본 연구에서는 유채의 소포자 배양을 위해 NLNS 배지를 사용하였다. 이 배지는 생장조절제를 제거한 Swanson이 제안한 배지에 \( \mathrm { KI } \) 0. 83 \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \)와 \( 10 \% \) sucrose를 첨가한 것이다. 소포자 밀도는 \( 1 \mathrm { mL } \)에 약 \( 10 \times 10 ^ { 4 } \)이었다. 소포자의 활력은 Heslop-Harrison의 방법을 따라 FDA를 이용해 조사하였다. 또한, 4주 후에 배양된 소포자의 수를 해부 현미경으로 조사하여 평균과 표준 오차를 계산하였다.
<h2>소포자 배양</h2> <p>소포자 배양 시 배지는 Swanson (1990) 이 유채의 소포자 배양에 사용하였던 배지에서 생장조절제를 제거하고 \( \mathrm { KI } \) 0.83 \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \)와 \( 10 \% \) sucrose를 첨가한 배지인 NLNS 배지(Kim et al. 2008)를 사용하였으며, 소포자의 밀도는 \( 1 \mathrm { mL } \)에 약 \( 10 \times 10 ^ { 4 } \)이 되도록 조정하였다. \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \) 배양접시에 \( 2.5 \mathrm { mL } \)씩 치상하여 \( 27 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 암 상태에서 배양하였다.</p> <p>단 전처리 배지 내 sucrose 농도가 배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 \( 3.0 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \) 배양접시에 \( 1 \mathrm { mL } \) 씩 치상하였으며, 배양용기의 크기가 배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 \( 3.5 \times 1.0 \mathrm { ~cm } \)와 \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \) 배양접시 에 각각 \( 1 \mathrm { mL } \)과 \( 2.5 \mathrm { mL } \)씩 치상하였다.</p> <p>배양 중 새 배지의 첨가가 소포자배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 배양 2 주와 3 주 후에 새 배지를 \( 10 \%(0.25 \mathrm { mL } / \) 배양접시) 또는 \( 20 \%(0.5 \mathrm { mL } / \) 배양접시) 첨가하였다.</p> <h2>소포자의 활력조사</h2> <p>소포자의 활력은 Heslop-harrison (1970)의 방법에 따라 조사하였다. 즉 fluorescein diacetate (FDA) \( 2 \mathrm { mg } \)을 \( 1 \mathrm { mL } \)의 acetone에 녹여 stock solution을 만들어 보관한 후 사용 직전에 stock solution \( 3 \mu \mathrm { l } \)를 \( 1 \mathrm { mL } \)의 증류수에 희석한 working solution을 만들어 사용하였다. 전처리한 소포자를 FDA warking solution에서 10 분 동안 반응 시킨 후 B 또는 IB Filter를 사용하여 형광현미경 하에서 관찰하였다.</p> <h2>결과조사</h2> <p>실험은 1 개의 배양접시를 1 반복으로 하여 한 처리에 5-7 반복씩 3회 이상 실시하였다. 배양 4 주 후 해부 현미경 10 배의 배율 하에서 1 개의 배양접시에서 발생한 배의 수를 계수하여 평균과 표준 오차를 구하였다.</p>