AIW는 시판 알칼리수, 대조구는 PW, DW를 사용하여 이들의 농축시료를 대상으로 미네랄함량, pH, ORP를 측정하고 항산화 활성 및 이들에 용해된 vitamin C의 항산화 활성 유지효과를 평가하였고, 이를 위해서 DPPH radical 소거능과 superoxide radical 소거능 및 환원력 측정을 이용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>AIW는 시판 알칼리수(H사)를 구입하여 사용하였으며, 대조구로는 정수(purified water: PW)와 상수용 음용수(drinking water: DW)를 사용하였다. PW는 국내 정수기(W사: 정수 필터에 부직포, 활성탄, 역삼투막 및 은 활성탄 및 UV 멸균기가 장착된 모델)를 통과한 물을 사용하였다. 각각의 \(\mathrm{pH}\),ORP(oxidation-reductionpotential) 및 미네랄 함량은 Table 1에 나타내었다. 사용한 물의 농축 시료 조제를 위해서는 AIW, PW 및 DW 각각 \(1\mathrm{L}\)를 감압회전 농축기(Eyela Co., Japan)를 이용하여 \(60^{\circ}\mathrm{C}\)에서 농축하여 최종적으로 \(10\mathrm{ml}\)를 회수하였으며, \(4^{\circ}\mathrm{C}\) 냉장고에 보관하며 사용하였다.</p> <h2>미네랄 함량,\(\mathrm{pH},\mathrm{ORP}\) 평가</h2> <p>미네랄 함량은 \(\mathrm{Ca},\mathrm{K},\mathrm{Na},\mathrm{Mg}\) 4개 항목에 대하여 유도결합 플라즈마 발광 광도법으로 Optima 4300 DV (Perkin Elmer Co., USA)를 사용하여 측정하였다. \(\mathrm{pH} \) 및 \( \mathrm{ORP}\)는 \(\mathrm{HI} 991003\)\(\mathrm{pH}\)-meter (HANNA Instruments Co., USA)를 사용하여 측정하였다.</p> <h2>항산화 활성</h2> <p>AIW, PW, DW 및 이들의 농축시료를 대상으로 항산화 활성 및 이들에 용해된 vitamin C의 항산화 활성 유지효과를 평가하였다. 먼저 다양한 물 및 100배 농축액의 항산화 활성은 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) radical 소거능 측정, superoxide radical 소거능 및 환원력 측정에 의해 평가하였다. DPPH radical 소거능 평가의 경우, 다양한 농도로 희석한 물 시료 \(20\mu\mathrm{l}\)에 \(99.5\%\) 에탄올에 용해시킨 \(2\times 10^{-4}\mathrm{M}\)\( \mathrm{DPPH}\)용액 \(380\mu\mathrm{l}\)를 넣고 혼합하여 \(37^{\circ}\mathrm{C}\)에서 30분 동안 반응시킨 후, \(516 \mathrm{~nm}\)에서 microplate reader (Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. DPPH free radical 소거능은 시료첨가구와 비첨가구의 백분율로 표시하였으며, 최종 결과는 3회 측정값의 평균과 편차로 나타내었다. 환원력 평가는 \(\mathrm{Oyaizu}\)등의 방법을 변형하여 측정하였다. 각각의 물 시료 \(1\mathrm{ml}\)를 \( 0.2\mathrm{M}\) sodium phosphate buffer \((\mathrm{pH}\) 6.6)\(2.5\mathrm{ml}\)와 \(10\%\) potassium ferricyanide \(2.5\mathrm{ml}\)를 첨가하고 \(50^{\circ}\mathrm{C}\)에서 20분간 반응시킨 후, \(10\%\) trichloroacetic acid \(2.5\mathrm{ml}\)를 첨가하여 반응을 종료하고 \(4,000\mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수한 상등액은 증류수로 2배 희석한 후, 신선하게 조제된 0.1% ferric chloride 용액과 5:1 (v/v) 비율로 혼합하고 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 평가하였다. Superoxide radical 소거능 평가는 superoxide와 반응하여 갈변물질을 만드는 pyrogallol 자동산화를 측정하여 평가하였다. 즉, 물 시료용액 \( 0.2 \mathrm{ml} \)에 Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer (50 mM tris, \( 10 \mathrm{mM} \) EDTA, pH 8.5) \( 3 \mathrm{ml} \)와 \( 7.2 \mathrm{mM} \) pyrogallol \( 0.2 \mathrm{ml} \)를 가하고, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시킨 후, \( 1 \mathrm{N}\) \(\mathrm{HCl} \) \(1 \mathrm{ml} \)로 반응을 정지시킨 후, \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 각각의 항산화 활성은 시료첨가구와 비첨가구의 백분율로 표시하였으며, 최종 결과는 3회 측정값의 평균과 편차로 나타내었다. 한편 다양한 물 시료에서의 vitamic \( \mathrm{C} \)의 항산화능 유지효과 평가를 위해서는, 각각의 물에 \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 vitamin C를 녹인 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 동안 \( 120 \mathrm{rpm} \)의 속도로 교반하거나, \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2시간 정치한 후 잔존 항산화능을 평가하였다. 각각의 항산화 활성은 상기 언급한 바와 동일하게 나타내었으며, 최종 결과는 3회 측정값의 평균과 편차로 나타내었다.</p>