melatonin이 소 대동맥 내피세포의 성장에 미치는 영향을 평가하기 위해 내피세포를 사용하여 관찰하였다. Fig. 1B에서 확인할 수 있는 것처럼, melatonin의 농도 변화와는 관계없이 active caspase-3의 수준은 변동이 없었으며, 이는 melatonin이 세포 사멸에 영향을 주지 않음을 시사하며 본 연구에서는 thymidine 처리로 세포 증식을 억제한 후 스크래퍼 찰과기를 사용하여 창상선을 형성한 후 세포 이동을 평가하기 위해 추가적으로 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에서 세포를 보관하고 세포 수를 계산하는 것은 melatonin이 혈전 생성에 대한 영향이 없음을 나타낸다.
<h1>결과</h1> <h2>혈관내피세포 성장 실험결과</h2> <p>혈관 생리 활성 가운데 하나인 내피세포의 성장에 melatonin이 미치는 영향 평가는 소 대동맥 내피세포를 이용하여 관찰하였다. Melatonin의 효과를 정확하게 알아보기 위하여 melatonin을 농도별 \( (1 \mathrm{nM}, 100 \mathrm{nM}, 10 \mu \mathrm{M}, 1 \mathrm{mM}) \)로 처리한 후 WST assay를 통해 세포 성장을 평가하였다. Fig. 1A에서 보는 바와 같이 다양한 농도의 melatonin을 처리하였을 경우 어느 농도에서도 내피 세포의 성장이 증가하지 않는 것을 확인할 수 있었다. 이는 melatonin이 혈관내피세포의 증식에는 아무런 영향을 미치지 않는다는 것을 의미한다.</p> <h2>혈관내피세포 사멸 실험결과</h2> <p>Melatonin이 혈관내피세포의 증식에는 아무런 영향을 미치지 않는 것을 확인하였으므로, 다음으로 혈관 내피층의 세포사멸에는 melatonin이 어떤 영향을 미치는지 관찰하였다. 소 대동맥 내피세포는 세포 외 기질에 부착하여 자라는 세포이기 때문에 죽은 세포는 모양이 원형이며 부유세포로 변화한다. 따라서 세포사멸은 모양이 원형으로 변형되어 부유하고있는 세포의 수를 세어서 평가하였다. 혈청기아로 소 대동맥 내피세포의 세포사멸을 유도하였고, melatonin이 세포사멸에 미치는 효과는 혈청기아 상태에서 melatonin을 처리하여 확인한 결과, 다양한 농도로 처리한 melatonin의 어느 경우에도 세포사멸 정도는 변함이 없음을 확인할 수 있었다(Data not shown). Melatonin이 세포사멸에 영향을 미치지 않는다는 사실을 다시 한 번 확인하기 위하여 western blot을 통해 세포사멸과 관련된 단백질인 procaspase-3와 active caspase-3의 양을 측정함으로써 세포사멸을 확인하였다. Fig. 1B에서 보듯이 melatonin의 농도와는 관계없이 active caspase-3의 양의 변화는 관찰되지 않았고, 이는 melatonin이 세포사멸에는 아무런 영향을 미치지 않음을 보여준다.</p> <h2>혈관내피세포 이동에 관한 실험결과</h2> <p>혈관내피세포의 이동은 혈관 형성과 상처 치유에 필요한 과정 중 하나로, 혈관 형성과 상처 치유에 미치는 melatonin의 영향을 알아보기 위해 혈관내피세포의 이동에 미치는 melatonin의 영향을 관찰하였다. 본 연구에서는 thymidine을 처리하여 세포 증식을 억제한 후 스크래퍼 찰과기를 이용하여 창상선을 만든 뒤 세포를 추가적으로 \( \mathrm{CO}_{2} \) 배양기에 보관하여 이동한 세포 수를 세어서 평가하였다. Fig. 1C에서 보듯이 혈관내피세포의 이동 정도는 melatonin의 농도와는 아무런 관계가 없음을 확인할 수 있었다. 이는 melatonin이 혈관 형성과 혈관의 상처 치유에는 영향을 미치지 않는다는 것을 의미한다.</p> <h2>백혈구 동종세포간 응집 실험결과</h2> <p>혈관에 상처가 생기면 백혈구 동종세포간 응집이 일어나 혈전이 형성되고 출혈을 방지하게 된다. 하지만 혈관 안에서 형성되는 혈전은 혈류를 따라 이동하는 도중에 혈관을 막게되면 뇌졸중이나 심근경색 같은 혈관질환이 일어난다. Fig.1D에서 보듯이 THP-1 세포에 melatonin을 처리하였을 경우, THP-1 동종세포간 응집이 일어나지 않는 것을 관찰할 수 있었다. 이는 melatonin이 혈전을 형성하는데 아무런 영향을 미치지 않는다는 것을 의미한다.</p>