우선, Brand-Williams의 방법을 변형하여 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical과 hydrogen peroxide에 대한 spermidine의 소거활성을 측정하였다. DPPH 용액과 spermidine을 \(10\)초 동안 잘 혼합한 다음, \(20\)분 동안 반응시킨 후 \(525\)nm에서 흡광도를 측정하였고, hydrogen peroxide 용액과 spermidine을 \(80\mu l\)과 \(20\mu l\) 반응하고, \(10\)분 후 \(450\)nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 시료 첨가군과 대조군의 흡광도 비를 % 값으로 환산하여 나타났다. 이와 유사하게 다른 실험들은 이 실험 방식에 사소한 변화를 주어 결과를 얻어냈다.
<h3>DPPH radical assay</h3> <p>Brand-Williams, 실험방법을 변형하여 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical에 대한 spermidine의 소거능력을 측정하였다. 시험농도의 spermidine를 DPPH 용액을 가하여 \( 10 \mathrm { sec } \) 동안 잘 혼합한 다음, 실온에서 \( 20 mathrm { ~min } \) 동안 반응시킨 후 \( 525 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. \( \mathrm { DPPH } \) radical 함량은 시료 첨 가군과 대조군의 흡광도 비를 % 값으로 환산하여 나타내었다.</p> <h3>Hydrogen Peroxide Scavenging Assay</h3> <p>Choi 등의 실험방법을 변형하여 hydrogen peroxide에 대한 소거활성을 측정하였다. \( 80 \mu l \) 의 spermidine, \( 20 \mu l \) 의 10 \( \mathrm { mM } \) hydrogen peroxide 및 100 씨의 \( 0.01 \mathrm { M } \) 인산완충용액 \( ( \mathrm { pH } 5.0) \) 을 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 5 \mathrm { ~min } \) 동안 반응 시켰다. 그 후, \( 15 \mu l \) 의 \( 1.25 \mathrm { mM } \) ABTS 및 \( 30 \mu l \) 의 peroxidase \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 10 \mathrm { ~min } \) 동안 반응시켜 \( 405 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였으며 항산화 활성은 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 % 값으로 환산하였다.</p> <h3>Hydroxyl radical assay</h3> <p>Chung 등 [37]의 실험방법을 변형하여 hydroxyl radical을 측정하였다. \( 50 \mu l \) 의 \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { FeSO } { } _ { 4 } \) 와 \( 50 \mu l \) 의 \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 이용한 Fenton 반응으로 hydroxyl radical를 발생시켰다. 발생된 radical을 \( 25 \mu 1 \) 의 \( 10 \mathrm { mM } \) EDTA, \( 25 \mu l \) 의 \( 10 \mathrm { mM } \) 2-de-oxyribose, \( 150 \mu l \) 의 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer(pH 7.4)의 존재하에서 시험농도의 spermidine과 반응시킨 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 \( \mathrm { hr } \) 간 동안 반응시켰다. 여기에 \( 250 \mu l \) 의 \( 2.8 \% \) TCA (trichloroacetic acid) 및 \( 250 \mu l \) 의 1% TBA (thiobabituric acid)를 첨가한 후에 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 가열하였다. 그 후 상온에서 식힌 다음 \( 1,000 \times g \) 에서 \( 5 \mathrm { ~min } \) 동안 원심분리 하였다. 회수한 상등액은 \( 532 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였으며 항산화 활성은 시료 첨가 전후의 흡광도 비를 % 값으로 환산하였다.</p>Ⅰ<h2>환원력 assay</h2>