해양심층수를 사용하여 역삼투압 시스템으로 탈염과 농축을 진행하였고, 탈염된 심층수에 미네랄을 첨가하여 희석하여 실험을 진행하였다. 관류법으로 처리한 흰쥐의 간 조직으로부터 Phol과 Fouts의 방법을 참고하여 CYP 1A2 활성을 진행하였고, 양성 대조군은 flavone을 사용하여 저해도 결과를 \(\%\)로 나타내었고 QR 활성은 MTT의 분당 환원된 흡광도와 crystal violet의 흡광도에 의해 산출하였고, QR의 활성 유도는 대조군의 QR 활성에 대한 시료에 의한 활성의 비로 계산하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시약</h2> <p>Minimum essential medium (MEM), S-MEM, antibiotics, trypan blue dye, \(\beta \)-naphthoflavone \( (\beta\)-NF), methoxyresor-ufin, 2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one (flavone), 3-4,5-dime-thylthiazol-2-yl-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT), glucose-6-phosphate dehydrogenase, glucose-6-phosphate, chloro-2,4-dinitrobenzenc (CDNB), Na-phosphate, Na-EDTA, tert-butylhydroquinone (tBHQ), difluoromethylornithine (DFMO), EDTA, dithiothreitol, pyridoxal phosphate, L-orni-thine, glutathione (GSH) chloro-2,4-dinitrobenzene, bovine serum albumin (BSA), Tris- HCl, bicinchoninic acid protein kit는 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, L-\( \left[1-{ }^{14} \mathrm{C}\right] \) ornithine은 PerkinElmer (Boston, MA, USA)에서 구입하였고, fetal bovine serum (FBS), dialyzed FBS는 웰진사 (Daegu, Korea)제품을 사용하였다.</p> <h2>시료</h2> <p>본 실험에 사용된 해양심층수는 동해의 해저 \(1,100\mathrm{~m}\)에서 취수하여 역삼투압 시스템으로 탈염과 농축을 하였으며, 탈염된 심층수(경도 0)와 그 심층수에 미네랄을 첨가하여 경도 4,000으로 조절된 심층수를 (주)워터비스(Seoul, Korea)로 부터 제공받아 희석하여 실험에 사용하였다. 탈염된 해양심층수와 경도 4,000의 해양심층수에 대한 미네랄의 함량은 Table 1에 나타내었다.</p> <h2>세포배양</h2> <p>계내 보존중인 Hepa 1c1c7 세포(mousc hepatoma)는 \( 10 \% \) FBS가 포함된 MEM 배지로, mouse epidermal cells, line 308은 불필수아미노산\((1\times)\), \( 5 \% \) dialyzed fetal bovine serum과 \( 0.05 \mathrm{~mM} \mathrm{~Ca}^{2+} \)이 포함된 S-MEM 배지로 하여 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기 \( \left(5 \% \mathrm{~CO}_{2}, 37^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에서 배양하였고, 배양액은 2~3일 간격으로 교환해 주었다. 세포는 액체질소에 보존해 두었다가 같은 passage 번호를 가진 세포를 녹여서 사용하였으며, 세포의 생존은 trypan blue dye exclusion 방법으로 확인하였다.</p> <h2>CYP 1A2 활성</h2> <p>관류법으로 \( \beta\)-NF (\(80 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) body weight, 매일 1회, 3일)을 처리한 흰쥐의 간 조직으로부터 마이크로좀의 분리는 Phol과 Fouts의 방법을 참고하여 실시하였다. CYP 1A2의 활성은 methoxyresorufin O-demethylase (MROD) 활성으로 측정하였으며 methoxyresorufin으로부터 resorufin의 형성 측정을 위하여 기질로 methoxyresorufin을 사용하였다. 양성 대조군은 flavone을 사용하였으며 결과는 대조군에 대한 각 시료들의 저해도 정도를 \(\%\)로 나타내었다.</p> <h2>QR 활성</h2> <p>Hepa 1c1c7 세포를 96-well plate에 \( 0.5 \times 10^{4}\mathrm{~cells/well}\)로 접종시키고 24시간 배양 후, 해양심층수를 경도별로 포함한 새 배양액 \( 200 ~\mu \mathrm{l} \)을 각 well에 처리하였다. 시료를 48시간 처리한 Hepa 1c1c7 세포에서의 QR 활성 유도 효과는 Prochaska와 Santamaria의 방법을 수정하여 사용하였다. QR 활성은 분당 환원된 MTT의 흡광도와 crystal violet의 흡광도에 의해 산출하였고, QR의 활성 유도는 대조군의 QR 활성에 대한 시료에 의한 활성의 비로 계산하였다.</p>