대추 및 포도 발효물들의 tyrosinae 저해 활성을 각각 분석한 결과, 대추의 알코올 발효 경우 54% 초산 발효는 36%의 저해효과를 나타내었고, 포도의 경우 알코올과 초산 발효물 모두 26% 저해효과를 나타내었다. 이를 MITF 발현으로 확인한 결과에서도 형광이 줄어드는 것을 확인하였다. 또한 항염증효과의 경우 사용한 각 발효물이 NO 발현을 감소시켜 각 발효물들은 항산화 및 미백, 항염증과 항균효과를 갖는 것으로 나타났다.
<h2>미백효과 측정 결과</h2> <p>Melanin 생성은 tyrosinase, tyrosinase related protein 1, tyrosinase related protein 2와 같은 3 종의 효소에 의해 조절된다. 이러한 효소들은 세포 내에서 cyclic adenosine monophosphate / protein kinase A 경로를 통해 melanin을 합성한다. 즉, 자외선에 피부가 노출되면 피부의 keratinocyte가 자극을 받게 되어 \( \alpha \)-melanocyte stimulating hormone, adrenocorticotropic hormone 등의 신호전달물질을 melanocyte로 분비하게 되어 세포 내 cyclic adenosine monophosphate가 증가하게 되며, protein kinase A를 활성화시켜 MITF 발현을 증가시킨다. 이렇게 발현이 증가된 MITF는 tyrosinase, tyrosinase related protein 1, tyrosinase related protein 2의 생합성을 촉진시켜 melanin이 증가하게 된다. 3종의 효소 중 tyrosinase는 tyrosin으로부터 DOPA와 DOPA-quinone을 거쳐 최종적으로 흑갈색의 melanin 색소 생성에 관여하는 효소로 자외선에 의하여 melanocyte의 유사분열이 일어나고 이어서 melanocyte가 활성화 된다. 활성화 된 melanocyte에서는 tyrosinase 합성이 촉진되고 melanin의 생성이 항지되어 이를 표피 밖으로 운반 배출하게 되어 기미, 주근깨와 같은 색소 침착이 일어나게 된다. 이는 따라서 tyrosinase 활성억제제는 피부 내에서의 melanin polymer 합성을 효과적으로 저해할 수 있어 피부 미백제의 개발에 있어서 tyrosinase 활성억제 실험은 유용한 평가법으로 인정되고 있다. 대추 및 포도 발효물들의 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 대추의 알코올 발효의 경우 \( 5 \mathrm{mg} \) / \( \mathrm{ml} \)에서 \( 54 \% \)의 저해능을 나타내어 발효물 중에서 가장 높은 저해활성을 나타내었으며, 초산 발효는 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서 \( 36 \% \)의 tyrosinase 저해능을 나타내었다. 포도의 알코올 및 초산 발효물은 \( 5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)에서 각각 \( 26 \% \) 이상의 저해능을 나타내었다. 세포 내에서의 melanin의 합성 기전 및 미백기전의 상관관계를 알아보기 위하여 MITF 및 tyrosinase의 발현 정도를 면역형광 염색법(immunofluorescence)을 실시한 결과 Fig. 3과 같이 나타내었다. MITF 발현은 대추 초산 발효물이 대조군과 비교시 형광발현이 줄어드는 것을 확인하였으며, tyrosinase 단백질 발현의 경우 대추 및 포도의 발효물을 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도로 처리한 결과 대추와 포도의 초산 발효물은 대조군과 비교시 형광 발현이 줄어드는 것을 확인하였다. 또한, 포도의 알코올 발효물은 형광 발현이 미미하게 줄어드는 것을 확인 하였다. 이는 tyrosinase 활성 저해 실험과 상반된 효능을 나타내어 좀 더 정확한 미백기전의 규명을 위한 실험이 향후 수행되어야 할 것이다.</p> <h2>항염증효과 측정 결과</h2> <p>\( \mathrm{NO} \)는 \( \mathrm{NO} \) 합성효소에 의해 L-arginie으로부터 생성되는 무기 유리체로 면역반응, 세포독성, 신경전달계 및 혈관이완 등 여러 가지 생물학적인 과정에 관여하는 것으로 알려져 있으며 농도에 따라 세포 기능유지에 중요한 작용을 하기도 하고 세포독성을 일으키기도 한다. RAW 264.7 cell의 \( \mathrm{NO} \) 생성억제 정도를 측정하기 위하여 세포에 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 LPS를 처리 후 대추 및 포도의 발효물을 농도별로 처리하여 생성되는 \( \mathrm{NO} \) 량을 측정한 결과 Fig. 4와 같이 나타내었다. LPS 처리군은 LPS 무처리군에 비하여 높은 \( \mathrm{NO} \) 발현양을 나타내었으며, 각 발효물마다 \( \mathrm{NO} \) 발현을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 즉, 포도의 초산 발효물의 경우 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 \( 37 \% \)의 \( \mathrm{NO} \) 발현 억제 효과를 나타내었으며, 대추 및 포도 알코올 발효물의 경우 같은 농도에서 \( 35 \% \)에 가까운 \( \mathrm{NO} \) 발현 억제 효과를 나타내었다.</p> <p>이와 같은 상기의 결과를 종합해 보면 초산 발효물보다 알코올 발효물이 우수한 활성을 나타내었으며, 대추의 알코올 발효물이 항산화, 미백, 항염증 및 항균효과를 보유하는 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 향후 기능성 식품 및 피부 미용 소재로서의 활용을 위한 근거 자료로 활용될 수 있을 것으로 판단된다.</p>