심박수가 예상 심박수의 \( 10 \% \) 미만이며, 호흡교환비율(RER)이 1.1을 초과할 경우, 그것은 최대 산소 섭취량 \(VO_{2 \mathrm{max}}\)으로 간주되었다. 기본 검사에서 측정한 산소 섭취량의 \( 85 \% \)에 도달하면 트레드밀의 경사도를 조절하였고, 혈액 분석을 위해 15분간 3,000 rpm의 속도로 원심분리했다. 남녀 그룹간의 최대 산소 섭취량, 운동 수행시간, 그리고 혈중 MDA, SOD, DNA 손상의 변화를 비교하였고, 이를 위해 독립표본 t-검증 및 이원변량분석법(two-way ANOVA)을 이용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>연구대상</h2> <p>본 연구는 남자대학생 17 명, 여자대학생 18 명을 대상으로 실시되었다. 본 연구의 대상자는 의학적으로 특별한 질환이 없고, 흡연과 음주 그리고 비타민을 복용하지 않으며 정상적인 체지방과 평균 이상의 최대산소섭취량을 가지고 있는 사람을 선정하였다. 연구 대상자의 신체적 특성은 Table 1 과 같다.</p> <h2>기본검사</h2> <p>기본검사로서 최대산소섭취량 \( \left(VO_{2 \mathrm{max}}\right) \) 은 트레드밀( Q65, Quinton, USA)에서 Bruce Protocol로 실시되었으며, 가스 분석기(Meta Max 3B, Cortex, Germany)를 이용하여 breath by breath 방식으로 측정되었다. 심박수가 예측된 심박수의 \( 10 \% \) 미만이며 호흡교환비율(RER)이 1.1을 초과한 경우 \(VO_{2 \mathrm{max}}\)로 받아들였다. 신체적 특성을 평가하기 위하여 신장(HD, STDK, Japan)과 체중(전기식 지시저울, CAS, Korea)을 측정하였으며 체지방은 전기저항 측정법(Model 310, Biodynamics, USA)을 이용하여 측정하였다.</p> <h2>운동검사</h2> <p>운동검사는 기본검사 1 주일 후 실시되었다. 운동강도는 기본검사에서 실시한 최대산소섭취량 \( \left(VO_{2 \mathrm{max}}\right) \) 의 \( 85 \% \) 로 설정하였으며, all-out 시점까지 트레드밀 런넝을 실시하였다. \( 85 \% \) \(VO_{2 \max } \) 운동강도 설정을 위하여 Bruce protocol로 측정을 시작하였으며, 운동이 진행되는 동안 가스 분석기를 통해서 \( VO_{2} \) 값을 관찰하였다. 피험자의 산소섭취량이 기본검사에서 측정한 \( VO_{2 \mathrm{max}} \) 의 \( 85 \% \) 에 도달하면 트레드밀의 경사도를 조절하여 산소소비량의 항정상태를 유지하였으며, 트레드밀의 경사도가 \( 7 \% \) 에 도달한 후에는 속도를 조절하여 강도를 유지하였다. 운동검사를 실시하는 동안 3 분 간격으로 심박수와 Borg 의 20RPE scale을 측정하였다. 채혈은 전완 정맥(antecubital vein)에서 21gage needle을 이용하여 안정시, 운동 종료, 회복 30 분, 회복 4 시간, 회복 24 시간으로 총 5 회 실시되었다. 여성그룹의 경우 여성그룹간의 생리주기에 의한 영향을 컨트롤하기 위하여 생리후 3일부터 배란일 4일 전까지인 여포기(follicular phase)에 운동검사를 실시하였다.</p> <h2>혈액 분석방법</h2> <p>혈액 채취는 21 gage needle을 이용하여 전완주정맥에서 5회(안정시, 운동 종료시, 회복 30 분, 회복 4 시간, 회복 24 시간) 총 5 회 실시하였다. 채취된 혈액은 15 분간 3,000 rpm의 속도로 원심분리한 후 분석에 이용되어 졌다.</p> <p>혈장 MDA 농도는 BIOXYTECH LPO-586 kit (Oxis, USA)를 사용하여, HP8452A spectrophotometer (Hi-Tech Scientific. USA)를 이용한 비색법으로 분석하였다. 혈장 SOD 농도는 superoxide dismutase assay kit (IBL, Germany)를 사용하여 colorimetry 방법으로 분석하였으며, microplate read-er (E max pressio, Molecular device, USA)로 흡광도 \( 450 \mathrm{~nm} \)에서 분석하였다.</p> <p>DNA 손상은 comet assay를 이용하여 측정하였다. 채취된 전혈 \( 120 \mu \mathrm{l} \) 와 phosphate buffered saline (PBS) \( 900 \mu \mathrm{l}\) 를 섞은 후, lymphocyte separation solution (Histopaue-1077) 위에 놓고 \( 1450 \mathrm{rpm} \) 으로 4 분간 원심 분리하였다. 이후 분리한 임파구를 다시 PBS를 넣어 원심분리 및 세척한 후, agarose를 사용하여 slide를 만들고 lysis solution \((\mathrm{pH} 10, 2.5\mathrm{M} \mathrm{Nacl}, 100 \mathrm{mM} \) Na2EDTA, \( 10 \mathrm{mM} \) Tris, \( 1 \% \) sodium sarcosinate, \( 1 \% \) Triton \( X\)-\(100,10 \% \) DMSO )에 담가 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 동안 lysis시켰다. Slide는 electrophoresis buffer에 담가 unwinding시키고 hori-zontal gel electrophoresis tank에서 전기 영동시킨 후, ethi-dium bromide로 염색하여 형광현미경(Leica, Germany)으로 관찰하였다. 이미지는 Komet 5.0 image analyzer software(Kinetic Imaging, UK)를 이용하여 slide 당 50개 세포에서 tail 에 함유된 %DNA (%DNA in the tail), DNA 파편의 거리(tail length), 그리고 두 값을 곱해준 tail moment 값을 측정하여 나타냈다.</p> <h2>자료처리 방법</h2> <p>본 실험의 결과는 SPSS 통계 패키지 18.0을 이용하여 기술 통계량을 산출하였다. 남, 여에 따른 최대산소섭취량 및 운동 수행시간 비교를 위해 독립표본 t-검증(independent t-test)을 실시하였다. 또한 혈중 MDA, SOD, DNA 손상의 변화형태 비교는 2(그룹: 남, 여) \( \times 5 \) (시기: 안정시, 종료시, 회복 30 분, 회복 4 시간, 회복 24 시간) 요인 설계 하에 시기를 반복 측정하는 이원변량분석법(two-way ANOVA)을 이용하여 분석하였으며, tukey의 사후검증법으로 평균치를 검색하였다. 통계적 유의 수준은 \( p<0.05 \) 로 하였다.</p>