팽이버섯 수확 후 배지에 우점하는 고온성 균주를 분리하고자 도레미농산에서 탈병 후 퇴적된 버섯 수확 후 배지를 수집한다. 그리고 trypticase soy agar 배지에 도말하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 36시간 배양하여 분리한다. 분리균의 항균활성은 paper diffusion 법을 이용하여 측정하였고, cellu-lase와 xylanase 생성능을 조사한다. 결과 Aspergillus flavus 와 Aspergillus ochraceous의 항균활성이 높고 cellu-lase와 xylanase 생성능이 우수한 균주를 분리·동정한다.
<p>본 연구에서는 수분과 섬유소 함량이 높은 팽이버섯 수확 후 배지 발효사료에 적합한 생균제 균주 개발을 목적으로 버섯 수확 후 배지에 우점하는 균주를 선발하기 위하여 퇴적되어 있는 수확 후 배지로부터 곰팡이독소를 생성하는 Aspergillus flavus 와 Aspergillus ochraceous에 대한 항균활성이 높고 cellu-lase와 xylanase 생성능이 우수한 균주를 분리·동정하고 분리균이 생성하는 항균물질의 특성을 조사하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>고온성 균주의 분리 및 배양조건</h2> <p>팽이버섯 수확 후 배지에 우점하는 고온성 균주를 분리하기 위하여 도레미농산(충북 음성 소재 팽이버섯 재배농가)으로부터 탈병 후 퇴적되어 있는 버섯 수확 후 배지를 수집하였다. 고온성 균주는 수집한 배지 \( 1 \mathrm { ~g } \)을 \( 10 \mathrm { ml } \)의 멸균수에 현탁한 후 현탁액을 trypticase soy agar (TSA) 배지에 도말한 다음 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 36시간 동안 배양하여 분리하였다.</p> <h2>분리균의 항균활성</h2> <p>분리균의 항균활성은 paper diffusion 법을 이용하여 측정하였으며 곰팡이독소를 생성하는 Asp. flavus와 Asp. ochra-ceous는 농촌진흥청 한국농업미생물보존센터(Korean Agricultural Culture Collection)에서 분양받아 사용하였다. 곰팡이독소를 생성하는 Asp. flavus와 Asp. ochraceous는 멸균된 cork-borer를 사용하여 potato dextrose agar (PDA) 배지 중앙에 접종한 후 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2일 동안 배양한 다음 사용하였다. 분리균은 trypticase soy broth (TSB) 배지에 접종하여 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 2 \times 10 ^ { 6 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 까지 배양한 후 paper disc \( (8 \mathrm { ~mm } \), Advantec, Japan)에 \( 20 \mu l \) 흡수시켜 실온에서 1시간 동안 확산시킨 다음 곰팡이가 배양된 배지 표면에 고정시켰다. 항균활성은 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2일 동안 배양하면서 paper disc 주위의 투명환 크기를 측정하여 확인하였다.</p> <h2>분리균이 분비하는 가수분해효소</h2> <p>항균활성이 확인된 균주의 cellulase 활성은 \( 0.5 \% \) carboxy methyl cellulose (CMC, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) 와 \( 1 \% \) trypan blue가 첨가된 Luria-Bertani (LB) 고체배지에 분리균을 접종한 다음 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 2일 동안 배양한 후 콜로니 주변에 형성된 cellulose 분해환 크기를 측정하여 확인하였다. Xylanase 활성은 \( 0.5 \% \) xylan (xylan from oat spelts, Sigma, USA) 이 기질로 첨가된 고체배지에 분리균을 접종한 다음 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 2일 동안 배양한 후 iodine으로 염색하여 콜로니 주변에 형성된 xylan 분해환 크기를 측정하여 확인하였다.</p>