소포자 및 약의 전처리는 고온처리하여 \( 32 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3일간 진행했다. 소포자 전처리는 나출한 소포자의 밀도를 조정하고, 약전처리는 멸균한 약을 배양접시에 치상하였다. 소포자 나출 시 sucrose 농도의 영향을 조사한 실험에서는 \( 10 \% \) 또는 \( 13 \% \) sucrose가 첨가된 NLNS 배지를 사용하였고, 소포자배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 당-기아배지 A와 \( 0.37 \mathrm { M } \) mannitol 용액에 NLNS 배양배지가 각각 0,5,10,20, 및 \( 40 \% \) 첨가된 배지를 사용하였다.
<p>단 소포자의 나출 시 sucrose 농도의 영향을 조사한 실험에서는 \( 10 \% \) 또는 \( 13 \% \) sucrose가 첨가된 NLNS 배지 (Kim et al. 2008)를 사용하였다.</p> <h2>전처리</h2> <p>소포자나 약을 \( 32 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3 일간 고온처리 하였다. 전처리 배지 내 sucrose 농도와 배양 용기의 영향을 조사하기 위한 실험에서는 소포자 전처리를 하였으며 이외의 실험에서는 약전처리를 하였다. 소포자 전처리는 나출한 소포자의 밀도가 \( 1 \mathrm { mL } \)에 \( 19-21 \times 10 ^ { 4 } \)이 되도록 조정하여 \( 9.0 \times 2.0 \mathrm { ~cm } \) 배양접시에 \( 8 \mathrm { mL } \) 씩 분주하였고, 약전처리는 30개의 꽃봉오리로부터 꺼낸 150-180개의 약을 멸균하여 액체 상태의 전처리 배지 \( 3 \mathrm { mL } \)이 들어있는 \( 6.0 \times 1.5 \mathrm { ~cm } \) 배양접시에 50-60개 씩 치상하였다. 전처리 시 배지는 Wang et al. (1999)이 보리의 약 전처리 시 사용하였던 것과 동일한 조성의 것, 즉 \( 0.37 \mathrm { M } \) mannitol, \( 10 \mathrm { mM } ~\mathrm { CaCl } , 1 \mathrm { mM }~ \mathrm { MgSO } { } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , 1 \mathrm { mM ~} \mathrm { KNO } _ { 3 } , 200 \mathrm { M } ~\mathrm { KH } _ { 2 } \mathrm { PO } , 1 \mathrm { M } ~\mathrm { KI } \), 그리고 \( 100 \mathrm { nM }~ \mathrm { CuSO } { } _ { 4 } \cdot 5 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) 가 포함된 것을 \( \mathrm { pH } 5.8\)로 조정하여 사용하였다 (당-기아배지 A라 칭함).<p>단 전처리 배지 내 sucrose 농도가 소포자배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 \( 10 \% \) 와 \( 17 \% \) sucrose가 첨가된 NLNS 배지를 사용하였으며, 전처리 배지 내 배양배지의 첨가가 소포자배의 발생에 미치는 영향을 조사한 실험에서는 당-기아배지 A와 \( 0.37 \mathrm { M } \) mannitol 용액에 NLNS 배양배지가 각각 \(0,5,10,20,\) 및 \( 40 \% \) 첨가된 배지를 사용하였다.</p>