Tryptone의 4개 제조업체(Difco, Gellix, MBcell, Sigma)의 제품을 STK 배지에 첨가하여 생장량을 조사한 결과, 8종의 꽃송이버섯 균주들의 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 염기서열 정보를 분석해 보았고, KGFS02와 KGFS07을 두 부류의 대표 균주로 선택하여 GenBank에 등록하였다. 그리고 KGFS08과 KFRI746이 각각 가장 높은 생장량을 나타내었고, KGFS08의 액체 배양 생장량은 40일까지 증가하고 50일 이후부터 정체기를 나타내는 것으로 나타났다.
<h2>Tryptone 제조원에 따른 생장량 조사</h2> <p>Tryptone의 제조원에 따른 액체 배양 생장량 조사를 위하여 4개 회사(Difco 사, Gellix 사, MBcell 사, Sigma 사)의 tryp-tone을 본 연구를 통해 개발된 STK 배지에 첨가하여 생장량을 조사하였다. 사용된 균주와 배양은 배지 선발 조건과 동일하게 실험하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>유전자 정보 등록</h2> <p>경상북도산림환경연구원이 보유하고 있는 꽃송이버섯 균주 KGFS01 등 8종의 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 영역의 염기서열을 비교해보면 KGFS01은 02, 04, 05, 06, 08과 동일하고 KGFS03은 07과 동일하게 나타났다. 결과적으로 8종은 두 가지로 나누어 볼 수 있었고 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 영역의 459 번 염기서열이 각각 G와 T로 한 개의 염기서열이 다름을 알 수 있었다. 미국 국립생물정보센터(NCBI)에 등록되어 있는 꽃송이버섯 균주들의 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 염기서열 정보를 분석해 보면 다른 균주에서도 459번 염기서열이G와 T로 다르게 나타났다. 또한, 염기서열의 분석의 부분적인 오류를 감안하여 두 차례 반복 분석을 하였다. 같은 지역권 내에서 채집된 균주이지만 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 염기서열 정보가 일부 다른 것으로 나타났다. 하지만 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 영역은 종의 구분을 위하여 사용되는 부분임으로 이 영역의 분석만으로 균주를 구별하기에는 부족한 부분이 있다. 그러나 분석된 8종의 두 부류는 459번 염기서열이 다르기 때문에 다른균주라고 판단된다. 따라서 KGFS02와 KGFS07을 두 부류의 대표 균주로 선택하고 분석된 정보를 'GenBank'에 등록하였다.</p> <h2>우량 균주 선발</h2> <p>경상북도산림환경연구원 균주 KGFS01 등 8종과 국립산림과학원 균주 KFRI644 등 10종의 액체 배양 생장량을 조사한 결과, 경상북도산림환경연구원 균주에서 KGFS08, 국립산림과학원 균주에서 KFRI746이 각각 가장 높은 값을 나타내었다. 따라서, 이 두 가지 균주를 꽃송이버섯 균사 액체 배양 특성 조사에 사용하였다.</p> <h2>균사체 배양 기간</h2> <p>꽃송이버섯 KGFS08 균주의 균사체 액체 배양 생장량은 40일에 가장 높은 값을 나타내었고, 30일에 대수기, 50일 이후로는 정체기를 나타내었다. 이와 같은 결과는 Hiroshi의 보고와 일치하는 것으로 나타났다.</p> <h2>배지 \( \mathrm { pH } \) 변화</h2> <p>균사체 액체 배양 기간에 따른 배지의 \( \mathrm { pH } \) 의 변화는 Fig. 3 과 같이 나타났다. \( \mathrm { pH } \) 는 51일 동안 아주 미세한 증가가 있지만 전반적인 변화는 없는 것으로 관찰되었다. Cheong 등은 HB 액체 배지에서 초기 \( \mathrm { pH } 4.0 \) 에서 배양 후, \( \mathrm { pH } 3.5 \) 이하가 되는 현상을 보고하였고, Oh는 균주 3종을 대상으로 8종의 배지에서 배양전과 후의 \( \mathrm { pH } \) 변화를 측정한 결과 대부분의 배지에서 \( \mathrm { pH } \) 변화가 미비하였고 MCM 배지에서만 \( \mathrm { pH } ~6.0 \)에서 \( \mathrm { pH } ~3.7 \) 로 차이가 나는 것으로 보고하였다. 이러한 결과는 배지의 종류에 따라 다르게 나타난다는 것을 알 수 있었다. 하지만 배양 방법과 균주 종류에 따라 차이가 있을 수 있기 때문에 대량 생산 체계 구축 시에는 면밀한 검토가 필요하다고 판단된다.</p>