RAW 264.7 세포는 ATCC에서 구입하였고, DMEM 매질에 1%의 penicillin/streptomycin, plasmocin prophylactic, 10%의 FBS를 첨가하여 배양하였다. 배양 환경은 \(37 ^ {\circ } \mathrm { C }\)와 \(5 \%~ \mathrm { CO } _ { 2 }\)를 유지하였다. 시료 처리 후와 증류수에 의한 Reducing power의 흡광도 값을 각각 \(A_ {\text { Sample } }\), \(A_ {\text { Blank } }\)로 표시하였다. 총 페놀 함량은 수정된 Folin-Ciocalteu 방법을 사용하여 측정하였다.
<p>Reducing power ( \( A_ {\text { control } } \) 의 상대값, \( \%) \) \[ = \left [1- \left (A_ {\text { Sample } } -A_ {\text { Blank } } \right ) / A_ {\text { control } } \right ] \times 100( \%) \]</p> <p>\( A_ {\text { Sample } } = \) 시료 처리 후 Reducing power의 흡광도 값</p> <p>\( A_ {\text { Blank } } = \) 증류수에 의한 Reducing power의 흡광도 값</p> <p>\( A_ {\text { Control } } = \) 양성 대조군 (L-ascorbic acid) 처리 후 Reducing power의 흡광도 값</p> <h2>총 페놀 함량 분석</h2> <p>총 페놀 함량은 Folin-Ciocalteu 방법을 수정하여 사용하였다. \( 50 \mu \mathrm { L } \) 의 시료 \( (4 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } ), 950 \mu \mathrm { L } \) 의 증류수, \( 500 \mu \mathrm { L } \) 의 \( 1 \mathrm { ~N } \) Folin Cioacltue 시약(Sigma-Aldrich)을 혼합 했다. 이후 \( 20 \% \) sodium carbonate \( 2.5 \mathrm { ~mL } \) 를 첨가하여 상온에서 40 분간 반응시켰다. UV/Visible spectrophotometer를 사용하여 \( 725 \mathrm { ~nm } \) 에서 상등액의 흡광도를 측정했다. Tannin acid를 표준 물질로 사용하고 선형 방정식을 사용하여 정량 분석했다.</p> <h2>세포 배양</h2> <p>RAW 264.7 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)에서 구입했다. 세포는 \( 1 \% \) 의 penicillin/ streptomycin, plasmocin prophylactic, \( 10 \% \) 의 FBS를 포함한 DMEM에서 배양했다. 세포를 배양하는 인큐베이터의 환경은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 \( 5 \%~ \mathrm { CO } _ { 2 } \) 를 유지 하도록 설정했다.</p> <h2>세포 독성 분석</h2> <p>RAW 264.7 세포를 96-well plate를 이용하여 24시간 동안 인큐베이터에서 배양 했다. 배양 후 WF, IF, PF, GF를 여러 농도 \( (50,100,200,400 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } ) \) 로 각 well에 처리한 후, 세포를 \( 37 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 동안 배양 했다. 24시간 후, 세포를 alamarBlue \( { } ^ {\circledR } \) Cell Viability Reagent (MTS reagent, Thermo Fisher Scientific) 로 처리했다. 2시간 후, microplate reader (ELx808, Biotek, Winooski, VT, USA)을 이용하여 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 세포 생존율을 측정했다.</p>