A549 인체 폐암세포의 증식에 미치는 resveratrol의 영향을 조사하기 위해 정상 배지와 \(50\mu \mathrm{M}\) 농도의 resveratrol 처리된 배지에서 3일 동안 암세포를 배양하고, 12시간 간격으로 살아있는 암세포의 수를 측정했다. 실험 결과, resveratrol의 농도가 증가함에 따라 세포주기 G1에 해당하는 세포의 비율이 감소하고, S기에 해당하는 세포의 비율은 점차 증가하는 경향을 보였다. 또한, G2/M기에 속하는 세포의 비율도 약간 증가했습니다. 정상 배지와 resveratrol 처리된 배지에서 자란 세포를 DAPI 염색을 통해 핵의 형태 변형을 조사한 결과, resveratrol 처리에 의해 암세포의 증식 억제와 형태적 변형이 나타났으며, 이는 암세포의 아포토시스 유발과 관련이 있을 것으로 추론된다.
<h1>결과 밎 고찰</h1> <h2>A549 세포의 증식에 미치는 resveratrol의 영향</h2> <p>A549 인체 폐암세포의 증식에 미치는 resveratrol의 영향을 조사하기 위하여 정상 및 \(50\mu \mathrm{M}\) resveratrol이 처리된 배지에서 3일간 암세포들을 배양하면서 12시간 간격으로 살아있는 암세포의 수를 계수하였다. Fig. 1B에 나타낸 바와 같이 24시간 후부터 정상배지에서 배양된 세포에 비하여 resveratrol이 함유된 배지에서 자란 암세포의 수는 감소하기 시작하여 48시간 이후부터 생존된 암세포의 수는 급격하게 줄어 들었으며, 이는 MTT assay에 의한 A549 세포에서의 결과와도 유사한 경향성임을 알 수 있었다(data not shown), 이러한 resvertatrol 처리에 따른 A549 폐암세포의 증식억제는 Fig. 2A에 나타낸 바와 같이 암세포의 전체적인 형태변화와도 연관성이 있었다. 즉 resveratrol의 처리에 따라 전체적인 암세포의 크기가 응축되었고 다양한 모양의 분지를 형성하면서 배지위로 부유되는 현상을 관찰할 수 있었다. 다음은 이러한 형태적 변화에 따른 암세포의 증식억제가 세포주기 진행과정의 특정시기 교란 현상과 연관성이 있는지의 여부를 조사하였다. 이를 위하여 정상 및 resveratrol이 처리된 배지에서 배양된 암세포를 대상으로 flow cytometry 분석을 실시한 결과는 Fig. 2B에 나타내었다. Fig. 2B의 결과에서 알 수 있듯이 정상배지에서 배양된 암세포에 비하여 resveratrol의 농도가 증가될수록 세포주기 G1기에 해당되는 세포의 빈도는 감소되는 반면 S기에 해당되는 세포의 빈도는 resveratrol 농도 증가에 따라 점차적으로 증가하였으며, \(\mathrm{G}2/\mathrm{M}\)기에 속하는 세포의 빈도도 다소 증가하였음을 알 수 있었다. 이러한 현상은 인체흑색종세포, leukemia 세포, 유방암세포, 전립선암세포, 대장암세포 등에서 관찰된 결과들과 유사하였다.</p> <h2>Resveratrol 처리에 의한 폐암세포의 apoptosis 유발</h2> <p>이상의 resveratrol 처리에 의한 A549 폐암세포의 증식억제 및 세포주기 교란현상 관찰에서 resveratrol의 처리에 의한 암세포 증식의 억제는 암세포의 apoptosis 유발과 연관성이 있을 것으로 기대되어 재료 및 방법에서 서술한 것과 같이 정상 및 resveratrol이 처리된 배지에서 자란 세포를 대상으로 핵산에 특이적으로 결합하는 형광물질인 DAPI 염색을 통하여 핵의 형태변형 여부를 조사하였다. Fig. 3A에 나타낸 것처럼 resveratrol이 처리되지 않은 정상 배지에서 자란 세포의 핵은 전체적으로 뚜렷하게 염색이 되었다. 그러나 resveratrol이 처리된 암세포의 경우, apoptosis가 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 염색질 응축 (chromatin condensation)에 의한 apoptotic body의 출현이 매우 증가하였음을 알 수 있었다. 즉 이는 neclease에 의한 염색체 nucleosome의 linker DNA 부분의 절단에 의한 DNA 단편화의 결과이므로 resveratrol의 처리에 의한 암세포의 증식억제 및 형태적 변형이 암세포의 apoptosis 유발과 밀접한 관련이 있음을 시사하여 주는 것으로 사료된다. 또한 flow cytometry 결과 분석에서 정상세지에서 배양된 세포의 자연적 세포사의 빈도는 \(3\%\) 이하로 나타났지만 resveratrol의 첨가 농도가 증가될수록 세포사의 빈도는 증가되어 \(12.5~\mu \mathrm{M}\)처리군에서 \(4\%\) 정도, 그리고 \(25~\mu \mathrm{M}\) 및 \(50~\mu \mathrm{M}\)처리군에서는 각각 \(5.3\%\) 및 \(11.8\%\)로 증가되었음을 알 수 있었다.</p>