균주 CK214의 배양액으로부터 분리한 효소액의 agar 분해 활성을 DNS 방법으로 측정하였다. 또한, CK214 균주의 운동성을 고체평판배지에서 이동한 지름의 길이로 측정하였다. 1.5% LB agar 평판배지에서 배양한 CK214 균주, Salmonella typhimurium, Bacillus subtilis를 0.85% NaCl 용액에 현탁하였다. 마지막으로 safranin 용액으로 염색 후 광학 현미경으로 세포의 형태 및 그람염색성을 관찰하였다.
<h2>Agar 분해 활성 측정</h2> <p>분리균 CK214의 배양액으로부터 분리한 효소액의 agar 분해 활성 측정은 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid) 법을 이용하였다. 효소액을 분리하기 위해 \( 0.2 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) agar가 첨가된 200 \( \mathrm { ml } \) 의 LB 액체배지에 전배양액 \( 0.1 \%( \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 를 접종하여 24 시간동안 진탕 배양하였다. 배양액을 \( 6,000 \mathrm { rmp } \) 속도로 20 분간 원심분리하여 균체를 제거한 후, 상등액은 centriprep(Millipore)을 이용하여 약 100 배 농축하였다. 농축된 효소액을 0.2 \% (w/v) agar가 첨가된 PBS (Phosphate Buffered Saline) 용액과 1:9 (v:v)로 섞은 후 5 분간 반응하였다. 이 반응액을 DNS 시약과 1:3 (v:v)으로 잘 섞은 후 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15 분간 반응시켰다. DNS 시약과 반응한 시료는 파장 \( 575 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>운동성 관찰</h2> <p>운동성은 \( 2 \mathrm { ml } \) 의 \( \mathrm { LB } \) 액체배지에서 12 시간 배양한 \( \mathrm { CK } 214 \) 균주 배양액 5 ㅆ를 \( 0.5,1.0,1.5,2.0 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \mathrm { LB } \) agar 평판배지에 떨어뜨린 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 20 시간 동안 배양하면서 관찰하였다. CK214 균주의 각 조건에 따른 운동성은 고체평판배지에서 이동한 지름의 길이 \( ( \mathrm { mm } ) \) 를 재어 측정하였다. \( \mathrm { CK } 214 \) 균주의 이동이 완전한 원형의 모습이 아닌 경우, 가장 멀리 이동한 거리를 측정하여 기록하였다.</p> <h2>그람 염색 및 광학 현미경 관찰</h2> <p>\( 1.5 \%( \mathrm { w } / \mathrm { v } ) \) LB agar 평판배지에서 배양한 CK214 균주, Salmonella typhimurium (그람음성대조균주), Bacillus subtilis (그람양성대조균주)를 \( 0.85 \% \mathrm { NaCl } \) 용액에 현탁하였다. 현탁액은 slide glass에 한 방울 떨어뜨린 후 열고정 시켰으며, 여기에 crystal violet 용액을 2-3 방울 떨어뜨린 후 1 분간 염색하였다. 염색된 시료를 3 차수로 세척한 이 후 요오드 용액을 2-3 방울 떨어뜨려 1 분간 반응 시킨 후 acetone isopropanol이 1:3 (v/v)으로 섞인 용액으로 탈색하였다. 최종적으로 sa-franin 용액으로 1 분간 대조 염색 후 광학 현미경을 통해 세포의 형태 및 그람염색성을 관찰하였다.</p>