apoptosis를 유도하는지를 알기 위해 Resveratrol의 A549, SKOV3 세포를 조사하였다., A549 세포에서는 DAPI 염색과 TUNEL 염색으로 염색된 세포의 수가 감소하거나 증가하는 것을 확인하였다. 반면에 SKOV3 세포에서는 TUNEL 염색으로 염색된 세포가 거의 없는 것을 발견했다. 또한 Resveratrol에 의해 유도된 A549 세포의 apoptosis는 농도에 비례해 증가함을 확인하였다.
<h2>Resveratrol이 A549 세포의 apoptosis에 미치는 영향</h2> <p>다음으로, resveratrol이 A549, SKOV3 세포의 apoptosis를 유도하는지 조사하였다. Resveratrol을 농도 별 \( (0,40 \), \( 100 \mu \mathrm { M } ) \) 로 48 시간 처리 후, 세포의 핵에 염색되어 형태적 변화를 관찰할 수 있는 DAPI 염색과 DNA의 분절여부를 파악할 수 있는 TUNEL 염색을 시행하였다. 그 결과, A549 세포에서는 DAPI에 의해 염색된 세포의 수가 확실하게 감소하였다는 것을 관찰할 수 있었고, TUNEL에 의해 염색된 세포는 resveratrol 처리 농도에 따라 증가하는 것을 확인하였다. 반면에, SKOV3 세포에서는 TUNEL에 의해 염색된 세포가 거의 없는 것으로 나타났고 염색된 세포의 형광강도와 면적 또한 현저히 적었다(Fig. 2A-B). Resveratrol에 의해 유도된 세포 apoptosis 비율을 확인하기 위해, TUNEL에 염색된 세포/DAPI에 염색된 세포의 비율을 분석한 결과resveratrol을 \( 100 \mu \mathrm { M } \) 의 농도로 처리하였을 때, 확실하게 apoptosis가 일어난 A549 세포의 비율이 증가했다는 것을 확인하였다(Fig. 2C). 이러한 결과들을 통해 A549 세포에서 resveratrol의 생존억제 효과는 apoptosis 유도와 연관성이 있다고 보여지며, SKOV3 세포에서는 크게 영향을 미치지 않는 것으로 보여진다. 세포와 세포 외 기질과의 결합이 끊어질 때, 정상 세포는anoikis에 빠지게 되어 대부분의 세포가 죽는 반면 암세포는 고착 비의존성 성장(anchorage-independent growth)을 함으로써 부착할 수 있는 기층(substratum) 없이 생존이 가능하다. 그러므로 우리는 resveratrol이 A549, SKOV3 세포의 anoikis 저항성에 영향을 미치는지 조사하기 위해 resveratrol을 농도별로 48시간 처리한 후 anoikis assay를 시행하였다. 그 결과 두 가지 세포 모두에서 resveratrol에 의한 anoikis 유도 효과가 없었다(Fig. 2D). 이러한 결과는 resveratrol이 A549 세포가 부착상태일 때는 apoptosis를 유도 하지만 부유상태일 때는 세포생존에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여준다. 또한 이러한 결과는 resveratrol이 일차 종양세포의 증식은 억제하지만, 전이과정에서 다른 기관으로 이동하는 세포의 증식을 억제하는 효과는 없다는 것을 의미한다.</p> <h2>Resveratrol이 apoptosis 관련 단백질의 발현에 미치는 영향</h2> <p>Caspases는 세포내에서 불활성화된 proenzyme의 형태로 존재하여 세포사멸 신호에 의해 분절되어 활성화 된다. 그 중 caspase3는 apoptosis 유발인자들에 의해 caspase cascade가 일어나면 다른 caspase에 의해 활성화되며, apoptosis 유도의 최종 단계에서 중 중요한 역할을 하는 effecter caspase이다. 그러므로, resveratrol을 A549 세포에 처리했을 때 농도의존적으로 apoptosis가 유도되는 현상의 분자적 기전 분석을 위하여 pro-caspase3 단백질의 발현 변화를 western blot을 통해 확인하였다. 그 결과, A549 세포에서 resveratrol에 농도가 증가함에 따라 pro-caspase3의 발현이 억제되었고, SKOV3 세포에서는 변화가 없었다(Fig. 3A-B). pro-caspase3의 발현량의 감소로 A549 세포의 apoptosis 유도 효과에 caspase3가 관여한다는 것을 확인하였다.</p>