미생물 생장에 필수적인 유기질소원이면서, cyclosporin A 분자 구성을 위한 아미노산 공급원인 첨가시에는 비첨가구보다 cyclosporin A 구성비율은 증가하였으나 복합유기질소원의 유래가 milk protein보다 meat protein인 경우가 cyclosporin A 생산성에 공급원인 복합 유기질소원들에 대해서 그 첨가 효과를 확인하였다.
<h2>복합 유기질소원의 첨가 효과</h2> <p>미생물 생장에 필수적인 유기질소원이면서, cyclosporin A 분자 구성을 위한 아미노산 공급원인 복합 유기질소원들에 대해서 그 첨가 효과를 확인하였다(Table 4). L-valine \(0.5\%\)와 L-leucine \( 0.5 \% \)가 첨가된 변형 SSM배지에서 유기질소원들이 cyclosporin A 역가 와 구성 비율에 영향을 미치는 영향을 검토한 결과, beef meat 유래의 Bacto-peptone을 첨가할 경우 cyclosporin A 역가는 \( 3,145 ~\mathrm{mg/L}\)로 비첨가구 \( 1,590 ~\mathrm{mg/L}\) 보다 2배 증가하였고, cyclosporin A 구성비율은 약 \( 13 \% \) 증가하였다. 그러나 우유 단백질인 casein 유래의 Merck-peptone, Casitone, Tryptone 그리고 NZ-amine 등의 복합 유기질소원 첨가시에는 비첨가구보다 cyclosporin A 구성비율은 \( 13 \% \) 이상 증가하였으나 cyclosporin A 역가는 비첨가구보다 오히려 약 \( 10-20 \% \) 감소하였다. 이러한 현상은 복합유기질소원의 유래가 milk protein보다 meat protein인 경우가 cyclosporin A 생산성에 유리한 것으로 해석되었다. 특히 동일한 우유 유래 영양원이지만 다른 것들에 비하여 유기질소함량이 낮은 whey가 cyclsporin 생산성이 더 높았던 것은 우유 유래 유기질소원이 cyclsporin 생합성을 오히려 억제하는 것으로 해석되었다. 또한 가수분해 정도가 증가하는 Merck-peptone, tryptone, NZ-amine, casitone 순서대로 cyclsporin 총 역가는 감소되어 우유 유래 유기질소원은 이화대사 억제 효과가 있는 것으로 추정되었다.</p> <h2>Bacto-peptone의 농도별 효과</h2> <p>복합유기질소원 가운데 가장 효과가 좋았던 beef meat의 가수 분해물인 Bacto-peptone의 농도별 첨가 효과를 검토한 결과, Bacto-peptone \( 1 \% \) 첨가시 cyclosporin A 역가는 \( 3,144 \mathrm{~mg/L} \)로 비첨가구보다 약 \( 1.7 \)배 증가하였고 cyclosporin A 구성비율도 \( 8.3 \% \) 향상된 반면에, cyclosporin B와 cyclosporin C는 각각 \( 2.1 \%, 5.4 \% \) 감소되었다(Table 5). 그러나 배지 내에 \( 1.0 \% \) 이상의 Bacto-peptone을 첨가할 경우에는 cyclosporin A 역가 및 구성비율에서 큰 차이가 없는 것으로 보아 cyclosporin A 역가 및 구성 비율에 대한 포화농도가 \( 1 \% \)인 것으로 확인되었다.</p> <h2>변이주들의 역가 및 구성비율 비교</h2>\(T. inflatum\) ATCC 34921의 UV 돌연변이체를 agar piece 배양한 후 \(Aspergilus~niger\)를 피검균주로 하여 closporin A 고생산 변이주 4종을 선별하였다. Table 6은 본 연구에서 확립된 최적화 배지 조건에서 모균주인 \(T. inflatum\) ATCC 34921과 선별된 변이주 4종의 cyclosporin A 역가 및 유도체 구성 비율을 비교한 결과이다. 고생산 변이주 YHC-004의 cyclosporin A 역가는 \( 3,430 \mathrm{~mg} / \mathrm{L} \)로, 모균주인 ATCC 34921 보다는 약 7.1배, YHC-002보다는 약 2.5배, YHC-003보다는 약 1.6배 증가한 값을 나타내었다. 그러나 모균주와 변이주 4종의 cyclosporin A 구성비율은 약 \(93-94\%\) 범위에서 비슷한 값을 나타내었으며, YHC-004의 경우 cyclosporin B는 \( 1.8 \%\), C는 \( 1.0 \%\), D는 \( 0.1 \%\), G는 \( 1.8 \%\), U는 \( 1.3 \% \)로서 모두 \( 2 \% \) 미만을 나타내었다(Fig. 2).</p>