본 장은 H. pylori의 urease 항원에 대한 anaphylaxis 쇼크 반응과 Guinea pig을 대상으로 heterologous PCA와 피부감작성을 실험한 결과들을 정리하였다. 실험 결과, urease에 대한 anaphylaxis 쇼크반응이 나타나지 않아 항원을 urease로 분리 시 anaphylaxis 쇼크증상의 위험이 감소할 것이라 예상된다. IgE 항체를 피하 주사 후 해당 항원과 색소를 정맥주사하여 해당 부위의 anaphylaxis 반응과 색 변화를 관찰하는 PCA 실험의 경우, H. pylori에서 분리된 whole cell과 urease 항원조직은 친화성 항체 IgE를 생성하지 않음이 드러났다. 피부 외용제의 피부 감작성을 평가하고 그 위험성을 예측하는 피부감작성 실험의 결과로, 피내 약물 주사 후 주사부위를 관찰하여 2마리 guinea pig 모두 피부 이상이 발생하지 않는 최고 농도, \( 20 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \)를 감작항원량으로 정하였다.
<h2>H. pylori의 urease 항원에 대한 anaphylaxis 쇼크반응</h2> <p>1차 야기투여 시 양성대조군인 BSA (H) 투여군에서는 코를 문지르거나 핥음, 재채기, 배뇨, 보행불안, 횡와 등의 중증과 3마리가 사망에 이르는 현상을 나타내었다. BSA (L) 투여군에서도 핥음, 재채기, 배뇨, 보행불안, 횡와 등의 중증과 1마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다. 그러나 음성대조군과 시험물질 투여군인 urease (H) 와 urease (L)에서는 anaphylaxis로 보이는 어떠한 증상도 관찰되지 않았다.</p> <p>2차 야기투여 시 양성대조군인 BSA (H) 투여군에서는 1차 야기투여 후 살아남은 2 마리 모두 횡와 증상의 중증의 증상을 나타내었고, BSA (L) 투여군 에서는 코를 문지르거나 핥음, 재채기, 호흡촉진 등의 중증과 1차 야기투여 후 살아남은 4마리 중 3마리가 사망에 이르는 것을 관찰할 수 있었다. 그리고 1 차 투여와 같이 음성대조군, 시험물질 투여군에서는 모두 어떠한 증상도 관찰되지 않았다.</p> <p>이와 같이 H. pylori의 urease에 대한 전신성 anaphylaxis 쇼크반응은 항원농도 \( 20 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 의 urease (L)와 \( 60 \mu \mathrm{g} \) \( / 100 \mu \mathrm{l}\) 의 urease (H) 모두 아무런 증상도 관찰되지 않았다. 따라서 whole cell과 비교할 때 urease로 분리된 항원에 대해서는 anaphylaxis 쇼크증상으로부터 더 안전한 결과를 기대 할 수 있을 것으로 사료된다.</p> <h2>Guinea pig-rat를 이용한 heterologous PCA 시험</h2> <p>PCA 실험은 IgE 항체를 피하 주사하여 일정한 잠복기간이 경과한 후에 해당 한원과 색소(Evan's Blue)를 정맥주사하면, 항체를 주사한 부위에서 국소 anaphylaxis 반응이 일어나고 색소가 혈관에서 유출되어 그 해당 부위가 청색으로 되는 반응이다. 즉시형 과민반응을 일으키는 항체의 연구에 사용된다. 그리고 수동 피부 anaphylaxis 반응시험에서 2마리 중 1마리가 양성반응을 나타낸 경우 의약품의 안전성 평가라는 관점에서는 양성으로 판정한다.</p> <p>본 시험법은 항원으로 감작시켜 얻은 Guinea pig 항혈청을 rat의 배부 피내에 수동면역 시킨 후 항원을 정맥내에 주사하여 조직 친화성 항체 IgE의 역가를 알아 보았다. 각 항혈청을 희석하여 피내주사하고 항원과 Evans Blue 혼합액을 정맥주한 결과, 양성대조군인 BSA (L)에서는 개체에 따라 23~26배, BSA (H) 는 25~26배 희석배율까지 \( 5 \mathrm{~mm} \) 이상 크기의 청색반점을 나타내었다. 그러나 음성대조군과 시험물질 투여군인 WC (H), WC (L), Urease (H), Urease (L)에서는 청색반점을 관찰 할 수 없었다. 따라서 H. pylori에서 분리된 whole cell 과 urease 항원의 PCA 실험결과 조직 친화성 항체 IgE를 생성하지 않는 것으로 나타났다.</p> <h2>피부감작성 시험</h2> <p>피부 외용제로 사용되는 의약품의 피부에서 접촉감작 위험성을 예측하기 위한 것으로써 접촉하는 약물의 피부감작성을 평가하기 위하여 피내주사 후 주사부위를 관찰하여 2마리 guinea pig 모두 피부괴사가 나타나지 않는 최고 농도를 감작항원량으로 정하였다.</p> <p>본 실험에서는 투여하고자 하는 항원의 감작항원량을 결정하기 위하여 WC 항원과 urease 항원을 피내 감작시킨 후 염증이나 이상반응이 발생하지 않는 최고 농도를 알아보고 그 농도를 결정하고자 하였다. 실험결과 WC와 urease항원 모두 \( 20 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 의 농도에서 피부 이상증상 반응을 나타내지 않았으며, 항원농도 \( 80 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 와 \( 40 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 에서는 염증증상은 아니지만 붉은 반점의 이상증상을 나타내는 것을 볼 수 있었다. 따라서 피부 이상증상이 발생하지 않는 최고의 농도를 \( 20 \mu \mathrm{g} / 100 \mu \mathrm{l} \) 로 결정하고 가장 적합한 감작항원 농도로 결정하였다.</p>