지방전구세포가 지방세포로 분화해서 생성된 지방세포에서 지방의 합성이 증가하면서 지방조직이 증가하여 비만을 유발한다. 한방복합물이 지방세포 분화의 전사인자인 PPAR \( \gamma\), C/EBP\( \alpha \)의 단백질 발현을 억제하여 지방세포 분화를 억제하는 것을 증명했다. 따라서 한방복합물은 지방세포 전사인자인 C/EBP\( \alpha\), PPAR\(\gamma \), SREBP-1c 의 발현을 억제하여 지방 합성 효소인 FAS의 발현을 억제시킴으로서 지방세포의 분화를 억제하여 체지방감소에 영향을 줄 것으로 보인다. 본 연구를 통해서, 한방복합물의 항비만 소재로서 활용이 기대되며 향후 추출물의 지방 억제 효능에 대한 연구를 통해 보다 과학적인 기초연구의 자료로 자리매김하길 바래본다.
<h2>한방복합물이 지방세포 분화 및 지방생합성 관련 단백질 발현에 미치는 영향</h2><p>지방세포의 분화는 지방전구세포가 지방세포로 분화하는 과정으로 이 과정으로 생성된 지방세포에서 지방의 합성이 증가하면서 지방조직이 증가하여 비만을 유발한다. 지방 전구 세포에서 지방세포로의 분화에 관여하는 전사인자에는 peroxisome proliferator-activated receptor \( \gamma \) PPAR\( \gamma) \) 와 CCAAT/enhancer binding proteins \( \alpha\)(C/EBP\( \alpha) \) 등이 있으며, 선행 연구 결과에 따르면 이 전사인자들의 발현을 억제하는 경우 지방세포 분화를 억제하여 체지방 축적을 억제한다고 알려져 있다. 한방복합물이 지방생합성과 관련된 단백질 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여 지방세포의 분화 전사인자인 PPAR\(\gamma\), C/EBP\( \alpha \)의 단백질 발현량을 Western blot 실험방법으로 측정하였다. 분화를 유도한 MDI처리군의 경우 음성대조군에 비하여 PPAR\( \gamma\), C/EBP\( \alpha \)의 발현이 각각 약 3배 및 2배로 증가되었으며 MDI 처리와 함께 한방복합물을 처리한 군에서 C/EBP\( \alpha \)의 단백질 발현량은 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 \( 72.9 \% \)로 유의하게 감소하였고, PPAR \( \gamma \)의 경우 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리군에서 \( 71.3 \%\), \(75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 처리군에서 \( 44.2 \% \)로 유의하게 감소하며 농도의존적으로 단백질 발현량이 감소하는 것을 확인하였다. 따라서 한방복합물이 지방세포 분화의 전사인자인 PPAR \( \gamma\), C/EBP\( \alpha \)의 단백질 발현을 억제하여 지방세포 분화를 억제할 것으로 확인하였다.</p><h2>한방복합물의 지방세포 분화 및 지방생합성 관련 mRNA 발현에 미치는 영향</h2><p>지방세포 분화 과정의 전사인자인 C/EBP\( \alpha\), PPAR\(\gamma \)의 발현은 SREBP-1c에 의하여 조절되며, 발현된 C/EBP\( \alpha \)와 PPAR \( \gamma \)는 상호 작용하여 지방세포 분화를 일으켜 중성지방의 생성과 축적을 유도한다. 또한 활성화된 SREBP-1c, PPAR \( \gamma \)는 지방산 합성을 위한 유전자인 FAS의 발현을 유도한다. 한방복합물이 지방세포 분화와 관련된 mRNA 발현에 미치는 영향을 보기 위하여 RT-PCR을 진행하였으며, house keeping gene으로는 GAPDH을 사용하였다. Reverse transcription-PCR 결과에서 SREBP-1c, PPAR \( \gamma\), C/EBP\( \alpha \)의 mRNA 발현량은 MDI 처리군이 음성대조군에 비하여 각각 약 2.5, 5 그리고 2.5배 증가하였다. MDI로 분화를 유도한 군에 한방복합물 처리한 경우 C/EBP\( \alpha \), SREBP-1c, PPAR \( \gamma \)의 유전자 발현이 농도의존적으로 감소하는 경향이 나타났고, MDI 처리군을 \( 100 \% \)로 보았을 때 한방복합물 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 C/EBP\( \alpha \), SREBP-1c, PPAR \( \gamma \)의 유전자 발현은 각각 \( 43.4 \%\), \(59.6 \% \) 및 \( 55.3 \% \)로 유의하게 억제되었다. Real-time PCR결과는 지방세포 전사인자인 C/EBP\( \alpha \), PPAR\(\gamma \), SREBP-1c 및 지방산 합성 관련 유전자인 FAS의 mRNA 발현량은 한방복합물 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 각 0.3, 0.7, 0.8, 0.6 level을 나타내 MDI 처리군에 비하여 감소하였고, C/EBP\( \alpha \)는 양성 대조군인 HCA \( 100 \mathrm{nM} \) 처리군보다 \( 75 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 2배 이상 효능이 감소함을 확인하였다. 이 결과들은 PPAR \( \gamma \)가 C/EBP\( \alpha \)와 상호작용하여 지방세포의 분화 및 지방세포 축적에 중요한 핵 수용체로 사용되며, 이 상호작용을 통하여 FAS의 전사를 조절한다는 연구 결과와 일치하는 것으로 확인되었다. 따라서 한방복합물은 지방세포 전사인자인 C/EBP\( \alpha\), PPAR\(\gamma \), SREBP-1c 의 발현을 억제하여 지방 합성 효소인 FAS의 발현을 억제시킴으로서 지방세포의 분화를 억제하여 체지방감소에 도움을 줄 수 있을 것으로 기대된다.</p><p>본 연구에서는 마황, 창출, 석고 및 카카오닙스를 사용하여 복합물을 제조한 후 추출물의 항산화능을 DPPH radical, ABTS\(^{+} \)radical 및 xanthine oxidase 저해활성 측정을 통해 항산화능이 있음을 확인하였다. 한방복합물을 지방전구세포인 3T3-L1 세포에서 세포생존율과 Oil Red O를 이용한 지방세포 분화 억제 실험을 진행하여 세포 내 지방 축적이 감소함을 확인하였고, Western blot과 RT-PCR을 통하여 지방세포 분화 과정의 전사인자인 C/EBP\(\alpha\), PPAR\(\gamma \), SREBP-1c 및 FAS의 발현이 억제되는 것을 확인하였다. 이 결과들을 통하여 한방복합물이 지방세포 분화 과정 중 전사인자의 발현을 억제하여 체지방 축적 억제 효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 한방복합물에 사용된 시료 중 카카오닙스는 독성이 거의 없으며 체질에 따른 부작용이 적다고 알려져 있어 복합물에서 나머지 시료 대비 높은 비율로 혼합되었으나 향후 다양한 혼합비율에 따른 효능분석이 추가적으로 연구되어야 할 부분이다. 본 연구 결과를 바탕으로 한방복합물이 항비만 소재로서 활용 가능성이 높을 것으로 사료되며 향후 추출물의 실험 동물 내에서의 지방 억제 효능에 대한 연구를 통해 보다 과학적인 기초연구의 자료로 사용하길 기대해본다.</p>