한국화학연구소에서 Sprague Dawley계 랫트를 구입하여 예비사육을 거친 다음, 7마리씩 3군으로 나누어 실험용 기본사료로 사육하고, 농촌진흥청 잠사곤충부에서 5령 3주짜리 누에를 동결건조하여 제공한 누에가루를 사료에 첨가한 실험그룹으로 하여 6주간 사육실험을 시행하면서 리포푸신, 아세틸콜린 및 그 관련효소의 활성에 미치는 영향을 평가하였다. 본 실험에 사용한 사료는 탄수화물, 단백질, 지질, 비타민, 무기질, 섬유질, DL-methionine, choline chloride 등이 첨가되었고, cholesterol \(0.5\%\) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \)도 첨가되었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물실험 및 사료조성</h2><p>한국화학연구소에서 구입한 Sprague Dawley계 랫트(male, \( 160 \pm 10 \mathrm{g} \))를 구입하여 본 대학 동물사육실에서 2주 동안 예비사육한 다음, 7마리씩 3군으로 나누어 실험용 기본사료(control group)로써 사육하면서 농촌진흥청 잠사곤충부에서 5령 3주짜리 누에를 동결건조하여 제공한 누에(Bombyx mori L.) 가루를 각각 200 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW가 되도록 사료에 첨가한 실험그룹(SWP-200 및 SWP-400 groups)으로 하여 6주간 사육실험을 행하여 리포푸신, 아세틸콜린 및 그 관련효소의 활성에 미치는 영향을 평가하였다. 동물사육실은 항온항습 \( \left(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 65 \pm 2 \% \mathrm{RH}\right) \)하에서 12시간 싸이클(06:00~18:00)로 명암이 자동 조절된다.</p><h2>조제사료의 조성</h2><p>본 실험에 사용한 사료조성은 전보와 같이 탄수화물 \( 57.8 \% \) (\( \alpha\)-corn starch: \( 44.5 \%+ \) sucrose \(13.3\%\), 단백질 \( 16.0 \% \) (sodium-free casein), 지질 \( 18.0 \% \) (lard 18.0\%), 비타민과 무기질(AIN-76 mixture) 각각 \( 1.0 \%, 3.5 \% \), 그리고 섬유질 \( 3.0 \% \), DL-methionine \( 0.3 \% \), choline chloride \( 0.2 \% \)를 첨가하였으며, 여기에 cholesterol \(0.5\%\) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \)를 첨가하하였다. 실험그룹의 사료조성은 누에가루(SWP)를 하루에 각각 200 및 \( 400 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) BW가 섭취되도록 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \)의 SWP를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 0.2 \% \) 및 \( 0.4 \% \)씩 제외하고 조제하였다.</p><h2>뇌세포 획분의 분획</h2><p>뇌세포의 분획은 저자 등의 방법에 따라 균질 완충용액 (\(1.15\%\) \( \mathrm{KCl}/10\mathrm{mM} \) phosphate buffer/\( 5 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm{pH} 7.4\))을 사용하여 미토콘드리아, 마이크로솜 및 시토졸 획분을 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등 방법에 따라 정량하였다.</p><h2>리포푸신 함량의 측정</h2><p>노화색소로서 리포푸신(lipofuscin)의 측정은 Fletcher 등의 방법에 따라 조직의 표면에 과도한 수분과 오물을 제거한 후 뇌조직 \( 0.2 \mathrm{g} \)에 chloroform-methanol (\(2: 1\), \( \mathrm{v} / \mathrm{v} \)) 혼합용액 \( 4.0 \mathrm{ml} \)에 첨가 후 1분간 균질화시킨후 원심분리하여 chloroform층 \( 2.0 \mathrm{ml} \)를 분취하여 형광광도계를 사용, \( 345 \mathrm{nm} \) (excitation)와 \( 435 \mathrm{nm} \) (emission)에서 표준용액(qui-nine sulfate \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) of \( 0.1 \mathrm{N} \) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \))을 대조군으로 형광도를 측정하여 리포푸신의 함량(\( \mu \mathrm{g} / \mathrm{mg} \) protein)을 정량하였다.</p>