본 실험은 교잡된 품종 순무에서 적순무만을 실험에 사용해 순무 뿌리를 속부분과 껍질 부분으로 구분하고 세절하여 순무의 추출물 및 용매분획물 제조하였다. 각 층을 감압농축하여, \(\mathrm{EtOAc}(7 \mathrm{g})\), \(\mathrm{n-BuOH}(13 \mathrm{g}) \) 및 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)분획을 얻었고, 순무 속부분 \(\mathrm{EtOAc}\)분획에 대하여 silica gel column chromatography를 실시하여 18개의 분획물를 얻고, 순무 속부분은 분획을 TLC로 확인하여 유사한 것끼리 모아 16개의 분획으로 나누었다. 또한 순무 껍질로부터 얻은 \(\mathrm{n-BuOH}\)분획 \((13 \mathrm{g})\)으로부터 silica gel c.c.를 실시하여 분획하였고, 이 분획을 TLC로 확인하여 유사한 것끼리 모아 11개의 분획으로 나눌 수 있었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 사용한 순무 (Brassica rapa L.)는 일본재래계와 유럽 품종계가 교잡된 품종으로, 원추모양인 뿌리의 겉이 자색을 나타내는 적순무만을 실험에 사용하였다. 2007년 5월 강화군 농업기술센터로부터 제공받았고, 강화군 강화특화작목연구소 정해곤 박사가 동정하였으며, 표본시료 (KHU-070429)는 경희대학교 생명공학원 천연물화학실에 보관되어 있다.</p><h2>시약 및 기기</h2><p>Column chromatography용 silica gel은 Kiesel gel 60 (Merck, Darm-stadt, Germany)을, octadecyl silica (ODS) gel은 LiChroprep RP-18 (Merck, Darmstadt, Germany)을 사용하였다. Thin layer chromatography (TLC)는 Kieselgel 60 F254와 RP-18 F254S (Merck, Darmstadt, Germany)를 사용하였고, 실험에 이용한 모든 시약은 특급시약을 사용하였다. NMR 스펙트럼은 Varian Inova AS 400 (Varian, Cali-fornia, LA)으로 측정하였고, IR spectrum은 Perkin model 599B (Perkin-Elmer, Massachusetts, NY)로 측정하였다. 녹는점은 Fisher-John's Melting Point Apparatus (Fisher Scientific, Miami, FL)로 측정하였으며, 비선광도는 Polarimeter Jasco-1000 (Jasco, Tokyo, Japan)로, EI-MS와 FAB-MS는 JMS-700 (JEOL, Tokyo, Japan)으로 측정하였다.</p><h2>순무의 추출물 및 용매분획물 제조</h2><p>순무 뿌리 (생체 중 \( 61 \mathrm{kg} \))를 속부분 \( (48 \mathrm{kg}) \)과 껍질 부분 \( (13 \mathrm{kg}) \)으로 구분하고 세절하였다. 속부분을 \( \mathrm{MeOH} 80 \% \)수용액 \((18 l \times 5 )\)으로 두 차례 걸쳐 추출한 후 여과지로 여과를 하였다. 얻어진 여액을 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압농축하여 \(\mathrm{MeOH}\)추출물을 얻었다. 얻어진 \(\mathrm{MeOH}\)추출물을 \(\mathrm{EtOAc}(3 l \times 2) / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} (3 l) \)로 분배 추출하였고, 다시 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)층을 \(\mathrm{n-BuOH}( 3 l \times 2) / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(3.2 l) \)로 분배 추출 하였다. 각 층을 감압농축하여 \(\mathrm{EtOAc}(15 \mathrm{g})\), \(\mathrm{n-BuOH}(46 \mathrm{g}) \) 및 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)분획을 얻었다. 또한 껍질부분 \( (13 \mathrm{kg}) \)을 \( 80 \% \mathrm{MeOH} \)수용액 \((18 l \times 2) \)으로 두 차례 걸쳐 추출한 후, 얻어진 여액을 감압농축하여 \(\mathrm{MeOH}\)추출물을 얻었다. 얻어진 \(\mathrm{MeOH}\)추출물을 \(\mathrm{EtOAc}(1.5 l \times 2)/\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(1.5 l)\)로 분배 추출하였고, 다시 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)층을 \(\mathrm{n-BuOH}(1.5l \times 2) / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(1.5 l) \)로 분배 추출 하였다. 각 층을 감압농축하여, \(\mathrm{EtOAc}(7 \mathrm{g})\), \(\mathrm{n-BuOH}(13 \mathrm{g}) \) 및 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)분획을 얻었다.