본 논문에서는 인체 위암 세포주 AGS, 인체 유빙암 세포주 MDA-MB-231 및 인간 유래의 정상 피부세포인 human dermal fibroblast 세포를 F-12K, DMEM 등과 fetal bovine serum, penicillin, streptomycin을 첨가하여 배양하였다. 이를 MTT assay 방법을 사용해 산화적 스트레스로부터의 세포 보호 활성과 암세포주에 대한 상동열매와 블루베리 메탄올 추출물과 용매 분획물의 증식 억제 활성을 측정하였다.
<h2>세포주 및 배양</h2> <p>실험에 사용된 인체 위암 세포주 AGS (human gastric adenocarcinoma)와 인체 유빙암 세포주 MDA-MB-231 (human breast adenocarcinoma)은 한국세포주은행에서 분양 받았으며, 인간 유래의 정상 피부세포인 human dermal fibroblast 세포는 제주대학교 의학전문대학원 조문제 교수로부터 분양 받아 사용하였다. AGS 세포는 F- 12 K, MDA-MB-231과 fibroblast 세포는 DMEM에 \( 10 \% \) fetal bovine serum, \( 100 \mathrm { units } / \mathrm { mL } \) penicillin, \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) streptomycin를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C }\), \(5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 배양하였다.</p> <h2>산화적 스트레스로부터의 세포 보호 활성 측정</h2> <p>\( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 에 의한 산화적 스트레스로부터의 세포 보호 활성은 MTT assay 방법을 이용하여 측정하였다(Carmichael 등, 1987). 세포를 \( 4 \times 10 ^ { 3 } \mathrm { cells } / \mathrm { well } \) 의 농도로 96-well plate에 분주하고 16시간 동안 배양하여 세포를 완전히 부착시킨 후, 시료와 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 4시간 동안 동시 처리하였다. 배지를 제거한 다음 MTT 용액\((5 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } ) \) 을 첨가하여 4시간 동안 배양한 후, 생성된 formazan crystal을 DMSO로 용해해 분광광도계(Sunrise, Tecan)를 이용하여 \( 570 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>암세포 증식 억제 활성 측정</h2> <p>암세포주(AGS, MDA-MB-231)에 대한 상동열매와 블루베리 메탄올 추출물과 용매 분획물의 증식 억제 활성은 MTT assay 방법을 이용하여 측정하였다. 각 세포를 \( 3 \times 10 ^ { 3 } \mathrm { cells } / \mathrm { well } \) 의 농도로 96-well plate에 분주하고 16시간 동안 배양하여 세포를 완전히 부착시킨 후, 시료를 48시간 처리하였다. 배지를 제거한 다음 MTT 용액 \( (5 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } ) \) 을 첨가하여 4시간 동안 배양한 후, 생성된 formazan crystal을 \( \mathrm { DMSO } \) 로 용해해 분광광도계 (Sunrise, Tecan)를 이용하여 \( 570 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p>