전통적인 방법을 사용하여 맥문동의 포제를 제조하였다. 생 맥문동 20 kg을 전통곡주에 1시간 동안 잠기도록 침전시킨 후, \(300 \sim 400 ^ {\circ } \mathrm { C }\)의 가마솥시루에서 약 20-30분 동안 쪘다. 그 후 일정 시간 동안 음건하게 한 다음, 전통곡주를 더해서 완전히 흡수시킨 후, 같은 온도와 시간 동안 쪄서 말림을 9번 반복하여 포제 맥문동을 제조하였다. 이를 기반으로 10가지의 추출물인 LP-H, LP-E, LP-M, LP-M80, LP-M50, LP-H20, LP9M80-H, LP9M80-C, LP9M80-B, LP9M80를 추출하고, 이들을 최종 농도 \(200 \mathrm { ug } / \mathrm { ml }\)가 되도록 DMSO (sigma, USA)로 희석하여 실험에 사용하였다.
<p>맥문동의 포제는 \( 20 \mathrm { ~kg } \) 의 생맥문동을 약 1 시간 동안 전통곡주에 완전히 잠기도록 침전 시킨 후 \( 300 \sim 400 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 가마솥시루에서 수증기를 이용하여 약 20 30분 동안 쪘다. 찐 맥문동이 엉키지 않도록 잘 섞은 후 일정시간 동안 음건한 다음, 다시 전통곡주를 가하여 완전히 흡수시킨 다음 가마솥에서 동일한 온도와 시간동안 쪄서 말리기를 9회 반복하여 포제맥 문동을 만들었다.</p> <p>포제맥문동의 추출방법은 \( 1,000 \mathrm { ~g } \) 을 믹서기로 완전히 분쇄한 다음 \( 80 \% \) 메탄올 3 를 첨가하여 1 시간 동안 초음파 분해 (sonication)하여 용액을 회수하고, 남은 찌꺼기에 \( 80 \% \) 메탄올을 첨가하여 3회 반복하여 추출하였다. \( 80 \% \) 메탄올 추출물은 Whatamn No. 2 여과지로 필터하였으며, \( 80 \% \) 메탄올 추출물과 동량의 헥산을 분획여두에 부은 다음 흔들어서 실온에 방치하였다. 일정한 시간이 지난 후 헥산층을 회수하였으며,이와 동일한 방법을 3회 반복하여 헥산 추출물을 얻었다 (LP9M80-H). \( \mathrm { CHCl } _ { 3 } \) 와 부탄올 \( ( \mathrm { BuOH } ) \) 추출물도 헥산 추출물과 동일한 방법으로 분획하여 각각의 추출물 LP9M80-C와 \( \mathrm { LP } 9 \mathrm { M } 80- \mathrm { B } \) 를 얻었다. \( 80 \% \) 메탄올 추출물은 헥산, \( \mathrm { CHCl } _ { 3 } \) 및 부탄올 \( ( \mathrm { BuOH } ) \) 분획으로 추출한 다음 남은 액체를 회전농축기로 농축하였다(LP9M80).</p> <h2>맥문동 추출물의 준비</h2> <p>맥문동에서 추출한 10 가지의 추출물인 LP-H, LP-E, LP-M, LP-M80, LP-M50, LP-H20, LP9M80-H, LP9M80-C, LP9M80-B, LP9M80를 최종 농도가 \( 200 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \) 가 되도록 DMSO (sigma, USA)로 희석시켜 실험에 사용하였다.</p> <h2>세포배양</h2> <p>인슐린세포의 일종인 HIT-T15는 한국세포주은행에서 분양받아 계대배양하면서 사용하였다. 세포는 RPMI 1640 (invitrogen. Co, USA)배지에 10 \%인 FBS (invitrogen. Co, New Zealand 10091-148), \( 100 \mathrm { mu } / \mathrm { ml } \) penicillin, \( 100 \mathrm {\mu g } / \mathrm { ml } \) streptomycin을 첨가한 배지를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 온도와 \( 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \)가 공급되는 조건하에서 배양하였다.</p>