P. P. farinosa MBY/L1569 균주의 내열성과 내산성이 대조 균주인 P. farinosa KCTC27412보다 우수함을 알아내기 위해 YEPD 평판배지를 이용한 실험을 진행하였다. 모든 배양온도에서 MBY/L1569 균주의 성장속도가 KCTC27412 균주보다 유의하게 빠른 것으로 나타났다.
<h2>분석방법</h2> <p>균체성장은 흡광광도계(Ultrospec 6300 pro, GE Healthcare, Sweden)를 사용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \)에서 세포흡광도를 측정하여 결정하였다. 포도당 및 에탄올 농도는 굴절률 검출기(RID-10A, Shimadzu, Japan)가 장착된 고성능 액체 크로마토 그래프(HPLC 20A-Series, Shimadzu)를 사용하여 측정하였다. 컬럼은 Rezex ROA-Organic Acid H + (Phenomenex, USA)를 사용하였으며, 이동상으로서 \( 0.005 \mathrm { ~N } \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 용액을 \( 0.6 \mathrm { ml } / \) \( \min \)의 유속으로 사용하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 측정은 3회 반복하였으며 평균값과 표준오차는 SPSS(v 20.0, SPSS, USA)를 사용하여 결정하였고 유의성 검증은 Duncan의 다중범위 검정법을 사용하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>균주분리 및 동정</h2> <p>누룩으로부터 \( 44 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 성장할 수 있는 효모 균주 60점을 분리하였다. 분리된 균주 중 YEPD 액체 배지에서 가장 성장속도가 우수한(data not shown) 균주를 선발하여 MBY/ L1569 균주로 명명하였다. MBY/L1569 균주는 동정한 결과 P. farinosa CBS8045 균주의 18S rRNA 유전자 (GenBank Accession No. FR668061.1)의 염기서열과 매우 높은 상동성 \( 99 \% \)을 나타내어 P. farinosa로 최종 동정하였다.</p> <h2>분리 균주의 생육특성</h2> <p>P. farinosa MBY/L1569 균주의 내열성과 내산성을 대조구 균주와 비교하기 위하여 YEPD 평판배지를 사용하여 성장을 비교하였다(Fig. 1). 배양온도 \( 44 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 P. farinosa MBY/L1569 균주는 모든 \( \mathrm { pH } \) 조건에서 성장하였지만 대조<p>구 균주는 성장하지 못하여 P. farinosa MBY/L1569 균주가 대조구 균주보다 내열성과 내산성이 우수한 것으로 판단되었다. 배양온도 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)와 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서는 \( \mathrm { pH } \) 5와 7로 조정한 배지에서 대조구와 실험구 균주가 유사하게 성장하여 유의적인 차이를 판단할 수 없었다. 평판배지를 이용한 실험결과로부터 P. farinosa MBY/L1569 균주가 대조구로 사용한 KCTC27412 균주에 비하여 내열성, 내산성이 우수한 것을 확인하였다.</p> <h2>배양조건에 따른 MBY/L1569 균주의 비성장속도</h2> <p>누룩으로부터 분리된 P. farinosa MBY/L1569 균주의 생육 특성을 조사하기 위하여 배양온도, 배지의 초기 \( \mathrm { pH } \)및 탄소원으로 주입한 포도당 농도에 따른 비성장속도를 측정하였다. 모든 배양온도에서 대조구로 사용한 P. farinosa KCTC27412 균주에 비하여 P. farinosa MBY/L1569 균주의 비성장속도가 유의적으로 우수하였다(Fig. 2A). 고체배지에서는 대조구 균주가 \( 44 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 성장하지 못하였으나, 액체배지에서는 \( 44 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \( 0.18 \pm 0.08 \mathrm { ~h } ^ { -1 } \)의 비성장속도를 나타냈으며, \( 46 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서는 \( 0.12 \pm 0.06 \mathrm { ~h } ^ { -1 } \)의 비성장속도를 나타내었다. 고체배지보다 액체배지에서 비성장속도가 빠른 것은 균체성장에 필요한 산소, 영양원 등의 물질전달이 고체배지보다 용이한 것에서 기인한 것으로 추정된다. 실험구 균주는 \( 44 ^ {\circ } \mathrm { C } , 46 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 각각 \( 0.38 \pm 0.03 \mathrm { ~h } ^ { -1 } , 0.37 \pm 0.05 \mathrm { ~h } ^ { -1 } \)의 비성장속도를 나타내어 대조구 균주보다 고온에서 상대적으로 빠른 성장속도를 나타내었다. P. farinosa MBY/L1569 균주는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 가장 빠른 비성장속도 \( \left (0.50 \pm 0.02 \mathrm { ~h } ^ { -1 } \right ) \)를 나타냈다.</p>