다른 유용버섯류를 번식시키는 방법을 이해하기 위해 곰팡이 종류의 짝짓기 유전자가 연구되었다. pSC13 코스미드 클론은 Z 영역의 일부와 A\(\alpha\) 짝짓기 활성에 필요한 모든 Y 영역을 갖는 것으로 밝혀졌다. Y 영역은 짝짓기 중 결실체를 형성하는 과정에 관여한다. A\(\alpha\)3 짝짓기 궤적의 Y 영역의 뉴클레오티드 서열은 게놈 라이브러리를 준비하고 Y 영역의 뉴클레오티드 서열을 분리함으로써 결정되었다. 전체 Y 영역 염기서열은 3,120 bp이고 1-71 A\(\alpha\)3 mating locus의 염기서열과 높은 상동성을 갖는다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <p>균류의 접합유전자(mating gene)를 분리하여 분석하고 다른 유용버섯류의 육종에 응용하기 위하여 생활사가 약 2 주 이내로 아주 짧게 끝나면서 ultialleleic mating type을 지니는 치마버섯(S. comune)의 mating gene을 이용하였다. 먼저 관련 유전자의 분리를 위하여 제조된 genomic library 로 부터 분리된 pSC13 cosmid clone이 A \( \alpha \) mating activity에 필요한 Z-region의 일부와 Y-region 전부를 지니고 있음을 확인하였다[10]. 전사방향이 Z-region에 대하여 반대로 위치하는 Y-region은 mating이 일어날 때 mating alleles type에 따라 자실체 형성과정에 반드시 관여하는 것으로 알려져 있으며, 따라서 분리된 cosmid clone에 대한 mating activity를 확인하기 위하여 이미 알려진 A \( \alpha 1 \sim \mathrm { A } \alpha \) 9의 A \( \alpha \) mating alleles에 대하여 각각의 실험을 수행하였다. 그 결과 1-71 균주에서 \( \mathrm { Z } 3 \) 의 일부와 및 Y3-region 모두를 포함하는 약 \( 5.7 \mathrm { ~kb } \) 의 cosmid clone \( \mathrm { pSC } 3 \) 이 \( \mathrm { A } \alpha 1 \) 을 제외한 \( \mathrm { A } \alpha \) 2 및 A \( \alpha 4 \) 9까지의 allele type 균주에 대하여 모두 activity를 나타내었으며 이는 남미산의 A \( \alpha 3 \) mating locus 와 같은 결과를 나타내었다. 그리고 Fig. 1의 Y-region의 염기서열에서 나타나 있는 3개의 hoemodomain은 mating activity의 발현에 \( \mathrm { A } \alpha 1 \) mating allele type을 포함한 mating activity 유도에 펄수적인 부분으로 알려져 있으며[19], 본 연구의 결과에서도 같은 위치에 존재하는 것으로 나타났다.</p> <p>접합유전자의 활성유도에 대하여 Specht 등[19]은 Z-region과 Y-region에서 만들어진 유전자 산물들이 multimeric protein complex 형태가 되어 자실체 발생 조절에 관여할 것으로 추측하고 있으며 이에 관한 Z-Y polypeptide complex 에 의한 활성화 모델을 제시한 바 있다. 그리고 치마버섯의 균사로부터 genomic library를 제조하고 여기에서 분리된 mating activity 함유 \( \mathrm { A } \alpha 3 \) mating locus의 염기서열 결정을 위하여 분리된 cosmid clone중 Z3-region을 제외한 Y-region의 염기서열을 결정하였다.</p> <p>결정된 Y- region의 전체 DNA sequence는 3,120 bp로서 Fig. 1에 나타나 있으며, 이는 남미산 치마버섯(1-71)의 mat-ing 활성을 나타내는 \( \mathrm { A } \alpha 3 \) locus 염기서열중에 Y-region의 모든 sequence를 포함하고 있음을 일차적으로 확인하였다. 전기영동에서는 second loading으로 한개 반응당 약 \( 250 \mathrm { bp } \)를 읽었으며, 이들 subclone들의 sequence overlapping 부위로부터는 oligonucleotide synthesizer로 primer를 합성하여 전체 sequence를 양방향으로 확인하였다. Blast program을 사용한 전체의 nucleotide 염기서열의 homology 비교분석에서는 1-71에 대하여 약 \( 96 \% \) 의 높은 homology를 나타내었으며, 1-71 A \( \alpha 3 \) mating locus에서 모두 7개로 추정되는 exon의 위치에 따라 그에 대한 homology 결과를 Fig. 1에서 homeodomain과 acidic-rich, basic rich region, serine rich region 등과 함께 나타내었다.</p>