균의 생육은 thallium acetate, boric acid 및 \( \mathrm{Pb}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \)의 첨가에 영향을 받지 않았으나, 요소분해효소활성은농도에 따른 저해를 나타내었고, \( p \)-hydroxymercuric benzoate, \( \mathrm{HgCl}_{2} \) 그리고 \( \mathrm{AgNO}_{3} \)의 첨가는 균의 생육 뿐만 아니라 요소분해효소 활성에도 저해를 나타내었다. VP 요소분해효소는 \( 0.1 \mathrm{mM}\)의 AHA의 첨가시에는 \( 63.9 \%\), \(1 \mathrm{mM} \)의 첨가시에는 \( 100 \%\)의 저해, \( 0.1 \mathrm{mM}\) 의 \( p \)-hydroxymercuric benzoate 첨가에는 \( 15.4 \% \)의 저해를 나타내었으며 1\( \mathrm{mM} \)의 경우에는 \( 25.8 \% \)의 저해를 나타내었다. \(1\mathrm{mM}\)의 \(\mathrm{AgNO}_{3}\)의 첨가시에는 VP 요소분해 효소와 jack bean urease 에서 \( 100 \% \) 의 저해를 보였다.
<h1>결 과<h1> <h2>균의 생육에 대한 저해제의 효과</h2> <p>균의 생육과 요소분해호소 저해제의 효과를 확인하기 위하여 기본배지에 각각의 저해제 농도를 \( 0.02 \% \) 로 첨가한 결과는 Table 1에 나타내었다. 균의 생육은 thallium ace-tate, boric acid 및 \( \mathrm{Pb}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \) 의 첨가에 전혀 영향을 받지 않았으나 요소분해효소활성은 각가 \( 29 \%, 25 \% \) 및 \( 38 \% \) 의 저해를 나타내었다. 한편 \( p \)-hydroxymercuric benzoate, \( \mathrm{HgCl}_{2} \) 그리고 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 의 첨가는 균의 생육에 큰 저해를 나타낼 뿐만 아니라 요소분해효소 활성에도 저해를 나타내었다. 한편 \( \mathrm{AHA} \) 는 균의 생육엔 \( 40 \% \) 정도의 저해를 나타내었으며 효소활성에도 \( 100 \% \) 저해를 나타내었다.</p> <h2>요소분해효소활성에 미치는 저해제 효과</h2> <p>요소분해효소는 Fig. 1의 정제과정을 거쳐서 \( 30,000 \mathrm{unit} / \) \( \mathrm{mg} \) 의 정제 효소액을 얻을 수 있었으며 정제된 효소 단백질을 SDS-PAGE로 확인 한 결과 \( 85 \mathrm{kDa}, 59 \mathrm{kDa} \), 그리고 41\( \mathrm{kDa} \) 크기의 밴드를 확인 할 수 있었다. 각각의 저해제의 농도를 다르게 하여 정제된 요소분해효소의 활성에 미치는 영향에 대한 결과는 Table 2에 나타내었다. Table 2에서 보는 비와 깉이 VP 요소분해호소는 \( 0.1 \mathrm{mM} \)의 AHA의 첨가시에는 \( 63.9 \%, 1 \mathrm{mM} \) 의 첨가 시에는 \( 100 \% \)의 저해를 나타내었다. 한편 \( 0.1 \mathrm{mM} \) 의 \( p \)-hydroxymercuric benzoate 첨가 시에는 \( 15.4 \% \) 의 저해를 나타내었으며 1\( \mathrm{mM} \) 의 경우에는 \( 25.8 \% \) 의 저해를 나타내어 jack bean urease와 유사한 저해력을 나타내었다. 그리고 \( 10 \mathrm{mM} \) 과 \( 20 \mathrm{mM} \) 의 \( \mathrm{Pb}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \) 을 첨가한 경우에는 표준 jack bean urease 와는 비교적 큰 차이를 나타내지 않았음을 볼 수 있었다. 또한 \( 1 \mathrm{mM} \) 의 \( \mathrm{AgNO}_{3} \) 의 첨가 시에는 VP 요소분해 효소와 jack bean urease 모두 \( 100 \% \) 의 큰 저해를 나타내었다. \( 10 \mathrm{mM} \) 의 thallium acetate의 첨가 시에는 jack bean urease가 \( 21 \% \) 의 저해를 나타낸 것에 비하여 VP 요소분해효소는 저해를 나타내지 않았으며 \( 10 \mathrm{mM} \) 이하의 농도는 효소활성에 전혀 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 1 \( \mathrm{mM} \) 의 boric acid 첨가 시에는 jack bean urease의 경우 영 향을 미치지 않는 반면 VP 요소분해효소에는 같은 농도에 서 \( 51.9 \% \) 의 저해를 나타내었다.</p>