3T3-L1 지방전구세포에 대한 OJSE의 독성과 효능을 확인하였다. OJSE는 농도가 1~200 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 사이일 때 세포의 생존율에 영향을 미치지 않는 것으로 판명되었다. 지방전구세포에 대한 OJSE의 분화억제 효능 분석 결과, OJSE는 지방세포 분화를 탁월하게 억제하며, 이는 지방세포 내의 lipid droplet 생성과 triglyceride 축적 감소를 초래한다. 이는 OJSE가 지방세포 분화 관련 전사인자인 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } a, \mathrm { C } / \mathrm { EBP } / \beta \) 및 \( \operatorname { PPAR } \gamma \) 의 발현을 억제하는 것으로 해석될 수 있다.
<h1>결 과</h1> <h2>OJSE의 세포독성</h2> <p>OJSE의 3T3-L1 지방전구세프에 대한 세프 독성여부를 확인하기 위하여 3T3-L1 지방전구세포에 OJSE를 처리한 다음 PreMix WST-1 Cell Proliferation Assay System으로 확인하였다. 대조군인 DMSO를 처리한 것에 대한 OJSE 처리 시 세포 증식의 변화 정도를 백분율로 계산하여 세포독성을 나타내었 다(Fig. 1). 그 결과 최고 시료 처리 농도인 OJSE \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서도 \( 85 \% \)이상의 높은 생존율을 나타내었다. 따라서 1~200 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 OJSE 처리는 3T3-L1 지방전구세포의 생존율에 큰 영향을 미치지 않는 것을 확인하였다.</p> <h2>OJSE의 lipid droplet 생성 억제 및 triglyceride 축적 억제 효과</h2> <p>Lipid droplet은 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정 중 나타나는 비활성 소낭으로 phospholipid monolayer에 둘거싸인 중성지방으로 구성되어 있으며, 중성지방으로 알려진 triglyceride는 음식물로 섭취하근 지방의 \( 95 \% \)를 차지하며 중요 에너지원으로 사용되나 여분의 triglyceride는 지방세포에 흡수되고 저장되어 비만의 원인으로 작용한다.</p> <p>OJSE의 3T3-L1 지방전구세포 분화억제 효능을 분석하기 위하여 Oil Red O 염색을 이용하여 3T3-L1 지방전구세포의 lipid droplet 생성 및 triglyceride 축적을 관찰하였다. 먼저 배양된 세포에 분화유도제와 함께 OJSE를 1,5,10,50,100, \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도로 처리한 다음, 분화유도과정이 끝난 후 Oil Red O로 염색하여 현미경으로 관찰하고 triglyceride 함량을 정량하였다. 그 결과 분화유도제만 처리한 대조군에 비해 OJSE를 동시에 처리한 경우 세포질 내 lipid droplet 형성이 농도의존적으로 억제되었으며 triglyceride 축적 또한 농도의존적으로 저해됨을 확인하였다. 특히 \( 200 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \)의 OJSE를 처리한 경우 대조군에 비해 triglyceride 축적이 약 \( 80 \% \) 저해됨을 확인하였다(Fig. 2). 따라서 OJSE는 지방전구세포에서 지방세포로의 분화 억제 및 지방세포내의 지방 축적억제 효과가 탁월한 것을 알 수 있었다.</p> <h2>OJSE의 지방세포분화 관련 전사인자들의 발현에 미치는 영향</h2> <p>OJSE가 3T3-L1 지방세포 분화 관련 전사인자들의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위하여 분화유도제만 처리한 대조군과 분화유도제와 OJSE를 동시에 처리한 실험군을 각각 분화 시킨 후 지방세포분화 관련 전사인자들의 발현 양상을 단백질 수준에서 확인하였다. Fig. \( 3 \mathrm { ~A } \) 와 Fig. \( 3 \mathrm { ~B } \) 는 각각 분화유도제만 처리한 경우와 분화유도제와 동시에 OJSE 200 \( \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) 을 처리한 경우의 지방세포분화 관련 전사인자들의 발현 양상을 본 결과이다. 먼저 Fig. \( 3 \mathrm { ~A } \) 에 나타난 바와 같이 분화유도제만 처리한 대조군의 경우 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } \beta \) 는 분화 초기인 \( 0.25 \)일부터 발현이 시작되어 \( 0.75 \)일에서는 최대 \( 4.8 \)배 발현이 되었고 분화유도 후 2 일까지 발현이 되었다가 3 일에서는 발현이 되지 않았다. 또한, C/EBPa는 4 일에 발현이 시작되면서 7일까지 발현이 점차 증가되다가 8 일에서 감소하였고, PPAR \( \gamma \) 는 3 일에 발현이 유도되어 4 일에 그 발현량이 증가하였다가 5일부터 점차 감소하였다. 이근 서론에서 논한 바 대로 분화유도제에 의해 분화 초기에 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBPB } \)가 발현이 유도되고 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBPB } \) 에 의해 지방세포 분화에서 가장 중요한 역할을 하는 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBPa } \)와 \( \mathrm { PPAR } \gamma \)의 발현이 촉진된다는 설명을 뒷받침할 수 있는 결과로 사료된다. 반면, Fig. 3B에서 알 수 있듯이 분화유도제와 OJSE를 같이 처리한 경우 C/EBP \( \beta \)의 발현량은 Fig. \( 3 \mathrm { ~A } \) 의 대조군의 C/EBP \( \beta \) 발현량보다 현저히 줄어드는 것을 알 수 있다. C/EBPa와 PPAR \( \gamma \) 의 발현량 또한 Fig. \( 3 \mathrm { ~A } \) 의 대조군의 C/EBPa와 PPAR \( \gamma \) 의 발현량 보다 현저히 줄어드는 것을 확인하였다. 따라서 OJSE 처리에 의해 C/EBP \( \beta \)의 발현량이 감소되고 이 후 cascade반응으로 인하여 C/EBPa와 PPAR \( \gamma \) 의 발현량 역시 줄어드는 것으로. 보여진다. 또한 Fig. \( 3 \mathrm { C } \) 에서 보듯이 OJSE 처리에 의한 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } 0 \) 와 PPAR \( \gamma \) 의 발현량은 OJSE 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다. 이상의 결과를 살펴보면 OJSE는 지방세포 분화 관련 전사인자들인 \( \mathrm { C } / \mathrm { EBP } a, \mathrm { C } / \mathrm { EBP } / \beta \) 및 \( \operatorname { PPAR } \gamma \) 의 발현을 억제하여 지방세포 분화를 저해하며 그 결과 lipid droplet 생성과 triglyceride 축적을 감소시키는 것으로 추정된다.</p>