본 장에서는 실험 재료 및 방법을 소개한다. 실험 재료 중 하나인 홍국은 백미(안계 황토백미)에 홍군 균주 Monascus purpureus를 접종 및 배양하여 만들었으며, 홍국김치 제조 시에는 홍국쌀풀을 사용하였으며, 마쇄후 후 동결 건조하여 분말화하였다. 실험동물은 난괴법을 통해 총 여섯 군으로 나눴으며 \(8\)마리씩 \(4\)주간 사육했다. 이후 실험에서 혈장 채취는 Heparin 처리가 된 주사기를 이용해 복부 대동맥에서 추출하였으며, 혈장 분석은 효소법에 의한 kit를 사용해 흡광도 측정과 auto dry che-mistry analyzer을 통해 이루어졌다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 사용한 배추, 무, 마늘, 고춧가루, 생강 등은 (주)정안농산으로부터 공급받아 사용하였고, 소금은 천일염과 한주 소금을 사용하였다. 실험에 사용된 일반시약은 Sigma(USA) 제품 및 Junsei (Japan) 제품으로 특급품을 사용하였다.</p><h2>홍국 제조 및 홍국김치 제조</h2><p>수침시켜 멸균한 시판 백미(안계 황토백미)에 계명대학교 TMR 센터에서 분리하여 동정한 홍군 균주 Monascus purpureus를 접종하여 \( 25 \sim 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12일간 정치 배양한 후, 수분함량이 \( 10 \% \) 이하가 되도록 \( 65^{\circ} \mathrm{C} \)에서 건조한 다음 분말화하여 사용하였다. 배추는 먼저 4등분하여 \( 10 \% \) 소금물에 12시간 절인 후 3회 세척하여 물기를 제거한 다음 Table 1과 같은 재료 혼합비로 김치를 제조하였다. 특히 절임 배추 \( 100 \mathrm{~g} \)에 대하여 홍국 쌀풀은 \( 0,2.5,5.0 \mathrm{~g} \)씩 각가 침가하였으며, 이때 홍국쌀풀은 분말 \( 20 \mathrm{~g} \)을 물 \( 100 \mathrm{~mL} \)에 첨가하여 잘 풀어 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3분간 가열하여 풀로 쑨 다음 사용하였으며, 제조된 홍국김치를 마쇄기로 마쇄한 후 동결 건조하여 분말화하였다. 이 때 배추김치로부터 분말김치를 만들어 낼 수 있는 수율은\( 44.2 \% \)이었다.</p><h2>실험사료의 구성</h2><p>정상식이군의 식이 구성은 casein \( 20 \% \), AIN-76 mineral mix\( 3.5 \% \), AIN-76 vitamin mix \( 1 \% \), corn oil \( 4 \% \), DL-methionine \( 0.18 \% \), alpha-cellulose \( 5.0 \% \), corn starch \( 15 \% \), 나머지는 sucrose로 \( 100 \% \)를 구성하였으며, 총열량 중 단백질, 지방, 탄수화물은 각각 \( 21 \%, 14 \%, 65 \% \)로 구성되었다. 또한 고지방식이군은 정상식이군에 \( 10 \% \) lard, \( 1 \% \) cholesterol, \( 0.25 \% \) sodium cholate를 더 첨가하여 공급하였다.</p><h2>실험동물 및 식이</h2><p>실험동물은 체중 \( 80 \sim 100 \mathrm{~g} \)의 4주령 Sprague-Dawley계수컷 횐쥐를 온도 \( 21 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 55 \pm 10 \% \)를 유지하고 밤과 낮의 길이를 12시간씩 인공조명으로 조절하여 사육하였으며 사료와 물은 충분히 공급하였다. 일주일간 적응시킨 후 난괴법(randomized complete block design)에 의해 I군(정상식이군), Ⅱ군(정상 식이+홍국 \( 5 \% \) 첩가 김치분말 \( 1 \% \) 군),III군(고지방식이군), Ⅳ군(고지방식이+김치분말 \( 1 \% \) 군), V군(고지방식이+홍국 \( 2.5 \% \) 첨가 김치분말 \( 1 \% \) 군), 그리고 VI군(고지방식이+홍국 \( 5 \% \) 첨가 김치분말 \( 1 \% \) 군)으로 나누어 각 군마다 8마리씩 4주간 사육하였다.</p><h2>체중 증가량 및 식이 섭취량 측정</h2><p>실험동물의 체중은 3일 간격으로 일정시간에 측정하였으며, 식이섭취량은 오전 10시에 매일 측정한 후 급여량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율(food efficiency ratio; FER)은 4주간의 체중 증가량을 같은 기간의 식이 섭취량으로 나누어 산출하였다.</p><h2>혈장 분리 및 장기 채취</h2><p>혈액은 4주간의 실험식이 급여 후 12시간 절식시키고 ether로 마취시킨 동물로부터 채취하였다. Heparin 처리가 된 주사기로 복부 대동맥에서 혈액을 채취한 후 실온에서 30분간 방치한 다음 \( 4^{\circ} \mathrm{C}\), \(3000\mathrm{ rpm}\)에서 20분간 원심분리하여 혈장을 분리한 후 각 성분분석에 사용하였다. 채혈 후 간, 신장 및 비장을 적출하고, 즉시 생리식염수로 혈액을 제거한 다음 각각의 무게를 측정하고, 체중 \( 100 \mathrm{~g} \)당 장기무게로 환산하였다.</p><h2>혈장분석</h2><p>혈장의 total cholesterol, HDL-cholesterol 및 tri-glyceride는 효소법에 의한 kit (아산제약, 한국)를 사용하여 흡광도롤 측정하였으며, AST, ALT 활성은 auto dry che-mistry analyzer (SPOTCHEM \( { }^{\mathrm{TM}} \) SP-4410, ARKRAY, Inc.,Japan)을 사용하여 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험결과는 SAS program을 이용하여 분산 분석한 후 유의차가 있는 항목에 대해서는 Duncan's multiple range test로 \( \mathrm{p}<0.05 \) 수준에서 시료간의 유의차를 검정하였다.</p>