하고초와 6년근 정선산 황기는 동국대학교 부속한방병원의 것을 사용한다. 약침액은 수제알콜침법에 의하여 조제한다. HL-60세포는 한국세포주은행로부터 분양받아 사용한다. Free radical 소거효과는 Cerruti의 기법을 참작하여 실시한다다. 아메바의 증식의 측정을 위해 hemocytometer를 이용하여 시간별로 계수하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료제조</h2><p>하고초와 6년근 정선산 황기는 동국대학교 부속한방병원에서 구입하여 사용하였다, 약침액은 수제알콜침법에 의하여 조제하였다. \( 3 \times, 5 \times \) 약침액은 \( 1 \times \)을 감압농축하여 사용하였고, \( 0.1 \times, 0.5 \times \) 농도는 증류수로 희석하여 조제하였다.</p><h2>세포배양</h2><p>HL-60 (human leukemic cell) 세포는 한국세포주은행(KCLB)로부터 분양받아 사용하였다. 배양용 배지는 RPMI-1640 에 \( 20 \% \) heat-inactivated FBS를 첨가하여 사용하였으며, 이들 배양액은 3 또는 4일 간격으로 교환해 주었다. 세포의 생존은 trypan blue dye exclusion 방법으로 확인하였다.</p><h2>Free radical inhibition 측정</h2><p>Free radical 소거효과는 Cerruti의 방법을 참고하여 실시하였다. \( 1 \times 10^{6} \) 개의 HL-60 세포를 HBSS에 부유시켜 96-well plate에 접종한 후, \( 8 \mu \mathrm{M}\) TPA를 치리하여 1 시간 동안 반응시킨 뒤, 하고초 및 황기 약침액을 농도별로 각각 처리하고 앙성대조군으로 \( 0.2 \mu \mathrm{g}\) ascorbic acid도 TPA를 처리한 세포에 첨가한 후 \( 160 \mu \mathrm{M} \) cytochrome \( \mathrm{C} \) 와 20분 동안 반응시켰다. Cytochrome \( \mathrm{C} \) 의 환원은 550\( \mathrm{nm} \)에서 측정하였으며, TPA에 의한 유도를 최대 free radical 형성의 측정으로 하고 TPA와 시료처리에 의한 radical 형성의 비율을 결정하였다.</p><h2>Polyamine metabolism 측정</h2><p>Acanthamoeba castellanii (아메바)의 증식을 측정하기 위해 \( 3 \times 10^{4} \) cells의 아메바를 OGM {\(3 \mathrm{~N} \mathrm{KOH}\), \(30 \% \) glucose, \( 0.2 \mathrm{g} \) thiamine \( \mathrm{HCl}, 40 \mathrm{mg} \) biotin, \( 200 \mu \mathrm{g} \) vitamin \( \mathrm{B}_{12} / \) \(100 \mathrm{m \ell}\) \(95 \% \) ethanol이 포함된 \( 2,000 \times\) vitamins, \( 0.4 \mathrm{g} \) ferric citrate, \( 0.1 \mathrm{g} \mathrm{~CaCl} \cdot \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(3.1 \mathrm{~g} \mathrm{~MgSO}\cdot7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)를 혼합한 \( 100 \times \) salt Ⅰ, \(100 \times \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4}(\mathrm{pH} 7.0\)), yeast extract-proteose peptone} \(3 \mathrm{m \ell}\)에 부유시켜 30\(^ {\circ} \mathrm{ C } \)에서 배양하였다. 24시간 후 하고초 및 황기 약침액 \( 150 \mu \ell \)를 각각 처리하였으며, 세포수는 hemocytometer를 이용하여 시간별로 계수하였다.</p>