2004년부터 2006년까지 부산의 5개 2차 종합병원에서 설사 증상을 보인 2,125명의 환자의 대변 검체에서 분리된 142개의 황색포도상구균 균주를 연구에 이용하였다. 설사 가물에서 S. aureus를 분리하기 위해 Egg yolk tellurite solution을 포함하는 Baird Parker agar 배지에 검체를 도말한 후, \(37^{\circ}C\)에서 24시간 동안 배양하였다. CLSI의 기준에 따라, disk diffusion 방법으로 황색포도상구균의 항생제 감수성을 실험하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용 균주</h2> <p>2004년 1월부터 2006년 12월까지 부산 지역 5개 2차 종합병원에 입원한 환자 중, 설사 증상을 보이는 환자 2,125명의 대변 검체에서 분리된 황색포도상구균 142균주를 본 연구에 사용하였다.</p> <h2>균의 분리 및 동정</h2> <p>설사 가검물에서 S. aureus의 분리는 \(5 \% \) Egg yolk tellurite solution (Oxoid)을 함유한 Baird Parker agar (Oxoid) 배지에 설사 검체를 멀균 면봉으로 도말하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 배양하였다. 배양 후 주위에 clear zone이 형성된 검정색 집라을 선별하여, \(5 \% \) Egg yolk tellurite solution을 함유한 Baird Parker agar (Oxoid) 배지에 도말하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 배양하였다(단일집락 분리, 2회 실시). 배양 후 그람염색을 실시하여 현미경으로 그람양성 포도상구균을 관찰하였다. coag-ulase 생산 시험은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 24시간 배양한 의심 집라을 saline broth가 \( 0.4 \mathrm { ~ml } \) 든 소형시험관에 접종하여 완전히 균질화한 다음, Bactident Coagulase EDTA Kaninchenplasma (Merck)를 \( 0.1 \mathrm { ~mL } \)를 가하여 잘 혼합하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 6시간 후 응고물질 형성을 주기적으로 검사하였다. 시험관을 옆으로 기울일 때 응고된 상태로 되어있는 것을 양성으로 판정하였다. coagulase양성인 균에 대해, API STAPH (bioMeriux)에 의한 생화학시험을 실시하여 황색포도상구균을 최종 동정하였다. S. aur-eus로 확인된 균주를 항생제 감수성 시험에 사용하였다. 또한 S. aureus를 nutrient agar 배지에 도말하여 \( 10 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보존하였으며, \( 20 \% \) glycerol을 첨가한 tryptic soy broth에 접종하여 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보존하였다.</p> <h2>항균제 감수성 시험</h2> <p>Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 에 따라 디스크 확산법(disk diffusion)으로 황색포도상구균의 항균제에 대한 감수성 시험을 실시하였다. 설사 변에서 분리한 황색포도상구균을 혈액한천배지에 도말하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 배양한 다음, 잘 분리된 집락 3~5개를 멸균 생리식염수에 풀어 MacFarland No. 0.5가 되도록 탁도를 맞춘 다음, 15분 이내에 Muller Hinton agar (Difco) 평판에 면봉으로 균액을 묻혀서 배지표면에 골고루 바른 다음, 실온에서 5분간 방치한 후 과잉의 습기를 제거하고 항생제 디스크를 올려놓았다. 평판을 뒤집어서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 배양 후 억제환의 크기를 측정하여, 디스크 제조자의 억제환 해석표에 따라 각 균주의 항생제에 대한 내성 및 감수성을 판정하였다. 사용한 항생제 디스크의 종류는 ampicillin (AM, \( 10 ~ \mu \mathrm { g } \) ), gentamicin(GM, \(10 ~ \mu \mathrm { g } \) ), cefepime (FEP, \( 30 ~ \mu \mathrm { g } \) ), cefotetan (CTT, \( 30 ~ \mu \mathrm { g } \) ), ciprofloxacin (CIP, \( 5 ~ \mu \mathrm { g } \) ), chloramphenicol (C, \( 30 ~ \mu \mathrm { g } \)), clin-damycin (CC, \( 2 ~ \mu g \)), erythromycin (E, \( 15 ~ \mu \mathrm { g } \)), oxacillin (OX, \( 1 ~ \mu \mathrm { g } \)), penicillin (P, \(10 \mathrm { ~U } \)), trimethoprim/sulfamethoxazole (SXT, \(1.25/23.75 ~ \mu \mathrm { g } \) ), imipenem (IPM, \( 10 ~ \mu \mathrm { g } \) ), tetracycline (Te, \( 30 ~ \mu \mathrm { g } \) ), rifampin (RA, \( 5 ~ \mu \mathrm { g } \) ), vancomycin (Va, \( 30 ~ \mu \mathrm { g } \) )이매, 모두 BBL sensi disk (Becton-Dickinson, France)를 사용하였다.</p>