건양대학교병원에서는 108명의 가족성 저칼륨성 주기성 마비 환자 중 가장 심한 증상을 보인 3명과 정상인 3명을 대상으로 실험을 실시하였다. 실험은 IRB의 심의를 거친 후, 비복근에서 표본을 채취하였고, 이를 위해 임상자들을 침상에 눕혀서 안정을 취하게 한 후 극소마취를 시켰다. 또한, 세포를 정상 칼륨농도에 노출시키고 저칼륨 조건에서 골격근 세포의 탈분극을 유도하기 위해 두 가지 다른 칼륨 완충용액을 제조하여 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>대상</h2> <p>건양대학교병원 소아청소넌퐈에서 치료중인 108 명의 가족성 저칼륨성 주기성 마비 환자들 중 가장 심한 임상 증상을 나다낸 3명의 환자와 3명의 정상인으로부터 실험에 대한 설명 후 서면 동의를 받아 기관 연구 윤리위원회(IRB)의 심의를 거쳐 시행하였다. 환자의 \( \mathrm { n } \) 수에 대한 유형성 확인은 희귀질환 환자를 통한 실험의 선례를 참고하였다.</p> <h2>근육 표본 채취</h2> <p>피험자를 침상에 뉘인 상태로 안정을 취하게 하여 비복근(gastroenemius)의 생검부위를 lidocaine으로 극소마취 시킨뒤 외과적 절개를 통해 표본을 채취하였다.</p> <h2>칼륨 완충용액(potassium buffer)의 제조</h2> <p>셍기적 정상 세포의 칼륨농도에 세포를 노출시키기 위해 pI 7.2의 \( 4 \mathrm { mM } \) 칼륨 완충용액을 제조 \( (4 \mathrm { mM } \mathrm { KCl } , 145 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NaCl } , 1 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 2,0.5 \mathrm { mM } \mathrm { CaCl } 2,5 \mathrm { mM } \) Glucose, \( 10 \mathrm { mM } \) 3-( \( N \)-morpholino) propanesulfonic acid (MOPS)) 하였고, 저칼륨 조건을 통해 환자의 골격근 세포의 탈분극을 유도하기 위해 \( \mathrm { pII } 7.2 \) 의 \( 1 \mathrm { mM } \) 칼륨 완충용액을 제조 \( (1 \mathrm { mM } \mathrm { KCl } , 145 \) \( \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } , 1 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 2,0.5 \mathrm { mM } \mathrm { CaCl } 2,5 \mathrm { mM } \) Glucose, 10 \( \mathrm { mM } \) MOPS)한 후 멸균하여 사용하였다.</p> <h2>골격근 세포배양 및 칼륨 완충용액 처리</h2> <p>골격근 세포의 증폭과 분화는 기존에 실시된 실험 방법을 참고로 수행되있다. 이를 간략히 기술하면, 가속성 저칼륨성 주기성마비 환자와 정상인으로부터채취한 골격근 표본을 전처리 과정을 거친 후, \( 20 \% \) Fetal Bovine Serum (Thermo Scientific, South Logan, UT, USA)과 1 \% Penicillin Streptomycin (Thermo Scientific, South Logan, UT, USA)이 함유된 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Thermo Scientific, South Logan, UT, USA)을 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 95% air 및 5% \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator (Thermo Scientific, South Logan, UT, USA)내에서 배양하였다. 이후 골격근 세포를 DMEM (Thermo Scientific)에 2% Horse serum (Thermo Scientific, South Logan, UT, USA) 및 1% Penicillin Streptomycin (Thermo Scientific)을 첨가한 배지에 배양하며 5일간 분화를 유도하였다. 환자와 정상인의 골격근 세포 모두 12 passage 상태의 세포를 이용하여 각 농도의 칼륨 완충용액을 처리하고 30분 경과 후 실험에 사용하였다.</p>