효소의 최적반응 온도를 결정하기 위해 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris-HCl buffer \( ( \mathrm { pH } 8.0 \))로 녹인 효소를 점적한 fibrin plate \( ( \mathrm { pH } 7.8) \)를 각 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위의 배양기에 넣고 4 시간 후 plate의 용해면적을 축정하여 효소의 활성을 바교하고 금속 2가 이온이 포함된 효소용액이나 효소만 포함된 용액을 paper disc에 흡입시켜 fibrin plate에 점적하고 37\(^\circ \mathrm{C}\)에서 8시간 반응 후 용해된 면적을 100%로하여 금속이온이 포함된 효소용액의 용해된 면적을 상대적 측정값으로 나타냈다.
<h3>효소활성에 대한 온도의 영향</h3> <p>효소의 최적반응 온도를 결정하기 위해 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris-HCl buffer \( ( \mathrm { pH } 8.0 \))로 녹인 효소를 점적한 fibrin plate \( ( \mathrm { pH } 7.8) \)를 각 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 범위의 배양기에 넣고 4 시간 후 plate의 용해면적을 축정하여 효소의 활성을 비교하였다. 온도의 안정성은 효소액을 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \sim 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 각각 30 분간 열처리 한 후 효소를 점적한 fibrin plate \( ( \mathrm { pH } 7.8) \) 를 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 4 시간 동안 방치한 후 잔존 활성을 측정하였다.</p> <h3>효소활성에 미치는 금속 2 가 이온의 영향</h3> <p>정제한 효소의 활성에 대한 금속 이온의 영향을 알아보기 위하여 \( \mathrm { CaCl } _ { 2 } \), \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \), \( \mathrm { CuSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { FeSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { MgSO } _ { 4 } \), \( \mathrm { ZnSO } 4 \) EDTA를 최종 농도가 각각 \( 1 \mathrm { mM } \) 이 되도록 혈 전용해 효소를 녹인 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer \( ( \mathrm { pH } 7.5) \)에 첨가한 뒤, 효소와 금속 2가 이온이 포함 혹은 효소만 포함된 용액을 \( 100 \mu l \) 씩 paper disc에 흡입시켜 fibrin plate에 점적하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 8 시간 반응 후 효소만 포함된 용해된 면적을 \( 100 \% \) 으로하여 각각의 금속이온이 포함된 효소용액의 용해된 면적을 상대적 측정값으로 나타내었다.</p>