갈반병 병원 P. talaasii는 펩티드 독소인 tolaasin을 분비해 세포독성을 보이며, 이는 느타리버섯 세포에 pore를 형성해 버섯 조직을 파괴한다. 숙주균과 파지저항성 균주의 세포독성과 병원성 변화를 확인하기 위해 쥐의 적혈구를 이용한 용혈활성 검정법과 양송이버섯을 이용한 버섯함몰 검정법을 사용했다. 병원성 균주의 용혈활성은 펩티드 독소의 세포독성과 독소와 적혈구 세포막 사이의 결합친화도, 그리고 독소의 분비 량에 따라 차이가 나타난다.
<h2>펩티드독소의 용혈활성 변화여부</h2> <p>갈반병 병원 P. talaasii는 tolaasin을 분비하여 세포독성을 나타내는데, tolaasin은 느타리버섯의 세포에 pore를 형성하여 버섯조직을 파괴하는 펩티드독소이다. 세포독성의 측정은 본래의 숙주균과 파지저항성 균주의 세포독성과 병원성 변화여부를 확인하기 위하여 실시하였다. 파지저항성 균주의 세포독성 측정은 쥐의 적혈구를 이용한 용혈활성 검정법(hcmolysis test)과 양송이버섯을 이용한 버섯함몰 검정법(pitting test)으로 이루어졌다.</p> <p>병원성균주의 용혈활성은 균주가 분비하는 펩티드 독소의 세포독성에 의해 나타나는데, 이것은 독소와 적혈구 세포막 사이의 결합친화도(binding affinity)와, 균주의 생육에 시기에 따른 독소의 분비랑에 의해서도 차이가 난다. 용혈활성의 측정은 취의 적혈구를 독소와 배양하며 배양시긴에 따른 세포의 파괴를 측정하여 이루어졌다(rig. 3). P. tolaasii 6264와 \( \mathrm { HK } 4 \) 배양액을 처리한 경우 모든 적혈구를 용혈시키는데에 각각 40분, 60분이 소요되었지만, 각각의 파지저항성 균주이 \( 6.642 \)과 \( 1 \mathrm { ~K } 4 \mathrm { R } \) 균주는 20분이내에 모든 적혈구를 완전히 용혈시키는 높은 활성을 보여 파지저항성 획득과정중 세포독성이 증가한 것을 알 수 잇었다. 반면, P. tolaasii \( \mathrm { HK } 5 \)와 \( \mathrm { HK } 23 \)의 경우, 숙주균의 세포독성은 매우 크게 나타났으나, 파지저항성 균주의 용혈활성은 완전히 없어져 적혈구의 파괴는 나타나지 않았다. P. tolaasii \( \mathrm { HK } 2, \mathrm { HK } : 7, \mathrm { HK } 3 \) 균주의 경우 파지저항성 획득에 따라 용혈 활성 변화는 관측되지 않아 변화가 없었다. 이상의 결과에서 파지저항성 균주의 세포독성 변화는 균주마다 다른 양상을 보여, 각 균주마다 파지에 대한 저항성을 획득할 때 파지저항성과 무관하게 세포독성 등의 생리생화학적 독성에 변화가 일어났음을 확인하였다.</p> <h2>파지저항성 균주의 갈반형성능</h2> <p>파지저항성 균주의 세포독성 변화 여부를 측정하기 위하여 병원성 균주의 갈반형성 측정법인 비섯조직함몰검정법으로 독성 변화를 확인하였다. 이 검정법은 실제 갈반병이 발셍하는 버섯 조직에 균주의 독소를 처리하여 병원성을 측정하는 방법으로, 버섯 조직의 파괴정도를 측정할 수 있다. Fig. 4에서 P. tolaasii 6264 균주의 경우 파지저항성 획득에 따른 갈반형성능의 변화는 나타나지 않았다. 반면, P. tolaasii HK3와 HI.4 균주는 저항성 획득에 따라 갈반의 깊이가 깊어지고 갈색이 짙어지는 결과로 갈반형성능이 커짐을 확인하였고, P. tolaasii HK5 균주의 경우 저항성 균주에서 갈반형성이 약해져 세포독성이 작아짐을 보였다. 한편, \( \mathrm { HK } 2, \mathrm { HK } 19, \mathrm { HK } 23 \) 균주의 갈반생성은 저항성 획득에 따라 변화가 없었다.</p> <p>버섯함몰 검정법에 따른 측정결과와 용혈활성 측정 결과를 비교하였을 때, \( 6264 ^ {\circ } \). 균주는 용혈활성이 증가하였지만 버섯함몰활성은 변함이 없었고, \( \mathrm { HK } 4 \mathrm { R } \)의 경우에는 용혈활성과 버섯함몰 활성이 모두 증가한 것으로 확인되었다. 또한 용혈활성이 사라진 \( \mathrm { FK } 5 \mathrm { ~K } \) 균주의 비섯함몰 활성이 원래의 P. tolaasii \( \mathrm { HK } 5 \) 균주의 버섯함몰 활성보다 낮아진 것을 볼 수 있었다. 그러나 \( \mathrm { HK } 23 \mathrm { R } \) it \( \mathrm { HK } 3 \mathrm { R } \) 균주의 경우는 용혈활성은 사지거나 작아졌으나 갈반형성능은 원래의 균보다 오히려 증가한 것을 볼 수 있었다. 용혈활성이 없는 P. tolaasii \( \mathrm { HK } 19 \)와 \( \mathrm { HK } 19 \mathrm { R } \) 균주는 비슷한 버섯함몰활성을 가지고 있었다. 이러한 결과는 파지저항성과 용혈활성, 갈반 형성능에 일정한 상관성이 없음을 의미한다.</p>