감물염색에 대한 실험 결과 항산화능, 항알러지 효과가 있다는 것을 알 수 있었다. 또한 이를 DNFB 처리를 통하여 그 효과를 추가적으로 검증하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <p>감물로 염색한 직물은 rayon과 cotton의 2종류이었는데, 이들은 알러지성 피부염 억제효과를 보기 위하여 패치실험을 하여 보았으나, 마우스에 적절하게 부착시키는 것이 용이하지 않았기 때문에, 이들 직물을 각각 \( 5 \mathrm{~cm} \times 5 \mathrm{~cm} \)로 절취하고 이를 증류수 \( 10 \mathrm{ml} \) 로 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 추출하고 이를 동결건조시켰다. 최종 powder \( 1 \mathrm{mg} \)을 \( 1 \mathrm{ml} \)에 녹이고 이를 마우스에 도포하는 방법을 선택하였다. 그 결과, 추출물에 대한 동물실험 결과는, 이들 추출물에 대한 항산화능을 측정한 결과와 유사한 양상을 보였다. DPPH assay에서는 rayon과 cotton이 powder \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서 각각 \( 84.0 \%\), \(68.9 \% \)의 모두 높은 활성을 보였으므로, 이 추출물 속에는 감물이나 감 속의 항산화물질과 유사한 물질이 그대로 남아 있거나 감물의 자연 발효 중에 이들 성분이 급격한 감소는 없었다고 판단되었다 (data not shown).</p> <h2>감물염색 직물로부터 추출한 시료로부터 알러지성 피부염 억제효과</h2> <p>항알러지 효과는 Fig. 1에서 보듯이 DNFB에 의한 아토피유발 동물모델로서 활성을 확인하였다. 2가지 직물의 추출물에서 아토피 억제효과가 대조구에 비교하여 우수한 것을 알수 있었다. Fig. 1의 A에서 보듯이 DNFB 처리를 한 마우스의 표피는 면역에 관련된 많은 세포가 발현되어 있음이 H&E staining으로 알 수 있었다. 이에 반하여 rayon을 물로 재추출하여 파우더로 만든 샘플의 경우에는 대조구와는 매우 다른 양상을 나타내었다. 또한 cotton의 경우는 rayon보다는 효과가 미약하게 나타남을 알 수 있었다. 이의 결과로 보아 여러 가지 직물에 대한 감물염색은 감의 성분이 직물에 염색되어 있어서 동물실험에서 이의 알러지성 피부염억제 효과가 나타난다고 판단되며, 이 감물염색은 중성세제로 수차례 세탁시에도 염색의 정도가 나빠지지 않으므로 감 내의 유용성분은 잔존하는 것으로 판단되었다(data not shown).</p> <h2>\( \mathrm{CD}_{4}^{+}\), MMP-2 및 MMP-9 발현 억제</h2> <p>Fig. 1의 결과를 더욱 확인하기 위하여, 알러지성 피부염발병에 관련이 있는 분자표적의 발현 차이에 대하여 면역조직 화학적 분석을 시도하였다. 그 결과, Fig. 2의 A-C에서 보는 바와 같이, \( \mathrm{CD}^{+} \)의 발현이 된 여러 가지 면역세포들이 DNFB 유도구에서 검출되었으나, rayon이나 cotton으로부터 추출한 샘플을 처리할 경우에는 이의 증상이 감소되는 경향을 나타냄 을 알 수 있었다. Matrix metalloproteinase (MMP)는 아연 의존적인 endopeptidase로서, 세포외 matrix를 분해하는 효소로 알려져 있다. 이 효소는 특히 세포 표면 수용체, 세포사멸 ligand 분비, chemokine이나 cytokine의 활성 및 불활성화에 관련이 있으며, 또한 세포증식, 이동, 분화, 혈관신생, 세포사멸과 자기방어 등과 같은 세포의 행동에도 중요한 역할을 한다. 이 효소는 현재 기능에 따라서 여러 가지로 불리워지는데 collagenase로 속해있는 것이 MMP-1, -8, -13이며, Gelatinase로는 MMP-2, -9이며, stromelysin으로는 MMP-3, -10,-11이며, 분비되지 않고 막에 연결되어 있는 MMP-14에서 17 및 -24,-25이며 기타 여러 가지가 산재해 있다. 이들 중 특히 MMP-2, -3 그리고 -9는 피부의 표피에서 면역세포가 외부로부터 host defense에 주요한 마커이므로 아토피의 발병 요인이 피부에 감작될 때 이의 발현이 증가하는 것으로 보고 되어 있다. Fig. 2의 D-F와 G-I에서 보듯이 mouse an-ti-MMP-2와 mouse anti-MMP-9 antibody에 의한 면역조직화학적 분석을 수행하여 본 바, DNFB 유도구에서는 공히 이들 효소의 발현이 매우 증가하는 것을 알 수 있으나, rayon이나 cotton에 함유된 감물의 여러 가지 유용 성분은 알러지성 피부염의 발병 원인을 완화시켜 주는 것으로 확인되었다. Kotani 등은 NC/Nga mice를 사용하여 감의 잎 추출물과 astragalin이란 flavonoid성 물질이 아토피성 피부염의 발병을 억제한다고 보고하였으며, 이를 더욱 발전시켜서 경구투여로 아토피 피부염에 효과가 있는 물질을 개발하려는 시도도하였다.</p> <p>결론적으로, 감물염색의 횟수나 함유된 유효성분의 농도, 나노 미세화에 의한 염색기법 등이 이들 기능성 직물의 제조에 걸림돌이 되므로, 향후 이에 대한 연구가 실용화에 중요하리라 판단된다. 또한 감물 내에 함유된 여러 가지 유용 성분 특히 폴리페놀 성분은 알러지성 피부염의 증상을 완화시켜주므로 이들의 유도체나 시너지 효과에 대한 연구가 필요하다. 본 연구는 이러한 효과나 활성을 아토피에 관련이 있는 효소 중 MMP로서 확인하고 이를 효과적으로 활용하는 의미에서 직접 감물염색을 한 직물로부터 이를 확인하고자 본 시도하였고 이의 결과를 얻었다.</p>