Collagenase 저해효과는 Wunsch와 Heidrich의 방법을 사용하여 \( 320 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였고, Tyrosinase 저해효과는 Hearing의 방법을 사용하여 \( 475 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.
<h3>Collagenase 저해효과</h3> <p>Collagenase 저해효과는 Wunsch와 Heidrich의 방법 \( [24] \) 에 준하여, 0.1 M Tris-HCl buffer \( \left ( \mathrm { pH } \right . \) 7.5)에 \( 4 \mathrm { mM } \\mathrm { CaCl } _ { 2 } \) 를 첨가하여 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg (0.3 mg/ \( \mathrm { mL } \) )를 녹인 기질액 \( 0.25 \mathrm { ~mL } \) 와 \( 50-200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) phenolic compounds 농도의 각 시료 용액 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \) 의 혼합액에 \( 0.2 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) collagenase (Sigma-Aldrich Co. St. Louis, MO, USA) \( 0.15 \mathrm { ~mL } \) 를 첨가하여 실온에서 20분간 방치한 후 \( 6 \% \) citric acid \( 0.5 \mathrm { ~mL } \) 를 넣어 반응을 정지시킨 다음, ethyl acetate \( 2 \mathrm { ~mL } \) 를 첨가하고 \( 320 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h3>Tyrosinase 저해효과</h3> <p>Tyrosinase 저해효과는 Hearing의 방법[25]에 준하여, \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 6.8) \( 2.3 \mathrm { ~mL } \) 와 기질엑 \( 1.5 \mathrm { mM } \) L-tyrosine 용액 \( 0.4 \mathrm { ~mL } \) 의 흔합액에 \( 250 \mathrm { U } / \mathrm { mL } \) mushroom tyrosinase (Sigma-Aldrich Co.) \( 0.1 \mathrm { ~mL } \) 와 \( 50-200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 페놀성 성분 농도의 각각의 시료 \( 0.2 \mathrm { ~mL } \) 를 넣고 대조구에는 시료 대신 증류수를 \( 0.2 \mathrm { ~mL } \) 를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20분간 반응시킨 다음, \( 475 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p>