제조된 DPPH 용액에 시료 용액을 혼합한 후 흡광도 감소를 측정하였고, 정상 흰쥐에서 채취한 간장으로 간 microsome획분 조제한 후 항산화 활성에 대해 조사하였다.
<h2>DPPH법에 dmks수소공여능 측정</h2> <p>DPPH (\( \alpha\), \(\alpha^{\prime}\)-diphenyl- \( \beta \)-picrylhydrazyl) 용액은 \(100 \mathrm{~mL} \) 에탄올에 DPPH \( 16 \mathrm{~mg} \)을 녹인 후 증류수 \( 100 \mathrm{~mL} \)를 혼합하여 Whatman filter paper No. 2에 여과시켜 만들었다. 이 용액 \( 5 \mathrm{~mL} \)에 \( 0.05 \% \) 및 \( 0.1 \% \)의 시료용액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 혼합한 후 30분간 방치시킨 후 분광광도계로 파장 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도 감소를 측정하였다.</p> <h2>간 microsome획분 조제 및 항산화 활성 조사</h2> <p>정상 흰쥐를 디에틸에테르로 가볍게 마취시켜 개복하여 적출한 간장을 냉각된 생리식염수로 즉시 씻고 여과지로 물기를 흡수시킨 다음 일정량 취해 \( 1.15 \%\) KCl-10\(\mathrm{~mM} \) phosphate buffer (\( \mathrm{pH} ~7.4\))를 가하여 homogenizer로 균질화 시켰다. 이 균질액의 일부를 homogenate 획분으로 하고 나머지 여액을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)로 설정된 냉각원심분리기로 \( 12,000 \mathrm{~rpm} \)에서 20분간 원심분리한 후 상등액을 4겹의 가아제로 여과하고, 여액을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)로 설정된 초원심분리기에서 \( 45,000 \mathrm{~rpm} \)으로 45분간 원심분리하여 침전된 획분에 \( 1.15 \%\) KCl-10\(\mathrm{~mM} \) phosphate buffer (\( \mathrm{pH} ~7.4\))을 일정량 가하여 microsome 획분으로 하였다. 항산화 활성은 Wong 등의 방법에 따라 \( 50 \mathrm{~mM} \) Tris-\(\mathrm{HCl}\) buffer (\( \mathrm{pH} ~7.5\)) \( 1.5 \mathrm{~mL} \)에 각 시료 용액 \( 0.2 \mathrm{~mL}(6 \mathrm{~mg} / \mathrm{mL}) \), 간 microsome 분흭 \( (1 \mathrm{~mL} \) 중 \( 1 \mathrm{~mg} \)의 단백질 함유) \( 0.1 \mathrm{~mL}, 0.1 \mathrm{~mM} \) ascorbate \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 및 \( 5 \mathrm{~mM} \) \( \mathrm{FeSO}_{4} ~0.1 \mathrm{~mL} \)를 차례로 가하여 반응액을 잘 혼합한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 shaking water bath에서 1시간 incubation 시켜 과산화를 유도시켰다. 이때 대조구는 시료를 첨가시키지 않고 위에서와 동일한 방법으로 하였다. 반응후 \( 3 \mathrm{~M} \) trichl-oroacetic acid와 \( 2.5 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \)의 혼합용액 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)를 가하고 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)으로 10분간 원심분리한 후 상징액 \( 1 \mathrm{~mL} \)를 취하여 \( 0.67 \%\) TBA \(1 \mathrm{~mL} \)를 가하여 혼합하고 끓는 물 속에서 30분간 가열하여 발색시켰다. 냉각 후 \( 533 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였으며, 지질과산화의 억제율은 녹차 추출물 무처리구의 흡광도에 대한 저해율(\(\%\))로 비교하였다.</p>