본 논문은 Primer ITS 1, 2, 3, 4의 ITS 염기서열 분석 결과 총 720개의 염기서열을 확인하였다. 또한 primer 40개로 팽이품종 29개를 RAPD 분석한 결과, 전 품종에 반응들이 나타났으나 그 중 16 종의 primer만 재현성이 확인되었고, 그 중에서도 고빈도의 polymeric band로 유전적 다양성을 잘 나타내는 primer들은 OPA-2, 4, 3, 9, 10, 20였다. 마지막으로 RAPD band 분석에서 일본, 중국, 한국 백색팽이 그룹은 band의 분포 범위가 좁고 다양성이 적은 반면, 한국 야생팽이 그룹은 넓은 band 분포 범위와 큰 다양성을 보였다.
<p>RAPD를 수행한 PCR product는 \( 5 \mathrm { ng } / 100 \mathrm { ml } \)의 농도로 ethidium bromide를 첨가한 \(1.2 \% \) agarose gel (SIGMA, USA)에서 1x TAE buffer에서 \( 50 \mathrm { mV } \)로 전기영동 하였으며, UV상에서 나타나는 DNA band를 확인하였다.</p> <h2>Data 분석</h2> <p>RAPD 결과, 반응이 나타난 16개의 primer에서 다형성이 인정되는 3,030개의 band를 발견하였다. 먼저 각 band를 하나의 형질로 취급하여 코드화하였으며, 그리고 전체 코드화한 자료를 바탕으로 자료행렬을 작성하였다. 분지도는 UPGMA (unweighted pair-group method, arithmetic aver-age method) 방법을 사용하였고, phylogenetic analysis에서 PAUP 4.02b version 을 사용하여 parsimony analysis를 실시하였으며, 분석방법으로는 Heurestic search를 이용하였다. 이에 따른 option으로 ACCTRAN, MULPARS 및 TBR을 이용하였다. 또한 Nei의 유전적 거리지수를 다소 변형한 Nei-Li의 거리지수를 이용하여 상사도 행렬을 도출하였다. 도출된 자료행렬에 따라 산출된 유전적 유사도를 기초로 하여 neighbour joining tree (NJ) 를 작성하였다. 그리고 종간의 유전적 유사도 계수(similarity coefficient)는 Sneath와 Sokal의 방법에 따라 구하였다. 또한 각 분계도의 지지정도는 jack-knifing, bootstrap을 이용하여 분석하였다. 이러한 분석방법은 1,000 회 반복 실시하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>ITS 염기서열</h2> <p>Primer ITS 1, 2, 3, 4를 이용한 ITS 염기서열 분석한 결과 전체 720개의 염기서열을 확인하였다(Table 3). 29개의 품종 모두 동일하였으며, 이는 Genebank에 수록된 것과 동일하였다.</p> <h2>RAPD</h2> <p>29개의 팽이품종들을 40개의 primer를 이용하여 RAPD 분석을 한결과 모든 품종에 반응들이 나타내었고 3번의 반복실험을 통하여 재현성이 확인된 것은 전체 40개 중 16종류의 primer였다(Table 2). 그 중 특히 polymeric band의 빈도가 높아 유전적 다양성을 잘 나타낸 primer들은 OPA-2,4,3,9,10,20 이었다.</p> <p>PCR에 의하여 증폭된 band들은 \( 400 \mathrm { bp } \)에서 \( 2,000 \mathrm { bp } \) 사이의 구간에 분포하고 있었으며 primer에 따라서 8~16개의 band들이 나타내었다. 특히 primer OPA 3과 20을 이용한 RAPD 분석결과를 보면 일본과 중국품종의 JW1~7과 CB 1-2, CW 1-5에서 band들이 500~1,600 bp 사이에 유사하게 나타나지만 한국의 야생종 KB 1~10들은 200~2,000 bp에서 매우 다양하게 나타냈다(Fig. 2). 그러나 OPA-2, 9, 10과 OPB-7들을 이용한 경우 band 분포가 모든 품종간에 다양성이 매우 컸다(Fig. 3). 또한 RAPD band 를 바탕으로 팽이버섯 형태 특징과 비교할 때 일본, 중국, 한국 백색팽이버섯 (JW, CW, KW) 그룹은 갓, 대의 형태가 일률적인 반면 특히 한국산 야생팽이 KB 그룹은 형태가 다양하였다(Table 1). 이는 RAPD band 분석에서 일본, 중국, 한국 백색팽이 그룹 band의 분포 범위가 좁고, 비슷한 양상을 띄었으며, 한국 야생팽이 그룹의 경우 band 분포 범위가 보다 넓고 다양하게 표현되었다(Fig. 2).</p>