U937 세포에 대한 Platycodin D 처리는 생존율 감소와 증식억제를 유발하며, 도립현미경과 현광현미경을 사용하여 세포의 형태변화와 apoptosis 유발을 관찰하였다. 이 결과는 Platycodin D 처리에 따른 U937 세포의 생존율 감소, 증식억제 및 형태변화가 apoptosis 유발과 밀접한 연관성을 가지고 있음을 시사한다.
<h2>Platycodin D에 의한 U937 세포의 형태 변화 및 apoptosis유발</h2> <p>Platycodin D 처리시 생존율 감소 및 증식억제 현상에 따른 U937 세포의 형태변화를 관찰하기 위하여 platycodin \( \mathrm { D } \) 를 다양한 농도 범위로 48 시간 동안 처리한 후 도립현미경을 이용하여 정상 및 platycodin \( \mathrm { D } \) 이 처리된 조건에서 배양된 U937의 모양을 관찰하였다. Fig. 2A에 나타난 바와 같이 platycodin \( \mathrm { D } \) 처리농도가 증가할수록 전체적인 세포의 밀도가 감소하였고 apoptosis 유발 시 특이하게 관찰되는 membrane blebbing 현상을 포함한 형태적 변형이 관찰되었다. 이러한 세포의 형태적 변형이 apoptosis의 유발과 관계가 있을 것으로 예상되 어 핵산에 특이적으로 결합하는 DAPI 염색을 통하여 현광현미경으로 관찰하였다. 그 결과 Fig. 2B에서도 platycodin D처리시 농도시 의존적으로 세포의 밀도가 감소하였고, 전형적으로 apoptosis가 일어난 세포에서 관찰되는 apoptotic body의형성이 증가하는 것을 확인하였다. 아울러 platycodin D 처리에 의하여 유발되는 apoptosis의 정도를 정량화하기 위하여<p>annexin \( \mathrm { V } \) 에 positive한 염색 반응을 보이는 세포의 정도를 DNA flow cytometry를 이용하여 분석하였다. Fig. 2C에서 알 수 있듯이 platycodin \( \mathrm { D } \) 의 처리 농도 증가에 따라, annexin \( \mathrm { V } \) 에 positive한 세포의 수가 점점 증가하는 것을 확인하였다.또한 apoptosis 유발의 직접적인 증거에 해당하는 DNA의 단편화 여부를 확인한 결과, Fig. 2D에 나타낸 바와 같이 platy- \( \operatorname { codin } \mathrm { D } \) 처리에 의해 DNA가 단편화되는 것을 알 수 있었다.이러한 apoptosis 유발 정도를 정량적으로 재분석하기 위하여상기와 동일한 조건으로 배양된 U937 세포를 대상으로 DNAflow cytometry를 이용하여 sub-G1기에 해당하는 세포의 빈도를 조사하였다. Fig. 2E의 결과에서 알 수 있듯이 platycodin \( \mathrm { D } \) 처리 농도의 증가에 따라 sub-G1기에 해당하는 세포의 빈도는 매우 증가함을 알 수 있었다. 즉 정상배지에서 자란 암세포의 경우에는 자연적 apoptosis 유발 빈도가 약 \( 4.5 \% \) 로 매우 낮았으나 platycodin D 처리 농도가 증가할수록 sub-G1기의세포의 빈도가 증가하여 \( 12 \mu \mathrm { M } \) 의 농도에서는 약 \( 24.5 \% \) 가 관찰되었고 \( 15 \mu \mathrm { M } \) 의 농도에서는 약 \( 30 \% \) 에 해당하는 세포가sub-G1기로 관찰되었다. 이상의 결과는 U937 세포에서 platy- \( \operatorname { codin } \mathrm { D } \) 처리에 의한 생존율 감소, 증식억제 및 형태변화는apoptosis 유발과 밀접한 연관이 있음을 의미한다.</p>