이 실험에서는 4주차 ICR종의 수컷 마우스 20마리를 표준식이군과 대조군으로 나누어서 각각의 지방산을 분석하였다. 대조군은 지방 함량이 \( 5 \% \)가 되도록 하였으며 고등어가 함유하고 있는 3대 에너지원 영양소들의 함량을 고려하여 주요 지방으로 palm oil로 사용하였다. 4주간의 사육을 완료하고 실험동물들로 부터 채혈 및 즉시 해부하여 간, 소뇌, 대뇌 피질 및 망막을 적출하였다. 각 조직으로부터 지방산을 추출하고 지방산 분석용 VARIAN CP-3380 gas chromatography를 통하여 분석하였다. 실험결과는 각 항목별로 mean\(\pm \)SEM으로 나타내었고, 유의성 검증을 위해서 Statistica program을 이용해서 \( \mathrm{p}<0.05 \) 수준에서 one-way ANOVA로 검증하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물 및 실험식이</h2><p>본 실험에서는 체중이 약 \( 18 \pm 0.1 \mathrm{~g} \)인 4주령 ICR종의 수컷 마우스 20마리를 (주)중앙실험동물로부터 구입하였다. 마우스들의 체중을 고려하여 각 그룹 당 10마리씩 나누어 4주간 적정 환경인 온도 \( 23 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 명암은 12시간 cycle로 자동 조절되게 하였고, 식수와 실험 식이는 자유롭게 섭취하게끔 하여 사육하였다. 본 실험에 사용된 고형사료는 AIN-93에 따른 표준식이로, 지방의 급원을 변형하여 (주)한삶 R&D 식이회사에 의뢰해 pellet으로 조제하였다. 대조군(Control군)의 경우 지방 함량을 \( 5 \% \)로 조절하고 주요 지방으로 palm oil을 사용하였고, 고등어군(Mackerel군)의 경우 고등어가 함유하고 있는 3대 에너지원 영양소들의 함량을 고려하여 나머지를 palm oil로 대체하였다. 식이섭취량과 체충은 전 실험기간 동안 매일 일정시간에 측정하였으며, 식이효율(food efficiency ratio, FER)은 실험기간 동안의 체중증가량을 식이섭취량으로 나누어 다음과 같이 산출하였다.</p><p>\( \mathrm{FER}(\%)=\frac{\text { 총 살험기간의 체중증가량 }(\mathrm{g})}{\text { 총 실험 기간의 식이섭춰량 }(\mathrm{g})} \times 100 \)</p><h2>재료</h2><p>2005년 1월에 남해안에서 잡힌 선도가 양호하며 어체의 중량(540g)이 비슷한 고등어 10 마리를 구입하였다. 신선한 상태에서 머리와 꼬리, 내장을 제거한 후 뼈를 중심으로 반으로 나누어 각각 3등분으로 포를 떴다. 포를 뜬 고등어를 저온 진공 건조기를 이용하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 40 \mathrm{torr} \)의 압력으로 \( 5 \mathrm{mm} \) 두께로 30시간 건조하였다. 건조된 고등어 파우더는 실험 사용 전까지 \( -75^{\circ} \mathrm{C} \)에 냉동 보관되었다. 건조된 고등어의 지방산 분석 결과, 총 포화지방산 \( 24 \% \), 총 monounsaturated \( 16.5 \% \), AA \( 2.64 \% \), EPA \( 10.6 \% \) 및 DHA \( 16.6 \% \)로 나타났다.</p><h2>실험동물의 희생 및 시료의 채취</h2><p>4주간의 사육기간이 완료된 후, 실험동물을 단두 절단하여 채혈한 후 즉시 해부하여 간, 소뇌, 대뇌 피질 및 망막을 적출하였다. 적출한 장기들은 중량을 측정한 후, 액체 질소가스에서 급속 냉동하여 추후 살험 전까지 \( -75^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉동 보관하여 분석에 이용하였다.</p><h2>조직의 지방산 추출</h2><p>지방산 분석은 Folch 등을 변형하여 실시하였으며 간단히 요약하면 다음과 같다. 생체조직을 butylated hydroxy toluene (BHT)를 함께 함유한 메탄올로 교반하여 균질화하였다. 균질물을 \( 1 \mathrm{ml} \) 취한 후 chloroform \( 2 \mathrm{ml} \) 와 \( 0.2 \mathrm{M} \) \( \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4} 1.4 \mathrm{ml} \)를 넣고 교반하여 \( 4 \mathrm{C}\), \(3,000 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 원심분리 후 지질층을 얻었다. 이와 같은 방법을 한 번 더 진행한 뒤 최종적으로 질소가스를 이용하여 서서히 지질층의 유기용매를 완전히 날린 다음 지질을 얻었다. Morrison과 Smith의 방법에 따라 추출된 지질에 methylation용 시약인 boron trifluoride \( \left(\mathrm{BF}_{3}\right) \) methanol \( 1 \mathrm{ml} \)와 hexane \( 0.4 \mathrm{ml} \)를 가한 후 1 간동안 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 가열하였다. 1시간 후 실온까지 충분히 냉각시킨 다음 hexane \( 2 \mathrm{ml} \)와 증류수 \( 2 \mathrm{ml} \)를 가한 후 다시 \( 4^{\circ} \mathrm{C}\), \(3,000 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 원심분리 후 상등액을 얻었다.</p><h2>Gas Chromatograph를 이용한 지방산 분석</h2><p>상등액을 질소가스 하에서 조금 날린 후, 상등액 \( 1 \mu \mathrm{l} \)를 취하여 지방산 분석용 VARIAN CP-3380 gas chromatography에 주입하여 지방산을 분석하였다. 지방산 분석에 사용한 표준용액은 미국 Nu-Check사의 462 standard를 이용하였다. 이용된 column은 silica capillary column \( (60 \mathrm{~m} \times 0.32 \) \( \mathrm{mm} \) inner diameter \( \times 0.10 \mu \mathrm{l} \) film thickness) 이다. 기기의 분석조건은 detector (FID) \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), oven (initial \( 130^{\circ} \mathrm{C} \), 분당 증가율은 \( 175^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min}\), \(210^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 1^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min}\), \(245^{\circ} \mathrm{C} \)까지 \( 30^{\circ} \mathrm{C} / \mathrm{min} \) ), injector \( 250^{\circ} \mathrm{C} \) 그리고 carricr gas는 질소를 사용하였다. 지방산 분석은 표준용액의 retention time시간과 비교하여 정성하였고 내부 표준물질(22:3n-3 methyl ester)을 이용하여 총 지방산을 정량하였으며 개개의 지방산들은 전체 peak area의 퍼센트로 산출하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>본 실험결과는 각 항목에 따라 mean\(\pm \)SEM으로 나타내었고, 각 군별로 유의성 검증을 위해서 Statistica program을 이용하여 \( \mathrm{p}<0.05 \) 수준에서 one-way ANOVA로 검증하였다.</p>