배지 내에셔 균주를 개발하였는데 이 균주를 통하여 콜레스테롤을 낮출 수 있음이 확인 되었다. 실험연구는 랫트 실험을 이용하여 콜레스테롤을 낮주는 기능을 하는 균주는 CBT 1702와 1209임을 알 수 있었다. 그리고 가열처리하여 살균한 유산균은 in viroo에서 콜레스테롤을 낮출 수 있다는 연구보고는 현재로써는 없다. 다만, 이들의 균을 가열 및 사멸을 시킨 경우에는 혈중 콜레스테롤을 효과적으로 낮출 수 있다고 확인 되었다.
<h1>서 론</h1> <p>사람의 혈중 콜레스테롤 농도는 포화지방으로부터의 콜레스테롤 생합성, 순환 중 콜레스테롤의 제거, 식이 콜레스테롤의 흡수, 담즙과 대변으로의 배출 등에 의하여 조절된다. 혈중 콜레스테롤과 중성지방의 농도가 높아지는 질병인 고지혈증은 고혈압, 흡연, 비만 및 지질섭취에 의하여 유도될 수 있다. 일반적으로 고지혈증은 심장 질환과 동맥경화증의 원인이 될 수 있다. 고지혈증 환자들은 많은 약들을 복용하는데 콜레스테롤 흡수의 억제, 대사와 배출을 촉진, 콜레스테롤 합성저해 등의 기작으로 콜레스테롤을 저하시키는 약들이다. 그러나 이러한 약들에서는 간 기능 저하, 근육통, 지용성 비타민의 결핍 등의 부작용을 유발한다.</p> <p>그러므로 부작용이 없이 혈중 콜레스테롤을 저하시킬 수 있는 식이요법에 대한 개발이 시도되고 있다. 저콜레스테롤과 포화지방산 함유 식품의 섭취 등의 식이요법이 시도되고 있으나 혈중 콜레스테롤의 저하효과는 불충분하다.</p> <p>유산균은 사람의 장 건강에 도움을 주는 것으로 잘 알려져 있으며 유산균의 혈중 콜레스테롤 저하기능도 동물과 사람의 실험을 통하여 연구되고 있다. 유산균은 담즙산 및 콜레스테롤과 결합하여 외부에서 섭취된 콜레스테롤 흡수를 저하시키거나 자체 생산되는 담즙산 분해효소에 의한 탈결합(deconjugation)을 통하여 콜레스테롤을 소모시키는 방법으로 혈중 콜레스테롤을 낮춘다.</p> <p>최근에 우리는 배지 내에셔 콜레스테롤을 낮추는 균주를 개발하였다. 본 연구에서는 랫트 실험을 통하여 screening한 CBT 1702와 1209 균주가 콜레스테롤을 낮추는 기능을 가진 것을 확인하였다. 또한 가열살균한 유산균이 in viroo에서 콜레스테롤을 저하시킨다는 보고는 아직 없는데 이의 균들을 가열하여 사멸시킨 경우 혈중 콜레스테롤 저하에 더욱 효과적인 것을 알았다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주와 in vitro assay</h2> <p>본 실험에서 사용한 Lactobacillus rhamnosus CBT 1702, Lactobacillus plantarum CBT 1209 균주와 다른 유산균은 Cellbiotech Co. (Kimpo, Korea)의 보관균주를 사용하였다. 또한 모든 유신균은 MRS 배지(Difco)에서 계대배양하여 보존하였다.</p> <p>콜레스테롤 흡수와 담즙산의 해리를 측정하기 위해, 균은 \( 0.2 \% \) sodium thioglycolate, \( 0.2 \% \) sodium taurocholate, \( 0.3 \% \) water-soluble cholesterol, \( 0.05 \% \) Tween 80 을 추가한 MRS 액체 배지에서 24 시간, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 혐기적 조건에서 정치 배양하였다. 배양 후, 세포를 \( 12,000 \times g \) 에서 20 분 동안 원심 분리하여 배양 배지로부터 분리하고, 상층액의 콜레스테롤의 양을 측정하기 위해 효소 kit(Asan Pharmaceutical Co., Korea)를 사용하였다. 배양 배지 내의 해리된 담즙산과 결합 상태의 담즙산 농도는 O-phthalaldehyde를 사용하여 측정하였다.</p> <p>균체 회수에서 Lactobacillus rhamnosus CBT 1702 균주와 Lactobacillus plantarum CBT 1209 균주를 MRS 액체 배지에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 18시간 동안 각각 배양한 뒤, \( 500 \mathrm { xg } \)에서 15분 동안 원심분리하여 증류수로 세척하고 \( 1: 1 \) 비율로 하여 \( 10 \% \) skim milk 용액에 100배 농축되게 현탁시켰다. 농축시킨 균 액은 균이 균일하게 되도록 잘 섞고, \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3일간 동결건조시켰다. 여기서 얻은 균체 를 LLAB(lyophilized lactic acid bacteria, 균주 1702 와 1209를 1\(:\)1비율로 함유)라고 하였으며 가열살균한(heat\(-\)killed)LAB (가열살균 균주 1702 와 1209 를 1\(:\)1비율로 함유)를 HKLAB라고 하였다. 가열살균은 \( 110 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15분간 처리하였으며 그 뒤 동결건조시켰다. 동결건조된 가루는 LLAB의 CFU (colony forming unit) 측정과 HKLAB의 계수 측정(hematocytometic counting)을 위한 분석에 사용하였다.</p>