이식 비장을 4\(^\circ \mathrm{C}\) 생리식염수에 담궈 혈액 수세 후 동일 온도의 glutaraldehyde-phosphate buffer에 담군 뒤, 전고정 및 후고정 처리 후 phosphate buffer 로 10분간 수세했다. ethyl alcohol로 탈수하고 실온에서 propyleneoxide로 청명과 수지침투과정을 실행 후 각각 다른 온도에서 하루씩 두는 방법으로 블럭을 만들었다. 이후 초박절편기를 이용하여 절편 이중 전자염색을 시행했고, 이렇게 염색한 그리드는 투과 전자현미경으로 5000배에서 주로 관찰했다.
<h2>전자현미경용 조직표본의 제작</h2> <p>이식 비장을 채취하여 \(4^ {\circ} \mathrm { C } \) 생리식염수 (중외제약, 한국) 에 5분간 담구어 혈액을 완전히 제거한 후 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer ( \( \mathrm { pH~ } 7.4 \) )로 수세한 다음 \( 4^ {\circ} \mathrm {C} \) 의 \( 2 \% \) glutaraldehyde-phosphate buffer ( \( \mathrm{ pH~ } 7.4 \) ) 에 2시간 동안 담구었다. 고정 후 다시 두께가 \( 0.5 \mathrm{~mm} \) 이내가 되도록 잘게 썰어 바이알에 넣는다. 전고정으로 \( 4^ {\circ} \mathrm{ C } \) 의 \( 2 \% \) glutaraldehyde-phosphate buffer에서 1시간 동안 처리하고 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer로 10분간 3회 수세한 다음 \( 4^ {\circ} \mathrm { C } \)의 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer 내에서 하룻밤 두었다. 후고정은 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer 로 실온에서 5분간 수세한 다음 \( 1 \% \) osmium tetraoxide-phosphate buffer 로 1시간 동안 deep black 이 될 때까지 고정하고 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer 로 각각 10분씩 3회, 2~3차 증류수로 10분간 수세하였다.</p> <p>탈수는 \( 30 \% \) 에서 \( 100 \% \) 까지 순차적으로 ethyl alcohol 을 이용하여 각각 5분간씩 3회 실시하고 마지막은 10분간 3회 실시하였다. 청명과 수지침투과정은 실온에서 propyleneoxide 를 이용하여 3회 각 10분간 실시하여 polyresin을 이용하여 beem capsule 에 포매하고 드라이오븐에서 \( 35-37^ {\circ} \mathrm {C} \) 에서 8-18시간, \( 45-50^ {\circ} \mathrm { C } \) 에서 하룻밤, \( 55-60^ {\circ} \mathrm{C} \) 에서 1일, 실온에서 하룻동안 두는 방법으로 중합시켜 블럭을 만들었다. 전자현미경 관찰을 위하여 초박절편기를 이용하여 금색이나 회색을 띠는 절편을 \( 200 \mathrm {~mesh} \) 의 구리 그리드에 얹어 uranylacetate-lead citrate 이중 전자염색을 시행하였다. 전자염색한 그리드는 \( 100 \mathrm { kV }, 61 \mu \mathrm { A } \) 상태의 투과 전자현미경 (JEOL \( 1200 \)EX \( \mathrm {II} \), Japan) 으로 5000배에서 주로 관찰하였다.</p>