6일간 배양한 수지상세포에 OVA와 다양한 농도의 시료를 24시간 동안 처리하여 항원 제시 능력을 연구한 결과, 천궁과 당귀 열수 추출물이 T세포 증식을 유도함을 확인하였다. 이는 각각 1과 100 마이크로그램/밀리리터 농도에서는 T세포 증식을 유도하지 않으나, 10 마이크로그램/밀리리터 농도에서 OVA만 첨가한 대조군에 비해 유의미한 T세포의 증식 반응을 보였음을 시사한다.
<h2>유세포분석기(Fluorescence Activated Cell Sorter) 분석</h2> <p>수지상세포를 6일 동안 배양한 다음, OVA \( (1 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } ) \) 와 시료를 농도별로 처리하여 24 시간 배양한 후 회수하였다. 회수한 모든 수지상세포 \( \left (5 \times 10 ^ { 5 } \right . \) 개)는 anti-CD16/CD32 (Fc \( \mathrm { F } \) III/II Receptor; 2.4G2)로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 blocking하고 washing 용액(1 \% \( \mathrm { FCS } \) 와 \( \left .0.1 \% \mathrm { NaN } _ { 3 } / \mathrm { PBS } \right ) \) 으로 세척한 다음, \( \mathrm { CD } 40 \) 은 PE-conjugated anti-CD40 mAb로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 서 30 분간 염색하였고, \( \mathrm { MHC } \) class II와 \( \mathrm { CD } 86 \) 은 anti- \( \mathrm { MHC } \) class \( \mathrm { D } \), anti-CD86 \( \mathrm { mAb } \) 로 먼저 처리한 다음, 다시 anti-rat IgG-PE로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분 염색한 후 washing 용액으로 세척하였다. 일차 항체로 처리한 모든 세포는 마지막으로 FITC-conjugated anti-CD11c mAb로 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30분간 염색한 후 세척한 다음에 유세포분석기(Epics XL, COULTER, USA)로 분석하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>여섯 가지 한약재가 수지상세포의 항원제시 능력에 미치는 영향</h2> <p>수지상세포는 항원을 섭취하여 \( \mathrm { T } \)세포에 제시함으로써 \( \mathrm { T } \)세포의 증식을 유도한다. 따라서 6가지 한약재인 황기, 백작약, 천궁, 가자, 당귀, 어성초 열수 추출물이 수지상세포의 항원제시 능력에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 \( \mathrm { T } \)세포주의 증식 반응을 측정하였다. 먼저, 6일간 배양한 수지상세포를 96 well micro-plate에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 분주하고 대조군과 항원인 OVA \( 1 \mathrm { mg } / \) \( \mathrm { ml } ) \), 그리고 황기, 백작약, 천궁, 가자, 당귀, 어성초 \( (1,10,100 \) \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 를 첨가하여 24 시간 배양한 다음, \( \mathrm { T } \) 세포가 한약재에 의한 직접적인 영향을 받지 않도록 plate를 원심 침전시켜 washing한 후, T세포주를 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 분주하여 72시간 배양한 후 증식 반응을 측정하였다. 실험 결과, 6가지 한약재 중 천궁과 당귀 열수 추출물이 수지상세포의 항원 제시 능력에 영향을 미쳐 \( \mathrm { T } \) 세포의 증식을 유도하는 것으로 나타났다. 천궁과 당귀는 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 과 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서는 수지상세포의 항원제시 능력에 영향을 미치지 않아 \( \mathrm { T } \) 세포의 증식을 유도하지 않았지만, \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서는 OVA만 첨가한 대조군에 비해 \( \mathrm { T } \) 세포의 증식 반응을 유도하는 것으로 나타났다(Fig. 1).</p>