대두를 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 침지한 후 그 물을 가열하지 않고 여과, 농축, 동결건조해 시료를 만들었다. genistein과 daidzein을 확인을 위해 표준시료물질과 시료의 retention time을 비교했고, 모든 분리시료는 UV detector에서 분석됐으며 확인된 물질의 함량은 peak area로 비교했다. 항산화 활성을 측정하기 위해 DPPH radical과 hydroxyl radical 소거능을 이용했고, Bondet 방법으로 DPPH에 대한 전자 공여능을 측정했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 제조</h2> <p>대두를 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 열수 침지한 침지수는 열수가열 없이 여과, 농축, 동결건조 하여 사용하였다. 두유와 순물은 12,000 \( \mathrm { ~rpm } \)으로 10분간 원심분리 후 여과지(Whatman No.1)로 거른다음 농축, 동결 건조한 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 냉장실에 보관하며 본 실험의 시료로 사용하였다.</p> <h2>대두부산물 내 isoflavone함량 측정</h2> <p>분석을 위한 시료는 각 공정별 시료 \( 0.1 \mathrm { ~g } \) 을 \( \mathrm { ddH } _ { 2 } \mathrm { O } ~3 \mathrm { ~ml } \)에 녹인 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } , 15,000 \mathrm { ~rpm } \) 에서 30분간 원심 분리하여 상등액을 취하였다. 각 공정별 상등액으로부터 genistein과 daidzein을 분석하기 위해 상등액 \( 3 \mathrm { ~ml } \) 을 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { ~HCl } ~3 \mathrm { ~ml } \) 과 혼합한 후 \( 98-100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 약 2시간 동안 반응시켰다. 2시간 후 methanol \( 6 \mathrm { ~ml } \)을 첨가하고 수 분간 상온에서 반응시킨 후 corning syringe filter (nylon \( 0.2 ~ \mu \mathrm { m } \) )를 사용하여 여과하였다. HPLC 분석 column은 Bondapak C18 (Waters Co, MA, USA)을 사용하였으며, 이동상 용액은 \(0.1 \% \) acetic acid가 포함된 acetonitrile과 \( 0.1 \% \) acetic acid가 포함된 증류수를 3:7 비율로 15분간 5:5 비율로 15분간 분석되었다. 모든 분리시료는 UV detector (254 \( \mathrm { ~nm } \))에서 분석되었으며 시료와 표준시료물질의 retention time을 비교하여 genistein과 daidzein을 확인하였으며 그 함량은 peak area로 비교하였다.</p> <h2>대두부산물의 항산화 활성 측정</h2> <p>공정별 항산화 활성은 DPPH radical과 hydroxyl radical 소거능을 이용하여 측정하였다. 공정 별 추출물은 각 시료 \( 2 \mathrm { ~g } \) 을 각각 \( 30 \mathrm { ~ml } \mathrm { ~MeOH } \)로 24시간 동안 추출한 후 evaporator로 농축한 후 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 보관하였다. 공정별 추출물의 DPPH에 대한전자 공여능은 Bondet 방법에 의해 측정하였다. 농도 별 추출물 \( (40 \mathrm { ~mg } / \mathrm { ml } \mathrm { ~MeOH } ) ~40 ~ \mu l \) 를 \( 300 ~ \mu \mathrm { M } \mathrm { ~DPPH } ~760 ~ \mu l \)에 첨가한 후 30분간 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 반응시킨 후 \( \mathrm { UV } / \) Visible spectrophotometer (Beckman, USA) 을 이용하여 \( 515 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 아래 식을 이용하여 공정별 추출물의 전자 공여능을 계산하였다.</p>