미생물제재의 효과검정을 위한 공시작물로 배추와 토마토를 사용한다. 공시 작물에 대한 미생물 제재의 특성과 효과를 조사하기 위한 방법으로 배추와 토마토의 지상부 생체중,경장으로 지상부의 높이,경태로 공시작물 줄기의 직경,근중으로 밑둥으로부터 \( 2 \mathrm{~cm} \)하단부의 토양을 수세시킨후 생체중,근장으로 뿌리를 곧게 펴고 최장길이, 엽면적으로 잎의 면적을 각각 측정한다. 미생물제재를 처리전과 처리한 후 공시작물을 재배한다. 2주단위로 총3회씩, 공시작물의 재배토양 표면으로부터 깊이 10 cm까지의 흙을 채취한 후, 가는 체로 고른 다음 \( 0.85 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \mathrm{NaCl} \) 멸균수에 현탁 시킨 후 선택배지를 사용하여 미생물제재의 처리량, 채취시기별 및 균 종류별로 희석법과 한천배지 평판 도말법으로 토양내의 미생물의 종류별 계수를 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>토양 미생물의 분리 및 동정</h2> <p>미생물제재의 제조에 사용된 미생물은 경남 김해에 위치하는 동아대학교 부속농장의 유기물이 풍부한 토양에서 분리하였다. 채취한 토양 시료는 멸균수로 희석한 후 Nutrient agar 배지를 사용하여 평간 도말법으로 미생물을 분리하였다. 분리한 균주는 API 50CH/B kit (BioMerieux,France)를 사용하여 일차 동정하였으며 16s rRNA의 염기서열을 분석하여 확인하였다.</p> <h2>미생물제재의 제조</h2> <p>분리한 균주를 \( 5.0 \mathrm{~g} / l \)의 \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, 1.0 \mathrm{~g} / l \)의 \( \mathrm{NaCl}, 0.2 \) \( \mathrm{g} / \mathrm{l} \)의 \( \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.6 \mathrm{~g} / \mathrm{l} \)의 \( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4} \) (Sigma Co.,U.S.A) 및 \( 2.5 \mathrm{~g} / l \)의 효모 추출물(yeast extract, Difco Lab., U.S.A.)이 포함된 배지를 사용하여 배양하였으며, 탄소원으로 포도당을 별도로 멸균한 후, 멸균된 배지에 무균적으로\( 2.0 \%(\mathrm{~W} / \mathrm{v}) \)으로 혼합하여 사용하였다. 전배양은 고체 배지에서 일정시간 배양한 균주를 백금이에 취하여 \( 500 \mathrm{ml} \) 용량의 플라스크에 멸균하여 준비된 \( 120 \mathrm{ml} \)의 배지에 접종 한 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 180 rpm의 진탕 속도로 48시간 진탕 배양 하였다. 본배양은 전배양한 배양액을 \( 7 \mathrm{~L} \) 용량의 생물 배양기(KoBioTech Co. Ltd., Korea)에 멸균되어 준비된 \( 5 \mathrm{~L} \)의 동일 배지에 \( 5 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)를 접종하여 전배양과 동일한 방법으로 3일간 배양하였다. 배양액 \( 1 \mathrm{~l} \)를 \( 9 \mathrm{~kg} \)의 미강에 흔합시킨 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 배양하여 \( 10 \%(w / w) \)이하의 수분함량을 유지하는 미생물제재를 제조하였으며 미생물 제재에 존재하는 생균의 함량은 \( 9.6 \pm 0.6 \times 10^{6} \mathrm{CFU} /\mathrm{g} \)이었다.</p> <h2>공시작물 재배지 토양의 미생물 조사</h2> <p>미생물제재를 처리하기 직전과 처리한 후 공시작물을 재배한 뒤, 2주 단위로 충 3회씩, 공시작물의 재배토양 표면으로부터 깊이 \( 10 \mathrm{~cm} \)까지의 흘을 채취한 후, 가는 체로 그른 다음 \( 0.85 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \mathrm{NaCl} \) 멸균수에 현탁 시킨 다음 선택배지롤 사용하여 미생물제재의 처리량, 채취 시기별 및 균 종류별로 희석법과 한천배지 평판 도말법으로 토양내의 미생물의 종류별 계수를 실시하였다. 실험에 사용한 선택배지의 종류로는 일반 세균을 선별하는 Tryptic Soy Agar (TSA), 방선균을 선별하는 Actinomycetes Isolation Agar (AIA), 곰팡이의 선별에 사용하는 Potato Dextrose Agar (PDA)에 \( 50 \mu \mathrm{g} / 1 \) 의 Chloramphenicol을 함께 사용하였으며, 트리코데마를 선별하는데는 Malt Extract Agar (MEA)에 항생제로 Chlorotetracyclin을 \( 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{l} \) 첨가한 배지를 사용하였다. 선별 배지에 도말한 미생물은 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에 48시간 배양하여 형성된 콜로니수를 측정하였다. 토양 상의 총균수는 이들 선택배지를 사용하여 계수된 개별 미생물들의 생균수의 총 합계로 계산하였다.</p> <h3>공시작물을 이용한 미생물제재의 효과검정</h3> <p>미생물제재의 효과를 검정하기 위한 공시작물로는 배추와 토마토를 사용하였다. 시험 장소는 경상남도 김해시 소재 동아대학교 생명자원과학부 실험 농장에서 실시하였으며, 미생물 동정 및 토양 이화학적 조성규명 시험과 궁시작물의 포장시험으로 나누어 두 가지의 시험을 동시에 수행하였다. 공시작물의 포장시헙에서 시헙구의 배치는 Fig 1. (a)에서 보는 바와 같이 완전임의배치법 (Completely randomized design)을 이용, 3회 반복 처리로 하여 \( 1 \mathrm{~m} \times 1 \mathrm{~m}\)의 면적에 미생물제재를 처리하지 않은 무 처리구, 제품에 명시된 표준량을 처리한 기준량 처리구, 기준량에 두배로 처리한 배량 처리구로 하였고, 시험 처리구 당 두 종류의 공시작물의 재식은 Fig. 1. (b)와 같이 실시하였다. 공시작물인 배추와 토마토를 재배할 토양에 투여된 미생물제재의 처리는 토양 1\( \mathrm{~m}^{2} \) 당 물 \( 10 \mathrm{l} \)를 살포한 무 처리구, 물 \( 10 \mathrm{l} \)에 미생물제재 \( 400 \mathrm{~g} \)을 녹여 토양 1 \( \mathrm{~m}^{2} \)에 살포한 기준량 처리구와 물 \( 10 \mathrm{l} \)에 미생물제재 \( 800 \mathrm{~g} \)을 녹여 토양 1 \( \mathrm{m}^{2} \)에 살포 한 배량 처리구로 구분지어 처리하였다. 미생물 제재를 처리한 후 기계적으로 표충과 표층에서 \( 20 \mathrm{~cm} \) 깊이의 하층 토양을 고루 섞어 주었다. 공시작물에 대한 미생물제재의 특성과 효과를 조사하기 위해서 배추와 토마토의 생체중으로 지상부 생체중, 경장으로 지상부의 높이, 경태로 공시작물 줄기의 직경, 근중으로 밑 둥으로부터 \( 2 \mathrm{~cm} \) 하단 부의 토양을 수세시킨 후 생체중, 근장으로 뿌리를 곧게 편 후 최장길이, 엽면적으로 잎의 면적을 각각 측정하였다.</p>