레스베라트롤이 MCF-7 세포의 증식에 미치는 영향을 분석한 결과 레스베라트롤의 농도가 증가함에 따라 MCF-7 세포의 증식억제에 더욱 효과적임을 알 수 있었으며, 이때, apoptosis가 유도됨을 확인하였다. 그리고 농도가 높아짐에 따라 농도 의존적으로 apoptosis 유도가 더욱 효과적 발현됨을 알았다. 또한 레스베라트롤의 농도 증가에 따라 mTOR와 COX-2의 발현 역시 감소하는 것을 확인하였다. 한편 rapamycin과 celecoxib를 처리하여 MCF-7 세포 증식에 대한 영향과 mTOR와 COX-2 신호 분자의 조절 관계를 분석한 결과 암세포의 생존과 증식을 촉진하는 mTOR 와 COX의 활성의 저해로 인해 MCF-7 세포 증식이 억제되었다고 추측할 있었다.
<h1>결 과</h1><h2>레스베라트롤이 MCF-7 세포의 증식 및 apoptosis에 미치는 영향</h2><p>레스베라트롤이 MCF-7 세포의 증식과 apoptosis에 미치는 영향을 알아보기 위해 레스베라트롤을 농도별로 처리하여 MTT assay를 통해 암세포의 생존율을 측정하였다. 그 결과 레스베라트롤을 \( 50 \mu \mathrm{M}, 100 \mu \mathrm{M}, 200 \mu \mathrm{M} \) 의 농도로 24시간 처리했을 때 레스베라트롤의 농도가 높아짐에 따라 MCF-7 세포 의 증식이 억제되는 것을 관찰하였다(Fig. 1A). 또한 레스베라 트롤 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 처리한 후 시간이 경과함에 따라 MCF-7 세포의 증식이 더욱 억제되는 것을 확인하였다(Fig. 1B). 이러한 결과 를 통해 레스베라트롤의 농도가 증가함에 따라 MCF-7 세포의 증식억제에 더욱 효과적으로 작용하는 것을 알 수 있었다.</p><h2>레스베라트롤에 의한 MCF-7 세포의 apoptosis 유도 효과</h2><p>레스베라트롤을 처리했을 때 MCF-7 세포의 증식이 억제된 MTT assay 실험 결과가 apoptosis에 의해 유도된 것인지를 알아보기 위해 Hoechst 33342 염색을 통해 apoptosis에서 나타나는 염색체 응축 현상을 관찰하였다. MTT assay와 동일한 조건으로 레스베라트롤을 \( 50 \mu\mathrm{M}, 100 \mu \mathrm{M}, 200 \mu \mathrm{M} \) 로 24시간 처리하고 Hoechst 33342 염색을 통해 apoptosis에서 나타나는 염색체 응축 현상을 확인한 결과, 레스베라트롤의 농도가 증가함에 따라 농도 의존적으로 염색체 응축 현상인 apoptotic body 가 더 많이 발생된 것을 알 수 있었다(Fig. 2A). 동일한 조건으로 Annexin V-propodium iodide staining을 이용하여 apoptosis가 일어난 세포를 측정한 결과, 레스베라트롤을 처리했을 때 apoptosis가 유도됨을 역시 확인하였고 농도가 높아짐에 따라 농도 의존적으로 apoptosis 유도가 더욱 효과적으로 나타난다는 것을 알 수 있었다(Fig. 2B).</p><h2>레스베라트롤이 COX-2와 mTOR 신호 경로에 미치는 영향</h2><p>MCF-7 세포에 레스베라트롤을 농도 별로 처리했을 때 mTOR와 COX-2 신호 분자의 조절에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 Western blotting을 실시하였다. Fig.3A 에서와 같이 레스베라트롤을 \( 50 \mu \mathrm{M}, 100 \mu \mathrm{M}, 200 \mu \mathrm{M} \) 으로 각각 처리했을 때, 농도 의존적으로 mTOR와 COX-2의 발현이 감소하는것을 관찰하였다. 또한, Fig. 3B 에서와 같이 레스베라트롤을 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 처리하고 \( 30 \mathrm{~min}, 1 \mathrm{hr}, 3 \mathrm{hr}, 6 \mathrm{hr} \) 시간이 경과함에 따라 시간 의존적으로 mTOR와 COX-2의 발현이 감소하는 것을 확인하였다.</p><h2>Rapamycin과 celecoxib가 MCF-7 세포의 증식과 mTOR, COX-2 신호 경로에 미치는 영향</h2><p>본 연구에서는 rapamycin과 celecoxib를 처리하였을 때, MCF-7 세포 증식에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고, 또한 mTOR와 COX-2 신호 분자의 조절 관계를 밝혀보고자 하였다.</p><p>먼저 rapamycin과 celecoxib가 \( \mathrm{MCF}-7 \) 세포의 증식에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 MTT assay를 통해 암세포의 생존율을 측정해 보았다. 그 결과 Fig. 4 에서와 같이 rapamycin \( 50 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) 과 celecoxib \( 50 \mu \mathrm{M} \) 을 각각 처리하였을 때, 암세포의 증식이 약 \( 20 \% \) 억제되는 것을 관찰하였다. 한편 레스베라트롤을 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 을 처리하고 rapamycin 50 \( \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) 을 병합처리 했을 시에는 레스베라트롤을 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 을 단독 처리했을 때의 약 \( 60 \% \) 의 세포생존율보다 낮은 약 \( 50 \% \) 의 세포생존율을 보였다. 레스베라트롤을 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 을 처리하고 celecoxib \( 50 \mu \mathrm{M} \) 을 병합처리 했을 때, 역시 레스베라트롤을 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 을 단독 처리했을 때 약 \( 60 \% \) 의 세포생존율과 비고해 보았을 때 약 \( 50 \% \) 로 더 낮은 세포생존율을 보였다. 이러한 결과는 암세포의 생존과 증식을 촉진하는 mTOR 와 COX의 활성의 저해로 인해 MCF-7 세포 증식이 억제되었기 때문인 것으로 보인다.</p><p>mTOR와 COX-2신호 분자의 조절 관계를 알아보기 위하여 MTT assay (Fig. 4)와 동일한 조건으로 레스베라트롤을 처리하여 Western blotting을 실시하여 실험 결과, Fig. 5 에서와 같이 Rapamycin \( 50 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) 을 단독으로 처리하였을 때 COX-2의 발현이 감소하였으며 Rapamycin을 처리하고 레스베라트롤 \( 100 \mu \mathrm{M} \)을 병행처리 했을 때에는 단독으로 처리했을 때보다 mTOR와 COX-2의 활성이 더 강하게 저해됨을 확인하였다. 한편 celecoxib \( 50 \mu \mathrm{M} \)을 단독으로 처리했을 때에는 mTOR의 활성에 변화가 없었으며 celecoxib와 레스베라트롤을 병행처리 했을 때에는 mTOR의 활성이 감소하는 것을 확인 할 수 있었다.</p>