본 연구에서는 다양한 화학물질들을 추가하여 유전자를 시료에 전이시켰다. 이 과정에서 GUS 유전자를 전이시키기 위해 cefotaxim이 첨가된 배지에서 세척 후, 체세포배 발아배지로 옮겨 7일간 암배양을 진행하였다. 그 후 유전자 도입여부를 확인하기 위해 GUS transient assay를 시행하였다.
<p>\( 50 \mu \mathrm { M } \) 2,4-D \( 3 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \), sucrose \( 30 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \), L-proline \( 300 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 등이 첨가되고 phytagel \( 2.5 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 로 고형화된 \( \mathrm { SH } \) 배지 \( ( \mathrm { pH } 5.2 \) 로 읆겨 \( 25 \pm 2 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 암상태로 3일간 공동배양하여 유전자가 시료로 전이되도록 하였다.</p> <h3>GUS유전자 도입 확인</h3> <p>GUS 유전자를 전이시키고자 균과 공동배양된 시료를 cefotaxim \( 250 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 이 쳠가된 \( \mathrm { SH } \) 액체배지로 세쳑 후 멸균된 filter paper상에서 시료에 물어 있는 세척액을 제거하여 Figure \( 1 \mathrm { ~B } \) 에서 보는 것과 같이 cefotaxim \( 250 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 이 첨가된 체세포배 발아배지 (SH component + IBA \( 0.1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) BAP \( 1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) maltose \( 30 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) agarose \( 4 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } , \mathrm { pH } \) 5.7)로 옮겨, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 7일간 암배양하였다. 그 후 명배양조건으로 옮겨 시료의 일부를 Jafferson 등 (1987)에 따라 GUS transient assay에 의해 유전자 도입여부를 확인하였다.</p>