감태 효소분해산물의 Elastase 저해활성 측정은 James의 방법에 따라 \( 50\mathrm { mM } \) Tris-\( \mathrm { HCl } \) buffer\(( \mathrm { pH } 8.2) \)에 기질과 elastase를 용해하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 415 \mathrm {nm } \)에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 각 시료마다 세 번씩 반복 실험하였으며, 얻은 결과를 실험군당 평균과 표준편차를 계산하여 분석하였다.
<p>저해율(\(\%\)) \( = \left [1- \left ( \mathrm { S } _ {\mathrm { Abs } } - \mathrm { B } _ {\mathrm { Abs } } \right ) / \mathrm { C } _ {\mathrm { Abs } } \right ] \times 100 \)</p> <p>\(\mathrm{S _ { Abs }} \): Sample absorbance \(\mathrm{B _ { Abs }} \) : Blank absorbance \(\mathrm{C _ { Abs }} \) : Control absorbance</p> <h1>Elastase 저해활성 측정</h1> <p>감태 효소분해산물의 elastase 저해활성 측정은 James의 방법에 따라 측정하였다. 피부노화, 특히 주름 생성에 있어 주된 역할을 하는 matrix metallo proteinases (MMPs)인 elastase의 저해활성 측정 방법은 다음과 같다. 효소반응은 \(50 \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer (\( \mathrm { pH }  8.2\))에 기질인 \( 0.5 \mathrm { mM } \mathrm { N } \)-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroniline을 용해하여 시료 및 elastase (\(1  \mathrm { unit/ml } \) ) 효소용액을 첨가하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10분간 반응시킨 후 \( 415 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. Elastase 저해활성은 다음의 식에 의해 계산하였다.</p> <p>Inhibitory activity \( ( \%)=[1-S / C] \times 100 \)</p> <p>\(S\) : 시료 첨가구의흡광도 \(C\) : 시료 무첨가구의흡광도</p> <h1>통계분석</h1> <p>본 실험에서 얻은 결과는 각 시료마다 세 번씩 반복 실험을 통해 실험군당 평균과 표준편차를 계산하여 나타내었다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주의 분리 및 동정</h2> <p>기장 해안의 해수에서 분리한 해양 미생물은 agar plate 표면에 colony를 중심으로 오목해지거나 clear zone 형성되었고, 5 일이 경과한 후 agar plate가 매우 유연해져 있음을 확인하였다. 이를 토대로, 이 미생물은 효과적인 agar 분해능이 있음을 알 수 있었고 그 중 활성이 높은 균주를 SC092라 명명하여 본 연구에 사용하였다. SC092는 16S rDNA sequence 분석으로 Microdullifer sp.와 높은 유사성이 있었으며 이는 GenBank 와 NCBI database의 alignment 결과에 기초하였다(Fig. 1). Microbulbifer sp. 에 대한 보고에 의하면 Jonnadula 등은 해조류로부터 분리된 Micrabulbifer CMC-5 균주가 비소화성 복합다당류인 agar 등을 분해하는 것으로 보고하였고, Song에 의하면 Microbulbifer sp. AJ-3 균주가 agar 및 agarose 분해능이 아주 높다고 하였다. 이는 본 연구결과인 Microdullifer sp. SC092가 agar 분해능이 높게 나타날 수 있음을 뒷받침하고 있다.</p>