실험에 사용한 봉선화는 인공기상실에서 3주간 생육시킨 것이며, 이를 \( \mathrm{pH} \) 농도에 따라 산성비 처리를 하였다. 이후 흡광도 조사를 통해 MDA 함량과 Bolin과 Book의 방법에 따라 환원형인 ascorbic acid (AsA)와 산화형인 dehydroascorbate (DHA)의 함량 등을 측정하였다. 또한, 산성비 처리한 잎을 채취하여 potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} ~ 7.8) \)로 추출한 다음 항산화효소 활성 측정에 이용하였다.
<h1>재료 밎 방법</h1><h2>공시식물</h2><p>봉선화(Impatiens balsamina L.) 종자를 발아시킨 후, \( 500 \mathrm{~g} \)의 배양상토( \( \left.\mathrm{N}: \mathrm{P}_{2} \mathrm{O}_{5}: \mathrm{K}_{2} \mathrm{O}=0.21: 0.41: 0.38\right) \)를 담은 플라스틱 포트에 1개체씩 파종하여 인공기상실에서 3주간 생육시켰다. 인공기상실 내의 온도는 낮(7시 \( \sim 19 \) 시)이 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), 밤(19시~ 7 시)이 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)였으며, 습도는 주야간 공히 \( 70 \pm 5 \% \)를 유지하였다.</p><h2>인공산성비 제조</h2><p>인공산성비의 제조는 Singh와 Agrawal의 방법에 따라\( 1 \mathrm{~N} \mathrm{H}_{2} \mathrm{SO}_{4} \) 와 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{HNO} \)를 이용하여 \( \mathrm{pH} \)가 각적각 2.0, 3.0, 4.0인 용액을 만들어 사용하였으며, 대조구는 일반으로 산성비의 기준이 되는 \( \mathrm{pH} 5.6 \) 용액을 제조하여 사용하였다.</p><h2>산성비에 대한 생장반응</h2><p>3주 동안 생육한 건전한 식물체를 대상으로 각 \( \mathrm{pH} \) 농도별 용액을 자연 강우와 같이 식물체가 완전히 젖을 정도로 3일 간격으로 처리하면서 2주 동안 생육시킨 후, 초장 및 건물중을 조사하였다.</p><h2>Malondialdehyde (MDA) 및 total carotenoid 함량 측정</h2><p>MDA 함량은 Heath와 Packer[7]의 방법에 따라 2 주간의 산성비를 처리한 \( 1 \mathrm{~g} \) 의 잎을 채취하여 \( 6 \mathrm{ml} \) 의 증류수를 넣어 마쇄하고, \( 20 \% \) trichloroacetic acid와 \( 0.5 \% \) thiobarbituric acid로 반응시킨 후, \( 532 \mathrm{~nm} \)와 \( 600 \mathrm{~nm} \)에서의 흡광도를 조사하여 그 함량을 측정하였다. Total carotenoid 함량은 Lichtenthaler의 등식에 의해 분광광도계를 이용하여 \( 470 \mathrm{~nm}, 648 \mathrm{~nm} \) 및 \( 664 \mathrm{~nm} \) 에서의 홉광도를 측정하여 함량을 조사하였다.</p><h2>Ascorbic acid 및 glutathione 함량 측정</h2><p>2주간의 산성비 처리한 \( 1 \mathrm{~g} \)의 잎을 채취하여 \( 10 \mathrm{ml} \)의 methaphosphoric acid 용액으로 추출하고 Bolin과 Book의 방법에 의해 환원형인 ascorbic acid (AsA)와 산화형인 dehydroascorbate (DHA)의 함량을 측정하였다. Glutathione 함량은 Law 등의 방법에 따라 환원형 glutathione (GSH) 및 산화형 glutathione (GSSG)의 함량을 측정하였다.</p><h2>항산화효소의 활성측정</h2><p>2주간의 산성비 처리한 \( 1 \mathrm{~g} \)의 잎을 채취하여 potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.8) \)로 추출하여 활성분석에 사용하였다. SOD의 활성은 Schoner과 Krause[18]의 방법에 따라 cytochrome \( c \)의 감소를 \( \mathrm{A}_{550} \)에서 측정하였으며, \( \mathrm{APX} \)의 활성은 \( \mathrm{A}_{200} \) \( \left(2.8 \mathrm{mM}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 에서 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)에 의한 ascorbate의 산화를 조사하였다. Monodehydroascotbate reductase (MDHAR)의 활성은 Hossain 등의 방법에 의해 \( \mathrm{A}_{30}\left(6.2 \mathrm{mM}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \)에서 \( \mathrm{NADH} \) 의 산화를 조사하였으며, dehydroascorbate reductase (DHAR)의 활성은 \( \mathrm{A}_{290}\left(2.8 \mathrm{mM}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 에서 dehydroascorbate 에서 ascorbate로의 환원을 조사하는 Tanaka 등의 방법에 따라 측정하였다. Glutathione reductase (GR)의 활성은 \( \mathrm{A}_{340}\left(26.6 \mathrm{mM}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 에서 \( \mathrm{NADPH} \) 의 감소량을 측정하였으며, guaiacol peroxidase (GP)의 활성은 \( \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 존재 하에서의 guaiacol의 산화를 \( A_{470}\left(26.6 \mathrm{mM}^{-1} \mathrm{~cm}^{-1}\right) \) 에서 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>측정치에 대한 통계처리는 one-way ANOVA에 의해 분석하고, 평균은 Tukey HSD에 의한 다중비교를 하였다(5\% significance levels).</p>