분석방법은 일반성분은 AOAC 방법으로 측정하고, 세포벽구성성분은 Van Soest 등의 방법으로 하였다.Hemicellulose의 값은 NDF와 ADF의 차이로 나타냈으며, cellulose는 ADF와 lignin의 차이로 각각 구했다.세포질 구성성분은 100에서 NDF함량을 제하여 계산하고 결과는 SAS package program의 General Linear Model (GLM) procedure에 따라 처리하고분산분석을 실시 후, Duncan's multiple range test로 \( 5 \% \) 수준에서 유의성을 검정하였다.
<h2>분석방법</h2> <p>일반성분은 AOAC 방법으로 측정하였으며, 세포벽구성성분은 Van Soest 등의 방법으로 분석하였다. Hemicellulose의 값은 NDF (Neutral detergent fiber)와 ADF (Acid de-tergent fiber)의 차이로 구하였으며, cellulose는 ADF와 lignin의 차이로 각각 구하였다. 세포질 구성성분은 100에서 NDF함량을 제하여 계산하였다.</p> <p>F-TMR의 온도변화는 bag을 발효기간별 (1, 3, 5, 7, 14 및 21 일)로 개봉한 후 \( -50^{\circ} \mathrm{C} \sim 150^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 측정이 가능한 전자 온도계(Thermolab)를 중앙부위에 넣어서 일정한 시각 (12:00)에 각각 측정하였다.</p> <p>pH는 F-TMR \( 50 \mathrm{g} \)에 \( 450 \mathrm{ml} \)의 증류수(pH 7.0)를 첨가하여 homogenizer를 이용하여 1분간 혼합시킨 후, 4겹의 cheese cloth로 여과한 용액을 pH meter (Mettler toledo, MP-230, Switzerland)를 이용하여 측정하였다.</p> <p>암모니아태질소 \( \left(\mathrm{NH}_{3}\right. \)-N) 는 Chaney와 Marbach의 방법으로 전처리 후, spectrophotometer (BIO-RAD Model 680, Japan)를 이용하여 OD (optical density) 값을 표준용액과 비교분석하였다.</p> <p>VFA (Volatile Fatty Acid)는 상기 \( \mathrm{pH} \)를 측정한 후, \( 1.5 \mathrm{mL} \)를 채취하여 Eppendorf tube에 취하고 3,000 rpm에서 3분간 원심 분리하여 사료입자를 제거하였다. 그리고 난 후 상충액을 \( 0.20 \mu \mathrm{m} \) syringe filter로 여과한 후, HPLC (Agilent-1200, Germany)를 이용하여 측정하였다. 시료의 주입량은 \( 20 \mu \) l이었고, 이동상용액은 \( 0.0085 \mathrm{~N} \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 을 사용하였으며, 유속은 \( 0.6 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \) 이었다. Column은 \( 300 \mathrm{mm} \times 7.8 \mathrm{mm} \) I.d. MetaCarb 87H (Varian, USA)을 사용하였으며, 사용 온도는 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)였다.</p> <p>미생물 성장량은 각 발효기간별로 \( \mathrm{pH} \)를 측정하고 난 후, sample을 \( 1.5 \mathrm{ml} \) Eppendorf tube에 취하고, \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 원심 분리하여 사료 입자를 제거하였다. 그리고 난 후 상층액을 취하여 \( 14,000 \mathrm{rpm} \)에서 3분간 재 원심 분리하여 미생물 pellet을 침전시킨 다음, 상층액은 제거하고 침전물에 sodium phosphate buffer \( (\mathrm{pH} \) 6.5)를 첨가하여 교반하여 현탁시켰다. 이 과정을 3회 반복한 후에 spectrophotometer 이용하여 \( 550 \mathrm{~nm} \)에서 \( \mathrm{OD} \) 값을 표준용핵과 비교분석하여 구하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>결과는 SAS (statistical analysis system) package program의 General Linear Model (GLM) procedure에 따라 처리되었으며, 각 처리구간의 유의성 검증을 위해 분산분석을 실시한 후, Duncan's multiple range test로 \( 5 \% \) 수준에서 유의성을 검정하였다 (p<0.05).</p>