추출액은 filter paper로 여과한 후 필요에 따라 rotary vacuum evaporator에서 농축하여 시료로 사용하였고, 총 페놀 화합물은 Folin-Denis 방법으로 측정하였다. 또한 DPPH radical에 대한 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였고, ABTS radical cation decolorization은 Pellegrin 등의 방법에 의해 측정하였으며, PF는 Andarwulan과 Shetty의 방법으로 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료의 선정</h2> <p>본 실험에 사용한 체리 세이지는 경북 구미시에 소재하는 herb 농원에서 구입하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) dry oven에서 건조한 후 40 mesh로 분쇄하여 시료로 사용하였다.</p> <h2>추출 조건</h2> <p>시료 추출의 최적 조건을 알아보기 위해 추출용매를 달리하여 각각 물과 \( 60 \% \)의 ethanol, methanol 및 acetone으로 추출하여 최적 조건의 추출용매를 정하였으며, 추출용매로 ethanol을 \( 0 \sim 100 \% \)의 농도로 사용하고 추출하여 최적 조건의 농도를 정하고, 30시간 동안 매 6시간 간격으로 phenol성 물질의 용출량을 측정하여 시간별 용출량의 변화를 살펴보고 최적조건을 정하였다.</p> <h2>추출물의 제조</h2> <p>시료 추출은 각 추출용매 \( 100 \mathrm{ml} \)에 체리 세이지 시료 \( 1 \mathrm{~g} \)을 가하여 24시간 동안 상온 진탕 추출하였으며, 추출액은 filter paper (Whatman No.1)로 여과한 후 필요에 따라 rotary vacuum evaporator (Eyela NE, Japan)에서 농축하여 시료로 사용하였다.</p> <h2>Phenol 화합물 정량</h2> <p>총 페놀 화합물은 Folin-Denis 방법으로 측정하였으며, 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \(95\%\) ethanol \( 1 \mathrm{ml} \)와 증류수 \( 5 \mathrm{ml} \)를 첨가하고 \( 1 \mathrm{~N} \) Folin-ciocalteu reagent \( 0.5 \mathrm{ml} \)를 넣어 잘 섞어주고, 5분간 방치한 후, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3}\) \(1 \mathrm{ml} \)를 가한 후, \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 1시간 이내에 흡광도를 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로부터 양을 환산하였다.</p> <h2>DPPH 라디칼 소거능 측정</h2> <p>DPPH radical에 대한 소거활성은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 각 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)에 \( 60 \mu \mathrm{M}\) DPPH \(3 \mathrm{ml} \)를 넣고 vortex한 후 15분 동안 방치한 다음 \( 517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거능은 다음 식으로 나타내었다.</p> <p>\( \begin{array}{c}\mathrm{DPPH} \text { 라디칼 } \\ \text { 소거능 }(\%)\end{array}=\frac{\text { 대조구의 흡광도 - 반응구의 흡광도 }}{\text { 대조구의 흡광도 }} \times 100 \)</p> <h2>ABTS radical cation decolorization의 측정</h2> <p>ABTS [2,2\('\)-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)] radical cation decolorization의 측정은 Pellegrin 등의 방법에 의해 측정하였다. 즉, \( 7 \mathrm{mM} \) ABTS \( 5 \mathrm{ml} \)와 \( 140 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{S}_{2}\mathrm{O}_{8}\) \(88 \mu \mathrm{l} \)을 섞어 어두운 곳에 \( 14 \sim 16 \)시간 방치시킨 후, 이를 absolute ethanol과 약 \(1:88\)비율로 섞어 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 대조구의 흡광도 값이 \( 0.7 \pm 0.002 \)가 되도록 조절한 ABTS solution을 사용하였다. 시료용액 \( 50 \mu \)와 ABTS sol-ution \( 1 \mathrm{ml} \)를 혼합하여 30초간 진탕한 후 2.5분간 반응시키고 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 아래의 식에 의해 라디칼 소거활성을 계산하였다.</p> <p>ABTS radical 저해율 \( (\%)=\left(1-\frac{\text { Sample O.D. }}{\text { Control O.D. }}\right) \times 100 \)</p> <h2>Antioxidant Protection Factor (PF) 측정</h2> <p>PF는 Andarwulan과 Shetty의 방법으로 측정하였다. \( 10 \mathrm{mg} \)의 \( \beta \)-carotene을 \( 50 \mathrm{ml} \)의 chloroform에 녹인 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 evaporator 수기에 넣고 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) water bath에서 chloroform을 증류시킨 후 \( 20 \mu\mathrm{l}\) linoleic acid, \( 184 \mu \mathrm{l}\) Tween 40과 \( 50 \mathrm{ml} \) \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)를 가하여 emulsion을 만들고, \( 5 \mathrm{ml} \)의 emulsion용액에 시료용액 \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 혼합하여 vortex로 잘 섞어준 뒤 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 반응 시켜 냉각시킨 다음, \( 470 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 다음의 식으로 PF값을 계산하였다.</p> <p>\( \mathrm{PF}=\frac{\text { 반응구의 흡광도 }}{\text { 대조구의 흡광도 }} \)</p>