5주령의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 동물실험실에서 시판 고형사료로 1주간 적응하고 콜레스테롤을 첨가하지 않은 기본식이로 1주간 예비사육하여 난괴법을 통해 7마리씩 5그룹으로 4주간 실험했다. 실험식이군은 정상군, 대조군 및 실험군으로 분류했고 실험군은 한약재 혼합물을 식이에 \(1\%\) 농도로 첨가하고 각각 마늘추출물 \(0.3\%\) 첨가군(G-\(0.3\%\)), 마늘추출물 \(0.5\%\) 첨가군(G-\(0.5\%\)) 마늘추출물 \(0.7\%\) 첨가군(G-\(0.7\%\))으로 구성했다. 최종일에 16시간 절식 후 에테르로 마취해 심장에서 혈액을 제거하고 장기를 적출하여 중량측정 후 적출된 간장은 생리식염수로 씻어 흡수지로 물기제거 후 실험에 활용했다. 실험결과는 SPSS package를 통해 실험군당 평균 표준편차로 표시했고, 통계적 유의성 검정을 위해 일원배치 분산분석 후 Duncan's multiple range test로 비교했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>한약재는 문헌고찰을 통하여 약리적으로 체내 지질개선 및 동맥경화 저해활성이 있는 것으로 알려진 결명자 (Gyeolmyeongja, Cassia obtusifolia Linne), 하수오(Hasuo,Polygoni multiflori Radix), 영지(Youngji, Ganoderma lucium) 및 산사육(Sansayuk, Crataeous pimatifida Bunge) 4종을 선정하였으며, 경남 진주시 소재 한약방에서 건조된 형태로 시판되는 것을 구입하였다. 마늘은 경남 남해군에서 생산된 것을 산지로부터 구입하여 박피 후 세척하여 실험에 사용하였다.</p> <h2>시료의 제조</h2> <p>마늘 및 4종의 한약재는 각각 \(100\mathrm{~g} \)에 대하여 10배의 증류수를 넣어 \(95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕조상에서 4시간 동안 환류냉각하면서 2회 반복 추출하였다. 추출물을 진공동결건조하여 분말을 얻어 \(-40^{\circ}\mathrm{C} \)에 밀봉하여 보관해 두고 항산화능 측정 및 흰쥐의 사육시 식이 첨가물로 사용하였다. 시료의 추출 수율은 추출 전 시료에 대한 추출물의 건조 후 중량백분율로 계산하였다.</p> <P>마늘과 한약재 복합물의 제조는 각 4종의 한약재 추출물을 \(250\mu \mathrm{g} \)씩 혼합하여 최종농도를 \(1,000\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 한 다음, 여기에 마늘 열수추출물 0, 0.05, 0.1, 0.3, 0.5 및 \(1\%\) 농도가 되도록 용해시켰으며, 복합물은 제조한 즉시 실험에 사용하였다.</p> <h2>항산화능의 측정</h2> <p>총 페놀 함량은 Folin-Denis법에 따라 측정하여 caffeic acid (Sigma Co., St. Louis, Mo, USA)로부터 얻은 검량선으로부터 총 페놀 함량을 산출하였다. 플라보노이드 함량은 Moreno 등의 방법에 따라 측정하여 quercetin (Sigma Co.)으로부터 얻은 검량선으로부터 총 플라보노이드 함량을 계산하였다. 전자공여능은 Blois의 방법을 변형하여 1,1-di-phenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)에 대한 전자공여 효과로 나타내었다. 환원력은 Oyaizu의 방법에 따라 측정하여 흡광도 값으로 나타내었다. Hydroxyl radical 소거능은 Gutteridge의 방법에 따라 측정하였으며, 대조구에 대한 시료 첨가구의 소거능으로 산출하였다. \(\beta \)-carotene linoleic acid계에서 항산화능 측정은 \(\beta \)-carotene과 linoleic acid를 혼합한 기질액을 이용하여 대조구에 대한 시료 첨가구의 항산화능으로 계산하였다.</p> <h2>실험동물의 사육 및 식이조성</h2> <p>5주령의 \(150\pm 10\mathrm{~g} \)인 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 (주)샘타코(오산, Korea)로부터 분양받아, 동물실험실(온도 \(22\pm2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \(50\pm 5\%\), 명암주기 07:00~19:00) 시판 고형사료(삼양사, Korea)로 1주간 적응 및 콜레스테롤을 첨가하지 않은 기본식이로 1주간 예비사육 후 난괴법으로 7마리씩 5그룹으로 나누어 4주간 실험 사육하였다. 