CRP 단백질의 구조가 열에 의한 변화보다 CAMP에 의한 영향으로 모든 경우에 subtilisin에 민감함을 보였고, 583G CRP의 CAMP binding pocket에 있는 아미노산의 치환이 CAMP의 결합, CRP의 구조변화, 단백질의 열적 안정성에 영향을 주는 것이 확인되었다. 또한 dimer-monomer 해리와 cAMP 결합 해리 중 우선순위를 파악하고, CRP에 두 분자의 CAMP가 결합해 한 분자의 CAMP가 결합할 때와 열적 한정성과 subtilisin digestion에 차이를 주는지는 차후 연구가 필요하다.
<p>높은 온도 \( \left (55 ^ {\circ } \mathrm { C } \right . \) 이상 \( ) \)에서 CRP의 구조가 CAMP에 의한 영향보다 열에 의한 단백질 변성의 영향으로 모든 경우에 subtilisin에 민감함을 볼 수 있었다. 그리고 \( \mathrm { CD } \) 스푁트럼에 의하면 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( \mathrm { S83G } \) CRP의 \( \alpha \)-helix 구조가 급격하게 파괴됨을 볼 수 있으나 전체적인 CRP 단백질 구조의 안정성에서 \( 5128 \mathrm { ~A } \) CRP와 유사한 것으로 분광 광도계 실험의 결파이서 알 수 있다. 그러나 낮은 온도에서 583G가 \( \mathrm { S } 128 \mathrm { ~A } \) 보다 CAMP에 대한 친화력이 커서 야생형에 더 가까운 구조를 가진다. 이것은 CAMP의 결합에 128번 아미노산이 더 중요하다는 젓을 보여주는 결과이다.</p> <p>결론적으로 야상형 \( \mathrm { CRP } \) 가 열에 가장 한정한 구조임을 알 수 있고 또한 cAMP binding pocket에 위치한 아미노산의 치환이 \( \mathrm { CAMP } \)의 결합, \( \mathrm { CRP } \) 의 구조변화, 그리고 단백질의 열적 안정성에 영향을 준다.</p> <p>최근의 연구 결과에 의하면 CRP 단백질이 denatur-ant에 의해 변성될 때 첫 번째 단계로 dimer가 monomer로 해리되는 과정을 거처 두 번째 단계인 native monomer에서 변성된(unfolded) monomer로 가는 느린 과정을 따른다. 그러나 분광 광도계를 이용한 실험에서 앞에서 언급한 첫 번째 과정이 관찰되지 않았다. 이것은 dimer에서 mon-omer로 해리될 때 흡광도에 영향을 주는 아미노산들이 관여하지 않은 것으로 생각된다. 그래서 추가적오로 TGGE(Temperature Gradient Gel Electrophoresis)기법으로 온도 기울기가 형성된 젤에서 실험한 결과에서도 확인이 어려웠다(발표되지 않은 결과).</p> <p>그리고 흥미로운 것은 CRP의 CAMP 결합부위에 결합한 CAMP의 해리와 CRP dimer의 monomer로의 해라 중에서 어느 과정이 우선적인가? 하는 문제와 CRP에 두 분자의 CAMP가 결합하면 한 분자의 cAMP가 결합할 때와 CRP의 열적 한정성과 subtilisin digestion에 어떤 차이를 주는가? 하는 문제는 앞으로 해결해야할 과제로 여겨진다.</p> <h1>요 약</h1> <p>CAMP 수용성 단백 질인 CRP는 Escherichta coli에서 대시와 관련된 유전자의 전사를 조절한다. 본 연구는 야생형과 돌연변이 CRP 단벡질의 열적 안정성과 온도에 따른 단백질의 구조변화를 관찰하기 위하여 proteolytic digestion, UV spectrophotometer, CD spectrapolarimeter 동의 방법을 사용하였다. \( \mathrm { cAMP } \) 가 없을 때는 야생형, \( 583 \mathrm { G } , 5128 \mathrm { ~A } \) \( \mathrm { CRP } \) 가 열적 안정섬에서 큰 차이를 보이지 않았지만, CAMP가 존재할 때 야생형 \( \mathrm { CRP } \) 가 다른 들연변이 CRP보다 열적으로 더욱 안정함을 보였다. 그리고 protease digestion 실험을 통하여 높은 온도에서 CAMP의 존재와 무관하게 돌연변이 CRP에서 단백질의 변성으로 인한 절단된 단백질 띠를 관찰할 수 있었다. 그리고 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 측정한 CD 스펙트럼에서 단백질의 2차 구조인 \( \alpha \)-helix 그조가 부분적으로 파괴되었음이 관찰되었다.</p>