농도가 400 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 미만인 모든 농도의 WF, IF, PF, GF 처리군에서 RAW \( 264. 7 \) 세포에 대한 독성을 나타내지 않으며, 이들 처리는 NO 생성을 농도 의존적으로 억제하였다. 이러한 처리는 iNOS 발현을 감소시켰으며, 이는 immunofluorescence와 immunoblotting 둘 다에서 확인되었다. 또한 미선나무꽃 처리는 ERK, JNK, p38의 인산화를 증가시키지 않으면서 p-ERK, p-JNK, p-p38의 발현을 억제하였다.
<h2>세포독성</h2> <p>WF, IF, PF, GF 처리 \( (50,100,200,400 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } ) \) 에 의한 RAW \( 264.7 \) 세포 생존율은 WF \( (96.8 \pm 0.6,97.6 \pm 0.6,99.6 \pm 1.0 \), \( 104.2 \pm 1.4 \%) \), IF \( (99.4 \pm 0.6,100.2 \pm 1.0,97.6 \pm 0.5,101.7 \pm 0.5 \%) \),PF \( (95.6 \pm 0.5,95.2 \pm 0.5,99.0 \pm 0.6,97.9 \pm 0.6 \%) \), GF \( (103.4 \pm 0.7 \), \( 97.8 \pm 0.5,99.1 \pm 0.5,95.2 \pm 0.5 \%) \) 로 나타났다. 결과적으로 모든 농도의 \( \mathrm { WF } , \mathrm { IF } , \mathrm { PF } , \mathrm { GF } \) 처리군(400 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 미만)에서 RAW \( 264.7 \) 세포에 대한 독성을 나타내지 않았다.</p> <h2>NO 생성 억제 효과</h2> <p>NO 생성 억제 효과는 200 및 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도에서 \( \mathrm { WF } \) (544.3 \( \pm 11.3 \) 및 \( 387.4 \pm 13.1 \%) \), IF (396.6 \( \pm 11.2 \) 및 \( 289.1 \pm 10.7 \% \) ), PF \( (489.7 \pm 11.5 \) 및 \( 381.0 \pm 5.6 \%) \), GF \( (508.1 \pm 10.4 \) 및 \( 447.1 \pm 6.7 \%) \) 로 확인되었다. 따라서 WF, IF, PF, GF 처리에 의해 농도 의존적으로 NO생성을 억제하는 것으로 나타났다.< \p> <h2>iNOS 및 COX-2 발현에 대한 미선나무꽃의 억제 효과</h2> <p>LPS에 의해 유도된 RAW \( 264.7 \) 세포에서 증가된 iNOS의 발현 \( (447.8 \pm 15.6 \%) \) 은, 각 미선나무꽃 시료 \( (200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } ) \) 의 처리에 의해 GF \( (304.6 \pm 9.5), \mathrm { WF } (120.4 \pm 3.1), \mathrm { IF } \) (185.7 \( \pm 5.3) \), PF \( (260.3 \pm 6.9 \%) \) 는 발현이 억제됐다. 또한, LPS에 의해 유도된 RAW \( 264.7 \) 세포에서 증가된 COX-2의 발현 \((1595.1 \pm 49.2 \%) \) 은, 각 미선나무꽃 시료 처리에 의해 WF \( (1233.5 \pm 37.4) \), IF \( (944.9 \pm 25.6) \), PF \( (1039.2 \pm 29.0) \), GF \( (727.8 \pm 21.0 \%) \)로 나타났다. iNOS의 mRNA수준은 모든 처리구에서 감소하는 경향을 나타내었으며, 특히 IF 및 PF의 억제 활성이 상대적으로 높은 것으로 나타났다. 세포 내의 iNOS 발현의 수준을 immunofluorescence으로 확인한 결과, LPS에 의해 유의하게 증가한 iNOS의 발현은 WF, IF, PF, GF 처리에 의해 감소했다. 이러한 결과는 immunoblotting 결과와 유사한 결과를 나타냈다.<h2>p65 및 MAPK 인산화에 대한 미선나무꽃의 효과</h2> <p>NF-KB 는 전염증 매개체의 발현을 조절하는 전사 인자 복합체로 알려져 있다. LPS에 의해 인산화된 p65 (p-p65)는 유의하게 증가했다 \( (329.6 \pm 9.8 \%) \). 미선나무꽃 처리는 \( \mathrm { NF } - \kappa \mathrm { B } \) р65의 총량에 영향을 미치지 않으면서, p-p65의 발현은 유의하게 감소하는 것으로 관찰 되었다. p-p65/p65의 발현은 WF \( (291.2 \pm 8.1) \),IF \( (274.5 \pm 8.6) \), PF \( (149.5 \pm 4.0) \), GF \( (111.8 \pm 3.0 \%) \) 로 나타났다. 또한 세포내의 p-p65의 발현 및 축적을 확인하기 위해 immunofluorescence를 수행한 결과, WF, IF, PF, GF 처리 후 p-p65 발현 및 축적이 감소 하였으며, immunoblotting 결과와 유사한 결과를 보였다(Fig. 8). MAPK (JNK, ERK 및 p38) 세포 신호 전달 경로는 \( \mathrm { NF } - \kappa \mathrm { BB } \) 신호 전달 경로를 자극한다고 알려져 있다. 미선나무꽃 처리가 MAPK의 인산화를 억제하는지 여부를 확인하기 위해 p-ERK, p-JNK 및 p-p38 의 발현을 확인했다. LPS는 세포 수준에서 JNK, ERK 및 p38의 인산화를 증가시켰다. 미선나무꽃 처리는 ERK, JNK, p38의 총량에는 영향을 미치지 않으면서, p-ERK, p-JNK, p-p38의 발현을 억제하였다.</p>