본 논문에서 감태 효소분해산물의 ALDH 활성 측정을 위해 Koivula 및 Koivusalo의 방법을 변형해서 계측했으며 감태 효소분해산물의 tyrosinase 저해 활성은 Yagi 등의 방법으로 계측했다.
<p>ADH activity \( =(B / A) \times 100 \)</p> <p>A : 대조구의 최대 흡광도 B: 실험구의 최대 흡광도</p> <h1>ALDH 활성 측정</h1> <p>감태 효소분해산물의 ALDH 활성 측정은 Koivula 및 Koivusalo의 방법을 약간 변형하여 측정하였다. ALDH 효소활성 측정은 acetaldehyde에서 acetate를 생성하는 효소로 NAD에서 NADH를 생성하는 원리를 이용하였다. 반응액의 조성은 증류수 \( 2.1 \mathrm { ml } , 1.0 \mathrm { M } \) Tris-HCl buffer ( \( \mathrm { pH } 8.0) 0.3 \mathrm { ml } \), \( 20 \mathrm { mM } \mathrm { NAD } { } ^ { + } 0.1 \mathrm { ml } , 0.1 \mathrm { M } \) acetaldehyde \( 0.1 \mathrm { ml } , 3.0 \mathrm { M } \mathrm { KCl } \) \( 0.1 \mathrm { ml } , 0.33 \mathrm { M } \) 2- mercaptoethanol \( 0.1 \mathrm { ml } \), 시료 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 혼합 한 다음 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 10 분간 반옹시키고 ALDH \((1 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } ) 0.1 \) \( \mathrm { ml } \) 를 첨가 후, 반응용액이 \( 3 \mathrm { ml } \) 이 되도록 조절하여 cuvette에 넣고 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 preincubation 하여 5 분 동안 \( 340 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 대조구는 시료대신 TE buffer \( ( \mathrm { pH } 8.0) \) 를 첨가한 것으로 상대활성 \( ( \%) \) 을 나타내었고, po-sitive control과 활성 계산식은 ADH 활성 측정식과 동일한 식을 사용하였다.</p> <h1>Tyrosinase 저해활성 측정</h1> <p>감태 효소분해산물의 tyrosinase 저해 활성은 Yagi 등의 방법에 따라 측정하였다. 반응은 \( 50 \mathrm { mM } \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.5)에 기질인 \( 2 \mathrm { mM } \) L-tyrosine solution 및 시료 용액의 혼합액을 mushroom tyrosinase \( (1,000 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } ) \) 효소 와 degassed 증류수를 첨가하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분간 반응시킨 다음 \( 490 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도 값 S \(_ { Abs } \)) 을 측정하였다. 이 때, 효소액 대신에 \( 50 \mathrm { mM } \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm { pH } \) 6.5) 20 \( \mu l \)를 첨가하여 흡광도를 측정한 값 B \(_ { Abs } \), 시료 용액 대신에 TE buf-fer \( \left ( \mathrm { pH } \right . \) 8.0)를 10 \( \mu l \)를 첨가하여 홉광도 값 C \(_ { Abs } \) 을 측정 한 후 다음의 식에 의해 계산하였다.</p>