환경정화를 위해 형질전환 식물체를 선발하기 위해 무기수은을 유기수은으로 전환시키는 organomercurial lyase 유전자 merB를 까마중에 도입하여 형질전환하였다. 2,4-D가 첨가된 동시배양 배지에서 2일간 배양한 후 항생제가 첨가된 선발배지로 옮기는 과정에서 캘러스 생성과 재분화가 빠르게 일어났고, 이는 2,4-D가 식물체의 상처부위에서 체세포배를 유도하여 캘러스가 왕성하게 유도된 것으로 사료된다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>형질전환체 육성</h2> <p>환경정화용 유전자변형생물체의 환경위해성 평가연구를 위한 형질전환 식물체를 선발하기위하여 유기수은을 무기수은으로 전환시켜서 독성을 저감시키는 organomercurial lyase 유전자 \( ( \operatorname { merB } ) \) 를 까마중에 도입하여 형질전환하였다. Agrobacterium 과 공동배양한 까마중 잎 절편을 2,4-D \( 2 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 가 첨가된 동시배양 배지에서 2일간 배양한 후 항생제가 첨가된 선발배지로 옮기는 것이 공동배양한 후 잎 절편을 곧바로 항생제가 첨가된 배지로 옮기는 것보다 캘러스 (callus) 생성과 재분화가 빠르게 일어났나. 이것은 \( 2,4- \mathrm { D } \) 가 식물체의 상처부위에서 체세포배 (somatic embryo)를 유다.하여 캘러스가 왕성하게 유도된 것으로 사료된다. 이러한 결과는 Choi 등 (1996)이 감자 (Solanum tuberosum)의 잎 절편을 2,4-D \( 2 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 가 첨가된 동시배양 배지에서 2일간 배양한 후 선발배지로 옮기는 것이 효과적이라는 보고와 같았다. 또한 배양한 Agrobacterium 균주를 원심 분리하여 배양액을 버리고 \( 0.85 \% \mathrm { NaCl } \) 로 세척하여 잎 절편과 공동 배양한 것이 비세척 시보다 2 배정도 많은 형질전환 신초가 형성되었다. 이는 \( 0.85 \% \mathrm { NaCl } \) 이 식물체 잎 조각 상처조직의 삼투압을 조절하면서 Agrobacterium의 감염성을 유지시키는 역할을 했기 때문인 것으로 보고 있으며, Choi 등 (2005)도 포플러의 잎 절편 형질전환 시 Agrobacterium 균주를 \( 0.85 \% \mathrm { NaCl } \) 로 세척하는 것이 효과적이라고 보고한 바 있다.</p> <p>재분화 선발배지 (MS, sucrose \( 3 \%, 40 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) hygromycin, \( 500 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) carbenicillin, \( 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) NAA, \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { BA } \) 로 읆긴 잎 절편은 1 주일 후 캘러스가 형성되기 시작하여 3주후부터 신초가 재분화되기 시작하였다 (Fig. 1A, B). 재분화된 신초로부터 뿌리를 형성하는데는 \( 1 / 2 \mathrm { MS } \) 와 sucrose를 \( 1 \% \) 고 낮춘 배지가 효과적이었다 (Fig. \( 1 \mathrm { C } \) ). 발근된 까-마중을 지피포트에 옮겨 순화시킨 후 온실의 큰 포트로 이식하고 약 3개월 동안 생육시킨 후 종자를 수확하였다 (Fig. ID, E).</p>