2001년부터 2004년까지 동아대학교병원에서 외과적으로 절제한 비소세포폐암 조직 74예를 생명윤리심의위원회의 허가를 받아 본 연구에 포함시켰다. MGMT에 대한 양성 염색은 면역조직화학적 염색에 의해 결정된 바와 같이 종양 세포의 핵 또는 핵 및 세포질 모두에서 갈색 과립으로 관찰되었으며 염색 강도를 기준으로 스코어링 시스템을 사용하여 MGMT 염색 결과를 평가했습니다. 음성 염색은 0점, 약한 양성은 1점, 보통 양성은 2점, 강한 양성은 3점을 받았다. 염색강도와 분포점수를 합산하여 0~2점은 MGMT 발현 소실, 3점 이상은 MGMT 발현 양성으로 판정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>연구 재료</h2> <p>동아대학교 의료원에서 2001년부터 2004년까지 외과적으로 적출한 폐암종 조직 중 병리과에서 비소세포암종으로 진단된 74예를 연구대상으로 하였으며, 생명윤리심의회의 허가를 얻은 후 본 연구를 수행하였다. 수술 전에 방사선 요법이나 화항ㅇ법을 받은 예는 연구대상에서 제외하였으며, 연구대상의 병리진단 보고서를 참고하고 보관된 조직 슬라이드를 재검토하였다. WHO 분류 방법에 의해 조직학적 유형을 분류하였고, 대상 환자의 의무기록 추적조사를 통해 나이, 성별, 홉연력, 종양의 크기, 종양의 T병기, 림프절 전이 유무 등 임상 병리적 양상을 조사하였다.</p> <h2>연구 방법</h2> <h3>면역조직화학 염색</h3> <p>\( 4 \mu \mathrm{m} \) 두께로 절편된 조직을 \( 100 \% \) xylene에서 탈파라핀하고 \( 100 \%, 95 \%, 70 \% \) 알코올에서 차례대로 함수 과정을 거친 후 흐르는 물에서 10 분간 씻어냈다. 항원성 회복을 위하여 \( \mathrm{pH} 9.0 \) Tris-EDTA 용액으로 전자레인지에서 10 분간 끓이는 전처리를 하였다. 조직 내의 내인성 과산화효소를 비활성화 시키기 위하여 실온에서 \( 3 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 에서 10 분간 반웅시킨 후Tris buffered saline \( (\mathrm{pH} 7.4) \)로 세척하였다. 비특이적인 반응을 줄이기 위하여 Cap-Plus \( { }^{\mathrm{TM}} \) Blocking solution(Zymed, Califonia, USA)에서 10 분간 더 반응시켰다. 수세 과정 없이 마우스 단클론성 일차항체 O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT, Lab Vision, Fremont CA, USA)를 \( 1: 100 \) 희석하여 실온에서 한 시간 동안 반응 시킨 후, Cap-Plus\( { }^{\mathrm{TM}} \) Biotinylated secondary antibody (Zymed, Califonia, USA)에서 30분간, Cap-Plus\( { }^{\mathrm{TM}} \) Streptavidine-HRP(Zymed, Califonia, USA)에서 30 분간 반응시켰다. 면역 염색 후 DAB (3,3'-Diaminobenzidine)로 발색시킨 후 Gill's hem-atoxylin으로 대조염색 하였다.</p> <h3>면역조직화학 염색 판독</h3> <p>면역조직화학 염색 결과, MGMT가 종양세포의 핵 또는 핵과 세포질에 동시에 갈색 과립상으로 염색될 때를 양성으로 판정하였다. MGMT 발현 유무는 반정량적 분석을 시행하여, 100 배 시야에서 염색되지 되지 않은 경우 즉, \( 0 \% \) 를 0 점, \( 25 \% \) 미반의 종양세포가 염색되는 경우 1점, \( 26-50\% \) 2점, \( 50 \% \) 이상을 3점으로 하였다. 그리고 염색 강도에 따라 음성은 0점, 약양성인 경우를 1점, 중등도 양성인 경우를 2점, 강양성을 3점으로 분류하였다. 염색 강도에 따른 점수와 분포 점수를 합하여 0-2점이면 MGMT 발현 소실, 3점 이상이면 MGMT 발현 양성으로 판정하였다.</p> <h3>통계학적 분석</h3> <p>통계 처리는 SPSS (Version 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용하였다. 임상병리학적 변수에 따른 MGMT 단백 발현의 차이를 평가하기 위해서는 \( x^{2} \) 검정방법을 사용하여 분석하였고 \( \mathrm{p}<0.05 \) 일 때 통계적 유의한 것으로 간주하였다.</p>