C.glutamicum의 N-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase와 glucosamine-6-phosphate deaminase를 사용하여 fructose-6-phosphate에서 2단계 반응을 거쳐 생합성되는 GlcNAc의 탄소흐름을 강화하기 위해, \( \operatorname { nagAB } \)와 \( \operatorname { nagE } \) 결손인 C.glutamicum의 개발이 적합하다고 할 수 있다.
<h2>결과 및 고찰</h2> <h3>염색체내 \( \operatorname { nagAB } \)와 \( \operatorname { nagE } \) 결손 \( C \). glutamicum 개발</h3> <p>\( \mathrm { GlcNAc } \)은 해당과정의 대사물질인 fructose-6-phosphate에서 2단계 반응을 거쳐 생합성 될 수 있다. 포도당에서 \( \mathrm { GlcNAc } \)로 가는 탄소흐름이 강화된 기반균주를 개발하기 위해 대사 물질들의 역반응과 곁가지 경로를 차단할 필요가 있다. \( C \). glutamicum에는 \( N \)-acetylglucosamine-6-phosphate의 탈 아세틸화(deacetylation)를 촉매하는 \( N \)-acetylglucosamine-6-phosphate deacetylase 와 glucosamine-6-phosphate의 탈 아미노화(deamination)를 촉매하는 효소인 glucosamine-6-phosphate deaminase가 존재하기 때문에, 염색체내 해당 유전자인 \( \operatorname { nagA } \)와 \( \operatorname { nagB } \)를 제거할 필요가 있다. \( \operatorname { nagA } \) 상류와 \( \operatorname { nagB } \) 하류부분의 \( \mathrm { DNA } \) 단편이 연결된 벡터 \( \mathrm { pK } 19- \triangle \mathrm { nagAB } \)를 제작한 후, 야생형 \( C \). glutamicum에 도입하고 2회의 상동성 재조합을 유도하여 최종적으로 \( n a g A B \) 유전자가 결손된 KB110 균주를 제작하였다. \( \mathrm { PCR } \)을 이용하여 분석한 결과, \( \mathrm { KB } 110 \) 균주의 경우 야생형 균주와 비교하여 약 \( 1.95 \mathrm { ~kb } \) 크기의 \( \mathrm { DNA } \) 단편이 감소하였으며, 이는 \( \operatorname { nagAB } \) 유전자가 결손되었음을 보여준다. N-Acetylglucosamine-6-phosphate는 \( N \)-acetylmannosamine-6-phosphate epimerase (유전자 nanE) 효소촉매에 의해 \( N \)acetylmannosamine-6-phosphate로 전환되는 곁가지 경로가 \( C \). glutamicum에 존재한다. 이 경로를 차단하기 위하여 염색체상에서 \( \operatorname { nanE } \) 유전자를 결손한 균주를 개발하였다. 먼저 \( \operatorname { nan } E \) 유전자의 상류 및 하류 부분의 \( \mathrm { DNA } \) 단편을 함유한 \( \mathrm { pK } 19- \triangle \operatorname { nan } E \)를 제작하고, 이를 \( \mathrm { KB } 110 \)에 형질전환하여 \( \operatorname { nanE } \) 유전자가 결손된 KG208 균주를 제작하였다. Fig. 2B에서 보는 봐와 같이 KG110 균주와 비교하여 KG208 균주는 \( \operatorname { nanE } \) 유전자가 결손되어 \( \mathrm { DNA } \) 단편이 약 \( 0.74 \mathrm { ~kb } \) 감소된 것을 \( \mathrm { PCR } \)로 확인하였다.</p>