실험에 사용하는 재료는 건조 상태 재료는 그대로 추출해 사용하였고, 생물 상태 재료는 흐르는 수도수를 이용하여 세척하고 열풍건조기로 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24-48시간 동안 건조하여 사용하였으며, 균 다섯 종 모두 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 진탕 배양기로 호기성 조건에서 24시간 혹은 48시간 배양하여 분석하였다. 건조 시료에 에탄올을 가하여 실온에서 24시간 추출한 후 같은 양의 용매를 다시 가하여 4시간 동안 진탕추출한 추출물을 여과하여 감압농축기로 농축하고, 당도계를 사용하여 \( 5 ~\mathrm{brix}\) 농도로 제조하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험의 식용 식물 원료 \( 35 \)종은 대형마트 또는 한약소재 전문 쇼핑몰을 통하여 구매하여 사용하였고, 식물 원료의 사용부위와 원산지는 Table \( 1 \)과 같다. 건조 상태의 재료는 그대로 추출에 사용하였고, 생물 상태의 재료는 흐르는 수도수를 이용하여 세척하고 열풍건조기(Taeyang Electric Co., Goyang, South Korea)를 이용하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 24-48 \)시간 동안 건조 과정을 거친 후 실험에 사용하였다.</p> <p>추출 용매인 정제수와 에탄올은 Burdick & Jackson사 (Muskegon, MI, USA)의 HPLC급 제품을 사용하였고, 기능성 평가에 사용된 folin-ciocalteu, \( 1,1 \)-diphenyl-\( 2 \)-picrylhydrazyl (DPPH) 시약과 표준물질로 사용된 chlorogenic acid, naringin, ascorbic acid는 Sigma-Aldrich사(St. Louis, MO, USA)의 제품을, 그 외 시약은 \( 1 \)급 이상을 사용하였다.</p> <h2>균주 배양</h2> <p>본 연구에서 사용한 균주는 \(4\)종의 구강세균 Streptococcus mutans KCTC \(3065\), Lactobacillus casei KCTC \( 3109 \), Staphylococcus epidermidis KCTC \( 1917 \), Klebsiella pneumoniae KCTC \( 2208 \)과 위생지표균 Escherichia coli KCTC \( 2441 \)으로, 생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures, Jeongeup, South Korea)에서 분양 받아 사용하였다. Streptococcus mutans KCTC \( 3065 \)는 Brain Heart Infusion 배지에서, Lactobacillus casei KCTC\( 3109 \)는 Lactobacilli MRS Broth 배지에서 배양하였다. Staphylococcus epidermidis KCTC \( 1917 \)와 Klebsiella pneumoniae KCTC \( 2208 \)와 Escherichia coli KCTC \(2441\)는 Nutrient Broth 배지를 사용하여 배양하였다. 다섯 종의 균 모두 \( 37~^{\circ} \mathrm{C} \)로 셋팅된 진탕 배양기(VS-\(8480\)SFN, VISION Scientific, Daejeon, South Korea)를 사용하여 호기성 조건에서 배양하였으며, \( 24 \)시간 또는 \( 48 \)시간 동안 배양하여 \( 1 \times 10^{7}~ \mathrm{CFU} / \mathrm{mL} \)의 균을 항균 활성 분석에 사용하였다.</p> <h2>식용 식물추출물의 제조</h2> <p>건조된 시료 \( 20 ~\mathrm{g} \)에 \( 70 \% \) 에탄올을 \( 100 ~\mathrm{mL} \)씩 가하여 실온에서 \( 24 \)시간 추출한 후 같은 양의 용매를 다시 가하여 \( 60~^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 4 \)시간 동안 진탕추출하였다. 추출물은 Whatman No. \( 1 \) 여과지로 여과한 뒤 감압농축기(Eyela, Tokyo Rikakikai Co., Tokyo, Japan)로 농축한 후, 당도계(Master refractometer, Atago, Tokyo, Japan)를 사용하여 \( 5 ~\mathrm{brix}\) 농도로 제조하였다.</p>