계대 보관한 M. luteus(Kocuria rhizophila) ATCC 9341, Escherichia coli ATCC 11303 균주를 백금이로 1 loopful을 접종하여 각각 항온수조에서 16시간 진탕 배양하고, MH배지에는 B. megaterium, #2 배지에는 B. stearo-thermophilus, #5 배지에는 B. subtilis, #8 배지에는 B. cereus, TA 배지에는 E. coli, EEC agar pH 8.0에는 M. luteus 균액을 각각 petridish에 분주하여 제작하고, 각 plate들의 항생제 잔류 수치를 알아보았다. Paper disk에 각 농도들을 분주하여 배지 위에 올리고, 각각 16-8시간 배양하였으며, 배양 후 미생물의 생육을 억제한 inhibition zone을 caliper로 직경이 \( 12 \mathrm{mm} \)이상인 것을 양성으로 판정하였다.
<h2>균 현탁액 조제</h2> <p>계대 보관되어 온 M. luteus(Kocuria rhizophila) ATCC 9341, Escherichia coli ATCC 11303 균주를 시험일 하루 전 tryptic soy broth \( 20 \mathrm{~mL} \)에 직경 \( 2 \mathrm{~mm} \) 백금이로 1 loopful을 접종하여 M. luteus(Kocuria rhizophila) ATCC 9341는 \( 32^{\circ} \mathrm{C} \)에서 E. coli ATCC 11303는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 16시간 진탕 배양하였다. 이 균액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 \( 19 \mathrm{~mL} \)의 멸균증류수에 희석하여 사용(균 농도는 약 \( 2 \times 10^{7} \mathrm{CFU} / \mathrm{mL} \) )하였으며, 이 희석균액은 냉장 보관하면서 약 1주일간 사용하였다.</p> <h2>시험용 평판의 조제</h2> <p>시험용 평판은 고온증기멀균 후 약 \( 45 \sim 50^{\circ} \mathrm{C} \)로 가온시킨 뒤, MH배지에는 B. megaterium, #2 배지에는 B. stearo-thermophilus, #5 배지에는 B. subtilis, #8 배지에는 B. cereus, 그리고 TA 배지에는 E. coli, EEC agar pH 8.0에는 M. luteus 균액을 각각 해당 배지량의 \( 1 \% \)씩 가하여 혼합한 후 \( 8 \mathrm{~mL} \)씩 petridish에 분주하여 제작하였다. 이때 MH 배지의 경우 희석한 아포액을 첨가함과 동시에 TMP \( 10.0 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 용액도 함께 배지 \( 100 \mathrm{~mL} \)당 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 첨가하였다.</p> <p>시험할 때마다 streptomycin sensi-disk를 이용하여 각 시험용 평판의 감도를 확인하였다. 시험용 평판에 \( \mathrm{S} 10 \)을 올려 놓은 뒤에 B. megaterium는 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \), B. subtilis와 E. coli는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), B. cereus와 M. luteus는 \( 30^{\circ} \mathrm{C}, B \). stearothermophilus는 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)에서 16-18시간 배양하였다. B. megaterium, B. subtilis, B. cereus, B. stearothermophilus의 평판에서는 sensi-disk의 억제대의 직경이 각 \( 20 \mathrm{~mm}, E \). coli와 \( M \).luteus의 평판에서는 각 \( 12 \mathrm{~mm} \) 이상 되는 평판을 사용하였다.</p> <h2>항생제 희석 용액 제조</h2> <p>각 plate 들의 항생제 잔류 수치를 알아보기 위해 \( 100 \mathrm{mg} \)의 각 항생제를 \( 100 \mathrm{~mL} \)의 용량플라스크에 취해 적합한 용매로 \( 10 \mathrm{~mL} \)로 녹인 뒤에 멸균증류수로 표시선 까지 맞추어 혼합하여 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \)의 stock solution을 만들고, \(50, 25, 10, 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 등의 농도들로 희석하였다. 각각의 항생제들의 용매 및 희석 용액은 Table 1에 나타내었다.</p> <h2>시험결과판정</h2> <p>Paper disk에 각 농도들을 \( 80 \mu \mathrm{L}\)씩 분주하여 배지 위에 올리고, B. megaterium 는 \( 45^{\circ} \mathrm{C} \), B. subtilis와 E. coli 는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), B. cereus와 \( M \). luteus는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), B. stearothermophilus은 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 16-18시간 배양하였다. 배양 후 미생물의 생육이 억제된 inhibition zone을 caliper를 사용하여 직경이 \( 12 \mathrm{~mm} \)이상인 것을 양성으로 판정하였다.</p>