Oyaizu의 방법과 Folin-Denis 방법을 사용하여 Reducing power와 총 페놀 함량을 측정하였다. 각각 potassium phosphate buffer, potassium hexacyanoferrate(III), trichloroacetic acid, ferric chloride, L-ascorbic acid, tannic acid 등을 사용하고 UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 \( 700 \mathrm { ~nm } \)과 \( 725 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였으며, Gallic acid에 대한 HPLC 분석은 Waters 2695 system, Waters 2996 Photo diode detector를 사용하였다.
<p>' \( \mathrm { A } _ {\text { Control } } = \) Absorbance values of \( \mathrm { ABTS } \) radicals.</p> <h2>Reducing Power</h2> <p>Reducing power는 Oyaizu의 방법을 참고하여 측정하였다. 각 농도 별 추출물 potassium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.6)와 potassium hexacyanoferrate(III)를 혼합한 후, \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20분 반응시킨 후 찬물로 냉각 하여, trichloroacetic acid를 첨가하였다. 위 반응액을 \( 2000 \mathrm { ~g } \) 에서 5 분간 원심 분리하여 상등액에 증류수와 ferric chloride를 첨가하여 혼합한 후, UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 \( 700 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>Reducing power (Relative value of \( \mathrm { A } _ {\text { Control } } , \% \) )</p> <p>\( = \left [ \left ( \mathrm { A } _ {\text { Sample } } - \mathrm { A } _ {\text { Blank } } \right ) / \mathrm { A } _ {\text { Control } } \right ] \times 100 \)</p> <p>'A \( \mathrm { A } _ {\text { Sample } } \) ' \( = \) Absorbance values of Reducing power after treatment</p> <p>with sample.</p> <p>'A \( \mathrm { A } _ {\text { Blank } } = \) Absorbance values of \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \).</p> <p>' \( \mathrm { A } _ {\text { Control } } = \) Absorbance values of Reducing power after treatment</p> <p>with L-ascorbic acid.</p> <h2>총 페놀 함량 분석</h2> <p>총 페놀 함량은 Folin-Denis 방법[24]을 참고하여 측정하였다. 추출물에 증류수, folin 시약을 혼합한 후, sodium carbonate를 넣어 40분간 실온에서 반응시켰다. 수득한 상등액을 UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 \( 725 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 표준품은 tannic acid를 사용하였고, 정량 직선방정식을 사용하였다.</p> <h2>Gallic acid에 대한 HPLC 분석</h2> <p>Gallic acid의 High performance liquid chromatography (HPLC)분석은 Waters 2695 system과 Waters 2996 Photo diode detector를 통해 분석하였다. 실험에 사용된 시료는 메탄올에 용해하여 \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) membrane filter (Waters, Milford, MA,USA)를 이용해 여과하였고, 시료 \( 10 \mu \mathrm { L } \) 를 메탄올 및 \( 1 \% \) acetic acid \( / \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 을 이동상으로 Waters XBridge \( { } ^ {\mathrm { TM } } \mathrm { C } -18 \) column \( (4.6 \mathrm { ~mm } \times 250 \mathrm { ~mm } ) \) packed with \( 5.0 \mu \mathrm { m } \) diameter particles를 이용하여 흡광도 \( 271 \mathrm { ~nm } \) 에서 분석하였다. 추출물의 gallic acid는 표준품과 비교하여 동정 및 정량하였다.</p>