GSH 함량은 Anderson의 방법, 단백질량은 Bradford 방법으로 측정하였으며 모든 실험은 triplicate로 실시하였다. mesangial 세포에서 AA 방출은 Xing 등의 방법, \( \mathrm{PGE}_{2} \) ELISA kit를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 Student's t test 및 Analysis of Variance (ANOVA)로 통계처리하였고, \( \mathrm{P}<0.05 \) 범위에서 means \(\pm\) S.E로 표현하였다.
<h2>GSH contents 측정</h2><p>GSH 함량은 Anderson의 방법으로 측정하였다. \( 0.248 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) NADPH (\(143 \mathrm{mM}\) sodium phosphate, \( 6.3 \mathrm{mM}\) Na-EDTA, \( \mathrm{pH.}7.5\)를 함유하고 있는) 용액 \( 700 \mathrm{ul}\), \(6 \mathrm{mM} \) 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB) 용액 \( 100 \mathrm{ul} \)와 증류수 \( 198 \mathrm{ul} \)를 cuvette에 넣어 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 데운 후 시료 \( 2 \mathrm{ul} \)를 넣고 섞은 다음 \( 266 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) GSSG reductase \( 10 \mathrm{ul} \)를 첨가하여 \( 412 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도의 변화를 관찰하였고 단위는 \( \mathrm{ug} / \mathrm{mg} \) protein으로 나타내었다. 단백질량은 Bradford 방법에 의해서 측정하고, 모든 실험은 triplicate로 실시하였다.</p><h2>\( \left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \)-Arachidonic acid 방출실험</h2><p>초대배양한 랫트 mesangial 세포에 있어서 AA 방출실험들은 Xing 등의 방법을 통해 실시하였다. 간략히 살펴보면, 세포들을 \( 35 \mathrm{~mm} \) 배양접시에서 \( 1 \mu \mathrm{Ci}\left[{ }^{3} \mathrm{H}\right] \mathrm{AA} / \mathrm{ml} \)으로 24시간 전배양시킨 후 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) BSA와 \( 20 \mathrm{mM} \) HEPES를 함유한 DMEM/F-12 세 번 세척한 후 시약을 처리하였다. 길항제 실험에서는 본 실험 30분 전에 전처리를 하였으며, 이후 \( 95 \% \) 공기 \( -5 \%\) \(\mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)로 1시간 배양시킨 후 상층액을 수거하여 이를 ethylene glycol-bis (\( \beta \)-amino ethyl ether)-N,N,N', N'-tetra acetic acid (EGTA) 및 EDTA를 최종 농도가 각각 \( 5 \mathrm{mM} \) 되어있는 얼음으로 차게 한 tube로 옮겼다. 세포파편을 제거하기 위해 원심분리한후 그 상층액만을 liquid scintilation counter (LS 6500, Beckman Instruments Inc, Fullerton, CA, USA)로 방사선 활성도를 측정하였다. 그리고 배양접시에 붙어있는 세포들은 \(0.1\%\) SDS \( 1 \mathrm{ml} \)로 세포를 용해시킨 후 세포를 수확하였고, \( 900 \mu \mathrm{l}\)씩을 각각 취하여 방사선 활성도를 측정하여 total치로 기준을 삼았으며 나머지는 단백질 정량을 위해 사용하였다.</p><h2>PGE2 함량 측정</h2><p>Mesangial 세포의 배지 \( 200 \mu \mathrm{l} \)를 수확하여 \( \mathrm{PGE}_{2} \) ELISA kit를 이용하여 측정하였다. 세포를 수확하여 단백질 양을 측정하여 이를 환산하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험결과의 통계처리는 Student's t test 및 Analysis of Variance (ANOVA)로 하였으며, \( \mathrm{P} \)값 \(<0.05 \)를 유의한 차이의 한계로 하였고, 실험결과의 표현은 means \( \pm \) S.E 로 하였다.</p>