Ohkawa 등이 개발한 방법을 수정하여 간 조직에서 glutathione의 함량을 측정했다. 간 조직은 포타슘 인산염 버퍼로 마쇄되고 preincubation이 이루어진다. 이후에 glutathione의 함량은 sulfosalicylic acid를 추가한 후 원심분리하여 상층액을 취하고, 이를 바탕으로 합광도를 측정하고 표준 검량선에 따라 결정했다. 추가로 trichloroacetic acid를 추가하여 단백질을 분리하고, 생성된 uric acid의 양을 측정하여 표준 검량선에 따라 활성도를 결정했다. 이 활성도는 1mg 단백질이 생성하는 uric acid의 양(nmole)으로 표현되었다.
<h2>간 조직의 지질과산화물 함량의 측정</h2> <p>Ohkawa 등의 방빕을 변경하여 간 조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 당 4 배 량의 \( 0.1 \mathrm { M } \) potassium phosphate buffer (pH 7.4)를 가해 마쇄하 고 이 마쇄액에 동일한 buffer를 동량 가하여 3 시간 preincu-bation시킨 아 8.1 \% sodium dodecyl sulfate와 \( 20 \% \) acetate buffer (pH 3.5) 닟 발 새의 목적으로. \( 0.8 \% \) thiobarbituric acid 플 가한 하 \( 95 \mathrm { C } \) 에서 1 시간 동안 반웅시켜 실온에서 냉각 후 예 \( \mathrm { n } - \mathrm { BuOH } \) : Pyridine \( (15: 1) \) 을 첨가하여 15 분간 원심분리하여 생성될 황색의 \( \mathrm { n } - \mathrm { BuOH } \) : Pyridine 층을 추하여 퐈장 532 \( \mathrm { nm } \) 에서 그합광도를 측정 하고 표준곡선에 의해 그 함당을 간 조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 당 malondialdehyde양은 nmole로 표시하였다.</p> <h2>간 조직의 glutathione 함량의 측정</h2> <p>간 조직 중 glutathione 함량 축정은 ElIman의 방법에 준하여 간 조직 homogenate \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 \( 4 \% \) sulfosalicylic acid \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 가하고 \( 2500 \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 원심분리한 후 상충액 \( 0.3 \mathrm { ml } \) 률 뤼하역 disulfide reagent \( 2.7 \mathrm { ml } \) 를 넣고 20 분간 방치 후 \( 412 \mathrm { ~nm } \) 에서 합광도를 측정하고 표준 검량선에 근거 하여 산정하였다.</p> <h2>효소활성의 측정</h2> <h3>Xanthine oxidase 활성의 측정</h3> <p>Stirpe과 Della의 방법에 준하여 \( 0.1 \mathrm { M } \) potassium phos-phate buffer ( \( \mathrm { pH } 7.5 \) ) \( 3.0 \mathrm { ml } \) 에 효소액 \( 0.4 \mathrm { ml } \) 를 가하고 기질 인 \( 60 \mu \mathrm { M } \) 의 xanthine sodium \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \( 37 \mathrm { C } \) 에서 반용시켰다. 여기에 \( 20 \% \) trichloroacetic acid를 가하여 단백질 을 쵭전시키고 상충액을 취한 후 생성된 uric acid를 퐈장 \( 292 \mathrm { ~nm } \) 에서 합광도귤 측정하고 표준 검량선에 근거하여 활 성도를 산열하였다. 하소환성의 단위는 1 근당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 셍성하는 uric acid의 양을 nmole로 나타내었다.</p>