본 논문은 Botrytis cinerea(잿빛곰팡이병)이 주는 심각한 피해를 방제하기 위한 생물학적 방법에 대해 연구한다. 화학적 방제를 대체하는 생물농약 개발에 주목하며, 근권토양에서 분리한 길항균을 제제화하여 생물농약을 제조하고, 이에 대한 방제효과를 검토한다. 효과적인 방제를 위해 길항세균의 균사생장 억제효과를 확인하고, 생화학적, 배양적 및 생리적 특성을 Bergey's manual을 이용해 동정한다. 또한, API system \( 20 \mathrm { E } \) 와 \( 50 \mathrm { CHB } \) 도 사용하여 동정의 정확성을 높인다.
<h1>서 론</h1> <p>Botrytis cinerea는 다범성균으로서 딸기, 오이, 강남콩 등의 많은 식물에 병을 일으키는데 가지에서도 잎, 꽃 및 열 매에 발병하여 심각한 푀해를 주는 것으로 김 등에 의해 확인된바 있다. Botrytis cinerea 는 유전적 변이가 심해 약제 내성균의 출현 빈도가 높고, 방제가 어려워 이로 인한 농약의 다량살포로 인해 인축에 대한 잔류독성 및 심각한 환경 오염 문제를 일으키고 있다. 따라서 화학적 방제의 대체 방법으로 생물학적 방제 연구가 활기를 띄고 있으며, 생물농약외 개발과 실용화에 관한 연구 결과들이 많이 보고되고 있다.</p> <p>전세계적으로 약 40여종의 생물농약 제품이 식물병 방제용으로 시판되고 있으며 이 중 감귤나무와 이과류의 잿빛곰팡이병 방제용으로 Pseudomonas syringae를 이용한 Bio-save110과 딸기, 포도나무 등의 잿빛곰팡이병 방제용으로 Trichoderma harzianum을 이용한 Trichodex등의 제품이 시판되어 방제 효과가 입증되고 있다. 하지만 가지 잿빛곰팡이병에 대한 효과적인 생물학적방제 연구는 국내외적으로 미약한 실정에 있다. 따라서, 본 논문에서는 가지 잿빛곰팡이병을 효과적으로 방제하기 위해 근권토양에서 분리한 길항균을 제제화하여 생물농약을 제조하고 이에 대한 방제효과를 구명하고자 한다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>길항세균의 선발</h2> <p>가지 재배하우스내의 근권토양을 채춰하여 \( 1 \mathrm { g } \)을 \( 100 \mathrm { ml } \)의 멸균수에 넣고 10 단계 회석법으로 NA배지와 King's B agar 배지에 도말하여 세균을 분리하였다. 분리한 세균 75 균주를 각각 Nutrient agar (NA)배지에 24시간 배양하여 PDA 배지상에서 공시 병원균 직경 \( 1 \mathrm { cm } \)의 균사절편과 대치배양하고 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 7일간 배양한 후 저지대의 크기를 조사하여 길항력을 가지는 균주를 길항균으로 선발하였다.</p> <h2>길항균의 동정</h2> <p>균사생장 억제효과가 확인된 길항세균을 동정하기 위하여 생화학적, 배양적 및 생리적 특성을 Bergey's manual에 따라 조사하여 동정하였으며, 아울러 정확성을 높이기 위하여 API system \( 20 \mathrm { E } \) 와 \( 50 \mathrm { CHB } \) 를 이용하여 동정하였다.</p> <h2>대량배양 배지의 선발</h2> <p>선발된 우수 길항균율 제제화하여 생물농약으로 제조하기 위하여 \( 250 \mathrm { ml } \) 의 플라스크에 증류수 \( 100 \mathrm { ~m } \ell \) 를 넣고, 대량배양 배지를 선발하기 위하여 시중에서 쉅게 구할 수 있는 염가의 비지, 대두박, 보리맥아 등 농가 부산물 및 농가 폐기물을 각각 5 \( \% \)씩 첨가하고, 여기에 Nutrient broth (NB)에 24시간 배양된 W1 균주 및 P99 균주 \( 2 m \ell \left (10 ^ { 7 } \right . \) cells/ml)를 접종하여 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } , 160 \mathrm { rpm } \) 으로 72시간 배양하고 4시간 간격 으로 세균의 밀도를 spectrophotometer \( 660 \mathrm { nm } \)로 측정하여 세균의 밀도가 최고에 도달하는 시점에서 세균 밀도가 가장 높은 배지를 대량배양 배지로 선발하였다.</p>