팥의 향균 활성평가는 그람 양성세균, 그람 음성세균, 진균으로 나누어 사용해 실험을 진행했다. 각각의 세균을 일정한 온도와 시간에 맞추어 배양을 시키고 생육저지환의 크기를 측정하여 결과를 나타내 평가를 진행하였다 . 또한 팥의 항당뇨 활성은 in-vitro \( \alpha \)-amylase와 \( \alpha \)-glucosidase 저해 활성을 통해서 흠광도를 측정한 후 3회 반복하여 저해율을 계산해 평가를 진행하였다.
<h2>항균 활성 측정</h2> <p>생팥 및 증자팥의 추출물의 항균 활성은 기존의 보고된 방법과 동일하게 평가하였다. 항균 활성평가를 위한 그람 양성세균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Listeria monocytogenes KACC 10550, Bacillus subtilis KCTC 1924를, 그람 음성세균으로 Escherichia coli KCTC 1682, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186, Proteus vulgaris KCTC 2433, Salmonella Typhimurium KCTC 1926, 진균으로는 Candida albicans KCTC 1940 및 Saccharomyces cerevisiae IFO 0233를 사용하였다. 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth (Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양한 후, 각 균주를 \( O.D._ { 600 } \) 0.1로 조정하여 Nutrient agar (Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish \( (90 \times 15 \mathrm { ~mm } \), Green Cross Co., Ltd. Korea)에 \( 100 ~ \mu \mathrm { l } \) 도말하고, 각각의 시료 \( 5 ~ \mu \mathrm { l } \)를 멸균 disc-paper (지름 \( 6.5 \mathrm { ~mm } \), Whatsman No.2)에 가하여, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균 경우에는 Sabouraud dextrose (Difco Co. USA)를 이용하여 동일한 방법으로 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 ampicillin과 항진균제인 miconazole (Sigma Co., USA)을 각각 \( 1 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { disc } \) 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 \( \mathrm { mm } \) 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.</p> <h2>팥의 항당뇨 활성</h2> <p>항당뇨 활성은 in-vitro \( \alpha \)-amylase 저해 활성과 \( \alpha \)-glucosidase 저해 활성을 평가하여 나타내었다. 먼저 \( \alpha \)-amylase 저해활성은 기존 보고와 동일하게 팥 추출물 시료 \( 2.5 ~ \mu \mathrm { l } \)와 \( 50 ~ \mathrm { mM } \) phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } ~6.8) \)로 희석한 \( \alpha \)-amylase \( (0.25 ~ \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) ~25 ~ \mu \mathrm { l } \)를 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 preincubation한 후, \( 0.5 \% \) soluble starch (Samchun Chemicals Co., Korea) \( 25 ~ \mu \mathrm { l } \)를 가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응하였다. 이후 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분간 가열하여 반응을 정지시켰으며, 반응액에 \( 150 ~ \mu \mathrm { l } \)의 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid, Sigma Co., USA) 용액을 가하여 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분간 가열하여 발색한 후 상온에서 방냉하였다. 발색액은 96 well microplate reader (Tecan Co., USA)를 이용하여 \( 540 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였으며, 각각의 실험은 3회 반복한 후 평균값을 구하여 다음의 식으로 저해율을 계산하였다.</p>