실험은 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 총 폴리페놀 함량은 Folin-Ciocalteu법을 변형시켜 측정하였고 tannic acid를 사용하였고 황칠나무 추출물을 시험관에 취한 후 증류수를 가하여 \( 2 \mathrm { ml } \) 로 정용하고 Folin-Ciocalteu reagent \( 0.3 \mathrm { ml } \) 를 가하여 잘 혼합한 다음 실온에서 3 분간 반응을 관찰하였다. 혼합물에 \( 7.5 \% \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \) 용액 \( 0.4 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 발색 시켜 실험하였다.
<h2>총 폴리페놀 함량 측정</h2> <p>황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 총 폴리페놀 함량은 Folin-Ciocalteu법을 약간 변형시켜 측정하였으며 표준 물질로는 tannic acid를 사용하여 분석하였다. 일정 농도의 황칠나무 추출물을 시험관에 취한 후 증류수를 가하여 \( 2 \mathrm { ml } \) 로 정용하고, Folin-Ciocalteu reagent \( 0.3 \mathrm { ml } \) 를 가하여 잘 혼합한 다음 실온에서 3 분간 반응시켰다. 혼합물에 \( 7.5 \% \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \) 용액 \( 0.4 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 발색 시킨 다음 \( 760 \mathrm { ~nm } \) 에서 훕광도를 측정하였다. 황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 총 폴리페놀 함량은 \( \mu \mathrm { g } \) tannic acid equivalents \( ( \mathrm { TAE } ) / \mathrm { ml } \) 로 나타내었다.</p> <h2>1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazy (DPPH) radical 소거능 측정</h2> <p>황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 DPPH radical 소거능은 Blois의 방법을 약간 변형시켜 DPPH에 대한 수소공여효과로 측정하였다. 96-well plate에 시료와 \( 150 \mu \mathrm { M } \) \( \mathrm { DPPH } \) 용액을 \( 1: 1 \) 의 비율로 혼합하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응 시킨 후, ELISA reader (Versa Max Microplate Reader, Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 540 \( \mathrm { nm } \) 에서 훕광도를 측정하였다. DPPH radical 소거능은 시료를 첨가하지 않은 대조그룹과의 흡광도차를 비교하여 free radical의 제거 활성을 백분율로 나타내었다.</p> <p>DPPH radical scavenging activity \( ( \%) = \) \[ \left (1- \frac {\text { 시료 첨가구의 흡광도 } } {\text { 시료 무첨가구 흡광도 } } \right ) \times 100 \]</p> <h2>Alcohol dehydrogenase (ADH) 활성 측정</h2> <p>황칠나무 잎과 줄기 물 추출물의 \( \mathrm { ADH } \) 효소 활성 측정 은 Choi 등과 Racker의 방법을 변형하여 측정하였으며, 생성된 \( \mathrm { NADH } \) 의 양을 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 훕광도를 측정하였다. 시험관에 alcohol \( 0.1 \mathrm { ml } , \mathrm { NAD } \) 수용액 \( (2 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } ) 0.5 \) \( \mathrm { ml } \) 및 시료 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 첨가하고 \( 10 \mathrm { mM } \) glycine- \( \mathrm { NaOH } \) buffer \( ( \mathrm { pH } 8.8) \) 를 총 부피가 \( 1.8 \mathrm { ml } \) 가 되도록 조절하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온 수조에서 10 분간 반응시킨 후 \( \mathrm { ADH } (10 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } ) \) 를 가하여 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 spectrophotometer (Amersham Pharmacia Bio-tech, Cambridge, UK)를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 대조구는 시료 대신 증류수를 첨가하였으며, positive con-trol은 약국에서 구입한 간장 활성화제 hepos (CHO-A Pharm. Co. Ltd., Seoul. Korea)를 \( 50 \% \) 의 농도로 희석하여 사용하였다. \( \mathrm { ADH } \) 의 활성은 다음과 같은 식으로 상대적인 백분율로 계산하였다.</p>