본 연구에서는 \(\mathrm{NO}\)로 인해 활성된 PLD와 PKG에 의한 경로가 호중구의 화학주성에 중요하고, PLD의 활성에는 RhoA가 필요하며 이들 두 단백질이 직접 결합하는 것이 알려졌다. 또한 \(\mathrm{NO}\)은 PLD의 활성은 증가시키지만 PKG 비의존형으로 일어난다는 것을 제시했으며, cGMP는 PLD 활성에는 영향이 없지만 RhoA의 활성화는 억제하는 것으로 추측된다.
<h2>\(\mathrm{NO}\)에 의한 PLD 활성의 증가에 대한 PKG 및 p38 MAPK의 역할</h2><p>\(\mathrm{NO}\)에 의한 화학주성의 억제는 CGMP와는 관계없이 \( \mathrm{O}_{2}^{-} \)에 의한 효과로 actin의 ADP-ribosylation에 의하여 일어난다고도 하였지만, PKG의 억제제인 KT 5823이나 \(\mathrm{NO}\) 생성의 억제제인 \( \mathrm{N}^{\omega} \)-nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME)는 호중구의 화학주성을 억제하였으며 PLD의 억제제인 n-butanol에 의하여도 이러한 억제 현상이 나타남으로써 PLD와 PKG에 의한 경로가 호중구의 화학주성에 중요하다고 하였다. 본 연구에서는 SNP에 의한 PLD의 활성이 CGMP를 경유하여 일어나는가를 보기 위하여 cGMP-dependent protein kinase(PKG)의 억제제인 KT 5823으로 세포를 전처리한 후 PLD 활성도를 측정하였다. SNP를 단독으로 처리하여 증가된 PLD의 활성은 KT 5823에 의하여 영향을 받지 않았으며 fMLP에 의한 PLD의 활성의 증가도 KT 5823에 의하여 변화되지 않았다. 이러한 결과는 SNP에 의한 PLD의 증가는 cGMP 이외의 경로를 통하여 일어나며 fMLP에 의한 PLD의 활성화도 cGMP와는 관계가 없다는 것을 의미한다.</p><p>fMLP에 의한 p38 MAPK의 인산화는 n-butanol에 의하여 억제되었으나 t-butanol에 의하여 변화가 없음으로써 fMLP에 의한 p38 MAPK의 활성에는 PLD가 필요하다고 보고되었으며, 한편으로 Browning 등은 LPS에 의하여 세포 내 증가된 \(\mathrm{NO}\)에 의하여 p38 MAPK가 인산화되는 과정에서 PKG의 경로가 중요하다고 하였다. Fig. 3에서 나타낸 바와 같이 호중구에서 \(\mathrm{NO}\)에 의한 PLD 의 활성은 p38 MAPK의 억제제인 SB 203580에 의하여 큰 영향을 받지 않았다. p38 MAPK의 활성은 인산화의 증가로 나타나는데 SNP를 처리한 호중구에서 p38 MAPK의 인산화가 증가됨으로써 Fig. 4에 나타낸 바와 같이 Western blot 실험에서 인산화된 p-p38 MAPK가 처리하지 않은 세포에 비교하여 현저히 증가되었다. 이러한 인산화의 증가는 SB 203580에 의하여 감소하였으나 KT 5823에 의하여 큰 변화가 없었다. 따라서, \(\mathrm{NO}\)에 의한 호중구의 p38 MAPK 활성은 PKG에 의하여 일어나지 않는 것으로 보인다. 또한 \(\mathrm{NO}\)에 의한 p38 MAPK의 활성은 n-butanol이나 t-butanol으로도 감소되지 않음으로써 PLD가 \(\mathrm{NO}\)에 의한 p38 MAPK의 활성에는 관여하지 않는 것으로 보인다.</p><h2>RhoA활성에 대한 cGMP의 영향</h2><p>최근에 PLD의 활성에는 RhoA가 필요하며 이들 두 단백질과의 결합이 직접적으로 이루어진다는 것이 규명되다. RhoA는 내부분 \( (90 \%) \)이 세포질에 존재하며 자극을 받지 않은 경우에는 Rho GDP-Dissociation Inhibitor(Rho-GDI)에 결합된 상태로 존재하며 자극을 받으면 GTP 결합형인 RhoA(GTP-RhoA)가 되어 Rho-GDI로부터 분리되어 세포막으로 이동하여 작용을 나타낸다. 세포막에 존재하는 Rap1이 PKA에 의하여 인산화되는 것과 비슷하게 세포막에 존재하는 활성형의 RhoA는 PKA에 의하여 인산화가 되고 세포막으로부터 세포질로 떨어져 나온다. 본 연구자들은 호중구에서 cAMP나 PKA가 PLD의 활성화를 억제하는 것은 RhoA를 인산화시키고 세포막으로의 결합을 봉쇄하기 때문이라는 사실을 밝혀내어 보고한 바 있다. PKA 뿐만 아니라, RhoA가 PKG에 의하여 인산화된다는 것이 최근 알려져 있으나 RhoA에 대한 PKG의 생리적인 영향은 거의 알려져 있지 않은 실정이다. 특히, PKG에 의한 RhoA의 인산화가 PLD에 대한 영향이 PKA에 의한 영향과 유사한 지는 아직 밝혀진 바가 없다. 본 연구에서는 \(\mathrm{NO}\)에 의한 PLD 활성의 증가가 비록 PKG 를 거치지 않고 일어나는 것으로 나타났지만 RhoA가 세포막으로 전이하는 것이 cGMP에 의하여 영향을 받는가를 조사하였다. Fig. 5에서와 같이 RhoA는 fMLP나 PKC의 자극제인 PMA에 의하여 활성화되어 세포질에서 세포막으로의 전이되는 양이 현저히 증가되었다. cAMP를 처리하였을 때와 유사하게 CGMP를 전처리하였을 때 PMA에 의한 전이는 억제되지 않았으나 fMLP에 의한 전이는 억제되었다. 이와 같은 결과로서 RhoA의 활성은 CGMP의 증가에 의하여 억제된다는 것을 알 수 있다.</p><p>따라서 \(\mathrm{NO}\)가 호중구에 미치는 영향은 신호전달 인자의 활성화를 증가시키거나 억제하는 두 가지 영향을 동시에 가지는 것으로 제안되고 있지만 본 연구결과로부터 \(\mathrm{NO}\)는 PLD의 활성은 증가시키지만 이러한 반응은 PKG 비의존형으로 일어난다는 것을 제시하고 있으며 cGMP는 RhoA의 활성화는 억제하지만 PLD 활성에는 큰 영향이 없는 것으로 추측된다.</p>