본 연구에서는 독활의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획이 혈소판 응집 억제에 뛰어난 효과를 보이며, 이는 독활에 포함된 강력한 항혈소판 활성 성분의 영향으로 추정된다. 또한 부탄올 분획에서도 높은 활성을 확인할 수 있었다. 결과를 종합해 보면, 독활의 혈소판 활성화 억제 효과는 폴리페놀류의 자유 라디칼 소거능을 통해 혈전형성의 초기 단계에서 조절될 가능성이 높다. 이에 따라 독활의 활성 성분과 그것이 혈소판 기능에 미치는 조절 기전에 대한 연구가 본 연구 결과를 기반으로 현재 진행 중이다. 이를 통해 독활의 항혈소판 활성과 관련된 세부적인 메커니즘을 명확히 이해하는 데 도움이 될 것으로 기대된다.
<h1>결과 밎 고찰</h1> <h2>혈소판응집 억제 활성</h2> <p>먼저 독활의 메탄올 추출물의 혈소판 응집억제 효과 검색 결과 우수한 항혈소판 작용을 나타내었으므로 이 추출물을 통상적인 방법으로 분획하여 각 분획에 대한 활성을 검색하였다. 혈소판의 응고 촉진제도 사용된 ADP (\(6 \mu \mathrm{M}) \)에 의해서 혈소판의 응고가 유도되었으며, 혈소판을 독활의 메탄올 추출물 또는 그 분획들과 2분간 전처리한 후 ADP로 응고를 유도하면 헥산과 클로로포름분획을 제외한 시료에 의해 응고가 억제 되는 것을 관찰하였다. 메탄올 추출물, EtOAc, BuOH, \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 분획의 농도 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 대조군에 비하여 각 각 \( 41.6 \%\), \(46.0 \%\), \(38.9 \%\), \(18.0 \% \)의 저해효과를 나타내었다. 이와 같이 독활의 EtOAc분획에서 가장 높은 혈소판 응집 억제효과를 나타내어 강한 항혈소판 활성 성분이 함유되어 있는 것으로 사료되며 부탄올 분획에서도 높은 활성을 확인하였다.</p> <h2>총 polyphenol 함량</h2> <p>식물의 폴리페놀 및 플라보노이드와 항혈전 효과와의 연관성을 알아보기 위하여 독활 추출물과 분획층의 총 폴리페놀 함량을 측정하였으며, 이 추출물의 직접적인 항산화 효과를 알아보기 위하여 DPPH 및 ABTS의 radical 감소를 측정함으로서 시료의 free radical-scavenging 활성을 조사하였다. Table 2에 나타낸 것과 같이 추출물의 총 폴리페놀은 \( 27.0 \pm 2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \)이었으며, EtOAc 분획에서 \( 290.4 \pm 3.3 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \)으로 추출물보다 10배 이상의 폴리페놀 함량이 측정되어 이 분획층이 폴리페놀류를 풍부하게 함유하고 있는 것을 알 수 있다. 국내 시판 차류의 폴리페놀 함량을 측정한 결과를 살펴보면 인삼차와 녹차의 폴리페놀 함량은 각각 28.3과 \(94.9 \)\( \mathrm{mg} / \mathrm{g} \)으로 보고되었다. 이 결과와 비교해 볼 때 독활의 EtOAc 분획은 높은 함량의 폴리페놀를 함유하고 있는 것을 알 수 있다. 식물의 폴리페놀 또는 플라보노이드가 항혈전능에 미치는 영향에 관한 연구는 많지 않으나, cyclooxygenase-2 활성의 억제, 혈소판내의 CAMP 농도의 감소, \( \mathrm{TxA}_{2} \)의 억제 및 \( \mathrm{PGI}_{2} \)의 증가 등의 arachidonate cascade의 초기 과정을 조절하는 것으로 나타났다.</p> <h2>DPPH 및 ABTS radical 소거능</h2> <p>시료의 free radical-scavenging 활성 측정은 stable radical인 DPPH를 소거하는 항산화물질의 활성을 측정하는 것으로 DPPH는 수소공여체와 반응할 때 상응하는 hydrazine으로 환원된다. 독활의 메탄올 추출물과 분획 층을 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도에서 DPPH radical-scavenging 효과를 비교한 결과, 추출물과 \( \mathrm{EtOAc} \) 분획의 \( \mathrm{RC}_{50} \) 값은 각각 \( 59.1 \pm 20.5 \)과 \( 45.4 \pm \) \( 32.4 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 다른 분획 층들에 비표해서 높은 라디칼 소거능이 있었다. 이것은 대조구로 사용된 BHA 보다는 효과가 적었으나, 조추출물과 분회물로서는 비교적 높은 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한 ABTS라디칼 소거능은 전체적으로 DPPH 라디컬에 대한 효과에 비교하면 낮았으며 추출물의 경우 \( \mathrm{RC}_{50} \)값이 \( 968.0 \pm 46.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)였으나, EtOAc 분획에서 \( 213.6 \pm 12.2 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 소거능이 4배 이상 높아져 폴리페놀이 풍부한 층에서 항산화능이 뛰어난 것을 확인할 수 있었다.</p> <p>이와 같이 항산화 효과를 나타내는 독활의 경우, 생리활성을 나타내는 폴리페놀화합물의 연구를 수행하여 주요 폴리페놀의 항혈전 및 항혈소판 효과에 미치는 영향을 알아보고, 그 기전을 알아볼 필요가 있다.</p> <h2>에틸아세테에트 분획층의 혈소판 응집 및 부착 억제 효과</h2> <p>이상과 같이 EtOAc 분획물의 항혈소판과 항산화 효과가 가장 높게 나타났으므로 EtOAc 분획물의 혈소판 활성에 대한 억제능을 응집과 부착에 대하여 효과로 알아보았다. 혈소판의 부착은 혈소판 활성화 과정의 초기과정으로 콜라겐이나 피브리노겐과 같은 단백질에 의해서 이루어진다.</p> <p>EtOAc 분획물의 혈소판 응집에 대한 억제효과를 ADP (\(6 \mu \mathrm{M}) \)로 응고를 유도하여 테스트한 결과, 사용한 농도 범위에서 모두 농도 의존적으로 응고에 억제효과 있었으며,이에 대한 \( \mathrm{IC}_{50} \) 값은 \( 217.7 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)로 나타났다. 또한 혈소판이 피브리노겐과 콜라겐에 부착하는 것에 대한 억제효과를 트롬빈 \( (0.2 \mathrm{U} / \mathrm{ml}) \)으로 혈소판을 활성화하여 조사한 결과, EtOAc 분획물이 농도의존적으로 증가하는 경향을 나타내었으며 시료농도 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)과 \( 200 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다.</P><p>이상의 결과로부터 혈전형성의 초기 단계인 혈소판 활성화에 대한 독활의 억제효과는 독활에 존재하는 폴리페놀류의 자유 라디칼 소거능을 통하여 조절되는 것으로 사료되며, 이러한 독활의 활성성분과 혈소판 기능을 조절하는 기전에 대한 연구는 이 결과들을 바탕으로 현재 진행 중에 있다.</p>