들깨와 토마토의 잿빛 곰팡이병원균인 Botrytis cinerea의 성장 및 발병 억제에 효과적인 Bacillus licheniformis N1 균주를 활용한 실험을 진행하였습니다. N1 균주는 \(30^{\circ}\mathrm{C}\), \(160\mathrm{rpm}\)의 조건에서 16시간 동안 NB 배지에서 배양한 후, 탄소원으로는 옥수수전분, 백설탕, 흙설탕, 노란설탕, 에탄올, 글리세롤, 유당, 과당, 맥아당, 정제한 자당을 \(1\%\)씩 첨가하고, 질소원으로는 Yeast extract를 \(1\%\) 첨가한 배지에서 24시간과 48시간 동안 배양액을 채취하여 분광광도계로 \(660\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하여 세균 밀도를 비교한 결과를 제시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>공시세균 및 배양</h2> <p>들깨 및 토마토 잿빛곰팡이병원균, Botrytis cinerea의 균사생육, 분생포자 발아 및 발병 억제 효과가 높은 것으로 확인된 Bacillus licheniformis N1 균주를 공시하였다. 이하의 모든 실험에 NB (Nutrient broth)배지에서 \( 160 \mathrm{rpm} \), \( 30^{\circ} \mathrm{C}, \) 16시간 배양한 N1 균주 \( 2 \mathrm{ml} \) 씩을 \( 500 \mathrm{ml} \) 삼각 플라스크에 \( 200 \mathrm{mI} \) 씩 넣은 공시배지에 접종하였다.</p> <h2>탄소원</h2> <p>N1 균주의 배양에 가장 적합한 탄소원을 선발하기 위해 미생물의 생장에 우수한 포도당과 가격이 저렴한 편인 옥수수전분, 백설탕, 흙설탕, 노란설탕과 에탄올, 글리세롤, 유당, 과당, 맥아당, 정제한 자당(Sucrose)를 각각 1% 씩 첨가하고, 질소원으로는 Yeast extract를 1% 첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), \( 160 \mathrm{rpm} \) 의 진탕배양기에서 N1 균주를 배양한 후, 24, 48시간째에 배양액 \( 2 \mathrm{ml} \) 를 채취하여 분광광도계로 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 조사하여 세균 밀도를 비교하였다.</p> <h2>질소원</h2> <p>N1 균주의 배양에 우수한 질소원을 선발하기 위해 기존에 생장 효과가 우수하다고 보고된 콩가루와 가격이 저렴한 비지가루, 미강, 밀기울, 대두박, 두유, 카세인, 트립톤, Beef extract, Yeast extract, Malt extract 그리고 황산암모늄을 각각 1%씩 첨가하고, 탄소원으로는 옥수수전분을 2%첨가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, 160 \mathrm{rpm} \) 의 진탕배양기에서 N1 균주를 배양한 후, 24, 48, 120시간째에 배양액 \( 2 \mathrm{ml} \) 를 채취하여 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 조사하여 세균 밀도를 비교하였다.</p> <h2>배양적온</h2> <p>N1 균주의 배양적온을 조사하기 위해 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 \( 5^{\circ} \mathrm{C} \) 간격으로 조정된 진탕배양기 \( (160 \mathrm{rpm}, 48 \) 시간)에서 NB 배지에 N1 균주를 배양하면서 24, 48시간째에 배양액을 \( 2 \mathrm{ml} \) 채취하여 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 조사하여 세균의 밀도를 측정하였다. 또한, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24시간 배양하면서 2시간 간격으로 배양액 \( 2 \mathrm{ml} \) 롤 채취하여 세균밀도의 변화를 흡광도 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 조사하였다.</p> <h2>교반속도</h2> <p>N1 균주의 배양에 적합한 교반 속도를 조사하기 위해 \( 100 \mathrm{rpm} \) 에서 \( 250 \mathrm{rpm} \) 까지 \( 50 \mathrm{rpm} \) 간격으로 조정된 진탕배양기에서 NB 배지에 N1 균주를 각각 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 배양하면서 20시간, 24시간 그리고 48시간 후의 배양액을 \( 2 \mathrm{ml} \) 채취하여 세균밀도를 흡광도 \( 660 \mathrm{~nm} \) 에서 조사하였다.</p>