요구르트의 proteolytic activity는 부분적으로 수정된 o-phthaldialdehyde (OPA) 방법을 사용해 측정했다. 여과액과 OPA 를 섞어서 반응시킨 후 흡광도를 측정해 아미노산과 펩타이드의 양을 조사했다. 또한, 요구르트의 \( \beta \)-galactosidase 효소 활성은 [32]의 방법을 따라 측정하였다. 활성도는 ONPG로부터 \( 1 \mathrm { M } \) 의 o-nitrophenol을 유방하는 양을 1 unit으로 하여 측정하였다.
<h2>효소활성 측정</h2> <p>요구르트의 proteolytic activity는 o-phthaldialdehyde (OPA) method 를 일부 변형하여 측정하였다. 요구르트 \( (2.5 \mathrm { ~mL } ) \) 와 \( 0.75 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) trichloroacetic acid \( (5 \mathrm { ~mL } ) \) 를 혼합한 후 상온 \( \left ( \right . \)약 \( \left .20 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 에서 10분간 반응시킨 다음 Whatman number 4A filter paper로 여과하였다. 여과액 \( (150 \mu \mathrm { L } ) \) 에 \( 3 \mathrm { mL } \) OPA reagent (Merck, Darmstadt, Germany)를 첨가한 후 상온 \( \left ( \right . \)약 \( \left .20 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 에서 2분간 반응시킨 다음 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 시료 용액으로부터 유리된 아미노산 및 펩타이드 양을 조사하였다.</p> <p>한편, 제조된 요구르트의 \( \beta \)-galactosidase 효소 활성은 [32] 등의 방법에 따라 측정하였다. 요구르트 \( 2 \mathrm { ~g } \) 에 \( 0.1 \mathrm { M } \) potassium phosphate buffer (PPB, pH 7.0) \( 2 \mathrm { ~mL } \) 를 가한 후 2분간 초음파 (Qsonica, Newtown, CT, USA)처리하여 조효소액을 준비하였다. 0.1 M PPB (pH 7.0)에 o-nitro-phenly- \( \beta \)-D-galactopyranoside (ONPG, Sigma-Aldrich) 를 5 \( \mathrm { mM } \) 농도로 맞춰 기질을 제조하였다. 기질 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 와 조효소액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15분간 방치한 후 급냉시켜 반응을 정지시키고 \( 1.0 \mathrm { M } \mathrm { ~Na } \mathrm { CO } _ { 3 } \) 용액 \( (2.5 \mathrm { ~mL } ) \) 을 가한 다음 흡광도 (O.D. \( 420 \mathrm { ~nm } \) )를 측정하여 유리된 o-nitrophenol을 정량하였다. 효소의 활성도는 \( 1 \mathrm { ~g } \) 의 시료에서 1분간 ONPG로부터 \( 1 \mathrm { M } \) 의 o-nitrophenol을 유리하는 것을 1 unit로 하였고 표준곡선을 이용하여 활성을 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>발효 균주의 종류와 FOS 농도에 따른 요구르트의 이화학적 특성, 장관액에 대한 저항성, 항균활성 및 효소활성 등을 각각 3회 실시하여 얻어진 측정값은 평균 \( \pm \) 표준편차로 나타내었고 SPSS (version 12.0) 프로그램으로 통계처리 하였다. 유의적인 차이 \( ( \mathrm { p }<0.05) \) 는 일원 배치 분산분석법 (one-way ANOVA)의 Turkey 다중범위검정 (Turkey's multiple range test)으로 결정하였다.</p>