토양 속의 잔류 디젤 농도를 측정하기 위해 토양에 hexane-acetone solution을 반응시켜 얻은 상등액을 gas chromatography를 이용해서 분석한다. 토양 중의 미생물 활성은 \( \mathrm { H } _ { 2 } \)와 반응해서 TPF를 생성하는 기질인 TTC를 이용한 탈수소 효소 측정법으로 알아본다. TPF의 양은 spectrophotometer을 이용하여 \(485 \mathrm { ~nm } \)에서 측정하였다.
<h2>토양 및 미생물 활성측정</h2> <p>토양의 \( \mathrm { pH } \)는 토양과 3차 증류수를 1: 5( \( \mathrm { w } / \mathrm { v } \))로 혼합한 후 30 분간 교반하고 30 분간 정치한 후 \( \mathrm { pH } \) meter(Thermo Benchtop, USA)로 측정 하였다. 토양 함수량은 토양 \( 5 \mathrm { ~g } \)을 \( 110 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 건조기에서 항량이 될 때까지 말린 후 건조중량당 백분율로 계산하였다. 토양 중의 잔류 디젤 농도를 측정하기 위해 각 화분에서 채취한 토양 \( 5 \mathrm { ~g } \)을 시험관에 넣고, hexane-acetone solution (1:1, \( \mathrm { v } / \mathrm { v } \))을 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 넣은 후 30 분간 교반한 후에 30분간 정치하였다. 디젤농도는 상등액(hexane-acetone solution)을 채취하여 gas chromatography(5890 series, Hewlett Packard, USA)를 이용하여 분석하였다. 이때 gas chromatography의 분석 조건은 HP-5( \(30 \mathrm { ~m } \times 0.32 \mathrm { ~mm } \times 0.25 \mu \mathrm { m } \)) column과 불꽃 이온화 검출기를 사용하였다. Oven 온도는 \( 320 ^ {\circ } \mathrm { C } \), inlet 온도는 \( 280 ^ {\circ } \mathrm { C } \), detecter 온도는 \( 250 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 설정하였다.</p> <p>토양 중의 미생물 활성의 지표인 탈수소 효소 활성(DHA) 측정법을 이용하였다. 첨가된 기질의 일종인 TTC(2, 3, 5 triphenyl tetrazolium chloride)는 \( \mathrm { H } _ { 2 } \)와 반응하여 TPF(Triphenyl formazan)를 형성한다. 토양 \(3 \mathrm { ~g } \)에 \(3 \% \) TTC \(1 \mathrm { mL } \)와 멸균수 \( 2.5 \mathrm { ~mL } \) 을 첨가한 후 광분해를 막기 위해 은박지로 덮은 후 \(37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온기에 넣고 24시간 배양 한다. 배양액에 메탄올을 첨가 한 후 1시간 반 동안 계속 하여 (20분마다 한번 정도) 흔들어 액/액 추출한다. 추출한 메탄올 용액 속의 TPF의 양을 \(485 \mathrm { ~nm } \)에서 spectrophotometer(Model DR5000, Hach, USA)를 사용하여 측정하였다.</p>