ACE 저해능을 조사하기 위해 MRS broth 및 \( 10 \% \) skim milk가 함유된 MRS broth에서 24시간 배양한 후, \( 10,000 \mathrm { x } ~g \)에서 15 분 동안 원심분리한 배양상등액을 시료로 사용하였다. \( \mathrm { HCl } \)을 첨가하여 반응을 중지하고 ethylacetate를 첨가하여 반응산물을 추출하여 건조한 후, 완전히 건조시켰다. 분리균주를 MRS broth에서 배양한 후, 원심분리하여 회수한 배양상등액을 시료로 사용하였고, 항산화능은 조사하여 평가하였고, 인공위액은 조정된 MRS broth에 첨가해 조제하였고 분리균주를 인공위액에 접종 후 생성된 콜로니를 계수하여 pepsin이 첨가되지 않은 생균수와 비교해 백분율로 나타내었다.
<h2>ACE 저해능 조사</h2> <p>분리균주를 MRS broth 및 \( 10 \% \) skim milk가 함유된 MRS broth에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 24시간 배양한 후, \( 10,000 \mathrm { x } ~g \)에서 15 분 동안 원심분리하여 회수한 배양상등액을 시료로 사용하였다. 분리 균주의 ACE 저해능은 Cushman과 Cheung의 방법에 준하여 다음과 같이 조사하였다. 0.4M \( \mathrm { ~NaCl } \)을 함유한 0.1M so-dium borate buffer \( \mathrm { pH } ~8.3 \)에 Hip-His-Leu \( 12.5 \mathrm { mM } \) 을 녹인 용액 \( 100 \mu \mathrm { l } \), ACE \(100 \mu \mathrm { l } \), 시료 \( 50 \mu \)를 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30 분간 반응시킨 후, \( \mathrm { HCl } \)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 여기에 ethylacetate를 첨가하여 반응산물을 추출한 후, 완전히 건조시켰다. 건조물에 증류수를 첨가하여 \( 229 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였으며, ACE 저해율 ( \( \% \))은 식 { [(control-control blank)-(sample-sample blank)]/(control-control blank) } \( \times \)100에 의하여 산출하였다.</p> <h2>항산화능 조사</h2> <p>분리균주를 MRS broth에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 24시간 배양한 후, \(17418 \mathrm { x } ~g \)에서 15 분 동안 원심분리하여 회수한 배양상등액을 시료로 사용하였다. 분리균주의 항산화능은 다음과 같이 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity를 조사하여 평가하였다. \( 200~ \mu \mathrm { M } \) DPPH \(1 \mathrm { ml } \) 와 시료 \(1 \mathrm { ml } \) 를 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 암소에서 30 분 동안 반응시킨 후, 517 \( \mathrm { nm } \) 에서의 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 소거능( \( \% \))은 식 \( [( \) control-sample \()/ \)control \(] \times100 \)에 의하여 산출하였다.</p> <h2>인공위액 내성 조사</h2> <p>인공위액은 0.5 \( \mathrm { ~N } \mathrm { ~HCl } \) 을 이용하여 \( \mathrm { pH } 2.5 \) 및 \( 3.0 \) 으로 조정 된 MRS broth에 pepsin \( 0.3 \% \) 를 첨가하여 조제하였다. 분리균주를 인공위액에 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 시간 동안 배양한 후, \( 200 \mu 1 \) 의 배양액을 MRS 평판배지에 도말하였다. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 시간 동안 배양한 후, 생성된 콜로니를 계수하였다. 인공위액 내성은 pepsin이 첨가되지 않은 MRS broth \( ( \mathrm { pH } \) 6.8)에서의 생균수와 비교하여 백분율로 나타내었다.</p>