택사 추출물의 항균력, 항산화력, 지질과산화 억제 효과를 측정하였다. 먼저 항균력의 측정은 Farag의 방법을 변형하여 측정하였다. 이때 사용된 미생물의 생육도 측정은 액체배지 희석법을 통해 이루어졌다. 택사 추출물의 항산화 효과는 linoleic acid에 대한 과산화물값을 in vitro에서 측정하는 것을 통해 탐색하였다. 마지막으로 흰쥐의 liver homo-genate를 사용하여 지질과산화 억제 효과를 확인하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>택사는 1998년도에 전남 순천에서 수확한 것을 구입하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>택사 추출물의 조제</h2> <p>메탄올, 에탄올 및 물과 같은 용매를 사용하여 택사 \(100\mathrm{g} \) 당 \( 1500 \mathrm{ml}\)의 비율로 용매를 첨가하여 환류냉각기를 이용하여 메탄올과 에탄올은 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \), 물은 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 추출하여 이를 택사 \( \mathrm{g} \) 당 \( 0.5 \mathrm{ml}\)가 되도록 농축한 후 항균 및 항산화 활성을 측정하는 시료로 사용하였다.</p> <h2>사용균주 및 배지</h2> <p>항균시험용으로 사용된 균주는 Bacillus subtilis, Pseudo-monas aeruginosa, Escherichia coli, Salmonella typhimurium 및 Vibrio parahaemolyticus로서 한국 종균협회에서 분양받아 사용하였으며, 각종 미생물의 배양에 사용된 배지는 nutrient broth와 agar를 사용하였으며, vibro parahaemolyticus는\(3\%\) \( \mathrm{NaCl} \)이 첨가된 배지를 사용하였다.</p> <h2>항균력 측정</h2> <p>항균력 측정은 Farag의 방법 [2]을 변형하여 측정하였다. 즉, agar \(1.5\%\)가 함유되어 있는 생육배지를 petri dish의 밑면에 얇게 펴고, 그위에 다시 \( 0.6 \% \)의 agar가 함유된 생육배지를 부어 2중의 평판배지를 만든 후 각 균주를 평판배지에 도말하였다. 직경 \( 0.8 \mathrm{~cm} \) 여지 disc에 택사 추출물 일정량을 가한 다음 균주가 도말된 평판생육배지위에 올려놓고 \( 36^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양하여 생성되는 생육저해환을 측정하여 항균력을 조사하였다.</p> <h2>미생물의 생육도 측정</h2> <p>미생물의 생육도 측정은 액체배지 희석법으로 하였다. 즉, 시험관에 \( 5 \mathrm{ml}\)의 생육배지를 넣고 대수기 중기까지 배양된 균체 배양액 \( 1 \% \)를 접종한 후 택사 물추출물의 함량을 배지 \( 5 \mathrm{lm}\) 당 \(30 \sim 200 \mu \mathrm{l}\)가 되도록 첨가하고 각 균주의 최적 온도에서 배양하면서 경시적으로 미생물의 생육정도를 spectrophotometer를 사용하여 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도롤 측정하였다.</p> <h2>Linoleic acid에 대한 항산화력 측정</h2> <p>택사 추출물의 항산화 효과를 linoleic acid에 대한 과산화물값(peroxide value, POV) 을 측정하여 in vitro로 탐색 하였다. 삼각플라스크에 linoleic acid \( 1\mathrm{g}\), ethanol \( 10 \mathrm{ml}\) 및 소정의 택사 추출물을 첨가한 후 \( 0.2 \mathrm{M} \) 인산완충용액 \( 25 \mathrm{~ml}\)을 가하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 일정기간(1,3,5 및 7일) 저장한 다음 반응용액을 분액깔대기에 읆겨 chloroform \( 25 \mathrm{ml}\)를 가하여 2~3회 반복 추출하였다. Chloroform 추출액에 acetic acid \( 25 \mathrm{ml}\)과 포화 KI용액 \( 1 \mathrm{ml}\)를 가하여 암소에서 5분간 방치한 다음 증류수 \( 50 \mathrm{ml}\)를 가하여 \( 0.01 \mathrm{~N} \mathrm{Na}_{2}\mathrm{~S}_{2} \mathrm{O}_{3} \) 용액으로 적정하였다.</p> <h2>간 지질에 대한 과산화 억제효과</h2> <p>택사 추출물의 지질과산화 억제효과를 흰쥐의 liver homo-genate를 사용하여 in vitro에서 조사하였다. 즉, 흰쥐의 간을 적출하여 phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 7.4)로 균질화한 다음 균질액에 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) (\(1 \mathrm{M}\))와 \( \mathrm{FeSO}_{4}(50 \mathrm{mM}) \) 및 택사 추출물 \( 0.05 \mathrm{ml}\)를 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 40분간 배양한 후 생성된 thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 함량을 측정하였다.</p>