간장획분에서 산화적 스트레스의 유무를 확인하기 위해서 DCF-DA를 probe로 이용한 간장세포의 mitochondria와 microsome획분의 기초활성산소의 생성량을 측정하였다. 이 때 분광형광광도의 변화는 DCF-DA를 표준으로 하여 표준검량선에 의해 생성된 DCF의 양으로 환산하고, 이 양으로써 기초산소라디칼 및 유도산소라디칼의 산소라디칼 생성량으로 정량하였다. 간장획분중의 과산화지질 함량은 분광광도계를 사용하여 측정 및 정량하였고, carbonyl group의 양은 분자흡광계수를 이용하여 계산하였다. 본 연구에서 모든 실험결과는 통계 처리하였으며, 각 실험군간의 유의성 검정은 Student's t-test로 실시하였다.
<h2>기초 및 유도산소라디칼의 정량</h2> <p>간장획분에서 산화적 스트레스(oxidative stress)의 유무를 확인하기 위해서 DCF-DA (2',7'-dichlorofluorescein dia-cetate)을 probe로 이용한 간장세포의 mitochondria와 micro-some획분의 기초활성산소(basal oxygen radical : BOR)의 생성량의 측정은 Lebel 등의 방법에 따라 측정하였다. BOR의 측정은 기저상태와 라디칼 생성을 유도하기 위해 ascorbic acld와 \( \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 로 자극한 유도상태의 두 가지 조건에서 비교 축정하였다. 기저상태와 라디칼 유도의 경우 모두 시료 \( 500 \mathrm{\mu l} \) 를 완충용액(\(40 \mathrm{mM}\) Tris- \( \mathrm{HCl} \) buffer \( \mathrm{pH} 7.4\))으로 10배 희석하고, probe인 \( 5 \mathrm{\mu M} \) DCF-DA (Mo-lecular probe, USA) \(12 \mathrm{\mu l}\)를 첨가, \( 10,000 \mathrm{rpm} \) 8분간 원심분리한다. 잔사를 \( 40 \mathrm{mM} \) Tris- \( \mathrm{HCl~} 3.0 \mathrm{ml} \) 에 녹인 후 라디칼 유도상태의 경우에는 \( 1 \mathrm{mM} \) ascorbic acid \(300\mathrm{\mu l}\)와 \( 100 \mathrm{\mu M} \mathrm{FeSO}{ }_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}(150 \mathrm{\mu l}) \) 를 혼합하였고 기저상태의 경우는 아무것도 첨가하지 않있다. 이후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 반응시킨 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 유지하면서 혐광 강도의 변화를 형광광도계를 이용하여 \( 488 \mathrm{~nm} \) (excitation)와 \( 525 \mathrm{~nm} \) (emission)에서 측정하였다. 이 때 분광형광광도의 변화를 \( 2^{\prime}, 7^{\prime} \)-dichloro-fluorescein diacetate (DCF-DA)을 표준품으로 해서 표준검량선에 의하여 생성된 DCF의 양( \( \mathrm{nmol} / \mathrm{mg} \) \(\mathrm{protin} / \mathrm{min} \) )으로 환산하고, 이 양으로써 기초산소라디칼(basal oxygen radical : BOR) 및 유도산소라디칼(induced oxygen radical: JOR) 의 산소라디칼 생성량으로 정량하였다.</p> <h2>산화적 스트레스의 분석</h2> <p>간장획분중의 과산화지질의 함량은 저자 등이 사용한 방법에 따라 분광광도계를 사용하여 TBA법으로 말론디알데히드(MDA)의 함량을 측정하여 과산화지질(LPO)의 함량을 측정하여 정량하였다. 또한 간장획분으로서 mitochondria와 microsome의 산화단백질(oxidized protein : OP)의 생성량은 Levine 등의 방법에 따라 carbonyl group의 셍성량을 측정하여 OP의 함량을 정량하였다. carbonyl group의 셍성량을 측정하여 OP의 함량을 정량하였다. carbonyl group의 양은 \( 360 \mathrm{~nm} \) 와 \( 370 \mathrm{~nm} \) 사이에 있는 홉광도의 파장에서 분자홉광계수 \( (E=22,000) \) 를 이용하여 계산하였다.</p> <h2>분석결과의 처리</h2> <p>본 연구의 모든 실헙결과는 통계 처리하여 평균치와 표준편차를 계산하였으며, 각 실험군간의 유의성 검정은 Student's t-test로 실시하였다.</p>