사자발쑥 추출물로부터 실험을 3회 반복하여 측정한 결과, 사자발쑥 추출물의 에틸아세테이트 분획에서 ROS 소거활성과 항산화 효과가 있는 eupatilin 및 jaceosidin을 분리할 수 있었다.
<h2>사자발쑥 추출물로부터 플라보노이드인 Eupatilin과 Jaceosidin 동정 및 확인</h2> <p>사자발쑥 추출물의 에틸아세테이트 분획에서 다양한 성분이 존재함을 TLC, HPLC를 통해서 획인하였으며, 다양한 성분 중에 ROS 소거활성과 항산화 효과가 있는 eupatilin 및 jaceosidin을 분리하였다.</p> <p>TLC 및 HPLC를 이용한 사자발쑥 추출물의 플라보노이드 분석: 플라보노이드 분석을 위한 사자발쑥 추출물의 에틸아세테이트 분획을 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter (Millipore \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) )를 이용하여 여과하고 이 여액을 TLC 및 HPLC 분석을 위한 시료로 이용하였다. 플라보노이드의 단일물질을 분리하기 위해서 TLC 분석은 2차분리를 통해서 분리하였다. TLC 분석의 전개용매로는 1 차 분리의 경우 ethyl acetate:formic acid:chloroform:water = 8:1:1:0.1 을 사용하였고, 2 차 분리의 경우는 chloroform:methanol = 10:1 를 사용하였다. 성분확인은 각 성분들의 \( \mathrm{R}_{f} \) 치와 자외선을 이용한 분리된 띠 등으로 확인하였다.</p> <p>HPLC 분석은 \( \mathrm{C18} \)로 충진된 column ( \( 250 \times 4.6 \mathrm{~mm}, 5 \) \( \mu \mathrm{m} \), Phenomenex)을 이용하였고, 주입량은 \( 20 \mu \mathrm{m}\) 였다. 이동상으로 \( \mathrm{MeOH} \) 수용액(A) 용매)과 \( 0.4 \% \mathrm{H}_{3} \mathrm{PO}_{4} \) 수용액(B 용매)을 전개용매로 사용하였다. 사자발쑥 추출물의 에틸아세테이트 분흭의 경우 기울기 용리법은 0-10분까지 \( 50 \% \) A에서 \( 70 \% \) A; 10~30분까지 \( 70 \% \) A에서 \( 70 \% \) A이며, 검출파장은 \( 340 \mathrm{~nm} \), 유속은 \( 1 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 로 분리하였다. 또한 사자발쑥 추출물의 성분 분석을 위하여 TLC로 분리된 각각의 따를 긁은 후 \( 50 \% \) 에탄올에 추출, 여과한 뒤 감압 농축하여 파우더를 얻었다. 이 때 얻어진 파우더 중 일부는 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter (Milli-pore \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) )를 이용하여 여과하고 그 여액을 HPLC 분석에 사용하였다. 이들의 성분확인은 이미 보고된 분광학적 자료를 이용하여 확인하였다.</p> <p>LC/ESI-MS/MS를 이용한 사자발쑥 추출물의 플라보노이드 분석: LC/ESI-MS/MS는 액체 상태의 물질을 이온화(ion spray)하여, 검출기에 의해서 질량/하전량과의 비 \( (\mathrm{m} / \mathrm{z}) \) 에 따라 분리 검출하여 분석 물질의 질량 및 구조를 확인함으로써, 천연물의 분자량과 구조를 동정한다. 측정방법으로 LC 분석은 autosampler와 diode-array detector (DAD)가 장착된 Agilent (Waldbronn, Germany) Model 1100 을 사용하였다. 컬럼은 Pursuit XRs \( \mathrm{C18} ~(2.0 \times 50 \mathrm{~mm}, 3 \mu \mathrm{m}) \) (Varian, USA)을 사용하였다. 이동상은 HPLC 분석 조건과 일치하였다. MS/MS 분석은 ion spray source을 사용하였고, negative ion mode로 capillary voltage는 \( -3500 \mathrm{~V} \), nebulizer gas \( \left(\mathrm{N}_{2}\right) 10 \) (arbitraryunits), collisiongas \( \left(\mathrm{N}_{2}\right) \) 그리고 ion source temperature는 \( 400^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 행하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실험은 3회 반복하였고 통계분석은 \( 5 \% \) 유의수준에서 Student's \( t \)-test를 행하였다.</p>