U2OS 세포를 특정 밀도로 세포 배양기에서 배양하였고, 세포 주기는 FACS Calibur flow cytometry로 측정하였고, 분석 시에는 Expo 32 ADC XL 4 color 프로그램을 사용하였다. 통계적 분석은, t-test로 p값을 지정하여 유의수준을 설정하여 분석을 진행했고, 실험 결과로 고농도의 HDL이 U2OS 세포의 생존율에 영향을 크게 미치지 않는다는 것을 얻었다.
<h2>세포주기 분석</h2> <p>U2OS 세포를 6-well plate에 \( 1 \times 10 ^ { 6 } \) cells/well 밀도로 세포를 분주하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { ~CO } _ { 2 } \) 세포 배양기에서 배양하였다. 안정화된 U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 단독 혹은 HDL과 함께 처리하였다. 24시간 후, 세포를 PBS로 세척하고 냉각된 \( 80 \% \) 에탄올을 이용하여 24시간 동안 고정하였다. 세포 주기를 측정하기 위해 DNA를 PI (50 \( \mu \mathrm { g } \) propidium iodide, \( 0.1 \% \) NP-40, 100 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) RNase A) 용액에 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 30분 동안 암실에서 염색하였다. 세포의 주기는 FACS Calibur flow cytometry (Beckman coulter)를 이용하여 측정하였으며, Expo 32 ADC XL 4 color 프로그램을 이용하여 분석하였다(PI detect: excitation 488 \( \mathrm { nm } \), emission \( 585 \mathrm { ~nm } \) ).</p> <h2>통계 분석</h2> <p>대조군과 양성대조군 혹은 양성대조군과 실험군 사이의 통계적인 유의성 검증은 Student's t-test로 양측 검증을 시행하여 \( p \) 값이 0.05 미만일 때와 0.01 미만일 때를 통계적으로 유의한 것으로 결정하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>골육종암 세포에서 세포증식에 대한 HDL의 영향</h2> <p>U2OS 세포에 \( 10 \% \) FBS를 함유한 배지에 HDL을 1, 5, 10, 20, 30 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도로 12시간 혹은 24시간 동안 처리하여, 세포생존율을 MTT assay법을 이용하여 백분율로 나타내었다. HDL을 고농도인 \( 30 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도로. 12시간 혹은 24시간 처리하였을 경우 U2OS 세포는 모두 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었다(Fig. 1B). 이러한 연구결과 \( 30 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 고농도에서도 HDL이 U2OS 세포의 생존율에 큰 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다.</p>