본 연구는 대식세포의 IL-1\(\beta\)발현에 따른 PG의 인과를 파악하기 위해, IL-1\(\beta\)발현의 RT-PCR로 수행하였다. THP-1 세포는 적은 양의 IL-1\(\beta\)를 분비하였으며, PG는 IL-1\(\beta\) 단백질 분비를 크게 증대시켰다. Akt의 활성화는 PG를 인산화 증가로 발생한다. 라파마이신은 IL-1\(\beta\)발현에 영향을 주었으며, 특히 IL-1\(\beta\)의 분비를 감소시켰다.
<h1>결 과</h1> <h2>전사체와 단백질단계에서 PG에 의한IL-1\(\beta \) 발현의 상향조절</h2> <p>대식세포에서한 IL-1\(\beta \)발현에 PG의 영향을 알아보기 위해, IL-1\( \beta \)발현의 전사수준을 RT-PCR로 조사하였다. 대식세포에서 IL-1\(\beta \) 발현에 PG의 영향을 알아보기 위해, PG가 없을 때 THP-1 세포에서 IL-1\(\beta \) 전사체가 상당히 약하게 발견된 반면 PG가 존재하는 경우 IL-1\(\beta \)의 전사체의 발현을 유도하였다. IL-1\(\beta \) 전사체의 유도는 PG처리 후 3시간 뒤부터 관찰되었고 9시간 까지 지속되었다. IL-1\(\beta \) 전사체의 발현은PG 10\(\mathrm{ng} / \mathrm{ml} \)이 존재했을 때 유도되었고 100과 1,000 ng/ml에서는 더 분명해졌다. PG가 사이토카인의 방출에 어떠한 영향을 주는지 아닌지를 조사하였다. THP-1 세포는 본질적으로 적은 양의 IL-1\( \beta \)를 분비하였고, PG는 IL-1\( \beta \)단백질 분비를 상당히 증가시켰다. PG가 없는 control cell과 비교해보면, IL-1\(\beta \)분비물의 양은 PG의 양이 \( 10,100,1,000 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \)일때 각각 1.5-, 1.6- and 3.0-fold 증가하였다.</p> <h2>PG로 인한 IL-1\( \beta \) 발현에 TLR2/4의 억제가 미치는 영향</h2>PG에 의한IL-1\(\beta \)발현에 TLRs의 관련성을 TLR2/4 억제제인 OxPAPC을 사용하여 조사하였다. OxPAPC은PG와 매개된 IL-1\(\beta \)의 발현을 전사와 단백질 수준에서 억제시켰다. PG에 의한 IL-1\( \beta \)의 분비는 OxPAPC의 존재 하에 거의 완전히 차단되어 대조군 세포만큼 줄어들고, PG에서 유도된 IL-1\( \beta \)전사체의 발현도 OxPAPC의 존재 하에 억제되었다. PG를 준비할 때 lipopolysaccharide (LPS)로 오염될 수도 있고, 오염된 LPS가 염증성 사이토카인과 케모카인의 발현을 증가시킬 수 있다. 따라서, LPS의 강한 억제제인 polymyxin B를 사용하여 PG에 의한 IL-1\(\beta \)의 상향조절에 LPS가 기여하는지 아닌지를 조사하였다. Polymyxin B는 PG에 의한 IL-1\( \beta \)분비나 전사를 약화시키지 않았다.</p> <h2>PG로 유도된 IL-1\( \beta \)발현에 mTOR과 Akt의 역할</h2> <p>PG는 Akt의 인산화를 증가시켜 Akt를 활성화시킨다. PG에 의한IL-1\(\beta \)발현에 Akt가 관여하는 지를 LY294002와 Akti IV 사용하여 조사하였다. LY294002는 quer-cetin의 morpholine 유도체로 Akt를 활성화시키는 phos-phoinositide 3-kinases (PI3Ks)를 강력히 억제한다. Akti IV는 Akt단백질 인산화효소의 억제제다. Akti IV는 IL-1\(\beta \)발현의 전사와 단백질 수준에 상당히 영향을 주었다. Akti IV는PG에 의한 IL-1 \(\beta \)유전자 발현의 유도를 현저히 감소시키고 IL-1\(\beta \)분비를 상당히 감소시켰다. 그러나 LY294002는 PG와 매개된 IL-1\(\beta \)의 유전자 전사와 분비에 영향을 주지 않았다. mTOR은 Akt의 하위분자이고 Akt의 생물학적 효과에 역할을 담당하므로, mTOR의 억제제인 rapamycin을 사용하여 PG에 의한 IL-1\( \beta \)의 발현에 mTOR 가 작용을 하는지 조사하였다. Rapamycin은 IL-1\( \beta \)발현에 영향을 주었다. 특히 rapamycin은 IL-1\( \beta \)의 전사보다는 IL-1\(\beta \)의 분비를 감소시켰다.</p>