자유 라디칼 소거활성에 사용한 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radical, 광증감제로 사용된 rose-bengal, luminol, L-ascorbic acid, ( + )- \( \alpha \)-tocopherol는 Sigma에서 구입하였고, 완충용액제조에 사용된 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 건조된 목형 잎은 Fig.1과 같은 방법으로 분액하고, 에틸아세테이트 분획 중 일부를 에틸아세테이트로 추출하고 감압◦농축하여 아글리콘 파우더를 제조하여 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>기기 및 시약</h2> <p>자유 라디칼 소거활성에 사용한 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) radical, 광증감제로 사용된 rose-bengal, luminol, L-ascorbic acid, ( + )- \( \alpha \)-tocopherol (1,000 IU vitamin E/g)는 Sigma (USA)에서 구입하여 사용하였다. \( \mathrm { FeCl } _ { 3 } 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \)는 Junsei (Japan)에서 구입하였으며, \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)는 대정화학에서 구입하여 사용하였다. 완충용액제조에 사용된 \( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } \cdot 12 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , \mathrm { NaH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \cdot 2 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , \mathrm { NaCl } \) 그리고 trizma base, \( \mathrm { HCl } \), 에탄올 \( ( \mathrm { EtOH } ) \), 메탄올 \( ( \mathrm { MeOH } ) \), 에틸아세테이트 \( ( \mathrm { EtOAc } ) \) 등 각종 용매는 시판 특급 시약을 사용하였다. 추출에 사용한 Sonication은 화신테크 (Korea)의 Powersonic 410제품을, UV-visible spectrophotometer는 Varian (Australia)의 Cary 50 , 적혈구 광용혈에 사용한 Spectronic 20D는 Milton Roy Co. (USA) 제품, 화학발광기는 Berthold (Germany)의 6-channel LB9505 LT를, pH meter는 Istek (Korea) 제품을 사용하였으며, 성분분석을 위한 thin layer chromatography (TLC)는 aluminum sheet silica gel 60 F254 \( (0.2 \mathrm { ~mm } ) \) 로 Merck (USA)에서 구입하였고 HPLC는 Shimadzu (Japan)사의 제품을 사용하였으며, LC/ESI-MS (Applied Biosystem, USA)는 서울대학교 농생명과학공동기기원에 분석 의뢰하였다. 목형 (Vitex negundo L. var. cannabifolia (Sieb. \& Zucc.) Hand-Mazz.) 잎은 2011년 9월 경동시장에서 구입하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>목형 잎의 분획 추출</h2> <p>건조된 목형 잎 \( 10 \mathrm { ~g } \) 을 \( 50 \% \) 에탄올 \( 1 \mathrm { ~L } \) 를 이용하여 \( 1 \mathrm { ~h } \) 동안 sonication ( \( 60 \mathrm { ~Hz } \) )을 이용하여 3회 반복 추출 후 Fig. 1과 같은 방법으로 분액을 하였다. \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 감압 농축 후 \( n \)-헥산을 처리하여 클로로필 등의 비극성 성분을 제거하고 에틸아세테이트를 이용하여 추출한 분획을 감압농축하여 파우더를 얻어 실험에 사용하였다. 에틸아세테이트 분획 중 일부를 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 및 아세톤 용액을 이용하여 산 가수분해 반응을 통해 당을 제거시키고 \( 5 \% \mathrm { KOH } \)- \( \mathrm { MeOH } \) 로 중화 적정 후 증류수로 산, 염기 및 당 등을 제거 한 후 에틸아세테이트로 추출하고 감압◦농축하여 아글리콘 파우더를 제조하여 사용하였다.</p>