당귀와 건지황의 열수 추출물 및 증숙 추출물이 SK-N-SH 세포의 oxidative stress를 억제하는 것이 관찰되었다. 특히, 당귀의 효과가 건지황보다 우수하였다. 또한, apoptosis 신호 전달 물질인 caspase-3 발현 정도를 당귀와 건지황 추출물을 이용하여 분석하였다. Apoptotic cell은 처리 전에는 \( 14.5 \% \)였으며, 처리 1시간 및 2시간 후에는 각각 \( 19.4, 5.6 \% \)로 처음에는 증가했다가 이후 감소하는 경향을 보였다.
<h2>SK-N-SH cello oxidative stress에 대한 증숙처리 추출물의 효과</h2> <p>한약재의 열수추출물이 oxidative stress억제 효과가 우수하였기 때문에, 한약재 증숙추출물의 효과를 조사하였다. Fig.2A 에서는 당귀의 열수추출물과 증숙추출물의 SK-N-SH 세포에 대한 oxidative stress 억제효과를 나타내고 있다. 당귀 열수추출물을 \( 0,0.5,1,2,4 \mathrm {\mu g } / \mathrm {\mu l } \) 농도로 처리한 결과 각각 \(100,131,150,101,63 \% \) 의 세포 성장률을 나타내어 \( 2 \mu \mathrm { g } / \mathrm {\mu l } \) 의 농도에서부터 세포성장률이 감소하였다. \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 90 분간 증숙추출물 효과는 \( 0,0.5,1,2,4 \mu \mathrm { g } / \mathrm {\mu l } \) 처리 농도에서 \(100, 123 ,106,54,40 \% \) 였고, \( 120 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 90 분간 증숙추출물 농도에 따른 효과는 각각 \( 100,133,116,54,42 \% \) 였다, 시료 모두 \( 2 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } \) 이상의 농도에서부터 세포성장률이 감소하였고, 증숙처리는 비증숙처리에 비해 오히려 세포성장을 억제하였다.</p> <p>Fig. 2B에서는 건지황 열수추출물과 증숙추출물의 SK-N-SH 세포에 대한 oxidative stress 억제효과를 나타내고 있다. 건지황 열수추출물 농도 \( (0,0.5,1,2,4 \mu \mathrm { g } / \mathrm {\mu l } ) \) 에 따른 효과는 각각 \( 100,105,128,105,64 \% \) 성장률을 나타내었다. 이와 같은 결과는 \( 2 \mathrm {\mu g } / \mu 1 \) 의 농도에서부터 세포성장률이 감소한 당귀 열수추출물과 같다. 건지황 증숙추출물은 비증숙추출물에 비해 세포보호 효과가 낮았고, \( 2 \mu \mathrm { g } / \mu \mathrm { l } \) 이상에서는 강한 독성을 나타내었다. 이들의 효과는 당귀보다 낮았다. SK-N-SH 세포 보호 효과가 큰 당귀와 건지황의 추출물을 이용하여 apoptosis 신호 전달 물질인 caspase-3 발현 정도를 분석하였다. 이들 추출물 중 열수추출물이 다른 증숙추출물에 비하여 caspase-3 발현을 억제하였고, 이 효과는 당귀에서 다소 강하였다.</p> <h2>열수추출물의 apoptosis 억제효과</h2> <p>Oxidative stress로부터 세포 보호효과가 가장 우수한 당귀 열수추출물로 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 처리에 의한 SK-N-SH 의 apoptosis 유발효과를 PI 염색액으로 핵을 염색한 후 flow cytomer로 분석하였다. Fig. 3A와 Table 2에서는 세포에 시료 \( 1 \mathrm {\mu g } / \mathrm {\mu l } \) 를 2 시간 처리하고 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 시간별 (0,1,2 시간)로 처리한 후의 cell cycle의 각 phase에 함유된 DNA 함량을 나타내고 있다. Apopotic cell (sub-G1 cell)은 control 처리에서는 \( 14.5 \% \) 였고, 처리 1 시간 및 2 시간 후에는 각각 \( 19.4,5.6 \% \) 로 시간이 경과함에 따라 다소 증가했다가 감소하였다. 또한 처리 2 시간 후의 DNA 함량은 \( \mathrm { M } \) phase가 \( 21 \% \) 로 control이나 1 시간 후의 DNA 함량보다 높았다.</p>