본 연구는 종자의 발아 및 haustorium 발달에 미치는 생장조절제의 영향을 조사한다. \( \mathrm { GA } _ { 3 } \) (gibberellic acid) 및 \( \mathrm { ABA } \) (abscisic acid), ethylene이 haustorium 발달에 미치는 영향을 조사하여 이를 파악한다. 또한, 접합자배 및 조직 (잎, 줄기, 화아(flower bud), apical bud)으로부터 캘러스 유도를 하고, 캘러스 발달이 이루어진 조직수를 조사하여 생장조절체가 미치는 영향을 조사한다.
<h2>기내 종자 발아 및 haustorium 발달에 미치는 생장조절제 영향 조사</h2> <p>종자의 발아 및 haustorium 발달에 미치는 생장조절제의 영향을 조사하기 위하여 표면살균된 종자를 IAA (indole-3-acetic acid), NAA (a-naphthalene acetic acid), IBA (indole-3-butyric acid), BA (6-benzyl adenine), zeatin, kinetin, TDZ(thidiazuron) \( 2 \mathrm { iP } \) (6-( \( \gamma, \gamma \)-dimethylallyamino) purine)가 각각 \( 0.1,0.3,1,3 \mathrm { mgl } ^ { -1 } \) 첨가된 B5 배양배지에 치상하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온기에서 명배양 (약 \( 80 \mu \mathrm { mol } \mathrm { m } ^ { -2 } \mathrm { ~s } ^ { -1 } \); 광주기 16/8시간)하였다. 또한 \( \mathrm { GA } _ { 3 } \) (gibberellic acid) 및 \( \mathrm { ABA } \) (abscisic acid)가 haustorium 발달에 미치는 영향을 조사하기 위하여 각각 1 \( \mathrm { mgl } ^ { -1 } \) 농도로 BA 와 흔용 및 단독처리된 B5 배양배지에 치상하여 배양하였으며 동시에 겨우살이 종자 발아시 광조건의 필요 여부를 조사하였다. 아울러 haustorium 발달에 미치는 ethylene의 영향을 조사기 위하여 ethylene 생합성의 전구체인 ACC (1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid) 및 ethrel (chloro-2-ethyl phosphonic acid) 그리고 ethylene 기능 저해제인 \( \mathrm { AgNO } _ { 3 } \)를 각각 \( 0,1,3,10,30 100 \mu \mathrm { M } \) 첨가된 B5 배양배지에 치상하여 배양하였다. 각 처리구는 페트리디쉬당 20 개의 종자를 치상하였으며 3개의 반복실험을 통해 4 주 배양 후 치상한 종자로부터 haustorium 발달이 이루어진 종자수를 조사하여 생장조절제가 미치는 영향을 조사하였다.</p> <h2>조직학적 관찰</h2> <p>접합자배, 잎 및 숙주내 endophytic system의 조직관찰을 위해 채집한 종자, 잎, 및 숙주내 endophytic system를 수거하여 고정액 (formalin: ethyl alcohol: glacial acetic acid,5:5:90, v/v } 에 넣어 고정한 다음 에탄올을 이용하여 조직의 탈수반응 후 현미경 관찰용 paraplast를 준비하였다. 조직은 10cm 두께로 절단하였으며 1%haematoxylin 으로 염색한 다음 canada balsam으로 영구표본을 제작하여 광학현미경하에서 관찰하였다.</p> <h2>다양한 조직으로부터 캘러스 유도</h2> <p>접합자배 및 조직 (잎, 줄기, 화아(flower bud), apical bud)으로부터 캘러스 유도를 위하여 종자 및 조직을 10% 상업용 락스로 10 분간 표면살균한 다음 멸균수로 3-4회 세척 멸균 여과지로 습기를 제거한 다음 20g/L sucrose 및 4g/L Gelrite가 첨가된 B5 배지에 각각 조직을 치상하여 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 암배양하였 다. 생장조절제는 NAA, IAA 및 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid)를 각각 0, 0.1, 0.3, 1 및 \( 3 \mathrm { mgl } ^ { -1 } \) 첨가하여 사용하였다. 잎 절편은 약 \( 5 \mathrm { ~mm } ^ { 2 } \), 줄기는 길이 약 5mm크기로 절단하여 사용하였으며 화분이 들어 있는 화아와 어린 잎이 들어 있는 apical bud는 채집한 식물에서 떨어지는 조직을 그대로 사용하였다. 접합자배는 살균된 종자를 무균작업대내에서 종축으로 절단하여 초록색의 접합자배를 꺼내어 배양하였다. 각 처리구는 페트리디쉬당 20 개의 조직을 치상하였으며 3 개의 반복실험을 통해 4 주 배양 후 치상한 조직으로부터 캘러스 발달이 이루어진 조직수를 조사하여 생장조절제가 미치는 영향을 조사하였다.</p>