구성당의 주요 조성은 galactose와 arabinose으로 되어 있다. 또한 비합착 획분인 0.4 M NaCl와 CAL-1 이상에서의 획분에서는 상대적으로 높은 비율로 glucose 이 나타났다. 고추잎에 대한 열수추출을 조사를 통하여 추출물의 보체계 활성을 조사한 결과 높은 항보체 활성이 열수추출물에서 나타났다. 고추잎에 대한 열수추출물을 대상으로 한 활성 다당을 분리 및특징들을 파악하였다. 조다당 CAL-0을 이온교환인 크로마토그래피로 가하여 비흡착획분 1개와 합착획분 6개을 획득 하였다. 보체계 활성이 다른 회분들에 비하여 높은 것은 CAL-1으로, 충당의 함량 및 산성당의 함량 각각 81.6%, 0.3%로 가장 낮게 나타났다.
<h3>조다당의 분획 및 정제</h3> <p>조다당 CAL-0를 DEAE Sepharose CL-6B 컬럼에서 이온교환 크로마토그래피를 행하여 1 개의 비흡착획분(CAL-1)과 6 개의 합착획분(CAL-2\( \rightarrow \)CAL-7)을 얻었다. 이들 획분의 수율은 \(\mathrm{0.2 M~ NaCl}\)에서 용출된 획분인 CAL-3의 수율이 \(30\%\)로 가장 높았으며 다음에 CAL-4, CAL-1, CAL-2의 순이었으나 \(\mathrm{0.4 M ~NaCl}\) 이상의 용출 획분에서는 수율이 급격하게 감소하였다. 보체계 활성은 시료 \(\mathrm{100mg}\)의 농도에서 증류수 용출획분인 CAL-1이 다른 획분에 비해 다소 높게 나타났으며 \(\mathrm{0.1 M, 0.2 M, 0.3 M}\)에서도 \(40\sim55\%\) 정도의 활성을 나타냈다(Fig. 6). 이들 각각의 당함량, 단백질 함량, 산성당 함량을 측정한 결과 Table 1과 같이 총당의 함량은 비흡착 획분인 CAL-1이 \(81.6\%\)로 가장 높았으며 산성당은 \(\mathrm{0.2 M, 0.3 M}\) 및 \(\mathrm{0.4 M ~NaCl}\) 획분에서 \(12\sim20\%\)의 함량으로 나타났다. 단백질 함량은 \(\mathrm{0.5 M}\)과 \(\mathrm{1 M~ NaCl}\) 용출 획분에서 \(45\%\) 이상의 높은 함량을 나타냈으나 항보체활성은 상대적으로 낮았다. 구성당의 조성은 모든 획분에 arabinose와 galactose가 주 구성당으로 되어 있었으며 비흡착 획분인 CAL-1과 \(\mathrm{0.4 M ~NaCl}\) 이상의 획분에서는 glucose 비율이 비교적 높게 나타났다. 또한 rhamnose는 CAL-4와 CAL-5에서 타 획분보다 높게 나타났다. 이온교환 크로마토그래피에 의해 얻어진 획분 중 활성이 높았던 CAL-2는 Sepharose CL-6B 컬럼 \((2.6\times90\mathrm{cm})\)을 이용한 겔 여과 크로마토그래피에서 고분자 획분과 저분자 획분으로 분리되었다(Fig. 7). 이 두 획분의 항보체 활성은 CAL-2-I에서 활성이 높게 나타났으며(Fig. 8), 표준 분자량 물질과 비교했을 때 약 61,000 정도의 분자량을 가지고 있는 것으로 나타났다.</p> <h2>고 찰</h2> <p>자연계에 존재하는 식물체에는 강한 생리활성, 생체방어, 항상성 유지 등의 효능을 가진 저분자 및 고분자 물질이 함유되어 있어 이들로부터 유용물질을 분리하여 건강보조식품 및 의약품으로 개발하려는 노력이 계속되고 있으며 실제로 상용화된 제품도 있다. 이중 보체계를 활성화하는 물질로는 한약재, 담자균류 및 식물류의 다당류와 단백 다당들이 보고되어 있다. 식물성 식품재료 총 38종을 대상으로 항보체 활성을 측정한 신 등의 보고에서 돌나물, 달래, 시금치, 미나리, 부추, 취나물, 들깻잎 등의 식품으로 이용되는 채소잎들은 다른 식물체, 특히 한약재의 뿌리, 외피 혹은 줄기보다 활성이 낮은 것으로 보고되어 있다. 