실험을 위한 식물 재료로는 8매엽까지 재배한 순비초를 이용하였으며, 그 추출물의 capsidiol spot을 분리하여 동정하였다. phytoalexin 유도를 위해 식물체는 UV-B로 조사시켰으며, 역병균의 접종은 주당 \( 5 \mathrm{ml} \)씩 토양에 관주하고, Metalaxyl과 역병균 동시 접종의 경우에는 역병균 접종 전후로 metalaxyl을 각각 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \)과 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \)의 농도로 토양에 관주하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료</h2><p>공시재료는 경북 영양 고추시험장에서 분양 받은 역병감수성품총인 순비초를 온실내에 파종하여 8매엽 시기까지 재배하여 이를 phytoalexin 분석용 시료로 사용하였다.</p><h2>방법</h2><h3>현탁배양세포로부터 capsidiol의 생성 검정</h3><p>고추품종 숭비초 callus를 \( 1 \mathrm{ppm} \) 의 2,4-D, \( 0.001 \mathrm{ppm} \)의 Benzyl Adenine (BA)를 첨가한 MS 배지에서 현탁 배양하여, \( 100 \mu \mathrm{M} \)의 jasmonic acid를 첨가하여 18시간 진탕시킨 후 chloroform으로 추출하였다. 추출물을 TLC상에서 전개하여 capsidiol의 spot을 확인한 후, spot를 분리 및 추출하여 \( 4 \mathrm{mM} \) methyl myristate를 내부표준물질로 하여 GC/MS로 동정하였다.</p><h3>Phytoalexin 유도롤 위한 환경인자 분석</h3><p>가. UV-B 조사</p><p>식물체를 UV-B \( (260 \mathrm{~nm}) \)로 10분, 20분, 40분, 60분 조사 시킨 다음, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 광 상태에서 3, 24, 48시간 incubation 후 추출하여 분석 시료로 사용하였다.</p><p>나. 역병균 (P. capsici) 접종</p><p>역병균의 접종은 Kim 등의 방법에 따라 수행하였고, Potato Dextrose Agar (PDA) 배지에서 5일 배양 후, V8(Campbell soup company U.S.A) 쥬스 배지에 이식하여 \( 26^{\circ} \mathrm{C} \), 7일간 암배양된 유주자를 채취하여 8매엽 시기에 주당 \( 5 \mathrm{ml} \) 씩 토양에 관주하였다. 접종 후 경과일수에 따라 3일, 6일, 10일째의 잎, 줄기, 뿌리를 각각 채취하여 분석시료로 사용하였다.</p><p>다. Metalaxyl과 역병균 (P. capsici) 접종</p><p>8매엽 시기의 식물체에 metalaxyl[methyl N-(2-methy-oxyacetyl)-N-(2,6-xylyl)-D,L-alaninate]을 역병균 접종 전 · 후에 각각 \( 1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \)과 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \)의 농도로 토양에 관주 한 후 3일, 6일, 10일째의 경과일수에 따라 잎, 줄기, 뿌리를 각각 채취하여 분석시료로 사용하였다.</p><p>식물체내의 Capsidiol과 유도물질의 분리 및 동정 처리별 식물체내의 capsidiol 동정 및 정량을 위하여 식물체 부위별로 약 \( 0.5 \mathrm{~cm} \)씩 잘라서 \( 40 \% \) ethanol내에서 \(110\mathrm{rpm}\)으로 7시간 진탕 추출 후, ethyl acetate로 3회 분획하였다. ethyl acetate 분획물은 sodium sulfate로 탈수하여 감압 농축한 후, GC/MS로 동정 및 정량하였다. GC/MS(Hewlett Packard 6890/5973)의 분석조건은 Column은 Ultra-2(Crosslinked \(5\%\) PH ME siloxane), Oven 조건은 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \)에서 시작하여 분당 \( 2.5^{\circ} \mathrm{C} \)씩 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \)까지 승온 하였다. 운반체는 He 가스를 사용하였으며, 유속은 \( 0.4 \ \mathrm{m} \ell / \mathrm{min} \).로 분석하였다.</p>