활성산소 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)는 자외선에 의해 발생되어 산화적 손상을 유발하는데, \( \mathrm { HaCaT } \) 세포를 황칠나무 잎 추출물 농도별로 처리하였고, 세포 생존율에 미치는 영향을 관찰하여 황칠나무 잎 추출물의 세포 보호 효과를 알아보려고 하였다. 농도별로 황칠나무 잎 추출물을 처리한 후, \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)를 함유한 배지를 처리하고 나서 PBD로 세척을 진행하였다. 실험 결과를 통하여 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대하여 황칠나무 잎 추출물이 세포보호 활성에 영향을 주었음을 확인하였다.
<p>\( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 처리에 따른 황칠나무 잎 추출물의 세포 보호 효과 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 농도별 처리에 따른 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포의 생존율: 자외선에 의해 발생되어 산화적 손상을 유발하는 활성산소인 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포를 대상으로 농도별로 \( (1,5,10,15 \), \( 20 \mathrm { mM } \) ) 처리하고 세포 생존율에 미치는 영향을 관찰하였다. \( 1 \mathrm { mM } \) 의 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 처리한 경우는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 처리하지 않은 경우에 비해 \( 89 \% \) 정도의 세포 생존율을 나타내었다. \( 5 \mathrm { mM } \) 인 경우 세포 생존율은 \( 75 \% \) 를 나타내었고, \( 10 \mathrm { mM } \) 은 \( 50 \%, 15 \mathrm { mM } \)은 \( 35 \% \) 그리고 \( 20 \mathrm { mM } \) 에서는 \( 16 \% \) 의 생존율을 나타내었다 (Fig. 4A). 본 연구에서는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 로부터 세포보호 효과를 측정하기 위하여 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 의 농도를 \( 50 \% \) 정도의 세포 생존율을 나타낸 \( 10 \mathrm { mM } \) 로 설정하였다.</p> <p>\( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 로 유도된 세포 손상에 대한 황칠나무 잎 추출물의 보호 작용: 농도별 황칠나무 잎 추출물을 처리한 후에 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 함유한 배지를 처리한 후, \( 30 \mathrm { ~min } \) 배양하여 PBS로 세척하였다. \( 24 \mathrm { ~h } \) 배양한 세포의 생존율을 MTT assay를 통해 측정하였다. \( 10 \mathrm { mM } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 처리한 세포 생존율은 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 를 처리하지 않은 대조군에 비하여 \( 50 \% \) 의 생존율을 나타내었다. \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 처리 전 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 \( 6.25,12.5,25 \) 및 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획을 처리한 경우 세포 생존율은 \( 53,53,54 \) 및 \( 55 \% \) 로, 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획이 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \) 처리에 의한 세포 손상에 대해 낮은 보호효과를 나타냄을 확인하였다. 또한 같은 농도로 황칠나무 잎 추출물의 아글리콘분획을 처리한 경우 \( 61,63,66 \) 및 \( 40 \% \) 로 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서는 농도 의존적으로 우수한 세포 보호 효과를 갖는 것으로 나타났다. 하지만 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서는 과산화수소만 조사한 경우보다 세포 생존율이 더 낮게 나타났다. 이는 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 황칠나무 잎 추출물의 아글리콘 분획 자체의 세포에 대한 독성을 반영한 결과로 보여진다(Fig. 2). 결과적으로 황칠나무 잎 추출물이 과산화수소로 유도된 세포 손상에 대한 세포보호 활성을 나타냄을 알 수 있었다(Fig. \( 4 \mathrm { ~B } ) \)</p>