MTT 분석 및 인슐린 분비 실험을 통해, 맥문동 추출물 중 인슐린 분비를 유도하는 물질은 500 μg/ml 농도에서 세포독성을 보여주었다. 그러므로, 이러한 물질을 실제적으로 적용하기 전에 세포독성이 없는 농도를 결정해야 한다. 이를 위해, 가장 강한 인슐린 분비 촉진 물질인 LP9M80-C를 이용한 농도 의존적 생존율 실험을 실시했다. 이 실험 결과는 인슐린 분비가 LP9M80-H 처리에 의해 세포 파괴나 다른 단백질로 인한 반응이 아님을 나타냈다.
<h2>LP9M80-H의 인슐린분비 적정농도의 설정</h2> <p>MTT 분석과 인슐린 분비능의 실험결과는 맥문동 추출물 중에서 인슐린 분비를 유도하는 물질은 동시에 \( 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서 강한 세포독성을 나타냄을 제시하고 있다. 따라서 실제로 이들을 적용하기 위해서는 세포독성을 나타내지 않는 농도를 결정할 필요가 있다. 이를 위하여 먼저 가장 강력히 인슐린 분비를 촉진시키는 물질인 LP9M80-C를 이용하여 농도 의존적인 생존율 측정실험을 실시하였다. 그 결과, \( 500 \mathrm {\mu g } / \) \( \mathrm { ml } \) 농도에서는 세포생존율이 매우 낮았으나 \( 125 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서부터는 거의 독성이 없음을 확인할 수 있었다(Fig. 4A).또한 독성이 없는 농도에서 인슐린 분비를 관찰한 결과, 인슐린은 \( 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서부터 \( 125 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 농도까지 거의 유사한 수준으로 분비됨을 관찰하였다. 그러나 \( 62.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서는 \( 30 \% \) 정도 감소하고, \( 31.3 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 농도에서는 거의 분비를 유도하지 못함을 관찰하였다(Fig. 4B). 따라서 이러한 결과는 \( \mathrm { LP } 9 \mathrm { M } 80- \mathrm { H } \) 가 \( 100 \sim 125 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 세포독성이 없이 인슐린 분비를 유도하도록 사용 가능할 것으로 사료된다.</p> <p>또한, 실험결과에서 인슐린 분비량의 증가원인이 세포의 사멸에 따른 세포내의 프로인슐린(pro-insulin) 혹은 c-펩타이드(c-peptide)와의 결합에 의해서 나타난 결과가 아님을 증명하기 위하여 세포사를 유도하는 물질인 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 \( 1 \mathrm { mM } \) 농도로 24 시간 동안 처리한 후 얻어진 배양액과 homogenizer를 이용하여 세포를 물리적으로 파괴한 후 얻어진 세포추출액을 이용하여 인슐린을 측정하는 대조실험을 실시하였다. 그 결과, \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 처리하여 세포사를 유도한 후 얻어진 세포배양액과 homogenizer를 이용하여 세포를 파괴하여 얻은 추출액에서 인슐린은 매우 적은 양으로 검출되었다(Fig. 5). 따라서 이러한 결과는 본 실험에서 확인한 LP9M80-H 처리에 의한 인슐린 분비는 세포의 파괴에 의해 분비되는 프로인슐린이나 다른 단백질에 의한 반응이 아님을 제시하고 있다.</p>