암컷 흰쥐를 난소절제 대조군, 비난소 절제군, 매생이 추출물 50mg/kg 투여군 및 200mg/kg 투여군으로 분류하여 실험하였다. 실험동물을 1주일동안 주위환경에 적응시킨 후 난소 절제 수술을 실시하고 3일 후 부터 매일 매생이 시료를 경구 투여했다. 실험동물의 혈액을 대동맥에서 채취하여 혈청 중 효소활성 및 지질농도를 분석하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료 제조방법</h2><p>본 실험에서 사용 된 매생이(Capsosiphon fulvecense, CF)는 2005년 엔존에서 구입하여 물로 \( 6 \sim 7 \)회 채로 씻어 내어 염분과 불순물의 제거하고 동결 건조, 분쇄하여 사용하였다. 건조시료에 \( 80 \% \) ethanol \( 2 \mathrm{L} \)를 가해 2회 열 추출하여 감압 농축기로 농축한 후 분말로 만들어 증류수에 녹여 동물실험에 사용하였다.</p><h2>실험동물</h2><p>실험동물은 체중이 평균 \( 160 \mathrm{g} \) (6주)되는 Sparaque-dawley계 암컷 흰쥐를 코아텍으로부터 구입하여 본 실험실에서 고형사료(삼양유지)로 사육하였고, 실험 시작 1주일 동안 대조군 식이로 적응시킨 후 동물의 체중에 따라 4군으로 나누었다. 즉 실험동물은 난소절제 대조군(OVX-Control), 비 난소 절제군(Sham), 매생이 추출물 \( 50 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 투여군 (OVX-CF50) 및 \( 200 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 투여군(OVX-CF200)으로 나누어 실험하였다.</p><p>체중은 실험 사육 기간 중에 격일로 일정 시간에 측정하고, 식이 섭취량은 매일 식이 잔량을 측정하여 산출하였다. 동물 실험실의 사육조건은 온도 \( 24 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 55 \sim 60 \% \)을 유지 시키며 물과 식이는 자유 공급하였고, 실험시료는 증류수로 용해하여 매일 \( 1 \mathrm{~mL} \)씩 경구 투여 하였고, 대조군은 동일용량의 증류수를 투여하였다.</p><h2>난소절제시술</h2><p>1주일 동안 주위환경에 적응시켜 난괴법에 의해 군을 나누어 난소 절제 수술을 실시하였다. 수술은 ether 마취 후 심마취기에 이르면 늑골하부를 절개하여 난소를 제거하고 절개부는 봉합하였다. 시술 후 3일부터 매일 매생이 시료를 경구 투여하였다.</p><h2>혈액 채취</h2><p>혈액은 실험동물을 해부 전 24시간 절식 시킨 후 ether 마취 하에서 개복한 후 대동맥에서 채취하였고, 혈청 중의 효소활성 및 지질 농도는 실온에서 한 시간 방치 후 \( 3,000 \mathrm{rpm} \), \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 원심분리 하여 분석하였다.</p><h2>혈소판 응집실험</h2><p>흰쥐를 ether로 마취하고 개복하여 복대동맥으로부터 채혈하여 \( 3.2 \% \) sodium citrate용액과 \( 1: 5 \)의 비율로 혼합한 뒤 \( 1,100 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심 분리하여 상층의 platelet rich plasma(PRP)를 취하고, \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 더 원심분리하여 상층의 혈장을 제거한 후 EDTA를 포함하는 washing buffer ( \( 138 \mathrm{mM} ~ \mathrm{ NaCl } \), \( 2.7 \mathrm{mM} ~\mathrm{KCl} \), \( 12 \mathrm{mM} ~\mathrm{NaHCO}_{3} \), \( 0.36 \mathrm{mM}~ \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4} \), \( 5.5 \mathrm{mM} \) glucose, \( 1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( \mathrm{pH}~ 6.5\) ) \( 5 \mathrm{~mL} \)를 가하고 섞어주어 혈소판을 재 현탁시켰다. 이 혈소판을 다시 \( 3,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리 한 후, 세척액을 버리고 잔사인 혈소판을 위의 방법으로 한번 더 세척하였다. 세척 후 suspending buffer( \( 138 \mathrm{mM}~ \mathrm{ NaCl } \), \( 2.7 \mathrm{mM} ~\mathrm{KCl}, \) \( 12\mathrm{mM} ~\mathrm{NaHCO}_{3}, 0.36 \mathrm{mM}~ \mathrm{NaH}_{2} \mathrm{PO}_{4}\), \(5.5 ~\mathrm{mM} \) glucose, \( 0.49 \mathrm{mM} ~\mathrm{MgCl}_{2}\), \(0.25 \% \) Gelatin, \( \left.\mathrm{pH} 7.4\right) \)로 재 현탁 시켜 \( 3000\mathrm{rpm}\), 10분간 원심분리한 후 다시 suspending buffer로 현탁시켜 washed platelet을 조제하였다. washed platelet는 suspending buffer로 희석하여 혈소판 수가 \( 5 \times 10^{8} / \mathrm{mL} \)이 되도록 하여 Whole blood lumiaggregometer (Chrono-log, U.S.A)를 사용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 Optical 방법으로 혈소판 응집을 측정하였다.</p><h2>혈청 중의 지질농도 분석</h2><p>혈 중 triglyceride, total-cholesterol, HDL-cholesterol 함량은 자동 측정용 slide (FU-JI FILM, Japan)를 이용하여 Dry chemistry analyzer 3500i(Fuji, Japan)으로 측정하였다.</p><h2>혈류측정</h2><p>혈류는 Micro Channel Array Flow Analyzer KH-6 (MC Lab, Japan)을 이용하여 채취한 혈액 \( 100 \mathrm{\mu L} \)를 주입하여 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>본 실험에 대한 모든 실험의 결과는 mean \( \pm\) SD치로 나타내었고, 통계적 유의성은 student's t-test를 이용하여 상호비교 하였다.</p>