동물의 체중은 일주일에 한 번 정기적으로 측정되며, 시작 체중과 10주 후 체중을 사용하여 체중 증가량을 계산한다. 사료는 주 2회 제공되며, 남은 사료의 양과 새로 제공된 사료의 양의 차이를 통해 섭취량을 계산한다. 실험 종료 전에 동물은 최소 12시간 동안 금식하고, CO2 가스 흡입을 통해 안락사시킨다. 부고환 지방과 맹장은 제거하고, 각각 중성포르말린에 고정, 액체 질소에 빠르게 동결시킨다. 고정된 조직은 파라핀 블록 제작 및 염색을 실시하고, 맹장은 DNA 추출 및 16S rRNA 유전자의 V3-V4 영역 증폭에 이용한다.
<h2>체중 및 사료 섭취량 측정</h2> <p>체중은 주 1 회 일정한 시간에 측정하였으며, 예비사육 직 후의 체중을 초기(initial) 체중으로 하고 10 주 후의 체중을 마지막(final) 체중으로 하여 체중 증가량을 계산하였다. 식이는 주 2 회 동일한 시간에 공급하였고, 전에 남은 사료의 양과 새로 공급한 사료의 양을 측정하여 그 차이로 사료 섭취량을 계산하였다.</p> <h2>해부 및 장기 무게 측정</h2> <p>실험 종료 전, 실험동물은 최소 12 시간 절식시킨 후 \( \mathrm{CO}_{2} \) 가스 흡입 안락사 방법으로 희생하였다. 복부를 개복한 다음, 하대정맥에서 채혈하였다. 채혈된 혈액은 \( 2,500 \mathrm{rpm} \) 에 서 20 분간 원심분리하여 혈청을 분리한 뒤 실험에 사용하였다. 간, 부고환 지방은 적출하여 생리 식염수에 세척하고, 여과지로 수분을 제거한 후, 중량을 측정하였다. 혈청 및 조직은 분석 직전까지 \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) deep freezer에 보관하였다.</p> <h2>혈청 생화학적 분석</h2> <p>혈청 중의 total cholesterol (TC), triglyceride (TG), glucose (Glu), glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT), BUN은 자동 생화학 측정기(FUJI DRI-CHEM 7000i, Fujifilm, Japan)를 이 용하여 측정하였다.</p> <h2>혈청 Adipokine 분석</h2> <p>혈청 중의 adipokine인 adiponectin, leptin, insulin의 함량은 Bio-Plex Pro Mouse Diabetes Assay 8-plex (Bio-rad) 를 사용하여 Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader에서 측정하였다.</p> <h2>조직학적 분석</h2> <p>부고환 지방을 적출하여 생리식염수로 세척하고, \( 10 \% \) 중성포르말린에 고정하였다. 고정된 조직은 파라핀 블록을 제작하여 \( 5 \mu \mathrm{m} \) 두께로 절편하고, hematoxylin과 eosin (H\&E) 염색을 실시하였다. 염색된 부고환 지방조직은 광학현미경 (200×; Olympus DP 73)으로 관찰되었다.</p> <h2>장내 미생물 군집 분석</h2> <p>맹장을 적출한 후, 액제질소에 급속 동결시켜 \( -150^{\circ} \mathrm{C} \) 에 보관하였다. Genomic DNA는 FastDNA Spin Kit (MP Biomedicals, USA)를 이용하여 추출하고, 16S rRNA 유전자의 V3-V4 영역을 증폭하였다. 증폭된 PCR 산물은 QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, USA)를 이용하여 정제하고, \( 250 \mathrm{bp} \) 이상의 DNA가 선별되었다. Illumina MiSeq (Illumina, USA) 장비를 사용하여 염기서열 정보를 확보하였으며, EzBioCloud software (Chunlab, Inc., Korea)를 이용하여 분석하였다.</P><h2>통계처리</h2> <p>모든 분석결과는 GraphPad Prism (Version 6.0, GraphPad Software Inc., USA)을 이용하여 평균 \( \pm \) 표준편 차로 표시하였고, 각 군간의 통계적 유의성 검증은 one-way ANOVA를 이용하여 분석하였다. 장내 미생물과 비만 관련 지표 사이의 상관관계는 Pearson을 이용하여 분석하였다. 실험군 간의 유의성은 \( p<0.05, p<0.01 \), 그리고 \( p<0.001 \) 수준에서 검증하였다.</p>