서울과 경기에 위치한 산후조리원에서 모유 영양아들의 분변을 분석하여 총 313 주의 유산균을 분리했다. 이 중에서 세균 Salmonella typhimurium KCTC 2054에 대한 강력한 항균력을 가진 IDCC 9203이 발견되었으며, 이는 Lactobacillus johnsonii로 신원을 확인하였다. IDCC 9203은 MRS 액체배지에서의 생존율이 높으며, 특히, 낮은 pH 및 담즙 존재 조건에서도 높은 생존율을 보였다. 추가로, 이 유산균은 \( \beta \)-lactam 계열의 항생제인 penicillin에 민감하게 반응하지만, aminoglycoside 계열의 항생제인 gentamicin과 kanamycin에 대해서는 내성을 보였다.
<p>또한 투여된 lactobacilli가 다른 장기로 전이되는지 확인하기 위하여 시험 종료 후 실험동물을 희생하여 비장, 간, 혈액의 조직을 적출하고 LBS 평판배지를 사용하여 lactobacilli 균수를 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>유산균 분리</h2> <p>서울, 경기 소재 산후 조리원에서 생후 2 주 이내의 모유 영양아로부터 분변을 채취하고 LBS 평판배지 \( ( \mathrm { pH } 4.0, 0.3 \% \) bile 함유)에 도말하여 총 313 주의 유산균을 분리하였다. 분리된 유산균 중에서 Salmonella typhimurium KCTC 2054에 대한 항균력이 우수한 IDCC 9203을 선발하였다(data not shown).</p> <p>크기의 염기서열을 NCBI의 BLAST program을 이용하여 상동성을 비교한 결과 \( 99.2 \% \) 의 신뢰도로 Lactobacillus johnsonii로 동정되었다(Fig. 2). 따라서 본 연구에서 선발한 IDCC 9203 균주를 L. johnsonii IDCC 9203으로 명명하였다(GenBank AY862434).</p> <h2>내산성 및 내담즙산성</h2> <p>L. johnsonii IDCC 9203을 pH 2.3으로 보정한 MRS 액체배지에서 2 시간 배양했을 때 약 \( 81 \% \) 의 생존율을 보였으며 bile \(0.3 \% \)를 첨가한 MRS 액체배지에서 5 시간 배양했을때 약 \( 57 \% \) 의 생존율을 보였다. 공복시 위내는 pH 2.0 이하의 강산성이지만 음식물 섭취 후 2-3시간 동안은 음식물에 희석되어 pH 2.0 이상인 점을 감안할 때, L. johnsonii IDCC 9203은 산과 담즙에 대한 내성이 있어 위장관에서의 생존가능성이 높을 것으로 기대된다.</p> <h2>항생제 감수성</h2> <p>L. johnsonii IDCC 9203은 \( \beta \)-lactam 계열의 항생제인 penicillin 등에 대해서는 감수성을 나타냈고, aminoglycoside 계열의 항생제인 gentamicin, kanamycin 등에는 내성을 나타내었다. Danielsen 등이 수행한 lactobacilli 항생제 감수성 결과와 대부분 유사하였으나, L. johnsonii IDCC 9203은 tetracycline에 내성을 갖는 특징이 있었다[8].</p> <h2>S. typhimurium에 대한 항균력</h2> <p>시험균의 S. typhimurium KCTC 2054에 대한 항균력을 평가하기 위하여 시험균의 배양여액이 함유된 BHI 액체배지에 S. typhimurium KCTC 2054를 배양하면서 생균수를 측정하였다. 시험균 배양여액 pH 4.0을 사용한 경우 S.typhimurium KCTC 2054는 \( 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { mL } \) 에서 \( 10 ^ { 5 } \mathrm { CFU } / \) \( \mathrm { mL } \) 로 감소한 반면, pH 7.0으로 조정한 시험균 배양여액에서는 \( 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { mL } \) 에서 \( 10 ^ { 9 } \mathrm { CFU } / \mathrm { mL } \) 로 증가하였고, 시험균간에 큰 차이가 없었다. 또한 대조군으로 lacticacid를 사용하여 pH 4.0으로 조정한 MRS 액체배지는 시험균 배양여액과 유사한 항균효과를 나타내었으나, pH 7.0 MRS 액체배지는 항균효과를 나타내지 못했다. 배양여액을 중화시키면 항균력이 소실되는 결과를 볼 때, 항균효과는 lactic acid를 비롯한 유기산 생성으로 인한 강한 산도 때문일 것으로 추정된다.</p>