B. amyloliquefa-ciens IUB158-03에서 생산한 항진균물질은 iturin계에 속하지만, 아미노산 조성의 차이가 존재해 새로운 항진균물질 개발 가능성이 있음이 발견되었다. 이 항진균물질을 NIH3T3 세포에 처리한 결과, 농도 \( 500 \mu \mathrm { l } / \mathrm { ml } \)부터 세포 생존율이 감소하였으나, 농도 \( 50 \% \) inhibition concentration ( \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) )보다는 낮지 않았다. 따라서, 이 항진균물질은 세포에 독성이 없으며, 생체 내 염증 반응을 유발하지 않는다는 결론을 내릴 수 있다.
<h2>NMR spectroscopy에 의한 분자구조 분석</h2> <p>항진균물질의 구조를 규명하기 위하여 \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR spectrum, \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-COSY, HMQC으로 분석한 결과 \( 0.85 \) ppm은 aliphaticchain에 methyl가 존재함을 확인할 수 있었으며, 1.27 ppm의 큰 peak는 methylene group의 긴 사슬이 존재함을 의미한다. 1.5-3.6 ppm 부분에서는 Asn, Gln, Ser, Tyr 등 \( \alpha \)-아미노산의 \( \beta \)-또는 \( \gamma \)-탄소에 수소 결합되어 있음을 확인하였다. 4.0-4.5 ppm 부분은 \( \alpha \)-탄소에 결합되어 있는 수소를 나타내며, 6.7 ppm과 7.7 ppm의 두 doublet은 방향족화합물을, 7 ppm부근에서 doublet을 보이는 것은 tyrosine의 유도체가 함유되어 있음을 알 수 있었다(Fig. 3). 이러한 분석 결과 B. amyloliquefa-ciens IUB158-03에서 생산한 항진균물질은 iturin계에 속하는 물질로 밝혀졌으나, 아미노산의 조성이 기존에 밝혀진 성분과 차이점이 있어 앞으로 새로운 항진균물질 개발의 가능성이 있다고 판단되어 물질의 구조 분석에 대한 연구를 진행하고 있다.</p> <h2>항진균물질의 독성 실험</h2> <h2>세포독성 실험</h2> <p>NIH3T3 세포를 대상으로 항진균물질을 처리하여 생존 세포 수를 간접적 측정하는 MTT방법을 이용한 결과 \( 10,50,100 \) \( \mu \mathrm { l } / \mathrm { ml } \)까지는 세포 수의 증가를 보였지만 \( 500 \mu \mathrm { l } / \mathrm { ml } \)부터 세포 생존율이 감소하기 시작하여 \( 1,000,2,000 \mu \mathrm { l } / \mathrm { ml } \)에는 대조군 보다 많은 감소를 보였다. 그러나 이 농도에서 \( 50 \% \) inhibition concentration ( \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) )의 생존율보다는 감소하지 않았으므로 정상 세포에는 독성이 없는 것으로 판단되었다(Fig. 4).</p> <h3>혈액 중 백혈구 수와 혈액 생화학적 검사</h3> <p>생체내의 식작용과 면역 작용 및 염증의 정도를 진단할 수 있는 백혈구의 수를 관찰한 결과 대조군과 비교하여 백혈구의 수에서 큰 차이를 보이지 않았다(Table 6). 따라서 항진균물질 투여로 인하여 생체 내에 염증 반응이 나타나지 않았으므로 독성이 없다고 판단되었다. 또한 생체 내의 생리적인 기능의 변화를 관찰하기 위하여 심장 채혈로 혈청을 분리한 후 생화학적 검사를 시행하였다. 생체 내에서 영양원, 삼투압의 유지, 면역, 효소반응에 관여하는 혈청 단백질인 albumin의 농도를 조사한 결과 \( 500 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도에서 약간의 감소를 보였지만 농도가 높을수록 차이가 없었으므로 정상이라고 판단되었다. 간 대사와 관련되어 있는 ALT, AST, ALP 효소들은 간세포가 괴사되면서 혈중으로 유리되어 나와 증가하게 되고, bilirubin은 간세포의 장애와 담도폐색으로 황달증상이 나타나게 된다. 실험군의 각 효소나 bilirubin의 측정치는 대조군 보다 조금 낮거나 비슷하였으므로 간, 비장, 담관에는 나쁜 영향을 끼치지 않는 다는 것을 알 수 있었다. 혈당과 cholesterol은 실험군이 대조군에 비하여 감소한 결과를 보였다. 이와 같은 결과는 항진균물질에 혈당과 cholesterol의 수치를 감소시키는 어떤 요인이 존재하고 있음을 추측할 수 있었다. 신장 기능 장애를 확인하기 위하여 blood urea nitrogen (BUN)과 creatinine의 수치를 분석한 결과 실험군과 대조군의 차이를 보이지 않았으므로 신장 기능에는 영향을 미치지 않는 다는 것을 알 수 있었다(Table 7).</p>