감태 효소분해산물의 ADH 활성 측정은 Bergmeyer의 방법을 변형하여 실시하였다. NADH 생성량은 스펙트로포토미터를 사용하여 340nm에서 흡광도를 측정하여 대조군과 비교하여 상대적 활성을 파악하였다. 대조군은 TE 버퍼를 첨가한 것으로, Hepos를 positive control로 사용하여, 약국에서 구입한 후 처방전에 따라 1/2로 희석하여 사용하였다.
<p>아질산염 소거율 \( ( \%)=[1-( \mathrm { A } - \mathrm { C } ) / \mathrm { B } ] \times 100 \)</p> <p>A : \(1 \mathrm { mM } \mathrm { NaNO } \) 용액에 추출 시료를 첨가하여 1 시간 반응 후의 흡광도 B : \( \mathrm { NaNO } _ { 2 } \) 용액의 흡광도 C : 추출시료 자체의 흡광도</p> <h1>ADH활성 측정</h1> <p>감태 효소분해산물의 ADH활성 측정은 Bergmeyer의 방법을 약간 변형하여 측정하였다. NADH생성량은 spec-trophotometer를 이용하여 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 대조군에 대한 상대적 활성을 비교하였다. 반응액 조성은 증류수 \( 1.4 \mathrm { ml } , 1.0 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } \) 8.8) \( 0.75 \mathrm { ml } , 20 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { NAD } ^ { + } 0.3 \mathrm { ml } , 0.2 \mathrm { M } \mathrm { EtOH } 0.3 \mathrm { ml } \), 시료 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 첨가한 후, \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온수조에서 10 분간 반응시키고 ADH( \(5 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } ) 0.15 \) \( \mathrm { ml } \) 를 cuvette에 넣어 반응용액이 \( 3 \mathrm { ml } \) 이 되도록 조절하여 \( 25 \mathrm { C } \) 에서 5 분간 preincubation 하고, 5 분 동안 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 대조구는 시료대신 TE buffer \( ( \mathrm { pH } \) \( 8.0) \) 를 첨가 한 것으로 상대 활성을 나타내었으며, positive control로 사용한 Hepos는 약국에서 구입하여 처방전에 따라 \( 1 / 2 \) 로 희석하여 사용하였다. ADH 의 활성은 반응 종료시 최대 흡광도를 대조구의 최대 흡광도에 대한 비율로 나타내었으며, 다음과 같은 식으로 계산하였다.</p>