\( S \). fibuligera 균주를 YEPS 액체배지에 접종해 \( \alpha \)-Amylase와 Glucoamylase의 효소활성을 측정하였다. 누룩으로부터 분리한 전분분해 활성을 나타내는 효모균주 7점이 상동성이 높아 \( S \).fibuligera 종인 것으로 확인되었다.
<p>\( \alpha \)-Amylase 효소활성은 Park 등의 방법을 수정하여 측정하였다. \( \mathrm { YEPS } \) 액체배지에 흡광도 \( \left ( \mathrm { OD } _ { 600 } \right ) \)가 \( 0.1 \)이 되도록 S. fibuligera 균주를 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양하고 균체를 제거한 상등액으로 효소활성을 측정하였다. 효소반응은 인산 완충액 \( (50 \mathrm { mM } , \mathrm { pH } 6) \)에 조효소액 \( 0.2 \mathrm { ml } \)과 기질용액인 가용성 전분 \( (1 \% \mathrm { w } / \mathrm { v } ) 1 \mathrm { ml } \)를 첨가하고 각 반응온도에서 30분 동안 반응하였다. 반응액 \( 0.1 \mathrm { ml } \)를 취하여 \( 1 \mathrm { ml } \)의 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS, Sigma-aldrich) 용액과 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분간 반응시킨 후 \( 570 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 1 unit (U)의 효소활성은 1분동안 \( 1 \mu \mathrm { mole } \)의 환원당을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. Glucoamylase 효소활성은 Liu 등의 방법을 수정하여 측정하였다. \( \mathrm { YEPS } \) 액체배지에서 흡광도가 \( 0.1 \)이 되도록 \( S \). fibuligera 균주를 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양한 뒤 상등액으로 효소활성을 측정하였다. 아세트산 완충액 \( (10 \mathrm { mM } \), \( \mathrm { pH } 5) \)에 조효소액 \( 0.7 \mathrm { ml } \) 과 기질용액인 가용성 전분 \( (1 \%, \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 첨가하여 각 반응온도에서 30 분 동안 반응시킨 후 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분 동안 가열하여 반응을 종결시켰다. 효소반응이 종결된 반응액은 포도당 정량키트(YD Diagnostic, Yongin, Korea)를 사용하여 생성된 포도당의 양을 측정하였다. 1 unit(U)의 glucoamylase 효소활성은 1분 동안 \( 1 \mu \mathrm { mole } \)의 포도당을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. Glucoamylase 효소활성은 Liu 등의 방법을 수정하여 측정하였다. YEPS 액체배지에서 흡광도가 \( 0.1 \)이 되도록 \( S \). fibuligera 균주를 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양한 뒤 상등액으로 효소활성을 측정하였다. 아세트산 완충액 \( (10 \mathrm { mM } \), \( \mathrm { pH } 5 \) )에 조효소액 \( 0.7 \mathrm { ml } \)과 기질용액인 가용성 전분(1 \%, w/v) \( 0.2 \mathrm { ml } \)를 첨가하여 각 반응온도에서 30분 동안 반응시킨 후 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 10분 동안 가열하여 반응을 종결시켰다. 효소반응이 종결된 반응액은 포도당 정량키트(YD Diagnostic,Yongin, Korea)를 사용하여 생성된 포도당의 양을 측정하였다. 1 unit(U)glucoamylase 효소활성은 1분 동안 \( 1 \mu \mathrm { mole } \)의 포도당을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다. Bradford Dye Reagent (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 제조사가 제시한 조건에서 단백질 농도를 측정하였으며 적정 농도로 희석된 bovine serum albumin (Biosesang, Sungnam, Korea)을 이용하여 검량선을 작성하였다. 균체농도는 흡광광도계(GE healthcare, Uppsala, Sweden)를 사용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 결정하였다. 에탄올 농도는 Rezex ROA-Oranic Acid H + (Phenomenex, Torrance, CA, USA) 컬럼이 장착된 HPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan)로 측정하였으며 \( 0.005 \mathrm { ~N } \) 황산용액을 이동상 \( (0.6 \mathrm { ml } / \mathrm { min } ) \)으로 사용하였다. Analytic Profile Index \( 20 \mathrm { C } \) AUX kit (bioMérieux, Marcy-I'Etoile, France)를 제조사의 사용방법에 따라 사용하여 효모균주의 탄소원대사특성을 조사하였다. 모든 측정은 3회 수행하였으며 평균값과 표준오차는 SigmaPlot (Systat Software Inc., San Jose, CA, USA)를 사용하여 분석하였다. 전국 각지에서 수집한 누룩으로부터 60점의 효모를 분리하였으며 평판배지에서 배양하였다. 전분이 함유된 배지에서 성장한 MBY \(1276, 1280,1320,1322,1323,1324 \) 및 MBY \( 1327 \)로 명명된 효모 7점을 18S rDNA 유전자의 ITS 염기서열 및 \( 26 \mathrm { ~S } \mathrm { rDNA } \) 유전자의 D1/D2 단편의 염기서열을 분석한 결과 MBY \( 1276 \) 및 MBY \( 1280 \) 균주는 기존에 보고된 \( S \). fibuligera와 \( 99 \% \) 의 상동성을 나타내었으며 MBY 1320 ,1322, 1323, 1324 및 MBY1327 균주는 \( S \). fibuligera와 \( 100 \% \)의 상동성을 나타내었다. API AUX 20 키트를 사용하여 누룩에서 분리된 효모균주의 탄소원 대사특성을 조사한 결과 KCTC7806균주와 누룩에서 분리된 균주들은 탄소원대사 특징이 유사하였다. 따라서 누룩으로부터 분리된 전분분해 활성을 나타내는 7점의 효모균주는 \( S \). fibuligera로 최종 동정하였다.</p>