Davis 방법에 따라 slab-type Native-PAGE를 조성하는 방법과 Weber 및 Osbom 방법에 따라 SDS-PAGE를 조성하는 방법으로 과즙액 처리 누에 분말의 단백질 패턴비교를 했다.
<h2>과즙액 처리 누에 분말의 Native-PAGE에 의한 단백질 패턴비교</h2> <p>각 과즙액 처리 누에 분말의 단백질 패턴은 Davis 방법에 따라 slab-type Native-PAGE (sodium dodecyl sulfate pol-yacrylamide gel electrophoresis)의 gel 농도는 \(7.5 \% \)를 사용하였다. 즉 분리 gel은 \(30 \% \) acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \( 1.5 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } 8.8 \)), \(0.05 \% \) TEMED 및 \( 10 \% \) 과산화암모늄을 혼합하여 \( 1 \mathrm { ~mm } \) 두께로 만들어 사용하였다. 분리 gel 위에는 \(5 \% \) 농축 gel [ \(30 \% \) acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \( 0.5 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer \( ( \mathrm { pH } 6.8 \))를 만들어 5 \( \times \) sample buffer( \(312.5 \mathrm { mM } \) Tris-HCl, \( \mathrm { pH } 6.8 \)), \(50 \% \) glycerol, \( 0.05 \% \) bromophe-nol blue] 용액에 혼합한 시료를 농축 gel내에 성형된 wall에 일정량씩 주입하였다. 전기영동은 Tris-glycine 완충액( \( 25 \mathrm { mM } \) Tris, \( 192 \mathrm { mM } \) glycine, \( \mathrm { pH } 8.8 \)) 하에서 \( 1.5 \mathrm { ~mA } / \mathrm { gel } ( \mathrm { cm } ) \)의 정전류를 통하여 행하고, \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 저온에서 2시간 통전시켰다. 전기영동이 완료된 gel은 \( 7 \% \) 초산 액에 용해한 \( 1 \% \) coomassie brilliant blue R-250으로 염색한 후 \(7 \% \) 초산 액으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 하였다.</p> <h2>과즙액 처리 누에 분말의 SDS-PAGE에 의한 단백질 패턴 비교</h2> <p>각 과즙액 처리 누에 분말의 단백질 패턴 분석은 Weber 및 Osbom 방법에 준하였는데, SDS-PAGE의 조성은 \( 10 \% \) acrylamide, \( 1.5 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } 8.8 \)), \(0.4 \% \) SDS (Sodium dodecyl sulfate), \( 10 \% \) 과산화암모늄 및 \( 0.05 \% \) TEMED로 만들어 사용하였다. 농축 gel의 조성은 \( 5 \% \) acryl-amide, \( 0.5 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } 6.8 \)), \(0.4 \% \) SDS, \( 0.05 \% \) TEMED 였다. 시료단백질의 SDS 처리는 최종농도 \( 2 \% \) SDS, \( 14.4 \mathrm { mM } \) 3-mercaptoethanol, \( 60 \mathrm { mM } \) Tris-HCl buffer \( ( \mathrm { pH } 6.8 \)), \( 25 \% \) glycerol 및 \( 0.1 \% \) BPB 혼합액에서 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 5분간 열처리 하였다. 전기영동은 Tris-glycine 완충액 ( \( 25 \mathrm { mM } \) Tris, \( 192 \mathrm { mM } \) glycine, \( \mathrm { pH } 8.3 \)) 하에서 \( 130-150 \mathrm { ~mA } / \mathrm { gel } ( \mathrm { cm } ) \) 의 정전류를 통하여 1시간 30분간 하였다. 전기영동 후 gel은 고정액(Methanol:Acetic acid:Water=10:10:80)에 \( 1 \% \) coomassie brilliant blue R-250을 첨가하고 10시간 염색한 후 탈색액 (Methanol:Acetic acid:Water=10:10:80)으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 행하였다.</p>