25종의 유산균이 희석법에 의해 분리되어 U-1,2,3,4 등으로 표시되었고 항균활성을 가진 유산균 중 GG-4가 가장 활성이 강했으며, 특히 L. monocytogens에 강한 항균활성을 보였다. GG-4에 대한 항생제 저항성을 조사한 결과, kanamycin에 대한 저항성이 가장 뚜렷하고 streptomycin에 약한 저항성이 관찰되었고 ampicillin,tetracyclin에 대한 저항성은 없었다. 또한 GG-4가 분비하는 항균 물질은 열에 상당한 내성도 있음을 확인할 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>유산균 분리 및 항균활성 측정</h2> <p>유아 분변으로부터 10 단계 희석법에 의해 총 25 종의 유산균을 분리하여 U-1, 2, 3, 4, 등으로 표시하였다. 순수분리 된 유산균을 배양하여 상등액만을 취한 다음 paper disc에 \( 100 \mathrm {\mu l } \) 농축하는 방법으로 집적하여 동물질병균을 비롯한 6 종의 병원균에 대한 항균활성을 확인하였다. 대부분의 분리균은 6 종의 병원균에 대한 항균력을 가지고 있었고 억제환의 크기는 \( 18 \pm 2 \sim 3 \mathrm { ~mm } \) 정도였다. 그 중 가장 활성이 큰 4 종의 유산균을 선발하여 각각 GG-1, GG-2, GG-3, GG-4 로 명명하였다. 6 종의 병원간에 대한 항균활성을 4 종의 유산균에 대하여 조사한 결과 특히 GG-4 가 활성이 가장 강함을 알 수 있었고 동물 병원성 세균인 L. monocytogens에 특히 강한 항균 활성을 확인 할 수 있었다. 따라서 다음 실험에서는 GG-4 만을 가지고 생균제로서의 특성을 조사하였다.</p> <h2>항생제 저항성 조사</h2> <p>분리된 유산균(GG-4)을 오랫동안 특성을 유지시키며 보존하기 위하여 항생제 kanamycine \( (50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \), streptomycine \( (50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \), ampicillin \( (50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \), tetracyclin을 표시된 양을 기준으로 배지에 첨가 하여 항생제 저항성 조사를 실시하였다. 순수 분리한 GG-4를 항생제를 첨가한 고체배지에 streaking 하여 colony 생성 유무를 관찰한 결과 kanamycin에 대한 저항성이 가장 뚜렷하게 나타났고 streptomycin에 약한 저항성이 관찰되었으며 ampicillin과 tetracyclin에 대한 저항성은 없었다. 이 결과로 kanamycin을 배지에 첨가하여 배양 하거나, 장기 보존 시킬 때 이 균만을 선택적으로 보존 할 수 있음을 확인할 수 있었다.</p> <h2>항균물질의 내열성 조사</h2> <p>분리균(GG-4)의 배양액을 \( 0,5,10,30,60 \) 분 동안 가열 후 식힌 다음 paper disc에 \( 100 \mathrm {\mu l } \) 씩 집적하여 동물 병원균으로 알려진 S. aureus, L. monocytogenes에 대한 항균활성에 변화가 있는지를 확인하였다. 실험 결과 1 시간 정도 가열 하였을 경우에는 전혀 변화가 없었다. 이 결과로 볼때 GG-4가 생육중에 분비하는 항균 물질은 열에 상당한 내성이 있음을 확인하였다.</p>