본 실험에서 GTL (\(500 \mathrm{~g}\))을 온도 (\(200^{\circ} \mathrm{C}\), \(240^{\circ} \mathrm{C}\))가 조절되는 fry-pan에서 10, 30, 60 및 120분 roasting 하였다. 분쇄한 시료를 증류수 \( (30 \mathrm{~ml}) \)와 혼합하여 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 추출했다. 관능평가를 위해 시료 열수추출물의 향미를 평가했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>GTL (우전엽)은 하동녹차연구소(하동, 경남)에서 제공받았고 인체 유방암세포 주MCF-7, 인체 전립선암세포 주PC-3, 인체 신경모세포 주SK-N-SH 및 쥐 심근세포 주H9c2는 Korea Cell Line Bank (Seoul, Korea)에서 구입하였다. Dulbecco' Modified Eagle Medium/Ham' F-12 nutrient (DMEM/F12), Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640, fetal bovine serum (FBS), penicillin \( (10,000 \mathrm{~U} / \mathrm{ml}) \)과 streptomycin \( 10\mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) ), \(0.25\%\) trypsin-EDTA는 Gibco BR사 (Rockville, MD), phosphate buffered saline (PBS), 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphyenyltetra-zolium (MTT) 및 bovine serum albu-min (BSA)은 Amresco사(Solon, OH)에서 구입하였다. Dimethyl sulfoxide (DMSO), polyvinyl difluoride (PVDF) membrane, \(\alpha\)-\(\alpha\)-diphenyl-\(\beta \)-picrylhydrazyl (DPPH), Folin-Ciocalteu's phenol 시약, gallic acid 및 Bradford 시약은 Sigma-Aldrich사(St. Louis, MO)에서 구입하였다. Radio immune precipitation assay (RIPA) buffer는 Cell Signaling Technology사(Danvers, CO)에서 ECL detection reagent는 Amersham사(Berkshire, UK)에서 구입하였다. \(\beta \)-Actin, cas-pase-3 goat anti-rabbit IgG-HRP는 Santa Cruz Biotechnology사(Santa Cruz, CA), caspase-3 rabbit polyclonal antibody는 Delta Biolabs사(Campbell, CA), mouse monoclonal anti- \( \beta \)-actin은 Sigma-Aldrich사에서 구입하였다. Nunc cell culture plate (24와 96well-plate)와 dish (\(100 \mathrm{~mm}\) dish)는 Sigma-Aldrich사로부터 구입하였다. 그 외 사용된 시약은 reagent grade 이상이었다.</p> <h2>GTL의 roasting 및 시료조제</h2> <p>GTL (\(500 \mathrm{~g}\))을 온도 (\(200^{\circ} \mathrm{C}\), \(240^{\circ} \mathrm{C}\))가 조절되는 fry-pan에서 10, 30, 60 및 120분 roasting 하였다. GTL 및 roasting한 녹차엽(RGT) \( 1 \mathrm{g} \)을 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 찻물 \( (100 \mathrm{~ml}) \)에 3분간 침출하여 관능검사에 사용하다. 이를 농축 (\(100 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml}\))하고 membrane \( (0.2 \mu \mathrm{m}) \) 여과하여 세포독성, caspase-3 발현 및 항산화능 검증시료와 일반화학성분 분석시료로 사용하였다.</P><p>분쇄한 시료 \( (0.3 \mathrm{~g}) \)를 증류수 \( (30 \mathrm{~ml}) \)와 혼합하여 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 1시간 추출하였다. 추출액을 Whatman 여과지(No. 4)로 여과하여 여액을 ethyl acetate \( (50 \mathrm{~ml}) \)로 5분 추출하였다. 추출 상층액을 회수하여 감압농축 하였다. 농축물을 다시 methanol \( (5 \mathrm{~ml}) \)에 용해한 다음 membrane 필터 \( (0.2 \mu \mathrm{m}) \)로 여과하여 catechin계 화합물 분석시료로 사용하였다.</p> <h2>관능평가</h2> <p>시료 열수추출물의 향미를 관능검사로 평가하였다. 관능평가 요원은 충분한 훈련을 거쳐 품질 차이를 식별 할 수 있는 능력을 갖춘 20대 대학생(15명)으로 구성하였다. 미지근한 물로 입안을 헹군 후 시료의 향미를 평가하였다. 평가요원은 평가를 모두 마칠 때까지 정숙히 자리를 지켰다. 평가 항목은 5점법으로 녹차 맛 및 향 1점, 녹차와 유사한 맛 및 향 2점, 녹차와 커피의 중간인 맛 및 향 3점, 커피에 가까운 맛 및 향 4점, 커피 맛 및 향 5점으로 평가 하였다.</p>