Sprague-Dawley종 수컷 14마리를 반으로 나누어 일반 식이군과 고지방 식이군으로 실험하였으며 섭취량과 체중을 측정해 식이효율을 계산했다. 실험 후 혈액을 체취하고 복부 지방 조직의 중량을 측정하였다. 핵의 침윤현상과 염증현상을 관찰하고 채취한 지방의 함량은 Oil Red O staining을 이용하여 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물 및 식이</h2> <p>실험동물은 체중 \( 35 \sim 75 \mathrm{~g} \) 범위 내에 있는 Sprague-Dawley종 수컷 14마리를 (주)대한바이오링크(충청도, 한국)에서 분양 받아 부산대학교 동물실험실에서 사육하였다. 실험식이 시작 전 일반배합사료(Purina Co., Seoul, Korea)로 예비 사육한 후 평균체중이 유사하도록 무선배정방식(randomized complete block design)에 의해 일반식이군(ND group) 7마리와 고지방 식이군(HFD group) 7마리로 나눈 후 Table 1과 같이 6주간 사육하였다. 실험기간 중 식이근 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였으며, 매일 일정 시간에 공급하여 자유로이 섭취하게 하였다. 사육실의 온도는 \( 22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도는 \( 50 \pm 10 \% \)를 유지하였다. 식이섭취량과 체중은 6주간의 실험기간 동안 매주 일정한 시간에 반복 측정하였다. 식이효율(food efficiency ratio, FER)은 체중증가량을 같은 기간 동안의 식이섭취량으로 나누어 계산하였다.</p> <h2>혈액 및 장기의 적출</h2> <p>사육기간 완료 후 실험동물을 12시간 절식시키고 에틸에테르(ethyl ether)로 마취시킨 다음 쥐의 하복부에서 경추부 이하까지 피막을 벗겨낸 후에 심장대동맥에서 혈액을 채취하였으며, 다시 하복부부터 횡격막까지를 절개한 후에 심장대동맥에서 혈액을 채취하고 복부에서 지방조직을 적출한 다음 그 중량을 측정하였다. 그 후 쥐의 양측 뒷다리에 있는 Type-Ⅰ 근육인 가자미근을 각각 채취하여 중량을 측정한 후에 하나는 \( 4 \% \) formaldehyde에 담가 보관하였으며, 또 다른 하나는 액체 질소에 급속 냉각하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)에 냉동 보관하였다.</p> <h2>H\(\&\)E염색</h2> <p>핵의 침윤현상(nucleus infiltration)과 염증반응을 관찰하기 위하여 H\(\&\)E염색을 실시하였다. 포르말린으로 고정한 가자미근 조직을 흐르는 물에 충분히 수세한 후 저농도에서 고농도의 에탄올로 탈수시켰다. 자일렌으로 투명화 과정을 거친 후 파라핀으로 조직을 고정시키고 조직 절편기를 이용하여\( 4 \mu \mathrm{m} \) 두께로 절편을 제작하였다. 이를 슬라이드에 부착한 후 자일렌과 에탄올을 이용하여 파라핀을 제거하였다. Hematoxylin으로 핵염색을 한 후 증류수 등을 이용하여 수세하였으며, eosin을 이용하여 세포질을 염색하였다. 이후 슬라이드를 봉입(mounting)하여 광학현미경을 이용하여 \(400 \times\) 배율에서 관찰하였다.</p> <h2>Oil Red O 염색</h2> <p>가자미근의 세포 내의 지방 함량은 Oil Red O staining을 이용하여 측정하였다. 냉동 보관되었던 가지미근 조직을 이용하여 슬라이드를 제작하였다. 실험에 쓰일 용액을 준비하기 위하여 \( 100 \% \)의 propylene glycol (Sigma-aldrich, St. Louis, USA) \( 500 \mathrm{ml} \)에 Oil Red를 잘 섞은 다음 \(95 \sim 100^{\circ} \mathrm{C} \)까지 가열하여 가루가 완전히 녹도록 한 후 \( 25 \mu \mathrm{m} \)의 여과지에 걸러 Oil Red O 용액을 만들었고, propylene glycol을 증류수를 희석하여 \( 85 \% \)의 농도로 만들었다. 마지막으로 hematoxylin과 증류수를 \( 1 \mathrm{~g} / 50 \mathrm{ml} \)의 비율로 섞어 hematoxylin 용액을 만들었다.</p> <p>슬라이드를 60분 동안 실온에서 건조시키고, 그때 10분간 얼음에 넣어뒀던 \( 10 \% \) formaldehyde를 슬라이드의 조직 위에 떨어뜨려 고정시켰다. 고정이 끝난 후에는 즉시 증류수로 씻어내고 다시 실온에서 건조시켰다. \( 100 \% \)의 propylene glycol에 슬라이드를 \( 2 \sim 5\)분간 담가두어 Oil Red O 염색 시에 수분이 함유되는 것을 피하도록 하였다. \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)의 incubator에서 미리 데워진 Oil Red O 용액에 1시간 동안 염색을 하였으며, 염색이 끝난 후 \( 85 \% \) propylene glycol 용액에 5분간 담가두고 5분후 증류수로 슬라이드를 씻어낸 뒤 30초간 hematoxylin 용액으로 염색을 하였다. 바로 흐르는 수돗물에 1분간 hematoxylin 용액을 세척한 후 슬라이드를 증류수에 담다 두었다. 마지막으로 aqueous mounting medium (Dako, Carpinteria, (A, USA)로 슬라이드에 cover glass를 고정시킨 후 현미경으로 관찰하였다. 지질은 붉은색으로 염색되어 관찰되었으며, 붉은색으로 염색된 부분을 전체의 관찰 면적으로 나누어 정량화 하였다.</p>