천궁과 당귀는 수지상세포의 항원제시 능력에 영향을 주는 최적 농도를 찾기 위한 실험을 진행했다. 각각의 시료는 \(1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml }\)에서는 영향을 미치지 못했지만, 천궁은 \(30 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml }\)에서, 당귀는 \(10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml }\)에서 최대 증식 반응을 나타냈다. 또한 IFN- \( \gamma \)는 대조군에 비해 천궁과 당귀에서 많이 분비되었으며, 특히 \(100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml }\)에서는 1.2배 이상, \(3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml }\)에서는 1.3배 이상 분비되었다.
<p>이상의 실험 결과로, 6 가지 한약재인 황기, 백작약, 천궁, 가자, 당귀, 어성초 중, 수지상세포의 항원 제시 능력에 영향을 미치는 물질이 포함되어 있는 것으로 생각되는 천궁과 당귀를 선별하여 본 실험에서 사용하였다.</p> <h2>천궁, 당귀가 수지상세포의 항원제시 능력에 미치는 영향</h2> <p>앞 실험에서 선별된 천궁과 당퀴가 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 와 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)에서 효과가 없는 것으로 나타나 수지상세포의 항원제시 능력에 영향을 미치는 최적 농도를 알아보기 위해 다양한 농도에서의 \( \mathrm { T } \) 세포의 증식 반응과 이 때 \( \mathrm { T } \) 세포 면역 반응 매개 물질로서 분비되는 IL-2와 IFN- \( \gamma \) 의 분비량을 알아보았다.</p> <p>먼저, 6일간 배양한 수지상세포를 96 well micro-plate에 \( 1 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 분주하고 대조군과 항원인 OVA( \( 1 \mathrm { mg } / \) \( \mathrm { ml } ) \), 그리고 천궁과 당귀를 농도별 \( (1,3,10,30,100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 로 첨가하여 24 시간 배양한 다음, T세포가 한약재에 의한 직접적인 영향을 받지 않도록 plate를 원심 침전시켜 washing하였다. 그 다음 T세포주를 \( 5 \times 10 ^ { 4 } \) cells/well로 분주하여 24시간 배양한 후, IL-2와 IFN- \( \gamma \) 의 측정을 위한 배양 상층액을 회수하였고 72 시간 후에는 T세포의 증식 반응을 측정하였다. 수지상세포의 항원 제시에 의한 \( \mathrm { T } \) 세포의 증식 반응은 두 시료 모두 \( 1 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서는 효과가 없었으나 천궁의 경우 \( 30 \mu \mathrm { g } \) \( / \mathrm { ml } \) 에서 최대 증식 반응이 나타났으며 \( 10, \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서도 이에 상응하는 증식 반응이 유도되었다(Fig. 2). 당기는 3, 10, \( 30 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 높은 증식 반응이 유도되었으며, \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 최대 증식 반응이 나타났다. 또한, 회수한 배양 상층액에 포함되어 있는 IL-2와 IFN- \( \gamma \) 의 농도는 ELISA로 측정하였다. 즉, \( \mathrm { IL } -2 \) 의 경우, 천궁은 \( 1,3,10,30 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 비교적 많은 양의 IL-2가 분비되는 것으로 나타났으며, 특히 \( 3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 과 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 OVA만 첨가한 대조군에 비해 약 2 배의 많은 양을 분비하였다(Table 1). 뼌만 아니라 당귀에서도 농도에 상관없이 많은 양의 IL-2 생산이 유도되었으며, \( 3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 과 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 OVA만 첨가한 대조군에 비해 \( 1.5 \) 배 정도의 IL-2가 분비되었다. IFN- \( \gamma \) 또한 천궁과 당귀 모두 대조군에 비해 많은 양이 분비 되었으며, IL-2와 달리 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서는 \( 1.2 \) 배 이상이, \( 3 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서는 \( 1.3 \) 배 이상의 많은 양이 분비되었다(Table 2).</p>