Gomisin A는 식약처로부터 분양된 표준품을 사용했고, \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하였다. 본 연구에 사용한 혈관내피세포 HUVECs는 \(20\%\) FBS, \(1\%\) P/S, \( 3 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) bFGF, \( 5 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) Heparin이 포함된 M199 mediums으로 배양하였다. 5주령의 C57/BL6 마우스 수컷을 1주일간 순화 기간을 거친 후 실험에 사용하였다. Gomisin A의 종양성장 억제 활성 측정은 마우스에 배양된 B16BL6 melanoma cell line을 50,000 cells/50 \( \mu \mathrm{l} / \mathrm{head} \)로 피하이식하여 14일 후 암 조직을 절개하여 종양조직의 성장율을 대조군과 비교하여 측정하여 확인하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>Gomisin A는 식품의약품안전청(Korea Food and DrugAdministration, Korea)으로부터 분양된 표준품을 사용 하였으며, \( -80^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하면서 실험에 사용하였다. 세포 및 세포주배양에 필요한 fetal bovine serum (FBS), penicillin/strepto-mycin (P/S), trypsin-EDTA, Medium 199 (M199), Minimum Essential Medium (MEM), Rosewell Park Memorial Institue(RPMI) 1640 medium, Phosphate Buffered Saline (PBS)은 Hyclone (Laboratoris Inc, USA)에서 구입하였으며, basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), Heparin은 R&D system(USA)과 Sigma Chemical (USA)로부터 각각 구입하여 사용하였다.</p> <h2>세포주 및 세포 배양</h2> <p>본 연구에 사용한 혈관내피세포인 human umbilical vein endothelial cell (HUVECs)은 \(20\%\) FBS, \(1\%\) P/S, \( 3 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) bFGF, \( 5 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) Heparin이 포함된 M199 mediums을 이용하여 배양하였다. A549 (human lung cancer cell line), Huh7 (human liver cancer cell line), Du145 (human prostate cancer cell line)는 \( 10 \% \) FBS, \( 1 \% \) P/S가 포함된 RPMI 1640 medium을 이용하여 배양하였으며, B16BL6 (mouse melanoma cell line)는 \( 10 \%\)FBS, \(1 \%\) P/S가 포함된 MEM medium을 이용하여 배양하였다. 배양 접시로부터 세포를 분리하기 위하여 \( 0.25 \% \) trypsin-EDTA 용액을 처리하였으며, 배양세포의 세척 등에는 PBS를 사용하였고, 모든 세포의 배양은 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 및 \( 95 \% \) 이상의 습도를 유지하는 배양기에서 배양하였다.</p> <h2>실험동물 및 사육조건</h2> <p>5 주령의 C57/BL6 마우스 수컷 \( (20 \mathrm{~g} \pm 1 \mathrm{~g}) \)은 (주)오리엔트에 서 구입하였으며, 모든 동물은 1주일간의 순화 기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 입수된 동물은 온도 \( 22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 50 \pm 10 \% \), 조명시간 12시간으로 제어된 환경 조건에서 사육되었다. 동물실의 사육환경 모니터링을 위하여 자동온습도 측정기에 의하여 주기적으로 측정되었으며, 사육실에 반입되는 멸균 소독된 물과 방사능으로 조사한 멸균된 사료로서 급수 급식하면서 사육하였다. 3-4일에 한번씩 멸균된 깔집으로 교환하였으며, 체중계 및 실험도구 등은 알코올 소독후 자외선 멸균 뒤 반입하여 세균에 감염되지 않도록 사육하였다.</p> <h2>종양 성장 억제 활성 측정</h2> <p>Gomisin A의 종양성장 억제 활성 측정은 C57/BL6 마우스에 배양된 B16BL6 melanoma cell line을 50,000 cells/50 \( \mu \mathrm{l} / \mathrm{head} \) 로 피하 이식한 후 종양조직의 성장율을 대조군과 비교 분석 하였다. 시료의 처리는 3일 간격으로 대조군 (vehicle)과 양성 대조군에는 생리 식염수를 투여하고, 실험 군에는 Gomisin A를 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{head} \) 와 \( 100 \mu \mathrm{g} / \) head로 \( 100 \mu \mathrm{l} \)씩 정맥 투여(intravenous injection) 하였다. 암 세포 이식 14일 후 부검하여 이식된 암 조직을 절개하여 조직의 무게 를 각각 측정하여 Gomisin A의 종양 성장 억제 활성을 확인하였다.</p>