본 논문에서 건조된 마디풀 \( 500 \mathrm{~g} \) 을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 \( 5 \mathrm{~L} \) 를 이용해 추출했다.\( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 농축한 후 물과 헥산을 이용하여 비극성 성분을 제거하고 이후 에틸 아세테이트 분획을 감압-농축하여 파우더를 획득했다.자유 라디칼 소거 활성의 경우 1,1- diphenyl-2-picrylhydrawyl (DPPH)를 사용하여 변형된 방법으로 측정했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>UV-visible spectrophotometer는 Varian (Astralia)사의 Cary 50, 화학발광기는 Berthold (Germany)사의 6-channel LB9505 LT, 적혈구 광용혈에 사용한 pectronic 20D는 Milton Roy Co. (USA) 제품, \( \mathrm{pH} \) meter는 Istek (Korea)사 제품을 사용하였다. 마디풀 성분분석에 사용한 thin layer chromatography (TLC)는 aluminum sheet silica gel 60 F254 \( (0.2 \mathrm{~mm}) \) 로 Merck (USA)에서 구입하였고, HPLC는 Shimadzu (Japan)사의 제품을 사용하였다. LC/ESIMS (Applied Biosystems, USA)는 서울대학교 농생명과학공동 기기원에 분석 의뢰하였다.</p> <p>(+)- \( \alpha \)-Tocopherol (1,000 IU vitamin \( \mathrm{E} / \mathrm{g}) \), L-ascorbic acid, EDTA, 루미놀, 혜파린, 증감제로 사용된 rose-bengal, 자유 라디칼 소거활성에 사용한 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical은 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하여 사용하였다. 기타 \( \mathrm{FeCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 는 Junsei Chemical Co. (Japan) 제품을, \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 는 Dae Jung Chemical & Metals (Korea) 제품을 사용하였다. 완충용액제조에 사용된 \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4} \). \( 12 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4} \cdot 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, \mathrm{NaCl} \), 그리고 에탄올(EtOH), 메탄올 \( (\mathrm{MeOH}) \), 에틸아세테이트(EtOAc) 등 각종 용매는 시판특급 시약을 사용하였다. 본 실험에 사용한 건조된 마디풀은 경동시장으로부터 구입하였다.</p> <h2>마디풀의 추출 및 용매 분획</h2> <p>건조된 마디풀 \( 500 \mathrm{~g} \) 을 잘게 자른 후 \( 50 \% \) 에탄올 \( 5 \mathrm{~L} \) 를 이용하여 추출하였다. \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 농축한 후 물과 헥산을 이용하여 비극성 성분을 제거하고 이후 에틸 아세테이트 분획을 감압-농축하여 파우더를 얻었다. 또한, 에틸 아세테이트 분획에서 아글리콘 분획을 얻기 위해 산 가수분해 반응을 이용하였다. 실험방법은 에틸 아세테이트 가용분 일정량에 \( 5 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 및 아세톤 용액을 넣고 4h동안 중탕 가열하면서 환류 - 냉각시킨다. 환류 시킨 용액을 \( 5 \% \mathrm{KOH}-\mathrm{MeOH} \) 용액으로 중화 적정한다. 중화 적정 후 다시 에틸 아세테이트 층을 분획하고 이를 감압-농축하여 얻 어진 아글리콘 파우더를 \( 100 \% \) 에탄올에 녹여 실험에 사용하였다.</p> <h2>DPPH 법을 이용한 자유라디칼 소거 활성</h2> <p>자유 라디칼은 피부노화의 주된 원인으로 알려져 있다. 따라서 마디풀 추출물에 대한 자유라디칼 소거활성 측정 은 DPPH 를 이용하였다. 자유 라디칼 소거 활성은 1,1- diphenyl-2-picrylhydrawyl (DPPH)를 사용하여 변형된 방법으로 측정하였다. 실험방법은 메탄올에 용해시킨 \( 0.2 \mathrm{mM} \)DPPH 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 에탄올 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 여러 농도의 추출물 \( 1 \mathrm{ml} \) 을 첨가하여 섞은 다음 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10min 동안 방치 후 자유 라디칼의 양을 분광광도계로 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 자유 라디칼 소거 활성 \( \left(\mathrm{FSC}_{50}\right) \) 은 자유 라디칼이 \( 50 \% \) 소거되는데 필요한 시료의 농도로 정의된다.</p>