\( \beta \)-Galactosidase 활성에 미치는 반응 온도와 pH의 영향을 조사하기 위하여 \( 30 \sim 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)와 pH5.0 9.0의 범위에서 \( \beta- \)galactosidase 활성을 각각 측정하였으며 그 결과 분리균은 이들 물질을 모두 분해하여 protease, amylase, esterase와 cellulase 활성을 보였다.
<h2>\( \beta \)-Galactosidase 반응특성 분석</h2> <p>\( \beta \)-Galactosidase 활성에 미치는 반응 온도와 pH의 영향을 조사하기 위하여 \( 30 \sim 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)와 pH5.0 9.0의 범위에서 \( \beta- \)galactosidase 활성을 각각 측정하였다. 이때 \( \mathrm { pH } 5.0 \sim 6.0 \) 의 범위에서는 citrate 완충용액, \( \mathrm { pH } \) 6.0 8.0에서는 phosphate 완충용액, \( \mathrm { pH } \) 8.0 9.0의 범위에서는 Tris 완충용액을 각각 사용하였다. \( \beta \)-Galactosidase에 의한 lactose의 분해산물을 분석하기 위해서는 \( 1.0 \% \) lactose와 과량의 효소를 포함한 최적 \( \mathrm { pH } \) 의 반응액을 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5시간 반응시킨 후 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3분간 열처리하야 원심분리한 다음 상등액을 적정량 취해 chloroform, acetic acid와 증류수[4.3: \( 5: 0.7,( \mathrm { v } / \mathrm { v } )] \)혼합 용액을 전개용액으로 하여 silica gel-precoated thin layer plate(Merck Kiesegel, No. 5748)에서 박층 크로마토그래피를 수행하였다. 전개된 물질을 발색시키기 위해서는 \( 9 \mathrm { ~mL } \) ethanol, \( 0.5 \mathrm { ~mL } \) p-anisaldehyde, \( 0.5 \mathrm { ~mL } \) sulfuric acid와 glacial acetate 멏 방울을 혼합한 발색제 용액을 뿌린 후, \( 120 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 방치하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>\( \beta \)-Galactosidase 생산균의 분리와 동정 및 특성</h2> <p>가정에서 제조된 청국장을 14점 수집하여 생리식염수로 희석하고 LB 한천 배지에 도말한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 하롯밤 배양한 결과 각 시료당 콜로니의 모양이 다른 것으로 보이는 균주가 3 8씩 분리되었다. 분리균 중 \( \beta \)-galactosidase 활성을 갖는 균을 탐색하기 위해 콜로니를 채취하여 pNP- \( \beta \)-Gal의 분해능을 관찰한 결과 대부분 미약한 활성을 보였고 활성이 높은 한 균주를 얻어 YB-1105로 명명하였다. 분리균의 고분자 물질을 분해능을 조사하기 위해 \( 1 \% \) skim milk, \( 0.2 \% \) potato starch, \( 1 \% \) tributyrin과 \( 0.5 \% \) carboxymethyl cellulose를 각각 첨가한 평판배지에서 하룻밤 배양하여 분해환을 관찰하였으며 그 결과 분리균은 이들 물질을 모두 분해하여 protease, amylase, esterase와 cellulase 활성을 보였다.</p>