분리 \( \cdot \) 동정한 알긴산 분해균을 최적 생육 조건( \( \mathrm { pH } ~9 \), \( 2 \% \mathrm { ~NaCl } \), \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 배양 24시간)에서 대량 배양하여 원심분리기를 통해 상층액과 침전물을 분리하고, 상층액을 조효소로 하여 알긴산 분해 \( \mathrm { pH } \), 온도, 알긴산 농도 및 반응 시간 조건을 확인하기 위해 점도 및 환원당을 측정하였다.
<h2>알긴산 분해 조효소액 제조</h2> <p>분리 \( \cdot \) 동정한 알긴산 분해균을 최적 생육 조건( \( \mathrm { pH } ~9 \), \( 2 \% \mathrm { ~NaCl } \), \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 배양 24시간)으로 대량 배양하였으며, 배양액을 원심분리기(SUPRA 22K, Hanil Science Co., Korea)로 \( 12,000 \times g, 30 \mathrm { ~min } , 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 조건으로 원심 분리하여 상층액과 침전물을 분리하였고, 상층액을 조효소로 하였다.</p> <h2>알긴산 분해 조효소의 특성 확인</h2> <p>분리 \( \cdot \) 동정한 알긴산 분해균이 생성한 조효소의 최적 알긴산 분해 \( \mathrm { pH } \), 온도, 알긴산 농도 및 반응 시간 조건을 확인하기 위해 점도 및 환원당을 측정하였다. 점도 측정은 점도계(LVLTDV-Ⅱ, Brookfield Co., USA)를 이용하여 Richard 등의 방법을 참고하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 52 \mathrm { ~cP } \) 및 \( 0.5 \mathrm { ~rpm } \) 조건에서 실험을 수행하였다. 환원당 측정은 Somogyi-Nelson법으로 \( 520 \mathrm { ~nm } \)에서 표준당(glucose)으로 작성한 검량 곡선으로 환원당 함량을 정량하였다. 효소 \(1 \mathrm { ~unit } \)는 1분에 \(1 \mathrm {\mu } \mathrm { mole } \)의 환원당을 생산하는 효소양으로 정의하였고, 각 실험 조건에서 최대 활성을 보인 것을 \( 100 \% \)로 간주하고 상대 활성으로 나타내었다. 최적 \( \mathrm { pH } \) 조건을 확인하기 위해 \( 0.1 \mathrm { ~N } \) 및 \( 1 \mathrm { ~N } \) HCl과 \( 0.1 \mathrm { ~N } \) 및 \( 1 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { NaOH } \)를 이용하여 \( \mathrm { pH } ~2-10 \)까지 조정하였으며, 알긴산과 조효소를 1:1 혼합 후 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 반응시켰다. \( \mathrm { pH } ~9 \) 조건에서 온도를 \( 10-50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 달리하여 알긴산과 조효소 1:1 혼합물을 24시간 반응 시킨 후 최적 온도조건을 확인하였으며, 최적 알긴산 농도를 확인하기 위해 \( 1-9 \% \) 농도의 알긴산을 조효소와 1:1 혼합한 후 \( \mathrm { pH } ~9 \) 및 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 조건에서 24시간 반응 시켰다. 또한 반응 시간에 따른 조효소의 알긴산 분해능을 확인하기 위해 \( \mathrm { pH } ~9 \), \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 조건에서 \( 7 \% \) 알긴산과 조효소를 1:1 혼합한 후 60시간까지 반응시키며 시간별로 분해정도를 확인하였다.</p>