Ether 마취한 후 개복하여 대동맥에서 채혈하여 \(3.2 \% \) sodium citrate 용액과 \(1:9 \)의 비율로 혼합한 다음 \( 1,100 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 원심분리하여 상층의 PRP를 취하고, \( 3,000 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 더 원심분리하고 상층에 혈장을 제거한 후 EDTA를 포함하는 여러 약물을 넣고 섞어 재 현탁하고 세척하는 방식을 반복한 후 혈소판 응집을 측정하였다. 혈소판 응집에 반응하는 약물의 효과는 응집 저해율과 slop, lag time, amplitude로 확인이 가능하다.
<h2>항혈전 활성 측정</h2> <p>Ether 마취 후 개복하여 대동맥으로부터 채혈하여 3.2 \( \% \) sodium citrate 용액과 \(1:9 \)의 비율로 흔합한 뒤 \( 1,100 \mathrm { rpm } \) 에서 10분간 원심분리하여 상층의 PRP (platelet rich plasma)를 취하고, \( 3,000 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 더 원심분리하여 상층에 혈장을 제거한 후 EDTA를 포함하는 washing buffer \( 138 \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } \), \( 2.7 \mathrm { mM } \mathrm { KCl } \), \(12 \mathrm { mM } \mathrm { NaHCO } _ { 3 } \), 0.36 \mathrm { mM } \mathrm { NaH } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } \), \(5.5 \mathrm { mM } \) glucose, \( 1 \mathrm { mM } \) EDTA, \( \mathrm { pH } \) 6.5) \( 5 \mathrm { ml } \)를 가하고 섞어주어 혈소판을 재 현탁 시켰다. 이 혈소판을 다시 \( 3,000 \mathrm { rpm } \)에서 10분간 원심분리 한 후, 세척액을 버리고 혈소판을 위의 방법으로 한 번 더 세척하였다. 세척 후 suspending buffer \( (138 \mathrm { mM } \mathrm { NaCl } \), \( 2.7 \mathrm { mM } \mathrm { KCl } , 12 \mathrm { mM } \mathrm { NaHCO } 3,0.36 \mathrm { mM } \mathrm { NaH } { } _ { 2 } \mathrm { PO } _ { 4 } , 5.5 \mathrm { mM } \) glucose, \( 0.49 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } _ { 2 } , 0.25 \% \) gelatin, \( \mathrm { pH } \) 7.4)로 재 현탁 시켜 3,000 rpm에서 10 분간 원심분리한 후 다시 suspending buffer로 현탁시켜 washed platelet을 조제하였다. Washed platelet는 suspending buffer로 희석하여 혈소판 수가 \( 5 \times 10 ^ { 8 } / \mathrm { ml } \) 이 되도록 하였고, 응집유도제로 collagen을 2.5 \( \mu \mathrm { l } \) 가하여 5분간 반응시켜, Whole blood lumi-aggregometer (Chrono-log, U.S.A)를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 혈소판 응집을 측정하였다. 혈소판 응집에 작용하는 약물의 효과는 응집 저해율과 slop, lag time, amplitude로 나타낼 수 있다. Slop은 반응이 일어나기 시작할 때의 속도를 나타내며, lag time은 반응하는 시간, amplitude는 최대 응집력을 나타낸다. 응집력은 반응이 최종적으로 끝났을 때의 광학밀도를 나타낸다.</p>