Pandoraea sp. BCNU 315 균주는 최적 조건에서 대량 배양됐으며, 이를 통해 생산된 대사물질은 감압건조기를 이용하여 농축 후 methanol에 녹여 HPLC로 분석했다. 분석 결과 CW I와 CW II는 \( 254 \mathrm{~nm} \)에서 단일 peak를 보여 순수물질로 판명되었다. 특히, 분리된 CW II 성분은 액체 형태로, 1H-NMR 스펙트럼에서 \(6.76-7.19 \mathrm{ppm}\) 및 \(0.86-2.34 \mathrm{ppm}\) 구간에 각각 15개와 다수의 프로톤이 관찰되었다. 후자의 구간은 saturated alkane계열의 수소를 나타내었다.
<h2>선발균주의 생리활성물질의 구조동정</h2> <p>Pandoraea sp. BCNU 315 균주를 최적 배지(\(\mathrm{pH}~7.0\))에 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10일 동안 대량 배양(60 1) 하였다. 배양 후 얻은 상충액을 108 1 ethylacetate로 추출하여, 얻은 시료를 hexane에 용해시킨 후 hexane으로 충진된 UV silica column chromatography \( (\varnothing 3.5 \times 25) \)에 흡착시켰다. 그리고 hexane : ethylacetate : dichloromethane (5:1:1)을 전개용매로 하여 \(60\mathrm{ml} / \mathrm{h} \)의 속도로 용출하여 \( 20 \mathrm{ml} \)씩 분획하였다. 1~25번 분획물에서 \( 78.4 \mathrm{mg} \)을 얻었고, 나머지 26~50번 분획물에서 \( 68.4 \mathrm{mg} \)을 얻었다. 이를 Preparative Thin Layer Chromatography (PTLC)를 이용하여 다시 분리하였다. 그 결과 Frac I에서 CW I을 얻을 수 있었고, Frac II에서 CW II를 얻을 수 있었다. 이후 정제된 화합물에 대하여 HPLC, GC/MS, NMR로 구조를 분석 하였다.</p> <p>Pandoraea sp. BCNU 315 균주가 생산하는 대사물질을 정제한 것을 감압건조기로 농축한 다음 소량의 methanol에 녹여 \( 20 \mu \mathrm{l} \)를 HPLC를 이용하여 \( 254 \mathrm{~nm} \)의 파장에서 흡광도를 측정하여 분석한 결과 CW I와 CW II는 단일 peak가 확인 되어 순수물질임이 추정되었다.</p> <p>분리한 CW I은 녹는점이 \( 52-53^{\circ} \mathrm{C} \) (lit. \( 51-54^{\circ} \mathrm{C} \) )이고 질량 스펙트럼(Mass spectroscopy)에서 분자이온(M+)이 117로 주어졌다. 그리고 적외선 스펙트럼으로 \( 3,120 \mathrm{~cm}^{-1} \) 부근에서 이차아민(-NH-) 피르가 나타났다. H-NMR \( \left(400 \mathrm{MHz}\), \(\mathrm{CD}_{3} \mathrm{OD}\right) \)스펙트럼으로 짝지음 상수 값(J) \( 8.8 \mathrm{~Hz} \)인 \( 7.43 \mathrm{ppm} \) 부근에서 4번 위치의 proton이 5번 proton과의 작용으로 스핀-스핀 갈라짐으로 이중선으로, 7번 proton은 6번의 proton에 의해 \( 7.25 \mathrm{ppm} \)에서 이중선으로, 5번 위치의 proton은 \( 6.97 \mathrm{ppm} \)에서 4번, 6번의 proton에 의해 겹쳐진 삼중선이 나타넜고, 6번 위치의 proton은 \( 6.88 \mathrm{ppm} \)에서 5번과 7번의 proton에 의해 삼중선으로 나타났다. 그리고 2번과 3번 위치의 proton은 각각 \( 7.09 \mathrm{ppm}\), \(6.31 \mathrm{ppm} \) 에서 짝지음 상수 값(\(J\))이 각각 \(3.14\), \( 3.21 \mathrm{~Hz} \)로 나타남으로 고리로 이루어진 cis-type의 결합으로 이루어져 있다. 또한 이차아민의 proton은 C-NMR 스펙트럼에서 주어진 각 위치의 탄소는 137.7, 129.4, 125.4, 122.1, 121.1, 119.9, 112.1, 102.2 \(\mathrm{ppm}\)에서 주어졌다(unpublished da-ta). 이러한 결과로 이 성분은 1H-indole임을 확인할 수 있었다. 이 성분은 보고된 문헌의 자료와 일치함이 확인되었다.</p> <p>CW II 화합물의 H-NMR spectrum 분석 결과는 Fig. 8과 같으며, C-NMR spectrum 분석 결과는 Fig. 9와 같았다. 더 정확한 구조를 알기위해 DEPT 분석을 하였고 그 결과는 Fig. 10에 나타내었다. 분리 정제한 물진의 구조 중 수소 원자가 어떤 탄소에 결합하고 있는지 알아보기 위하여 COSY NMR spectrum을 조사하였으며 그 결과는 Fig. 11과 Fig. 12에 나타내었다. 분리된 CW II는 액체의 성분이고 1H-NMR 스펙트럼에서 \(6.76-7.19 \mathrm{ppm}\)에 proton이 15개의 수소가 나타났고, \(0.86-2.34 \mathrm{ppm}\)에 saturated alkane계열의 수소들이 주어졌다. C-NMR 스펙트럼으로 \( 110-160 \mathrm{ppm} \) 사이에 주어진 탄소의 수를 확인한 결과, \( 155 \mathrm{ppm} \)에서 amide carbonyl 탄소가 주어지고 나머지는 130, 121, 115 \(\mathrm{ppm} \)에서 주어졌다. 그리고 saturated alkanc계열의 탄소들은 42.9, 40.6, 26.5. 25.5, 22.3, 16.3, 11.5 \(\mathrm{ppm}\)에서 나타났다. 이들에 해당하는 단소의 차수를 확인하기 위하여 DEPT (45, 90, 135) 스펙트럼을 분석한 결과 130, 121, 115 \(\mathrm{ppm} \)의 탄소들은 3차 탄소로 주어졌고, \( 155.4 \mathrm{ppm} \)의 탄소는 4차탄소임을 확인하였다. Saturated alkane계열의 탄소의 차수는 각각 42.9(2차), 40.6(3차), 26.5(2차), 25.5(3차), 22.3(1차), 16.3(1차), 11.5(1차) \(\mathrm{ppm}\)에서 나타났다. HMQC 스펙트럼으로 수소와 탄소의 배열을 확인하였고, HMBC 스펙트럼으로 먼 거리의 coupling관계를 확인한 결과 두 개의 입체배열을 가지는 즉 (1E,3Z,5E,7Z,9E,11Z,13E)-cyclopentadeca-1, 3, 5, 7, 9, 11, 13-heptene 계열의 화합물로 추정되었다.</p>