울릉도에서 채취한 섬바디나물을 분쇄 후 에탄올에 침지하여 추출하였고, 이를 Raw 264.7 세포에 농도별로 조제하여 배양하였다. 세포 생존율은 MTT assay를 통해 측정하였으며, 대조군은 동량의 증류수를 첨가하여 동일한 조건으로 배양하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 준비</h2> <p>실험에 사용된 섬바디나물은 울릉도에서 채취하였으며, 열풍건조 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료에 시료 중량의 10배 양의 \( 80 \% \) 에탄올을 가하여 실온에서 24시간 침지한 후 상등액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였다. 각 시료 추출물은 여과지(Whatman No.2)를 이용하여 여과한 후 EYELA evaporator로 감압 농축하여 용매를 제거 후 동결건조하여 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에 보관하면서 본 실험의 시료로 사용하였다.</p> <h2>세포 배양</h2> <p>세포 배양은 \( 10 \% \) fetal bovine serum (FBS)과 \( 1 \% \) penicillin/streptomycin \( (100 \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) \) 을 첨가한 Dulbeco's modified eagle's medium (DMEM) 배지를 사용하였으며, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \; \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에 적응시켜 계대 배양하였다.</p> <h2>MTT assay에 의한 세포 생존율 측정</h2> <p>세포 생존율 측정은 Carmichae의 방법에 따라 측정하였다. Raw 264.7 세포를 96 well plate에 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well이 되게 \( 0.18 \mathrm { ml } \) 분주하고, 시료를 농도별로 조제하여 \( 0.02 \mathrm { ml } \) 첨가한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \; \mathrm { CO } _ { 2 } \) incubator에서 24시간 배양하였다. 대조군은 시료와 동량의 증류수를 첨가하여 동일한 조건으로 배양하였다. 여기에 \( 5 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도로 제조한 MTT 용액 \( 0.02 \mathrm { ml } \)를 첨가하여 4시간 배양한 후 배양액을 제거하고 각 well 당 DMSO \( 0.15 \mathrm { ml } \)를 가하여 실온에서 30분간 반응시킨 뒤 ELISA reader로 \( 540 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율 측정은 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p> <p>세포생존율 \( ( \%) = \left (1- \frac {\text { 시료첨가군의 흡광도 } } {\text { 무첨가군의 흡광도 } } \right ) \times 100 \)</p>