참치 심장 \( 70 \% \) ethanol 추출물을 dichloromethane으로 분획한 후 항염증 효과를 확인하기 위해 RAW 264.7세포에 LPS로 염증을 유도시켜 염증 매개성 물질인 NO와 pro-inflammatory cytokine의 분비량의 변화를 확인한 결과, 참치 심장 dichloromethane 분획물을 처리하였을 때, 농도 의존적으로 NO의 생성량을 감소시키는 것을 확인하였다. 조직학적 변화를 확인한 결과에서는, 진피와 경피의 두께가 감소하였으며 진피내 mast cell 침윤이 감소되는 것을 확인할 수 있있고, 따라서 참치 심장 dichloromethane 분획물이 효과적인 염증 예방 및 부종 완화를 위한 치료제로서 활용 가능성을 확인하였다.
<h2>귀부종 억제 효과 및 조직 관찰</h2> <p>염증 발생시 인체 내에서는 생리학적 및 면역학적인 반응 등이 진행되며, 발열이 일어나면서 혈관 확장 및 부종 등의 생리 현상이 일어나게 된다. 또한, 면역세포인 mast cell이 염증반응에 의해 활성화 되면 여러 가지 pro-inflammatory 매개물질들의 분비를 유도한다. 따라서 염증반응에 의한 부종 완화 효과를 확인하기 위해 참치 심장 dichloromethane 분획물을 처리하여 실험을 진행하였다. 먼저, positive control로 사용된 합성 스테로이드제인 prednisolone은 10 및 50 \( \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \).body weight로 투여하였고, dichloromethane 분획물을 10,50 및 \( 250 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) ·body weight가 되도록 \( 200 \mu \mathrm { l } \)씩 투여하였다. Croton oil로 귀 염증을 유발한 후, 각 농도로 sample을 투여하였을 때 control과 비교하여 모든 농도에서 유의적으로 귀 두께가 감소한 것을 확인할 수 있었다. 특히, dichloromethane 분획물을 \( 250 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \).body weight 처리구 와 positive control인 prednisolone을 \( 50 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 처리구를 비교하였을 때, 유사하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. Dichloromethane 분획물의 부종 억제 효과를 조직 관찰로 확인한 결과, control에서는 귀 조직의 경피 및 진피 두께가 증가하는 것을 확인할 수 있었고, prednisolone 과 dichloromethane 분획물을 처리한 경우에는 경피 및 진피 두께가 얇아진 것을 확인할 수 있었다. 조직 내 mast cell 침윤 정도를 확인하기 위해서, toluidine-blue 염색하여 확인하였다. 그 결과, croton oil을 처리하였을 때, mast cell 침윤 이 많이 진행된 것을 확인할 수 있었지만, dichloromethane 분획물을 처리하였을 때, 조직내의 mast cell의 침윤을 억제시키는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 dichloromethane 분획물이 염증을 예방하거나 치료하는 항염증제로 이용 가능성을 보여주었다.</p> <h1>요약</h1> <p>본 실험에서는 참치 심장 70 \( \% \) ethanol 추출물을 dichloromethane으로 분획한 후 항염증 효과를 확인하기 위해 RAW 264.7세포에 LPS로 염증을 유도시켜 염증 매개성 물질인 NO와 pro-inflammatory cytokine의 분비량의 변화를 확인하였다. 그 결과, 참치 심장 dichloromethane 분획물을 처리하였을 때, 농도 의존적으로 NO의 생성량을 감소시키는 것을 확인하였으며, 특히, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 가장 높은 억제효과를 나타내었다. 따라서 dichloromethane 분획물의 억제 활성이 세포사멸에 의한 감소인지 알아보기 위해서 MTT assay를 하였을 때, 세포 생존율이 dichloromethane 분획물을 PBS 처리군과 비교하였을 때 유의적인 차이가 나타나지 않음을 확인하였고, 이를 통해 dichloromethane 분획물이 NO 및 전염증성 cytokine의 분비를 효과적으로 억제할 수 있는 물질임을 확인할 수 있었다. Dichloromethane 분획물을 처리하였을 때, 염증 관련 단백질 발현 정도를 western blot을 통해 확인한 결과, LPS에 의해 발현이 증가된 \( \mathrm { NF } - \kappa B \), iNOS및 \( \mathrm { COX } -2 \)는 분획물을 처리함으로써 농도 의존적으로 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 dichloromethane 분획물의 처리가 인산화된 MAPKs의 발현을 저해함을 확인하여 참치 심장 dichloromethane 분획물이 \( \mathrm { NF } - \kappa B \)와 MAPKs의 발현을 억제시킴으로써 NO 및 pro-inflammatory cytokine 의 분비량을 감소시킴을 확인할 수 있었다. 동물 모델에서는, dichloromethane 분획물을 처리하였을 때 croton oil에 의한 귀 부종이 농도 의존적으로 감소함을 확인하였고, 특히, \( 250 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도로 투여시 시판 항염증제인 predinisolone을 \( 50 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \)·body weight 농도로 투여한 그룹 과 유사한 효과를 나타내었다. 조직학적 변화를 확인한 결과에서는, 진피와 경피의 두께가 감소하였으며 진피내 mast cell 침윤이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 참치 심장 dichloromethane 분획물이 효과적인 염증 예방 및 부종 완화를 위한 치료제로서 활용 가능성을 확인하였다.</p>