제조된 추출물의 안전성 평가를 위해 인간 적혈구를 사용하여 용혈 활성을 평가하고 (\(\%\)) Hemolysis \(= [(\mathrm{S}-\mathrm{C})/(\mathrm {T}-\mathrm {C})]\times100\)\(\mathrm {S}\) : 시료 첨가구의 흡광도, \(\mathrm {C}\): DMSO 첨가구의 흡광도, \(\mathrm {T}\):triton X-100 첨가구의 흡광도 식을 통해 용혈활성을 계산했다. 대장암세포 성장에 36종 한약재 추출물이 미치는 영향 평가를 위해 성장률을 측정하였고 결과적으로 한약재 고체발효에 의해 대장암세포 증식억제능이 증가된 건 도인, 골쇄보, 구기자, 패모이며, 감소된 건 백선피, 백과, 신이, 황부자, 산약, 현삼, 괄루인이었다.
<h2>인간 적혈구 용혈 활성 평가</h2> <p>제조된 추출물의 안전성 평가의 일환으로 인간 적혈구 \( (4 \%) \)를 이용하여 용혈 활성을 평가하였다. 기존의 보고한 방법과 동일하게, PBS로 3회 수세한 인간 적혈구에 추출물 시료용액을 가하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응한 다음, 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 \( 414 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였다. 용매 대조구로 DMSO ( \(2 \% \)), 적혈구의 \( 100 \% \) 용혈을 위한 실험 대조구로 triton X-100 ( \( \ 0.1 \% \))을 사용하였으며, 다음의 수식을 이용하여 용혈활성을 계산하였다.</p> <p>( \( \% \)) Hemolysis \( = [( \mathrm { S } - \mathrm { C } ) /( \mathrm { T } - \mathrm { C } )] \times 100 \) \( \mathrm { S } \) : 시료 첨가구의 흡광도, \( \mathrm { C } \): DMSO 첨가구의 흡광도, \( \mathrm { T } \): triton X-100 첨가구의 흡광도.</p> <h2>통계분석</h2> <p>실험 결과는 SPSS 17.0 버전을 사용하여 mean \( \pm \)SD로. 나타내었으며, ANOVA Tukey LSD 통계처리방법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다. 유의수준은 \( \mathrm { p }<0.05 \) 로 하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>한약재 추출물 및 발효한약재 추출물의 대장암세포 성장억제 활성</h2> <p>36 종 한약재 추출물이 대장암세포 성장에 미치는 영향을 평가하고자 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도로 HCT116 배양액에 첨가하고 24 시간 배양한 후 각각의 성장률을 측정하였다. 그 결과, 사인, 천궁, 석곡, 백선피, 시체, 두충, 백과, 신이, 와송, 삼칠, 견우자, 원지 및 괄루인의 13 종에서 암세포 성장률이 \( 50 \% \) 이하를 나타내어 이들 한약재가 대장암세포 성장억제능을 가짐을 알 수 있었다. 특히 사인, 와송, 삼칠, 견우자 및 원지 추출물은 무첨가구에 비해 각각 \(29.3,29.5,17.5 \), 및 \( 20.6 \% \) 의 성장률을 나타내어 우수한 암세포 성장억제능을 나타내었다. 한편 한약재 고체발효의 경우, 백부자, 감국, 신이, 황정 및 대추의 경우 정상적인 균사체 성장이 이루어지지 않아 대장암세포 성장억제능을 평가하지 못하였다. 발효에 이용된 장수상황버섯 균사체 추출물의 경우 \( 100 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 \( 46.3 \% \) 의 성장률을 나타내어 대장암세포 성장억제능을 확인할 수 있었다. 고체발효 한약재 추출물에서는 사인, 천궁, 석곡, 시체, 두충, 와송, 삼칠, 견우자, 원지 및 괄루인의 10 종은 발효전과 거의 동일한 성장억제 활성을 나타내었으나, 백선피, 백과 및 신이의 경우에는 고체발효에 의해 대장암세포 성장억제능이 부분적으로 감소하였다. 반면 도인, 골쇄보, 구기자 및 패모 추출물의 경우에는 발효에 의해 대장암세포 성장억제능이 오히려 증가되어 암세포 성장률이 무첨가구에 비해 각각 \( 26.6, 29.1, 23.4 \) 및 \( 26.3 \% \) 를 나타내었다(Table 2). 최종적으로 한약재 고체발효에 의해 대장암세포 증식억제능이 증가된 경우는 도인, 골쇄보, 구기자 및 패모의 4 종이었으며, 증식억제능이 감소된 경우에는 백선피, 백과, 신이, 황부자, 산약, 현삼 및 괄루인의 7종이었다.</p>