전주시 완산구 용복동에서 재배하는 5년생 작약의 뿌리를 채취해 실험재료로 사용하였다. 작약 뿌리 절편을 유관속층이 포함되도록 만들어, 오옥신과 사이토카닌이 다양한 농도로 조합 첨가된 MS배지에 배양하였다. 가장 효과적인 캘러스 형성은 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) NAA와 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) zeatin을 조합 첨가한 배지에서 관찰되었으며, 이 배지를 사용해 1개월 간격으로 3개월 이상 계대배양하여 대량의 캘러스를 얻었다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>배양재료</h2> <p>전라북도 전주시 완산구 용복동 지역에서 재배하고 있는 5 년생 작약(Paeonia lactiflora Pall) 뿌리를 채취하여 실험재료로 이용하였다. 뿌리는 흐르는 수돗물에 깨끗이 수세한 후 \( 70 \% \) 알코올에 1분, \( 0.5 \% \) 클로락스용액에 30분간 침적하여 표면 살균한 후 멸균수로 4회 수세하였다. 무균작업대에서 메스로 뿌리를 횡단면으로 절단한 후 형성층이 포함되도록 약 \( 4 \times 4 \times 4 \mathrm{~mm}^{3} \) 크기로 절단하여 배양재료로 사용하였다.</p> <h2>작약 뿌리 절편으로부터 캘러스 형성</h2> <p>5년생 작약 뿌리 절편을 유관속층이 포함되도록 절편을 만들어 오옥신과 사이토카닌이 여러가지 농도로 조합 첨가된 MS배지(Murashige and Skoog 1962)에 배양하였다. 캘러스 유도배지는 MS배지에 오옥신으로서 \( 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) IAA, NAA, IBA, 2,4-D를, 그리고 사이토카닌으로서 \( 0.0, 0.5, 1.0, 2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) kinetin, zeatin, BAP를 각각 조합 첨가하여 제조 하였다. 작약 캘러스를 유도하기 위하여 각각의 배지에 뿌리 절편을 치상한 후 암상태로 6주 동안 배양하였다. 배양 6 주째에 배양절편으로부터 캘러스 형성 측정은 육안으로 매우 양호(>+++), 양호 (++), 보통 (+)로 기록하였으며, 각 처리 구당 15개의 절편을 3회 반복 수행하였다.</p> <h2>캘러스 클론으로부터 부정근 발생 및 길이 생장</h2> <p>작약 뿌리 절편으로부터 가장 양호한 캘러스 형성은 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) NAA와 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) zeatin을 조합 첨가한 배지에서 이루어졌으며, 동일배지에서 1개월 간격으로 계대배양하면서 3개월 이상 배양하여 대량의 캘러스를 얻었다. 캘러스 클론은 캘러스 덩어리로부터 메스와 날카로운 핀셋으로 크기가 약 \( 5 \times 5 \times 5 \mathrm{~mm}^{3} \) 크기로 조심스럽게 잘라 준비하였다. 첫 단계에서 캘러스 클론으로부터 부정근 발생은 오옥신으로서 IAA, NAA, IBA를, 사이토카닌으로서 kinetin, zeatin, BAP를 각각 \( 0.1, 0.5, 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \)를 단독 첨가하여 암 상태로 6주 동안 배양하면서 최적의 오옥신과 사이토카닌을 선정하였고, 둘째로 첫 단계에서 선정된 IBA와 zeatin을 다시 \( 0.1, 0.5, 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \)농도로 조합 첨가하여 명(18시간 \( 46 \mu \mathrm{mol} \mathrm{m} \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) 광, 6시간 암 주기)/암 조건으로 배양하면서 최적의 농도와 조합 그리고 명/암 효과를 조사하였다. 모든 처리구는 1회당 15개의 캘러스 클론을 사용하였으며, 3회 반복 수행하였다.</p>