각 균주는 tryptic soy broth (TSB, Difco, Detroit, USA) 액체 배지에서 성장시킨 후, 성장 최적 조건에서 NB, BHI , TSB 배지에서 추가 배양하였다. 추출물의 항균력 검색은 disc diffusion method를 실시하여, 균주를 \(100\mathrm{ml}\mathrm{TSB}\) 배지에 접종하여 \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 24시간 동안 교반 배양한 후, 3일 동안 계대 배양하여 균을 활성화시켰다. 이후 spec-trophotometer를 사용하여 \(560\mathrm{~nm}\)에서 O.D.값이 0.2가 되도록 하여 균수를 \(1\times10^{7}\)\(\mathrm{cfu}/\mathrm{ml}\)로 사용했다.
<p>준비된 깔집은 6 분할로 통풍이 되는 케이지를 제작하여 천연오일이 처리된 깔집과 처리되지 않은 깔집을 구분하여 Fig. 2 와 같이 설치하였다. 케이지의 각 칸 마다 사료를 주고 모서리 부분에 물을 공급하였고, 48시간 방치 후 쥐의 배설물 수를 확인하여 서식지 기피능을 확인하였다. 각 시료에 대해 쥐를 번갈아가며 암소에서 시료당 3회 반복 실험하였다.</p> <p>서식지 기피율 \( = ( \) 시료 처리시 대변 수/대조구 대변 수) \( \times 100 \)</p> <h2>사용 균주 및 배지</h2> <p>본 실험에서 사용한 Escherichia coli O157:H7 (ATCC 4388), Bacillus cereus (ATCC 12573)은 미국균주보존센터로부터, Staphylococcus aureus (KCTC 1621), Listeria monocytogenes (KCTC 3710)은 한국생명공학연구원 생물자원 센터로부터, Streptococcus mutans (KCCM 40105), Salmonella typhimurium (KCCM 11862), Pseudomonas aeruginosa (KCCM 1132), Vibrio parahaemolyticus (KCCM 11965)을 한국미생물보전센터로부터 분양을 받았다. 각각의 균들을 tryptic soy broth (TSB, Difco, Detroit, USA) 액체 배지에 백금이 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 교반하여 3회 계대 배양한 후, 성장 최적조건에서 균에따라 NB (Nutrient broth), BHI (Brain heart infusion broth), TSB (Tryptic soy broth) 배지에서 배양 시켰다.</p> <h2>항균활성평가</h2> <p>추출물의 항균력 검색은 disc diffusion method를 실시하였다. 균주를 \( 100 \mathrm { ml } \mathrm { TSB } \) 에 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 shaking하면서 24 시간 배양하여 활성화시키고 3 일 계대 배양 후 spec-trophotometer (UNIKON922, Kontron, Milan, Italy) 를 이용하여 \( 560 \mathrm { ~nm } \) 에서 O.D.값이 0.2가 되게 하여 균수를 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \) \( \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \) 로 사용하였다. 고체배지에 멸균된 glass spreader로 균을 고르게 도말 한 후, \( 8 \mathrm { ~mm } \) paper disc (Adantec co., Tokyo, Japan)를 올려놓은 다음 추출물은 최종농도가 \( 10 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 가 되도록 DMSO (dimethyl sulfoxide)에 용해시키고 \( 50 \mu l \) 를 주입하여 완전히 흡수시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 24 시간 배양시켜 paper disc 주위의 inhibition zone \( ( \mathrm { mm } ) \) 의 직경을 측정하였다.</p>