첫번쨰 Western blotting 결과 \( \mathrm { A } _ { 4 } \), \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소의 위치가 확인되었고, 두번째 경우 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소만의 확실한 위치가 확인되었다. 나머지를 분명히 하기 위해 면역침전 반응 및 전기영동을 실시한 결과 liver-specific LDH \( mathrm { C } _ { 4 } \) 동위효소가 확인되었다.
<h2>면역화학적 분석</h2> <p>P. polyuranodon 눈조직의 LDH를 꺽지 \( \mathrm { A } _ { 4 } \)와 소 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소에 대한 항체와 Western blotting을 실시하여 반응시킨 결과, 꺽지 \( \mathrm { A } _ { 4 } \)에 대한 항체와 반응하여 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소가 확인되었고, 소 \( \mathrm { B } _ { 4 } \)에 대한 항체와도 반응하여 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소의 위치가 확인되었다. 따라서 \( \mathrm { A } _ { 4 } \), \( \mathrm { ~A } _ { 3 } \mathrm { ~B } \), \( \mathrm { ~A } _ { 2 } \mathrm { ~B } _ { 2 } \), \( \mathrm { AB } _ { 3 } \) 및 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 동위효소들의 위치를 확인 할 수 있었다. H. plecostomus의 경우 여러 동위효소를 분명하게 확인하기 위해 골격근조직과 뇌조직을 혼합한 조직액을 사용하여 \( \mathrm { A } _ { 4 } \), \( \mathrm { ~B } _ { 4 } \) 및 \( \mathrm { C } _ { 4 } \)에 대한 항체와 Western blotting을 실시하였다. 실험결과 꺽지 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소에 대한 항체와 반응하여 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소의 위치가 확인되었으나 \( \mathrm { B } _ { 4 } \) 및 \( \mathrm { C } _ { 4 } \)에 대한 여러 항체들과는 반응이 불분명하게 나타나서, 면역침전반응을 실시하게 되었다. 면역침전 반응 후 전기영동을 실시하여 MTT를 이용한 LDH 동위효소 염색을 실시한 결과, 음극쪽의 LDH band가 \( \mathrm { LDH } \mathrm { ~B } _ { 4 } \)에 대한 항혈청 및 조피볼낙 눈 \( \mathrm { C } _ { 4 } \)에 대한 항혈청과는 반응하지 않아 전기영동결과 band가 나타나고, 대구 간 \( \mathrm { C } _ { 4 } \)에 대한 항혈청과는 항원-항체 복합체를 형성하여 전기영동결과 나타나지 않았다. 따라서 음극쪽에서 나타난 LDH band는 liver-specific LDH \( \mathrm { C } _ { 4 } \) 동위효소로 확인되었다. plecostomus의 \( \mathrm { A } _ { 4 } \) 동위효소 보다 양극쪽의 band는 Fig. 3의 Western blotting 상에서 \( \mathrm { A } _ { 4 } \), \( \mathrm { ~B } _ { 4 } \), \( \mathrm { C } _ { 4 } \)에 대한 항체들과 모두 반응하여 나타나므로 어떤 동위효소인지 결과 해석이 불분명하므로 ADH 및 NDH 염색을 실시하였다.</p>