hydroxyl radical 에 의한 지질과산화 확인을 하기 위해 \( 0.01 \% \) 의 vitamin \( \mathrm { E } \) 의 지질과산화에 대한 억제효능을 실험하여 \( 30 \% \) 의 지질과 산화 억제효과있음을 알 수 있었다.Hydroxyl radical에 의한 genomic DNA 산화에 대한 spermidine의 보호 효과를 보면 대조군에서는 hydroxyl radical에 의하여 분해되고 spermidine을 첨가한 군에서는 1000\(\mu\mathrm{m}\) 의 농도에서 유의하게 억제됨을 알 수 있었다.
<h2>In vitro 수준에서 지질과산화에 대한 spermidine의 항산화 효과</h2> <p>In vitro에서 지질과산화에 대한 spermidine에 의한 항산화 효과를 조사하기 위하여 linolenic acid를 Fenton반응으로 발생시킨 hydroxyl radical에 노출시켰다. 먼저 hydroxyl radical 에 의한 지질과산화 확인을 위하여 기존에 알려진 친유성 항산화제인 \( 0.01 \% \) 의 vitamin \( \mathrm { E } \) 의 지질과산화에 대한 억제효능을 평가한 결과, Fig. 2에서 보여지는 바와 같이 \( 30 \% \) 의 지질과 산화 억제효과가 관찰되었다. Spermidine 처리군은 대조군과 비교 시 \( 500 \mu \mathrm { M } \) 이하의 농도에서는 지질과산화에 대한 효능에서 유의적인 차이가 관찰되지 않았다. 반면에 spermidine은 \( 1,000 \mu \mathrm { M } \) 의 농도에서는 \( 20 \% \) 의 지질과산화 억제효과를 보여 주었다.</p> <h2>Hydroxyl radical에 의한 genomic DNA 산화에 대한 spermidine의 보호 효과</h2> <p>사람피부섬유아세포로 부터 분리한 genomic DNA를 이용하여 Fenton 반응에 의하여 발생 된 hydroxyl radical에 의한 \( \mathrm { DNA } \) 의 산화적 손상에 대한 spermidine의 보호 효과를 조사하였다. 대조군의 genomic DNA는 Fig. 3에서 보여지는 바와 같이 hydroxyl radical에 의하여 분해되는 것을 확인 할 수 있었다. 그러나 spermidine을 첨가한 군에서는 genomic DNA의 산화적 손상이 고농도인 \( 1000 \mu \mathrm { M } \) 의 농도에서 유의성 있게 억제되었다 \( (p<0.01) \). Hydroxyl radical에 의한 \( \mathrm { DNA } \) 의 산화적 손상이 \( 1,000 \mu \mathrm { M } \) 의 농도의 spermidine에 의하여 \( 40 \% \) 정도 억제되는 것으로 관찰되었다.</p> <h2>세포독성에 미치는 spermidine의 영향</h2> <p>본 실험에서는 spermidine이 세포성장에 미치는 영향을 관찰하기 위하여 세포 독성 유, 무를 조사하였다. MTT assay를 이용하여 spermidine의 세포 독성 효과를 조사하였다. Fig. 4에서 보여지는 바와 같이 피부섬유아세포에서 \( 1,000 \mu \mathrm { M } \) 이하의 농도에서 대조군과 비교하여 어떠한 독성 효과도 없는 것으로 판정 되었다. 따라서, \( 1,000 \mu \mathrm { M } \) 이하의 농도에서 sper-midine은 본 연구에서 사용된 사람피부섬유아세포에 대하여 안전하다는 것을 나타낸다.</p> <h2>\( \mathrm { HDFs } \) 에서 항산화 효과와 관련된 단백질의 발현에 대한 spermidine의 효과</h2> <p>항산화 효소의 발현을 조절하는데 가장 중요한 전사인자인 Nrf2와 이 전사인자에 의하여 발현되는 3종류의 super-oxide dismutase (SOD)인 항산화 효소의 단백질 발현에 대한 spermidine이 영향을 조사하였다. Fig. 5에서 보는 바와 같이 사람피부섬유아세포에 spermidine를 처리 시 \( \mathrm { Nrf2 } \) 전사인자는 대조군에 비하여 감소되는 것으로 나타났다. Superoxide dismutases는 spermidine 처리에 대하여 다르게 반응하였으나, 대조군에 비하여 모두 발현이 증가되었다. 먼저 \( 250 \mu \mathrm { M } \) 의 spermidine의 존재하에서 SOD-1이 발현되는 것이 뚜렷하게 관찰되었다. SOD-2와 SOD-3는 \( 125 \mu \mathrm { M } \) 의 spermidine의 존재하에서 발현되고 농도를 증가 시 발현이 감소되는 것으로 나타났다. 이상의 결과에서 spermidine는 전사인자인 \( \mathrm { Nrf } 2 \) 와는 독립적으로 대조군에 비하여 \( \mathrm { SOD } \) 의 발현을 증가시키는 것을 알 수 있었다.</p>