Gibco BRL, Life Technologies, ATCC, Sigma Chemical Co. 등에서 재료 및 시료을 구입하여 매실추출물을 1:1의 중량 비로 장독속에 1kg씩 6층으로 교대로 혼합하여 35일 동안 통풍이 잘되는 그늘에서 숙성시킨 후 여과하고 동결건조하여 분말 형태의 매실추출물을 얻었다. 시험농도의 매실추출물을 DPPH용액을 더하여 \( 10 \mathrm { sec } \) 동안 혼합한 후에 실온에서 \( 20 \mathrm { ~min } \) 동안 반응 시킨 후 \( 525 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료 및 시료의 제조</h2> <p>세포배양을 위한 Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), Trypsin-EDTA, penicillin / streptomycin / am-photericin 각각 \( 10,000 \mathrm { U } / \mathrm { ml } \), \( 10,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 및 \( 2,500 \mathrm { kg } / \mathrm { ml } ) \), fetal bovine serum (FBS) 시약은 Gibco BRL, Life Technologies (Paisley, Scotland)로 부터 구입하였다. B16F1 cell line은 ATCC (American Type Culture Collection, USA)로부터 구입하였다. MTT reagent, gelatin, agarose 와 기타시약은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA)로 부터 구입하였다.</p> <h2>시료의 제조</h2> <p>매실추출물은 하기와 같은 방법으로 추출하여 얻을 수 있다. 먼저, 매실을 흐르는 물에 깨끗이 세척한 다음 완전히 자연 건조시킨다. 세척·건조된 상기 매실과 설탕을 \( 1: 1 \)의 중량 \( \% \)비로 장독속에 \( 1 \mathrm { ~kg } \)씩 6층으로 교대로 혼합하여 35일 동안 통풍이 잘되는 그늘에서 숙성시켜 추출한다. 상기 추출물을 여과 한 후, 여과된 여액을 동결건조하여 분말 형태의 매실추출물를 얻는다. 분말형태의 매실추출물을 시험농도로 희석하여 본 연구에 사용하였다.</p> <h2>DPPH radical assay</h2> <p>Brand-Williams 실험 방법을 변형하여 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical에 대한 매실추출물의 소거능력을 측정하였다. 시험농도의 매실추출물을 DPPH용액을 가하여 \( 10 \mathrm { sec } \) 동안 잘 혼합한 다음, 실온에서 \( 20 \mathrm { ~min } \) 동안 반응 시킨 후 \( 525 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 함량은 시료 첨가군과 대조군의 흡광도 비를 \( \% \) 값으로 환산하여 나타었다.</p> <h2>Hydrogen Peroxide Scavenging Assay</h2> <p>Choi 등의 실험방법을 변형하여 Hydrogen peroxide에 대한 소거활성을 측정하였다. \( 80 \mu \mathrm { l } \)의 매실추출물, \( 20 \mu \mathrm { l } \)의 10 \( \mathrm { mM } \) Hydrogen peroxide 및 \( 100 \mu 1 \)의 \( 0.01 \mathrm { M } \) 인산완충용액에서 \( 100 \mathrm { ~V } \)로 \( 30 \mathrm { ~min } \) 동안 전기영동 하였다. Gel은 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) ethidium bromide로 염색하여 물로 세척하여 UV로 LAS3000 \( ^ {\circledR } \) image analyzer (Fuii Film Life Science, Tokyo, Japan)를 이용하여 관찰하였다.</p> <h2>MTT assay</h2> <p>Hansen의 방법에 따라 B16F1 세포에 대한 매실추출물의 세포독성을 MTT (3-(4,5-dimethyl-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 이용하여 측정하였다.</p>