살조물질 분자량은 3 kDa 이하로 유추되었고, 5~30분간 열처리하여도 지속적인 살조활성을 나타내며, pH 2, 7, 10으로 조정하여 1일간 정치한 후 배양종료시의 pH를 측정하여 배양여과액이 pH 변화에 강하게 반응함을 확인하였으며, 암모니아 이온으로 전환이 가능한 동일한 살조성능을 나타내었으나 살조활성에는 영향을 미치치 않아 이온화되었을 경우 살조활성을 나타내는 것으로 사료된다.
<h2>살조물질의 물리 \( \cdot \) 화학적 특성</h2> <p>살조물질의 물리 \( \cdot \) 화학적 톡성을 조사하여 Table 2에 요약하였다. 살조물질의 분자량 유추실험은 초여과막을 이용하여 여과한 여과액을 이용하여 C. polykrikoides에 대한 살조활성능을 특정하였다. 그 결과 \( 100 \mathrm { ~kDa } , 10 \mathrm { ~kDa } \) 그리고 3 \( \mathrm { ~kDa } \)의 여과액에서 \( 90 \% \)이상의 강한 살조활성을 나타내어 살조물질은 \( 3 \mathrm { ~kDa } \)이하의 분자량을 갖는 것으로 유추할 수 있다. 배양여과액은 끊는 물에서 5~30분간 열처리 하여도 지속적인 살조활성을 나타내 열에 안정함을 알 수 있었다. 또한 배양여과액의 \( \mathrm { pH } \)를 2, 7, 10으로 조정하여 1일간 정치한 후 배양종료시의 \( \mathrm { pH } \)인 8.0으로 조정하여 살조활성을 조사한 결과 알칼리보다 산성 \( \mathrm { pH } \)에서 살조효과가 다소 감소함을 관찰하였다. 결과적으로 K. algicida가 생성하는 세포외 물질은 물리 \( \cdot \) 화학적 변화에 다소 안정한 저분자량의 물질임을 유추할 수 있었다. 저분자량을 갖는 살조물질은 현재까지 보고된 적이 없으며 다만 Clamidomonas reinharditii의 mating을 저해하는 물질이 Bacillus brevis strain NT4가 생산하는 oligopeptide인 MINT-1 (754 dalton)로 보고 된 바 있다.</p> <h2>살조물질의 분리 및 염류에 의한 살조 특성</h2> <p>살조물질을 분리하기 위하여 3 1의 배양여액을 감압 \( \cdot \) 농축하여 수분을 제거한 후 메탄올로 추출 농축하여 얻어진 시료를 대상으로 gel permeable chromatography를 수행하였으며 분획물을 대상으로 살조활성능을 측정하였다. 그 결과 Fig. 2에서와 같이 활성물질이 농축되었음을 알 수 있었으며 분자량을 유추한 결과 \( 180 \mathrm { ~Da } \)인 glucose보다 크기가 작은 것으로 판단되었다(자료 미제시). 살조물질의 분자량 크기가 너무 작아 활성분획물을 대상으로 ICP/MS를 이용한 분석결과 고농도의 ammonium ion이 검출되었으며 그 외 \( \mathrm { Mg } , \mathrm { Na } \), \( \mathrm { Ca } , \mathrm { K } \) 및 \( \mathrm { Li } \)이 검출되었다. 따라서 검출된 이온을 대상으로 살조활성능을 조사한 결과 편모조류인 C. polykri-koides는 \( 10 \mathrm { ~mM } \)의 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { Cl } \)농도에서 30분 이내에 모두 용혈되었으며 \( 0.1 \mathrm { mM } \) 의 농도에서는 세포가 swellen되어 성장을 하지 못하였다. 반면에 \( 0.01 \mathrm { ~mM } \)의 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { Cl } \)을 공급하였을 경우 조류의 성장은 영향을 받지 않았다. 그 외 염류가 살조에 미치는 효과를 조사한 결과 동일 농축액에서 C. polykrikoides의 성장제한 및 사멸효과는 나타나지 않았다. 결과적으로 적조생물인 C. polykrikoides의 급격한 사멸은 살조 세균인 K. algicida의 배양기간 동안 세포외로 생성된 고농도의 암모니아 이온의 효과로 결론을 지었다. Stein은 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { Cl } \)을 질소원으로 공급할 경우 많은 종의 식물플랑크톤에게 독성을 나타내며 조류성장을 위해 \( 0.1 \mathrm { ~mM } \) 이하의 농도로 공급해야 함을 지적한 바 있으며 이는 본 실험의 결과와 일치하고 있다. 암모니아 이온으로 전환이 가능한 \( \mathrm { NH } _ { 4 } \mathrm { Cl } \), \( \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \)는 동일한 살조활성을 나타내었으나 요소(urea)의 형태로 첨가하였을 때는 살조활성에는 영향을 미치지 않아 이온화되었을 경우 살조활성을 나타내는 것으로 사료된다.</p>