연구진은 세포융합을 통해 12개의 모노클로널 항체(클론)를 확보하고 ELISA를 이용해 단백질 티로글로불린에 대한 반응성을 실험했다. 이들 클론 중 3개(TN-1, TN-2, TN-3)는 티로글로불린에 대한 친화력이 높은 것으로 밝혀졌으며, 추가적인 ELISA 억제 실험은 TN-2 클론이 티로글로불린에 대한 결합 특이성을 가지고 있음을 보여주었다. 또한, TN-2는 자기 항원의 일종인 포스파티딜세린과 교차 반응성을 갖는 것으로 밝혀져, 이 두 분자에서 공통의 하전 구조를 인식할 수 있음을 시사했다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <p>2번의 세포융합을 통해 thyroglobulin과 반응하는 클론 12개를 얻을 수 있었다. ELISA 결과 항원으로 사용한 thyroglobulin과 반응하는 3 클론(TN-1, TN-2 및 TN-3)을 얻었으며 이들 clone 모두 다 비교적 thyroglobulin과 높은 친화성을 가짐을 알 수 있었다. 그중 비교적 반응성이 강한 3클론에 대한 반응성을 Fig. 1에 나타내었다.</p> <p>이들 clone중 thyroglobulin의 3차원적인 구조를 인식할 수 있는 결합특이성을 가진 클론을 찾기 위해 항원-항체와의 반응을 soluble thyroglobulin이 어느정도 저해하는가를 알아보기 위해 ELISA 억제실험을 행하였다. 그 결과 3 clone 중 1 clone (TN-2)이 soluble thyroglobulin의 농도에 비례해서 plate 바닥에 흡착된 항원과의 결합이 억제됨을 알았다. 이는 TN-2가 thyroglobulin을 인식하는 항체임을 더욱 시사하고 있다.</p> <p>TN-2의 자가항원 결합특성을 알아보기 위해 자가항원으로 알려진 phosphatidylcholine, phosphatidylserine 및 phosphatidylethanolamine과의 반응성을 검토하였다. 그 결과 3종류의 인지질중 phosphatidylserine과는 교차반응성을 나타내었다. 이러한 사실은 TN-2가 thyroglobulin을 포함한 자가항원과 반응하는 항체로 나타났으며, 단백질인 thyroglobulin 과 phosphatidylserine과의 구조유사성이 전혀 없는 점으로 미루어 보아 본 항체는 단백질 및 phosphatidylserine구조 중 전하를 띄는 부분을 공통적으로 인식할 것으로 판단되어진다.</p> <p>이전에 Rauch등은 anti-cardiolipin mAb가 DNA와 결합함을 보고하였고 또한 phosphatidylinositol phosphate 및 cholesterol에 대한 항체들이 각각 nucleic acid와 교차 반응성을 나타냄을 보고한 적이 있다. Igarashi등은 phosphatidylserine에 대한 단일클론 항체중 그 일부가 lupus anticoagulant 활성 및 DNA결합성을 가지는 이른바 병원체 항체(pathogenic antibody)와 같은 성질을 가지고 있음을 보고하였다.</p> <p>그러므로 TN-2가 기존에 확립된 anti-phosphatidylcholine mAb 및 anti-phosphatidylserine mAb 와의 공통성 및 자가항원에 대한 반응특이성을 알아보기 위해 single strand-DNA, double strand- DNA 및 다양한 전하를 가진 인지질들과의 반응성에 대해서도 검토 할 계획이다. 또한 갑상선기능저하증 치료법으로서 지금까지 본 연구실에서 연구하여 왔던 천연물(30여종)들중 항염증 효과를 기준으로 새로운 감궁탕약침액을 처방하고, 갑상선기능저하증을 중심으로 한 자가면역질환의 치료에 미치는 효과를 규명하는데 본 항체를 도구로 사용할 수 있다고 생각된다. 안전성 평가 후 직접 자가면역성 갑상선기능저하증에 적용하여 치료효과를 병행 할 예정이다.</p> <h1>요약</h1> <p>Thyroglobulin과 반응하는 monoclonal antibody를 3클론(TN-1, TN-2 및 TN-3)을 확립하였다. 이들 중 1클론(TN-2)은 thyroglobulin의 3차원적인 구조를 인식하면서 음전하를 띠는 자가항원의 일종인 phosphatidylserine과도 교차반응성을 나타내었다. 따라서 TN-2를 이용한 자가면역성 갑상선염의 진단 및 치료에의 적용효과가 기대된다.</p>