섬쑥부쟁이의 다양한 분획물 중 에틸아세테이트 분획물은 \(1,000 \mathrm { ug } / \mathrm { ml }\)에서 \(83\%\)의 저해 효과를 보였으며, 이는 돌나물 추출물 처리 시에 비해 우수한 세포 생존율을 보임을 확인하였다. 또한 이 분획물은 tyrosinase 활성을 저해하여 멜라닌 생성을 감소시키며, extracellular signal-regulated kinase (ERK)의 활성화를 저해함으로써 tyrosinase와 TRP-1의 발현을 저해하는 것으로 파악되었다.
<h2>Collagenase 저해활성 확인</h2> <p>Collagen은 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다. 또한 collagen은 collagenase에 의해 분해된다는 보고가 있어, 섬쑥부쟁이 분획물의 collagenase 저해활성을 Table 3, Fig. 3과 같이 측정하였다. 섬쑥부쟁이 헥산 분획물의 경우 \( 1,000 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 78.0 \% \), 에틸아세테이트 분획물의 경우 \( 1,000 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 83 \% \), 부탄올 분획물의 경우 \( 500 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 53 \% \), 물 분획물의 경우 \( 500 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 65 \% \)의 저해 효과가 나타났고, 대조군인 catechin의 경우 \( 500 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 86 \% \)의 저해능이 나타났다. 이는 토사자, 음양곽, 건지황 열수 추출물 \( 250 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 각각 \( 40 \%, 37.5 \%, 35 \% \)의 저해능과 비교시 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물도 그와 유사한 효능을 확인할 수 있었다.</p> <h2>섬숙부쟁이 분획물에 의한 melanoma cell (B16F10)의 독성 확인</h2> <p>섬쑥부쟁이 분획물에 의한 melanoma 세포의 독성을 확인한 결과 Fig. 4와 같이 나타내었다. 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물이 \( 1,000 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)에서 \( 10 \% \) 이하의 세포독성이 나타내어 멜라노마 세포 독성에 영향을 적게 주는 것으로 나타났다. 이는 돌나물 추출물을 \( 100 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \) 이상 처리 시 melanoma cell(B16F10)의 세포생존율이 \( 90 \% \) 이하로 나타나는 결과와 비교했을 때 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물의 세포생존율이 우수함을 확인할 수 있었다.</p> <h2>Western blot을 통한 tyrosinase, TRP-1 단백질의 발현 측정 결과</h2> <p>Mushroom 유래의 tyrosinase 저해 실험의 결과로 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물은 tyrosinase 활성을 저해하여 melanin 생성을 감소시켰다. 이러한 결과가 멜라닌 생성에 관련된 단백질 발현과도 연관성이 있는지를 확인하기 위해 tyrosinase, TRP-1의 항체를 이용한 western blot으로 관련 단백질의 발현량 변화에 대하여 조사하였다. B16F10 mouse melanoma 세포에 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물 \( 100 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)처리 한 후 24시간 뒤에 tyrosinase protein과 TRP-1 발현을 western blotting으로 확인 하였다. 이때 세포의 여러 조건에서도 그 발현정도의 차이가 거의 없는 house keeping gene인 GAPDH를 positive control로 사용하였다. 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물을 처리하지 않은 군에서는 tyrosinase protein과 TRP-1의 발현이 증가하였지만 에틸아세테이트 분획물을 \( 100 \mathrm { ug } / \mathrm { ml } \)을 처리한 군에서는 tyrosinase protein이 \( 30.5 \% \) 감소하였고, TRP-1은 \( 41.5 \% \) 감소하였다. Tyrosinase와 TRP-1의 발현 저해는 a-MSH에 의한 세포신호전달 경로 중 지속적인 ERK 활성화를 저해함으로서 tyrosinase와 TRP-1의 발현을 저해하는 것으로 섬쑥부쟁이 에틸아세테이트 분획물은 a-MSH에 의해 유도된 extracellular signal-regulated kinase (ERK)의 활성화를 저해함으로써 멜라닌 생합성에 직접적으로 관여하는 효소인 tyrosinase와 TRP-1의발현을 저해하는 것으로 사료된다.</p>