에틸아세데이트 분획, 에틸아세데이트 분획, 물 분획을 이용하여 카카오 분획물의 superoxide anion radical 소거능과 \( \mathrm{Cu}^{2+} \), \( \mathrm{Fe}^{2+} \)이온 첨가에 따른 지방산패 억제능을 비교하였다. 소거능은 에틸아세테이트 분획물이 가장 강했으며, 분획물의 농도 증가에 따라 활성이 증가함을 확인할 수 있었다. \( \mathrm{Cu}^{2+} \)이온에 비해 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)이온을 첨가했을 때 지방산패 억제능이 더 높았으며, 특히 에틸아세테이트 분획물의 지방산패 억제능이 가장 우수했다.
<h2>카카오 분획물의 superoxide anion radical 소거능 확인</h2> <p>카카오 분획물의 superoxide anion radical 소거능은 Fig. 2와 같이 나타내었다. 각 분획물의 superoxide anion radical소거능은 클로로포름 분획물이 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 53.9 \% \)의 소거능을 보였고, 에틸아세테이트 분획물이 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서\( 76.09 \% \), 부탄올 분획물이 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 51.4 \% \), 물 분획물이 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \(55.7\%\)를 나타내었으며, 대조군인 Vit.C에서는 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 78.7 \% \)의 소거능을 나타내었다. 각 분획물들의 \( \mathrm{IC}_{50} \)값은 클로로포름이 \( 726.36 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), 에틸아세테이트 분획물은 \( 21.7 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), 부탄올 분획물은 \( 36.8 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), 물 분획물은 \( 79.1 \) \( \mu \mathrm{g} /\mathrm{ml} \)로 측정되었다. 카카오 분획물 중 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 소거능을 나타내었다. 또한 분획물의 농도 증가에 따라 활성이 증가함을 확인할 수 있었으며, 에틸아세데이트 분획물의 경우 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 90 \% \)의 활성을, 부탄올 분획물의 경우 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 80 \% \)의 활성을, 물 분획물의 경우 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 80 \% \)의 활성을 나타내어 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 가장 활성 증가가 높음을 확인할 수 있었으며, superoxide anion radical 소거능의 경우 대조군인 Vit.C보다 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.</p> <h2>카카오 분획물의 \( \mathrm{Fe}^{2+}, \mathrm{Cu}^{2+} \)의 첨가에 따른 지방산패 억제능 확인</h2> <p>2 -thiobarbuturic acid reactive substance (TBARS)는 불포화 지방산이 자동 산화하는 과정 중 지방산화의 2차 산물인 malonaldehyde (MA)가 발생하며, 이는 높은 반응성을 가지고 있다. 이러한 malonaldehyde (MA)는 2-thiobarbuturic acid (TBA)시약과 반응하는 주된 물질이며, \( 531 \mathrm{~nm} \)에서 형광을 갖는 물질을 만든다. 생체 내에서 세포막에 존재하는 인지 질 및 닫지질과 혈관에 존재하는 지질은 산소와 결합하여 과산화물을 만들고 이들의 연속반응에 의하여 alcohol류, aldehyde류, ketone류 등을 생성하여 생체 내에서 DNA를 손상시켜 암을 유발하기도 하며, 세포의 노화와도 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 지방산패의 억제 효과를 측정하기위해 산화촉진제인 \( \mathrm{Fe}^{2+}, \mathrm{Cu}^{2+} \)이온첨가에 따른 카카오 분획물들의 지방산패 억제능을 측정한 결과 Fig. 3, 4와 같이 나타내었다. \( \mathrm{Fe}^{2+} \)를 첨가한 군에서는 vitamin \( \mathrm{C} \)의 경우 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 57 \% \)의 저해능이 나타난 반면, 에틸아세테이트층은 \( 50 \mu \mathrm{g} / \)\( \mathrm{ml} \)에서 \( 64 \% \)의 억제능을 나타내어 vitamin C보다 높은 활성을 나타내었고, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 분획물 모두 \( 100 \mu \mathrm{g} /\mathrm{ml} \)에서 \( 50 \% \)이상의 저해능이 확인되었다. \( \mathrm{Cu}^{2+} \)를 첨가한 군에서 vitamin C의 경우 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 52 \% \)의 억제능을 나타낸 반면, 에틸아세테이트 분획물, 물 분획물의 경우 \( 1,000 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 60 \% \)의 저해능을 나타내었다. \( \mathrm{IC}_{50} \)값으로 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)를 첨가한 군에서는 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 분획물의 \( \mathrm{IC}_{50} \)값은 각각 \( 99.78 \mu \mathrm{g} /\mathrm{ml}\), \(27.59 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(68.13 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), \(647.84 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 나타났고, vitamin C의 \( \mathrm{IC}_{50} \)값은 \( 28.02 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 나타났으며, \( \mathrm{Cu}^{2+} \)를 첨가한 군에서는 에틸아세테이트 분획물의 \( \mathrm{IC}_{50} \)값은 \( 833.3 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 나타난 반면, vitamin C는 \( 752.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 나타났다. 상대적으로 \( \mathrm{Cu}^{2+} \)보다 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)첨가의 지방산패 억제능이 더 높음을 확인하였으며, 특히 에틸아세테이트 분획물의 \( \mathrm{Fe}^{2+} \)이온 첨가에 따른 지방산패 억제능이 가장 탁월함을 확인할 수 있었다.</p>