비성장속도를 다양한 조건에서 측정하였고 YEPD 배지 \( 50 \mathrm { ml } \)에 단일집락을 접종하고, 호기적 배양조건과 플라스크 배양조건에서 균주의 성장 및 포도당 소모 특성을 조사하였다. 또한, 다양한 배양온도, pH 및 포도당 농도 조건에서 비성장속도를 측정하여 최적 배양조건을 결정하였다.
<h2>균주의 비성장속도</h2> <p>분리된 균주의 생육특성을 조사하기 위하여 다양한 배양 온도, \( \mathrm { pH } \) 및 포도당 농도 조건에서 비성장속도를 측정하였다. 단일집락을 YEPD 배지 \( 50 \mathrm { ml } \)에 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 18시간 동안 호기적인 조건으로 전배양하였다. 배양액을 원심분리 \( (13,000 \times g, 1 \) 분)하여 균체를 회수하고 멸균수로 세척한 후 \( 20 \mathrm { ~g } / \)의 포도당이 첨가된 YEPD 배지에 세포흡광도가 0.1이 되도록 접종한 후 \( 200 \mathrm { rpm } \) 으로 진탕배양하여 대수 증식기로 성장하고 있을 때 비성장속도를 측정하였다. 비성장속도는 다양한 배양온도에서 결정하였으며, 비성장속도가 가장 빨랐던 온도를 최적 배양온도로 선정하였다. 최적 배양 온도를 결정한 후 최적 \( \mathrm { pH } \) 조건을 설정하기 위하여 \( 5 \mathrm { ~N } \) \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \)와 \( 5 \mathrm { ~N } \mathrm { NaOH } \)를 사용하여 YEPD 배지의 초기 \( \mathrm { pH } \)를 조정한 뒤 배지에서 균주의 비성장속도를 측정하였다. 최적 배양온도 및 \( \mathrm { pH } \) 조건을 결정한 후 탄소원으로 주입하는 포도당 농도를 조정하여 균주의 비성장속도를 측정하였다.</p> <h2>배양조건</h2> <p>배양시간에 따른 균주의 성장 및 포도당 소모 특성을 조사하기 위하여 단일집락을 \( 50 \mathrm { ml } \)의 YEPD 배지에 접종하고 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 200 \mathrm { rpm } \)의 교반속도로 18시간 동안 전배양하였다. 전배양된 균주를 멸균수로 세척한 후 세포흡광도가 0.1이 되도록 \( 200 \mathrm { ml } \)의 YEPD 배지에 접종하고 진탕배양기를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 200 \mathrm { rpm } \)의 교반속도로 36시간 동안 배양하였다. 또한, 같은 조성의 YEPD 배지에 \( 20 \mathrm { ml } / \)의 oxyrase (Bioworld, USA)를 첨가하고 플라스크를 밀봉하여 혐기적 배양조건 하에서 균주의 성장 및 포도당 소모 특성을 호기적 배양조건과 비교하였다.</p>