sarcoma-180 암세포는 실험동물의 복강에서 주기적으로 배양하여 보존하고 실험에 사용하였다. 암세포 증식 억제 효과를 측정하기 위해, 실험동물에 암세포를 주사하고 이들을 특정 물질이 함유된 배지에서 배양한 후, 흡광도 값을 측정하여 대조군과 비교하였다. 또한, 실험동물로부터 비장세포를 분리하기 위해 특정 방법을 사용하였으며, 이를 위해 비장을 무균적으로 채취하고, 특정
 
 용액으로 세척한 후, 비장세포를 분리하였다.
<h2>암세포 배양 및 증식 억제효과</h2> <p>복수암 세포인 sarcoma-180 세포는 실험동물의 복강 내에서 1 주일 간격으로 계대 배양하여 보존하면서 실험에 사용하였다. 즉 실험동물의 복강 내에서 1 주일간 배양된 sarco-ma-180 세포를 복수와 함께 취하고 PBS로 현탁한 후 원심분리하여 분리하였다. 분리된 세포를 PBS 에 다시 부유시켜 원심분리하고 상등액을 제거한 후 \( 1 \times 10 ^ { 6 } \mathrm { cells/ml } \) 의 sarco-ma-180 세포 부유액을 만들어 \( 1 \mathrm { ml } \) 씩 복강 주사하여 이식 보존하였다. 암세포에 대한 증식 억제 효과를 알아보기 위하여 \( 1 \times 10 ^ { 6 } \) cells/ml의 농도로 실험동물에 복강 주사하여 10 일 후 그들의 복강으로부터 채취한 sarcoma-180 세포를 각각 \( 10 \% \) fetal calf serum (FCS), \( 2 \mathrm { mM } \) glutamine 및 penicillin-streptomycin이 함유된 RPMI 1640 배지에서 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells \( / \mathrm { ml } \) 이 되도록 세포수를 조정한 후 96 well plate에 seeding하고 24 시간 배양한 후 시료 추출물을 첨가한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 배양하였다. 배양 4 일 후에 3-(4,5-dimethylth-iazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) \( 10 \mu \mathrm { l } \) 를 첨가 하고 4 시간 동안 발색시켰다. 다시 \( 0.02 \mathrm { ~N } \) 의 \( \mathrm { HCl } \) 용액에 \( 10 \% \) 의 농도로 녹인 sodium dodecyl sulfate (SDS) 용액 250 \( \mu \mathrm { l } \) 를 첨가하여 실온에서 하룻밤 방치한 후 microplate reader (Model 550 microplate reader, Bio-Rad, USA) 를 이용하여 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도값 (OD) 을 대조군과 비교하였다.</p> <h2>마우스 비장세포의 분리</h2> <p>마우스로부터 비장세포는 Mishell 과 Shiigi 의 방법에 의해 분리하였다. 즉, 실험동물로부터 무균적으로 비장을 적출하여 Hank's balanced salt solution (HBSS) 용액으로 2 번 세척하여 조직 배양용 접시에 옮긴 후 다시 신선한 HBSS 용액을 가하여 핀셋으로 가볍게 문질러 비장세포를 유리시켰다. 세포 부유액을 15 분 동안 방치한 후 그 상층액을 HBSS 용액으로 다시 세척한 다음 증류수와 PBS 를 이용하여 적혈구를 제거하고 \( 10 \% \) FCS 가 함유된 RPMI 1640 배지로 부유시켜 사용하였다.</p>