U937세포의 생존율 및 증식에 미치는 영향을 알아보기 위한 ENIL 및 ENIS 단독 처리 실험에서 처리군 모두에서 세포의 생존율 및 증식에 큰 영향을 미치지 못하는 것을 알 수 있었다. U937 세포의 전체적인 형태 변화를 알아보기 위하여 PMA와 ENIL 및 ENIS를 복합 처리했을 경우 큰 변화가 없음을 알 수 있었다. U937세포에 PMA를 처리하였을 경우 염증 유발에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 COXs의 발현에 어떠한 영향을 미치는 지를 관찰한 결과, PMA는 U937 세포의 생존율 및 증식과 더불어 COX-1의 발현에는 큰 영향을 미치지 못하지만 염증발현에 중요한 역할을 하는 COX-2의 발현을 증가시킨다는 것을 알 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>세포의 생존율 및 증식에 미치는 ENIL 및 ENIS의 영향</h2> <p>ENIL 및 ENIS를 단독 처리했을 경우와 PMA와 동시 처리했을 경우에 U937세포의 생존율 및 증식에 미치는 영향을 알아보기 위하여 hemocytometer 및 MTT assay를 이용하였다.Fig. 1A 및 B에서 나타난 바와 같이 ENIL 및 ENIS를 6시간 동안 처리했을 경우 \( 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 큰 변화가 관찰되지 않았다. 다음으로 생존율 및 증식에 큰 영향을 미치지 않는 \( 5 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 각각의 시료를 1시간 선처리한 다음 염증유발물질로서 PMA를 처리하여 6시간 경과 후 변화를 관찰한 결과, Fig. 1C 및 D에 나타난 바와 같이 ENIL 및 ENIS 처리군 모두에서 세포의 생존율 및 증식에 큰 영향을 미치지 못하는 것을 알 수 있었다. 따라서 이후의 실험은 \( 5 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) 농도의 ENIL 및 ENIS를 사용하여 진행하였다.</p> <h2>세포의 형태에 미치는 ENIL 및 ENIS의 영향</h2> <p>PMA와 ENIL 및 ENIS 처리에 따른 U937 세포의 전체적인 형태 변화를 알아보기 위하여 ENIL 및 ENIS를 1시간 선처리후 PMA를 6시간 동안 처리한 다음 ENIL 및 ENIS를 6시간 처리하였을 경우 Fig. 2A에서 보는 바와 같이 세포의 밀도에 큰 변화가 없었으며 전체적인 세포의 형태도 큰 변화가 없음을 알 수 있었다. 또한 상기와 동일한 조건으로 처리된 U937 세포의 핵의 형태 변화를 조사한 결과에서도 Fig. 2B에서와 같이 염색질 응축에 의한 apoptosis가 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 apoptotic body가 관찰되지 않았고 핵의 형태가 뚜렷하게 정상으로 염색되는 것을 알 수 있었다. 이상의 결과는 ENIL 및 ENIS와 PMA의 단독 또는 복합 처리에 따른 U937 세포의 생존율 및 증식에 대한 결과와 잘 부합되었다. 즉 이러한 조건은 ENIL 및 ENIS의 단독 처리에 의하여 세포독성을 나타내지 않음을 의미한다.</p> <h2>COXs의 발현에 미치는 PMA의 영향</h2> <p>PMA는 유전자의 전사, 세포의 성장과 분화, apoptosis, 면역반응 및 protein kinase C signaling pathway를 통한 re-ceptor desensitization 등과 같은 다양한 세포반응을 조절하는 tumor promoter이다. 또한 PMA는 강력한 PKC activa-tor로서 성장인자들, 호르몬 및 세포의 성장과 분화를 조절하는 cytokine에 의한 기전을 연구하는데 사용되며, cytokine 및 LPS와 마찬가지로 여러 세포들에서 COX-2의 발현 및 PGs 생성을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 따라서 U937세포에 PMA를 처리하였을 경우 염증 유발에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 \( \mathrm{COXs} \) 의 발현에 어떠한 영향을 미치는 지를 western blot으로 관찰하였다. 먼저 PMA의 농도별 처리에 따른 변화를 관찰한 결과, Fig. 3A에 나타난 바와 같이 COX-1의 경우는 아무런 변화가 관찰되지 않았지만 COX-2의 경우는 \( 20 \mathrm{~nM} \) 의 농도에서부터 강하게 발현되는 것을 확인 할 수 있었다. 다음으로 PMA 처리시간에 따른COX-2의 발현 정도를 관찰한 결과, Fig. 3B에 나타난 바와 같이 COX-2의 경우에는 PMA 처리 1시간까지는 발현양의 변화가 나타나지 않았지만 2시간째부터 발현양의 증가가 나타나기 시작하여 6시간 처리군에서 현저하게 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과를 살펴볼 때 PMA는 U937 세포의 생존율 및 증식과 더불어 COX-1의 발현에는 큰 영향을 미치지 못하지만 염증발현에 중요한 역할을 하는 COX-2의 발현을 증가시킨다는 것을 알 수 있었다.</p>