PCR을 이용해 획득한 Pseudomonas sp. SW-3 유래 lipase 유전자를 포함한 plasmid pET-Lip을 KCL-1에 형질 전환하여 실험하였다. 탄소원이 결핍된 C-배지에 glucose, soybean oil, kerosene을 첨가한 본배양 배지에서 37°C, 180rpm 조건으로 96시간 동안 균주를 배양하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주</h2> <p>본 연구에서 사용된 균주는 유류로 오염된 헤양으로부터 분리 동정된 Klebsiella sp. KCL-1 이었다. PCR을 통하여 획득된 Pseudomonas sp. SW-3유래의 lipase 유전자가 포함되어 있는 plasmid pET-Lip (Fig. 1)을 KCL-1에 형질 전환하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>배지 및 배양방법</h2> <p>표면활성을 측정하기 위해 실험 균주롤 LB 액체 배지에서 16 시간 전배양한 후 1/100 의 량으로 본 배양용 배지 \( 500 \mathrm { ml } \)에 접종하여 본배양 하였다. 본배양 배지로는 탄소원이 결핍 된 C-배지(Carbon-minimal medium)에 탄소원으로 glucose,soybean oil, kerosene을 각각 첨가한 후 사용하였으며, 각 배지에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 180 \mathrm { rpm } \) 으로 진탕하면서 96시간 동안 배양하였다. C-배지의 조성은 \( \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } 5 \mathrm { ~g } , \mathrm { ~K } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } 2 \mathrm { ~g } , \mathrm { MgSO } _ { 4 } \) - \( 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 0.2 \mathrm { ~g } , \mathrm { KH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } 1 \mathrm { ~g } , \mathrm { CaCl } _ { 2 } 10 \mathrm { mg } , \mathrm { FeSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 10 \mathrm { mg } , \mathrm { NaCl } 30 \mathrm { ~g } \), yeast extract \( 0.2 \mathrm { ~g } \) per liter and trace ele-ment solution \( 2 \mathrm { ml } \left ( \mathrm { MoO } _ { 3 } 1 \mathrm { mg } , \mathrm { ZnSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 7 \mathrm { mg } \right . \), \( \mathrm { CuSO } _ { 4 } \cdot 5 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 0.5 \mathrm { mg } , \mathrm { H } _ { 3 } \mathrm { BO } _ { 3 } \mathrm { mg } , \mathrm { CoCl } _ { 2 } \cdot 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 6 \mathrm { mg } \), \( \mathrm { NiSO } _ { 4 } \cdot 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } 1 \mathrm { mg } \) per liter)를 함유하고 있으며, \( \mathrm { pH } 7.0 \) 으 로 조정하여 사용하였다.</p>