SDS-chitin zymogram 분석은 Trudel and Asselin에 따라 시행되었으며, lois의 방법에 따라 DPPH용액 \( 4 \mathrm { ml } \) 균 배양액 \( 1 \mathrm { ml } \) 혼합하여 적절한 온도에 반응시킨 후 흡광도를 측정하였다.새우젓에서 분리된 균주를 fibrinogen과 thrombin이 함유된 분리용 배지에 도말하여 분리하고 colloidal chitin이 함유된 분리용 배지에 도말하여 다시 분리하였다.
<p>SDS-chitin zymogram 분석은 Trudel and Asselin 방법에 따라 수헹되었다. 단백질 시료에 SDS-PAGE sample buffer를 넣고 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분 동안 가열한 후 전기영동 시료로 사용하였다. 단백질 시료는 \( 0.1 \% \) glycol chitin을 함유한 \( 10 \% \) acryl-amide gel에서 분리하였으며, 겔은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), refolding buffer (50 \( \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } ( \mathrm { pH } 7.5), 1 \% \) Triton \( \times 100) \)에서 24시간 담근 다음, 증류수로 세척한 후 Coomassie brilliant blue R-250로 염색하였다. Chitin 분해능을 지닌 단백질 분획은 활성염색 법에 의해 gel상의 glycol chitin을 분해하여 Coomassie blue R-250 염색결과 투명대로 활성을 화인하였다.</p> <h2>DPPH법에 의한 항산화 활성측정</h2> <p>DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl) 옹액은 \( 100 \mathrm { ml } \) 에탄올에 DPPH \( 1.5 \times 10 ^ { -4 } \mathrm { M } \) 을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm { ml } \) 혼합하여 Whatman filter paper No. 2에 여과시켜 만들었고, Blois의 방법에 따라 DPPH용액 \( 4 \mathrm { ml } \) 균 배양액 \( 1 \mathrm { ml } \) 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응시킨 후 \( 520 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능(Electron donating ability, EDA)은 EDA \( \% \) = 1-시료 첩가구흡광도/대조구합광도 \( \times 100 \)으로 계산하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과 흡광도차를 비교하여 프리라디칼의 제거활성을 백분율로 나타내었다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>혈전과 chitin 분해능이 높은 균주의 분리 및 동정</h2> <p>새우젓에서 분리된 균주를 fibrinogen과 thrombin이 함유된 분리용 배지에 도말하여 clear zone을 생성한 균주를 혈전분해능이 있는 균주로 간주하여 1차로 12종을 분리하였다. 또한 colloidal chitin이 함유된 분리용 배지에 도말하여 clear zone을 생성한 균주를 1차로 30여 균주를 분리하였다. 그 중에서 혈전용해제로 알려져 있는 plasmin과 비교하여 그보다 높은 활성을 나타냄과 동시에 높은 chitin 분해능을 나타내는 9번 균주를 2차로 선별하여 SC082라 명명하였다. 혈전과 chitin 분해능이 우수한 SC082의 동정을 위해서 \( 16 \mathrm { ~s } \) rRNA sequence를 의뢰하여 분석한 결과 고유전자의 상동성이 Bacillus licheniformis와 높은 유사성을 가지는 것으로 나타났다. 따라서 이 균주를 B. licheniformis SC082로 명명하였다.</p>