경남 진주 시내 한약방 및 한의원에서 건조된 한약재를 약리적으로 조사하여 심혈관 질환 개선과 항산화 작용이 있는 시료를 선택했다. 한약재 조성물에 DPPH 용액을 첨가하고 잘 혼합한 후 일정 시간 동안 반응시킨 후 \(525 \mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정했다. 전자공여능은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 비율로 표현되고, 시료의 환원력은 흡광도 값으로 표현되었다. 시료의 hydroxyl 라디칼 소거능은 특정 식에 따라 계산되었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>한약재는 문헌고찰을 통하여 약리적으로 심혈관계 질환의 개선 및 항산화작용이 있는 시료를 선정하였으며, 경남 진주 시내 한약방 및 한의원에서 건조된 형태로 시판되는 것을 동정 후 구입하였다.</p><h2>한약재 조성물의 제조</h2><p>시료는 적당한 크기로 자른 후 \( 100 \mathrm{~g} \)에 10배의 증류수를 넣어 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 3시간 동안 환류 냉각하면서 2회 반복 추출하였다. 추출된 시료는 여과 후 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압 농축하여 완전 건고시킨 다음, 3차 증류수를 가해 \( 1000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 농도가 되도록 한약재 추출물을 제조하였다.</p><h2>전자공여능의 측정</h2><p>전자공여능은 Blois의 방법을 변형하여 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)에 대한 전자공여 효과로 시료의 환원력을 측정하였다. 즉 일정농도의 한약재 조성물에 DPPH 용액을 가하여 10초간 잘 혼합한 다음 실온에서 20분간 반응시킨 후 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 비(%)로 나타내었다.</p><h2>환원력 측정</h2><p>Oyaizu의 방법에 따라 측정하였으며 시료 \( 1 \mathrm{~mL} \)에 \( 200 \mathrm{mM} \) 인산 완충액 ( \( \mathrm{pH} 6.6\) ) 및 \( 1 \% \)의 potassium ferricyanide 각 \( 1 \mathrm{~mL} \) 를 차례로 가하여 교반한 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)의 수욕상에서 20분간 반응시켰다. 여기에 \( 10 \%\) TCA(trichloroacetic acid) 용액을 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 가하여 \( 13,500 \times \mathrm{g} \)에서 15분간 원심분리하여 얻은 상징액 \( 1 \mathrm{~mL} \) 에 증류수 및 ferric chloride 각 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 가하여 혼합한 후 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 환원력은 흡광도의 값으로 나타내었다.</p><h2>Hydroxyl radical 소거능 측정</h2><p>Gutteridge의 방법에 따라 시험관에 \( 1 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{FeSO}_{4} \) / EDTA 용액 \( 0.2 \mathrm{~mL}\), \(10 \mathrm{mM} \) 2-deoxyribose \( 0.2 \mathrm{~mL} \), 시료 \( 0.2 \mathrm{~mL} \), \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer( \( \mathrm{pH} 7.4\) ) \( 1.2 \mathrm{~mL} \) 및 \( 10 \mathrm{mM} \) \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) \( 0.2 \mathrm{mL} \)를 차례로 가한 다음 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1 시간 반응시킨 후 \( 2.8 \% \) TCA 용액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 가하고 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 10 분간 가열한 다음 급냉시킨 후 \( 532 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 hydroxyl 라디칼 소거능은 다음 식에 따라 계산하였다.</p><p>Hydroxyl radical scavenging activity (\(\%\)) \[ =\left(1-\frac{\mathrm{A}-\mathrm{O}}{\mathrm{B}-\mathrm{O}}\right) \times 100 \]</p><p>\( \mathrm{O}\): Absorbance of no treatment at \( 532 \mathrm{~nm} \)</p><p>\( \mathrm{A}\) : Absorbance of sample treatment at \( 532 \mathrm{~nm} \)</p><p>\( \mathrm{B}\) : Absorbance of control treatment at \( 532 \mathrm{~nm} \)</p>