세포를 배양하기 위해서 총 6개의 시약, Gibco BRL, Life Technologies(USA)를 통해서 구입하였는데, 시약은 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), Trypsin-EDTA, penicillin/streptonycin/ampho-tericin, fetal bovine serum(FBS) 을 사용하였다. 시료 제조 과정은, 아사이베리를 세척하고, 자연건조를 하였다. 세척하고 건조된 아사이베리는 분쇄와 주정과 혼합과정을 거친 후, 상온에 2일 추출하는 과정을 총 3회 반복하였고, 얻은 추출액은 감압 농축 후 여액은 동결건조하여 분말 ABEE 를 추출하였다. 세포 배양은 \( 5 \% \) fetal bovine serum, \( 2 \mathrm { mM } \) glutamine과 penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM 배지에서 진행하였으며, 세포는 RAW 264.7과 EA-HY-926 두 세포를 사용하였고, \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \)와 적정 온도와 습도를 유지한 배양기에서 배양하였다. 환원력은 Oyaizu의 방법을 사용하여 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 및 시료의 제조</h2> <p>세포 배양을 위한 Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), Trypsin-EDTA, penicillin/streptonycin/ampho-tericin(각각 \(10,000 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \), \( 100 \mu g / \mathrm { ml } \) 및 2,500 \( \mu g / \mathrm { ml } \) ), fetal bovine serum(FBS) 시약은 Gibco BRL, Life Technologies(USA)로부터 구입하였다. RAW 264.7과 EA-HY-926 cell line은 ATCC (American Type Culture Collection, USA)로부터 구입하였다. MTT reagent, gelatin, agarose와 기타 시약은 Sigma(USA)로부터 구입하였다.</p> <h2>시료의 제조</h2> <p>ABEE를 다음과 같은 방법으로 추출하였다. 먼저, 아사이베리를 흐르는 물에 깨끗이 세척한 다음 자연 건조한다. 세척·건조된 아사이베리를 믹서기로 분쇄한 후에 주정을 \( 1:10 \)의 중량 %비로 혼합하여 상온에서 2일 추출하였으며, 이를 3회 반복한 후에 추출액을 모아 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 감압 농축하고 남아 있는 여액을 동결건조하여 분말 형태의 ABEE를 얻었다. 분말형태의 ABEE를 시험농도로 희석하여 본 연구에 사용하였다.</p> <h2>세포배양</h2> <p>RAW 264.7과 EA-HY-926세포는 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 및 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 95 \% \)이상의 습도를 유지한 배양기에서 \( 5 \% \) fetal bovine serum, \( 2 \mathrm { mM } \) glutamine과 penicillin-streptomycin(각각 \( 10,000 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \), \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \))을 포함하는 DMEM 배지에서 배양하였다.</p> <h2>환원력 assay</h2> <p>Oyaizu의 방법에 따라 측정하였다. 시료 \( 1 \mathrm { ml } \)에 \( \mathrm { pH } \) \( 6.6 \)의 \( 200 \mathrm { mM } \) 인산완충액 및 \( 1 \% \)의 potassium ferricyanide를 각 \( 1 \mathrm { ml } \)씩 차례로 가하여 교반한 후 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 수욕상에서 20분 동안 반응시켰다. 여기에 \( 10 \% \) TCA(trichloroacetic acid)용액을 \( 1 \mathrm { ml } \) 가하여 \( 13,500 \times g \)에서 15분 동안 원심분리하여 상등액 \( 1 \mathrm { ml } \)에 증류수 및 ferrous chloride 각 \( 1 \mathrm { ml } \)을 혼합한 후 \(700 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 환원력은 시료 첨가군과 대조군의 흡광도 비를 %값으로 환산하였다. 양성 대조군으로는 \( 0.001 \% \)의 vitamin C를 사용하였다.</p>