MX47 균체로부터 genomic DNA를 추출하고 bacterial universal primer 27 F와 1492R를 프라이머로 사용하여, 16S rRNA 단편을 증폭 후 pGEM-T easy vector에 클로닝하여 Applied Biosystems 3730x1 DNA Analyzer로 염기 서열을 분석하였으며, GeneBank의 데이터베이스의 미생물 염기서열 정보를 BLAST N program을 기반으로 비교하여 분리한 균주의 16S rRNA 염기서열을 분석하였다.
<p>LBX 액체 배지에 접종하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양하여 회수된 MX47 균체로부터 genomic DNA를 추출하였다. 이를 template로 하고 bacterial universal primer 27 F와 1492R를 프라이머로 사용하여 16S rRNA 단편을 증폭하였다. 증폭한 DNA 단편은 pGEM-T easy vector (Promega corp., USA)에 클로닝한 후, (주)제노텍에 의뢰하여 Applied Biosystems 3730x1 DNA Analyzer로 염기 서열을 분석하였다. National Center for Biotechnology Information (NCBI)에서 제공하는 Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) N program[1]을 사용하여 GeneBank의 데이터베이스의 미생물 염기서열 정보를 비교하여 분리한 균주의 16S rRNA 염기서열(1,447 bp)의 상동성 검사를 수행하였고, GenBank 에 등록하였다(등록번호: JN578480). 관련 균주의 16S rRNA 염기서열 정보는 EzTaxon server (http://www.eztaxon. org)로부터 수집하였다. 확보된 염기서열들 간의 다중서열정렬(multiple sequence alignment) 검색은 Clustal W 프로그램을 사용하였고, 5'과 3' end의 gap은 BioEdit program으로 보정하였다. 진화적인 거리(evolution dis-tance matrix)는 Kimura's 2-parameter evolution model을 사용하여 계산하였고, 계통수(phylogenetic tree)는 neigh-bour-joining (NJ) analysis로 제작하였다. 계통수의 안정성 검사를 위해 1,000번의 bootstrap resampling을 시행하였다.</p> <p>16S rRNA 유전자 염기서열 상동성 분석 결과 MX47 균주는 genus Bacillus에 속하는 것으로 판단되었으며, Bacillus safensis FO-036 \( { }^{\mathrm{T}} \) 유래의 16S rRNA 유전자 염기서열과 가장 높은 상동성 \( (99.86 \%) \)을 보였다. 이러한 16S rRNA 유전자에 기초한 NJ phylogenetic tree에서, MX47 균주는 B. safensis FO-\(36 \mathrm{~b}^{\mathrm{T}} \), Bacillus pumilus ATCC706 \( 1^{\mathrm{T}} \), Bacillus aerophilus \( 28 \mathrm{~K}^{\mathrm{T}} \), Bacillus stratosphericus \( 41 \mathrm{KF} 2 \mathrm{a}^{\mathrm{T}} \), Bacillus altitudinis \( 41 \mathrm{KF} 2 \mathrm{~b}^{\mathrm{T}} \) 와 함께 clade를 형성하였다.</p> <p>그람 반응 여부를 알아보기 위하여 그람 염색과 KOH 시험을 실시하였다. 그 결과, MX47 균주는 호기성, 그람-양성 박테리아임이 판명되었다. 또한, LBX agar 평판배지에 \( \mathrm{pH} \) \( \left(\mathrm{pH}\right. \) 4-9)와 NaCl 농도\( (0-15 \%) \)를 달리하고, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양한 후 균주 생장에 미치는 이들의 영향을 관찰하였으며, 배양온도 \( \left(4-40^{\circ} \mathrm{C}\right) \)의 영향도 조사하였다. API kit (API Staph, bioMerieux, France)을 이용하여 MX47 균주가 사용하는 탄수화물, 생산하는 효소 및 활성 등을 조사하였으며, 기 타 주요한 형태학적, 생화학적 특성을 Table 1에 정리하였다.</p>