과학 연구에서는 소포자 배양 시에 영향을 미치는 여러 요인을 밝히지 않았으며, 고추에서의 연구도 제한적이며 따라서 본 연구에서는 고추의 소포자 배양에 영향을 주는 전처리 및 배양 조건을 조사하였다. 실험에서는 배지의 sucrose 농도, 전처리 시 배양배지의 첨가, 배양 중 새 배지의 첨가, 및 배양 용기의 크기가 배의 발생과 발달에 미치는 영향을 조사하였고 고추의 소포자는 꽃봉오리로부터 추출되었으며, 전처리와 수확은 특정 방법에 따라 진행되었다. 연구를 통해 고추 소포자 배양에 필요한 조건을 파악하고자 한다.
<p>이상에서와 같이 소포자 배양 시 배의 발생은 여러 가지 요인들에 의해 영향을 받는 것으로 알려져 있는데 고추에서는 최근 본 연구자들이 소포자 배양에 의해 비교적 많은 수의 배를 획득하는데 성공하였으나 이와 같은 요인들이 배의 발생에 미치는 영향을 밝힌 연구는 이루어지지 않았다 (Kim et al. 2008; Lee et al. 2007; Park et al. 2005). 따라서 본 연구에서는 고추의 소포자 배양 시 배의 발생 및 발달에 적합한 전처리 및 배양 조건을 밝히기 위해 소포자의 나출 및 전처리 시 사용되는 배지의 sucrose 농도, 전처리 시 배양배지의 첨가, 배양 중 새 배지의 첨가, 및 배양 용기의 크기가 배의 발생과 발달에 미치는 영향을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>고추 (Capsicum annum L.)의 밀양재래 폼종을 사용하였으며, 모식물의 생육, 꽃봉오리의 수확 및 멸균은 선행연구 (Kim et al. 2008)에서와 동일하였다. 즉 모식물이 생육된 생장실의 온도는 \( 25 / 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) (명/암), 광주기는 \( 16 / 8 \mathrm { ~h } \) (명/암), 광도는 \( 200 \mu \mathrm { mol } \mathrm { m } ^ { -2 } \mathrm { ~s } ^ { -1 } \) 였다. 꽃봉오리는 2/4-3/4이 보라색으로 착색된 약이 들어있는 것들을 채취하여 \( 2 \% \) sodium hypochlorite 용액으로 10 분간 멸균하였다.</p> <h2>소포자의 나출 및 수확</h2> <p>꽃봉오리로부터의 소포자의 나출, 체세포 조직과 소포자의 분리, 및 소포자의 수확과 수세는 Park 등 (2005)의 방법에 따랐다. 즉 소포자 전처리 시에는 멸균된 30 개의 꽃봉오리를 blender cup에 넣고 전처리 배지 \( 10 \mathrm { mL } \)을 첨가하여 blending \( (16,000-18,000 \mathrm { rpm } ) \)하고, 이를 다시 vortexing하여 약 내 소포자를 나출 하였다. 구멍의 크기가 \( 75 \mu \mathrm { m } \)와 \( 35 \mu \mathrm { m } \)인 채를 이용해 크기가 큰 체세포 조직 파편들을 게거한 후 \( 1,000 \mathrm { rpm } \)에서 5 분 동안 원심 분리하여 소포자를 수확하였으며 동일한 방법으로 3 회 멸균수로 수세하였다. 약전처리 시에는 전처리한 약을 모아 blender cup에 넣고 전처리 배지 4 \( \mathrm { mL } \)을 첨가한 후 10 초씩 2 회 blending 하였으며 이후 소포자의 수확 및 수세는 소포자 전처리 시와 동일하게 하였다. 소포자 나출 시의 배지는 전처리 시와 동일한 조성의 배지인 당-기아배지 A를 사용하였다 (전처리 참조).</p>