본 논문에서 SNP를 처리한 결과 ERK의 활성이 증가함으로써 RA가 유도하는 탈분화에 대한 ERK의 중요한 역할을 확인하였다. PD98059을 사용하여 ERK 신호전달경로를 차단한 후, SNP와 RA를 함께 처리하여 type Ⅱ collagen과 Sox-9의 발현량이 회복되는 것을 확인했다. 즉 RA는 NO가 유도한 탈분화를 끌어내고 ERK 신호전달경로를 통해 조절된다는 것을 확인했다.
<h2>ERK 신호전달경로를 통한 RA 유도 탈분화의 조절</h2> <p>기존에 SNP를 처리하여 type Ⅱ collagen 발현량이 감소할 때 ERK의 활성이 증가된다는 논문이 보고된 바 있다. 즉 이와 같은 결과는 SNP가 유도하는 연골세포의 탈분화는 ERK의 활성과 밀접한 관련이 있다라는 것을 말해주는 연구 결과라 할 수 있다. 따라서, RA가 유도하는 탈분화에 있어서도 ERK의 활성이 중요한 역할을 하는지 알아보기 위해 RA를 처리한 후, ERK의 활성을 확인 할 수 있는 pERK의 발현량을 확인해 보았다. 그 결과 RA를 처리한 후 약 1시간이 지난 후 pERK의 발현이 대조군 세포와 비교 시 약 2.6배 증가하였으며 그 후 서서히 감소되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3A). 이러한 결과는 RA를 단독으로 처리한 군과 비교했을 때 SNP를 함께 처리한 군에서 RA를 처리한 후 약 1시간이 지난 후 pERK의 발현량이 더욱 증가하여 대조군과 비교했을 때 약 3배 이상 증가하여 발현되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3B). 또한 pERK의 발현이 SNP처리에 의해 6시간까지 강하게 발현되는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3B). 이와 같은 결과는 RA가 유도하는 탈분화의 조절에 있어서 pERK 신호전경로가 중요한 역할을 한다는 것을 말해준다.</p> <p>따라서 ERK의 억제자인 PD98059을 사용하여 RA가 유도하는 탈분화에 미치는 ERK의 역할에 관한 연구를 수행하였다(Fig. 4). PD98059을 1시간 먼저 처리하여 ERK 신호전달경로를 차단 한 뒤, SNP와 RA를 함께 처리하여 pERK, type Ⅱ collagen, Sox-9의 발현량을 확인해 보았다. 그 결과, PD98059을 처리한 군에서 RA와 SNP에 의해 감소하였던 type Ⅱ col-lagen이 약 3.5배 회복되는 것을 확인 할 수 있었고, Sox-9의 발현량 역시 약 2배 회복되는 것을 확인 할 수 있었다(Fig.4A). 이와 같은 결과는 Alcian blue staining을 통해서도 유사한 경향을 보이는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 4B). 즉, 이러한 모든 결과를 통해 RA는 NO가 유도하는 탈분화를 촉진하고 이와 같은 효과는 ERK 신호전달경로를 통해 조절된다는 것을 확인 할 수 있었다.</p> <h1>고 찰</h1> <p>연골의 탈분화, 염증 반응, 세포사멸과 같은 연골의 퇴행성 변화는 관절염과 같은 관절 질환을 유발한다. 따라서 이와 관련한 단백질 및 유전자의 발굴과 신호전달경로의 규명은 관절염을 연구하는데 있어서 매우 중요하다.</p>