쓴메밀, 여주, 그리고 영지버섯 혼합시료의 메탄올추출물의 항산화활성을 Blois의 방법에 따라 측정하기 위해 DPPH 용액을 만들고 흡광도의 감소를 측정하였다. 또한 쓴메밀, 여주, 그리고 영지버섯 혼합시료의 메탄올의 Fe-환원력과 Cu-환원력 측정을 위해 시료를 제작하였으며 각각 흡광도를 측정하였다.
<h2>DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>영지버섯, 여주, 쓴메밀, 이들 혼합시료의 메탄올 추출물의 항산화 활성은 Blois의 방법에 따라 측정하였다. 즉 DPPH (\( \alpha \), \( \alpha ' \)-diphenyl-\( \beta \)-picrylhydrazyl) 용액은 \( 100 \mathrm{~ml}\) 에탄올에 DPPH \(16 \mathrm{~mg} \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{~ml} \)를 혼합하여 여과지 (Whatman filter paper NO. 2)로 여과시켜 만들었다. DPPH 용액 \( 5 \mathrm{~ml} \)에 \(0.1, 0.5\) 및 \( 1 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) 시료 용액 \( 1 \mathrm{~ml} \)을 혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 대조군인 시판 항산화제 BHT는 \( 0.05 \% \)로 첨가하여 상기와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH free radical scavenging activity는 시료 첨가군와 무첨가군의 흡광도차를 백분율 \(\%\)로 표시하였다.<p>\(\mathrm{DPPH\ free\ radical\ scavenging\ activity} (\%)=[1-(\mathrm{Abs} / \mathrm{Abc})] \times 100 \)</p> <p>Abc: Absorbance of control treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p> <h2>\( \mathrm{Fe} / \mathrm{Cu} \) 환원력 측정</h2> <p>영지버섯, 여주, 쓴메밀, 이들 혼합시료의 메탄올의 \( \mathrm{Fe} \)-환원력 측정은 Zhu 등의 방법에 따라 측정하였다. 각 시료 추출물 \(0.1, 0.5\) 및 \(1 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 한 용액 \( 0.75 \mathrm{~ml} \)을 취하고, \(0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} ~6.6 ) \) \( 1.25 \mathrm{~ml} \) 및 \( 1 \%\) (w/v) potassium ferricyanide \( \left[\mathrm{K}_{3} \mathrm{Fe}(\mathrm{CN})_{6}\right] 1.25 \mathrm{~ml} \)을 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 진탕반응 시켰다. 이 반응액에 \( 10 \% \) trichloroacetic acid (w/v)를 \( 1.25 \mathrm{~ml} \) 가하여 acidified 시키고, \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 20분간 원심분리 시켰다. 상층액 \( 2.5 \mathrm{~ml} \)를 취하고 distilled water \( 2.5 \mathrm{~ml} \) 및 \( 0.5 \% \) ferric chloride \( \left(\mathrm{FeCl}_{3}\right) 0.5\mathrm{~ml} \)를 혼합한 후 실온에서 10분간 반응 시켜 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 한편, \( \mathrm{Cu} \)-환원력 측정도 각 시료 \(0.1, 0.5\) 및 \( 1 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) 용액에 \(0.01 \mathrm{M} ~\mathrm{CuCl}_{2},7.5 \mathrm{~mM} \) ethnolic neocuprorine solution, \(1 \mathrm{M} ~\mathrm{NH}_{4} \mathrm{OAc} \) buffer를 혼합하여 상온에서 반응시킨 후 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 환원력 비교를 위하여 천연 항산화제 ascorbic acid와 합성 항산화제 BHT를 각각 시료와 동일한 농도와 방법으로 흡광도를 측정하였다.</p>