본 연구는 GSSG 첨가를 통해 반응을 시작하여, \( \mathrm { NADPH } \)의 분해를 \( 340 \mathrm { ~nm } \)의 흡광도 감소로부터 얻었다. 과산화 수소와 Malondialdehyde (MDA)를 측정하였으며, 동결 보존한 꽃잎을 동결 마쇄한 후, \(0.1 \%\) TCA와 염산을 포함한 메탄올을 활용해 표본을 균질화하고 원심분리하였다.
<p>GR활성의 측정은 Halliwell과 Foyer (1978)의 방법에 준해 수행하였다. 조효소액 \( 0.05 \mathrm { ~mL } \)에 \( 1 \mathrm { mM } \) NADPH \( 0.12 \mathrm { ~mL } , 100 \mathrm { ~mM~ } \mathrm { K } - \mathrm { P } \) buffer (pH 7.8) \( 0.25 \mathrm { ~mL } \), 증류수 \( 0.48 \mathrm { ~mL } \)를 첨가했다. 반응은 GSSG의 첨가에 의해 개시되었으며, \( \mathrm { NADPH } \)의 분해를 \( 340 \mathrm { ~nm } \)의 흡광도 감소 속도로부터 구했다.</p> <h2>Malondialdehyde (MDA) 측정</h2> <p>MDA의 분석은 Heath와 Packer (1968)의 thiobarbituric acid (TBA) 반응을 이용해 실시하였다. 동결 보존한 꽃잎 \( 0.5 \mathrm { ~g } \)을 동결 마쇄한 후, \( 0.1 \% \) trichloroacetic acid (TCA) \( 5 \mathrm { ~mL } \)를 가해 조직분쇄기로 30초간 균질화하고, 원심분리 ( \(4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 10,000 \times \mathrm { g } \), 10분간)를 하였다. 상청액 \( 1 \mathrm { ~ml } \)에 \( 0.5 \% \) TBA를 포함한 \( 20 \% \) TCA \( 5 \mathrm { ~mL } \)를 가해 교반하였다. 그 후 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 가열한 후 빙냉하여 반응을 중지시켰다. \( 10,000 \times \mathrm { g } \)로 10분간 재차 원심분리한 후 \( 532 \mathrm { ~nm } \)에서의 흡광도를 측정했다. MDA함량은 흡광계수 \( 155 \mathrm { mM } ^ { -1 } \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \)를 이용해 산출했다.</p> <h2>과산화 수소 \( \left ( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \right ) \) 측정</h2> <p>동결 보존한 꽃잎 \( 0.5 \mathrm { ~g } \)을 동결 마쇄한 후, \( 10 \mathrm { ~mL } \)의 추출액 \( (0.25 \mathrm { M } \)의 염산을 포함한 \( 50 \% \) 메탄올)을 가해 다시 균질화했다. \( 35,000 \times \mathrm { g } \)로 25 분간 원심분리하여, 상청액을 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 함량 분석에 이용했다. \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 함량의 측정에는 과산화물 측정지 (Reflectoquant test strips \( 0.2-20 \mathrm { ~mg~ } \mathrm { H } 2 \mathrm { O } 2 / \mathrm { L } \), Merck Chemicals, Germany)와 Reflectometer (RQflex, Merck Chemicals)를 이용하였다.</p>