HDL에 의해 항산화 기전을 바탕으로 세포주기와 관련된 단백질이 조절된다는 것을 바탕으로 FACS를 이용하여 세포주기를 측정하고 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 U2OS 세포에 함께 처리하여 세포주기와 관련된 단백질을 웨스턴 블롯 분석법으로 확인한 결과 G1 phase 에서 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 증가된 세포가 항산화 효과를 가진 HDL에 억제되지 않고 정상 세포주기를 유지함을 확인하였다.
<p>\( 200 \mu \mathrm { M } \)의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 농도 별로 U2OS 세포에 함께 12시간 동안 처리하였다. 그 결과 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 발현이 증가되었던 p53 단백질이 HDL에 의해 농도 의존적으로 감소하였다. 그리고 p53에 의해 전사활성이 유도되는 P21 \( { } ^ {\text { Waf1/Gip1 } } \), 세포주기와 관련된 단백질인 p27 \( { } ^ {\text { Kip1 } } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 처리하였을 경우 발현이 증가하였던 P21 \( { } ^ {\text { Waf1/Gip1 } } \)은 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL에 의해 낮은 수준으로 감소하는 것을 보였으며, p27 \( { } ^ {\text { Kip1 } } \)은 HDL의 처리에 의해 발현의 변화가 없었다. 이 결과는 HDL에 의해 항산화 기전을 바탕으로 세포주기와 관련된 단백질이 조절되는 것으로 사료된다(Fig. 5A)</p> <h2>HDL에 의한 세포주기 변화 분석</h2> <p>\( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 U2OS 세포에 함께 처리하여 세포주기와 관련된 단백질을 웨스턴 블롯 분석법을 이용하여 확인하였다. 단백질의 발현 변화 결과를 바탕으로 FACS를 이용하여 세포주기를 측정하였다. \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 U2OS 세포에 함께 24시간 동안 처리하여 세포를 \( 80 \% \) 에탄올에 고정한 후, DNA를 PI 용액에 염색한 후, FACS Calibur flow cytometry를 이용하여 세포주기를 측정하였다. 그 결과 control의 경우 전체 세포주기 중 \( 50.3 \%,~200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \) 처리를 처리하였을 경우 \( 65.2 \% \)의 세포가 G1 phase에서 관찰되었다. 이는 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 U2OS 세포가 G1 phase에서 \( 30 \% \) 증가한 것을 나타낸다. 그리고 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 농도 별로 함께 처리한 경우 G1 phase의 세포가 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다. \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 \( 30 \% \) 증가되었던 G1 phase의 세포가 \( 48.1 \% \)가 관찰되었다. 이 결과는 산화적 스트레스를 유도하는 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 증가된 G1 phase의 세포가 항산화 효과를 가진 HDL에 의해 G1 phase에 억제되지 않고 정상 상태의 세포주기를 유지하는 것으로 사료된다(Fig. 5B and C).</p>