혈소판은 내피세포 손상 후 노출된 collagen과 결합하여 1차 지혈 플러그를 형성하고 혈전생성을 시작한다. 열수 추출물과 ethanol 추출물의 당 함량은 EA 분획과 물 잔류물에서 각각 높게 나타났다. 이에 따라, 주박 추출물의 EA 분획에서 다양한 유용활성이 나타날 것으로 예상된다.
<h2>혈소판 응집 저해 활성</h2> <p>혈소판은 다양한 혈구세포와 함께 내피세포의 손상으로 노출된 collagen 등과 결합하여 1차 지혈 플러그(primary hemostatic plug)를 형성하여 혈전생성을 개시하는 중요한 세포이다. 고구마 소주 주박 시료의 혈소판 응집저해 활성은, 미세전극에 혈소판이 부착되어 응집됨에 따라 발생하는 전기 저항값의 변화를 측정하는 impedance 법을 사용하여 평가하였다. 인간 농축 혈소판(platelet rich plasma: PRP)은 적십자로부터 공급받았으며 PRP의 전처리 및 수세과정은 기존의 보고와 동일하게 하였으며, 수세된 혈소판은 suspending buffer (\( 138 \mathrm{~mM} \mathrm{~NaCl} \), \( 2.7 \mathrm{~mM} \mathrm{~KCl} \), \( 12 \mathrm{~mM} \mathrm{~NaHCO}_{3} \), \( 0.36 \mathrm{~mM} \mathrm{~NaH}{ }_{2} \mathrm{PO}_{4} \), \( 5.5 \mathrm{mM} \) glucose, \( 0.49 \mathrm{~mM} \mathrm{~MgCl}_{2} \), \( 0.25 \% \) gelatin, \( \mathrm{pH} 7.4 \))에 현탁하여 최종 혈소판 농도가 \( 5 \times 10^{8} / \mathrm{ml} \)이 되도록 조정하였다. 혈소판 응집은 Whole Blood Aggregometer (Chrono-log, USA)를 사용해 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 측정하였으며, \( 10 \mathrm{mM} \mathrm{CaCl}{ }_{2} 50 \mu \mathrm{l} \), suspending buffer \( 147.5 \mu \mathrm{l} \), 시료 \( 5 \mu \mathrm{l} \)가 포함된 반응 cuvette에 혈소판 \( 50 \mu \mathrm{l} \) 을 넣은 후 3 분 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 로 가온 후 응집유도제로 collagen \( (1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \) 을 \( 2.5 \mu \mathrm{l} \) 를 넣고 혈소판 응집을 측정하였다. 응집반응은 collagen 첨가 후 12분간 측정하였으며 amplitude, slope, area under를 측정하여 평가하였다. 이때, amplitude \( (\mathrm{ohm}) \) 는 혈소판에 응집유도제를 첨가하였을 때 일어나는 최대 응집정도를 나타내며, slope 는 응집유도제를 첨가한 직후부터 1 분 동안의 응집곡선의 기울기를 나타내며, area under는 전체적인 혈소판 응집 정도를 표시하는 것으로 전기저항 증가에 따른 slope 곡선의 하강면적을 나타낸다. 시료의 혈소판 응집 저해 활성은 시료 대신 DMSO를 첨가한 대조구와의 상대적인 area under 값의 비를 백분 출물의 polyphenol 함량은 \( 38.09 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \)으로 열수 추출물보다 1.88배 높았으며, 분획물들의 polyphenol 및 flavonoid 함량 분석 결과 EA 분획 >butanol 분획 >물 잔류물 >hexane 분획 순으로, flavonoid 함량은 butanol 분획 >물 잔류물 >hexane 분획 >EA 분획 순으로 나타났다. 반면 주박의 열수 추출물은 \( 61.54 \% \) 가 물 잔류물로, \( 33.26 \% \) 가 butanol 분획으로 이행되었으며, 지용성 hexane 분획은 ethanol 추출물의 \( 18.4 \% \) 와 대조적으로 아주 낮은 \( 0.52 \% \) 를 나타내었다(Table 3). 또한 열수 추출물의 분획물들의 polyphenol 함량은 EA 분획 >butanol 및 hexane 분획 >물 잔류물 순으로, flavonoid 함량은 hexane 분획 >butanol 분획 >물 잔류물 >EA분획 순으로 나타났다. 총 당 및 환원당 함량 평가결과 ethanol 추출물에서는 EA 분획 및 물 잔류물에서 높은 함량을 나타낸 반면, 열수 추출물에서는 물 잔류물 및 hexane 분획물에서 높은 함량을 나타내었다. 따라서 다양한 유용활성은 주박 추출물의 EA 분획에서 나타나리라 예상되었다.</p>