음나무 배발생 세포의 갈변화와 노화현상을 분석한 결과, 배양 5일째 G1 phase가 \(87.8 \% \)%에서 \(81.7\% \)로 감소하고 S phase가 \(5.6 \% \)에서 \(11.7 \% \)로 두 배 증가하였다. 배양 15일 이후부터는 초기 세포 주기로 되돌아가면서 안정화 되었다. 배발생 세포로부터 체세포배 발달을 위한 액체 현탁 배양 시 \(0.5\mathrm { ~g } / \mathrm { L }\) 접종 시 \(65 \% \) 이상의 어뢰형 단계의 배를 얻을 수 있었고 \(30\mathrm { ~g } / \mathrm { L }\)의 고밀도에서는 \(20 \% \) 미만의 구상형/심장형의 배가 관찰되었다.
<p>세포의 갈변화와 노화현상은 배지의 양분과 수분 흡수 장애에 따른 세포의 활력 감소를 의미하기 때문에 배양 주기별 세포 주기(G1, S, G2/M)를 분석하였다 (Fig. 2). 그 결과 배양 기간에 따른 세포 주기의 변화가 명확하게 나타나 배양 5 일째 G1 phase는 \( 87.8 \% \)에서 \( 81.7 \% \) 로 감소하였고, S phase는 \(5.6 \% \) 에서 \( 11.7 \% \) 로 두 배 증가하였으며 배양 15 일 이 후부터는 초기 세포 주기로 되돌아 가면서 안정화 되었다 (Fig. 2). Winkelmann 등 (1998)은 Cyclamen persicum의 체세포배 캘러스 증식 시 배양 1 주일 안에 S기가 \( 23 \% \) 에서 \( 46 \% \)로 두 배가 증가하였고 G0 / G1 기는 \( 30 \% \) 가 감소한다고 하여 본 실험과 유사한 결과를 보고하였다. 이상의 결과를 종합해 보면 음나무 배발생세포는 배양 초기 10 일까지가 유도기에 달하고 그 후 5일 정도의 간격으로 증식기와 안정기를 거침을 알 수 있었다. 따라서 음나무의 현탁배양 시 배발생 세포의 빠른 생장으로 인한 갈변화 및 세포활력 저하를 최소화 시키기 위해서는 적어도 2 주 정도의 배양주기로 계대배양이 이루어져야 한다는 것을 보여 주었다.</p> <p>배발생 세포로부터 체세포배 발달을 위한 액체 현탁 배양 초기 세포 접종 밀도를 조사한 결과는 Fig. 3 과 같다. \( 0.5 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \) 접종 시 \( 65 \% \) 이상의 어뢰형 단계의 배를 얻을 수 있었고 \( 1.0 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \) 의 경우는 약 \( 50 \% \) 의 어뢰형의 배를 생산하였다. 반면 접종 밀도가 가장 높았던 \( 30 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \) 에서는 \( 20 \% \) 미만의 구상형/심장형의 배가 관찰되었다. 접종 밀도에 따른 체세포배 발달 정도를 확인하기 위하여 조직을 관찰한 결과 배양 밀도가 높아질수록 체세포배 발달은 거의 이루어 지지 않아 거의 \( 80 \% \) 이상이 세포 단계에 머무르고 구상형/심장형의 배가 일부 관찰되었으나 어뢰형의 배는 전혀 발달하지 못했다. \(30 \mathrm { g } / \mathrm { L } \) 의 고밀도에서는 배발생 세포만 관찰 되었을 뿐 체세포배 분화 단계의 세포는 전혀 관찰되지 않았다 (Fig. 4). 따라서 배양초기의 접종밀도가 많을수록 특히 어뢰형 배의 발달이 지연됨을 알 수 있었고 구형 및 심장형의 배는 초기 접종 밀도에 크게 영향 받지 않는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 초기 세포 접종 밀도는 구형 및 심장형 배의 발달에는 영향을 주지 않으나 구상형/심장형의 배가 어뢰형으로 분화하는데 크게 영향을 미친다는 Osuga 등 (1993)의 연구 결과와 유사한 내용이다.</p>