오디 추출물을 처리한 PPAECs 세포의 MMP-2 및 MMP-9 분비는 각각 \( 45 \% \), \( 33 \% \) 감소하였다. 하지만 이러한 혈관신생 억제 기작이 TIMP-2가 간접적으로 MMP 저해한 효과라기보다는 TIMP-2의 intergrin \( \alpha_{3} \beta_{1} \) 수용체에 대한 또 다른 경로의 작용이라는 보고도 있으므로, 관련 연구를 진행할 계획이다. 또한 Western hybridization 결과 80 \(\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\)의 농도 오디 추출물에서 MMP-2 단백질 생성과 MMP-9 단백질 생성은 각각 \( 35 \% \), \( 76 \% \)가 억제되어 앞의 enzyme immunoassay를 이용한 효과와 일치하게 농도-의존적으로 단백질 생성이 억제되었다.
<h2>PPAECs 세포의 MMPs 및 TIMPs 분비에 미치는 오디 추출물의 효과</h2> <p>MMPs는 기저층의 기질을 분해하는 효소로, 혈관신생의 초기 단계에 작용한다고 알려져 있다. MMPs는 배발생, 혈관신생, 상처부위의 재생, 생식주기 그리고 물질대사 같은 생리학적 및 병리학적인 과정에 관여한다. 본 연구에서는 오디 추출물에 의해 PPAECs 세포의 이동과 발아가 효과적으로 억제된다는 사실을 확인하였다. 이러한 이동 및 발아의 억제는 세포외기질을 분해하는 단백질분해효소의 분비 감소와 관련되어 있다고 추정할 수 있다. 이를 확인하기 위해 오디 추출물 처리에 의해 PPAECs 세포의 MMP-2와 MMP-9의 분비에 미치는 효과를 enzyme immunoassay를 통해서 확인하였다. 그 결과, 오디 추출물 농도 \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 MMP-2의 분비는 약 \( 45 \% \) 감소되었으며, MMP-9의 분비는 약 \( 33 \% \) 감소되었다. MMP-2와 MMP-9는 혈관 평활근 세포의 이동에 관여한다고 알려져 있다. 대부분의 경우, MMP-2는 \( 72 \mathrm{~kDa} \)의 불활성형으로 조직 내에 항상 존재하고 있으나, MMP-9는 필요시에만 유전자 전사 수준에서 조절되며 MMP-2와 MMP-9의 합성 및 분비는 여러 다양한 성장 인자에 의해 조절된다고 알려져 있다. U-373-MG 세포를 이용한 이전의 연구에서, 오디 추출물에 의한 MMP-2와 MMP-9의 분비에 미치는 효과를 조사한 결과, MMP-9의 분비는 증가되었고 MMP-2의 분비는 완전히 억제(자료 미제시) 되었으나, 본 연구에서는 MMP-2 및 MMP-9의 분비가 모두 억제되었다. 이러한 차이는 각각의 연구에 사용한 내피세포와 교모세포종간의 세포 유형에 따른 차이라 여겨진다. Hu 등의 연구 결과, HUVECs 세포에서 레스베라트롤에 의해 MMP-2 및 MMP-9의 분비가 억제되어 본 연구 결과와 일치하였다. 한편, MMPs는 활성화되기 전까지는 내재적 억제인자인 \( a_{2} \)-macroglobulin 또는 TIMPs에 의해 그 활성이 조절된다고 알려져 있다. MMP-2는 TIMP-2와 복합체를 형성하고 MMP-9는 TIMP-1과의 복합체 형성에 의해 이들 MMPs의 활성을 조절한다고 알려져 있다. 따라서, 이들 MMPs와 TIMPs 사이의 양적 균형을 확인하기 위해 오디 추출물에 의해 PPAECs 세포로부터 분비되는 배양 배지를 이용하여 enzyme immunoassay를 행하였다. 그 결과, TIMP-1은 오디 추출물 농도 \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 분비가 약 \( 51 \% \) 억제되었으나, TIMP-2는 오디 추출물 농도 \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 분비가 \( 150 \% \) 증가되었다. 이것은 MMP-2와 TIMP-2가 복합체를 형성하여 효소의 활성이 조절된다는 이전의 연구 결과와 동일한 결과로 MMP-2와 TIMP-2 사이의 양적 균형이 결합 조직의 붕괴를 조절하는 중요한 요인으로 작용할 것이라 여겨진다. 위와 같은 결과에 근거하여 불 때, MMP-2와 MMP-9의 분비 감소를 초래하는 오디 추출물이 혈관 기저막의 분해를 억제하여 궁극적으로 혈관신생을 억제할 것이라 여겨진다. 한편, 혈관신생 억제 기작이 TIMP-2의 MMP 저해에 의한 간접적인 효과보다는, TIMP-2의 integrin \( \alpha_{3} \beta_{1} \) 수용체에 대한 또 다른 경로의 작용이라는 결과가 보고된 바 있다. 따라서, 오디 추출물에의한 PPEACs 세포의 이동 및 발아 억제가 MMPs 및 TIMP의 상호작용 이외에 다른 경로에 의해서도 이루어지는지를 추후 연구할 계획이다.</p> <h2>MMP-2 및 MMP-9 단백질의 생성에 미치는 오디 추출물의 효과</h2> <p>MMP-2와 MMP-9 단백진의 생성에 미치는 오디 추출물의 효과를 조사하기 위해, 세포를 무혈청 상태에서 대조 완충용액으로 1시간 배양한 다음, 오디 추출물 처리 후, 20시간 동안 배양하여 단백질을 추출하였다. Western hybridization 결과, 오디 추출물에 의한 MMP-2 단백질의 생성은 \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 약 \( 35 \% \) 억제되었고, MMP-9의 경우 약 \( 76 \% \)가 억제되는 등 enzyme immunoassay를 이용한 분비 억제 효과와 일치되게 농도-의존적으로 단백질 생성이 억제되었다. Chen 등의 연구 결과, cyanidin-3-glucoside에 의해 MMP-2의 생성이 억제되고, TIMP-2의 생성이 증가하여 본 연구 결과와 동일한 유형을 보여주었다. 과도한 혈관신생에 의한 암세포의 침윤에는 세포의 이동 증가 및 세포와 기질 사이의 접촉 해리 및 세포외기질의 분해에 필요한 세포외 단백질분해효소의 생성 및 활성화 같은 여러 생리학적 변화가 요구된다. 따라서, 오디 추출물에 의해 유도된 혈과내피세포의 이동 및 발아 억제는 부분적으로 MMP-2 및 MMP-9의 생성 및 분비 감소에 의한 것이라 사료된다. 이러한 결과는 오디 추출물이 VEGF의 과발현에 의한 암의 성장 및 증식을 억제 조절하는데 이용될 수 있는 가능성을 제시하고 있다. 그러나 이번 결과는 오디 추출물 자체를 이용한 결과로, 추후 정제과정을 거쳐 혈관신생 인자의 발현 억제 및 in vivo에서의 혈관 형성에 대한 연구를 추가하여 헐관신생억제에 의한 전이성 암의 치료제로서의 가능성을 제시하고자 한다.</p>