2007년 1, 3, 5월 경남 거제시 성포에서 채취한 미더덕 \( 20 \mathrm{~kg} \) 을 소포장 후 -24^{\circ}C 냉동고에 저장하고 Simultaneous Steam Distillation and Extraction(SDE), 에서 ether를 추출용매로 그리고 Solid-Phase Microextraction(SPME) 등을 사용하여 향기성분을 추출하여 KD 농축기로 용매를 제거 후 GC 및 GC-MS로 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>본 실험에 사용한 미더덕(Styela clava)은 2007년 1월, 3월, 5월 경남 거제시 성포에서 채취하여 \( 20 \mathrm{~kg} \) 으로 소포장한 후 \( -24^{\circ} \mathrm{C} \) 의 냉동고에 저장하여 두고 각 항목의 분석을 위하여 재료를 흐르는 수돗물에서 해동 후 실험에 사용하였다.</p> <h3>Simultaneous Steam Distillation and Extraction(SDE)에 의한 향기성분의 추출</h3> <p>초퍼(copper)로서 마쇄한 신선한 미더덕 육 및 체액 \( 100 \mathrm{~g} \) 에 탈이온수 \( 900 \mathrm{ml} \) 와 내부표준물질(cyclohexanol, \( 140.5 \mu \mathrm{g} \) )을 첨가한 다음 SDE 장치에서 ether를 추출용매로 \( 2 \mathrm{hr} \) 추출 농축하였다. 추출된 향기성분은 KD (Kuderna-Danish Sample Concentrators) 농축기로 서서히 용매를 제거하여 약 \( 1 \mathrm{ml} \) 가 되도록 하여 GC 및 GC-MS로 동정하였다.</p> <h3>Solid-Phase Microextraction(SPME)에 의한 향기성분의 추출</h3> <p>SPME 장치(Manual type, Supelco Inc., Bellefonte, PA, USA)에, 흡착용 fiber는 polydimethylsiloxane/divinyl-benzene (PDMS/DVB, \( 65 \mu \mathrm{m} \) coating thickness)를 사용하였다. 시료 일정량과 내부표준물질(cyclohexanol, \( 70.3 \mu \mathrm{g} \) )을 첨가한 다음 \( 20 \mathrm{ml} \) 의 headspace glass vial (Supelco Inc., Bellefonte, PA, USA)에 넣고 aluminum crimp seal \( (20 \mathrm{~mm} \), open center)과 polytetrafluoroethylene (PTEE)/silicone sep-tum (60 mils)으로 밀봉한 후 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30 분간 fiber를 vial 내에서 노출시켜 휘발성 화합물을 흡착시켰다.</p> <h2>향기성분의 분석</h2> <p>미더덕 육 및 체액으로부터 채취한 향기물질의 조성은 ca-pillary column (Omegawax-320, \( 30 \mathrm{~m} \times 0.32 \mathrm{~mm} \) i.d., \( 0.25 \) \( \mu \mathrm{m} \) thickness, Supelco, St. Louis. MO, USA)과 FID를 장착한 GC (Shimadzu 17A, Kyoto, Japan)로 분석하였다. Injector \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), detector \( 260^{\circ} \mathrm{C} \), carrier gas (He)는 \( 1 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 로 유지하였고, split ratio는 100:1로 하였다. SPME법에 의해 추출된 시료 성분은 직접 GC에 fiber를 탈착시켜 주입하였다. 분석조건은 column 온도를 최초 5 분간은 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지하다가 분당 \( 3^{\circ} \mathrm{C} \)씩 상승시켜 \( 240^{\circ} \mathrm{C} \) 에 도달한 다음 40 분간 유지시켰다.</p> <h2>향기성분의 동정 및 정량</h2> <p>GC profile에 나타난 각 향기성분의 peak에 해당하는 휘발성화합물의 linear retention indices를 결정하기 위하여 탄화수소(n-paraffins, \( \mathrm{C}_{5}-\mathrm{C}_{25} \), Alltech Associates, USA)를 표준물질로 사용하였고, 시료의 향기성분을 분석할 때와 동일한 조건으로 GC에 주입하여 C5-C25의 표준 머무름 시간을 구하였다. 시료의 GC profile상에 나타난 각 향기성분의 머무름 시간과 표준 탄화수소와의 머무름 시간을 비교하여 향기성분의 retention index (RI)를 구하였다. 각 휘발성 화합물에 대한 잠정적인 동정은 retention index 및 standard MS library data (Wiley 275K, Hewlett-Packard Co., USA)에 의하였으며, 휘발성 화합물의 함량은 내부표준물질을 이용하여 상대적 함량으로 환산하였다(factor=1, \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{g}) \).</p>