MCF-7 세포에 대해 Microplate에서의 세포수에 따른 성장곡선과 흡광도 분석 결과 \( 2 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \) 로 배양한 값의 곡선이 안정된 상승곡선을 보여 이러한 조건을 배양 조건으로 선택하였다. 다음으로 각 시료에 대한 MCF-7 세포의 증식억제를 확인하기 위해 시료를 넣은 것과 넣지 않은 것에 MCF-7 cell을 분주하였으며, 살아있는 세포수의 지표가 되는 MTT 정량법의 흡광도를 이용해 분석하였다. 시료 Capsicum annuum L. leaf는 증식억제효과가 아주 현저하게 나타났다. 다음으로 증식억제작용이 확실한 시료를 골라 MCF-7세포의 형태변화를 추가로 관측하였다.
<h1>실험결과 및 고찰</h1><h2>Microplate에서의 세포수에 따른 성장곡선과 흡광도</h2><p>생존세포수와 MTT비색법에 의한 흡광도의 관계는 Fig. 1에서 보이는 바와 같다. 그리고 96well microplate에 \( 2 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \)와 \( 5 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \) MCF-7 세포를 \( 0.2 \mathrm{ml} \)씩 접종하여, 0시간, 24시간, 48시간, 72시간 배양한 후 세포수를 측정하였다. Fig. 2에서 보이는 바와 같이 세포수 \( 5 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \)을 배양하여 얻어진 값의 변화곡선보다 \( 2 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \) 로 배양한 값의 곡선이 안정된 상승곡선을 보였으므로, \( 2 \times 10^{4} \mathrm{cells}/\mathrm{ml} \)로 48시간 배양 결과를 실험조건으로 선택하여 이 시점을 기본 배양기간으로 정하고 실험을 행하였다. 각 측정값은 6회 실험하여 평균하여 얻은 값이며, 이는 hematocytometer에 의한 세포수 측정에서도 유의성있는 결과를 얻었다.</p><h2>각 시료에 대한 MCF-7 세포의 증식억제</h2><p>각 시료들을 각각 \( 50 \mu \mathrm{l}\), \(75 \mu \mathrm{l}\), \(100 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \) 농도로 첨가한 것과 넣지 않은 well 모두에 \( 20 \mu \mathrm{l} \) 씩 MCF-7 cell을 분주하여 각 well당 세포수 \( 4 \times 10^{3} \)개/\(200 \mu \mathrm{l}\) well가 되게 하였다. 이것을 \( 37^{\circ} \mathrm{C}\) \(5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 배양기 내에서 48시간 배양한 뒤 MTT 정량법으로 그 흡광도를 측정했다. MTT 정량법에 의한 흡광도 측정치의 감소는 살아있는 세포수의 감소, 즉 항암효과가 있는 것으로 간주할 수 있다. 측정값은 6회 실험 값을 평균하여 얻은 결과이다. 그 결과 Fig. 3에서와 같이 Capsicum annutm L. 에서 살아있는 세포수의 현저한 감소를 보였다. Fig. 3의 결과에서 MCF-7세포의 증식억제효과가 높은 것을 선정하여 농도를 좀 더 세분화하여 실험하였다 그 사용농도는 \( 10 \mu \mathrm{l}\), \( 25 \mu \mathrm{l}\), \(50 \mu \mathrm{l}\), \(75 \mu \mathrm{l}\), \(100 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \)이었고, 실험결과는 Fig. 4.a.와 같다. 시료 Capsicum annuum L. leaf는 증식억제효과가 아주 현저하여 \( 10 \mu \ell / \mathrm{m \ell} \) 에서 MCF-7세포에 대한 증식억제률이 \(95\%\)를 상회하였다. 이 결과에서 농도변화에 따른 세포 성장억제률의 변화가 확인되지 않았으므로 더 세분화된 저 농도까지를 실험범위로 삼고 행했다. 그 결과는 Fig. 4.b와 같이 \( 1 \mu \mathrm{l}/ \mathrm{ml} \)에서 \( 35.3 \% \)의 증식억제 효과를 보였고, \( 2.5 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \)에서는 \( 42.9 \% \)의 증식억제 효과를 보였으며, \( 7.5 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \) 에서는 \( 94.8 \% \)의 감소를 나타내었다.</p><h2>MCF-7세포의 형태변화</h2><p>Table 1 시료 중 MCF-7세포에 대한 증식억제작용이 확실한 시료들을 선택하여 그 작용 양상을 확인하기 위하여 형태학적관찰을 하였다.</p><p>1. Capsicum annuum L. leaf 2. Lactuca dentata Makino. var. flaviflora Makino 6. Equisetum arvense L. 10. Capsicum annuum L. fruit unripen만을 골라 행했다.</p><p>MCF-7세포는 배양병에 부착하여 성장하며, 이식배양 2일에 완전히 착상하여 배양병 바닥에 붙어 자라기 시작한다. Fig. 5.에서 보이는 바와 같이 MCF-7 세포는 선명한 형태를 갖추고, 계속해서 성장을 유지한다. 각 시료를 주입한 세포에서는 Fig. 6-9에서 보이는 바와 같이 시료에 따른 차이는 없으나 약4일 정도에서 일부세포를 제외하고는 탈락을 보이며 세포 형태 변화를 보이기 시작했다. 그리고 14-19일 정도에서 세포는 거의 파괴되었으며, 그 주변에 파쇄 된 세포파편들이 관찰되었다.</p><p>Fig. 6는 Capsicum annuum L. leaf 추출액 \( 10 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \)을 첨가한 것으로서, 이식 후 첫날부터 착상이 어렵고 3일부터는 세포탈락과 세포파괴가 일어나기 시작하여 6일째엔 모든 세포가 파괴되었다. Fig. 7는 Capsicum annuum L. fruit unripen 추출액 \( 10 \mu \mathrm{l} / \mathrm{ml} \) 을 첨가한 것으로서, 4일째에 세포변형이 관찰되고, 7일째에 세포가 탈락되고 파괴되기 시작했으며, 14일째엔 거의 모든세포가 파괴되었다. Fig. 8는 Lactuca dentata Makino. var. flaviflora Makino 추출액을 첨가한 것으로서, 4일째에 세포가 잘 자라지 못하고, 8일째에 파괴되기 시작하여 19일째엔 거의 모든 세포가 파괴되었다. Fig. 9는 Equisetum arvense L. 추출액을 첨가한 것으로서, 4일째에 세포성장은 지연되었으나 여전히 잘 자랐으며 일부세포에서 변형이 관찰되었다. 12일째에도 성장은 계속되었고 일부세포만이 변형을 보였으며 18일째에도 마찬가지였다.</p>