실험을 통해 PMA에 의해 유발된 COX-2의 과발현 현상이 ENIL 및 ENIS에 의하여 억제될 수 있을지를 확인한 결과 COX-2의 발현억제 정도에 있어서 ENIL에 비하여 ENIS의 효과가 뛰어났다. ENIS는 COX-2의 발현억제와 이로 인한 \(\mathrm{PGE}_{2}\)의 생성 저해작용이 ENIL보다 효과적이라는 결과를 도출했다. ENIL 및 ENIS가 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 발현에 어떠한 영향을 미치는지를 확인한 결과, \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 경우 PMA 처리농도 및 시간에 따라 핵 내로의 이동이 증가했고 세포질에서 \( \mathrm{I} \kappa \mathrm{B} \)의 발현은 감소했다. PMA 처리에 의해 세포질에서 핵 내로의 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \) 이동이 ENIS에 의하여 눈에띄게 억제되었다.
<h2>PMA에 의한 COX-2의 발현 증가에 미치는 ENIL 및 ENIS의 영향</h2> <p>COX-2는 인체의 정상세포에서는 낮은 수준으로 유지되지만 여러 종류의 cytokine이나 성장인자에 의해서 증가되면 염증반응 및 조직의 손상을 유발하는 것으로. 알려져 있다. 뿐만 아니라 COX-2는 대장암, 전립선암, 유방암 등을 포함하는 거의 대부분의 암세포에서 과발현되어 있는 것으로 밝혀지고 있으며, 이러한 COX-2의 과발현 정도가 암환자의 생존율과 반비례한다고 보고되고 있다. 본 연구에서는 PMA에 의해 유발된 COX-2의 과발현 현상이 ENIL 및 ENIS에 의하여 억제될 수 있을지를 확인하기 위하여 각각의 시료를 \( 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도로 단독 처리하였을 경우와 1시간 선처리한 다음 PMA \( 40 \mathrm{nM} \)을 처리하였을 경우에 유발되는 COX-2의 발현 변화를 전사 및 번역 수준에서 비교하였다. Fig. 4에서 나타난 바와 같이 COX-1의 경우는 큰 변화가 관찰되지 않았지만 PMA에 의해서 과발현된 COX-2의 경우에는ENIS 선처리에 처리 농도 의존적으로. 의해서 전사 및 번역 수준 모두에서 발현의 정도가 현저하게 감소하는 것으로 나타났다. 하지만 ENIL을 선처리 하였을 경우에는 PMA에 의하여 증가된 COX-2의 발현감소 정도가 약하게 나타났다. 즉 염증반응에 중요한 역할을 하는 COX-2의 발현억제 정도에 있어서 ENIL에 비하여 ENIS의 효과가 더욱 뛰어나다는 것을 알 수 있었다.</p> <h2>PMA에 의한 \( \mathrm{PGE}_{2} \) 생성 증가에 미치는 ENIL 및 ENIS의 영향</h2> <p>COX-2에 의하여 생성된 \( \mathrm{PGE}_{2} \)는 염증반응에 동반되는 홍반, 부종 및 통증 등과 같은 증상의 원인이다. 뿐만 아니라 \( \mathrm{PGE}_{2} \)는 염증성 질환을 포함한 다양한 생체반응에 있어서도 세포분열이나 증식에 영향을 줌으로서 각종 질병의 유발과 진행에 관여하며, PMA는 이러한 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 발현을 증가시키는것으로 보고되고 있다. 따라서 \(\mathrm{PGE}_{2} \) 생성에 있어서ENIL 및 ENIS가 어떠한 영향을 미치는지를 조사한 결과는 Fig. 5에 나타난 바와 같으며, 결과에서 알 수 있듯이 정상 및ENIL 및 ENIS이 단독 처리된 경우에는 \( \mathrm{PGE}_{2} \) 생성에 큰 변화가 나타나지 않았지만, PMA 처리에 의한 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 생성 증가는 ENIS 선처리에 의하여 매우 억제됨을 알 수 있었으며, ENIL를 선처리하였을 경우에는 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 억제 현상이 약하게 나타났다. 이상의 결과를 살펴볼 때 ENIS는 COX-2의 발현억제와 이로 인한 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 생성 저해작용이 ENIL 보다 효과적이었음을 알 수 있었다.</p> <h2>PMA에 의한 \( N F-\kappa B \) 발현 증가에 미치는 ENIL 및 ENIS의 영향</h2> <p>염증반응에 있어서 \( \mathrm{NF}-\kappa B \)는 COX-2의 발현을 조절하는 것으로 알려져 있는데, 일반적으로 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)는 IBK와 결합하여 세포질에 존재하지만 inflammatory stimuli에 의하여 IBK가 degradation되면 자유로워진 \( \mathrm{NF}-\mathrm{\kappa B} \)는 핵 내로의 이동이 촉진되어 전사조절인자로 작용하면서 COX-2의 발현을 증가시킴으로서 염증반응을 촉진시킨다. 따라서 ENIL 및 ENIS가 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 발현에 어떠한 영향을 미치는지를 확인한 결과,Fig. 6A에 나타난 바와 같이 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 경우 PMA 처리농도 및 시간 의존적으로 핵 내로의 이동이 증가되었음을 알 수 있었으며, 세포질에서 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)와 결합하고 있는\( \mathrm{I} \kappa \mathrm{B} \)의 발현은 상대적으로 감소되었다. 다음은 PMA에 의하여 유발된 \( \mathrm{NF}-\kappa B \)의 핵 내로의 이동이 ENIL및 ENIS에 의하여 억제되는지의 여부를 확인한 결과, Fig. 6B에 나타낸 바와 같이 PMA 처리에 의하여 세포질에서 핵 내로의 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \) 이동이 ENIS 에 의하여 현저하게 억제되었음을 알 수 있었으며, 동시에 세포질에 존재하는 \( \mathrm{I}_{k} \mathrm{~B} \)의 발현도 매우 회복되는 것으로 나타났다. 하지만 ENIL 처리군에서는 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 핵 내 이동 억제의 정도가 ENIS 처리군에 비하여 다소 약한 것으로 나타났다. 결론적으로 협죽도 추출물은 \( \mathrm{NF}-\kappa \mathrm{B} \)의 활성 억제를 통한 COX-2의 발현을 억제함으로서 \( \mathrm{PGE}_{2} \)의 생성을 억제함으로서 항염증 효능을 나타낸다고 생각된다. 아울러 이러한 협죽도의 항염증 효능에 실질적인 역할을 하는 성분에 대한 추가적인 연구가 진행되어야 할 것이다.</p>