Luminol 발광법을 활용하여 \( \mathrm { Fe } ^ { 3 + } - \mathrm { EDTA } / \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 시스템에서 활성 산소 소거활성을 평가하였다. 이 시스템은 철의 촉매 작용을 통해 다양한 ROS를 생성하며, 이를 통해 ROS의 총 항산화능을 측정할 수 있다. 이 총 항산화능에는 활성산소 생성을 억제하는 킬레이트 작용도 포함될 수 있다. 생성된 ROS는 루미놀과 ROS와의 반응에 따른 화학 발광을 측정하여 확인한다.
<p>Radical scavenging \( ( \%) = \) \[ \left (1- \frac {\mathrm { A } _ {\text { experiment } } - \mathrm { A } _ {\text { sample blank } } } {\mathrm { A } _ {\text { control } } } \right ) \times 100 \]</p> <p>Luminol 발광법을 이용한 \( \mathrm { Fe } ^ { 3 + } - \mathrm { EDTA } / \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 계에 있어서 활성 산소 소거활성 평가(총 항산화능): \( \mathrm { Fe } ^ { 3 + } - \mathrm { EDTA } / \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 계는 다양한 \( \mathrm { ROS } \left ( \mathrm { O } _ { 2 } ^ { -- } , \cdot \mathrm { OH } \right . \) 그리고 \( \left . \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \right ) \) 를 생성시키고, 철은 이 반응에서 촉매로 작용한다. 이 계를 이용하면 ROS에 대한 총 항산화능을 측정할 수 있으며, 이 총 항산화능에는 활성산소의 생성을 막아주는 킬레이트 작용도 포함될 수 있다. 생성된 ROS의 검출은 루미놀과 ROS와의 반응을 통한 화학 발광을 측정함으로써 확인할 수 있다. 화학 발광 측정용 튜브에 증류수 \( 1.78 \mathrm { ml } \) 를 넣고 여러 농도의 지모 뿌리 추출물을 넣었다. 여기에 \( 2.5 \mathrm { mM } \mathrm { EDTA } 40 \mu \mathrm { l } \) 및 \( 5 \mathrm { mM } \mathrm { FeCl } _ { 3 } \). \( 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 10 \mu \mathrm { l } \) 를 가한 후 \( 35 \mathrm { mM } \) luminol \( 80 \mu \mathrm { l } \) 를 넣고 흔들어 섞어주었다. 이어서 화학발광기의 cell holder에 튜브를 넣고 \( 5 \mathrm { ~min } \) 동안 항온시킨 후 \( 150 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } 40 \mu \mathrm { l } \) 를 넣고 화학 발광을 \( 25 \mathrm { ~min } \) 동안 측정하였다. 대조군(control)은 시료용액 대신에 증류수를 넣고, 공시험 (blank)은 시료군과 조건이 동일하거나 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 와 \( \mathrm { FeCl } _ { 3 } \cdot 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 대신 증류수를 첨가 하였다. 화학발광기 6-channel LB9505 LT의 각 채널은 실험 전에 보정하여 채널 간의 차이가 거의 없도록 하였다. 화학 발광으로 측정한 저해율( \%)은 다음 식과 같이 나타내었고, 활성산소 소거활성의 크기는 화학 발광의 세기가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도(reactive oxygen species scavenging activity, \( \mathrm { OSC } _ { 50 } \) )로서 표기하였다.</p>