본 실험에서는 건조된 매생이를 분쇄하여 사용하였으며, 기초식이, 사염화탄소 투여, 매생이분말 의 3가지 군으로 실험식이를 나누었다. 실험동물의 혈청과 간장을 추출하여 사용하였고, 중성지질과 총스테롤의 농도를 측정하고, HDL-콜레스테롤의 농도는 간장조직 및 혈청에서 추출 된 지질추출시료를 측정하였다. 혈청 GOT및 GPT활성을 측정하기 위해, 활성측정용 혈청측정 kit를 사용하여 분광광도계로 간의 손상정도를 측정하였다. Western immunoblotting 분석을 위하여, 혈청을 전기영동하여 Insulin-like growth factor(IGF) binding protein-1 (IGFBP-1)을 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>매생이 분말 제조</h2><p>전남 장홍군 내저리 매생이 작업장으로부터 구입한 매생이를 흐르는 물에 3번 수세한 후, 동결건조기로 건조하였다. 건조된 매생이는 식품분쇄기 (HANIL, FM-681)로 미세하게 분쇄하여 사용하였다.</p><h2>실험동물 사육 및 식이조성</h2><p>본 실험에서는 4주령된 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐 30마리를 (주)샘타코(Korea)에서 구입하여 사용하였다. 실험식이 시작 전 1주일간은 고형배합사료로 적응시킨 후, 체중을 고려하여 10마리씩 3군으로 임의배치한 다음, 적정환경 (온도 \( 20 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 명암은 12시간 주기)에서 5주간 사육하였으며, 체중은 주 1회 측정하였다. 사염화탄소로 인한 간독성을 유도하기 위해서 이틀에 한번씩 체중 \( 100 \mathrm{~g} \) 당 \( 100 \mu \mathrm{l}\) \((\mathrm{CCl}_{4}\):Corn col = 1: 1)씩 복강투여를 실시하였다. 실험식이는 기초식이군(Normal), 사염화탄소 투여군 \( \left(\mathrm{CCl}_{4}\right)\), \(5 \% \) 매생이분말군 (Exp-CF)으로 나누었다. 본 실험에서 사용한 기초식이군과 실험군의 식이조성은 Table 1과 같이 배합하였고, 모든 식이와 음용수는 자유 섭취방법으로 급여하면서 하루에 한번 일정한 시간에 섭취량을 측정하였다. 식이효율(Feed Efficiency Ratio, FER)은 체중증가량을 식이섭취량으로 나누어 계산하였다.</p><h2>실험동물의 처리</h2><p>실험동물의 처리는 실험사육 최종일에 12시간 절식시킨 후에 단두하여 채혈하였고, 각 혈액시료는 빙수중에 1시간 방치한 후에 원심분리 \((3,000 \mathrm{rpm}\), \(15 \mathrm{~min}\), \(4^{\circ} \mathrm{C}\)하여 취한 혈청을 저온 \( \left(-70^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에 보관하면서 실험에 사용하였다. 그리고 간장은 별도로 적출하여 생리식염수로 씻은 후, 그 무게를 칭량하고 혈청과 마찬가지로 저온 \( \left(-70^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에 보관하면서 실험하였다. 간장 내 지질함량을 측정하기 위하여 간 조직 \( 0.5 \mathrm{~g} \)을 조직균질기로 마쇄한 후 hexane : isopropanol 혼액 \( (3:1, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \)으로 지질을 추출하였다. 지질추출기를 질소가스로 농축한 다음, chloroform : methanol 혼액 \( (2: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v}) \) \(1 \mathrm{ml} \)에 용해하여 지질 농도를 측정하였다.</p><h2>혈청과 간조직의 지질분석</h2><p>중성지질과 총콜레스테롤의 농도는 표준효소법에 의해 Triglyzyme-V와 CHOLESTEZyme-V kit (신양화학, Korea)를 사용하였는데, 혈청을 포함한 지질시료 \( 10 \mu \mathrm{l} \) 에 효소시액 \( 1.5 \mathrm{ml} \)을 섞어 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 반응시켜 \( 505 \mathrm{~nm} \) 파장에서 그 흡광도를 측정하였다 (Ultraspec 2001 pro. Amersham Phamacia Biotech, England). HDL-콜레스테롤의 농도는 혈청 및 간장조직으로부터 추출한 지질추출시료 각 \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 취하여 HDL-C555 kit (신양화학, Korea)를 사용하여 phospho-tungstic acid-\( \mathrm{Mg}^{++} \) 헤파린\(\cdot\)망간 결합 침전법으로 반응시켜 분광광도계로 측정하였다.</p><h2>혈청 GOT 및 GPT 활성 측정</h2><p>간의 손상정도를 측정하기 위하여 Reitman-Frankel의 방법에 따라 제조된 Glutamic oxaloacetic transaminase (GOT) 및 Glutamic pyruvic transaminase (GPT) 활성측정용 혈청 transaminase 측정 kit (신양화학, Korea)를 사용, 분광광도계 (Ultraspec 2001 pro. Amersham Phamacia Biotech., England)로 \( 505 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p><h2>Western immunoblotting 분석</h2><p>Insulin-like growth factor(IGF) binding protein-1 (IGFBP-1)을 분석하기 위하여 혈청 \( 1.5 \mu \mathrm{l} \)를 \( 12.5 \% \) SDS-PAGE에 전기영동한 다음, semi transblot (Bio-rad, USA)로 멤브레인에 옮겼다. 그 멤브레인을 \( 3 \% \) BSA + 1X TBS로 실온에서 2시간 반응시킨 후, rabbit TGFBP-1 1차 항체 (1:1000)로 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 하룻밤 반응시켰다. 다음 날, 멤브레인을 세척한 후 2차 항체(1:1000, an-ti-rabbit IgG conjugated alkaline phosphatase)를 처리하여 실온에서 3시간동안 반응시킨 뒤, TBS로 세척하였다. 그 후 alka-line phosphatase를 발색시키는 용액(NBT/BCIP, Promega)을 이용하여 발색시켰다. 각각의 밴드는 스캐닝 덴시토미터(SHARP SCAN JX-330, Pharmacia Biotech)로 정량분석하였다.</p><h2>통계분석</h2><p>실험자료는 평균\(\pm\)표준편차로 표시하였으며, 유의수준 \( \mathrm{p}<0.05 \)로 student \( t \)-test를 실시하였다.</p>