MIC는 한천 확산법(agar diffusion)을 이용하여 petri dish에 2 \( \mathrm { mL } \) 의 분획물과 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \) 의 시험균을 주입하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 72h(P. acnes), 24h(S. aureus, E. coli) 각각의 균들이 증식되지 않는 농도를 MIC로 측정하였다. TLC 및 HPLC를 이용하여 ethyl acetate 분획과 deglycosylated 분획을 분석하고, 이미 보고된 분광학적 자료, 플라보노이드 표준물질의 Rf 값과 자외선 및 발색법을 이용하여 성분 확인하였다. 모든 실험은 3회 반복하고 Student's t-test를 통해 \( 5 \% \) 유의수준에서 통계처리하였다. 일반적으로 세균의 세포막을 파괴해 세균을 사면시키는 시작을 응용해 최대의 효과를 얻을 수 있는 물질을 선택해 사용하고 며느리배꼽 추출물의 항균활성 측정 결과 사용되고 있는 방부제나 항균제가 평균적인 농도 범위내에서 사용하고 있는 것을 감안해 천연 방부제, 항균제로서의 역할이 충분히 기대된다.
<p>최소 억제 농도(Minimum Inhibitory Concentration: MIC): 최소억제농도(MIC)는 한천 확산법(agar diffusion)을 이용하여 다음과 같이 측징하였다. 즉, 각각의 분획물들을 2 \( \mathrm { mL } \) 씩 함유한 배지 \( 20 \mathrm { ~mL } \) 를 petri dish에 주입하였고, 시험 균을 평판 배지 위에 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \) 집종하였다. P. acnes는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 72h 후에, \( S \). aureus와 E. coli는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24h 후에 육안으로 관찰하였을 때, 각각의 균들이 증식되지 않는 농도를 MIC로 결정하였다.</p> <h2>TLC 및 HPLC를 이용한 며느리배꼽 추출물의 플라보노이드 분석</h2> <p>며느리배꼽 추출물 중 ethyl acetate 분획을 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter(Milopore \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) )를 이용하여 여과하고 이 여액을 TLC 및 HPLC 분석을 위한 시료로 이용하였다. TLC 분석에서 ethyl acetate 분획의 전개용매는 ethyl acetate : chloroform : formic acid : water \( = 8: 1: 1: 1 \) (v/v)을 사용하여 분석하였고, deglycosylated 분획의 전개용매는 n-hexane: ethyl acetate : acetic acid \( =25: 14 \) : \( 5(v/v) 을 사용하여 분석하였다. 성분 확인은 이미 보고된 분광학적 자료, 플라보노이드 표준물질의 Rf 값과 자외선 및 발색법을 이용한 분리된 띠의 색상 등으로 확인하였다. HPLC 불석은 \( 2 \% \) acetic acid 수용액과 \( 0.5 \% \) acetic acid를 함유한 \( 50 \% \) acetonitrile 수용액을 기울기 용리법으로 분리하였고, ethyl acetate 분획과 deglycosylated 분획의 HPLC 분리조건은 각각 Table 1에 나타내었다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실험은 3회 반복하였고 통계분석은 \( 5 \% \) 유의수준에서 Student's \( t \)-test를 행하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>며느리배꼽 추출물의 항균 활성 측정</h2> <p>균에 대한 MIC 평가: 여드른균인 P. acnes에 대한 며느리 배꼽 추출물 중 \( 50 \% \) ethanol 추출물의 MIC 는 \( 0.5 \% \), ethyl acetate 분획은 \( 0.25 \% \) 로 나티났다. Ethyl acetate 분획의 경 우 methyl paraben \( (0.25 \%) \) 과 비교하여 동일한 항여드름균 활성을 나타내었고, 천연 플라보노이드 성분인 quercetin \( (0.3 \%) \) 과 비교하였을 경우 큰 항여드름균 활성을 나타내었다. 이러한 결과는 며느리배꼽 추출물의 ethyl acetate 분획이 여드름에 유효한 소재 및 화장품 개발에 용용가능성이 높음을 시사한다. 여드름 균처럼 특정 세균의 기능이나 생리활동을 약화 또는 억제시키거나 세균자체를 사면시키기 위한 목적의 항균제 이외에도, 화장숨에서는 제품의 변질이나 오염을 막기 위헤 다양한 종류의 방부제나 항균제가 사용되고 있다. 일반적으로 세균의 세포막을 파괴하여 세균을 사면시키는 기작을 응용하여 화장품에 응용되고 있는 방부제나 항균제들은 직집적으로 인체 피부와 접촉하여 반응하게 되므로 인체 피부에 영향을 주지 않는 가능한 한 최소량을 사용하여 최대의 효과를 얻을 수 있는 물질을 선택하여 사용하는 것이 중요하다. 이런 관점에서 살펴보면 본 실험에 대조군으로 사용된 호기성 균주인 S. aureus와 E. coli 에 대한 며느리배꼽 추출물의 항균활성 측정 결과, E. coli에 대해서는 비교물질인 methyl paraben, quercetin에 비하 여 낮은 활성을 니티내었다. 그러나 S. aureus에 대한 항균 활성은 며느리배꼽 추출물 중 ethyl acetate 분획의MIC는 \( 0.25 \% \) 로 methyl paraben(MIC: \( 0.25 \% \) )과 비교하여 동일한 항균활성을 나타내고 있음을 알 수 있다. 현재 사용되고 있는 방부-제나 항균제가 평균적으로 \(0.2 \sim 0.4 \% \)정도의 농도 범위 내에서 사용하고 있는 것을 감안하면 며느리배꼽 추출물 또한 천연 방부제, 항균제로서의 역할이 충분히 기대된다.</p>