수컷 마우스의 비장에서 적혈구를 제거한 후 림프구와 복강대식세포를 분리하였다. 이와 같이 모든 준비를 마친 세포를 flat bottomed 96 well plate에 넣어 다양한 농도의 압란유를 가하여 총량을 맞춘 후 72시간 배양하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 동물</h2><p>5-6 주령의 수컷, C57 BL/6계 마우스를 대한실험동물센타 (충북 음성)에서 구입하여 사용하였다. 온도는 \( 20 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 명암주기가 12시간 단위로 유지하며 고형사료와 물을 충분히 공급하였다. 실험전 마우스를 동일한 조건하에서 사육하여 동물실 환경에서 적응시켰다. 사료는 삼양유지 사료사와 항생제 무첨가 마우스용 펠렛을 공급하였다.</p><h2>압란유</h2><p>청둥오리 압란유(고온에서 추출)는 보성식품(주)(경북 청도면 매전면 구촌리)에서 제공받아 사용하였다.</p><h2>공시세포</h2><p>비장으로부터 림프구의 분리는 다음과 같이 시행하였다. 마우스로부터 얻은 비장은 Hanks' balanced salt soution(HBSS, Sigma, St. Louis, Mo)에서 두 장의 멸균된 slide glass로 부드럽게 압착하여 림프구를 비장으로부터 유리시켰다. 이 속에 포함된 적혈구는 멸균된 림프구증류수를 사용하여 hypotonic shock로 제거하며 분리된 림프구는 완전 배지에 부유시켰다. 복강대식세포는 Yoon 등의 방법에 따라 분리하였다. 마우스의 복강내에 Brewer's thioglycollate broth(Difco laboratory, detroit, MI) \( 3 \mathrm{~mL} \)를 주사한 3일 후, \( 1 \% \) fetal calf serum(FCS), \( 10 \mathrm{~mM} \) HEPES, 그리고 페니실린\( (100 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \) 및 스트렙토마이신\( (100 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{mL}) \)이 첨가된 \( 10 \mathrm{~mL} \) HBSS(calcium 및 magnesium 무첨가)를 이용하여 복강 삼출세포를 수집하였다. 이를 RPMI 1640 완전배지에 재부유시켜 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 배양한 후 부착되지 않은 세포들을 인산완충액으로 세척하여 제거하고 부착세포들은 \( 2.5 \mathrm{~mM} \) pyrophosphate와 rubber policeman을 이용하여 수집하여 복강대식세포로 사용하였다. 암세포주로는 mouse mammary carcinoma 세포와 mouse leukemia 세포, human histocytic lymphoma를 사용하였다.</p><h2>정상 면역 세포의 증식에 미치는 압란유의 영향 측정</h2><p>상기에서와 같이 준비한 세포를 flat bottomed 96 well plate 의 각 well에 분주한 다음 여기에 여러 농도의 압란유를 가하여 총량이 \( 0.2 \mathrm{~mL} \)씩 되도록 조정하고 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C} ~5 \% \) \( \mathrm{CO}_{2} \)배양기에 넣고 72시간 배양하였다. 이 때 배양세포의 \( { }^{3} \mathrm{H} \)-thymidine( \( { }^{3} \mathrm{H} \)-TdR, specific activity: \( 2.0 \mathrm{~Ci} / \mathrm{mmol} \), ICN Biomedicals, High Wycombe, Bucks, England) pulse는 \( 0.5 \mathrm{uCi} \)의 \( { }^{3} \mathrm{H} \)-TdR을 각 well에 배양종료 18시간 전에 가하여 실시하고, \( { }^{3} \mathrm{H} \)-TdR incorporation의 측정은 cell harvestor로 glass fiber에 세포를 수확한 후 \( \beta \)-counter을 이용하였다.</p>