본 논문은 Agarase활성측정은 \( 0.1 \% \) agarose 용액을 기질로 삼아 한천분해효소의 반웅산물인 환원당을 DNS (3,5-Dinitrosalicylic acid)법에 의해 측정했다. 효소의 정제도 및 분자량을 측정하고자 SDS-PAGE를 Laemmli의 방법으로 수행했고, Agarase 활성에 대한 최적조건 및 안정성을 분석하고자 효소활성의 최적온도는 \( 0.1 \% \) agarose가 함유된 기질용액에 정제된 효소용액을 첨가하여 온도를 변화시킨 다음 효소활성에 미치는 온도의 영향을 조사했다.
<h2>Agarase 활성측정 및 단백질 정량</h2> <p>Agarase활성측정은 \( 0.1 \% \) agarose 용액을 기질로 하여 Leon의 방법에 따라 한천분해효소의 반웅산물인 환원당을 DNS (3,5-Dinitrosalicylic acid)법에 의해 측정하였다. 한천분해효소의 활성은 1분당 \( 1 \mu \mathrm { mol } \) 의 galactose를 생산하는 효소의 양을 \( 1 \mathrm { unit } \)로 나타내었다. 단백질 정량은 UV-Vis spectrophotometer (UltrospecⓇ 3000)를 이용하여 \( 280 \mathrm { ~nm } \) 에서의 흡광도를 측정하였으며, 표준단백질로 bo-vine serum albumin을 사용하였다.</p> <h2>효소의 정제도 및 분자량 측정</h2> <p>효소의 정제도 및 분자량을 측정하기 위하여 sodium do-decyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)를 Laemmli의 방법에 따라 수행하였다. SDS-pol-yacrylamide gel은 \( 10 \% \)를 사용하였으며, gel 염색은 Coomassie brilliant blue G-250을 사용하였다.</p> <h2>Agarase 활성에 대한 최적조건 및 안정성</h2> <p>Agarase 활성에 대한 \( \mathrm { pH } \) 영향은 \( 0.1 \% \) agarose가 함유된 기질용액 \( 1 \mathrm { ml } \)에 가 \( \mathrm { pH } \)에 따른 완충용액(0.1 M sodium ace-tate buffer: \( \mathrm { pH } ~4.0-6.0 \), 0.1 M Tris-HCl buffer: \( \mathrm { pH } ~7.0-8.0 \), sodium carbonate buffer: \( \mathrm { pH } ~9.0-10.0 \)) \( 1 \mathrm { ~ml } \)를 혼합한 용액에 효소액을 가하여 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응시킨 후 환원당을 측정하여 효소활성에 미치는 \( \mathrm { pH } \) 의 영향을 조사하였다.</p> <p>효소활성의 최적온도는 \( 0.1 \% \) agarose가 함유된 기질용액 \( 1 \mathrm { ml } \)에 정제된 효소용액을 첨가하여 \( 0.1 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } ~7.0 \)에서 \( 20 \sim 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)까지 온도를 변화시키면서 30분간 반응시킨 다음 효소활성에 미치는 온도의 영향을 조사하였다. 효소의 \( \mathrm { pH } \) 안정성은 완충용액 \( ( \mathrm { pH } ~5.0-10.0 \)에 정제된 효소액을 가하여 30분간 전 처리한 효소액 \( 1.0 \mathrm { ~ml } \)와 \( 0.1 \% \) 기질용액 \( 1 \mathrm { ~ml } \)를 혼합하여 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분간 반응시킨 후 환원당을 측정하여 효소의 안정성에 미치는 \( \mathrm { pH } \) 조건을 확인하였다.</p>