유방암 세포인 MDA-231, MDA-435 세포와 전립선 암인 PC-3는 라미닌-1이 MT 유전자를 유도하는지 노던블럿 방법으로 조사했다. 라미닌-1에 의해 분화된 HSG 및 PC-12 두 세포는 MT 유전자의 발현이 1시간 처리 때부터 증가하여 4시간 처리 시 최고를 이루며 16시간은 초기 수준으로 돌아왔다. 라미닌-1의 처리는 유방암(MDA-231, MDA-435) 세포와 전립선 암인 PC-3 세포에서 MT 유전자의 변화는 없었다. 종합하면, 라미닌-1은 분화유도를 일으키며 만약에 분화가 유도되면 MT 단백질의 발현이 증가하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>세포배양</h2> <p>HSG 세포는 \(5 \% \) fetal bovine serum이 첨가된 DMEM/Ham's F-12 \((1:1) \) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). 에 \(100 \mathrm { units } / \mathrm { ml } \) penicillin와 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) streptomycin (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 첨가한 배지에서 배양하였다. PC-12 세포는 \( 10 \% \) fetal bovine serum이 포함된 DMEM에 100 units \( / \mathrm { ml } \) penicillin와 \( 100 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) streptomycin을 첨가한 배지에서 배양하였다. 유방암 세포인 MDA-231, MDA-435 세포와 전립선 암인 PC-3는 \( 10 \% \) fetal bovine serum이 포함된 RPMI 1640 에 \( 100 \mathrm { units } / \mathrm { ml } \) penicillin와 \( 100 \mathrm {\mu g } \) \( / \mathrm { ml } \) streptomycin을 첨가한 배지에서 배양하였다.</p> <p>악성화 정도가 다른 다섯 종류의 전립선 세포 및 암세포인 RWPE-1, WPE1-NA22, WPE1-NB14，WPE1-NB11, WPE1-NB26는 complete KSFM 배지 (K-SFM 배지에 50 \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) bovine pituitary extract (BPE), \( 5 \mathrm { ng } / \mathrm { ml } \) epidermal growth factor (EGF)와 \( 1 \% \) antibiotic/antimycotic mixture(PSF)를 첨가한 배지) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)에서 배양하였다. 각 세포는 라미닌-1이 코팅된 \( 100 \mathrm { ~mm } \) 배양접시에 1시간, 4시간, 16시간 배양 후 관찰하였다.</p> <h2>Northern blot analysis</h2> <p>Stratagene사의 RNA mini-prep kit (Stratagene, La Jolla, CA, USA)을 사용하여 각 세포의 total RNA를 분리하였으며 \( 10 \mu \mathrm { g } \) 의 RNA를 formaldehyde - agarose gel에 전기영동 한 후 Nytran membrane (Schleicher and Schuell, Keene, NH, USA) 에 transfer하고 \( \left [ { } ^ { 32 } \mathrm { P } \right ] \mathrm { dCTP } \) 로 표지 된 MT 유전자의 cDNA probe로 hybridization하여 관찰하였다.</p> <h1>결 과</h1> <p>라미닌-1에 의해 분화가 유도되는 것으로 알려져 있는 HSG 및 PC-12 세포를 대상으로 라미닌-1이 MT 유전자를 유도하는지를 노던블럿 방법에 의해 조사하였다. 라미닌-1에 의해 HSG 및 PC-12 두 세포에서는 MT 유전자의 발현이 1시간 처리 후부터 증가하기 시작하여 4시간 처리 시 최고를 이루며 16시간 처리 시에는 원래의 수준으로 감소하는 것이 관찰되었다. 반면 분화 역량을 지니지 않은 암세포인 유방암(MDA-231, MDA-435) 세포와 전립선 암인 PC-3 세포에서는 라미닌-1의 처리가 MT 유전자의 변화에 영향을 미치지 못하는 것이 관찰 되었다. 이러한 결과를 통해 라미닌-1은 정상적인 세포 의 분화유도를 일으키며 라미닌-1에 의해 분화가 유도될 때 MT 단백질의 발현이 증가하며 라미닌-1에 의해 분화가 유도 되지 않는 암세포의 경우 MT 유전자의 발현 역시 유도되지 않는 것으로 추정할 수 있었다.</p>