실험에 사용된 분리된 균주 SH-517은 형태학적 특성과 배양상의 특성을 통해 Gram 양성의 호기성 간균으로 확인되었다. 이 균주는 내생포자를 형성하며 운동성이 있고, catalase는 양성 반응을, oxidase는 음성 반응을 보였다. 또한, 균주는 Glucosc를 이용하여 산을 형성하며 가스 발생은 음성이었으며, Gelatin, casein, starch에 대한 가수분해능이 확인되었지만 indol 생성능에서는 음성 반응을 보였다.
<h3>효소 활성 측정</h3> <p>Keratin azure를 이용한 Assay배양조건 검토를 위하여 효소의 활성은 Suntornsuk 등 [18]의 방법을 변형하여 조사하였다. 즉, 조효소액(원심분리액) \( 1 \mathrm { ml } \) 을 Keratin azure 현탁액(0.01M Tris- \( \mathrm { HCl } \) buffer \( \mathrm { pH } \) \( 7.5,4 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) ) \( 1 \mathrm { ml } \) 에 첨가하여 water bath에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 150 \) \( \mathrm { rpm } \) 으로 1 시간 반응 시킨 후 반응액을 10 분간 끓여서 반응을 정지시키고 \( 8,000 \mathrm { rpm } \) 에서 원심분리하여 기질에서 유리 된 발색단을 \( 595 \mathrm { ~nm } \) 에서 측정하였다. 대조군은 조효소액과 Keratin azure 현탁액의 혼합액을 반응 전에 10 분간 끓인 것으로 하였다. 그리고 효소의 units는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 분동안 기질과 반응한 반응액의 흡광도를 \( 0.01 \) 중가시키는 효소량을 1 unit라 하였다.</p> <h3>깃털을 이용한 assay</h3> <p>깃털을 이용한 효소활성의 측정은 Farag 등[4]의 keratin을 이용한 호소활성 측정 방법을 변형하여 사용하였다. 즉, 조효소액 \( 5 \mathrm { ml } \) 을 \( 0.1 \mathrm { ~g } \) 의 절단된 깃털에 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 시간 동안 반응 시킨 후 \( 8,000 \mathrm { rpm } \) 으로 원심 분리하여 잔여 깃털을 제거한 후 Lowry method [13]를 이용하여 \( 770 \mathrm { ~nm } \) 에서 홉광도롤 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h3>균주의 동정</h3<p>본 실험에 사용한 분리된 균주 SH-517의 형태학적 특성 및 각 종 배지를 이용한 배양상의 특성을 조사한 결과(not shown data), Gram 양성의 호기성 간균이며 내생포자를 형성하고 운동성이 있었으며 catalasc는 양성, oxidase는 음성이었다. Glucosc를 이용하여 산을 형성하였으며 가스 발생은 음성이었다. Gclatin, cascin, starch의 가수분해능이 있었으며 indol 생성능에서는 음성이었다. Citrate utilization 및 ni-trate reduction 등을 하는 것으로 조사되었으며 Bergey's manual of systematic bacteriology [15]와 비교한 결과를 종합하여 볼 때 SH-517 strain은 Bacillus licheniformis와 가장 가까운 특성을 보였으나 정화한 균종을 밝힐 수는 없었다. 따라서 여기서는 Bacillus sp. SH-517로 명명하고, 차후에 \( 16 \mathrm { ~S } \) rRNA를 이용하여 보다 정확한 동정을 실시하기자 한다.</p>