HPLC를 활용하여 감초 성분의 항균활성을 측정하였다. Shim pack VP-ODS 컬럼과 acetic acid 및 acetonitrile이 포함된 이동상을 사용하며, 분석 속도는 \(1.0 \mathrm {ml} / \mathrm {min}\)이었다. 항균활성 평가를 위해 disc diffusion assay를 사용하였고, 그 결과 glycyrrhizin과 liquiritin이 E. coli에 대해 항균활성을 나타냈다. 더불어, liquiritin이 glycyrrhizin보다 더 높은 항균활성을 보였다. 그중 가장 뛰어난 항균활성을 보인 isoliquiritigenin에 대해 별도로 challenge test를 시행하여 방부력을 확인하였다.
<h2>HPLC 기기 분석 조건</h2> <p>HPLC (Shimadzu, Japan)의 조건은 고정상으로 Shim pack VP-ODS (L: \( 250 \mathrm { ~mm } \), LD: 4.6mm) 컬럼을 사용하였으며 이동상으로는 \( 2 \% \) acetic acid in water와 \( 0.5 \% \) acetic acid in \( 50 \% \) acetonitrile (40:60)을 이용하여 기울기 용리하여 \( 254 \mathrm { ~nm } \) 에서 검출하였다. 유속은 \( 1.0 \mathrm { ml } / \mathrm { min } \) 로 분석하였으며 시료는 \( 20 \mu \mathrm { l } \) 주입하였다.</p> <h2>Isoliquiritigeninof challenge test</h2> <p>감초성분의 항균활성 측정에서 가장 우수한 항균활성을 나타낸 성분인 isoliquiritigenin의 방부력을 측정하기 위해서 challenge test를 시행하였다. Isoliquiritigenin \( 0.20 \% \) 를 함유한 크림을 제조하였고 대조군으로 방부제를 첨가하지 않은 크림과, 메틸 파라벤 \( 0.20 \% \) 함유한 크림을 제조하여 실험에 사용하였다(Table 1). 시험 균은 isoliquiritigenin이 항균활성을 나타낸 B. subtilis, P. acnes, E. coli, P. aeruginos \( \alpha \) 을 사용하였고, 배양된 균주의 균수는 \( 10 ^ { 6 } -10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 으로 맞추어 크림에 접종하였다. 시험 균이 접종된 크림은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 100 \mathrm { rpm } \) 으로 조정된 shaking incubator에서 보관하여 실험에 사용하였다. 각각의 시험 균이 접종된 크림을 \( 1 \mathrm { ~g } \) 씩 취해 멸균된 증류수로 희석하고 고체배지에 도말하였다. 그 후 배양하여 0 일차 균 수를 측정하고, 7 일 후 균 수가 처음 균 수보다 \( 99.9 \% \) 사멸하는지를 확인하였다. 1 주마다 균 수를 측정하여 4 주까지 균 수를 확인하였다. 실험은 방부제의 유효성 측정에 대한 시험방법의 법규 중 CTFA 법을 기준으로 시행하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>감초성분의 disc diffusion assay에 의한 항균활성</h2> <p>감초의 대표적인 구성성분인 glycyrrhizin, liquiritin, liquiritigenin, isoliquiritigenin 중 항균활성에 영향을 미치는 성분을 알아보고자 disc diffusion assay를 통해 항균활성을 측정하였다. 시험균주는 피부 상재균으로서 3 종의 그람 양성균(S. aureus, B. subtilis, P. acnes), 2종의 그람 음성균 (E. coli, P. aeruginosa)과 비듬균인 P. ovale을 포함한 총 6 종의 균주에 대해 실험을 실시하였으며 결과는 Table 2 에 나타내었다. 감초의 지표성분인 glycyrrhizin과 liquiritin은 병원성균인 E. coli에 대해서만 항균활성을 나타내었으며 liquiritin이 glycyrrhizin 보다 높은 항균활성을 나타냄을 확인하였다. Liquiritin 구조에서 당이 제거된 형태인 liquiritigenin은 B. subtilis, P. acnes, E. coli 총 3종의 균에 대해 항균활성을 나타내었다. Isoliquiritigenin은 B. subtilis, P. acnes, E. coli, P. aeruginosa 총 4 종의 균에 대하여 항균활성을 나타내었고 감초 성분들 중 가장 높은 항균활성이 있음을 확인하였다.</p>