본 연구에서는 다양한 용매를 사용하여 한국, 중국, 우즈베키스탄의 감초로부터 50% 에탄올 추출물 파우더를 제작하였다. 이 파우더는 피부 상재균인 6종류의 균주를 대상으로 실험하였으며, 이들 균주는 한국 미생물 보존센터에서 분양받아 사용하였다. P. acnes 균주의 경우, RC 배지를 사용하여 Gaspack system을 활용한 혐기성 배양을 72시간 동안 진행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>본 연구에서 사용된 에탄올, 에틸아세테이트, 헥산, DMSO 등 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 감초추출물의 항균 활성 비교물질로 화장품방부제인 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 1,2-hexanediol은 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하여 사용하였다.</p> <h2>원산지별 감초의 분획 및 추출</h2> <p>본 연구에서 사용된 한국(충북 제천), 중국, 우즈베키스탄 감초는 경동시장 약업사를 통해 한약재로 판매되는 원료를 구입하였다. \( 100 \mathrm { ~g } \) 의 건조된 감초를 \( 1 \mathrm { ~L } \) 의 \( 50 \% \) 에탄올 용액에 24 시간동안 침적시킨 후 여과한 여액을 감압 및 건조하여 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 파우더를 얻었다.</p> <p>에틸아세테이트 분획을 만들기 위해, \( 50 \% \) 에탄올 추출물을 감압 - 농축한후 헥산을 이용하여 엽록소 등의 비극성 성분을 제거하였다. 이 후 에틸아세테이트로 추출한 분획을 감압 및 건조하여 파우더를 얻은 다음 실험에 사용하였다.</p> <p>2 가지 형태의 감초 추출물 \( (50 \% \) 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획)은 모두 화장품의 원료로 이용 가능한 형태의 추출물로서 이들의 항균활성을 측정하여 그 응용 가능성을 검토하였다.</p> <h2>원산지별 감초 추출물의 항균활성 측정</h2> <h3>사용균주:</h3> <p>본 실험에 사용된 균주는 피부 상재균으로써, 그람 양성균주 3 종, 그람 음성균주 2 종 및 효모균 1 종으로 총 6종의 균주이며, 여드름의 원인균인 P. acnes \( \mathrm { ATCC } 6919 \)와 비듬균인 P. ovale \( \mathrm { ATCC } 12087 \), 호기성 그람 양성균주인 S. ureus \( \mathrm { ATCC } 6538 \), B. subtilis \( \mathrm { ATCC } 19659 \), 호기성 그람 음성균주인 E. coli \( \mathrm { ATCC } 23736 \)ATCC23736, P. aeruginosa \( \mathrm { ATCC } 29336 \)를 한국 미생물 보존센터 KCCM 에서 분양받아 사용하였다.</p> <h3>배지 및 배양조건:</h3> <p>P. acnes의 배양 배지는 Reinforced clostridial(RC) 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 균을 배양 배지에 접종한 후 anaerobic jar에서 Gaspack system(Merck Anaerocult \( { } ^ {\circledR } \) Gaspack system, Germany)을 사용하여 밀봉하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 72 시간 동안 혐기성 배양하였다. 호기성 그람 양성균주인 S. aureus, B. subtilis와 그람 음성균주인 E. coli, P. aeruginosa 는 Mueller-Hinton 배지(Merck, Germany)를 사용하였으며 균을 접종한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 24 시간 배양하였다. 또한 비듬균인 \( P \). ovale는 pityrosporum 배지(Malt extract agar \( 6 \% \), ox-bile \(2 \% \), tween \( 401 \% \), glycerol mono-oleate \( 0.25 \%) \) 를 사용하였으며 균을 접종한 뒤 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 동안 배양하여 사용하였다 (Table 1).</p>