화학성분 분석에서 Catechin계 화합물 및 카페인의 함량은 El-Shahawi 등의 방법에 준하여 Dionex Ultimate-3000 HPLC (Sunnyvale, CA)를 이용하여 분석하였다. Total phenol 함량은 Singleton과 Rossi Jr.의 방법에 의하여 측정하였으며, 시료에 증류수와 Folin-Ciocalteu's phenol 시약을 첨가하여 vortex 후 상온에서 반응시키고 탄산나트륨 용액을 첨가하여 90분 동안 정치시킨 후 Beckman DU-8으로 750 \mathrm{~nm}750 nm에서 흡광도를 측정하였다. Total Sugar 함량은 Phenol-sulfuric acid법으로 측정하였는데, Test tube에 시료, \(5 \% \) phenol 용액, \(95\%\) sul-furic acid를 첨가한 후 vortex하고 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 5분간 반응하고 실온에서 5분간 방치 한 후 흡광도를 \( 490 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Total protein 함량은 Bradford시약을 이용하여 정량하였는데, Test tube에 시료, 증류수, Bradford시약을 첨가하여 voltex한 후 흡광도를 \( 595 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. GLGT의 휘발성 향기성분 분석은 증류한 \( n \)-pentane/diethyl ether 혼합용매(1:1, \(\mathrm{v}\)/\(\mathrm{v}\)) \( 100 \mathrm{~ml} \)를 사용하여 상압에서 3시간 동안 simultaneous distillation extraction(SDE)장치로 추출하여 용매의 수분을 제거하고 약 \( 0.5 \mathrm{ml} \)로 농축하여 GC/MS를 분석하였으며 Carrier gas는 질소를 사용하였다. 데이터의 유의성 검증은
<h2>화학성분 분석</h2> <h3>Catechin계 화합물 및 카페인 함량</h3> <p>Catechin계 화합물은 El-Shahawi 등의 방법에 준하여 Dionex Ultimate-3000 HPLC (Sunnyvale, CA)를 이용하여 분석하였다. Column은 TSK-gel C18 column \( (4.6 \times 250 \mathrm{~mm} \); Waters, Milford, MA)을 사용하였고, mobile phase는 \( 0.2 \% \) \( \mathrm{H}_{3} \mathrm{PO}_{4} \)/wateracetonitrile (8.5: 1.5, \(\mathrm{v}\)/\(\mathrm{v}\))을 사용하였다. Flow rate는 \( 1 \mathrm{~ml}\)/\(\mathrm{min}\)였고 peak는 \(254 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다.</p> <h3>Total phenol 함량</h3> <p>Total phenol 함량은 Singleton과 Rossi Jr.의 방법에 준하여 측정하였다. 시료 \( (200 \mu \mathrm{l}) \)에 증류수 \( 2.6 \mathrm{~ml} \)와 Folin-Ciocalteu's phenol 시약(\(200 \mu \mathrm{l}\))을 첨가하여 vortex 후 6분간 상온에서 반응시켰다. \( 7 \%\) \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 용액 \( 2 \mathrm{~ml} \)를 첨가하여 90분 동안 정치시킨 후 Beckman DU-8으로 \( 750 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Gallic acid를 표준물질로 사용하여 total phenol 함량은 건물에 대한 gallic acid equivalent \( \mathrm{mg}\) (\(\mathrm{mg}\) GAE/\(\mathrm{g}\) dry weight)으로 표시하였다.</p> <h3>Total sugar 함량</h3> <p>Total sugar 함량은 phenol-sulfuric acid법으로 측정하였다. Test tube에 시료 \(250 \mu \mathrm{l}\), \(5 \% \) phenol 용액 \( 150 \mu\mathrm{l}\), \(95\%\) sul-furic acid \( 750 \mu\mathrm{l}\)를 첨가한 후 vortex하고 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 5분간 반응하고 실온에서 5분간 방치 하였다. 반응 시료의 흡광도를 Becknan DU-8 Spectrometer를 이용하여 \( 490 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Total sugar 함량은 glucose \(\%\)로 표시하였다.</p> <h3>Total protein 함량</h3> <p>Total protein 함량은 Bradford시약을 이용하여 정량 하였다. Test tube에 시료 \( 10 \mu \mathrm{l}\), 증류수 \( 90 \mu\mathrm{l}\), Bradford 시약 \( 900\mu\mathrm{l}\) 를 첨가하여 voltex 후 Beckman DU-8 Spectrometer로 \( 595 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. BSA를 표준물질로 사용하여 total protein의 함량은 건물 중에 대한 \(\%\)로 표시하였다.</p> <h2>CLGT의 휘발성 향기성분 분석</h2> <p>휘발성분의 분석은 Lee 등의 방법에 준하여 증류한 \( n \)-pentane/diethyl ether 혼합용매(1:1, \(\mathrm{v}\)/\(\mathrm{v}\)) \( 100 \mathrm{~ml} \)를 사용하여 상압에서 3시간 동안 simultaneous distillation extraction(SDE)장치로 추출하였다. 용매의 수분을 제거하고 약 \( 0.5 \mathrm{ml} \)로 농축하여 GC/MS는 HP6890 Series gas chromatograph-MS로 분석하였다. Injector와 ion source의 온도는 각각 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \)와 \( 230^{\circ} \mathrm{C} \)이며, column은 DB-Wax \( (60 \mathrm{~m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \), i.d., \( 0.25 \)\( \mu \mathrm{m} \) film thickness, J&W, USA)를 사용하였다. Oven temperature는 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3분간 유지한 다음 \( 2^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \)의 속도로 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승 시켜 5분간 유지하고 동일한 속도로 \( 180^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승시켜 5 분간 유지하였으며, 다시 \( 4^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \)의 속도로 \( 200^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승시킨 후 10분간 유지한 다음 \( 5^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \) 의 속도로 \( 230^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승시킨 후 10분간 유지하도록 설정하였다. Carrier gas는 nitrogen을 사용하였고, flow rate는 \( 1.0 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \)였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>Data는 mean\(\pm \)SD로. 나타내었다. 통계분석은 SPSS 통계 프로그램 14.0 version (SPSS Inc, Chicago, IL)을 이용하여 분석하였다. Data의 유의성 검증은 Duncan의 multiple range test 또는 t-test로 검증하였다.</p>