눈조직에서 발현되는 LDH eye-specific \( C_{4} \) 동위효소에 대해 연구하기위해, 눈조직에서 발현되는 \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~B}_{4} \) 및 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소를 확인하였다. 4, 5, 9월에 채집된 파랑볼우럭 눈조직의 LDH활성을 측정하였다.9월에 채집한 파랑볼우럭 눈조직의 LDH 활성은 30.4로 4월의 9.45에 비해 크게 증가되었다. CS의 활성은 5월에 0.53 units로 4월의 활성보다 감소되었지만, 9월에 0.9 units로 4월의 활성과 유사하였다. 따라서 LDH 가 CS 보다 증가폭이 컸으므로 혐기적대사가 증가된 것이었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Native-polyacrylamide gel 전기영동: Western blotting 및 면역침강반응</h2> <p>눈조직에서 발현되는 LDH eye-specific \( C_{4} \) 동위효소에 대해 연구하기위해 눈조직에서 발현되는 \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~B}_{4} \) 및 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소를 확인하였다. 파랑볼우럭 눈조직 추출물을 native-PAGE한 후 Western blotting하여 양극 쪽에 LDH eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소를 확인하였다. 또한 눈조직에 LDH \(\mathrm{A}_{4} \)에 대한 항혈청을 반응시켜 면역침강반응 후 native-PAGE를 실시한 결과 \( \mathrm{A}_{4} \) 밴드는 확인되지 않고 \( \mathrm{A}_{2} \mathrm{~B}_{2} \) 는 흐리게 나타났으며, LDH \(\mathrm{B}_{4} \)에 대한 항혈청을 반응시킨 경우 \( \mathrm{B}_{4} \) 밴드가 나타나지 않았고 \( \mathrm{A}_{2} \mathrm{~B}_{2} \) 활성이 흐려졌으며, LDH eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \)에 대한 항혈청을 사용하여 반응시킨 결과 \( \mathrm{A}_{4} \)와 이질동위효소, \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소는 나타나지 않고 \( \mathrm{B}_{4} \) 동위효소만 확인되어 LDH eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소가 \( \mathrm{B}_{4} \)보다 \( \mathrm{A}_{4} \) 동위효소에 유사한 것으로 확인되었다.</p> <p>파랑볼우럭과 큰입우럭 눈조직의 LDH 전기영동상은 음극 쪽으로 부터 \( \mathrm{B}_{4}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{~B}_{2}, \mathrm{~A}_{4}, \mathrm{~A}_{3} \mathrm{C}, \mathrm{C} \) hybrid 및 양극 쪽의 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소가 나타났고, \( \mathrm{A}_{3} \mathrm{~B} \)와 \( \mathrm{AB}_{3} \) 동위효소가 나타나지 않은 것이 유사하였으나, 파랑볼우럭의 LDH \(\mathrm{C} \) hybrid의 발현이 큰입우럭보다 약하게 나타나 차이를 보였다. 그리고 풀망둑과 쥐노래미 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \)의 역학적 성질이 \( \mathrm{B}_{4} \)보다 \( \mathrm{A}_{4} \)에 유사하다는 보고와도 일치하였다. 쥐노래미 LDH는 \( \mathrm{A}_{4} \) 동위효소가 가장 음극에 나타나 차이를 보였으나 \( \mathrm{A}_{3} \mathrm{~B}, \mathrm{AB}_{3} \)가 나타나지 않은 것은 동일하여, 5가지 동위효소가 나타나는 가물치에 비해 저산소에 적응된 것으로 보였다. 그리고 파랑볼우럭과 큰입우럭 눈조직의 미토콘드리아 LDH도 \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{~B}_{2}, \mathrm{~B}_{4}, \mathrm{C} \) hybrid, \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소가 모두 확인되었으므로 미토콘드리아에서 LDH에 의한 에너지 대사가 활발하게 이루어지는 것으로 사료된다.</p> <h2>세포기질 LDH, 미토콘드리아 LDH 및 CS의 활성</h2> <p>4, 5, 9월에 채집한 파랑볼우럭 눈조직의 LDH 활성을 측정하였다. 9월에 채집한 파랑볼우럭 눈조직의 LDH 활성은 30.4 \( \mathrm{units} \)로 4월의 9.45 \( \mathrm{units} \)에 비해 크게 증가되었다. CS의 활성은 5월에 0.53 \( \mathrm{units} \)로 4월의 활성보다 감소되었지만 9월에 0.9 \( \mathrm{units} \)로 4월의 활성과 유사하였다. 따라서 LDH 가 CS 보다 증가폭이 컸으므로 LDH CS는 9월에 33.78로 증가되어 혐기적 대사가 증가된 것으로 확인되었다. 또한 단백질양이 9월에 \( 48.3 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \)이므로 가장 많이 증가되었다. 파랑볼우럭(9월)의 눈조직 추출액의 MAOX 활성은 0.35 \( \mathrm{units} \)였으나, 미토콘드리아 분획 추출액에서는 MAOX가 0.43 \( \mathrm{units} \)였으므로 미토콘드리아가 분리되었음이 확인되었으며, 눈조직 미토콘드리아 분획의 LDH 활성이 1.38 \( \mathrm{units} \)였고, LDH 의 비활성은 1.29 \( \mathrm{units} / \mathrm{mg} \)였다. 그리고 큰입우럭 눈조직의 미토콘드리아 LDH 활성은 0.55 \( \mathrm{units} \)였고, LDH의 비활성은 5.00 \( \mathrm{units} / \mathrm{mg} \)였다. 따라서 파랑볼우럭 미토콘드리아 LDH 활성은 세포기질 LDH 활성의 \( 4.54 \% \)였고, 큰입우럭의 경우는 \( 4.7 \% \)로 나타났으므로 미토콘드리아에서 LDH 에 의한 젖산의 대사가 이루어지는 것이 확인되었다. 파랑볼우럭(9월)의 눈조직 추출액의 활성은 풀망둑 눈조직 LDH 53.25 \( \mathrm{units} \), CS 8.35 \( \mathrm{units} \) 가물치 눈조직 LDH3.5 \( \mathrm{units} \), CS10.9 \( \mathrm{units} \), 쥐노래미 눈조직 LDH 10.90 \( \mathrm{units} \)와 비교하면 풀망둑 LDH 활성 보다 낮지만 쥐노래미와 가물치의 LDH 활성보다 높게 확인되었고, CS는 풀망둑과 가물치보다 낮아 파랑볼 우럭과 큰입우럭 눈조직의 경우 혐기적 대사 비율이 높은 것으로 확인되었다.</p>