환원력은 Oyaizu 방법에 따라 상등액 \(0.3 \mathrm { ml }\)에 증류수 \(0.3 \mathrm { ml }\)과 \(0.1 \%\) ferricchloride \(0.1 \mathrm { ml }\)를 흔합한 후 흡광도를 측정하였다. NO 생성능은 NO 산화물인 \(\mathrm { NO } _ { 2 } ^ { - }\)(nitrite)를 Griess 반응을 이용하여 흡광도를 측정하였고 실험에 사용한 대식 세포 주는 \(10\%\) FBS가 첨가된 RPMI 1640 배지를 이용하여 실험에 사용하였다. 비장세포 증식측정은 분리하여 희석한 비장세포를 96well plate에 놓고 여기에 시료를 농도별로 넣어 배양 48시간 후 배양액 \(100 \mathrm { ml }\)에 Cell titer \(15 \mathrm { ml }\)씩 첨가하여 흡광도를 측정하였다.
<h2>환원력의 측정</h2> <p>환원력은 Oyaizu 의 방법에 따라 행하였다. 각 시료 추출물 \( 0.2 \mathrm { ml } \)에 0.2 M phosphate buffer (pH 6.6) \( 0.2 \mathrm { ml } \), \( 1 \% \) potassium ferricyanide \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 차례로 가한 다음 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 수욕상에서 20 분간 반응시켰다. 여기에 \( 10 \% \) trichloroaceticacid (TCA)용액 \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 가하여 13,500× \( g \)에서 15분간 원심 분리한 후 얻은 상등액 \( 0.3 \mathrm { ml } \)에 증류수 \( 0.3 \mathrm { ml } \)과 \( 0.1 \% \) ferricchloride \( 0.1 \mathrm { ml } \)를 흔합한 후 \( 700 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 나타내었다.</p> <h2>NO 생성능</h2> <p>NO 생성능은 안정된 NO 산화물인 \( \mathrm { NO } _ { 2 } ^ { - } \)(nitrite)를 Griess 반응을 이용하여 측정하였다. 실험에 사용한 대식 세포 주 RAW264.7는 한국세포주은행(Korean Cell LineBank, \( \mathrm { KCLB } ^ {\circledR } \))으로부터 분양 받아 \( 10 \% \) FBS가 첨가된 RPMI 1640 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 계대 배양하여 실험에 사용하였다. LPS의 농도는 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 로 제조하여 각 농도별 CJP 또는 PTP화 혼합하여 사용하였다. CJP와 PTP를 각 농도별로 첨가한 후 RAW264.7을 48시간 배양하고 배양 상층액을 96 well plate에 \( 100 \mathrm { ml } \) 씩 넣고 여기에 Griess 시약(0.1 \% N-1-naphthy-1-ethylenediamine in \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \): \( 1 \% \) sulfanilamide in \( 5 \% \mathrm { H } _ { 3 } \mathrm { PO } _ { 4 } \) 을 1:1로 혼합)을 첨가하여 10분간 반응 시킨 후 96 well plate용 microplate reader로 550 \( \mathrm { nm } \) 에서 흡광도를 측정 하였다. Nitrite의 standard 농도는 sodium nitrite \( 64 \mathrm { mM } \)에서부터 \( 0.5 \mathrm { mM } \)까지 2배씩 희석하여 표준곡선에 비교되어 측정하였다.</p> <h2>면역세포 증식능</h2> <p>본 실험에 사용된 생쥐(BALB/c)는 대한실험동물센터(충북 음성군)에서 구입한 생후 8 ~ 12주 된 암컷을 사용하였고, 실험 전 까지 고형사료와 1차 증류수를 공급하면서 사육하였다. 비장 세포 분리를 위해 생쥐(BALB/c)를 경추탈골로 희생시킨 후 알코올로 소독하여 절개, 개복하여 비장을 획득하였다. 분리한 비장을 single 세포로 만들어 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 1,200 \mathrm { rpm } \)에서 5분간 원심분리하여 RPMI 1640 배지로 3회 세척 후 세포를 회수하여 RPMI 1640 배지로 세포를 희석하여 실험에 사용하였다. LPS와 ConA의 농도는 각각 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)로 제조하여 각 농도별 CJP 또는 PTP화 흔합하여 사용하였다. 사용하였다. 분리하여 희석한 비장세포를 96well plate에 놓고 여기에 시료를 농도별로 넣어 배양한 다음 각 조건에 따른 증식 정도를 측정하였다. 비장세포 증식측정은 배양 48시간 후 Cell titer \( 96 ^ {\circledR } \) Aqueous One Solution를 사용하여 각각 배양된 배양액 \( 100 \mathrm { ml } \) 에 Cell titer \( 15 \mathrm { ml } \) 씩 첨가하여 4~8시간 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 배양한 다음 \( 490 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p>