실험식이군은 정상군(Normal), 대조군(Control) 및 실험군으로 분류하였으며, 실험군은 한약재 혼합물을 식이에 \(1\%\) 농도로 동일하게 첨가하고 여기에 각각 마늘추출물 \(0.3\%\) 첨가군(G-\(0.3\%\)), 마늘추출물 \(0.5\%\) 첨가군(G-\(0.5\%\)) 마늘추출물 \(0.7\%\) 첨가군(G-\(0.7\%\))으로 구성하였으며, 각 실험군의 식이조성은 Table 1과 같다.</p> <h2>실험동물의 처리</h2> <p>실험사육 최종일에 16시간 절식 후 에테르로 마취하여 심장으로부터 혈액을 제거시킨 후 장기(간장, 심장, 신장, 비장, 폐, 고환)를 적출하여 중량을 측정하였으며, 적출된 간장은 생리식염수로 씻어 흡수지로 물기를 제거한 후 실험에 사용하였다.</p> <h2>간장 조직의 지질 성분 분석</h2> <p>간장 조직 \(0.5\mathrm{~g} \)을 취하여 chloroform:methanol (C:M=2:1,v/v)을 가하여 tissue grinder (Daihan WOS01010, Korea)로 마쇄하여 \(30\mathrm{ml} \)로 정용한 다음 냉암소에 하룻밤 정치시켜 지질을 추출한 다음 일정량을 취해 완전 건고시킨 것을 간장 조직 중 지질 분석용 시료로 사용하였다. 총지질(total lipids)은 sulfophospho-vanillin 법에 따라 지질추출액에 진환 황산 및 phospho-vanillin 시약을 첨가한 후 \(37^{\circ} \mathrm{C}\)에서 15분간 반응시켜 시료 무첨가구를 대조로 하여 \(540\mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 총 콜레스테롤(total cholesterol)은 총 콜레스테롤 측정용 kit시약(AM 202-k, Asan, Korea), 중성지방(triglyceride)은 중성지방 측정용 kit시약(AM 157S-k, Asan, Korea), 인지질은 인지질 측정용 kit시약(SICDIA L PL, Eiken, Japan)으로 측정하였으며 표준검량선에 의해 산출하였다.</p> <h2>간장 조직의 지질과산화물 함량 및 항산화능 측정</h2> <p>지질과산화물 함량은 간장 조직 \(1\mathrm{~g}\)에 \(1.5\%\mathrm{~KCl}\) 용액을 가하여 균질화한 후 균질액 \(0.5\mathrm{ml} \)를 취하여 \(3\mathrm{ml} \)의 \(1\% \) phos-phoric acid와 \(1\mathrm{ml} \)의 \(0.6\% \)TBA를 넣어 잘 혼합하였다. 이것을 \(95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕조상에서 45분간 가열한 후 butanol로 발색물질을 추출한 다음 \(532\mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 간장 조직의 지질과산화물 함량은 1,1,3,3-tetraethoxypropane으로부터 얻은 검량선으로부터 TBARS 값을 산출하였다.</p> <p>간장 조직의 항산화능은 Lim 등의 방법에 따라 상기의 균질액 \(100 \mu\)에 tris-\(\mathrm{HCl}\) 완충액(\(100 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{pH} 7.4\)) 및 DPPH( \(2.5\mathrm{mg}\)/\(100\mathrm{ml}\) ethanol) 용액 각 \(2\mathrm{ml} \)를 가한 다음 실온의 암실에서 15분간 반응시켰다. 여기에 chloroform을 가하여 발색물질을 추출하여 \(157\mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 시료 무첨가구에 대한 시료 첨가구의 흡광도 비(%)로 나타내었다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>실험으로부터 얻은 결과는 SPSS package를 이용하여 실험군당 평균 \( \pm \) 표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검정은 일원배치 분산분석을 한 후 \(\mathrm{p}<0.05 \) 수준에서 Duncan's multiple range test로 비교분석하였다.</p>