곰팡이 균주로 발효시킨 발효 누에분말의 지방산 분석은 Garces 및 Mancha 방법을 통해 진행되었으며, Omega-Wax capillary column을 사용하여 Gas chromatography로 분석하였다. 지방산 분석 결과는 retention time에 검출된 것으로 하였으며, 총 지방산의 면적에 대한 각 지방산의 면적 비율을 표시하였다. 다음으로 발효 누에분말의 단백질패턴 분석을 위해 Davis 방법에 따라 slab-type poly-acrylamide gel을 사용하였고, 이 방법에서 사용된 Native-PAGE의 gel는 \( 7.5 \% \)농도인 것을 사용하였다.
<h2>지방산 조성 분석</h2><p>각 곰팡이 균주로 발효시킨 동결 및 열풍건조 발효 누에분말의 지방산 분석은 Garces 및 Mancha 방법으로 행하였다. 즉, 각 발효누에 분말 \( 1 \mathrm{~g} \)에 \( 15 \mathrm{ml} \) chloroform 및 \( 7.5 \mathrm{ml} \) methanol 혼합액(2:1)을 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30 분간 가온 추출한 후 chloroform 및 methanol 혼합액(2:1)으로 \( 25 \mathrm{ml} \)로 맞추어 여과 시켰다. 여과한 용액에 \( 4.5 \mathrm{ml} \)의 증류수를 가하여 혼합시킨 후, \(3,000 \mathrm{rpm}\)에서 15 분간 원심분리하여 상층액을 버리고 chloroform 층을 질소가스 하에서 농축하여 \( 5 \mathrm{ml} \)의 석유에테르로 다시 용해하였다. 추출된 지질 용액에 methanol : \( \mathrm{HCl} \) \( (5: 1, \mathrm{v} / \mathrm{v} \%) \) 용액을 가하여 \( 65^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3 시간 methylation 한 후 hexane으로 지방산 methylester를 추출하였다. 지방산 분석은 Omega-Wax capillary column \( (30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mu \mathrm{m} \), Supelco, USA)을 사용하여 Gas chromatography (GC-17A, Shimazdu, Koyto, Japan)로 분석하였다. 캐리어 가스는 헬륨을 사용하였고, injection 온도는 \( 250^{\circ} \mathrm{C} \), oven 온도는 \( 180^{\circ} \mathrm{C} \) 및 detection 온도는 \( 260^{\circ} \mathrm{C} \)로 하였다. 지방산 분석 결과는 각 지방산 표준물질과 동일한 retention time에 검출된 것으로 하였으며, 이때 검출된 총 지방산의 면적에 대한 각 지방산의 면적 비율(%)로 나타내었다.</p><h2>Nondenaturring polyacrylamide gel electrophoresis (Native-PAGE)에 의한 단백질 패턴비교</h2><p>각 곰팡이 균주로 발효시킨 동결 및 열풍건조 발효 누에분말의 단백질패턴은 Davis 방법에 따라 slab-type poly-acrylamide gel을 사용하였다. Native-PAGE의 gel 농도는 \( 7.5 \% \)를 사용하였다. 즉 분리 gel은 \(30\% \)acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \(1.5 M\) Tris-HCl buffer \( (\mathrm{pH} 8.8) \), \(0.05\%\) TEMED 및 \( 10 \% \) 과산화암모늄을 혼합하여 \( 1 \mathrm{~mm} \) 두께로 만들어 사용하였다. 분리 gel 위에는 \(5\%\) 농축 gel [\(30\%\) acrylamide, \( 0.8 \% \) bis-acrylamide, \( 0.5 \mathrm{M} \) Tris-HCl buffer \( (\mathrm{pH} 6.8) \) 을 만들어 \( 5 \times \) sample buffer (\(312.5 \mathrm{mM}\) Tris-HCl, \(\mathrm{pH} 6.8)\), \(50\%\) glycerol, \( 0.05 \% \) bromophenol blue] 용액에 혼합한 시료를 농축 gel 내에 성형된 홀에 일정량씩 주입하였다. 전기영동은 Tris-gly-cine 완충액(\(25 \mathrm{mM}\) Tris, \( 192 \mathrm{mM} \) glycine, \( \mathrm{pH} 8.8) \) 하에서 \( 1.5 \mathrm{~mA} / \mathrm{gel}(\mathrm{cm}) \)의 정전류를 통하여 행하고, 저온 \( \left(4^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에서 2시간 통전시켰다. 영동이 완료된 gel은 \( 7 \% \) 초산액에 용해한 \( 1 \% \) Coomassie brilliant blue R-250으로 염색한 후 \( 7 \% \) 초산액으로 충분히 탈색시켜 건조 및 사진촬영을 하였다.</p>