본 실험에 사용한 잔가시 모자반은 11년도 부산 연화리에서 채취하여 담수로 깨끗이 수세하고 동결 건조한 후, 이를 분말화하고 진공 포장하여 -20\(^\circ \mathrm{C}\)에서 저장하여 사용하였으며, 시약으로는 Folin-ciocalteu's phenol reagent, gallic acid, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), dibutyl hydroxy toluene (BHT), potassium ferrcyanide, irganox 1098, butylated hydroxytoluene (BHT) 등의 특급 시약을 사용하였다. 총 페놀 화합물 함량은 \mathrm { Folin }Folin- \mathrm { Densi }Densi법을 변형하여 측정하였으며, DPPH radical 소거능은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험에 사용한 잔가시 모자반은 \(11 \)년도에 부산 연화리에서 채취하여 담수로 깨끗이 수세하고 동결 건조한 후, 이를 분말화하고 진공 포장하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 저장하며 사용하였다.</p> <h2>시약</h2> <p>\( \mathrm { Folin } \)- \( \mathrm { ciocalteu's~phenol~reagent } \), \( \mathrm { gallic~acid } \), \(1 \), \(1 \)- \( \mathrm { diphenyl } \)- \(2 \)- \( \mathrm { picrylhydrazyl~(DPPH) } \), \( \mathrm { dibutyl~hydroxy~toluene~(BHT) } \), \( \mathrm { potassium~ferrcyanide } \), \( \mathrm { iron chloride(Ⅱ) } \), \( \mathrm { iron~chloride(Ⅲ) } \), \(3 \)-( \(2 \)- \( \mathrm { pyridyl } \))- \(5 \), \(6 \)- \( \mathrm { dihpehnyl } \)- \(1 \), \(2 \), \(4 \)- \( \mathrm { triazine } \)- \(4 \)', \(4 \)"- \( \mathrm { disulfonic~acid~sodium~salt~(ferrozine) } \), \( \mathrm { collagnease } \), \( \mathrm { mushroom~tyrosinase,~epigallocatechin~gallate (EGCG) } \), \(4 \)- \( \mathrm { phenyl~azobenzyloxycarbonyl } \)- \( \mathrm { Pro } \)- \( \mathrm { Leu } \)- \( \mathrm { Gly } \)- \( \mathrm { Pro } \)- \( \mathrm { D } \)- \( \mathrm { Arg } \), \( \mathrm { L } \)- \( \mathrm { tyrosine } \), \( \mathrm { arbutin } \)은 \( \mathrm { Sigma } \)사 \( \mathrm { (St.Louis, MO, USA } \))에서 구입하여 실험에 이용하였다. \( \mathrm { Ethylenediamine } \) \( \mathrm { tetra } \)- \( \mathrm { acetic~acid(EDTA) } \)는 \( \mathrm { Yakuri~pure~chemical~Co } \). \( \mathrm { (Osaka, Japan) } \)의 일제 특급시약을 사용하였으며, \( \mathrm { L } \)( + )- \( \mathrm { ascorbic~acid } \)는 \( \mathrm { Junsei } \)사 \( \mathrm { (Tokyo, Japan) } \)의 특급 시약을 사용하였다.</p> <h2>추출물 제조</h2> <p>건조 분말 상태의 잔가시 모자반에 \(10 \) 배의 \( 95 \% \) 에탄올 또는 물을 가한 후 실온에서 \(24 \) 시간 동안 교반기 \( \mathrm { (H } \)- \( \mathrm { 0820 } \), \( \mathrm { Dongwon~science~Co.,~Busan,~Korea) } \)를 이용하여 추출하였다. 이를 \( 1,977 \times \mathrm { g } \) 에서 \(10 \) 분간 원심분리기 \( \mathrm { (UNION } \) \( 32 \mathrm { R } \), \( \mathrm { Hanil~Co.,~Incheon,~Korea) } \)를 이용하여 상층액을 얻었다. 남은 잔사를 이용하여 이와 동일한 방법으로 \(2 \) 회 반복하여 추출하였다. 상층액은 여과 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 감압농축기 \( ( \mathrm { RE } 200 \), \( \mathrm { Yamato Co., Tokyo, Japan) } \)를 이용하여 농축 후 건조하였으며, 건조 후 시료는 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하며 실험에 사용하였다.</p> <h2>총 폴리페놀 함량 측정</h2> <p>총 페놀 화합물 함량은 \( \mathrm { Folin } \)- \( \mathrm { Densi } \)법을 변형하여 측정하였다. 증류수 \( 6.5 \mathrm { ml } \) 에 시료 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 희석한 후 \( \mathrm { Folin } \)- \( \mathrm { Ciocalteu's } \) 용액 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \(3 \) 분간 정치시켰다. 다음 무수포화 탄산나트륨 포화용액 \( \left ( \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \right ) 1 \mathrm { ml } \) 를 가하고 증류수로 전체를 \( 10 \mathrm { ml } \) 로 정용하여 상온에 \(1 \) 시간 방치 시킨 후 \( \mathrm { UV/VIS spectrophotometer(GENESYS~10UV,~Rochester,~NY,~USA) } \)로 \( 765 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. \( \mathrm { Gallic~acid } \)를 표준물질로 하여 동일한 방법으로 작성된 표준곡선으로 부터 총 페놀화합물 함량을 정량하였다.</p> <h2>\( \mathrm { DPPH~radical } \)소거능</h2> <p>\( \mathrm { DPPH~radical } \) 소거능은 \( \mathrm { Blois } \)의 방법을 변형하여 측정하였다. 시료 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 에 \( 0.2 \mathrm { mM } \mathrm { DPPH } \) 용액 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 넣고 진탕하여 실온에서 \(30 \) 분간 방치시킨 후 \( \mathrm { UV/VIS ~spectrophotometer } \)로 \( 517 \mathrm { ~nm } \) 의 흡광도에서 측정하였다. 대조구 \( \mathrm { (Control) } \)는 시료 대신 용매를 가하여 \( \mathrm { radical } \) 고유의 보라색을 측정하였고, 시료 자체의 색을 측정하기 위한 공시에는 \( 0.2 \mathrm { mM } \mathrm { DPPH } \) 용액 대신 증류수를 가하여 측정하였다.</p>