UV-visible spectrophotometer을 위해 Cary 50 모델을 사용하고 여러가지 시약을 사용하여 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 정량 분석하고 Microfluidizer Processor M110EH-30을 이용하여 에멀젼의 나노화를 진행하였으며, 나노에멀젼의 입자 크기 및 입도 분포를 조사하고 나노에멀젼의 포집 효율을 측정하기 위해 \( 0.1\ (\mathrm{w} / \mathrm{w}) \% \) 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 에틸아세테이트 분획을 함유한 나노에멀젼을 제조하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>기기 및 시약</h2><p>피부 투과 실험에 \( 9 \mathrm{~mm} \) Franz diffusion cell (receptorvolume \( 5 \mathrm{ml} \))과 V6A Stirrer 모델(Permegear Inc., USA)을 사용하였다. 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 정량 분석에 사용한 UV-visible spectrophotometer (Varian, Australia)는 Cary 50 모델을 사용하였고 에멀젼의 나노화를 위한 micofluidizer는 microfluidizer (Microfluidics, USA)는 Microfluidizer Processor M110EH-30을 사용하였다.</p><p>나노에멀젼은 스테아르산(stearic acid, SA, USA), 세틸알코올(cetyl alcohol, CA, USA), 미네랄 오일(mineral oil, MO, USA), 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드(caprylic/ capric triglyceride, CCT)를 사용하여 제조하였고 (Sigma, USA), polyoxyethylene hydrogenated castor oil (HCO-60) 또한 구입하여 사용하였다(Nikkol, Japan). 실험에서 사용된 물은 Millipore Q (Millipore Co., USA)를 이용한 3차 증류수(DW)를 사용하였다. 에탄올 \( (\mathrm{EtOH}) \), 헥산, 에틸아세테이트\( (\mathrm{EtOAc}) \)등 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 본 실험에 사용한 담쟁이덩굴은 2011년 10월 경 강원도 홍천군 서석면 생곡리에서 채취하여 양건 후 세절하여 사용하였다.</p><h2>담쟁이덩굴 줄기의 분획 및 추출</h2><p>건조된 담쟁이덩굴 줄기 \( 100 \mathrm{~g} \)을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm{~L} \)를 이용하여 일주일 동안 침적시킨 후 여과하였다. 이 여액을 감압 건조하여 파우더를 얻고 이를 실험에 사용하였다. 또한 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 농축한 후 물과 헥산을 이용하여 비극성 성분을 제거하고 이후 에틸아세테이트 분획을 감압농축하여 파우더를 얻었다.</p><h2>담쟁이덩굴 줄기 추출물을 함유한 나노에멀젼 제조</h2><p>\( 0.1\ (\mathrm{w} / \mathrm{w}) \% \) 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 에틸아세테이트 분획을 함유한 나노에멀젼은 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 오일상, 에탄올상 그리고 수상의 구성 성분과 조성을 Table 1에 나타내었다. 오일상은 stearic acid, cetyl alcohol, caprylic capric triglyceride, mineral oil, polyoxyethylene hydrogenated castor oil (HCO-60)로 구성되며 이들을 비이커에 넣은 후 \( 75^{\circ} \mathrm{C} \)에서 균일하게 용해시킨다. 에탄올상인 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 에틸아세테이트 분획과 에탄올은 비이커에 넣고 완전히 용해시킨다. 에탄올 상을 \( 75^{\circ} \mathrm{C} \)로 유지한 후 이를 오일상에 넣고 빠르게 섞어서 분산상을 제조 한다. 분산상을 연속상인 증류수 에 넣고 균질기(X1030D, Germany)을 이용하여 \( 3000\ \mathrm{rpm} \)으로 3 min 동안 교반하였다. 제조한 O/W 에멀젼을 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)까지 냉각한 후 고압유화 장치인 microfluidizer를 이용하여 나노화하였다. Microfluidizer의 reservoir에 에멀젼 \( 250\ \mathrm{ml} \)을 넣은 후 \( 700\ \mathrm{bar} \)의 압력 조건과 5 cycle의 순환 조건으로 \( 0.1 \% \) 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 에틸아세테이트 분획 함유 나노에멀젼을 제조하였다. 제조된 나노에멀젼은 \( 23 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하였다.</p><h2>담쟁이덩굴 줄기 추출물을 함유한 나노에멀젼의 물리적 성질</h2><h3>나노에멀젼의 입자 크기 및 입도 분포:</h3><p>나노에멀젼의 입자 크기 및 입도 분포는 빛의 산란을 이용하여 입자 크기를 분석하는 Otsuka ELS-Z series (Otsuka Eletronics, Japan)를 이용하여 측정하였다. 시료는 전처리 과정 없이 에멀젼 원상태로 측정하였다. 측정 산란각은 \( 165^{\circ} \)이며 Ar 레이져를 광원으로 사용하였다. 평균 입자 및 입도 분포는 70번씩 2회 측정한 후 누적분석법과 Contin법으로 해석하여 나타내었다.</p><h3>나노에멀젼의 포집효율 측정:</h3><p>\( 0.1 \% \) 담쟁이덩굴 줄기 추출물의 에틸아세테이트 분획을 함유한 나노에멀젼의 포집 효율은 다음과 같이 평가하였다. 에탄올에 용해한 담쟁이덩굴 줄기 추출물은 \( 280 \mathrm{~nm} \)에서 최대 흡수를 나타낸다. 담쟁이덩굴 줄기 추출물 함유 나노에멀젼 \( 1 \mathrm{~g} \)을 취하여 에탄올로 추출하여 여과하고 그 여액의 흡광도를 \( 280 \mathrm{~nm} \)에서 UVvisible spectrophotometer로 측정한 후 동일 농도의 담쟁이 덩굴 줄기 추출물을 녹인 에탄올 용액과 비교하였다.</p>