9주령의 Sprague-Dawley 수컷 흰쥐를 동일한 실험실 환경에서 12시간 간격으로 낮과 밤을 교대시키며 사육하였다. 이들 흰쥐는 정상 대조군, ICV STZ투여군, 사전운동과 ICV STZ투여군으로 분류되었고, 두개골 표면에서 정수리 점(bregma)을 기준으로 우측 1.5mm, 후측 0.8mm되는 지점의 두개골을 소형 드릴로 천공하여 Saline에 STZ을 체중 당 1.5mg로 희석한 후 20\(\mu\mathrm{l}\)용량을 주입하였다. 흰쥐 부부를 stereotaxic frame에 고정하고 뇌실내에 STZ를 주입하였으며, 스트레스를 최소화하기 위해 소형 동물용 트레드밀을 이용한 저강도 지구성 운동을 실시하였다. 또한 기억력 검사는 step-down avoidance task의 latency time을 측정하여 평가했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 동물</h2> <p>본 실험에 사용된 동물은 9주령의 Sprague-Dawley 수컷 흰쥐로 3 일간의 환경 적응 기간을 거치게 하였고, 4 마리당 한 개의 사육케이스 \( (38 \times 28 \times 18 \mathrm{~cm}) \)에 넣고 항온 \( \left(20 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}\right) \), 항 \(\mathrm{60\%}\)이 유지되며, 12시간 간격으로 낮과 밤을 교대시키는 동일한 실험실 환경에서 사육되었다. 이들 흰쥐들은 정상 대조군 \( (\mathrm{n}=8)\), ICV \ STZ투여군 \( (\mathrm{n}=8) \), 그리고 사전운동과 ICV \ STZ투여군 \( (\mathrm{n}=8) \)으로 분류되었다.</p> <h2>알쯔하이머 흰쥐 모델(intracerebroventricular admin-istration of streptozotocin)</h2> <p>흰쥐의 부부를 stereotaxic frame에 고정하고 뇌실내 (intracerebroventricular, ICV)에 다음과 같은 방법으로 streptozotocin (STZ) 을 주입하였다. 두개골 표면에서 정수리 점(bregma)을 기준으로 우측 \( 1.5 \mathrm{~mm} \), 후측 \( 0.8 \mathrm{~mm} \)되는 지점의 두개골을 직경 \( 0.5 \mathrm{~mm} \)인 소형 드릴로 천공한 후 미량 주입기 (\(10 \mu \mathrm{l}, 26 \mathrm{G} \), Hamilton. USA)를 깊이 \( 3.6 \mathrm{~mm} \) 자침하여 Saline에 STZ을 체중 당 \( 1.5 \mathrm{mg} \)으로 희석시킨 후 \( 20 \mu \mathrm{l} \)용량을 주입하였다. 대조군에는 동일한 실험 방법으로 saline만을 주입하였다.</p> <h2>운동 프로토콜(protocol)</h2> <p>운동 방법으로는 동물에게 스트레스를 최소화하기 위해서 많은 선행연구에서 보편화되어 있는 방법에 따라 소형 동물용 트레드밀을 이용한 저강도 지구성 운동을 실시하였다. 운동군의 동물들은 수술 전 2주간 매일 1회 30분간 트레드밀 달리기 운동을 실시하였다. 운동의 강도는 경사도를 \( 0 \% \)로 고정시킨 상태에서 운동시작 5분 동안 \( 2 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \), 다음 5분은 \( 5 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \), 마지막 20분은 \( 8 \mathrm{~m} / \mathrm{min} \)의 점증적 강도로 구성하였다. 신경세포생성을 확인하기 위하여 모든 흰쥐들에게 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU; \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) in saline)을 복강에 매회 운동 30 분 전에 주사하였다.</p> <h2>기억력 검사</h2> <p>기억력 검사는 step-down avoidance task의 latency time을 측정함으로서 평가되었다. 알쯔하이머 질병 유발 2주 후에 각 흰쥐에게 platform \( (7 \times 25 \mathrm{~cm}, 2.5 \mathrm{~cm} \) high)에서 2 분간 안정을 취하게 한 후 step-down avoidance task를 실시하였다. 기록은 최초 platform에 놓인 흰쥐가 강철 스테인레스 바 \( (42 \times 25 \mathrm{~cm}, 1 \mathrm{~mm} \) diameter, spaced \( 1.0 \mathrm{~cm} \) apart)에서 내려 서서 네발이 모두 닿았을 때까지 시간(initial latency)이 측정 되었다. Platform에서 내려온 쥐에게 \( 0.3 \mathrm{~mA} \)의 전기 자극을 2초간 주어 기억을 시킨 뒤 3일 후 동일한 실험을 각각 실시 하였으며 횐쥐가 platform에서 바닥으로 내려올 때까지의 시간(retention latency time)을 측정하여 기억의 지표로 선정하였다. Latency time은 최대 300 초까지 기록하였다. 만약 기억력이 손상되지 않았다면 기억력이 손상된 흰쥐보다 전기충격을 받게 되는 스테인레스 바 들어가는 시간(retention latency time)이 길어진다.</p>