백혈구의 내피층 부착에 관한 실험결과는 melatonin을 세포에 처리하였을 경우, THP-1 세포와 소대동맥 내피세포 사이에 일어나는 이종세포간 부착에는 melatonin이 영향을 미치지 않음을 확인할 수 있다. 혈관내피세포 탈착 실험결과는 소 대동맥 내피세포에 melatonin을 처리하였을 경우, melatonin의 농도가 증가함에 따라 혈관내피세포의 탈착이 증가하였으며, 특히 \( 1 \mathrm{mM} \)의 melatonin을 처리하였을 경우, 혈관내피세포의 탈착이 대조군의 5배 증가함을 확인할 수 있다. 산화질소 생산 측정 실험결과는 melatonin을 단시간 처리 하였을 경우 eNOS의 전체량은 차이가 없고, 인산화된 eNOS의 양이 크게 줄어드는 것을 확인할수 있다.
<h2>백혈구의 내피층 부착에 관한 실험결과</h2> <p>동맥혈관 벽의 염증은 동맥경화 진행 과정의 초기 단계로 , 이러한 염증반응 시 분비되는 주변분비(paracrine)에 의하여 백혈구가 혈관 내피층에 부착하게 된다. 따라서 백혈구가 혈관 내피층에 부착하는 정도를 관찰함으로써 동맥경화의 발생 가능성을 간접적으로 평가할 수 있다. Fig. 1E에서 보듯이 melatonin을 세포에 처리하였을 경우, THP-1 세포와 소대동맥 내피세포 사이에 일어나는 이종세포간 부착에는 melatonin이 아무런 영향을 미치지 않음을 확인할 수 있었다.</p> <h2>혈관내피세포 탈착 실험결과</h2> <p>혈관이 여러 가지 생리활성을 일정하게 유지하기 위해서는 혈관의 안정성이 적절하게 유지되어야 한다. 또한 혈관내피세포가 혈관에서 탈착되어 내피하층이 드러나게 되면 내피하조직의 콜라겐, 기저막 등이 혈액에 노출되어 혈전이 형성될 수 있다. 본 연구에서는 내피세포의 탈착을 세포수준에서 측정해보았다. 세포수준에서 측정한 탈착실험은 \( \mathrm{Ca}^{2+} \) 와 \( \mathrm{Mg}^{2+} \) 이온이 없는 PBS에 melatonin을 첨가한 후 세포를 30 분 동안 배양하여 탈착된 세포를 세어 평가하였다. Fig. 2에서 보듯이 소 대동맥 내피세포에 melatonin을 처리하였을 경우 melatonin의 농도가 증가함에 따라 혈관내피세포의 탈착이 증가하였으며, 특히 \( 1 \mathrm{mM} \)의 melatonin을 처리하였을 경우, 혈관내피세포의 탈착이 대조군에 비해 5배나 증가함을 확인할 수 있었다. 이는 고농도의 melatonin은 혈관내피세포의 탈착을 상승시켜 혈전형성을 유도할 가능성이 있음을 의미한다.</p> <h2>산화질소 생산 측정 실험결과</h2> <p>산화질소는 다양한 생리적 기능을 한다고 알려져 있다. 특히 혈관계에서는 혈관 확장, 혈소판 응집 억제, 호중구의 부착 억제, 동맥경화의 발생 억제와 같은 기능을 갖고 있으며, eNOS에 의해 L-arginine으로부터 합성된다. 따라서 melatonin이 이와 같이 중요한 산화질소의 생성에 어떤 영향을 미치는지 알기 위한 실험을 수행하였다. Fig. 3A에서 보듯이 내피세포에 존재하는 산화질소의 양이 melatonin 처리에 의하여 감소되었으며, 특히 고농도 \( (1 \mathrm{mM}) \)로 처리했을 때, 산화질소의 양이 대조군에 비해 \( 80 \% \)까지 감소함을 알 수 있었다. Melatonin이 산화질소 기초생산량을 감소시킨다는 것을 다시 한 번 확인해보기 위해, eNOS의 활성화 형태인 인산화 eNOS (p~eNOS)의 양을 Western blot을 통해 확인하였다. 그 결과, Fig. 3B에서 보듯이 melatonin을 단시간 처리 하였을 경우 eNOS의 전체량은 변함이 없지만, 인산화된 eNOS의 양은 확연하게 줄어드는 것을 확인할 수 있었다. 이는 melatonin이 산화질소의 기초생산량을 억제함으로써 새로운 혈관 생리 혹은 병리 현상을 유발할 수 있는 가능성을 보여주는 것이다.</p>