본 실험에서는 호기성 균주인 S. aureus, E. coli, 여드름의 원인균인 P. acnes, 비듬균인 P. ovale을 한국 미생물 보존센터에서 분양받아 Mueller Hinton 배지 및 Pityrosporum agar 배지를 사용하여 37\(^\circ \mathrm{C}\) 또는 30\(^\circ \mathrm{C}\) incubator에서 24시간 동안 배양하여 비수리 추출물의 항균 활성을 측정하였다.
<h2>비수리 추출물의 항균 활성 측정</h2> <p>사용균주: 본 실험에서 사용한 균주는 호기성 그람 양성 균주인 Staphylococcus aureus (S. aureus) ATCC6538과 Escherichia coli (E. coli) ATCC23736, 여드름의 원인균인 Propionibacterium acnes (P. acnes) ATCC6919, 비듬균인 Pityrosporum ovale (P. ovale) ATCC12078은 한국 미생물 보존센터에서 분양받아 사용하였다.</p> <p>배지 및 배양조건: 호기성 균주인 S. aureus와 E. coli는 Mueller Hinton 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 균을 접종한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양하면서 사용하였다. 또한 비듬균인 P. ovale는 Pityrosporum 배지(Malt extract agar \( 6 \% \), ox-bile \( 2 \% \), tween- \( 401 \% \), glycerol monooleate \( 0.25 \% \) )를 사용하였으며 균을 접종한 뒤 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 \( \mathrm { h } \) 동안 배양하여 사용하였다. 또한 P. acnes의 배양 배지는 reinforced clostridial(RC) 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 P. acnes는 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하면서 실험 \( 72 \mathrm { ~h } \) 전에 활성화시키고 균을 배양 배지에서 접종한 후 anaerobic jar에서 Gaspack system(Merck Anaerocult Gaspack system, Germany)을 이용하여 밀봉한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 72 \mathrm { ~h } \) 동안 혐기성 배양하였다.</p> <p>최소억제농도(Minimum Inhibitory Concentration: MIC): 최소억제농도(MIC)는 한천배지 확산법을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 각각의 분획물들을 \( 2 \mathrm { ~mL } \) 씩 함유한 배지 20 \( \mathrm { mL } \) 를 petri dish에 주입하였고 시험균을 평판 배지 위에 \( 0.1 \) \( \mathrm { mL } \) 접종하였다. S. aureus 는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 후에, P. ovale은 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 48 \mathrm { ~h } \) 후에, P. acnes는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 72 \mathrm { ~h } \) 후에 육안으로 관찰하였을 때, 각각의 균들이 증식되지 않는 농도를 MIC로 결정하였다.</p>