HAase 저해효과는 Dorfman와 Ou의 방법[23]에 준하여, sodium-hyaluronic acid (HA)로부터 형성된 N-acetyl-glucosamine을 glucoxazoline 유도체로 변형시킨 후 \( \rho \)-dimethylaminobenzal-dehyde로 발색시켜 흡광도 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였음을 알 수 있다.
<h3>Xanthine oxidase (XOase) 저해효과</h3> <p>XOase 저해효과는 Stirpe와 Corte의 방법[21]에 준하여, \( 0.1 \mathrm { M } \) potassium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.5)에 녹인 기질액 \( 2 \mathrm { mM } \) xanthine \( 3 \mathrm { ~mL } \) 에 효소 \( (0.05 \mathrm { U } / 0.1 \mathrm { ~mL } ) 0.1 \mathrm { ~mL } \) 와 시로 \( 0.3 \mathrm { ~mL } \) 를 넣고 대조구에는 시료 대신 증류수를 \( 0.3 \mathrm { ~mL } \) 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 반응시키고 종료시약으로 \( 20 \% \) TCA \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 가한 후 반응액을 원심분리하여 단백질을 제거하고, 생성뎐 uric acid를 흡광도 \( 292 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다.</p> <h3>\( \alpha \)-Glucosidase 저해효과</h3> <p>\( \alpha \)-Glucosidase 저해효과는 Tibbot과 Skadsen의 방법[22]에 준하여, \( 50 \mathrm { mM } \) sodium succinate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 6.8)에 \( \rho \)-nitrophenol- \( \alpha \)-D-glucopyranoside (PNPG)를 용해시켜 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 의 농도로 기질을 만들고, 기질 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 와 효소액 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \) 를 혼합하고 대조구에는 증류수 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \), 반응구에는 \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도의 시료 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \)를 넣어 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응시킨 후 \( 1 \mathrm { ~N } \\mathrm { NaOH } \ 0.1 \mathrm { ~mL } \) 를 첨가하여 발색시켜 \( 400 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h3>Hyaluronidase (HAase) 저해효과</h3> <p>HAase 저해효과는 Dorfman와 Ou의 방법[23]에 준하여, sodium-hyaluronic acid (HA)로부터 형성된 N-acetyl-glucosamine을 glucoxazoline 유도체로 변형시킨 후 \( \rho \)-dimethylaminobenzal-dehyde로 발색시켜 흡광도 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였다.</p>