본 실험에서 N1 균주의 항균물질 생산능은 초기 \( \mathrm{pH} \)의 영향 실험, 탄소원 및 질소원 선발 실험, 다양한 기질 선발 실험 그리고 옥수수전분 첨가량에 따른 생장효과 실험과 함께 항균물질 생산능도 조사했다. 그리고, 각 배지에서 N1 균주를 48시간 배양 후 30분간 원심분리후 균체를 제거하고, 동량의 부탄올로 2회 추출하여 회전진공 증발기에 감압건조했다.
<h2>초기 pH의 영향</h2> <p>초기 pH에 따른 N1 균주의 생육 정도를 조사하기 위해 NB 배지와 2% 비지배지를 1N NaOH와 1N HCl를 이용하여 \( \mathrm{pH} 5.0 \) 에서 \( \mathrm{pH} \) 9.5까지 \( \mathrm{pH} 0.5 \) 간격으로 보정하고, 진탕배양기 \( \left(160 \mathrm{rpm}, 30^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 에서 N1 균주를 48시간 배양하면서 24시간 간격으로 배양액을 각각 \( 2 \mathrm{ml} \) 씩 채취하여 NB 배지는 10배 희석하고, 비지배지는 100배 희석하여 660nm에서 흡광도를 조사하여 세균밀도를 비교하였다. 또한 세균 배양 말기의 배지내 \( \mathrm{pH} \) 의 변화를 조사하기 위해 매 양 48시간째 \( \mathrm{pH} \) 를 각각 측정하였다.</p> <h2>항균물질 생산능</h2> <p>N1 균주의 항균물질 생산능은 초기 \( \mathrm{pH} \)의 영향 실험, 탄소원 및 질소원 선발 실험, 다양한 기질 선발 실험 그리고 옥수수전분 첨가량에 따른 생장효과 실험과 함께 항균물질 생산능도 조사하였다. 각 배지에서 N1 균주를 48시간 배양 후 \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 에서 30분간 원심분리하여 균체를 제거한 후, 동량의 부탄올로 2회 추출하여 회전 진공 증발기에서 감압건조하였다. 메탄올 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 로 물질을 완전히 용해시킨 다음, Paper disk (직경 \( 8 \mathrm{gII} \) ) 상에 \( 60 \mu \) 씩 처리하고 자연건조하였다. 항균믈질이 처리된 Paper disk를 PDA 배지에서 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 로 7일 간 배양한 B. cmerea 균총 절편과 대치배양하고, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 의 배양기에서 5 일간 베양한 후, 저지대의 크기를 조사하여 항균물질의 생산 능력을 조사하였다. 대조구로 메탄을 \( 60 \mu \) 만을 처리한 Paper disk를 대치배양하였다.</p> <h2>배양기질 선발</h2> <p>가격이 저렴한 기질인 미강, 대두박, 비지가루, 밀기울과 단술, 어묵, 간장생산 부산물, 사과껍질, 오렌지껍질, 쌀가루, 콩깻묵, 맥아, 볏짚을 각각 5% 첨가한 배지와 이들 배지에 각각 2% 옥수수전분을 첨가하여 만든 배지에 N1 균주를 접종하고 진탕배양기 \( \left(30^{\circ} \mathrm{C}, 160 \mathrm{rpm}\right) \) 에서 48시간 배양하여 세균 밀도를 10단계 희석법으로 조사하였다. 수분을 함유하고있는 기질들은 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 건조한 후, 브랜드로 분쇄하여 사용하였다. 간장생산부산물은 간장을 제조하고 남은 찌꺼기를 사용하였고, 어묵은 생선혼합물을 사용하였다.</p> <h2>옥수수전분의 첨가량에 따른 생장효과</h2> <p>탄소원인 옥수수전분의 첨가량에 따른 세균의 생장 정도를 조사하기 위해 5% 비지배지 \( 200 \mathrm{ml} \) 에 옥수수전분을 각각 1,3,5%씩 첨가한 것과 Soluble starch 3%, 포도당 3%를 각각 첨가하여 진탕배양기 \( \left(30^{\circ} \mathrm{C}, 160 \mathrm{rpm}\right) \) 에서 N1 균주를 배양한 후, 24,48시간째에 배양핵을 \( 2 \mathrm{ml} \) 채취하여 10배와 100배로 희석하여 세균 밀도를 흡광도 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 조사하였다.</p>