Exophiala sp. LH2 균주가 포함된 배지를 삼각플라스크에 담아 다양한 조건에서 배양하였다. 배양 후 균체는 건조 및 실온에서 방냉하여 중량을 측정하였고, 배양액 내의 중금속 농도는 유도결합 플라즈마 원자 방사분광기를 사용하여 분석하였다. 이러한 실험은 각각 온도를 제외한 조건에서 3회씩 반복되었다.
<h2>균주 Exophiala sp. LH2의 성장과 중금속제거에 미치는 환경인자의 영향</h2> <p>\( 250 \mathrm { ~mL } \) 삼각플라스크에 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 의 Biosorption 배지를 넣고 전 배양된 Exophiala sp. LH2 균주를 \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 가 되도록 접종한 후, 다양한 조건에서 7일간 진탕 배양 및 정치배양하였다. Biosorption 배지에는 5 종의 중금속을 각각 10 , \( 50,100,150,200 \mathrm { ppm } \) 으로 첨가하여 배양하였다. 균주생장에 미치는 배지의 \( \mathrm { pH } \) 및 온도영향을 알아보기 위하여 \( \mathrm { pH } \) \( 4,5,6,7 \) 로 설정하였으며, 온도는 \( 25,37,45 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 설정하여 각각의 조건에서 최적 성장조건 및 중금속 제거효율을 관찰하였다. 매일 일정량의 시료 \( 5 \mathrm { ml } \) 를 회수하여 \( \mathrm { pH } \) 및 O.D를 측정하였으며, 실험 종료 후 건조중량을 측정하기 위하여 시료 \( 10 \mathrm { ml } \) 를 회수하여 원심분리 \( (10,000 \mathrm { rpm } , 10 \mathrm { ~min } ) \) 하였다. 원심분리 후 상등액을 버린 후 남겨진 균체를 \( 90 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 건조기에서 24 시간 건조 후 실온에서 방냉하여 중량을 측정하였다. 온도에 대한 영향을 제외한 모든 실험은 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 수행되었으며, 모든 실험조건은 3회 반복 실험하였다.</p> <h2>중금속 분석</h2> <p>배양액 중의 중금속 농도는 유도결합 플라즈마 원자 방사분광기(ICP-MS, Elan 6100, Perkin Elmer, U.S.A.)를 이용하여 분석하였다. 배양이 종료된 후 \( 10,000 \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 원심분리(20PR-52D, HITACHI, Japan)하여 균체를 제거한 후 배양액 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 존재하는 유기물을 제거하기 위해서 질산용액(85 \%)을 \( 2 \mathrm { ml } \) 넣고 건조하는 전처리과정을 거친 후 분석하였다.</p>