\(70\% \) 에탄올 처리, 세포제거용액 처리, 산화에틸렌 가스 멸균의 불활화 효과를 검증하기 위한 실험을 하였다. 각 단계별로 확보한 피부조직을 동결건조한 후 각 바이러스를 첨가하여 바이러스 용액이 피부조직에 침투하도록 한 뒤, 불활화 공정을 실시한 후 조직에서 각 바이러스를 회수,정량하여 불활화 정도를 비교하였다.
<h2>불활화 효과 실험</h2><p>\(70\% \) 에탄올 처리, 세포제거용액 처리, 산화에틸렌 가스 멸균에 의한 불활화 효과를 검증하기 위해 각 단계별로 확보한 피부조직을 동결건조한 후 각 바이러스를 첨가하여 바이러스 용액이 피부조직에 침투하도록 하였다. 각 불활화 공정을 실시한 후 조직에서 각 바이러스를 회수하여 정량한 후 불활화 정도를 비교하였다. 조직으로부터 바이러스를 회수하기 위해 세포배양배지를 첨가한 후 혼합 실험기(vortex mixer)를 이용하여 격렬하게 반응시킨 후 바이러스를 추출하였다. 바이러스 추출은 바이러스 회수율이 \( 90\% \) 이상이 되게 3차례 이상 실시하였다.</p><h2>\(70\% \) 에탄올 처리 공정에서 바이러스 불활화 검증</h2><p>\(70\% \) 에탄올 처리 공정에서 각 바이러스들의 불활화 정도를 비교하였다. 동결건조한 \( 3 \times 3 \mathrm{~cm} \) 피부에 바이러스를 \( 1\mathrm{mL} \) 첨가하여 바이러스 용액을 조직 속으로 침투시켰다. 바이러스를 첨가한 조직으로부터 바이러스를 회수하여 즉시 정량하였다. 또한 바이러스가 첨가된 피부를 \( 70 \% \) 에탄올에 2.5분, 5분, 10분, 20분간 처리한 후 바이러스를 회수하여 즉시 정량하였다.</p><h2>세포제거용액 처리 공정에서 바이러스 불활화 검증</h2><p>표피가 제거된 진피를 \(4 \times 5 \mathrm{~cm} \)로 자른 후 동결건조를 하였다. 각 바이러스를 \( 4 \mathrm{~mL} \) 첨가하여 바이러스 용액을 조직 속으로 침투시켰다. 바이러스를 첨가한 조직으로부터 바이러스를 회수하여 즉시 정량하였다. \( 0.1 \%\)TnBP 와 \( 2 \% \) deoxycholic acids로 구성된 세포제거용액을 처리한 후 5, 30, 60, 120분 간격으로 바이러스를 회수하여 즉시 정량하였다.</p><h2>산화에틸렌 가스 처리 공정에서 바이러스 불활화 검증</h2><p>세포가 제거된 \(3 \times 3 \mathrm{~cm} \) 무세포 진피에 바이러스를 \( 3 \mathrm{~mL} \) 첨가한 후 동결건조를 하였다. 동결건조한 무세포 진피로부터 바이러스를 회수하여 즉시 정량하였다. 또한 바이러스를 첨가한 무세포 진피에 산화에틸렌 가스를 처리한 후 바이러스를 회수하여 불활화 정도를 비교하였다. 산화에틸렌 가스 멸균에 의한 감염성 위해인자 불활화 검증을 위해 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), 상대습도 \( 60 \% \) 조건에서 \( 1,000 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 의 산화에틸렌 가스 농도로 4시간 동안 처리하였다. 무세포 진피에 잔존하는 산화에틸렌 가스가 바이러스 정량 분석을 위한 감염성 세포주에 독성을 일으킬 수 있기 때문에 무세포 진피로부터 바이러스를 회수하기 전에 산화에틸렌 가스를 제거하기 위해 상온에서 24시간 보관하였다. 산화에틸렌 가스 멸균 공정을 규정한 ISO 11135 규정에 준하여 검증을 실시하였다.</p><h2>바이러스 감소인수(Virus reduction factor)의 계산</h2><p>바이러스 정량 분석이 끝난 후 그 결과를 기초로 각 공정에서 바이러스 감소인수를 구하였다. 바이러스 감소인수는 바이러스가 첨가된 공정출발물질에 존재하는 바이러스 양의 \( \log \) 값에서 공정진행 후에 존재하는 바이러스 양의 \( \log \) 값을 뺀 \( \log \) 감소인수(reduction factor)로 정의하였다. 모든 실험은 독립적으로 두 번 실시하여 평균값을 구하였다.</p>