 \% \)로 CLGT 시료에서 유의적으로 낮았다\( (p<0.05) \).</p> <p>Fig. 5는 GTL과 CLGT 시료의 catechin계 화합물의 HPLC chromatogram이고, 그 함량을 Table 4에 나타내었다. GTL과 CLGT 시료 에는 gallocatechin (GC), epigallocatechin (EGC), catechin, caffeine, epicatechin (EC), epigallocatechin gallate(EGCG), gallocatechin gallate (GCG), epicatechin gallate (ECG)의 화합물이 검출되었다. 이들 성분 중 GTL 시료에 비해 CLGT 시료에서 EGC, catechin, EC, EGCG, GCG 및 ECG의 함량이 유의차 있게 감소되었고 \( (p<0.05)\), GC 및 caffeine함량은 감소되었지만 유의차가 없었다. Roasting에 의한 이와 같은 catechin 감소는 total phenol 함량에는 큰 영향을 미치지 않았다.</p> <h2>CLGT의 휘발성분 함량</h2> <p>GTL과 CLGT시료에 함유된 휘발성 성분을 분석하였다. GTL에서 39개 화합물이 검출되었고 그 중 2-methyl butanal, acetic acid, 4-tert-butyl cyclohexanol, cis-ocimene, 1-ethyl pyrrole, limonene, 2-methyl propanal, propanoic acid, tererpineol, cis-geraniol의 함량(면적비가 \( 1.0 \% \) 이상인 화합물)이 상대적으로 높았다. 반면에 CLGT에는 33개 화합물이 검출되었고, 그 중 2-methyl butanal, 1-ethyl-pyrrole, acetic acid, o-xylene, 4-tert-butyl cyclohexanol, limo-nene, cis-ocimene, cis-2,6-dimethyl-2,6-octadiene, 1-ethyl-1H-pyrrole-2-carboxaldehyde, terpinolen, 2,6-dimethyl-1,5-heptadiene, trans-ocimene의 함량(면적비가 \( 1.0 \% \) 이상인 화합물)이 높았다.</p> <p>Roasting에 의해 증가되었거나 생성된 화합물도 있었고, 감소되었거나 없어진 화합물도 있었다. GTL에서 검출된 39개 화합물 중 2-methyl propanal 및 2,5,5-trimethyl-1-hexen-3-yne을 비롯하여 17개 화합물이 파괴되어 없어졌고, 2-mentyl butanal을 포함하여 10개 화합물이 감소되었다. 또한 CLGT에 검출된 33 화합문 중 o-xylene, 1-ethyl-1H-pyrrole-2-carboxaldehyde, 1-methyl-2-formpyrrole을 포함하여 11개 화합물이 생성되었고, 1-ethyl pyrrole, 2,6-dimethyl-1,5-heptadiene, phenylethyl hexanoic acid 및 1-octan-3-ol을 비롯한 12개 화합물의 함량은 증가되었다. 이와 같은 결과는 Kenji와 Hisami가 pan-fried한 Japanese Kumara-cha와 Chinese Longing tea에서 각각 51 및 52개의 화합물을 검출한 결과와 유사하였다.</p>