추출과정은 먼저 건조분말 초과\( 5 \mathrm{~kg} \)에 \( 80 \% \) 에탄올 \( (2 \times 30 \mathrm{~L}) \)를 가하여 냉침 추출하고 여과 및 감압농축 하여 \( \mathrm{EtOH} \) 추출물 \( 219 \mathrm{~g} \)을 확보하였다. 이후 역상 ODS-A을 이용한 VLC 로 소분획하고 silica gel을 이용한 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 분리하였으며 컬럼크로마토그래피로 분리정제하였다.
<h2>추출 및 분리</h2> <p>건조분말 초과(草果) \( 5 \mathrm{~kg} \)에 \( 80 \% \) 에탄올 \( (2 \times 30 \mathrm{~L}) \)를 가하여 \(24\)시간동안 냉침 추출하였다. 그 후 추출물을 여과하여 농축기 (Rotavapor R-250, Büchi Labortechnik \( \mathrm{GmbH} \), Flawil, Switzerland)로 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압농축 하여 \( \mathrm{EtOH} \) 추출물 \( 219 \mathrm{~g} \)을 확보하였다. 농축된 시료에 대하여 증류수 \( 500 \mathrm{~mL} \)을 가하여 현탁시키고 상법에 따라 동량의 methylene chloride \( \left(\mathrm{CH}_{2} \mathrm{Cl}_{2}\right) \), ethyl acetate (EtOAc) 및 \( n \)-BuOH 순으로 용매 분획한 후 농축시켜 \( \mathrm{CH}_{2} \mathrm{Cl}_{2} \) 가용성 분획 \( 66 \mathrm{~g}, \mathrm{EtOAc} \) 가용성 분획 \( 18 \mathrm{~g} \), 및 \( \mathrm{n}-\mathrm{BuOH} \) 가용성 분획 \( 50 \mathrm{~g} \)을 얻었다. \( \mathrm{CH}_{2} \mathrm{Cl}_{2} \) 가용물을 다시 \( n \)-hexane에 현탁시키고 \( 50 \%(32 \mathrm{~g}), 70 \%(8 \mathrm{~g}), 90 \% \mathrm{MeOH}(12 \mathrm{~g}) \), 및 \( n \)-hexane \( (10 \mathrm{~g}) \) 순으로 각각 분획하였다. 항알러지 효과가 있는 \( 70 \% \mathrm{MeOH} \) 가용물에 대하여 \( \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH} \) 혼합용매를 이동상 \( (1: 0 \rightarrow 1: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v}, 2 \mathrm{~L}) \)으로 하여 silica gel (\(70-230\) Mesh, Merck, Germany)을 이용한 컬럼 크로마토그래피 \( (\varnothing 8 \times 30 \mathrm{~cm}) \)를 수행하여 \(7\)개의 소분획(\(G47-70M-1-7\))으로 나누었다.\(G47-70M-4\) 소분획물 \( (1.1 \mathrm{~g}) \)에 대하여 \( \mathrm{MeOH} \)와 증류수 혼합용매를 이동상 \( (20: 80 \rightarrow 100: 0, \mathrm{v} / \mathrm{v}, 500 \mathrm{~mL}) \)으로 하여 역상 ODS-A (\(12\mathrm{nm} S- 75 \mu \mathrm{m} \), YMC GEL)을 이용한 VLC (vacuum liquid chromatography, \( ø 16 \times 6 \mathrm{~cm}) \)를 수행하여 \(6\)개의 소분획(\(G47-70M-4-1-6\))을 얻었다. G47-70M-4-4 (150 mg)에 대하여 \( \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH} \) 혼합용매를 이동상 \( (20: 1 \rightarrow 6: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v}, 200 \mathrm{~mL}) \)으로 하여 silica gel (\(230-400\) Mesh, Merck, Germany)을 이용한 컬럼 크로마토그래피(ø1.5× \( 25 \mathrm{~cm}) \)를 수행하여 화합물 \( \mathbf{1}(3.2 \mathrm{mg}) \)을 분리하였다. 소분획 \( \mathrm{G} 47-70 \mathrm{M}-4-3(600 \mathrm{mg}) \)에 대하여 \( \mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}(1: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v}, 2 \mathrm{~L}) \)혼합용매를 이동상으로 하여 Sephadex \( { }^{\mathrm{TM}} \mathrm{LH}-20 \)을 이용한 컬럼크로마토그래피 \( (\varnothing 4 \times 150 \mathrm{~cm}) \)를 수행하여 화합물 \( 2(5.7 \mathrm{mg}) \)와 \(3(7.3 \mathrm{mg}) \)을 각각 분리 정제하였다.</p>