TCDD에 의한 CNPase 발현 변화는 면역세포화학법과 면역염색법을 이용해 조사하였다. TCDD 농도에 따른 차이는 CNP1과 CNP2 항체로 염색한 4 DIV세포에서 관찰되었으며, 이는 TCDD가 포함된 배지에서 배양한 세포로부터 얻은 균질액을 사용하여 더욱 직접적으로 확인하였다. 이 결과 CNP1과 CNP2의 발현양상은 서로 다르며, 이들의 mRNA transcript는 oligodendrocyte의 분화과정에서 역시 서로 다른 발현양상을 보임이 보고되었다.
<h2>TCDD에 의한 CNPase 발현의 변화</h2> <p>TCDD에 의한 CNPase 발현의 변화를 면역세포화학법 (immunocytochemistry)과 면역염색(immunoblot)법으로 조사하였다. 4 DIV세포를 CNP1과 2에 대한 항체로 변역염색한 결과, TCDD의 농도에 따라 상당한 차이가 있음을 보았다(Fig. 3, CNP). 5및 10 \( \mathrm { nM } \) TCDD에서는 CNP 양성세포의 면역염색반응이 줄어드는 반면 20 및 50 \( \mathrm { nM } \) 에서는 증가하는 양상을 보였다(Fig. 3, CNP). 그러나 용매인 toluene은 1.6% ( \( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 농도에서 별다론 변화를 보이지 않은 것으로 보아(Fig. 3, Veh.) 이러한 변화는 TCDD에 특이적인영향으로 보인다. 한편 신경세포에 특이적으로 발현되는 neurofilament 200(NF200) 중간세사(intermediate filament)에 대한 면역염색반응을 조사한 결과, 신경세포에서는 유의한 변화가 나타나지 않았다(Fig. 3, NF200).</p> <p>CNPase의 변화를 보다 직접적으로 알아보기 위하여 TCDD가 포합된 배지에서 배양한 4 DIV 세포로부터 균질액을 얻고, 8 % SDS-PAGE하고 nitrocellulose membrane에 옮긴 후 CNP1과 CNP2에 대한 항체로 면역염색하였다. Fig. 4A에서 보는 바와 같이 CNP1과 CNP2는 발현양상이 서로 달랐다. 이를 densitometer로 정량한 결과를 Fig. 4B에 나타내었다. CNP 은 TCDD에 농도 의존적으로 감소하였는데, TCDD를 5,10,20,25 \( \mathrm { nM } \) 처리할 경우 대조군에 비하여 각각 75.4,74.0,44.5,39.1 % 의 발현을 보였다(Fig.5, CNP1. CNP2는 TCDD의 농도에 따라 그 발현이 증가 혹은 감소되는 양상을 보였다. 즉, 5 \( \mathrm { nM } \) 에서는 대조군에 비하여 68.8 %, 10 \( \mathrm { nM } \) 에서는 86.5%, 20 \( \mathrm { nM } \) 에서는 52.7% 의 발현을 보였다(Fig. 4B, CNP2) . 그러나 특이하게도 50 \( \mathrm { nM } \) 농도에서는 123.5 %로 오히려 대조군보다 증가하는 현상을 나타내었다(Fig. 4B, CNP2). 그러나 NF200의 발현은 큰 변화를 보이지 않았다(Fig. 4B, NF200).</p> <p>CNP1 과 CNP2의 mRNA transcript는 oligodendrocyte의 분화과정에서 서로 다른 발현양상을 보임이 보고되었다. 즉, oligodendrocyte precursor에서는 CNP2 mRNA만 존재하는 반면 분화중인 oligodendrocyte에는 CNP1, CNP2 모두 발현된다. (8-Gravel 등, 2000). 또한 CNP2만이 in vivo에서 인산화되는 것으로 알려져 있다. 이와 같은 보고들은 CNP1과 CNP2가 생체 내 혹은 분화과정에서 서로 다른 역할을 할 것을 의미한다. 따라서 TCDD와 같은 독성환경 하에서도 이들이 서로 다른 발현변화를 보여, 아직 그 기능은 알 수 없지만 각각의 기능을 수행할 것으로 추정된다.</p>