유전자 조합에서 다른 중요한 요소는 종결부위 (terminator)이며 유전자 조합에서 다른 중요한 요소는 종결부위 (terminator)이며Table 6에 나타낸 바와 같이 조사된 상업화 GM 작물에서 가장 많이 사용된 종결부위는 아그로박테리움의 nopaline synthase 유전자에서 분리된 nos 종결부위 (T-nos)로 전체 102개 유전자 카세트 중 옥수수, 카놀라, 면화, 콩, 토마토 등 44개의 유전자 카세트에서 종결부위로 사용되었다. 일반적으로 식물체 내에 목적유전자를 도입하기 위한 운반체를 제조할 때 목적유전자 카세트와 함께 선발마커 유전자를 운반체와 연결하여 이용하며 최근에 여러 작물을 대상으로 선발마커가 제거된 마커프리(marker-free) 식물체 개발을 활발히 추진하고 있다.
<h2>상업화 \( \mathrm{GM} \) 작물의 종결부위 조사</h2> <p>유전자 조합에서 다른 중요한 요소는 종결부위 (terminator)이다.Table 6에 나타낸 바와 같이 조사된 상업화 GM 작물에서 가장 많이 사용된 종결부위는 아그로박테리움의 nopaline synthase 유전자에서 분리된 nos 종결부위 (T-nos)로 전체 102개 유전자 카세트 중 옥수수, 카놀라, 면화, 콩, 토마토 등 44개의 유전자 카세트에서 종결부위로 사용되었다. T-nos와 함께 많이 사용된 종결인자는 T-35(CaMV \( 35 \mathrm{~S} \) terminator)로 16 개의 유전자 카세트에서 사용되었다. 조사된 전체 상업화 GM작물에 사용된 종결부위의 종류는 16 종이었으며, 이 중 절반인 8종의 종결부위의 유래는 아그로박테리움이었다.</p> <h2>상업화 GM 작물의 선발미커 조사</h2> <p>일반적으로 식물체 내에 목적유전자를 도입하기 위한 운반체를 제조할 때 목적유전자 카세트와 함께 선발마커 유전자를 운반체와 연결하여 이용한다. 이는 아그로박테리움을 이용한 형질전환법을 이용할 경우에 형질전환과정에서 식물 세포내로 외래 운반체가 도입되는 비율이 매우 적기 때문에, 선발마커 유전자를 이용하여 외래 유전자가 도입된 식물체만을 손십게 얻을 수 있기 때문이다. 식물형질전환에는 통상적으로 가장 많이 사용되고 있는 선발마커 유전자가 가나마이신 내성 유전자 (nptII)로 알려져 있다. 그러나 Table 7에 나타낸 바와 같이 상업화된 GM 작물 개발에서 가장 많이 사용된 선발마커는 제초제 내성 pat 유전자로 나타났다. 옥수수, 카놀라, 면화, 콩에서 pat나 epsps와 같 은 제초제 내성 유전자가 선발마커로 주로 이용된 것은, 제초제에 내성을 지닌 식물체를 개발할 수 있으면서 형질전환과정에 선발이 가능하기 때문이다. 또한 콩과 같은 일부식물의 경우 항생제 내성 유전자는 형질전환과정에서 선별력이 약한 것으로 알려져 있다. GM 토마토의 선발마커로는 조사된 6종 모두 nptII 유전자가 사 용된 것으로 조사되었다. GM 토마토의 형질전환과정에서 항생제 내성 유전자가 주로 선발마커로 이용된 것은, GM 토마토의 목적 형질이 주로 과실의 숙기조절과 곤충저항성의 개선이며 토마토의 형질전환이 1986년 시작된 이래 오랜 기간 의 연구 성과로 항생제 저항성 유전자를 선발마커로 사용하여 어 려움 없이 높은 수준의 형질전환이 이루어지고 있기 때문으로 생각된다. 최근에 여러 작물을 대상으로 선발마커가 제거된 마커프리(marker-free) 식물체 개발을 활발히 추진하고 있다. 조사된 GM 옥수수 중 LY038과 MON89034는 식물형질전환에서 nptII를 이용하여 형 질전환체를 선발한 후 선발마커 유전자를 제거한 마커프리 작물이다. LY038은 위치-특이적 재조합효소 시스템인 cre/lox를 이용하여 선발마커 유전자가 제거되었고, MON89034의 경우에는 두개의 벡터를 같이 형질전환하는 이중형질전환(co-transformation) 후 자식세대의 유전자 분리 현상을 이용하여 선발마커 유전자를 제거하였다.</p> <h2>형질전환 방법 조사</h2> <p>식물형질전환은 목적유전자를 식물 게놈으로의 안정적 도입이 중요하다. 여러 가지 형질전환 방법이 현재까지 고안되었으며 많은 식물종이 성공적으로 형질전환 되었다. 상업화 GM 작물의 개발에 사용된 형질전환 방법은 세 가지 방법으로 분류되었다. 아그 로박테리움 매개에 의한 방법은 식물체 형질전환의 가장 널리 이용되는 방법으로, Table 8에 나타낸 바와 같이 옥수수, 카놀라, 면화, 토마토 등 36 개 GM 작물의 제조에 사용된 것으로 조사되었다. 직 접 DNA 도입 (direct DNA transfer) 방법은 전기충격 (electoporation) 과 같은 물리적 또는 화학적 약품을 사용하여 식물세포에 DNA를 도입하는 방법이다. BT10, BT11, MS3, MS6 등의 형질전환 옥수수 가 주로 전기충격을 이용하여 형질전환 되었다. 입자충격 (particle bombardment) 방법은 텅스텐 또는 금으로 코팅된 DNA를 공기압 등으로 가속하여 식물 세포내로 도입하는 방법으로, 식물체 내에 서 코팅된 DNA 입자가 용해되어 식물체의 게놈내로 삽입되게 된다. 입자충격법에 의해 형질전환 된 작물은 주로 옥수수와 공으로, 전체 21종의 상업화 GM 작물이 입자충격법에 의해 형질전환 되었다. 아그로박테리움 매개에 의한 형질전환 방법은 주된 5 작물 모두에서 폭 넓게 사용된 것으로 조사되었고, 특히 조사된 카놀라, 토마토 및 면화는 주로 아그로박테리움 매개에 의한 방법으로 형질전환 되었다. 