본 연구는 LPS로 인해 늘어난 NO 분비량에 관해 참치심장 분획물이 끼치는 영향을 알아보았다. LPS로 인해 늘어난 NO분비량은 참치 심장 \(70 \% \) ethanol 추출물과 dichloromethane 분획물을 각기 농도별로 처리했을 때, 농도의존적으로 감소하는 것을 확인했다. dichloromethane 분획물이 NO 분비 억제에 효과적인 것으로 나타나 항염증 효과을 갖는 유효성분이 다량 함유되어 있는 것으로 생각된다. dichloromethane 분획물이 pro-inflammatory cytokine 분비량 억제를 통해 항염증 효능를 보임을 확인했다.
<h2>Dichloromethane 분획물의 NO 생성 억제 효과</h2> <p>NO는 염증 반응 시 면역세포의 합성 효소에 의해 L-arginine으로부터 생성되는 반응성이 강한 무기 유리체로 인체 내에서 면역반응, 세포독성, 신경전달계 및 혈관 이완 등 여러 생물학적인 과정이나 피부손상 및 노화의 주요 원인이며 과도한 증가는 염증을 유발하고 조직의 손상을 유도하는 병적인 반응에서 중요한 물질이다. 본 연구에서는 LPS에 의해 증가된 NO 분비량에 대해 참치심장 분획물이 미치는 영향을 살펴보았다. LPS에 의해 증가된 NO분비량은 참치 심장 70 \( \% \) ethanol 추출물과 dichloromethane 분획물을 각각 농도별로 처리하였을 때, 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다. 특히, dichloromethane 분획물은 100 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도로 처리하였을 때 약 63.8 \( \% \)로 NO 생성이 ethanol 추출물 28.2 \( \% \) 보다 더 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, dichloromethane 분획물이 NO 분비 억제에 효과가 좋 은 것으로 나타나 항염증 효능을 가지는 유효성분이 다량 함 유되어 있는 것으로 사료된다.</p> <h2>Dichloromethane 분획물의 pro-inflammatory cytokines 생성 억제 효과</h2> <p>대식세포의 toll-like receptor 4에 LPS } 가 결합하여 유도되는 pro-inflammatory cytokine으로 TNF- \( \alpha, \mathrm { IL } -6 \) 및 IL-1 \( \beta \)가 있다. 이런 cytokine들은 면역 반응을 일으키고 과도하게 생성되면 발열 및 조직을 손상시키고 염증반응을 촉진하게 된다. 본 실험에서는 대식세포주인 RAW 264.7세포에 LPS를 처리하여 자극시켜 \( \mathrm { IL } -6, \mathrm { TNF } - \alpha \) 및 \( \mathrm { IL } -1 \beta \)를 분비를 유도시킨 후 참치 심장 분획물의 억제 활성을 ELISA 방법을 통하여 측정하였다. 그 결과, 전염증성 cytokine의 분비량은 LPS 처리에 의해 분비량이 증가하였으며, 참치 심장 에탄올 추출물 및 dichloromethane 분획물을 처리하였을 때 cytokine 분비량은 농도 의존적으로 감소되는 것으로 나타났다. IL-6의 분비량은 50 및 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서, dichloromethane 분획물은 42 및 56 \( \% \) 로 IL-6 분비량을 감소시켜, \( 70 \% \) ethanol 추출물 (34 \( \% \),35 \( \% \)) 보다 억제효과가 더 크게 나타났다. TNF- \( \alpha \)의 경우, dichloromethane 분획물과 70 \( \% \) ethanol 추출물 모두 농도 의존적으로 분비가 감소되 었고, 70 \( \% \) ethanol 추출물이 효과가 조금 더 높은 것으로 나타났다. \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서는 각각 54 \( \% \) 및 \( 61 \% \) 의 감소효과를 나타내었다. IL-1 \( \beta \)에서는 dichloromethane 분획물은 \( 10-100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)농도에서 약 56 \( \% \) 의 감소효과를 나타내었고, 70 \( \% \) 에탄올 추출물은 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 약 40 \( \% \)의 감소량이 억제에 효과가 좋은 것으로 나타났다. 따라서 참치 심장 분획물 중 dichloromethane 분획물이 pro-inflammatory cytokine 분비량 억제를 통해 항염증 효과를 나타냄을 확인 하였다.</p>