효소의 최적 반응 온도를 확인하기 위해, 효소를 Tris-HCl buffer에서 녹인 뒤 fibrin plate에 점적하고 각기 다른 온도에서 4시간 동안 반응시켜 효소 활성을 비교하였다. 또한, 금속 이온의 영향을 알아보기 위해 다양한 금속 이온을 첨가한 후 효소의 활성을 비교하였다. 결과적으로 최적 배양온도는 \( 35 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 생육 가능한 온도 범위는 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 45 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이며, 생육 가능한 \( \mathrm { pH } \) 범위는 \( 5. 0 \sim 9
 
 . 0 \)이고, 생육 최적 \( \mathrm { pH } \)는 7.0이었다.
<h3>효소활성에 대한 온도의 영향</h3> <p>효소의 최적반응 온도를 결정하기 위해 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris-HCl buffer \( ( \mathrm { pH } \) 8.0)로 녹인 효소를 점적한 fibrin plate \( ( \mathrm { pH } 7.8) \)를 각 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위의 배양기에 넣고 4 시간 후 plate의 용해면적을 축정하여 효소의 활성을 비교하였다. 온도의 안정성은 효소액을 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 각각 30 분간 열처리 한 후 효소를 점적한 fibrin plate \( ( \mathrm { pH } 7.8) \) 를 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 시간 동안 방치한 후 잔존 활성을 측정하였다.</p> <h3>효소활성에 미치는 금속 2 가 이온의 영향</h3> <p>정제한 효소의 활성에 대한 금속 이온의 영향을 알아보기 위하여 \( \mathrm { CaCl } _ { 2 } \), \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \), \( \mathrm { CuSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { FeSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { MgSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { ZnSO } 4, \) EDTA를 최종 농도가 각각 \( 1 \mathrm { mM } \) 이 되도록 혈 전용해 효소를 녹인 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer (pH7.5)에 첨가한 뒤, 효소와 금속 2가 이온이 포함 혹은 효소만 포함된 용액을 \( 100 \mu l \) 씩 paper disc에 흡입시켜 fibrin plate에 점적하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 8 시간 반응 후 효소만 포함된 용해된 면적을 \( 100 \% \) 으로하여 각각의 금속이온이 포함된 효소용액의 용해된 면적을 상대적 측정값으로 나타내었다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주의 분리 및 동정</h2> <p>경남 김해시 일대에서 채취한 마른 볏짚으로부터 균주를 분리한 다음 이들 중 혈전용해 효소를 생산하는 균주를 선정하였다. 선정된 균주는 Gram 양성의 균주로 그 크기는 약 \( 0.49 \times 1.59 \mu \) 이었으며, 운동성이 있고 호기성이며 내생포자를 형성하였다. 최적 배양온도는 \( 35 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 였고, \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 45 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 생육가능하였다. 생육 가능한 \( \mathrm { pH } \) 의 범위는 \( 5.0 \sim 9.0 \) 이였고, 생육 최적 \( \mathrm { pH } \) 는 7.0이었다. 생화학적, 생리학적 특성은 Table 1에 나타내었다. 결론적으로 이 균주의 형태학적,생화학적, 생뢰학적 녹성을 분석해본 결과 Bacillus subtilis인것으로 확인되었다.</p>