포도와 오이 즙에 동충하초 균사체를 배양하여 얻은 배양액이 멜라닌 생성세포에 농도에 따라 멜라닌 생성을 억제함을 확인하였다. 이 배양액은 세포 독성이 없어 피부에 부작용이 없다. 따라서 이 배양액은 tyrosinase 활성을 억제하여 피부의 흑화나 색소침착을 방어하는 기능성 미백화장품 소재로 사용될 수 있다. 특히, 동충하초로 만들어진 멜라닌 생성 억제제는 약 15일 동안 배양하면 최대 억제 활성을 발휘하며, 그 이후로는 증가하지 않는다. 이로부터 포도와 오이 즙에 동충하초 균사체를 배양하는 과정이 약 15일 정도가 최적이라는 결과를 도출하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>배양기간에 따른 멜라닌 생성 억제</h2> <p>포도와 오이즙액에 동충하초 균사체를 기간별로 배양하여 각각의 배양액이 가지는 멜라닌 생성억제 효과를 측정한 결과 배양일수가 증가할수록 억제율이 높았으며, 15일을 기점으로 멜라닌 생성억제 활성이 최대치에 도달하였다. 이 결과에서 동충하초가 생성하는 멜라닌 생성 억제제가 15일을 기점으로 최대로 만들어지며, 그 이후에는 억제활성이 증가하지 않는 점을 볼 때 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체를 배양할 때 재료 및 방법에서 설명한 조건하에서는 약 15일정도의 배양이 미백화장품 원료로서 최적임을 확인하였다.</p> <h2>시료의 농도에 따른 멜라닌 생성 억제</h2> <p>포도와 오이즙액에 동충하초 균사체를 15일간 배양한 배양액을 B16BL6 mouse melanoma cell에 처리 하였을 때, 무 처리 세포에 비하여 멜라닌 생성이 억제됨을 Fig. 2A와 같이 육안으로 확인하였고, 억제율은 Fig. 2B와 같이 흡광도를 이 용하여 확인 한 결과 \( 2 \% \) 첨가 시 \( 50 \%, 5 \% \) 첨가 시 \( 100 \% \) 멜라닌 생성이 억제됨을 확인하였다. 이와 같은 결과에서 볼 때 포도와 오이 즙액에 동충하초 균사체를 배양한 배양액을 멜라닌 생성세포에 처리 시 농도 의존적으로 멜라닌 생성억제 효과가 나타남을 확인 할 수 있었다.</p> <h2>포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액의 세포독성</h2> <p>포도와 오이즙액 및 이 즙액에 동충하초 균사체를 배양한 배양액의 멜라닌 생성세포에 처리로 인한 세포독성조사 결과, Fig. 3B와 같이 포도와 오이즙액은 \( 5 \% \) 첨가 시 \( 50 \% \)의 세포가 사멸하는 것을 보였으며, \( 9 \% \) 이상 첨가에서는 세포가 모두 사멸됨을 확인하였다. 포도와 오이 즙액에 동충하초 균사체 배양액은 \( 20 \% \)의 농도까지 첨가하였을 때, 세포독성이 없는 것을 관찰하였다. 이 결과에서 볼 때 포도와 오이 즙액 자체의 세포독성을 동충하초 균사체를 배양함으로써 제거되었을 것으로 판단된다. 그리고 세포에 대한 독성이 없는 것으로 볼 때 피부에 대한 자극적인 부작용이 없는 것으로 판단되며, 이 배양액의 피부자극실험은 이 등이 앞서 보고 한 바 있다.</p> <h2>Tyrosinase 활성억제 측정</h2> <p>포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액의 in vitro tyrosinase 활성억제조사에서는 시료의 처리 농도가 높아질수록 멜라닌 생성 억제율이 증가하는 것을 관찰하였다. Fig. 4와 같이 배양액을 \( 10 \% \) 첨가 시 \( 50 \% \)의 멜라닌 생성 억제율을 보였으며, 최종 \(30\%\) 농도에서는 tyrosinase 활성을 \( 100 \% \) 억제시키는 것을 관찰할 수 있었다. 피부는 자외선에 노출되면 서 tyrosinase의 작용으로 melanosome에서 멜라닌이 합성되어 피부노화가 촉진되며, 이때 생성된 자유라디칼은 지질, 단백질, 당 및 핵산을 손상시키고 세포막의 파괴에 관여함으로써 돌연변이 유발, 피부암의 발암, 성인병 및 노화등을 촉진시키는 원인요소로 알려져 있다. 따라서 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액은 tyrosinase 활성을 억제시킴으로서 피부 흑화나 색소침착 등을 방어할 수 있는 기능성 미백화장품 소재로 이용 가능하리라 생각된다.</p>