배양용액을 0.2µm 메브레인 필터로 멸균하여 biosurfactant 용액을 만들었다. LP03, TBM40-3 두 균주에 대한 Botrytis. cinerea의 항진균성은 야외 포장에서 부추에서 병이 진행되는 정도 및 생육 조사를 통해 확인했다. 두 균주는 최적 biosurfactant 생산온도에서 1일간 배양하여, 배양액의 \( \mathrm { OD } _ { 600 } \)에서 \( \mathrm { OD } \) 값이 1.5가 되도록 하였다.
<h2>유화활성 측정</h2> <p>배양용액을 \( 0.2 \mu \mathrm { m } \) membrane filter (Pall, USA)을 퉁과시켜 멸균시킨 것율 biosurfactant 용액으로 하였다. 여과액 \(2 \mathrm { ml } \) 를 마개 있는 시험관에 넣고, \( \mathrm { pH } 3.0 \) 의 \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium ace-tate 완충액 \( 2 \mathrm { ml } \)와 혼합한 용액에 \( 1 \mathrm { ml } \)의 기질을 넣고 2분간 최고속도로 vortex mixing 한 후 10 분간 정치한 후 \( 540 \mathrm { nm } \)에서의 현탁도를 측정하였다.</p> <h2>항 진균 활성 조사</h2> <p>LP03, TBM40-3의 Botrytis. cinerea에 대한 항진균성 조사는 실험실 내에서 potato dextrose agar (Difco, USA) 상에서 곰팡이에 대해 투명 환이 생기는 것으로 확인을 한 후 본 연구에서는 각각의 시료와 함께 positive control로 농약(살균제, 스미렉스 수화제 : \( 1 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \)) 을, negative control로 3차 증류수를 사용하여 부추에서 병이 진행되는 정도 및 생육 조사를 야외 포장에서 수행하여 항진균활성을 확인 할 수 있었다.</p> <h2>부추의 생육조사</h2> <p>LB-broth (Gellix, Korea)에 두 균주, LP03, TBM40-3을 접종하여 두 균주의 최적 biosurfactant 생산온도에서 200 \( \mathrm { rpm } \)으로 1일간 배양하여 \( \mathrm { OD } _ { 600 } \)에서 \( \mathrm { OD } \) 값을 \( \mathrm { UV } \) spectropho-tometer (UV-1601, UV-VISIBLE, SHIMADZU, JAPAN) 상에서 1.5가 되도록 배양하여 그 배양액을 실험 군으로 사용하였다. 대조구로는 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)의 농약과 증류수를 사용하여 각각 \( 50 \mathrm { ml } \)을 pot 당 7일 간격으로 엽면에 살포하였으며, 각각의 pot 당 10포기의 부추를 무작위로 선정하여 엽장 및 엽수를 측정하였다. 엽장 측정 시 한 포기당 가장 긴 잎(기준 엽)을 측정하였으며 엽수는 기준엽을 기준으로 나머지 잎을 상대적으로 3차례에 걸쳐 측정하였다. 측정된 값은 Microsoft \( ^ { Ⓡ } \) Excel 2002를 이용하여 평균값 및 표준편차를 구했으며 이를 그래프로 나타내었다.</p>