발현 유전자 꼬리표 분석은 조직이나 발육단계에 따른 특이적 유전자 발현 정보를 제공한다. cDNA 염기서열분석과 비교하면 제한된 정보를 제공하지만 저렴한 비용으로 유전자 정보를 얻을 수 있으며, 새로운 유전자 동정과 염색체 지도 작성, 게놈 유전자 분석에 유용하다. 유발에 마쇄된 종령 천잠 후부견사선으로부터 추출한 total RNA와 poly A + RNA를 이용하여 cDNA 유전자 은행을 구축하였다.
<h1>서 론</h1> <p>발현 유전자들을 모두 포함하는 cDNA 유전자 은행으로부터 임의로 선발한 클론들을 5'- 또는 3'- 한쪽 방향으로 부분 염기서열 분석한 후, 기존 데이터베이스를 통한 상동성 분석에 의한 유전자들의 잠정적인 기능을 추정하는 방법인 발현 유전자 꼬리표 (expressed sequence tags: ESTs) 분석은 유전정보 및 유전자원의 대량 확보 차원에서 효과적이고 획기적인 방법이다. 그리고 이러한 부분 염기서열 분석은 전체 유전자의 염기서열 분석, 유전자 지도 작성 및 각각의 유전자들에 대한 기능해석을 가능하게 하며, 나아가서는 유전질병 예방 및 치료에 응용할 수 있을 것으로 기대된다.</p> <p>발현 유전자 꼬리표 (ESTs) 분석은 조직특이 (tissue specific) 또는 발육단계특이 (stage specific)적으로 발현되는 유전자들에 대한 방대한 양의 정보를 줄 수 있는 효과적인 분석방법으로 판명되었다. 비록 부분적인 cDNA 염기서열분석 (ESTs)이 최근 미국을 중심으로 수행되고 있는 인간을 비롯한 다양한 생물체의 게놈 프로젝트에 비하여 제한된 정보를 제공받는다는 단점은 있지만 저렴한 비용으로 전사된 유전자에 대한 상당한 양의 정보를 제공받을 수 있으며, 그리고 새로운 유전자의 동정, 염색체 지도 작성 및 게놈 유전자 분석에도 유용하게 이용될 수 있다는 장점을 갖고 있다. 이러한 장점으로 인해 발현유전자 꼬리표 (ESTs)의 분석은 사람과 선충 (Caenorhabditis elegans)에서 시작된 후, 벼, Brassica napus, 옥수수 와 Arabidopsis 등에서 유전정보 및 대량 유전자원 확보를 위하여 수행되어졌으며, 현재에는 자동염기서열 분석 장치의 발달로 그 대상 생물체의 범위가 더욱 더 확대되고 있는 실정이다.</p> <p>따라서 본 연구는 견사곤충 중 대표적인 가잠 (Bombyx mori), 야잠 (B. mandarina), 천잠 (Antheraea yamamai) 및 작잠 (A. pernyi) 중에서 다른 견사충류에 비하여 보다 고부가 가치의 견을 생산하는 천잠의 실크합성 관련 유전자의 분자 생물학적 메카니즘의 이해에 목적을 두었다. 천잠 실크가 시간적 (temporal) - 공간적 (spatial)으로 특이적으로 발현되는 종령 천잠의 후부견사선으로부터 cDNA 유전자 은행을 작성하고 그것으로부터 발현 유전자 꼬리표 (ESTs)를 분석하여, 실크합성 관련 유전자 및 견사충류의 생명현상에 관련된 유전자를 발굴하였기에 보고하고자 한다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>Total 및 poly A + RNA 분리</h2> <p>본 연구에 사용된 공시곤충은 농업과학기술원 잠사곤충부 잠사양봉과로부터 분양받은 천잠 (Antheraea yamamai)을 사용하였다. 종령의 천잠을 해부하여 후부견사선만을 분리 한 후 액체 질소로 급속 냉동시켜서 유발에 마쇄하여 이로 부터 total RNA는 RNAgents Total RNA Isolation System (Promega Co.)을 이용하여 분리하였다. 분리한 total RNA는 전기영동으로 그 양상을 확인하고, 파장 \( 260 \mathrm { ~nm } \)에서 UV 분광광도계로 정량하여 poly A + RNA 분리에 사용하였다. Poly A + RNA는 total RNA로부터 poly(A) Quik mRNA Isolation Kit (Stratagene Co.)를 이용하여 oligo (dT)-셀룰로오스 크로마토그래피에 의해 분리한 후 cDNA 유전자 은행 작성에 사용하였다.</p>