본 실험은 발효 당귀 분말의 미네랄 함량, Fe/Cu 환원력, Tyrosinase 활성을 one-way ANOVA 검정으로 측정하였다.
<h2>미네랄 함량 측정</h2> <p>발효 당귀 분말의 미네랄 함량은 \( \mathrm{AOAC} \) 분석 방법에 준하여 측정하였다. 각 분말 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 정확히 취해 각 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \) 회화로에서 3 시간 회화 시킨 후 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \) 에 용해시켜 완전히 산 분해시켜 수욕상에서 산을 완전히 제거하고, 이 건고물에 \( 3 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \) 을 가하여 여과한 후 원소 종류에 따라 각각 일정비율로 희석하여 원자흡광 분광광도계(AAnalyst 300, Perkin Elmer, Norwalk CT, USA)를 이용하여 측정하였다.</p> <h2>\( \mathrm{Fe} / \mathrm{Cu} \) 환원력 측정</h2> <p>\( \mathrm{Fe} \)-환원릭 측정은 Zhu 등[41]의 방법에 따라 측정하였다. 발효. 당귀분말의 \( 0.05 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 시료 용액 \( 0.75 \mathrm{ml} \) 을 취하고, \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 6.6) \( 1.25 \mathrm{ml} \) 및 \( 1 \% \) (w/v) potassium ferricyanide \( \left[\mathrm{K}_{3} \mathrm{Fe}(\mathrm{CN})_{6}\right] 1.25 \mathrm{ml} \) 을 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20 분간 진탕반응 시켰다. 이 반응액에 \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 를 \( 1.25 \mathrm{ml} \) 가하여 acidified 시키고, \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 에서 20 분간 원심분리 시켰다. 상층액 \( 2.5 \mathrm{ml} \)를 취하고 distilled water \( 2.5 \mathrm{ml} \) 및 \( 0.5 \% \) ferric chloride \( \left(\mathrm{FeCl}_{3}\right) 0.5 \mathrm{ml} \) 를 혼합한 후 실온에서 10 분간 반응 시켜 Spectrophotometer (HITACHI U-2900, Kyoto, Japan)의 700\( \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>한편, \( \mathrm{Cu} \)-환원력 측정은 발효 당귀 분말의 \( 0.05 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 시료 용액 \( 0.2 \mathrm{ml} \) 를 취하고 \( 0.01 \mathrm{M} \mathrm{CuCl}_{2} 0.25 \mathrm{ml}, 7.5 \mathrm{mM} \) etha-nolic neocuprorine solution \( 0.25 \mathrm{ml}, 1 \mathrm{M} \mathrm{NH}_{4} \mathrm{OAc} \) buffer \( 0.25 \) \( \mathrm{ml} \) 를 혼합하여 distilled water \( 1.05 \mathrm{ml} \) 를 넣은 후 상온에서 30 분간 반응시킨 후 \( 420 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 이때 환원력 비교를 위하여 기존에 항산화제로 많이 사용되고 있는 천연 항산화 ascorbic acid와 함성 항산화제 \( \mathrm{BHT} \) 를 각각 시료와 동일 농도로 동일한 방법으로 흡광도를 측정하였다. 환원력은 시료 반응액에서 흡광도가 증가된 만큼 강한 환원릭을 나타내어 준다.</p> <h2>Tyrosinase 활성 측정</h2> <p>Tyrosinase 활성은 Masamoto 등의 실험 방법에 준하여 측정하였다. In vitro mushroom tyrosinase 저해 활성을 측정하기 위하여 \( 2.5 \mathrm{mM} \) 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) \( 0.3 \mathrm{ml} \), 발효. 당귀 분말의 \( 0.1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 시료 용액 \( 0.05 \mathrm{ml} \) 에 \( 0.1 \) \( \mathrm{M} \) 인산완충용액 \( \left(\mathrm{pH}\right. \) 6.8)을 혼합하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 preincubation 시키고, 여기에 1,380 units/ml mushroom tyrosinase \( (2,500 \) unit, Sigma, St. Louis MO, USA) \( 0.05 \mathrm{ml} \) 를 넣은 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2분간 반응시키면서 spectrophotometer (HITACHI U-2900, Kyoto, Japan)의 \( 475 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 대조구는 시료가 들어있지 않는 시료 용해 용액을 사용하였고, 양성 대조구는 tyrosinase 저해제로 알려진 albutin, ascor-bic acid 및 kojic acid를 사용하였다. 이때 tyrosinase 활성 저해율\( (\%) \)은 다음의 공식에 의하여 산출하였다.</p> <p>Tyrosinase 활성 저해율(\%) \( =100-[(\mathrm{A}-\mathrm{B}) / \mathrm{A}] \times 100 \)</p>\( \mathrm{A} \) 는 시료가 들어있지 않은 반응액의 0.5-1분 사이의 흡광도 차이 \( \mathrm{B} \) 는 시료가 들어있는 반응액의 \( 0.5-1 \) 분 사이의 흡광도 차이</p> <h2>통계처리</h2> <p>실험으로부터 얻어진 걸과치는 one-way ANOVA 검정에 의한 평균치와 표준오차 \( (\mathrm{mean} \pm \mathrm{SE}) \) 로 표시하였다.</p>