Streptozotocin(STZ)을 이용해 당뇨를 유발한 실험쥐를 대상으로 바나바 추출물의 투여 효과를 관찰하였다. 실험 동물에게 매일 체중 1kg 당 1.5ml의 바나바 추출물을 경구투여 방식으로 섭취시켰고, 정상 그룹과 당뇨 유발 그룹은 동량의 생리식염수를 섭취하게 하였다. 실험 과정에서 혈액내 콜레스테롤과 지질 농도는 ADVIA 1650을, 조직절편의 동위원소 측정은 Gamma counter COBRA Ⅱ Packard 장비를 이용하였으며, 인슐린 농도는 Sensitive Rat RIA kit을 이용해 분석하였다. 또한, 췌장 조직은 4㎛ 크기로 절단한 뒤 Avidin-biotin complex (ABC)를 통해 인슐린 함유를 분석하였다.
<h2>실험 동물의 당뇨 유발</h2> <p>실험동물의 당뇨유발을위해 Streptozotocin (STZ) (\( 65\mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \)을 \( 0.01 \mathrm{M} \) citrate buffer \( (\mathrm{pH} 4.5\))에 녹여 \( 250 \mu \mathrm{l}\)을 주사로 꼬리에 투여하였다. STZ을 투여한지 3일 후 꼬리정맥에서 혈액을 채취하여 혈당이 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{dl} \) 이상인 쥐를 당뇨 유발로 간주하였으며 7일 후에 실험에 이용하였다. 혈당의 측정은 ACCU-CHEK Active (Roche, Germany)를 이용하였으며 측정기의 포도당 측정범위 한계인 \( 600 \mathrm{mg} / \mathrm{dl} \)를 초과하는 쥐는 실험에서 제외하였다.</p> <h2>바나바 추출물들의 경구투여</h2> <p>본 실험에서는 실험 동물의 체중이 유사하도록 선별하였으며 4주간 해당 추출물을 섭취시켰으며 group 당 실험쥐는 20마리씩 사용하였다. 이들 groups의 실험쥐는 매일 체중을 측정하여 체중 \( 1 \mathrm{~kg} \) 당 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 기준으로 해당 바나바 추출물을 1일 2회씩 경구투여 방식으로 섭취시켰으며 정상쥐와 당뇨유발쥐는 동량의 생리식염수를 섭취시켰다.</p> <h2>실험 동물들의 항당뇨 효과 변화 측정</h2> <p>혈액 내 콜레스테롤과 지질의 농도를 측정하기 위하여 ADVIA 1650 (Bayer, Deerfield, IL, USA)를 사용하였고, 조직절편의 동위원소측정을 위하여 Gamma counter COBRA Ⅱ Packard, Ramsey, MN, USA)장비를 이용하였으며 인슐린 농도는 Sensitive Rat RIA kit (Linco research, Billerica, MA, USA)로 분석하였다. 또한 조직의 절편을 만들기 위해서 Rotary microtome (Leica, Wetzlar, Germany)를 사용 하였다. Periodic Acid-Schiff (PAS) stain은 SSO02 Kit (BioGenex, San Ramon, CA, USA)를 사용하였고 면역조직화학적 염색(immunohistochemical stain)의 1차 항체(primary antibody)는 mouse anti-insulin (BioGenex, San Ramon, CA, USA)를 사용하였고, 2차 항체(secondary antibody)는 Super Sensitive \( { }^{\mathrm{TM}} \) polymer-HRP detection kit (BioGenex, San Ramon, CA, USA) 를 이용하였다.</p> <p>혈액의 채취는 실험군 별로 매주 5마리의 실험쥐를 ethylether를 이용하여 마취한 후 흉부를 절개하여 주사기로 심장에서 직접 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 즉시 \( 4^{\circ} \mathrm{C}\) \(4,000 \mathrm{rpm}\)으로 10분간 원심분리하여 serum을 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 냉동 보관하였으며 4주간의 실험이 완료된 후 glucose, 인슐린, 총콜레스테롤(TC), HDL-cholesterol (HDL-C), triglyceride (TG), free fatty acid (FFA) 농도를 측정하였다.</p> <p>조직검사를 위하여 실험 4주에 혈액샘플을 채취한 실험동물은 생리심염수를 심장에 주사하여 장기에 남아있는 잔여혈액을 제거한 후 췌장을 분리하였다. 분리된 이들 조직은 생리식염수로 세척하여 \( 10 \% \) Neutral formalin 용액에 12시간 고정하였고, 다시 12시간 동안 수돗물로 수세하여 고정액을 제거한 후 탈수, 투명, 침투 과정을 거쳐 파라핀으로 포맷하였다. 파라핀에 포맷된 각 조직은 \( 4 \mu \mathrm{m} \) 크기의 조직절편으로 박절하여 췌장을 immunohistochemical 염색인 Avidin-biotin complex (ABC)를 통해 인슐린 함유를 분석하였다.</p>