목초액과 디메칠설폭사이드를 이용한 표준원액과 이를 희석한 표준액 및 검액을 gas chromatography (GC)로 분석한 후 각각의 피크 면적비를 구해 검액 중 잔류용매 (메탄올, 벤젠, 에테르, 클로르포름) 의 양을 구하였고, 개발된 분석법에 따라 유기산의 함량분석을 실시했다. 발모 촉진 효능 평가를 위해 실험군은 총 4새 군당 5마리씩 수컷 C57BL/6 마우스를 사육실 환경에 적응 시킨 후 실험에 사용하였다. 시료 처리는 매일 오전 10시 1회씩 2주간 실시하였고, 양모 효과를 살펴보기 위하여 에바크린 제모약으로 등판의 털을 제거한 후, Nam 등의 방법에 따라 체모의 6주기령을 사용했다. 시료를 실험 시작 후 피부(제모부위)에 매일 도포, 음성대조군으로서 생리식엄수를 도포하고, 주기적으로 사진촬영을 실시하였다. 도포가 종료된 14일 동물들을 부검하여 장기의 무게를 측정해 신체에 미치는 영향을 평가하고 통계처리는 SPSS \( 12.0 \) program을사용하여 one-way ANOVA에서 유의한 F값의 항목을 Scheffe's test를 이용해 유의성을 검증하였다.
<h3>잔류용매(메탄올, 벤젠, 에테르 및 클로르포름)</h3> <p>목초액 \( 1 \mathrm{~ml} \)에 디메칠설폭사이드 \( 10 \mathrm{~ml} \)를 가하여 검액으로 하였으며 메탄올, 벤젠, 에테르 및 클로르포름 표준품 \( 10 \mathrm{~ml} \)를 취해 디메칠설폭사이드로 \( 50 \mathrm{~ml} \)로 만들어 표준원액으로 하여 이를 디메칠설폭사이드로 희석하여 표준액으로 하였다. 표준액 및 검액을 gas chromatography (GC)로 분석한 후 각각의 피크 면적비를 구해 검액 중 메탄올, 벤젠, 에테르, 클로르포름 의 양을 구하였다. 컬럼은 VB-1 \( (30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mathrm{~mm} \times 0.25 ~ \mu \mathrm{m}) \)를 사용하였고, 검체를 주입한 다음 5분간 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 유지하고 그 다음 매분 \( 10^{\circ} \mathrm{C} \)의 속도로 \( 70^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승시킨 다음 이 온도를 6분간 유지한 후, 매분 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)의 속도로 \( 90^{\circ} \mathrm{C} \)까지 상승시킨 다음 3분간 유지하였다. 검출기는 \( 220^{\circ} \mathrm{C} \)로 유지한 불꽃이온화 검출 기(FID)를 사용하였고, 주입구의 온도는 \( 220^{\circ} \mathrm{C} \), 질소의 유속은 \( 24 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \)으로 시료 \( 20 \mu \mathrm{l} \)를 주입하였다.</p> <h3>유기산 함량 변화</h3> <p>유기산의 함량분석은 개발된 분석법에 따라 실시하였다. 즉 목초액 \( 20 \mathrm{ml} \)에 물을 가해 \( 100 \mathrm{ml} \)로 맞추어 검액으로 하고, FA, AA 및 PA 표준품 \( 0.1 \mathrm{~g} \)을 취해 물을 넣어 \( 100 \mathrm{ml} \)로 하여 표준원액으로 한 후, 표준원액을 물로 희석하여 표준액으로 하였다. 표준액 및 검액에 대하여 HPLC로 분석한 후 각각의 피크 면적비를 구해 검액 중 FA, AA, PA의 양을 구하였다. 컬럼은 Atlantis \( { }^{TM} dC 18(4.6 \times 250 \mathrm{~mm}, 5 ~ \mu \mathrm{m} \), Waters \( ) \) 을 사용하였고, 컬럼 온도는 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \), 검출은 자외부 흡광광도계를 사용하여 \( 230 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였고, 이동상은 아세토니트릴 : \( 0.1 \% \) 인산 \( (5: 95, v / v) \), 유속 \( 1.0 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \)에서 시료 \( 30 \mu \mathrm{l} \)를 주입하였다.</p> <h2>C57BL/6 마우스를 이용한 발모 촉진 효능 평가</h2> <h3>실험 동물</h3> <p>생후 5주된 수컷 C57BL/6 마우스를 중앙실험동물로부터 구입하여 1주간 동물 사육실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육실은 온도 \( 23 \pm 3^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 50 \pm 10 \%, 12 \)시간씩 밤낮을 유지하였다. 실험동물은 사료와 물을 자유로이 급여하였으며 군은 총 4개로 군당 5마리씩 총 20마리를 실험에 사용하였다.</p> <h3>발모제의 도포 및 육안적 관찰</h3> <p>양모 효과를 살펴보기 위하여 Nam 등의 방법에 따라 등쪽 피부의 색이 분홍색을 띠는 휴지기 체모의 6주기령을 사용하였다. 에바크린 제모약(삼공제약(주))을 사용하여 마우스 등판의 털을 제거한 후, 이틀 후부터 그 부위에 \( 150 \mu \)의 시료를 각 군별로 도포하였다. 시료 처리는 매일 오전 10시에 1회씩 2주간 실시하였다.</p> <p>시료로서 목초액 \( (3,5 \%) \)과 \( 3 \% \) MXD를 실험 시작 후 피부(제모부위)에 매일 도포하였으며 음성대조군으로서 생리식염수를 도포하였다. 실험 시작 후 1일, 4 일, 7일, 10일 및 14일에 털이 자라는 상태를 육안적으로 확인하기 위하여 에테르로 가볍게 마취한 후 사진촬영을 실시하였다. 털이 자란 정도는 육안적으로 \( 0 \sim 25\% \) (-), \( 25 \sim 50 \% \) ( \( \pm), 50 \sim 75 \%(+), 75 \sim 100 \% \) \( (++) \)로 평가하여 비교하였다.</p> <h3>체중 및 장기 무게의 측정</h3> <p>체중은 발모제 도포 직전부터 측정하여 실험 종료 시까지 일정한 시간(오전 10시)에 매일 측정하였고, 도포가 종료된 14일에 각 동물들을 부검하여 각종 장기의 무게를 측정하여 신체에 미치는 영향을 평가하였다.</p> <h3>통계학적 분석</h3> <p>모든 결과는 평균 \( \pm \) 표준편차로 표시하였으며, 체중 및 장기무게 측정치에 대한 통계처리는 SPSS \( 12.0 \) program을 사용하여 one-way ANOVA에서 유의한 F값의 항목을 Scheffe's test를 이용하여 \( p<0.05 \) 수준에서 유의성을 검정하였다.</p>