PICO-tag 방법으로 PITC labeling한 \( 10 \mathrm { mg } \) 시료 \( 400 \mu \mathrm { L } \) 중 \( 50 \mu \mathrm { L } \)을 HPLC (Waters 510)로 분석한다. High Resolution Column Bio 20 PEEK Lithium, buffer 250 \( \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), ninhydrin \( 20 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), buffer \( 55 \mathrm { bar } \), ninhydrin 12 bar의 조건으로 유리아미노산 분석을 한다.
<p>이 중 \( 10 \mathrm { mg } \)을 취하여 PICO-tag 방법을 이용하여 PITC labeling한 후 얻은 시료 \( 400 \mu \mathrm { L } \)중에서 \( 50 \mu \mathrm { L } \)을 취하여 HPLC (Waters 510)를 이용하여 분석하였다. column은 High Reso-lution Column Bio 20 PEEK Lithium이며 유속은 buffer 250 \( \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), ninhydrin \( 20 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \) 이고 압력은 Buffer \( 55 \mathrm { bar } \), nin-hydrin 12 bar의 조건으로 구성 아미노산 분석을 하였다.</p> <h2>유리아미노산의 분석</h2> <p>시료 \( 200 \mathrm { mg } \)을 absolute ethanol \( 1 \mathrm { ml } \)에 첨가하여 혼합한 후 상온에서 24시간 동안 표반하여 유리아미노산을 추출한다. 혼합액을 원심분리하여 상징액 \( 0.5 \mathrm { ml } \)을 취하여 Dowex \( 50-X 8 \) resin (200-400 mesh) column (made in a Pasteur pi-pette)을 통과 시킨다음 \( 10 X \) column volumn의 증류수로 column washing하고, \( 10 \mathrm { X } \) column volumn의 absolute eth-anoles protein, phenolic compound, carbohydrates, lipid를 제거하고, 10X column volumn의 \( 2 \mathrm { ~N } \) ammonium hydroxide로 유리아미노산을 용출한다. Column 용출액은 rotary evap-orator를 이용하여 evaporation 시키고, 건조된 시료는 \( \mathrm { pH } \)2.2 lithium citrate loading buffer를 이용하여 녹인 후 \( 0.2 \mu \mathrm { m } \) filter로 여과하였다.</p> <p>이 중 \( 20 \mu \mathrm { L } \) 을 취하여 HPLC (Waters 510)를 이용하여 분석하였고, column은 High Resolution Column Bio 20 PEEK Lithium이며 유속은 buffer \( 20 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), ninhydrin \( 20 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), 압력은 buffer \( 75 \mathrm { bar } \), ninhydrin \( 14 \mathrm { bar } \)의 조건으로 유리 아미노산 분석을 하였다.</p> <h2>비타민 분석</h2> <p>시료 \( 1 \mathrm { ~g } \) 을 식품공전의 미량 영양성분 시험법에 따라 처리하여 이 중 \( 20 \mu \mathrm { L } \) 을 취하여 HPLC (Waters 510)로 분석하였다. HPLC 분석조건은 \( \mathrm { C } _ { 18 } \) column ( \( \mu \) Bondapak \( \mathrm { C } _ { 18 } \), \( 0.39 \times 30 \mathrm { ~cm } , 10 \mu \mathrm { m } \) )이며 유속은 solvent \( 30 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \), nin-gydrin \( 20 \mathrm { ml } / \mathrm { hr } \) 이고, 압력은 solvent 55 bar, ninhydrin 12bar이었다.</p>