점액세균을 배양하는데 일반적으로 사용하는 CYE, CY, VY/2 등의 배지 중, coralloides 균주에 의한 항세균 물질 생산이 최적인 배지를 찾기 위해 CYE, CY, VY/3 배지에서 KYC4012 균주를 배양하고 배양추출물을 분석하였다. HPLC 분석 결과, VY/3 배지에서는 1~5번 물질 피크가 모두 생성되었으나, CYE와 CY 배지에서는 이러한 피크가 발견되지 않았다.
<h2>배지에 따른 항세균 물질의 생산</h2> <p>점액세균의 배양에서 많이 사용하는 배지로는 CYE, CY, VY/2 등이 있다. CYE는 \( 1 \% \)의 casitone과 \( 0.5 \% \)의 효모추출물을 함유한 배지로 고농도 영양분에 적응된 용균성 점액세균의 배양에 사용하는데, 대부분의 균주들은 이 배지에서 다세포 자실체를 생성하지 않는다. CY는 \( 0.3 \% \) 의 casitone과 \( 0.1 \% \) 의 yeast extract를 함유한 배지로 Corallococcus를 포함한 용균성 야생 점액세균의 배양에 사용하며, 일정 기간 성장 후 일부 균주들은 자실체를 생성하기도 한다. VY/2는 효모를 먹이로 일반적인 야생 점액세균의 분리 및 배양에 사용하는 배지로 대부분의 점액세균들은 VY/2 배지에서 일정기간 성장한 후, 다세포 자실체를 형성한다. VY/3 배지는 VY/2에 \( 10 \mathrm{mM} \) MOPS를 첨가한 배지이다.</p> <p>C. coralloides 균주들에 의한 항세균 물질 생산이 최적인 배지를 선별하기 위하여 CYE, CY, VY/3 배지에서 KYC4012을 배양하고, 배양추출물을 제조한 다음, HPLC 분석을 통해 물질 피크의 크기를 비교하였다. 그 결과, VY/3에서는 1~5번 피크 물질 생성이 모두 관찰되었으나, CYE와 CY에서는 이들 피크들이 전혀 검출되지 않았다. KYC4023과 KYC4046을 대상으로 배양과, S. aureus 를 대상으로 하는 생리활성조사에서도 동일한 결과를 얻었다. 이러한 결과의 원인에 대한 설명 중 하나는 Corallococcus 속 균주들이 CYE과 같이 영양생장만을 위한 배지에서는 항세균 물질을 생산하지 않지만, VY/3와 같이 영양생장을 지원하다가 후기에 자실체를 형성하게 하는 배지에서는 항세균 물질을 생산한다는 것이다.</p> <p>이러한 설명과 이전에 생리활성물질 생산에 사용되었던 배지조성을 기반으로 CYS 배지를 디지안하고 KYC4012에 의한 항세균 물질의 생산을 조사하였다. 그 결과, CYS 배지에서는 VY/3 배지에서보다 피크에 따라 2~8배 많은 물질을 생산하였다. CYS 배지는 \(0.5\%\) casitone과 \(0.1\%\) yeast extract 외에도 \( 0.3 \% \) soluble starch, \( 0.1 \% \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.05 \% \mathrm{CaCl}_{2}, 50 \mathrm{mM} \) HEPES, \( 0.1 \% \) 미량원소용액, \( 0.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) cyanocobalamine을 함유하고 있다. Corallococcus와 Myxococcus 속 균주들은 CYS 배지에서 배양초기에 왕성히 영양생장하며, 후기에는 자실체를 형성하였다.</p> <h2>배양시간에 따른 항세균 물질의 생산</h2> <p>Corallococcus 속 균주에 의한 항세균 활성물질의 생산이 배양시간에 따라 어떻게 달라지는지 조사하기 위하여 CYS 배지에 KYC4012 균주를 접종하고, 2일, 4일, 6일, 8일, 10일 동안 배양한 다음, XAD-16 레진을 회수하여 배양추출물을 제조하였다. 그리고 HPLC 분석을 통하여 배양시간에 따른 3번 피크(30.71분)의 변화를 조사하였다. 3번 피크 물질의 양은 6일째까지 계속 증가하였으며, 이후에는 정체되는 양상을 보였다. 따라서 최대 수율을 얻기 위해서는 6일간 배양하는 것이 가장 적절한 것으로 나타났다. Corallococcus 속 균주들은 물질 생산능력에 비해 탐색된 생리활성물질이 극소수이다. 본 연구에서 얻은 결과들은 향후 Corallococcus 속 균주들로부터 신규 생리활성물질을 탐색하는데 기반이 될 것으로 기대한다.</p>