지질의 산화 억제를 위해 천연물 유래 항산화 물질인 고등어 추출물을 살펴본 결과 세포 내 활성 산소종 억제효과가 컸으다. 또한 MTT assay를 행한 결과, 인체 섬유육종 및 결장암 세포의 증식을 크게 억제하였다. 향후 건조 고등어의 기능성 물질의 활용이 기대된다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>세포 내 활성산소종 농도 감소에 의한 항산화 효과</h2> <p>지질의 산화는 식품 품질저하의 주요한 원인일 뿐만아니라 산화 생성물은 인체에 심각한 유해를 일으키는 것으로 보고되고 있다. 산화 억제 방법으로는 산소, 광선, 열에너지의 차단, 일중항산소의 불활성화 그리고 유리라디칼의 안정화 등 여러 가지가 제시되고 있으나 가장 간단하면서적당한 방법은 항산화제를 첨가하는 것이다. 지금까지는 합성 항산화제인 butylated hydroxy toluene (BHT)와 buty-lated hydroxy anisole (BHA) 등이 주로 사용되어 왔으나 최근 발암성 등의 문제로 사용이 규제되고 있어 천연 항산화제로 관심이 기울어지고 있다. 천연물 유래 항산화 물질 검색과 수산식품의 효과적인 이용이라는 측면에서 고둥어 추출물에 의한 항산화효과를 검색하였다. 건조 고등어의 ace-tone/methylene chloride 추출물 \( (\mathrm{A}+\mathrm{M}) \) 및 methanol 추출물\( (\mathrm{MeOH}) \) 과 각 분획물들을 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 및 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 농도로\( \mathrm{HT} 1080 \) 섬유육종세포에 처리하였을 때 세포 내 활성산소종을 농도 의존적으로 크게 감소시켰다. 건조 고둥어추출물을 hexane, \( \mathrm{BuOH}, 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \), water로 다시 추출하여 얻어진 각 분획물을 첨가농도 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 처리했을때 water 분혁물을 제외한 분획물들은 blank군과 control군에 비해 측정 시간 120분 동안 계속적으로 세포 내 활성산소종을 감소시키는데 우수한 능력을 나타내었으며 \( (\mathrm{p}<0.05) \),water 분혀물을 처리한 경우에서는 다른 분획물들보다는 다소 낮은 활성을 나타내었지만, \( 500 \mu \mathrm{M} \mathrm{H} \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 만을 처리한control군보다 세포 내 활성산소종 농도가 낮았음을 관찰할수가 있었다. Jeong 등은 고등어 내장으로부터총지질을 추출하여 헥산 추출물, 사염화탄소-메탄올 추출물,인지질, 포스파티덜콜린 PC, PC를 제외한 나머지 인지질획분으로 추출하여 항산화성을 비교한 결과 극성지질인 인지질과 인지진을 구성하고 있는 PC 및 그 나머지 획분들에서모두 현저한 산화 억제 효과를 나타내었으며 그 중에서도 PC에 의한 산화 억제 효과가 가장 높았다고 보고하였다. 최근 수산식품에 대해서도 항산화와 관련된 다양한 연구 들이 활발허 이루어지고 있는 가운데 해조류에 대한연구로 Kim 등은 구멍쇠미역과 괭생이모자반 메탄은 추출물은 1,1-dipheny-2-picrylhydrazyl (DPPH)를 이용한 전자공여능 평가와 hydroxy radical 소거능 평가 실험에서 우수한 항산화 효과를 보였고 이러한 평가 결과는 각 해조류의총페놀 함량과 밀접한 관련이 있다고 보고하였다. 한편,Kwak 등은 김, 미역, 다시마, 톳, 파래와 같은 해조류들은 모두 지질과산화를 억제하거나 DPPH 라디칼을 소거하는효과보다는 이미 생성된 지질과산화물이 단백질과 결합하는것을 저해하는 효과가 컸으며 특히 파래, 김, 다시마의 효과는 매우 우수하였기 때문에 이들 해조류를 많이 섭취하는 것이 노화 및 산화적 스트레스로 인하여 중가된 지질과산화물로 야기된 세포 및 조직의 기능적 손상을 예방할 것이라고보고하였다. 본 연구결과로부터 건조 고등어 추출물들 중 특허 \( 85 \% \) aq. \( \mathrm{MeOH} \) 분획물에 의한 세포 내 활성산소종 억제효과가 우수하였으므로 극성 물질로 추정되어지며 분획물정제와 갇은 연구가 향후 필요하다고 사료된다.</p> <h2>인체 암세포 증식 억제 효과</h2> <p>건조 고등어 추출물과 그 분흭물들의 인체 암세포 증식억제효과를 조사하기 위해 MTT assay를 행하였다. 