표준 곡선을 사용하여 hydroxyproline의 양을 계산하고 이를 collagen으로 변환하였다. HPLC를 이용하여 collagen의 가교물질인 pyridinoline 함량을 측정하였다. 난소 절제로 인해 체중이 증가하였고, 이는 난소가 절제되지 않은 상태와 비교하여 확인되었다. 지방조직에서 여성호르몬 생성 기능으로 난소의 기능을 대체하는 경향이 있었다. 또한 난소 절제 후 매생이를 투여한 모든 군에서 체중 증가량이 증가하였으나, 매생이 추출물이 체중 감소에 큰 영향을 주지 않았다.
<h2>혈청 중의 alkaline phosphatase 분석</h2> <p>혈 중 Alkaline phosphatase(ALP) 활성은 분리한 혈청을 자동 측정용 slide (FU-JI FILM, Japan)를 이용하여 Drychemistry analyzer 3500i (Fuji, Japan)로 측정하였다.</p> <h2>Collagen 함량분석</h2> <p>적출한 결합 조직 폐, 골, 연골, 피부는 \( 6 \mathrm { ~N } \mathrm { HCl } 10 \mathrm { ~mL } \) 을첨가하여 \( 110 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 시간 가수분해한 후 여과 농축하여 증류수로 5 배 희석한 후 시료용액으로 하였다. 결합조직의 collagen 함량은 Woessner법을 변형하여 분석하였다. Hydroxyproline의 정량분석을 위해 조제한 sample을 다시 증류수로 일정량 희석한 후 실험에 사용하였다. 반응액은 UV visible spectroscopy를 이용하여 흡광도 \( 560 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였다. 표준 곡선을 이용하여 hydroxyproline양을 구한 다음collagen 함량으로 환산하였다. Collagen의 아미노산 조성으로부터 collagen 중의 hydroxyproline 비율은 평균 110 잔기/1000잔기이므로 collagen 양의 환산은 일반적으로 다음 식에 준한다.</p> <p>collagen \( ( \mu \mathrm { g } ) = 9.09 \times \) hydroxyproline \( ( \mu \mathrm { g } ) \)</p> <h2>Pyridinoline/ Deoxypyridinoline (PYD/ DPD) 함량분석</h2> <p>Collagen 중의 가교물질인 pyridinoline 함량 측정은 위의방법에서 얻어진 collagen분석시료를 HPLC를 이용하여 행하였다. HPLC 분석 조건은 Table 2과 같고, 결과에 관한 분석은 Fig. 1에서 나타낸 바와 같이 시료와 standard의 peak를 이용하여 PYD/DPD의 peak를 파악 한 후 standard \( \mathrm { area } \% \) 농도와 시료의 \( \mathrm { area } \% \) 농도를 계산하여 PYD/collagen, DPD/ collagen 으로 나타내었다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>본 실험에 대한 모든 실험의 결과는 \( m e a n \pm S D \) 치로 나타내었고, 실험군 간의 유의성은 ANOVA로 검증한 후, \( \mathrm { a } =0.05 \)수준에서 Scheffe법, Bonferroni법으로 다중비교 하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <p>Table 3는 실험기간 동안 실험동물의 체중 증가량 및 식이효율을 나타낸 것이다. 난소 절제에 의한 estrogen 분비감소가 체중 증가를 가져온 여러 보고와 마찬가지로 본 실험에서도 난소를 절제한 OVX-control이 난소를 절제하지 않은 Sham에 비해 체중이 증가하였다. 일반적으로 난소절제로 인한 estrogen분비 부족은 지방조직의 지 단백 리파아제(lipoprotein lipase)의 활성을 저하시키고 호르몬 민감성 리파아제(hormone sensitive lipase) 활성을 증가시켜 체 지방축적을 억제한다고 알려져 있다. OVX-control이 Sham 군에 비해 체중이 증가하는 것은 여성호르몬 부족으로 인한 체내 지방조직의 증가에 의한 것이며, 또한 지방조직에서도 여성호르몬을 생성 할 수 있는 기능을 갖고 있기 때문에, 지방조직에서 난소의 기능을 대체 하고자 하는 체내의 비상대책으로 여겨진다. 난소 절제 후 매생이를 투여한 모든 군에서 Sham과 비교해 높은 체중 증가량 나타내어 매생이 추출물이 체중감소에는 크게 영향을 미치지 않았다.</p>