양파 추출물의 항돌연변이 시험은 Ames test를 개량한 preincubation 법으로 revertant 숫자를 계수하였다. 양파 추출물의 인공 소화 후 항돌연변이 시험은 인공위액 또는 인공 소장액을 사용하거나 또는 2시간 동안 인공소화 시킨 소화물을 혼합해 배양한 후 복귀 돌연변이수를 측정하였다. 모든 실험은 triplicate로 시행되었고 그 일관성을 확인하였으며 revertant colony의 수는 세 개 시료의 평균값을 사용하였다.
<h2>양파 추출물의 항돌연변이 시험</h2> <p>양파 추출물의 항돌연변이 시험은 S. typhimurium TA98과 TA100을 이용하여 Ames test를 개량한 preincubation법으로 실시하였다. S9 mix \( 0.5 \mathrm { ml } , 12 \) 시간 배양된 균주 \( 0.1 \mathrm { ml } \), mutagen과 시료 각각 \( 50 \mathrm { ml } \) 씩을 ice bath에 담긴 cap tube에 첨가하여 강하게 혼합하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } ~30 \) 분간 전배양하였다. 47-49 \( { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 top agar \( 2 \mathrm { ml } \) 씩을 각 tube에 넣고 3 초간 혼합하여 minimal glucose agar plate에 도말하고, \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48 시간 배양한 후 revertant 숫자를 계수하였다.</p> <h2>양파 추출물의 인공 소화 후 항돌연변이 시험</h2> <p>양파추출물 \( 0.5 \mathrm { ml } \), 인공위액 또는 인공 소장액 \( 0.5 \mathrm { ml } \) 과 mutagen \( 0.1 \mathrm { ml } \) 를 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 100 \mathrm { rpm } \) 에서 30 분 또는 2 시간 동안 인공소화 시킨 소화물 \( 0.1 \mathrm { ml } , \mathrm { S } \). typhimurium TA98 또는 TA100 \( 0.1 \mathrm { ml } \) 그리고 \( \mathrm { S } 9 \) mixture \( 0.5 \mathrm { ml } \) 를 cap tube에 넣고 잘 혼합한 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분 전배양하였다. 그리고 \( 10 \% \) histidine/biotin이 첨가된 top agar를 \( 2 \mathrm { ml } \) 씩 가하여 잘 흔합한 후 minimal glucose agar plate상에 도말하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 150 \mathrm { rpm } \) 에서 48 시간 배양하여 생긴 복귀 돌연변이수를 측정하였다.</p> <h2>자료처리</h2> <p>모든 실험은 triplicate로 시행되었고 그 일관성을 확인하였다. 각 실험에는 추출물을 포함하지 않은 positive control이 포함되었고 IQ와 MNNG를 함유하지 않은 spontaneous control을 동시에 수행해 revertant colony수를 보정하였다. revertant colony의 수는 세 개 시료의 평균값을 사용하였다.</p>