실험적 연구는 Acori graminei Solander의 뿌리줄기인 Acori graminei rhizoma(AGR)를 활용하였다. AGR은 실험을 위해 한의원에서 입수하였다. AGR 용액을 준비하기 위해 \(( 2 \mathrm{~g}) \)의 AGR을 \( 20 \mathrm{ml} \)의 증류수와 혼합하였다. 혼합물을 균질화하고 실온에서 4시간 동안 유지한 다음, 주기적으로 진탕하면서 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 18시간 동안 인큐베이션하였다. 건조물 함량은 추출물의 \( 1 \mathrm{ml} \) 튜브 3개를 동결 건조하여 계산했습니다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>약재</h2><p>실험에 사용된 생약제 석창포(Acori graminei rhizoma. AGR)는 창포(Acori graminei Solander)의 뿌리줄기로서 대한 약전 및 대한약전 외 한약 규격주해에 근거하여 동국대학교 부속 한방병원에서 구입하였다.</p><h2>석창포의 물추출액 제조</h2><p>AGR \(( 2 \mathrm{~g}) \) 에 \( 20 \mathrm{ml} \) 의 증류수를 넣어 균질화하고 상온에서 \(4\) 시간, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 18 시간 진탕하였다. 이를 \( 15,000 \mathrm{rpm} \) 에서 15분간 원심분리하여 상등액을 얻괴 여과멸균 \( ( 0.45 \mathrm{um}) \) 한 후 소량씩 분주하여 \( -20^{\circ} \mathrm{C} \) 에 보관하였다. 건조물의 량은 \( 1 \mathrm{ml} \) 추출액 3 튜브를 동결건조한 후 평균치를 사용하였다.</p><h2>신경세포 배양</h2><p>임신 18 일(embryonic day \( 18: \mathrm{E}_{18} \) )의 Sprague-Dawley계 흰쥐 대뇌피질신경세포를 Brewer 등의 방법에 따라 배양하였다. 즉, \( \mathrm{E}_{18} \) 의 횐쥐를 dry ice가 들어있는 통속에 \( 3 \sim 5 \) 분간 넣어 마취하고, 자궁을 가른 후 횐쥐 태아를 취하고 뇌를 잘라내었다. 대뇌피질 조직을 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5분간 \( 0.25 \% \) trypsin으로 처리하고 \( 1 \mathrm{mM} \) sodium pyruvate와 \( 10 \mathrm{mM} \) HEPES ( \( \mathrm{pH} \) 7.4)가 첨가된 HBSS용액(Invitrogen Life Technology) \( 5 \mathrm{ml} \)로 4~5희 세척하여 반응을 중단시켰다. 조직을 \( 1 \mathrm{ml} \mathrm{Hank's} \)용액으로 옮기고 끝을 불에 달구어 구멍을 작게 한 pasteur pipette으로 6 7회 통과시켜 신경세포를 분산시켰다. 이 후 분산된 세포를 모으고 세포수를 측정한 다음 약 \( 1,500 \mathrm{cells / mm^2} \)되도록 B27을 첨가한 plating neurobasal media (Invitro-gen Life Technology) \( (100 \mathrm{ml} \) neurobasal, \( 2 \mathrm { ml} \) B27 supple-ment, \( 0.25 \mathrm{ml} \) glutamax \( \mathrm{I}, 0.1 \ mathrm{ml} 25 \mathrm{mM} \) glutamate, \( 0.1 \mathrm{ml} \) \( 25 \mathrm{mM} \) 2-mercaptoethanol) 에 접종하여 5% \( \mathrm{CO}_{2} \)배양조에서 배양한 다음 2~3일 간격으로 배양액을 feeding neurobasal media( 100 ml neurobasal, \( 2 \mathrm{ml} \) B27 supplement, \( 0.25 \mathrm{ml} \) glutamax I)로 \( 1 / 3 \)씩 교환하였다.</p>