심험동물의 심장에서 채혈 후 항 응고처리를 한 전혈, 혈장, 및 혈청으로 분리하여 냉장보관 하였다. 일련의 ANOVA를 사용하여 혈액학적 변수, 철 표지자, 사이토카인 및 일산화질소 등을 측정 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <p>본 연구에서 사용한 8주령의 수컷 Sprague-Dawley (SD) 레트는 중앙실험동물(Central Laboratory Animal Inc. 대한민국)에서 구입하였고 동물사육실에서 실내온도 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)와 습도 \( 60 \% \) 그리고 12시간 간격의 점등 환경하에서 멸균된 사료와 음수를 제공하며 관리하였다. 2주간의 적응기간이 지난 후 대조군(Control group, n=8)을 포함하여 20 분(E-20 min group, n=8), 60분(E-60 min group, n=8), 그리고 120분(E-120 min group, n=8) 간 운동을 시킨 실험군 등 4군으로 분류하였다. 대조군을 제외한 모든 실험군은 1주일 동안 \( 13.33 \mathrm{m} / \mathrm{min} \) (약 \( 0.8 \mathrm{~km} / \mathrm{hr} \))의 속도로 평지상태의 motorized treadmill (TM motor 2000, Korea)에서 달리도록 하여 적응을 시켰다. 운동시작 약 3분 동안은 점증적으로 속도를 올리면서 운동에 적응시키고 매일 8주간 \( 16.67 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \)에서 시작하여 \( 36.67 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \) (약 \( 2.20 \mathrm{~km} / \mathrm{hr}) \)로 서서히 속도를 올리면서 실험군에 따라 각각 20, 60, 120 분 동안 달리기를 실시하였고 적용된 최종 속도를 고강도운동(\(\mathrm{VO}_{2} \mathrm{~max}>80-85 \%) \)으로 설정하였다. 8주간의 실험이 종료된 직후 참여동물로부터의 채혈을 포함한 시료 채취를 위해 에테르를 사용하여 마취 및 안락사를 실시하였고 이는 동의대학교 동물윤리위원회의 규정에 따라 기관의 승인 하에 실시되었다.</p> <h2>시료채취 및 처리</h2> <p>실험동물의 채혈은 심장으로부터 실시되었으며 채취된 혈액은 이후의 측정을 위해 항 응고처리를 한 전혈, 혈장, 및 혈청으로 분리하여 혈액학적 분석마커와 사이토카인 및 \( \mathrm{NO} \) 등을 분석하기 위해 냉장 보관하였다.</p> <h2>분석</h2> <h3>혈액학적 변수</h3> <p>CBC \( \& \) diff-count 측정은 EDTA처리 전혈을 이용하여 자동혈액분석기(BC-2800 ver., Shenzhen Mindary Bio-Medical Electronics Co., Ltd., Germany)에서 실시하였다.</p> <h3>철 표지자</h3> <p>혈청 내 철농도, 총철결합능(total iron binding capacity, TIBC), 그리고 불포화 철결합능(unsaturated iron binding capacity, UIBC)의 수준은 Hitachi 7600-210 (Hitachi Co., Japan)와 Lqdia Fe (Asan Co., Korea)을 이용하여 측정하였다.</p> <h3>사이토카인 및 일산화질소(Nitric Oxide, \( \mathrm{NO} \))</h3> <p>혈청의 Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-10 (IL-10), 그리고 Interferon- \( \gamma \) (IFN- \( \gamma \) ) 등 사이토카인과 \( \mathrm{NO} \)의 수준은 시판되고 있는 면역혈청학적인 방법을 이용한 각각의 Quantikine Rat IL-6 kit (R \( \& \) D System, America), Quantikine Rat IL-10 kit (R \( \& \) D System, America), Rat interferon Gamma ELISA kit (abcam, U.K), 그리고 Total NO/Nitrite/Nitrate kit (R \( \& \) D System, America) 제품을 사용하여 측정하였다.</p> <h2>데이터 분석 및 통계</h2> <p>자료의 분석에는 일련의 ANOVA를 사용하였고 유의적인 차이가 있을 경우 Scheffe's test를 이용하여 사후검정하였다. \(p<0.05\)의 수준에서 유의성을 채택하였으며 모든 자료는 평균\( \pm \)표준오차(SE)로 표기하였다.</p>