paper disc method를 사용하여 박테리오신의 항균 스펙트럼을 측정하였다. 또한, 빅테리오신의 열에 대한 안정성, \( \mathrm{pH} \)에 대한 안정성, 유기용매에 대한 안정성, 가수분해효소에 대한 내성에 대해 실험하였다.
<h2>항균 스펙트럼</h2> <p>박테리오신의 항균 스펙트럼은 paper disc method를 사용하여 확인하였다. Bacillus sp., Paenibacillus polymyxa, Enterococcus faecium, Listeria monocyrogenes, Micrococcus lu-teus, Lactobacillus sp., Pediococcus dextrinicus 및 Xhanthomonas sp. 등을 시험균주로 사용하여 저해환의 형성 유무를 조사하였다.</p> <h2>항균물질의 안정성</h2> <h3>열안정성</h3> <p>열에 대한 박테리오신의 안정성을 조사하기 위하여 배양 상등액을 20, 40, 60, 80 및 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 각각 30 또는 60분간 열처리한 후 잔존하는 박테리오신의 항균활성을 측정하였다.</p> <h3>\( \mathrm{pH} \) 내성</h3> <p>\( \mathrm{pH} \)에 대한 박테리오신의 안정성을 조사하기 위하여 \( \mathrm{pH} 3.0 \)(0.1 M citrate buffer), \( \mathrm{pH} 5.0 \)(0.1 M acetate buffer), \( \mathrm{pH} 7.0 \) (0.1 M phosphate buffer), \( \mathrm{pH} 9.0 \) (0.1 M borate buffer) 및 \( \mathrm{pH} 11.0 \) (0.1 M carbonate buffer)의 완충용액과 배양 상등액을 1:1로 혼합하여 24시간 상온에서 반응시킨 후 잔존하는 박테리오신의 항균활성을 측정하였다.</p> <h3>유기용매 내성</h3> <p>Chloroform, isopropanol, methanol, ethanol, acetone 및 acetonitrile 등을 배양 상등액과 같은 부피 비율로 혼합(1:1)하여 용매의 최종 농도를 \( 50 \% \) 로 맞추고 상온에서 1시간 배양한 후, 잔존하는 박테리오신의 항균활성을 측정함으로써 여러 유기용매에 대한 박테리오신의 안정성을 조사하였다.</p> <h3>가수분해효소에 대한 내성</h3> <p>단백질, 탄수화물 및 지질 가수분해효소 등을 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 제조사의 지침에 따라 사용하였다. Lipase \( (4307 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 와 trypsin \( (13,500 \) \( \mathrm{U} / \mathrm{mg} \) )은 \( 50 \mathrm{mM} \) Tris-HCl buffer \( (\mathrm{pH} 7.5) \), a-chymotrypsin \( (83.9 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 과, carboxypeptidase A \( (73 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 는 \( 50 \mathrm{mM} \) Tris-HCl \( (\mathrm{pH} 8.0) \), pepsin \( (3.280 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 은 \( 10 \mathrm{mM} \) citrate \( (\mathrm{pH} 6.0) \), \( \alpha \)-amylase \( (519 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 는 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate \( (\mathrm{pH} 7.0) \)에 그리고 proteinase K \( (30 \mathrm{U} / \mathrm{mg}) \) 는 \( 0.01 \mathrm{M} \) Tris- HCl \( (\mathrm{pH} 7.9) \), \( 0.005 \mathrm{M} \) EDTA 및 \( 0.5 \% \) SDS 완충액에서 \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 가 되도록 준비하였다. 배양 상등액에 준비된 각종 효소를 2 \( \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 농도로 첨가하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 150분간 그리고 protei-nase K는 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 12시간 반응시켰다. 남아있는 박테리오신 활성은 M. luteus에 대한 저해환의 직경을 측정하였다. 또한 동일한 조건에서 효소액만을 처리하지 않은 것을 음성 대조구로 사용하였다.</p>