AY2000균주를 MYCS배지(\(\mathrm{pH ~5.5}\))에 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \)-citrate 제거, \( 100 \mu \mathrm { M } \; \mathrm { FeCl } _ { 3 } \) 첨가하고 \(25^\circ \mathrm{C}\)에 12-24시간 동안 배양하면 S. cerevisiae에 대한 가장 높은 활성(MIC \(7.8\mathrm{\mu g/mL}\))을 가지는 AYS를 생산할 수 있다. 24시간 이후 항효모 활성이 감소하였으며 60시간까지 그대로 유지되었다.
<h2>배양시간에 따른 AYS의 생산</h2> <p>이상의 결과에서 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \)-citrate는 제거하고, \( 100 \mu \mathrm { M } \; \mathrm { FeCl } _ { 3 } \)를 첨가한 MYCS배지 \( ( \mathrm { pH } 5.5) \)에 AY2000균주를 접종하고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양하면 항효모 활성이 가장 강한 AYS를 얻을 수 있었다. 그러나, 배양이 끝난 후 배양액에는 여러 가지 효소들이 함유되어 있음으로 생산된 AYS의 활성이 유지되는 기간을 검토하고자 배양시간을 늘여서 배양시킨 후 AYS에 대한 MIC를 측정하였다. 그 결과 Table 9에서 보는 바와 같이 배양 12-24시간 동안에 가장 항효모 활성이 강하게 나타났으며(MIC; \( 7.8 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \)), 그 이후에는 오히려 항효모 활성이 감소하였다. 또한 AY2000균주의 생육곡선을 조사해서 비교분석해 본 결과 배양 12시간에는 정지기에 도달하였으며(data 미제출), AY200균주의 항효모성 물질의 생성은 정지기에 도달하여 배양 24시간까지 그 활성이 유지되었으나(MIC는 \( 7.8 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) ), 배양 24 시간 이후에는 항효모 활성(MIC는 \( 31.3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \))이 다소 떨어져서 배양 60시간까지 그대로 항효모 활성을 유지하였다. 따라서 전보에서 기술한 바와 같이 항효모 활성은 다른 Rahnella속의 균주들에서는 알려지지 않은 AY2000균주의 특성이며, 본 연구에서는 AY200균주가 생산한 AYS의 연구에서 많은 보완해야 할 문제점들 중에서 적어도 액체 배양에서 안정적으로 AYS를 생산하는 조건을 알 수 있었다. 현재 이 조건에서 생성된 AYSfmf 부분정제하고 그 안정성 및 AYS의 이화학적 특성에 대한 지속적인 연구가 진행되고 있다.</p> <p>결론적으로 AYS균주로부터 액체배양을 행하여 항효모 활성을 가진 AYS를 안정적으로 생산하기 위해서는 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \)-citrate가 제거되고, \( 100 \mu \mathrm { M } \; \mathrm { FeCl } _ { 3 } \)가 첨가된 MYCS배지 ( \( \mathrm { pH } 5.5 \))를 조제하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 12-24시간 동안 AY2000균주를 진탕 배양하면 S. cerevisiae에 대해 가장 높은 활성(MIC; \( 7.8 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { mL } \))을 가지는 AYS를 생산할 수 있었다.</p>