p38 MAPK가 TRAIL과 genistein에 의한 apoptosis 유도에 미치는 영향을 조사하기 위해 Hep3B 세포를 배양하여 Bcl-2 family 멤버, cytochrome c 등의 발현 변화를 조사한 결과, 3 가지가 동시에 처리된 경우 total Bid의 발현이 거의 관찰되지 않고 truncation 형태인 tBid로 모두 감소하는 것을 확인하였다.
<h2>TRAIL과 genistein에 의한 미토콘드리아 기능 손상에 미치는 p38 MAPK의 영향</h2> <p>다음은 TRAIL과 genistein에 의한 apoptosis 유도에 미치는 몇 가지 주요 apoptosis 조절인자들의 발현 변화에 미치는 p38 MAPK의 영향을 조사하기 위하여, 상기와 동일 조건에서 배양된 Hep3B 세포를 대상으로 Bcl-2 family에 속하는 주요 인자 및 cytochrome \( c \) 의 발현 변화를 조사하였다. Fig. \( 4 \mathrm{~A} \) 에 나타낸 결과에서 알 수 있듯이, apoptosis 유도에서 extrinsic 경로와 intrinsic 경로의 매개체로 작용하는 Bid의 발현이 TRAIL 및 genistein 복합 처리군과 SB203580 단독 처리군에서 약간 감소된 반면 3 가지가 동시에 처리된 경우 total Bid의 발현이 거의 관찰되지 않아 truncation 형태인 tBid로 모두 전환되었음을 알 수 있었다. 아울러 pro-apoptotic 단백질인 Bax의 발현이 TRAIL, genistein 및 SB203580 복합 처리군에서 매우 증가된 반면, anti-apoptotic 단백질인 Bcl-2의 발현은 매우 감소되어 Bcl-2에 비하여 상대적인 Bax의 발현이 크게 증가되었고, 세포질 내의 cytochrome \( c \) 발현이 매우 증가되었음을 알 수 있었다. 아울러 MMP의 손실 정도가 3 가지 동시 처리군에서 매우 증가되어(Fig. 4B), p38 MAPK 활성의 억제가 TRAIL 및 genistein의 복합 처리군에 의한 extrinsic 및 intrinsic 경로 활성을 크게 촉진시켜 apoptosis 유도를 증가시켰을 것으로 추정된다.<h2>TRAIL과 genistein 동시 처리군에서 caspase 활성 미치는 p38 MAPK의 영향</h2> <p>이상에서 관찰된 p38 MAPK 저해제에 의한 TRAIL 및 genistein의 복합 처리군의 extrinsic 및 intrinsic 경로 활성 촉진 가능성의 여부를 조사하기 위하여 extrinsic 및 intrinsic 경로의 활성 개시에 핵심적으로 관여하는 caspase-8 및 \( -9 \) 와, 대표적인 effector caspase인 caspase-3의 발현 변화를 조사하였다. Fig. 5의 결과에서 알 수 있듯이, SB203580 단독 처리군 및 TRAIL과 genistein 복합 처리군에서 전혀 관찰되지 않았던 활성형 caspase-8의 발현이 SB203580, TRAIL 및 genistein 복합 처리군에서 관찰되었으며, 비활성형 caspase-9의 발현도 3가지 복합 처리군에서 매우 감소되었다. 아울러 SB203580 단독 처리군 및 TRAIL과 genistein 복합 처리군에서는 관찰되지 않았던 활성형 caspase- 3 의 발현도 3 가지 복합 처리군에서 매우 증가되었으며, 활성형 caspase-3의 표적 단백질인 PAPR의 단편화도 3 가지 복합 처리군에서만 관찰되었다. 이상의 결과는 TRAIL과 genistein에 의한 extrinsic 및 intrinsic 경로가 연계된 apoptosis 유도가 p38 MAPK 활성저해로서 더욱 촉진되었음을 의미한다.</p>