HDL의 Glutathione (GSH) 농도 및 Lipid peroxidation에 대한 효과를 알아본다. 대표적인 물질인 MDA를 이용하여 thiobarbituric acid 반응을 통하여 검출한다. U2OS 세포에 CoCl2를 6시간동안 처리시켜 세포 내의 TBARS의 농도 변화를 조사한 결과 증가하는 것을 확인하였고 GSH 농도는 TBARS의 농도와 상반된 경향을 보였다. U2OS 세포에도 동일한 조건으로 처리하여 GSH의 농도를 조사한 결과 control에 비하여 GSH의 농도가 감소하였다. 이 결과 H2O2를 가수분해 하기 위해 GSH를 산화시켜 GSSG를 생성하기 떄문에 감소된 것으로 사료되며, 가수분해가 되지 못한 것은 펜톤반응에 의해 OH로 전환되어 지질과산화를 유도한 것으로 사려 된다.
<h2>HDL의 Glutathione (GSH) 농도 및 Lipid peroxidation에 대한 효과</h2> <p>불포화지방산이 산소에 노출되면 Lipid peroxidation이 일어난다. Lipid peroxidation은 free radical에 의해 불포화지방산의 methylene \(( \mathrm { -CH2- } ) \)기로부터 수소원자 \(( \mathrm { H~ \cdot } ) \)를 탈취하여 시작된다. 이런 반응을 자극하는 free radical로는 \( \cdot ~ \mathrm { OH } , \mathrm { RO } \) \( \cdot, \mathrm { ROO } ~ \cdot, \mathrm { HO } _ { 2 } \cdot \) 등이 알려져 있으며, \( \mathrm { O } _ { 2 } \)-과 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)는 그 자체로는 반응을 자극할 수 없는 것으로 알려져 있다. 또한 빛 (light) 또는 금속이온이 Lipid peroxidation 반응을 야기할 수 있는 것으로 알려져 있다. 수소탈취에 의해 생긴 alkyl radical \(( \mathrm { R~ \cdot } ) \)은 분자재구성을 통해 디엔(diene, 분자 안에 탄소-탄소 이중결합을 2 개 가진 화합물)형태로 바뀌고 이것이 다시 산소와 결합하여 peroxyl radical을 형성한다. Peroxyl radical은 또한 분자재구성을 통해 여러 형태의 과산화물로 전환된다.Lipid peroxidation의 산물은 그 자체로는 상당히 안정되나 전이금속의 존재 하에서는 분해가 촉진된다. Lipid perox-idation의 분해산물은 다양하며 많은 종류의 carbonyl 화합물을 포함한다. 그 중 대표적인 물질이 MDA로서 thiobarbituric acid (TBA) 반응을 통하여 검출할 수 있다.</p> <p>세포 내 Lipid peroxidation enzyme은 TBA와 반응하는 TBARS의 생성 비율을 이용하여 측정하였다. U2OS 세포에 \( 200 \mu \mathrm { M } \)의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 6시간 동안 처리하여 세포내의 TBARS의 농도 변화를 조사한 결과 control \( (0.09 \pm 0.001 \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } \) pro-tein)에 비해 \( 110.8 \%~(0.20 \pm 0.001 \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } \) protein)의 TBARS 농도가 증가하는 것을 확인하였다(Fig. 4B). \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의한 세포 내의 GSH의 농도는 TBARS의 농도와 상반된 경향을 보였다. U2OS 세포에 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 처리하여 6시간 동안 처리하여 세포내의 GSH의 농도를 조사한 결과 control \( (7.2 \pm 0.01 \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } \) cells)에 비하여 GSH의 농도가 \( 34 \%~(4.8 \pm 0.01 \) \( \mathrm { pmol } / \mu \mathrm { g } \) cells)가 감소하였다(Fig. 4A). 이 결과는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 생성된 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 가수분해하기 위해 GSH를 산화시켜 GSSG를 생성하기 때문에 GSH의 농도가 감소된 것으로 사료되며, 가수분해되지 못한 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)는 펜톤반응(Fenton reaction)에 의해 \( \cdot \mathrm { OH } \)로 전환되어 지질과산화를 유도한 것으로 사료된다.</p>