그러나 인삼잎은 인삼과 동일 수준의 높은 활성을 가지고 있는 것으로 보고되었으며, 본 연구에서 식품소재인 고추잎을 대상으로 항보체 활성을 조사한 결과 고추열매에서 높은 활성이 나타난 것과 마찬가지로 잎에서 조제한 조다 당에서도 높은 활성이 관찰되었고, 시호, 당거, 쑥, 대복피, 고사리 등에서와 같이 보체계 활성화 물질들이 다당에 기인한다는 보고와 일치하였다. 식물성 식품재료 및 한약재에서 분리한 보체계 활성 다당의 조성은 매우 복잡하고 다양하여 활성과 당조성 사이의 정확한 관계를 밝히기는 매우 어려우나 버섯류의 경우에는 glucose로 구성된 glucan이 대부분이며 식물성 재료 및 한약재에서 분리한 활성 다당들은 arabinan, glucan, arabinogalactan처럼 다양한 당조성 및 비율로 구성되어 있다. 고추잎에서 분리한 다당도 galacturonic acid, arabinose, galactose, glucose 및 rhamnose 등이 주요 구성당으로 되어 있어 고추, 당가, 차 전자, 쑥, 시호, 자근 둥에서 분리된 보체계 활성화 다당들과 유사한 특성을 나타냈다. 또한 조다당 분획 CAL-2의 겔 여과 크로마토그래피에서 얻은 고분자 획분이 저분자 획분보다 활성이 높은 것과 같이 동일한 재료에서 분리 정제된 경우 고분자 획분이 저분자 획분보다 일반적으로 활성이 높으나 활성을 가진 타 재료와의 분자량 비교에는 곤란한 점이 있으며, 복합산성다당의 경우 활성에 영향을 주로 미치는 것은 rhamnogalacturonan의 주쇄구조에 연결된 중성당 부분으로 활성과 당조성 및 분자량과의 관계는 더 연구될 필요가 있다고 본다. 보체계의 활성화는 고전경로와 부경로를 동하여 활성화되는데 자근에서 분리된 arabinan, 차전자 중의 Plantago mucilage A 등은 고전경로 및 부경로를 활성화하며, lentinan, inulin, zymosan, pachman 등의 다당들은 주로 부경로를 통하여, lipid A나 peniculatan 등은 고전 경로를 통하여 보체계를 활성화하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서 분리한 고추잎의 다당은 고전경로 및 부경로 모두에 관여함이 밝혀졌으나 활성과 당조성 및 구조와의 상관관계에 대해서는 현재 연구 중이다.</p> <h2>요 약</h2> <p>고추잎의 열수추출을 행하여 추출물의 보체계 활성을 측정한 결과 열수추출물에서 높은 항보체 활성이 나타나 고추잎의 열수추출물을 대상으로 활성 다당을 분리하여 특성을 조사하였다. 즉 열수추출물의 메탄올 환류, 에탄올 침전, 투석 및 동결건조를 통하여 고추잎 \(\mathrm{600 g}\)으로부터 \(\mathrm{186g}\)의 조다당(CAL-0)을 얻었다. CAL-0는 당 \(51.8\%\), 산성당 \(8.2\%\), 단백질 \(16.8\%\)를 함유하고 있었으며 주로 arabinose, glucose, galactose로 구성되어 있었다. 조다당 CAL-0는 pronase 처리에서 활성의 변화가 없었으나 과요오드산 산화에 의해서 급격히 활성이 감소하였다. 또한 CAL-0의 항보체 활성은 \(\mathrm{Ca} ^ { 2 + } \) 이온 존재 유무시의 항보체 활성과 교차면역 전기영동 결과 고전경로와 부경로를 통하여 보체계를 활성화하는 것이 관찰되었다. 이 조다당 CAL-0를 DEAE Sepharose CL-6B을 사용하여 \(\mathrm{0⭢1 M ~NaCl}\)로 이온교환 크로마토그래피를 행하여 1개의 비흡착획분과 6개의 흡착획분을 얻었다. 이중 증류수(CAL-1)와 \(\mathrm{0.1 M ~NaCl}\)에서 용출된 획분(CAL-2)이 다른 획분에 비해 높은 보체계 활성을 보였으며 활성 획분들에서는 주로 arabinose, galactose, glucose가 다양한 비율의 몰비로 구성되어 있었다. CAL-2 획분은 Sepharose CL-6B의 gel filtration에서 고분자 peak 와 저분자 peak로 분리되었으며 항보체 활성은 분자량 61,000 정도의 고분자 획분에서 높게 나타났다.</p>