본 실험의 공시충인 흰점박이꽃무지의 유충과 참나무 발효톱밥은 농업회사법인 귀농생태마을에서 공급받았다.황 및 셀레니움의 급이에 따른 굼벵이의 영양요소 변화를 관찰하기 위해 주사료인 발효톱밥에 황 및 셀레니움을 \( 1 \% \)의 비율로 혼합하였다.시료를 핀밀분쇄기를 이용하여 \( 4,600 \mathrm{rpm} \) 으로 분쇄하여 일정량의 시료를 취하였다.지방산 조성은 peak area의 상대적인 비로 나타내었고, 3 샘플의 풀링에 의해 분석을 수행하였다. 그리고, 반복 실험으로 얻은 결과는 SAS program을 사용하여 분산분석으로 표시했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>흰점박이꽃무지의 사육</h2> <p>본 실험의 공시충인 흰점박이꽃무지의 유충과 먹이인 참나무 발효톱밥은 농업회사법인 귀농생태마을(경남 진주)에서 공급받았다. 공시충은 유황먹인농장 곤충사육실 (16L:8D, \( 25 \pm 2^{\circ} \mathrm{C}, 60 \pm 5 \% \mathrm{RH} \) )에서 사육하였다. 투명한 폴리프로필렌(polypropylene) 재질의 직사각형(400×320×180\( \mathrm{mm} \) ) 용기에 우화한 암수 10 쌍을 넣어 산란한 알에서 부화한 유충을 이용하였다. 유충은 참나무 발효톱밥을 급이하였으며, 유충의 발달 단계에 따라서 크기가 다른 폴리프로필렌(polypropylene) 재질의 직사각형\( 400 \times 320 \times 180 \mathrm{~mm} \) ) 용기를 이용하여 사육을 하였다.</p> <h2>영양원 급이</h2> <p>황 및 셀레니움의 급이에 따른 굼벵이의 영양요소 변화를 관찰하기 위해 주사료인 발효톱밥에 황 및 셀레니움을 \( 1 \% \)의 비율로 혼합하였다. 조제된 대체먹이는 2령 유층부터 급이하였으며, 3 령 유충을 3 일 동안 절식상태로 배변을 유도하였다. 이를 흐르는 물에 2회 세척한 후 1시간 스팀처리 후 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 건조기에서 48 시간 건조하여 보관하였고, 필요한 경우에는 분쇄기(Super grinder J-1000, Hibell, Hwaseong, Korea)로 분쇄하고 \( 0.5 \mathrm{~mm} \) 체로 선별하여 냉동고에 보관하면서 시험에 사용하였다.</p> <h2>시료 분쇄 및 일반성분 분석</h2> <p>시료를 핀밀분쇄기(DK201, Sejung Tech, Daegu, Korea)를 이용하여 \( 4,600 \mathrm{rpm} \) 으로 분쇄하여 일정량의 시료를 취하였다. 일반성분은 association of official agricultural chem-ists (AOAC) 방법에 따라 분석하였다. 조지방 함량은 soxh-et 방법으로 분석하였고 회분 함량은 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \) 직접회화법으로 측정하였으며 조단백질함량은 Kjeldahl 분석기(2300 Kjeldahl Analyzer Unit, Foss Tecator, Eden Prairie, MN, USA)를 이용하여 정량 분석하였다. 무기성분 함량은 건식법(NAAS, 2000)으로 측정하였다. 즉, 시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 회화한 후 \( 0.5 \mathrm{~N} \mathrm{HNO}_{3} \) 을 넣고 \( \mathrm{GF} / \mathrm{C}(90 \mathrm{~mm} \), Cat No. 1822 090, Whatman International Ltd., Maiidstone, England) 여과지로 여과한 다음 \( 0.5 \mathrm{~N} \mathrm{HNO} 30 \mathrm{ml} \) 로 정용하여 In-ductively Coupled Plasma Spectrometer (ICP, Thermo Jarrell Ash, Franklin, MA, USA)로 분석하였다.</p> <h2>지방산 분석</h2> <p>지방산 분석은 추출된 조지방 \( 0.5 \mathrm{~g} \) 에 반응시약(metha-nol: heptane: benzene: 2,2-dimethoxypropane: H2SO4=37: \( 3620: 5: 2(\mathrm{v} / \mathrm{v})) 2 \mathrm{ml} \) 을 넣고 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20 분간 반응시킨 후 상등액을 질소농축하여 hexane에 용해시켜 지방산 분석 시료로 사용하였다. 지방산 분석은 가스크로마토그래피 (Agilent \( 6850 \mathrm{GC} \), Agilent Technologies, Wilmington, NC, USA)를 사용하였고 column은 HP-INNOWAX( \( 30 \mathrm{~m} \times 0.25 \) \( \mathrm{mm}, 0.25 \mu \mathrm{m} \), Aglient Technologies), 검출기는 flame ioniza-tion detector를 사용하였다. 주입구 온도는 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), 검출기 온도는 \( 300^{\circ} \mathrm{C} \) 로 하였으며, 오븐 온도는 \( 120^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분간 유지한 후 분당 \( 5^{\circ} \mathrm{C} \) 씩 \( 230^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 올려 5 분간 유지하였다. Carrier gas는 N2 (99.999\%)를 사용하였으며 유속은 \( 1.3 \) \( \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 으로 최종 주입되는 양은 \( 1 \mathrm{ml} \) 이었다. 지방산 조성은 peak area의 상대적인 비로 나타내었고, 3 샘플의 풀링에 의해 분석을 수행하였다.</p> <h2>아미노산 조성분석</h2> <p>구성 아미노산 분석을 위하여 건조된 3 샘플 풀링 흰점박이꽃무지 유충의 분말 \( 1 \mathrm{~g} \) 과 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} 40 \mathrm{ml} \) 을 둥근 플라스틱에 넣고 혼합한 다음 \( 110^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 동안 질소가스를 가수분해 하였다. 염산을 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 감압 농축시킨 다음 농축시료는 \( 0.2 \mathrm{~N} \) sodium citrate buffer (pH 2.2) 50 \( \mathrm{ml} \) 을 넣어 희석시키고 여과지 \( (0.25 \mu \mathrm{m} \) millipore)로 여과하였다. 여과한 시료 \( (20 \mathrm{ml}) \) 는 아미노산 분석기(L-8900, Hitachi, Tokyo, Japan)를 이용하였다.</p> <p>유리아미노산 분석을 위하여 건조된 3샘플의 풀링 시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 에 증류수 \( 40 \mathrm{ml} \) 를 가하여 15 분간 끓인 후 증류수를 \( 50 \mathrm{ml} \) 로 맞추고 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 취하여 \( 5 \% \mathrm{TCA} \) (trichloroaceticacid) \( 1 \mathrm{ml} \) 를 주입하고 vortex mixer (Genie 2, Scientific in-dustries, Inc USA)로 교반 후 \( 10,000 \times \mathrm{g} \) 으로 10 분간 원심분리한 후 상등액을 취하여 여과지 \( (0.25 \mu \mathrm{m} \) millipore \( ) \) 로 여과하였다. 여과한 시료 \( (20 \mathrm{ml}) \) 는 아미노산 분석기(L-8900, Hitachi, Tokyo, Japan)를 이용하여 분석하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>반복 실험을 통하여 얻은 결과는 SAS program (V. 9.2, Cary, NC, USA)를 사용하여 분산분석에 의해 나타내었다. 각 시료의 분석결과에 대한 유의성 검정은 분산분석을 한 후 \( p<0.05 \) 수준에서 Duncan's multiple range test (DMRT)를 실시하였다.</p>