막걸리 시료로부터 genomic DNA를 추출하기 위해 phenol extraction법을 따라 실험하였다. 그 결과, 전기영동으로 DNA를 확인할 수 있었다. 더불어 막걸리 시료의 당도 및 알코올 함량 측정이 이루어졌으며, 연구결과 자료는 기술 통계치 산출 및 유의성 검증을 거쳤다.
<h2>당도 측정</h2> <p>막걸리 시료의 당도는 당도 측정기(Wine Refractometer HI 96811, Hanna Instrument, RI, USA)를 이용하여 측정하였다.</p> <h2>알코올 함량 측정</h2> <p>막걸리 시료의 알코올 함량은 알코올 측정기(Portable Refractometer)를 이용하여 측정하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>연구결과로 얻어진 자료는 Macintosh용 통계 프로그램인 Aabel 2 (Gigawiz Ltd Co., USA)을 사용하여 하위그릅 각각의 기술 통계치(mean, SD) 를 산출하였다. 분산분석(ANOVA) 후 Fisher's PLSD의 다중범위 유의성 검증을 실시하였고, \( p<0.05 \) 수준에서 유의성을 검증하였다.</p> <h2>총 genomic DNA의 추츨</h2> <p>막걸리 시료로부터 총 genomic DNA의 추출은 phenol extraction법에 의거하여 수행하였다. 막걸리 시료를 원심분리 \( (3,000 \times g, 30 \mathrm{~min})\) 한 후 상층액을 제거하고 lysis buffer \(( 50 \mathrm{mM}\) Tris-base, \( 20 \mathrm{mM}\) EDTA, \( 400 \mathrm{mM} \mathrm{~NaCl}, 0.75 \mathrm{M} \) sucrose) \( 1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하였다. \( -80^{\circ} \mathrm{C} \) 와 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 의 water bath에서 각각 2분씩 총 3회 처리하여 세포벽을 파괴하였다. 여기에 \( 10 \% \) sodium dodecyl sulfate (SDS) 용액 \( 100 \mu 1 \) 를 첨가한 후 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 15분 간 반응시켰다. 시료에 RNase A\( (10 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) 10 \mu \mathrm{l} \) 를 첨가한 후 상온에서 5분간 반응시킨 후 원심분리 \( (10,000 \times g \), \( 5 \mathrm{~min}) \) 하여 상등액 \( 750 \mu \mathrm{l} \) 를 취하였다. 이 상등액에 동량의 phenol:chloroform:isoamyl alcohol (25:24:1) (Bioneer Co., Korea)을 첨가하여 조심스럽게 혼합한 뒤 원심분리 \( (10,000 \times g \), \(5 \mathrm{min} \) )하고 상등액 \( 600 \mu \mathrm{l} \)를 취하였다. 이 상등액에 다시 동량의 phenol:chloroform:isoamyl alcohol (25:24:1)을 첨가하여 조심스럽게 혼합한 뒤 원심분리 \( (10,000× \mathrm{g}, 30 \mathrm{~min}) \) 하고 상등액 \( 500 \mu \mathrm{l} \) 를 취하였다. 이 상등액에 동량의 chloroform:isoamyl alcohol (24:1)를 넣고 원심분리 \( (10,000 \times g .5 \mathrm{~min}) \) 하고 상등액 \( 400 \mu \mathrm{l} \) 를 새 튜브에 옮기고 \( 100 \% \) cold ethanol \( 1 \mathrm{ml} \) 와 \( 3 \mathrm{M} \) sodium acetate \( 40 \mu \mathrm{l} \) 를 첨가하여 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 200분 이상 침전 과정을 수행하였다. 침전과정을 거친 시료를 원심분리 \( (10,000 \times g, 5 \mathrm{~min}) \) 하여 상등액을 제거하고 \( 70\% \) cold ethanol \( 1 \mathrm{ml} \) 을 사용하여 세척한 후 상온에서 건조하였다. 최종적으로 \( \mathrm{DNA} \) 를 \( 100 \mu \mathrm{l} \) 의 증류수에 용해시킨 후 \( 0.3 \% \) agarose gel을 이용한 전기영동으로 확인하였다.</p>