이 연구에서는 약독화된 polio virus type 3을 사용하여 CPE 양성 대조군을 설정하였다. ATCC에서 분양받은 BGM 세포를 항생제와 10% 혈청이 첨가된 MEM/L-15 배지에서 배양하였다. 계대는 monolayer가 형성된 BGM 세포주를 CO2 배양기에서 꺼내고, EDTA-trypsin을 추가한 후 37℃ 배양기에서 5분간 방치하였다. 세포가 완전히 떨어진 후, 원심분리를 통해 침전된 세포를 새 배양액에 혼합하여 다시 배양하였다.
<h3>바이러스 및 세포주</h3> <p>CPE 양성 대조군으로 사용한 바이러스는 약독화된 polio virus type 3을 사용하였다. 사용한 세포주는 미국 ATCC에서 분양받은 BGM (Buffalo Green Monkey kidney) 세포이다. BGM 세포주의 배양액은 항생제와 10% 혈청이 첨가된 MEM/L-15 배지를 사용하였다. 세포의 계대는 우선 monolayer가 형성된 BGM 세포주를 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에서 꺼내어 배양용기 안에 있는 배지를 우선 제거한 후 EDTA-trypsin을 세포배양용기에 적정량(약 \(10 \mathrm { ㎖ } \))을 넣고 \(37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양기에 5분 정도 방치하였다. BGM 세포들이 배양용기의 바닥에서 완전히 떨어지는 것을 확인한 후 떨어진 세포들을 \(1,000 \times \mathrm { g } \), 10분간 실온에서 원심 분리한 후에 상층액을 깨끗이 제거하고 침전된 세포를 새로운 증식용 배양액에 혼합한 후 세포배양플라스크에 분주하여 \(37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 배양기에서 배양하였다.</p> <h3>시료 채수 및 여과</h3> <p>시료채수 여과장비는 미국 EPA의 ICR 및 환경부에서권장하는 표준필터장치를 조합하여 사용하였다. 원수와 수도꼭지에 대한 시료 채수는 1-MDS filter (Cuno사)를 이용하여 여과하였으며, 원수는 최소 \(200 \mathrm { L } \), 정수 및 수도꼭지는 \(1,200 \mathrm { L } \) 이상을 여과하였다.</p> <h3>탈리 및 유기응집농축</h3> <p>채수한 시료의 전처리는 미국 EPA의 ICR 방법에 준하여 수행하였다. 1-MDS 여과지가 장착된 여과기(car-tridge housing module)의 관내로 \( 1,000 \mathrm { ~m } \ell \) 의 \( 1.5 \% \) beefextracts \( ( \mathrm { pH } \) 9.5)를 부은 후 용출액의 거품발생을 최대한 줄일 수 있도록 천천히 압력을 가하여 3회 반복하여 용출시켰다. 달리된 beef extract 용출액의 \( \mathrm { pH } \) 를 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { HCl } \) 로 \( 3.5 \pm 0.1 \) 로 조절한 후 실온에서 30 분간 교반시켰다. 탈리액을 \( 5,000 \times \mathrm { g } \) 에서 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 15 분간 원심분리 하고 상등액을 제거한 후 0.15 M PBS (phosphate buffered saline, \( \mathrm { pH } \) 9.4) \( 30 \mathrm { ~m } \) 를 첨가한 후 완전히 용해시켰다. 용해된 침전물을 \( 7,000 \times g \) 로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 원심분리 한 후, 상등액만 취하여 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { HCl } \) 로 \( \mathrm { pH } 7.0 \sim 7.5 \) 로 조정하고 미생물 오염을 제거하기 위해 \( 50 \mathrm { m \ell } \) 주사기에 상등액을 넣어 \( \mathrm { pH } 7.5 \) 의 beef extract 용액을 통과시킨 \( 0.22 \mu \) 뚀 멸균 필터를 이용하여 여과하였다.</p>