Rajagopalan, Habig, Meister와 Richman 등의 방법에 준하여 Aldehyde oxidase, Glutathione S-transferase, \(\Upsilon\)-Glutamylcystein synthetase 활성을 측정하였다. 측정 대상 별로 적정한 반응액을 만들어 적정 농도의 trichloroacetic acid를 가해 단백질을 침전 시킨 후, 적정 파장에서 흡광도를 측정하여 각각의 활성도를 산출하였다. 효소 활성의 단위는 1 분당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 생성하는 2-pyridone의 양, 2,4-dinitrochloro-benzene 의 mole 합광계수, 1 분당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 생성한 \( \mathrm { P } _ { i } \) 의 양을 이용하여 산정하였다.
<h3>Aldehyde oxidase 활성의 측정</h3> <p>Rajagopalan 등의 방법에 준하여 0.1 M potassium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } 7.5 \) ) \( 3.0 \mathrm { ml } \) 에 효소액 \( 0.4 \mathrm { ml } \) 를 가하고 기질인 \( 60 \mu \mathrm { M } \) 의 N-nicotinamide \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 반응시킨 후 \( 20 \% \) trichloroacetic acid를 가하여 단백질을 침전시키고 상층액을 취한 후 생성된 2-pyridone을 파장 300 \( \mathrm { nm } \) 에서 흡광도를 측정하고 표준검량선에 근거하여 활성도를 산출하였다. 효소활성의 단위는 1 분당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 생성하는 2-pyridone의 양을 nmole로 나타내었다.</p> <h3>Glutathione S-transferase 활성의 측정</h3> <p>Habig 등의 방법에 준하여 \( 0.1 \mathrm { M } \) potassium phos-phate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.5)에 \( 40 \mathrm { mM } \) reduced glutathione \( \mathrm{75 \mu l}\) 를 가한 후 효소액 \(\mathrm{10 \mu l} \) 를 넣고 \( 25 \mathrm { C } \) 에서 5 분간 preincubation 한 뒤 기질로서 2,4-dinitrochlorobenzene \(\mathrm{25\mu l}\)를 가하여 2분간 반응시켰다. 여기에 \( 20 \% \) trichloroacetic acid를 가하여 반응을 완료시키고 시료를 원심분리하여 얻은 상층액을 파장 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정한 후 2,4-dinitrochloro-benzene 의 mole 흡광계수 \( 9.6 \mathrm { mM ^ { -1 } cm ^ { -1 }} \) 를 이용하여 활성도를 산정하였다.</p> <h3>\( \gamma \)-Glutamylcystein synthetase 활성의 측정</h3> <p>Meister와 Richman의 방법에 준하여 \( 0.1 \mathrm { M } \) tris \( \mathrm { HCl } \) buffer \( ( \mathrm { pH } 8.0) 1 \mathrm { ml } \) 에 \( 8.9 \mathrm { mM } \) L-glutamic acid, \( 0.94 \mathrm { mM } \) EDTA, \( 3.2 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 21.35 \mathrm { mM } \) ATP 및 \( 1 \mathrm { mM } \) L- \( \alpha \)-Ami-nobutylic acid을 포함하는 반응액에 효소액(\(\mathrm{100\sim200\mu g}\) protein)을 가한 후 \( 37 \mathrm {^\circ C } \) 에서 10분간 반응시킨 후 \(10 \%\) trichioroacetic acid로 반응을 완료시컸다. 이 용액을 원심분리한 뒤 상 충액에 molybdic acid와 aminonaphthol sulfonic acid를 가하여 생성되는 황색의 생성물을 파장 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하고 표준검량선에서 그 양을 산정하였다. 효소의 활성 단위는 1 분당 \( 1 \mathrm { mg } \) protein이 생성한 \( \mathrm { P } _ { i } \) 의 양을 nmole로 표시하였다.</p>