MCF-7 유방암 세포에 대하여 SRB assay법을 이용하여 유자와 탱자 과피 추출물의 성장억제효과를 확인하였고, Hoechest 염색을 시행하여 증식억제가 세포사멸과 관련되는 지를 관찰하였으며, CJP와 PTP의 세포사멸을 유도과정에서 DNA를 단편화하는 지를 확인하였다. 실험 결과, PTP의 항암효과가 더 크다는 것을 알 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>암세포 성장 억제 효과</h2> <p>본 연구에서는 SRB assay법을 이용하여 MCF-7 유방암 세포에 대한 유자와 탱자 과피 추출물의 항암 효과를 살펴보았다. SRB assay법은 세포 단백질 염색을 이용하여 세포증식이나 독성을 측정하는 실험으로, 비교적 주위환경에 덜 민감하며 중간 대사산물에 영향을 받지 않는 안정한 end point를 제공해 주는 것으로 알려져 있다. CJP와 PTP에의한 MCF-7 세포주의 성장 억제 효과를 Fig. 1에 나타내었다. MCF-7 세포에 CJP와 PTP를 각각 1, 5, 10, 50, 100, 300 \( \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 첨가하고 \( 24 \mathrm{hr}, 48 \mathrm{hr}, 72 \mathrm{hr} \) 배양한 결과, 24 시간 배양한 경우에는 CJP와 PTP가 \( 1 \sim 50 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 까지는 \( 10 \% \) 미만의 성장 억제 효과를 보였으나 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 이상에서는 \( 20 \% \) 이상의 효과를 보였다. 또한 48 시간 배양한 경우, \( 1 \sim 10 \) \( \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 범위에서는 농도와 배양시간 의존적으로 암세포의 성장을 억제하였으며 특히, PTP를 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 처리 하였을 때는 \( 60 \% \) 이상의 유방암 세포 성장 억제 효과를 나타내었다. 또한, PTP가 CJP보다 더 뛰어난 항암 효과를 지니고 있음을 알았다. Yoo 등은 유자 추출물이 전립선 암세포주인 DU145와 LN-Cap의 세포 성장 억제 효과를 보였다고 보고하고 있으며 이러한 암세포 사멸효과는 유자에 함유된 지용성 및 수용성 물질들이 함께 작용하여 세포 사멸 효과에 좋은 활성을 나타내는 것으로 보고하고 있다. 또한, Jayaprakasha 등은 탱자 추출물로부터 분리한 HPCME (2-hydroxy-1,2,3-propanetricarboxylic acid 2-methyl ester)가 강한 항산화 능력과 함께 대장암세포 HT-29에 대해도 시간과 농도 의존적으로 암세포의 성장을 저해한다고 보고하고 있다. 또한, Kawaii 등[13]과 Johnson 등은 과일 등에 함유된 수용성 기능성 물질인 flavonid와 epigalloacatechin gallate, quercetin 등에 의한 암세포 억제 효과를 규명하고 있어, 본 연구에서도 유자와 탱자 과피 추출물에 함유된 지용성 및 수용성의 자유기 소거활성 물질이 MCF-7 세포주의 성장 억제에 효과가 있는 것으로 사료된다.</p> <h2>Hoechest 염색을 통한 핵의 관찰</h2> <p>본 연구에서는 유자와 탱자 과피 추출물의 첨가에 따른 MCF-7 세포의 증식억제효과가 세포사멸과 관련하는지를 확인하고자 Hoechest 염색을 시행하여 세포질 및 핵질 간의 이동 여부 및 세포 사멸체 형성을 관찰하였다. CJP와 PTP를 각각 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 와 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 처리하여 48시간 배양한 결과, CJP를 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 처리한 MCF-7 세포와 PTP를 300 과 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 첨가한 MCF-7 세포에서는 세포막이 파괴되며 세포사멸로 인해 형성되는 세포 사멸체를 확인할 수 있었다. 이러한 현상은 CJP 보다 PTP에서 더 뚜렷이 관찰되어 PTP가 세포사멸을 더 효율적으로 유도함을 알 수 있었다.</p> <h2>DNA 단편화</h2> <p>CJP와 PTP가 세포사멸을 유도함에 있어서 DNA 단편화를 형성하는 지를 관찰하기 위해 CJP와 PTP를 처리한 MCF-7 세포로부터 DNA를 분리하여 DNA 단편화 형성을 살펴보았다. 그 결과, CJP와 PTP 농도를 \( 300 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)로 처리한 경우 뚜렷한 DNA 단편화를 확인할 수 없었으나 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 처리한 경우 DNA laddering이 형성되는 것을 관찰할 수 있었으며, Hoechest 엄색의 결과처럼 CJP 보다 PTP에서 더 많은 DNA단편화가 관찰되었다. Jayaprakasha 등의 bromide staining을 통한 Poncirus trifoliata (L.) Raf의 추출물을 처리한 대장암 세포주(colon cancer, HT-29)에서 세포사멸이 관찰된 것과 Yi 등의 탱자 과육 열수 추출물로부터 농도 증가에 따른 전골수성 백혈병 세포의 세포사멸체 형성 증가와 DNA 단편화의 증가 등에 의한 연구 결과들도 본 연구 결과와 유사함을 나타내어 유자와 탱자 과피 추출물이 암세포의 DNA 단편화를 유발함을 확인할 수 있었다.</p>