AP-PCR을 이용한 random amplified polymorphic DNA 분석과 tdh 유전자의 restriction fragment length poly-morphism을 실시했다. Table 3, 4에서 장염비브리오 27균주에 대한 혈청형의 분포, urease 생성, toxR 유전자의 보유 상황과 모든 실험균주가 보유한 toxR 유전자는 장염비브리오로 확인 동정할 수 있음을 볼 수 있다. 7종류의 항생제를 사용한 항생제 감수성 시험에선 van-comycin, oxacillin, penicillin은 높은 내성이 나타났고 gentamicin은 10균주가 내성을 나타냈으며 그 외 항생제는 tetracycline, chlor-amphenicol, cefoperazone를 제외한 대부분의 균주에서 감수성이 나타났다.
<h2>AP-PCR을 이용한 random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis</h2> <p>염색체 DNA의 분리는 실험균주를 LB 한천평판배지에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 24시간 배양한 후 1개의 집락만을 선택하여 Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega)를 사용하였으며 primers는 Table 2와 같이 사용하였다.</p> <h2>tdh 유전자의 restriction fragment length poly-morphism (RFLP)</h2> <p>염색체 DNA의 분리는 Wizard Genomic DNA purification Kit (Promega)를 이용하여 분리한 후 사용 전까지 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하였다. 염색체 DNA는 제한효소 Hind Ⅲ을 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 20 \) 시간 반응시켜 절단하고 처리된 DNA를 \( 1.0 \% \) agarose gel에서 \( 10 \mathrm { ~mA } \mathrm { ~15V } \) 로 18시간 전기영동한 후 위와 같이 Southern hybridization을 실시하였다. Molecular weight marker로 DNA Molecular Weight Marker VII, digoxigenin-labeled (Roche)를 사용하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>장염비브리오의 혈청형의 분포와 toxR 유전자의 검출 및 생화학적 성상</h2> <p>장염비브리오 27균주에 대한 혈청형의 분포, urease 생성, toxR 유전자의 보유 상황은 Table 3, 4와 같다. 혈청형의 분포는 국내 분리주의 경우 1999년도 환자유래 9균주 중 8균주가 O3:K6, 1균주가 O4:K9이었고, 2000년 환자유래 4균주는 모두 O6:K46이었으며, 2001년 환자유래 5균주 중 2균주는 O3:K6, 3균주는 각각 다른 O4:K9, O3:K57, O5:K5으로 모두 5종류의 혈청형을 나타내었다. 반면 일본 분리주의 경우 9균주 중 3균주는 각각 O1:K38, O4:K68, O4:K12이었고, 나머지 6균주는 모두 O3:K6로 모두 4종류의 혈청형을 나타내었다. 그리고 일본 분리균주 1균주를 제외하고는 모두 urease 음성이었다. 또한 toxR 유전자는 실험균주 전부가 보유하고 있어 장염비브리오로 확인 동정할 수 있었다.</p> <h2>약제감수성 시험</h2> <p>7종류의 항생제를 사용한 항생제 감수성 시험에서는 van-comycin과 oxacillin은 27균주 \( (100 \%) \), penicillin에 대하여서 는 26균주 \( (96.3 \%) \) 에서 높은 내성을 나타내었고 gentamicin에 대하여서는 10균주 \( (37.0 \%) \) 가 내성을 나타내는 반면에 그 외 항생제에 대해서는 tetracycline 4균주 \( (14.8 \%) \), chlor-amphenicol 1균주 (3.7 \%), cefoperazone 1균주 (3.7 \%)를 제외한 대부분의 균주에서 감수성을 나타내었다. 그리고 각 항생제의 내성 양상을 살펴보면 Ⅰ-Ⅵ형의 6종류로 분류할 수 있었으며 한국 및 일본의 대부분의 균주는 혈청형별에 관계없이 vancomycin, oxacillin, penicillin에 내성을 나타내는 Ⅴ형이 15균주 \( (55.6 \%) \)로 가장 많이 나타났고 그 다음으로 van-comycin, oxacillin, gentamicin 및 penicillin에 내성을 나타내는 Ⅳ형 7균주 \( (25.9 \%) \)로 높게 나타났으며 전체 27균주 중 14균주 \( (51.9 \%) \)가 4가지 이상의 항생제에 다제내성을 나타내었다. 또한 국내 분리주의 경우 Ⅴ형이 가장 많이 나타났으며, 특히 혈청형 O3:K6 균주들은 대부분이 Ⅴ형의 내성 양상을 나타났다.</p>