광노화에서 주요한 활성산소인 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \)을 발생시키는 rose bengal을 농도별로 처리하여 HaCaT 세포의 생존율을 측정하였다. Rose bengal의 농도가 증가할수록 세포 생존율이 감소하였으며, 이를 바탕으로 세포 보호 효과를 측정하기 위해 50%의 세포 생존율을 나타내는 4μM의 rose bengal 농도를 설정하였다. 이 과정을 통해 황칠나무 잎 추출물이 비독성 농도에서 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 유도 라디칼 연쇄 반응을 차단하며 세포 손상에 대해 우수한 보호 효과를 발휘함을 확인하였다.
<p>\( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 으로 유도된 HaCaT 세포의 손상에 대한 세포보호 효과 Rose bengal 농도별 처리에 따른 HaCaT 세포의 생존율: \( \mathrm { HaCaT } \) 세포를 대상으로, 광노화에 있어서 주요한 활성산소인 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 을 발생시키는 rose bengalo을 농도별 \( (1,2,3,4 \), \( 5 \mu \mathrm { M } \) )로 처리하고 세포 생존율을 측정하였다. \( 1 \mu \mathrm { M } \) 의 rose bengal을 처리한 경우는 rose bengal를 처리하지 않은 경우에 비해 \( 89 \% \) 정도의 세포 생존율을 나타내었다. \( 2 \mu \mathrm { M } \) 인 경우 세포 생존율은 \( 75 \% \) 를 나타내었고, \( 3 \mu \mathrm { M } \) 은 \( 59 \%, 4 \mu \mathrm { M } \) 은 \( 50 \%, 5 \mu \mathrm { M } \) 은 \( 37 \% \) 의 생존율을 나타내었다(Fig. 5A). 본 연구에서는 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 으로 유도된 세포 손상으로부터 세포 보호 효과를 측정하기 위하여 rose bengal의 농도를 \( 50 \% \) 의 세포 생존율을 나타낸 \( 4 \mu \mathrm { M } \) 로 설정하였다.</p> <p>\( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 으로 유도된 세포 손상에 대한 황칠나무 잎 추출물의 보호 작용: \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 황칠나무 잎 추출물을 농도별로 처리한 후에 \( 4 \mu \mathrm { M } \) 의 rose bengal을 함유한 배지를 넣고 \( 15 \mathrm { ~min } \) 동안 광조사한 후 세포를 \( \mathrm { PBS } \) 로 세척하였다. \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 세포를 배양하고 세포의 생존율을 MTT assay로 측정 하였다. \( 4 \mu \mathrm { M } \) rose bengal을 첨가한 경우는 rose bengal을 처리하지 않은 대조군 대비 세포 생존율 \( 41 \% \) 를 나타내었다. Rose bengal을 처리하기 전에 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 \( 6.25,12.5,25 \) 및 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획을 처리한 경우 세포 생존율은 각각 \( 54,63,72 \) 및 \( 91 \% \) 를 나타내었으며, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 경우, 무처리군인 control과 비슷한 세포생존율을 나타내었다. 아글리콘 분획의 경우, 동일한 농도에서 \( 75,80,84 \) 및 \( 54 \% \) 의 세포 생존율을 보였다. 이는 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 황칠나무 잎 추출물의 아글리콘 분획 자체의 세포에 대한 독성을 반영한 결과로 보여진다(Fig. 2). 따라서 황칠나무 잎 추출물이 세포독성을 갖지 않는 농도에서 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \)으로 유도된 라디칼 연쇄반응의 개시 단계를 차단시키고, 세포 손상에 대하여 우수한 세포 보호 효과를 나타냄을 알 수 있었다(Fig. 5B).</p>