자유 라디칼 소거 활성을 사용하여 DPPH법으로 측정하였고 목형 잎 추출물의 항산화 효과를 측정하였다. 실험방법은 에탄올과 여러 농도의 추출물을 첨가하여 흡광도를 측정하였다. DPPH 메탄올 용액과 에탄올, 추출물을 첨가하여 \( 10 \mathrm{~min} \) 간 방치 후 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 대조군과 실험군의 흡광도 차이를 계산하여 항산화 효과를 측정하였다.
<h2>목형 잎 추출물의 항산화 효과 측정</h2> <h3>DPPH법을 이용한 자유 라디칼 소거 활성:</h3> <p>DPPH법을 이용한 자유 라디칼 소거 활성: 목형 잎 추출물과 비교 표준물질인 (+)-α-tocopherol의 자유 라디칼 소거활성을 DPPH를 이용하여 측정하였다. 측정에는 유기 자유 라디칼인 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical을 이용하였다. 실험방법은 \( 0.2 \mathrm{mM} \) DPPH 메탄올 용액 \( 1 \mathrm{ml} \)에 에탄올 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 여러 농도의 추출물 \( 1 \mathrm{ml} \) 을 첨가하여 섞은 다음 실온에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 간 방치 후 \( 517 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 그 활성의 크기는 시료를 넣지 않은 군을 대조군(control)으로, 시료를 넣은 군을 실험군 (experiment)으로 하여 다음 식으로 DPPH의 활성 저해율을 나타내었으며 DPPH의 농도가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도 (free radical scavenging activity, \( \mathrm{FSC}_{50}, \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) )로 표기하였다.</p> <h3>Luminol 발광법을 이용한 \( \mathrm{Fe}^{3+}-\mathrm{EDTA} / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 계에 있어서 활성산소 소거 활성(총항산화능):</h3> <p>\( \mathrm{Fe}^{3+}-\mathrm{EDTA} / \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 계에 의해 ROS \( \left(\mathrm{O}_{2}^{\cdot-}, \mathrm{OH}\right. \) 그리고 \( \left.\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2}\right) \)가 생성되고, 철과 같은 전이금속은 hydroxyl radical \( (\mathrm{OH}) \)을 발생시킨다. 따라서 이 반응을 이용하면 ROS에 대한 총항산화능을 측정할 수 있다. 총항산화능은 luminol이 ROS에 의해 산화되어 나타나는 빛을 화학발광기로 검출하여 측정하였다. 방법은 화학발광 측정용 튜브에 증류수 \( 1.78 \mathrm{ml} \) 를 넣고 여러 농도의 목형 추출물과 \( 2.5 \mathrm{~mM} \) EDTA \( 40 \mu \mathrm{l} \) 및 \( 5 \mathrm{~mM} \mathrm{~FeCl}{ }_{3} ~6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) \( 10 \mu \mathrm{l} \) 를 가한 후 \( 35 \mathrm{~mM} \) luminol \( 80 \mu \mathrm{l} \) 를 넣고 흔들어 섞어 화학발광기의 cell holder에 튜브를 꽂는다. \( 5 \mathrm{~min} \) 동안 항온시킨 후 \( 150 \mathrm{~mM} \mathrm{~H}_{2} \mathrm{O}_{2} ~40 \mu \mathrm{l} \) 를 넣고 \( 25 \mathrm{~min} \) 동안 측정하였다. 대조군 (control)은 시료용액 대신에 증류수를 넣고 공시험 (blank)는 시료군과 조건이 동일하나 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 와 \( \mathrm{FeCl}_{3} \) \( 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 을 첨가하지 않았다. 화학발광기 6-channel LB9505 LT의 각 채널은 실험 전에 보정하여 채널간의 차이가 거의 없도록 하였으며 화학발광으로 측정한 저해율을 다음 식과 같이 나타내었고, 활성산소 소거활성의 크기는 화학발광의 세기가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도 (reactive oxygen species scavenging activity, \( \left.\mathrm{OSC}_{50}, \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\right) \) 로 표기하였다.</p> <p>Inhibition (\%) \( =1-\frac{\left(\mathrm{A}_{\text {Experiment }}-\mathrm{A}_{\text {Blank }}\right)}{\left(\mathrm{A}_{\text {Control }}\right)} \times 100 \)</p>