보체계는 고전경로와 부경로로 활성화되며, 이는 각각 Ca \( ^ { 2 + } \), Mg \( ^ { 2 + } \) 이온과 Mg \( ^ { 2 + } \) 이온의 참여를 필요로 한다. 고추의 조다당 CAL-0가 이 두 경로를 모두 활성화하는지 확인하기 위해, 교차 면역전기영동을 이용해 C3의 분해산물 생성을 관찰했다. 이를 통해, 고추잎의 조다당 CAL-0는 고전경로 뿐만 아니라 부경로도 활성화시키는 것을 확인하였다.
<h3>항보체 활성 다당의 작용양식</h3> <p>보체계의 활성화 경로는 고전경로(classical pathway)와 부경로(alternative pathway)로 구성되어 있고, 고전경로에서는 Ca \( ^ { 2 + } \) 및 Mg \( ^ { 2 + } \)) 이온이, 부경로에서는 Mg \( ^ { 2 + } \) 이온만이 각각 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 따라서 조다당 CAL- 0 를 대상으로 보체계 활성화의 두 경로 중 어느 경로를 통하여 보체계를 활성화는지를 파악하기 위해 GVB \( ^ { 2 + } \) 완충액 및 GVB \( ^ { 2 + } \) 완충액에서 Ca \( ^ { 2 + } \) 이온만을 제거한 Mg \( ^ { 2 + } \) -EGTA \( ^ { -G V B ^ { 2 } } \) 를 사용한 경우와 2가 금속이온을 모두 제거 한 10 mM EDTA-GVB \( { } ^ { 2 } \) 를 사용한 경우의 항보체 활성을 시료 100 mg/1 의 농도에서 비교 측정하였다. EDTA-GVB 반응계에서는 대조구에 비해 완전한 활성의 감소를 관찰할수 있었으나 Mg \( ^ { 2 + } \)-EGTA-GVB \( { } ^ { 2- } \) 반응계에서는 20% 정도의 활성이 유지됨을 알 수 있었다(Fig. 4). 따라서 고추잎으로 부터 추출한 조다당 CAL-0는 보체계의 고전경로 뿐만 아니라 부경로도 활성화할 수 있음을 추측할 수 있었다.</p> <h3>교차 면역전기영동에 의한 C3 산물의 동정</h3> <p>고추의 조다당 CAL-0가 보체계의 고전경로 및 부경로 모두를 활성화하는 것을 확인하기 위해 교차 면역전기영동 에 의한 C3 의 분해산물 생성여부를 관찰하였다. CAL-0를 정상인의 혈청과 혼합하고 GVB \( ^ { 2 + } \), EDTA-GVB \( ^ { 2- } \) 및 Mg \( ^ { 2 + } \) -EGTA-GVB \( ^ { 2- } \) 반응계에서 반응시킨 후 보체 활성화에 중요한 역할을 담당하고 있는 C3 의 반응산물을 확인한 결과를 Fig. 5에 나타냈다. 그 결과 정상인 혈청만을 반응시킨 경우와 2가 금속이온을 모두 제거한 EDTA-GVB \( ^ { 2- } \)에서는 C3의 활성화가 이루어지지 않은 것에 기인한 1 개의 침강선만이 관찰된 반면, GVB \( ^ { 2 + } \) 와 Ca \( ^ { 2 + } \) 이온만 선택 제거한 Mg \( ^ { 2- } \)-EGTA-GVB \( ^ { 2- } \)에서는 각각 2 개씩의 침강선을 관찰할 수 있었다. 특히 Mg \( ^ { 2 + } \)-EGTA-GVB \( { } ^ { 2- } \) 반응계에서는 well로부 터 두 번째 peak가 GVB \( ^ { 2 + } \) 반응계에서 보다 작게 나타났는데 이는 well로부터 첫 번째 peak는 C3에, 두 번째 peak는C3a 및 C3b 에 기인한 침강선임을 고려할 때 부경로의 활성화가 상대적으로 낮음을 알 수 있었다. 이상의 결과로부터 고추잎의 활성 조다당 획분 CAL-0의 작용양식은 고전경로 뿐만 아니라 부경로도 활성화시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.</p>