표준물질로 Quercetin과 Caffeic acid를 사용해 총 플라보노이드와 페놀화합물의 함량을 산출하였다. Folin-Denis법을 적용해 총 페놀화합물의 함량을 측정하였고, 쇠비름의 물 및 80% 에탄올 추출물의 pH도 측정하였다. 또한, 무기물의 정량을 위해 개량된 Chung 등의 방법을 통해 ICP 분석을 수행하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료 및 추출</h2> <p>쇠비름(Portulaca oleracea L. Portulacaceae)은 경북 영덕군에서 자생된 어린순을 채취하여 동결 건조시킨 분말 \(80\sim 100\mathrm{mesh}\)을 한빛농장(Yeongdeok-gun, Korea)으로부터 구입하여 실험에 사용하였다.</p> <p>동결건조된 쇠비름 분말 \(30\mathrm{~g}\)에 물 및 \(80\%\) 에탄올을 각각 \(1\mathrm{~l}\)씩 가하고, \(70^{\circ}\mathrm{C}\)의 수욕조상에서 환류냉각장치에 의해 24시간씩 2회 반복 추출하였다. 각 추출물을 여과한 후, 여액을 회전식 진공증발 농축기로 농축하여 추출 건조물을 얻은 다음, 증류수로 농도를 조정하여 항산화 활성 측정에 사용하였다. 추출수율은 쇠비름 건조 분말에 대해 추출 후 건조물의 중량 백분비(\(\%\))로 계산하였다.</p> <h2>무기물 정량</h2> <p>무기물의 정량은 Chung 등의 방법을 개량하여 분해용 플라스크에 시료 \(1\mathrm{~g} \)에 진한 황산과 질산을 차례로 \(10\mathrm{~ml}\) 씩 가한 다음 hot plate 상에서 무색으로 변할 때까지 분해하여 \(100\mathrm{~ml}\)로 정용한 후, Inductively Coupled Plasma (ICP, Optima 3300DV, Perkin-Elmer Co., USA)로 분석하였다. 이 때, RF generator는 \(27.12\mathrm{~MHz}\), RF power는 \(1300\mathrm{~W} \), Plasma argon \(15\mathrm{~l} /\mathrm{min}\), auxiliary argon flow rate \(0.5\mathrm{~l}/\mathrm{min}\), nebu-lizer argon flow rate \(0.8\mathrm{~l}/\mathrm{min}\), sample up take는 \(1.5\mathrm{~ml}/\mathrm{min}\)으로 하였다.</p> <h2>pH 및 갈색도 측정</h2> <p>쇠비름의 물 및 \(80\%\) 에탄올 추출물을 \(2,000~\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml}\)의 농도로 조정한 후 pH meter (410, Thermo Orion, Beverly, USA)로 쇠비름 추출물의 pH를 측정하였다. 갈색도는 상기의 시료에 대해 증류수를 대조로 하여 UV spectrophotometer (Optizen 2120UV, Mecasys Co., Ltd., Daejeon, Korea)로 \(420\mathrm{~nm}\) 에서 측정한 흡광도 값으로 나타내었다.</p> <h2>총 페놀화합물 및 플라보노이드 정량</h2> <p>총 페놀화합물의 함량은 Folin-Denis법에 따라 각 추출물 \(1\mathrm{~ml}\)에 Foline-Ciocalteau 시약과 \(10\%~\mathrm{Na_{2}}\mathrm{CO_{3}}\)용액을 각 \(1\mathrm{~ml}\)씩 차례로 가하여 충분히 혼합한 다음 실온에서 1시간 정치한 후 \(700\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. Caffeic acid (Sigma Co., St. Louis, USA)를 표준물질로 사용하여 얻은 검량선으로부터 총 페놀화합물의 함량을 산출하였다. 플라보노이드 함량은 Moreno 등의 방법에 따라 추출물 \(1\mathrm{~ml}\)에 \(10\%\) aluminum nitrate 및 \(1\mathrm{~M}\) potassium acetate 각 \(0.1\mathrm{~ml}\), ethanol \(4.3\mathrm{~ml}\)를 차례로 가하여 혼합하고 실온에서 40분간 반응시킨 후 \(415\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. Quercetin (Sigma Co., St. Louis, USA)을 표준물질로 하여 얻은 검량선으로부터 총 플라보노이드 함량을 계산하였다.</p> <h2>환원력 측정</h2> <p>Oyaizu의 방법에 따라 시료액 \(1\mathrm{~ml}\)에 인산 완충액 (\(200\mathrm{~mM}, \mathrm{pH} ~6.6\)) 및 \(1\%\)의 potassium ferricyanide용액 각 \(1\mathrm{~ml}\)를 차례로 가한 다음 \(50^{\circ}\mathrm{C}\)의 수욕상에서 20 분간 반응시켰다. 여기에 \(10\%\) TCA용액 \(1\mathrm{~ml}\) 를 가하여 \(5,000\mathrm{~rpm}\)에서 10분간 원심 분리하여 상층액을 얻었으며, 여기에 동량의 증류수 및 ferric chloride 용액을 차례로 가하여 흔합한 후 \(700\mathrm{~nm}\)에서 흡광도를 측정하였다. 시료의 환원력은 \(700\mathrm{~nm}\)에서 흡광도 값으로 나타내었다.</p>