GSH(Glutathione reduced form)와 GSSG(Glutathione oxidized form)의 정량을 측정하기 위해, Homogenate에 \(25\%\) \(\mathrm{HPO_3}\)를 혼합하여 \(4^\circ \mathrm{C}, 8000 \times \mathrm{g}\)에서 10분간 원심 분리하였다. 그리고 OPT(ophthalaldehyde)을 넣어 15분 shaking한 다음 \(360 \mathrm{nm}\)에서 형광 측정하였다.
<h2>간 조직 중 GSH (Glutathione redeced form), GSSG (Glutathione oxidized form)의 정량</h2> <h3>1) GSH</h3> <p>Homogenate에 \( 25 \% \) \( \mathrm { HPO } _ { 3 } \) 를 혼합하여 \( (4: 1) \) \( 4 { } ^ {\circ } \mathrm { C } , 8000 \) \( \times \mathrm { g } \) 에서 10분간 원심 분리하여 96well에 상등액과 phosphate buffer (1 \( \mathrm { mM } \) EDTA 함유, \( \mathrm { pH } ~7.4\))와 OPT(ophthalaldehyde)를 넣어 15분 shaking한 후 \( 360 \mathrm { ~nm } \) 에서 형광 측정했다.</p> <h3>2) GSSG</h3> <p>Homogenate에 \( 25 \% \) \( \mathrm { HPO } _ { 3 } \) 를 혼합하여 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 8000 \times \mathrm { g } \) 에서 10분간 원심 분리하여 microtube에 상등액에 NEM(Nethylmalemide)를 섞은 후 20분 방치하고 \( 0.1 \mathrm { ~N } \mathrm { NaOH } \)를 가하여 혼합한 후 96well에 앞에서 혼합한 sample \( 200 \mu \mathrm{l} \)와 OPT \( 10 \mu \mathrm{l}\) 를 섞어 15분간 shaking 후 \( 360 \mathrm { ~nm } \) 에서 형광 측정했다.</p> <h2>간 조직 중 GPX (GSH-peroxidase)의 활성 측정</h2> <p>\( 0.1 \mathrm { M } \mathrm { PB } (4 \mathrm { mM } \) EDTA) \( 400 \mu \mathrm{l} + 0.01~ \mathrm { M~ } \mathrm { NaN } _ { 3 } ~70 \mu \mathrm{l} \) \( + 0.01 \mathrm { ~M~ } \mathrm { GSH } 70 \mu \mathrm{l} + 1.5 \mathrm { ~mM~ } \mathrm { NADPH } 70 \mu \mathrm{l} + \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~360 \) \( \mu \mathrm{l} + \) GSSG-reductase \( (1.8 \mathrm { u } / \mathrm { m } \mathrm{l}) ~20 \mu \mathrm{l} + \operatorname { sample } (20 \% \mathrm { ~H } \) 원액) \( 10 \mu l \)를 혼합하여 상온에서 1분간 방치한 후 \( 2 \mathrm { mM } \)의 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~100 \mu \mathrm{l} \) 를 가해 잘 섞은 후 \( 340 \mathrm { ~nm } \)에서 1분 30초간 흡광도 감소 측정을 하였다.</p>