바이오에탄올 발효를 위해 C. lusitaniae의 배양에는 YPG와 YPHG 배지가 사용되었으며, 이는 각각 50ml와 100ml의 작업용량을 갖는다. YPHG 배지에서 고농도 당 순치 효모는 원심분리 후 최종 균 농도 0.35g dcw/l로 30℃, 200 rpm 조건에서 3일 동안 배양되었다. 배양 중 샘플은 정해진 시간마다 채취되어 단당 및 에탄올 함량 분석에 사용되었으며, 이를 위해 원심분리 후 상층액은 HPLC로 분석되었다. 에탄올 수율은 식 (3)을 통해 계산되었다.
<h2>효모를 이용한 바이오 에탄올 발효</h2> <p>바이오에탄올 발효에 사용된 C. lusitaniae의 종배양 배지는 \( 100 \mathrm { ml } \) 플라스크 안에 \( 50 \mathrm { ml } \) working volume으로 YPG broth (yeast extract \( 10.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), peptone \( 20.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), galactose \( 20.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \))를 사용하였다. 고농도 당 순치 효모는 종배양 배지 YPG broth에서 \( 5 \mathrm { ml } \)의 균을 취하여 \( 250 \mathrm { ml } \) 플라스크 안에 \( 100 \mathrm { ml } \) working volume의 YPHG (yeast extract \( 10.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), peptone \( 20.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), high galactose \( 120.0 \mathrm { g } / \mathrm { l } \))에 접종하여 36시간 동안 배양하였다. YPHG broth에서 원심분리기를 이용하여 배지를 제거하고, 순치된 효모를 최종 균 농도가 \( 0.35 \mathrm { g } \) \( \mathrm { dcw } / \mathrm { l } \)로 접종한 후 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } , 200 \mathrm { rpm } \)으로 3일 동안 배양을 하면서 일정 시간마다 시료를 분석하였다. 여러 단당이 혼합되어 있는 E. denticulatum 가수분해산물에서 고농도 당 순치를 한 효모는 당 흡수율과 에탄올 생산이 증가한다고 보고되고 있으며, 효과적인 바이오 에탄올 생산비교를 위해 고농도 당에 순치하지 않은 대조군과 순치를 한 C. lusitaniae를 사용하였다.</p> <p>다양한 단당 및 에탄올 함량 분석을 위해 시료를 \( 14,240 \times \mathrm { g } \)에서 10분동안 원심분리를 한 후 상층액을 HPLC (Agilent 1100 Series, Agilent. Inc., USA)를 이용하여 분석하였다. 에탄올 수율 \((Y_ { E t O H } , \mathrm { g } / \mathrm { g } ) \)은 식 (3)로 나타낼 수 있다.</p> <p>\( Y_ { E t O H } ( \mathrm { g } / \mathrm { g } )- \frac { [E t O H]_ {\max } } { [ \text { Sugar } ]_ { ini } } \)<caption>(3)</caption></p>