일반적인 간이검사법은 4개의 균주를 사용하는데, 이 방법으로 9가지 계열의 19가지 항생제에 대한 최저한계 검출치를 측정한 결과 6가지 계열에 대해서는 잔류 허용기준 수준의 농도를 검출할 수 있었으나, 일부 계열은 검출 감도가 잔류 허용 기준 수준 이상인 것도 존재했다. 따라서 기존의 간이검사법의 검출 감도를 향상하기 위해 여러가지 미생물을 이용한 간이검사법들을 이용해 검출 감도를 실험한 결과, quinolone 계의 항생제는 이전의 간이검사법에서는 잔류 허용 기준을 충족시키지 못하는 낮은 검출 감도를 나타냈으나 cephalosporins 계 항생제들은 잔류 허용 기준에 해당되는 높은 검출도를 나타내었다.
<h1>결 과</h1> <h2>간이검사법의 최저 한계 검출치</h2> <p>4개 균주를 사용하는 일반적인 간이검사법으로 9가지 계열로 이루어진 총 19가지의 항생제에 대한 최저한계 검출치를 측정하였고 그 결과는 Table 3에 나타내었다. 실험 결과, 잔류 허용 기준이 \(1.2\sim0.1 \mathrm{mg/kg}\)인 tetracycline 계열의 경우, 실험 균주인 B. stearothermophilus를 이용한 #2 배지와 B. cereus 를 이용한 #8 배지에서 최저 \( 0.05 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)까지 검출 가능했다. 주로 B. stearothermophilus 균주를 이용한 #2 배지에서 높은 검출 감도를 나타내는 것을 볼 수 있었다. Penicillin계의 ampicillin, penicillin G, cloxacillin도 \( 0.005\sim 0.05 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 최저 검출 한계로 \( 0.3 \sim 0.004 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \)인 잔류 허용 기준을 충족시켰다. 또한 잔류 허용 기준이 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \)인 novobiocin의 경우 B. stearothermophilus의 배지에서 \( 0.25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)까지의 높은 검출 감도를 나타내었다. 그러나 peptide계의 bacitracin이나 aminoglycoside계의 neomycin, gentamicin, streptomycin의 경우 B. stearothermophilus를 이용한 #2 배지에서 비교적 높은 검출 감도를 나타냈으나 잔류 허용 기준을 충족시키지는 못했다. Sulfonamide계의 항생제들은 다른 균주를 이용한 배지들에 대해서는 상당히 낮은 검출 감도를 나타내지만 B. megaterium 를 이용한 MH 배지에서는 \( 0.1 \sim 0.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)정도로 잔류 허용 기준을 거의 충족시켰다. MH 배지는 재현성이 좋고, 대부분의 병원균이 잘 자라고 또한 다른 배지에 비해 sulfonamide, trimethoprim, tetracycline에 대한 억제 성분이 거의 없기 때문에 sulfonamides를 검출하는태 효과적이었다.</p> <p>총 9가지 계열의 항생제 중 6가지 계열에 대해서는 잔류 허용기준 수준의 농도를 검출할 수 있었으나, 일부 계열은 검출감도가 잔류허용기준 수준이상인 것도 있었다.</p> <h2>추가 균주를 이용한 간이 검사법의 검출 감도 향상 실험</h2> <p>기존의 간이검사법의 검출 감도를 향상하기 위해서 여러가지 미생물을 이용한 간이검사법들을 조사하였다. 유럽에서 사용되고 있는 EEC-4 plate 법과 다섯 가지 균주를 이용한 STAR(Five-plate test)법[5], 여섯 가지 균주를 사용한 six-plate법 등을 조사하여 간이 검사법의 감도를 보완할 E. coli ATCC 11303와 M. luteus(Kocuria rhizophila) ATCC 9341 두 가지 균주를 선별하였다. 또한 quinolone계와 cephalosporin계의 총 다섯 가지의 항생제를 추가하였다. 이와 같이 향상된 bioassay 방법을 사용하여 24 가지의 항생제로 실험한 결과를 Table 4에 나타내었다. 추가된 항생제에 대해 검출 감도를 알아본 결과, quinolone계의 항생제의 경우 4가지 균주를 이용한 실험에서는 잔류 허용 기준을 충족시키지 못하는 낮은 검출 감도를 나타냈으나 cephalosporins계의 항생제들은 B. stearothermophilus를 이용하는 #2 배지에서 잔류 허용 기준에 해당되는 높은 검출 감도를 나타내었다. 새로 추가된 균주인 M. luteus(Kocuria rhizophila) ATCC 9341는 현재 사용되고 있는 간이 검사법에서는 검출감도가 좋지 않았던 macrolide계열의 검출 감도가 \( 0.25\sim0.05 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 정도로 잔류 허용 기준과 거의 일치하는 것으로 나타났다. 또한, E. coli ATCC 11303의 경우 새로 추가된 quinolone계의 잔류 허용 기준에 해당되는 높은 검출 감도를 가지고 있었을 뿐만 아니라 penicillin계, aminoglycoside계에 대해서도 높은 검출 감도를 가지고 있음을 확인하였다. 하지만 B. subtilis ATCC 6633는 잔류 항생제 정성시험을 위한 미생물 균주로 활용도가 낮았다.</p>