Racker의 방법을 활용하여 rubisco 활성을 측정하였다. UV-VIS spectrophotometer를 사용하여 RuBP가 PGA를 형성하고, 이것이 다시 GAP를 형성할 때 산화되는 NADH의 양을 측정하였다. 활성 측정 단위는 1 분당 1mM RuBP를 분해하는 효소의 양으로 정의하였다.
<h2>Rubisco의 활성 측정</h2> <p>Racker 의 방법으로 rubisco의 활성을 측정하였다. 1 \( \mathrm { M } \) Tris ( \( \mathrm { pH } \) 7.8), 0.006 \( \mathrm { M } \) NADH, 0.1 \( \mathrm { M } \) GSH, 0.5 \( \mathrm { M } \) \mathrm { KHCO } _ { 3 } \), 0.5 \( \% \) glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, 0.025 \( \% \) 3-phosphoglycerate kinase, 0.05 \( \% \) a-glycerophosphate dehydrogenase-triose phosphate isomerase, 0.025 \( \% \) ribulose bisphosphate, 0.2 \( \mathrm { M } \) ATP 및 0.5 \( \mathrm { M } \mathrm { MgCl } _ { 2 } \) 로써 조제한 측정용액 0.94 \( \mathrm { ml } \) 에 rubisco 용액 0.06 \( \mathrm { ml } \) 를 가하여 1 \( \mathrm { ml } \) 의 측정용액으로 하였다.</p> <p>UV-VIS spectrophotometer (Scinco S-100)를 이용하여 RuBP 가 PGA (3-phosphoglycerate)를 형성하고, 이것이 GAP (glyceraldehydes 3-phosphate)를 형성할 때 산화되는 NADH양을 340 \( \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였다. 1 unit는 1 분당 1 \( \mathrm { mM } \) RuBP 를 분해시키는 효소의 양으로 정의하였다.</p> <h2>Rubisco activase의 활성 측정</h2> <p>Robinson과 Portis 의 방법으로 rubisco activase의 활성을 측정하였다. 0.4 \( \mathrm { ml } \) reaction mixture [50 \( \mathrm { mM } \) tricine ( \( \mathrm { pH } \) 8.0) 20 \( \mathrm { mM } \) KCl, 5 \( \mathrm { mM } \\mathrm { MgCl } _ { 2 } \), 2.5 \( \mathrm { mM } \) ATP. 1 \( \mathrm { mM } \) PEP, 0.3 \( \mathrm { mM } \) NADH, 40 units/ \( \mathrm { ml } \) pyruvate kinase, 40 units / \( \mathrm { ml } \) lactate dehydrogenase]에 rubisco activase 용액 0.4 \( \mathrm { ml } \) 를 가하여 25 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분간 반응시킨 다음, 340 \( \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정한 후, ATP로부터 ADP의 생성율을 계산하여 활성을 나타내었다.</p>