본 실험에서는 헤모글로빈 단백질과 개망초의 에탄올 추출물 결합 정도에 따른 수렴효과를 판단한다. 농도가 증가함에 따라 활성이 증가하며, 특히 개망초 추출물은 일정 농도 이상에서 높은 세포 생존율을 보였다. 또한, 다른 실험 결과와 비교해 개망초 추출물이 더 우수한 수렴효과를 보였다.
<h2>Astringent 활성 측정 결과</h2> <p>본 실험에서는 hemoglobin의 단백질이 개망초의 에탄올 추출물과 결합하는 정도에 따라 수렴효과 정도를 판단하였고, 그 결과를 Fig. 5와 같이 나타내었다. 농도가 증가함에 따라 활성이 증가하는 것을 확인할 수 있었고, \( 5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 \(35\%\)의 효과를 확인할 수 있었으며, \( 1,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 80% 이상의 수렴효과를 확인할 수 있었다. 이는 비교군인 Vit.C 보다 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다. Youn 등의 눈 개승마 에탄올과 물 추출물이 \( 2,500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 약 \(60\%\) 의 효과와 \(10\%\) 이하의 수렴효과가 나타났다는 보고와 비교 할 때 \( 500 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 \(60\%\) 이상의 활성을 나타낸 개망초 에탄올 추출물의 수렴효과가 더 우수한 것을 확인할 수 있었다.</p> <h2>MTT 분석법을 이용한 세포 생존율 측정 결과</h2> <p>MTT 분석은 탈수소 효소작용으로 담황색 기질인 MTT tetrazolium을 자주색을 띄는 비수용성의 MTT formazan을 생성시키고, 미토콘드리아의 호흡연쇄에 의해 환원시키는 효소능력을 이용하여 죽은 세포에는 반응하지 않는 MTT formazan의 생성량을 측정하는 검사법이며, 흡광도는 \( 550 \mathrm { ~nm } \) 근처 파장에서 최대가 된다.</p> <p>개망초 에탄올 추출물에 의한 멜라노마 세포의 생존율을 MTT assay에 의해 확인한 결과 Fig. 6 과 같이 나타내었다. 개망초 추출물은 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서 \(96\%\)의 세포 생존율을 나타내었다. 이는 비교군인 Vit.C와 유의한 결과이며, 따라서 이하의 멜라노마 세포에서의 미백관련 신호전달 인자 측정은 생존율이 \(100\%\)에 가까운 농도인 \( 25,50,100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서 실험을 진행하였다.</p> <h2>Western bolt을 통한 단백질 발현 측정 결과</h2> <p>멜라닌 생합성은 아미노산의 하나인 tyrosin이 tyrosinase, TRP-1, TRP-2에 의해 DOPA를 거쳐 DOPA quinone으로 전환되고 자동산화반응과 효소반응으로 DOPA chrome을 거쳐 멜라닌이 생성되었다. 이와 같은 단백질은 멜라닌 생성의 중요한 전사인자인 MITF의 발현에 의해 조절된다고 알려져 왔다. MITF의 발현이 억제됨에 따라 tyrosinase, TRP-1의 단백질 발현이 감소되어 멜라닌 생성 억제로 이어지는 것이라고 판단할 수 있다.</p>