LPS는 급성 및 만성 질환의 병의 원인이 되는 그람음성 박테리아의 세포벽 구성 성분이다. 그리고 serpin superfamily의 하나인 Plasminogen activator inhibitor (PAI)-1은 LPS와 TGF- \( \beta \)1 등 다양한 인자에 의해 활성화된다. 또한, 단백질분해효소는 종속적인 섬유소 용해 작용을 억제하고 세포외기질을 높인다. 더불어 PAI-1는 MEK 및 ERK 기전을 통해 조절 및 발현된다. LPS는 CD14와 TLR-4에 결합하여 하위의 MEK 및ERK 기전을 활성화 시키는 것이다. 그러므로 표적 유전자인 PAI-1 발현은 신장섬유화를 비롯한 섬유화 치료에 주요하다.
<h1>서론</h1> <p>신장섬유화는 급성 및 만성 신장질환의 대표적인 유발증상으로 그 진행에 따라 신장의 기능부전이 발생된다. 신장섬유화의 특징으로는 혈관 기저막이 두꺼워지거나 세뇨관의 위축, 단핵세포의 침투와 세포외기질의 침착 등이 있다. 신장섬유화를 유도하는 대표적인 인자들로는 Tumor Necrosis Factor (TNF)- \( \alpha \), Interferon (IFN)- \( \gamma \), Lipopolysaccharide (LPS), Transforming Growth Factor-beta 1 (TGF- \( \beta \)1) 등의 촉매제가 알려져 있다. 신장섬유화 유도인자인 LPS는 그람음성 박테리아의 세포벽 구성 성분으로 인체 유해 내독소로 작용하며, 급성 및 만성 신장질환의 병인과 관련되어 있다. 또한 LPS는 대식세포를 자극하여 TNF- \( \alpha \), IL-1과 IL-6와 같은 사이토카인들의 활성 및 발현을 조절하며, 발현된 사이토카인들 또한 신장섬유화를 유도하는 것으로 보고 되었다.</p> <p>Plasminogen activator inhibitor (PAI)-1은 serpin superfamily의 하나로, LPS와 TGF- \( \beta \)1을 비롯한 다양한 인자에 의해 활성화 된다. 활성화된 PAI-1은 단백질분해효소 의존적인 섬유소 용해 작용을 억제하며, 세포외기질의 축적을 증가시킨다. 따라서 PAI-1 발현이 신장섬유화를 포함한 섬유화 진행에 따른 표지인자임으로 향후 신장섬유화를 비롯한 섬유화 치료를 위한 주요한 표적 유전자이다. 또한 PAI-1 발현이 MEK/ERK 기전을 통해 발현이 조절됨이 확인되었으며, LPS도 CD14와 Toll-like receptor (TLR)-4에 결합하여 하위의 MEK/ERK 기전을 활성화 시킨다고 알려져 있어, LPS에 의한 PAI-1 발현이 MEK/ERK 기전을 통해 조절될 가능성이 있음을 예상할 수 있다.</p> <p>이 연구에서 사용한 Ascofuranone (AF)은 불완전한 균류인 Ascochyta visiae에서 분리한 항진균성 플레닐페놀계 항생 물질로, 주로 항바이러스성 효과에 대한 연구와, 피하조직과 관련한 다양한 생리학적 효과에 대한 연구가 보고 되었다. 또한, 고혈압 억제, 제1형 및 제2형 당뇨병 개선 그리고 항암제로서의 활성을 가지는 것으로 보고되었다. 최근에는 신장암세포(Caki-1)에서 AF가 암세포 전이 시 발현되는 matrix metalloproteinase-9 (MMP-9)의 발현을 억제하고 그 메커니즘을 조사한 결과 extracellular signal regulated kinase-1/2 (ERK-1/2)의 인산화 저해를 통한 activator protein (AP)-1 전사활성의 선택적인 조절로 MMP-9 발현을 억제한다는 연구결과가 발표 되였다. 이 연구에서는 LPS에 의해 유도된 섬유화 표지인자인 PAI-1을 비롯한 섬유화 관련인자들의 발현제어에 대한 AF의 저해효과를 확인하고자 하며 동시에 PAI-1 발현 저해 기전을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>세포배양</h2> <p>신장섬유아(rNRK-49F) 세포는 American culture type collection (ATCC)으로부터 구입하였다. 신장섬유아 세포는 \( 10 \% \) 혈청(Fetal bovine serum: FBS) (Gibco-BRL, Grand Island, NY)과 \( 1 \% \) 항생제(Gibco)를 함유한 DMEM-Low glucose (Dulbecco's modified Eagle's medium)(Gibco) 배지에서 배양하였으며, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 5 \% \) 이산화탄소 조건 하에 배양하였다. ascofuranone (AF)은 일본 중외제약에서 합성된 물질을 제공받았다.</p>