기후, 토양 환경 등 다양한 조건에서 생육 조건을 확인하기 위해서 TSB 배지를 이용해서, 배양온도 \(\left(0-55^{\circ} \mathrm{C}\right)\), 배양온도별 \(\mathrm{pH}(4-13)\) 그리고 염농도\(0-20\%(\mathrm{w}/\mathrm{v})\)에서 생육능을 확인하였으며, 성장곡선은 분광광도계를 이용하여 \(600\mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하였다.
<h2>최종 선별주의 16S rRNA 유전자 분석</h2> <p>16S rRNA 유전자 분석을 (주)솔젠트(Solgent Co., Ltd., Daejeon, Korea)에 의뢰하여 분석하였으며, 유전자 증폭을 위해 universal primer인 \(27 \)F ( \(5 \)'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG- \(3 \)')와 \(1492 \)R ( \(5 \)'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T- \(3 \)')를 사용하였다.</p> <h2>생장 조건 확인</h2> <p>기후, 토양 환경 등 다양한 조건에서 생육 조건을 확인하기 위해서 TSB 배지를 이용하여, 배양온도 \( \left (0-55 ^ {\circ } \mathrm { C } \right ) \), 배양온도별 \( \mathrm { pH } (4-13) \) 및 염농도 \( 0-20 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \)에서 생육능을 확인하였으며, 성장곡선은 분광광도계를 이용하여 \( 600 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>인산 가용화능 측정</h2> <p>NBRIP 배지(glucose \( 10 \mathrm { g } / \mathrm { L } \) , \( \mathrm { Ca } _ { 3 } \left ( \mathrm { PO } _ { 4 } \right )_ { 2 } ~5 \mathrm { g } / \mathrm { L } \), \( \mathrm { MgCl } _ { 2 } \cdot 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~5 \mathrm { g } / \mathrm { L } \), \( \mathrm { MgSO } _ { 4 } \cdot 7 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~0.25 \mathrm { g } / \mathrm { L } \), \( \mathrm { KCl } ~0.2 \mathrm { g } / \mathrm { L } \), \( \left ( \mathrm { NH } _ { 4 } \right )_ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } ~0.1 \mathrm { g } / \mathrm { L } \), \( \mathrm { pH } ~7.0) \)에 접종한 뒤 \(24 \)시간 간격으로 배양액으로부터 유리된 인산을 Lee와 Song의 방법을 응용하여 측정하였다. 원심분리하여 얻은 상등액 \( 1 \mathrm { mL } \) 를 vanado-molybdophosphoric acid 반응용액 (solution A: ammonium molybdate \( 25 \mathrm { g } , \mathrm { dH } _ { 2 } \mathrm { O } ~400 \mathrm { mL } \), solution B: ammonium metavanadate \( 1.25 \mathrm { g } , \mathrm { dH } _ { 2 } \mathrm { O } ~300 \mathrm { mL } , \mathrm { HNO } _ { 3 } ~250 \mathrm { mL } \); solution A와 solution B를 혼합한 뒤 최종 부피가 \( 1,000 \mathrm { mL } \)가 되도록 \( \mathrm { dH } _ { 2 } \mathrm { O } \)를 첨가) \( 1 \mathrm { mL } \)와 혼합하여 \(30 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \(30 \)분간 반응시킨 뒤 \( 470 \mathrm { nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p>