PyMS분석 결과는 NTSYS program package로 SHAN clustering program으로 그룹화하고 dendrogram으로 나타내는 방법으로 도출하였고, Large subunit rDNA의 partial sequencing은 Kurtzman과 Robnett의 방법으로 DNA분리, PCR 증폭, Sequencing 반응은 ABI TaqDye- Deoxy Terminator Cycle Sequencing Kit를 쓰고, ABI TaqDye- Deoxy Terminator Cycle Sequencing Kit를 써서 ABC 310 DNAsequencer로 분석하여 NCBI-GenBank에 수록된 뉴클레오타이드 염기서열 데이터베이스와 유사도를 비교했다.
<h2>PyMS분석</h2> <p>PyMS분석올 위한 시료의 준비는 Timmuns등 \( [7,8] \) 이 기술한 방법으로 준비하였다. 준비한 시료의 pyrolysis mass spectrometry분석은 Horizon Instrument PyMS-200X (Hor-izon Instruments Lid, Heathfield, LK)를 사용하여 Tim-mins등 \( [7,8] \) 의 방법으로 분석하였다.</p> <p>PyMS 분석결과 도출된 각 균주의 정량적인 pyrolysis mass spectra는 퍼센트값으로 표준화하고 principal com-ponent analysis \( [14,15] \) 로 처리하였다. 이와 같이 얻어진 data는 NTSYS program package [16]를 이응하여 SHAN clustering program으로 그룹화하고 그 결과를 Tree display program올 이용하여 dendrogram으로 나타내었다.</p> <h3>Large subunit rDNA의 partial sequencing</h3> <p>DNA분리와 large subunit rDNA의 D1/D2 영역의 PCR 증폭은 Kurtzman과 Robnett [10]의 방법으로 수행하었다. 증폭한 단편들은 QIAquick PCR purification kit (Qiagen)를 사용하여 정제하였다. Sequencing 반응은 ABI TaqDye- Deoxy Terminator Cycle Sequencing Kit를 사용하었으며, 생산된 DNA 단편들은 ABC 310 DNAsequencer (Applied Biosystems)를 이용하여 분석하였다.</p> <p>실험에 이용한 효모균주의 동정은 각 균주의 large sub-unit rDNA의 D1/D2 영역의 서열을 The National Center for Biotechnology Information (NCBI)- GenBank에 수록되어 있는 뉴클레오타이드 염기서열 데이터베이스와 유사도를 비교하여 동정하였다[10].</p> <p>또한 실험한 균주들이 니타내는 분자 진화적인 관계를 살펴보기 위하여 multiple-sequence alignment program인 clustal w [17]를 사용하여 염기 서열들을 정렬하였으며, ph-ylip program package [18]를 이용하여 unrooted phylo-genetic tree를 그려 균주들 사이에 존재하는 진화적 관계를 나타내었다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주 동정</h2> <p>Kurtzman과 Robnett[11]은 약 500종의 효모 균주를 대상으로 large subuint rDNA DI/D2 영역의 염기배열을 비교 분석하여 같은 종 (species)내 strain의 경우 이 영역의 뉴클레오타이드 치환 (nucleitide substitutions)이 \( 1 \% \) (약 \( 3-4 \)개 bp)를 넘지 않는다는 것과 이 영역의 염기배열 결정으로 대부분의 효모를 동정할 수 있다는 것을 보고하였다. 그리므로 본 보고에서 분리된 균주의 동정은 Kurtzman<p>등의 연구결과를 적응하여, 븐리한 균주의 large subunt rDNA의 D1/D2 영역 염기배열을 결정하고 NCBI에 수록된 뉴클레오타이드의 데이터베이스와 비교하였다. 비교결과 분리균주와 염기배열의 유사도가 99 \%가 넘는 균주를 선별하여 이틀 기준으로 동정하였으며 동징한 결과는 Table 1이 정리하였다. 공단폐수로부터 분리한 16개의 효모 균주를 동정한 결과 Rhodotorula mucilaginosa 5주, Pichia guillier-mondil 2주, Tnchosporon asehii 2주, Dipodascus capitatus 4 주, Candida rugosa 2주와 미동정 균주 1주 (Y16)로 나타났다.</p>