지모 뿌리의 추출물과 분획물에 대한 실험에서 UVB로 조사된 세포에서 ROS 소거 활성을 측정하였다. UVB 조사한 실험군에서는 ROS가 대조군에 비해 4배 이상 증가하였으며, 에탄올 추출물에서는 ROS 소거 활성을 나타내지 않았다. 지모 뿌리의 에틸아세테이트 분획물 성분은 TLC 크로마토그램과 LC/ESI-MS 분석을 통해 확인되었다.
<p>세포 내 ROS 소거활성: 사람 피부에 자외선을 처리하게 되면 피부 내에 ROS가 생성된다. 이들 ROS는 세포의 구성 성분인 단백질, DNA 및 지질을 손상시키고 콜라겐, 엘라스틴과 같은 세포 외 기질을 분해하는 MMPs의 발현을 촉진 시킴으로서 피부노화를 가속화시킨다. 따라서 세포내 \( \mathrm { ROS } \) 를 소거할 수 있는 항산화제를 사용하면 피부노화를 억제할 수 있다. 본 실험에서는 지모 뿌리 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획물 및 아글리콘 분획물에 대하여 UVB로 조사된 HaCaT 세포에서 세포내 ROS 소거 활성을 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { DCF } - \mathrm { DA } \) 를 이용하여 측정하였다. 실험결과, UVB를 조사한 실험군은 조사하지 않은 음성대조군에 비해 \( \operatorname { ROS } \) 가 4 배 이상 증가하였다. \( 50 \% \) 에탄올 추출물에서는 ROS 소거 활성을 나타나지 않았다. 에틸아세테이트 분획물의 경우 \( 2 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { ml } \), 아글리콘 분획물의 경우 \( 0.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도 이상에서 유의한 세포내 ROS 감소를 나타내었다(Fig. 8). 결론적으로, 자외선으로 유도된 세포 손상에서 아글리콘 분획물은 \( 2 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 \( \mathrm { UVB } \) 를 처리한 양성 대조군 대비 \( 41.77 \% \) 까지 세포내 \( \operatorname { ROS } \) 를 감소시켰다. 이 연구에서도 아글리콘 분획물은 매우 낮은 농도에서도 세포내 ROS를 소거함을 확인하였고, 이는 앞에서 언급한 \( { } ^ { 1 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 으로 유도된 세포 손상뿐만 아니라 과산화수소로 유도된 세포 손상에 있어서도 세포보호 효과가 매우 큰 이유를 설명하는 것이다.</p> <h2>지모 뿌리 추출물의 성분분석</h2> <p>TLC 및 LC/ESI-MS 성분분석: TLC 크로마토그램을 통해 지모 뿌리 에틸아세테이트 분획의 성분을 확인하였다. 용매 조건은 chloroform : methanol : D.W : formic acid \( =70: 30 \) : \( 4: 2 \) (v/v)으로 분리한 후 에틸아세테이트 분획물의 TLC 띠 분석을 통해 크게 7 가지 띠로 분리된 것을 확인하였다. 이로 나타난 띠를 긁어서 추출 및 여과하고 용매를 감압·건조시켜 파우더를 얻은 뒤, 에탄올에 녹여 분석 시료로 사용하였다. 이중 4 개의 띠를 자외선과 vanillin 발색으로 확인하였다 (Fig. 9). \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } 0.26 \) 인 \( \mathrm { AAB } \) 4는 단일 물질과의 비교를 통해 \( \mathrm { LC } / \) \( \mathrm { ESI } - \mathrm { MS } \) \( [ \mathrm { M } - \mathrm { H } ] ^ { - } \)이 \( \mathrm { m } / \mathrm { z } 251.3 \) 에서 나타났고, 성분은 Nyasol 임을 확인하였다. \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } 0.63 \) 인 \( \mathrm { AAB } 2 \) 는 [M-H] \( { } ^ { - } \)이 \( \mathrm { m } / \mathrm { z } 739.8 \) 으로 나타나 Timosaponin A-III로, \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } 0.57 \) 인 \( \mathrm { AAB } 3 \) 은 \( [ \mathrm { M } - \mathrm { H } ] ^ { - } \)이 \( \mathrm { m } / \mathrm { z } \) 421.4로 Isomangiferin으로 확인하였다(Table 6).</p>