MAPKs는 p38, ERK, JNK로 구분되는 serine/threonine kinase로서, 밀배아유의 MAPKs에 대한 영향력을 연구하였다. Western blot을 통해 LPS가 MAPKs의 인산화를 증가시키는 것을 확인하였으며, 특히 p-ERK의 발현량은 \( 0.1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 감소하는 것이 확인되었다. 또한, mast cell 침윤 정도는 toluidine-blue 염색을 이용하여 확인하였고, 피부염증에 대한 항염증 효능 검증을 위한 실험을 통해 혈관 확장, 세포막 유동성 증가, 부종 등의 생리현상이 일어나는 것을 확인하였다.
<h2>MAPKs 발현 억제 효과</h2> <p>MAPKs는 serine/threonine kinase로 p38, ERK, JNK로 분류된다. MAPKs의 인산화를 통한 활성화는 대식세포가 LPS로 인한 자극 반응에 의해 나타나며 이는 염증과 관련된 전염증성 cytokine 및 iNOS의 분비를 증가시킨다. 또한 MAPKs pathway는 LPS에 의한 NF-KB의 신호 활성화에도 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 밀배아유가 MAPKs의 활성화에 미치는 영향을 알아보기 위해, LPS에 의해 증가하는 MAPKs의 인산화 변화를 Western blot을 통해 확인하였다. 그 결과(Fig. 5), LPS 처리에 의해 p-p38, p-ERK 및 p-JNK의 발현이 증가하였고, 밀배아유의 처리에 의한 발현량 변화를 보면, p-p38 경우 저농도에서는 발현 억제효과가 거의 없었으나, \( 10-100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리시에는 발현량이 약간 감소하였다. p-ERK의 발현량은 \( 0.1 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 발현량이 감소하였으며, 농도가 증가함에 따라 발현량의 감소가 크게 나타났다. p-JNK의 경우는, \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 감소효과가 뚜렷이 나타나기 시작하여, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 발현 억제가 가장 컸다. Kim 등의 연구에서는 LPS에 의해 증가된 ERK, p38, JNK의 인산화의 발현이 Camellia japonica oil를 \( 250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도 이상에서 감소효과가 크게 나타나, 밀배아유의 JNK와 ERK 인산화 발현 억제 효과가 더 뛰어난 것으로 사료된다. 따라서, 밀배아유는 염증반응에 의해 활성화 되는 p-ERK와 p-JNK MAPKs의 활성 조절을 통해 항염증 효과를 나타내는 것으로 사료된다.</p> <h2>귀 부종 억제 효과 및 조직 관찰</h2> <p>피부염증에서 일어나는 대표적 반응으로 염증 반응 시 혈관 확장, 세포막 유동성 증가, 부종 등의 생리현상이 수반되며 이 반응을 억제하는 효과를 실험적으로 검증함으로써 특정 물질의 항염증 효능을 증명할 수 있다[10]. 따라서 밀배아유를 10,50 및 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 농도로 \( 200 \mu \mathrm{M} \) 씩 경구투여 한 후, croton oil로 염증을 유발한 후, 귀 두께를 측정한 결과 Fig. 6 과 같다. Control구와 비교하였을 때, 모든 농도에서 유의적으로 귀 두께가 감소한 것을 확인하였다. 특히, 밀배아유를 \( 250 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 농도로 경구 투여 하였을 때, positive control인 prednisolone \( 10 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 처리구와 유사한 귀 부종 억제 효과를 나타내었다. 또한 조직관찰 결과에서, croton oil 만을 처리한 경우에 경피와 진피의 두께가 증가하였으나, 밀배아유를 \( 100 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리한 경우 경피 및 진피 두께가 얇아진 것을 확인하였다(Fig. 7A). 그리고 조직내의 mast cell 침윤 정도를 toluidine-blue 염색을 통해 확인한 결과 (Fig. 7B), prednisolone 처리구와 유사한 정도로 진피에서의 mast cell 침윤을 억제함을 확인하였다. 불포화 지방산인 linoleic acid와 oleic acid의 함량이 높은 pumpkin seed oil의 귀부종 test 결과에서 positive control구에 비해 귀부종 형성, 진피 및 경피의 두께, 염증관련 cell 수가 억제되었다고 보고 하였으며, 이는 불포화지방산이 피부 염증 반응 조절에 중요한 역할을 한 것이라 보고하였다[6]. 따라서 밀배아유가 귀부종 완화에 효과적인 것은 불포화 지방산에 의한 염증 반응 조절에 기인한 것으로 사료되며, 천연 항염증 소재로 이용될 가치가 충분한 것으로 사료된다.</p>