ATG-3'(reverse)로 이루어져 있다. PCR 조건은 94\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 1분, 55\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 30초, 72\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 2분의 회전식 사이클 35번을 사용하였다.PCR에 사용된 프라이머는 \( \lambda \)-phage DNA를 주형으로 하여 \( 1,2,4,6,8 \mathrm { ~kb } \) 의 DNA단편을 증폭할 수 있게 설계되었고, 6개의 염기서열로 구성되어 있으며, PCR 조건은 94\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 1분, 55\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 30초, 72\(^\circ \mathrm{C}\) 동안 2분의 회전식 사이클 35번을 사용하였다.
<h2>프라이머와 PCR 조건</h2> <p>PCR에 사용한 프라이머는 \( \lambda \)-phage DNA를 주형으로 하여 \( 1,2,4,6,8 \mathrm { ~kb } \) 의 DNA단편을 증폭할 수 있게 설계되었다. 프라이머의 염기서열은 다옴과 간나: primer 1(7131-7153) 5'-GATGAGITCGTGTCCGTACAACT-3'(forward); primer 2 (8111-8130) 5'-GGCGTACCTTTGTCTCACGG-3'(reverse); primer 3(9111-9131) 5'-TAGCTGTCGICATAGGACTC-3' (reverse); primer 4(11101-11120) 5'-CTTAACCAGTGC-GCTGAGTG-3'(reverse); primer 5(13121-13140) 5'-CCA-CATCCATACCGGGTTTC-3'(reverse); primer 6(15121-15130) 5'-CGGCGGTAAAGAATGATCCG-3'(reverse). PCR 혼합물 \( (50 \mu \mathrm { L } ) \) 은 \( 25 \mathrm { mM } \) Tris-HCl(pH 9.0), \( 0.25 \mathrm { mM } \) dNTPs, \( 2.5 \) \( \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } _ { 2 } , 0.01 \% \) tween-20,0.1 \( \mu \mathrm { M } \lambda \)-phage DNA, \( 2.5 \) pmol primers, \( 0.1 \mu \mathrm { g } \) Tod DNA polymerase를 포함한다. PCR 조건은 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \) 분간의 변성단계를 거쳐 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분, \( 64 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( \mathrm { I } \) 분, \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분간을 25회 반복 수행하고 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분간 마지막 신장반응을 수행하였다. 그리고 중폭하려는 DNA 단편의 길이에 따라 신장 반응 시간을 다르게 조절하였다. 증폭된 DNA 단편은 densitometry(Gel-Pro Analyzer 3.1, MediaCybernetics, MD, USA)를 사용하여 정량 분석하였다. Taq(Takara)와 pfu(Promega) DNA poly-merase를 사용한 \( \mathrm { PCR } \) 은 제조사에서 게시된 방법에 따라 수행하였다. PCR 반응이 종료한 후 반응액과 동일 용량의 stop solution( \( 60 \mathrm { mM } \mathrm { EDTA } \) and \( 60 \mathrm { mM } \mathrm { NaOH } ) \)을 첨가하고 \( 5 \mu \mathrm { L } \) 의 샘플을 \( 1.0 \% \) agarose gel에 전기영동한 후 EtBr(ethidium bromide)로 염색하여 증폭된 밴드를 확인하였다.</p>