\( 10 \mathrm { kDa } \mathrm { PEH } \)로부터 ACE 저해 peptide를 분리하기 위해 \( 10 \mathrm { kDa } \mathrm { PEH } \) 이하인 분자들을 걸러내기 위해 여과막을 사용하였다. 분리된 저분자 분획물들 중 ACE 저해 활성이 높게 나타나는 분획물들을 확인하기 위해 HPLC를 사용하여 분리하였다. ACE 저해 활성을 가장 많이 나타내는 분획물들은 A, B, C, D, E, F로 식별되었고, 이들의 ACE 저해 활성은 표 3에 나타내었다. Fraction A와 B에서 가장 높은 활성을 나타내는 fraction B를 선택하고, 이를 peptide로 합성하여 ACE 저해활성을 확인하였다. 이 결과, 저해활성 농도(IC50)가 \( 1.18 \mathrm { uM } \) 임을 확인하였다. 이와 비슷하게 ACE 저해효과를 가지는 peptide들이 다른 연구에서도 보고되었으며, 이들은 주로 소수성 아미노산인 Leucine 등으로 구성되어 있다. 따라서 본 연구에서 얻은 결과도 이와 유사하다고 판단된다.
<h2>\( 10 \mathrm { kDa } \mathrm { PEH } \) 로 부터 ACE 저해 peptide 분리</h2> <p>고분자의 polypeptide를 제거하고 저분자 peptide를 얻기위해 ACE저해 활성이 가장 높게 나타난 10 시간 이상 반응시킨 \( \mathrm { PEH } \) 를 \( 10 \mathrm { kDa } \) 이하인 한외여과 막을 통과한 저분자 분획물들을 HPLC를 이용하여 분리하였다(Fig. 3). 총 33개의 분흭물을 분취하였고, 각각의 분획물은 건조하여 \( \mathrm { ACE } \) 저해 활성을 비교 하였는데, 그 결과 \( \mathrm { ACE } \) 저해 활성을 나타내는 분획물은 15 분 이내에 모두 용출되었으며, 그 중 \( \mathrm { ACE } \) 저해활성을 가장 많이 나타내는 것으로 판단되는 분획인 A (No. 4), B (No.6), C (No. 7), D (No. 10), E (No. 12), F (No. 15)의 분획물을 건조시켜 \( \mathrm { ACE } \) 저해활성을 확인한 결과를 table 3 에 나타내었다. 각각의 \( \mathrm { ACE } \) 저해활성은 \( 85.78 \%, 85.85 \%, 29.56 \%, 81.72 \% \), \( 77.37 \%, 52.53 \% \) 로 나타났다. 그 중 높은 활성을 나타내는 fraction A, B peak에서 녿은 함량을 가지는 fraction B를 선정하여 \( \mathrm { HPLC } \) 를 이용하여 확인한 결과, \( \mathrm { PEH } \) 의 fraction \( \mathrm { B } \) 의 peak인 것을 확인하였다(Fig. 4). Fraction B의 아미노산들의 분자량은 \( 600 \mathrm { Da } \) 이하였고, \( \mathrm { N } \) 말단에는 소수성 아미노산인 Leucine, 중앙에는 염기성 아미노산 Glutamine, \( C \) 말단의 아미노산 잔기 Proline을 가진 Leu-Gln-Pro 인 것을 확인하였다. 이를 peptide 합성하여 ACE 저해활성을 확인한 결과, 저해활성 농도 \( \left ( \mathrm { IC } _ { 50 } \right ) \) 가 \( 1.18 \mathrm { uM } \) 임을 확인하였다.</p> <p>Daisuke 등 도 ACE 저해효과를 나타내는 참깨 가수분해물에서 peptide를 분리하고 peptide를 합성한 결과 Leu-LysTyr, Leu-Gln-Pro의 \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) 값이 각각 \( 0.78 \mu \mathrm { M } , 1.04 \mu \mathrm { M } \) 로 높은 활성을 가지는 것으로 보고하였다. 또한 Leu-Val-Tyr 의 저해 활성 역시 \( 1.80 \mu \mathrm { M } \) 로 녺은 활성을 나타났다고 보고하였다. 여기서 저해 활성이 강한 peptide들은 공통적으로 \( \mathrm { N } \) 말단 아미 노산 잔기에는 \( \mathrm { Leu } \) 와 같은 소수성 아미노산으로 구성되어 있 는 것으로 보고하였는데, 본 연구에서도 \( \mathrm { ACE } \) 저해효과를 보 인 fraction \( \mathrm { B } \) 의 아미노산 조성을 확인한 바 유사한 결과를 얻었다고 판단된다.</p>