U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 동시에 처리하여 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의한 GSH의 농도 감소와 TBARS의 농도 증가 현상을 조사하였다. 그 결과 HDL은 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 증가된 TBARS의 농도를 감소시키고, GSH의 농도를 증가시킨다. 또한, 고농도의 ROS는 생체 화합물에 산화적 손상을 유발하며, 반면 낮은 농도의 ROS는 세포의 성장 등을 조절하는 세포 내 이차 전달물질로 작용한다.
<p>\( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 감소된 세포내의 GSH의 농도와 증가된 TBARS의 농도에 대한 HDL의 영향을 조사하기 위해 U2OS 세포에 \( 200 \mu \mathrm { M } \)의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 농도 별로 함께 처리하여 6시간 후 GSH의 농도와 TBARS의 농도를 각각 측정하였다. 그 결과 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 증가되었던 TBARS의 농도는 HDL에 의해 감소하였고, 감소하였던 GSH의 농도는 증가하였다. \(200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 처리하였을 경우 control에 비하여 \( 34 \% \) 감소하였던 GSH의 농도는 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL에 의해 \( 4.8 \%~(0.33 \pm 0.001 \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } \) cells)의 감소를 보였다(Fig. 4A). 그리고 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 \( 110.8 \% \)가 증가한 TBARS의 농도는 HDL에 의해 \( 69 \%~(0.62 \pm 0.001 \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } ) \)의 증가를 보였다(Fig. 4B). 이 결과는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 생성된 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 HDL이 가수분해하여 지질과산화의 유도를 억제한 것으로 사료된다.</p> <h2>HDL에 의한 단백질 발현 변화 분석</h2> <p>단순히 호흡과정에서 생성되는 부산물로 여겨졌던 ROS는 최근 외부자극에 의하여 세포막에 존재하는 수용체를 통하여 일시적으로 생성되어 세포신호전달의 이차 신호전달물질 (second messenger)로서 작용한다고 보고되고 있다. 고농도의 ROS는 핵산, 지질 및 단백질 등의 생체 화합물에 산화적 손상을 유도하며, 특정 부위에 생성되는 낮은 농도의 ROS는 세포의 성장 등의 조절에 관여하는 세포 내 이차 전달물질로 알려져 있다.</p> <p>\( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)는 전이금속으로 세포에 처리하였을 경우, 산소 농도가 \( 1 \% \) 이하의 저산소 상태와 유사한 상태(mimic hypoxia)를 유도하는 것으로 잘 알려져 있다. 그리고 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)는 세포 내 DNA 손상이 아닌 미토콘드리아에 손상을 입혀 ROS를 생성한 후, hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF-1a), p53, p21 및 PCNA 등의 단백질의 발현을 조절하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의한 ROS의 생성에 의해 발현이 증가한 p53, P21 \( { } ^ {\text { Waf1/Gip1 } } \) 및 p27 \( { } ^ {\text { Kip1 } } \) 단백질에 대한 HDL의 저해효과를 웨스턴 블롯 분석법으로 확인하였다.</p>