시험에 사용한 단순 포진 바이러스 1형, 2형, adenovirus 각 3건과 mumps virus 2건은 real-time NASBA, 바이러스 배양, 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험 모두에서 음성으로 나타났으며, rhinovirus의 경우 2 step RT-PCR 시험에서는 1건이 위양성 반응을 나타냈다. 양성으로 검출된 검체는 모두 145건으로 그중 10세 미만 143건이 검출되었고, 10세 이상 2건 검출되었다. 시험법 중 Real-time NASBA는 증폭과 검출이 동시에 일어나 복잡한 단계가 필요 없고, 시험 소요 시간이 5시간 정도이므로 총 9시간이 소요되는 2 step RT-PCR에 비해 신속히 진단과 편리성이 용이했다.
<h2>특이도 검사</h2> <p>시험에 사용한 단순 포진 바이러스 1형(HSV-1), 2형(HSV-2), adenovirus 각 3건과 mumps virus 2건은 real-time NASBA, 바이러스 배양, 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험 모두에서 음성으로 나타났다. rhinovirus의 경우, 10건 모두에서 바이러스 배양과 real-time NASBA 시험 결과 음성으로 일치하였지만, 2 step RT-PCR 시험에서는 1 건의 rhinovirus가 위양성 반응을 나타내었다.</p> <h2>양성 검체 특성</h2> <p>46건의 검체에서 3가지 시험법 모두에서 양성 결과를 보였고 이들은 모두 10 세 미만 환자의 검체에서 검출 되었다.</p> <p>각각의 시험법 중 하나 또는 그 이상 양성으로 검출된 검체는 모두 145 건 이었으며 그 중 10 세 미만 환자에서 143 건이 검출되었고, 10 세 이상에서 2건 검출되었으며 18 세 이상에서는 1 건도 검출되지 않았다. 검체별 양성율은 대변이 52.3 \%(103건/197 건), 뇌척수액 \( 34.8 \% \) (24건/69건), 인후도찰물 \( 69.2 \%(18 \) 건/26건) 으로 각각 나타났다. 또 뇌척수액의 경우 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험에서 상대적으로 낮은 양성율 \( 7.2 \%(5 / 69) \) 을 보였으며, 인후도찰물은 바이러스 배양에서 양성율이 \( 30.7 \%(8 / 26) \)으로 낮게 나타났다. 월별로는 6-8월에 분리된 검체건수가 많았고, 양성 환자의 성별비는 남 70 : 여 71로 유의한 차이점을 나타내지 않았다.</p> <h2>Real-time NASBA, 5'-NCR 2 step RT-PCR, 바이러스 배양시험의 편리성 및 소요시간 비교</h2> <p>세포배양에서 enterovirus가 자라는데 보통 3일에서 5일, 길게는 7일이 걸리며 14 일 이상 세포병변효과가 관찰되지 않으면 음성으로 판정하게 된다. 그리고 세포배양 실험을 위해서는 실험이 없을 때에도 세포주를 항상 최적의 상태로 유지하기 위한 시간이 별도로 소요되며, 세포의 유지와 세포변성 효과를 확인하기 위하여 숙련된 인력이 필요하다. Real-time NASBA는 molecular beacon probe와 NucleiSens EasyQ롤 사용하여 하나의 튜브에서 증폭과 검출이 동시에 일어나므로 복잡한 단계가 필요 없고 소요시간도 5시간이면 충분하다. 2 step RT-PCR은 RT와 PCR의 2단계가 필요하며 증폭산물을 확인하기 위한 별도의 전기영동과정이 필요하므로 총 9 시간이 걸려 결과적으로 하루 만에 실험결과를 확인할 수는 없었다.</p> <h2>바이러스 유전자형 분석결과</h2> <p>바이러스 배양과 5'-NCR 2 step RT-PCR 시험결과 양성인 검체 141건(바이러스 배양과 5'-NCR 2 step RT-PCR 모두 양성 46건, 바이러스 배양만 양성 55건, 5'-NCR 2 step RT-PCR만 양성 40건)에 대하여 VP-1 RT-PCR을 수행하여 검체 모두에서 \( 358 \mathrm { bp } \) 의 증폭산물이 확인되어(Fig. 1) sequencing 분석을 수행하였다. 그 결과 coxsackievirus CA4형 1건, \( \mathrm { CB } 1 \) 형 2건, \( \mathrm { CB } \) 2형 1건, \( \mathrm { CB } 3 \) 24건(17.0 \%), CB5 53건(37.6 \%), echovirus E9형 13건(9.2 \%), E18형 44건(31.2 \%), E30형 1건, untypable enter-ovirus 2건으로 분석되었다(Table 4). 그 중 세포배양에서는 음성이고 2 step RT-PCR에서만 양성을 보이는 검체 40 건은 coxsackievirus CA4형 1건, CB3 2건, CB5 4건, echovirus E9형 3건, E18형 27건, E30형 1건, untypable enterovirus 2건으로 나타났다.</p>