옥수수 종자는 청결하게 세척하고, \( 27^{\circ} \mathrm{C} \) 암 상태에서 15시간 동안 물에 담가 뒀다. 발아를 위해 젖은 종이 타월 위에 배치하고, \( 27^{\circ} \mathrm{C} \) 암실에서 42시간 동안 발아시켰다. 이후, 완충용액에 노출된 일차뿌리 조직절편 40개를 넣고, \( 27^{\circ} \mathrm{C} \) 암소에서 배양했다. 마지막으로, 각 시약이 들어있는 tube에 옥수수 뿌리 끝이 잠기도록 고정하고 습도 \( 95 \% \) 이상을 유지하는 환경에서 1.5시간 동안 전처리를 진행했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>식물 재료</h2> <p>옥수수 종자(Zea mays L., Golden cross bantum 70)를 흐르는 물에 충분히 세척하고 \( 27^{\circ} \mathrm{C} \) 암 상태에서 15시간 동안 물에 불린 후, 불투명한 플라스틱 쟁반에 젖은 종이 타월을 깔고 옥수수 종자의 배(embryo) 부분이 쟁반 바닥에 닿게 하여 일렬로 배열한 다음 그 위에 종이 타월을 덮고 적신다. 쟁반을 포개어 물이 들어 있는 통 안에 수직 방향으로 세우고 \( 27^{\circ} \mathrm{C} \) 암실에서 42시간 동안 발아시켰다. 옥수수 뿌리는 \( 15-20 \mathrm{~mm} \) 정도인 것을 골라 실험 재료로 사용하였다.</p> <h2>실험 방법</h2> <h3>에틸렌 생성량 측정</h3> <p>\( 25 \mathrm{ml} \) vial에 완충용액 \( (1 \mathrm{ml} \) potassium - phosphate buffer, \( 50 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{pH} 6.8\), \(50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) chloramphenicol)에 test chemical을 처리한 후, 옥수수 일차뿌리 조직절편 \( (1 \mathrm{~cm} \); root cap 포함) 40개를 넣어 실리콘 마개로 막고 \( 27^{\circ} \mathrm{C} \), 암소에서 진탕 배양하였다. 2시간 간격으로 기체 \( 1 \mathrm{ml} \)씩을 채취하여 gas chroma-tography (Hewlett Packard, 5890 series II, USA; 80/100 Porapak-Q column, oven temp: \( 120^{\circ} \mathrm{C} \), injector temp: \( 150^{\circ} \mathrm{C} \), detector temp: \( 280^{\circ} \mathrm{C} \))를 이용하여 측정하였다.</p> <h3>굴중성 반응 및 뿌리 생장률 측정</h3> <p>각 시약이 들어있는 \( 1.5 \mathrm{ml} \) tube에 \( 15-20 \mathrm{~mm} \) 정도 곧게 자란 옥수수 뿌리 끝이 \( 2 \mathrm{~mm} \) 잠기도록 수직 방향으로 고정시킨 후 습도가 \( 95 \% \) 이상 유지되근 통 안에서 1.5시간 동안 전처리 하였다. 그리고 전처리된 뿌리를 습도가 \( 95 \% \) 이상 유지되는 유리 상자에 수평 혹은 수직으로 부착시켜 그 변화를 접사 렌즈를 부착한 CCD camera (Samsung Aerospace, SAC-410NDX, Korea)를 이용하여 촬영한 영상을 time-lapse video cassette recorder (Samsung, STLU-36D, Korea)로 8시간 동안 지연 녹화한 후, TV 수신카드(Sasem, On-Air TV Little, Korea)의 정지영상 capture program을 사용하여 매 30분 간격으로 저장하고 관찰한 다음 Image Tool program을 이용하여 뿌리의 굴중성 굴곡 혹은 생장률을 측정하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>모든 실험은 최소한 3회 이상 반복하였고, 각 실험 처리구 당 40개의 옥수수 일차뿌리를 사용하였다. \( p<0.05 \) 유의성을 검사하기 위하여 mean value는 Student t test에 따라 계산하였다.</p>