본 실험에서는 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 정제도 확인 후 분자량 측정을 위하여 SDS-PAGE를 실시하였고, 단일밴드를 확인함으로써 순수하게 정제되었음을 확인하였다. 정제된 동위효소로 역학실험 및 항체생성에 항원으로 사용하였다. 본 실험에서 동일 동위효소의 피루브산 기질의존성 측정 결과, \( 29.9 \% \)의 활성이 남아있었음을 확인할 수 있었다.
<h2>LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 분자량, 등전점 및 최적 \( \mathrm { pH } \)</h2> <p>LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 정제도를 확인하고 분자량을 측정하기 위해 SDS-PAGE를 실시한 결과, 하부단위체 A가 단일밴드로 나타나 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소가 순수하게 정제되었음을 확인하였고, 정제된 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소는 역학실험 및 항체생성을 위한 항원으로 사용하였다. 하부단위체 A 의 분자량이 \( 35.1 \mathrm { kDa } \) 으로 측정되어 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 분자량은 \( 140.4 \mathrm { kDa } \) 이라고 추정하였고, 이는 돔발상어, 넙치, 참치, 황소 개구리, 오리, 칠면조, 꿩 및 타조 같은 척추동물들의 일반적 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소 분자량과 유사하였다. 또한 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소를 IEF한 결과 등전점은 7.0으로 나타났는데, 이는 생활환경이나 서식지가 유사한 꺽지 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 등 전점 7.1과 거의 일치하였다. LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소에 대한 \( \mathrm { pH } \) 안정성을 측정한 결과 \( \mathrm { pH } 7.0 \sim 8.5 \) 에서 \( 70 \% \) 이상의 LDH 활성이 유지되어 좁은 범위의 \( \mathrm { pH } \) 안정성을 보였고, \( \mathrm { pH } 5.5 \sim 8.5 \) 에서는 \( 50 \% \) 이상의 LDH 활성이 유지되었으며, \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소가 최적 반응활성을 나타내는 \( \mathrm { pH } \) 조건은 7.5로 나타났다.</p> <h2>LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 기질의존성 및 \( K_ { m } ^ {\text { PYR } } , V_ {\max \text { 값 } } \)</h2> <p>LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소는 피루브산에 대한 저해반응이 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소와 달라서 고농도의 피루브산에서 비교적 저해정도가 작다. 본 실험에서 LDH \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 피루브산에 대한 기질의존성을 측정한 결과, \( 10 \mathrm { mM } \) 피루브산에서 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소는 \( 29.9 \% \)의 활성이 남아있었다. 이는 \( 10 \mathrm { mM } \) 피루브산에서 소 심장 LDH \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소의 활성이 \( 22 \% \) 남은 경우와 비교 할 때 차이는 작지만 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소가 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소보다 피루브산에 저해되는 정도가 작게 나타난다는 경향과 일치하였다.</p>