질산염이 많이 함유된 식품을 다량 섭취하게 되면 중독증상과 발암물질인 nitrosamine을 생성할 수도 있다. 박층 크로마토그래피는 일정 두께를 가진 박층의 흡착제를 고정상으로 하고, 이동하는 용매상과 고정상에 대한 친화력이 물질에 따라 다른 것을 이용한 분리분석법으로써 각 분획물을 감압 증류하여 ES-R1은 하얀 분말을, ES-R2은 노란 분말을 ES-R3, ES-R4은 연두색 분말을 ES-R5, ES- R6에서는 갈색 분말을 얻었다. DPPH를 통한 전자 소거능, 산화 지질 형성능 억제율과, 아질산염 소거능 측정을 통해 에틸아세테이트의 추출물이 가장 좋은 항산화 활성도를 나타냄을 알 수 있었고, 다시 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 분획하였다. 초석잠의 항산화 활성도가 높은 부분만을 취해 분획하여 나타난 UV-VIS spectral data와 동일한 결과를 얻은 결과 본 추출물 중에도 여러 phenolic compounds가 존재함을 추정할 수 있다.
<h2>아질산염 소거능 측정</h2> <p>아질산염은 육제품의 발색과 Clostridium botulinum 성장저해제로 각종 식품에 첨가되고 있다. 질산염은 식물체내, 소화기관 및 식품의 저장과정에서 질산환원효소, 환원세균 등의 작용에 의해 아질산염으로 환원된다. 질산염이 많이 함유된 식품을 다량 섭취하게 되면 methemoglobin 증 등의 중독증상과 아질산염과 제2급 및 3급 아민과의 nitroso화 반응이 위장내의 낮은 산성조건에서 쉽게 일어나서 발암물질인 nitrosamine을 생성할 수도 있다. 아질산염의 nitrosamine화 반응이 인체와 유사한 \( \mathrm{pH} \)에서 최적 조건을 가지므로, \( \mathrm{pH} 1.2,3.03,5.97 \) 에서 각 추출물의 아질산염의 분해작용을 측정한 결과를 Fig. 5에 나타내었다. \( \mathrm{pH} \) 가 낮을수록 높은 소거능을 보였으며 특히 \( \mathrm{pH} 1.2 \) 에서는 모든 추출물군에서 \( 80 \sim 90 \% \) 이상의 분해능을 보이고 있다. \( \mathrm{pH} 3.03 \) 과 \( \mathrm{pH} 5.97 \)에서는 에틸아세테이트 추출물이 각각 \( 83.86 \%\), \(54.35 \% \) 를 나타내며 다른 추출물에 비해 우수한 소거능을 보이고 있다.</p> <h2>박층 크라마토그래피를 이용한 칼럼 크로마토그래피 분획물의 분리</h2> <p>박층 크로마토그래피는 일정 두께를 가진 박층의 흡착제를 고정상으로 하고, 이동하는 용매상과 고정상에 대한 친화력이 물질에 따라 다른 것을 이용한 분리분석법으로 분리된 이동거리 Rf로 분석하는 장치이다. 실리카겔 칼럼을 이용해 \( 1 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 속도로 용출시킨 에틸아세테이트의 추출물을 박층 크로마토그래피를 이용해 64 개의 fraction을 같은 Rf값을 가지고 있는 6개의 분획으로 나누었고 이를 각각 ES-R1 \( (1 \sim 3) \), ES-R2 \( (4 \sim 6) \), ES-R3 \( (7 \sim 14) \), ES-R4 \( (15 \sim 28) \), ES-R5 \( (29 \sim 36) \), ES-R6 \( (37 \sim 65) \) 로 명명하였다. 분리되어진 띠의 확인은 UV \( 254 \mathrm{~nm} \) 와 \( 1 \% \mathrm{~Ce}\left(\mathrm{SO}_{4}\right) / 10 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 를 이용하였으며 그 결과를 Fig.6에 나타내었다. 각 분획물을 감압 증류하여 ES-R1에서는 하얀 분말을, ES-R2에서는 노란 분말을 ES-R3, ES-R4에서는 연두색 분말을 ES-R5, ES- R6에서는 갈색 분말을 얻었다. 각 띠는 높은 Rf에서 낮은 Rf으로 이동되며 이것은 비극성에서 극성으로 옮겨가는 것을 의미한다.</p> <h2>칼럼 크로마토 그래피를 이용한 에틸아세테이트 추출물의 분리 및 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH를 통한 전자 소거능, 산화 지질 형성능 억제율과, 아질산염 소거능 측정을 통해 에틸아세테이트의 추출물이 가장 좋은 항산화 활성도를 나타냄을 알 수 있으므로, 다시 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 분획 하였다. 각 분획별 흡광도의 변화를 Fig. 7에 나타내었으며 최대 흡광도값을 Table 2에 나타내었으며 칼럼 분획물은 \( 280 \sim 330 \mathrm{~nm} \) 사이에서 높은 흡광도를 나타내고 있다. 각 분획을 DPPH법을 이용해 항산화 활성도를 측정하여 Fig. 8 에 나타내었으며, \( 325 \mathrm{~nm} \) 및 \( 289 \mathrm{~nm} \) 에서 최대흡광도 값을 가지는 값인 ES-5가 가장 높은 활성도를 나타내었다. 이러한 모양은 phenolic acids 과 flavonids 의 UV-VIS spectral 값인 \( 200 \sim 400 \mathrm{~nm} \) 사이와 일치하며 특히 flavonids 계열 중 flavones의 최대 흡광범위로 알려져 있는 띠 Ⅰ이 \( 300 \sim 330 \mathrm{~nm} \), 띠 Ⅱ가 \( 275 \sim 295 \mathrm{~nm} \) 와 일치하는 범위를 나타내고 있다. 이러한 범위는 초석잠(Stachyssieboldii MIQ.)에서 항산화 활성도가 높은 부분만을 취해 분획하여 나타난 UV-VIS spectral data의 범위와 같으므로 본 연구의 추출물 중에도 여러 phenolic compounds가 존재함을 추정할 수 있으며, 보다 정확한 구조는 차후 실험에서 C-NMR, H-NMR, IR등을 이용해 밝힐 예정이다.</p>