쓴메밀, 영지버섯, 영주와 같은 이들의 동량 혼합시료의 메탄올 추출물을 얻기 위하여 각각 건조된 분말 시료를 \( 70 \% \) 메탄올 용매에 \( 3 \%\) (w/v) 수준으로 첨가하여 상온에서 12시간씩 교반 하면서 3회 반복 추출하였고 페놀성 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomolybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 원리를 이용한 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였다. Flavonoid 함량은 Jia 등의 방법에 따라 측정한 결과 쓴메밀, 영지버섯, 영주 이들 혼합시료 메탄올 추출물의 \( \alpha\)-glucosidase 활성 저해 측정은 전보의 방법에 따라 측정하였다. Acarbose \( (0.1\ \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)는 positive control로 사용하여 \( \alpha\)-glucosidase 저해 활성을 다음과 같은 식에 의하여 계산하여 저해율의 공식을 나타낼 수 있다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료의 추출 및 수율 측정</h2> <p>영지버섯, 여주, 쓴메밀 및 이들 동량 혼합시료의 메탄올 추출물을 얻기 위하여 각각 건조된 분말 시료를 \( 70 \% \) 메탄올 용매에 \( 3 \%\) (w/v) 수준으로 첨가하여 상온에서 12시간씩 교반 하면서 3회 반복 추출하였다. 회수한 혼합 용액을 여과지(Whatman No.2)로 여과시켜 얻은 여액을 rotatory vacuum evaporator로 감압 농축하여 용매를 제거시킨 후 freeze dryer로 동결건조 하여 분말 시료를 얻었다. 각 추출물들의 수율(\(\%\))은 추출액을 동결 건조시켜 건물 중량을 구한 다음 추출액 조제에 사용한 원료 건물량에 대한 백분율로 계산하였다.</p> <h2>총 폴리페놀 함량 측정</h2> <p>페놀성 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomolybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 원리를 이용한 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였다. 즉, \( 0.1 \%\)(w/v) 시료 용액 \( 0.5\mathrm{~ml} \)에 Folin-ciocalteu's phenol reagent \( 2.5 \mathrm{~ml} \)를 첨가하여 잘 혼합하고 5분간 실온에서 방치하였다. 정확히 5분 반응시킨 후 \( 7.5 \%\ \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3}\ 2 \mathrm{~ml} \)를 가하여 혼합하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 발색 시킨 후 spectrophotometer (HITACHI U-2900, Hitachi High-Technologies Co., Kyoto, Japan) \( 760 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 페놀성 화합물의 함량은 tannic acid를 \(0 -500\ \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 하여 시료와 동일한 방법으로 측정한 표준곡선으로부터 계산하였다.</p> <h2>플라보노이드 함량 측정</h2> <p>Flavonoid 함량은 Jia 등의 방법에 따라 측정하였다. 각 추출물 시료 \( 0.1 \%\) (w/v) 시료 용액 \( 0.25 \mathrm{~ml} \)에 \( 1.25 \mathrm{~ml} \)의 정제수와 \( 5 \%\ \mathrm{NaNO}_{2} \)용액 \( 5 \mathrm{~ml} \)을 가하고, 5분 후 \( 10 \%~ \mathrm{AlCl}_{3} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) \( 0.15 \mathrm{~ml} \)를 잘 혼합한 후 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \(510 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 플라보노이드 함량은 표준 물질로서 (+)-catechin hydrate을 \(20 -200\ \mu \mathrm{g}/\mathrm{ml} \) 농도로 시료와 동일한 방법으로 측정하여 작성한 표준곡선으로부터 계산하였다.</p> <h3>\( \alpha\)-Glucosidase 저해 활성 측정</h3> <p>영지버섯, 여주, 쓴메밀, 이들 혼합시료 메탄올 추출물의 \( \alpha\)-glucosidase 활성 저해 측정은 전보의 방법에 따라 측정하였다. 즉, 0.1 M sodium phosphate buffer \( ( \mathrm{pH} ~7.0) \) \( 250\ \mu \mathrm{l} \), \( 20 \mathrm{~mM} \) pNPG (p-nitrophenyl-\( \alpha\)-D-glucopyranoside) 기질 \( 250\ \mu \mathrm{l} \), 그리고 반응구에는 \( 0.5 \mathrm{~mg} / \mathrm{ml} \) 시료액 \( 250\ \mu \mathrm{l} \) 첨가하고, 대조구에는 증류수를 \( 250\ \mu \mathrm{l} \) 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 반응시킨 후 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \( 405 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 그 후, Saccharomyces cerevisiae 유래 \( \alpha\)-glucosidase \( (0.075\ \mathrm{U} / \mathrm{ml}) 250 \mu \mathrm{l} \)를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 반응시킨 후, \( 0.1 ~\mathrm{M} \) sodium carbonate buffer \( 2 \mathrm{~ml} \)를 첨가하여 반응을 정지시키고 spectrophotometer (HITACHI U-2900) \( 405 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정 하였다. Acarbose \( (0.1\ \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)는 positive control로 사용하여 \( \alpha\)-glucosidase 저해 활성을 다음과 같은 식에 의하여 계산하였다.<p>저해율 \( (\%)=[1 \) - (반응액 \( \mathrm{OD}) / \) 대조구 \( \mathrm{OD}] \times 100 \)</p>