다양한 품종의 케나프 종자 추출물의 항혈전, 항산화, 항당뇨 활성은 각각 TT, PT, aPTT, DPPH, ABTS, nitrite 소거능, 환원력 측정 및 \( \alpha \)-glucosidase 저해 활성 측정으로 평가하였다. 또한, Total polyphenol과 Total flavonoid의 함량은 rutin과 tannic acid를 표준시약으로 사용하여 측정하였다. 결과는 SPSS 26. 0을 사용해 mean \(\pm\) SD로 표현하였으며, 각 군간의 차이는 ANOVA와 Duncan’s multiple range test로 \(p<0. 05\) 수준에서 검증하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 시약</h2> <p>본 실험에 사용된 케나프 종자는 2020년 전남 순천지역에서 재배된 ‘장대’ 품종에서 채종한 종자와 외국산 8종 케나프 종자로 각각의 정보는 Table 1 및 Fig. 1에 나타내었다. 외국산 품종 중, 홍마는 중국산 홍마 74-3 종자를(주)카나프코리아에서 구입하여 사용하였으며, 그외 종자7종(IT 181215 ~ IT 236176)은 국립농업과학원의 농업생명자원 분양 프로그램 지원으로 확보하였다(DT-22001). 확보된 종자는 이물질을 제거한 후 세절하여 추출에 사용하였으며, 케나프 종자 시료에 각각 20배의 \(95\%\) ethanol(Daejung Chemicals & Metals Co., Ltd. Korea)을 첨가한 후 상온에서 2일 동안 침지하여 추출하였고, 추출액은 fil-ter paper (Whatsman No. 2, GE healthcare UK limited, UK)로 거른 후 감압 농축(Eyela Rotary evaporator N-1110S, Tokyo Rikakikai Co., Ltd. Japan)후 동결건조하였다. 추출물들은 DMSO에 \(100 \mathrm{mg/ml}\)의 농도로 녹인 후, 항혈전,항산화 및 항당뇨 활성 평가에 사용하였으며 최종농도가 \(0.05\sim5 \mathrm{mg/ml}\)가 되도록 조정하여 첨가하였다.</p> <h2>항혈전 활성</h2> <p>다양한 품종의 케나프 종자 추출물의 항혈전 활성은 혈액응고에 따른 혈전 생성시간의 변화를 각각 thrombintime (TT), prothrombin time (PT) 및 activated partial throm-boplastin time (aPTT)을 측정하여 평가하였다. 활성평가에 사용한 혈장은 시판 control plasma (MD Pacific Tech-nology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며, PT reagent와 aPTT reagent는 MD Pacific Hemosta-sis (MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan IndustrialArea, China)의 분석시약을 사용하여 측정하였다. 활성 대조구로 사용된 aspirin과 기타 시약은 Sigma Co. (St. Louis, MO, USA)의 시약급 이상의 제품을 구입하여 사용하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 평균치로 나타내었으며, 각각의 항응고 활성은 시료 첨가시의 응고 시간의 평균치를 무첨가시의 응고시간의 평균치의 비로 나타내었다.</p> <h2>항산화 활성</h2> <p>다양한 품종의 케나프 종자 추출물의 항산화 활성은 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 활성 음이온 소거능, ABTS [2,2-azobis (3-ethylbenzothiazoline -6- sulfonate)] 활성 양이온 소거능, nitrite 소거능 및 환원력(reducing pow-er) 측정으로 평가하였다. 활성 평가는 기존의 방법과 동일하게 사용하였으며, 활성 대조구로는 vitamin C (Sig-ma Co., St. Louis, MO, USA)를, 용매 대조구로는 DMSO를 사용하였다. 각각의 활성 평가는 각각 3회 반복한 실험의 평균과 편차로 표시하였다. 상기 분석에서 다양한 농도의 케나프 종자 추출물(\(0\sim10\mathrm{mg/ml)}\)을 첨가하여 항산화 활성을 평가한 후 활성이온의 \(50\%\) 소거능을 나타내는 추출물농도를 계산하여 \(\mathrm{RC_{50}}\) (Concentration required for \(50\%\) scavenging of reactive radical)로 나타내었다.</p> <h2>항당뇨 활성</h2> <p>다양한 품종의 케나프 종자 추출물의 항당뇨 활성은 \( \alpha \)-glucosidase 저해 활성을 측정하여 나타내었다. \( \alpha \)-Gluco- sidase 저해활성은 케나프 종자 추출물 시료 \( 2.5 \mu 1 \)와 \( 50\mathrm{mM} \) sodium acetate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 5.6)로 희석한 \( \alpha \)-glucosidase \( (0.25 \mathrm{U} / \mathrm{ml})\) \(25 ~\mu \mathrm{l}\) 를 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시켰고 \( 1 \mathrm{~mM}\) p-nitrophenol glucoside 용액 \( 25 ~\mu \mathrm{l} \)를 첨가하여 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 반응시켰다. 이후 \( 1 \mathrm{M} ~\mathrm{NaOH} ~25 ~\mu \mathrm{l}\)를 첨가하여 반응을 정지시키고, \( 405 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 저해율을 계산하였다.</p> <p>저해율 \( (\%)=[1-( \) 시료 첨가구 효소활성/대조구 첨가구 효소활성) ] \( \times 100 \)</p> <h2>총 폴리페놀 및 기타 분석</h2> <p>Total polyphenol (TP) 및 Total flavonoid 함량 측정은기존의 보고된 방법에 따라 측정하였으며, 각각 rutin과 tannic acid를 표준시약으로 사용하였다. 총당 정량은 phenol-sulfuric acid법으로, 환원당 정량의 경우에는 DNS 변법을 이용하였으며, 각각 sucrose와 glucose를 표준물질로 사용하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>모든 분석결과는 3회 반복한 실험의 평균과 편차로 나타내었다. 실험 결과는 SPSS 26.0 버전을 사용하여 mean \(\pm\) SD로 나타내었으며, 각 군간의 차이는 각 군 간의 차이는 일원배치 분산분석(1-way analysis of variance, ANOVA)을 한 후, Duncan’s multiple range test에 의하여 \(p<0.05\) 수준에서 유의성을 검증하였다.</p>