파골세포는 단핵의 전 파골세포를 형성하며, TRAP과 칼시토닌 수용체를 가지고 있어 골 표면에 부착하여 골을 흡수하는 작용을 한다. 실험에서는 RANKL 처리를 하지 않은 대조군은 RAW \( 264.7 \) 세포가 구 모양을 유지한 채 증식하며, RANKL을 처리한 세포에서는 진한 암갈색이나 적갈색으로 염색된 \( \mathrm{TRAP}(+) \) 다핵세포가 관찰되었다. 물 추출물들에서는 대조군 \(100\%\)에 비해 전체적으로 \( 75.9-31.8 \% \) 의 TRAP 억제 활성을 나타냈고, 1 년산 수탉 육질과 3 년산 수탉 육질은 껍질보다 TRAP 활성을 억제하는 효과가 뛰어났다. 따라서 수탉 육질이 골 강화에 효과적이다.
<h2>파골세포의 TRAP 활성에 미치는 영향</h2> <p>파골세포는 분화가 진행되면서 단핵의 전 파골세포를 형성하지만, 세포가 융합되면서 다핵의 성숙 파골세포를 형성하게 되고 이는 골 표면에 부착하여 골을 흡수하는 작용을 한다. 파골세포는 TRAP와 칼시토닌 수용체를 가지며, 산 생성이 활발한 특징을 가진다. 이에 TRAP는 파골세포의 표지 인자로 널리 사용되고 있다. 본 실험에서는 쥐의 대식세포에서 유래한 RAW \( 264.7 \) 세포를 이용하여 연산 오골계의 TRAP 활성과 염색을 하였고 그 결과를 나타내었다(Fig. 3).</p> <p>일반적으로 TRAP 염색을 하게 되면 RANKL 처리를 하지않은 대조군은 RAW \( 264.7 \) 세포가 구 모양을 유지한 채 증식하며, TRAP 염색에서도 음성반응을 보여 연한 갈색이나 황토색을 띤다. 이에 반해 RANKL을 처리한 세포에서는 진한 암갈색이나 적갈색으로 염색된 \( \mathrm{TRAP}(+) \) 다핵세포가 관찰된다[32]. TRAP 염색 결과 RANKL 처리 세포군에서는ㅠ 3 개 이상의 핵을 가지는 \( \mathrm{TRAP}(+) \) 다핵세포로 분화가 유도되었고, RANKL과 연산 오골계 물 추출물을 처리한 세포군에서는 파골세포로의 분화가 억제되었다(Fig. 4). 물 추출물들에서는 대조군(100\%)에 비해 전체적으로 \( 75.9-31.8 \% \) 의 TRAP 억제 활성을 나타냈으며 농도에 따른 유의적 차이는 나타나지 않았다. 또한, 연산 오골계 물 추출물들의 농도를 \( 250,500,1000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 으로 조정하여 세포 생존율 실험을 분석한 결과 RAW \( 264.7 \) 세포에서 시료의 독성은 나타나지 않았다(데이터는 제시하지 않음).</p> <p>육질과 껍질을 비교하였을 때 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 1 년산 수탉 육질(31.8\%)이 1 년산 수탉 껍질(53.4\%)보다 TRAP 활성을 \( 21.6 \% \) 이상 억제하는 것으로 나타났고 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 3 년산 수탉 육질(31.8\%)이 3년산 수탉 껍질(62.7\%)보다 TRAP 활성을 \( 30.9 \% \) 이상 억제한 것으로 나타나 껍질보다 육질에서 \( \mathrm{TRAP} \) 활성 억제 효과가 뛰어남을 보였다. 또한, ALP 활성과 비교해 볼 때 3 년산 수탉 육질이 3 년산 수탉 껍질보다 우수한 결과를 나타내어 육질이 껍질보다 골 강화에 효과적이었다.</p> <p>1 년산과 3 년산을 비교하였을 때 1 년산과 3 년산 수탉은 유의적 차이를 보이지 않았으나 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 1 년산 수탉 육질과 3년산 암탉 육질을 비교하였을 때 1 년산 수탉 육질 \( (31.8 \%) \) 이 3 년산 암탉 육질(75.9\%)보다 TRAP 활성을 \( 44.1 \% \) 이상 억제하는 것으로 나타나 1 년산 수탉 육질이 3 년산 암탉 육질보다 TRAP 활성 억제 효과가 좋았다.</p> <p>성별 간 차이를 비교해 보았을 때 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 3 년산 수탉 육질(31.8\%)이 3 년산 암탉 육질(75.9\%)보다 TRAP 활성을 \( 44.1 \% \) 이상 억제하는 것으로 나타나 암탉보다 수탉에서 TRAP 활성 억제 효과가 우수하였다.</p> <p>본 실험에서 RAW \( 264.7 \) 세포에 연산 오골계 물 추출물을 처리하여 TRAP 억제 활성을 관찰하였고 \( \operatorname{earthworm}(P \). aspergillum) 연구[11]에서 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도의 earthworm (P. aspergillum) 추출물이 \( 76 \% \) 의 TRAP 활성을 가지지만 본 실험에서의 3 년산 수탉 육질은 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( \mathrm{TRAP} \) 활성이 \( 31.8 \% \) 로 TRAP 억제 활성이 2 배 이상 뛰어난 결과를 보였다. 그러므로 연산 오골계 물 추출물이 파골세포의 증식을 억제하는 작용이 있음을 확인하였다.</p>