균주 WJ-1의 지방산 분석을 위해 methyl ester화된 FAME mixture를 GC를 사용하여 분석하였다. Genomic DNA 내의 G + C content와 퀴논은 reverse phase HPLC를 사용하여 분석하였다. DNA-DNA hybridization 분석을 위해 균주 WJ-1과 가장 유사한 Streptomyces spinoveruuсоsus NBRC14228 표준 균주를 사용하였다.
<h2>균주 WJ-1의 생화학적 특성 분석</h2> <p>균주 WJ-1의 지방산 분석은 Miller 등의 방법에 준하여 methyl ester화 시킨 fatty acid methyl esters (FAME) mixture를 제작한 후, Microbial Identification system (MIDI)의 지침에 따라 gas chromatography (GC)를 사용하였다. Genomic DNA 내 G + C content는 Meshbah 등에 의해서 제시된 방법에 따라 reverse phase HPLC를 사용하여 분석하였다. 퀴논은 Komagata 등의 방법에 따라서 reverse phase HPLC를 사용하여 분석하였다.</p> <h2>DNA-DNA hybridization</h2> <p>DNA-DNA hybridization (DDH) 분석을 위해서, 균주 \( \mathrm { WJ } -1 \) 와 16S rRNA 유전자 염기서열 상동성 및 계통분석발생적 유연관계가 가장 높은 표준 균주 Streptomyces spinoveruuсоsus NBRC14228, S. minutiscleroticus NBRC13000, S. glaucescens NBRC12774, S. glaucescens NBRC12774를 LB 고체배지에서 배양하고 각 균체로부터 genomic DNA를 DNA Extraction Kit로 추출하여 준비하였다. Negative standard는 E. coli KCCM12119 DNA를 사용하였다. 탐침용 DNA 준비 및 hybridization 반응은 DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ (Roche Applied Science, Germany)를 사용하여 수행하였다. Hybridization signal은 Quantity One Program (Bio-rad, USA)으로 측정하였고, 균주 WJ-1의 signal을 \( 100 \% \) 로 하여 hybridization 정도를 환산하였다. 각 균주들 에 대한 hybridization 값은 세 번의 반복 실험을 통하여 얻은 평균값으로 표시하였다.</p> <h2>균주 WJ-1의 성장 및 xylanase 생산 측정</h2> <p>균주 WJ-1을 LB 액체배지, \( 0.2 \% \) beechwood xylan이 포함된 LB 액체배지(LBX), \( 0.2 \% \) glucose가 포함된 LB 액체배지(LBG) 등에 접종한 후 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 일간 진탕 배양하였다. 세포배양액은 일정한 간격으로 채취하여 균의 성장을 흡광도 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였고, 균체 배양액을 \( 10,000 \times g \) 에서 20 분간 원심분리 후 균체를 제거한 상등액을 회수하여 세포 외로 분비 생산된 xylanase 활성을 측정하였다. Xylanase 활성은 dinitrosalicylic acid (DNS) 방법에 따라 수행하였으며, 흡광도 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 효소 반응으로 유리되는 환원당의 양을 측정하였다. 효소활성의 \( 1 \mathrm { U } \) (unit)는 beechwood xylan으로부터 1 분간 \( 1 \mu \mathrm { mol } \) 의 xylose를 생산하는 효소의 양으로 기준하였다.</p>