Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법을 통해 측정하였고, Elastase 저해활성 측정은 Cannell 등의 방법에 따라 측정 하였으며, Tyrosinase와 Elastase의 저해활성은 무첨가구의 흡광도 감소율과 시료용액의 첨가구로 나타내었다.
<h2>Tyrosinase 저해활성 측정</h2> <p>Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법으로 측정하였다. 반응구는 \( 0.175 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 6.8) \( 0.5 \mathrm { ml } \)에 \( 10 \mathrm { mM } \) L-DOPA를 녹인 기질액 \( 0.2 \mathrm { ml } \) 및 시료용액 \( 0.1 \mathrm { ml } \)의 혼합액에 mushroom tyrosinase ( \( 110 \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) 0.2 \mathrm { ml } \)을 첨가하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 2 분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 \( 475 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>저해율 \( ( \%) = \left (1- \frac {\text { 시료첨가군의 흡광도 } } {\text { 무첨가군의 흡광도 } } \right ) \times 100 \)</p> <h2>Elastase 저해활성 측정</h2> <p>Elastase 저해활성 측정은 Cannell 등의 방법에 따라 측정하였다. 기질로서 \( \mathrm { N } \)-succinyl- (L-Ala) \( )_ { 3 } \)-p-nitroanilide를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 \( 405 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정농도가 되도록 조제하여 \( 0.5 \mathrm { ml } \)씩 시험관에 취하고, \( 50 \mathrm { mM } \)tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer \( ( \mathrm { pH } \) 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase \( (2.5 \) \( \mathrm { U } / \mathrm { ml } \) )용액 \( 0.5 \mathrm { ml } \)을 가한 후 기질로 \( 50 \mathrm { mM } \) tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer \( ( \mathrm { pH } ~8.6 \)에 녹인 \( \mathrm { N } \text { -succinyl-(L-Ala } )_ { 3 } \) - p-nitroanilide \( (0.5 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) )을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. Elastase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p>