사이모신 베타4는 혈관형성을 촉진시키고 암의 성장과 전이에 중요한 역할을 하는 단백질이며, 사이모신 베타 4의 기능과 연관된 \( \mathrm { VEGF } \) 및 \( \mathrm { HIF } \)-1a도 혈관생성 및 암의 성장과 전이와 관련이 매우 높다. 본 연구에서는 tissue micro-array를 활용해 면역조직화학검사를 진행하여, 다양한 암 조직으로부터 사이모신 베타 4, VEGF 및 \( \mathrm { HIF } -1 a \) 의 발현 양상을 연구하고 단백질의 발현부위와 발현양상의 관련성을 조사했다.
<p>사이모신 베타4는 혈관형성을 촉진하며 암의 성장 및 전이에 중요한 역할을 담당하는 단백질이다. 이와 더불어 사이모신 베타 4의 기능과 관련된 \( \mathrm { VEGF } \) 및 \( \mathrm { HIF } \)-1a는 혈관신생에 중요한 역할을 하는 단백질이며 암의 전이 및 성장과 밀접한 관련성을 지닌다. 따라서 본 연구에서는 tissue micro-array를 사용하여 여러 가지 암 조직에서 사이모신 베타 4, VEGF 및 \( \mathrm { HIF } -1 a \) 의 발현 양상을 조사하고 이들 각각의 단백질의 발현부위 및 발현양상이 서로 연관되었는지를 조사하였다.</p> <h2>재료 및 방법</h2> <h3>Tissue microarray</h3> <p>Tissue microarray는 Super Bio Chip (Super Biochips Laboratories, Seoul, Korea)사로부터 구입하여 사용하였다. 나이와 성별을 제외한 조직을 제공한 환자의 정보는 가지고 있지 않다.</p> <h3>면역조직화학검사(Immunohistochemistry)</h3> <p>면역조직화학검사를 위해 tissue microarray 슬라이드를 탈 파라핀화와 수화를 거친 다음 citrate buffer \( (0.01 \mathrm { M } , \mathrm { pH } \) 6.0)상에서 전자레인지로 최고출력으로(700 W 이상) 5 분간 두 번 antigen retrieval을 실시하였다. PBS하에서 슬라이드를 충분히 식힌 후 3 \% hydrogen peroxide 용액에서 5분간 반응하여 endog-enous peroxidase를 제거하였다. 이후 PBS로 5 분간 3 번 씻어 준 다음 \( \mathrm { PBS } \) 에 희석된 rabbit polyclonal thymosin \( \beta 4 \left (1: 2,000 \right . \) dilu \( ^ { - } \) tion; ALPCO Diagnostics, Windham, \( \mathrm { NH } \), USA) 혹은 rabbit polyclonal VEGF (1:2,000 dilution, Abcam Inc., Cambridge, MA, USA), mouse monoclonal HIF-1a (1:100 dilution; Novus Biologicals, Littleton, CO, USA) 항체로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 overnight 배양하였다. 다음날 PBS로 5 분씩 3 번 씻어 준 후 2 차 항체를 처리하여 1 시간 동안 반응한다. \( \mathrm { PBS } \) 로 5분 동안 3 번 씻어 준 후 Dako's EnVision Kit (DAKO, Carpinteria, CA, USA)를 사용하여 thy- \( \operatorname { mosin } \beta 4 \) 와 \( \mathrm { HIF } -1 a \) 의 경우 \( \mathrm { DAB } \) 발색반응을 VEGF의 경우 per-manent red의 발색반응을 유도하였다. 슬라이드는 이후 대조 염색을 Meyer's hematoxylin (DAKO, Carpinteria, CA, USA)로 10 초간 염색 후 탈수반응을 거친 다음 Permount (Fishier Scientific, Pittsburgh, PA, USA)로 고정하였다.</p>