EAHF의 인체 유방암세포주 MDA-MB-231 및 MCF-7 세포 증식에 미치는 영향을 연구한 결과, EAHF 처리 농도가 증가함에 따라 MDA-MB-231 세포에서 암세포 증식이 현저하게 억제되며, apoptosis와 관련된 형태 변화가 발생한다는 것을 확인했다. MCF-7 세포에서는 apoptosis에 대한 민감도가 낮았다. 이 결과는 EAHF가 암세포 종류에 따른 G1 arrest와 apoptosis의 민감도 차이와 밀접한 연관성을 보여준다.
<h1>고 찰</h1><p>본 연구에서는 인체 유방암세포주인 MDA-MB-231 및 MCF-7 세포의 증식에 미치는 EAHF의 영향과 EAHF의 처리에 의한 암세포 증식억제와 연관된 apoptosis 유발 여부 및 apoptosis 유발 조절과 연관된 관련 유전자들의 변화 여부를 조사하였다. 이를 위하여 먼저 MDA-MB-231 및 MCF-7 세포의 증식에 EAHF가 어떠한 영향을 미치는 지를 알아보기 위해 MTT assay에 의한 세포 증식억제의 정도를 조사한 결과, en 세포주 모두에서 EAHF를 처리하지 않은 군과 비교하여 EAHF의 처리 농도가 증가할수록 암세포의 증식이 현저하게 억제되는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 증식억제는 세포질의 응축 및 부착력 상실에 따른 부유되는 세포의 증가 현상과 더불어 분지를 형성하는 듯한 구조의 형성 등과 같은 형태적 변형을 동반하였다. 이러한 증식억제 및 형태변형이 apoptosis 유발과 관계가 있는지를 확인하기 위하여 DAPI 염색을 이용한 염색질 응축 형성의 유무를 관찰하였다. 정상 배지에서 배양된 세포의 경우 핵의 전체가 완전한 형태로 염색되는 양상을 보였으나 MDA-MB-231 세포의 경우는 EAHF의 농도가 증가할수록 밀도의 감소와 함께 염색체 응축에 의한 apoptosis가 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 apoptotic body의 형성 정도가 증가되었다. 그러나 MCF-7 세포에서는 밀도의 감소는 관찰되었지만 염색질의 응축 정도가 MDA-MB-231 세포와 비교해서 매우 낮게 나타났다. 즉 EAHF의 처리에 따른 유방암세포의 증식의 억제 및 형태변화가 MDA-MB-231 세포에서는 apoptosis 유발과 밀접한 연관성이 있을 것으로 생각되지만 MCF-7 세포에서는 apoptosis에 대한 감수성이 낮음을 알 수 있었다. 이러한 차이를 정량적으로 비교하기 위하여 flow cytometry를 이용한 apoptosis 유발 세포군에 해당하는 sub-G1기에 속하는 세포들의 빈도를 측정하였다. MDA-MB-231 세포의 경우는 EAHF의 처리 농도의 증가에 따라 sub-G1기에 해당하는 세포의 빈도가 증가하여 \( 400 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도에서는 약 \( 23 \% \) 정도로 나타났으나 MCF-7 세포에서는 EAHF의 처리 농도의 증가에 따른 sub-G1기 세포의 빈도가 소폭 증가하였다. 그러나 세포주기 분포도 비교에서 EAHF 처리에 의한 세포주기 G1 arrest 현상은 MCF-7 세포에서 높게 나타났다. 이러한 EAHF에 대한 apoptosis 감수성의 차이는 MCF-7 세포의 경우 apoptosis 유발 단계에서 G1 arrest 과정에 더 많은 시간이 소모되므로 MDA-MB-231 세포에 비하여 다소 낮은 것으로 추정된다. 또한 염색질 응축과 함께 apoptosis 유발의 직접적인 증거에 해당하는 DNA fragmentation 여부를 agarose gel 전기영동으로 조사하였다. 이를 위하여 정상 및 EAHF가 함유된 배지에서 자란 암세포의 총 DNA를 대상으로 조사한 결과, MDA-MB-231 세포에서는 apoptosis가 일어난 세포들에서 볼 수 있는 전형적인 DNA laddering을 관찰할 수 있었지만 MCF-7 세포에서는 DNA laddering이 거의 관찰되지 않았다. 이는 결국 MCF-7 세포에서 보다 MDA-MB-231 세포에서 EAHF의 처리에 의한 chromosomal DNA가 단편화 현상이 높게 나타난 결과이므로 EAHF의 apoptosis 감수성의 차이와도 잘 일치되는 결과이다. 이러한 결과는 EAHF가 암세포의 종류에 따라 G1 arrest 및 apoptosis에 대한 다양한 감수성 차이를 가질 수 있음을 보여주는 것이고, EAHF에 의한 유방암세포의 증식억제는 결국 G1 arrest와 연관된 apoptosis 유발과 밀접한 연관성이 있음을 잘 알 수 있었다.</p>