국화는 국화과, 국화속에 속하는 다년생 초본식물로, 아시아 길가나 산, 들판에 주로 서식하며, 국화는 스탠다드형 국화, 스프레이형 국화, 화분국화 등으로 분류할 수 있는데, 현재 국내에서만도 700종 이상의 품종이 육종개발되어있다. 국화꽃의 밝혀진 활성으로서는 항산화, 혈관형성 저해, 항 HIV 바이러스, 항돌연변이, 세포독성, 간독성 저해, 유전자독성 저해 활성 등이 보고되어 있으며, 국화의 이러한 다양한 활성에 주목하며 국화품종 중 가장 생산량이 많은 스탠다드형 국화품종인 ‘백선'을 가지고 생리활성물질을 분리하고, 성분 분석을 통해 활용방안을 모색하고자 한다. 추출 및 분리 방법으론, 국화 ‘백선’의 건조한 꽃 \(485.0 g ^ {\circ } \) 를 \(80 \ % \) MeOH 수용액(50 L)으로 24시간씩 3번 실온에서 추출하여 얻어진 여액을 감압농축하여 MeOH 추출물(246.4 g)을 얻었다.
<h1>서 론</h1> <p>국화는 국화과 (Compositae), 국화속(Chrysanthemum)에 속하는 다년생 초본식물로, 아시아에 주로 서식하며, 길가나 산, 들판에서 자란다. 주요한 용도는 관상용이나, 동아시아 문화권에서는 차나 방향제 등으로도 사용된다. 식물학적 특징으로는 \( 0.3 \sim 0.9 \mathrm { ~m } \) 까지 자라며, 꽃은 가을에 개화하고, 청색, 녹색, 오렌지색, 흰색 등 여러가지 색이 있다. 국화는 스탠다드형 국화, 스프레이형 국화, 화분국화 등으로 분류할 수 있는데, 현재 국내에서만도 \(700 \) 종 이상의 품종이 육종개발되어있다. 스탠다드형이 전체의 \( 80 \% \) 이상으로 생산량이 가장 많다(Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs \(2014 \) ). 국화꽃의 밝혀진 활성으로서는 항산화(Yuan 등, \(2015 \) ), 혈관형성 저해(Zheng 등, \(2015 \)), 항 \( \mathrm { HIV } \) 바이러스(Lee 등, \(2003 \) ), 항돌연변이(Miyazawa 와 Hisama \(2003 \) ), 세포독성(Xie 등, \(2009 \) ), 간독성 저해, 유전자독성 저해 (Lee 등, \(2011 \))활성 등이 보고되어 있다. 국화의 이러한 다양한 활성에 주목하며 국화품종 중 가장 생산량이 많은 스탠다드형 국화품종인 ‘백선'을 가지고 생리활성물질을 분리하고, 성분 분석을 통해 활용방안을 모색하고자 본 연구를 시작하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>본 실험에서 사용한 국화 '백선'(C. morifolium) 은 스탠다드형 국화로 \( 2015 \) 년 \( 9 \) 월에 양재꽃시장(서울, 대한민국)에서 흰색 꽃을 구입하였으며, 충청남도농업기술원 화훼연구소 (충청남도 예산군 오가면 역탑리) 박하승 박사가 동정하였다. 표본시료( KHU- \( \mathrm { NPCL } - 20150930) \) 는 경희대학교 천연물화학실에 보관되어 있다.</p> <h2>시약 및 기기</h2> <p>시약 및 기기는 이전 실혐과 동일하게 사용하였다( Lee 등, \(2016 \) ).</p> <h2>추출 및 분리</h2> <p>국화 ‘백선’의 건조한 꽃 \(485.0 \) \( g ^ {\circ } \) 를 \(80 \ % \) MeOH 수용액(50 L)으로 24시간씩 3번 실온에서 추출하였다. 얻어진 여액을 감압농축하여 MeOH 추출물(246.4 g)을 얻었다. 얻어진 \( \mathrm { MeOH } \) 추출물은 물( \(1 \) \( \mathrm { L } \))과 \( \mathrm { ethyl \ acetate } \) \( \mathrm { (EtOAc, 1 L×3) } \)로 분배 추출하였고, 다시 물층을 \(n \) \( \mathrm { -butyl \ alcohol } \) \( \mathrm { (n-BuOH, 800 mL×3) } \)로 분배 추출하였다. 각층을 감압농축하여 \( \mathrm { EtOAc } \) 분획 \( \mathrm { (CBE, 8.5 g) } \, \(n \) \( \mathrm { -BuOH } \) 분획 \( \mathrm { (CBB, 27.7 g) } \) 및 물 분획 \( \mathrm { (CBW, 188 g) } \)을 얻었다. \( \mathrm { EtOAc } \) 분획 \( \mathrm { (CBE, 8.5 g) } \)에 대하여 \( \mathrm { silica \ gel \ (SiO_2) } \) \( \mathrm { columnchromatography } \) \( \mathrm { (c.c., φ4.4×15.0 cm, CHCl_3-MeOH = 10:1→5:1 } \),각 \( \mathrm { 2.0 L } \))를 실시하여 \(11 \)개의 분획 \( \mathrm { (CBE-1~CBE-11) } \)을 얻었다.