HaCaT 세포는 \(10\% \mathrm{FBS}, 1\% \mathrm{P}/\mathrm{S}\)를 이용하여 \(37^{\circ}\mathrm{C}, 5\% \mathrm{CO}_{2}\) 조건의 incubator에서 배양하였다. MTT assay를 통해 시료의 농도를 결정하고, 6-well 플레이트에 분배하여 배양하였다. 24시간 배양 후 세포 생존율을 확인하여 과산화수소로 유도된 세포손상에 대한 지모 뿌리 \(50\%\) 에탄올 추출물과 분획물의 세포보호효과를 확인할 수 있었다.
<h2>지모 뿌리 추출물의 HaCaT 세포보호효과 측정</h2> <p>\( \mathrm { HaCaT } \) 세포배양: 사람 각질형성 세포주인 HaCaT 세포는 Dr. Fusening (German Cancer Research Center, DKFZ) 로부터 분양받아 사용하였다. 세포는 \( 10 \% \mathrm { FBS } \) (PAA, Austria), \( 1 \% \mathrm { P } / \mathrm { S } \) (PAA, Austria)을 이용하여, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 조건의 incubator에서 배양하였다.</p> <p>세포 독성 평가: 본 실험에서는 MTT assay를 통해 본 실험에 사용될 시료의 농도를 결정하였다. 추출물이 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포의 생존율에 미치는 영향을 알아보기 위해 세포를 96-well plate에 분배하여 70-80 \%까지 배양하였다. 그 후, 농도별로 희석한 추출물을 무혈청배지에 24 시간동안 처리하였다. 96 -well plate의 무혈청배지를 모두 제거하고 각 well당 \( 0.5 \mathrm { mg } / \) \( \mathrm { ml } \mathrm { MTT } \) 용액을 첨가하여 \( 2 \mathrm { ~h } \) 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 반응시켰다. 생성된 formazan을 DMSO로 녹이고 ELISA reader (Tecan, Austria)를 이용하여 \( 570 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <p>과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 세포 보호 효과: \( \mathrm { HaCaT } \) 세포를 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 96 -well plate에 분주하고 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 조건으로 incubator에서 배양하였다. \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양 후, 배지를 제거하고 무혈청 배지에 지모 뿌리 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획물 및 아글리콘 분획물을 농도 별로 희석하여 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양하였다. \( \mathrm { PBS } \) 로 1 회 세척한 후, 과산화수소 \( 2 \mathrm { mM } \) 농도(PBS)로 \( 30 \mathrm { ~min } \) 처리하였다. 과산화수소를 모두 제거 후, \( \mathrm { PBS } \) 로 2 회 세척하였다. 세척 후, 무혈청 배지로 바꿔 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator 에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양하였다. \( 24 \mathrm { ~h } \) incubation 후, MTT assay로 세포 생존율을 확인하여 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 지모 뿌리 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 분획물의 세포보호 효과를 확인하였다.</p>