Burkholderia sp. IS-203은 해수에서 분리한 미생물로, 면역증강물질을 생산하기 위한 최적 배양조건은 배지조성, \( \mathrm{NaCl} \) 농도, 초기 \( \mathrm{pH} \), 온도, 통기량 순으로 진행되었다. 이 면역증강물질의 활성은 마우스 비장세포를 대상으로 3-4,5-dimethyl-thazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay 법을 이용하여 측정되었으며, 대조군의 세포 생존율에 대한 백분율로 표현되었다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>배지조성</h2><p>균주 배양을 위한 기본배지로서는 일본 Jarmarin Lab-oratory로부터 구입한 jamarin S 해수 1 L에 glucose \( 10 \mathrm{~g} \), peptone \( 0.5 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{NH}_{4} \mathrm{NO}_{3} ~0.0016 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{HPO}_{4} ~0.008 \mathrm{~g} \)을 첨가한 MMM(\mathrm{pH} 7.8)\)을 사용하였다.</p><h2>최적 배양 조건 검토</h2><p>해수에서 분리한 Burkholderia sp. IS-203의 면역증강물질 생산을 위한 최적 배양조건은 배지조성, \( \mathrm{NaCl} \) 농도, 초기 \( \mathrm{pH} \), 온도, 통기량 순으로 행하였다. 배지 조성은 해수에 탄소원, 질소원, \( \mathrm{NaCl} \) 등의 순서로 하였으며 배양 후 mi-togenic activity와 생육도 및 \( \mathrm{pH} \) 를 검토하였다. mitogenic activity는 MTT법을 이용하여 mouse의 splenocytes에 대한 세포증식능을 multiscanner를 이용하여 \( 540 \mathrm{~nm} \)에서 optical density를 측정하여 백분율로 나타내었고 면역증강물질을 생산하는 균의 생육도는 UV spectrophotometer를 이용하여 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 optical density를 측정하였다. 탄소원은 MMM에 각종 탄소원을 \( 1 \% \) 첨가하여 배양한 후 mitogenic activity가 가장 높은 탄소원을 선택하였으며 결정된 탄소원은 농도별로 첨가하여 mitogenic activity을 검토하였다. 질소원은 결정된 탄소원을 넣은 다음 MMM에서 peptone을 제거하고 각종 유기 및 무기질소원을 \( 1 \% \) 씩 첨가하여 배양한 후 탄소원과 같이 mitogenic activity를 검토하였다. 정해진 탄소원과 질소원을 넣은 후 해수의 \( \mathrm{NaCl} \) 농도를 달리하여 배양한 후 위와 같은 방법으로 검토하였다. 초기 \( \mathrm{pH} \)는 결정된 배지 조성에 \( 1 \mathrm{~N}-\mathrm{HCl} \)과\( 1 \mathrm{~N}-\mathrm{KOH} \)로 \( 3.0 \sim 10.0 \)까지 조절하여 초기 \( \mathrm{pH} \)가 면역증강물질 생산에 미치는 영향을 검토하여 최적 \( \mathrm{pH} \)를 결정하였다. 온도는 앞에서 정해진 배지 조건에 따라 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \sim 40^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 5^{\circ} \mathrm{C} \) 간격으로 배양하여 면역증강물질 생산을 위한 최적 온도를 설정하였다. 통기량의 영향은 \( 250 \mathrm{ml} \mathrm{flask} \)에 배지를 \(30-150\mathrm{ml}\) 씩 넣어 \( 180 \mathrm{rpm} \)으로 진탕배양 후 그 상등액으로 mitogen activity를 측정하여 결정하였다. 그리고 면역증강물질의 최대 생산시기는 정해진 최적 배양조건으로 배양하여 시간별로 활성을 측정함으로써 배양 최적시간을 결정하였다.</p><h2>활성 측정</h2><p>마우스 비장세포에 대한 면역증강물질 활성은 3-4,5-dimethyl-thazol-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay 법을 이용하여 측정하였다. 결과는 대조군의 세포 생존율에 대한 백분율로 나타내었다.</p>