2004년 1월부터 11월까지 부산의 여러 병원(부산의료원, 동래백병원, 광혜병원, 수영한서병원, 숭성도병원, 춘해병원)을 방문한 환자 704명의 대변 검체에서 총 64종의 황색포도상구균을 분리하였다. 분리된 Staphylococcus aureus 균주를 SET-RPLA(reversed passive latex agglutination kit, Denka Seiken, Japan)를 이용하여 장독소 동정 시험을 하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양한 후 억제고리의 크기를 측정하고 제조사의 억제고리 분석표를 기준으로 각 균주의 항생제에 대한 내성(resis-tant, R) 및 감수성(susceptible, S)을 판정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주</h2> <p>2004년 1월부터 11월까지 부산광역시내 병원(부산의료원, 동래백병원, 광혜병원, 수영한서병원, 성분도병원, 춘해병원)에 내원한 환자의 설사 분변 704명의 검체에서 분리한 황색포도상구균 64주를 사용하였다.</p> <h2>균의 분리 및 동정</h2> <p>분변 검체에서 황색포도상구균의 분리는 \( 5 \% \) egg yolk tellurite 용액(Oxoid)을 함유한 Baird Parker agar (Oxoid) 평판에 분변을 멸균 면봉으로 도말하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양하였다. 배양 후 집락 주위에 투명대가 형성된 검정색 집락을 선별하여 \( 5 \% \) egg yolk tellurite 용액을 함유한 Baird Parker agar 평판에 다시 도말하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양하였다(단일집락 분리, 2회 실시). 배양 후 그람염색을 실시하여 현미경으로 그람 양성 포도상구균을 관찰하였으며, Bacti-dent Coagulase EDTA-Kaninchenplasma (Merck)를 사용한 coagulase 시험관 시험을 실시하여 coagulase 양성인 균을 APISTAPH (bioMerix)로 최종 동정하였다. 황색포도상구균으로 확인된 균주를 장독소 확인 및 항생제 감수성 시험에 사용하였다.</p> <h2>장독소 확인시험</h2> <p>분리된 황색포도상구균에 대한 장독소 확인시험은 SET-RPLA (reversed passive latex agglutination kit, Denka Seiken, Japan)를 사용하였다. 분리된 균을 brain heart infusion broth(Difco)에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 18 \sim 20\)시간 진탕배양한 후 배양액을 \( 3000 \mathrm{~rpm} \), 20분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 10배씩 단계 희석하여 시험에 사용하였다. 검액을 \(25 ~\mu \mathrm{l}\)씩 microplate 5계열에 넣고, 각 계열에 감작 latex A, B, C, D 및 대조 latex \(25 ~\mu \mathrm{l}\)씩을 첨가하고 10분간 교반하여 실온에서 \( 18 \sim 20\)시간 정치한 후, 응집 형태를 육안으로 관찰하여 독소형을 확인하였다.</p> <h2>항생제 감수성 시험</h2> <p>분리된 황색포도상구균의 항생제에 대한 감수성 시험은 national committee for clinical laboratory standard (NCCLS)의 방법에 따라 디스크 확산법(disk diffusion)으로 실시하였다. 설사 분변에서 분리한 황색포도상구균을 tryptic soy agar (Difco) 평판에 도말하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 18 \sim 24\)시간 배양한 다음, 잘 분리된 집락 \( 4 \sim 5 \)개를 멸균 증류수에 현탁하여 MacFarland No. 0.5가 되도록 탁도를 맞춘 다음, Muller Hin-ton agar (Difco) 평판에 멸균면봉으로 균액을 묻혀서 배지표면에 골고루 바른 다음 실온에 5분간 방치한 후 과잉의 습기를 제거하고 항생제 disc를 올려놓는다. 평판을 뒤집어서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양 후 억제환의 크기를 측정하여, 제조사의 억제환 해석표에 따라 각 균주의 항생제에 대한 내성(resis-tant, R) 및 감수성(susceptible, S)을 판정하였다.</p> <p>사용한 항생제 디스크의 종류는 ampicillin, gentamycin, ce-fepime, cefotetan, ciprofloxacin, chloramphenicol, clindamycin, erythromycin, oxacillin, penicillin, trimethoprim/ sulfame-thoxazole, imipenem, tetracycline, rifampin, vancomycin이며 모두 BBL sensi disk (Becton-Dickinson)를 사용하였다.</p>