간세포와 합동 배양하여 간세포로 분화시킨 줄기세포를 간부분 절제술한 흰쥐의 비상내 주입하여 이식세포의 구조를 관찰하였다. 3일간 배양한 간세포 위에 접종시 배자줄기세포는 간세포의 가장자리에 부착하였고, 6일 후 많은 줄기세포들이 간세포로 분화하여 다양한 형태를 하고 있었으며, 일부 줄기세포는 원형을 유지하였다. 배양한 줄기세포를 이식 10일째에 비적수의 부분은 더욱 많은 적혈구와 함께 수많은 림프구들이 분포하였으며, 80일째에는 세포의 크기가 커지고 타원형의 핵을 가진 간세포들이 증가, 세포간의 간격이 넓어진 상태로 혈관이 분포한 육주의 분지로 둘러싸인 소엽을 구성하고 있었다. 포 이식 후 10일째에 밝고 큰 핵을 가진 분화한 간세포들은 비장의 림프구 사이에서 돌기를 내어 부착하고 있었으며, 시간 경과에 따라 핵과 세포질의 크기는 점차 증가하여 80일째에는 대부분의 세포들이 세포질이 증가한 간세포들로 이루어져 있었다.
<h1>결 과</h1> <p>본 실험에서는 간세포와 합동 배양하여 간세포로 분화시킨 줄기세포를 간부분 절제술한 흰쥐의 비상내 주입하여 이들 이식세포의 구조를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.</p> <h2>배자줄기세포의 분리와 배양</h2> <p>포배는 투명대에 둘러싸여 있었으며 내부에는 분열하고있는 오디배를 확인할 수 있었다. 이러한 포배들을 가는 유리관으로 흡입하여 채취한 후 \( 1 \% \) dispase 용액으로 처리하면 투명대가 소실되고 속세포덩이만 남았다. 이를 다시 collagenase로 처리하여 각각의 세포들로 분리한 다음 하룻밤이 지나면 속세포덩이의 세포들이 배자체로 형성하게 하였다. 이 세포들을 미리 준비한 feeder cell인 섬유모세포 배지 위에 분주하였다.</p> <p>배양 1일 후 배자줄기세포들은 분열하여 수가 증가하면서 원형이나 다각형에 가까운 세포들이 돌기를 내면서 바닥에 부착하여 자라고 있었다. 배양 3일 후에는 원형이나 직사각형의 세포들이 띠모양으로 배열하여 증식하고 있었으며, 배양 6일 후에는 줄기세포들은 덩어리로 뭉쳐져서 자라고 있었다.</p> <p>3일간 배양한 간세포 위에 접종시 배자줄기세포는 간세포의 가장자리에 부착하였으며, 합동배양 6일 후 많은 줄기세포들이 간세포로 분화하여 다각형에서 타원형에 이르는 형태를 하고 있었으며, 일부 줄기세포는 분화하지 않고 원형을 유지하고 있었다. 합동배양 8일 후에는 대부분의 줄기세포들이 간세포로 분화되어 있었으며 약간의 분화되지 않고 원형으로 보이는 줄기세포들도 세포들 사이에 부착되어 있었다.</p> <h2>비장내 이식 후 광학현미경적 소견</h2> <h3>1) H&E 소견</h3> <p>배양한 줄기세포를 이식한 후 10일째에 비적수의 부분은 더욱 많은 적혈구와 함께 수많은 림프구들이 분포하고 있었다. 비백수의 동맥주위림프초(periarterial lymphatic sheath : PALS) 근처에도 주로 이식한 세포들이 모여서 분포하였으며 많은 짙게 염색된 작은 핵을 가진 림프구의 침윤과 적혈구들이 많이 관찰되었다. 분화한 간세포들은 다른 세포보다는 옅게 염색된 큰 핵을 가지고 있었으며 서로 연결되어 모여 있었다.</p> <p>이식 20일군의 분화한 간세포들 주위에는 여전히 림프구의 침윤이 있으나 10일군보다는줄어들어 핵이 쉽게 관찰되었다. 간세포들은 적혈구의 수가 적은 동맥주위림프초 부근에서 2-3개의 세포들로 모여 있거나 타원형으로 소엽을 이루는 것이 관찰되었으며 세망세포와는 달리 세포의 핵이 크고 밝게 염색되었다.</p> <p>이식 30일군에서는 혈관이 있는 육주 근처에서 다각형의 큰 핵을 가진 세포들이 세포들 사이의 경계를 유지하면서 소엽상으로 모여 있는 것을 자주 관찰할 수 있었으며, 소엽 주위에는 작고 짙은 염색된 핵을 가진 림프구들이 둘러싸고 있었다.</p> <p>40일째에는 동맥주위림프초 근처에 다각형으로 옅게 염색된 큰 핵을 가진 세포들과 약간 짙게 염색된 둥근 핵을 가진 세포들이 작은 간격을 두고 작은 소엽을 이루며 군데군데 모여 있었으며, 그 사이에는 섬유모세포들도 관찰되었으며 각 소엽의 주위는 림프구들이 분포하고 있었다.</p> <p>80일째에는 세포들의 크기가 커지고 타원형의 핵을 가진 간세포들이 현저하게 많아졌으며 세포들간의 간격이 약간 넓어진 상태로 혈관이 분포한 육주의 분지로 둘러싸인 소엽을 구성하고 있었다.</p> <h3>2) Toluidine blue 소견</h3> <p>배양한 줄기세포를 이식한 후 10일째에 밝고 큰 핵을 가진 분화한 간세포들은 비장의 림프구 사이에서 돌기를 내어 부착하고 있었으며, 이들 세포들은 20일 후에는 그 수가 증가하였으며, 이식 30일군에서는 핵이나 세포질의 크기가 증가하였으며, 40일째에는 더 많은 수의 분화한 간세포들에서 세포질이 증가하였고, 80일째에는 대부분의 세포들이 세포질이 증가한 간세포들로 이루어저 있었다.</p>