TM3에서 호로파, 야관문 추출물을 처리할 때, 테스토스테론 양을 얼마나 증가시킬 수 있는 지를 확인하고, 다양하게 혼합하여 시험을 실시하였다. 호로파, 야관문 추출물의 혼합비율이 \(8:2 \)일 때, 테스토스테론 양이 가장 많이 증가되는 것으로나타났고 YHM이 TM3 세포에 미치는 독성을 평가하기 위한 실험 결과, 과산화수소만 4 시간 처리한 군은 \( 77.4 \pm 5.6 \% \) 의 세포생존률을 보였다. 결과적으로 YHM은 산화적 스트레스를 받은 TM3 세포의 증식에는 거의 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>YHM 추출혼합물 비율의 결정</h2> <p>Leydig 세포인 TM3에서 호로파 및 야관문 추출물 처리 시 테스토스테론 양을 얼마나 증가시킬 수 있는 지를 확인하고, 최대한의 테스토스테론 증가를 얻기 위한 상기 두 추출물의 혼합비율을 \(5:5 \), \(8:2 \) 그리고 \(2:8 \) 로 다양하게 혼합하여 시험을 실시하였다(Fig. 1). 시험에 사용한 각 시료들의 농도는 \( 20 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 로 통일하여 수행하였다. 호로파 또는 야관문 추출물 각각을 단독으로 처리했을 때와, 호로파와 야관문 추출물을 비율별로 혼합하여 처리한 결과를 비교하였을 때, 호로파와 야관문 추출물을 단독으로 처리한 경우보다, 호로파와 야관문 추출물의 혼합비율이 \(8:2 \) 인 경우 테스토스테론 양이 가장 많이 증가되는 것으로나타났다. 따라서 본 실험에서는 이러한 \(8:2 \) 혼합물을 YHM이라 명하고 실험에 사용하였다.</p> <h2>YHM이 세포생존에 미치는 영향</h2> <p>YHM이 TM3 세포에 미치는 독성을 평가하기 위하여 각 시료를 농도별로 처리한 후 용매대조군(vehicle) 대비 세포의 생존률을 구하였다. YHM의 경우 \( 20 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 에서는 독성을 보이지 않았으며, \( 40 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 을 처리하였을 때 용매대조군 대비 \( 88.7 \pm 13.3 \% \) 의 세포 생존률을 보이고 \( 60 \), \(80 \), \(100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 처리하였을 때 각각 \( 83.4 \pm 11.7 \), \(80.2 \pm 14.5 \), \(72.4 \pm 13.9 \% \) 의 세포 생존률을 보였다(Fig. 2A).</p> <p>산화적 스트레스가 가해진 TM3 세포생존에 시료가 미치는 영향을 측정하고자, TM3세포에 과산화수소를 처리하였다. 과산화수소의 처리 농도는 별도의 농도 설정시험을 통해 \( 50 \mu \mathrm { M } \) 로 설정하였다(data not shown). TM3 세포에 \( 50 \mu \mathrm { M } \) 과산화수소를 4 시간 처리한 후, 시료를 농도 별로 넣어준 배지로 교환하여 20 시간 추가 배양하여 세포생존률을 측정하였다. 과산화수소를 처리하지 않은 군에 비해 과산화수소만 4 시간 처리한 군은 \( 77.4 \pm 5.6 \% \) 의 세포생존률을 보였으며, 여기에 YHM \( 10 \) , \(20 \), \(40 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 을 추가로 처리하였을 때에도 과산화수소만 처리한 군과 비교했을 때 유사한 세포생존률을 보였다(Fig. 2B). 따라서 YHM은 산화적 스트레스를 받은 TM3 세포의 증식에는 별다른 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.</p>