독소 유전자의 검출하고 검출된 유전자에 대한 chitosan의 영향을 알아보기 위해, Enterotoxin 유전자 독소가 검출된 17주 중에서 ctx 유전자의 경우 V vulnificus-2 균주, thh 유전자의 경우 V damsela-1 균주, tdh 유전자의 경우 V parahemolyticus-7 균주를 선정하고 PCR 산물에 chitosan을 농도별로 첨가하여 독소 유전자 검출에 대한 영향을 살펴보며, ctx와 trh는 \( 450 \mu \mathrm { g } / \mathrm { m \ell } \) 이상에서 tdh는 \( 400 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { m } \ell \) 이상에서 독소 유전자가 검출되지 않아 chitosan이 독소 유전자의 검출에 영향을 미치는 것으로 판단된다.
<h2>독소 유전자에 대한 chitosan의 영향</h2> <p>Enterotoxin 유전차 독소가 검출된 17 주 중에서 ctx 유전자의 경우 V. vulnificus-2 균주를, thh 유전자의 경우 V. damsela-1 균주를 tdh 유전자의 경우 V. parahemolyticus-7 균주를 선정하여 이들의 PCR 산물에 chitosan을 농도별로 첨가하여 독소 유전자 검출에 대한 영향을 살펴보았다.</p> <h3>1) cts</h3> <p>ctx 유전자 검출시 chitosan의 영향을 V. vulnificus-2로 실시한 결과 Fig. 4와 같았다. Fig. 4에서처럼 chitosan을 첨가하지 않은 b와 c lane에서는 Fig. 1에서 보여지는 동일 한 크기의 band를 관찰할 수 있었으나, 농도별 첨가에 따라 ctx 유전자의 양이 점차 줄어트는 것을 할 수 있었으며 \( 450 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상의 농도에서는 ctx 유전자가 검출되지 않아 chitosan이 독소 유전자 DNA 의 증폭에 영향을 미치는 것으로 판단된다.</p> <h3>2) trh</h3> <p>trh 유전자 검출시 chitosan의 영향을 V. damsela-1로 실험한 결과 Fig. 5와 같았다. Fig. 5에서처럼 chitosan을 첨가하지 않은 b와 c lane에서는 Fig. 2에서 보이지는 동일한 band를 관찰할 수 있었으나, chitosan이 농도별로 침가됨에 따라 th 유전자의 양이 점차 줄어들어 DNA 가 적게 생성되었으며 \( 450 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 첨가농도에서부터는 trh 유전자가 deletion된 것을 볼 수 있었다. 이는 ctx 의 경우와 마찬가지로 \( 450 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의상의 농도에서는 th 유전자도 검출되지 않아 chitosan이 독소 유전자 DNA의 증폭에 영향을 미치는 것으로 나타났다.</p> <h3>3) tdh</h3> <p>th 유전자 검출시 chitosan 의 영향을 V. parahemolyticus -7로 실시한 결과 Fig. 6과 같았다. Fig. 6에서처럼 chitosan올 첨가하지 않은 b와 c lane 에서는 Fig. 3에서 보여지는 동일한 band를 관찰할 수 있었으나, chitosan이 농도별로 첨가됨에 따라 tdh 유전자의 양과 활성이 점차 줄어들어 DNA 가 적게 생성되었으며, \( 400 \mu \mathrm { g } / \mathbb { ml } \) 첨가농도에서부터는 tdh 유전자가 전혀 검출되지 않아 ctx 와 trh 의 경우와 유사한 결과가 나타났다. 이는 primer의 종류와 PCR 조건 내지는 chitosan의 첨가시 반응시간과 조건 그리고 mutant로서의 작용 가능성 등의 원인을 고려하여 이후 실험을 진행하여야 될 것으로 사료된다.</p> <h1>요 약</h1> <p>식중독을 야기하는 미생물중에서 분리 빈도가 최근 증가하고 있는 비브리오속을 대상으로 독소 유전자의 검출하였고 PCR을 이용하여 검출된 독소 유전자에 대한 chitosan의 영향을 알아보았다.</p> <p>해산물과 해수로부터 8균주의 V. parahemolyticus, 7균주의 V. minicus, 6균주의 V. damsela, 5균주의 V. vulnificus, 4균주의 V. alginolyticus를 분리하였다. 이들 30주에서 식중독을 야기시키는 독소 유전자인 ctx, trh 및 tdh의 검출을 실시한 결과, 각각 7주, 4주 및 4주에서 검출되었다. 각각의 독소 유전자 검출 양성주 중에서 V. vulnificus-2, V.damsela-1 및 V. parahemolyticus-7를 선정하여 PCR산물에 chitosan 용액을 농도별로 첨가하여 독소 유전자 검출을 실시하였다. ctx와 trh는 \( 450 \mu \mathrm { g } / \mathrm { m \ell } \) 이상에서 tdh는 \( 400 \mu \mathrm { g } / \) \( \mathrm { m } \ell \) 이상에서 독소 유전자가 검출되지 않아 chitosan이 독소 유전자의 검출에 영향을 미치는 것으로 생각된다.</p>