37\(^\circ \mathrm{C}\), 5% CO₂에서 배양하여 각 분획물과 17\(\beta\)-estradiol, 에탄올을 처리하여 48시간 배양한 후 chloramphenicol acetyltransferase (CAT) 단백질의 함량을 측정하였다. 미역, 다시마, 곰피 및 돌자반 건조분말시료는 80% 에탄올로 8시간 동안 추출하고 농축시킨 후 12.7~19.6%의 수율을 나타냈고, 분획물의 수율은 미역과 다시마의 경우 methanol 분획에서 가장 높았고, 곰피와 돌자반의 경우 butanol 분획에서 가장 높았다. 이를 통해 에스트로겐 유사활성을 측정할 수 있었다.
<h2>에스트로겐 유사활성 측정</h2> <p>본 연구진에 의해 제작된 에스트로겐 유사물질 검정용 세포주 MCF7/pDsCAT-ERE119-Ad2MLP를 10% dex-tran-coated charcoal stripped FBS를 포함하는 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, BioWhittaker) 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \)에서 배양하였다. 각 분획물들은 ethanol에 완전히 용해시켰고 세포가 약 \( 90 \% \)의 confluence가 되었을 때, 각 시료와 표준물질인 17 \( \beta \)-estradiol (RBI, Natick, MA, USA) 그리고 대조구로 에탄올을 각각 \( 5 \mathrm {\mu l } \)씩 처리하였다. 각 시료의 추출물은 최종농도 \( 500, 50, 5 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \)로 사용하였고, 표준물질은 최종농도 \( 10 ^ { -7 } , 10 ^ { -8 } , 10 ^ { -9 } \mathrm { M } \)로 사용하였다. 그 후, 48시간 동안 배양한 다음 세포를 회수하였고, \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분 동안의 처리를 4회 반복하여 세포를 파괴한 후, \( 14,000 \times g \)에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 취하여 chloramphenicol acetyltransferase (CAT) 단백질의 함량을 측정하였다. CAT 단백질의 함량측정은 CAT-ELISA Kit (Roche Applied Science, Mannheim, Germany)를 이용하여 manual에 따라 수행하였다. CAT 단백질의 함량측정 결과는 BCA Protein Assay Reagent Kit (Pierce, Rockford, IL, USA)를 이용해 측정한 각 추출물의 총 단백질함량으로 표준화시켰다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>해조류 추출물 및 분획물의 수율</h2> <p>미역, 다시마, 곰피 및 돌자반 건조분말시료를 80% 에탄올로 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 8시간 동안 추출하고 농축시킨 후 획득된 에탄올 추출물의 수율과 획득된 추출물들을 분획하여 얻은 분획물들의 수율을 Table 1에 나타내었다. 각각의 추출물들은 12.7~19.6%의 수율을 나타냈으며, 미역의 경우는 19.6%로 가장 높은 수율의 추출물이 획득되었고 곰피의 경우는 12.7%의 가장 낮은 수율의 추출물을 획득되었다. 분획물의 수율은 미역과 다시마의 경우는 methanol 분획에서 가장 높았고, 곰피와 돌자반의 경우는 butanol 분획에서 가장 높았다.</p> <h2>해조류 추출분획의 에스트로겐 유사활성</h2> <p>생물체내로 유입된 에스트로겐 유사물질은 에스트로겐을 모방하여 세포 내에 있는 에스트로겐 수용체(estrogen receptor, ER)와 결합하고 DNA의 특정 염기서열인 estrogen responsive element (ERE)를 인식하여 결합한다. 이러한 DNA 상의 반응인자의 전사를 증대시키고 결국 특정 단백질의 발현을 유도하여 에스트로겐 유사물질에 의한 세포반응을 유도하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 에스트로겐 수용체를 발현하는 것으로 앝려진 인체 유방암 세포주 MCF7에 에스트로겐에 반응성을 나타내도록 고안된 CAT 리포터 플라스미드인 pDsCAT-ERE119-Ad2MLP를 도입한 in vitro 검출시스템을 사용하여 에스트로겐 활성을 측정하였다.</p>