미역 에탄올 추출물이 지방세포의 mRNA 발현량에 미치는 영향을 분석하기 위해, 분리된 RNA를 Real-Time PCR로 증폭한 뒤 결과를 분석하였다. 미역 에탄올 추출물 처리에 따른 3T3-L1 세포 및 성숙지방 세포에서의 생존율을 알기 위해 MTT assay를 실시했으며, ( 60 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도부터 생존율이 급격히 감소함을 확인하였다.
<h2>Real-Time PCR에 의한 mRNA의 분석</h2> <p>미역 에탄올 추출물을 첨가하여 분화시킨 지방세포의 Total RNA는 Ribospin \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) kit (GeneAll, Seoul, Korea)를 사용하여 분리하였다. 분리된 RNA를 각각의 primer, DEPC water와 Takara (Dalian, Japan)의 One step SYBR PrimeScript \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) RT-PCR Kit를 넣고 Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad)을 이용하여 증폭하였다. RT-PCR에 사용된 Primer의 서열은 Table 1 에 나타내었으며, \( \beta \)-actin 유전자는 internal control로 사용하였다. 첫 번째 단계에서 반응 조건은 \( 42 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 5 분, \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 초간 반응 시키고, 두 번째 단계의 반응 조건은 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 5초, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 초 간격으로 cycle을 35 번 반복하여 수행하였다. 결과 분석법으로는 \( 2 ^ { -( \triangle \Delta \mathrm { CT } ) } \operatorname { method } \) 를 이용하였으며, mRNA의 상대적 발현량은 control에 대한 sample의 상대적 유전자 발현 값으로 나타내었다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>미역 에탄올 추출물이 성숙한 지방세포의 생존율에 미치는 영향</h2> <p>미역 에탄올 추출물 처리에 따른 3T3-L1 세포 및 성숙지방 세포에서의 생존율을 알기 위하여 MTT assay를 실시하였다.Fig. 1에 나타난 바와 같이 지방전구 세포인 3T3-L1세포와 성숙지방세포에서 모두 \( 50 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 의 농도 까지는 세포의 생존율에 영향을 미치지 않았지만 \( 60 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도부터는 생존율이 급격히 감소하였으며, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서는 약 \( 40 \% \) 의 생존율을 나타내었다. 그 결과, 지방전구 세포인 3T3-L1 세포와 지방세포에서 생존율에 영향을 미치지 않는 \( 50 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 의 농도까지를 실험 조건으로 설정하였다.</p>