UDPGT 활성도를 측정하기 위해 working sub-strate 용액(0.05 \( \mathrm { M } \) phospate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.0), \( 15 \mathrm { mM } \) UDP-glucuronic acid, \( 10 \mathrm { mM } \) p-nitrophenol, \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } _ { 2 } \). \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , 0.2 \% \) bovine albumin, \( 0.5 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) Triton \( X-100 \)을 가하여 3분 간 가열한다.
<h2>간조직의 UDP-glucuronyl transferase (UDPGT) 활성 측정</h2> <p>전 처리한 간 microsome에서 Reinke 등의 방법으로 UDPGT 활성도를 측정하였다. 즉 시험관에 working sub-strate 용액(0.05 \( \mathrm { M } \) phospate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.0), \( 15 \mathrm { mM } \) UDP-glucuronic acid, \( 10 \mathrm { mM } \) p-nitrophenol, \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } _ { 2 } \). \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } , 0.2 \% \) bovine albumin, \( 0.5 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) Triton \( X-100 \) 을 가하여 3분 간 preincubation 시킨 후 \( 0.15 \mathrm { M } \mathrm { KCl } \)로 현탁시킨 micro-some 시료와 증류수를 가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 20분간 반응하고 \( 0.3 \) \( \mathrm { N } \) perchloric acid를 가하여 \( 1,600 \times g \)에서 15분간 원심분리하여 상층액을 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 취하여 \( 1.6 \mathrm { M } \) glycine buffer \( ( \mathrm { pH } 10.3) \)를 가하여 \( 436 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>분변 중의 지질조성 분석</h2> <p>실험 전 마지막 2주간 분변을 채취하여 freezer dryer ( \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) )에서 항량에 도달 할 때까지 냉동건조 시킨 뒤 건조중량을 측정하였다. 이중 \( 500 \mathrm { mg } \) 을 시료로 채취하여 Deweal 등의 방법에 의해 곱게 분쇄한 뒤 \( \mathrm { KOH } \) solution을 \( 1 \mathrm { ml } \) 넣어 3시간 autoclave한 다음 \( 20 \% \mathrm { NaCl } \) 용액 \( 1 \mathrm { ml } \) 을 첨가하고 ether \( 20 \mathrm { ml } \) 을 넣어 상층액을 걷어내고(2회) 하층액에 \( \mathrm { HCl } 0.2 \) \( \mathrm { ml } \) 첨가하여 다시 ether \( 20 \mathrm { ml } \) 을 넣어 상층액을 수집하는 과정을 4 회 반복하였다. 수집한 상등액을 rotary evaporator로 농축시킨 후 액체질소로 완전히 건조시켜 \( \mathrm { MeOH } / \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } (5 / 1) \) 혼액에 용해시켜 일정량을 시료로 취하였다. 변의 총지질 배설량은 Folch 등[15]의 방법에 의해 정량하였고, 중성지방 함량은 Sale 등에 의해 수정된 방법에 의해 \( 500 \mathrm { ~nm } \) 에서 정량하였으며, 콜레스테롤은 Pearson 등의 방법에 의해 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서 정량하였다.</p>