무균성수막염 의심환자의 검체를 대상으로 real-time NASBA, 2 step RT-PCR, 세포배양 시험을 실시하였다. 총 292건의 검체 중에서, real-time NASBA가 145건의 양성 판정으로 가장 높은 검출율을 보였다. 또한 real-time NASBA는 교차 오염 가능성이 낮고 시험 소요시간이 5시간으로 가장 짧아, 일선 병원이나 실험실에서 enterovirus를 신속하게 진단하는데 효과적일 것으로 추정되었다.
<p>반면, 세포배양은 양성이고 5'-NCR 2 step RT-PCR은 음성인 검체는 55건이었다. 이는 검체 자체에 활력을 가지는 바이러스가 2 step RT-PCR에서는 검출한계를 벗어난 매우 적은 숫자로 존재하거나 검체의 취급, 운반, 보관 중에 RNA가 소실된 것으로 추측된다. 이는 세포배양과 \( 2 \mathrm { step } \) RT-PCR 단독으로는 enterovirus를 검출하는데 한계가 있으며 두 실험을 상호 보완적으로 수행해야 함을 의미하며 아울러 검체 채취 및 보관, 운송 등의 과정에서 최적의 조건을 유지하는 것이 필요할 것으로 사료된다. 그에 비해 real-time NASBA 시험은 민감도와 특이도가 높게 나타나 두 시험법을 대체할 가능성이 있다고 사료된다. Real-time NASBA 시험의 특이도 검사를 위하여 enterovirus 외에 뇌수막염의 원인이 되는 바이러스 즉, 단순포진바이러스 1형 3건, 단순포진바이러스 2형 3 건, 아데노바이러스 3건, 유행성이하선염바이러스 2 건 그리고 rhinovirus 10건을 대상으로 real-time NASBA, 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험, 세포배양 시험을 각각 수행하였다. 실험에 사용된 모든 바이러스는 세포배양, real-time NASBA 시험에서 모두 음성으로 나타났다. 흥미로운 결과로 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험에서 10 건의 rhinovirus중 1 건에서 강한 양성 밴드가 관찰되어 위양성 반응을 보여 다른 두 시험보다 특이도가 떨어지는 것으로 나타났다. 이는 enterovirus는 rhinovirus 와 유전적으로 매우 유사하며 다른 바이러스들 간에 교차반응이 많다는 보고[12]와 9건의 rhinovirus에 대해 2 step RT-PCR과 real-time NASBA를 수행한 결과 real-time NASBA에서는 모두 음성이었지만 2 step RT-PCR에서 3건의 rhinovirus가 위양성 반응을 보였다는 보고[1]와 유사한 결과를 보인다. 그러므로 무균성수막염 의심환자의 인후도찰물 검체에서 enter-ovirus 검출을 위한 2 step RT-PCR 시험 시 rhinovirus와의 감별시험이 필요할 것으로 사료된다.</p> <p>또한 본 연구는 real-time NASBA와 enterovirus 검출의 표준시험법(Gold standard)으로 사용되어 왔던 세포배양과 2 step RT-PCR 시험 간의 사용자 편리성과 소요시간을 비교 고찰하였다. 세포배양에서 바이러스가 자라려면 보통 3 일에서 5 일, 길게는 7일이 걸리며 음성판정에는 14 일 이상이 걸린다. 그리고 실험이 없을 때에도 세포주를 항상 최적의 상태로 유지하기 위한 시간이 별도로 소요되므로 enterovirus를 신속하게 검출하는 데는 한계가 있다. 그리고 세포배양을 위해 BSL (BioSafety Level) 2-3등급으로 별도의 구역화 된 실험실과 세포의 유지 및 CPE (Cytopathic Effect)를 확인을 위한 숙련된 인력이 필요하여 임상에서 무균성수막염 진단에 적용하기에는 어려움이 있다. 2 step RT-PCR은 cDNA를 합성하는 과정과 PCR로 증폭하는 과정 및 전기영동장치가 필요하므로 오염방지를 위하여 별도로 \( 3 \sim 4 \) 개의 실험구역이 필요하며 9 시간 정도의 수행시간이 필요하다. 그러나 real-time NASBA는 molecular beacon probe와 NucleiSens EasyQ analyzer 제조 사의 NucleiSens EasyQ director software를 사용하여 증폭과 검출이 실시간으로 확인됨으로 5시간 정도면 결과를 볼 수 있다. 이로써 NucleiSens EasyQ를 이용한 enterovirus re-al-time NASBA가 다른 실험에 비해 사용자의 편리성과 수행시간이 짧음을 확인할 수 있었다. 그리고 단계별로 튜브를 열고 다른 튜브로 산물들을 옮겨 실험하는 2 step RT-PCR이나 여러 검체를 세포에 접종할 시 검체 간의 오염가능성이 있어 신중한 주의를 요하는 세포배양법에 비해 real-time NASBA는 하나의 튜브에서 증폭과 검출이 동시에 일어나므로 교차오 염을 줄일 수 있다는 장점을 가진다. 또한 real-time NASBA는 세포배양이나 2 step RT-PCR에 비해 구역화 된 별도의 실험공간이 필요치 않으며 비교적 간단한 시설과 장비, 시약으로도 충분히 운영가능하다. 그러므로 일선 병원과 소규모 실험실에서 무균성수막염을 신속하게 진단하는데 쉽게 적용할 수 있어, 결과적으로 부적절한 항생제의 사용을 막을 수 있고 입원 시간을 단축하는데 기여할 수 있을 것으로 예상된다.</p> <h1>요 약</h1> <p>본 연구는 무균성수막염 의심환자의 다양한 검체로부터 enterovirus의 진단을 위하여 real-time NASBA, 2 step RT-PCR 시험과 세포배양 시험을 각각 실시하여 각 시험법의 검출율, 특이도, 사용자 편리성, 시험소요 시간, 교차오염의 가능성 등을 비교 검토하였다. 비교시험 결과 전체 292건의 검체로부터 real-time NASBA에서 145건, 세포배양에서 101건, 2 step RT-PCR에서 86건이 양성으로 나타나 real-time NASBA가 가장 검출율이 높은 시험법임을 알 수 있었다. Enterovirus 외의 무균성수막염 원인바이러스에 대한 특이도 비교 시험결과 2 step RT-PCR 시험에서 rhinovirus 10건 중 1건이 위양성 반응을 나타내어 다른 시험법에 비해 특이도가 떨어지는 것으로 나타났다. Real-time NASBA는 하나의 튜브에서 중폭과 검출이 동시에 일어나 다른 시험과 비교하여 교차오염의 가능성이 낮으며 또한 시험 소요시간이 5 시간 정도로 세포배양(5-14일 소요) 및 2 step RT-PCR(9시간소요) 에 비하여 신속하게 진단할 수 있어 일선병원이나 실험실에서 enterovirus를 검출을 위하여 적용할 수 있을 것으로 사료된다.</p>