구성아미노산은 5g 시료에 6N-HCl 3mL 7분간 질소가스 충전, 110\(\pm\)1\(^\circ \mathrm{C}\) heating block에 24시간 가수분해, Whatman No.6 여과한 것을 pH 2.2 구연산 완충액 10ml로 만들었다. 그 후 membrane filter 0.2\(\mu\mathrm{m}\) 및 sep-pak C18 cartridges를 거쳐 Amino acid analyzer 835로 구성 아미노산을 분석하고, Blois의 방법을 변형하여 전자공여능을 측정하였다.
<h2>구성 아미노산 정량</h2> <p>구성아미노산은 시료 \( 5 \mathrm { ~g } \)에 \( 6 \mathrm { ~N } - \mathrm { HCl } 3 \mathrm { ~mL } \)를 가하고 질소가스를 7분간 충진시킨 후 \( 110 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 heating block에서 24시간 가수분해한 다음 여과(Whatman No. 6)하여 회전식 진공증발기로 감압 - 농축하였다. 이것을 \( \mathrm { pH } 2.2 \) 구연산 완충액으로 총 부피를 \( 10 \mathrm { ml } \)로 만든 다음, membrane filter ( \( 0.2 \) \( \mu \mathrm { m } ) \) 및 sep-pak \( \mathrm { C } _ { 18 } \) cartridges에 차례로 통과시킨 다음 아미노산 자동 분석기(Amino acid analyzer 835, Hitachi, Japan)로써 분석하였다. 이때 칼럼은 high resolution 칼럼을 사용하였고 칼럼 온도는 \( 47 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 파장은 \( 570 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다.</p> <h2>전자공여능 측정</h2> <p>전자공여능은 Blois의 방법을 변형하여 측정하였다. 농도별로 조제된 추출물 \( 1 \mathrm { ml } \) 에 \( 1 \times 10 ^ { -4 } \mathrm { M } athrm { DPPH } (1,1 \)-diphenyl-2-picrylhydrazyl)용액 \( 3 \mathrm { ~mL } \)를 가하여 10초간 진탕한 다음 실온에서 30분간 반응시킨 후 \( 525 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.</p> <h2>환원력 측정</h2> <p>Oyaizu의 방법에 따라 추출물 \( 1 \mathrm { ml } \)에 \( 200 \mathrm { mM } \) 인산 완충액 \( ( \mathrm { pH } \) 6.6) 및 potassium fericyanide를 동량으로 혼합한 후 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 분간 반응시켰다. 여기에 \( 10 \% \) trichloroacetic acid (TCA)를 가하여 5,000 rpm에서 10분간 원심분리시켜 상층액을 얻었다. 상층액 \( 1 \mathrm { ml } \)에 증류수 및 \( 1 \% \) ferric chlor-ide를 각각 \( 1 \mathrm { ml } \)씩 혼합하여 \( 700 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였으며, 환원력은 흡광도의 값으로 나타내었다.</p>