Rat basophil 세포를 통해 histamine 분비량을 24 well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 5 } \mathrm { ~cell } / \mathrm { ml } \) 로 배양하고 PMA, A23187을 8시간 처리하여 histamine ELISA kit (abcam, UK)를 이용하여 측정하여 3회 반복하여 평균과 표준편차로 하여 Student's t-test를 통해 유의성 \( (p<0.05) \)을 나타냈다. Rat basophil 세포를 24 well plate에 \(1\times10^{5}\) cell/ml로 배양하고 PMA, A23187을 8시간 처리하여 histamine ELISA kit(abcam, UK)를 이용하여 Histamine 분비량을 측정하였다.
<h2>Histamine 분비측정</h2> <p>Histamine 분비량은 rat basophil 세포주를 통해 확인하였다. RBL-2H3 세포를 24 well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 5 } \mathrm { ~cell } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 분주하고 \( 24 \mathrm { ~hr } \) 배양하고 농도별 시료 처리 후 PMA \( (50 \mathrm { ~nM } ) \) 과 A23187 ( \( (1 \mathrm { ~uM } ) \))를 \( 8 \mathrm { ~hr } \) 처리하여 histamine을 유리시켰다. 배양이 끝난 상층액을 96 well plate에 옮기고 histamine ELISA kit (abcam, UK)를 이용하여 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>실험은 3회 반복하여 평균과 표준편차로 나타내었고, Student's t-test를 통해 유의성 \( (p<0.05) \)을 확인하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>자외선 조사로 유도한 버섯추출의 비타민 D2 함량</h2> <p>비타민 D는 식물성 스테롤인 ergosterol에서 유래하는 ergocalciferol와 동물성 스테롤인 cholesterol에서 유래하는 cholecalciferol 두 가지 형태가 있으며 ergocaciferol로 알려진 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)는 버섯과 같은 식물성 스테롤의 자외선 조사로 합성된다고 알려져 있다.</p> <p>이전 연구에서 미세분말화한 버섯의 자외선(UV-B) 조사로 5종의 버섯(새송이, 느타리, 팽이, 양송이, 표고)에서 비타민 D 전구체(ergosterol)가 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)로 전환이 크게 증가함을 확인하였고, 특히 표고버섯의 전환율은 \( 2.98 \% \)로 다른 버섯 종류들보다 전환효율이 좋은 것을 확인하였다. 따라서 5종의 버섯 중 표고버섯을 선택하여 자외선에 노출되는 표면적을 높이기 위한 분말화 작업 후에 UV-B 처리 조건별 버섯 분말의 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \) 함량을 측정하였고 Table 1과 같은 측정 결과를 확인하였다. 버섯 분말을 \( 5 \mathrm { ~mm } \) 이하 두께로 조절하고 UV-B를 1 회당 8분 조사한 결과 대조군에서 \( 5 \mathrm { ~ug } / \mathrm { g } \)으로 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)가 측정되었고, 4회 처리한 32분에서 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \) 함량이 \( 68 \mathrm { ~ug } / \mathrm { g } \)으로 가장 높게 나타남을 확인하였다. 이러한 결과로 표고버섯의 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \) 전환을 위한 최적의 조건은 분말화한 후 UV 조사 시간 32분이 적합한 것으로 판단하여 본 연구에 사용하기 위한 조건을 확립하였다.</p>