가시오가피의 농도 의존적인 \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Thymidine 편입 증가는 혈관 내피세포의 증식 촉진을 나타낸다. 가시오가피는 세포 증식을 유발하며, 세포 사멸에는 영향을 끼치지 않는다. 이로써 가시오가피가 혈관 내피층의 증식을 촉발하고 혈관 형성을 유발하는 것이 확인되어, 이는 상처 치유 과정에 가시오가피가 중요한 역할을 한다는 것을 의미한다. 또한, 가시오가피가 동종세포 간 THP-1 세포응집 현상을 유발하는 것은 출혈 방지 효과가 있다는 것을 보여준다.
<h1>결 과</h1> <h2>가시오가피 추출액이 혈관 내피세포 성장에 미치는 영향</h2> <p>먼저, 가시오가피가 현관 생리 활성 가운데 하나인 세포 성장에 어떤 영향을 미치는지 실험하였다. BAEC에 가시오가피를 농도별(0 800 \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \) 로 처리한 후, 24 시간까지 \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Thymidine 편입(incorporation)을 통해서 세포 성장을 평가하였다(Fig. 1). Fig. 1에서 보여 주듯이, 가시오가피 추출액 농도 \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서는 \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Thymidine 편입정도가 가시오가피를 처리하지 않은 대조구과 커다란 차이가 없었지만, \( 800 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 로 처리하였을 때 \( 30 \% \) 이상 증가하는 것을 관찰하였다. \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Thymidine 편입은 가시오가피 추출물의 농도가 증가할수록 더욱 커짐을 알 수 있었다. 이와 같이 농도 의존적인 \( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Thymidine 편입증가는 가시오가피가 혈관 내피세포의 증식을 촉진시킴을 의미한다.</p> <h2>가시오가피 추출액이 혈관 내피세포 세포 사멸에 미치는 영향</h2> <p>혈관 내피층의 증식은 세포 성장과 세포 사멸 효과를 동시에 관찰하여 평가할 수 있다. 위에서 이미 가시오가피가혈관 내피세포 성장을 촉진하는 기능을 보유하고 있음을 확인하였기 때문에 본 연구자들은 다음 단계로 가시오가피가 세포 사멸에 어떤 영향을 미치는지 조사하였다. 세포 사멸은 세포의 모양이 둥글고 부유하고 있는 세포 수를 세어서 평가하였다. Fig. 2 에서 보는 바와 같이 가시오가패 추출액 \( (200 \mu \mathrm{g} \) \( / \mathrm{ml} \) 처리 군과 처리하지 않은 대조군을 48 시간까지 배양하면서 세포 사멸 정도를 시간별로 측정한 결과, 두 실험군에서 차이가 나지 않음을 앆 수 있었다. 이는 가시오가패가 세포 증식은 유발하면서 세포 사멸에는 영향을 미치지 않음을 보여 주는 것으로, 종합해 보던, 가시오가펴 주출액이 혈관 내피층의 증식을 촉발시킬 가능성이 있음을 예측할 수 있다.</p> <h2>가시오가피 추출액이 혈관 내피세포 이동에 미치는 영향</h2> <p>가시오가피가 혈관 내피층의 증식울 촉발할 수 있기 때문에, 다음으로 혈관 내펴충 중식과 연계된 기능인 혈관 내피 세포 이동에 미치는 영향을 조사하였다. 헐관 내퍼세포의 이동은 혈관형성 과정에 일어나는 한 단계로 혈관형성에 가시오가피가 어떤 영향을 미챠는 지 쉅게 평가할 수 있는 방법이다. 따라서 세포 이동 정도를 측정하여 혈관형성에 미치는 가시오가피의 효능을 간접적으로 확인하였다. 