EG가 소포체 스트레스에 미치는 영향을 연구하고, 그에 따라 소포체 샤페론의 발현과 관련된 인자들을 알아보았다. 단순히 6주령 female Sprague Dawley rats를 대조군과 부동액을 경구투여한 군으로 나누어 10ml/kg의 EG를 경구투여하여 소포체 스트레스에 미치는 영향을 연구하였다.
<p>그러나 아직 EG에 의한 소포체스트레스에 관련된 인자와 소포체 샤페론의 발현에 관한 연관성에 대한 연구는 미미한 상태로, 본 연구자는 EG 급성 중독에 의해 소포체 스트레스에 밀접하게 관련되어 급성 신세뇨관 괴사 및 급성신부전 등의 원인이 될 것으로 판단하고 소포체스트레스 관련 인자의 발현을 연구하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물</h2> <p>실험동물은 6주령 female Sprague Dawley rats (다물 sci-ence, Daejion, Korea)를 사용하였다. 각각 5마리씩 대조군과 부동액을 경구투여한 군으로 나누어 실험하였다. EG의 rat 경구반수치사량은 문헌에 따라 다소 차이가 있으나 \( 5.5-13 \mathrm { ml } / \mathrm { kg } \)으로 알려져 있으며 본 연구에서 \( 10 \mathrm { ml } / \mathrm { kg } \)으로 사용하였다.</p> <h2>조직면역염색</h2> <p>부동액(불스원 부동액, KSM 2141 제12-133호)을 경구투여 \( (8 \mathrm { ml } / \mathrm { kg } ) \)하여 급성중독을 유도하고 6시간 후에 ether를 이용한 흡인마취 하였다. 헤파린을 함유한 생리식염수를 실온에서 혈액이 모두 빠져나갈 만큼 심장을 통해 관류한 후 \( 4 \% \) par-aformaldehyde를 포함한 0.1 M PB (400-600 ml/kg, pH7.4)를 관류하였다. 조직을 절취하여 \( 4 \% \) paraformaldehyde 용액에 24 시간 동안 후고정 한 후 흐르는 물에 3시간 동안 수세과정을 거친 다음 탈수과정과 파라핀 침투과정을 통해 파라핀으로 포매한 후 \( 4 \mu \mathrm { m } \)로 절편하여 슬라이드 위에 붙였다. 절편된 조직을 탈파라핀 과정을 거쳐 hematoxylin 용액에서 1분, eo- \( \sin \) 용액에서 10 초 정도 염색한 후 탈수과정을 거쳐 봉입한 후 광학현미경으로 관찰하였다. Antibody의 이중 염색을 위하여 탈파라핀 된 조직을 antigen retrival을 수행한 후, \( 5 \% \) normal serum이 포함된 PBS로 실온에서 1시간 동안 blocking하여 첫 번째 염색의 1차 antibody를 하룻밤 동안 냉장고에서 반응시켰다. PBS로 3번 세척한 후 biotinylated anti-rabbit (or goat) IgG를 2시간 동안 실온에서 반응 시켜 다시 PBS로 3 번 세척하여 Cy3-streptavidin을 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 두 번째 염색을 위해 \( 5 \% \) normal serum이 포함된 PBS로 실온에서 1시간 동안 blocking하여 두번째 1차 antibody를 하룻밤 동안 냉장고에서 반응시켰다. PBS로 3번 세척한 후 Cy2-mouse (or rabbit) IgG를 2시간 동안 실온에서 반응시키고, 핵 염색을 위한 Hoechst를 10 분간 반응시켜 최종적으로 PBS로 세척한 후 봉입하여 형광현미경으로 관찰하였다.</p>