In vitro 건물 소화율은 Moore 방법으로, In vitro 건물소화율 실험을 통해 발효시간대별 소화율을 기초로 Ørskov와 McDonald로소화율을 추정하고 가스발생량의 추정과 반추위 통과속도를 고려해 유효 가스발생량의 측정을 in vi-tro 소화율과 같이 산출하였다. In vitro 미생물 성장량 측정은 시간대별로 발효된 시험관에서 배양액 \( 1.5 \mathrm { ~ml } \)를 test tube에 취한 후 3분간 원심분리 하고, 이 과정을 3회 반복한 후 spectrophotometer를 이용해 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서 OD값을 비교해 미생물 성장량을 구했다.
<h2>조사항목 및 조사방법</h2> <p>In vitro 건물 소화율은 Moore 방법으로, 시험에 사용할 filter paper 무게를 미리 측정해 두었다가 \( \mathrm { pH } \) 측정 후, filter paper에 걸러진 내용물과 filter paper를 \( 105 ^ {\circ } \mathrm { C } \) drying oven에서 12시간 건조시킨 다음, 아래 공식으로 구하였다.</p> <p>In vitro 소화율 \( ( \%) = \frac {\text { 발효 전 기질의 무게 } - \text { (여과 후 남은 기질의 무게 } - \text { Blank) } } {\text { 발효 전 기질 무게 } } \times 100 \)</p> <p>In vitro 건물소화율 실험을 통해 얻어진 각 발효시간대별 소화율을 기초로 하여 다음의 Ørskov와 McDonald의 방법에 의해 소화율을 추정하였다.</p> <ul> <li>\( P = a + b (1-e ^ { ct } ) \)</li> <li>\( P \) : 시간 " \( t \)" 경과시 반추위 내 건물 소화율 \( ( \%) \)</li> <li>\( a \) : 시간 "0"시간대의 건물 소화율 \( ( \%) \), 신속하게 소화되는 부분.</li> <li>\( b \) : 주어진 시간에 있어서 소화될 수 있는 건물의 잠재적인 소화율 \( ( \%) \)</li> <li>\(c \) : " \(b \)"부분의 시간당 소화상수</li> <li>\( t \) : 반추위내 발효시간</li></ul> <p>유효 소화도(effective ruminal digestibility, ED)는 사료의 반추위 내 통과속도를 시간당 \( 6 \%( \mathrm { r } =0.06) \)로 가정하여, 다음과 같은 공식으로 추정하였다.</p> <ul> <li>\(ED= \mathrm { a } + \mathrm { b } \{\mathrm { c } /( \mathrm { c } + \mathrm { r } ) \} \)</li> <li>\(r \) : 사료의 반추위내 통과속도</li> <li>\( a, b, c \) : 건물 분해상수의 공식에서와 동일.</li></ul> <p>Gas 발생량은 각 발효시간대별로 시험관을 shaking in-cubator에서 꺼낸 후, 온도에 따른 변화를 감안하여 상온에서 20분간 방치시킨 다음, water displacement apparatus를 이용하여 gas 발생량을 측정하였다. 가스발생량의 추정과 반추위 통과속도를 감안한 유효 가스발생량의 측정은 in vi-tro 소화율 방법에서와 동일하게 산출하였다.</p> <p>In vitro 미생물 성장량 측정은 각 시간대별로 발효된 시험관으로부터 배양액 \( 1.5 \mathrm { ~ml } \)를 test tube에 취한 다음 사료입자를 제거하기 위하여 \( 3,000 \mathrm { ~rpm } \)에서 3분간 원심분리 시킨다. 상층액을 \( 14,000 \mathrm { ~rpm } \)에서 3분간 다시 원심분리하여 미생물 pellet을 침전시킨 다음, 상층액은 제거하고 침전물에 so-dium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.5)를 첨가하여 vortex로 현탁시킨다. 이 과정을 3회 반복한 후에spectrophotometer를 이용하여 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서 OD (optical density)값을 비교하여 미생물 성장량을 구하였다.</p>