실험동물은 고형사료(Teklad Certified Irradiated Global \( 18 \% \) Protin Rodent Diet \(2918 \)C)를 자유섭취하였다. 실험 종료 후 생존 동물은 음수를 자유섭취하면서 절식을 진행하였고, 도살 후 부검소견을 관찰하였다. 통계학적 결과는 평균 ± 표준편차로 표현되었고, 시험물질 투여군과 대조군 간 유의성은 Student's t-test를 통해 \( p<0. 05, p<0. 01, p<0. 001 \) 수준에서 검증하였다.
<h2>사료 및 물의 급여방법</h2> <p>실험동물용 고형사료(Teklad Certified Irradiated Global \( 18 \% \) Protin Rodent Diet \(2918 \)C, Research Diet INC., New Brunswick, NJ, USA)는 두열바이오텍에서 공급받아 급이기에 넣고 자유섭취 하였다. 음수는 음용 상수도수를 정수시킨 후 폴리카보네이트제 물병에 넣고 멸균하여 자유섭취 하였다. 사료와 음수의 분석은 생산자로부터 공급된 성적서 및 국가공인 검사기관에서 검사한 자료를 참고하여 분석결과가 시험기관에서 정한 허용범위내에 속하는지를 확인하였다.</p> <h2>일반증상관찰, 체중 및 사료섭취량 측정</h2> <p>시험기간 중, 모든 동물에 대하여 투여 전 \( \cdot \)후 매일 \(2 \)회 일반증상의 변화 및 독성증상을 관찰하였다. 체중 측정은 군 분리 시, 투여기간 중 주 \(2 \)회 측정 및 부검 당일에 측정하였다. 사료섭취량은 투여 개시 후 \(4 \)주 동안 주 \(2 \)회 측정하였으며, 평균 사료섭취량은 사료를 급여한 후 섭취량 차이를 \(1 \)마리/ \(1 \)일 기준으로 산출하였다.</p> <h2>혈구분석</h2> <p>시험 종료 후 생존한 모든 동물을 대상으로 부검 전일 음수는 자유섭취 시키면서 절식을 진행하였다. 실험동물은 흡입마취제를 이용하여 호흡 마취 후, 개복하여 복대 동맥에서 혈액을 채혈하여 항응고제인 EDTA가 들어있는 채혈튜브(BD Caribe, Ltd., Franklin Lakes, NJ, USA)에 넣어 혈구분석기(MEK- \(6550 \) , NIHON KOHDEN, Tokyo, Japan)를 이용하여 White blood cell count (WBC), Red blood cell count (RBC), hemoglobin concentration (HGB), Hematocrit (HCT), Mean corpuscular hemoglobin (MCV), Mean corpuscular hemoglobin (MCH), Mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC), Platelet (PLT), Red cell distribution width (RDW), Platelet distribution width (PDW), Mean platelet volume (MPV)를 측정하였다.</p> <h2>혈액생화학분석</h2> <p>혈구분석을 완료한 실험동물의 혈액을 \( 3,000 \mathrm { rpm } , 15 \)분간 원심분리기(Centrifuge \(5415 \)R, EPPENDORF, Hamburg, Germany)를 이용하여 원심 분리하여 얻은 혈청을 혈액생화학분석기(7020, HITACHI, Tokyo, Japan)를 이용하여 Glucose (GLU), Creatinine (CREA), Total protein (TP), Albumin (ALB), Glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), Glutamate pyruvate transaminase (GPT), Total bilirubin (T-BIL), Cholesterol CHO, Triglyceride (TG), High density lipoprotein (HDL), Blood urea nitrogen (BUN), Low density lipoprotein (LDL), Inorganic phosphorous (IP), Lactate dehydrogenase (LDH), Direct bilirubin (D-BIL), Uric acid (UA)를 측정하였다.</p> <h2>부검소견 관찰 및 장기무게 측정</h2> <p>채혈 후 복대정맥을 절단하여 방혈하는 방법으로 도살을 실시하고, 부검소견을 관찰하였다. 부검 후 심장, 폐, 간, 비장, 신장,고환 및 난소를 적출하여 무게를 측정 후 부검 전 절식된 체중과 비교하여 상대적 장기중량을 산출하였다.</p> <h2>통계 처리</h2> <p>본 시험에서 얻은 결과는 평균 \( \pm \)표준편차로 나타냈으며, 대조군과 시험물질 투여군의 통계학적 유의성을 Student's t-test를 실행하여 \( p<0.05, p<0.01, p<0.001 \) 수준에서 검정하였다.</p>