본 연구에서는 합천군 해인사 부근에서 채취한 소나무(Pinus densiflora)의 잎을 사용하였다. 채취한 잎은 일반 수돗물과 증류수로 세척하고, 말린 후 \(2 \sim 3\mathrm{~cm}\) 길이로 세절하였다. 세절한 잎 \(100\mathrm{~g}\)과 솔잎 중량의 10배의 증류수를 사용하여 \(90^{\circ}\mathrm{C}\)에서 2시간 동안 3회 반복 추출하였다. 또한, DPPH 용액은 에탄올과 DPPH, 그리고 증류수를 혼합하여 제조하였다. 추출물의 총 폴리페놀 화합물의 함량은 Folin-Denis법을 변형하여 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>본 실험에서 사용한 솔잎은 2003년 10월경 경남 합천군 해인사 부근 인근 야산에서 자생하는 소나무(Pinus denstifora)에서 잎만을 채취하여 일반 수돗물로 세척하고 다시 증류수로 헹군 후 그늘에서 말린 후 \( 2 \sim 3 \mathrm{~cm} \) 길이로 세절하여 추출 재료로 사용하였다.</p> <h2>시료의 추출</h2> <p>세절한 솔잎 \( 100 \mathrm{~g} \) 과 솔잎 중량의 10 배의 증류수를 열수 추출기에 넣고 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2 시간 씩 3 회 반복 추출하였다. 추출액을 모아 여과지(Whatman filter paper No.2)로 여과시킨 후 여과액을 rotatory vacuum evaporator로 감압 농축하고, 농축된 액을 동결건조기로 동결건조 시킨 분말 상태를 수용성 추출물로 하였으며, 이때 수율은 약 \( 1 \% \) 정도였다.</p> <h2>DPPH법에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH \( \left(\alpha, \alpha^{\prime}\right. \)-diphenyl- \( \beta \)-picrylhydrazyl) 용액은 \( 100 \mathrm{ml} \) 에탄올에 DPPH \( 16 \mathrm{mg} \) 을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \) 를 혼합하여 Whatman filter paper No. 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 \( 5 \mathrm{ml} \) 에 일정농도 \( (0.01 \%, 0.05 \%, 0.1 \%) \) 의 시료용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 을혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 \( 528 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 감소를 측정하였다. 이때 대조구인 \( \mathrm{BHT} \) 는 \( 0.05 \% \) 농도로 첨가하여 위에서와 동일한 방법으로 흡광도 감소를 측정하였다. DPPH를 이용한 전자 공여능(electron donating ability; EDA)은 시료 첨가구와 무첨가구의 홉광도차를 백분율 (\%)로 표시하였다.</p> <p>EDA(\( \% \)) = \( \{1-(\mathrm{Abs} / \mathrm{Abc})\} \times 100 \)</p> <p>Abc: Absorbance of control treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p> <p>Abs : Absorbance of sample treatment at \( 528 \mathrm{~nm} \)</p> <h2>총 풀리페놀 화합물의 함량 측정</h2> <p>총 폴리페놀 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomo-lybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 것을 이용한 Folin-Denis법을 약간 변형시켜 측정하였다. 즉, 시료용액 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 에 Folin-ciocalteu's phenol reagent \( 2.5 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 잘 혼합하고 5 분간 실온에서 방치하였다. 정확히 5 분 반응시킨 후 \( 7.5 \% ~ \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} ~2 \mathrm{ml} \)를 가하여 혼합하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 발색시킨 후 \( 760 \mathrm{nM} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 이때 총 폴리페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. Tannic acid를 이용한 표준곡선은 tannic acid \( 1 \mathrm{~g} \) 을 \( 50 \% \) 메탄올용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 녹이고 최종농도가 0, 50, 100, 150, 200, 300 및 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 용액이 되도록 조제하여 이를 일정량 취하여 위와 같은 방법으로 \( 760 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.</p>