실험에는인체 섬유육종세포 \( (\mathrm{HT} 1080) \)와 인체 결장암세포 \( (\mathrm{HT}-29) \)가 사용되었으며 Fig. 2은 건조 고등어의 acetone/methylenechloride 추출물 \( (\mathrm{A}+\mathrm{M}) \)과 methanol 추출물 \( (\mathrm{MeOH}) \)을 \( 5 \mathrm{mg} / \)\( \mathrm{ml}, 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}, 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도로 \( \mathrm{HT} 1080 \) 섬유육종세포에 처리했을 때 인체 암세포 중식 억제효과를 나타낸 것이다. \( \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물과 \( \mathrm{MeOH} \) 추출물은 둘 다 가장 낮은 농도인\( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서부터 농도 의존적으로 섬유육종세포의 성장을 억제시켰다 \( (\mathrm{p}<0.05) . \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물의 경우, \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가농도에서 \( 95 \% \)의 증식 억제효과톨 보였고, \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가농도에서는 \( 97 \% \)로 높은 억제효과톨 보였다 \( (\mathrm{p}<0.05) . \mathrm{MeOH} \) 추출물을 처리한 경우에도 \( \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물과 유사하게 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \),\( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가농도에서 각가 \( 94 \%, 97 \% \)의 높은 암세포 중식억제효과를 보었다 \( (\mathrm{p}<0.05) \). 선조 고등어 추출물을 \( 85 \% \) aq.\( \mathrm{MeOH} \), hexane, \( \mathrm{BuOH} \), water로 다시 추출하여 얻어진 각분회물을 \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도로 \( \mathrm{HT} 1080 \) 세포에 처러했을 때, 각각 \( 91 \%, 89 \%, 97 \%, 73 \% \)의 높은 압세포 중식 억제 효과( \( \mathrm{p}<0.05) \)가 나타나 \( \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물 및 \( \mathrm{MeOH} \) 주출물가 유사한 억제효과둘 보였다. 인체 결장안세포(HT-29)에대한 결과를 나타내 것으로, \( \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물은 HT1080 섬유윤종세포의 결과와 비교했을 때 다소 안세포 증식 억제 효과가낮았으나 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 및 \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 첨가농도에서 각각\( 78 \% \) 및 \( 96 \% \)로 암세포 층식 억제효과를 보였다 \( (\mathrm{p}<0.05) \).\( \mathrm{MeOH} \) 추출물을 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}, 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가농도로 처리했을때 경우에서도 앞서 \( \mathrm{A}+\mathrm{M} \) 추출물 결과와 유사하게 인체 섬유육종세포에 비해 낮은 암세포 성장 억제효과를 보였지만,첨가농도 \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 에서는 \( 96 \% \)로 높은 압세포 중식 억제효과를 보였다 \( (\mathrm{p}<0.05) \) 건조 고등어 추출룰의 \( 85 \% \) aq.\( \mathrm{MeOH} \), hexane, \( \mathrm{BuOH} \), water 분훡물을 \( 20 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 의 농도로인체 결장암세포에 처라했을 때 암세포 증식 억제효과를 나타낸 것으로 각각 \( 80 \%, 88 \%, 96 \%, 96 \% \)의 암세포 증식 억제효과(p<0.05)를 보였다. Kong 등은 고등어 메탄올 추출물은 농도 의존적으로 AGS 인체 위암세포 생존율을 감소시켰고 이러한 증식 억제는 위암세포의 형태적 변이도 함께 유발하였다고 보고하여 인체 섬유육종 및 결장암 세포를 이용한 본 연구 결과와 유사하였다. 또한 소금의 종류를 달리하여 제조한 염장 고등어 추룰물에 의한 항돌연변이 실험에서소금을 첨가하지 않은 고등어 메탄올 추출물은 \( 53 \% \)의 항돌연변이 효과를 나타내었고 한주소금, 천일염, 죽염 및 \( \mathrm{KCl} \)혼합죽염으로 염장한 고등어 메탄을 추출물들 중 특히 죽염과 \( \mathrm{KCl} \)로 염장한 경우가 가장 높은 돌연변이 유발 억제효과를 보였다고 보고하였다. 따라서 본 연구 결과로부터 건조 고등어는 인체 섬유육종 및 결장암 세포의 증식을 크게억제하였으며 세포막 손상을 일으키는 지질 과산화물의 생성올 억제시키는 작용이 있으므로 향후 건조 고등어를 이용한 유용한 기능성 물질의 활용을 기대해 본다.</p>