SCC-4 및 SCC-9 세포에 DHA 처리 후 자가포식을 나타내는 LC3-II 및 GFP-LC3 dot를 측정한 결과 증가한 것으로 나타나 DHA는 구강암세포를 자가포식을 유도할 수 있음이 확인되었다. 또한 구강암 세포에 대한 DHA의 자가포식 기전을 검색한 결과, SCC-9에서 DHA 처리 후 p-AMPK 단백양이 증가하고 AMPK의 내인성 기질인 ACC의 인산화 또한 증가한 것을 통해 DHA는 AMPK활성화를 증가시키고 mTOR를 억제하여 자가포식을 유도할 수 있음을 시사하였다. 마지막으로 SCC-9에서 DHA 처리 후 p-AKT의 단백양이 감소하였으며 p-mTOR도 감소한 것을 확인함을 통해 DHA가 AKT의 활성 억제하여 mTOR가 억제되어 자가포식을 유도할 수 있음을 확인하여 이를 구강암의 치료 및 예방 목적으로 사용할 수 있을 것이다.
<h1>고 찰</h1><p>오메가-6 지방산은 암화, 암세포의 성장, 침윤 및 전이 등을 촉진시키지만 오메가-3 지방산은 반대로 억제한다고 알려져 있다. 이는 유방암 등 동물실험에서도 잘 밝혀져 있다. 그러나 구강암세포에 대한 오메가-3 지방산의 세포독성에 대해서는 전혀 알려져 있지 않다.</p><p>Lim 등은 오메가-3 지방산이 간암 및 간담도암에서 자가사멸을 유도한다고 하였다. 이에 먼저 구강암세포주인 SCC-4 및 SCC-9에 대한 DHA의 세포독성을 검색했을 때 PARP cleavage 증가, subG1 분획 증가, TUNEL 양성세포의 증가 등을 볼 때 이는 자가사멸을 통한 세포독성을 유발함을 시사하였다.</p><p>세포사멸에는 자가사멸 외에도 자가포식이 중요하다고 알려져 있다. Jing 등은 DHA가 자가포식에 의해 SiHA 세포 등 인체 자궁경부암세포를 사멸할 수 있음을 보고 하였다. 이에 DHA가 구강암세포에서도 자가포식을 유도할 수 있는지 검색하기 위하여 SCC-4 및 SCC-9 세포에 DHA 처리 후 자가포식의 표식자인 LC3-II 및 GFP-LC3 dot를 측정한 바 DHA에 의해 증가함으로 DHA는 구강암세포 SCC-4 및 SCC-9에서 자가포식을 유도할 수 있음이 확인 되었다. 형성된 autophagosome은 lysosome과 fusion 되어 autolysosome을 형성한 후 포식한 물질들을 파괴함으로 자가포식과정이 마무리 된다. 그러나 형성된 autophagosome이 자가포식 때문인지 혹은 자가포식과 무관하게 증가된 것인지 확인하기 위해서는 autolysosome의 형성을 억제하는 CQ 등의 약물의 전처리로 autophagic flux assay를 시행해야 한다. 본 실험에서 SCC-4 및 SCC-9 세포에CQ 전처리 후 DHA를 처리했을 때 DHA 단독보다 LC3-II양이 각각 증가하였는데 이는 CQ가 autolysosme 형성을 억제함으로 LC3-II의 lysosome에 의한 분해가 감소되어 나타난 것으로, DHA가 구강암세포를 자가포식시킴을 강력히 시사하며, 따라서 DHA에 의한 구강암세포 SCC-4 및 SCC-9의 세포사멸에 자가포식도 중요하리라 생각된다.</p><p>자가포식의 조절에는 mTOR를 통한 신호전달 경로가 중요함으로 따라서 이를 조절함으로 자가포식이 조절될 수 있는데, 즉 mTOR는 자가포식의 음성조절자로서 알려져 있다. AMPK는 체내 에너지가 부족할 때 인산화되어 그 활성을 나타내는 효소로써 AMPK의 활성화는 mTOR의 신호전달을 억제함으로 자가포식의 양성조절자이다. Jing 등은 DHA에 의한 p53 wild type인 암세포에서 p53의 증가가 AMPK를 활성화 시켜 mTOR를 억제한다고 보고하였다. 이에 구강암 세포주에 대한 DHA의 자가포식 기전을 검색한바 SCC-9에서 DHA 처리 후 p-AMPK 단백양이 증가 하였으며, AMPK의 내인성 기질인 ACC의 인산화도 증가된 것을 감안할 때 이는 DHA가 SCC-9 세포에서 AMPK 활성화를 증가 시켜 mTOR를 억제하여 자가포식을 유도할 수 있음을 시사한다.</p><p>한편 AKT는 mTOR의 양성조절자로서 AKT의 활성화는 mTOR를 활성화 시켜 자가포식을 억제한다고 알려져 있다. 이에 구강암 세포주 SCC-9에서 DHA 처리 후 p-AKT의 단백양을 측정했을 때 p-AKT\(^{\mathrm{Th} 308} \) 및 p-AKT\(^{\mathrm{Ser} 473} \) 단백양이 감소하였을 뿐만 아니라 p-mTOR도 감소하였는데 이는 구강암 세포주 SCC-9에서 DHA가 AKT의 활성화를 억제함으로 mTOR가 억제되어 자가포식이 유도될 수 있음을 시사한다.</p><p>이상의 결과로 DHA는 구강암세포에서 첫째, 자가사멸 및 자가포식을 통해 세포사멸을 유도하며, 둘째, AKT의 활성 억제에 따른 mTOR 억제, 셋째, AMPK 활성 증가에 의한 mTOR 억제 등을 통해 자가포식을 유도하여 자가사멸과 더불어 세포 사멸을 유도하리라 생각되며 따라서 이는 구강암의 치료 및 예방 목적으로 유용하게 사용할 수 있으리라 시사된다.</p>