이 연구에서는 목형 잎 추출물이 \( \alpha \)-MSH로 자극된 B16 melanoma 세포의 멜라닌 생산에 미치는 영향을 측정하였다. 또한, 이 추출물의 여러 농도에 따른 멜라닌 생산 저해 효과를 평가하였다. 이 중 에틸아세테이트 분획이 가장 높은 멜라닌 생산 저해 활성을 보였으며, 이는 mushroom tyrosinase 저해 활성과 유사하게 나타났다. 이 분획의 저해 활성은 농도에 따라 변화하였으며, 알부틴의 경우 2 mM 농도는 약 54.45 \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에 해당하여 6.21%의 멜라닌 생합성 저해활성을 보였다.
<h3>세포 내 멜라닌 함량 측정:</h3> <p>목형 잎 추출물의 세포수준에서 미백 효과를 알아보기 위해 \( \alpha \)-MSH로 자극된 B16 melanoma 세포에 목형 잎 추출물을 처리하여 멜라닌 함량을 측정 하였다. \( \alpha \)-MSH \( 100 \mathrm{nM} \) 처리시 무처리군(control)과 비교하여 멜라닌 함량이 평균 \( 16.19(\pm 2.44) \% \) 가 증가하였다. 기능성 화장품의 미백제로 널리 알려진 알부틴을 비교 물질로 사용하였으며, \( \alpha \)-MSH만 처리 하였을 때 세포의 멜라닌 함량은 \( 18.56 \% \) 증가하였고, \( \alpha \)-MSH 단독 처리군과 비교하여 알부틴의 \( 3 \mathrm{~mM} \) 농도에서 \( 58.38 \%, 2.5 \mathrm{~mM} \) 농도에서 \( 37.23 \%, 2 \mathrm{~mM} \) 농도에서 \( 6.21 \% \) 로 농도 의존적으로 멜라닌 생성을 저해 하였지만 \( 1 \mathrm{~mM} \) 농도에서는 저해 활성이 나타나지 않았다. 목형 잎 추출물의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 \( \alpha \)-MSH만 처리 하였을 때 \( (+15.61 \%) \) 와 비교하여 \( 25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 28.14 \%, 12.5 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 14.03 \%, 6.25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 8.74 \%, 3.125 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 8.39 \% \) 저해활성이 나타났고, 에틸아세테이트 분획은 \( \alpha \)-MSH만 처리하였을 때(+17.56\%)와 비교하여 \( 50 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 41.80 \% \), \( 25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 27.30 \%, 12.5 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 18.70 \% \), \( 6.25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 11.61 \% \) 의 멜라닌 생합성 저해활성이 나타났다. 아글리콘 분획의 경우 \( \alpha \)-MSH만 처리하였을 때 \( (+13.03 \%) \) 와 비교하여 \( 25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 27 \% \), \( 12.5 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 9 \%, 6.25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 4.85 \% \), \( 3.125 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 0.90 \% \) 로 농도 의존적으로 멜라닌 생합성을 저해하였다.</p> <p>게다가 mushroom tyrosinase 저해활성과 유사하게 에틸아세테이트 분획에서 세포 내 멜라닌 생합성에 대한 저해활성이 가장 좋았으며, mushroom tyrosinase 저해 활성 중 에틸아세테이트 분획의 저해활성 \( \left(\mathrm{IC}_{50}=48.58 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\right) \) 과 비교하여 세포 내 멜라닌 생합성에 대한 저해활성에서도 \( 50 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 41.80 \% \) 저해활성으로 mushroom tyrosinase 저해활성과 유사하게 나타났다. 또한 알부틴의 \( 2 \mathrm{~mM} \) 농도는 약 \( 54.45 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에 해당하며 이 때의 세포내 멜라닌 생합성 저해활성은 \( 6.21 \% \) 로 나타났다. 따라서 세포내에서 미백제로 알려진 알부틴 보다 목형 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 멜라닌 생합성에 대해 더 우수한 저해활성이 나타났으며, 이를 미백 화장품의 원료로써 응용할 경우 미백효과가 클 것으로 기대된다.</p>