재조합 CGTase의 반응 최적 pH는 4.0~8.0 범위, 최적 온도는 35~65\(^\circ \mathrm{C}\) 범위를 검사하여 알아내었고, Methyl Orange 법과 HPLC를 이용하여 활성 측정 및 CD의 분석과 정량을 실시하여 분당 1 \mu1\(\mu\) mole의 aa-CD를 생성하는 효소량을 1 \mathrm { unit }1unit로 정의할 수 있게 되었다.
<h2>재조합 CGTase의 반응 최적 \( \mathrm { pH } \) 및 \( \mathrm { pH } \) 안정성</h2> <p>\( \mathrm { pH } 3.7 \sim 5.6 \) 범위에서는 \( 50 \mathrm { mM } \) acetate buffer, \( \mathrm { pH } 5.6 \) \( \sim 7.5 \) 범위에서는 \( 50 \mathrm { mM } \) phosphate buffer, \( \mathrm { pH } 8.0 \sim 10.6 \) 범위는 \( 50 \mathrm { mM } \) glycine buffer를 사용하여 전체 \( \mathrm { pH } 4.0 \sim 8.0 \) 범위에서 재조합 CGTase의 반응 최적 \( \mathrm { pH } \) 와 \( \mathrm { pH } \) 안정성을 조사하였다.</p> <h2>재조합 CGTase의 반응 최적온도 및 열안정성</h2> <p>재조합 CGTase의 반응 최적 온도는 \( 35 \sim 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 사이에서 10 분간 반응하여 측정하였고, 열안정성 은 \( \mathrm { pH } 6.0 \) 에서, \( 45 \sim 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위에서 시간별로 측정하였다.</p> <h2>CGTase 활성측정 및 \( \mathrm { CD } \) 의 분석과 정량</h2> <p>효소활성 측정은 Methyl Orange 법을 사용하였으며, 분당 \( 1 \mu \) mole의 \( a \)-CD를 생성하는 효소량을 \(1 \mathrm { unit } \)로 정의하였다.</p> <p>부분 정제한 CGTase의 CD 생산 앙상을 분석하기 위해 \( 50 \mathrm { mM } \) 의 인산완충액 \( ( \mathrm { pH } 6.0) \) 에 기질로 \( 5 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) soluble starch와 부분정제효소를 가하여(0.5unit \( / \mathrm { ml } ) \) 반웅액을 \( { 50 } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 반응시킨 후 시간별로 생성된 CD를 HPLC (LC Module I, Waters, U.S.A.)로 분석하였다. 사용한 column은 TSKgel Amide-80 (Tosoh Co., Japan)이며, acetonitrile : \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } = 60: 40 \) 의 용매로 분당 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 의 유속으로 용출하여 RI detector(Model 410, Waters, U.S.A.)로 검정하였다.</p>