모델반응 생성물을 얻기 위해 asparagine monohydrate와 glucose를 혼합하여 증류수를 가한 후, 오븐에서 가열하였다. 반응물을 분쇄해 methanol과 ethyl acetate를 각각 첨가하고 4-decanol를 내부 표준물질로 첨가한 후 진탕추출 하였다. 이를 아크릴아마이드를 포함하는 시험액으로 정제하였다. 아크릴아마이드 분석은 아크릴아마이드 methanol용액을 표준용액으로 비교하고, 내부표준물질로 내부표준법으로 정량하였다. 또한 모델반응에서 함께 생성되는 화합물들도 분석하여 동정했는데, 이는 mass spectrum을 해석하여 Willey library 및 문헌을 참고하여 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>모델반응</h2><p>모델반응 생성물을 얻기 위하여, asparagine monohydrate (Merk Co., Germany) \( 3.02 \) g과 glucose (Sigma Co., St. Louis, USA) \( 3.06 \mathrm{~g} \) 을 \( 200 \mathrm{ml} \) 유리병에 취하여 혼합한 각 시료들에 \( 1.0 \mathrm{ml} \) 증류수를 가한 후, 125, 150, 175 및 \( 200^{\circ} \mathrm{C} \)의 온도에서, 각각 10, 20 및 30분간 오븐에서 가열하였다. 막자 사발을 이용하여 반응물을 분쇄하고 각 분쇄 시료들에서 \( 700 \mathrm{mg} \) 씩 각 2개의 시료를 취하여 1개의 시료에는 \( 50 \mathrm{ml} \) methanol, 또 다른 1개 시료에는 \( 50 \mathrm{ml} \)의 ethyl acetate를 가하고, \(500 \mathrm{ppm}\)의 4-decanol (Aldrich Co., USA, \(97\%\)) \( 1 \mathrm{ml} \) 을 내부 표준물칠로 각각 첨가한 후, 30분간 초음파 처리를 하고 4시간 동안 진탕추출을 하였다.</p><p>추출한 시료용액은 \( 30 \mathrm{~g} \)의 무수황산나트륨으로 24시간 동안 탈수시키고 뷰크너 펀넬을 이용하여 여과한 후, 회전감압 농축기로써 \( 5 \mathrm{ml} \)로 농축하고 \( 0.22 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과한 것을 GC/MS 분석용 시험액으로 하였다.</p><h2>아크릴아마이드 분석</h2><p>모델반응에서 생성되는 아크릴아마이드 분석을 위하여, 반응생성물을 methanol로 추출한 시험액을 GC/MS (HP 6890 series GC system+HP 5973 MSD, Hewlett Packard Co. USA)에서 FFAP-capillary column (free fatty acid phase; \( 30 \mathrm{~m} \times 0.32 \mathrm{~mm}\) i.d. fused silica capillary, \( 0.25 \mu \mathrm{m} \); J \(\&\) W Scientific, Agilent, Waldbronn, Germany), carrier gas는 \(\mathrm{He}\) \( (20 \mathrm{ml} / \mathrm{min}.\)), 오븐 온도조건은 initial temp.(time) \( 70^{\circ} \mathrm{C}\) \((5 \mathrm{~min} \).), rate는 \(5^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \)., final temp.(time) \( 220^{\circ} \mathrm{C}(5 \) \( \min \).), 주입구 온도 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), interface 온도 \( 240^{\circ} \mathrm{C}\), \(70 \mathrm{eV} \)의 ion-ization voltage의 조건으로 분석하였다.</p><p>아크릴아마이드 분석은 아크릴아마이드(Sigma Chemical Co., St. Louis) \( 10 \mathrm{ppm} \) methanol용액을 표준용액으로 하여 비교하였으며, 내부표준물질로 첨가한 4-decanol의 피크면적을 이용하여 내부표준법으로 정량하였다.</p><h2>기타 화합물의 분석</h2><p>모델반응에서 아크릴아마이드와 함께 생성되는 화합물들을 분석하기 위하여, ethyl acetate 및 methanol로 추출하여 처리한 두 시험액을 GC/MS (HP 6890 series GC system+HP 5973 MSD, Hewlett Packard Co. USA)에서, HP-5MS \(5\%\) phenyl methyl siloxane column \( (30 \mathrm{~m} \times 250 \mu \mathrm{m} \) film thickness \( 0.25 \mu \mathrm{m}) \) 을 사용하였고, carrier gas는 \(\mathrm{He}\) \( (20 \mathrm{ml} / \mathrm{min}\).), 오븐 온도조건은 initial temp.(time) \(60^{\circ} \mathrm{C}\) \((5 \mathrm{~min} \).), rate는 \( 5^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \)., final temp.(time) \( 240^{\circ} \mathrm{C}(5 \mathrm{~min} \).), 주입구 온도 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), interface 온도 \( 240^{\circ} \mathrm{C}\), \(70 \mathrm{eV} \)의 ionization voltage의 조건으로 분석하였다.</p><p>각 화합물들의 동정은 mass spectrum을 해석한 결과를 토대로 Willey library 및 문헌을 참고하였으며, 각 화합물의 정량은 각 피크의 면적을 내부표준물질인 4-decanol의 피크 면적과 비교하여 이때의 response factor는 1로 가정하여 산출하였다. 또한, 아크릴아마이드 분석에서 같이 검출된 기타 화합물들의 동정과 정량도 동일하게 행하였다.</p>