NO는 iNOS으로 생성되고 정상적인 상태에서 방어작용과 신경전달물질 및 혈관 조절 등의 기능을 하고 염증과정에서 염증성 사이토카인에 의해 과도하게 분비된 NO는 급성 패혈성 쇼크를 일으킬 수 있고 DNA 손상, 염증매개물 과다 생성을 통한 염증 증폭, 강한 세포독성으로 인한 세포 및 조직 괴사, 기능장애 등을 일으켜 만성 염증 및 자가면역질환의 원인이 될 수 있다. iNOS에 의해 생성된 NO의 생성이 농도의존적으로 억제됨을 확인하고 iNOS 생성도 억제되는 것을 확인한 결과, RGE \( ~5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서부터 iNOS가 거의 발현되지 않았다. 염증과정에서 인지질을 대사시켜 생성된 아라키돈산에서 PGE\(_{2} \)를 생성시키는 효소인, COX-2의 발현을 하려고 RGE를 농도별로 염증이 유발된 RAW 264.7 대식세포에 농도별로 처리하여 iNOS처럼 농도의존적으로 발현이 감소되는 것을 확인하였다.
<p>홍삼을 \( 40 \% \) 에탄올을 이용하여 추출한 시료를 대식세포에 농도별로 처리한 후 24시간 배양하여 MTT 방법을 이용하여 세포독성을 확인하였다. NO와 PGE\( _{2} \) 생성 변화를 관찰하기 대식세포에 염증유발물질인 구강미생물인 Streptococcus mutans에서 분리한 \( \mathrm{Ag} ~Ⅰ/Ⅱ-\mathrm{N} \) 재조합단백질을 처리한 다음 홍삼에탄올추출물 (RGE)을 농도별로 처리 한 후 24시간 배양하였다. NO 생성을 측정하기 위해 세포배양액을 이용한 Griess reaction 방법을 통하여 측정하였다. 또한, PGE\(_{2} \) 생성 변화를 관찰하기 위해 ELISA 방법을 이용하였다. 그 결과, RGE는 \( 120 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도까지 세포독성이 없는 것을 확인하였다. NO의 생성이 농도의존적으로 억제를 보였으며, \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서부터 \( 58.44 \% \) 이상 감소되는 것을 확인하였다. 또한, PGE\(_{2} \) 역시 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였으며, \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 43.67 \% \) 이상 감소하였다. NO는 iNOS에 의해 생성되며 정상적인 상태에서는 방어작용과 신경전달물질 및 혈관 조절 등의 기능을 하지만 염증과정에서 염증성 사이토카인에 의해 과도하게 분비된 NO는 급성 패혈성 쇼크를 일으킬 수 있으며, DNA 손상, 염증매개물 과다 생성을 통한 염증 증폭, 강한 세포독성으로 인한 세포 및 조직 괴사, 기능장애 등을 일으켜 만성 염증 및 자가면역질환의 원인이 될 수 있다.</p> <p>염증관련 사이토카인, TNF-\(\alpha\), IL-1\(\beta\), IL-6 그리고 IL-10을 확인하기 위해 RGE을 \( \mathrm{Ag} ~I/II-\mathrm{N}\) 재조합단백질에 의해 염증이 유발되어진 대식세포에 농도별로 처리한 후 시간별로 배양하였다. 배양액을 이용하여 각각의 사이토카인 변화를 ELISA 방법을 통하여 확인하였다. 또한, 염증유발 관련 단백질 발현 변화를 확인하기 위해 RGE를 농도별로 처리한 세포를 모아 RIPA buffer를 이용하여 단백질을 분리하였다. 분리된 단백질 정량은 BCA 방법을 이용하여 농도를 결정하였고, \( 40 \mu \mathrm{g} \)의 단백질을 \(8-12\%\) sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로 전기영동하고, PVDF membrane에 blotting한 후 일차 항체, iNOS, COX-2, ERK, JNK, P38, 그리고 NF-\(\kappa\)B를 반응시켰다. Horse radish peroxidase가 부착된 이차항체를 반응시키고 chemiluminescence detection system (Fisher)을 이용하여 단백질 발현을 분석하였다.</p> <p>iNOS에 의해 생성되는 NO의 생성이 농도의존적으로 억제됨을 확인하였으므로 iNOS 생성 역시 억제되는 것을 확인한 결과, RGE \( ~5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서부터 iNOS가 거의 발현되지 않음을 확인할 수 있었다. 또한, 염증과정에서 인지질을 대사시켜 생성된 아라키돈산에서 PGE\(_{2} \)를 생성시키는 효소인, COX-2의 발현을 확인하기 위해 RGE를 농도별로 염증이 유발된 RAW 264.7 대식세포에 농도별로 처리한 결과, iNOS와 마찬가지로 농도의존적으로 발현이 감소되는 것을 확인하였다. iNOS와 COX-2 mRNA 발현 역시 농도 의존적으로 감소됨을 확인하였다.</p>