Bacillus sp A8-8은 유류 분해능 특성을 가진 균주로, 이의 암모니아성 질소 산화를 관찰하려고 ammonium sulfate를 첨가한 배지에서 배양하고, 시간대에 따라 달라지는 암모니아의 경시적 감소율 변화를 관찰하였다. 실험 균주의 생육도는 \( 610 \mathrm{nm} \)의 흡광도로, 암모니아성 질소와 아질산성 질소 산화 균주의 산화율은 배지 내의 암모니아성/아질산성/질산성 질소의 농도 변화를 시간대별로 측정 관찰하였다. 또한 미생물 부착 담체를 액체 배지에 접종하여 시간대별로 암모니아성, 질산성 질소의 변화 양상을 측정하여 질소 산화능을 측정하였다.
<h2>재료 및 방법</h2> <h3>실험 균주</h3> <p>본 연구에 사용한 균주는 유류 오염 지역에서 분리한 유류 분해능의 특성을 가진 균주로서 본 연구실에서 보관 중 인 균주, Bacillus sp. A8-8을 사용하였다. 질소의 이용이 양호하도록 암모니아가 함유된 배지(Table 1)에서 7일간 진탕 배양을 하면서 암모니아성 질소 산화능이 있음을 확인한 뒤에 공시 균주로 사용하였다. 균주의 일반적인 계대 배양은 LB-broth를 사용하였으며, 질소 산화 측정을 위한 배지의 조성은 Table 1에 나타낸 바와 같다.</p> <h3>질소 산화 측정을 위한 배양</h3> <p>암모니아성 질소의 산화를 측정하기 위하여 ammonium sulfate를 첨가한 배지에서 배양한 후, 시간대에 따른 암모 니아의 경시적인 감소율 변화를 보고자 하였다. 일정 시간대 별로 샘폴링하여 균 생육 정도를 측정하고 생육된 균을 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 10,000 \mathrm{rpm} \) 에서 원심분리 하여 얻은 배지의 상등액에 존재하는 암모니아성 질소, 아질산성 질소 및 질산성 질소의 함량을 측정하였다. 또한, 아질산성 질소의 산화를 확인하기 위해서는 sodium nitrite를 첨가한 배지에서 배양한 배양 상등액으로부터 동일 방법으로 샘플링하여 균 생육정도롤 측정하고 생육된 배지의 상등액에 존재하는 각종 아질산성 질소와 질산성 질소의 함량을 측정하였다.</p> <h3>분석 방법</h3> <p>실험 균주의 생육도는 \( 610 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도로 측정하였으며,사용한 기기는 UV-spectrophotometer(Phamacia Biotech,Ultrospec3000, U.S.A)를 사용하였다. 암모니아성 질소 및아질산성 질소 산화 균주의 산화율은 배지 내의 암모니아성 질소, 아질산성 질소 및 질산성 질소의 농도 변화를 경시적으로 측정하여 비표하였다. 암모니아성 질소는 인돌페놀법, 아질산성 질소는 디아조화법, 질산성 질소는 부루신법을 이용하였으며, 이는 수질 오염 공정 시험법에 준하여 분석하였다[1].</p> <h3>실험 균주의 담체 고정화 및 질소산화능 측정</h3> <p>미생물을 담체에 고정화시키는 방법은 사용한 Bacillus\( \mathrm{sp} \). 균주를 48 시간 동안 배양한 배양액에 하루 동안 건열 멸균시킨 평균 직경이 \( 0.5 \mathrm{~mm} \) 의 세라믹 담체를 완전히 잠기게 담근다. 미생물 배양액과 담체가 섞여진 샘플을 실온에서 좌우로 흔들어 주는 장치(shaker, 호기적 조건)로 48시간 정도 반응시키면서 담체에 고정시켰다. 이 때 건조된 담체의 다공질 공국 사이로 수분이 충전되면서 미생물 입자가 흡착, 고정되어 생물막을 형성하게 된다. 이 과정에서 형성된 생물막의 모습을 전자 현미경으로 관찰하여 확인하였다. 질소 산화능의 측정은 미생물이 부착된 담체를 \( 1 / 50 \),\( 1 / 250(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 의 양이 되게 액체 배지에 접종한 후, 경시적으로 암모니아성 질소와 질산성 질소의 변화 양상을 측정 하였다.</p>