곤충은 병원체 침입에 대응하여 항세균성 펩타이드를 생산하며, 이는 여러 동물에서 확인되는 적극적인 면역 반응이다. 항세균성 단백질은 큰 분자량의 attacin을 비롯해 cecropin, sttacin, lysozyme 등이 곤충에서 분리되었고, 이들은 그람 음성 세균에 특이적인 항 세균 활성을 보인다. 그 중에서도 lysozyme은 세균의 세포벽 성분을 가수분해하는 기능을 수행하며, 다른 항세균성 펩타이드와 달리 발현 수준이 수일 동안 유지되는 특성을 갖는다. 그 외에도 defensin, moricin 등 다양한 항세균성 단백질이 분리 및 보고되었지만, 진균 특이적인 항 진균성 단백질의 발견은 아직 보고되지 않았다.
<h1>서 론</h1> <p>곤충은 병원체의 침입에 대한 혈 림프의 유도 방어 수단으로 항 세균성 펩타이드를 생산하여 적극적 면역반응을 수행한다. Boman 등이 처음으로 Hyalophora cecropia에서 cecropin, sttacin 및 lysozyme등의 항 세균성 단백질을 분리한 이후, 곤충을 포함한 여러 동물에서 수 많은 항 세균성 단백질이 분리되고 있다. 지금까지 분리된 항 세균성 단백질은 분자량이 작은 펩타이드 형태로서 숙주 특이성을 가지며 면역원의 종류, 양 그리고 감염 경과 시간에 따른 항 세균 활성이 서로 다르게 나타난다고 보고되고 있다.</p> <p>H. cecropia에서 처음으로 분리된 cecropin은 4kDa 의 항세균성 펩타이드로서 7종이 보고되고 있는데 이중에서 주로 그람 양성 및 음성 세균에 활성을 갖는 cecropin A, B 및 D 형태가 잘 알려져 있다[18]. 한편, Schmidt 등이 H. cecropia에서 발견한 hemoline은 면역반응시 면역원을 인지하여 혈 림프에 존재하는 단백질과 면역원의 안정화를 위한 복합체 형성에 관여하여 초기 단계의 면역과정에 관여하는 항 세균 단백질로 알려져 있다. Hultmark 등이 발견한 attacin은 cecropin 계의 항세균 단백질 보다 큰 분자량을 갖는 그람 음성 세균에 특이적인 항 세균 활성을 나타낸다. 또한, 대부분의 인시목 곤충에서 발견되는 내재적 항 세균 단백질 중에서 lysozyme은 cecropin이 작용한 후, 세균의 세포벽 성분을 가수분해하는 것이 주요 기능으로 다른 항 세균성 펩타이드와 달리 발현 수준이 수일 동안 유지되는 특성을 갖는다.</p> <p>한편, 현재까지 곤충에서 분리, 보고된 항 세균성 단백질로는 defensin, moricin, manduca D, diptercin A, abaecin, 등이 보고되고 있지만, 이러한 항 세균 단백질은 그람 음성 및 양성세균에 특이적인 것으로 진균 특이적인 단백질, 즉 항 진균성 단백질의 발견은 거의 보고되고 있지 않다. 따라서 본 연구는 annealing control primer (ACP)-based PCR 기술을 이용하여 누에에 Aspergillus niger를 감염 시켜서 유도 발현되는 항진균성 단백질을 암호화하는 유전자의 클로닝과 동정을 목적으로 수행되었다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>면역 유도</h2> <p>본 연구에 이용된 누에는 표준 사육기준에 따라서 사육된 누에를 농촌진흥청 농업과학원으로부터 분양 받아 A. niger (KCCM 6014)의 감염을 위한 기주 곤충으로 사용하였다. 면역원인 A. niger 는 potato dextrose agar 배지(Himedia, India)에서 순수분리 하여 5령기 누에 유충의 체강에 약 \( 6 \times 10 ^ { 8 } \) colony per unit로 주사하여 면역반응을 유도시킨 뒤 6시간이 경과한 후에 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 냉동 보관하여 RNA 추출용 시료로 사용하였다.</p>