전자공여능과 Tyrosinase 저해활성을 측정하기 위해 개망초에서 추출한 시료를 사용하였으며, 측정 결과 전자공여능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡 광도 감소율로 나타내었고, Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가 구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 준비</h2> <p>본 실험에서 사용된 개망초는 경기도산림환경연구소에서 6 월에 채집하여 에탄올 추출을 실시하였다. 개망초를 건조 시킨 후 70% ethanol은 시료의 10 배를 가하여 상온에서 24 시간 침지하였다. 그 후 상등액과 침전물을 분리 및 추출 을 하였으며, 시료 추출물은 여과지(Whatman No.2)를 사용 하여 여과하였다. 감압농축은 EYELA evaporator로 실시하 였으며, 용매를 완전히 제거한 후 동결건조하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하면서 본 실험의 시료로 사용하였다.</p> <h2>전자공여능 측정 방법</h2> <p>전자공여능(EDA: electron donating abilities)은 Blois의 방법[12]을 변형하여 측정하였다. DPPH 용액 \( 60 \mu 1 \) 와 농도 별 추출물을 \( 120 \mu \mathrm { l } \) 씩 넣어 혼합하고 15 분간 반응 후 microplate reader를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡 광도 감소율로 나타내었다.</p> <h2>\( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)cation radical scavenging activity assay 측정</h2> <p>\( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)cation decolorization assay 방법[13]은 ABTS radical을 이용한 항산화력 측정방법으로 7 mM 2,2-azinobis (3-ethyl-benthiazoline-6-sulfonic acid) 및 2.45mM potassium persulfate를 혼합 후 실온에서 24 시간 동안 반응 하여 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } \)를 형성시켰다. 이 후 ethanol로 희석하여 \( \mathrm { ABTS } ^ { + } 100 \mu \mathrm { l } \) 에 시료 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 를 가하여 700nm에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>Tyrosinase 저해 활성 측정</h2> <p>Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법[14]에 따라 실험하였다. 67mM sodium phosphate buffer pH 6.8 \( 80 \mu \mathrm { l } \) 에 \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { L-DOPA } \) (Sigma, USA)를 녹인 기질 액 \( 40 \mu \mathrm { l } \) 및 시료용액 \( 40 \mu \mathrm { l } \) 의 혼합액에 \( 200 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) mushroom tyrosinase (Sigma, USA) \( 40 \mu \) l을 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 492nm 에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가 구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p>