혈관 내피 조직세포에서 만들어지는 세린프로테아제 계열의 혈전용해제는 피브린 표면에서, 활성이 없는 형태의 플라스미노겐을 활성이 있는 형태의 플라스민으로 전환해 혈전 단백질인 피브린의 분해를 유도하며 기존에 알려진 혈전용해제들에 비하여 t-PA는 혈액에 순환하는 피브리노겐과 플라스미노겐의 농도에 영향을 최소화해 부작용이 적은 것 으로 알려져 있다. 1982년 t-PA cDNA 유전자가 \( (2,530 \mathrm{bp}) \) 클로닝되었고, cDNA에 의해 추측된 서열에 따라 35개의 아미노산이 제거된다는 사실과 대장균를 이용한 발현이 가능하게 되었으나 t-PA의 혈전질병치료와 다른 치료분야의 응용을 위해서는 t-PA의 더 많은 공급이 필요하고 의약품으로써 보다 안전하고, 소비자가 저렴하게 소비 가능하도록 하기위한 새로운 대량생산 방법이 요구된다.
<h1>서 론</h1> <p>혈관 내피 조직세포로부터 생성되는 혈전용해제 [tissue-type plasminogen activator (t-PA)]는 피브린 표면에서, 활성이 없는 형태의 플라스미노겐 (plasminogen)을 활성을 갖는 형태의 플라스민 (plasmin)으로 전환을 시켜 혈전 단백질인 피브린의 분해를 유도하는 세린프로테아제 (serine protease) 계열의 단백질 분해효소로 알려져 있다 (Collen and Lijnen 2004). 생체내에서 활성화된 피브린용해 (fibrinolysis) 과정의 조절은, 혈액내에 존재하는 두 억제제 (PAI-1와 a a -antiplasmin)에 의해서 조절이 이뤄진다고 알려져 있다. 이중 PAI-1가 생체내에서 t-PA에 특이적으로 결합하는 억제제로 알려져 있다. 기존의 알려진 혈전용해제들 (urokinase와 streptokinase)에 비하여 t-PA는 혈액에 순환하는 플라스미노겐과 피브리노겐(fibrinogen)의 농도에는 영향을 최소화하여 부작용이 적은 것으로 알려져 있다 (Collen and Lijnen 2004). 1982년에 t-PA cDNA 유전자가 \( (2,530 \mathrm{bp}) \) 클로닝되었으며, cDNA에 의해서 유추된 서열에 따라 35 개의 아미노산이 제거된다는 사실과 대장균를 이용한 발현이 가능하게 되었다 (Pennica et al. 1983). 인체 유래의 t-PA는 분자량 \( 70 \mathrm{kDa}(\mathrm{pI} 7-8) \) 의 단일 사슬로 구조로 되어 있으며, 첫 번째 아미노산이 serine으로 시작하는 527 개의 아미노산으로 구성되어 있다. t-PA 단백질 구조는 4개의 도메인으로 구성되어 있고, 이들은 피브린 클랏 (fibirn clot)에 특이적 결합을 위해 중요한 도메인 (finger와 kringle 2 domains), 혈관내에 t-PA 제거에 관여하는 도메인 (finger와 epidermal growth factor domains) 및 프로테아제 활성 도메인 (serine protease domain)으로 구성되어 있다.이러한 t-PA는 melanoma 세포주 (Bowes, RPMI-7272)에서 생화 학적-생물학적 특성 분석이 가능할 정도로 충분한 양이 정제된 후,생체내 t-PA의 혈전용해 효과는 토끼를 이용한 폐색전 (pulmonary embolus) 모델실험에서 처음으로 실험이 성공적으로 확인되었다 (Matsuo et al. 1981). 환자를 치료하기 위한 목적으로 대장균 (Manosroiet al. 2001; Kim et al. 2005)과 Chinese hamster ovary (CHO) 세포주등에 의해서 대량으로 생산되었으며, 또한 효소학적으로 활성이 있는 형태의 t-PA는 Aspergillus nidulans, mouse C 127 cells, baculovirus-infected insect cells, goat milk와 mouse milk (Ebert et al. 1991; Pittius et al. 1998) 등에서 생산하는 기술이 개발되었다. 현재 상업적 목적을 위해 사용되는 t-PA는 CHO 세포와 대장균에서 생산되고 있다 (Tate et al. 1987; Keyt et al. 1994). 그러나 t-PA의 혈전질병치료를 포함한 다른 치료분야의 응용을 위한 접목기술 개발을 위하여 t-PA의 더 많은 공급양의 필요성과, 의약품으로써 보다 안전하고, 소비자가 더 저렴하게 이용할 수 있게 하기 위한 새로운 대량생산 시스템을 요구하고 있다.</p>