평활근 수축 조절에 중요한 역할을 하는 Protein kinase C 는 inositol-1,4,5 triphosphate는 diacylglycerol에 의하여 활성화되는데, 본 연구 결과 역시 PKC 활성제와 PKC 활성억제제의 특이성에 의해 동일종류의 세포에서도 결과가 다양하며 이는 PKC의 여러 가지 이성체가 iNOS 발현에 양성적 또는 음성적으로 반응할 수 있음을 시사한 Paul 등의 보고로 뒷받침될 수 있다. 실험에서 혈관평활근세포를 이용해 PMA로 전처리 할 때 IL- \( 1 \beta \)에 의한 \(\mathrm{NO}\)생성이 억제되는 것은 혈관평활근세포에서 IFN-gamma 및 TNF에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성이 PKC 활성제인 PMA에 의하여 감소되고, 사구체간질세포에서 IL-1 \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성과 iNOS mRNA 함유랑이 증가되며, 이는 PMA 및 PDB에 의하여 억제된다고 볼 수 있다. 그러나 그 억제가 IL- \( 1 \beta \)에 의한 iNOS 발현 어디에 관여하는지, mRNA 안정성저하에 기인됐는지, iNOS의 소실을 촉진한 것인지는 여전히 문제점이다.
<h1>고 찰</h1> <p>Protein kinase C (PKC) 는 inositol-1,4,5 triphosphate와 같이 평활근 수축 조절에 중요한 역할을 하고 있으며, phospholipids 존재하에서 phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 및 phosphatidylcholine로 부터 phospholipase C에 의하여 생성되는 diacylglycerol에 의하여 활성화되며 이 활성화 과정에 칼슘이 필요하게 된다.</p> <p>아직까지 완전히 특성이 밝혀지지 않은 10여종의 PKC 이성효소가 있는데, Liou와 Morgan은 혈관평활근세포에 존재하는 PKC가 alpha, delta zeta 등의 이성효소가 있으며, Andera와 Walsh 는 평활근에 존재하는 PKC는 칼슘의존성 이성효소(alph, beta-1, beta-2, gamma)와 비의존성 이성효소(delta, epsilon, zeta, eta)가 존재한다고 한다. 그리고 PKC는 대식세포 및 간세포에서도 \(\mathrm{NO}\) 생성유도에 관여한다고하며, 설치류의 대식세포에서 iNOS 발현에 PKC 의존성과정이 관여되며 lipopolysaccharide 및 interferon-gamma에 의하여 야기되는 iNOS유도 조절에 PKC-tyrosine kinase-polyADP-ribosylation 이 관여된다고 한다. 한편 세포의 종류에 따라 PKC활성화에 의하여 \(\mathrm{NO}\)생성이 촉진될 수도 억제되어질 수도 있다고 한다.</p> <p>본 실험에서는 혈관 평활근 세포배양액 중 PKC 활성제인 PMA가 존재하는 경우에는 IL-1\(\beta \) 에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \)생성이 증가되었는데, PMA로 전처리 하였을 경우에는 IL-1에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \)생성이 감소되었다. 이는 동일 세포에서라도 실험조건에 따라 PKC가 iNOS 및 \(\mathrm{NO}\)생성과정에 촉진 또는 억제적으로 작용할 수 있다는 것을 의미한다. Lee는 PKC 활성제인 PDB나 PKC 불활성제인 PDD는 IL-1 \(\beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성에 아무런 영향을 주지 아니하였고, PDB 와 PMA는 유사한 PKC 활성제 임에도 불구하고, PMA에서만 유일하게 농도의 증가에 따라 IL- \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성을 유의하게 증가시켰다고 했다. 그러나 본 실험에서 PMA 및 PDB로 전처리한 경우에는, IL-1 \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성을 같은 양상으로 억제하였다. 이는 혈관평활근세포에서 PMA와 PDB에 의한 PKC 활성과정은 다르나, PKC 억제과정은 유사할 수 있다는 것을 의미하는 것으로 본다.</p> <p>Lee는 IL-1\( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성에 대한 PMA의 촉진작용이 비특이성 PKC억제제인 staurosporine에 의하여 감소되지 아니하고, 오히려 증가되는 현상을 나타내었고, 특이성 PKC 억제제인 bisindolylmalaimide에 의해서 유의하게 억제된 것은 IL-1 \(\beta \)에 의하여 야기되는 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성이 PMA와 같은 특정한 PKC 활성제에 의하여 촉진될 수 있다고 하였다. 본 연구 결과 역시 PKC 활성제와 PKC 활성억제제의 특이성에 의하여 동일종류의 세포에서도 다양한 결과를 나타낼 수 있음을 의미한다. 이는 PKC의 여러 가지 이성체가 iNOS 발현에 양성적 또는 음성적으로 반응할 수 있음을 시사한 Paul 등의 보고로 뒷받침될 수 있다고 본다. PMA 또는 PDB전처리로서 특히 전처리 시간이 비교적 긴 24시간에 IL- \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성이 현저히 억제되어진 것은, PMA 또는 PDB 전처리에 의하여 세포내 존재하는 PKC의 활성이 억제된 것인지, PKC 활성작용과는 무관한 PMA 또는 PDB의 다른 작용에 의한 억제작용인지는 검토되어야 할 것이다.</p> <p>본 실험에 혈관평활근세포를 이용하여 PMA로 전처리 하였을 때 IL- \( 1 \beta \)에 의한 \(\mathrm{NO}\)생성이 억제된다는 결과는, 혈관평활근세포에서 IFN-gamma 및 TNF에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성이 PKC 활성제인 PMA에 의하여 감소되고, 사구체간질세포에서 IL-1 \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성과 iNOS mRNA 함유랑이 증가되며, 이 증가는 PMA 및 PDB에 의하여 억제된다고 볼 수 있다.</p> <p>이상에서 IL- \( \beta \)에 의한 \( \mathrm{NO}_{2} \) 생성이 PKC 활성제 전처리로 억제되는 것이 어떤 경로를 통하여 야기되는 것인지는 알 수 없으나, iNOS 발현이 cycloheximide, actinomycin D의 존재와 PMA 전처리로 IL-1 \( \beta \)에 의한 iNOS 발현이 억제되었다는 것은 mRNA 발현이나 translation이, PMA 전처리에 의한 PKC의 조절저하에 관여된 것으로 추정된다. 그러나 그 억제가 IL- \( 1 \beta \)에 의한 iNOS 발현의 어떤 과정에 관여하는지, mRNA 안정성저하에 기인된 것인지, iNOS의 소실을 촉진한 것인지는 추구되어햐할 문제점으로 남아있다.</p>