인동덩굴 추출물 및 분획물의 고농도에서의 HaCaT 세포 보호 효과를 확인하기 위해 MTT assay를 실시한 결과, \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 \( 12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 에틸아세테이트 분획물은 세포 독성을 나타내지 않았다. 또한 과산화수소로 유도된 HaCaT 세포 손상에 대한 인동덩굴 추출물 및 분획물의 세포 보호 효과를 확인해보니 세포손상에 대한 보호 효능이 뛰어났다.
<p>고농도에서의 인동덩굴 추출물 및 분획물의 세포 보호 효과 감소를 통해, 고농도의 추출물 및 분획물에 세포막 교란 혹은 세포 독성을 나타내는 물질의 존재 가능성을 확인하였다. 게다가 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 인동덩굴 에틸아세테이트 분획물에서 대조군(30.8 min)보다 용혈이 빠르게 나타나는 것으로 미루어보아 이 물질이 에틸아세테이트 분획에 더 많이 함유되어 있을 것으로 예상된다.</p> <h2>HaCaT 세포 보호 효과</h2> <h3>인동덩굴 추출물 및 분획물의 HaCaT 세포 독성 평가.</h3> <p>MTT assay를 통해 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물의 각질 형성 세포인 HaCaT 세포에 대한 독성을 확인함으로써 앞으로의 실험에 사용될 시료의 농도 범위를 결정하였다. \( 0.4-400.0 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물을 HaCaT세포에 \( 24 \mathrm { ~h } \) 처리 후 세포 생존율을 확인하였다. 실험 결과, 아무 처리하지 않은 군에 비해 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \), 에틸아세테이트 분획물은 \( 12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도까지는 세포 독성을 나타내지 않았다. 이를 바탕으로 본 실험에서는 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물의 최고 농도를 \( 12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 으로 설정하였다.</p> <h3>과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 세포 보호 효과.</h3> <p>과산화수소는 세포 내에서 \( \mathrm { O } _ { 2 } { } ^ { - } \)이 SOD로 촉매되어 생성되거나 자외선 조사에 의해서 과잉 생산되면 산화적 손상을 일으키게 된다. 활성산소인 과산화수소는 세포막을 통과하여 생체내 미량으로 존재하는 금속 이온과 반응하여 다른 ROS를 생성시켜 세포 손상을 야기시킨다[19]. 따라서 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획물이 과산화수소로 유도된 HaCaT세포의 산화적 손상에 대한 세포 보호 효과를 확인하였다.</p> <p>실험 결과, 과산화수소를 처리한 실험군은 처리하지 않은 군에 비하여 약 \( 65 \% \) 의 생존율을 나타내었다. 0.4- \( 12.5 \mathrm { gg } / \mathrm { ml } \) 농도 범위에서 \( 50 \% \) 에탄올 추출물을 처리한 군은 최고 농도 \( 12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서만 \( 70.0 \% \) 의 세포 생존율을 나타내 유의적 차이를 나타냈다. 그러나 \( 0.4-12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도 범위에서 에틸아세테이트 분획물을 처리한 군은 모든 농도에서 세포 생존율을 현저히 증가시켰으며 최대 \( 78.6 \% \) 까지 증가시켰다(각각 \( 73.2,74.8,76.9,76.0,78.0 \%) \). 세포 증식율은 Fig. 6B 에 나타내었다. 실험 결과, 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획물 모두 농도 의존적으로 증가하는 경향을 나타내었다. 그러나 최고 농도에서 \( 50 \% \) 에탄올 추출물이 약 \( 4.5 \% \) 의 증가율을 나타낸 것과 비교하여 에틸아세테이트 분획물은 약 \( 14.6 \% \) 의 증가율을 나타냄으로써 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물보다 에틸아세테이트 분획물이 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 보호 효능이 뛰어남을 확인하였다.</p>