피부노화를 개선하려면 collagenase 활성을 저해하는 것이 매우 중요하며 이에 대해 collagenase 억제활성에 울릉도와 운금 만병초 추출물이 미치는 영향에 대한 연구를 진행했다. 비교군으로 진생베리 발효물은 \( 1,000\mu \mathrm{g}/\mathrm{ml}\)에서 \(33.44\%\), 선복화 가압 열수 추출물이 \(1,000\mu\mathrm{g}/\mathrm{ml} \)에서 \( 34.62 \% \)로 나타났고 울릉도와 운금 만병초 추출물은 약 2 배 높은 collagenase 저해 활성을 보여줬다. MTT assay를 사용해 울릉도 만병초와 운금 만병초 추출물이 섬유아세포인 CCD-986Sk cell의 증식에 끼치는 영향을 알아냈다.
<h2>Collagenase 저해활성 측정 결과</h2> <p>유연한 결합 조직인 collagen은 피부 내 진피층의 \( 80 \% \) 이상을 차지하고 있는 구조 단백질로 탄력 및 보습기능을 한다. 이외에도 elastin, fibronectin, laminin 등이 세포외기질을 구성하고 있다. 자연노화와 같은 내적 요인에 의해 체내의 collagen 생성이 감소하고, 자외선에 의한 활성 산소종 증가 및 외부 환경에 의한 스트레스에 의해 colla-gen 분해가 가속화되어 피부 기질이 파괴된다. 또한 colla-genase에 의해 collagen이 다른 세포외기질과 가교결합을 이루지 못하게 되어 수분, 탄력이 감소하며 주름이 생기게 된다. 이로써 피부의 주름 생성에 있어 collagenase 활성을 저해하는 것은 피부노화를 개선함에 있어 매우 중요하다.</p> <p>Collagen을 분해하는 효소인 collagenase 억제활성에 울릉도와 운금 만병초 추출물이 미치는 영향을 알아보았으며, Fig. 3 과 같이 나타내었다. 농도 의존적으로 저해능이 증가하였고 낮은 농도에서도 \( 50 \% \) 에 가까운 저해활성을 보였다. 최고 농도인 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 울릉도와 운금 만병초 추출물은 각각 \( 77.7 \%\), \(80.2 \% \) 의 collagenase 억제 효과를 확인할 수 있었다. Kim의 연구에 따르면 진생베리 발효물은 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 33.44 \% \) 의 저해 활성이 보고되었고, 선복화 가압 열수 추출물이 \( 1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 \( 34.62 \% \) 라고 보고한 Seo 등의 결과와 비교하면 울릉도와 운금 만병초 추출물은 이에 비해 약 2 배 높은 collagenase 저해 활성을 나타내었다.</p> <h2>MTT assay에 의한 세포 생존율 측정 결과</h2> <p>세포 증식 및 사멸도를 측정하며 tetrazolium salt를 이용한 방법으로 세포 독성을 판단하기에 비교적 간단한 실험이다. Tetrazolium salt는 dehydrogenase 및 환원형 화합물 등의 효소에 의해 쉽게 환원되어 formazan을 형성한다. 미토콘드리아의 전자전달계 과정을 통해 왕성한 대사활동을 하고 있는 세포는 에너지를 생산하며, 전자전달계에 존재하는 탈수소효소가 tetrazolium salt를 분해하여 for-mazan을 생성한다. 또한 노란색의 수용성 MTT tetrazo-lium을 세포에 처리하면, 온전한 대사과정이 가능한 세포의 미토콘드리아에 있는 탈수소효소에 의해 tetrazolium의 ring 구조가 파괴되면서 자주색을 띄는 비수용성의 MTT formazan 결정으로 환원되는 원리이다.</p> <p>울릉도 만병초와 운금 만병초 추출물이 섬유아세포인 CCD-986Sk cell의 증식에 미치는 영향을 확인하였기 위하여 MTT assay를 이용하여 측정하였다. 시료용액을 Fig. 4, Fig. 5 와 같이 5, 10, 50, 100, 500, \(1,000 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 의 농도로 처리하여 측정한 결과 농도 의존적으로 생존율이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 울릉도 만병초 추출물은 모든 농도구간에서 \( 90 \% \) 이상, 운금 만병초 추출물은 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었으며 이하의 실험에서는 추출물이 세포 증식에 영향을 거의 미치지 않아 생존율이 \( 100 \% \) 에 가까운 농도인 25, 50, \(100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 를 사용하여 진행하였다.</p>