Toluidine blue 염색을 통해 신경수초의 자세한 관찰을 위해 광학현미경 하에서 시행하였다. 4\(^\circ \mathrm{C}\) 2% glutaraldehyde-phosphate buffer 용액에 1시간 동안 전고정하고 1% osmium tetroxide-phosphate buffer로 1시간 동안 후고정하고 0.1M phosphate buffer로 10분 3회 수세하였다. 30%-100% ethyl alcohol로 탈수하고 propylene oxide와 polyresin (polyscience제품)을 이용하여 포매하고 60\(^\circ \mathrm{C}\)에서 3일간 중합시켰다. 중합시킨 조직을 초박절편기(UL)로 절단하여 광학현미경을 이용하여 관찰하였다.
<p>광학현미경 하에서 신경수초의 자세한 관찰을 위하여 toluidine blue 염색을 시행하였다. 이식편의 전고정은 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)의 \( 2 \% \) glutaraldehyde-phosphate buffer 용액에서 1 시간 동안 처리하였고, 후고정은 \( 1 \% \) osmium tetroxide-phosphate buffer로 1 시간 동안 고정하였으며 고정 후 \( 0.1 \mathrm { M } \) phos-phate buffer로 각각 10 분씩 3회 수세하였다. 탈수는 \(30% \) - \( 100 \% \) ethyl alcohol로 실온에서 실시하였고, 청명과 수지침투는 propylene oxide와 polyresin (polyscience제품)을 이용하여 포매하고 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3 일간 중합시켰다. 중합시킨 조직은 초박절편기( \( ( \mathrm { LKB } , \mathrm { NOVA } ) \) 로 준초박절편 \( (0.5 \mu \mu \mathrm { m } ) \) 을 언어 \( 1 \% \) toluidine blue로 가온 염색 후 400 배에서 광학현미경으로 관찰하였다.</p> <p>수초를 관찰하기 위하여 phosphotungstic acid hematox- \( y \operatorname { lin } \) 법을 시행하였다. 조직을 탈파라핀 후 함수시켰다. 절편은 실온에서 하롯밤 혹은 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 시간 동안 Zenker 용액(2.5 \% potassium dichromate \( 95 \mathrm { ~m } \ell \), glacial acetic acid \( 5 \mathrm { ~m } \ell \) )내에서 매염시켰다. 매염 후 15 분간 흐르는 물로 수세하고 Lugol's Iodine 용액(Iodine \( 1 \mathrm { ~g } \), potassium iodide \( 2 \mathrm { ~g } \), 중류수 \( 100 \mathrm { ~m } \ell \) )내에 15 분간 담구어 두었다가 \( 95 \% \) 에탄올에 담구어 완전히 탈색될 때까지 1시간 이상 두었다. 증류수로 3초간 3회 수세한 다음 \( 0.25 \% \) potassium permanganate 용액내에서 5 분간 산화시키고 증류수로 3 초간 3 회 수세하였다. 수세 후 \( 8.5 \% \) oxalic acid 용액내에서 5 분간 담구어 탈색시켰다. 5-10분간 증류수로 잘 수세하고 흐르는 물로 세척하였다. 잘 숙성된 PTAH 용액(hematoxylin \( 1 \mathrm { ~g } \), phos-photungstic acid \( 20 \mathrm { ~g } \), 증류수 \( 1,000 \mathrm { ml } \) 를 혼합하여 녹인 후 potassium permanganate \( 0.177-0.2 \mathrm { ~g } \) 를 첨가한 다음 6 개월간 숙성)내에서 실온에서는 24 시간 혹은 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 하에서는 2 시간 동안 두었다. 95 \% 에탄올로 자색이 없어질 때까지 5 분간 살짝 담구었다 빼면서 분별염색을 한 후 \( 100 \% \) 에탄올로 2회 빠르게 탈수시키고 청명과정을 거쳐 봉입하였다.</p>