본 연구는 제2형 당뇨병 환자 200명과 대조군 100명을 대상으로 하였으며, 이들에게 시행된 모든 검사들은 경북대학교병원 유전자검사기관 생명윤리심의위원(IRB)의 승인을 받았다. 설문지를 통해 병력, 과거력, 음주력, 흡연력 등을 조사하였고, 자동신장체중계를 이용하여 신장과 체중을 측정하였고 10시간 이상 금식한 공복 상태에서 혈액 검사를 통해 공복 혈장 포도당, 당화혈색소, 중성지방, 총 콜레스테롤, 고밀도 콜레스테롤, 저밀도 콜레스테롤을 측정하였다.
<h2>재료 및 방법</h2> <h3>대상</h3> <p>본 연구는 제2형 당뇨병 환자군 200명, 대조군 100명을 대상으로 하였고, 성비는 전체적으로 남자 144명, 여자 156명이었다. 평균 연령은 제 2 형 당뇨병 환자군 \( 64.3 \)세, 대조군 \( 63.2 \)세였다. 제2형 당뇨병 환자군은 경북대학교 병원과 계명대학교 동산의료원 내분비내과를 내원하였던 환자 200명으로 제2형 당뇨병의 과거 병력이 있거나 내원 후 제2형 당뇨병 진단을 받은 환자를 대상 환자군으로 정하였으며 남자 108명, 여자 92명이었다. 대조군은 60세 이상, 공복혈당 \( 110 \mathrm { mg } / \mathrm { dl } \)이하, 당화혈색소 \( 5.8 \% \)이하인 100명으로 고혈압, 갑상선, 고지혈증, 심근경색, 뇌졸중, 골다공증, 협심증, 간질환, 천식, 걸핵, 관절염, 우울증, 파킨슨병, 전립선 비대증, 암 등의 질병이 없는 사람으로 정하였으며, 남자 36명, 여자 64명이었다. 대상자에게 시행된 모든 검사들은 경북대학교병원 유전자검사기관 생명윤리심의위원 (Institutional Review Board, IRB)의 승인을 받았으며, 이들로부터 자발적으로 문서화된 동의서를 받았다.</p> <h3>설문조사 및 신체계측</h3> <p>한국인 만성병 역학조사 및 유전체 연구사업의 설문지를 참고하여 자기 기입식 방법으로 현제의 병력, 과거력, 음주력, 흡연력, 사회 인구학적 특성 등이 설문지 형식으로 작성되었다. 대상자는 검사 전날 밤부터 최소한 10시간 이상 금식한 공복 상태에서 가벼운 의복을 착용하게 하였고, 자동신장체중계를 이용하여 신장과 체중을 동시에 측정하였다. 체질량지수(body mass index, BMI \( = \mathrm { kg } / \mathrm { m } ^ { 2 } \) )는 측정한 기본 신체 계측기로부터 산출하였다.</p> <h3>혈액검사</h3> <p>혈액 검사는 전날 밤부터 최소한 10시간 이상 금식한 공복상태에서 채혈한 후, 공복 혈장 포도당, 당화혈색소, 중성지방, 총 콜레스테롤, 고밀도 콜레스테롤, 저밀도 콜레스테롤을 측정하였다. 공복혈당은 Modular Analytics SWA (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany)를 이용하여 측정하였고, 당화혈색소, 중성지방, 총 콜레스테를, 고밀도 콜레스테롤, 저밀도 콜레스테롤은 Histachi Modular D2400 기계(Roche, Tokyo, Japan)를 이용하여 측정하였다.</p> <h3>채혈 및 DNA 분리</h3> <p>채혈된 혈액의 일부는 EDTA 처리된 시험관에 넣어 냉장보관하였다가 실험실로 운반하여 DNA를 분리하였다. DNA분리는 Genomic DNA isolation kit (Gentra, Maryland, USA)을 이용하였다. \( 6 \mathrm { ml } \)의 적혈구분해액을 혈액 \( 2 \mathrm { ml } \)에 넣은 후 5분간 흔들어 섞어주었고, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 3,500 \mathrm { rpm } \)의 속도로 5분간 원심분리한 후, 상등액과 분리하였다. Vortex mixer로 잘 풀어준 후 세포분해액 \( 2 \mathrm { ml } \)를 넣고 다시 vortex mixer로 10초간 잘 섞어준 후 10분 이상 실온에서 방치하였다. 단백질침전용액 \( 0.7 \mathrm { ml } \)를 넣고 충분히 vortex한 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 3,500 \mathrm { rpm } \)으로 10분간 원심분리하여 단백질을 포함한 모든 불순물을 가라앉혔다. 상등액을 조심스럽게 \( 100 \% \) 이소프로필알콜 \( 2 \mathrm { ml } \)에 옮겨 DNA가 보일 때까지 섞었다. \( 2,500 \mathrm { rpm } \) 으로 5분 동안 원심분리한 후 상등액은 버리고, \( 70 \% \)에탄올로 탈수시켰다. DNA수용액 \( 150 \mu 11 \)를 넣어 \( 2 \sim 3 \)시간 정도 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 방치한 후 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관한 후 사용하였다.</p>