Disc diffusion assay에서 높은 항균 활성을 가진 isoliquiritigenin과 liquiritigenin의 최소저해농도를 agar-dilution method를 참고하여 측정하였다. 감초 추출물의 isoliquiritigenin 및 liquiritigenin 정량은 대한약전 정량법에 따라 원산지별 각 감초 \(10\mathrm {~g}\)에 에틸 파라벤 \(0.02\mathrm{~g }\)을 넣고 \(50\%\) 에탄올에 하루 침적시킨 후 여과하였으며, 이를 HPLC로 분석하여 얻은 chromatogram의 면적을 회귀직선 방정식에 대입하는 과정을 각 시료에 대해 3회 반복하여 성분의 함량을 산출하였다.
<h2>최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC) 측정</h2> <p>Disc diffusion assay에서 우수한 항균 활성을 보인 isoliquiritigenin과 liquiritigenin의 최소저해농도를 측정하기 위하여 agar-dilution method를 참고하여 실험을 진행하였다. 각각의 균주는 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 로 조절한 후 사용하였고, 메틸 파라벤과 프로필 파라벤은 대조군으로 사용하였다. 시료는 2 배 희석법을 이용하여 DMSO로 농도를 희석한 후에 사용하였고, 시료 \( 2 \mathrm { ml } \) 를 함유한 배지 \( 20 \mathrm { ml } \) 를 petri dish에 주입한 후 시험 균을 평판배지 위에 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 도말하여 배양하였다. 배양 후, 육안으로 관찰하였을 때, 각각의 균들이 증식되지 않는 농도를 최소저해농도로 결정하였다.</p> <h2>원산지별 감초 추출물의 isoliquiritigenin 및 liquiritigenin 정량</h2> <p>점액의 제조: 대한약전 정량법(개정9)에 따라 한국, 중국, 우즈베키스탄 감초 각각 \( 10 \mathrm { ~g } \) 에 내부표준물질로 에틸 파라벤 \( 0.02 \mathrm { ~g } \) 을 넣고 \( 50 \% \) 에탄올 \( 100 \mathrm { ml } \) 에 \( 24 \mathrm { ~h } \) 침적시킨 후 여과하였다. \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 증발된 \( 50 \% \) 에탄올을 보정하여 정확하게 \( 100 \mathrm { ml } \) 로 만들어 사용하였다. 원산지별 감초 추출물 에틸아세테이트 분획을 만들기 위해 \( 50 \% \) 에탄올 추출물을 감압한 후 헥산을 이용하여 비극성 성분을 제거하였다. 이후 에틸아세테이트로 추출한 분획을 감압 및 건조하여 파우더를 얻어 검액을 조제하는데 사용하였다. 원산지별 감초 추출물 에틸아세테이트 분획 파우더를 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후 syringe filter (Milli-pore \( 0.45 \mu \mathrm { m } \), USA)로 여과한 여액을 검액으로 사용하였다. HPLC로 분석하여 얻은 chromatogram의 면적을 회귀직선 방정식에 대입하여 각각의 isoliquiritigenin 과 liquiritigenin의 함량을 구했으며 각각의 시료에 대해 3 회 반복하여 성분의 함량( \%)을 산출하였다.</p> <p>표준품의 준비: Isoliquiritigenin \( 1 \mathrm { mg } \) 을 \( 100 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 녹인 후 \( 80,60,40,30,15 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 희석하여 검량선을 작성하였고, liquiritigenin은 \( 0.1 \mathrm { mg } \) 을 \( 100 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 녹인 후 \( 8,6,2,1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 희석하여 검량선을 작성하였다. 내부표준물질로 사용한 에틸 파라벤은 \( 0.1 \mathrm { mg } \) 을 \( 100 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 녹인 후 \( 8,6,4,2 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 희석하여 검량선을 작성하였다.</p>