혈청 중 지질과산화물 함량은 혈청에 황산용액과 phosphotungstic acid를 가해 원심분리시킨 후 침전물에 증류수 및 TBA 시약을 가하여 항온 수조에서 반응시킨 후 생성된 지질과산화물의 흡광도를 측정하였다. 간조직의 지질 함량은 간 조직에 chloroform : methanol 혼합액을 가한 후 마쇄한 다음 냉암소에 하룻밤 정치시켜 지질을 추출하였다. 간조직의 지질산화물 함량은 간조직에 KCl 용액을 가한 후 마쇄하여 균질액을 만든 다음, phosphoric acid와 TBA를 넣어 잘 혼합하였다. 이것을 가열하고 발색물질을 추출한 다음 원심분리한 butanol 층의 흡광도를 측정하였다. 간조직의 항산화 활성 역시 위와 동일하게 분석하였다.
<h2>혈중 지질과산화물 함량 및 항산화 활성 측정</h2> <p>혈청 중 지질과산화물 함량은 Yagi 의 방법 따라 혈청 \( 100 \mu 1 \)에 \( 1 / 12 \mathrm { ~N } \)황산용액과 \( 10 \% \) phosphotungstic acid를 차례로 가한 후 \( 4,000 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 원심분리시켰다. 원심분리 후 침전물에 증류수 및 TBA 시약을 \( 1 \mathrm { ml } \) 가하여 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 항온 수조에서 60 분간 반응시킨 후 생성된 지질과산화물을 butanol 에 이행시켜 \( 532 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 활성은 Lim 등의 방법에 따라 혈청 \( 100 \mu 1 \) 에 100 \( \mathrm { mM } \) tris-HCI buffer ( \( \mathrm { pH } \) 7.4) 및 \( 0.5 \mathrm { mM } \) 1,1-diphenyl-2-pic-rylhydrazyl (DPPH) 용액 \( 1 \mathrm { ml } \) 를 가한 다음 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 암실에서 15 분간 반응시켰다. 여기에 chloroform \( 2 \mathrm { ml } \)를 가하여 3,000 rpm에서 10 분간 원심분리시켜 하층부의 chloroform을 취하여 파장 \( 517 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 활성은 시료첨가구와 무첨가구의 흡광도 비로 나타내었다.</p> <h2>간조직의 지질 분석</h2> <p>간조직의 지질 함량은 Floch 등의 방법에 따라 간 조직 \( 0.5 \mathrm { ~g } \) 에 chloroform : methanol 혼합액(C:M = 2:1, v/v)을 가하여 Poter-Elvehjem tissue grinder (Daihan, WOS01010, Korea)로 마쇄하여 \( 30 \mathrm { ml } \)로 정용한 다음 냉암소에 하룻밤 정치시켜 지질을 추출하였다. 이를 여과한 후 일정량을 취하여 건고시킨 것을 간조직의 총 지질, 총 콜레스테롤 및 중성지방 분석을 위한 시료로 사용하였으며, 상기의 분석법에 따라 측정하였다.</p> <h2>간조직의 지질과산화물 함량 및 항산화 활성 측정</h2> <p>Uchiyama와 Mihara의 방법과 Lee 등의 방법에 따라 분석하였다. 간조직 \( 1 \mathrm { ~g } \) 에 \( 1.5 \% \mathrm { KCl } \) 용액을 가하여 homog-enizer로 마쇄하여 \( 10 \% \) 균질액을 만든 다음, 이를 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 취하여 \( 3 \mathrm { ml } \)의 \( 1 \% \) phosphoric acid와 \( 1 \mathrm { ml } \) 의 \( 0.6 \% \) TBA를 넣어 잘 혼합하였다. 이것을 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) water bath에서 45 분간 가열 한 뒤 \( 4 \mathrm { ml } \) 의 butanol를 가하여 발색물질을 추출한 다음 3,000 \( \mathrm { rpm } \) 에서 10 분간 원심분리 한 butanol 층의 흡광도 \( \left ( \mathrm { OD } _ { 535-520 } \right ) \) 를 측정하였다. 간조직의 항산화 활성은 간 조직에 \( 1.5 \% \mathrm { KCl } \) 용액을 가하여 \( 10 \% \) 균질액을 제조한 다음 이를 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 취하여 상기의 방법과 동일하게 분석하였다.</p>