이 연구에서는 P. capsici 기질과 B. licheniformis K11의 항진균성 물질 및 cellulase 활성에 대해 조사하였다. 배양 조건과 미디어 변화에 따른 균 생육도와 항진균성 물질, siderophore의 생산, 그리고 cellulase 활성을 측정하였다. 특히, 균생육도는 흡광도 \(600 \mathrm { ~nm }\) 에서 확인하였고, 항진균성 물질의 생산은 균체량 측정법으로 확인하였으며, cellulase 활성은 CMC를 기질로 이용하여 DNS 방법으로, siderophore의 생산은 Arnow assay 방법을 사용하였다.
<p>용하였다. 효소반응 시 P. capsici 기질은 \( 50 \mathrm { mM } \) phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 6.0)에 건조된 cell wall을 일정량 넣은 후,Ultraschallprozessor(UP200s, Dr. Hielscher GmbH, Stuttgart)를 이용해 파쇄 후 멸균 증류수와 원심분리기를 이용해 3회 수세하였으며, 침전물을 동일한 buffer에 현탁하여 기질로 이용하였다. 그리고 효소 반응시 효소액으로는 본 균주가 생산하는 cellulase의 조효소액을 사용하였으며, 이는 B. lichen-iformis K11을 nutrient broth에서 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 72 시간 배양 후 배양상등액을 염석과 투석 과정을 거쳐 조제하였다. Cellulase의 활성은 DNS 방법으로 확인하였고, cellulase의 활성도 1 unit는 1 분 동안 \( 0.1 \mu \mathrm { g } \) 의 glucose를 생산하는 효소의 양으로 정의하였다.</p> <h3>배양시간, 배양온도, 그리고 \( \mathrm { pH } \) 에 따른 항진균성 물질의 생산 및 cellulase의 활성 확인</h3> <p>배양시간, 배양온도, 그리고 \( \mathrm { pH } \) 에 따른 B. licheniformis K11의 항진균성 물질의 생산과 cellulase의 효소활성을 확인하기 위해서, \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 배양한 전배양액을 \( 0.1 \% \) 농도로 \( 100 \mathrm { ml } \) nutrient broth에 접종하고 \( 10 ^ {\circ } \mathrm { C } , 20 ^ {\circ } \mathrm { C } , 30 ^ {\circ } \mathrm { C } , 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 각각 4 일 동안 배양하였으며, 배양시간은 4 인 동안 매일 배양액을 회수하여 균 생육도와 항진균성 물질과 side-rophore의 생산과 cellulase의 활성을 각각 조사하였다. 균생육도는 흡광도 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 확인하였으며, 항진균성 물진의 생산확인은 균체량 측정법으로 cellulase의 활성은 CMC 를 기질로 이용하여 DNS방법으로 확인하였고, siderophore의 생산은 Arnow assay방법을 이용하였다. Arnow assay방법 시 표준시약은 Sigma-Aldrich Co., U.S.A.사의 2,3-dihydroxybenzoic acid를 사용하였다.</p> <h3>탄소원과 질소원에 따른 항진균성 물질 및 cellulase의 활성 확인</h3> <p>탄소원과 질소원의 변화에 따라 B. licheniformis K11의 균생육도와 항진균성 물질과 siderophore의 생산 그리고 cellulase의 활성을 측정하기 위해서 Davis minimal medium \( \left (0.7 \% \mathrm { ~K } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } , 0.2 \% \mathrm { KH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } , 0.1 \% \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } , 0.05 \% \right . \) so-dium citrate \( \cdot 2 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , 0.01 \% \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , 0.1 \% \) glucose)중 glucose와 \( \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 대신 10 가지 탄소원과 16 가지의 질소원을 각각 \( 0.1 \% \) 로 첨가한 Davis minimal medium을 제조하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 일간 진탕배양 후 위와 동일한 방법으로 균 생육도, 항진균성 물질과 siderophore의 생산, 그리고 cellulase의 활성을 조사하였다.</p>