세포 내 ROS 소거활성에 대한 평가는 에틸아세테이트 분획물을 에탄올에 녹인 후 syringe filter로 여과한 다음 DCF-DA를 이용하여 fluorescence을 측정하였으며, 인동덩굴 추출물을 이용해 극성 TLC 및 비극성 HPLC 분석하였고, 성분 확인은 NP-PEG 발색법을 이용한 띠의 색상 등으로 이용해 진행하였다.
<h3>세포 내 ROS 소거활성 평가.</h3> <p>세포 내 ROS 소거활성 평가는 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate \( \mathrm { H } _ { 2 } \) DCF-DA)를 사용하여 fluorescence를 측정하는 방법을 이용하였다. HaCaT 세포를 96 -well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well의 농도로 분주하여 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양한 후, 농도별로 희석한 시료를 처리하여 \( 24 \mathrm { ~h } \) 동안 배양하였다. Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS)를 이용하여 세포를 2 회 세척하였다. \( 20 \mu \mathrm { M } \) \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { DCF } - \mathrm { DA } \) 로 \( 30 \mathrm { ~min } \) 동안 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 처리한 후, CL-1000 ultraviolet crosslinker를 이용하여 DPBS 상태에서 200 \( \mathrm { mJ } / \mathrm { cm } ^ { 2 } \mathrm { UVB } \) 를 조사하여 세포 내 \( \mathrm { ROS } \) 를 생성시킨 직후, fluorescence ELISA reader (excitation, \( 490 \mathrm { ~nm } \) emission, \( 530 \mathrm { ~nm } \) ) 기기를 통하여 형광의 세기를 측정하였다.</p> <h2>TLC 및 HPLC를 이용한 인동덩굴 추출물의 성분 분석</h2> <p>인동덩굴 추출물 중 에틸아세테이트 분획물을 \( 100 \% \) 에탄올에 녹인 후, syringe filter (Milliopore \( 0.45 \mu \mathrm { m } \) )를 이용하여 여과한 후 여과된 추출물 용액을 이용하여 극성 TLC (normal phase) 및 비극성 HPLC (C18) 분석에 이용하였다. TLC분석 시 사용한 전개 용매는 Table 1 에 나타내었다. 성분은 이미 보고된 분광학적 자료, 표준물질의 \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) 값과 자외선 및 NP-PEG (natural products-polyethylene glycol, 2-aminoethyl diphenylborinate) 발색법을 이용한 띠의 색상 등을 통해 확인하였다. HPLC 분석은 \( 2 \% \) acetic acid 수용액과 \( 0.5 \% \) acetic acid를 함유한 \( 50 \% \) acetonitrile 수용액을 이용해 기울기 용리법으로 분석하였고, HPLC 분리조건은 Table 2에 나타내었다.</p>