효소의 저해율은 같은 농도로 3번씩 반복하여 시험한 후 반응액 중에 만들어진 uric acid의 평균값을 백분율로 나타내었다. 감태 열수 추출물의 아질산염 소거능은 Gray와 Dugan을 변형하였다. ADH 활성도는 Choi 등과 Racker의 방법을 활용하여 변형하였는데, spectrophotometer를 이용하여 340 nm에서 만들어지는 NADH의 흡광도를 측정하여 확인하였다. ADH 활성은 반응이 끝나면서 최대 흡광도를 대조구의 최대 흡광도를 기반으로 비율을 활용하여 계산하였다.
<h2>Xanthine oxidase 억제 활성</h2><p>Xanthine oxidase 저해활성측정은 \( 50 \mathrm{mM} \) phosphate buf-fer (pH 7.5)에 xanthine \( 2 \mathrm{mM} \) 을 녹인 기질액 \( 1 \mathrm{ml} \) 에 효소액\( 0.1 \mathrm{ml} \) 와 시료 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 반응구로 하였으며, 대조구는 시료 대신 증류수를 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5분간 반응 시킨후 \( 20 \% \) TCA \( 1 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 반응을 종료시키고 3,000 \( \mathrm{rpm} \) 에서 10분 동안 원심분리하여 단백질을 제거한 후 반응액 중에 생성된 uric acid를 흡광도 \( 292 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. 효소의 저해율은 동일농도로 3회씩 반복 시험한 후 반응액 중에 생성된 uric acid의 평균값을 백분율로서 나타내었다.</p><h2>아질산염 소거능 측정</h2><p>감태 열수 추출물의 아질산염 소거능은 Gray와 Dugan의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 아질산염 용액에 시료 용액을 가하고 여기에 \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{HCl}(\mathrm{pH} 1.2) \) 및 \( 0.2 \mathrm{M} \) 구연산 완충 용액 \( (\mathrm{pH} 3.0 \) 와 6.0)을 사용하여 반응 용액의 \( \mathrm{pH} \) 를 각각 \( 1.2 \), \( 3.0 \) 및 \( 6.0 \) 으로 조정하여 반응용액을 준비하였다. 이를 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 동안 반응시킨 다음 Griess 시약을 가하여 혼합시켜 15분간 실온에 방치시킨 후, \( 520 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 잔존하는 아질산염을 구하였다. 아질산염 소거능은 다음식에 따라 계산하였다.</p><p>아질산염 소거율(\%)=[1-(A-C)/B] \( \times 100 \)</p><p>\( \mathrm{A}: 1 \mathrm{mM} \mathrm{NaNO}_{2} \) 용액에 추출 시료를 첨가하여 1 시간 반응 시킨 후의 흡광도</p><p>\( \mathrm{B}: \mathrm{NaNO}_{2} \) 용액의 흡광도</p><p>C: 추출시료 자체의 흡광도</p><h2>\( \mathrm{ADH} \) 활성 측정</h2><p>\( \mathrm{ADH} \) 활성도는 Choi 등과 Racker의 방법을 변형하였는데, spectrophotometer를 이용하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 형성되는 \( \mathrm{NADH} \) 의 흡광도를 측정함으로써 나타내었다. 즉, 시험관에 alcohol, NAD 수용액, 시료 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 첨가하고 \( 0.01 \mathrm{M} \mathrm{gly-} \) cine- \( \mathrm{NaOH} \) 완충용액 \( (\mathrm{pH} \) 8.8)을 총 부피가 \( 1.8 \mathrm{ml} \) 가 되게 첨가 한 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 항온수조에서 10 분간 반응시키고 \( \mathrm{ADH}(10 \)\( \mathrm{unit} / \mathrm{ml}) \) 를 가하여 \( 340 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 이때 대조구는 시료대신 증류수를 넣은 것으로 하였다. Positive control로 사용한 hepos는 약국에서 구입한 것으로, 처방전에 따라 \( 1 / 2 \) 로 희석하여 사용하였다. \( \mathrm{ADH} \) 의 활성은 반응 종료시의 최대 흡광도를 대조구의 최대 흡광도에 대한 비율로 나타내었으며 다음과 같은 식으로 계산하였다.</p><p>\( \mathrm{ADH} \) activity \( =(\mathrm{B} / \mathrm{A}) \times 100 \)</p><p>\( \mathrm{A} \) : 대조구의 최대 흡광도</p><p>B: 실험구의 최대 흡광도</p>