홍삼 추출액 파우치 제품 중 자연변패된 것을 선택하여 H1~5까지 5종의 세균을 얻었는데 분리된 5가지 균주 모두 MR-VP test에서 음성을 나타내었다. 그 중 H4는 실시한 다른 모든 실험에서 음성을 나타내 다른 균주와 구별되는 양상을 보였다. 분리균주를 다양한 온도에서 배양하였더니 대체로 \(30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)~ \(35 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 잘 생장하였다. H1과 H5는 NaCl \( 97 \% \)까지 생장하였는데 나머지는 \(2 \% \)이상에서 성장하지 못했다. 또 pH의 영향을 관찰한 결과 모두 pH6~8의 중성에서 잘 생육하였다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주의 분리</h2> <p>(주)오리엔탈바이오택에서 생산하는 홍삼 추출액 파우치 제품 중 자연변패된 것을 선택하여 변패원인 미생물의 분리를 시도한 결과, H1에서 H5까지 5종의 세균을 분리하였으며, 각 균주의 평판배지 상에서의 콜로니 성상 및 사진은 Table 1 및 Fig. 1에 각각 나타내었다.</p> <h2>분리균주의 동정</h2> <p>5종의 분리균주를 16S rDNA 염기서열 비교에 의해 동정한 결과, 5종 모두 GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/)에 등록된 균종과 \(95-98 \% \)의 상동성을 갖는 것으로 확인되었다. 분리균주 H1은 GenBank에 등록된 Bacillus subtilis \((98 \%) \), H2는 Bacillus sp. \((95%) \), H3 Paenibacillus sp. \((95 \%) \)), H4는 Micrococcus sp. \((97 \%) \), H5는 Pseudomonas sp. \((98 \%) \)와 모두 \(95 \% \) 이상의 상동성을 보였다.</p> <h2>분리균주의 형태학적 및 생화학적 특성 조사</h2> <p>5종의 분리균주의 형태학적 및 기본적인 생화학적 특성을 살펴본 결과를 Table 3에 나타내었다. 분리된 5균주 모두 MR-VP test에서 음성을 나타내었고, 특히 H4는 catalase, oxi-dase, citrate, indole 반응 등 실시한 모든 실험에서 음성을 나타내어 다른 균주와 대별되는 양상을 보였다. H4를 제외한 나머지 균주들은 catalase와 oxidase test에서 모두 양성을 보였으며, H1, H2 와 H3는 운동성을 가지는 것으로 나타났다. H3과 높은 유사도를 보인 Paenibacillus strain WN \( \9 ^ {\mathrm { T } } \) 는 Paenibacillus chinjuensis sp. nov.로 대한민국 진주에서 발견된 exopolysaccharide를 생산하는 편성혐가성의 내생포자를 형성하는 그람 양성간균이다. H3은 P. chinjuensis sp. nov.와 catalase 및 oxidase test 양성, 포도당 이용능, 운동성, 및 생육온도와 NaCl의 영향, 적정 pH등에서 동일한 특성을 나타내었다. 그러나 H3은 그람염색의 결과 음성으로 나타났 는데, P. chinjuensis sp. nov.가 장기간배양 후의 그람염색 결 과는 불명확하였다는 기록으로 볼 때, 본 연구의 결과도 같 은 원인에서 기인하였다고 사료된다. H4와 rDNA 서열에서 \(97 \% \)의 상동성을 보인 Micrococcus sp. TUT1210은 음식물 쓰 레기 발효기에서 분리된 단백질 분해능이 뛰어난 호중온성 의 Micrococcus luteus로 동정되었다. H5와 rDNA 서열에 서 \(98 \% \)의 높은 상동성을 보인 Pseudomonas sp. BE08은 사탕 무 잎의 병든 부위에서 분리된 식물유래의 균주로 P. syringae ATCC19310과 높은 유사성을 나타낸다고 보고된 바 있다.</p> <h2>분리균주 생장의 온도, NaCl 및 pH 의 영향</h2> <p>분리균주를 \( \mathrm { pH } 7.0 \)으로 조절한 peptone water에 접종하여 \(20-45 ^ {\circ } \mathrm { C } \)까지 \( 5 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 단위로 24시간 진탕배양한 결과,H1, H2, H3 및 H5는 \(35 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서, H4는 \(30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 가장 잘 생장하였다. 또한 H1, H3, 및 H4는 \( 45 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서도 생장하였으며, H2와 H5균주는 \(45 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 사멸하였다. NaCl농도의 영향에 있어서는, H1 과H5는NaCl \( 97 \% \)까지 생장하였고, H2, H3, H4는 NaCl \(2 \% \)이상에서는 성장하지 못하였다. 또한 분리균주 생장에의pH의 영향을 살펴본 결과, 5종의 분리 균주 모두 pH6-8의 중성 조건에서 잘 생육하였다.</p>