유기용매에 대한 조혀소액의 안정성은 benzene, toluene, xylene, \( n \)-hexane등 각종 유기용매를 사용하여 확인하였으며, 금속이온에 대한 횽소활성도의 영향을 측정하기 위해 다양한 금속이온을 사용하여 확인하였다.
<h2>효소의 유기용매 안정성 조사</h2> <p>유기용매에 대한 조혀소액의 안정성은 benzene, toluene, xylene, \( n \)-hexane등 각종 유기용매를 사용하여 확인하였다. 조효소액에 \( 25 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 농도의 유기용매를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 150 \mathrm { rpm } \) 으로 2시간 진탕 시킨 후 조효소액을 채취하여 잔존 효소활성을 측정하였다. 양성대조구로 novozyme 435 를 사용하여 유기용매에 대한 효.소의 안정성을 비교하였다.</p> <h2>효소 활성에 대한 금속이온 영향 조사</h2> <p>금속이온에 대한 횽소활성도의 영향을 측정하기 위해 다양한 금속이온 \( \left ( \mathrm { CaCl } _ { 2 } , \mathrm { FeCl } _ { 3 } , \mathrm { CuCl } _ { 2 } , \mathrm { MgSO } _ { 4 } , \mathrm { BaCl } _ { 2 } , \mathrm { HgCl } _ { 2 } , \mathrm { NiCl } _ { 2 } \right . \), \( \mathrm { ZnSO } _ { 4 } , \mathrm { MnCl } _ { 2 } , \mathrm { KCl } , \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { Cl } \) 및 \( \left . \mathrm { NaCl } \right ) \) 을 사용하여 확인하였다. 조효소액과 \( 1 \mathrm { mM } \) 의 금속이온을 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 시간 전반응 시키고 기질을 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 반응 시킨 후 410 \( \mathrm { nm } \) 에서 잔즌 효소활성을 조사하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>유기용매 내성세균 및 효소 생산 균주의 분리</h2> <p>울산공단 일대의 폐수 및 토양시료에서 toluene에 내성을가진 균주 10 여 종을 분리하였으며, 선별된 균주를 대상으로 tributyrin이 함유된 NA 배지에서 lipase 효소 생산여부를 확인하였다. 고농도의 toluene이 포함된 환경에서 생장률이 뛰 어나며 lipase를 생산하는 균주를 선별하여 BCNU 5005로 명명하여 본 실험에 사용하였다.</p>