세포주기의 변화가 FACT 복합체의 단위체중 hSpt16 단백질 발현에 영향이 있는지 알아보기 위해 웨스턴 블롯을 수행하였다. hSpt16이 휴지기 상태의 세포가 아닌 증식이 일어나고 있는 세포에서 발현 이 증가했다. 또한 FACT 복합체의 단위체중 하나인 SSRP1 단백질 발현에도 영향을 끼치는지 알아보았으나 hSpt16과는 다르게 세포주기가 \( \mathrm { G } _ { 0 } \)기에 정지되어 있는 T98G 세포와 세포주기가 진행되고 있는 T98G 세포에서 SSRP1 단백질 발현 수준이 변화가 없었다.
<p>이러한 세포주기의 변화가 FACT 복합체의 단위체중 하나 인 hSpt16 단백질 발현에 영향을 미치는지 알아보기 위해 Western blot을 수행하였다. Fig. 3A의 결과에서 보둣이 세 포주기가 \( \mathrm { G } _ { 0 } \)기에 정지되어 있는 T98G 세포에서는 세포주기 가 진행되고 있는 T98G 세포와 비교하여 볼 때 hSpt16 단백 질의 발헌 수준이 급격히 감소되어 있음을 관찰할 수 있다.</p> <p>Fig.3A의 결과를 정량적으로 분석해보면 세포주기가 \( \mathrm { G } _ { 0 } \)기에 정지되어 있는 T98G 세포에 비해 세포주기가 진행되고 있는 T98G 세포에서 hSpt16가 18.5배 많이 발현됨을 알 수 있었다. 우리는 또한 면역형광 분석법을 이용하여 hSpt16 이 발현되는 위치와 세포주기에 따른 발현 양의 변화를 관찰 하였다. Fig. 4 의 결과에서 보듯이 세포주기가 \( \mathrm { G } _ { 0 } \)기에 정지되어 있는 T98G 세포에 비해 세포주기가 진행되고 있는 T98G세포에서 FITC로 염색된 hSpt16 양이 감소함을 관찰할 수 있었다. 또한 PI를 이용하여 핵을 염색하고 hSpt16의 세포내 위치를 측정한 결과 기존의 문헌에서 보고된 바와 같이 핵 속에 존재하고 있음이 관찰되었다. 위의 결과 들로부터 FACT 단백질 복합체의 단위체인 hSpt16이 휴지기 상태의 세포에서 보다 증식이 일어나고 있는 세포에서 발현 이 증가함을 알 수 있다.</p> <p>세포주기의 변화가 FACT 복합체의 단위체중 하나인 SSRP1 단백질 발현에 영향을 미치는지 알아보기 위해 Western blot을 수행하였다. 다른 단위체인 hSpt16과는 달리 세포주기가 \( \mathrm { G } _ { 0 } \)기에 정지되어 있는 T98G 세포와 세포주기가 진행되고 있는 T98G 세포에서 SSRP1 단백질 발현 수준이 변화가 없음을 관찰할 수 있었다.</p> <p>FACT 복합체는 in vitro와 in vivo에서 뉴클레오좀을 해체 함으로써 전사 진행을 활성화 한다고 보고되었다. 또 한 FACT 복합체가 히스톤 단백질과 상호 작용 할 뿐 아니라 뉴클레오좀 형성을 촉진하는 활성을 가지고 있고 이러한 활성은 단위체인 hSpt16 단백질의 C-말단과 직접적인 연관이 있다는 연구 결과가 발표되었고 이로부터 히스톤 chaperone 으로 작용할 것이라 제시되었다. 본 연구에서는 FACT 복합체의 단위체인 hSpt16 단백질의 발현이 휴지기 세포에서 중식이 일어나고 있는 세포와 비교하여 급격히 감소되어 있음을 관찰하였다. 이러한 결과는 chromatin assembly factor-1 (CAF-1)이라는 히스톤 chaperone이 증식 이 일어나고 있는 세포에서 과발현된다는 기존의 연구 결과와 일치하고 있다. 본 연구 결과는 hSpt16 단백질이 세포 증식의 표지로 사용될 수 있음을 제시하였고 또한 다양한 암 의 진단에 사용될 수 있을 것으로 사료된다.</p> <h1>요 약</h1> <p>FACT(facilitates chromatin transcription)은 크로마틴을 주형으로 하는 전사에 필요한 크로마틴 특이적 전사 진행 인 자이다. FACT는 Saccharomyces Cerevisiae Spt16/Cdc68의 인간 유사체와 high mobility froup-1-like protein structure-specific recognition protein-1(SSRP-1)의 이종단백질 복합체이다. 본 논문에서는 FACT의 단위체인 hSpt16의 발현 이 휴지기의 T98G 세포에서 급격히 감소됨을 면역형광 분석 법과 Western blot 분석법을 이용하여 관찰하였다. 이와 반 대로 증식기의 T98G 세포에서는 hSpt16이 높은 수준으로 발 현되고 있는 것이 관찰되었다. FACT의 또 다른 단위체 SSRP-1의 발현은 휴지기나 증식기의 세포에서 변화가 없음이 관찰되었다. 이상의 결과로부터 hSpt16이 발현이 세포의 증식과 연관이 되어 있음을 알 수 있었고 세포 증식 포지 인 자로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.</p>