1960년대 Yalow와 Berson이 발표한 radioimmunoassay(RIA)는 인간 혈청에서 미량의 인슐린을 측정할 수 있어 생명과학, 의학 분야에서 사용되고 있다. ELISA방법은 RIA보다 방사선을 사용하지 않고 항체를 이용하여 인슐린을 측정하나 미량의 인슐린을 측정할 수 없는 단점이 있다. Mercodia사의 인슐린 ELISA kit를 사용하여 췌장베타세포 배양액내의 사람 인슐린을 측정하였고 LP9M80-H를 선정하여 생체적용 가능농도를 설정하였다.
<p>체내의 인슐린을 측정하기 위해서는 몇 가지 방법이 개발되어 사용되고 있다. 1960년대에 Yalow와 Berson 에 의해서보고된 인간의 혈청에서 radioimmunoassay (RIA)는 미량의 인슐린까지도 확인할 수 있어 생명과학분야와 의학분야에서 지속적으로 사용되어 왔다. 그러나 이러한 방법은 인체에 해롭고 엄격한 시설을 갖추어야 하는 방사선동위원소를 사용해야하는 단점을 갖고 있어 최근에는 방사선을 사용하지 않고 항체를 이용한 ELISA방법이 많이 사용되고 있다. 그러나 새로운 ELISA방법은 RIA처럼 미량을 측정할 수 없는 단점은 갖고 있다. 본 연구에서는 Mercodia사의 인슐린 ELISA kit를 사용하여 세포 배양액내의 사람의 인슐린을 측정하였다. 사용된 ELISA kit는 solid phase two-site enzyme immunoassay로서 두 개의 monoclonal 항체가 인슐린을 인식하는 direct sand-wich 기술이 적용된 것이다. 또한 이 kit는 프로인슐린과 c-펩 타이드에 대한 crossreaction이 \( 0.01 \% \) 이하이며, 랫드와 마우스 인슐린에 대해서는 각각 \( 0.7 \% \) 와 \( 0.3 \% \) 의 crossreaction이 있고, detection limit은 \( 1 \mathrm { mU } / 1 \) 로 알려져 있다[21]. 따라서 본 실험의 결과에서 \( \mathrm { MTT } \) 에 의해 측정된 세포사와 인슐린의 분비량과의 상관성 때문에 맥문동 추출물질이 세포사를 유발하고 세포가 파괴되면서 분비된 인슐린이 관찰될 수 있다는 가정을 할 수 있으나 이러한 점은 다른 세포사 유발물질을 이용한 대조실험과 ELISA kit의 특성을 고려하면 가능성이 낮은 것으 로 사료된다.</p> <p>따라서 본 논문에서는 맥문동으로부터 새로운 치료가능 후보물질을 선별하기 위하여 췌장베타세포를 인슐린 분비능을 조사한 결과, 그 중에서 분비유도능이 우수한 LP9M80-H를 선정하여 생체적용 가능농도를 설정하였다. 향후 이들 물질을 직접 실험동물에 투여하여 in vivo 인슐린 분비능과 혈당조절기능에 대한 연구가 수행된다면 새로운 치료제로서 가능성이 매우 클 것으로 기대된다.</p> <h1>초록</h1> <h2>HIT-T15 췌장세포의 인슐린분비 촉진을 유도하는 맥문동(Liriope platyphylla) 추출물의 효능 및 독성분석</h2> <p>맥문동(Liriope platyphylla)은 한국과 중국에서 전통적으로 당뇨, 비만, 뇌신경질환, 천식 등의 치료를 위해 사용해온 치료제이다. 최근에 이들 맥문동으로부터 새로운 치료제를 개발하려는 노력이 활발히 진행 중이지만 아직도 유력한 치료후보제는 확보되지 않았다. 따라서 본 연구에서는 맥문동의 새로운 추출물을 이용하여 당뇨치료 제로서의 가능성을 평가하기 위하여 새로운 방법으로 10 가지 후보물질을 추출하고 이들의 독성과 효능을 평가하였다. 그 결과 10 가지 추출물 중에서 \( \mathrm { LP } 9 \mathrm { M } 80- \mathrm { H } \) 가 인슐린 분비를 가장 많이 촉진하였고 다음으로는 LP-H, LP-M, LP-E과 LP9M80-C 등의 순서로 촉진을 하였으나 나머지는 인슐린 분비를 촉지하지 못하였다. 그러나 이들 물질은 인슐린 분비를 촉진하는 농도에서 강한 세포 독성을 나타내었다. 따라서 이들 물질 중에서 가장 효능이 좋은 \( \mathrm { LP } 9 \mathrm { M } 80- \mathrm { H } \) 의 치료용 최적농도를 설정하였으며, 대략 \( 100-25 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \) 가 최적농도로 결정되었다. 이러한 결과는 맥문동 추출물 중에서 LP9M80-H가 췌장 \( \beta \)-세포의 인슐린 분비능을 유도하는 새로운 당뇨치료 후보물질로서 향후에 사용될 가능성을 시사하고 있다.</p>