균사 배양이 완료되면 온도와 습도를 조절하여 버섯의 발생을 유도하고, 1~2주 동안의 생육 상황을 조사하였다. 또한, 절편을 고정액에 전고정하고 세척한 후 후고정시킨 다음, 이를 건조하였다. 이후, 이 시험편에 금을 증착시킨 뒤 주사전자현미경으로 관찰하였다.
<h2>발이 및 생육특성 조사</h2> <p>봉지 바닥까지 균사가 배양되면 뚜껑을 벗기고 온도 \( 15 \pm \) \( 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 습도 \( 90 \)~ \( 95 \% \)로 조절하여 버섯 발생을 유도하고 1~2주기까지 생육조사하였다. 배양일수는 접종 후부터 봉지바닥까지 균사가 자란 봉지가 전체의 \( 80 \% \) 일 때까지의 소요일수, 초발이소요일수는 뚜껑을 제거하여 입상 후 원기가 고르게 형성된 봉지가 전체의 \( 70 \% \) 일 때까지의 기간, 생육일수는 초발이소요일부터 첫 수확일까지의 기간으로 나타내었다. 생육특성을 조사하기위해 생육일수, 유효경수, 갓크기, 대굵기, 대길이 등의 자실체 특성과 수량을 조사하였다.</p> <h2>물리적 특성 및 색도 조사</h2> <p>생육이 끝난 자실체의 대로부터 길이 \( 20 \mathrm { ~mm } \), 두께 10 \( \mathrm { mm } \) 의 절편을 제작하고, 물성측정기 (SUN RHEO meter, Compac-100D, Japan)를 이용하여 경도 (Hardness), 응집성(Cohesiveness), 검성 (Gumminess) 등을 측정하였다.</p> <h2>전자현미경 관찰</h2> <h3>주사전자현미경용 시험편제작</h3> <p>자실체 수확 직후 갓의 표면, 주름, 대 부위에서 \( 5 \times 5 \times 3 \mathrm { ~mm } \)의 절편을 만들어 주사전자현미경 시료로 사용하였다. 각각의 절편을 Karnovsky's 고정액에 2시간 전고정한 뒤 \( 0.05 \mathrm { M } \) cacodylate buffer로 10 분씩 3 회 세척한 다음 \( 1 \% \) os-mic acid에 1 시간 동안 후고정 시켰다. 후고정이 끝난 시험편에 대해 \( 0.05 \mathrm { M } \) cacodylate buffer로 10 분씩 3회 수세한 뒤, \( 50 \% \) 알코올용액에서부터 \( 100 \% \) 용액까지 1시간씩 에탄올 시리즈로 탈수하고 초산 이소아밀용액으로 치환하여 임계점 건조 (HCP-2, Hitachi, Japan)를 실시하였다. 건조가 끝난 시험편을 시료대에 장착한 다음, ion sputter (E-1010, Hitachi, Japan)를 이용해 120초간 금증착을 하고, 주사전자현미경(S-3000N, Hitachi, Japan)으로 가속전압 \( 15 \mathrm { kV } \), WD \( 10 \mathrm { ~mm } \)에서 관찰하였다.</p> <h3>투과전자현미경용 시험편 제작</h3> <p>갓의 표면, 주름, 대의 부위에서 \( 1 \times 1 \times 3 \mathrm { ~mm } \) 의 절편을 만들고, 주사전자현미경 시험편 제작에 있어서 탈수 시리즈까지 동일하게 처리하였다. 탈수가 끝난 시험편에 대하여 propy-lene oxide 용액에 30분씩 2회 치환한 다음, EPON 812 포매용매로 서서히 농도를 높이면서 치환시켰다. \( 100 \% \) EPON 용액에 DMP-30 경화제를 \( 1.5 \% \) 가 되도록 흔합한 뒤 포매간에 시료를 넣어 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간, \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48 시간 동안 경화시켜 블록을 제작하였다. 만들어진 블록을 실체현미경으로 관찰하면서 삭정한 다음 Ultramicrotome (Lieca Ultracut UCT, Austria)으로 \( 300 \mathrm { ~nm } \) 의 절편을 제작하였다. 만들어진 절편을 Toluidine blue로 염색하여 광학현미경상에서 관찰하였다. 투과전자현미경으로 관찰하고자 하는 부위를 재조정하여 잘라내고 Ultamicrotome으로 \( 80 \mathrm { ~nm } \) 의 연속된 절편을 제작하였다. Cu-grid (VECO Cu 200, Kkenshoji Co., Japan)에 연속된 절편을 없어 실온에서 건조시킨 다음, 염색 키트에 담아 \( 2 \% \) Uranyl acetate-lead citrate 용액으로 이중염색하고, 실온에서 건조하여 투과전자현미경 (H7500, Hitachi, Japan)으로 \( 80 \mathrm { kV } \), High resolution mode에서 관찰하였다.</p>