건선 유발 사이토카인인 TNF-\( \alpha \), IL-17A, IFN-\( \gamma \)로 자극한 HaCaT 세포를 in-vitro 모델로 사용하여 브라질린의 항염증 효과를 real time RT-PCR 분석을 통해 측정하였다. CXCL8과 CCL20 케모카인의 발현 조절 효과 또한 확인하였고, 브라질린이 STAT3 인산화를 억제하는 것이 관찰되었다. 이 결과는 브라질린이 건선과 관련된 염증성 사이토카인 및 케모카인의 발현을 조절하며, CCL20 전사 인자인 STAT3 인산화를 억제한다는 것을 보여준다.
<h2>TNF- \( \alpha \) IL-17A/ IFN- \( \gamma \) 자극 조건에서 브라질린의 케모카인 발현 조절</h2> <p>IL-17A 이외의 Th 세포에서 분비되는 IFN- \( \gamma \), TNF- \( \alpha \) 염증성 사이토카인 또한 건선 환자의 혈청에서 높은 수준으로 발현된다. 건선 유사 환경을 위해 TNF \(- \alpha \)/ IL-17A/IFN- \( \gamma \) 등 3종의 사이토카인으로 자극한 HaCaT 세포를 in-vitro 시험 모델로 사용하였다. 위와 같은 염증 환경에서 브라질린의 항염증 효과를 조사하고자 real time RT-PCR 분석을 수행하여 염증성 사이토카인 발현 수준을 측정하였다. 먼저, TNF \(- \alpha \)/ IL-17A / IFN- \( \gamma \) 자극은 HaCaT 세포에서 IL-1 \( \alpha / \beta \), TNF- \( \alpha \) 그리고 IL-6의 발현을 각각 \( 1.9 \pm 0.0 \), \( 1.7 \pm 0.2 \), \(2.9 \pm 0.1 \), \(2.6 \pm 0.2 \) 배 증가시켰다. 대조적으로, 브라질린은 TNF \(- \alpha \) / IL-17A/ IFN- \( \gamma \) 유도된 HaCaT 세포에서 염증성 사이토카인 mRNA 발현 수준을 감소시켰다. 특히, \(33 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 처리된 브라질린은 IL-1 \( \alpha / \beta \), TNF \(- \alpha \) 및 IL-6의 발현 수준을 각각 \( 72.7 \pm 1.6 \) , \(69.0 \pm 2.9 \), \(39.1 \pm 12.9 \), \(66.6 \pm 8.0 \% \) 감소시켰다(Fig.2A-D).이러한 결과는 브라질린이 TNF- \( \alpha / \) IL-17A/IFN- \( \gamma \) 복합적 염증 환경에서도 IL-1 \( \alpha/ \beta \), IL-6 및 TNF- \( \alpha \) mRNA 발현을 유의적으로 억제함을 보여준다. 또한, TNF \(- \alpha \)/ IL-17A/ IFN \(- \gamma \)자극에 의해 활성화된 각질형성세포에서 브라질린에 의한 CXCL8, CCL20 케모카인 발현 조절 효과를 확인하고자 하였다. TNF- \( \alpha \)/IL-17A/ IFN- \( \gamma \) 자극은 HaCaT 세포에서 CXCL8, CCL20의 발현 수준을 각각 \( 5.9 \pm 0.6 \) , \(4.7 \pm 0.6 \) 배 증가시켰다. 브라질린을 1, 3 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 처리하였을 때, 상향 조절 CXCL8 mRNA 발현은 \( 34.8 \pm 8.0 \) , \(80.3 \pm 1.9 \% \) 감소되었다(Fig. 2E). CCL20 mRNA 발현에서는 브라질린 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도에서 유의미한 감소가 보이지 않았으나, \( 3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도에서 \( 61.9 \pm \) \( 11.4 \% \) 의 저해 효과가 관찰되었다(Fig. 2F). 또한 western blot을 통해 CCL20 전사 인자인 STAT3 인산화 조절을 관찰하였다. TNF- \( \alpha \)/IL-17A/IFN- \( \gamma \) 자극에 의해 STAT3 활성화가 유도되었고, STAT3의 인산화는 브라질린에 의해 유의적으로 억제되었다(Fig. 2G). 이를 정량 분석하였을 때, TNF- \( \alpha \)/IL-17A/IFN- \( \gamma \) 처리한 세포에서 무처리군 대비 STAT3의 인산화가 \( 3.8 \pm 1.6 \) 배 상향 조절되었다. 대조적으로, 브라질린을 \( 1,3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 으로 각각 처리하였을 때, 인산화된 STAT3 단백질 발현 수준은 각각 \( 14.4 \pm 3.4 \), \( 15.6 \pm 2.8 \% \) 감소되는 것을 확인하였다(Fig. 2H). 위 결과들은 각질형성세포에서 브라질린이 건선 유발과 관련된 염증성 사이토카인 및 케모카인들의 발현을 유의적으로 조절하고, STAT3 인산화를 억제 할 수 있음을 보여준다.</p>