노루발풀 추출물의 항균활성은 \( 80 \% \) ethanol 추출물의 2종의 식품 부패균에 대한 항균효과 측정결과 그람 음성균 E. coli 에서는 활성이 나타나지 않은 반면 그람 양성균 B. subtilis에 대해서는 항균활성을 나타낸 것을 확인할 수 있었다. 노루발풀의 항균활성을 나타내는 물질은 비극성의 성질을 가지는 물질이라 예상된다. Hexane 분획물을 Silica gel col-umn chromatography를 통해 획득된 100개의 분획물을 다시 analytical TLC를 실시하여 5개의 분획물 그룹으로 나누어 활성을 확인한 결과 No.\( 18 \sim 40 \) 까지의 fraction에서 강한 항균활성을 관찰할 수 있다. 항균활성 물질의 분리는 노루발풀의 \( 80 \% \) ethanol 추출물로부터 다양한 용매별로 분획하여 얻은 분획물 중 항균활성을 보인 hexane분획물로부터 silica gel column chromatography와 preparative TLC를 통하여 얻은 10개의 분획물에서 항균활성을 보인 No. 1 ~ 5까지의 분획물의 유효성분을 알아보기 위해 HPLC를 통해 단일 분리한 결과 retention time이 9분, 13분대 두 개의 peak를 확인할 수 있었고 peak I 의 단일물질이 노루발풀의 B. subtilis에 대한 항균활성을 나타내는 물질임을 확인할 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>노루발풀 추출물의 항균활성</h2> <p>노루발풀의 \( 80 \% \) ethanol 추출물의 항난활성을 paper discmethod를 이용하여 실험한 결과는 Table 2 와 같다. 즉, \( 80 \% \) ethanol 추출물의 2종의 식품 부패균에 대한 항균효과 측정결과 그람 음성균 E. coli 에서는 활성이 나타나지 않은 반면 그람 양성균 B. subtilis에 대해서는 항균활성을 나타낸 것을 확인할 수 있었다. 이는 노루발풀의 methanol과 ethyl ace-tate 추출물에서도 그람 양성균에 대해서 활성을 보였던 연구와 유사한 견과를 나타냄을 확인할 수 있었다. 노루발풀의 그람 양성균에 대한 항균활성은 추출물의 농도가 증가할수록 항균활성을 나타내는 생육억제환이 증가하는 것으로 보아 항균활성이 증가하는 것을 보여 주고, 이는 추출물의 항균활성은 추출물의 농도에 의존적으로 증가한다는 것을 시사한다.</p> <p>또한, 그람 양성균 B. subtilis에 대하여 활성을 나타낸 노루발풀의 \( 80 \% \) ethanol 추출물은 항균 물질을 분리하기 위한 목적으로 hexane, diethyl ether, ethyl acetate 및 물 순으로 점차 극성을 높이면서 분획 추출하여 항균활성을 확인한 결과는 Table 3 과 같다. 노루발풀의 hexane 충에서 강력한 항균활성을 보인데 반하여 나머지 용매 층에서는 그람 양성균에 대한 항균활성이 나타나지 않았다. 이것으로 볼 때 노루발풀의 항균활성을 나타내는 물질은 비극성의 성질을 가지는 물질임을 예상할 수 있다.</p> <h2>Hexane 분획물의 항균성</h2> <p>Hexane 분획물을 silica gel column chromatography를 실시하여 100 개의 분획을 얻을 수 있었다. Silica gel col-umn chromatography를 통해 획득된 100 개의 분획물을 다시 analytical TLC를 실시하여 5개의 분획물 그룹으로 나누어 활성을 확인한 결과 No. \( 18 \sim 40 \) 까지의 fraction에서 강한 항균활성을 확인 할 수 있었다. 항균활성이 높은 No. 2 그룹의 회수물 \( 410 \mathrm{mg} \) 에 대하여 prep. TLC를 실시하여 10 개의 소분획물로 다시 분리하였다. 획득된 10 개의 분획물에 대해서 항균활성을 확인한 결과 No. 1에서 No. 5까지의 분획물에서는 항균활성을 나타내었으며 특히 No. 3의 분획물에서는 강한 저지능을 보였다. 그렇지만 No. 6 이후의 분획물에서는 뚜렷한 항균활성이 보이지 않았다.</p> <h2>항균활성 물질의 분리</h2> <p>노루발풀의 \( 80 \% \) ethanol 추출물로부터 여러 가지 용매별로 계통 분획하여 획득한 분획물 중 항균활성을 나타낸 hex-ane 분획물로부터 silica gel column chromatography와 preparative TLC를 실시하여 획득한 10 개의 분획물 중에서 항균활성을 보인 No. 1에서 No. 5까지의 분획물의 유효성분을 알아보기 위하여 HPLC를 통해 단일 분리한 결과 re-tention time이 9분과 13분대인 두 개의 peak를 확인할 수 있었다. 이렇게 나타난 두 peak 중 노루발풀의 B. sub-tilis에 대한 항균활성을 나타내는 물질을 선별하기 위해서 preparative HPLC를 통해 획득된 두 peak의 분획물에 대해 항균성을 실험해본 결과 peak I 에서 항균활성을 보이는 것으로 보아 peak I 의 단일물질이 노루발풀의 B. subtilis에 대한 항균활성을 나타내는 물질임을 확인할 수 있었다.</p>