CYP2C19 유전자 다형성 분석은 환자군과 대조군의 말초혈액 \( 5 \mathrm { ml } \) 를 EDTA 튜브로 채혈하여 QuickGene SP kit DNA whole blood를 이용하여 백혈구 핵으로부터 genomic DNA를 추출하고 Quant-iT ds DNA BR Assay Kits로 정량한 후 TaqMan SNP Genotyping Assay를 사용하여 CYP2C192와 CYP2C193 유전자형 결정을 수행하는 방법이다.
<h2>CYP2C19 유전자 다형성 분석</h2> <p>\( C Y P 2 C 19 \) 유전자 다형성 분석은 환자군 및 대조군 각각의 말초혈액 \( 5 \mathrm { ml } \) 를 ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) 튜브로 채혈한 후, QuickGene SP kit DNA whole blood(FUJIFILM, JAPAN)를 이용하여 백혈구 핵으로부터 genomic DNA를 추출하여 수행하였다. 추출된 DNA 시료는 Quant-iT \( { } ^ {\mathrm { TM } } \) ds DNA BR Assay Kits (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 정량한 후 각각의 튜브에 시료 당 \( 25 \mathrm { ng } / \mu 1 \) 씩 분주하였다. CYP2C192와 CYP2C193 유전자형 결정은 실험방법이 비교적 간단하고 정확한 분석기법인 TaqMan \( { } ^ {\mathbb { R } } \) Fluorogenic \( 5 ^ {\prime } \)Nuclease Assay (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 수행하였다. CYP2C192 유전자형 결정에 사용된 sense primer 서열은 5'-AATTACAACCAGAGCTTGGC-3'이고, antisense primer 서열은 5'- TATCACTTTCCATAAAAG CAAG-3'이다. CYP2C1933의 경우는 sense primer 서열이 5'-CCAATCATTTAGCTTCACCC-3'이며 antisense primer 서열은 5'-CCTTCAGGGCTTGGTCAATA-3'로 사용하였다. PCR(polymerase chain reaction) 반응을 위해 반응액은 genomic DNA \( 10 \mathrm { ng } , 40 \times \) assay mix \( 0.13 \mu \mathrm { l } \), TaqMan \( { } ^ {\mathbb { R } } \) Universal PCR master mix \( 2.5 \mu 1 \) 를 첨가하여 총 반응액을 \( 5 \mu 1 \) 로 조정하였다. Real-time PCR은 ABI Prism \( { } ^ {\mathbb { R } } 7900 \mathrm { HT } \) Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems)을 이용하여 수행하였으며 PCR 수행은 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } 10 \) 분간 초기 변성(pre-denaturation)을 한 후 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15 초 동안, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분간의 2 단계로 \( \mathrm { PCR } \)을 45회 수행하였다. PCR 수행이 끝난 후, 결과의 분석은 \( 7900 \mathrm { HT } \) Sequence Detection System \( 2.3 \) software (Applied Biosystems)를 이용하여 실시하였다.</p>