Leuconostoc sp. strain YSK는 5% 슈크로즈가 포함된 1,000 ml MMY에서 30°C에서 24시간 동안 배양된 후 50 ml 배양 시험관에 20개로 나누어 담고, 원심분리기를 사용하여 상층액과 균체를 분리하여 균체량을 측정하였다. 또한, 발효 과정 중 슈크로즈의 양은 TLC와 densitometry 방법을 사용하여 분석하였다.
<h2>분석 방법</h2> <p>균체량의 측정은 Leuconostoc sp. strain YSK를 5% \( ( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 슈크로즈를 포함한 \( 1,000 \mathrm { ml } \) MMY를 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 동안 배양 한 후 멸균된 \( 50 \mathrm { ml } \) 배양 시험관 튜브에 20개로 나누어 옮겨 담은 후 원심분리기를 사용하여 상층액과 균체를 분리 하였다. 분리된 균체들을 하나의 배양 시험관 \( 50 \mathrm { ml } \) 에 모으고, 균체를 완충용액을 이용하여 3차례 세척 하였다. 세척된 균체를 완충용액을 이용하여 단계별로 희석을 하였다. 정량의 희석된 균체 용액으로부터 일정량을 알루미늄 그릇에 넣고 건조기를 이용하여 건조 균체량을 측정하였다. 희석된 균체용액에서 건조 균체량의 측정과 같은 비율의 균체용액을 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 흡광도를 측정을 하였다. 건조 균체량과 흡광도를 이용하여 표준곡선을 그리고 발효 중 균체량 측정하였다.</p> <p>덱스트란 양은 gravimetric method를 이용하여 측정을 하였다. 배양 시험관 \( (50 \mathrm { ml } ) \) 을 잘 세척을 한 다음 건조기에서 건조 후 무게를 측정하였다. 배양 시험관에 일정양의 배양액</p> <p>\( (20 \mathrm { ml } ) \) 를 읆기고 원심분리를 하여 균체를 제거 하였다. 상등액을 무게가 측정된 배양 시험관에 옮기고, \( 40 \mathrm { ml } \) 알코올 \( (100 \%) \) 를 첨가하여 덱스트란을 침전시켰다. 침전된 덱스트란이 들어 있는 시험관을 진공건조기에서 건조를 한 후 무게를 측정하여 시험관의 무게를 뺀 후 덱스트란 양을 계산하였다. 발효 공정 중 슈크로즈 양은 TLC (thin layer chromatog-raphy)에 의하여 분석을 하였다. TLC의 전개 용매는 \( 85 \mathrm { ml } \) Aceto itrile, \( 20 \mathrm { ml } \) Ethyl Acetate, \( 20 \mathrm { ml } \) 1-Propa \( 101,15 \mathrm { ml } \) Water의 비율로 혼합을 하여서 사용하였으며, 발색 시약은 \( 5 \% \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 를 알코올에 혼합하여 제조 사용하였다. 사용된 슈크로즈의 양은 densitometry 방법에 의하여 분석을 하였다(Scion Image, Frederick, Maryland, USA).</p>