ALP (alkaline phospha-tase)활성도는 ALP 측정용 kit (AM 105S-K, Asan pharm. Co.) 시약을 사용하였다. 간 조직의 지질 함량은 Folch 등의 방법으로 추출한 지질성분을 여과하여 일정량을 취한 다음 건고시켜 총 지질, 중성지방 및 총 콜레스테롤 함량 분석을 위한 시료로 사용하였으며, 상기의 혈중 지질성분 분석과 동일한 방법으로 하였다. 발색물질을 butanol로 추출하여 흡광도 \((\mathrm{OD}_{535-520} )\)를 측정하였으며 지질과산화물 함량은 1,1,3,3-tetraethoxypropane으로 작성한 검량선에 의해 계산하였다. SOD 활성은 pyrogallol의 자동산화에 의한 발색 정도를 알칼리 조건에서 측정하였다. GSH-px (glutathione peroxidase) 활성은 산화형 glutathione이 glutathione reductase와 NADPH에 의해 환원될 때 나타나는 흡광도의 감소 정도를 측정하였다. 본 실험결과는 SPSS package (12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 평균과 표준편차로 나타내었으며, 통계적 유의성은 Student-t test 및 일원배치 분산분석(one-way analysis of variance)을 한 후 \mathrm{p}<0.05p<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test로 비교분석을 하였다.
<h2>간 기능 효소 활성 측정</h2> <p>간 기능 평가를 위한 혈중 지표로써 AST (aspartate aminotransferase) 및 ALT (alanine aminotransferase)활성 측정은 kit (AM 101-k, Asan pharm. Co.) 시약으로 측정하여 혈액 \( 1 \mathrm{ml} \)당 Karmen unit로 표시하였다. ALP (alkaline phospha-tase)활성도는 ALP 측정용 kit (AM 105S-K, Asan pharm. Co.) 시약을 사용하였다.</p> <h2>간 조직의 지질 성분 분석</h2> <p>간 조직의 지질 함량은 Folch 등의 방법에 따라 간 조직 \( 0.5 \mathrm{g} \)을 취하여 chloroform과 methanol 혼합액 (\(2:1\), \( \mathrm{v} / \mathrm{v} \))을 가하여 Poter-Elvehjem tissue grinder (WOS01010, DAIHAN, Wonju, Korea)로 마쇄하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 지질 성분을 추출하였다. 이를 여과하여 일정량을 취한 다음 건고시켜 총 지질, 중성지방 및 총 콜레스테롤 함량 분석을 위한 시료로 사용하였으며, 상기의 혈중 지질성분 분석과 동일한 방법으로 하였다.</p> <h2>혈청 및 간 조직의 지질과산화물 함량 측정</h2> <p>혈청의 지질과산화물 함량은 혈청에 \(1/12\) \( \mathrm{N} \) 황산용액 및 \( 10 \% \) phosphotungstic acid를 혼합하여 \( 1,100\times \mathrm{g} \)에서 10분간 원심분리시켜 침전물을 얻었다. 여기에 증류수와 thiobarbituric acid (TBA) 시약을 각각 \( 1 \mathrm{ml} \)씩 첨가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕에서 1시간 반응시킨 다음 생성된 지질과산화물을 butanol로 이행시켜 \( 532 \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 간 조직의 지질과산화물 함량은 간 조직에 \( 1.5 \%\) \(\mathrm{KCl} \) 용액을 가하여 균질화시킨 시료액 \( 0.5 \mathrm{ml} \)에 \( 1 \% \) phosphoric acid 및 \( 0.6 \% \) TBA시약을 \( 1 \mathrm{ml} \)씩 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕에서 45분간 반응시켰다. 이때 생성된 발색물질을 butanol로 추출하여 흡광도 (\( \mathrm{OD}_{535-520} \))를 측정하였으며 지질과산화물 함량은 1,1,3,3-tetraethoxypropane으로 작성한 검량선에 의해 계산하였다.</p> <h2>간 조직의 항산화효소 활성 측정</h2> <p>간 조직은 \( 0.25 \mathrm{M} \) sucrose와 \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA를 포함하는 \( 50 \mathrm{mM} \) 인산 완충액(\( \mathrm{pH}\) 7.4) \( 10 \mathrm{ml} \)로 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)의 조건에서 tissue grinder로 마쇄하여 \( 10 \%\) (\( \mathrm{w} / \mathrm{v} \)) 균질액을 제조하였다. 이를 \(1,100 \times \mathrm{g} \)에서 10분간 원심분리하고 상층액은 \( 12,000\times \mathrm{g} \)에서 20분간 재원심분리하였다. 이때 얻은 상층액을 \(105,000 \times \mathrm{g} \)에서 1시간동안 초원심분리하여 얻은 상층액을 cytosol 분획물로 하였다. 재원심분리한 후 남은 잔사에 상기의 완충용액을 가하여 \(12,000 \times \mathrm{g} \)에서 20분간 원심분리 한 후 남은 잔사를 mitochondria 분획물로 구분하였다. 분획물의 단백질 함량은 Lowry 등의 방법에 따라 bovine serum albumin (Sigma Co., St. Louis, MO, USA)으로 정량하였다. Catalase 활성은 Abei의 방법에 따라 효소활성은 1분간 \( 1 \mu \mathrm{M} \)의 \( \mathrm{H_2} \mathrm{O_2} \)를 분해시키는데 소요되는 효소량( \( \mu \mathrm{mol} / \mathrm{min} / \mathrm{mg} \) protein)으로 나타내었다. SOD 활성은 pyrogallol의 자동산화에 의한 발색 정도를 알칼리 조건에서 측정하였다. GSH-px (glutathione peroxidase) 활성은 산화형 glutathione이 glutathione reductase와 NADPH에 의해 환원될 때 나타나는 흡광도의 감소 정도를 측정하였다.</p> <h2>통계 분석</h2> <p>본 실험결과는 SPSS package (12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 평균과 표준편차로 나타내었으며, 통계적 유의성은 Student-t test 및 일원배치 분산분석(one-way analysis of variance)을 한 후 \( \mathrm{p}<0.05\) 수준에서 Duncan's multiple range test로 비교분석을 하였다.</p>