고추에서 추출한 수용성 단백질이 6개의 우물판에서 2-12개의 세포의 성장과 군집 형성에 미치는 영향을 실험하였다. 세포들은 CO2 배양기에서 14일 동안 배양되었고, 군체의 형성은 현미경으로 관찰되었다. 고추 추출물의 항산화 활성도 평가되었는데, 성장 후기에는 DPPH 자유라디칼 스캐빈징 활성이, 성장 초기에는 잔틴산화효소 억제 활성이, 종자 추출물의 성장 말기에는 크산틴산화효소 억제 활성이 높았다.
<h3>생물학적 검정: 2-12 세포 콜로니 형성억제</h3> <p>본 실험에 사용된 세포는 종양유발 유전자인 Ha-ras on-cogene (valine mutation at codon 12)을 NIH 3T3 세포로 전환하여 만들어진 2-12 세포주로 6 well plate에서 콜로니 형성억제 실험에 사용하였다. 세포배양 및 콜로니 형성억제정도는 Jeong 등(2002)의 방법에 의하였다. 2-12 형질전환 세포주는 isopropyl \( \beta \)-D-thiogalactoside (IPTG, Sigma)의 유도에 의해 높은 Ha-ras 종양유전자와 독립 부착성을 포함한 강력한 전이특성을 나타낸다. 세포주는 정기적으로 배양했으며 배양조건은 5 \%- \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) 와 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 수준을 유지하였다. 배양액으로 \( 10 \% \)-calf serum이 포함된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle medium)을 사용하였다. 각 well당 \( 880 \mu \) 씌의 배양액에 \( 5 \% \)-agar \( 120 \mu 1 \) 을 희석해서 \( 0.6 \% \)-ase agar layer로 \( 1 \mathrm { ml } \) 을 주입하고 실온에서 15 분간 방치했다. upper agar layer는 \( 0.6 \% \) -agar \( 550 \mu \mathrm { l } \), 배양액 \( 330 \mu \mathrm { l } , 1 \mathrm { M } \) IPTG 20 \( \mu \mathrm { l } \)와 2-12 세포 (40,000 cells/ml) 100 \( \mu \mathrm { l } \)을 조합해서 well당 각 \( 1 \mathrm { ml } \) 씩 주입했다. 세포는 14 일간 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 배양했으며 형성된 콜 로니에 대한 관찰은 광학현미경 \( ( \times 40) \) 하에서 실시하였다. 처리시료는 고추의 수용성 단백질을 처리하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>항산화활성</h2> <p>고추 ethyl acetate 추출물의 DPPH free radical scavenging 활성, xantine/ xanthin oxidase 억제활성을 조사한 결과, 부위간의 DPPH free radical scavenging 활성은 과육은 종자보다 높았으나, 그 차이는 높지 않았다(Fig. 2). 생육시기별로 과육과 종자추출물의 활성은 개화 후 일 수가 경과된 생육 후기가 초기에 비하여 높았다.</p> <p>Xanthine oxidase 억제활성은 생육초기에는 과육에서, 생육후기는 종자에서 높았고, 개화 후 20 일인 4 단계가 전 생육시기 중 가장 높았다(Fig. 3).</p>