Caspase와 직간접적으로 상호작용하여 그들의 활성을 억제함으로써 알려진 apoptosis 억제 효과를 가지고 있습니다. 이 연구에서는 FS 및 FYA에 의해 유발된 apoptosis에 대한 영향을 확인하기 위해 IAP 패밀리 유전자들의 \( \mathrm{mRNA} \) 및 단백질 수준을 조사하였습니다. apoptosis에서 직접적인 역할을 하는 caspase로 알려져 있으며 caspase-3의 활성화는 poly (ADP-ribose) polymerase (PARP)와 같은 특정 단백질의 단편화에 직접적으로 투여되며 따라서 FS 및 FYA의 처리에 따른 caspase 활성 변화를 조사한 결과, Fig. 7에 표시된 대로 PS 및 FYA 처리 농도에 따라 caspase-3, -8 및 -9의 감소함을 확인할 수 있었다.
<h2>Bcl-2 family의 발현에 미치는 FS 및 FYA의 영향</h2> <p>FS 및 FYA 처리에 의한 apoptosis 유발하는 과정에 어떠한 유전자들이 관여하는지 확인하기 위해, 먼저 FS 및 FYA를 처리하였을 때 Bcl-2 family의 발현 변화를 RT-PCR과 Western blotting을 통하여 알아보았다. FS의 경우 처리 농도가 증가하여도 apoptosis 억제인자인 Bcl-2와 유발인자인 Bax 모두 \( \mathrm{mRNA} \) 및 단백질 발현 상에서 큰 변화가 없었다. 그러나 FYA는 번역 수준에서는 큰 변화가 없었지만, 전사 수준에서 농도가 증가함에 따라 Bcl-2의 발현양이 감소하고, Bax의 발현양이 증가하였다. 이는 앞 선 결과에서 AGS 세포에서 유발되는 poptosis에 대한 영향이 FS보다는 FYA의 효과가 더 뛰어나다는 사실과 어느 정도 연관성이 있는 것이며, FYA에 의해 유발된 apoptosis는 mitochondrial pathway와 연관이 있을 것임을 암시하여 주는 것이다.</p> <h2>IAP family의 발현에 미치는 FS 및 FYA의 영향</h2> <p>Caspase와 직.간접적으로 결합하여 그들의 활성을 차단함으로서 apoptosis를 억제하는 것으로 알려진 inhibitor of apoptosis protein (IAP) family 인자들이 FS 및 FYA에 의해 유발된 apoptosis에 미치는 영향을 확인하기 위해 \( \mathrm{mRNA} \) 및 단백질 수준에서 조사하였다. 그 결과 FS 및 FYA를 처리하였 을 때 농도가 증가함에 따라 IAP family 인자의 발현 양이 감소하는 것을 전사 및 번역 수준에서 확인할 수 있었다. 이 때, IAP family 인자들의 발현 억제에도 \( \mathrm{FS} \) 보다 FYA에서 더 뛰어남이 확연하게 드러났다. 이를 통해 FS 및 FYA의 처리에 의한 apoptosis 유발과정에 IAP family의 발현 변화도 어느 정도 관여하였음을 앋 수 있었다.</p> <h2>Death receptor family의 발현에 미치는 FS 및 FYA의 영향</h2> <p>다음은 apoptosis의 또 다른 경로인 death receptor (DR) pathway에 관여하는 관련 유전자들의 발현 변화를 조사하였다. 먼저 FS의 처리 양이 중가함에 따라 DR5, Fas, TRAIL의 발현양이 증가하는 것을 확인하였으며, FYA를 처리하여 확인한 RT-PCR 및 Western blotting의 결과에서는 DR5, Fas, FasL의 발현 양도 중가하였음을 알 수 있었다. 이러한 인자들의 발현증가는 앞선 결과들과 유사하게 FS 보다 FYA를 처리하였을 때 더욱더 확연히 증가하였으며, 이는 AGS 세포 FS 및 FYA에 의한 apoptosis에 death receptor pathway에 연관된 인자들도 관여할 것임을 의미하는 결과이다.</p> <h2>Caspases의 발현에 미치는 FS 및 FYA의 영향</h2> <p>Apoptosis 유발에서 가장 핵심적인 역할을 하는 것으로 알려진 caspase는 크게apoptosis를 개시하는데 영향을 미치는 initiator caspase와 직접적으로 apoptosis에 관여하는 effector caspase 두 가지로 나눌 수 있다. Initiator caspase에는 caspase-8, -9, -10 및 -12 등이 포함되며, effector caspase에는 caspase-3, -6 및 -7 등이 알려져 있는데, 이 중 caspase-3은 직접적으로 apoptosis 효.과를 가지는 caspase로서, caspase-3의 활성화는 직접적으로 poly (ADP-ribose) polymerase (PARP)와 같은 표적 단백질의 단편화에 관여하는 것으로 알려져 있다. 따라서 apoptosis 유발에 가장 핵심적인 역할을 하는 caspases의 활성에 FS 및 FYA가 미치는 영향을 알아본 결과, Fig. 7에 나타낸 바와 같이 PS 및 FYA를 처리하였을 때 처리 농도 의존적으로 caspase-3,-8 및 -9의 비활성 단백질 발현이 감소하는 것을 확인하였다.</p>