Fibrin 평판법을 이용하여, fibrinogen에 thrombin을 추가하여 fibrin plate를 생성하고, 그 위에 시료를 떨어뜨려 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 반응을 일으켜 fibrin의 분해 면적을 측정하는 방법을 제시하였다. 방선균으로부터 생산되는 혈전용해효소에 대한 연구가 없음을 감안하여, 본 연구에서는 fibrin에 특이적인 활성을 가지는 균주 JK-20을 선정하여 사용하였다. 또한, 다양한 탄소원을 첨가하여 배양한 후 혈전용해효소의 활성 및 생육상태를 검토하였으며, 특히 lactose 및 soluble starch의 경우 균의 생육은 증가하였으 나, lactose에서의 효소 활성은 비교적 낮았다.
<h2>혈전용해효소의 활성 측정법</h2> <p>Fibrin을 기질로 하는 방법 중 fibrin 평판법을 사용하였다. Fibrin 평판법은 fibrinogen에 thrombin을 가하여 fibrin plate를 만들어 그 위에 시료검체를 점적하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 시간별로 반응하여 fibrin의 분해면적을 측정하는 방법이다. Fibrin plate 제조 방법은 borate saline buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.8) \( 10 \mathrm { ml } \)에 \( 0.06 \mathrm { ~g } \) fibrinogen을 넣어 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 녹인다. 녹은 fibrinogen 용액 \( 10 \mathrm { ml } \)를 petri dish에 넣고 borate saline buffer ( \( \mathrm { pH } \) 7.8)에 녹인 thrombin용액(20 unit)을 가하여 균일하게 흔합되도토 잘 흔들어 준다. Fibrinogen을 thrombin과 반응하면 서서히 굳게되는데 이 plate를 실온에서 30분 정도 방치한 후 사용하였다. 측정할 시료를 fibrin palte위에 얹어 활성 측정을 하는데 표면 장력이 약한 액체시료인 경우 plate위에서 퍼져버리므로 paper disc에 충분히 흡입시켜 plate위에 놓는다. 반응은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 약 18시간 반응한 후 fibrin의 분해 면적(가로 \( \times \) 세로)을 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>혈전용해효소를 생산하는 방선균의 탐색</h2> <p>토양으로부터 혈전용해효소를 생산하는 방선균을 분리하였다. 현재까지 방선균으로부터 생산되는 혈전용해효소에 관한 연구가 보고된 바 없는 것에 주목하여 이 중 비교적 fibrin에만 특이적으로 활성을 보이는 균주 JK-20을 생산 균주로 선택하여 본 실험에 사용하였다. 본 균주는 회색의 기중균사를 가지며, 약 \( 0.6 \sim 0.8 \mu \mathrm { mm } \times 0.4 \sim 0.8 \mu \mathrm { m } \) 크기의 원통형 포자를 가지고 있다. 포자의 표면은 매끈하며, 약 \( 10 \sim 40 \)개의 포자가 고리를 이루고 있는 형태를 나타내었다. 이상의 결과로 본 균주는 Streptonnces 속으로 추정되어 Streptomyces sp. JK-20로 명명하였다.</p> <h2>효소 생산에 미치는 탄소 및 질소원의 영향</h2> <p>기본배지에서 탄소원인 glucose 대신에 Table 1에 언급된 각종 탄소원을 첨가하여 배양 후 혈전용해효소의 활성 및 생육상태를 검토하였다. 그 결과 Table 1에서 보는 바와 같이 lactose 및 soluble starch의 경우에 균의 생육은 각각 \( 43.2 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 및 \( 49.2 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)로 증가하였으나 효소 활성에 있어 lactose는 \( 1.4 \mathrm { cmm } ^ { 2 } \)로 효소 생산이 적음을 알 수 있었다. 반면, xylose는 생육이 \( 37.3 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)로 lactose나 soluble starch에 비해 낮지만 효소 활성은 \( 5.1 \mathrm { cmm } ^ { 2 } \)로 높고 효소 생산도 증가하여 탄소원은 xylose로 결정하였다.</p>