균주의 혈전분해동위효소와 chitin 분해동위효소를 확인하기 위하여 각각 \( 10 \% \) fibrin-polyacrylamide gel와 \( 0.1 \% \) glycol chitin을 포함한 \( 10 \% \) poly-acrylamide gel상에서 전기영동을 실시했다. 그 결과 대략적인 분자량이 \( 23.0,62.0,72.0 \mathrm { kDa } \)인 3종류의 혈전분해효소 isozym band와 대략적인 분자량이 \( 55.0, 62.0 \mathrm { kDa } \)인 2가지의 chitin 용해요소 isozyme band를 확인할 수 있었다.
<h2>SDS-PAGE 및 zymogram assay</h2> <p>분리된 균주 B. licheniformis SC082의 혈전분해동위효소를 확인하기 위하여 fibrinogen 농도가 \( 0.12 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \)가 되게 poly-acrylamide 용액에 혼합한 후 즉시thrombin ( \(1,000 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } \))을 첨가한 \( 10 \% \) fibrin-polyacrylamide gel 상에서 전기영동을 실시하였다. Fibrin 분해능을 지닌 단백질 분획은 활성염색법에 의해 gel상의 fibrin을 분해하여 Coomassie blue R-250 염색 결과에서 투명대로서 나타났다. 활성을 가지는 3종류의 혈전분해효소 isozyme band는 그림 6A와 같이 확인 할 수 있었는데 대략적인 분자량은 \( 23.0,62.0,72.0 \mathrm { kDa } \) 이었다. 보고된 바에 의하면 Bacillus 속 미생물 중에서 혈전분해능이 매우 높은 균주 중 B. sublilis BB-1가 알려져 있는데 이 균구의 혈전용해 동위효소 분자량은 각각 \( 19,25,30,45,60 \mathrm { kDa } \)으로 조사되었다. 5종류의 혈전분해효소 isozyme을 가지고 있는 이 균주는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , \mathrm { pH } 7.0 \)에서 6시간 반응으로 plasmin 보다 4배나 높은 혈전분해능을 나타내었는데, 이와 같이 매우 높은 현전분해능은 다수의 혈전용해동위효소에 의한 것임을 본 실험의 결과와 함께 증명 되고 있다.</p> <p>분리된 균주 B. licheniformis SC082의 chitin 분해동위효소를 확인하기 위하여 \( 0.1 \% \) glycol chitin을 포함한 \( 10 \% \) poly-acrylamide gel상에서 전기영동을 실시하였다. Chitin 분해능을 지닌 단백질 분획은 활성염색법에 의해 gel상의 glycol chi-tin을 분해하여 Coomassie blue R-250 염색결과에서 투명대로서 나타났다. 활성을 가지는 2종류의 chitin용해효소 isozyme band는 그림 6B와 같이 확인할 수 있었는데 대략적인 분자량은 chitinase가 \( 55.0, 62.0 \mathrm { kDa } \)이었다. 현재까지 보고된 균주가 생산하는 chitinase의 분자량은 Aeromonas 속들의 105 110 \( \mathrm { kDa } \), Vibrio 속들의 \( 60 \sim 63 \mathrm { kDa } \), Serratia 속들의 \( 50 \sim 58 \mathrm { kDa } \), Streptomyces와 Mucor 속들의 \( 30 \sim38 \mathrm { kDa } \), B. licheniformis X-7u의 chitinase I \( 89 \mathrm { kDa } \), II \( 76 \mathrm { kDa } \), III \( 66 \mathrm { kDa } \), IV \( 59 \mathrm { kDa } \) 등이 밝혀져 있으며 subunit의 구조는 식물과 미생물 기원의 모든 효소가 monomer로 보고되어 있다. B. subtilis에서 Kim 등이 \( 56 \mathrm { kDa } \), B. circulans No 4.1에서 \( 45 \mathrm { kDa } \) 크기의 chitinase를 보고하였다.</p>