3T3 세포주에 MNNG를 처리하였을때 WDI가 평균 204로 관찰되었고 이를 \( 100 \% \) 손상으로 계산하여 다른 시료처리구와 비교하여 손상정도를 환산한 결과 RJ 및 RSP의 경우 유전독성이 거의 없는 것으로 확인되었으며, 한편 무는 항유전독성을 검토한 결과 MNNG에 RSP를 첨가한 RSM의 경우 유전 독성이 \( 100 \% \)에서 \( 70 \% \)로 감소되는 결과를 관찰 할 수 있었으며, RJM의 경우 \( 43 \% \) 가량의 강력한 항유전독성을 관찰 할 수 있었다. 또한 항균활성 및 항산화활성에 기인한 강력한 항유전독성과 세포독성이 거의 없는 한국산 무 및 그 종자유래 단백질을 실험한 결과 천연물질로서 화장품, 식품의 천연보존제 등 여러 분야에서의 적용성을 확인할 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1><h2>시료의 유전독성, 항유전독성과 세포독성</h2><p>3T3 세포주에 직접발암원인 MNNG를 처리하였을때의 WDI(weighted damage index)가 평균 204로 관찰되었고 이를 \( 100 \% \) 손상으로 계산하여 다른 시료처리구와 비교하여 손상정도를 환산한 결과 Fig. 1와 같이 RJ 및 RSP의 경우 음성대조구와 거의 같은 수준의 손상효과가 관찰되어 유전독성이 거의 없는 것으로 확인되었다. 한편 무는 강한 항산화활성을 가진 것으로 보고되어 있어 항유전독성을 검토한 결과 MNNG에 RSP를 첨가한 RSM의 경우 유전 독성이 \( 100 \% \)에서 \( 70 \% \)로 감소되는 결과를 관찰 할 수 있었으며, MNNG에 RJ를 첨가한 시로 RJM의 경우 무려 \( 43 \% \) 가량의 매우 강력한 항유전독성을 관찰 할 수 있었다. 따라서 RSP와 RJ는 보존제 뿐 아니라 유효활성을 갖는 기능성 첨가제로서의 가능성을 시사한다.</p><p>또한 시료의 세포에 대한 안전성을 검토하기 위해 3T3 세포주에 각각의 시료를 첨가시킨 후 세포가 괴사할 때 방출되는 LDH를 측정한 결과 Fig. 3에서 모식한 것과 같이 \( 10 \mathrm{mg} \) / \( \mathrm{ml} \) RSP의 경우 \( 22 \% \) 미만의 세포독성을, \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) RJ의 경우 \( 15 \% \) 미만의 세포독성이 관찰되었으며 그 이상의 농도에서도 ED50 값은 관찰되지 않았다. 또한 \( 0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) RSP 및 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) RJ 이하의 농도에서는 세포독성은 관찰되지 않았고 시료와 세포를 6시간 및 12시간 반응시킨 결과 또한 위의 결과와 뚜렷한 차이가 관찰 되지 않음을 확인하였다.</p><h2>시료의 오염미생물에 대한 항균활성</h2><p>항균활성 검증에 앞서 기능성 한방 화장품의 오염정도를 측정한 결과, 저은 \( \left(4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 임에도 불구하고 \( 2 \sim 4 \)주가 지나면 많은 수의 미생물 집락이 관찰되었다. 4주간 보관한 화장품시료 (C1, C2)의 경우 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)당 \( 10^{5} \)개 이상의 오염 미생물이 검출되었으며 주로 세균집락이 관찰되었다. 또한 2주간 보관된 시료(C3, C4)의 경우에는 주로 균사를 형성하는 진균성 집락이었으며 시료 \( 1 \mathrm{ml} \)당 \( 10^{3} \)개 이상의 오염미생물이 관찰되었다. 이에 따라 비교적 오염정도가 심한 시료 C1과 C4를 선정하여 이에 대한 RJ 및 RSP의 오염저해활성을 관찰한 결과, RJ의 경우 \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 시료와 동량 혼합하였을때 C1에서는 저해활성이 거의 관찰되지 않았으나, C4의 경우 약 \( 76 \% \) 가량의 항균활성을 보였다. 또한 RSP의 경우 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로서 시료와 혼합하였을 때 C1에서는 약 \( 85 \% \) 가량의 오염균 억제효과가 있었으며 또한 C4에서도 \( 79 \% \) 가량의 항균활성을 확인할 수 있었다. 한편 양성대조구로 사용한 methyl paraben의 경우에는 C1에 대해서는 약 \( 95 \% \), C4에는 약 \( 89 \% \) 가량의 항균활성을 보였다. 이전 연구에서 밝힌 바와 같이 RJ 의 경우 항진균활성이 강하게 관찰되었기 때문에 세균성 오염이 심한 C1 시료에 활성을 보이지 못한 것으로 사료된다. 한편 RSP의 경우 그람양성인 바실러스균과 그람음성인 대장균을 지표균으로 하여 사전실험을 한 결과 별다른 활성을 보이지 않았으나, 세균성 오염이 삼한 C1시료에 강한 저해 활성을 보였는데, 단지 host spectrum의 차이에서 기인한 것인지 다른 저해 메커니즘의 문제인지는 추후 연구가 요구된다.</p><p>첨가물에 있어서 천연 보존제는 그 부가가치가 큰 유효성분들로서 그 특성상 생물공학적 기법이 적용되기 좋은 기능성 신소재이다. 한국산 무 및 그 종자유래 단백질의 보존제로서의 가능성을 조사한 결과 유효한 항균활성 및 항산화활성에 기인한 강력한 항유전독성을 관찰 할 수 있었다. 또한, 세포독성이 거의 없는 것으로 관찰되어 첨가물로서의 안전성 또한 확인할 수 있었다. 본 유효성분들은 우리 농산물에서 추출된 천연물질로서 화장품 뿐 아니라 식품의 천연보존제 등 여러 분야에서의 적용이 가능 할 것으로 사료된다. 또한 이러한 효과적이고도 안전한 천연 첨가물의 효율적인 생산 및 소비가 이루어져 국민건강 뿐 아니라 농가소득 창출 등에 이바지되어야 할 것이다.</p>