PGA-HM과 PGA-LM이 등피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 실험하였다. 그 결과, PGA-HM을 투여한 경우, 대조군과 거의 차이가 없었으나, PGA-LM을 투여한 경우, 대조군에 비해 epidermis의 두께가 현저히 줄었고, 과각화증, 표피증식증, 과과립증, 비만세포의 침윤 등이 감소한 효과를 보였다. 결과적으로 PGA-HM보다 PGA-LM이 Treg를 유도하여 IgE 및 염증 사이토카인의 생산 및 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구의 증식과 활성화가 억제되어 아토피 완화 효과가 있는것으로 추정된다.
<h2>피부조직 분석</h2> <p>PGA-LM 투여로 아토피유발 NC/Nga 생쥐의 등피부 발진 부위에서 foxp3 mRNA 유전자 발현량이 대조군에 비하여 약 2배 이상 증가를 나타내는 것을 확인한 후, PGA-HM과 PGA-LM이 등피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 등피부를 적출한 후 H&E 염색과 dermis에 침윤된 비만 세포(mast cell)를 관찰하기 위하여 toluidine blue 염색을 실시하였다(Fig. 5, Fig. 6). 그 결과 Fig. 5A와 Fig. 6A는 SPF 조건에서 사육한 15주령의 정상 NC/Nga 생쥐의 피부 조직으로 epidermis가 얇게 분포하고 비만세포는 거의 관찰이 안 되는 것을 알 수 있다. 그러나 Fig. 5B와 Fig. 6B는 conventional 조건에서 사육하고 BMAC를 도포하여 아토피 피부발진을 유도한 대조군으로 epidermis의 두께가 비후(hyperplasia)로 현저하게 확장되어, 그 주변에 과각화증(hyperkeratosis), 표피증식증(acanthosis), 과과립증(hypergranulosis) 그리고 비만세포의 침윤 등이 정상군에 비하여 현저하게 증가되었다. BMAC를 도포하여 아토피 피부발진을 유도한 NC/Nga 생쥐에 양성대조군으로 FK506 \( 0.3 \% \)를 피부발진 부위에 도포한 Fig. 5C와 Fig. 6C는 대조군에 비하여 정상군에 가깝게 epidermis의 두께가 줄어들었고, 그 주변에 hyperkeratosis, acanthosis, hypergranulosis 그리고 비만세포의 침윤이 현저하게 감소하였다. 그러나 Fig.5D와 Fig. 6D는 BMAC를 NC/Nga 생쥐의 등 부위에 도포하여 아토피 피부발진을 유도한 NC/Nga 생쥐모델에 PGA-HM을 3주간 경구 투여한 결과로, 대조군에 비하여 epidermis의 두께가 약간 줄어들었으나, epidermis의 두께와 그 주변에 hyperkeratosis, acanthosis, hypergranulosis 그리고 비만세포의 침윤 등이 대조군과 차이가 없었다. Fig. 5E와 Fig. 6E는 PGA-LM을 3주간 투여한 결과로, 대조군에 비하여 epidermis의 두께가 현저하게 줄었고, hyperkeratosis, acanthosis, hypergranulosis 그리고 비만세포의 침윤 등이 감소하였다.</p> <p>이러한 결과는 Yoshifumi 등이 royal jelly를 피부발진된 NC/Nga 생쥐에 경구 투여하여 피부조직과 ear의 H&E 조직검사에서 epidermis의 두께가 현저하게 대조군에 비하여 줄어들었고, 호산구 및 비만세포의 침윤도 억제하였다는 결과와 일치하였다.</p> <h2>면역화학조직염색</h2> <p>아토피 질환에서는 호산구, 비만세포, 호염기구, 그리고 Th2 세포의 표면분자인 CCR3가 다량 발현된다. 또한 eotaxin, RANTES(regulated and normal T cell expressed and secreted), 단핵구 화학조성 단백질(monocyte chemotactic protein(MCP)-3) 및 MCP-4와 높은 친화력으로 결합한다. 그 중 비만세포는 세포질 내에 과립을 풍부하게 가지고 있는 세포로서 주로 결체조직과 점막에 존재하면서 알레르기 염증반응에 관여하고 IgE-FceRI 반응에 의해 과립내의 화학 매개체(histamine, cysteinyl leukotrienes, prostaglandins)와 사이토카인(IL-5, TNF-alpha) 등을 분비하면서 알레르기 염증의 초기반응과 후기 반응을 일으키고 만성적으로 염증을 지속시키는 데에 주요한 역할을 한다. 그리고 아토피 피부발진이 심화되면 ALN(axillary lymph node)으로 Th2 세포, 호산구, 호염기구, 단핵구, 비만세포 등 면역 염증 세포가 증가하게 되어 만성피부질환 동물의 피부발진을 계속 유지하고 악화시키는데 기여하게 된다.</p> <p>NC/Nga 생쥐의 ALN을 적출하여 면역 조직화학염색을 한 후 조직에 침윤된 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구 세포를 광학현미경으로 관찰하였다. 그 결과 Fig. 7에서 보듯이 BMAC를 도포하지 않은 정상 NC/Nga 생쥐군(Fig. 7A)에 비하여 대조군(Fig. 7B)의 ALN에서 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구 세포들이 ALN 조직사이에 침윤되어 현저하게 중가하였다. 또한 \( 0.3 \% \)의 FK506 도포군(Fig. 7C)은 정상군에 가깝게 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구 세포들이 ALN의 조직사이에서 감소되었다. PGA-LM 투여군(Fig. 7E)은 ALN에서 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구 세포가 대조군에 비하여 감소하였고, PGA-HM 투여군(Fig. 7D)은 대조군과 차이가 없었다. 이러한 결과는 NC/Nga 생쥐에 PGA-LM 투여로 \( \mathrm{CD}4^{+} \mathrm{CD}25^{+} \mathrm{foxp}3^{+} \) Treg 세포가 유도되어 Treg 세포에 의한 Th2 세포의 면역조절 작용으로 IL-5의 분비가 억제되어 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 세포의 증식과 활성화가 억제되어 아토피 피부발진의 완화를 가져오는 것으로 생각된다.</p> <p>이상의 결과로 아토피 피부염을 유발한 NC/Nga 생쥐에서 PGA-HM과 PGA-LM을 경구투여한 후 면역글로블린 측정, 면역조직화학분석 및 \( \mathrm{foxp3}^{+} \) mRNA 유전자 발현 측정 등을 분석하였다. 그 결과 PGA-HM보다 PGA-LM이 아토피 피부발진 NC/Nga 생쥐 모델에서 Treg를 유도하여 IgE 및 염증 사이토카인의 생산 및 \( \mathrm{CCR3}^{+} \) 호산구의 증식과 활성화가 억제되어 아토피조절 효과를 나타내는 것으로 생각되었다. Selliah 등의 연구결과를 보면 in vitro에서 고분자 물질보다 저분자 물질을 투입했을 때 자극받은 T 세포의 anti-CD3 mAb가 눈에 띄게 증가하였다. 이렇듯 in vitro 에서는 고분자 저분자의 실험은 몇 가지 있으나 아직 in vivo 실험은 없으며, in vivo에서 고분자인 PGA-HM보다 저분자인 PGA-LM이 아토피 피부발진 억제에 효과적인 결과는 없다.</p>