MTT assay 수행을 통해 실험에 사용될 농도범위를 결정하고 Casuarictin의 세포 독성을 측정하였다. CCD-986sk 세포를 결정된 범위의 농도별 Casuarictin으로 처리해본 결과 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \)이하의 농도에서는 세포의 생존율에 미미한 영향을 미친다는 것을 확인하였다.UVB의 노출시 피부에 생성되는 ROS는 피부주름 관련 전사인자들을 활성화 시킨다.UVB 는 ROS 생성률를 2배 가까이 증가시켰으며,casuarictin 농도별 처리결과 ROS생성률이 농도에 의존적으로 감소되었다.
<h2>결과 및 고찰</h2> <h3>세포독성 평가</h3> <p>Casuarictin의 세포 독성측정과 실험에 사용될 농도 범위 결정 을 위해 MTT assay를 수행하였다. CCD-986sk 세포에 casuarictin을 \( 5,10,25,50,100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 농도로 처리한 결과, \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 이하의 농도에서 세포생존율이 \( 90 \% \) 이상으로 나타 내어 CCD-986sk 세포의 생존율에 큰 영향을 나타내지 않음을 확인 할 수 있었다(Fig. 1)</p> <h3>\( \operatorname { ROS } \) 생성 억제 효과</h3> <p>피부에 UVB의 노출은 활성산소종 생성을 야기시키며(Fisher 등, 1997; Yoon 등, 2003; Han 등, 2013), 이때 생성되는 ROS는 피부세포 내에서의 신호전달 과정화에 영향을 미쳐 피부 주름 과 관련된 전사인자들을 활성화 시킨다(Pentland 등, 1995; Park 등, 2010). CCD-986sk 세포에서의 UVB 조사에 따른 ROS 생 성을 측정한 결과, UVB로 유도된 그룹에서는 정상군에 비해 2 배 가까이 ROS 생성률이 증가하였으며, casuarictin을 농도별로 처리한 결과 농도 의존적으로 ROS 생성을 감소시키는 것을 확 인하였다(Fig. 2).</p> <h3>Pro-collagen 합성 및 MMP-1 발현 추정 결과</h3> <p>피부 세포의 주름과 관련된 collagens은 pro-collagen이라는 전 구물질의 형태로 합성된다. 따라서 pro-peptide의 양을 측정함으 로써 세포내에서의 collagen의 합성 정도를 파악할 수 있다 (Parfitt 등, 1987). Pro-collagen의 합성을 촉진 시킬 수 있는 소재는 탄력 있는 피부를 만들어 주는 화장품 원료로서 사용 가능성이 높다고 생각되며 이에 casuarictin을 이용하여 pro-collagen 합성 실험을 수행하였다. 그 결과, casuarictin은 농도의존적으로 pro-collagen 생성을 증가 시켰으며, 특히 최고 농도 인 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 의 농도에서는 대조군에 비해 \( 20 \% \) 이상의 높은 생성률을 나타내었다. 또한 MMP-1은 type collagen을 분해하는 인자로 알려저 있으므로(Talwar 등, 1995; Nagase와 Woessner 1999) 이 인자의 발현을 지해하는 것이 피부의 탄력유지에 효 과를 줄 수 있을 것으로 예측되는바 casuarictin의 MMP-1의 발 현 지해율 측정 실혐을 수행하였 다. 그 결과, UVB로 발현된 MMP-1을 control과 비교하였을 때 casuarictin이 \( 5,10,25 \) \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { mL } \) 의 농도에서 각각 \( 14,15,22 \% \) 의 발현을 저해하는 것을 확인하였다(Fig. 3).</p>