에스트로겐 수용체(ER)와 CAR, SXR, PPARr와 같은 제노바이오틱 핵 수용체간의 상호작용을 살펴보기 위해 Hep G2세포에서 ER 전사활성의 변화를 조사하였다. 동시에 ER과 CAR, SXR, PPARr을 transfection 시키고, \( 10 \mathrm{nM} \) 의 moxestrol을 처리한 결과, 4ERE-tk-luciferase의 활성이 각각 100배 이상 증가하였다. 그러나 각각의 수용체의 ligand인 TCPOBOP, rifampicin, prostaglandin는 4ERE-tk-luciferase의 활성에 영향을 주지 않았다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Hep G2 세포에서의 ER과 CAR, SXR, PPARy cross-talk</h2> <p>Estrogen receptor (ER)와 xenobiotic orphan nuclear receptors인 CAR, SXR, 그리고 PPARr사이에 기능적인 상호작용 (cross-talk)이 있는지를 알아보기 위하여, 먼저 이전에 보고된 바와 같이 Hep G2세포에서 일어나는 xenobiotic 핵 수용체에 의한 ER 전사활성의 변화를 조사함으로써 실험조건의 적합성을 확인함과 동시에 유방암세포에 대한 실험대조군으로 비교하는 데 사용하고자 하였다. 약 95%의 confluency에 도달한 Hep G2세포에 human ER 포유동물 발현plasmid, 각각의 xenobiotic orphan nu-clear receptor 발현plasmid, 그리고 synthetic 4ERE-tk-luciferase reporter plasmid를 transiently cotransfection하였다. 간세포에서는 endogenous estrogen이 대사과정을 거쳐 쉅게 활성이 소실되기 때문에 이를 방지하기 위하여 대사에 저항성이 있는 moxestrol을 estrogen receptor에 대한 ligand로 사용하였다. Fig. 1에서 보는바와 같이, ER과 CAR expression plasmid를 Hep G2세포에 동시에 trans-fection시켰을 때, \( 10 \mathrm{nM} \) 의 moxestrol을 처리함으로써 estrogen receptor의 매개에 의한 4ERE-tk-luciferase의 활성이 ethanol과 비교하여 100배 이상 증가되었다 (Fig. 1A). 이와는 달리, CAR에 대한 agonist인 TCPOBOP를 처리하였을 때는 luciferase의 활성이 전혀 중가되지 않았다. 따라서, 본 실험의 assay system에서 TCPOBOP는 \( \mathrm{hER} \alpha \) 에 대한 ligand가 아널 뿐 아니라 CAR가 ERE (Estrogen Response Element)를 함유한 promoter의 활성을 촉진하지 못함을 의미한다. 한편, TCPOBOP와 moxestrol을 동시에 처리하였을 때는 TCPOBOP가 moxestrol에 의해 증가된 ER transactivaton의 효과를 \( 70 \% \) 이상 억제하였다 (Fig. 1A). ER과 SXR expression plasmid를 동시에 transfection 시켰올 때, \( 10 \mathrm{nM} \) 의 moxestrol에 의해서는 ER trans-activation에 의한 luciferase의 활성이 100배 이상 증가되었지만 SXR의 ligand인 rifiampicin에 의해서는 4ERE-tk-luciferase의 할성에 영향을 주지 않았다 (Fig 1B). 따라서, rifampicin도 \( \mathrm{hER} \alpha \) 에 대한 ligand로서 기능을 하지 않을 뿐 아니라 SXR이 ERE (Estrogen Response Element)를 함유한 promoter의 할성을 속진하지 못함을 의미한다. 하지만, rifampicin과 moxestrol을 동시에 처리하였을 때는 rifampicin에 의한 SXR의 activation의 걸과로 ER-mediated transactivation을 약 \( 30 \% \) 억제하였다 (Fig. 1B). CAR와 SXR의 transfection 결과에서와 유사하게, ER과 PPAR \( \gamma \) expression plasmid를 동시에 transfection 시켰을 때에도, \( 10 \mathrm{nM} \) 의 moxestrol에 의혜서는 ER transactivation에 의한 luciferase의 활성이 100배 이상 증가되었지만 PPAR \( \gamma \)의 ligand인 prostaglandin에 의해서는 4ERE-tk-luciferase의 활성에 영향을 주지 않았다 (Fig 1C). 따라서, prosta-glandin이 hER \( a \) 에 대한 ligand로서 기능을 하지 않을 뿐 아니라 PPAR \( y \) 가 ERE (Estrogen Response Element)를 함유한 promoter의 활성을 촉진하지 못함을 의미한다. 하지만 CAR와 SXR과는 달리, Prostaglandin에 의한 PPAR \( \gamma \)의 activation이 ER-mediated transactivation에는 거의 영향을 미치지 못하였다 (Fig. 1C). 그러므로, Hep G2세포에 있어서 조사된 세 가지 xenobiotic nuclear. receptor 중 CAR가 moxestrol에 의해 활성화 된 ER의 \( 4 \mathrm{ERE} \)-tk-luciferase reporter transactivation을 가장 현저히 억제하였으며, SXR에 의해서도 ER과의 기능적 cross-talk 작용에 의해 ER transactivation을 감소시켰다. 반면, 이전에 보고된 바와 일치하게, ligand에 의해 환성화 된 \( \operatorname{PPAR} \gamma \)은 ER transactivation에 영향을 미치지 않았다.</p>