참갈파래 추출물의 항산화 성분인 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였다. 시료를 각 농도별로 희석하여 정치반응을 한다. 에탄올에 녹인 gal-lic acid를 희석하여 흡광도를 측정한 후 표준검량곡선을 작성하고 시료의 총 폴리페놀 함량의 계산에 이용하였다.
<p>Lipopolysaccharide (LPS, Sigma, USA, final concentration: \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 를 처리한 후, \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \right ) \)에서 3시간 동안 배양하여 염증을 유도하였다. 이 후, DMSO에 용해한 참갈파래 추출물과 사포닌(Sigma, USA)을 각각 \( 500,50,5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 처리해서 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator \( \left (37 ^ {\circ } \mathrm { C } \right . \), \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) )에서 24 시간 배양하였다. 배양 상등액의 TNF- \( \alpha \) 함량을 Mouse TNF- \( \alpha \) DuoSet ELISA kit (R&D SYSTEM,USA)를 이용하여 \( 450 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다.</p> <h2>총 폴리페놀 함량 측정</h2> <p>참갈파래 추출물의 항산화 성분인 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였다. 시료를 각 농도별로 희석한 후, 1 N Folin-ciocalteu's phenol reagent (Sigma, USA)와 1:1로 혼합하여 실온에서 3분간 정치반응을 하였다. 이후 \( 10 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) Sodium carbonate를 \( 500 \mu 1 \)씩 넣고 vortex하여 실온에서 차광한 상태로 1시간 동안 반응을 진행하였다. 반응이 끝난 후, 침전물이 있으면 원심분리 \( (12,000 \times \mathrm { g } , 10 \mathrm { ~min } ) \)를 진행하고 상등액을 96 well plate에 \( 200 \mu \) l씩 분주하여 ELISA Reader (Multiskan Go, Thermo Scientific, Finland)를 이용하여 \( 725 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 에탄올에 녹인 gal-lic acid를 최종농도가 \( 0,25,50,100,200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)이 되도록 희석하여 \( 725 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 표준검량곡선을 작성하였고, 시료의 총 폴리페놀 함량의 계산에 사용하였다.</p>