상추 형질전환체 육성 과정에서 비타민 C를 생합성하는 GalUR 유전자를 사용하였고, 재분화 선발배지에 치상하여 형질전환체를 선발하였다. 재분화된 형질전환체에서 PCR 분석을 실시하였고, 식물체 본엽에서 genomic DNA를 추출하였다. 분석 결과 형질전환을 하지 않은 상추에서는 GalUR 유전자 단편이 증폭되지 않은 반면, 형질전환된 상추에서는 모두 약 \( 1.2 \mathrm { ~kb } \) 크기의 GalUR 유전자의 단편이 증폭된 것으로 확인되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>상추 형질전환체 육성</h2> <p>화횽적축면 상추 형질전환을 위해 비타민 C를 생합성하는 GalUR 유전자를 사용하였다. \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) Kanamycin과 200 \( \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) Lilacillin이 첨가된 재분화 (MS, sucrose \( 3 \%, \mathrm { BA } 0.5 \) \( \mathrm { mg } / 1, \mathrm { NAA } 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) ) 선발배지에 치상하여 형질전환체를 선발하였다 (Kim and Kwon 1999). 재분화 선발배지에서 3주 정도 되었을 때 callus에서 신초가 형성되기 시작하였고, 4주 정도 경과 후 식물체로서 모습을 갖춘 신초들이 관찰되었다 (Fig. 3A). 형성된 신초들을 callus와 함께 또는 신초만 자엽절편체와 분리하여, 다시 재분화 선반배지 또는 생장조절제가 첨가되지 않은 선발배지에 계대배양을 하였다 (Fig. 3B). 계대배양 후 녹색을 띠며 잘 자라는 신초가 있는 반면, 성장을 멈추고 백화되는 신초도 많이 발생되었다 (자료 미제시). 더 확실한 선발을 위하여 발근 배지에 \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { Kanamycin } \)을 첨가하여 뿌리를 유도 하였는데, 뿌리가 형성되지 못하고 백화 되고 성장을 멈추는 개체들도 있었지만, 대부분 유도된 녹색의 신초들은 발근이 잘되었다. 발근된 식물체들을 지피포트에 옮겨 안정적으로 순화를 하고 본엽이 전개되면서 보다 큰 포트로 이식하여 순화실에서 순화하였다 (Fig. 3 C). 차후에 유전자의 도입이 확인된 상추 형질전환 개체들을 2회에 걸쳐 큰 포트로 이식하고 하우스에서 자가수분하여 \( \mathrm { T } _ { 1 } \) 종자를 채종하였다 (Fig. 3D).</p> <h2>PCR 및 Southern 분석</h2> <p>재분화된 형질전환체에서 Kanamycin 내성을 갖는 식물체가 정상적으로 자라는 것을 확인함으로써 형질전환 여부를 대략 판단할 수 있었고, 더 정확한 유전자 분석을 하기 위하여 PCR 분석을 실시하였다. 순화된 식물체 본엽에서 genomic DNA를 추출하였다. PCR 검정을 한 결과 형질전환을 하지 않은 상추에서는 GalUR 유전자 단편이 증폭되지 않았으나, 상추 형질전환체에서는 모두 약 \( 1.2 \mathrm { ~kb } \) 크기의 GalUR 유전자의 단편이 증폭된 것으로 확인되었다 (Fig. 4). GalUR 유전자가 도입된 상추 형질전환체 \( \mathrm { T } _ { 0 } \) 총 18 개체를 확보하였으며 그 형질전환 효율은 약 \( 0.36 \% \) 였다.</p>