piceatannol 처리에 의한 A549 세포의 생존율 감소는 apoptosis 유발과 밀접한 연관이 있으며, piceatannol 처리에 의한 apoptosis 유도에는 extrinsic 및 intrinsic pathway가 모두 관여할 것이며, caspase의 활성 감소가 연관되었음을 의미한다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Piceatannol에 의한 A549 세포의 증식 억제 및 apoptosis 유발</h2> <p>Piceatannol의 처리에 따른 A549 세포의 생존율에 미치는 영향을 알아 보기위하여 piceatannol을 적정 농도로 48 시간 동안 처리한 후 hemocytometer counting을 실시하였다. Fig. 1B에 나타낸 바와 같이 \( \mathrm{A} 549 \) 세포에 piceatannol을 처리하였을 경우 처리 농도 의존적으로 생존율이 유의적으로 감소되었음을 알 수 있었다. Piceatannol 처리에 의해 유발되는 생존율 감소가 apoptosis 유발과 직접적인 연관이 있는지를 확인하기 위하여 정상 및 piceatannol이 처리된 배지에서 48 시간 동안 배양된 A549 세포를 대상으로 flow cytometry를 이용하여 apoptosis가 유발되었을 것으로 예상되는 sub-G1기에 해당하는 세포의 빈도를 측정한 결과는 Fig. 2A에 나타낸 바와 같다. 결과에서 알 수 있듯이 정상 배지에서 자란 암세포에서의 자연적 apoptosis 유발 빈도는 약 \( 2.03 \% \) 로 매우 낮았으나 piceatannol 처리 농도가 증가할수록 sub-G1기의 세포의 빈도가 증가하여 \( 75 \mu \mathrm{M} \) 및 \( 100 \mu \mathrm{M} \) 처리군에서는 각각 \( 8.97 \% \) 및 \( 20.71 \% \) 에 해당하는 세포가 sub-G1기로 관찰되었다. 이러한 sub-G1기 세포의 빈도 증가가 apoptosis 유발에 의한 것이라는 직접적인 증거를 제시하기 위하여 piceatannol이 처리된 배지에서 배양된 A549 세포 핵의 형태변화를 관찰하였다. Fig. 2B에 나타낸 바와 같이 핵산에 특이적으로 결합하는 형광물질인 DAPI 염색을 실시하고 형광현미경을 이용하여 관찰한 결과, piceatannol이 처리되지 않은 정상 배지에서 자란 A549 세포에서는 핵의 형태가 뚜렷하게 정상으로 염색이 되었으나 piceatannol이 처리된 세포의 경우는 piceatannol의 처리 농도의 증가에 따른 밀도의 감소와 더불어 apoptosis가 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 염색질 응축에 의한 apoptotic body가 관찰되었다. 이상의 결과는 piceatannol 처리에 의한 A549 세포의 생존율 감소는 apoptosis 유발과 밀접한 연관이 있음을 알 수 있었다.</p> <h2>Apoptosis 조절 인자들의 발현에 미치는 piceatannol의 영향</h2> <p>일반적으로 apoptosis는 death receptor 및 ligand에 의하여 유발되는 extrinsic pathway와 Bcl-2 family member에 의하여 조절되는 intrinsic pathway를 경유하여 활성화 되는 것으로 알려져 있다. 따라서 piceatannol에 의하여 유발되는 apoptosis가 어떤 경로를 통하여 활성화되는지를 조사하기 위하여 이들 유전자의 발현 변화를 조사하였다. 조사한 몇 가지 유전자 중, 먼저 extrinsic pathway의 활성화에 관여하는 대표적인 Fas/FasL system의 경우는 Fig. 3에 나타난 바와 같이 piceatannol 처리 농도의 증가에 따라 Fas 및 FasL 모두 전사 및 번역 수준에서 증가되었으며, intrinsic pathway의 활성 조절에 관여하는 Bcl-2 family 중, pro-apoptotic Bax의 발현은 증가되었으나 anti-apoptotic Bcl-2 및 Bax의 발현은 감소되는 경향성을 보였다. 그리고 caspase와의 직접적인 결합을 통하여 그들의 활성을 억제하는 IAP family 인자들의 발현도 모두 감소되었다. 이상의 결과는 piceatannol 처리에 의한 apoptosis 유도에는 extrinsic 및 intrinsic pathway가 모두 관여할 것이며, caspase의 활성 감소가 연관되었을 것을 의미하는 것이다.</p>