본 연구에서는 \( \gamma \)-Glutamyl transpeptidase 활성도를 측정하였고, 이는 1분 동안에 \( 1 \mu \mathrm { mol } \)의 p-nitroaniline-을 생성할 수 있는 효소량으로 정의되었다. 이외에도 Tietze의 방법으로 측정한 Oxidized glutathione(GSSG)은 2-vinyl pyridine(VP)의 처리를 통해 reduced glutathione(GSH)를 제거하고 측정하였다. 또한 단백질 정량은 Lowry 등의 방법을 준용하여 bovine serum albumin(Sigma, Fr. V)을 표준품으로 사용하였다.
<h2>\( \gamma \)-Glutamyl transpeptidase 활성도 측정</h2> <p>\( \gamma \)-Glutamyl transpeptidase 활성도는 Tate 등의 방법에 의해 측정하였다. 효소반응액[1mM L- \( \gamma \)-glutamyl-P-nitroanilid(GPNA)와 \( 20 \mathrm { mM } \) glycylgylcine를 함유한 \( 0.1 \mathrm { mM } \) Tris-HCl, \( \mathrm { pH } 8.0] 2.95 \mathrm { ~m } \ell \)를 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3분간 방치시킨 후. 조효소액 \( 0.05 \mathrm { ~m } \ell \)를 첨가해 \( 410 \mathrm { ~nm } \)에서 변화되는 흡광도를 측정하였다. 효소활성도는 1분 동안에 \( 1 \mu \mathrm { mol } \)의 p-nitroaniline-을 생성할 수 있는 효소량을 \(1 \mathrm { unit } \)로 하였다.</p> <h2>Glutathione 정량</h2> <p>Tietze의 방법에 의해 측정하였다. 간과 신장을 절제한 후, 즉시 dry ice-ethanol 혼합액으로 동결시킨 후, 10배 \( ( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \)의 \( 5 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) SSA를 가해 조직을 마쇄하고 \( 10,000 \times \mathrm { g } \) 로 15분간 원심분리하여 상징액을 시료로 사용하였다. 총 glutatione reductase를 함유한 \( 100 \mathrm { mM } \) DTNB 및 \( 0.45 \mathrm { U } \) glutathione reductase를 함유한 \( 100 \mathrm { mM } \) phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } 7.5) 2.9 \mathrm { ~m } \ell \)에 시료액 \( 25 \mu \ell \)를 가해 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 3분간 방치한 후, NADPH를 최종농도가 \( 1 \mu \mathrm { M } \)이 되게 가하여 \( 415 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도의 변화를 1분간 측정하였다. Oxidized glutathione(GSSG)은 2-vinyl pyridine(VP)을 가해 reduced glutathione(GSH)를 제거한 후 glutathione과 같은 방법으로 정량하였다.</p> <h2>단백질 정량 및 통계처리</h2> <p>단백질의 정량은 Lowry 등의 방법에 준하여 bovine serum albumin(Sigma, Fr. V)을 표준품으로 측정하였다. 본 실험에서 얻어진 결과는 평균 \( \pm \) 표준편차로 표시하였고, 통계적 유의성 검증은 Duncan's multiple range test를 이용하였다.</p>