본 실험에서는 갈조류 17종, 홍조류 11종 및 녹조류 7종의 35종의 해조류들을 사용하여 메탄올 추출물을 제조하였다. 이를 DMSO에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 DPPH anion 소거능, ABTS cation 소거능 및 환원력을 측정하여 항산화 활성을 평가하였고, DPPH scavenging activity (DSA)는 \( 99.5 \% \) 에탄올에 용해시킨 \( 2 \times 10^{-4} \mathrm{M} \mathrm{DPPH} \) 용액과 희석한 시료를 혼합하여 흡광도를 측정하여 결정하였다.ASA평가를 위해 \( 7 \) \(\mathrm{mM} \) ABTS (Sigma Co., USA) \( 5\) \( \mathrm{ml} \)와 \( 140\) \( \mathrm{mM} \) potassium persulfate 88 씨를 빛을 차단한 공간에서 16시간 상온에 두어 ABTS 양이온을 발생시켰으며 이를 희석하여 실험했다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 시료의 조제</h2> <p>본 실험에 사용된 해조류들은 갈조류 17종, 홍조류 11종 및 녹조류 7종의 35종으로, 최근 보고와 동일한 시료를 사용하였다(Table 1). 메탄올 추출물 조제를 위해서는 해조류들의 이물질을 제거하고 수돗물로 세척한 후 실온에서 음건하고, 건조 해조류들을 믹서기로 분쇄한 후 건조분말 해조류에 10배 부피의 메탄올을 가한 후 상온에서 2일 추출하였으며, 이를 4회 반복한 후 추출액을 모아 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압 농축하여 추출물을 제조하였다.</p> <h2>항산화 활성</h2> <p>조제된 추출물은 dimethylsulfoxide (DMSO)에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 항산화 활성을 평가하였으며, 항산화 활성은 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) anion 소거능, 2,2-azobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) (ABTS) cation 소거능 및 환원력을 측정하여 평가하였다. 대조구로는 vitamin C (Sigma Co., USA)를 사용하였으며, 용매 대조구로는 DMSO를 사용하였다. 각각의 활성 평가는 각각 3회 이상 반복한 실험의 \( \operatorname{mean} \pm \mathrm{SD} \)로 표시하였으며, 소거능 평가에서 \( 50 \% \)의 소거능이 나타나는 시료 농도를 \( \mathrm{IC}_{50} \)로 나타내었다.</p> <h2>DPPH scavenging activity (DSA)</h2> <p>DSA평가는 기존의 보고한 방법과 동일한 방법을 사용하였다. 다양한 농도로 희석한 시료 \(20 \mathrm{\mu l}\)에 \( 99.5 \% \) 에탄올에 용해시킨 \( 2 \times 10^{-4} \mathrm{M} \mathrm{DPPH} \) 용액 \(380 \mathrm{\mu l}\)를 넣고 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분 동안 반응시킨 후, \( 516 \mathrm{~nm} \) 에서 microplate reader (Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하고 다음의 식에 의해 DSA를 결정하였다. DSA \( (\%)=[1-(\mathrm{S} / \mathrm{C})] \times 100, \mathrm{C}: \) 용매 대조구 DMSO 첨가 시의 흡광도, S, 시료 첨가시의 흡광도.</p> <h2>ABTS scavenging activity (ASA)</h2> <p>ASA평가를 위해 \( 7 \mathrm{mM} \) ABTS (Sigma Co., USA) \( 5 \mathrm{ml} \)와 \( 140 \mathrm{mM} \) potassium persulfate 88 씨를 섞은 후 상온에서 16시간 빛을 차단하여 ABTS 양이온을 형성시켰으며, 이후 이 용액을 \( 414 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 에탄올로 희석하였다. 조제된 희석용액 \(190 \mathrm{\mu l}\) 와 해조류 시료 \(10 \mathrm{\mu l}\)를 혼합한 후 상온에서 6분간 반응시킨 후 \( 734 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하고 다음의 식에 의해 ASA를 결정하였다. ASA\( (\%)=(C-S) / C \times 100, C: \) 용매 대조구 DMSO 첨가시의 흡광도, S, 시료 첨가시의 흡광도.</p> <h2>환원력 측정(reducing power: RP)</h2> <p>에탄올에 용해시킨 해조류 시료 \( 2.5 \mathrm{ml} \)에 \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.6) \( 2.5 \mathrm{ml} \) 와 \( 10 \% \)potassium ferricya-nide \( 2.5 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분 동안 반응시킨 후, \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( 2.5 \mathrm{ml} \) 를 넣어 반응을 종료하고 \( 4000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수한 상등액을 \( 0.1 \% \) ferric chloride 용액과 5:1 (v/v) 비율로 혼합하고 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 환원력을 평가하였다.</p> <h2>Nitrite 소거활성(Nitrite scavenging activity: NSA)</h2> <p>해조류 추출물의 NSA평가를 위해, 아질산염 용액 \( (1 \mathrm{mM}) \)에 시료용액을 가하고, 여기에 \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \)을 가해 \( \mathrm{pH} 1.2 \) 로 조정한 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 반응시킨 후 Griess reagent (Sigma Co., USA)를 가하고 혼합하였다. 이후 15분간 실온에서 방치 후 \( 520 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 잔존 nitrite 양을 측정하였다. NSA (\(\%\))는 다음의 식에 의해 계산하였다.</p> <p>NSA \( (\%)=[1-(\mathrm{A}-\mathrm{C}) / \mathrm{B}] \times 100 \), A: \( (1 \mathrm{mM}) \)nitrite 용액에 시료를 첨가하여 1시간 반응시킨 후의 흡광도, B: \( (1 \mathrm{mM}) \) nitrite 용액의 흡광도, C : 해조류 시료의 흡광도.</p> <p>대조구로는 vitamin C (Sigma Co., USA)를 사용하였으며, 용매 대조구로는 DMSO를 사용하였다. 각각의 활성 평가는 각각 3회 이상 반복한 실험의 mean \( \pm \) SD로 표시하였으며, 소거능 평가에서 \( 50 \% \)의 소거능이 나타나는 시료 농도를 \( mathrm{IC}_{50} \)로 나타내었다.</p> <h2>통계 분석</h2> <p>실험 결과는 SPSS 18.0버전을 사용하여 mean \( \pm \) SD로 나타내었으며, 각 군간의 차이는 ANOVA Tukey LSD 통계처리방법으로 통계적 유의성 검정을 조사하였다. 유의수준은 \( p \times 0.05 \) 로 하였다. 항산화 활성 평가 결과들의 상관관계 검토는 SigmaPlot 2001 (Ver 7.0)의 linear regression을 이용하였다.</p>