Matrix-matched 표준용액을 제조한 후, 이를 단계적으로 희석하여 다양한 농도의 working solution을 제조하였다. LC-MS/MS에 주입하여 chromato-gram에서 peak 면적을 측정하여 표준검량선을 작성하였다. 기기정량한계 (ILOQ)는 크로마토그램상의 S/N이 10 이상인 농도를 기준으로 계산하였고, 분석법의 정량한계 (MLOQ)는 시료 전처리 및 분석과정을 고려하여 계산되었다. 케일 시료를 acetonitrile로 추출한 후 농축하고, 잔류량을 측정하기 위해 LC-MS/MS에 주입하였다. 분석조건은 Table 3에 명시되어 있다.
<h2>표준용액 조제 및 검량선 작성</h2> <p>Flubendiamide 표준품(99.4\%) \( 10.06 \mathrm{mg} \) 을 칭량하여 \( 10 \mathrm{~mL} \) 용량플라스크에 넣고 acetonitrile로 정용하여 \( 1000 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 농도의 stock solution을 조제하였다. 이 표준용액을 acetonitirle로 희석하여 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 의 표준용액을 만들고, 이 중 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 취하여 질소농축기(Hurricane-Lite, Cheongmin Tech, Seoul, Korea)를 사용하여 농축한 후 무처리 시료 \( 10 \mathrm{~mL} \) 로 재용해하여 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 의 matrix-matched 표준용액을 제조하였다. 이와 같이 제조한 matrix-matched 표준용액을 무처리 시료를 사용하여 단계적으로 희석하여 \( 0.01,0.05,0.1,0.5,0.8 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 의 working solution을 제조한 후, \( 2 \mu \mathrm{L} \) 씩을 LC-MS/MS에 주입하여 나타난 chromato-gram 상의 peak 면적을 토대로 표준검량선을 작성하였다.</p> <h2>분석정량한계(MLOQ)</h2> <p>기기정량한계(Instrmental limit of quantitation, ILOQ)는 크로마토그램상의 signal to noise ratio (S/N) \) 가 10 이상인 농도로, 주입량을 곱하여 최소검출량 (minimum detectable amount, MDA)을 산출하였으며, 분석법의 정량한계(Method limit of quantitation, MLOQ)는 시료 전처리 및 분석과정을 통틀어 전체 분석법을 통해 시료 내의 분석물질을 정량할 수 있는 한계치로써, 분석기기의 정량한계, 시료주입량, 시료채취량, 최종 시험용액량 및 분석조작에 따른 희석 또는 농축배수를 고려하여 아래의 계산식에 의해 산출하였다.</p> <p>MLOQ \( (\mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \) \( =\frac{\text { MDA }(\mathrm{ng}) \times \text { Final volume }(\mathrm{mL}) \times \text { Dilution factor }}{\text { Injection volume }(\mu \mathrm{L}) \times \text { Sample weight }(\mathrm{g})} \)</p> <h2>케일 중 flubendiamide의 잔류분석</h2> <p>균질화한 케일 시료 \( 20 \mathrm{~g} \) 을 취하여 \( 100 \mathrm{~mL} \) 의 acetonitrile을 첨가하고 \( 200 \mathrm{rpm} \) 으로 30 분간 진탕기(SK600, Lab. companion, Daejeon, Korea)로 추출하였다. 진탕 추출액을 Advantac No. 2 filter paper로 흡인여과하고 여분의 \( 50 \mathrm{~mL} \) acetonitrile로 용기를 씻어 내려 앞의 여과액과 합하였다. 여과액을 \( 1000 \mathrm{~mL} \) 분액여두에 옮긴 후 \( 50 \mathrm{~mL} \) 포화식염수와 \( 450 \mathrm{~mL} \) 증류수를 가하고 dichloromethane \( 70 \mathrm{~mL} \) 로 2회 분배하였다. 이 중 유기용매층을 \( 20 \mathrm{~g} \) 의 anhydrous sodium sulfate에 통과시켜 수분을 탈수시키 고 \( 40{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 감압농축기(Eyela, Tokyo, Japan)로 농축한 후 acetone/ \( n \)-hexane \( (10 / 90, \mathrm{v} / \mathrm{v}) 5 \mathrm{~mL} \) 에 재용해하고 이 중 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 취하여 정제를 실시하였다. Chromatography column \( (14 \mathrm{~mm} \) i.d \( \times 400 \mathrm{~mm}) \) 에 \( 130^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 12 시간 가열하여 흡착표면 중 수분을 제거하여 활성화 시킨 florsil \( (10 \mathrm{~g}) \) 을 습식 충진한 후, 상단에 sodium sulfate anhydrous를 \( 100 \mathrm{~mm} \) 높이로 충진하고, \( 50 \mathrm{~mL} n \)-hexane으로 씻어버렸다. 이후 acetone/ \( n \)-hexane \( (10 / 90, \mathrm{v} / \mathrm{v}) 5 \mathrm{~mL} \) 에 재용해한 시료 중 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 적하하고, acetone/ \( n \)-hexane \( (15 / 85, \mathrm{v} / \mathrm{v}) 100 \mathrm{~mL} \) 로 용출시켜 흘려버린 후, acetone/ \( n \)-hexane \( (25 / 75, \mathrm{v} / \mathrm{v}) 100 \mathrm{~mL} \) 로 받아 감압농축 하였다. 농축 직후 잔사를 acetonitrile \( 4 \mathrm{~mL} \) 에 재용해하여 \( 2 \mu \mathrm{L} \) 씩 \( \mathrm{LC} \) -\( \mathrm{MS} / \mathrm{MS} \) 에 주입하여 나타난 chromatogram상의 peak area를 표준검량선과 비교하여 잔류량을 산출하였으며 분석조건은 Table 3와 같다.</p>