폐수에 포함되어 있는 방향족 화합물 분해를 위한 균주를 확보하기 위해 채칩한 폐수와 토양의 희석 현탁액을 기체 형태로 고체배지에 흘려주어 자화능이 우수한 균주를 분리하였다. 제지폐수의 주성분인 셀룰로오스를 분해시키는 미생물 확보를 위해 셀룰로오스 현탁액을 다양한 균주가 배양된 고체배지에 도말하여 clear zone 형서 여부를 분석하여 제지폐수 처리용 미생물을 확보하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>폐수시료의 선정</h2><p>본 연구에 사용된 폐수시료는 경남 소재의 J 제지공장의 원수, 1차 처리 수, 폭기조, 침전조와 방류수를 대상 제지폐수로 선정하였고, 이들 폐수의 성상은 환경오염 공정시험법과 standard method를 이용하여 분석하였다.</p><h2>방향족 화합물 분해균주의 분리</h2><p>Benzene과 phenol 등 방향족 화합물 분해 균주의 분리는 전국 각지에서 채집한 폐수와 토양을 균주원 시료로 하여 멸균된 증류수로 연속 희석한 후 희석액을 LB 평판 고체배지에 도말하여 나타난 집락(colony)을 tooth-pick로써 고체 최소배지에 접종하고 benzene과 phenol을 각각 증기상태로 공급하면서 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 약 5일간 배양한 후 집락을 관찰하여 자화능이 우수한 균주를 분리하였다. 미생물 배양 및 특성 조사를 위하여 사용한 배지는 고 등이 사용한 최소배지를 사용하였으며, 배지 \( 1 \mathrm{l}\)당 각 성분의 조성과 함량은 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl}\) \(1.0 \mathrm{~g} \), \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4} \) \(4.35 \mathrm{~g}\), \( \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4}\) \(3.9 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\) \(0.48 \mathrm{~g}\) \(\mathrm{CaCl}_{2}\) \(0.03 \mathrm{~g} \), \(\mathrm{FeSO}_{4}\) \(0.01 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MnCl}_{2}\) \(0.01 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{CoCl}_{2}\) \(0.001 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{MnO}_{4}\) \(0.001 \mathrm{~g} \) 등이며 \( \mathrm{pH} \)를 6.8로 조절하였다.</p><h2>Cellulose 분해균주의 분리</h2><p>제지폐수의 주성분인 cellulose를 분해시킬 수 있는 미생물을 분리하기 위하여 경남, 전남, 부산 일원의 토양, 톱밥퇴비 및 썩은 볏집 등에서 채취한 시료를 생리식염수로 \( 10^{-3} \sim 10^{-6} \)으로 희석하여 분리용 고체배지에서 상기 시료의 현탁액을 도말하여 배양한 후 \( 0.1 \% \) congo red 용액으로 30분간 염색하고 \( 1.0 \mathrm{~M} \mathrm{~NaCl} \) 용액으로 세척하여 clear zone의 형성 유무를 확인하였다. 손 등의 방법을 변형한 분리용 고체배지는 멸균된 생리식염수 \(1\mathrm{~l}\)에 carboxlymethyl cellulose \( 5 \mathrm{~g} \), \( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4}~ 2.5 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{~K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\) \(0.25 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\) \(0.1 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{FeSO}_{4}\cdot 7\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\) \(0.002 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{MnSO}_{4} \cdot 4 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\) \(0.002 \mathrm{~g}\), \(\mathrm{NaCl}~ 0.1 \mathrm{~g} \), yeast ex-tract \( 1.0 \mathrm{~g} \), trypan blue \( 0.25 \% \) solution (\(0.66 \mathrm{~ml} / 100 \mathrm{~ml} \) medium) 등으로 구성되었으며, cellulose 분해균주 배양조건은 \( \mathrm{pH} 7.0\), \(30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5일간 배양하여 clear zone 형성이 큰 균주를 선별하여 이를 제지폐수 처리용 미생물로 활용하였다.</p>