M.scorodonius 균사체로부터 \(0.4\%\) yeast extract로 결정, laccase 생산을 위한 최적 배지는 \(1\%\) galactose, 배양 10~15일째까지 효소활성 확인하니 급격히 증가하였지만 22일째부터는 효소활성이 급격하게 감소하였으며, 균체량과 비례하지 않았다. Native-PAGE를 통해 \(60-70 \mathrm{kDa}\) 사이에 2개의 band가 확인되었고, M. quercophilus 유래 laccase와 유사한 결과를 나타냈지만 다른 곰팡이 유래의 laccase와 비교하여 매우 높은 온도에서 최적 활성을 가진다.
<h3>배양 시간에 따른 균체 성장 및 효소 생산</h3> <p>M.scorodonius 균사체로부터 laccase 생산을 위한 최적배지를 \( 1 \% \) galactose 및 \( 0.4 \% \) yeast extract로 결정하고, 이배지 조건에서 균사체를 배양하면서 시간대별로 건조 균체량 및 효소활성을 측정하였다. 그 결과 생장곡선의 대수증식기 초기에 해당하는 배양 10 일째부터 효소활성이 급격히 증가하기 시작하여 15일째에 가장 높은 활성을 나타내었다. 또한 정지기에 해당하는 배양 22 일째부터는 효소 활성이 급격하게 감소하였다. 따라서 배양시간에 따른 laccase 생산량은 균체량과 비례하지 않았고, 대수증식기 초기에 일정량의 효소가 생산되면 그 이후로는 효소 생산이 억제되는 것으로 확인되었다. Pycnoporus cinnabartinus 및 Monotosporasp. 유래 laccase가 각각 7 일 및 8 일 배양 후에 최대 활성을 나타낸 결과와 비교하면 본 효소가 최대 활성을 나타내는 배양 시간은 비교적 긴 것을 알 수 있었다, 그러나, Phlebia floridensis 유래 laccase는 배양 후 20일, Cyathus bulleri 유래 laccase는 배양 후 21일에 최대활성을 나타낸 것으로 보아 본 균주의 laccase 생산을 위한 배양시간은 곰팡이로부터 laccase 생산을 위한 일반적인 배양시간의 범주에 속하는 것으로 생각된다.</p> <h3>활성 염색</h3> <p>M. scorodonius 균사체로부터 생산된 배양액 중의 효소 활성을 확인하기 위하여 조효소액을 Native-PAGE로 전기영동한 후 기질인 ABTS를 사용하여 활성염색을 수행하였다. 그 결과 laccase 활성을 나타내는 2개의 band가 약 \( 60-70 \mathrm { kDa } \)사이에서 확인되었다. 이것은 M. quercophilus 유래 laccase가 \( 60 \mathrm { kDa } \) 의 분자량 부근에서 2종류의 isozyme 형태로 존재한다는 보고와 유사한 결과를 나타내었다.</p> <h3>최적 \( \mathrm { pH } \) 와 최적 온도</h3> <p>M. scorodonius 균사체로부터 생산된 배양액 중의 효소활성에 대해 \( \mathrm { pH } \) 및 온도의 영향을 조사하였다. 효소는 \( \mathrm { pH } 3.4 \)에서 최대 활성을 나타내었고 \( \mathrm { pH } 3.0-3.8 \)사이에서 \( 80 \% \)이상의 활성을 나타내었으며, \( \mathrm { pH } 4.6 \)이후로는 효소의 활성도가 \( 40 \% \)이하로 급격히 감소하였다. 이 결과는 Salony 등이 보고한 Cyathus bulleri로부터 분리정제한 laccase의 최적 \( \mathrm { pH } 3.5-4.0\)과 유사하였으며, Trametes sp. AH28-2의 laccase 및 Fomitella fraxinea 의 laccase가 각각 \( \mathrm { pH } 4.5 \)와 \( \mathrm { pH } \mathrm { 5.0 } \)에서 최대 활성을 나타내는 결과와는 상이함을 알 수 있었다. 또한, M. quercophilus의 laccase는 같은 Marasmius 속 균주 유래의 효소임에도 불하고 본 효소와 다른 최적 \( \mathrm { pH } ( \mathrm { pH } \mathrm { 5-6) } \)를 나타내었다. 한편, 본 효소는 \( 75 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 최대 활성을 보였고 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이하에서는 활성도가 \( 50 \% \) 이하로 나타났다.Trametes sp. AH 28-2로부터 생산된 laccase의 최적온도는 \( 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이고, Lentinula edodes laccase 의 최적온도는 \( 40 ^ {\circ } \mathrm { C } \)이며 C. bulleri laccase 의 최적온도는 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이었다. 또한, M. quercophilus의 laccase는 \( 75 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 최적온도를 나타내어 본 효소의 최적온도와 동일하디. 따라서, Marasmius 속 균주 유래의 laccase는 다른 곰팡이 유래의 laccase와 비교하여 매우 높은 온도에서 최적 활성을 가지는 것으로 확인되었다. 이와 같은 특성을 이용하여 본 효소를 오염 우려가 없는 고온 하에서 산업적으로 적용할 경우 매우 유용할 것으로 생각된다.</p>