복분자 딸기는 우리나라 남부지역이 주 생산지로, 한방과 민간에서 약재로 사용되고 있다. 복분자에 함유된 기능성 물질은 (-)-epicatechin, ( + )-catechin, proanthocyanidin, fravonoid 화합물 등이 있으며, 이러한 생약재들은 우리나라를 비롯한 동양권에서 오랜 기간 질병치료와 예방목적으로 사용되어왔다. 본 연구에서는 복분자를 이용하여 methanol 추출물과 분획물을 제조하고, 항산화효과 및 유전적 손상유도 효과를 확인하고자 한다.
<p>복분자는 복분자 딸기의 열매를 약재로 이르는 말로, 복분자 딸기(Rubus coreanus Miquel)는 장미과의 낙엽 관목이며, 우리나라 남부지역이 주 생산지로, 높이는 3미터 정도이며 땅에 닿은 줄기에서 뿌리가 내리며, 잎은 어긋나고 깃모양 겹잎으로 이루어져 있고, 열매는 \(7 \sim 8 \)월에 붉은빛이 도는 검은색으로 익어 수확된다. 복분자는 식용으로 이용되고 있을 뿐만 아니라, 예로부터 한방과 민간에서 맹안, 태생, 지사, 음위, 강장, 그리고 양모 등에 약재로 이용하고 있다. 복분자에 함유된 기능성 물질에 관한 연구로는, 줄기에 (-)-epicatechin, ( + )-catechin, proanthocyanidin, 잎에 fravonoid 화합물이 존재하고 있음이 보고 된 바 있다. 복분자와 같은 이러한 생약재들은 우리나라를 비롯한 동양권에서 오랜 기간 질병치료와 예방목적으로 사용되어왔으며, 생약재의 2차 대사산물들이 생체에 대한 산화적 장해를 방어하고 노화를 억제하는 효과 등 여러 생리활성을 나타내면서 천연 자원에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.</p> <p>따라서, 본 연구에서는 복분자를 이용하여 methanol 추출물 및 분획물을 제조한 다음 항산화효과를 검색해 보고 위암 세포주에 대한 생육저해 효과를 MTT로 확인하고 comet assay를 통하여 복분자의 위암세포에 대한 유전적 손상유도 효과를 확인하고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 및 제조</h2> <p>본 실험에 사용한 복분자는 대구광역시 약령시장에서 건조상태인 것을 구입하여 건조된 시료 \( 100 \mathrm { g } \)을 10배 용량의 \( 80 \% \) methanol과 혼합하여 24시간 동안 정치 추출하고, 이를 3회 반복 추출하였다. 추출액은 여과지(Whatman No. 3, England)로 여과한 다음 rotary evaporator (Buchi R3000, Japan)로 농축한 후 동결건조하여 ethanol 추출물로 사용하였다. 복분자 methanol 추출물은 20배(w/v)의 증류수를 가하여 현탁시킨 후 동량의 ethylacetate를 가하여 진탕하고 방치한 다음 분획하고 농축하여 ethylacetate fr. 을 얻었고, 수용성층은 다시 n-butanol을 첨가하여 순차 분획한 후 농축하여 butanol fr.을 얻었다. 남은 수용성 층은 농축하여 water fr.을 제조하였다. 위 시료들은 - \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하면서 사용하였다.</p> <h2>총 폴리페놀 함량</h2> <p>총 폴리페놀 함량은 분석방법으로 널리 사용되고 있는 Folin Denis법을 응용하여 측정하였다. 즉, 각 methanol 추출물 시료 \( 1 \mathrm { mg } \)을 중류수 \( 1 \mathrm { ml } \)에 녹이고 10배 희석한 희석액 \( 2 \mathrm { ml } \)에 2배로 회석한 Folin 시약 \( 2 \mathrm { ml } \)을 첨가하고 잘 혼합한 후 3분간 방치한 후 \( 2 \mathrm { ml } \)의 \( 10 \% \) \( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \)를 서서히 가하였다. 이 혼합액을 1시간동안 방치한 후 UV/visible spectrophotometer (UVIKON 922, Kontron, Italy)를 사용하여 \( 700 \mathrm { ~nm } \)에서 홉광도를 측정하였다. 이때 총 폴리페놀 화합물은 Tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. Tannic acid를 이용한 표준곡선은 tannic acid의 최종 농도가 \( 5,25,50 \mathrm { ~ } \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)이 되도록 하여 위와 같은 방법으로 \( 700 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.</p>