건조 포공영의 열수추출물은 물1000 mL와 파쇄된 포공영100 g을 75∼80 \(^\circ \mathrm{C}\)의 가열 맨틀상에서 24시간 추출한 후 filter paper 로 여과하여 여과된 여액을 감압 농축한 다음 동결건조하여 얻어진 분말을 냉장고에 보관하며 사용하였다.실험동물은 무작위적으로 대조군 kg당 150mg의 포공영 추출물 투여군,kg당 300mg의 포공영 추출물 투여군으로 분류하였으며 각각 10마리씩 총 30마리 3그룹으로 나누어 실험을 수행하였다.시료채취를 위해서는 실험동물의 하복부를 절개하여 복부대동맥에서 혈액을 채취하였고 간, 비장, 고환, 부고환 및 해면체를 회수하였는데 혈청은 혈액을 원심분리하여 채취한 후 간기능, 신장기능, 당대사 및 남성호르몬 지표평가에 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>포공영 추출물</h2> <p>본 실험에서 사용된 포공영은 충남 천안에서 마른 건초를 구입하여 사용하였다. 건조 포공영의 열수추출물은 물 \( 1000 \mathrm{~mL} \)와 파쇄된 포공영 \( 100 \mathrm{~g} \)을 \( 75 \sim 80^{\circ} \mathrm{C} \)의 가열 맨틀상에서 24시간 추출한 후 filter paper (Whatman No. 1, GE Healthcare, Pittsburgh,PA, USA)로 여과하여 여과된 여액을 감압 농축한 다음 동결건조하여 얻어진 분말을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 냉장고에 보관하며 사용하였다. 포공영을 실험동물에게 투여하기 전에 정상 식염수(JW 중외제약, Dangjin, Korea)에 용해시켰다.</p> <h2>동물관리 및 시료채취</h2> <p>본 연구에서는 12주령된 Sprague-Dawley 수컷(체중 \( 350-380 \mathrm{g}\)) 흰쥐를 오리엔트 바이오(Daejeon, Korea)에서 구입하여 사용하였으며 단국대학교 실험동물윤리위원회 승인하에 표준작업 지침에 따라 수행되었다(DKU-18-008). 실험시작 전 10주 동안 대한바이오링크사의 일반 고형사료로 적응시키며 22주령까지 사육하며 실험을 진행하였다. 실험동물을 무작위적으로 대조군, \( \mathrm{kg} \)당 \( 150 \mathrm{mg} \)의 포공영 추출물 투여군, \( \mathrm{kg} \)당 \( 300 \mathrm{mg} \)의 포공영 추출물 투여군으로 분류하였으며 각각 10마리씩 총 30마리 3그룹으로 나누어 실험을 수행하였다. 포공영은 1일 1회 같은 시간대에 4주간 경구 투여하였고, 동일한 양의 생리식염수를 대조군에 투여하였다. 실험동물은 온도 \( 24{ }^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 50 \pm 10 \% \), 환기 회수 10-20회(시간, 조명 시간 12시간(점등 08:00-소등 20:00)으로 설정된 환경에서 cage당 두 마리씩 배치하여 관리하였다. 포공영 추출물을 마지막 투여한 다음날에, zoletil (\(10 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}\)) 및 rompun (\(5 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}\))를 복강 내 주사하여 실험동물을 마취시켰다. 시료채취를 위해 실험동물의 하복부를 절개하여 복부대동맥에서 혈액을 채취하였고 간, 비장, 고환, 부고환 및 해면체를 회수하였다. 혈청은 혈액을 \( 516 \times \mathrm{g}\)에서 원심분리하여 채취한 후 간기능, 신장기능, 당대사 및 남성호르몬 지표평가에 사용하였다. 희생 당일에 \( 0.1 \mathrm{M} \) 인산 칼륨 완충액 (\(\mathrm{pH} 7.4\))에 분리한 해면체를 넣고 Ultra Turnax T25 (IKA-Lab, Staufen, Germany)를 사용하여 해면제를 균질화 하였다. 그런 후 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 516 \times \mathrm{g} \)로 원심분리하여, 상등액을 분리 혈관확장기능 평가의 원천으로 사용하였다.</p> <h2>안전성 평가</h2> <p>실험동물의 포공영 투여에 따른 안전성 평가를 위해 체중은 일주일에 한 번씩 측정하였고, 비장 및 고환의 중량은 실험동물 희생 후 측정하여 대조군과 비교하였다. 간기능 시험은 혈액내 아스파르트산아미노전이효소(aspartate aminotransferase, AST, Biovision, Milpitas, CA, USA), 알라닌아미노전이효소(alanine aminotransferase, ALT, Biovision), 감마글루타전이효소(gammaglutamyl trasferase, \( \gamma \)-GT, Mybioscience, Beverly, MA, USA) 및 젓산탈수소효소(lactic dehydrogenase, LDH, Mybioscience)를 샌드위치 효소결합면역분석법(ELISA)을 사용하여 제조업체의 지시대로 평가하였다. 신장기능 시험은 혈액요소질소(blood urea nitrogen, BUN, Mybioscience)와 크레아티닌(Creatinine,\( \mathrm{Cr} \), Mybioscience)을 간기능 시험과 같은 방법으로 평가하였다. 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, 중성지질 측정(Mybioscience)과 glucose은 효소면역측정법(EIA) 키트(Biovision)를 사용하여 평가하였다.</p>