비수리 추출물의 항산화 효과 측정을 위해 첫번째로 DPPH법을 이용하여 Free Radical 소거 활성을 측정했다. 소거 활성은 DPPH의 농도가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도로 표기하였다. 두번째로 Luminol 발광법을 이용하여 총 항산화능을 측정했다. 각종 ROS를 생성하는 \( \mathrm{Fe}^{3+}-\mathrm{EDTA} / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 계를 이용하면 ROS에 대한 총 항산화능을 측정할 수 있다. 총 항산화능은 화학발광의 세기가 50% 감소되는데 필요한 시료의 농도로 표기하였다.
<h2>비수리 추출물의 항산화 효과 측정</h2> <p>DPPH법을 이용한 Free Radical 소거 활성: Free radical은 피부노화의 원인 물질로 알려져 있는 물질이다. 따라서 \( \mathrm{DPPH} \) 를 이용하여 비수리 추출물에 대한 free radical의 소거활성을 측정하였다. 실험방법은 methanol에 용해시킨 \( 0.2 \) \( \mathrm{mM} \) DPPH 용액 \( 1 \mathrm{~mL} \) 에 에탄올 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하고 여러 농도의 추출물 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 첨가하여 섞은 다음 실온에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 동안 방치 후 spectrophotometer로 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 그 활성의 크기는 시료를 넣지 않은 경우를 대조군(control)으로 하고 시료를 넣은 것을 실험군(experiment)으로 하여 다음 식에 의해 \( \mathrm{DPPH} \) 의 활성 저해율을 나타내었다. 소거 활성은 \( \mathrm{DPPH} \) 의 농도가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도(free radical scavenging activity, \( \mathrm{FSC}_{50}, \mu \mathrm{g} \) / \( \mathrm{mL} \) )로서 표기하였다.</p> <p>Inhibition (\%) \( =\left\{1-\left[\frac{\left(\mathrm{A}_{\text {Experiment }}-\mathrm{A}_{\text {Blank }}\right)}{\mathrm{A}_{\text {Control }}}\right]\right\} \times 100 \)</p> <p>Luminol 발광법을 이용한 \( \mathrm{Fe}^{3+}-\mathrm{EDTA} / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 계에 있어서 활성산소 소거 활성(총항산화능): \( \mathrm{Fe}^{3+}-\mathrm{EDTA} / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 계는 각종 \( \operatorname{ROS}\left(\mathrm{O}_{2^{*}} \cdot \cdot \cdot \mathrm{OH}\right. \) 그리고 \( \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \) 를 생성시키고, 철은 이 반응의 촉매로 작용한다. 따라서 이 계를 이용하면 ROS에 대한 총 항산화능을 측정할 수 있는데 이 총 항산화능에는 활성산소의 생성을 막아주는 킬레이트 작용도 포함될 수 있다. 생성된 ROS의 검출은 luminol과 ROS 간의 반응을 통한 화학발광을 측정함으로써 알 수 있다.</p> <p>화학발광 측정용 튜브에 증류수 \( 1.78 \mathrm{~mL} \) 를 넣고 다양한 농도의 비수리 추출물을 넣었다. 여기에 \( 2.5 \mathrm{mM} \) EDTA 40 \( \mu \mathrm{L} \) 및 \( 5 \mathrm{mM} \mathrm{FeCl} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} 10 \mu \mathrm{L} \) 를 가한 후 \( 35 \mathrm{mM} \) luminol \( 80 \mu \mathrm{L} \) 를 넣고 흔들어 섞어 주었다. 이어서 화학발광기의 cell holder에 튜브를 넣고 \( 5 \mathrm{~min} \) 동안 항온 시킨 후 \( 150 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} 40 \mu \mathrm{L} \) 를 넣고 화학발광을 \( 25 \mathrm{~min} \) 동안 측정하였다. 대조군(control)은 시료용액 대신에 에탄올을 넣고, 공시험 (blank)은 시료군과 조건이 동일하나 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 와 \( \mathrm{FeCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 를</p> <p>첨가하지 않은 것으로 하였다. 화학발광기 6-channel LB9505 \( \mathrm{LT} \) 의 각 채널은 실험 전에 보정하여 채널 간의 차이가 거의 없도록 하였다. 화학발광으로 측정한 저해율을 다음 식과 같이 나타내었고, 활성산소 소거활성의 크기는 화학발광의 세기가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도(reactive oxygen species scavenging activity, \( \mathrm{OSC}_{50}, \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) )로서 표기하였다.</p> <p>Inhibition \( (\%)=\frac{(\text { Control의 } \mathrm{cpm}-\text { Sample의 } \mathrm{cpm})}{(\text { Control의 } \mathrm{cpm}-\text { Blank의 } \mathrm{cpm})} \times 100 \)</p>