본 연구에서는 마우스 대식 세포에 자외선 조사한 버섯추출물을 농도별로 처리하여 대조군 대비 세포 생존율에 문제가 없음을 확인하였다. 또한 대식세포에 LPS를 처리하여 pro-inflammatory cytokine인 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6의 생성 억제 조절 효과를 나타냄을 확인하였고, 결과적으로 자외선 조사한 표고버섯에서 추출한 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)가 TNF- \( \alpha \)와 IL-6의 분비억제를 통한 항염 효능을 나타냄을 입증하였다.
<h2>버섯추출물의 항염증 효과</h2> <p>UV-B 조사한 표고버섯에서 추출한 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)의 항염증 활성효과를 확인하기 위해 세포독성을 마우스 대식세포에서 MTT assay 방법을 통해 확인하였다. RAW 264.7 세포에 자외선 조사한 버섯추출물을 \( 0.5,~1,~2,~4 \mathrm { ~ug } / \mathrm { ml } \) 농도로 처리하여 세포독성을 확인한 결과 대조군 대비 세포 생존율에 문제가 없음을 확인하였다(Fig. 1). 이를 바탕으로 본 연구에서 사용한 효능 검증에는 버섯 추출물의 농도를 \( 2 \mathrm { ~ug } / \mathrm { ml } \) 농도 범위로 설정하였다.</p> <p>LPS는 그람 음성균의 세포 외막에 존재하며 대식세포에 처리하면 염증성 cytokine의 발현을 유도하게 된다. Cytokine은 면역세포가 분비하는 단백질로 면역세포의 활성, 증식 및 분화를 조절하여 염증반응을 매개하는 인자이다. 그 중 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6는 대표적인 pro-inflam-matory cytokine으로 알려져 있다. TNF- \( \alpha \)는 염증을 통한 생체방어기구에 관여하는 cytokine으로서 주로 대식세포에서 생성되지만 호중구를 비롯한 림프구, NK 세포, 비만세포 등에서도 생성이 되고 항종양활성, 항미생물활성, 염증 반응 등에 관여한다. IL-6는 림프구를 활성화시켜 항체생산을 증가시키고 염증성 질환에서 발현이 증가된다고 보고되어 있으며 IL-1 \( \beta \)는 감염이나 다른 자극에 대한 숙주의 염증반응 매개자로서 역할을 한다.</p> <p>본 연구에서는 자외선 조사한 표고버섯 추출물의 세포 내 항염증 효능을 확인하기 위하여 LPS를 처리한 대식세포에서 pro-inflammatory cytokine인 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6의 생성 억제 조절 효과를 확인하였다. 우선 TNF- \( \alpha \)의 경우 RAW 264.7 대식세포에서 LPS ( \(1 \mathrm { ~ug/ml } \))로 염증을 유도하였을 경우 \( 1221 \pm 40.7 \mathrm { ~pg } / \mathrm { ml } \)의 TNF- \( \alpha \)가 분비되었고 이를 자외선 조사한 표고버섯 추출물을 \( 0.5,~1,~2 \mathrm { ~ug } / \mathrm { ml } \) 농도로 처리하면 각각 \( 1016 \pm 51.7,~795 \pm 155.2,~245 \pm 72.6 \mathrm { ~pg } / \mathrm { ml } \) 로 TNF- \( \alpha \) 분비가 농도 의존적으로 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 2A). 이는 LPS 대조군과 비교했을 때 각각 \( 83 \%, ~65 \%, ~20 \% \)로 TNF- \( \alpha \) 분비 억제능력을 보여주고 있다. 또한 자외선 조사한 표고버섯 추출물의 IL-6 분비에 대한 효과를 확인하였다. LPS에 의해 유도된 IL-6는 \( 504 \pm 12.2 \mathrm { ~pg } / \mathrm { ml } \)로 측정되었고 표고버섯 추출물을 처리하였을 때는 약 \( 59 \% \)로 분비 억제효과를 나타내었다(Fig. 2B). 같은 조건에서 IL- \(1 \beta \)의 분비도 확인하였으나 IL- \(1 \beta \)의 분비에는 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다(data not shown). 이러한 결과들로부터 자외선 조사한 표고버섯에서 추출한 비타민 \( \mathrm { D } _ { 2 } \)가 TNF- \( \alpha \)와 IL-6의 분비억제를 통한 항염 효능을 나타낼 것으로 예측할 수 있다.</p>