셀룰로오스 분해성 점액세균 균주들로부터 soraphen 생합성 유전자군을 가지고 있는 균주를 찾기 위해 두 쌍의 oligonucleotide들을 합성하여 primer로 이용하고 , PCR을 수행함으로써 새로운 균주를 탐색하고자 햇다. 그 결과 PCR1과 PCR 2이 만들어졌는데 , 이것이 비특이적인 증폭으로 인해 생성된 산물일 가능성도 존재하기 때문에 DNA 염기서열을 분석한 결과 , 이는 sorA와 sorB 유전자를 포함하는 soraphen 생합성 유전자군을 갖는 균주일 가능성이 높다는 것이 발견되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1><h2>Soraphen 생합성 유전자를 가지고 있는 점액세균 탐색</h2><p>Soraphen A는 셀룰로오스 분해성 점액세균 S. cellulosum So ce26에서 처음 분리된 이차대사산물로 강력한 항진균 활성이 있는 macrolide polyketide이다. S. cellulosum So ce26의 soraphen A 생합성 유전자군은 미국 Syngeta Biotechnology사에 의해 클로닝되어 염기서열이 결정되었는데 (Fig. 1), 본 연구에서는 이들의 정보를 기반으로 이미 본 연구팀이 국내에서 분리한 셀룰로오스 분해성 점액세균 균주들로부터 soraphen 생합성 유전자군을 가지고 있는 새로운 균주를 탐색하고자 하였다. 이를 위해 먼저 보고된 S. cellulosum So ce26의 soraphen A 생합성 유전자군 염기서열을 이용하여 sorA와 sorB 유전자 중간부위를 각각 PCR 증폭할 수 있는 두 쌍의 oligonucleotide들을 합성하여 primer로 사용하고, 분리된 점액세균 균주의 유전체 DNA를 주형으로 하여 PCR을 수행함으로써 soraphen 생합성 유전자군을 갖는 새로운 균주를 탐색하고자 하였다. 본 연구팀에 의해 순수 분리된 50균주의 셀룰로오스 분해성 점액세균에 대해 제작한 두 쌍의 primer를 사용하여 PCR을 수행한 결과 Fig. 2에서 보인 바와 같이 균주 KYC3047과 KYC3076의 유전체 DNA를 주형으로 사용한 반응에서 예측한 크기의 PCR1과 PCR2 조각이 생성되었다.</p><p>하지만 이들 PCR 산물들이 비특이적인 PCR 증폭의 결과로 생성된 산물일 가능성도 존재하므로 이러한 가능성을 배제하기 위하여 생성된 PCR 산물의 DNA 염기서열을 분석하였다. 그 결과, C155와 C156 oligonucleotide를 PCR primer로 사용하고, KYC3047과 KYC3076의 유전체 DNA 주형으로 사용하여 얻어진 두 PCR 조각(PCR1)은 모두 sorA의 중간부분이며, C157와 C158을 PCR primer로 사용하여 얻어진 두 PCR 조각(PCR2)은 sorB의 중간부위였음을 확인할 수 있었다. Fig. 3에서는 KYC3027과 KYC3076의 PCR1 염기서열을 S. cellulosum So ce26 sorA 유전자 중간 부위, 즉 8,890번째 염기부터 9,294번째 염기까지( \( 405 \mathrm{bp}) \)의 서열과 비교한 것을 보였다. 그리고 Fig. 4에서는 KYC3047과 KYC3076의 PCR2 염기서열을 S. cellulosum So ce26 sorB 유전자 중간부위, 즉 3,275번째 염기부터 3,716번째 염기까지 ( \( 442 \mathrm{bp}) \)의 서열과 비교한 것을 보였다. 두 Figure에서 보인 바와 같이, KYC3047과 KYC3076의 PCR1 염기서열은 So ce26의 sorA와 \(94\%\) 동일하였으며, PCR2 염기서열은 sorB 유전자와 \( 95 \% \) 동일하였다. 이러한 결과는 KYC3047과 KYC3076가 S. cellulosum So ce26과 마찬가지로 sorA와 sorB 유전자를 포함하는 soraphen 생합성 유전자군을 갖는 균주일 가능성이 매우 높음을 보여주었다.</p>