적혈구 세포의 50% 파괴되는 시간인 \( \tau_{50} \)은 세포 보호 활성이 높을수록 더 크게 나타나며, 이는 농도에 따라 달라진다. 핵심 효소인 타이로시네이즈는 멜라닌 생산에서 중요한 역할을 하며, 멜라닌 생합성 과정에서 여러 산화 과정을 통해 흑·갈색의 멜라닌인 eumelanin으로 전환된다. 이를 이용해 목형 잎 추출물의 미백 활성을 타이로시네이즈 저해활성을 통해 측정하였다.
<h2>\( \mathrm{O}_{2} \) 으로 유도된 사람 적혈구의 파괴에 대한 세포보호 효과</h2> <p>활성산소에 의해 야기되는 세포손상에 대한 목형 잎 추출물의 세포보호 효과를 적혈구 광용혈법으로 측정하였고 각 분획의 농도에 따른 세포 보호효과를 Table 1에 나타내었다. 적혈구 세포가 \( 50 \% \) 파괴되는데 걸리는 시간 \( \left(\tau_{50}\right) \) 은 세포보호활성이 클수록 크게 나타나며 농도 의존적임을 확인하였다. 목형 잎의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 \( 5, 10, 25, 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 각각 \( 36.8, 52.0, 67.8, 91.7 \mathrm{~min} \), 에틸아세테이트 분획은 동일한 농도 범위에서 \( 38.5, 49.5, 58.5, 66.8 \mathrm{~min} \)으로 나타났다. 또한 당을 제거시킨 아글리콘 분획 역시 동일한 농도 범위에서 \( 56.8,71.5,103.7,120.3 \mathrm{~min} \) 으로 나타났으며 모든 분획에서 비교물질로 사용한 지용성 항산화제인 (+)-\( \alpha \)-tocopherol \( (10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 38 \mathrm{~min}, 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 74 \mathrm{~min} \))보다 우수한 세포보호 활성이 있는 것으로 나타났다.</p> <h2>목형 잎 추출물의 멜라닌 생성 저해활성 측정</h2> <h3>Mushroom tyrosinase 저해 활성:</h3> <p>타이로시네이즈는 멜라닌 생성에 있어서 핵심 효소로 알려져 있으며 tyrosine으로부터 시작되는 멜라닌 생합성과정에서 3,4-dihydroxy-L-phenylananine (DOPA)로부터 DOPA quinone으로 산화되는 과정과 dihydroxyindole (DHI)로부터 흑·갈색의 멜라닌인 eumelanin으로 전환되는데 관여한다. 따라서 타이로시네이즈 저해활성을 통해 목형 잎 추출물의 미백활성을 측정하였다.</p> <p>목형 잎 추출물 중 \( 50 \% \) 에탄올 추출물의 타이로시제네이즈 저해활성 \( \left(\mathrm{IC}_{50}\right) \) 은 \( 323.5 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 으로 나타났으며, 에틸아세테이트 분획의 경우 \( 48.58 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), 아글리콘 분획의 경우 \( 97.57 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 으로 나타났다. 기능성 화장품의 미백제로 잘 알려져 있는 알부틴의 저해활성 \( \left(\mathrm{IC}_{50}=226.88 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\right) \) 을 측정한 결과 알부틴 보다 목형 잎 추출물 중 에틸아세테이트 분획과 아글리콘 분획이 타이로시네이즈 저해 활성이 더 우수한 것으로 나타났다.</p> <h3>세포 생존률 측정:</h3> <p>세포 생존률 측정: 목형 잎 추출물의 멜라닌 생성 저해능 측정을 위해 목형 잎 추출물과 대조군으로 사용된 알부틴의 세포독성을 알아보기 위하여 MTT assay를 통하여 실험에 사용될 농도 범위를 결정하였다. 비교물질로 사용한 알부틴은 \( 3 \mathrm{~mM} \) 이하의 농도 \( (1 \sim 3 \mathrm{~mM}) \) 에서 \( 86.72(\pm 6.70) \% \), \( 89.94(\pm 4.29) \%, 97.42(\pm 11.17) \% \) 의 생존율을 나타내었다. 목형 잎 추출물의 \( 50 \% \) 에탄올 추출물은 \( 25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 \( 92.10(\pm 6.23) \% \) 로 \( 80 \% \) 이상의 세포생존율을 나타내었다. 또한, 에틸아세테이트 분획 및 아글리콘 분획의 경우 각각 \( 50 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 와 \( 25 ~\mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 각각 \( 86.02(\pm 0.99 \%) \), 97.84 \( (\pm 5.35) \% \) 로 \( 80 \% \) 이상의 세포생존율을 나타내었다.</p>