Tissue microarray 슬라이드 상의 59가지의 인간 정상조직을 대상으로 사이모신 베타 4와 VEGF에 대한 면역조직화학검사를 실시하였다. 림프계통의 기관에서는 사이모신 베타 4와 VEGF 모두 중간 정도의 발현 양상을 보였다. 비뇨계통에서 사이모신 베타 4는 신장의 신장 관, 요관상피 및 기질 조직에서 중간 정도의 발현양상을 보였으며 VEGF는 발현 양상은 사이모신 베타 4와 유사하지만 요관 상피에서 강하게 발현되는 것이 관찰되었다. 내분비계에서는 혈관내피세포를 제외한 부신 피질과 수질에서는 사이모신 베타 4의 발현이 관찰되지 않았으며 VEGF 역시 혈관내피세포 이외에는 발현 되지 않았다. 소화기계에서는 침샘의 관 상피에서 사이모신 베타 4가 강하게 발현되는 것이 관찰되었고 간, 체관에서도 강하게 발현되었으며 침샘의 세엽, 이자의 외분비 세엽, 위의 기저관, 맹장의 선상피및 기질 조직에서 중간 정도의 발현양상을 보였다. VEGF는 대체로 사이모신 베타 4와 유사한 발현 양상을 보였으며 이자에서 강한 발현을 보였다. 생식계통에서는 사이모신 베타 4의 발현이 대체로 낮거나 중간 정도였으며 VEGF 역시 약하거나 발현 되지 않았다. 신경계통에서는 뇌의 백색질이나 척수의 신경세포에서는 사이모신 베타 4가 발현되지 않았으나 뇌의 회색질 및 척수의 아교세포에서는 약하게 발현되는 것이 관찰 되었다. VEGF 역시 신경계통에서는 발현되지 않거나 매우 약하였다. 피부 상피에서는 중간 정도의 발현양상을 보였으나 바닥층에서는 발현이 되지 않았으며 진피에서는 부분적으로 약하게 발현되었다. VEGF는 혈관 내피세포를 제외하고는 피부에서는 발현되지 않았다. 유방의 기질 조직에서는 사이모신 베타4가 강하게 발현되었으나 유선에서는 발현되지 않는 양상을 보였으며 VEGF는 유선에서 강하게 발현되었다. 골격근에서는 사이모신 베타 4가 중간 정도로 발현되었으나 심장근에서는 아주 강하게 발현되었다. VEGF는 골격근에서는 약한 발현을 보였으며 심장근에서는 중간 수준의 발현을 보였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>Tissue microarray</h2><p>Tissue microarray는 Super Bio Chip (SuperBioChips Laboratories, Seoul, Korea)사로부터 구입하여 사용하였다. 나이와 성별을 제외한 환자의 정보는 제공되지 않았다. 조직에 관한 정보와 조직의 종류는 Table 1에 요약되어 있다.</p><h2>면역조직화학검사(Immunohistochemistry)</h2><p>면역조직화학검사를 위해 tissue microarray 슬라이드를 탈파라핀화와 수화를 거친다음 citrate buffer \( (0.01 \mathrm{M}, \mathrm{pH} \) 6.0)상에서 전자레인지로 최고출력으로(\( 700 \mathrm{W} \) 이상) 5분간 두번 antigen retrieval을 실시하였다. PBS하에서 슬라이드를 충분히 식힌 후 3% hydrogen peroxide 용액에서 5분간 반응하여 endogenous peroxidase를 제거하였다. 이후 PBS로 5분간 3번 씻어 준 다음 PBS에 희석된 rabbit polyclonal thymosin \( \beta 4 \) (\( 1: 1,000 \) dilution; ALPCO Diagnostics, Windham, NH, USA) 혹은 rabbit polyclonal VEGF (\( 1: 2,000 \) dilution, Abcam Inc., Cambridge, MA, USA) 항체로 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 overnight 배양하였다. 다음날 PBS로 5분씩 3번 씻어 준 후 2차 항체를 처리하여 1시간 동안 반응한다. PBS로 5분 동안 3번 씻어 준 후 Dako's EnVision Kit (DAKO, Carpinteria, CA, USA)를 사용하여 DAB 발색반응을 유도하였다. 슬라이드는 이후 대조 염색을 Meyer's hematoxylin (DAKO, Carpinteria, CA, USA)로 10초간 염색 후 탈수반응을 거친 다음 Permount (Fishier Scientific, Pittsburgh, PA, USA)로 고정하였다.