5-HT와의 동일성을 확인하기 위해 Capcellpak \( \mathrm { C } _ { 18 } \) column을 사용하여 그들의 크로마토그램을 비교한 결과, 약 13분에 해당되는 흡광도 값이 다른 피크들에 비해 크게 나타났으므로 이 물질이 방사성동위원소 피폭에 의해 금붕어 뇌에서 변화가 일어나거나 새롭게 생성된 물질인 것으로 생각된다. 또한, Diodarray에 의한 크로마토그래피에 따라 이 물질은 \( 280 \, \mathrm { nm } \)의 흡수 파장을 갖는바, 아미노산에 해당하는 트립토판 또는 그 대사물일 것으로 판단된다.
<h2>정제물질과 Tryptophan (Trp, 트립토판) 또는 그것의 대사물과의 비교</h2> <p>정제된 물질, 트립토판 또는 그것의 대사물 중의 하나인 5-HT과의 동일성을 알아보기 위해 Capcellpak \( \mathrm { C } _ { 18 } \) column (4.6 \( \times 250 \, \mathrm { mm } , 5 \, \mu \mathrm { m } \), Shiseido, Japan)을 사용하여 마지막 정제단계와 동일한 조건으로 각각의 물질을 용출시켜 용출시간을 비교하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>방사선 조사된 금붕어 뇌조직으로부터 물질정제</h2> <p>대조군인 금붕어 뇌 조직의 추출물과 방사성동위원소에 피폭된 금붕어 뇌 조직의 추출물 각각 \( 100 \, \mu \mathrm { l } \)를 역상 컬럼인 \( 218 \mathrm { TP } 54 \) protein & peptide \( \mathrm { C } _ { 18 } \) column \( (4.6 \times 250 \, \mathrm { mm } , 5 \, \mu \mathrm { m } \), Grace Vydac, USA)을 사용하여 분리하여 그들의 크로마토그램을 비교한 결과, Fig. 1B에서 화살표로 표시된 약 13분에 해당되는 흡광도 값이 다른 피크들에 비해 특히 크게 증가하였다. 아마도 이 물질이 방사성동위원소 피폭에 의해 금붕어 뇌에서 변화가 일어나거나 또는 새로 생성된 물질인 것으로 판단된다. 이 물질을 두 번째 정제과정으로 분자량 컬럼인 Superdex Peptide HR 10/30 컬럼( \( 10 \times300 \, \mathrm { mm } \), Pharmacia, Sweden)을 이용하여 \( 0.1 \% \) TFA를 포함하는 \( 30 \% \, \mathrm { CH } _ { 3 } \mathrm { CN } \)으로 분리하였으며, 특히 이 과정에서 3 파장을 동시에 검출 할 수 있는 Diode-Array Detector (OD \( 220, 254 \) 및 \( 280 \, \mathrm { nm } \) )를 사용하여 물질을 분석하였다.</p> <p>그 결과, 43분대에 해당하는 피크에서 나타났다. 분자량 컬럼을 사용하면 분자량이 작은 물질들, 특히 아미노산 및 생리활성 아민들이 이 시간대에 해당하는 물질로 알려져 있다. 또한 Diodarray에 의한 크로마토그램에 의하면 이 물질은 \( 280 \, \mathrm { nm } \)에서 흡수파장을 나타내는 것으로 미루어 보아 아미노산인 트립토판 또는 그것의 대사물 중 하나인 것으로 생각된다. Fig. 2A의 43분 대 피크를 최종적으로 정제하기 위해서 분석용 역상컬럼인 Capcellpak \( \mathrm { C } _ { 18 } \) column \( (4.6 \times 250 \, \mathrm { mm } \), \( 5 \, \mu \mathrm { m } \), Shiseido, Japan)을 사용하였다. 분리조건으로는 A 용매로 \( 0.1 \% \) TFA를 포함하는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \, ( \mathrm { pH } 2.2) \)와 B용매로는 \( 0.1 \% \) TFA를 포함하는 \( 100 \% \, \mathrm { CH } _ { 3 } \mathrm { CN } \,( \mathrm { pH } 2.2) \)을 이용하여 \( 5 \rightarrow 35 \% \, \mathrm { CH } _ { 3 } \mathrm { CN } \) \( (30 \mathrm { ~min } ) \)의 농도구배로 \( 1.0 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \)의 유속으로 분리한 결과, 16 분대에 단일피크를 나타내었다.</p>