PDA평판배지에서 균사체를 채취해 PDB 배지에 접종하였으며, 곰보버섯의 균사생육에 최적인 온도를 조사하기 위해 20, 25, 30, 35℃ 범위의 항온기에서 7일 간 배양하여 균사의 생장을 살펴보았다. 또한, 최적 배지를 선별하기 위해 6가지의 배지를 300mL 플라스크에 분주하여 고압 살균 후, 균사를 접종하였다. 그리고 각각 7가지 당류를 첨가하여 배양한 후, 선발된 탄소원의 농도를 다양화하여 실험을 진행하였다. 마지막으로, 7일간 배양한 배양액을 균질화시켜 본 배양의 접종원으로 사용하였다.
<h2>접종원</h2> <p>PDA평판배지에서 생육한 균사체를 직경 \( 5 \mathrm { ~mm } \) 의 cork borer로 절취한 균사절면 3개를 \( 100 \mathrm { ~mL } \) PDB (potato dextrose broth)배지를 넣은 \( 300 \mathrm { ~mL } \) 삼각플라스크에 접종하였다. \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 100 \mathrm { rpm } \) 으로 7일간 배양한 다음, 배양액을 균질기로 30초 동안 균질화시켜 본 배양의 접종원으로 사용하였고, 매 실험마다 새로이 배양하여 사용하였다.</p> <h2>배양조건</h2> <p>곰보버섯의 균사생육에 가장 좋은 최적 온도를 조사하기 위하여 PDA 배지를 조제하여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15분간 고압살균하고 petri dish에 \( 20 \mathrm { ~mL } \) 씩 분주하여 굳힌 다음, 접종원을 접종하고 \( 20,25,30,35 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 온도 범위로 조절된 항온기에서 7일간 배양하면서 균사의 생장 정도를 하루 간격으로 조사하였다.</p> <p>균사생육이 가장 좋은 최적배지를 선발하기 위하여 Table 1에 공시된 6종의 배지롤 \( 300 \mathrm { ~mL } \) 삼각플라스크에 각각 \( 100 \mathrm { mL } \) 씩 분주한 후, \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 15분간 고압 살균한 다음, clean bench에서 무균적으로 균질화 된 접종원을 \( 5 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 접종하여, \( 25 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 \( 100 \mathrm { rpm } \) 으로 7일간 진탕배양하였다.</p> <h2>탄소원 선발 및 최적농도</h2> <p>최적배지에 탄소원으로서 glucose외 7종의 당류를 각각 \( 1 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) 씩 첨가하고 배지의 \( \mathrm { pH } \) 를 6.5로 젖절한 다음 \(300 \mathrm { mL } \) 삼각플라스크에 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 씩 분주하여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15분간 고압살균 후 접종원을 \( 5 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 로 접종하여 \( 25 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \(100 \mathrm { rpm } \)으로 7일간 진탕배양 하였고, 선발된 탄소원의 농도를 \(0 \)~ \(10 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) 까지 달리하여 탄소원 선발 실험조건과 같은 방법으로 수행하였다.</p>