토종닭의 소장과 대장을 길항균의 분리원으로 하여 가금티프스 원인균에 대한 길항균의 선발을 발육저지측정법을 이용해서 생육을 억제하여 clear zone을 형성하는 억제균주를 분리, 선발하였다. 염화암묘늄 \(0.2\%\)를 첨가한 배지에서 길항물질 생산성이 가장 우수하였으며 배양온도 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 균성장과 길항력 모두 탁월했다. 균증식 및 생산성은 \( \mathrm{pH} ~7\)에서 가장 좋은것으로 나타났다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>가금티프스 길항균 분리 및 선발</h2> <p>경북 구미 지역에서 자연 방사하여 사육하는 토종닭의 소장과 대장을 길항균의 분리원으로 하여 LB배지에 순수분리한 결과 육안으로 관찰하여 형태적으로 상이한 23종을 분리하였다. 이들을 대상으로 가금티프스 원인균 Salmo-nella gallinarum에 대한 길항균의 선발을 발육저지측정법을 이용해서 생육을 억제하여 clear zone을 형성하는 억제균주를 분리, 선발하였다.</p> <h2>선발 길항균의 동정</h2> <p>선발균주 strain Y3의 분류학적 동정을 위해 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology 조사와 Biolog사의 동정시스템(MicroLog \( { }^{\mathrm{TM}} 4.0 \))을 이용하여 최종 동정하여 본 결과 Bacillus amlyloliquefaciens와 \(98\%\)의 상동성이 확인되었으므로 본 연구에 사용된 strain Y3를 최종적으로 Bacillus amyloliquefaciens Y3균주로 명명하였다.</p> <h2>길항물질 생산을 위한 배지조건</h2> <p>배지에 사용되는 영양원에 따른 길항물질 생산의 영향을 조사하여 본 결과 Table 2에서 볼 수 있는 바와 같이 탄소원은 균생장이나 길항물질 생산성에 있어서 가장 우수한 maltose가 최적이었다. 또한 maltose 농도별로 길항물질 생산성을 조사한 결과로는 \(0.3 \% \) 첨가시에 그 생산성이 가장 우수하였다.</p> <p>질소원에 대한 길항물질 생산성을 조사하여 본 결과 Table 3에서 볼 수 있는 것 같이 길항물질 생산성에 있어서 다양한 질소원들 중 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} \)가 가장 높은 길항물질 생산성을 보였으며 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} \)을 \( 0.2 \% \) 첨가한 배지에서 길항물질 생산성이 가장 우수하였다.</p> <h2>선발 길항균의 담즙산에 대한 안정성 및 길항력</h2> <p>\(0.5\% \)까지 단계별로 담즙산이 첨가된 LB broth에 접종한 후 2일간 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 배양한 후 길항균주의 성장도를 spec-trophotometer(Hitach U-2000)을 이용하여 \( 600 \mathrm{nm} \)에서 균탁도를 측정한 결과 Fig. 4에서 보는 바와 같이 담즙의 농도가 올라갈수록 균성장 및 길항력이 감소하는 것을 알 수 가 있었다. 그러나 \(0.2 \%\) 첨가 경우에도 비교적 높은 균성장과 길항물질 생산성을 보였으므로 실제 가금용 생균제로 사용하여도 체내에서 급격한 활성의 저하없이 가금티브스균을 억제할 수 있을 것으로 생각된다.</p> <h2>선발 길항균의 \( \mathrm{pH} \) 및 온도에 따른 길항력</h2> <p>배양온도는 균성장과 길항력 모두 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)가 가장 좋은 것으로 나타났다. 또한 \( 20 \sim 45^{\circ} \mathrm{C} \)까지 넓게 균성장 및 길항물질 생산성이 양호하였다. 가금류를 포함한 항온동물의 체온이 대부분 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)임을 고려해볼 때 길항물질의 생산 및 생육에 큰 영향은 없을 것으로 추정된다.</p> <p>배양 \( \mathrm{pH} \)에 따른 길항세균의 균 성장도와 길항물질 생산성은 \( \mathrm{pH} ~3 \)에서 \( \mathrm{pH} ~10\)까지 조사한 결과 Table 9에서 볼 수 있는 것과 같이 균증식 및 생산성은 \( \mathrm{pH} ~7\)에서 가장 좋았다. 또한 \( \mathrm{pH} ~5 \sim \mathrm{pH} ~9\)까지 양호한 균의 증식 및 생산성을 보였다.</p> <h2>배양 상등액의 길항물질 특성 확인</h2> <p>회수한 상등액을 Amicon centriprep T10K를 이용하여 M.W, 10,000 을 기준으로 고분자, 저분자를 분리한 후 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 중탕으로 열처리하여 길항력을 측정하여 본 결과 Table 6에서 보는 바와 같이 내열성이 있는 저분자성 길항물질임을 확인할 수가 있었다. 또한 선별균주가 생산하는 길항물질을 n-butanol로 추출하여 조정제 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압 농축하고 증류수, methanol에 각각 용해하여 길항물질의 활성을 여지 디스크법으로 조사하여 저분자의 용매추출성 길항물질임을 확인하였다./p>