균주 V. mimicus 등은 백병원 환자 분리균, V. mimicus 등은 한국과학 기술원에서 분양받아 실험에 사용하였고, 생선회용 소-스류의 순간 살균력 측정을 위해 표면도말법으로 균수의 감소를 측정하였으며, 식초와 젖산의 항균성 검색을 위해 paper disc diffusion method를, 식초와 젓산에 대한 최소생육저해농도는 액체배지 희석법을 수정하여 실험하였다.
<p>사용균주 및 배지</p> <p>실험에 사용한 균주 중 E. coli O157:H7, V. oulnificus는 백병원 환자 분리균, V. mimicus(ATCC 33653), V. paraha-emolyticus (ATCC 33844), S. typhimurium (ATCC 19585), V. cholerae non-O1(ATCC 25872)은 한국과학기술원 생명공학연구소 유전자 은행에서 분양받아 실험하였다.</p> <p>표면도말법으로 집락수 측정시 사용한 선택배지로 Vibrio 속은 TCBS agar (Difco, U.S.A)를, S. typhimurium 은 Hek-toen enteric agar((Difco, U.S.A)를, E. coli O157:H7은 O157:H7 ID-medium(bioM'erienx, France)을 사용하였다. 그리고 항균력 측정 배지는 Mueller hinton broth와 Mueller hinton agar(Difco co., U.S.A.)를 사용하였다.</p> <h2>생선회용 소-스류의 순간 살균력 측정</h2> <p>생선회 소-스로 사용되고 있는 간장( \(100 \% \) 양조간장, (주) 대상), 와사비액(와사비분말 \( 2.7 \% \), (주)대상), 초고추장(주) 대상)을 사용하여 간장, 간장과 와사비액(1:1)을 섞은 용액, \( 1 \% \) 생리 식염수와 와사비액(1:1)을 섞은 용액 그리고 식초와 초고추장(1:1)을 섞은 용액에 배양액을 \( 1 \mathrm { m } \ell \) 씩 혼합하여 10초간 처리 후 표면도말법으로 균수의 감소를 측정하였다.</p> <h2>식초와 젖산의 항균성 검색</h2> <p>식초와 젖산의 항균활성 검색은 paper disc diffusion method를 수정하여 실험 하였다. 식초와 젓산은 \( 1 \% \) 생리식염수로 희석하여 membrane filter(o.2 \( 2 \mu \mathrm { m } ) \) 로 여과 멸균한 뒤 원액, \( 80 \%, 60 \%, 40 \%, 20 \%, 10 \% \) 농도로 사용하였다. 각 균주는 멸균된 BHI-salt \( 50 \mathrm { ~m } \ell \) 에 한 백금이 씩 취하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 진탕배양한 뒤 petri dish에 배양액 \( 1 \mathrm { ml } \)씩을 취하고 Mueller hinton agar를 \(15 \sim 20 { ml } \) 정도 부어 혼합평판 하였다. 평판배지에 멸균된 paper disc( \(8 \mathrm { mm } \)), Toyo roshi, Ltd., Japan)를 올려놓고 식초와 젓산을 농도별로 \( 50 \mu \ell \) 주입시켜 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 배양한 뒤 paper disc 주위의 생육저해환 직경 \( ( \mathrm { mm } ) \) 을 측정하였다.</p> <h2>최소생육저해농도 측정</h2> <p>식초와 젓산에 대한 최소생육저해농도(Minimal inhibitory concentration, MIC)는 액체배지 희석법을 수정하여 실험하였다. BHI-salt 배지에 식초는 \( 0 \sim 2.6 \% \) 까지 \( 0.5 \% \) 농도 간격으로, 젓산은 \(0 \sim 4.0 \% \) 까지 \( 0.5 \% \) 농도 간격으로 첨가하여 총량이 \( 10 \mathrm { ~m } \ell \) 가 되게 한 다음, 최초균수가 \( 10 ^ { 5 } \sim 10 ^ { 6 } \mathrm { cells } / \) \( \mathrm { m \ell } \) 되도록 하여 각 균주를 \( 0.1 \mathrm { m \ell } \) 씩 분주한 후. \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48시간 배양하여 미생물의 증식 여부를 colony 생성 유무로써 최소생육저해농도를 측정하였다. 최소생육저해농도는 배지 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 대한 첨가량 \( ( \mu \ell) \) 으로 나타내었다.</p>