분리한 균주는 YEPD 배지를 사용해 배양 후, GenEx genomic Sx로 염색체 DNA를 추출하였다. 정제한 PCR 산물의 염기서열을 확보하였으며, NCBI의 BLAST 프로그램을 이용하여 상동성을 확인하였다. 또한, 분리된 효모균주의 맥아당 이용능 및 에탄올 생산성을 측정하기 위해 YEPD 배지에 접종하여 배양하였다.
<h2>균주동정</h2> <p>분리한 균주는 YEPD 배지를 사용하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 배양한 후 \(GenEx ^ { TM } \) genomic Sx(GeneAll, Seoul, Korea)를 사용하여 염색체 \( \mathrm { DNA } \)를 추출하였다. ITS1( \( \mathrm { 5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3' } \))과 ITS4( \( \mathrm { 5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3' } \)) 프라이머를 사용하여 18S \( \mathrm { rRNA } \) 유전자의 Internal transcribed spacer 영역을 증폭하였다. 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)은 \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30초(denaturation), \( 58 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30초(annealing), \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1분(extension)간 총 35회(cycles) 반복 수행하였으며, 전기영동을 통하여 약 \( 650 \mathrm { bp } \)의 PCR 반응산물을 확인하였다. 정제한 PCR 산물을 (주)마크로젠에 의뢰하여 염기서열을 확보하였으며 National Center for Biotechnology Information(NCBI, MD, USA)의 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool, http://www.ncbi.nlm.nih. gov/BLAST/) 프로그램을 사용하여 확보한 상동성을 근거로 균주를 동정하였다.</p> <h2>배양조건</h2> <p>분리한 효모균주의 맥아당 이용능 및 에탄올 생산성을 측정하기 위하여 단일집락을 \( 10 \mathrm { ml } \)의 YEPD 배지에 접종하고 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 200 \mathrm { rpm } \)의 교반속도로 12시간 동안 전배양하였다. 전배양액은 멸균수로 세척한 후 \( 10 \mathrm { ml } \)의 YEPM(yeast extract \( 10 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), peptone \( 20 \mathrm { g } / \mathrm { l } \), maltose \( 200 \mathrm { g } / \mathrm { l } , \mathrm { pH } 6.8 \)) 배지가 포함된 시험관에 세포흡광도 ( \(OD_ { 600 } \))가 0.1이 되도록 접종하고 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 200 \mathrm { rpm } \)의 교반속도로 48시간 동안 배양한 후 맥아당을 이용한 세포성장과 에탄올 생산을 조사하였다. 에탄올 생산량은 \( \mathrm { g } / \mathrm { l } \)의 단위로 표시하였으며, 에탄올 생산성은 에탄올 생산량을 배양시간으로 나누어 계산하였다.</p>