Urease는 사람과 동물의 요로와 장에서 독성을 나타내며, 이 효소를 생산하는 세균은 강한 산을 분비하는 위벽과 장 상피세포에 서식할 수 있다. 또한, urease의 암모니아 생성은 비뇨기과 호흡기에서도 작용하여 신우염을 유발하는데, 이로 인해 병원성 세균의 중요한 발병 결정 요인으로 간주된다. 해양 환경에서 분리된 V. parahaemolyticus 균주 중 약 8%가 urease 양성을 나타내는 것으로 보고되었다. 본 연구는 이전에 보고된 사례가 없는 해양환경 유래의 Kanagawa 양성 V. parahaemolyticus를 조사하여 urease 생산과 관련된 병원성 요인을 규명하고자 하였다.
<h2>Nitric Oxide (NO) assay</h2> <p>참갈파래 추출물의 항염증 활성을 조사하기 위하여 NO assay를 시행하였다. \( 10 \% \) (v/v) FBS가 첨가된 DMEM (WELGENE, South Korea) 배지에 현탁시킨 RAW264.7 세포를 12 well plate에 \( 2 \mathrm { ml } \) 씩 분주하고 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } \right . \), \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) )에서 24시간 배양하였다. 배지를 제거하고 1X PBS (Gibco, UK)로 세척한 후, \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) FBS가 첨가된 새로운 DMEM 배지를 \( 2 \mathrm { ml } \)씩 분주하고 Lipopolysaccharide (LPS, Sigma, USA, final concentration: \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) )를 처리한 후, \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \) 에서 3시간 동안 배양하여 염증을 유도하였다. 이 후, DMSO에 용해한 참갈파래 추출물과 사포닌(Sigma, USA)을 각각 \( 500,50,5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 처리해서 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \) 에서 24시간 배양하였다. 배양 상등액에 Griess reagent (Sigma,USA)를 1:1로 혼합하여 15분 동안 실온에서 방치한 후, ELISA Reader (Multiskan Go, Thermo Scientific, Finland)를 이용하여 \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>Tumor necrosis factor-a (TNF-a) assay</h2> <p>참갈파래 추출물의 항염증 활성을 조사하기 위하여 Tumor necrosis factor- \( \alpha \) assay를 시행하였다. \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) FBS가 첨가된 DMEM (WELGENE, South Korea) 배지에 현탁 시킨 RAW264.7 세포를 12 well plate에 \( 2 \mathrm { ml } \) 씩 분주하고 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \) 에서 24시간 배양하였다. 배지를 제거하고 1X PBS(Gibco, UK)로 세척한 후, \( 10 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) FBS가 첨가된 새로운 DMEM 배지를 \( 2 \mathrm { ml } \) 씩 분주하고</p>