Caco-2 cells에 대한 부착능 시험은 IDCC 9203, L. acidophilus, L. fermentum, L. reuteri, L. rhamnosus를 시험균으로 S. typhimurium KCTC 2054를 지시균으로 3가지 방법으로 진행하였고, Caco-2 cell monolayer는 10% fetal calf serum과 20 uL/mL의 감소된 Dulbecco's modified Eagle medium 사이에 분산하고 37\(^\circ \mathrm{C}\)에서 5% CO_2 환경에서 일주일간 자리시킨 후 사용하였다.
<h2>In vitro 부착능</h2> <p>Caco- 2 cells에 대한 부착능 시험은 시험균으로 IDCC 9203, L. acidophilus, L. fermentum, L. reuteri, L. rhamnosus를 사용하였고, 지시균으로는 S. typhimurium KCTC 2054를 사용하였다. 부착능 시험은 시험균과 S. typhimurium KCTC 2054 각각의 부착능 정도를 비교한 시험, 시험균을 Caco-2 cells에 먼저 부착시킨 후 S. typhimurium KCTC 2054를 부착시키는 시험, 시험균과 S. typhimurium KCTC 2054를 동시에 처리하여 경쟁적으로 부착시키는 시험 등 3 가지 방법으로 구분하여 진행하였다. Caco-2 cell monolayer는 Caco-2 cells를 \( 10 \% \)(v_v) fetal calf serum과 \( 20 \mathrm { uL } / \mathrm { mL } \)의 gentamicin을 첨가한 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM, Hyclone, USA)에 \( 1.2 \times 10 ^ { 5 } \) cells \( / \mathrm { mL } \) 농도로 접종하고 six-well tissue culture plate(Becton, Dickinson and Company, USA) well 당 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 분주하여 7일간 배양한 후, phosphate buffered saline(PBS, \( \mathrm { pH } \) 7.2)으로 2회 세척하여 제조하였다. 시험균 및 S. typhimurium KCTC 2054의 시료는 각각 MRS와 BHI 배양액 \( 10 \mathrm { ~mL } \) 를 원심분리하여 균체를 회수하고 \( \mathrm { PBS } \) 로 2회 세척한 다음 \( 1 \mathrm { ~mL } \mathrm { PBS } \) 에 재현탁하고 serum-free한 DMEM에 \( 1 \times 10 ^ { 8 } \mathrm { CFU } / \mathrm { mL } \) 농도로 희석하여 조제하였다. 모든 반응은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 실시하였으며 시험균은 MRS 평판배지에서 생균수를 측정하였고 S. typhimurium KCTC 2054는 BHI 평판배지에서 측정하였다.Tween \( 80(0.04 \%, \mathrm { w } / \mathrm { v } ) 1 \mathrm { ~mL } \) 를 가하여 시험균 및 \( S \). typhimurium KCTC 2054를 회수하였다. 시험균 및 S.typhimurium KCTC 2054의 Caco-2 cells에 대한 부착율은 다음과 같이 계산하였다.</p> <caption>Caco-2 cells 부착율 \( \% \) \( = [ \) 부착 균수 \( / \) 초기 처리균수 \( ] \times 100 \)</caption>