\( 1 \mathrm{mM} \) 농도의 melatonin과 SNAP을 함께 처리한 경우, 그림 4에서 확인할 수 있듯이 melatonin에 의한 혈관내피세포의 탈착이 감소한다. 앞선 실험에서는 고농도의 melatonin이 eNOS의 인산화를 억제하고 동시에 혈관내피세포의 탈착을 유도한다는 사실을 확인하여 protein phosphatases와 내피세포 탈착의 상관관계를 연구하기 위한 실험을 실행하였다.
<h2>Melatonin에 의한 산화질소 생산량의 변화와 혈관내피세포 탈착 간의 상관관계 실험결과</h2> <p>혈관내피세포가 혈관에서 탈착되는 현상은 산화질소의 생산 억제와 관련되어 있다고 알려져 있다. Melatonin에 의해 유발되는 혈관내피세포의 탈착과 산화질소 생산량 감소사이의 상관관계를 알아보기 위해, 산화질소의 생성을 유도하는 SNAP (S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine)과 산화질소의 생성을 억제하는 L-NAME (L-N \( { }^{\mathrm{G}} \)-nitroarginine methyl ester)을 melatonin과 함께 처리하여 혈관내피세포 탈착 현상의 변화를 확인해 보았다. Fig. 4 에서 보듯이 SNAP을 \( 1 \mathrm{mM} \)의 melatonin과 함께 처리하였을 경우, melatonin에 의한 혈관내피세포의 탈착이 감소함을 확인할 수 있었다. 이는 melatonin에 의한 혈관내피세포의 탈착이 산화질소 생성의 억제와 관련이 있음을 의미한다.</p> <h2>Melatonin에 의한 혈관내피세포 탈착 기전 연구 실험결과</h2> <p>eNOS는 L-arginine으로부터 산화질소를 합성하는 효소로, Ser 116, Ser 1179, Thr 497의 인산화와 탈인산화에 의해 활성 이 조절된다. eNOS의 탈인산화는 protein phosphatases에 의해 이루어지는데, Ser 1179 와 Thr 497의 탈인산화에는 protein phosphatase 2A (PP2A)가 관여하며, Ser 116의 탈인산화에는 protein phosphatase 2B (PP2B)가 관여하는 것으로 알려져 있다. 앞의 실험에서 고농도의 melatonin이 eNOS의 인산화를 억제하며 동시에 혈관내피세포의 탈착을 유도한다는 사실을 확인하였으므로 protein phosphatases와 내피세포 탈착의 상관관계를 알아보는 실험을 수행하였다. 이 실험을 위해 PP2A의 억제자인 okadaic acid와 PP2B의 억제자인 cyclosporin A를 사용하였고, 각 억제자들은 30분간 전처리한 후 \( 1 \mathrm{mM} \)의 melatonin을 처리하여 eNOS의 탈인산화와 내피세포의 탈착 정도를 측정하였다. Fig. 5 에서 보듯이 \( 1 \mathrm{mM} \) 의 melatonin을 처리하였을 경우 eNOS의 양은 변화가 없지만 인산화된 eNOS의 양은 감소하였으며, okadaic acid를 전처리한 후 melatonin을 처리하였을 경우, eNOS의 양과 인산화된 eNOS의 양은 변화가 제한적임을 확인할 수 있었다. 이는 melatonin이 PP2A를 활성화시켜 eNOS의 탈인산화를 유도함을 의미한다.</p> <p>또한 Fig. 6 에서 보듯이 okadaic acid와 cyclosporin A를 전 처리한 후, melatonin을 처리하였을 경우, melatonin에 의한 혈관내피세포의 탈착 비율이 감소하였으며, 특히 okadaic acid를 전처리하였을 경우, 혈관내피세포의 탈착 비율은 약 \( 60 \% \) 정도 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이는 고농도의 melatonin이 PP2A의 활성화를 통해 내피세포의 탈착을 유도함을 의미한다. 즉 melatonin은 PP2A의 활성화를 유발하고 또한 eNOS의 탈인산화를 유도하며, 따라서 세포 내의 산화질소 기초생산량이 감소되어 궁극적으로는 혈관내피세포의 탈착이 상승하게 된 것이다. 본 실험 결과 나타나는 혈관내피세포의 탈착은 in vivo에서 혈전이 형성될 가능성이 있음을 의미 한다.</p>