본 연구에서는 총 플라보노이드의 함량 측정은 건강기능식품공전방법의 변형을 통해 시행하였으며, 이를 위한 표준물질로 catechin을 사용하였다. 플라보노이드의 함량은 mg catechin equivalent (CE)/ \(100 \) g dried sample로 표기하였다. 또한, 총안토시아닌 함량은 pH differential method의 변형을 통해 측정하였으며, 표준물질은 cyaniding- \(3 \)-glucoside equivalents의 분자량과 분자흡광계수 값을 이용하였다. 마지막으로, ABTS radical의 소거능 측정은 Re 등의 방법을 변형하여 수행하였다.
<h3>총플라보노이드 함량</h3> <p>총플라보노이드 함량은 건강기능식품공전방법을 변형 하여 실험하였다. 96 well plate에 희석한 시료 \( 17 \mu l \) 와 증류수 \( 96 \mu \mathrm { l } \) 를 혼합한 후 \( 2.5 \% \) (w/v) \( \mathrm { NaNO } _ { 2 } \) (Sigma) \( 10 \mu \mathrm { l } \)를 넣어 균질화하였다. 그 후, \( 5 \% \) (w/v) \( \mathrm { AlCl } _ { 3 } \) (Sigma) \( 10 \mu \mathrm { l } \) 를 넣고 \( 1 \mathrm { M } \mathrm { Na } _ { 2 } \mathrm { CO } _ { 3 } \) (Sigma) \( 67 \mu \mathrm { l } \) 넣어 균질화한 후 \( 510 \mathrm { ~nm } \) 에서 96 well microplate reader를 이용하여 흡광도를 3회 반복 측정하였다. 표준물질은 catechin (Sigma)을 사용하였으며, mg catechin equivalent (CE)/ \(100 \) g dried sample으로 함량을 표기하였다.</p> <h3>총안토시아닌 함량</h3> <p>총안토시아닌 함량은 pH differential method을 변형하여 측정하였다. 96 well plate에 적당한 농도로 희석한 시료 \( 10 \mu \mathrm { l } \) 를 넣고 각각 \( 2.5 \mathrm { mM } \) potassium chloride buffer ( \( \mathrm { pH } \) \(1.0 \))와 \( 400 \mathrm { mM } \) sodium acetate buffer \( ( \mathrm { pH } \) \(4.5 \)) \( 190 \mu \mathrm { l } \) 씩을 넣고 \( 510 \mathrm { ~nm } \) 와 \( 700 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 3회 반복 측정하였다. 표준물질은 cyaniding- \(3 \)-glucoside equivalents의 molecular weight (MW)와 molecular extinction coefficient \( ( \varepsilon) \) 값을 통하여 monomeric anthocyanin pigment 방법을 변형하여 사용하였다.</p> <h3>항산화능</h3> <p>ABTS radical 소거능의 경우, Re 등의 방법을 변형하여 실험하였다. 96 well plate에 \( 1.0 \mathrm { mM } \) AAPH (2,2'-azobis-(2amidinopropane) \( \mathrm { HCl } \) 와 \( 2.5 \mathrm { mM } \mathrm { ABTS } ^ { 2- } \) (2,2'-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt) 를 phosphate-buffered saline와 혼합하여 \( 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 반응시킨 후 \( 0.2 \mu \mathrm { m } \) PTFE syringe filter (Tokyo Roshi Kaisha Ltd., Japan)로 반응물을 제거 후, \( \mathrm { ABTS } ^ { - } \)시약과 시료를 10분 동안 반응시켰다. 반응온도는 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 였으며, 흡광도는 96 well microplate reader를 이용하여 \( 750 \mathrm { ~nm } \) 에서 3회 반복 측정하였다.</p>