LED 파장별로 R. sphaeroides의 성장 변화를 측정하기 위해, \(\mathrm{450\sim850nm}\) 파장의 LED 5개를 5일간 조사하며 UV-VIS 분광광도계를 사용하여 \(\mathrm{660nm}\)에서 흡광도를 측정하여 균주의 성장을 확인했다. 건조체 질량당 ALA의 생산량을 측정하기 위해, 원심분리 tube에서 상층액을 제거하고 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 dry oven에서 24시간 건조시켰다. 그리고 정밀전자저울에서 무게를 측정한 다음, 원심분리되기 전 미리 질량을 재어둔 빈 원심분리 tube의 무게를 빼어 R. sphaeroides의 건조 질량을 산출하였다.
<h2>LED 파장에 따른 R. sphaeroides의 성장변화 측정</h2> <p>LED 파장별 R. sphaeroides의 성장 변화를 측정하기 위해 실험군으로는 각각 126개의 다이오드가 설치된 \( 450, \) \(550, \) \(650, \) \(750 \) 및 \( 850 \mathrm { ~nm } \) 파장의 LED를 5일간 조사하며 매 6시간 또는 12시간마다 배양액을 취한 후 UV-VIS 분광광도계(Libra S22, Biochrom, England)를 사용하여 \( 660 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도 \( \left ( \mathrm { OD } _ { 660 \mathrm { ~nm } } \right ) \)를 측정하여 균주의 성장을 확인하였다. 필요에 따라 배양 시료를 분광 광도계 측정 범위 내에 있는 밀도로 희석하였다. 정량적 평가를 위해 3회 반복 실험하여 최종 성장률을 결정하였다.</p> <h2>배양액의 ALA 농도 및 건조체 질량당 ALA 생산량 측정</h2> <p>배양액 시료 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 을 분취 후 15분간 \( 13,000 \mathrm { rpm } \) 으로 원심분리하여 상등액을 회수한 다음, Mauzerall과 Granick의 방법에 따라, 시료 \( 0.75 \mathrm { ~mL } \)에 \( 1 \mathrm { M } \) acetate buffer \( ( \mathrm { pH } ~4.6) \) \(1 \mathrm { ~mL } \) 및 acetyl acetone \( 40 \mu \mathrm { L } \) 을 혼합하고, 열 중탕으로 15분간 반응시킨 후 냉각시킨다. 상기용액 \( 1.75 \mathrm { ~mL } \) 와 Ehrilich's 시약(Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA) \( 1.75 \mathrm { ~mL } \) 을 넣고 잘 섞은 후 20분간 상온에서 방치시키고, 분광광도계를 이용하여 \( 556 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정한 후 ALA 표준곡선 \( \left ( \epsilon_ { 556 } =9,300 \mathrm { M } ^ { -1 } \mathrm { ~cm } ^ { -1 } \right ) \)을 이용하여 배양액에 포함된 ALA의 농도를 분석하였다. R. sphaeroides 건조체 질량당 ALA의 생산량을 측정하기 위해 상층액이 제거된 원심분리 tube를 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 dry oven에서 24시간 건조시킨 후 정밀전자저울(OHAUS, Parsippany, NJ, USA)에서 무게를 측정하여 원심분리되기 전에 미리 질량을 재어둔 빈 원심분리 tube의 무게를 빼어 R. sphaeroides의 건조 질량을 산출하였다. 필요에 따라 ALA의 농도는 ALA 표준곡선 선형 범위 내에 있는 농도로 희석하였다. 정량직 평가를 위해 3회 반복 실험하여 최종 농도를 결정하였다.</p>