본 연구에서 사용한 세포 이동 평가는 혈청기아와 동시에 thymidine을 2회 처리하여 세포 증식을 억제한 후 스크레이퍼 찰과기 (scraper)로 세포가 전면 성장해 있는 부분을 찰과(scraping)하여 창상선을 만든 뒤 이동한 세포 수를 세어 평가하였다. Fig. 3 에서 보는 바와 같이 혈관 내피세포 이동 정도는 가시오가피 추출액의 농도가 올라 갈수록 중가함을 확인하였다. 이를 통해 가시오가피가 헐관 내피세포 이동을 촉발시킴을 알 수 있었고, 더불어 가시오가피가 현관 형성을 유발시킬 수 있음을 알 수 있었다. 가시오가피가 혈관 내피세포 증식을 촉발하면서 혈관 형성을 동시에 촉발하는 것은 상처 치유등에 가시오가피가 중요하게 관여함을 의미한다.</p> <h2>가시오가피 추출액이 산화질소(NO) 생산에 미치는 영향 측정</h2> <p>산화질소(\( (\mathrm{NO}) \) 는 혈관 확장 기능 및 혈소판 웅집 방해 기능을 갖고 있어서 헐압 조절 및 동맥경화 발생 억제와 같은 다양한 현관 조절인자이다. 이와 같은 혈관 조절인자의 생산에 가시오가피가 어떤 효과를 나타내는지 산화실소 생산량을 축정하여 평가하였다. BAEC이 생산하는 산화진소량을 Fig. 4A에 보여 주었다. \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 가시오가피 추출액을 처리하였을 때 BAEC에서 검출되는 산화질소량이 20 30\% 증가하였다. 가시오가피 추출액이 산화질소 생산을 증가시키는 현상은 가시오가피가 산화질소를 매개로 하여 헐관기능을 조절하고 있음을 알 수 있다. 소량의 산화질소량의 증가는 세포의 이동을 상승하는 효과를 나타내므로 가시오가피가 촉진시키는 혈관 내피세포 이동은 증가된 산화질소에 의하여 일어날 수 있음을 암시한다. 가시오가피 추출액에 의해 생산되는 산화질소는 어떤 기전에 의해 일어나는지 알아보기 위하여, 혈관 내펴형 산화질소 합성효소(eNOS, endothelial nitric oxide synthase)의 인산화 정도를 Western Blot을 이용하여 평가하였다. Fig 4B에서 보는 것처럼 가시오가피가 \( \mathrm{eNOS} \) 의 인산화를 \( 2.1 \) 배 정도 상숭시킴을 알 수 있었고, 이는 가시오가퍼에 의해 중가하는 산화질소는 eNOS 인산화를 동해 eNOS가 활성화되어 나타난 것을 의미한다.</p> <h2>가시오가피 추츨액이 백혈구의 내피충 부착에 미치는 영향</h2> <p>백혈구(Leukocyte)가 혈관 내피층에 부착하는 현상은 염증반응 진행의 한 단계이다. 혈관의 염증반응은 동맥 경화 발생 유발의 원인이다. 따라서 백혈구의 내피층 부착 정도를 평가하는 것은 동맥경화 발생 가능성을 간접적으로 평가하는 것이다. Lipopolysaccharide (LPS)는 염증을 유발시키는 물질이며, LPS와 함께 전처리한 후 백혈구와 내피세포를 배양하면 두 세포 간에 부착이 일어난다. 홍미롭게도 가시오가피 추출액을 LPS와 같이 전 처리하면 LPS에 의해 유발되는 THP-1 세포 부착정도가 통계적으로 유의하게 감소하였다. 이런 연구 결과는 가시오가피가 동맥경화 발생옦을억제 할 수 있는 효과를 갖는다는 것을 의미한다.</p> <h2>가시오가피 추출액이 백혈구 동종세포 간 응집에 미치는 영향</h2> <p>백헐구 동종세포 간 응집은 상처난 조직에서 헐관이 파괴되어 출혈을 방지하도록 혈병이 형성되는 단계에 일어나는 현상이다. 가시오가피 추출액을 백혈구에 처리하였을 경우, 양성 대조군인 LPS를 처리한 세포군처럼 동종세포 간 THP-1 응집이 발생하는 것을 관찰하였다. 웅집이 일어나는 시간도 LPS와 비숫하게 진행되었다. 처리 후 4 시간이 지나면 응집이 현저하게 형성되고, 8시간 후에는 더욱 뚜렷이 진행 되었다. 가시오가피가 동종세포 간 THP-1 세포응집 현상을 유발하는 효과는 가시오가피 추출액이 상처에 의한 출혈 방지 효과가 있음을 나타낸다.</p>