총 콜레스테롤의 함량 분석을 위해서 돈육중의 지질은 Folch의 방법에 따라 추출하였고, 표준물질을 농도별로 GC에 주입하여 얻은 표준 검량곡선에서 각 시료의 콜레스테롤 함량을 정량하였으며, 동일조건에서 머무른 시간 비교 및 표준물질의 동시주입을 통해 확인•동정했다. 콜레스테롤 산화물의 동정 및 분리를 위해서 Morgan과 Amstrong의 방법을 사용해 GC로 분석했다.
<h2>총 콜레스테롤의 함량 분석</h2> <p>돈육중의 지질은 Folch의 방법에 따라 추출하였다. 즉, 혼합 마쇄한 시료 \( 5 \mathrm { ~g } \)을 정평하여 내부표준물질로 \( 5 \mathrm { a } \)-cholestan을 \( 1 \mathrm { ml } \)를 넣은 후 chloroform : methanol(C : M \( =2: 1, \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \)혼합용액을 이용하여 총지질을 추출하였다. 지질추출물은 무수황산나트륨으로 탈수시킨 뒤 감압하여 용매를 제거하고, \( 33 \% \\mathrm { KOH } \)용액 \( ( \mathrm { KOH } 33 \% \) : ethanol = \( 6: 94) \)으로 검화하였다. 증류수 \( 2 \mathrm { ml } \)와 hexane \( 2 \mathrm { ml } \)를 가해 진탕 혼합한 후 hexane층을 분리하여 Table 1 와 같은 조건에서, gas chromatography(GC)로 총 콜레스테롤 함량을 분석하였다. 표준물질을 농도별로 GC에 주입하여 얻은 표준 검량곡선으로부터 각 시료의 콜레스테롤 함량을 정량하였으며, 동일조건에서 머무름 시간 비교 및 표준물질의 동시주입을 통하여 확인•동정하였다.</p> <h2>콜레스테롤 산화물의 분리 밎 동정</h2> <p>Morgan과 Amstrong의 방법에 따라 GC로 분석하였다. 즉, 시료 \( 5 \mathrm { ~g } \)을 \( \mathrm { C } : \mathrm { M } \)용액과 함께 혼합 마쇄하고 내부표준물질로 5 \( \mathrm { a } \)-cholestan을 첨가한 후 여과하여 지질층을 분리하였다. 분리된 지질층은 용매를 제거한 후 \( 5 \mathrm { ml } \) hexane으로 용해하여 hexane과 diethyl ether에 의해 미리 활성화된 sep-pak silica cartridge에 통과시키고 \( 10 \mathrm { ml } \) acetone으로 녹힌 다음 질소가스로 농축하였다. BSTFA(Bis-[trimethylsiyl] trifluoroacetamide \( + 1 \% \) trimethyl chlorosilane)와 pyridine을 각 \( 100 \mu \mathrm { l } \)씩 가한 다음 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1시간 동안 검화시켜 Table 2와 같은 조건으로 GC에 주입하였다.</p> <p>표준물질은 \( 7 \beta \)-hydrocholesterol, 19-hydrocholesterol, 및 \( 5 \mathrm { a } , \beta \)-epoxide를 sigma사 제품을 구입하여 사용하였으며, 이들을 농도별로 주입하여 얻은 표준 검량곡선으로 부터 정량하였고 동일 조건에서 머무름시간 비교 및 표준물질과 동시주입을 행하여 확인•동정하였다.</p>