고추의 항산화 물질 추출은 80% methanol에 3일간 침지하여 여과 추출하며, ethyl acetate로 분획하여 GC를 사용하여 분리하고 MS chemstation library를 이용하여 동정하였다. DPPH free radical 소거활성 측정은 \( 300 \mu \mathrm { M } \mathrm { DPPH } \) 용액과 농도별 시료를 cuvette내에 넣고 37\(^\circ \mathrm{C}\)에서 30분간 반응하여 515nm에서 흡광도 차이로 측정하여 \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) 값을 계산하였다.
<h2>방법</h2> <h3>항산화 활성</h3> <ul> <li>추출</li> <p>비효소적 항산화 방어계의 추출은 생체시료 \( 1 \mathrm { ~kg } \) 을 \( 80 \% \)-methanol에 3일간 침지하여 여과 추출하였다. 여과한 me-thanol 추출물은 각각 농축하여 Fig. 1와 같은 방법으로 분획하였다.</p> <li>분획</li> <p>고추의 항산화 활성물질의 분리는 \( 80 \% \)-methanol로 추출한 ethyl acetate 분획하였다.</p> <li>분리 및 동정</li> <p>항산화물질의 분리는 분획된 ethyl acetate층을 GC (Hewlett Packard 6890)를 사용하였고, column은 Ultra-2 (Crosslinked \( 5 \% \) PH ME Siloxane), oven 조건은 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 시작하여 분당 \( 2.5 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 씩 \( 230 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 숭온하였다. 운반기체는 \( \mathrm { He } \) 가스를, 유속은 \( 0.8 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \) 로 분석하였다. 동정은 각 peak의 mass spectrum을 MS chemstation library. (Wiley 275; "Hewlett Packard)에 적용하여 얻은 결과로 분자량을 확인하였다.</p> <li>DPPH free radical 소거활성</li> <p>DPPH free radical 소거활성 측정은 cuvette내에 농도별 시료와 \( 300 \mu \mathrm { M } \mathrm { DPPH } \) (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 용액을(흡광도가 \( 1.0 \) 이 되도록 용액을 희석) 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 반응 후 \( 515 \mathrm { ~nm } \) (Beckman coulter, \( \mathrm { Du } \mathrm { 650) } \) 에서 대조구와의 흡광도 차이에 의하여 측정하였다. 시료처리에 의한 억제율은 DMSO (dimethylsulfoxide)처리 대조 구와 비교하여 계산하였고, \( \mathrm { IC } _ { 50 } \) (inhibitor concentration 50 \%)값은 50 \% DPPH free radical을 제어시키는 시료농도를 계산하였다.</p> <li>Xanthine/xanthine oxidase 억제 활성</li> <p>Xanthine / xanthine oxidase 억제 활성 측정은 Lee (1997)의 실험방법에 의하였으나, xanthine oxidase 용액은 \( 0.2 \) unit를 사용하여 측정하였다. uric acid 생성함량은 \( 2 \mu 1 \) xanthine oxidase 용액(0.2 unit)이 포함된 \( 100 \mu \mathrm { M } \) xanthine용액(988 \( \mu \) 1)과 \( 10 \mu \mathrm { DMSO } \) 를 실온에서 3분간 반응시킨 후, \( 295 \mathrm { ~nm } \) 에서 조사하였다.</p></ul>