2009년 7~8월 경북 울릉군 울릉읍에서 건조된 잎을 사용하여 섬쑥부쟁이\( 5 \mathrm { ~kg } \)를 70% 메탄올로 1주일간 3회 시료로 추출하여 여과하여 \( (472.7 \mathrm { ~g } ) \)의 메탄올을 추출했다. 또한 극성차를 이용해 헥세인과 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 용매를 첨가하여 단계적으로 분획하여 연구하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험에 사용한 섬쑥부쟁이(Aster glehni Fr. Schm.)는 2009 년 7, 8월경 경북 울릉군 울릉읍에서 건조된 잎을 구입하여 실험재료로 사용하였다.</p> <h2>시료 추출 및 용매분획</h2> <p>시료의 추출은 섬쑥부쟁이 \( 5 \mathrm { ~kg } \)을 시료 중량의 10배 양인 \( 70 \% \) 메탄올을 가하여 상온에서 1주일간 3회 추출한 다음 filterpaper (Whatman No. 2)로 여과하였고, 얻어진 여액은 감압농축하여 메탄올 추출물 \( (472.7 \mathrm { ~g } ) \)을 얻었다. 이 메탄올 추출물을 극성 차를 이용해 서로 다른 용매를 첨가하여 단계적으로 분획하였다. 섬쑥부쟁이 메탄올 추출물과 hexane을 1:1 비율로 분획 깔대기에 넣고 hexane층과 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)층을 분획하였고, hexane층을 다시 감압 농축하여 hexane 분획물 \( 154.22 \mathrm { ~g } \)를 얻었다. 동일한 과정을 통해 EtOAc층 (74.66 \( \mathrm { g } \)), n-BuOH층(87.84 \( \mathrm { g } \)), \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) \( (155.98 \mathrm { ~g } ) \)을 순차적으로 가하여 각 분획물을 얻고 감압, 농축 후 동결 건조하여 용매를 제거한 후 실험에 사용하였다.</p> <h2>시약 및 기기</h2> <p>Leu-Gly-Pro-D-Arg 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO,U.S.A.)에서 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정에 사용된 세포주는 melanoma 세포인 B16F10을 Korean Cell Line Bank (KCLB)에서 구입하여 사용하였다. 세포 독성 측정 시약은 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium), fetal bovineserum (FBS), penicillin/streptomycin, trypsin 250, 0.4 \( \% \) trypan blue stain은 Gibco BRL Co. (Grand Island, U.S.A.) 및 Haemacytometer (Marienfeld, Germany)에서 구입하여 사용하였으며, 3-[4,5-dimethyl -thiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazo-liumbromide (MTT)는 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, U.S.A.)에서 구입하여 사용하였다. 항균력 검색 실험에서 사용한공시 균주는 피부상재균인 Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Escherichia coli. KCTC1039를 사용하였고, 여드름 유발균으로서 Propionibacterium acnes KCTC 3065를 계대 배양하여 사용하였다. 전 배양 및 본 배양을 위한 배지로서 Staphylococcus aureus는 tryptic soy broth와 agar를 사용하였고, Escherichia coli 및 Staphylococcus epidermidis는 nutrient broth와 agar를 사용하였으며, Propionibacterium acnes는 Gifu anaerobic medium (GAM)과 본 배지에 agar powder를 첨가하여 실험에 사용하였다.</p>