실험에는 Sigma-Aldrich에서 구매한 화학 약품과 소화효소, 그리고 시판중인 식품 15가지를 사용했다. 식품의 인체내 소화 과정을 모방하여 소화산물을 제조하고, 이를 위해 SSF, SGF, SIF를 제조했다. Oral phase에서는 5g의 식품 시료와 3.5mL의 SSF, 0.5mL의 α-amylase, 25µL의 0.3M CaCl2, 그리고 975µL의 증류수를 사용했고, Gastric phase에서는 반응된 SSF용액과 pepsin solution을 포함한 SGF용액을 혼합하여 Shaking incubator를 이용해 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>실험에 이용된 주요 화학 약품과 소화효소는 Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA)에서 구매하였다. 실험에 사용된 \( 15 \)가지 식품들은 모두 시판중인 제품을 사용했다. 그 외의 실험기기 및 시약은 별도로 기술하였다.</p> <h2>In vitro Gastrointestinal digestion (GID)</h2> <p>이전에 보고된 방법을 이용하여, 식품이 인체내에서 소화되는 과정을 모방한 GID 과정을 통해 소화산물을 제조하였고, Simulated saline fluid (SSF), Simulated gastric fluid (SGF), Simulated intestinal fluid (SIF)도 그에 따라 제조하였다. Oral phase에서는 \( 5 \mathrm { ~g } \)의 식품 시료(액체의 경우 \( 5 \mathrm { ~mL } \) )를 사용하였고, \( 3.5 \mathrm { ~mL } \)의 SSF, \(0.5 \mathrm { ~mL } \) \( \alpha \)-amylase \( (1,500 \mathrm { U } / \mathrm { mL } \)), \( 25 \mu \mathrm { L } \) \(0.3 \mathrm { M } \) \( \mathrm { CaCl } _ { 2 } \), 그리고 증류수 \( 975 \mu \mathrm { L } \)를 첨가하여 최종 부피를 \( 10 \mathrm { ~mL } \)로 맞춘 후 \( \mathrm { pH } 7 \) 로 조절했다. 그 후 Shaking incubator를 이용하여 \( 37 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 2 \)분 간 반응시켰다. Gastric phase에서는 반응된 SSF용액 \( (10 \mathrm { ~mL } ) \)과 \( 1.6 \mathrm { ~mL } \) pepsin solution \( (25,000 \mathrm { U } / \) \( \mathrm { mL } ) \)을 포함한 SGF용액 \( (10 \mathrm { ~mL } ) \)과 혼합 후 \( \mathrm { pH } \) \( 2.5 \) 로 조절하였고, 그 후 Shaking incubator를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 2 \)시간 동안 반응시켰다. 최종적으로 Intestinal phase에서는 반응된 SGF 용액 \( (20 \mathrm { ~mL } ) \)은 \( 5 \mathrm { ~mL } \) pancreatin solution \( (800 \mathrm { U } / \mathrm { mL } ) \)과 \( 2.5 \mathrm { ~mL } \) bile salt \( (160 \mathrm { mM } ) \)을 포함한 \( 11 \mathrm { ~mL } \) SIF 용액과 혼합 한 후, \( 1 \mathrm { M } \) \( \mathrm { NaOH } \)을 사용하여 \( \mathrm { pH } \) \( 7 \)로 조절하여 Shaking incubator를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 2 \)시간 동안 반응시켰다. 소화효소 반응 이후 식품시료는 액체 질소에 넣어 동결시켜 효소반응을 중지시켰고, \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하여 이후 실험에 사용하였다.</p>