최근의 연구 결과에 따르면, sulforaphane은 다양한 암세포에서 세포주기의 G2/M 단계를 선택적으로 방해하여 암세포 증식을 억제하며, 이는 apoptosis로 이어져 암세포 생존을 억제하는 것으로 알려져 있다. 그러나 세포주기 조절 연구가 대부분 최근에 이루어졌고, 암세포의 종류에 따라 항암 기전이 다소 다르게 보고되고 있어, 다양한 암세포에 대한 추가 연구가 필요하다는 주장이 있다. 이에 따라, 본 연구에서는 sulforaphane의 항암 메커니즘에 대한 연구가 부족한 인체 간암세포를 대상으로, sulforaphane이 간암세포 성장에 미치는 영향을 세포주기 조절인자를 중심으로 조사하였다.
<p>Sulforaphane의 항암작용에 대한 최근의 연구 결과들에 의하면 sulforaphane은 다양한 인체 암세포에서 세포주기 진행과정의 G2/M기를 선택적으로 교란함으로서 암세포의 증식을 억제할 수 있는 것으로 알려져 있다.아울러 이러한 G2/M arrest는 apoptosis 유발로 연결되면서 암세포의 생존을 억제하는 것으로 보고되어져 오고 있다. 그러나 세포주기 조절과 연관된 연구의 대부분이 극히 최근에 이루어졌고, 아직도 암세포주의 종류에 따라 항암 기전이 다소 상이하게 보고되어져 오고 있으므로 다양한 암세포를 대상으로 보다 부가적인 연구가 절실히 요구되어지고 있다.</p> <p>본 연구에서는 sulforaphane의 항암 기전에 관한 연구가 거의 이루어져 있지 않은 인체 간암세포를 대상으로 sulfor-aphane에 의한 간암세포의 성장에 미치는 영향을 세포주기 조절인자를 중심으로 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 및 세포배양</h2> <p>본 실험에 사용된 sulforaphane은 Sigma Chemical Co. (St. Luis, MO, USA)에서 구입하였으며 \(10 \mathrm { mM } \) 의 농도로 di-methyl sulfoxide (DMSO, Sigma)에 용해하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하여 사용하였고, 매회 처리 전 배지에 희석 후 사용하였다.실헙에 사용한 간암 세포주인HepG2는 한국세포주은행에서 구입하여 사용하였으며, 세포의 배양을 위해 90%의 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)과 10% 우태아혈청(fetal bovine se-rum, FBS, Gibco BRL), 1%의 penicillin 및 streptomycin (Gibco BRL) 등이 포함된 배지를 사용하여 배양하였다. 세포는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \(15 \% \) \( \mathrm { CO } _ { 2 } \)조건하에서 배양하였고, 세포의 증식에 따른 과밀도 현상을 해소하기 위해 적정시간 배양 후 \(0.0 \5% \) trypsin-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA, Gibco BRL 를 처리하여 세포를 부유시킨 다음 세포 배양용 petrid-ish로 옮겨 배양하였다.</p> <h2>MTT assay를 이용한 세포 성장율의 측정 및 세포형태 변화의 관찰</h2> <p>HepG2 세포를 분주하고 24시간 동안 안정화시킨 후, sul-foraphane을 적정 농도별로 처리하고 48시간동안 배양하였다. 그 후, 배지를 제거하고 tetrazolium bromide salt (MTT, Amresco, Solon, Ohio, USA) 시약을 \(0.5 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 농도가 되게 성장배지로 희석하여 분주하고 3시간 동안 배양 후 MTT 시약을 제거하고 DMSO를 첨가하여 well에 생성된 for-mazin을 모두 녹인 후 ELISA reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 \(540 \mathrm { nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 정상 배지에서 배양된 암세포와 sulforaphane이 처리된 배지에서 배양된 세포들의 성장률을 비교하였다. 세포형태 변화 관찰을 위해서는 세포배양용 petridish에 세포를 24시간동안 안정화시킨 다음 sulforaphane을 농도별로 처리하여 48시간 동안 배양한 후, 도립 현미경하에서 각 농도에 따른 형태의 변화를 관찰하였다.</p>