결과적으로 RLE \( 900 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 처리군은 G1기에서 대조군보다 상대적으로 높은 비율(45.3%)의 세포주기 정지를 보였고, RLE \( 1000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 처리군은 G1기에서 대조군보다 상대적으로 높은 비율(50.2%)의 세포주기 정지를 보였다. RLE는 3T3-L1 지방전구세포의 G1기에서 세포주기 정지 효과를 나타내며, C/EBP\(\beta\)의 발현이 억제되어 clonal expansion 단계를 저해하는 것으로 보인다.
<h2>RLE에 의한 분화초기세포 증식 억제(Clonal expansion 억제)</h2> <p>지방세포로의 분화 초기단계에서 contact inhibition에 의해 증식이 정지되어 있던 세포는 지방세포 유도 복합체에 의해 다시 세포 증식을 시작하는데, 이 과정에서 핵심적인 역할을 하는 인자가 바로 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } \beta \)이다. Fig.4A에서 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } \beta \)의 발현이 RLE에 의해 저해됨을 확인하였기에, RLE가 지방세포 유도 복합체에 의한 세포 증식, 즉 clonal expansion 단계를 저해시킬 것이라 판단하고, 이를 확인하기 위해 trypan blue exclusion assay를 통해 생세포수를 확인하였다. 그 결과 대조군의 세포 증식은 0시간일 때 \( 100 \% \)라고 봤을 때 24,48 시간에는 \( 154.77, 225.1 \% \)의 증식을 보였지만 RLE \( 900 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 처리군은 \( 119.6,158.03 \%, \mathrm { RLE } 1000 \) \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 처리군은 \( 101.59,127.85 \% \)로 증식이 억제됨을 확인하였다(Fig. 5). 이러한 증식 억제 효과는 RLE를 처리하기 전 confluent 상태, 즉 Day 0에서의 세포수와 비교하였을 때 RLE 처리 이후 생세포수의 감소는 유도되지 않는 것으로 보아 세포 독성에 의한 효과는 아닌 것으로 사료된다. 따라서, RLE는 3T3-L1 세포의 분화초기 clonal expansion 단계에서 세포증식 억제를 통해 지방세포로의 분화를 억제하는 것으로 사료된다.</p> <h2>RLE에의한 3T3-L1 지방전구세포의 G1기에서의 세포주기 정지 효과</h2> <p>위의 결과에 의하면, RLE는 지방전구세포가 지방세포로 분화하는 초기 단계에서 세포 분열을 억제시킨다. 즉, 정지된 세포주기가 MDI로 인해 다시 진행될 때, RLE의 작용에 의해 세포주기 진행의 변화가 있을 것으로 생각되어 Muse \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) Cell Analyzer를 이용하여 세포주기 분포도를 확인하였다.</p> <p>Fig. 6 에서와 같이 RLE를 처리하지 않고 MDI와 \( 0.5 \% \) \( \mathrm { DMSO } \)를 처리한 대조군의 G1기의 세포 비율은 \( 42.9 \% \)로 나타났으나, RLE를 처리한 군들의 G1기 세포 비율은 RLE 처리 농도가 높아질수록 점점 증가하여 최고농도인 \( 1000 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { ml } \)에서는 \( 82.1 \% \)로 나타났다. 이러한 결과는, RLE가 clonal expansion 단계에 있는 지방세포의 세포주기를 G1기에서 정지시킴으로써, 지방세포로의 분화를 억제시킨다는 것을 나타낸다.</p>