경남과 부산지역의 가지 재배 하우스 내 근권 토양에서 세균 75균주를 분리해 PDA배지에서 균사생장 억제 효과를 검사한 결과 P99, R1, R2, R3 및 W1균주가 억제효과를 보였고 그중 P99와 W1균주에 의한 억제효과가 가장 높았다. 동정의 정확성을 위해 P99와 W1균주를 API system으로 동정한 결과, P99 균주의 유사도는 \( 82.1 \% \), W1균주는 \( 88.5 \% \)로 Bergey's manual에 의한 동정과 일치했다.
<p>발병도 \( ( \%)= \frac {\sum( \text { 발병수 } \times \text { 계수 } ) } { 4 \times \text { 엽수 } } \times 100 \)</p> <p>계수; 0-발병무, 1-병반면 적율 \( 1 \sim 5 \% \), 2-병반면적율 \( 5.1 \sim \) \( 20 \% \), 3-병반면적율 \( 20.1 \sim 40 \% \), 4-병반면적율 \( 40 \% \) 이상.</p> <p>방제 효과가 확인된 생물농약( \( 10 ^ { 9 } \) cells/g)을 농도별로 하우스내에서 방제효과를 검정하기 위해 50,100,300,500배로 희석하여 가지의 잎, 꽃 및 열매에 처리한 후 24시간 후에 병원균을 접종하고 상대습도 \( 90 \% \), \(25 \pm 5 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 하우스에 보관하면서 2일 간격으로 밭병도를 조사하여 방제가로 환산하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>길항세균의 선발</h2> <p>경남 김해시와 부산시 대저동 지역의 가지 재배 하우스 내 근권 토양에서 세균 75균주를 분리하여 PDA배지 상에서 병원균에 대한 균사생장 억제 효과를 검정한 결과 W1, P99, R1, R2 및 R3균주가 균사생장 억제효과를 보였으며 그 중 W1과 P99균주에 의한 억제효과가 가장 높았다.</p> <h2>길항균의 동정</h2> <p>병원균에 대한 길항력이 우수한 것으로 확인된 W1균주와 P99균주를 동정하기 위하여 생리적, 배양적 특성을 조사하고 Bergey's manual에 따라 동정한 결과, W1균주는 Bacillus subtilis, P99균주는 Pseudomonas putida로 동정되었다. 동정의 정확성을 기하기 위해 2균주를 API system으로 동정한 결과, W1균주의 유사도는 \( 88.5 \% \), P99 균주는 \( 82.1 \% \) 로 Bergey's manual에 의한 동정과 일치하였다.</p> <h2>대량배양배지의 선발</h2> <p>대량배양 배지를 선발하기 위하여 \( 5 \% \) 의 보리맥아, 대두박 및 비지 배지에 각각 P99와 W1 균주롤 접종하고 3일간 배양하여 10 단계 평판 희석법으로 세균수를 측정한 결과 P99 균주는 비지 배지에서 \( 3.5 \times 10 ^ { 9 } \mathrm { CFU } / \mathrm { m } \) 으로 세균 수가 가장 많았으며, W1균주는 대두박 배지에서 \( 3.7 \times 10 ^ { 9 } \) \( \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 으로 가장 효과가 좋았다.</p> <h2>생물농약의제조</h2> <p>길항세균 W1 및 P99 균주는 비지배지에 배양하고 여기에 전착제와 보호제 및 영양원을 혼합하여 윈디오븐에서 건조한 후 브라인더로 마쇄하여 여러종류의 수화제 형태의 생물농약으로 제조하였는데 P. putida P99 균주에 대해서는 P99S(콩가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 밀가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 을리브 오일 \( 50 \mathrm { cc } / \) \( \ell), \mathrm { P } 99 \mathrm { ~B } ( \) 비지가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 밀가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \) 올리브 오일 \( 50 \mathrm { cc } / \ell) \) 제제, B. subtilis W1 균주에 대해서는 BSA(옥수수 전분 \( 400 \mathrm { ~g } / \ell \), 콩기름 \( 50 \mathrm { cc } / \ell \), 검은설탕 \( 25 \mathrm { ~g } / \ell), \mathrm { BSB } \) (콩가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 밀가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 올리브 오일 \( 50 \mathrm { cc } / \ell), \mathrm { BSC } ( \) 쌀 가루 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \), 옥수수전분 \( 200 \mathrm { ~g } / \ell \) 콩기름 \( 50 \mathrm { cc } / \ell), \mathrm { BSD } \) (찹쌀가루 \( 400 \mathrm { ~g } / \ell \), 해바라기유 \(50cc/ l \) ) 제제로 제조하였다.</p>