Platycodin D는 RT-PCR 및 Western blotting을 통해 mRNA 및 단백질 수준에서 apoptosis 조절 인자들의 발현에 미치는 영향을 확인하였고, Bcl-2 family의 pro-apoptotic 유전자인 Bax의 발현이 platycodin D 처리농도 의존적으로 증가하였으며, anti-apoptotic 유전자인 Bcl-2 및 Bcl-xL의 발현에는 큰 변화가 관찰되지 않았고, IAP family의 발현 감소가 중요한 역할을 한다는 걸 알 수 있다. Platycodin D의 영향을 조사해보면 비활성화 상태의 pro-form의 caspase-3의 발현이 감소하고, 활성화 상태의 cleavage-form이 점차 증가하는데 이는 세포의 생존에 중요한 미토콘드리아의 손상과 연계성을 가지고 U937 세포의 apoptosis 유발은 mitochodrial pathway를 통하여 일어난다는 것을 알 수 있다.
<h2>Apoptosis 조절 주요 인자들의 발현에 미치는 platycodin \( \mathrm { D } \) 의 영향</h2> <p>Platycodin D 처리에 의한 apoptosis 유발 기전해석의 일환으로 주요 apoptosis 조절인자들의 발현에 미치는 platycodin \( \mathrm { D } \) 의 영향을 RT-PCR과 Western blotting을 통하여 mRNA 및 단백질 수준에서의 변화 여부를 확인하였다. 먼저 Bcl-2 fam- ily에 속하는 인자들 중, pro-apoptotic 유전자인 Bax의 발현이 platycodin D 처리농도 의존적으로 현저하게 증가된 반면, an-ti-apoptotic 유전자인 Bcl-2 및 Bcl-xL의 발현에는 큰 변화가 관찰되지 않았다. 다음으로 caspases 활성을 억제함으 로서 apoptosis를 억제하는 것으로 알려진 IAP family의 발현 에 platycodin \( \mathrm { D } \) 이 어떠한 영향을 미치는 지를 확인한 결과, cIAP-1의 발현에는 큰 변화가 관찰되지 않았지만 XIAP 및 cIAP-2의 발현이 platycodin D 처리에 의하여 감소되는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 살펴볼 때 platycodin D에 의하여 유발되는 apoptosis는 pro-apoptotic 유전자인 Bax의 증가와 IAP family 유전자 중 XIAP 및 cIAP-2의 발현 감소가 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있었다.</p> <h2>Caspases의 활성 및 기질 단백질의 발현에 미치는platycodin \( \mathrm { D } \) 의 영향</h2> <p>tycodin D의 영향을 조사하였다. Fig. \( 4 \mathrm { ~A } \) 의 결과에서 알 수 있듯이 platycodin D 처리 농도 의존적으로 비활성화 상태의 pro-form의 caspase-3의 발현이 감소하였으며, 활성화 상태의 cleavage-form이 점차 증가됨을 알 수 있었다. 또한 caspase-3 의 활성 여부를 재확인하기 위하여 in vitro caspase-3 활성을정량적인 방법으로 분석한 결과, Fig. 4C에 나타난 바와 같이DEVD-pNA를 기질로 한 in vitro 활성 결과에서도 caspase-3이 platycodin D 처리농도 의존적으로 증가하였다. 다음으로활성화된 caspase-3에 의하여 특이하게 분해가 일어나는 기질단백질의 발현에 미치는 platycodin D의 영향을 조사한 결과,platycodin D의 처리에 의하여 DNA repair와 genomic stabil- \( \mathrm { ity } \) 에 관여하는 PARP 단백질의 주단백질 발현감소와 더불어단편화된 단백질의 발현 증가가 관찰되었다. \( 4 \mathrm { ~A } ) \). 이러한 platycodin D 처리에 의한 U937 세포의 apoptosis 유발은 세포 내 에너지 생산 기관으로 세포의 생존에 중요한 기능을주행하는 미토콘드리아의 손상과 연계성을 가지는지를 조사하기 위하여 JC-1 염색을 통한 MMP 소실의 정도를 조사한결과, platycodin D 처리농도 의존적으로 MMP의 소실이 증 가되어 platycodin D 처리에 의한 U937 세포의 apoptosis 유발은 미토콘드리아 기능 손상과 연계성을 가지고 있음을 확인 할 수 있었다. 이상의 결과를 살펴볼 때 platycodin D 처리에 따른 인체 혈구암세포인 U937 세포에서의 apopto-sis 유발은 pro-apoptotic 유전자인 Bax의 증가와 IAP family 유전자 중 XIAP 및 CIAP-2의 감소를 통해 미토콘드리아 기능 손상을 초래하여 caspase- 3 의 활성화와 더불어 기질단백질들의 단편화 및 발현 감소 등과 같은 전형적인 mitochodrial pathway를 통하여 일어난다는 것을 알 수 있었으며, 특히 cas-pase-3의 활성화가 중요한 역할을 한다는 것을 알 수 있었다.</p>