흰색 무정형 분말 형상인 화합물 2는 TLC에서, \( 10 \% \) \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 을 분무하여 heating 하면 진한 갈색으로 발색되고, positive FABMS에서 \( m / z 285[ \mathrm { M } + \mathrm { H } ] ^ { + } \)molecular ion peak가 관측되었으며 molecular weight가 \( 284 [ \mathrm { M } ] \)임을 확인하였으며, 화합물 2를 구조동정 하고, 실험을 진행하여, 분리한 화합물들의 cytotoxicity를 평가하였다.
<p>화합물 2 는 흰색 무정형 분말 형상으로서, TLC에서, \( 10 \% \) \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 을 분무하여 heating시 진한 갈색으로 발색 되었다. positive FABMS에서 \( m / z 285[ \mathrm { M } + \mathrm { H } ] ^ { + } \)molecular ion peak가 관측되어 molecular weight을 \( 284 [ \mathrm { M } ] \)로 확인하였다. IR spectrum 관측 시 수산기 \( \left (3556 \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \right ) \) 가 있는 것으로 확인되었다. \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } - \mathrm { NMR } \left (600 \mathrm { MHz } , \mathrm { MeOD } -d_ { 4 } , \delta_ {\mathrm { H } } \right ) \) 와 \( { } ^ { 13 } \mathrm { C } - \mathrm { NMR } (150 \mathrm { MHz } \), \( \left . \mathrm { MeOD } -d_ { 4 } , \delta_ {\mathrm { C } } \right ) \) spectra에서 하나의 methylene signal \( \left [ \delta_ {\mathrm { H } } 2.88 \right . \) \( \left .(2 \mathrm { H } , \mathrm { dd } , J=8.4,1.8 \mathrm { ~Hz } , \mathrm { H } 7) ; \delta_ {\mathrm { C } } 37.2 \right ] \) 를 제외하고는 화합물 1과 유사한 data를 가짐을 확인하였다. 위의 data로부터 동정한 구조를 보고된 문헌과 비교한 결과, 화합물 2를 2-phenylethyl \( O- \beta \)-D-glucopyranoside으로 구조동정 하였다.</p> <p>분리한 화합물들의 cytotoxicity를 평가하기 위해 실험을 진행 하였다. 화합물 2종의 in vitro cytotoxicity는 cell mitochondria 활성에 의존하여, 세포생존을 결정할 수 있는 WST-1 반응액을 이용하여 측정되어졌다. 세포생존율은 HDF-N, HaCaT, melan-a 및 RAW264.7 세포에서 평가하였으며, 시료를 제외한 배양배지만 처리한 값 (control)에 대한 백분율로 나타내었다. 실험 결과, HDF-N 세포에 대해 화합물 1은 \( 100 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서, 화합물 2 는 \( 10 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생존율을 보였다(Fig. 3A). RAW264.7 세포에 대해 화합물 1 는 \( 200 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서, 화합물 2 는 \( 100 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생즌율을 보였다(Fig. 3B). 또한, 화합물 1 는 HaCaT세포에 대해 \( 200 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서, 화합물 2 는 \( 100 \mathrm { ppm } \) 이하에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생존율을 보였다(Fig. 3C). 마지막으로, melan-a 세포에 대해서는 화합물 1 의 경우 \( 50 \mathrm { ppm } \) 이하에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생존율을 보였으며, 화합물 2 의 경우 \( 10 \mathrm { ppm } \) 이하 농도에서 \( 80 \% \) 이상의 세포 생존율을 보였다(Fig. 3D).</p>