형질전환 까마중의 수은저항성을 확인하기 위해 여러 농도의 유기수은 제제를 사용한 실험을 진행하였으며, 해당 저항성이 확인된 까마중은 배양실에서 순화시킨 후 온실로 이식하여 3개월 동안 재배하였다. 이후 화서당 열매수, 열매의 개당 종자수 등을 대조군과 비교하고, 자연 건조시킨 형질전환 1세대 까마중 종자의 건조 중량을 측정하였다.
<h2>형질전환 까마중의 수은 저항성 검정</h2> <p>유전자 밭현이 확인된 형질전환 까마중의 수은저항성을 확인하기 위하여 잎을 약 \( 0.5 \mathrm { ~cm } \times 0.3 \mathrm { ~cm } \) 로 잘라서 유기수은 제제인 methylmercury (II) chloride (MMC; \( \mathrm { CH } _ { 3 } \mathrm { HgCl } \), Aldrich, Germany)와 phenylmercuric acetate (PMA; \( \mathrm { C } _ { 6 } \mathrm { H } _ { 5 } \mathrm { HgOCOCH } _ { 3 } \), Sigma, Germany)가 \( 0.5,1,2,5,10,20,40,60 \mu \mathrm { M } \) 농도별 처리된 \( \mathrm { MS } \) 재분화 배지 ( \( \mathrm { MS } \), sucrose \( 3 \%, 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { NAA } , 1 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { BA } \) )에 치상하였다. 20 일후 잎 전편의 재분화 정도를 조사함하여 수은저항성을 알아보았다. 또한 수은저항성이 확인된 까마중은 온실에서 3 개월 간 재배한 후 종자를 수학하였다. 수확한 종자는 \( 70 \% \) ethanol과 \( 2 \% \) sodium hypochlorite 용액으로 소독하여 MMC와 PMA가 각각 \( 2 \mu \mathrm { M } \) 농도로 첨가된 발아배지에 치상하였으며, 치상 후 10 일째 생육상태를 조사하였다.</p> <h2>형질전환 까마중의 형질전환 1 세대 \( \left (T_ { 1 } \right ) \) 종자형성과 유전자 분리비 조사</h2> <p>유전자 발현과 수은저항성이 확인된 까마중을 배양실에서 순화시킨 후 온실의 포트로 이식하고 약 3 개월 동안 재배하였다. 3 개월 후 화서당 열매수, 열매의 개당 종자수를 대조구와 비교하였고, 수확 후 자연 건조시킨 형질전환 1세대 \( \left ( \mathrm { T } _ { 1 } \right ) \) 종자 100 립의 건조 중량도 측정하였다. \( \mathrm { merB } \) 유전자가 후대로 안정되게 유전되는지를 확인하기 위하여 건조된 \( \mathrm { T } _ {\mathrm { i } } \) 종자를 \( 70 \% \) ethanol에 30 초, \( 2 \% \) sodium hypochlorite 용액에 20 분간 표면살균하고 멸균수로 세척한 후 물기를 제거한 다음 항생제 hygromycin (Sigma)이 첨가 발아배지 (1/2MS, 50 \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) hygromycin)에 치상하였다. 10 일 동안 배양 \( \left (25 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \right . \), \( 16 \mathrm { hr } \) day \( / 8 \mathrm { hr } \) dark) 한 후 발아되어 생장하는 항생제 저항성 종자와 발아하지 못하는 감수성인 종자 수를 조사하였다.</p>