CLA 시료는 지방산이 없는 BSA와 복합체를 형성하여 세포배양에 사용되었다. CLA 시료의 독성은 MTT assay를 통해 측정되었으며, MTT solution을 제거하고 PBS로 세포를 세척한 후 DMSO를 이용해 formazan crystal을 용해시켰다. 이후, 96-well plate로 이동하여 Anthos 2020 model microplate reader로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생육 정도를 파악하였다. 데이터는 평균과 표준편차로 표현하였으며, 통계적 분석은 SAS 프로그램과 one-way ANOVA, 그리고 Duncan's multiple range test를 통해 수행하였다.
<h2>색도분석</h2> <p>CLA 시료의 색도는 Minolta model CM-3600d colorimeter(Tokyo. Japan)를 이용하여 측정하였다. 색도는 L(brightness), a (red/green), and b (yellow/blue) 값으로 표시하였다.</p> <h2>CLA 시료 처리 및 세포독성 assay</h2> <p>CLA 시료는 fatty acid-free BSA와 complex를 만들어 세포배양에 사용하였다. MCF-7 세포와 SK-N-SH 세포는 \( 10 \% \) FBS와 penicillin/streptomycin이 함유된 DMEM/F-12 배지에서 그리고 PC-3과 A-549 및 HT-29는 \( 10 \% \) FBS와 pen-icillin/streptomycin이 함유된 RPMI 1640 배지에서 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 3 } \)가 공급되는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양기에서 배양하였다. 세포가 \( 80 \% \)정도 자라면 배지를 제거한 후 PBS로 3회 세척하고 \( 0.25 \% \) trypsin-EDTA 용액 \( 1 \mathrm { ml } \)를 5분간 처리하고 원심분리 \( (1,500 \mathrm { rpm } ) \)하여 세포를 분리하였다. 이들 세포를 24-well plate \( \left (1.5 \times 10 ^ { 5 } \right . \) cells/ \( 0.5 \mathrm { ml } / \) well \( ) \)에서 24시간 배양하였다. 이들로부터 배지를 제거하고 PBS로 3회 세척 후 serum free media(SFM)를 넣고 CLA 시료(c-CLA, d-CLA, r-CLA)를 농도별 ( \( 0, 10,40 \mu \mathrm { M } ) \)로 처리하고 48시간 배양하였다.</p> <p>처리된 CLA 시료의 독성은 MTT assay로 측정하였다. CLA 시료가 처리된 세포의 배지를 제거하고, PBS로 세척(3회)하고, MTT 시약(5 \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) PBS \( ) \)을 well당 100 μl 가하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3시간 배양하였다. 그 후 MTT solution을 제거하고 PBS로 세척한 뒤 DMSO를 well당 200 μl씩 처리한 뒤 for-mazan crystal을 녹였다. 이를 새로운 96-well plate의 well당 100 μl 옮겨 Anthos 2020 model microplate reader (AnthosLabtech Instruments, Wals, Austria)로 \( 570 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 세포의 생육정도를 계산하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>Data는 mean±standard deviation (SD)으로 나타내었고, Statistical Analysis System (SAS) 프로그램을 이용하여 one-way ANOVA와 Duncan's multiple range test를 통해 분석하였다. Data의 유의수준은 p<0.05 이상으로 하였다.</p>