cordycepin에 의한 PC-3 세포 내에서의 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 이온 변화를 Flou-3/AM 형광염색법을 이용하여 측정하였다. cordycepin에 의한 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 증가는 apoptosis 유도 기전 중 하나로 판단하였다. 또한 cordycepin이 PC-3에 대한 apoptosis 유도에서 ROS 생성에 관여하는지 확인하기 위해 DCFH-DA 형광 염색법을 활용하여 측정하였다. 여기서 \( \mathrm{Ca}^{2+} \)의 항상성은 세포 기능, 성장, 분화, 그리고 세포사멸에 중요하다는 점을 강조하였다.
<h2>Cordycepin에 의한 PC-3 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 농도의 증가</h2><p>\( \mathrm{Ca}^{2+} \)의 항상성은 세포의 성장, 분화 및 세포사멸을 포함한 다양한 세포 기능에서 매우 중요하다. 특히, 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 이온 농도의 증가는 미토콘드리아 막의 이온 균형에 영향을 주게 되어 세포벽의 파괴를 유발하게 되고, Bax나 Bak과 같은 pro-apoptosis 단백질을 미토콘드리아 내로 유입시켜 apoptosis를 일으키게 한다. 따라서 cordycepin에 의한 PC-3세포에서 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 이온의 변화를 확인하기 위해 Flou- 3/AM 형광염색법을 통해 측정하였다. \( 200 \mu \mathrm{M} \) cordycepin을 6 시간 동안 처리 한 PC-3세포를 \( 5 \mu \mathrm{M} \)의 Flou-3/AM을 처리하여 30분간 염색 후, flow cytometry를 이용하여 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 농도의 변화를 확인한 결과, cordycepin은 PC-3 세포에 대해 \( \mathrm{Ca}^{2+} \)의 농도를 시간 의존적으로 증가시킴을 확인 할 수 있었고, 항산화제인 NAC과 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) chelator 인 BAPTA/AM을 전처리 하였을 때, \( 46.9 \% \)까지 중가한 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 농도가 각각 \( 22.81 \% \)와 \( 6.74 \% \)까지 감소 하는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 cordycepin에 의한 세포 내 \( \mathrm{Ca}^{2+} \)의 증가가 PC-3 세포의 apoptosis 유도 기전 중의 하나로 사료된다.</p><h2>PC-3 세포에서 cordycepin의 reactive oxygen species (ROS) 생성 유도</h2><p>ROS는 apoptosis를 유도하는 주요 인자 중 하나로 잘 알려져 있다. ROS는 DNA에 손상을 줄 뿐만 아니라 unfolding protein response (UPR)을 일으켜 ER-stress의 원인이 되기도 하고, 미토콘드리아의 기능을 저해하기도 한다. 또한 세포내의 ROS 증가는 세포의 산화적 stress를 증가시켜 세포의 손상을 유발시킨다. 따라서 cordycepin의 PC-3에 대한 apoptosis 유도에서 ROS 생성의 관여하는지 알아 보기 위해서 DCFH-DA 형광 염색법을 이용하여 측정하였다. \( 200 \mu \mathrm{M} \)의 cordycepin을 15-720 분 동안 처리한 PC-3 세포를 수거하여 \( 10 \mu \mathrm{M} \)의 DCFH-DA를 30 분간 처리하여 생성된 ROS를 flow cytometry를 이용하여 측정하였다. 시간에 따른 ROS의 생성을 확인한 결과, \( 1.86 \% \)에서 \( 69.31 \% \)까지 시간 의존적으로 증가하는 것을 확인하였고, 특히 6시간 이후부터 유의적으로 증가함을 확인하였다. 하지만, 항산화제인 NAC이나 \( \mathrm{Ca}^{2+}\) chelator 인 BAPTA/AM을 처리한 세포에서는 ROS의 변화가 유의성을 보이지 않았다(data not shown).</p>