본 연구는 굴에서 항고혈압 활성을 나타내는 유효지표물질을 찾고자 실험을 진행한다. 경남 통영 연안의 양식장에서 채취하여 인근 가공공장에서 가공되고 12년 동안 냉동 보관된 굴을 가수분해 시료로 사용하고, Alcalase, Neutrase, Flavourzyme, Protamex, Pepsin 등 상업적 효소를 이용하여 굴 효소 가수분해물을 제조한 뒤, 불용성 물질을 제거하고 건조 분말로 만들어 실험에 사용하였다.
<p>현재 김 가수분해물, 김, 다시마, 미역, 우뭇가사리, 청각, 가시파래, 톳 열수추출물, 쇠미역, 파래, 김, 지누아리 효소 가수분해물, 굴 단백질 pepsin 가수분해물, 바지락 단백질 Thermolysin 가수분해물, 어육 단백질로부터 분리된 항고혈압 펩타이드, 분리대두 단백질 가수분해 등의 해산물 및 곡물을 이용한 혈압조절 건강기능성에 관한 선행연구가 이루어지고 있다. 또한 정어리단백질 유래 디펩타이드인 valyl-tyrosine은 경중고혈압 환자에 대해 강압효과를 나타내어 우리나라 제 1호 개별인정형 건강기능식품으로 인정받았다.</p> <p>본 연구에서는 본태성 고혈압 쥐를 이용한 in vivo 실험에서 굴 효소 가수분해물이 항고혈압 활성이 나타난다는 선행연구 결과에 따라 유효지표물질을 찾고자 이에 대한 영양 및 기능 특성이 우수한 굴을 효소처리 하여 얻은 가수분해물의 ACE 저해효과를 비교하고, 이로부터 ACE 저해 peptide를 한외여과하여 HPLC fraction별 저해효과를 검토하고, 활성을 가지는 peptide의 아미노산 구조를 확인하여 유효지표물질을 찾았고, 이를 peptide 합성을 통하여 \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) 값을 구하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>재 료</h2> <p>굴 효소 가수분해물 제조에 사용하기 위한 참굴(crassostrea gigas, 각장 \( 4.6 \pm 2.3 \mathrm { ~cm } \), 각중 \( 9.9 \pm 3.2 \mathrm { ~g } \) )은 경남 통영 연안의 양식장에서 채취하여 인근의 가공공장에서 Individual Quick Frozen (IQF)으로 가공한 제품으로서 1\(\sim\)2년 동안 냉동 보관된 제품을 가수분해 시료로 사용하였다.</p> <h2>효 소</h2> <p>굴 효소 가수분해물을 제조하기 위해서 사용한 상업적 효소 들 중에서 Alcalase \(2.4 \mathrm{L}(2.4 \mathrm{AU/g})\), Neutrase \( 0.8 \mathrm { ~L } (0.8 \) \( \mathrm { AU } / \mathrm { g } )\), Protamex \(1.5\mathrm{MG} (1.5 \mathrm{AU/g})\), Flavourzyme \( 500 \mathrm { MG } \) 은 Novozyme (Novozyme Co, Bagsvaerd, Denmark)에서, Pepsin은 sigma(Sigma-aldrich Co, Louis, USA)에서 구입하여 사용하였다.</p> <h2>1-step 효소 가수분해물 제조</h2> <p>Alcalase, Neutrase, Flavourzyme, Protamex, Pepsin 등 상업적 효소를 이용하여 굴 효소 가수분해물을 제조하였다. 냉동 굴(IQF) \( 1 \mathrm { ~kg } \)을 1분 동안 끓는 물에 데치고 2배 수도수를 가한 후 마쇄하여, 마쇄물을 Alcalase, Neutrase, Flavourzyme, Protamex, Pepsin의 효소 반응 최적온도(각각 \( 55,50,40,55 \), \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) )에서 시료의 단백질 농도에 대하여 \( 1 \% \) 가 되도록 각 효소를 첨가하여 \( 1 \sim 12 \) 시간 동안 반응 시킨 후 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10분간 가열하여 효소를 불활성화시켰다. 얻어진 굴 효소 가수분해물을 원심분리(Model SUPRA 21K, Hanil science Industrial, Co., Ltd, Korea)하여 불용성 물질을 제거하고, 상층액을 진공 동결 건조하여 건조 분말을 만든 후 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하면서 실험에 사용하였다(Fig. 1). Alcalase, Neutrase, Flavourzyme, Protamex, Pepsin로 가수분해한 각각의 분해 산물을 AEH, NEH, FEH, PEH, PepEH으로 명명하였다.</p>