E. coli ATCC 11229와 S. enteritidis ATCC 13076 균주를 이용하여 프로바이오틱 및 신비오틱 요구르트를 제조하였다. 각 균주의 초기 농도를 \(2.0\times 10^{5}\mathrm{~CFU}/\mathrm{mL}\)로 설정하고, \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 12시간 동안 배양한 후 \(4^{\circ}\mathrm{C}\)에서 보관하며 미생물 동태를 조사하였다. 또한, 환원력 조사를 위해 시료 \(1\mathrm{~mL}\)를 \(1 \%\) 포타슘 철사이안화물, \(0.2\mathrm{M}\)의 소듐인산 버퍼 및 \(10\%\)의 삼염화 염소산으로 처리하고, \(50^{\circ} \mathrm{C}\)에서 20분 동안 반응시킨 후, \(0.1\%\)의 염화 철을 첨가하여 \(700\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다.
<h2>항균활성 측정</h2> <p>E. coli ATCC 11229와 S. enteritidis ATCC 13076각각을 brain heart infusion (BHI) broth (Difco Co.)에 접종한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양한 후 얻어진 배양액을 원심분리 \( \left(7,000 \times \mathrm{g}, 4^{\circ} \mathrm{C}, 20\right. \)분)하여 세포만을 회수한 다음 PBS로 2회 세척하고 현탁시켰다. Probiotic 및 synbiotic 요구르트에 E. coli ATCC 11229와 S. enteritidis ATCC 13076의 균수를 \( 2.0 \times 10^{5} \mathrm{~CFU} / \mathrm{mL} \) 로 조정하여 접종한 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 12시간 배양시킨 후 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에 저장하는 동안 균수 변화를 조사하였다. 시료를 \( 0.85 \% \) NaCl 용액으로 십진 희석한 다음 E. coli ATCC 11229는 MacConkey agar (Difco Co.), S. enteritidis ATCC 13076는 SS agar (Difco Co.) 상에서 표준한천평판 배양법으로 접종한 균수에 대한 요구르트 내에서의 잔존하는 균수를 구하여 사멸율을 측정하였다. 항균활성의 원인이 과산화수소나 박테리오신 생성에 의한 것인지를 확인하기 위해 발효된 probiotic와 synbiotic 요구르트에 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{~NaOH} \) 를 사용하여 pH 7.0으로 조정한 것과 여기에 \( 10 \mathrm{mM} \) potassium phosphate (pH 7.0)에 용해시킨 catalase \( (1 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \), Sigma-Aldrich)를 처리하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 반응시킨 요구르트에 E. coli와 S. enteritidis 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 12시간 배양시켜 균수 변화를 조사하였다.</p> <h2>항산화 활성 측정</h2> <p>발효직후와 7일간 저장한 요구르트 시료를 \( 95 \% \) 메탄올에 \( 1: 1(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 로 혼합한 후 원심분리 \( \left(7,000 \times \mathrm{g}, 20\right. \)분, \( \left.4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 하여 얻은 상등액을 여과한 시료 \( 0.5 \mathrm{~mL} \) 를 \( 4.0 \times 10^{-4} \mathrm{M} \mathrm{DPPH} \) 용액 \( 1.0 \mathrm{~mL} \) 와 혼합한 후 vortex mixer로 약 10초간 진탕한 다음 상온에서 30분간 반응시켜 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도 (UV-1601, SHIMAZU, Koyto, Japan)를 측정하고 계산식 [1-(시료 첨가구의 흡광도/시료 무첨가구의 흡광도 \( \times 100] \) 에 대입하여 DPPH radical 소거능을 산출하였다. 한편, 시료 \( (1 \mathrm{~mL}) \) 를 \( 1 \% \) potassium ferric cyanide \( (1 \mathrm{~mL}) \) 및 \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer (pH 7.0)\((1 \mathrm{~mL}) \) 와 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20분간 반응시 킨 후 \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( (1 \mathrm{~mL}) \) 를 첨가해서 원심분리 \( \left(3,000 \times \mathrm{g}, 5\right. \)분, \( \left.4^{\circ} \mathrm{C}\right) \)하여 얻은 상등액 \( (1 \mathrm{~mL}) \) 에 \( 0.1 \% \) ferric chloride \( (0.1 \mathrm{~mL}) \) 을 가한 후 \( 700 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측 정함으로써 환원력을 조사하였다.</p>