\( \operatorname { tarda } \mathrm { CK } 41 \) 는 단일 집락을 접종한 후 \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 12시간 전배양하고, 이를 LB 액체배지에 0.1% 농도로 접종하여 \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 200 rpm 속도로 배양한다. 배양 시간 동안 2시간 간격으로 흡광도를 측정하고, 이를 통해 각 염농도 조건별로 증식률을 평가한다. 이와 병행하여, 10배씩 연속적으로 희석한 배양액을 LB 고체배지에서 배양하여 생균수를 측정한다. 그리고 \(0.4\%\) agar가 첨가된 LB 배지에서 균을 접종하여 배양하고, tarda CK41 균주의 운동성을 관찰한다.
<h2>E. tarda 균주의 생장곡선 및 생균수 측정</h2> <p>E. \( \operatorname { tarda } \mathrm { CK } 41 \) 을 \( 2 \mathrm { ml } \) 의 \( \mathrm { LB } \) 액체배지에 각 균주의 단일 집락을 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 12 시간 전배양한 후, 전배양액을 \( 3.5 \% \) \( \mathrm { NaCl } \) 또는 \( 1.0 \% \mathrm { NaCl } \) 을 함유하고 있는 \( 300 \mathrm { ml } \) 의 LB 액체배지에 \( 0.1 \% \) 의 농도로 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 200 \mathrm { rpm } \) 의 속도로 진탕 배양하였다. 배양동안 2 시간 간격으로 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서의 흡광도를 측정하여 각 염농도 조건별로 \( E . \operatorname { tarda } \) CK41의 생장을 추정하였다. 이와 동시에 생균수 측정을 위하여 멸균된 \( 0.85 \% \) \( \mathrm { NaCl } \) 희석수에 배양액을 10 배씩 연속적으로 희석하고 LB 고체배지에서 배양하여 생균수를 측정하였다.</p> <h2>E. tarda 운동성 실험</h2> <p>E. tarda CK41 균주의 운동성을 관찰하기 위하여 운동성 측정배지 \( (0.4 \% \) agar가 첨가된 LB 배지 \( ) \) 에서 균을 접종하여 배양하고 그 형태를 관찰하였다. 염농도가 운동성에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 운동성 측정배지에 최종농도가 \( 1 \% \) 또는 \( 3.5 \% \) 이 되도록 \( \mathrm { NaCl } \) 을 첨가하였다. \( 2 \mathrm { ml } \) 의 LB 액체배지에 각 균주의 단일 집락을 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 12 시간 전배양한 후, 염농도가 다른 운동성 측정배지의 중앙에 각 전배양액 1 \( \mu \mathrm { ll } \) 을 주입하여 실온에서 배양하면서 일정시간 간격으로 균주의 운동거리를 형성된 집락의 지름을 측정하여 비교 관찰하였다.</p> <h2>투과 전자 현미경(Transmission Electron Microscope, TEM)</h2> <p>투과 전자 현미경을 이용하여 \( E . \operatorname { tarda } \) CK41 균주의 형태학적 특성을 육안으로 관찰하였다. 시편 제작에 사용된 균주는 각 \( 3.5 \% \) 또는 \( 1.0 \% \mathrm { NaCl } \) 농도의 고체배지에서 자란 균체집락을 \( 1 \mathrm { ml } \) 의 멸균된 \( 0.85 \% \mathrm { NaCl } \) 희석액에 부드럽게 현탁하여 사용하였으며, 현탁시킨 균체는 격자에 부착시키고 \( 1 \% \) uranyl acetate로 2분간 염색 후 TEM 을 사용하여 관찰하였다.</p>