남해군에서 생산된 마늘을 가공하고, 다양한 한약재와 혼합하여 추출한 물질을 둔산한방병원에서 제공받아 실험에 사용하였다. 이를 통해 얻은 시료의 알코올 탈수소효소(ADH) 활성도를 측정하는데, 특정 용액과 함께 반응시킨 후 ADH를 첨가하고 흡광도를 측정하였다. 이때, ADH 활성은 대조구에 대한 상대적 활성(%)로 표현하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료</h2> <p>마늘은 남해군에서 생산된 마늘을 산지로부터 구입하여 껍질을 제거한 후 거칠게 마쇄한 다음 시료 중량에 대해 10 배의 증류수를 가하여 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 수욕상에서 3시간 동안 환류냉각하면서 2회 반복 추출하였다. 추출물은 여과 후 진공동결건조기로 건조시켜 마늘 열수추출물을 얻었으며, 한약재는 나복자 \( (100 \) \( \mathrm { g } ) \), 단삼 \( (60 \mathrm { ~g } ) \), 목향 \( (20 \mathrm { ~g } ) \), 백출 \( (60 \mathrm { ~g } ) \), 별갑 \( (100 \mathrm { ~g } ) \), 복령 \( (60 \) \( \mathrm { g } ) \), 사인 \( (40 \mathrm { ~g } ) \), 인진 \( (100 \mathrm { ~g } ) \), 자감초 \( (20 \mathrm { ~g } ) \), 저령 \( (40 \mathrm { ~g } ) \), 지실 \( (40 \) \( \mathrm { g } ) \), 창출 \( (60 \mathrm { ~g } ) \), 택사 \( (60 \mathrm { ~g } ) \) 를 혼합하여 \( 5 \mathrm { l } \) 의 물을 가하여 2시간동안 추출하여 총량이 \( 3.51 \) 되도록 하여 레토르트 파우치에 포장된 것을 대전대학교 둔산한방병원으로부터 제공받았으며, 이를 진공동결건조시킨 건조물을 \( -40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 동결고에 보관해두고 실험에 사용하였다.</p> <h2>마늘 및 한약재의 알코올 대사효소 활성 측정</h2> <p>시료의 ADH (alcohol dehydrogenase) 활성도는 Hwang 등과 Racker의 방법을 변형하여 에탄올 \( 0.1 \mathrm { ml } , 2 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도의 NAD (nicotine adenine dinucleotide) 수용액 \( 0.5 \mathrm { ml } \), 시료액 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 차례로 첨가한 다음 \( 0.01 \mathrm { M } \) gly-cin- \( \mathrm { NaOH } \) 완충액 \( \left ( \mathrm { pH } \right . \) 8.8)으로 최종부피를 \( 2 \mathrm { ml } \) 로 한 후 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온수조에서 10 분간 반응시켰다. 이 반응액에 ADH (Sigma, \( \mathrm { USA) } 0.25 \mathrm { ml } \) 를 가하였으며, 대조구는 ADH 대신에 동량의 완충액을 첨가하여 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. ADH의 활성은 대조구에 대한 상대적인 활성(%)으로 나타내었다.</p>