아토피 효능시험에서 이용된 cell line은 HaCaT cell이며, 배양접시 바닥에 접종 후 FBS를 함유하는 물질을 넣고 배양했다. 사용되는 2종의 화합물은 동결건조된 분말 형태의 시료이고, 양성 대조군 또한 세포 배양 배지로 희석하여 처리하였다.
<h2>세포주 배양 및 시료의 조제</h2> <p>아토피 효능시험에서 사용되는 cell line은 HaCaT cell (Human Keratinocyte, HaCaT, ATCC)이며, 배양접시 바닥에 접종한 후 penicillin \( (100 \mathrm { IU } / \mathrm { mL } ) \), Streptomycin \( (100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } ), 10 \% \) FBS를 함유하는 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Welgene, Gyeongsan, Korea)를 넣고 배양하였다 \( \left (37 { } ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \). 사용되는 화합물은 2종으로, 동결건조된 분말 형태의 시료를 사용하였다. 시료는 증류수를 이용하여 \( 200 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 농도로 stock을 제조하였고, 세포 배지에 알맞은 농도로 dilution하여 사용하였다.또한, WST-1 assay를 통하여 예비실험을 진행한 후 세포독성을 나타내지 않는 농도를 설정하여 시료의 피부 관련 효능을 평가 하였다. 양성 대조군 역시 세포 배양 배지로 희석하여 처리하였다.</p> <h2>세포독성시험</h2> <p>시료의 cytotoxicity를 확인하기 위해, HaCaT cell, HDF-N cell, RAW264.7 cell, 그리고 melan-a cell에서의 cytotoxicity를 측정하였다. HaCaT cell \( \left (5 \times 10 ^ { 4 } \right . \) cells/well \( ), \mathrm { HDF } - \mathrm { N } \) cell \( \left (6 \times 10 ^ { 3 } \right . \) cells/well), RAW264.7 cell \( \left (1 \times 10 ^ { 5 } \right . \) cells/well \( ) \) 및 melan-a cell \( \left (9 \times 10 ^ { 3 } \right . \) cells/well)을 96 well plate에 분주한 다음, 세포 배양조건에서 \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양하였다. 배양 후, 12 시간의 기아상태를 유지한 뒤, 시료 및 새로운 배지(media supplement 또는 FBS 제외)를 넣고, 24h 동안 배양하였다. 배양 후, 세포생존율 측정을 위해 WST-1 반응액을 supplement (또는 FBS)가 제외된 배지에 1/10로 희석하고, 각 well당 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 씩 처리하여 \( 1 \mathrm { ~h } \) 동안 반응시킨 후, \( 450 \mathrm { ~nm } \) 에서 absorbance를 측정하였다.</p>