효소에 의한 조항균물질의 영향을 알아보기 위하여 분획한 배양 상징액에 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 첨가하여 중성으로 조절한 다음, 냉동건조하여 \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 멀균수에 녹였으며 조항균물질의 안정성에 미치는 \( \mathrm{pH} \) 의 영향을 알아보기 위하여 분획한 배양 상징액을 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \) 또는 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 사용하여 \( \mathrm{pH} \) 를 2에서 11 까지 단계적으로 조절하였고, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 방치한 다음, 냉동건조하여 \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 증류수에 녹여 \( \mathrm{pH} \) 안정성 검토에 사용하였다.
<h2>Lc. mesenteroides CK0122 균주가 생산하는 항균물질의 안정성</h2> <p>\( \mathrm{CK} 0122 \) 균주가 생산하는 항균물질의 효소 및 \( \mathrm{pH} \), 온도에 대한 안정성은 분자량 3,000 \( \mathrm{Da} \) 이하 조항균물질을 이용 하여 Bacillus cereusKCCM 11341과 St. aureus ATCC 12692를 지시균으로 한 agar disk diffusion method에 의해 평가하였고 각 균주는 \( \mathrm{KCCM} \) (Korean Culture Center of Microorganisms)과 ATCC the global bioresource center 로부터 구입하였다. Nutrient agar를 지시균의 생육에 사용하였고, 생육저해활성은 생육저해환의 크기로 측정하였다. Paper disk에 첨가하는 시료는 동일한 농도조건으로 제조하여 \( 20 \mu \mathrm{L} \) 첨가하였다.</p> <p>효소에 의한 조항균물질의 영향을 알아보기 위하여 분획한 배양 상징액에 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 첨가하여 중성으로 조절한 다음, 냉동건조하여 \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 멀균수에 녹였다. 이렇게 농축한 조항균물질에 동량의 \( 50 \mathrm{mM} \) 인산완충용액 \( (\mathrm{pH} 7) \) 에 녹인 \( \alpha \)-amylase(EC 3.2.1.1 type VIII, Sigma, USA), lipase(EC 3.1.1.3 type VII, Sigma), proteinase K (EC 3.4.21.64, Sigma), catalase(EC 1.11.1.6, Sigma)를 첨가하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 처리한 다음, 조항균물질의 활성에 미치는 효소의 영향을 검토하였다. CK0122 균주가 생산하는 분자량 \( 3,000 \mathrm{Da} \) 이하의 조항균물질은 단백질 분해효소 proteinase \( \mathrm{K} \) 에 의한 항균활성 소실이 확인되어 단백질성 또는 펩타이드성 bacteriocin으로 확인되었다(Table 1).</p> <p>조항균물질의 안정성에 미치는 \( \mathrm{pH} \) 의 영향을 알아보기 위하여 분획한 배양 상징액을 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \) 또는 \( 5 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 를 사용하여 \( \mathrm{pH} \) 를 2에서 11 까지 단계적으로 조절하였고, \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 방치한 다음, 냉동건조하여 \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 증류수에 녹여 \( \mathrm{pH} \) 안정성 검토에 사용하였다. 지시균 St. \( a u r e u s \) 를 사용하여 \( \mathrm{pH} \) 안정성을 확인한 경우, \( \mathrm{pH} \) 2에서 11 까지의 영역에서 항균활성을 확인할 수 있었고 \( \mathrm{pH} 4 \) 이하 및 \( \mathrm{pH} 9 \) 이상에서는 강력한 생육저해활성이 확인되었다. 그러나 St. aureus는 중성 \( \mathrm{pH} \) 에서 최적생장을 나타내고 4 이하 및 9 이상의 \( \mathrm{pH} \) 는 생장범위를 벗어나는 것으로 알려져 있다. 따라서 비교적 넓은 \( \mathrm{pH} \) 에서 생장하는 B. cereus를 지시균으로 조항균물질의 \( \mathrm{pH} \) 안정성을 검토한 결과, 8 이하의 \( \mathrm{pH} \) 에서만 지시균에 대한 생육저해활성을 나타내었다. \( \mathrm{pH} \) 4 이하의 산성영역에서 지시균의 생장이 쉅지 않다는 점을 고려하면, CK0122 균주가 생산하는 bacteriocin은 \( \mathrm{pH} 4 \) 에 서 7 정도의 영역에서 최적활성을 갖는 것으로 사료된다 (Table 1).</p> <p>온도에 대한 안정성 검토를 위하여 분획하여 냉동건조한 조항균물질을 \( 0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{mL} \) 농도로 증류수에 녹여 \( 4^{\circ} \mathrm{C}, 30^{\circ} \mathrm{C} \), \( 50^{\circ} \mathrm{C}, 70^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간, \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5 분 및 30 분, \( 121^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 15 분간 처리하였다. 조항균물질은 \( 121^{\circ} \mathrm{C}, 15 \) 분 살균처리에 의해서도 활성의 감소가 나타나지 않는 것으로 보아, 높은 열 안정성을 가지고 있는 것으로 나타났다(Table 1).</p>