</p><h2>순무 속부분 \(\mathrm{EtOAc}\)분획으로부터 이차대사산물의 분리</h2><p>\(\mathrm{EtOAc}\)분획 \( (15 \mathrm{g}) \)에 대하여 silica gel column chromatography (c.c., \( \varphi 5 \times 22 \mathrm{cm}\), n-hexane-\(\mathrm{EtOAc}=10: 1 \rightarrow 5: 1 \rightarrow 3: 1 \rightarrow 1: 1 \rightarrow \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=10: 1 \rightarrow 7: 1 \rightarrow 5: 1 \rightarrow 3: 1 \rightarrow 2: 1 \rightarrow 1: 1)\)를 실시하여 18개의 분획물 (BRE-1\(\sim\) BRE-18)을 얻었다. 이 중에서 BRE-11 \( (1.7 \mathrm{g}) \)분획에 대하여 silica gel c.c. \( (\varphi 4.5 \times 13 \mathrm{cm} \), n-hexane-\(\mathrm{EtOAc}=7: 1 \))를 실시하여, 16개의 분획물 (BRE11-1 BRE11-16)을 얻었다. 그 중 BRE11-5\((137\mathrm{mg})\)분획을 ODS c.c. ( \( \varphi 3.5 \times 9 \mathrm{cm}\), \(\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=3: 1) \)로 정제하여 BRE11-5-1[(화합물 1, \( 12\mathrm{mg} \), TLC(RP-18 \(\mathrm{F}_{254s})\) \(\mathrm{Rf}=0.75\), \(\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=5: 1]\)을 분리 하였다</p><h2>순무 속부분 \(\mathrm{n-BuOH}\)분획으로부터 이차대사산물의 분리</h2><p>\(\mathrm{n-BuOH}\)분획 \( (46 \mathrm{g})\)으로부터 silica gel c.c. \( (\varphi 10 \times 11 \mathrm{cm}\), \(\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=7: 1 \rightarrow 5: 1 \rightarrow 3: 1 \rightarrow 1: 1) \)를 실시하여 분획하였고, 이 분획을 TLC로 확인하여 유사한 것끼리 모아 16개의 분획 (BRB-1 \(\sim\) BRB-16)으로 나누었다. 그 중에서 BRB-3 분획 ( \( 172\mathrm{mg}) \)에 대하여 ODS c.c. \( (\varphi 3.5 \times 7 \mathrm{cm}\), \( \mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=2: 8) \)를 실시하여 6개의 분획 (BRB-3-1 \(\sim \)BRB-3-6)으로 나누었고, 이중에서 BRB-3-2 분획 \( (72 \mathrm{mg}) \)을 silica gel c.c. \( (\varphi 3 \times 21 \mathrm{cm}\), n-hexane-\(\mathrm{EtOAc}=7:1)\)로 정제하여, BRB-3-2-2[(화합물 2, \( 10 \mathrm{mg} \), TLC(Kieselgel 60 \( \mathrm{F}_{254})\) \(\mathrm{Rf}=0.5\), \(\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=10: 1] \)을 얻었다.</p><h2>순무 껍질부분 \(\mathrm{n-BuOH}\)분획으로부터 이차대사산물의 분리</h2><p>순무 껍질로부터 얻은 \(\mathrm{n-BuOH}\)분획 \((13 \mathrm{g})\)으로부터 silica gel c.c. \( (\varphi 5 \times 15 \mathrm{cm}\), \(\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=7: 1 \rightarrow 5: 1 \rightarrow 3: 1 \rightarrow 1 : 1) \)를 실시하여 분획하였고, 이 분획을 TLC로 확인하여 유사한 것끼리 모아 11개의 분획 (BRSB-1 \(\sim\)11)으로 나누었다. 그 중에서 BRSB-3 분획 ( \( 400 \mathrm{mg}) \)을 ODS c.c. (\(\varphi 3 \times 7 \mathrm{cm}\), \(\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=1 : 1) \)를 실시하여 BRSB-3-6[(화합물 3, \( 21 \mathrm{mg} \), TLC(RP-18 \( \mathrm{F}_{254})\) \(\mathrm{Rf}=0.2\), \(\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=7: 1)] \)을 분리하였다. 또한 BRSB-4 분획 \((190 \mathrm{mg}) \)을 ODS c.c. \( (\varphi 3 \times 5 \mathrm{cm}\), \(\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=1: 1) \)를 실시하여 BRSB-4-3[(화합물 4, \( 41 \mathrm{mg} \), TLC(Kieselgel 60 \(\mathrm{F}_{254})\) \(R_{f}=0.35 \), \( \left.\left.\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}=6: 1\right)\right] \)을 분리하였다.</p>