랫트를 7 마리씩 3군으로 나누어 1그룹은 실험용 기본사료로써 사육하였고, 뽕잎 메탄을 추출물을 하루에 100 및 300 \(mg/ \mathrm{kg} \) BW가 되도록 사료에 첨가한 2가지 실험그룹으로 하여 6주간 사육실험을 행하여 뇌의 산화적 스트레스 및 세포막 유동성에 미치는 영향을 평가했다. 실험그룹 사료는 MLE를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 0.1 \% \) 및 \( 0.3 \% \)씩 제외하였다. 뇌세포의 분획은 미토콘드리아 및 마이크로솜획분을 사용한 후 단백질과 콜레스테롤의 함량을 정량하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>동물실험 및 사료조성</h2><p>한국화학연구소에서 구입한 Sprague Dawley계 랫트 (male, \( 160 \pm 10 \mathrm{~g} \) )를 구입하여 본 대학 동물사육실에서 2주 동안 예비사육한 다음, 7 마리씩 3군으로 나누어 실험용 기본사료(Control group)로써 사육하면서 뽕나무(mulberry: Morus alba L.)의 뽕잎 메탄을 추출물(mulberry leaf extract: MLE)을 하루에 \(100\) 및 \(300 \mathrm{mg/ \mathrm{kg}} \) BW가 되도록 사료에 첨가한 실험그룹 (MLE-100 및 MLE-300 group)으로 하여 6주 간 사육실험을 행하여 뇌의 산화적 스트레스 및 세포막 유동성에 미치는 영향을 평가했다. 동물사육실은 항온항습 \( \left(22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 65 \pm 2 \% \mathrm{~RH}\right) \)하에서 12시간 싸이클\((06:00 \sim 18:00)\)로 명암이 자동 조절된다.</p><h2>조제사료의 조성</h2><p>본 실험에 사용한 사료조성은 전보와 같은 방법으로 탄수화물 \( 57.8 \%(\alpha \)-corn starch \( 44.5 \%+ \) sucrose \( 13.3 \%) \), 단백질 \( 16.0 \% \) (sodium-free casein), 지질 \( 18.0 \% \) (lard 18.0\%), 비타민과 무기질(AIN-76 mixture) 각각 \( 1.0 \%, 3.5 \% \), 그리고 섬유질 \(3.0\%\), DL-methionine \( 0.3 \% \), choline chloride \( 0.2 \% \)를 첨가하였으며, 여기에 cholesterol \(0.5\%\) 및 sodium chloride \( 0.2 \% \)를 첨가하여 고콜레스테롤혈증을 유도하였다. 실험그룹의 사료조성은 뽕잎 메탄올 추출물(MLE)을 하루에 각각 \(100\) 및 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \mathrm{~BW} \) 가 섭취되도록 \( 0.1 \% \) 및 \( 0.3 \% \) 의 MLE를 첨가하는 대신 탄수화물을 각각 \( 0.1 \% \) 및 \( 0.3 \% \)씩 제외하고 조제하였다.</p><h2>뇌세포 획분의 분획</h2><p>뇌세포의 분획은 저자 등[3]의 방법에 따라 균질 완충용액(\(1.15\% KCl/10 mM\) phosphate buffer/\(5 \mathrm{mM}\) EDTA, \( \mathrm{pH} 7.4)\)을 사용하여 미토콘드리아 및 마이크로솜획분을 분획하여 사용하였다. 이들 획분의 단백질의 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 정량하였다.</p><h2>콜레스테롤의 함량 측정</h2><p>뇌조직에서 분획한 mitochondria 및 microsome 획분 중의 콜레스테롤의 함량은 Rudel 등의 방법에 따라 o-phthalaldehyde법으로 측정하여 표준 검량선을 이용하여 이들 획분 중의 콜레스테롤의 함량을 정량하였다.</p><h2>세포막 유동성의 측정</h2><p>뇌 조직의 mitochondria 및 nucrosome 획분 중의 세포막 유동성(membrane fluidity)은 형광 probe로서의 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene(DPH)을 사용한 Heron 등에 의한 형광 분광법에 따라 측정하였다. 