Cytokine 분비에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험에서 송이 자실체의 추출물을 사용하는데 이 추출물이 어떻게 생쥐의 비장세포를 자극하여 cytokine 분비를 조절하는지 mouse inter-leukin-2와 mouse TNF-\(\alpha\) ELISA kit를 이용해 측정한다. 또한 실험에는 송이에서 추출한 조다당류를 각각 \(0.01 \mathrm{mg}/ \mathrm{ml}, 0.1 \mathrm{mg}/ \mathrm {ml} 1.0 \mathrm {mg}/ \mathrm {ml}\) 첨가하여 비장면역세포의 자극능을 확인하였다.
<p>Alkaline phosphatase activity (p-nitrophenol \( \mu \mathrm { mol } / \) \( 1 \times 10 ^ { 5 } \) lymphocytes / 60 mins) \( =1.15 \times \) O. D. at \( 405 \mathrm { ~nm } \)</p> <h2>Cytokine 분비에 미치는 영향</h2> <p>송이 자실체의 추출물이 생 쥐의 비장세포를 자극하여 cy-tokine의 분비를 조절하는지를 알기 위하여 mouse inter-leukin-2 (IL-2)와 mouse TNF- \( \alpha \) ELISA kit (KOMA \( \mathrm { BIOTECH } \) Co., Korea)를 이용하여 측정하였다. 무균적으로 비장을 적출하여 complete medium \( (10 \% \) heat inactivated FBS, \( 2 \mathrm { mM } \) glutamine, \( 100 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) penicillin, \( 100 \mu \mathrm { g } \) strepto-mycin을 첨가한 RPMI 1640 medium)에서 스테인레스 스틸망을 통과시켜 단헥세포를 만들었다. 이로부터 언은 세포는 Ficoll-Paque Plus 용액(Sigma, USA) \( 3 \mathrm { ml } \) 에 넣은 후. 현탁액 을 \( 7 \mathrm { ml } \) 까지 세포가 섞이지 않도록 넣는다. 이 후 \( 400 \times g \) 에 서 30 분간 원심 분리하였다. 이 후 가운데 위치한 유핵세포 를 언어 혈구계산기를 이용하여 세포의 수를 계수하였고, trypan blue exclusion 방법[1]으로 생존율 \( (85 \% \) 이상)을 확인하였다. 유핵세포를 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { cells } / \mathrm { ml } \) 로 맞추어 버섯추출 조다 당류의 농도와 함께 24 well plate에 서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양 기에서 24 시긴 배양한 상등액 중에서 분비된 싸이토카인 (TNF-alpha, interleukin-2) 을 ELISA kit (KOMA BIOTECH Co. Korea)로 측정하였다. 비장 임파구 자극의 양성 대조군 으로 \( \mathrm { T } \) 세포(concanavalin \( \mathrm { A } ; \mathrm { Con } \mathrm { A } \) ) 및 \( \mathrm { B } \) 세포 mitogen (li-popolysaccharide; LPS)를 사용하였다. 실험에 는 송이에서 추출한 조다당류를 각각 \( 0.01 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } , 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } 1.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 로 첨가하여 비장면역세포의 자극능을 확인하였다.</p>