Nieva Moreno 등의 방법으로 플라보노이드 함량을 측정하였고, Blois의 방법을 사용하여 시료의 DPPH 라디칼 소거활성을 측정했다. 복분자 methanol 추출물과 분획물의 세포독성 효과는 MTT assay를 이용하여 평가하였다. 각 세포주를 동일한 세포 수로 배양한 후, 시료를 처리한 뒤 24시간 동안 배양하였다. 상대적인 세포성장 억제율은 대조구 세포수를 100%로 설정하여 측정되었다.
<h2>총 풀라보노이드 함량</h2> <p>총 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 등의 방법에 의해 측정하였다. 각 시료 \( 100 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)를 \( 80 \% \) ethanol \( 900 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)에 희석한 후 \( 100 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)를 취하여 \( 10 \% \) aluminum nitrate와 \( 1 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { M } \) potassium acetate를 함유하는 \( 80 \% \) ethanol \( 4.3 \mathrm { ~ml } \)에 혼합하여 실온에서 40분 방치한 뒤 \( 415 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 총 플라보노이드 함량은 quercetin을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.</p> <h2>DPPH free radical의 소거활성</h2> <p>각 시료의 DPPH 라디칼에 대한 소거활성은 Blois의 방법에 따라 측정하였다. 각 시료를 \(99 \% \) methanol에 녹인 후, \( 800 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)를 취하여 methanol에 녹인 \( 0.15 \mathrm { ~mM } \)의 DPPH용액 \(200 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)와 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 반응시킨 후에 \( 517 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 각 시료 추출물의 유리 라디칼 소거활성은 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도를 \( 1 / 2 \)로 환원시키는데 필요한 시료의 농도인 \( \mathrm { RC } _ { 50 } \)값으로 나타내었다.</p> <h2>세포주 배양</h2> <p>본 실험에 사용한 human gastic carcinoma cell인 AGS와 Katom는 세포주 은행에서 구입하여 사용하였으며, RPMI 1640 (Gibco BRL, USA)배지에 \(10 \% \) FBS (Gibco)와 \(1 \% \) antibiotics (Gibco)를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 \( 5 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 \(2 \sim 3 \)일 마다 계대 배양하면서 실험에 사용하였다.</p> <h2>세포독성 측정</h2> <p>복분자 methanol추출물 및 분획물의 세포독성 효과를 측정하기 위하여 MTT assay를 실시하였다. 각 세포주를 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \mathrm { ~cells/well } \)로 맞추고 \(96 \mathrm { ~well } \)에 각각 \( 100 \mathrm { ~ml } \) 씩 첨가하여 24시간 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \(5 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 배양한 후, 시료를 암세포에 처리하였다. 24시간 동안 배양하여 각 well에 \(5 \mathrm { ~mg } / \mathrm { ml } \)의 MTT solution을 \( 10 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \)씩 첨가하여 다시 1 시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고 \( 100 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { l } \) DMSO로 well에 생성된 formazan을 녹여 ELISA reader (Spectra MAX 340 pc, Molecular Device, USA)를 이용하여 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 그 값은 대조구 세포수를 \( 100 \% \)로 하였을 때의 상대적인 세포성장 억제율로 나타내었다.</p>