분말 형태의 패를 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 증류수 또는 \( 80 \% \)에탄올로 2회 추출하여 얻은 추출물을 실험에 사용하였다. 이를 바탕으로 tannin acid를 표준시약으로 사용하여 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. D PPH radical 소거 활성은 각 시료의 DPPH radical에 대한 환원력을 측정하였고, 이를 위해 \( 70 \% \) ethanol에 용해한 후 농도별로 희석하고 시료와 methanol에 용해시킨 DPPH를 혼합하여 \( 540 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 마지막으로 SOD 유사활성은 pylogallol의 생성량을 측정하여 나타냈다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>추출물의 제조</h2> <p>본 연구에 사용된 갈조류인 패(Ishige okamurae)는 제주도 동귀에서 채취하여 세척 후 자연 건조하여 분쇄한 형태로 판매하는 것을 파라제주(제주시)에서 구입하여 사용하였다. 분말형태의 패 \( 30 \mathrm{~g} \)을 증류수 혹은 \( 80 \% \)에탄올로 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 추출하였고 추출과정을 2회 반복하여 얻은 추출물을 감압건조하여 모든 실험에 사용하였다.</p> <h2>총 폴리페놀 함량 측정</h2> <p>총 폴리페놀함량은 Chandler과 Dodds의 방법에 따라 측정하였다. 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( 95 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{ml} \), 정제수 \( 5 \mathrm{ml} \) 및 \( 50 \% \) Folin-Ciocalteu reagent (Sigma) \( 0.5 \mathrm{ml} \)을 혼합하여 5분간 방치한 후 \( 5 \%\) \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3}\) \(1 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 교반시킨 다음 1시간 동안 암소에 둔 후 tannin acid를 표준시약으로 사용하여 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical 소거능 측정</h2> <p>DPPH radical 소거 활성은 Blois의 방법에 따라 각 시료의 DPPH radical에 대한 환원력을 측정하였다. 각 분획물을 \( 70 \% \) ethanol에 용해한 후 농도별로 희석하고 시료 \( 100 \mu 1 \)와 methanol에 용해시킨 \( 60 \mu \mathrm{M}\) DPPH \(100 \mu \mathrm{l} \)를 혼합하여 30분 동안 반응 시킨 다음 ELISA reader를 이용하여 \( 540 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 소거 활성능은 아래 식에 따라 백분율로 나타내었다.<p>DPPH radicals scavenging activity \( (\%)=(1-A / B) \times 100 \)</p> <p>\(A\): absorbance of sample, \(B\): absorbance of blank</p> <h2>Superoxide dismutase (SOD) 유사활성 측정</h2> <p>SOD 유사활성은 Marklund등의 방법에 따라 과산화수소 \( \left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \)로 전환시키는 반응을 촉매하는 pylogallol의 생성량을 측정하여 SOD 유사활성으로 나타내었다. 시료를 농도별로 희석하여, 시료 \( 10 \mu 1 \)에 \( \mathrm{pH} 8.5\)로 보정한 tris-HCIbuffer ( \(50 \mathrm{mM}\) tris [hydroxymethyl] amino-methane, \( 10 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm{pH}~8.5\)) \( 150 \mu \mathrm{l} \)와 \( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 10 \mu \)를 첨가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} ~50 \mu \)를 가하여 반응을 정지시켰다. 반응액 중 산화된 pyrogallol의 양은 ELISA reader를 사용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도 차이를 백분율\((\%)\)로 나타내었다.</p> <p>SOD-like activy \( (\%)=(1-A / B) \times 100 \)</p> <p>\(A\): absorbance of sample, \(B\): absorbance of blank</p>