내담즙산성 시험은 IDCC 9203 배양액을 MRS 액체배지에 \( 10 \% \) 접종하고 bile(oxgall, Sigma-Aldrich, USA) \( 0.3 \% \) 가 첨가된 대조군과 비교하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 시간 배양한 후 생존율을 계산하여 동정하고 항생제 감수성을 disc diffusion method를 사용하여 확인하였다.IDCC 9203의 동정 위해 염기서열 분석을 토대로 계통유전학적인 시럼을 했다. 항생제 감수성의 확인을 위해 disc diffusion method를 이용했다. 균력 시험은 IDCC 9203, L. acidophilus, L. fermentum, L. reuteri, L. rhamnosus를 시험균으로 했다.
<p>내담즙산성 시험은 bile(oxgall, Sigma-Aldrich, USA) \( 0.3 \% \) 가 첨가된 MRS 액체배지에 IDCC 9203 배양액을 \( 10 \% \)접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 시간 배양한 후, bile을 첨가하지 않은 대조군의 생균수와 비교하여 생존율을 계산하였다.</p> <h2>균주의 동정</h2> <p>IDCC 9203의 동정을 위해 \( 16 \mathrm { ~S } \) ribosomal DNA 염기서열 분석을 기초로 한 계통유전학적 시험을 실시하였다. 이를 위해, Escherichia coli의 16S rDNA 서열을 바탕으로 primer(Forward primer 5'-GGGGGATCCAGAGTTTGA-TCCTGGCTCA-3', Reverse primer 5'-GGGCTCGAGTAC-CTTGTTACGACTTCACC-3')를 제작한 후 IDCC 9203 genomic DNA를 추출하고 PCR로 \( 16 \mathrm { ~S } \mathrm { rDNA } \) 를 증폭하여 염기서열을 결정하였다. 이 서열을 기반으로 NCBI의 BLAST program으로 유사성이 높은 Lactobacillus 균주들의 서열들을 선별하고 Clustal X (Des Higgins, Germany)로 다중 정렬을 실시한 후 계통유전수를 작성하고 Saito 등의 neighbor-joining 방법으로 그 위치를 확인하였다[18]. 또한, BLAST 2 program을 이용한 쌍정렬을 실시함으로써 동일종에 속하는 서열들과의 상동성을 비교하였다.</p> <h2>항생제 감수성</h2> <p>항생제 감수성을 확인하기 위하여 disc diffusion method를 사용하였다[6]. 항생제 감수성 판독용 평판배지는 MRS agar(agar \(1.5 \% \))를 직경 \( 90 \mathrm { ~mm } \) petri dish에 \( 15 \mathrm { ~mL } \) 분주하여 bottom agar를 만들고, MRS agar(agar \(0.7 \% \)) \( 20 \mathrm { ~mL } \)에 IDCC 9203의 배양액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 혼합한 top agar \( 4 \mathrm { ~mL } \)를 bottom agar 위에 분주하여 제조하였다. 항생제가 포함된 19종의 Sensi-Disc \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) (Becton, Dickinson and Company, USA)를 평판배지 위에 올려 놓고 anaerobic jar(BBL, Becton, Dickinson and Company, USA)에 담아 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양기에서 24 시간 배양하였다. 배양이 종료되면 항생제 디스크 주변에 형성된 투명대의 직경을 측정하여 감수성을 판단하였다.</p> <h2>S. typhimurium에 대한 항균력 측정</h2> <p>항균력 시험은 시험균으로 IDCC 9203, L. acidophilus, L. fermentum, L. reuteri, L. rhamnosus를 사용하였고, 지시균으로 S. typhimurium KCTC 2054를 사용하였다. 시험균을 MRS 액체배지에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 18 \) 시간 배양한 후 원심분리하여 상층액을 수거하였고, \( 10 \% \) HCl과 \( 10 \% \) NaOH 용액을 사용하여 pH 4.0과 pH 7.0으로 각각 조정한 상층액을 항균력 시험용 시료액으로 하였다. 대조군으로는 시험균을 배양 하지 않은 MRS 액체배지를 lactic acid를 이용하여 pH 4.0으로 조정한 시료와 \( 10 \% \) NaOH 용액을 사용하여 pH 7.0으로 조정한 시료를 조제하였다. 준비된 각각의 시료 \( 1 \mathrm { ~mL } \)와 \( \mathrm { BHI } \) 액체배지 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 로 조성된 배지에 S. typhimurium KCTC 2054 배양액을 \( 10 \% \)(v/v } 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 8 시간 배양한 후 S. typhimurium KCTC 2054 생균수를 측정하였다.</p>