종자 추출물에 EtOH, potassium acetate, aluminum chloride, 증류수를 혼합하여 반응시킨 후 흡광도를 측정하였다. Quercetin을 표준물질로 사용하여 종자 추출물의 총 플라보노이드 함량을 분석하였다. 또한, DPPH 라디칼 소거활성을 측정하여 종자 추출물 농도에서 50%의 라디칼 소거능을 나타내는 \( \mathrm { EC } _ { 50 } \) 값을 구하였으며, ascorbic acid를 양성대조군으로 사용하였다.
<h2>총 플라보노이드 함량 측정</h2> <p>총 플라보노이드 함량은 Christ와 Müller의 연구를 변형하여 측정하였다. \( 100 \mu \mathrm { L } \) 종자 추출물에 \( 300 \mu \mathrm { L } \mathrm { EtOH } \) (Daejung, Siheung-si, Korea), \( 20 \mu \mathrm { L } \) 의 \( 1 \mathrm { M } \) potassium acetate (Junsei Chemical Co., Tykyo, Japan), \( 20 \mu \mathrm { L } \) 의 \( 10 \% \) aluminum chloride ( \( \mathrm { AlCl } _ { 3 } \), Junsei Chemical Co., Tykyo, Japan), \( 560 \mu \mathrm { L } \) 의 증류수를 넣고 혼합한 후 상온에서 30 분간 반응시킨 후 96-well plate에 \( 200 \mu \mathrm { L } \) 씩 분주 후 microplate reader로 \( 415 \mathrm { ~nm } \) 에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. 표준물질로 Quercetin (Sigma Chemical Co.)을 희석하여 검량선을 만들어, 종자 추출물 내 총 플라보노이드 함량을 분석하였다.</p> <h2>DPPH 라디칼 소거활성 평가</h2> <p>DPPH radical 소거활성은 Blois의 연구[21]를 변형하여 평가하였다. 종자 추출물 \( 50 \mu \mathrm { L } \) 에 \( 150 \mu \mathrm { L } \) 의 \( 0.1 \mathrm { mM } \) 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH, Alfa Aesar, MS, USA) radical 용액을 혼합하여 30 분간 암소에서 반응시켰다. 그 후에 microplate reader로 \( 517 \mathrm { ~nm } \) 에서 반응액의 흡광도를 측정하였다. Blank는 종자 추출물을 처리하지 않고 추출물 희석 용매인 \( \mathrm { DMSO } \) 를 첨가한 것으로 하여 반응액의 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거활성은 아래의 식에 따라 백분율로 나타낸 후 \( 50 \% \) 의 소거능을 나타내는 종자 추출물 농도인 \( \mathrm { EC } _ { 50 } \) 값을 구하였다. 양성대조군으로 ascorbic acid(Fujifilm Wako pure chemical co., Osaka, Japan)을 사용하였다.</p> <p>\( \mathrm { DPPH } \) 라디칼 소거능( \%) \( = \left (1- \frac {\text { 추출물 첨가구의 흡광도 } } {\text { 무첨가구의 흡광도 } } \right ) \times 100 \)</p>