본 실험에서는 서해안의 염전으로부터 분리한 오렌지 색소를 생산하는 Pseudoalteromonas psicida TA20 균주를 진탕 배양하여 사용하였으며, 그 배양액을 원심분리하여 ethanol을 사용하여 세균 색소를 추출하고 시료를 조제하였다. 추출된 색소의 안정성 알아보기 위하여 pH, 온도, 광선, 금속이온의 영향을 실험을 통해 수행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용균주 및 배양 조건</h2> <p>본 실험에 사용한 균주는 서해안의 평화 염전으로부터 분리한 오렌지 색소를 생산하는 Pseudoalteromonas psicida TA20 균주로, Marine broth 2216 (Difco, USA) 배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, 200 \mathrm{rpm} \) 으로 30 시간 진탕 배양하여 사용하였다.</p> <h2>색소의 추출 및 색소 시료의 조제</h2> <p>배양액은 \( 6,000 \mathrm{rpm} \) 에서 15 분간 원심 분리하여 균체와 상등액을 분리하고, 얻은 균체를 증류수로 세척한 후, 추출 효율이 우수하고, 색소의 안정성이 높은 것으로 보고된 ethanol을 사용하여 세균 색소를 추출하였다. 색소추출물 시료는 ethanol을 첨가하여 3회 반복하여 진탕 추출한 후 원심 분리하여 상등액을 회전진공증발농축기로 증발 건조하였다. 건조 시료 \( 50 \mu \mathrm{g} \) 을 에탄올 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 녹여 사용하였다.</p> <h2>색소의 안정성</h2> <h3>\( \mathbf{p H} \) 의 영향</h3> <p>\( \mathrm{pH} \) 에 대한 색소의 안정성을 알아보기 위하여 색소 용액에 \( \mathrm{pH} \) 3에서 \( \mathrm{pH} 10 \) 사이의 완충용액 \( (\mathrm{pH} \) 3.0-5.0: sodium citrate, \( \mathrm{pH} \) 6-7: sodium phosphate, \( \mathrm{pH} \) 8: Tris- \( \mathrm{HCl}, \mathrm{pH} \) 9-10: sodium carbonate- \( \mathrm{HCl} \) )을 동량 가하고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 4 시간 방치한 후 흡광광도계(Spectronic Genesys 5, Miltonroy, USA)를 이용하여 실험균주 색소의 최대 흡수 파장인 \( 387 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p> <h3>온도의 영향</h3> <p>온도에 대한 안정성은 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 색소 추출물 \( 3 \mathrm{ml} \) 을 시험관에 넣고 para film을 이용하여 밀봉한 후 이를 각각 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \), \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 25^{\circ} \mathrm{C}, 40^{\circ} \mathrm{C} \) 의 암소에서 15 일간 보존하면서 24 시간 간격으로 \( 387 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 조사하였다.</p> <h3>광선의 영향</h3> <p>광선에 대한 안정성은 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 색소 추출물 \( 3 \mathrm{ml} \) 을 시험관에 넣은 후 \( 110 \mathrm{~V}, 30 \mathrm{~W} \) 의 조명으로부터 \( 30 \mathrm{~cm} \) 의 거리에 위치시키고, \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 15 일간 보존하면서 24 시간 간격으로 \( 387 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 조사하였다. 대조구는 빛을 완전히 차단하고 같은 조건하에서 실험을 수행하였다.</p> <h3>금속이온의 영항</h3> <p>금속이온에 대한 안정성은 \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 색소 추출물 \( 3 \mathrm{ml} \) 에 \( 1.0 \mathrm{X} 10^{2} \mathrm{M} \) 농도의 \( \mathrm{NaCl}, \mathrm{AlCl}_{3}, \mathrm{FeCl}_{2}, \mathrm{CaCl}_{2}, \mathrm{CuCl}_{2}, \mathrm{ZnCl}_{2} \), \( \mathrm{MgCl}_{2} \) 와 \( \mathrm{KCl} \) 의 금속이온 용액을 \( 1.0 \% \) 첨가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 의 암소에서 15 일간 보존하면서 24 시간 간격으로 \( 387 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 조사하였다. 대조구는 금속이온을 첨가하지 않고 같은 조건에서 실험을 수행하였다.</p>