유전자 재조합 단백질 의약품 제조를 위한 동물세포주에서 외인성 바이러스 검출에 대해 WHO, EMEA, FDA 등 규제 기관들이 관리 규정을 설정하고 있지만, 민감한 분자시험법이 상용화되지 않아 비용과 시간 소요가 큰 생물학적 시험법이 주로 사용되고 있다. 이런 상황에서 BPV real-time PCR 시험법이 동물세포주 검증과 생산공정 검증에서 BPV 오염 여부를 효과적으로 검출할 수 있는 방법으로 확인되었다. 이런 동물세포주 검증에서의 real-time PCR 활용 방식은 이전에는 보고된 적이 없었다.
<p>WHO(World Health Organization), EMEA(European Medicines Agency), FDA(Food and Drug Administration)와 같은 규제기관은 유전자 재조합 단백질 의약품을 생산하기 위해 사용하는 동물세포주의 마스터세포(Master cell)와 제조용세포(Working cell)에서 외인성 바이러스 검출에 대한 관리 규정을 정하고, 세포주에 의한 바이러스 오염 사고를 최소화하고 있지만, 비용과 시간이 많이 드는 생물학적 시험법(In vitro 시험법, In vivo 시험법, 항체생산 시험법)을 대체할 수 있는 민감한 분자시험법이 상용화되지 않은 실정이다. \(9 \mathrm { CFR } \) section \(113.53 \)은 원료물질 유래 생물의 세포주 (primary cells 또는 cell line)를 사용하여 생산용 원료물질, 생산용 세포주, 공정 시료 등에 오염될 수 있는 바이러스를 검출하도록 요구하고 있다. Bovine turbinate(BT) 세포주는 소유래 바이러스에 쉽게 감염되기 때문에 우혈청을 사용하는 공정에서 바이러스 검출에 사용되는 세포주이다. 일반적으로 BT 세포주 단층세포에 원료물질, 세포주 파쇄액, 공정 시료, 반제품, 완제품 등을 첨가한 후 7 일 이상 배양을 하면서 병변효과를 관찰하여 오염여부를 판단하거나 haemadsorption test를 통해 바이러스 오염여부를 판단한다. 또한 BT 세포주 단층세포에 원료물질, 세포주 파쇄액, 공정 시료, 반제품, 완제품 등을 첨가한 후 7 일 이상 배양 한 다음 소유래 바이러스에 대한 항혈청을 이용해 면역형광 방법으로 바이러스 오염 여부를 판단한다. 이러한 생물학적 실험법의 경우 시간이 많이 걸리고, 비용이 많이 드는 단점이 있다. 본 연구를 통해 확립된 BPV 검출 시험법을 CHO 세포주에서 BPV 검출 시험에 활용하였을 때, BPV에 오염된 CHO 세포주가 병변현상을 일으키지는 않았지만, CHO 세포주와 세포주 배양 상등액에서 BPV를 효과적으로 검출할 수 있었다. 따라서 BPV real-time PCR 시험법은 동물세포주 검증과 생산공정 검증에서 BPV 오염 여부를 정성적 또는 정량적 검출할 수 있는 우수한 시험법임을 확인할 수 있었다. 동물세포주 검증에서 real-time PCR을 활용한 BPV 검출 시험은 지금까지 보고된 바 없다.</p> <p>소유래 콜라겐은 의료용 생체재료로 널리 이용되고 있지만, 콜라겐의 바이러스 안전성 검증에 관한 구체적인 가이드라인이 현재까지 제시되지 않아 제조사에서 자체적으로 안전성 검증시스템을 구축하고 안전성 보증 시험을 실시하고 있다. 하지만 BPV를 효과적으로 검출할 수 있는 시험법이 확립되지 않아 real-time PCR 시험법 같은 민감한 시험법이 요구되고 있다. 본 연구를 통해 확립된 BPV 검출 시험법을 \( 0.5 \% \) 콜라겐에 적용하였을 때 \( 1.3 \times 10 ^ { 0 } \mathrm { TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)까지 정량적으로 검출할 수 있어 콜라겐의 품질보증에 활용 할 수 있는 우수한 시험법임을 확인하였다. 민감도를 높이기 위해서는 콜라겐으로부터 BPV DNA 추출 조건의 최적화가 필요하다고 판단된다.</p>