GUS유전자 전이가 확인된 시료는 체세포배 발아배지나 체세포배 성숙배지로 이동시켜 신초원기를 유도하였으며, 원기에서 신초를 재분화시켰다. 유전자 도입이 확인된 신초는 발근유도 선발배지에서 2~3주 동안 배양하여 발근시킨 후 순화하였다. 모든 배지에는 cefotaxim이 단독 첨가되거나 ppt와 혼합하여 첨가되었으며, 계대 배양은 3~4주 간격으로 진행하였다.
<h3>GUS유전자 전이 식물체 획득</h3> <p>GUS유전자의 전이가 확인된 시료는 그 상태에 따라 체세포배 발아배지나 체세포배 성숙배지 (SH component + 2,4-D \( 1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \mathrm { ABA } 1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) BAP \( 1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \mathrm { GA } 30.3 \)로 옮겨 신초원기를 유도하였고 그 원기로부터 신초를 재분화시켰다. 재분화된 신초의 건실한 지상부 생장을 위해 신초생장 (MS component + BAP \( 2 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) NAA \( 0.1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) sucrose \( 30 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \operatorname { agar } 8 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } , \mathrm { pH } 5.8 \) ) 및 다신초유도 (MS component + BAP \( 1 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) IBA \( 0.001 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) sucrose \( 30 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \) agar \( 8 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } , \mathrm { pH } 5.8 \) ) 선발배지에 배양한 다음 일부 신초를 떼어 유전자 도입 확인할 때와 같은 방법으로 도입 유전자의 발현 여부를 조사하였다. 도입 유전자의 발현이 확인된 다신초는 발근유도 선발배지(MS component + NAA \( 0.3 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) + sucrose \( 30 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } + \operatorname { agar } 8 \mathrm { ~g } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } , \mathrm { pH } 5.8 \))에서 2~3주 배양하여 발근시킨 후 순화하였다. 모든 배지는 cefotaxim \( 250 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \)이 단독 첨가되거나 ppt \( 2 \mathrm { mg } \cdot \mathrm { L } ^ { -1 } \) 와 혼합첨가되었고, 계대 배양은 3~4주 간격으로 이루어졌다.</p>