임신 전과 임신 후 엄마 쥐에게 동일한 고형사료를 주어 사육하는 실험을 진행하였다. 두 사육방법에 따른 엄마 쥐들의 모유 지방산 조성을 출생 후 0,10일로 비교 검토하는 방법을 사용했다. 지방산 분석은 표준용액의 유지 시간과 비교하여 정성하였고, 전체 peak area의 퍼센트로 나타냈다. 실험 결과는 mean \( \pm\) SEM으로 나타내었고 실험 데이터는 Statistica program을 이용해 one way ANOVA를 실시하여 살펴보았다.실험결과 5% 수준에서 유의성을 검증하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물의 종류 및 사육</h2><P>본 실험에서는 두 가지 방법으로 1세대 엄마 쥐들을 사육하였다. 첫째 임신전 단계 동물 사육 방법(Pre-pregnancy group)으로 생후 3주된 암컷 Long-Evans 쥐를 Charles River 실험실(Portage, MI)에서 구입하여 \(2.6\%\) LNA가 첨가된 AIN-93G 표준식이를 각각 급여하여 적정 환경(온도 \( 23\pm 1 \mathrm{C}^{\circ}\), 상대습도, 명암 12 시간 주기)에서 8주간 사육하였다. 11주가 되었을 때 12주된 수컷과 교배시킨 후 임신 쥐들을 구별하여 교배 17일부터 개개 cage에서 사육하였다. 두 번째 방법으로는 Charles River 실힘실(Portage, MI)에서 임신 3일째 된 암컷 쥐를 구입하여 동일한 식이와 환경으로 사육하였다(Pregnancy group). 실험기간동안 실험식이와 음용수는 자유섭취방법으로 급여하였다. 두 가지 방법들로 각각 사육된 엄마 쥐들로부터 얻어진 신생 쥐들을 생후 12시간 내에 체중을 고려하여 5마리 엄마 쥐들로부터 각 1마리씩 신생 쥐를 분리하여 연령별로 위 내용물 및 뇌를 취하여 지방산을 분석하였다.</p><h2>실험식이</h2><p>본 실험에 사용된 고형사료는 AIN-93G에 따른 식이로 지방의 급원을 변형하였다. 임신전 단계 동물 사육 방법(Pre-pregnancy group)에서 엄마 쥐를 위한 식이의 경우 포화지방산의 급원으로 수소화된 coconut oil을 사용, linoleic acid(LA) 급원으로 safflower oil을 사용, LNA급원으로 flaxeed oil은 사용하였다. 두 번째 사육 방법인 임신 쥐를 사용한 경우(Pregnancy group)는 실험실에 도착한 날부터 위와 동일한 사료로 임신 동물을 사육하였다.</p><h2>Gas chromatography를 이용한 지방산 측정</h2><p>두 가지 사육방법에 따른 엄마 쥐들의 모유의 지방산 조성을 연령별(출생 후 0, 10일)로 취해서 비교 검토하였다. 모유는 신생쥐를 희생시킨 후 위내용물을 취하였고, 다음으로 뇌를 취하여 뇌의 무게를 재고 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하여 실험에 사용하였다. 지질 추출은 Folch 등을 변형하여 실시하였으며 Morrison과 Smith의 방법에 따라 추출된 지질에 methylation용 시약인 boron trifluoride methanol \( 1 \mathrm{ml} \)와 hexane \( 0.4 \mathrm{ml} \)를 가한 후 1시간동안 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 가열하여 methylation시켰다. 지방산 분석은 HP-5890B gas chromatography (Agilent, Palo Alto, CA)를 이용하였고 이용된 칼럼은 silica capillary column (DB-FFAP, \( 30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \) inner diameter \( \times 0.25 \mu \mathrm{m} \) film thickness, J and W Scientific, Folsome, CA) 이었으며 기기의 분석 조건은 detector (FID) \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), oven (initial \( 130^{\circ} \mathrm{C} \), 분당 증가율 \( 175^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \), \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 1{ }^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min}, 210^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 30^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \), final \( 245^{\circ} \mathrm{C} \) ), injector \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 그리고 carrier gas는 수소를 사용하였다. 지방산 분석은 표준용액의 retention 시간과 비교하여 정성하였으며 개개의 지방산들은 전체 peak area의 퍼센트로 산출 하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험결과는 mean \( \pm\) SEM (Stadndard Error of Mean)으로 나타내었고 분석된 실험 데이터는 Statistica program (Statsoft, Tulsa, OK)을 이용하여 one-way ANOVA를 실시하여 살펴보았다. 유의성이 있을 경우에 post-hoc test로 Tukey's HSD (Honest Significant Difference) test를 실시하여 \(5\%\) 수준에서 유의성을 검증하였다.</p>