유류가 오염된 해양에서 유류 분해 미생물을 분리하기 위해 유류오염 지역의 해수를 채취해 1%의 crude oil이 함유된 C-배지를 사용해 배양했다. 수일간 배양해 생성된 콜로니를 반복 배양시킨 결과 유류 분해능을 확인했고, 단일 콜로니를 분리해 특징을 조사한 후 Bergey's manual of systematic bacteriology를 근거로 선별된 균주를 동정했다. 선별된 균주의 생육온도를 조사하기 위해 온도별로 진탕배양하고, 배양시간에 따른 균체의 성장을 알아보기 위해 흡광도를 측정했다.
<h2>균주의 분리</h2> <p>유류가 오염된 해양으로부터 유류 분해 미생물을 분리하기 위하여 유출이 빈번하다고 생각되는 전남 여천의 호남정유 원유선착장과 인근 유류오염 지역으로부터 해수를 채취하여 탄소원으로서 유일하게 \( 1 \% \) 의 crude oil이 함유된 C-배지를 사용하여 배양하였다. 수일간 배양하여생성된 콜로니를 반복하여 배양시킨 결과 유류 분해능을 확인하였으며, 단일 콜로니를 분리하였다.</p> <h2>균주의 동정</h2> <p>선별된 균주를 동정하기 위하여 형태학적, 생리학적, 생화학적 특징을 조사한 후 Bergey's manual of systematic bacteriology를 근거로 하여 동정하였다.</p> <h2>균주의 생육도 측정</h2> <p>선별된 균주의 생육온도를 조사하기 위하여, \( 500 \mathrm { m } \ell \) 삼각플라스크에 crude oil \(1 \% \)를 함유한 C-배지를 \( 200 \mathrm { m } \ell \)넣고, LB 액체 배지에서 전배양시킨 균주 \( 1 \% \) 를 접종하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 32 ^ {\circ } \mathrm { C } , 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 \( 42 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 각각 \( 200 \mathrm { rpm } \) 으로 진탕배양하였다. 이때 배양시간에 따른 균체의 성장은1, 3, 5일에 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 UV-VIS spectrophotometer(U-1100, Hitachi, Japan)를 사용하여 \( 600 \mathrm { nm } \) 에서 흡광도(optimal density)를 측정하였다.</p> <p>생육 \( \mathrm { pH } \) 의 영향은 배지중의 \( \mathrm { pH } \) 를 5, 6, 7, 8 및 9로 각각 조정하여 실시하였으며, 배양시간에 따른 균체의 성장은 1, 3, 5일에 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 \( 600 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하였고, 이때 균생육이 양호한 \( \mathrm { pH } 7 \) 과 8 의 배양액을 원심분리 \( (3000 \mathrm { rpm } , 10 \mathrm { min } ) \) 하여 상동액을 취한 후 유화도 측정에 이용하였다.</p> <p>염분 (NaCl)농도의 영향은 C-배지의 염분농도를 \( 2 \%, 3 \% \), \( 4 \% \) 및 \( 5 \% \) 로 각각 조정하여 실시하였으며, 배양시간에 따른 균체의 성장은 처음 3일간은 12시간 단의로, 그 이후로는 1일 단위로 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 \( 600 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p>