지금까지 알려진 glycolipid와는 다른 새로운 종류로 추정되는 Pseudamanas sp. G314가 생산하는 생물 계면활성제의 정확한 성분을 파악하기 위해 갈색 분말상태로 추출하고 silica gel column 을 이용하여 용출하며 각각 \( 40 \mathrm { ml } \) 씩의 분획을 획득한 후 각각의 표면장력을 측정한 결과 3번 분획시료의 표면장력이 가장 표면장력활성이 우수한 것을 확인하였다. 또한 silica gel \( G F_ { 254 } \) plate 로 TLC를 전개하여 각각의 성분을 분석하였는데 최대감소 표면장력이 나타난 3번째 분획시료는 3 종류의 spot이 있는 것으로 확인되어 순수하게 정제 되지 않았다는 것을 알 수 있었다.
<h2>생물 계면활성제의 성분</h2> <p>일반적으로 rhamnolipids 계열의 생물 계면활성제는 methanol, chloroform, ethyl acetate, ethyl ether에는 잘 녹으나 hexane에서는 녹지 않는다고 알려져 있다. 그리고 Shim과 Park 논문에서 Pseudamanas sp. G314가 생산하는 생물 계면활성제는 acetone과 methanol 등에서 잘 용해되고 benzene과 toluene에서는 소량 용해되며 hexane 등에서는 전혀 용해되지 않아, 지금까지 알려진 glycolipid와는 달리 sur-factin과 rhamnolipid와 비슷한 양상을 나타내는 새로운 종류의 glycolipid 인 것으로 추정하였다.</p> <p>Pseudomonas sp. G314가 생산하는 생물 계면활성제의 정확한 성분을 파악하기 위해 용매로 추출한 갈색 분말상태의 생물 계면활성제를 methylene chloride:methanol:acetic acid \( (7: 1: 1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } )) \)로 용해시켜 동일 용매로 평형화 된 silica gel column \( (2.5 \mathrm { ~cm } \times 30 \mathrm { ~cm } ) \) 에 흡착시킨 후 동일 용매로 \( 1 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \) 의 속도로 용출하며 각각 \( 40 \mathrm { ml } \) 씩의 분획을 획득하였다(Fig. 4). 용출된 분획은 각각 감압 농축하여 \( 0.2 \mathrm { M } \) phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } 7.0) \) 로 용해시켜 각 분획에 대한 표면장력을 측정한 결과, 분획시료 2,3,4 번에 표면장력 활성이 있는 것으로 나타났으며, 특히 3번 분획시료의 표면장력이 \( 28 \mathrm { dyne } / \mathrm { cm } \) 을 나타내 분획시료 중 가장 표면장력활성이 우수한 분흭임을 확인하였다.</p> <p>또 silica gel \( G F_ { 254 } \) plate (Merck, Germany)로 TLC를 전개하여 부분 정제된 갈색분말 형태의 생물 계면활성제와 silica gel로 용출한 시료의 각 단계별 시료의 성분을 분석하였다. 이때 전개용매는 예비실험을 통해 가장 전개능력이 우수한 것으로 확인된 methylene chloride:methanol:acetic acid \( (7: 1: 1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } )) \) 의 조건으로 실험을 진행하고, \( 254 \mathrm { ~nm } \) 와 365 \( \mathrm { nm } \) 의 두 종류 파장에서 전개된 spot을 확인하고 Rf 값을 계산하였다. 그 결과 부분 정제된 갈색의 분말은 \( 365 \mathrm { ~nm } \) 에서는 spot이 총 6 개로 각각의 \( \mathrm { Rf } \) 값이 각각 0.4,0.48,0.57,0.84,0.89로 나타났고, \( 254 \mathrm { ~nm } \) 에서는 spot이 5개로 Rf 값은 각각 0.4,0.52,0.58,0.68,0.76로 나타났다. 그리고 sili-ca gel column chromatography를 통해 얻은 분획시료 중 최대감소 표면장력을 나타낸 2번, 3번, 4번 분획을 각각 TLC plate를 이용하여 전개한 결과, 표면장력 활성이 있는 3개의 분획시료 모두에서 공통적인 spot이 확인되었고, 그 Rf 값은 0.58로 나타났다. 그러나 최대감소 표면장력이 나타났던 3번째 분획시료도 TLC로 전개해 본 결과 단일 spot이 아닌, 3 종류의 spot을 가지고 있는 것으로 확인되어 순수하게 정제 되지 않았음을 알 수 있었다.</p>