유산균배양배지로는 MRS, cMRS (0.05% cysteine이 첨가된 MRS), 또는 Raffinose-Bifidobacterium (RB) 배지를 사용하였으며 분리된 균주를 cMRS broth에 접종하여 3 일간 배양 후 대조균주 \( L \) pentosus K34보다 저해환(inhibitory clear zone)의 지름이 크게 형성된 균주를 항균력이 우수한 균주로 선별하여 1 차로 분리하였다.
<h2>배지 및 배양</h2> <p>유산균배양배지로는 MRS, cMRS (0.05% cysteine이 첨가된 MRS), 또는 Raffinose-Bifidobacterium (RB) 배지를 사용하였다. 병원성 세균 배양배지는 Salmonella spp., S.aureus, L. monocytogenes 등은 tryptic soy broth (TSB;BD, USA; 1.7% pancreatic digest of casein, 0.3%enzymatic digest of soybean meal, 0.25% dextrose, 0.5%sodium chloride, 0.25% dipotassium phosphate), Brainheart infusion broth (BHI; BD, USA; 20% infusion fromcalf brains, 25% infusion from beef heart, 1% proteosepeptone, 0.2% dextrose, 0.5% sodium chloride, 0.25%disodium phosphate)를 사용하였다. ETEC는 Luria-Bertani broth (LB; 0.5% yeast extract. 1% tryptone, 1%NaCl)를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1일 동안 배양하였다. C. jejuni의 경우는 BHI agar에 10% (v/v) calf serum (Gibco BRL,USA)을 첨가하여 10% CO2 incubator에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 배양하였다. C. perfringens는 Reinforced Clostridial Medium(0.3% yeast extract, 1% beef extract, 1% peptone, 0.1%soluble starch, 0.5% dextrose, 0.3% sodium acetate)을 제조하여 사용하였으며, anaerobic jar에서 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 혐기적으로 배양하였다.</p> <h2>유산균분리 및 1 차 선별</h2> <p>Bifidobacterium을 분리하기 위하여 젖소 제 1 위 내용물, 돼지 분변, 토종닭 소장내용물 들의 시료 \( 1 \mathrm { ~g } \) 을 \( 9 \mathrm { ml } \) 혐기 희석액 \( (0.2 \% \) yeast extract, \( 0.05 \% \) cysteine- \( \mathrm { HCl } , 0.05 \% \) sodium thioglycollate, \( 0.2 \% \mathrm { ~K } _ { 2 } \mathrm { HPO } _ { 4 } \) )을 사용하여 연속희석 한 후 \( \mathrm { RB } \) agar plate에 도말하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 혐기적으로 배양하였다. RB agar plate에서 성장한 분리된 콜로니 중에서 raffinose를 이용할 수 있는 Bifidobacterium 의 성장으로 인하여 \( \mathrm { pH } \) 가 저하됨으로써 bromocresol purple 지시약 색깔이 노랗게 변하여 콜로니 주위가 노랗고, 동시에 콜로니 주위에sodium caseinate의 침전이 형성된 콜로니를 분리하여 RB agar plate streaking하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 2일간 혐기적으로 배양하였다. 분리된 균주를 cMRS broth에 접종하여 3 일간 배양 후 대조균주 \( L \). pentosus K34보다 저해환(inhibitory clear zone)의 지름이 크게 형성된 균주를 항균력이 우수한 균주로 선별하여 1 차로 분리하였다.</p>