AYS는 hPBMC의 증식에는 영향을 미치지 않았으나, PHA는 증식을 유도하였다. 염증관련 cytokine 측정 결과, AYS나 PHA 처리된 hPBMC는 미처리 hPBMC에 비해 IL-6과 IFN- \( \gamma \)의 분비량이 증가하였다. 특히, TNF-\( \alpha \)는 PHA로 처리된 hPBMC에서 미처리 hPBMC에 비해 약 32배, AYS로 처리된 hPBMC에서는 약 3배 증가하였다. 이로부터 AYS는 체액성 면역뿐만 아니라, 세포성 면역에도 영향을 미칠 수 있음을 시사한다.
<p>그 결과 PHA가 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 처리된 hPBMC는 배양 3일까지는 변화가 없었지만 배양 5일에는 1.77배, 배양 7일에는 2.05배까지 세포가 증식되었으나, AYS가 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 이하로 처리된 hPBMC의 경우에는 7일 동안 배양에서 세포증식이나 억제현상이 전혀 나타내지 않았다. 한편 AYS의 hPBMC에 대한 응집활성을 측정한 결과는 3일과 5일 배양에서 \( \mathrm{SI}=10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), 7일 배양에서 \( \mathrm{SI}=5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)을 나타내었고, PHA의 경우는 3일 배양에서 \( \mathrm{SI}=2.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\) 5일과 7일 배양에서 \( \mathrm{SI}= 1.25\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 를 나타내었다. 따라서 AYS는 hPBMC 증식에는 영향을 주지 않았지만, PHA는 hPBMC 증식을 유도하였다. 이는 AYS와 PHA는 hPBMC에 대한 응집효과는 동일하게 나타났지만, AYS는 hPBMC에 대한 증식효과가 없다는 점에서 차이가 있다.</p> <p>또한 AYS \( (20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}) \)로 처리된 hPBMC의 배양액을 취하여 염증관련 cytokine의 량을 Bio-Plex system (Bio-red사)으로 측정하였다. 그 결과 IL-6는 AYS나 PHA를 처리한 hPBMC가 미처리 hPBMC에 비해 약 25배 정도로 많은 량을 분비하였고, IFN- \( \gamma \)도 AYS나 PHA의 미처리 hPBMC에 비해 각각 약 1.5배 정도로 많은 량을 분비시켰다. 또한 TNF-\( \alpha \)는 PHA로 처리된 hPBMC는 미처리 hPBMC에 비해 약 32배 정도, AYS로 처리된 hPBMC는 미처리 hPBMC에 비해 약 3배 정도 많이 분비하였다. 한편 IL-5 는 미처리 hPBMC에서는 거의 측정이 되지 않았으나, AYS 처리 hPBMC에서는 \( 0.03 \mathrm{pg} / \mathrm{ml} \), PHA 처리 hPBMC에서는 \( 0.54 \mathrm{pg} / \mathrm{ml} \)로 다른 cytokine에 비해 극히 소량만이 분비되었다. 일반적으로 IL-2, IFN- \( \gamma \) 와 TNF- \( \alpha \) 생성은 Th1 세포와 관련되어 있으며, IL-4, IL-5와 IL-6의 생성은 Th2 세포와 관련되어 있다고 알려져 있다. 따라서 AYS는 hPBMC를 자극하여 염증관련 cytokine, 특히 IFN- \( \gamma \)의 증가는 세포성 면역에도 관련이 있음을 시사하고 있어, AYS는 체액성 면역에는 물론 alum의 문제점인 세포성 면역에도 작용할 가능성을 시사하고 있다.</p> <p>생체 내에서 AYS가 항체생산을 유도하는 보조제로서 가능성을 확인하기 위해 BALB/c 생쥐에 항원 BSA과 AYS를 혼합하여 복강에 1차 주사하고, 10일 간격으로 BSA만을 3회 더 주사한 후 생쥐의 혈액을 채취하여 생성된 항 BSA의 량을 간접-효소항체법(ELISA 법)으로 측정하였다. 그 결과 보조제로 alum을 사용한 생쥐군 보다 AYS를 보조제로 사용한 생쥐군의 혈액에서 항 BSA 생성이 더욱 증가되었다. 특히 AYS를 보조제로 사용한 생쥐에서 전체 IgG와 IgG1 및 IgG2b의 함량 모두가 alum을 보조제로 사용한 생쥐에 비해 훨씬 더 증가되었다.</p> <p>결론적으로 AYS는 in vitro에서 적혈구나 백혈구에 세포 독성이나 세포증식을 나타내지 않았으나, 백혈구를 응집시켰으며 염증성 사이토카인 생산을 유도하였다. 또한 생쥐를 이용한 BSA에 대한 항체생산에서 보조제로 alumn 보다 AYS를 투여한 생쥐에 항 BSA의 량이 더욱 증가되었다.</p>