탱자와 매실의 추출고형물에 알칼리를 처리하여 항균활성을 극대화하기 위한 실험을 진행하였는데, 온도를 높일수록 활성은 계속 증가하는 것을 알 수 있었지만 시간의 경과는 오히려 감소하는 결과를 나타내었다. 본 실험에서는 물에 의하여 추출된 탱자와 매실의 추출액의 항균활성은 정유성분만에 의한 것이 아닌 것으로 추정할 수 있었는데, 그 이유는 열수 추출의 경우 지용성 물질이 비록 고온에서 추출되어도 공정에서 물과 분리되어 유실될 가능성이 높기 때문이다.
<h3>주정추출 및 알칼리 첨가</h3> <p>탱자와 매실의 주정 추출물을 얻기 위하여, 각 시료 약 \( 200 \mathrm{~g} \)을 파쇄하고 제핵 후 음건하였다. 건조하고 분쇄한 시료에 \( 400 \mathrm{~ml} \)의 주정을 첨가한 후 24시간 진탕추출하고, 이를 감압 여과하여 얻은 여액을 rotary vacuum evaporator로 농축하여 추출고형물을 획득하였다. 이 추출고형물에 알칼리를 처리하여 항준활성의 증가여부를 조사하기 위하여, 각 추출고형물(각 원료 \( 200 \mathrm{~g} \)에 해당량)에 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)로 예열한 물 \( 400\mathrm{~ml} \), 그리고 \( \mathrm{NaOH} \) \(0.0\), \(0.4\), \(0.6\), \(0.8\), \(1.0 \) 및 \( 1.2 \mathrm{~g} \)씩을 첨가한 후 30분간 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온수조에서 가열하고 여과하여 얻은 여액을 \( 4.5 ~ \mu \mathrm{m} \)의 membrane filter로 다시 여과한 후, 각 시험액의 항균활성을 paper disk법으로 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>항균활성 식물체 선정</h2> <p>V. parahaemolyticus에 대한 13종 식물들의 항균활성을 조사한 결과 Table 1과 같이, 탱자와 매실에서 각각 \( 15.8 \) 및 \( 16.1 \mathrm{~mm} \)의 저지환을 형성하여 이 두 식물체의 항균활성을 확인하였으나, 기타 식물체들에서는 저지환이 관찰되지 않았다. 따라서 항균활성을 극대화를 위한 추출공정에 관한 2차적 연구는 탱자와 매실을 대상으로 하였다.</p> <h2>물추출 조건</h2> <p>예비실험에서 비브리오식중독균에 항균활성이 있는 탱자와 매실을 \( 20\), \(40\), \(60\), \(80 \) 및 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)의 각 온도에서 \( 10\), \(20\), \(30\), \(40 \) 및 50분간 가열 추출하고 여과한 추출액의 항균활성을 조사한 결과, Fig. 1과 2와 같이 실온인 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 측정한 결과에서는 저지환의 지름이 paper disk의 것(\(8 \mathrm{~mm}\))과 거의 같 게 나타나서 항균활성이 인정되지 않았으나, 온도를 높일수록 활성은 점차 증가하여 탱자의 경우 80 및 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 열수 추출한 시험액이 약 \( 14.8 \mathrm{~mm} \), 매실은 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 30분간에서 약 \( 16.6 \mathrm{~mm} \)로 가장 높은 활성을 나타내었다. 가열시간의 영향을 보면 매실의 경우 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)까지는 시간의 경과에 따라 추출물의 항균활성은 증가하지만 최대 활성을 나타낸 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서는 30분 이상 가열시 오히려 감소하는 경향을 보였으며, 탱자의 경우에는 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)와 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분 이상 가열시 감소하였다. 따라서 온도와 추출시간의 상관관계를 나타낸 Fig. 1과 2의 결과로만 보면, 탱자의 최적조건은 80 및 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간이지만, 매실의경우에는 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 열수 추출하는 조건이었다. 이와 같이 탱자와 매실의 항균활성이 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)의 고온에서 최대인 것으로 미루어 볼 때, 활성물질들이 물에 대한 용해도는 낮고 내열성은 어느 정도 있는 것으로 추정되었다. 특히 매실은 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 최대 활성을 보여 그 이상의 온도에서도 시험할 필요성이 제기되었다. 식물체의 항균활성 물질에 대하여, Shim 등은 겨자의 경우 물과 에탄올 추출물이 항균활성이 높다고 하여 겨자의 항균활성 물질들 대부분 극성물질인 것으로 보고 하였지만, 마늘 등 기타 식물체들의 경우, diethyl ether로 추출한 정유성분에서 강한 활성을 보이며, 특히 탱자의 정유에서는 8종의 mon-oterpene류를 포함하여 16종의 terpene류가 검출되었으며, 이들 중 monoterpene류 및 diterpene류가 항균활성을 가지는 것으로 알려져 있다. 그러나 본 실험에서 행한 열수 추출의 경우 terpene류와 같은 지용성 물질이 비록 고온에서 일단 추출되더라도 여과 등의 공정에서 물과 분리되어 유실될 가능성이 높으므로, 물에 의하여 추출된 탱자와 매실의 추출액의 항균활성은 정유성분 만에 의한 것이 아닌 것으로 추정되었다.</p>