Cochlodinium polykrikoides를 대상으로 살조활성을 측정하였고 초기 농도를 \( 500 \sim 600 \mathrm { ~cells/ml } \)로 배양하고, \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5,000 \mathrm { ~Lux } \). 조건에서 2~3 일 동안 배양하여 \( 1,500 \mathrm { ~cells/ml } \)로 성장된 조류세포를 96 well plate에 시료와 대조구를 첨가하고, Rugol's Iodine용액을 \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \)씩 첨가하여 조류를 고정하였다.
<h2>살조활성(Algicidal activity, \( \% \))</h2> <p>살조활성의 측정은 Cochlodinium polykrikoides를 대상으로 측정하였다. 초기 \( 500 \sim 600 \mathrm { ~cells/ml } \) 농도가 되도록 \( 100 \mathrm { ~ml } \) culture flask에 \( 30 \mathrm { ~ml } \)을 접종하여 2~3 일, \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5,000 \mathrm { ~Lux } \). 조건에서 배양하여 \( 1,500 \mathrm { ~cells/ml } \)로 성장된 조류세포를 이용하였다. 96 well plate에 \( 10 ~ \mu \mathrm { l } \) 시료를 첨가한 후 각 well에 \(1,500 \mathrm { ~cells/ml } \)로 성장된 Cochlodinium polykrikoides 배양액을 각 \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \)씩 첨가하였다. 대조구는 시료대신에 멸균된 Zobell 2216E 액체배지 또는 증류수를 첨가하였으며 5회 반복회수로 하였다. 혼합된 96 well plate는 2시간동안 조류 배양기( \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5,000 \mathrm { ~Lux } \).)에 배양한 후 각 well에 \(2 \% \) Rugol's Iodine용액을 \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \)씩 첨가하여 조류를 고정한다. 조류의 계수는 도립현미경(Ziess, x100) 하에서 정상세포를 계수하였다. 살조활성능 \(( \% \))은 다음의 식에 의해 계산되었다.</p> <p>살조 활성능(Alcididal activity, \( \% \)) \( = [1 \) - (시료 첨가구의 세포 수/대조구의 세포 수 \( )] \times 100 \)<caption>(식 1)</caption></p> <h2>살조물질의 특성</h2> <p>살조물질의 특성조사에 사용한 배양액은 \( 500 \mathrm { ~ml } \) 용량의 Baffle flask에 ZoBell 2216E액체배지 \( 200 \mathrm { ~ml } \)에 Kordia algi-cida를 접종하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 150 \mathrm { ~rpm } \)에서 24시간 진탕배양한 후 원심분리 \( \left (4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 16,000 \times g, 10 \mathrm { ~min } \right ) \)하여 배양상층액과 세포를 분리하였다. 배양상층액은 멸균된 \( 0.2 ~ \mu \mathrm { m } \) 여과지로 여과한 후 실험에 이용하였고 세포는 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 ultrasonicator (Sonic & materials Inc., Vibra Cell model VC375, USA)를 이용하여 1분간(Microtip, \( 150 \mathrm { w } , \% \)duty cycle 50) 5회 반복하여 세포를 파괴한 후 원심분리를 통하여 얻어진 상층액을 \( 0.2 ~ \mu \mathrm { m } \) 여과지로 여과한 후 실험에 이용하였다.</p>