지질과산화 억제 효과는 Ottolenghi 방법을 변형하여 기질 용액과 에탄올을 혼합한 용액에 linoleic acid를 첨가하였다. 지질과산화물가는 분획 첨가구의 흡광도와 대조구의 흡광도로부터 산출하였으며, 지질과산화 반을을 억제시키는 농도를 설정하였다. 이때 첨가한 Linoleic acid에 대한 항산화 효과를 실험하기 위해 추출액 Chloroform에 acetic acid 및 KI 포화용액, 증류수를 가한 후 가용성 전분을 지시약으로 하여 용액 \( \mathrm{~Na}_{2} \mathrm{S}_{2} \mathrm{O}_{3} \)으로 적정하였다. 실험을 통해 결과를 실험군당 평균 \( \pm \) 표준오차로 나타내었으며 , 일원배치 분산분석을 한 후 각 실험군의 평균치간의 유의성을 검정하였다.
<h2>지질과산화 억제 효과</h2> <p>지질과산화 억제 효과는 Ottolenghi 방법을 변형하여 기질 용액 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer(\( \mathrm{pH} 7.0 \))와 에탄올을 4: 1 로 혼합한 용액에 linoleic acid를 \( 0.03 \mathrm{M} \) 이 되도록 첨가하였다. 이 기질 용액 \( 2.5 \mathrm{ml} \) 에 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer(\( \mathrm{pH} 7.0 \)) \( 2.4 \mathrm{ml} \) 및 \( 0.1 \% \) 분획 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 씩 첨가하여 반응액을 조제한 후 반응액 \( 2.0 \mathrm{ml} \) 에 \(35\%\) TCA \( 1.0 \mathrm{ml} \) 와 \( 0.75 \% \) TBA \( 2.0 \mathrm{ml} \) 을 가한 다음 vortex mixer로 진탕하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상에서 40분간 반응하였다. 이 반응액을 실온까지 냉각시켜 acetic acid \( 1.0 \mathrm{ml} \), chloroform \( 2.0 \mathrm{ml} \) 를 가하고 진탕시킨 후 \( 1,150 \times \mathrm{g} \) 에서 5분 동안 원심분리하여 \( 532 \mathrm{~nm} \) 에서 상징액의 흡광도를 측정하였다. 지질과산화물가는 분획 첨가구의 흡광도와 대조구의 흡광도로부터 산출하였으며 지질과산화반응을 \( 50 \% \) 억제시키는 농도를 \( \mathrm{IC}_{50} \) 으로 하였다.</p> <p>지질과산화 억제활성 \( (\%)=\left(\mathrm{A}_{\text {control }}-\mathrm{A}_{\text {sample }}\right) /\left(\mathrm{A}_{\text {control }}-\mathrm{A}_{\text {blank }}\right) \times 100 \)</p> <p>\( \mathrm{A}_{\text {contral}} \) : 대조군(분획 미첨가)의 흡광도</p> <p>\( \mathrm{A}_{\text {sample}} \) : 실험군(분획 첨가)의 흡광도</p> <p>\( \mathrm{A}_{\text {blank: }} \) 대조군(증류수 첨가)의 흡광도</p> <h2>Linoleic acid에 대한 항산화 효과</h2> <p>삼각플라스크에 linoleic acid \( 1 \mathrm{ml} \), 에탄올 \( 20 \mathrm{ml} \), 분획 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 및 \( 0.2 \mathrm{M} \) phosphate buffer \( (\mathrm{pH} 7.4)\) \( 25 \mathrm{ml} \) 를 취하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 일정 기간 동안 (3, 5, 7일) 저장한 후 반응액을 분획여두에 옮겨 chloroform을 가하고 3회 반복 추출하였다. Chloroform 추출액에 acetic acid \( 25 \mathrm{ml} \) 및 KI 포화용액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 가하고 암소에서 5 분간 방치한 다음 증류수 \( 50 \mathrm{ml} \) 를 가한 후 가용성 전분을 지시약으로 하여 \( 0.01\mathrm{N} \mathrm{~Na}_{2} \mathrm{S}_{2} \mathrm{O}_{3} \) 용액으로 적정하였다.</p> <h2>통계 처리</h2> <p>본 실험은 독립적으로 각 시료 당 3회 반복 실시하여 얻은 결과로 결과는 실험군당 평균 \( \pm \) 표준오차로 나타내었고, SPSS 통계 package를 이용하여 일원배치 분산분석(one-way analysis of variance)을 한 후 \( p<0.05 \) 수준에서 Tukey's test에 의하여 각 실험군의 평균치간의 유의성을 검정하였다.</p>