Jurkat cells에 대해 HKSMM50 및 AHCC 시료를 처리하고 MTT assay로 cytotoxicity를 측정한 결과 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 cytotoxicity 검출되지 않은 점을 통해 Jurkat cells 실험에 HKSMM50과 AHCC를 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 사용할 수 있음을 알았다. 또한 이를 통해 HKSMM50 시료 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 까지는 Jurkat cells에 독성이 없음을 알았다. 다음으로 Jurkat cells의 proliferation은 BrdU assay로 측정한 결과 \(3\)시간 처리에서, HKSMM50시료 처리에 의한 proliferation은 유의성 있게 증가함을 알 수 있었다.
<h1>결 과</h1><h2>HKSMM50의 Jurkat cells에 대한 cytotoxiciy</h2></p>HKSMM50 시료의 Jurkat cell에 대한 cytotoxicity는MTT assay로 측정하였다. MTT assay는 살아 있는 세포의 대사 능력을 측정하는 방법이다. 세포의 대사 활동에 의해 tetrazolium salt로부터 formazan dye를 형성하는능력을 측정하는 원리로, salt 자체가 cytotoxicity를 가지고 있어 장기간 처리시 세포에 영향을 받을 수 있는 단점이있지만, 시료의 cytotoxicity 측정에 많이 활용된다. 따라서 본 연구에서도 HKSMM50의 Jurkat cells에 대한 cytotoxicity를 MTT assay로 측정하였다</p><p>Jurkat cells에 HKSMM50 및 AHCC 시료 \( (0 \sim 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)를 처리하고 24시간 배양한 후 MTT assay로 cytotoxicity를 측정하였다. HKSMM50 시료의 처리 최고 농도인 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리에서도 cytotoxicity는 없었다. Positive control인 AHCC 처리 최고 농도인 \( 100 \mu \mathrm{g} / \) \( \mathrm{ml} \)에서도 cytotoxicity는 나타나지 않았다. 따라서, 이들 결과는 Jurkat cells 실험에 HKSMM50과 AHCC를 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 사용할 수 있음을 의미한다.</p><p>HKSMM50 시료에 함유되어 있는 성분 중 가장 함량이 높은 \( \beta \)-glucan은 T cell에 대한 세포독성이 아주 낮다고 보고되었다. 따라서, \( \beta \)-Glucan, total flavonoids와 total isoflavonoids를 포함한 HKSMM50 시료 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 까지는 Jurkat cells에 독성이 없음을 의미한다</p><h2>Jurkat cell proliferation에 대한 HKSMM50의 영향</h2><p>Jurkat cells의 proliferation은 BrdU assay로 측정하였다. BrdU assay는 새로이 합성된 DNA 양을 측정하는 방 법으로 새로이 합성된 DNA-Br을 BrdU specific antibody를 이용하여 colorimetric으로 측정하는 방법이다. HKSMM50 시료의 Jurkat cell proliferation을 측정하기 위하여 ConA로 활성화되지 않은 Jurkat cells과 활성화된 Jurkat cells에 HKSMM50 시료 \( (0,25,50 \) 및 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)를 처리하고 다시 3시간 및 6시간 배양한 후 proliferation을 BrdU assay kit로 측정하였다. Positive control인 AHCC의 농도는 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)를 사용하였다.</p><p>Fig. 2는 ConA를 처리하지 않은 Jurkat cell proliferation을 나타내고 있다. 3시간 처리에서, HKSMM50시료 처리에 의한 proliferation은 Control 처리에 비해 유의성 있게 증가되었다. \( (p<0.05)\) 6시간 처리에서의 cell proliferation은 Control보다 증가 하였지만 \( (p<0.05) \), 그 효과는 3시간 처리보다 낮았다. AHCC와 HKSMM50시료의 동일한 농도에서의 cell proliferation은 차이가 없었으나, 6시간 처리에서 AHCC가 HKSMM50보다 높았다 \( (p<0.05) \). 이와 같은 결과는 \( \mathrm{HKSMM} \) \(50\) 시료 처리 \( (25 \sim 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} ; \) 3시간 및 6시간)가 Jurkat cells 의 proliferation을 유도함을 의미한다.</p><p>Fig. 3은 ConA로 활성화 시킨 Jurkat cells의 proliferation을 나타내고 있다. 3시간 및 6시간처리에서, ConA 처리에 의한 cell proliferation은 Control보다 높았다 \( (p<0.01) \). ConA 처리에 비해 HKSMM50 시료 처리에 의한 cell proliferation은 처리 농도 간에는 큰 차이가 없었으나 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리에서만 유의성이 있었다 \( (p<0.01\). AHCC \(100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)에 의한 cell proliferation은 동일한 농도의 HKSMM50 시료의 proliferation보다 낮았다 \( (p<0.05) \). 이 결과는 HKSMM50 시료 처리 \( 100\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \); 3시간 및 6시간)는 ConA로 활성화한 Jurkat cell의 proliferation을 증가시켰음을 의미한다. 