본 연구는 꿀풀을 이용한 lactic acid bacteria 생육, 항산화 효과 및 항균 활성을 조사하였다. 꿀풀을 꽃과 잎으로 나누어 사용하였고 사용균주는 MRS agar에서 stab culture 하여 실험에 사용하였다. 시료 추출을 위해 식물은 건조하여 수분을 충분히 제거하고 mixer를 이용하여 미세하게 마쇄, 다음으로 중탕 및 여과과정을 거쳐 항균 항상화 효과 및 유산균 생육 연구에 사용하였다. 생육을 조사하기 위해 정치배양의 조건을 갖추고 시간에 따른 흡광도 및 \( \mathrm { pH } \)를 측정하였다.
<p>본 연구에서는 우리나라 식품의약품안정청에 식품원료로 사용 가능한 식물로 분류되어 있고, 한약재로도 널리 쓰이는 꿀풀을 이용하여 인체에 유익한 미생물로 알려진 lactic acid bacteria 생육에 미치는 영향과 lactic acid bacteria에 의해 발효되어진 꿀풀 추출액의 항산화 효과 및 어류질병 미생물에 대한 항균 활성을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용시료</h2> <p>본 실험의 공시 재료인 꿀풀은 2005년 7월에 제주도 목초지에서 채집하여 Table 1과 같이 꽃과 잎으로 나누어 실험에 이용하였다. 식물분류는 한국식물도감과 한국의 자원식물 1 그리고 제주식물도감 인터넷 사이트(http://www.nfc.co.kr)를 참고 하였다.</p> <h2>사용균주</h2> <p>본 연구에 사용된 균주는 한국종균협회 (KCCM, Korean Culture Center of Microorganism)에서 Enterococcus faecium KCCM 12118, Lactobacillus rhamnosus KCCM 32826, Lactobacillus plantarum KCCM 11542, Pediococcus pentosaceus KCCM 40464를 분양받아 MRS agar (Difco, USA)에서 stab culture 하여 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하면서 3주마다 계대하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>시료 추출방법</h2> <p>생체로 채집된 식물은 물을 이용하여 훍과 같은 이물질은 제거한 후 바람이 통하는 음지에서 3일 이상 건조하여 수분을 충분히 제거하였다. 음건된 식물체는 각 부위별로 자른 다음 mixer를 이용하여 미세하게 마쇄하여 실험에 사용하였다.</p> <p>증류수 \( 500 \mathrm { ml } \) 당 \( 10 \mathrm { ~g } \)의 식물시료를 혼합하여 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 수욕상에서 약 60 분간 중탕한 다음 Whatman No.2 여과지를 사용하여 1차 여과과정을 거친 후 pore size \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) syringe 용 멸균 필터를 사용하여 무균적으로 식물 열수 추출액을 조제 하여 갈색 병에 보관하면서 유산균 생육 및 항균 항산화 효과 측정에 사용하였으며, 추출된 시료 보관은 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관 하면서 사용하였다.</p> <h2>Lactic acid bacteria 생육조건</h2> <p>Lactobacilli MRS (Difco, USA) broth에서 L. plantarum은 \( 3.0 \times 10 ^ { 8 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \), L. rhamnosus, E. faceium 그리고 P. pentosaceus는 \( 2.9 \times 10 ^ { 8 } \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \) 농도로 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 48시간 정치배양하면서 배양시간에 따른 생균수를 측정하기 위해 12시간 별로 흡광도 및 \( \mathrm { pH } \) 측정하였다. \( \mathrm { pH } \) 측정은 \( \mathrm { pH } \) meter (SevenMulti, Swiss)를 이용하여 조사하였고, 생균수는 Lactobacilli MRS broth에서 배양하는 동안 12시간마다 UV/VIS spectrophotometer (Hanson OPRON-3000, Korea) 를 사용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \)에서 배양액의 흡광도를 측정하여 생육을 조사하였다.</p>