웅성 흰쥐와 유한양행의 MTX를 사용하여 STZ \( (50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \) 을 \( 0.01 \mathrm{M} \) citrate buffer \( (\mathrm{pH} \) 4.5)에 용해하여 꼬리정맥에 주사하여 유발한 실험한 결과는 평균치\(\pm\)표준편차로 표시 및 통계적 유의성은 Duncan's new multiple range test를 이용하였다. P값이 \( 5 \% \) 미만일때 통계적으로 유의성이 있다고 판정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물 및 실험설계</h2> <p>MTX는 유한양행으로부터 구입하였으며, 실험 동물은 대한 BioLink(충북 음성)로 부터 분양 받아 본 대학 동물사에서 일정한 조건(온도 : \( 22 \pm 0.5^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 : \( 46-60 \% \), 명암 : 12시간 light/dark cycle)으로 1주 동안 고형 사료로 적응시킨 체중 \( 200 \pm 10 \mathrm{~g} \) 의 Sprague-Dawley계 웅성 흰쥐를 사용하였다. 당뇨의 유도는 STZ \( (50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \) 을 \( 0.01 \mathrm{M} \) citrate buffer \( (\mathrm{pH} \) 4.5)에 용해하여 꼬리정맥에 주사하여 유발하였다. STZ 주사 48시간 후 공복 상태에서 꼬리 정맥으로부터 채혈하여 공복 시 혈당 수준이 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{dL} \) 이상일때 당뇨병이 유발된 것으로 간주하였고 당뇨 유발 3일째부터 1주일 동안 MTX 3 \( \mathrm{mg} / \mathrm{kg}, 6 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 을 복강 주사하였고 마지막 주사로부터 24시간후에 처치하였다.</p> <h2>헐액 성분의 측정</h2> <p>혈청생화학적 검사는 실험동물을 \( \mathrm{CO}_{2} \) 로 가볍게 마취시키고 복부 대동맥으로부터 혈액을 채취하였다. 혈액을 3000 rpm에서 10 분간 원심 분리하여 얻은 혈청으로 aspar-tate/alanine aminotransferase (AST/ALT)의 활성 측정은 Reitman 과 Frankel의 방법, alkaline phosphatase (ALP)의 활성 측정은 Lowry등의 방법, blood urea nitrogen(BUN)의 함량 측정은 Chabner 등의 방법, creatinine의 함량 측정은 Slot의 방법, lactate dehydrogenase (LDH)의 할성 측정은Cabaud와 Wroblewski의 방법 및 superoxide dismutase의 활성 측정은 Oyanagui의 방법 에 준하였다.</p> <h2>신조직에서의 변동</h2> <p>채혈을 마친 실험동물에서 신장을 적출하여 신조직을 관류하여 혈액을 제거하고 얻은 신조직에 0.1 M sodium phos-phate buffer \( (\mathrm{pH} \) 7.4)를 가하여 빙냉하에서 glass-tefron ho-mogenizer로 마쇄하여 \( 10 \% \) 마쇄액을 얻었다. 이를 이용하여 thiobarbituric acid reactive substances (TBARS)의 함량측정은 Ohkawa의 방법, glutathione(GSH)의 함량측정은 Ellman의 방법에 준하여 측정하였다. 이 마쇄액을 고속 및 초고속 원심분리 \( (105,000 \times \mathrm{g}, 1 \mathrm{hr}) \) 하여 mitochondria, cytosol 및 microsomal 분획을 얻어 이를 효소액으로 하여 xanthine oxidase/dehydrogenase (XO/XD) 활성 측정은 Stirpe과 Della의 방법, aldehyde oxidase (AO)의 활성 측정은 Rajagopalan의 방법, aminopyrine N-demethylase (AD)의 측정은 Nash의 방법, aniline hydroxylase(AH)의 활성 측정은 Bidlack 등의 방법, glutathione S-transferase (GST)의 활성 측정은 Habig 등의 방법, superoixde dismutase(SOD) 활성의 측정은 Marklund와 Marklund의 방법, cat-alase 활성의 측정은 Aebi의 방법, glutahthione peroxidase(GSH-Px) 활성의 측정은 Paglia와 Balentine의 방법, \( \gamma \)-glutamylcystein synthetase \( (\gamma \)-GCS)의 측정은 Meister와 Richmandml 방법, glutathione reductase (GR)와 활성 측정은 Charles와 Robert의 방법에 준하여 측정하였다.</p> <h2>단백질 정량 및 통계처리</h2> <p>단백질 정량은 bovine serum albumin (Sigma Fr. IV)을 표준품으로 하여 Lowry 등의 방법에 따라서 측정하였으며, 실험결과는 평균치±표준편차로 표시하였고 통계적 유의성은 Duncan's new multiple range test를 이용하였다. P값이 \( 5 \% \) 미만일때 통계적으로 유의성이 있다고 판정하였다.</p>