선변된 균주를 동정하기 위하여 형태학적, 생리학적 및 생화학적 특징을 조사하기 위하여 LB액체 배지에서 전배양시킨 생육 \( \mathrm { pH } \)의 영향은 배지중 \( \mathrm { pH } \)를 5, 6, 7, 8 및 9로 염분 \( ( \mathrm { NaCl } ) \) 농도의 영향은 C-배지의 염분농도를 \( 2 \%, 3 \%, 4 \% \) 밎 \( 5 \% \)를 각각 조정하여 유화력을 측정하였다.
<h2>균주의 동정</h2> <p>선변된 균주를 동정하기 위하여 형태학적, 생리학적 및 생화학적 특징을 조사한 후 Bergey's manual of systematic bacteriology를 근거로 하여 동성하였다.</p> <h2>균주의 생육도 측정</h2> <p>선벽된 균주의 생육온도를 조사하기 위하여, \( 500 \mathrm { ml } \) 삼각 플라스크에 crude oil \( 1 \% \) 를 함유한 C-배지를 \( 200 \mathrm { ml } \) 넣고, LB액체 배지에서 전배양시킨 균주 \( 1 \% \) 를 접종하여 \( 26 ^ {\circ } \mathrm { C } \), \( 32 ^ {\circ } \mathrm { C } , 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 및 \( 42 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 각각 \( 180 \mathrm { rpm } \) 으로 진탕배양하였다. 이때 배양시간에 따른 균체의 성장은 1, 3, 5일에 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 spectrophotometer (U-1100, Hitachi, Japan)를 사용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.<p>생육 \( \mathrm { pH } \) 의 영향은 배지중의 \( \mathrm { pH } \) 를 5, 6, 7, 8 및 9로 각각 조정하여 실시하였으며, 배양시간에 따른 균체의 성장은 1, 3, 5일에 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 염분 \( ( \mathrm { NaCl } ) \) 농도의 영향은 C-배지의 염분농도를 \( 2 \%, 3 \%, 4 \% \) 밎 \( 5 \% \) 르 각각 조정하여 실시하였으며, 배양시간에 따른 균체의 성장은 처음 3 일간은 12 시간 단위로, 그 이후로는 1 일 단위로 진탕배양한 배양액을 일정량 취하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도률 측정하였다.</p> <h2>Crude oil 분해능 측정</h2> <p>4A3 균주의 배양 시간에 따른 유화력의 변화를 보기위해 균배양액을 원심분리한 후 상층액을 얻어 사용하였다. 유화력 측정은 \( 0.5 \mathrm { M } \mathrm { NaCl } \) 이 첨가된 \( 20 \mathrm { mM } \) Tris- \( \mathrm { HCl } \) 완충용액 \( ( \mathrm { pH } 7.8) 5 \mathrm { ~m } \ell \) 에 상충액 \( 1 \mathrm { ~m } \ell \) 를 가하고, 기질로서 \( 2 \% \)crude oil를 첨가하여 1 분간 강하게 교반한 다음 10 분간 정치시켜 중간부위의 반응액 \( 2 \mathrm { ~m } \ell \) 를 취하여 \( 610 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도 측정값으로 나타내었다. 또한 분리균주의 유류분해 정도는 \( 4 \% \) crude oil이 첨가된 배지에 진탕배양 시키면서 경시적으로 관찰하였다.</p>