발효 중인 멸치젓갈을 marine 한천배지(\( 10 \% \mathrm{~NaCl} \), 전지분유 함유)에 도말해서 배양 후 단백질분해 환을 형성하는 콜로니를 분리해 내 단백질분해효소 생산 호염균을 선별하였다. \( \mathrm{NaCl} \) 첨가조건에서 나타난 세포 성장과 효소활성도를 바탕으로 분리한 FAM 10, 114, 115는 모두 단백질분해효소를 분비하는 중간 정도의 호염세균(moderately halophilic bacteria)이었다. 그람염색하여 현미경으로 관찰해 보니 FAM 10은 휜 모양의 그람음성 세균이었고, FAM 114, 115균은 모두 막대형으로 그람양성 세균임을 확인했다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>단백질분해효소 생산 호염세균의 분리 및 특징</h2> <p>발효가 진행중인 멸치젓갈을 \( 10 \% \mathrm{~NaCl} \)과 전지분유를 함유한 marine 한천배지에 도말하여 배양하여 단백질분해 환을 형성하는 콜로니를 분리하여 단백질분해효소 생산 호염균을 선별하였다. 큰 환을 형성하는 24개의 콜로니를 1차 선별하고, 몇 단계의 순수분리 작업을 거쳐서 최종적으로 3개의 균주를 선택하였다. 균주 FAM 10은 크림색깔을 나타내었으며, FAM 114와 FMA 115는 황색을 보였다. 또한 선별된 균주가 protease를 분비하는 호염성균인 것을 확인하기 위해 액체 배지에 \( \mathrm{NaCl} \)을 \( 10 \% \) 첨가하면서 각 균주의 세포 성장과 단백질분해효소 활성을 관찰하였다. FAM 10, FMA 114, 그리고 FMA 115 는 각각 \( \mathrm{NaCl} ~2 \sim 4\%\), \(10 \% \), 그리고 \( 6 \% \) 조건에서 최적 성장조건을 나타내었다. 또한, 모든 균이 \( 14 \% \)까지는 세포성장이 이루어지다가 \( 18 \% \)부터 성장이 급격히 저하되기 시작하였으며, \( 26 \% \)에서는 모든 균의 세포 성장이 억제되었다. 이때 배양액 상등액을 이용하여 단백질 분해 효소 활성을 측정하여 본 결과, FAM 10은 \( \mathrm{NaCl} ~6 \% \) 조건에서 가장 높은 활성을 보였으며, \( 14 \% \) 첨가조건에서는 단백질분해효소 활성을 관찰할 수 없었다. FMA 114와 FAM 115는 모두 \( 10 \% \)에서 단백질분해효소 활성이 가장 높았으며, \( 14 \% \) 조건에서는 활성이 급격히 저하되다가 \( 18 \% \)부터는 효소 활성이 없었다. 효소활성도 측면에서는 FAM 115가 FAM 10과 FAM 114보다 더 우수한 활성도를 나타내었다. 따라서, \( \mathrm{NaCl} \) 첨가조건에서 세포 성장과 효소활성도를 기반으로, 본 연구에서 분리한 FAM 10, 114, 115는 모두 단백질분해효소를 분비하는 중간 정도의 호염세균 (moderately halophilic bacteria)임을 알 수 있었다.</p> <h2>단백질분해효소 생산 호염세균의 생화학적 특성</h2> <p>그람염색 후에 현미경으로 관찰한 결과 FAM 10은 휜 모양 (curved-shaped)의 그람음성 세균이였다. API 20 NE키트를 사용하여 FAM 10에 대한 생화학적 특성을 조사하였다. glucose acidification, arginine dihydrolase, \( \beta \)-glucosidase (esculine 가수분해), protease (젤라틴 가수분해), cytochrome oxidase는 양성반응을 보였으며, nitrate reduction, 인돌 생산, urease, 그리고 \( \beta \)-galactosidase 실험은 음성을 나타내었다. 여러 탄소원에 대한 자화도를 테스트한 결과, glucose, mannose, mannitol, N-acetylglucosamine, maltose, gluconate, caprate, 그리고 citrate는 자화할 수 있었으나, arabinose, adipate, malate, 그리고 phenyl-acetate는 자화할 수 없었다. FAM 114와 115 균을 현미경으로 관찰한 결과, 모두 막대형(rod-sahped), 그람양성 세균임이 확인되었으며, 그 생화학적 특성은 Table 2에 나타내었다. FAM 114는 D-arabitol을 이용하지 못한 반면, FAM 115는 탄소원으로 D-arabitol을 사용할 수 있었으며, 그 외의 모든 생화학적인 특성은 동일하였다.</p>