본문에서는 CRP의 구조적인 변화를 확인시 사용되는 실험 기법을 이용하여 친화력 차이에 의한 CRP의 구조간 차이를 설명하고, 돌연변이 CRP가 야생형 CRP보다 열에 의한 단백질 구조의 변성이 크기 때문에 CAMP가 존재하지 않을 때 5128A로 갈수록 subtilisin에 민감한 경향을 보임을 설명하였다.
<p>온도에 따른 CRP의 proteolytic digestion</p> <p>CRP는 cAMP가 결합되지 않은 상태에서는 subtilisin에 의해서 절단되지 않지만 cAMP의 결합으로 protease에 의해 절단되어 \( \alpha \)-CRP를 생성한다[7]. 이것은 cAMP의 결합으로 CRP의 구조가 변화되었다는 증거로 CRP의 구조적인 변화를 확인하는데 사용되는 실험 기법이다.</p> <p>그림 2는 여러 온도 \( \left (25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 45 ^ {\circ } \mathrm { C } , 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \right . \), 그리고 \(65  \left . { } ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \) 에서 야생형과 돌연변이 CRP의 subtilisin과의 반응결과를 보여준다. 그림 2-(A)와 (B)에서 CAMP가 없을 때 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)와 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 야생형과 돌연변이 CRP 모두가 전혀 절단되지 않았다. 그러나 cAMP가 존재할 때 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 절단된 \( \alpha- \)CRP band를 볼 수 있다. 그리고 절단되는 CRP량이 야생형에서 583G 그리고 S128A의 순서로 감소하였다. 이것은 CAMP 결합에 의한 CRP의 구조가 야생형 CRP, 583G 그리고  5128A에 있어서 약간씩 다르다는 것을 의미한다. 이런 차이는 cAMP의 친화력에 의한 차이로 생각된다. 그림2-(C)에서 CAMP가 존재하지 않을 때 야생형에서 583G 그리고 5128A로 갈수록 subtilisin에 민감한 경향을 보였다.이것은 돌연변이 CRP가 야생형 CRP보다 열에 의해 단백질 구조의 변성이 크게 일어나기 때문이다. cAMP가 존재 할 때는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서와 같은 경향을 보인다. 그림 2-(D)는 \(55   ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 CAMP가 존재할 때 앞의 경향과 다르게 S128A가 S83G보다 훨씬 subtilisin에 민감하게 반응함을 나타냈다. 이것은 CAMP의 결합에 따른 CRP의 구조적인 변화의 영향보다는 돌연변이 CRP의 열에 의한 구조적인 변성의 차이로 여겨진다. 또한 cAMP가 존재하지 않을 때도 같은 경향을 보였다. 그림 2-(E)에서 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 결과는 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보다 더욱 변성된 CRP로 인해 CAMP의 존재유무와 관계없이 subtilisin에 절단된 것올 볼 수 있다.</p>