사과종자발아에 필요한 \( { GA } _ { 3 } \)의 적정농도를 찾기 위해 다양한 농도로 실험을 진행하였으며, 각각의 처리 조건에서 발아율을 측정하였다. 또한, 종자 표면의 살균 및 자엽 제거가 발아율에 미치는 영향을 분석하였다. 자엽을 완전 제거한 경우와 부분적으로 제거한 경우에 대한 실험을 진행하여 각각의 조건에서의 발아율을 측정하였다.
<h3>지베렐린의 적정농도</h3> <p>사과종자발아에 \( { GA } _ { 3 } \) 의 적정농도를 스크리닝하기 위하여 \( 0,20,50,80,120,200 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 용액을 페트리디쉬 ( \( \Phi 9 \mathrm { ~cm } \)) 에 각각 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 를 넣고, 농도당 사과종자 20개씩 사용하여 3회 반복 수행하였으며, 배양조건은 \( 24 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 1900 \mu \mathrm { mol } \mathrm { ~photons } \mathrm { ~m } ^ { -2 } \mathrm { s } ^ { -1 } \)로 18시 광주기 조건에서 진행하였다.</p> <h3>자엽제거와 영양분 처리</h3> <p>발아율에 자엽의 제거가 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여 종자를 \( 70 \% \) 에탄올로 1분간 소독 후 \( 1 \% \) sodium hypochloite용액으로 15 분간 표면 살균 후 멸균수로 3 ~ 5 회 수세하였다. 무균작업대에서 종피를 제거한 후 정상배 (WCE), 자엽을 \( \frac { 1 } { 4 } \) 제거한 배( \( \frac { 3 } { 4 } \)CE), \( \frac { 1 } { 2 } \)제거한 배( \( \frac { 1 } { 2 } \)CE), \( \frac { 3 } { 4 } \) 제거한 배( \( \frac { 1 } { 4 } \)CE), 완전히 제거한배(NCE)로 나누어(Fig. 2) 각 배지에서 배양하면서 발아율을 측정하였다. 각 배지는 \( 0.7 \% \) 한천 단톡배지(Agar), \(3 \% \) sucrose와 MS용액이 포함된 한천배지 ( \( Agar + MS \), 가장 적정한 \( { GA } _ { 3 } \) 농도로 조사된 \( 80 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) 가 포함된 한천배지 \( Agar + { { GA } _ { 3 } } \) 그리고 \( 3 \% \) sucrose, MS 기본용액 및 \( 80 \mathrm { mg } / \mathrm { L } ~ { { GA } _ { 3 } } \) 가 포함된 한천배지( \( Agar + MS + { { GA } _ { 3 } } \) 를 사용하였으며, \( 25 \mathrm { ~mm } \times 50 \mathrm { ~mm } \) 의 시험관에 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 씩 넣고 고압멸균기로 멸균시킨 후 발아배지로 사용하였다. 각 처리구당 20개의 종자를 3회 반복시험 하였으며, 배양 조건은 \( 24 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 1900 \mu \mathrm { mol } \mathrm { ~photons } \) \( \mathrm { m } ^ { -2 } \mathrm { s } ^ { -1 } \) 18시간 광주기로 진행하였다.</p>