남조류인 구슬말은 생태계에서 중요한 1차생산자로서 다양한 환경에서 서식하며, 우리나라에는 보고된 종이 있지만 연구가 부족하다. 구슬말은 특이한 이형세포를 가지며 군체를 형성하여 토양과 암반 등에서 발견된다. 연구에서는 Pairwise distance를 계산하고 maximum likelihood (ML) tree를 bootstrap method로 분석하였으며, 증폭된 DNA 단편의 염기서열을 분석하여 Nostoc 속의 종과 근연한 속과의 계통을 파악하였다.
<p>남조류는 선캄브리아시대부터 대기중 산소공급에 중요한 역할을 한 광합성 원핵생물로 생태계 내에서 중요한 1차생산자 역할을 하며 극지, 사막에 이르기까지 다양한 육상 및 수생 환경에서 서식하고 있다. 또한 항균 및 항바이러스 활성을 가진 tolyporphin, laxaphycin, indolocarbazole 등의 성분을 포함하는 것으로도 보고되었다. 남조류의 일종인 구슬말 (Nostoc commune Vaucher ex Bornet & Flahault)은 남조류 구슬말목 (Nostocales) 구슬말과 (Nostocaceae)에 속하며 이형세포를 갖는 특징으로 다른 목들과 구분되는데 극지방에서 열대 지역까지 광범위한 지역에 분포하며 단세포가 연결되어 형성된 수많은 trichome들이 점액질에 둘러 쌓인 형태로 커다란 군체를 형성하고 주로 토양, 암반, 잔디 위 등에 서식한다고 알려져있다. 2021년 국가생물종목록 기준으로 우리나라에는 구슬말속 10종이 보고되이 있으나, 흔히 관찰되지 않고 연구가 거의 없는 실정이다. 이에 본 연구에서는 산업적으로 유용한 신규 생물 소재를 탐색하기 위해 그 동안 연구가 많이 이려지지 않은 토양 남조류를 분리.동정하였으며 분리한 N. commune HCW0811의 추출물의 항염증 활성을 조사 하고자 하였다. 이에 LPS로 유도된 RAW 264.7세포에서 \( \mathrm { NO } , \mathrm { PGE } _ { 2 } \), 및 tumornecrosis factor- \( \alpha \) \( \mathrm { TNF } - \alpha \), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1 \( \beta \) \( ( \mathrm { IL } -1 \beta) \) 와 같은 염증성 사이토카인의 억제 활성을 측정하였으며, western blot assay를 통해 iNOS, COX-2 및 MAP kinase 외 \( \mathrm { NF } - \mathrm {\kappa B } \) 세포내 신호전달 경로에서의 단백질 발현을 확인하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>남조류의 분리 및 동정</h2> <p>대전시 국립대전현충원 내 묘역 잔디에 착생하여 서식하는 암녹색 남조류를 채취하여 분리 배양한 strain을 HCW0811로 명명하였으며, 광학현미경을 사용하여 세포의 형태적 특성을 관찰 하였다. 형태적 특성을 토대로 남조류로 파악하고 남조류 특이적 primer CYA106F (CGGACGGGTGAG TAACGCGTGA)와 FDSKS_CyaR1 (CACCTTCCGGTACGGC TACCTTG)를 사용한 polymerase chain reaction을 통해 약 \( 1.3 \mathrm { ~kb } \) 의 \( 16 \mathrm { ~S } \) rRNA 유전자를 증폭 부위를 증폭하였다. 이 후 증폭된 약 \( 1.3 \mathrm { ~kb } \) 의 DNA 단편을 제노텍(주)에 의뢰하여 염기서열을 해독하였으며 HCW0811의 16S rRNA 유전자 서열은 우선 NCBI database에서 상동성을 검색하고 Nostoc 속의 종과 근연한 속과의 계통을 분석하기 위해 Mega X 프로그램으로 align하고 계통 분석을 실시하였다. Pairwise distance는 maximum composite likelihood model로 계산하고, maximum likelihood (ML) tree는 bootstrap method로 1000회 반복 테스트하였다.</p>