전남 여천의 해안 10여곳, 원유 선착장과 인근의 유류오염 지역으로부터 해수를 채취하여 crude oil 분해능력을 가진 미생물을 분리하기 위해 C-배지에 crude oil과 해수를 첨가하여 37\(^\circ \mathrm{C}\) 200rpm에서 배양하여 단일 콜로니를 얻고, LB 액체배지에 접종하여 7일간 배양하여 crude oil 분해능을 가진 수십여 종의 균주를 분리하였다. 그 중 KCL-2 균주는 그램 염색법, 형태학적 관찰 및 생화학적 실험을 통해 Klebsiella sp. KCL-2로 명명되었고, 우리나라 및 외국의 유류 오염 지역에서 주로 분리되고 있는 균주와는 다른 종으로 판명되었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주의 분리</h2> <p>전남 여천의 해안 10여곳, 원유 선착장과 인근의 유류오염 지역으로부터 해수를 채취하여, crude oil 분해능을 가진 미생물을 분리하기 위하여 탄소원이 결핍된 C-배지 \( 200 \mathrm { m } \ell \) 에 crude oil \( 1 \% \) 및 해수가 \( 1 \% \) 되게 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 200 \) \(rpm \)으로 진탕배양한 후, crude oil 분해능을 가진 분해균이 생육하는 것을 확인하였다. 배양액의 일부를 crude oil \( 1 \% \) 를 함유한 새로운 C-배지에 첨가한 실험을 3회 반복하였다. 이렇게 하여 얻어진 균주를 LB 고체배지상에 도말하여 단일 콜로니를 얻었다. 이 단일 콜로니들을 LB 액체배지에 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 전배양시킨 후, crude oil \( 1 \% \) 를 함유한 C-배지에 전배양 한 균주를 \( 2 \% \) 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 7일간 진탕배양시켰다. 이때 대조구로 C-배지에 crude oil \( 1 \% \) 만을 첨가 시킨것과, \( C-배지에 \( 2 \% \) 균주만을 첨가시킨 것을 두었다. 대조구와 함께 7일간 배양 시킨 후, crude oil 분해능을 가진 수십여 종의 균주를 분리하였으며, 이중에서 분해능이 강력한 KCL-2 균주에 대하여 계속하여 실험하였다.</p> <h2>균주의 동정</h2> <p>선별된 KCL-2의 동정을 위하여 그램 염색법, 형태학적 관찰 및 생화학적 실험을 수행한 결과를 Table 1에 나타냈다. 그램 염색법에 의해서는 그램 음성균으로 확인되었으며, 전자현미경 관찰에서는 활발한 운동성을 가진 균주로 확인되었다. 생화학적 실헙은 미생물 동정 kit인 API 20NE Kit를 이용하여 Bergey's manual of systematic bacteriology에 준하여 동정한 결과, Klebsiella sp.으로 판명되어 Klebsiella sp. KCL-2로 명명하였다. 우리나라 및 외국의 유류 오염 지역에서 주로 분리되고 있는 균주로는 Pseudomonas sp., Aeromonas sp., Acmetobacter sp., 및 Arthrobacter sp. 등이 보고 되고 있다. 그러나, 본 실험에서 분리된 Klebstelln sp. 균주는 이들과는 다른 종으로서, 앞으로의 생물유화제 생산, 유전공학적 수법에 의한 우량 균주의 개발 및 유류 분해능의 촉진 인자 탐색 등을 위한 많은 연구가 기대된다.</p>