미생물을 활용한 항균 활성 실험은 American Type Culture Collection에서 구입한 ATCC 균주와 본 실험실에서 토양, 된장, 메주, 김치로부터 분리한 여러 균주들을 이용하였다. 이들 미생물의 항균 활성 측정은 Paper disk method와 direct method를 사용하며, 적절한 온도와 시간 동안 배양하여 진행하였다. 또한, 항세균 및 항진균 물질의 온도, \( \mathrm { pH } \), 효소처리 안정성에 대한 조사도 수행하였다.
<h2>항균 spectrum</h2> <p>그람 양성과 음성세균, 효모 및 곰팡이에 대한 분리균주의 항균 활성은 paper disk method 및 direct method를 사용하여 조사하였다. 항균 활성 실험에 사용한 미생물 중 ATCC 균주는 American Type Culture Collection(ATCC, Manassas, VA, U.S.A.)로부터 구입하였으며 본 실험실에서 토양, 된장, 메주 그리고 김치로부터 분리하여 동정한 균주 Bacillus subtilis cx1, Bacillus subtilis DJI, A. petrakii PF-1, Aspergillus ochraceus PF-2, Aspergillus nidulans PF-3, Cladosporium gossypiicola KF-2를 사용하였다. 항균 활성 측정을 위한 감수성 세균은 LB 또는 brain heart infusion(BHI, Difco Laboratories) 평 판배지, 감수성 곰팡이는 PDA 또는 MEA 평판배지, 감수성 효모는 YM(Difco Laboratories) 또는 sabouraud dextrose(SD, Difco Laboratories) 평판배지에 \( 1 \times 10 ^ { 6 } \mathrm { cfu } / \mathrm { mL } \) 로. 도말하였다. Paper disk method는 감수성 균주가 도말된 평판배지 위에 \( 8 \mathrm { ~mm } \) 직경의 paper disk를 놓고 항균 물질을 \( 100 \mu \mathrm { L } \) 씩 일정하게 가하였다. Direct method에서는 \( 5 \mathrm { ~mL } \) TSB 액체배지에서 12 시간 배양된 분리균주 \( 6 \mu \mathrm { L } \) 를 감수성 균주가 도말된 평판배지 위에 micropipette을 사용하여 \( 3 \mathrm { ~cm } \) 길이로 그어 주었다. Paper disk method와 direct method에 의한 분리균주의 항균 활성 측정시 감수성 세균은 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 12시간 동안 배양하고, 감수성 효모와 곰팡이는 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 또는 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24~72시간 동안 배양하였다. 항균 활성은 diamatic caliper를 사용하여 생육저지환의 지름으로 측정하였으며 3회의 반복실험을 한 후 평균값을 사용하였다.</p> <h2>항균 물질의 안정성</h2> <p>항세균 및 항진균 물질의 온도, \( \mathrm { pH } \) 및 각종 효소처리에 대한 안정성을 조사하였다.</p> <p>온도에 의한 영향을 알아보기 위하여 분리 균주 배양상등액을 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 50 ^ {\circ } \mathrm { C } , 70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간, \( 100 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 30 분, \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15 분간 열처리한 후에 잔존활성을 측정하였다.</p>