동물실험을 위해 동결 건조된 청국장 20g를 200ml 증류수에 첨가하여 2시간 동안 진탕한 후, 원심분리하여 잔여물을 제거하고 동결건조하여 청국장 추출물을 조제하였으며 ICR 마우스 5마리씩 4그룹으로 나누어 증류수 음용군, 종균-발아콩 청국장 음용군, 종균-미발아콩 청국장 음용군, 볏짚-미발아콩 청국장 음용군으로 실험하였다고 간세포 내 항산화 효소 SOD 활성 측정은 microplate WST-1 assay를 사용하여 분석하였다.
<h2>동물실험</h2> <p>동물실험을 위한 청국장 추출물은 다음과 같이 조제하였다. 동결 건조된 청국장 \( 20 \mathrm{~g} \)을 증류수 \( 200 \mathrm{ml} \)에 첨가하여 \(200 \mathrm{rpm} \)에서 2시간 동안 진탕한 후, 원심분리(1,000 rpm, 20분)에 의하여 잔여물을 제거하고, 상등액을 회수하여 동결건조 함으로써 청국장 추출물을 조제하였다. 이하 실험은 부산대학교 동물실험윤리위원회로부터 과학성과 윤리성에 대한 심사를 거쳐 승인을 받아 수행하였다. 실험에 사용된 동물은 8주령의 ICR 마우스로서 샘타코(오산, 한국)로부터 구입하였다. ICR 마우스는 방사선 조사된 사료(Purina Mills Inc)를 자유 급식하였으며, 12시간의 조명주기로 specified pathogen-free 상태의 부산대학교 청정실험동물센터 \( \left(\right. \)온도 \( 23 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 50 \pm 5 \% \)에서 사육하였다. ICR 마우스를 4개 그룹으로 구분하여 그룹당 5마리의 실험동물을 임의적으로 배정하였으며, 증류수 음용군(대조군), 종균-발아콩 청국장 음용군, 종균-미발아콩 청국장 음용군, 볏짚-미발아콩 청국장 음용군으로 나누어 실험하였다. 청국장 추출물 시료는 증류수에 \( 70 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도로 희석한 후, 존데를 이용하여 1일 1회 투여하였다. 7일후에 \( \mathrm{CO}_{2} \)가스를 이용하여 마우스를 안락사 시킨 후, 부검을 실시하였다.</p> <p>간세포 내 항산화 효소 SOD (superoxide dismutase) 활성 측정은 microplate WST-1 assay를 사용하여 분석하였다. 실험동물에서 적출한 간 \( 100 \mathrm{mg} \)을 sucrose buffer \(600 \mu \mathrm{l} \)에 넣고 잘게 자른 뒤, homogenizer를 이용하여 마쇄하였다. 실온에 30분간 방치한 후, 튜브에 넣고 \( 4^{\circ} \mathrm{C}\), \(5000 \mathrm{rpm}\), 10분간 원심분리를 실시해서 상등액만 새 튜브에 \(100 \mu \mathrm{l} \)씩 넣었다. 이렇게 조제된 시료에 WST working solution, enzyme work-ing solution, \( \mathrm{ddH}_{2} \mathrm{O} \), dilution buffer를 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 배양한 후에 microplate reader를 사용해서 \( 450 \mathrm{nm} \)에서의 흡광도를 측정했다.</p> <p>청국장 추출물 섭취가 혈청 내 유전자의 발현에 영향을 미치는 것을 최소화하기 위하여 약 24시간 동안 절식하여 \( \mathrm{CO}_{2} \)가스를 이용하여 마우스를 안락사 시킨 후, 혈액을 채취하였다. 분리된 혈액은 상온에서 30분 동안 방치한 후, 원심분리하여 혈청을 회수하였다. 혈청 내 효소의 변화는 혈청분석기(HITACHI 7080 Automatic Analyzer, Japan)를 이용하여 ALP (alkaline phosphatase)는 Tietz의 방법, AST(asparatate aminotransferase) 및 ALT (alanine amino-transferase)는 Reitman과 Frankel의 방법으로 분석하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>다른 언급이 없는 한, 모든 실험은 3반복 수행하였으며, 결과는 mean\( \pm \mathrm{SD} \)로 제시하였고, 평균치간의 유의성은 SPSS(Statistical Package for Social Sciences) system software package (version 21)을 이용하여 ANOVA 분석(Turkey method)을 하였다.</p>