그 중에서 \( \mathrm { CBE-2 } \) 분획 \( \mathrm { [423.6 mg, elution \ volume/total \ volume(Ve/Vt) \ 0.032-086 } \)]에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 c.c. (φ3.0×16.0 cm, CHCl3-MeOH-water=50:3:1→24:3:1, } \) 각 \( \mathrm { 470 mL } \))를 실시하여 화합물 \( \mathrm { 2(CBE-2-6, 6.9 mg, Ve/Vt 0.207, SiO_2 \ TLC \ R_f 0.61, CHCl 3-MeOH-water=50:3:1) } \)를 분리하였다. \( \mathrm { CBE-9 } \) 분획 \( \mathrm { (284.5 mg, Ve/Vt \ 0.535-649) } \)을 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. \ (φ3.0×15.0 cm, CHCl3-MeOH-water=30:3:1→27:3:1, } \) 각 \( \mathrm { 3.5 L } \))를 실시하여 총 \(13 \)개의 분획 \( \mathrm { (CBE-9-1~CBE-9-13) } \)을 얻었다. 그 중 \( \mathrm { CBE-9-9 } \) 분획 \( \mathrm { (61.9 mg, \ Ve/Vt0.533-632) } \)에 대하여 \( \mathrm { octadecyl \ silica \ gel \ (ODS) \ c.c. } \) \( \mathrm { ( φ2.0×5.0cm, MeOH-water=1:2, \ 1.3 L) } \) 를 실시하여 화합물 \( \mathrm { 3 (CBE-9-9-5, 7.4 mg, \ Ve/Vt \ 0.322-410, \ SiO_2 \ TLC \ R_f 0.49 \ CHCl_2-MeOH-water=9:3:1) } \)을 분리하였다. \(n \) \( \mathrm { -BuOH } \) 분획 \( \mathrm { (CBB, 27.7g) } \)에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. \ (φ7.0×10.0 cm, CHCl_3-MeOH=7:1→5:1→3:1 \ CHCl_3-MeOH-water=12:3:1→10:3:1→7:3:1→65:35:10, } \) 각 \( \mathrm { 1 L } \))를 실시하여 \(13 \)개의 분획 \( \mathrm { (CBB-1~CBB-13) } \)을 얻었다. 그 중에서 \( \mathrm { CBB-7 } \) 분획 \( \mathrm { (797.6 mg, \ Ve/Vt \ 0.255-318) } \)에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. \ ( φ4.5×15.0 cm, \ CHCl_3-MeOH=4:1, \ 2.1 L) } \)를 실시하여 화합물 \( \mathrm { 4 (CBB-7-4, 28.3 mg, Ve/Vt \ 0.192-205, \ SiO_2 \ TLC \ R_f \ 0.27 \ CHCl_3-MeOH=3:1) } \)를 분리하였다. \( \mathrm { CBB-10 } \) 분획 \( \mathrm { (1.02 g,Ve/Vt \ 0.563-899) } \)에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. (φ4.0×16.0 cm, \ CHCl_3-MeOH-water=10:3:1→8:3:1→7:3:1, } \) 각 \( \mathrm { 2 L } \))를 실시하여 총 \(9 \)개의 분획 \( \mathrm { (CBB-10-1~CBB-10-9) } \)을 얻었으며, 화합물 \( \mathrm { 3 (CBB-10-5, 253.9 mg, \ Ve/Vt \ 0.182-482, \ SiO_2 \ TLC \ R_f \ 0.60 \ CHCl_3-MeOH-water=65:35:10) } \)을 분리하였다. \( \mathrm { CBB-10-4 } \) 분획 \( \mathrm { (19.5 mg,Ve/Vt \ 0.150-179) } \)에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. \ (φ1.5×16.0 cm, CHCl_3-MeOH-water=50:3:1, } \) \( \mathrm { 1.6 L) } \)를 실시하여 화합물 \( \mathrm { 1 (CBB-10-4-1,13.0 mg, Ve/Vt \ 0.007-296, SiO_2 \ TLC \ R_f \ 0.42 \ CHCl_3-MeOH-water=18:3:1) } \)을 분리하였다. \( \mathrm { CBB-10-6 } \) 분획 \( \mathrm { (405.2 mg, \ Ve/Vt \ 0.146-216) } \)에 대하여 \( \mathrm { SiO_2 \ c.c. \ (φ2.5×16.0 cm, CHCl_3-MeOH-water=18:3:1→12:3:1, } \) 각 \( \mathrm { 2.5 L } \))를 실시하여 화합물 \( \mathrm { 4 (CBB-10-6-4, 13.8 mg, Ve/Vt \ 0.139-372, SiO_2 \ TLC \ R_f \ 0.52 \ CHCl_3-MeOH-water=9:3:1) } \)를 분리하였다.</p>