시험을 위해 ALDH활성 측정은 Tottmar 등의 방법을 변형하여 수행하였고, tyrosinase 활성 저해능은 Yagi의 방법에 따라 측정하였다. 또한 Elastase 저해 활성은 James의 방법을 따라 측정하였다. 3반복 실험을 통해 얻은 결과는 평균과 표준편차로 나타내었다.
<h2>\( \mathrm{ALDH} \) 활성 측정</h2><p>\( \mathrm{ALDH} \) 의 활성도는 Tottmar 등의 방법을 변형하여 \( \mathrm{NADH} \) 생성에 따른 흡광도의 변화를 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다. 즉, \( \mathrm{ALDH} \) 의 활성도 측정을 위해 증류수, \( 1 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer ( \( \mathrm{pH} \) 7.5), \( 3 \mathrm{M} \mathrm{KCl} \), 시료, \( 20 \mathrm{mM} \) NAD, \( 0.33 \) M 2-mer-captoethanol, \( 0.1 \mathrm{M} \) acetaldehyde를 혼합한 다음 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 분간 반응시키고 ALDH (1 unit/ml)를 가하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 대조구는 시료대신 증류수를 넣은 것으로 하였다. Positive control은 \( \mathrm{ADH} \) 활성 영향 측정에서 사용한 것으로 하였으며, \( \mathrm{ALDH} \) 의 활성은 \( \mathrm{ADH} \) 활성 계산식에 따라 측정 되었다.</p><h2>Tyrosinase 저해활성 측정</h2><p>시료의 tyrosinase 활성 저해능은 Yagi의 방법에 따라 측정하였다. 즉, \( 50 \mathrm{mM} \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.5), 기질인 \( 2 \mathrm{mM} \) L-tyrosine 용액 및 시료 용액의 혼합액에 mush-room tyrosinase \( (1,000 \mathrm{unit} / \mathrm{ml}) \), 초순수를 첨가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 반응시킨 다음 \( 490 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도 값 \( \left(\mathrm{S}_{\mathrm{Abs}}\right) \) 을 측정하였다. 이때 효소액 대신에 \( 50 \mathrm{mM} \) sodium phosphate buffer \( \left(\mathrm{pH}\right. \) 6.5) \( 20 \mu l \) 를 첨가하여 흡광도를 측정한 값 \( \left(\mathrm{B}_{\mathrm{Abs}}\right) \), 시료 용액 대신에 증류수를 \( 10 \mu l \) 를 첨가하여 흡광도를 측정한 값 \( \left(C_{A b s}\right) \) 을 다음의 식에 의해 계산하였다.</p><p>저해율 \( (\%)=\left[1-\left(\mathrm{S}_{\mathrm{Abs}}-\mathrm{B}_{\mathrm{Abs}}\right) / \mathrm{CAbs}\right] \times 100 \)</p><p>SAbs: Sample absorbance</p><p>BAbs: Blank absorbance</p><p>\( \mathrm{C}_{\text {Abs: }} \) Control absorbance</p><h2>Elastase 저해활성 측정</h2><p>시료의 elastase 저해활성은 James의 방법에 따라 측정하였다. 즉, \( 0.05 \mathrm{M} \) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer \( (\mathrm{pH} \) 8.2)에 기질인 \( 0.5 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{N} \)-succinyl-Ala-Ala-Ala-pnitroniline를 용해시킨 후 시료와 효소인 elastase (1 unit/ml) 용액을 첨가하였다. 이 혼합액을 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 분간 반응시킨 후 \( 415 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. Elastase 저해활성은 다음의 식에 의해 계산하였다.</p><p>저해활성 \( (\%)=[1-\mathrm{S} / \mathrm{C}] \times 100 \)</p><p>S: 시료 첨가구의 흡광도</p><p>C: 무첨가구의 흡광도</p><h2>통계분석</h2><p>본 실험에서 얻은 결과는 각 시료마다 세 번씩 반복 실험을 통해 실험군당 평균과 표준편차를 계산하여 나타내었다.</p>