본 연구에서는 목련과 및 그 밖의 동속 근연 식물의 꽃봉오리인 신이를 사용한 추출물을 실험에 사용하였다. 추출과정은 목련 꽃봉오리를 물로 3회 추출한 후 농축 및 분무건조하여 얻은 추출물을 사용하였다. 실험에서는 신이 추출물을 최고용량으로 설정한 후 다른 농도는 일정한 간격으로 설정하였다. 실험에는 6주령의 암 수컷 SD rat를 사용하였고, 동물실험은 AAALAC-1에 인증된 기관의 동물실험윤리위원회의 승인을 받아 표준작업순서에 따라 수행되었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>신이추출물 제조</h2> <p>신이는 목련과 및 그 밖의 동속 근연 식물의 꽃봉오리를 말하는 것으로 본 실험에 사용한 신이추출물은 (주)뉴온에서 제공받아 사용하였다. 실험에 사용한 신이는 중국 사천성에서 수확하여 건조한 목련(Magnolia kobus) 꽃봉오리를 사용하였으며 추출물은 Shaanxi Jiahe Phytochem Co., Ltd. (Shaanxi, China)에서 제조하였다. 추출물은 목련 꽃봉오리를 약 \(8 \)배 중량의 \(95 \) \( { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 물로 \(2 \)시간씩 \(3 \)회 추출한 후, \( 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 조건에서 농축 후, 분무건조를 거쳐 획득하여 사용하였다.</p> <h2>시험물질의 조제 및 투여</h2> <p>시험물질로 사용되는 신이 추출물(Magnoliae Flos extract, ME)은 중량 그대로를 순도 보정 없이 조제에 사용하였다. 정량의 시험물질을 전자저울을 이용하여 칭량하였고 부형제는 대한약품공업의 대한멸균증류수 주사용수를 사용하였다. 조제용기에 시험물질을 넣고 부형제를 소량씩 가하여 교반기를 이용하여 시험물질을 완전히 용해시킨 후 규정농도에 맞게 남은 부형제를 넣고 조제하였다. 조제물은 투여 당일에 매일 조제하여 투여에 사용하였다. 신이 추출물을 균일하게 용해시켜 일반적인 경구투여 반복독성 한계용량으로 사용되는 \( 1,000 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 보다 \(3 \)배 높은 \( 3,000 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \)을 최고용량으로 설정하고 또 다른 농도는 \(2 \)배수 간격을 두어 \( 1,500 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \)로 투여 농도를 설정하였다. 투여액량은 \( 10 \mathrm { ~mL } / \mathrm { kg } \)으로 하고 동물의 체중을 기준으로 개체 별 투여량을 산출하였다. 투여는 존데를 부착한 일회용 주사기를 이용하여 위내 강제 투여하였고, 신이 추출물은 투여 기간 동안 냉장보관 하였으며, 투여횟수 및 기간은 \(1 \)회/일, \(6 \)일/주, \(4 \)주간 진행하였다.</p> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 \(6 \)주령의 암, 수컷 SD rat를 (주)오리엔트바이오에서 구입하였다. 실험동물 입수 시, 외관검사를 실시하고 전자저울로 체중을 측정하였다. \(1 \)주일간 실험실에서 순화과정을 거치고 그 기간 중에 일반증상을 관찰하여 이상이 없는 실험동물을 선택하여 실험에 사용하였다. 모든 실험동물은 군당 \(5 \)마리씩 배치하였다.</p> <h2>사육환경</h2> <p>실험기간 중 사육실 환경조건은 실내온도 \( 22 \pm 3 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 상대습도 \( 50 \pm 20 \% \), 환기횟수 \( 15 \)~ \(20 \)회/시간, 명암주기 \(12 \)시간(오전 \(7 \)시~오후 \(7 \)시 및 조도 \(150 \)~ \(300 \) \( \mathrm { Lux } \), 소음 \( 60 \mathrm { ~dB } \) 이하를 유지하였으며 모든 실험동물은 Polysulfone 사육상자 \( (300 \mathrm { D } \times 500 \mathrm { ~W } \times \) \( 200 \mathrm { H } \mathrm { mm } \) )에 \(2 \)~ \(3 \)마리씩 분리하여 사육하였다. 동물실험은 국제실험동물관리평가인증협회(AAALAC- \(1 \))에 완전인증을 받은 (재)경기도경제과학진흥원 바이오센터에서 동물실험윤리위원회 (Institutional Animal Care and Use Committee, IACUC)의 승인(승인번호: \(2021 \)- \(05 \)- \(0001 \))하에 시험기관의 표준작업순서에 따라 수행하였다.</p>