누로와 대계 추출물의 항균력을 filter disc를 사용하여 측정한 결과, 대계 추출물이 M. smegmatis 및 M. fortuitum에 대한 항균력을 가지고 있음을 확인하였고, 엉겅퀴의 건조된 잎에서 genomic DNA를 추출하여 PCR template로 사용할 수 있었으며, 따라서 대계(엉겅퀴)의 추출물이 mycobacteria에 대한 항균력을 가지고 있음을 확인함으로써 새로운 항결핵 약제의 후보물질이 발견되었음을 알 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>식물 추출물의 anti-mycobacterial 활성 측정</h2> <p>누로와 대계 추출물을 여러 가지 다른 농도로 희석하여 M. smegmatis 및 M. fortuitum에 대한 항균력을 filter disc를 사용하여 측정하였다. 그 결과, 누로 추출액은 희석여부와 관계없이 inhibition zone이 전혀 관찰되지 않았다. 그러나 대계의 희석하지 않은 추출액의 경우는 inhibition zone의 직경이 약 \( 14 \mathrm{~mm}\), 1/2로 희석한 경우는 약 \( 12 \mathrm{~mm} \), 그리고 1/4로 희석한 경우는 약 \( 10 \mathrm{~mm} \)로 나타났다. 즉, 대계 추출액의 경우는 농도에 따라서 inhibition zone의 크기가 정비례하는 것을 관찰할 수 있었고, 따라서 대계 추출액이 M. smegmatis 및 M. fortu- itum에 대한 항균력을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 대계 추출물이 함유되지 않은 control에서는 inhibition zone이 전혀 관찰되지 않았다. 누로와 대계 추출물이 몇 가지 미생물들에 대해서 항미생물활성을 가지고 있다는 보고를 확인하고 본 연구를 시작하였으나, mycobacteria에 대한 항균력은 대계의 추출물에서만 확인이 되었다. 본 연구에서 대계의 추출물이 anti-mycobacterial activity를 지닌 것으로 밝혀졌기 때문에, 새로운 항결핵 약제의 후보물질이 발견되었다고 본다.</p> <h2>엉겅퀴로부터의 genomic DNA 추출</h2> <p>대계(엉겅퀴)의 추출물이 mycobacteria에 대한 항균력을 가지고 있음을 확인하였기 때문에, 본 연구에 사용된 엉겅퀴의 계통분류학적 분류를 위하여 ITS1, 5.8S rRNA 및 ITS2 DNA 염기서열을 밝혀서 사용하고자 하였다. 따라서 PCR의 template로 사용하기 위하여 엉겅퀴의 건조된 뿌리로부터 ge-nomic DNA를 추출하려 시도하였다. 그러나 여러 가지 방법들을 시도해 보았으나 평균 크기가 \( 1 \mathrm{~kb} \)를 넘는 DNA를 추출 할 수가 없었다. 따라서 엉겅퀴의 건조된 잎을 사용하여 ge-nomic DNA를 추출하려 시도하였는데, 이 경우는 평균 분자량이 \( 10 \mathrm{~kb} \)를 훨씬 넘는 DNA를 성공적으로 얻을 수 있었다.</p> <h2>PCR을 통한 엉겅퀴의 ITS1, 5.8S rRNA, ITS2의 증폭 및 그 염기서열 분석</h2> <p>엉겅퀴의 genomic DNA를 사용하여 PCR을 수행한 후, 그 산물을 agarose gel로 분석한 결과, 대략 \( 700 \mathrm{~bp} \) 정도의 PCR 산물을 확인할 수가 있었다. 이와 같이 얻어진 PCR 산물을 pBluescript plasmid에 cloning하여서 DNA se-quencing을 수행하였다. 그 결과 \( 733 \mathrm{~bp} \)의 염기서열이 밝혀졌고, 이 염기서열을 GenBank에 등록하였다(accession number GU188570). 그 결과, 한국에 자생하는 엉겅퀴로서는 최초로 본 연구에 사용된 엉겅퀴의 ITS1, 5.8S rRNA 및 ITS2의 염기서열이 GenBank에 등록되게 되었다. 진핵생물들의 종(species) 수준에서의 분자유전학적(phylogenetic) 분류를 위해서는 ITS1과 ITS2의 염기서열을 주로 사용하는데, 현재 국내의 엉겅퀴의 경우에는 이러한 자료가 알려져 있는 것이 없기 때문에 국내 자생종들과의 추가적인 비교분석은 수행할 수가 없었다.</p>