건조된 당근뿌리와 씨앗의 methanol 추출물에서 용매별 계통분획하여 각각 4가지 분배층을 얻었다. QR 유도효과를 알아보기 위해 HepG 2 암세포에 methanol 추출물과 각각의 분배층을 농도를 달리하며 첨가한 결과, 당근 뿌리의 경우에는 ethyl acetate 분배층이 가장 높은 효과를 나타내었고, 당근 씨앗의 경우 n-butanol분배층에서 괄목할만한 유도효과를 보였다.
<p>\( \frac {\text { absorbance change of } \mathrm { MTT } / \mathrm { min } } {\text { absorbance of crystal violet } } \times 3345 \mathrm { nmol } / \mathrm { mg } \)</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>당근의 methanol 추출물 및 분획물의 수율</h2> <p>건조된 당근 뿌리 \( 220 \mathrm { ~g } \)을 methanol로 추출하여 \( 74.97 \mathrm { ~g } \)을 얻었다. 이 methanol 추출물(DCRM)을 n-hexane, ethylacetate 및 butanol의 각 용매별 계통분획에 의하여 분획하여 n-hexane 분배층(DCRMH)은 \( 2.85 \mathrm { ~g } \)( \( 3.8 \% \)), ethyl acetate 분배층(DCRMEA)은 \( 2.73 \mathrm { ~g } \)( \( 3.64 \% \)) 및 n-butanol 분배층 (DCRMB)은 \( 11.69 \mathrm { ~g } \)( \( 15.59 \% \))씩을 각각 얻었고 나머지 물가 형부(DCRMA)에서는 \( 44.15 \mathrm { ~g } \)( \( 58.89 \% \))의 수율을 얻었다. 같은 방법으로 당근 씨앗(DCS) \( 975 \mathrm { ~g } \)을 추출하여 methanol 추출물(DCSM) \(74.4 \mathrm { ~g } \)을 얻었으며 methanol 추출물을 위와 동일하게 각 용매별 계통분획하여 n-hexane(DCSMH)은 \( 12.10 \mathrm { ~g } \)( \( 16.26 \% \)), ethyl acetate 분배층(DCSMEA) \( 8.28 \mathrm { ~g } \)( \( 11.13 \% \)) 및 n-butanol분배층(DCSMB)은 \( 13.28 \mathrm { ~g } \)( \( 17.78 \% \))을 얻었으며 나머지 물가용부(DCSMA)는 \( 37.55 \mathrm { ~g } \)( \( 50.47 \% \))을 얻었다.</p> <h2>Quinone reductase(QR) 유도 활성효과</h2> <p>Quinone reductase 유도 물질 탐색은 인체 암세포 중 유일하게 quinone reductase를 가지고 있는 HepG2세포주를 사용하여 당근 뿌리와 씨앗의 methanol 추출물과 각각 4가지 분배층에서의 QR유도 활성을 측정한 결과는 Fig. 1 및 2와 같다. HepG 2 암세포에 당근 뿌리와 씨앗의 각 용매 추출물 및 분배층을 50,100,150 및 \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 씩 첨가하였을 때 첨가물의 농도가 증가함에 따라 QR 활성이 증가하였고, 당근는 뿌리에서는 DCRMEA와 DCRMH에서 QR 유도 활성이 있었고, 당근 씨앗에서는 DCSMB에서 괄목할만하게 그 유도효과가 컸다. 이 결과를 종합해보면 시료 무처리구인 대조군을 1로 보았을 때 당근 첨가물의 양을 200 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { m } \ell \)로 고정시킨 경우 당근 뿌리의 경우 DCRMEA는 2.1배, DCRMH는 1.6배의 QR 유도 효과를 나타내었으며, 씨앗의 경우 DCSMB에서는 3.0배로 아주 현저한 QR 유도 효과를 나타내었으며, 전반적으로 당근 씨앗의 butanol분배층이 당근 뿌리에서보다 상대적으로 매우 높은 QR 유도활성 효과를 나타내었다. 반면 당근 씨앗의 DCSM의 경우에는 첨가물의 농도를 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { m } \ell \) 가했을 때 2.2배의 효과를 나타내었으나, 그 이상 \( 200 \mu \mathrm { g } / \mathrm { m \ell } \) 까지 첨가시 다시 1.1배로 감소하였고 DCSMEA의 경우에서도 이와 유사한 경향이었다. 본 연구 결과 HepG2에 대한 암 예방 효소인 QR 유도활성 효과는 당근 뿌리의 경우 DCRMEA가 다른 용매 분배층 DCRM 및 DCRMB에 비해 제일 높은 효과를 나타내었고 hexane층인 DCRMH는 DCRMEA보다는 낮은 수준이었지만 유의적으로 QR 효소 활성을 증가시키는 것으로 나타났고, 당근 씨앗의 DCSMB에서는 높은 QR 유도 효과를 나타내었다.</p>