토양에서 분리한 미생물인 Norcardia orientalis를 배양하여 반코마이신을 얻었다. 발효액에서 균체를 제거하고, 반코마이신이 함유된 발효 배양액을 정제하였다. 양이온 교환수지와 음이온 교환수지, 다공성 양이온교환수지를 연속적으로 통과시킨 후 암모니아로 용출하였다. 그 다음, 알루미나 및 약산성 양이온 교환수지를 이용하여 색소와 단백질 등의 불순물을 제거한 후, 염산염 형태의 반코마이신(순도: \( 88 \% \))을 얻어 결정화 공정을 수행하였다.
<p>본 실험에 사용된 반코마이신은 토양으로부터 분리한 미생물인 Norcardia orientalis 배양을 통하여 얻었다. 발효액으로부터 균체를 제거하고, 반코마이신을 함유한 발효 배양액을 정제하였다. 양이온 교환수지와 음이온 교환수지 및 다공성 양이온교환수지를 연속 통과하여 암모니아로 용출 한 뒤, 알루미나 및 약산성 양이온 교환수지를 이용하여 색소 및 단백질 등의 불순물을 제거한 염산염 형태의 반코 마이신(순도: \( 88 \% \) )을 얻어 결정화 공정에 이용하였다.</p> <p>실리카겔을 이용한 표면적이 증가된 결정화 공정의 개략도를 Fig. 1에 나타내었다. 먼저 시료(반코마이신 순도: \( 88 \% \) ) 를 \( 1 \mathrm { ~N } \) 염산으로 \( \mathrm { pH } 2.5 \), 전도도는 염화나트름을 이용해 \( 20 \mathrm { ~ms } / \mathrm { cm } \) 로 조절한 증류수에 용해하고 이온성 액체의 종류와 양을 달리하여 반코마이신이 녹아 있는 증류수 용액에 첨가하였다. 본 실험에서는 범용으로 사용되는 대표적 이온성 액체인 1-butyl-3-methylimidazolium chloride ([BMIm]Cl), 1-butyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate ([BMIm] [PF \( \mathrm { PF } _ { 6 } \) ), 1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate ([BMIm] \( \left . \left [ \mathrm { BF } _ { 4 } \right ] \right ) \) 를 사용하였으며 이들의 주요 특성을 Table 1에 나타내었다. 반코마이신 \( 0.1 \mathrm { ~g } \) 을 증류수와 이온성 액체 혼합 용액 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 녹여 반코마이신 용액을 제조하였다. 염화나트륨는 \( \mathrm { pH } \) 에 영항을 주지 않기 때문에 \( \mathrm { pH } \) 부터 먼저 조절하였다. 교반 \( (640 \mathrm { rpm } ) \) 하에서 \( 3.5 \mathrm { ml } \) 아세톤을 \( 1.0 \mathrm { ml } \) 반코마이신 용액에 떨어뜨렸다. 교반을 중단하고 반응엑액부피당 표면적 증가를 위해 실리카겔(입자크기: \( 230-400 \) mesh, 기공지름: \( 60 \AA \), 기공부피: \( 0.79 \mathrm { ~cm } ^ { 3 } / \mathrm { g } \), 표면적: \( 405 \mathrm { ~m } ^ { 2 } / \mathrm { g } \) )을 첨가 \( (0.15 \mathrm { ~g } \) silica gel \( / 4.5 \mathrm { ml } \) solution)하고 결정을 유도하였다. 생성된 반코마이신 결정을 여과지 \( (150 \mathrm { ~mm } \), Whatman,Buckinghamshire, UK)로 여과와 동시에 아세톤으로 세척하여 결정 표면에 불순물을 제거하였다.</p>