이전의 실험을 통해 \( \mathrm { NO } \) 의 생성에 LPS로 유도된 RAW264.7 세포 중 HCW0811의 영향이 있음을 확인하였다. 또한 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 의 생성에 RAW 264.7 세포의 HCW0811가 미치는 영향도 밝혀졌다. 이와 관련해 본 실험에서는 \( \mathrm { NO } \) , \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \)의 생성과 연관된 iNOS와 COX- 2 단백질의 발현에 관여하는 HCW0811의 상관성을 알고자 했다. 그 결과로는 HCW0811가 iNOS와 COX-2의 유전자 발현을 방해함으로써 \( \mathrm { NO } \) 및 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \)의 생성을 제어하는 것으로 추측된다.
<h2>NO 생성 억제 활성 비교</h2> <p>LPS로 유도된 RAW264.7 세포에서 HCW0811이 \( \mathrm { NO } \) 의 생성에 미치는 영향을 조사하고자 시행되었다. LPS \( (1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } ) \) 와 HCW0811을 \( 12.5,25,50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 동시 처리한 뒤 griess reagent (Sigma-Aldrich)를 이용하여 세포 배양액에 존재하는 \( \mathrm { NO } ^ { 2- } \)의 양을 측정하였다. 그 결과 HCW0811은 LPS 단독 처리군과 비교하였을 때 \( \mathrm { NO } \) 생성을 \( 12.5,25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 에서 각각 \( 10.9,28.0 \% \) 억제 하였으며 가장 고농도인 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 에서 \( 58.9 \% \) 억제하는 것으로 나타났다.</p> <h2>\( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 생성 억제 활성</h2> <p>LPS 자극에 의해 유도된 RAW 264.7 세포에서 HCW0811이 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 의 생성에 미치는 영향을 조사하기 위해 실험을 진행한 결과 HCW0811은 각 농도에서 LPS 단독 처리군과 비교하였을 때 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 의 생성을 \( 10.4,36.5,45.3 \% \) 억제하였다.</p> <h2>iNOS 및 COX-2 발현 억제</h2> <p>본 실험에서는 \( \mathrm { NO } \) 와 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \)의 생성에 관여하는 iNOS 및COX- 2 단백질의 발현에 HCW0811이 미치는 영향과 이들의 연관관계를 조사하고자 western blot assay를 시행하였다. LPS \( (1 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { ml } ) \) 로 자극한 RAW 264.7 세포에 HCW0811을 \( 12.5, 25, 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 처리하여 24시간 염증을 유도한 후 iNOS 및 COX-2의 단백질 발현을 확인한 결과 HCW0811을 처리한 RAW 264.7 세포에서 LPS 단독 처리군과 비교하였을 때 \( 25,50 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { ml } \) 농도에서 iNOS의 발현이 유의하게 감소하는 것으로 나타났으며 iNOS 발현과 \( \mathrm { NO } \) 감소 양상이 유사한 것으로 보아 HCW0811 처리에 의한 \( \mathrm { NO } \) 감소 활성은 iNOS의 발현과 밀접한 관련이 있음을 확인 하였다. 또한 prostaglandin 생합성의 전구체인 arachidonic acid로부터 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 를 생성하는 것으로 알려진 COX-2 와 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 의 연관성을 확인하기 위해 COX-2 발현량을 확인한 결과 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) 감소량과 유사한 감소 앙상을 확인하였다. 이와 같은 결과를 근거로 HCW0811은 iNOS와 COX-2의 유전자 발현을 억제함으로써 \( \mathrm { NO } \) 및 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \)의 생성을 제어하는 것으로 사료된다.</p>