시료에 의한 보체 소비 후 잔여 보체에 의한 적혈구 용혈정도에 근거를 두는 complement fixation test법으로 황보체 활성을 측정하였다. 반응액을 \(2800\mathrm{rmp}\)에서 약 10분간 원심분리를 해서 얻은 상등액의 흡광도를 \(412\mathrm{nm}\)에서 측정하였다. 고추잎 \(600\mathrm{g}\)의 10배의 증류수를 기로 될 때가지 3회의 가열과정을 반복해서 얻은 열수추출 상등액을 농축하고 4배의 methanol을 가해 5회 환류 추출하여 mathanol 가용 성분을 분리했다.
<h3>항보체 활성의 측정</h3> <p>항보체 활성은 시료에 의한 보체 소비(complement com-sumption)후 잔여 보체에 의한 적혈구 용혈 정도에 근거를둔 complement fixation test법으로 측정하였다. 즉, 여러 농도로 증류수에 녹이거나 분산시킨 시료에 정상인의 혈청과 2% gelatin, 3mM \( \mathrm { Ca } ^ { 2 + } , 10 mM \mathrm { Mg } ^ { 2 + } \) 이 함유된 \( \mathrm { GVB } ^ { 2 + } \) (gelatin veronal buffered saline, pH 7.4을 각각 50ul 씩 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 분간 1 차 반웅시킨 후 이 반응액에 \( \mathrm { GVB } ^ { 2 + } \) 를 350ul 가하고 이를 10~160 배로 연속 희석하였다. 여기에 다시 750 ul 의 \( \mathrm { GVB } ^ { 2 + } \) 와 양의 감작 적혈구(1X \( 10 ^ { 8 } \) cells/ml)를 250 ul가해 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 60 분간 2차 반응시킨후 PBS(phosphated buffered saline, pH 7.4) 2.5 ml 을 가하여 반응을 정지시켰다. 이 반응액을 2800 rpm 에서 약 10 분간 원심분리하여 얻어진 상등액의 흡광도를 412 nm 에서 측정하였다. 항보체 활성은 혈청과 buffer, 시료대신 중류수만을 반응시킨 대조군의 충보체 용혈(50% total complement hemolysis, \( \mathrm { TCH } _ { 50 } \% \) )에 대한 저지율(inhibition of 50% total complement hemolysis, \( \mathrm { ITCH } _ { 50 } \% \) )로서 나타내었다.<p>Inhibition of \( \mathrm { TCH } _ { 50 } ( \%) = \)</p> <p>\( \mathrm { TCH } _ { 50 } \) of control - TCH \( \mathrm { T } _ { 30 } \) of treated with sample \( \times 100( \%) \) \( \mathrm { TCH } _ { 50 } \) of control</p> <h3>항보체 활성 물질의 추출</h3> <p>고추잎 600 g 에 10 배의 증류수를 기로 될 때까지의 가열과정을 3회 반복하여 얻은 열수추출 상등액을 농축하고 4 배의 methanol을 가해 5회 환류 추출 하여 methanol 가용 성분을 분리하였다. Methanol 비가용 성분을 소량의 중류수에 녹인 후 5 배의 ethanol을 가해 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24 시간 교반하여 ethanol 가용 성분을 분리하였다. 다시 ethanol 침전 성분을 물에 재용해하여 3 일간 증류수에서 투석한 다음 비투석된 성분을 농축, 동걸건조하여 조다당 CAL-0로 조제하였다(Fig. 1).</p>