오디 추출물이 PPAECs 세포에 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였는데, 혈관신생 과정에서 혈관신생 유도 인자의 자극에 의한 세포의 이동이 중요한 역할을 수행한다고 알려져 있다. 오디의 수용성 추출물의 주된 성분이 cyanidin-3-glucoside와 레스베라트롤일 것으로 확인되었다. 또한 오디 추출물이 혈관내피세포의 발아를 억제시키는지 확인한 결과, 암의 성장을 억제 조절하는 방법에 이용할 수 있는 가능성을 제시하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>PPAECs 세포의 생존 및 이동에 미치는 오디 추출믈의 효과</h2> <p>오디 추출물을 처리한 PPAECs 세포의 생존능력을 조사하기 위해 MTT conversion assay를 수행하였다. \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 오디 추출물을 PPAECs 세포에 24시간 동안 처리한 결과, 생존율이 거의 \( 100 \% \)를 나타내 오디 추출물이 PPAECs 세포에 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였다. 혈관신생 과정에서 혈관신생 유도 인자의 자극에 의한 세포의 이동이 중요한 역할을 수행한다고 알려져 있다. PPAECs 세포의 이동에 미치는 오디 추출물의 효과를 확인하고자 microcarrier beads에 PPAECs 세포를 2~3일간 배양하여 bead 당 약 25~30 세포가 융합된 단일층을 형성하도록 하였다. 이렇게 PPAECs 세포로 덮힌 microcarrier bead를 젤라틴 처리된 plastic dish에 대조 완충용액을 첨가하여 배양한 결과, \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 오디 추출물 처리에 의해 세포의 이동이 약 \( 36 \% \) 억제되었다. 한편, 강력한 혈관신생 유도 인자로 알려진 VEGF를 처리한 결과, 대조군에 비해 PPAECs 세포의 이동이 약 \( 325 \% \) 증가되었으며, VEGF에 의해 증가된 PPAECs 세포의 이동이 오디 추출물에 의해 약 \( 67 \% \) 억제되었다. 한편, 오디 추출물의 주된 성분 중 하나인 cyanidin-3-glucoside를 \( 100 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 결과, 대조 완충용액에 비해 PPAECs 세포의 이동이 약 \( 29 \% \) 억제되었다. Chen 등의 연구 결과, cyanidin-3-glucoside에 의해 인간의 폐기종 세포수인 A549 세포주의 이동과 침윤이 세포 독성 없이 농도-의존적으로 억제되었다. 따라서, 본 연구에 사용한 오디 추출물의 주된 성분 중의 하나가 cyanidin-3-glucoside임을 추정할 수 있었다. 또한 오디 추출물의 다른 성분으로 알려진 레스베라트롤을 \( 50 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 결과 대조군에 비해 PPAECs 세포의 이동이 약 \( 37 \% \) 억제되었다. 한편, Hu 등은 인간 제대혈 내피세포(HUVECs)에서 레스베라트롤에 의한 이동 억제 효과를 관찰한 결과, \( 50 ~\mu \mathrm{M} / \mathrm{ml} \)에서 HUVECs 세포의 이동이 유의할만하게 억제되었고, in vitro에서의 관 형성 역시 농도 의존적으로 감소됨을 보고하였다. 이상의 결과는 오디의 수용성 추출물의 주된 성분이 cyanidin-3-glucoside와 레스베라트롤일 것이라 사료된다. 추후, 이동 억제에 관련된 분자 기작을 밝히기 위해 세포골격 구성요소의 변화에 미치는 오디 추출물의 효과를 조사할 계획이다.</p> <h2>PPAECs 세포의 발아에 미치는 오디 추출물의 효과</h2> <p>혈관신생 과정에서 내피세포의 발아는 내피세포의 이동과 함께 일어나는 초기단계의 중요한 현상이다. VEGF 등을 포함한 각종 성장 인자 및 여러 사이토카인의 작용에 의해 혈관내피세포의 증식, 이동 및 발아가 일어나는데, 이러한 활성의 증가는 암 등의 진행과 관련이 있다. 이러한 측면에서 오디 추출물이 혈관내피세포의 발아를 억제시키는가를 확인하고자 하였다. 이를 위해 microcarrier beads에 PPAECs 세포를 2~3일간 배양하여 bead 당 약 25~30 세포가 융합된 상태의 단일층을 형성하도록 한 다음, 이들 beads를 3차원-피브린 젤에 매몰시켜 배양하였다. 이후 24시간마다 오디 추출물을 첨가 \( (0 \sim 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)하면서 조사하였다. 그 결과, 오디 추출물 농도 \( 80 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 PPAECs 세포의 발아가 \( 50 \% \) 억제되었다. 또한 VEGF에 의해 증가된 발아 역시 오디 추출물에 의해 약 \( 43 \% \) 감소되었다. 한편, 오디 추출물의 주된 성분으로 알려진 cyanidin-3-glucoside를 \( 100 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 결과, PPAECs 세포의 발아가 약 \( 50 \% \) 억제되었다. 또한 \( 50 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 레스베라트롤을 처리한 결과 대조구에 비해 PPAECs 세포의 발아가 약 \( 37 \% \) 억제되어 본 연구에 사용한 수용성 오디 추출물의 주된 성분이 효과적으로 추출되었다고 추정할 수 있었다. 이러한 결과는 오디 추출물이 VEGF의 과발현에 의한 암의 성장을 억제 조절하는데 이용될 수 있을 가능성을 보여주고 있다. 즉, 세포의 이동 억제 효과와 더불어 전이성 암의 효과적인 억제제로서의 가능성을 제시한다고 할 수 있다.</p>