열수추출물의 제조는 분쇄한 유자 과피 \( 100 \mathrm { ~g } \)에 \( 5 \)배의 증류수를 \( 70 \)\(^\circ \mathrm{C}\) 수욕 상에서 \( 3 \)시간 동안 환류냉각하면서 2회 추출하고, 이를 여과하여 \( 90 \% \) diethylene glycol 용액 \( 10 \mathrm { ml } \) 및 \(1 \mathrm { N } - \mathrm { NaOH } 1 \mathrm { ml } \) 를 차례로 가하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 1 \)시간 둔 후 \( 420 \mathrm { ~nm } \) 에서의 흡광도를 측정했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>과피 추출물 제조 및 수율 측정</h2> <p>유자는 \( 2007 \)년 생산된 과숙과를 거제, 고성, 고흥 및 남해에서 산지로부터 직접 구입하였다. 유자는 흐르는 물에 세척하여 자연 건조한 다음 과피를 취하여 분쇄하였다. 열수추출물의 제조는 분쇄한 유자 과피 \( 100 \mathrm { ~g } \)에 \( 5 \)배의 증류수를 가하여 \( 70 \)°C 수욕 상에서 \( 3 \)시간 동안 환류냉각하면서 \( 2 \)회 반복추출하였다. 추출물은 여과 후 동결건조 하였으며, 건조물의 무게를 측정한 다음 \( -70 \)°C 동결고에 보관해 두고 실험에 사용하였다. 추출 수율은 추출 전 유자 시료에 대한 추출물의완전건고 후 무게백분율로 계산하였다.</p> <h2>추출물의 총 페놀 및 플라보노이드</h2> <p>총 페놀 함량은 Folin-Denis법에 따라 각 추출물 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 Foline-Ciocalteau 시약 및 \( 10 \% \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \) 용액을 각 \( 1 \mathrm { ml } \) 씩 차례로 가한 다음 실온에서 \( 1 \)시간 정치한 후 \( 700 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광 도를 측정하였다. Caffeic acid (Sigma Co., USA)를 사용하여 얻은 표준검량선으로부터 총 페놀 함량을 산출하였다.</p> <p>총 플라보노이드는 Moreno 등의 방법에 따라 추출물 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 \( 10 \% \) aluminum nitrate \( 0.1 \mathrm { ml } , 1 \mathrm { M } \) potassium ace-tate \( 0.1 \mathrm { ml } \) 및 ethanol \( 4.3 \mathrm { ml } \) 를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 \( 40 \)분간 정치한 다음 \( 415 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. Quercetin (Sigma Co., USA)을 표준물질로 하여 얻은 표준검량선으로부터 추출물의 총 플라보노이드 함량을 계산하 였다.</p> <h2>추출물의 hesperidin 및 naringin 함량</h2> <p>유자 과육 및 과피의 hesperidin 및 naringin 함량은 Davis 변법에 따라 수행하였다. 시료 \( 10 \mathrm { ~g } \) 에 증류수 및 메 탄올을 각각 \( 30 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \( 90 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온수조에서 \( 30 \) 분간 가온 한 후 냉각하여 \( 100 \mathrm { ml } \) 로 정용하였다. 이를 여과하여 일 정량을 취한 후 \( 90 \% \) diethylene glycol 용액 \( 10 \mathrm { ml } \) 및 1 \( \mathrm { N } - \mathrm { NaOH } 1 \mathrm { ml } \) 를 차례로 가하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 1 \)시간 가온 한 후 \( 420 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 시료 중 함량은 표준물질 인 hesperidin 및 naringin (Sigma Co., USA)을 사용하여 표 준검량곡선을 작성하여 산출하였다.</p>