생물의약품의 바이러스 오염을 방지하기 위해 세계적으로 감도와 특이도가 우수한 검출시험방법 개발을 위한 여구가 활발히 진행되고 있으며, 특히 MVM 바이러스는 물리화학적 처리에 매우 큰 저항성을 가지고 있기 때문에 생물의약품 안전성 검증을 위한 모델 바이러스로 사용되고 있다. MVM을 검출하기 위한 기존의 시험법은 민감도가 떨어지는 단점이 있어 최근에는 민감도와 특이도가 우수한 PCR을 활용하여 MVM을 검출하려는 시험법이 개발되고 있으며, 이러한 시험법의 민감도는 \( 1 \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)로 우수하며, 시험시간도 감염성 시험에 비해 10배 단축된다.
<h1>서 론</h1> <p>동물세포를 이용한 바이러스 백신이 개발된 이래로 동물세포는 단백질 의약품과 단일클론 항체 등 치료 및 예방용 생물의약품 생산을 위한 숙주로 사용되고 있다. 세포배양 유래 생물의약품은 생체에서 유래한 복잡한 분자구조를 가진 물질로 최종제품에 대한 물리화학적 분석만으로는 제품의 효능을 평가하기 어렵다. 또한 생물의약품 생산에 사용되는 동물세포주는 내인성 및 외래성 바이러스에 오염될 가능성이 크기 때문에 안전성에 관한 논란이 오래 전부터 있어왔다. 최근에 WHO(World Health Organization), FDA(Food and Drug Administration), EMEA(European Medicines Agency)는 이러한 제제의 최종제품 대한 안전성과 유효성 분석과 함께 원료부터 완제품에 이르는 전체 제조공정에 대한 철저한 품질관리의 중요성을 강조하고 있다. 따라서 세계 각국의 규제기관에서는 생물의약품에서 내인성 또는 외래성 위해 바이러스의 오염을 방지하기 위하여 감도와 특이도가 우수한 검출시험방법 개발, 바이러스 제거 및 불활화 공정 확립과 검증, 바이러스 관련 기준 규격 제정 등에 관한 연구를 활발히 진행하고 있다.</p> <p>생물의약품 생산을 위해 설치류 유래 세포주인 Chinese hamster ovary(CHO) 세포와 baby hamster kidney(BHK) 세포가 주로 사용되고 있다. 이러한 세포들은 Minute Virus of Mice(MVM)에 쉽게 감염될 수 있으며, 생물 의약품 생산공정에서 이러한 세포주들이 오염된 사례가 보고되고 있다. MVM은 parvovirus 과에 속하며, single-stranded DNA로 구성된 \( 5 \mathrm { ~kb } \) 유전체를 갖고 있는 외피비보유 바이러스(non-enveloped virus)이다. MVM은 열, 유기용매, 계면활성제, 산과 알칼리, 건조 등 물리화학적 처리에 매우 큰 저항성을 나타내어 세포배양 유래 생물의약품 생산공정의 안전성 검증을 위한 모델 바이러스로 이용되고 있다. MVM의 자연계상의 숙주는 집쥐(Mus musculus)이며, 성체 쥐가 감염되었을 경우 무증상을 나타내나, 신생아쥐나 햄스터가 감염되었을 경우 기형이 되거나 사망할 수 있다. MVM은 세포분화, 세포증식, 면역억제를 포함하는 생물학적 과정에 관여하며, 바이러스의 비구조적 단백질이 세포독성이 있다는 연구도 보고되었다 .</p> <p>MVM을 검출하기 위한 시험법으로 기니픽의 적혈구를 사용한 혈구응집반응 시험(haemagglutination assay), 감염성 세포를 이용한 감염성 시험(infectivity assay), 면역형광염색법(immunofluorescent staining), 효소결합면역흡수법(enzyme immunosorbent assay) 등이 사용되어 왔다. 이러한 시험법은 시간과 비용이 많이 들고, 민감도와 특이도가 떨어지는 단점이 있어, 생물의약품 생산 공정에서 MVM 검출 시험법으로 적용하는데 어려움이 있다. 최근에는 민감도와 특이도가 우수한 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 활용하여 동물세포 배양액에서 MVM을 검출하려는 시헙법이 개발되었다. 또한 real-time PCR을 이용하여 동물세포 배양 유래 단백질 의약품 제조공정에서 바이러스 제거 검증 실험에 활용하고자 하는 연구가 시도되었다. 이러한 시험법의 민감도는 \( 1 \mathrm { ~TCID } _ { 50 } / \mathrm { mL } \)로 기존의 전통적인 시험법보다 민감도와 특이도 우수하였고, 시험시간도 감염성 시험에 비해 10배 정도 단축되었다. 하지만 동물세포 배양액에는 감염력이 없는 MVM 입자와 MVM DNA 절편들이 감염력이 있는 MVM과 함께 존재할 수 있음으로, 배양액에 존재하는 모든 MVM DNA를 검출하기 위해서는 더 민감도가 높은 시험법이 요구되고 있다.</p>