생체적합성과 치유 능력이 향상된 무세포 진피를 제조하기 위해서는 면역거부반응을 일으키는 세포들만 말끔히 제거하는 공정이 필요하며, 감염성 위해인자에 대한 안전성을 보증하기 위해서는 소독 및 멸균공정의 확립이 필요하다. 그러므로 본 연구에서는 조직을 동결건조 후 바이러스를 첨가하는 방법으로 피부조직 안에 바이러스가 고루 침투할 수 있도록 하였고, 첨가 바이러스로는 무세포 진피 제조공정의 바이러스 불활화 효과 검증을 위한 지표 바이러스로 HIV-1, BHV, BVDV, PPV, 그리고 HAV를 선정하였으며 이러한 바이러스들은 안전성 검증을 위해 사람 체액, 혈액 및 조직 유래 바이오의 약품 제조공정에 사용되고 있다.
<h1>고 찰</h1><p>생체적합성과 치유 능력이 향상된 무세포 진피를 제조하기 위해서는 진피층의 3차원 구조를 그대로 유지하면서 면역거부반응을 일으키는 진피 내 세포들만 완벽하게 제거하는 공정의 개발이 필요하다. 또한 동종피부에 오염될 가능성이 있는 감염성 위해인자에 대한 안전성을 보증하기 위해서는 무세포 진피의 화학적 구조와 물성에 영향을 미치는 않는 소독 및 멸균공정의 확립이 필요하다. 동종 무세포 진피인 SureDerm \( { }^{\mathrm{TM}} \) 제조공정은 이러한 요구를 충족시키는 \( 70 \% \) 에탄올 소독공정, TnBP와 Deoxycholic acids를 사용한 진피 내 세포 제거 공정, 산화에틸렌 가스멸균 공정을 포함하고 있다.</p><p>일반적으로 사람 혈장 유래 의약품의 바이러스 제거 또는 불활화를 위해 열처리, 용매/계면활성제 처리, low \( \mathrm{pH} \) 처리, 바이러스 필터 공정과 같은 의도적인 바이러스 제거/불활화 공정을 적용하고 있으나, 인체조직 이식재인 무세포 진피는 3 차원의 단백질 구조로 이루어져 있어 바이러스를 제거 또는 불활화 하기가 쉅지 않다. 또한 열처리, low \( \mathrm{pH} \) 처리 등의 방법들은 진피 내 단백질의 변성을 일으킬 수 있어 그 사용이 제한적이다. 용매/계면활성제 처리는 단백질의 활성에 영향을 미치지 않고, HIV, HBV, HCV 등 외피보유바이러스를 효과적으로 사멸시키는 방법으로 혈장 유래 단백질 제제(면역글로불린, 혈액응고인자 제 8 인자, 혈액응고 제 9인자, 안티트롬빈 III 등) 제조공정에서 화학적 바이러스 불활화 공정으로 사용되어 왔다. 주로 사용되는 용매는 TnBP이며, 계면활성제로는 Tween 80, Triton X-100, 또는 sodium cholate가 사용된다. 용매/계면활성제 처리는 외피보유바이러스의 지질막을 파괴함으로 해서 바이러스를 불활성화 시키며, 그 불활화 효과는 처리 시간과 온도에 따라 달라진다. SureDerm \( { }^{\mathrm{TM}} \) 제조과정 중 TnBP/deoxycholic acids를 이용한 세포제거공정은 진피 내 세포들을 제거하기 위한 목적뿐만 아니라 외피보유바이러스를 효과적으로 불활화시키기 위해 개발되었다.</p><p>혈장유래의약품 또는 동물세포를 이용하여 생산하는 단백질의약품의 제조공정에서 바이러스 불활화 검증 실험은 단백질 용액에 바이러스를 첨가하고 불활화 공정을 진행하면서 시간별로 또는 공정별로 시료를 분취하여 감염성 세포주에 접종하고 바이러스를 배양한 후 감염성 바이러스 입자의 수를 정량하는 과정을 통해 진행된다. 이때 첨가한 바이러스가 단백질 용액에서 고루 혼합되도록 교반을 하는 것이 필요하다. 피부와 같은 인체조직은 단백질 용액과는 다른 고형성분이기 때문에 바이러스 불활화 검증 실험을 위해 첨가하는 바이러스가 조직속에 골고루 침투하기가 쉅지 않다. 본연구에서는 피부조직 안에 바이러스가 고루 침투할 수 있도록 조직을 동결건조 후 바이러스를 첨가하였다.</p><p>감염성 위해인자 불활화를 위한 소독 및 멸균 공정에서 바이러스 불활화 효과 평가 연구를 위한 생물학적 지표 선택 시 고려하여야만 할 사항은 다음과 같다. 첫째, 검증을 위해 사용될 생물학적 지표는 인체조직에 오염 가능성이 있는 감염성 위해인자 그 자체 또는 가장 유사한 미생물이어야 한다. 또한 다양한 물리◦화학적 성질의 생물학적 지표를 선택하여 불활화 효과검증을 함으로 해서 일반적으로 모든 종류의 감염성 위해인자를 불활화할 수 있다는 것을 보여 주어야 한다. 둘째, 선택된 생물학적 지표는 되도록 물리◦화학적 처리에 큰 저항성을 나타내는 것이어서 다른 미지의 또는 동정되지 않은 감염성 위해인자의 불활화를 보장할 수 있어야 한다. 셋째, 검증용 생물학적 지표는 되도록 쉽게 분석 가능하며 고농도로 배양할 수 있어야 한다. 넷째, 선택된 생물학적 지표는 시험자에게 감염의 위험이 적어야 한다. 본 연구에서는 무세포 진피 제조공정의 바이러스 불활화 효과 검증을 위한 지표 바이러스로 HIV와 HTLV의 모델 바이러스인 HIV-1, Herpes virus와 Cytomegalovirus의 모델 바이러스인 BHV, HCV의 모델 바이러스인 BVDV, B19의 모델 바이러스인 PPV, 그리고 HAV를 선정하였다. 이러한 바이러스들은 일반적으로 사람 체액, 혈액 및 조직 유래 바이오의약품 제조공정의 바이러스 안전성 검증을 위해 사용되고 있다.</p>