Neuraminidase 활성 저해 시험에서 인플루엔자 바이러스와 같이 바이러스의 침입과 증식에 표면의 HA와 NA 단백질 system을 이용하는 바이러스들에 대한 항바이러스 활성 여부롤 neuraminidase(NA) inhibition assay로 조사하였다. 에탄올 침전물 고분자의 성분은 \( 1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)의 시료용액을 \( 4 \mathrm{M} \) TFA와 \( 1: 1(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 혼합하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 네시간 동안 가수분해 후 Speed Vac에서 건조시킨 후 증류수 \( 200 \mu \mathrm{L} \)에 용해시켜 산가수분해물을 만들고 PMP로 표식하고 HPLC로 분석하였다.
<h2>Neuraminidase 활성 저해 시험</h2> <p>Influenza virus(Flu) 등과 같이, 바이러스의 침입과 증식에 바이러스 표면의 haemagglutinin(HA)과 neuraminidase(NA) 단백질 system을 이용하는 바이러스들에 대한 항바이러스 활성 여부롤 neuraminidase(NA) inhibition assay로 조사하였다. NA 호소 활성 저해 실험에는 낙엽진흙 버섯 자실체외에, 노루궁뎅이버섯 \( (H \). erinacium \( ) \), 운지버섯 \( (C \). vesicolor \( ) \), 상황버섯 \( (P \). linteus), 잔나비불로초 ( \( G \). applanatum ), 차가버섯 (I. obliquus)의 자실체 열수추출물을 낙엽진흙 버섯의 경우와 동일한 방법으로 제조하여 각 버섯 열수 추출물의 NA 효소 활성 저해를 통한 항바이러스 활성을 비교하고, 가장 우수한 것으로 나타난 낙엽진흙 버섯의 열수 추출 에탄올 침전물 \( (\mathrm{EP}) \)에 대해 농도별로 효소 저해 활성을 조사하였다. NA 효소액 \( 10 \mu \mathrm{L}\left(2.5 \times 10^{-3} \mathrm{U}\right), 0.2 \mathrm{mM} \)의 기질 (MUNANA) \( 40 \mu \mathrm{L} \), 농도별 시료액 (열수 추출물 또는 에탄올 침전물) \( 10 \mu \mathrm{L} \)를 \( 40 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer(pH 5.0)에 첨가하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15 분 반응시킨 후 \( 0.1 \mathrm{M} \) \(glycine-\mathrm{NaOH} \) buffer(pH 10.4) \( 2.94 \mathrm{~mL} \)을 첨가하여 반응을 종료시키고 spectrofluorophotometer(Bio-Rad, USA)로 Ex. 360 \( \mathrm{nm} / \mathrm{Em} .440 \mathrm{~nm} \)에서 fluorescence를 측정하여 효소활성 저해여부를 조사하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군으로 측정한 fluorescence 값을 100%로 하였으며, NA에 대한 표준 저해제로는 sialyllactose(Sigma)를 사용하였다.</p> <h2>에탄올 침전물 고분자의 성분 분석</h2> <p>항바이러스 활성 물질의 성분당 분석을 위해 \( 1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)의 시료용액을 \( 4 \mathrm{M} \) trifluoroacetic acid(TFA)와 \( 1: 1(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)로 혼합하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 동안 가수분해 한 후 Speed \( \mathrm{Vac} \) 에서 건조시킨 후 증류수 \( 200 \mu \mathrm{L} \)에 녹여 산가수분해물을 만들고, Honda 등의 방법에 따라 PMP(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone)로 표식하고, \( 10 \mu \)씩 injection하고 Shim-pack CLC-ODS column \( (6.0 \mathrm{~mm} \times 15 \mathrm{~cm} \), Shimadzu, Japan \( ) \) 상에서 HPLC(Dionex, USA)로 분석하였다. \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer/10\% acetonitrile \( (\mathrm{pH} \quad 7.0) \)로 \( 1.0 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 속도로 용출하면서 UV detector(Dionex, USA)로 \( 245 \mathrm{~nm} \) 에서 검출하였다. 표준시료는 각 \( 20 \mathrm{mM} \) 의 fucose, mannose, glucose, galactose, xylose를 PMP로 표식하여 사용하였다. 총당은 phenol-sulfuric acid method로 분석하고, 단백질은 BSA를 표준물질로하여 Bradford assay로 분석, 정량하였다.</p>