전분함량을 분석하기 위해 Phenol-sulfuric법을 사용하여 풍란의 지상부 및 지하부 \( 10 \mathrm { ~g } \)를 균질분쇄하고, 진탕한 후 Toyo No. 1 여과지를 통해 1차 여과하고 Sep-Pak cartridge와 membrane filter를 이용하여 여과한 후 분광법으로 분석을 실시하였다. 단백질 함량을 조사하기 위해서 Lowry 등의 방법에 의해 분석을 실시하고 흡광도를 측정하였고, 단백질 표준요액의 흡광도로 표준곡선을 작성하여 각각의 처리별 함량을 조사하였다.
<h2>전분 함량분석</h2> <p>전분 함량분석을 위해서 Phenol-sulfuric법을 이용하였다. 풍란의 지상부 및 지하부를 각각 \( 10 \mathrm { ~g } \) 씩 채취하여 균질분쇄기를 이용하여 \( 80 \% \mathrm { ~MeOH } ~100 \mathrm { ~ml } \) 와 함께 분쇄한 후 48시간 동안 진탕 \( (50 \mathrm { ~rpm } ) \)하였다. 진탕 후 여과지(Toyo No. 1)를 통해 1차 여과를 하였고, 여과액을 다시 원심분리 \( (3,000 \mathrm { ~rpm } \), 10분)시켜 그 상등액을 취하여 Sep-Pak cartridge와 membrane filter \( (0.2 ~ \mu \mathrm { m } ) \)를 이용하여 여과시키고, 시험관 \((1.5 \mathrm { cm } \times 15 \mathrm { ~cm } \) )당 시료용액 \( 1 \mathrm { ~ml } \)와 \(5 \% \) phenol용액 \( 1 \mathrm { ~ml } \)를 첨가하여 혼합한 후, 끝을 자른 피펫으로 가수분해와 환원당 탈수를 시키기 위해 무수 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } ~5 \mathrm { ~ml } \)를 직접 시험관의 액면에 가하고, vortex mixer로 잘 혼합하여, 실온에 20~30분간 방치하였다. 당 표준용액의 조제는 glucose를 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 8시간 건조시켜 수분을 제거한 후 \( 1 \mathrm { ~mg } / \mathrm { ml } \)의 glucose를 포함하는 용액을 조제 후 이 용액을 25, 50, 75, \( 100 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 용액을 만들어 시료와 동일한 방법으로 조작하였다. 모든 조작이 완료된 후 UV-VIS spectrophotometer (UV-1201, Shimadzu)를 이용하여 \( 470 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였으며, 당 표준용액의 흡광도를 이용하여 탄수화물 함량 표준곡선을 작성하여 시료 중의 전분함량으로 환산하였다.</p> <h2>단백질함량 분석</h2> <p>식물체 내 단백질 함량을 조사하기 위해 Lowry 등의 방법에 의해 분석을 실시하였다. 전분 함량 분석의 방법과 같이 시료를 준비하여 시험관 \( (1.5 \mathrm { ~cm } \times 15 \mathrm { ~cm } ) \)에 시료용액 \( 0.1 \mathrm { ~ml } \)와 단백질 표준용액(bovine serum albumin standard)에 \( 2 \mathrm { ~N } \mathrm { ~NaOH } \)를 \( 0.1 \mathrm { ~ml } \) 씩을 각각 첨가하고 \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \(10 \)분간 가수분해 후 상온에서 용액이 완전히 식을 때까지 방치하였다가 혼합시약 \( \left (2 \% \mathrm { ~Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } : 1 \% \mathrm { ~CuSO } _ { 4 } \cdot 5 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } : 2 \% \right . \) sodium potassium tartrate \( =100: 1: 1 \) )을 \( 1 \mathrm { ~ml } \)씩 첨가한 후 실온에서 10분간 방치하고 folin 시약 \( 0.1 \mathrm { ~ml } \)를 첨가 후 vortex mixer로 잘 흔합하여 실온에서 30분간 방치하였다. 이 시료를 30분 후 UV-VIS spectrophotometer (UV-1201, Shimadzu)를 이용해 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도(Optical Density; OD)를 측정하였고, 단백질 표준용액의 흡광도로 단백질 함량 표준곡선을 작성하여 각각의 처리별 단백질 함량을 조사하였다.</p>