</p><h2>정량적 분석(Semiquantitative Assessment)</h2><p>단백질 발현양상의 정도를 측정하기 위해 면역화학염색의 정도를 4가지로 나누어 판단하였다. 발현이 되지 않고 염색이 되지 않은 경우를 negative\( (-) \), 약하게 발현되는 경우를 weak\( (+) \), 중간 정도의 발현양상을 보이는 경우를 moderate \( (++) \), 강한 발현양상을 보이는 경우를 strong \( (+++) \)으로 분류하였다. 발현 양상이 국소적인 경우는 focal positive \(( \left.{ }^{*}\right) \)로 표시하였다.</p><h1>결 과</h1><p>Tissue microarray 슬라이드 상의 59가지의 인간 정상조직을 대상으로 사이모신 베타 4와 VEGF에 대한 면역조직화학검사를 실시하였다. 사이모신 베타 4는 조직에 관계 없이 주로 섬유성 기질 조직(stromal fibrous tissue), 혈관내피세포(blood endothelial cells) 및 림프구(lymphocytes)에서 발현되는 것이 관찰되었으며 VEGF는 주로 혈관 내피세포에서 관찰되었다. 사이모신 베타 4와 VEGF의 자세한 조직별 발현양상은 Table 2에 요약되어 있다.</p><p>기관별로 사이모신 베타 4와 VEGF의 발현 양상을 살펴보면 림프계통의 기관인 이자, 림프절, 갑상선에서는 사이모신 베타 4와 VEGF 모두 중간 정도의 발현 양상을 보였다. 사이모신 베타 4와 VEGF 모두 폐의 폐포 사이막 세포 (alveolar septal cells)와 혈관 내피세포에서도 증간 정도의 유사한 발현양상을 보였다. 비뇨계통(urinary system)에서 사이모신 베타 4는 신장의 신장 관(renal tubes), 요관상피(ureter epithelium) 및 기질 조직에서 중간 정도의 발현양상을 보였으며 VEGF는 발현 양상은 사이모신 베타 4와 유사하지만 요관 상피(ureter epithelium)에서 강하게 발현되는 것이 관찰되었다. 내분비계(endocrine system)에서는 혈관내피세포를 제외한 부신 피질(adrenal cortex)과 수질 (medullar)에서는 사이모신 베타 4의 발현이 관찰되지 않았으며 VEGF 역시 혈관내피세포 이외에는 발현 되지 않았다. 소화기계(digestive system)에서는 침샘(salivary gland)의 관 상피(ductal epithelium)에서 사이모신 베타 4가 강하게 발현되는 것이 관찰되었고 간, 체관(pancreatic ducts)에서도 강하게 발현되었으며 침샘의 세엽(acini), 이자의 외분비 세엽(exocrine acini), 위(stomach)의 기저관(fundic gland), 맹장(appendix)의 선상피(gland epithelium) 및 기질 조직에서 중간 정도의 발현양상을 보였다. VEGF는 대체로 사이모신 베타 4와 유사한 발현 양상을 보였으며 이자에서 강한 발현을 보였다. 생식계통(reproductive system)에서는 사이모신 베타 4의 발현이 대체로 낮거나 중간 정도였으며 VEGF 역시 약하거나 발현 되지 않았다. 신경계통(nerve system)에서는 뇌의 백색질(white matter)이나 척수(spinal cord)의 신경세포(neurons)에서는 사이모신 베타 4가 발현되지 않았으나 뇌의 회색질(gray matter) 및 척수의 아교세포(glial cells)에서는 약하게 발현되는 것이 관찰 되었다. VEGF 역시 신경계통에서는 발현되지 않거나 매우 약하였다. 피부 상피(skin epidermis) 에서는 중간 정도의 발현양상을 보였으나 바닥층(basal layer)에서는 발현이 되지 않았으며 진피(dermis)에서는 부분적으로 약하게 발현되었다. VEGF는 혈관 내피세포를 제외하고는 피부에서는 발현되지 않았다. 유방의 기질 조직에서는 사이모신 베타4가 강하게 발현되었으나 유선(mammary gland)에서는 발현되지 않는 양상을 보였으며 VEGF는 유선에서 강하게 발현되었다. 골격근(skeletal muscle)에서는 사이모신 베타 4가 중간 정도로 발현되었으나 심장근(cardiac muscle)에서는 아주 강하게 발현되었다. VEGF는 골격근에서는 약한 발현을 보였으며 심장근에서는 중간 수준의 발현을 보였다.</p>