질소원 종류에 따른 protease 활성과 건조균체량을 비교하여 B. subtilis FBL-1의 protease 생산과 균체 성장에 적합한 질소원이 무엇인지 추정하였다. 그 결과 yeast extract가 가장 우수한 활성을 보였고, beef extract, tryptone에서도 높은 활성을 나타냈다. beef extraion을 질소원으로 사용하면 건조균체량은 높으나 protease 활성은 상대적으로 낮다. yeast extraction를 질소원으로 사용하면 건조균체량은 beef extraction을 사용하였을 때 보다는 값이 낮지만 protease 활성은 beef extraction을 사용한 경우보다 2배 이상 높기 때문에 B. subtilis FBL-1을 이용한 protease 생산에 가장 적합한 질소원은 yeast extraction이다.
<h2>질소원 종류에 따른 균체 성장 및 protease 활성 비교</h2> <p>B. subtilis FBL-1의 protease 생산과 균체 성장에 적합한 질소원을 알아보기 위하여 질소원 종류에 따른 protease 활성과 건조균체량을 비교하였다. Fig. 4에서 보는 바와 같이 질소원이 포함되지 않은 배지에서는 전혀 protease 활성을 나타내지 않았기 때문에 질소원 또한 탄소원과 함께 protease 생산에 중요한 인자임을 알 수 있다. Protease 생산에 가장 우수한 영향을 미치는 질소원으로는 yeast extract (451.640 \( \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) \) 로 확인되었으며, 그 다음으로는 beef extract (194.014 \( \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) \) 와 tryptone (183.414 U/ml)을 사용한 경우에서 비교적 높은 활성을 보였다. 대부분의 유기 질소원의 경우에는 protease 활성이 높게 나타났으나, malt extract 및 peptone의 경우는 다른 유기 질소원에 비하여 상대적으로 낮은 protease 활성과 균체 성장을 보였다. 또한, ammonium sulfate, ammonium chloride, urea와 같은 무기 질소원을 사용한 경우 protease 활성이 매우 낮게 나타났다. 균체 성장의 경우 beef extract를 질소원으로 사용한 경우 건조균체량이 \( 1.668 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 로 가장 높게 나타났으나 protease 활성은 \( 194.014 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) 로서 상대적으로 낮은 결과가 관찰되었다. 반면, yeast extract를 질소원으로 사용한 경우 건조균체량은 \( 1.471 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \) 로 beef extract를 사용한 경우보다는 다소 낮은 값을 보였으나 protease 활성은 yeast extract를 사용한 경우 에 비하여 2배 이상 높은 결과를 보였다. 따라서 B. subtilis FBL-1을 이용한 protease 생산에는 yeast extract가 가장 적합하다는 것을 알 수 있었다.</p> <h1>요 약</h1> <p>경상북도 경산시에 위치한 영남대학교 내의 토양으로부터 protease를 생산하는 신규 미생물 FBL-1을 분리하였다. 본 균주는 Biolog test 및 API \( 50 \mathrm { CHB } \) test 결과, Bacillus 속 미생물 중 하나인 것으로 확인되었다. \( 16 \mathrm { ~S } \mathrm { rDNA } \) 염기서열 분석결과로부터 FBL-1 균주는 B. subtilis subsp. subtilis NCIB 3610 (99.5 \%), B. subtilis subsp. inaquosorum KCTC 13429 (99.4 \%), B. subtilis subsp. spizizenii NRRL B-23049 (99.3 \%), B. methylotrophicus KACC 13105 (99.3 \%) 등과 높은 상동성을 보였다. 이러한 생리적, 형태학적, 계통학적 특성에 따라 균주 FBL-1은 B. subtilis에 속하는 균으로 최종 동정하여 B. subtilis FBL-1으로 명명하였다. B.subtilis FBL-1을 이용한 protease 생산시 탄소원으로는 fructose, 질소원으로는 yeast extract가 균체 성장 및 protease 활성을 위하여 가장 적합한 것으로 나타났다. \( B \).subtilis FBL-1 균주는 protease를 생산하는데 활용할 수 있으며, 향후 배지 및 발효조건 최적화와 효소의 특성 규명 등 의 연구를 통하여 식품, 세제 등의 다양한 산업에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.</p>