방풍에서의 함량이 높고 방풍의 다양한 약리적인 활성과 가장 연관 있는 화합물인 5-O-methylvisammioside와 식방풍 뿌리에 가장 많이 함유되어 있고 식방풍의 약리효과와 연관이 큰 Peucedanol를 UPLC로 정성 분석한 결과, 방풍과 식방풍 추출물에서 상대적 함량 차이가 크게 났다. 분석법의 검증은 식품의약품안전처의 가이드라인에 따라 특이성, 직선성, 범위, 검출한계, 정량한계, 정확성, 정밀성에 대해 평가했으며 두 성분 모두 상대 표준편차는 5 \(\%\) 이하였으며 회수율은 90 \(\%\)에서 110 \(\%\) 사이의 범위에 근접하게 나와 정밀성과 정확성이 높은 분석방법임을 확인했다.
<p>5-O-methylvisammioside는 방풍의 대표직인 chromone 계열화합물 중 하나로 특히 방풍에서의 함량이 높다고 알려져 있으며 방풍의 다양한 약리적인 활성과 가장 연관 있는 화합물로 여겨진다. 또한 최근의 연구에서는 5-O-methylvisammioside가 혈관질환과 초기 뇌 손상 예방에 강력한 면역 억제제로서의 가능성을 나타내고 있다.</p> <p>Peucedanol은 식방풍 뿌리에 가장 많이 함유되어 있으며, 식방풍의 약리효과와 연관이 크다고 알려져 있다. 최근의 연구에서는 peucedanol이 항산화와 butyrylcholinesterase 저해에 효과를 나타낸다고 알려져 있다.</p> <p>위에서 언급된 다변량 통계분석 걸과를 바탕으로 5-O-methylvisammioside와 peucedanol을 방풍과 식방풍의 지표성분으로 제안할 수 있음을 확인하였으며, UPLC를 이용하여 분석법을 검증하고자 하였다(Fig. 3). 지표성분으로 제안된 5-O-methylvisammioside 와 peucedanol을 UPLC로 정성 분석한 결과, 방풍과 식방풍 추출물에서 상대적 함량 차이가 크게 나는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 4).</p> <p>분석법의 검증은 식품의약품안전처의 '의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인' 및 '생약(한약)제제의 성분 프로파일 설정 가이드라인'에 따라 특이성, 직선성, 범위, 검출한계, 정량한계, 정확성 및 정밀성에 대한 평가를 실행하였다. 5-O-methyl-visammioside와 peucedanol의 회귀식은 Table 1에 나타내었으며, 각각의 상관계수 \( \left (r ^ { 2 } \right ) \) 값은 0.9996,0.9991 로 높은 직선성을 나타내었다. 5-O-methylvisammioside와 peucedanol의 검출한계(LOD)는 각각 0.44 및 0.53 \( \mathrm { ng } / \mu \mathrm { L } \) 이었고, 정량한계 LOQ는 0.58 및 0.72 \( \mathrm { ng } / \mu \mathrm { L } \) 로 측정되었다.</p> <p>또한, 지표성분 2 종에 대해서 2,5 ,10 \( \mathrm { ng } / \mu \mathrm { L } \) 의 3가지 농도로 일내분석(intra-day) 및 일간분석(inter-day)을 실시하여 정밀성(precision), 정확도(accuracy)를 구하여 UPLC 분석법의 재현성을 검증하였으며 Table 2 에 나타내었다. 일내분석은 3가지 농도를 5회 반복하여 분석하였으며 일간분석은 3가지 농도를 연속 5일 동안 반복 분석하여 재현성을 구하고자 하였다. 정밀성은 상대표준오차 값으로 나타내었으며, 정확도는 회수율로 나타내었다. 5-O-methylvisammioside의 일내분석의 정밀성은 0.72-0.89 \( \% \), 정확도는 102.66-112.36 \( \% \) 및 일간분석의 정밀성은 0.59-0.62 \( \% \), 정확도는 100.76-102.17 \( \% \)의 범위로 측정되었다. Peucedanol의 일내분석의 정밀성과 정확도는 각각 0.93-1.13 및 101.19-110.5 \( \% \) 범위로 측정되었고, 일간분석의 정밀성은 1.02-2.66 \( \% \), 및 정확도는 98.43-105.66 \( \% \)로 측정되었다. 따라서, 지표성분으로 제안된 두 성분 모두 정밀성의 지표인 상대 표준편차는 모두 5 \( \% \) 이하였으며 정확성의 지표인 회수율은 90 \( \% \) 에서 110 \( \% \) 사이의 범위에 근접하게 나와 정밀성 및 정확성이 높은 분석방법임을 확인되었다(Table 2).</p>