DDB 혼합제제인 DWP-04을 전처리하고 GaIN을 투여해 간독성을 유발시킨 후 혈중간지표에 미치는 생화학적 변동을 관찰하였다. 정상군은 GaIN 중독에 따라 aminotransferase, SDH, ALP 및 LDH의 활성이 증하였고 DWP-04 투여 후 용량 의존적으로 억제되었는데, 특히 \( 100 \sim 200 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 의 투여에서 유의성 있게 감소하였다. aminotransferase, SDH, ALP 및 LDH 등은 간세포의 괴사를 반영하는 효소로서 간조직의 손상시 다량이 혈중으로 유출된다. 본 실험에서 GaIN에 의한 여러 효소 활성은 간손상을 의미하는데 DWP-04의 전처리로 간 세포막이 안정되는 것으로 사료된다.
<p>혈액 성분의 측정 - 혈청생화학적 검사는 실험동물을 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) gas로 마취하여 개복하고 복부대동맥으로부터 혈액을 채취하였다. 혈액을 \( 3,000 \mathrm { rpm } \) 으로 15분간 원심분리 하였으며, 이를 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에 즉시 보관하여 분석에 사용하였다. Aspartate/ alaline aminotransferase (AST/ALT), sorbitol dehydrogenase (SDH), \( \gamma \)-glutamyltranspeptidase ( \( \gamma \)-GTP), alkaline phospha-tase (ALP), lactate dehydrogenase (LDH)의 분석은 clinical spectrophotometer (Shimadzu, CL-770, Japan)을 사용하였다.</p> <p>간조직에서의 변동 - 체혈을 마친 실험동물에서 간을 적출하여 간조직을 관류하여 간조직에서 혈액을 제거한 간조직에서 thiobarbituric acid reactive substances (TBARS)의 함량측정은 Buege와 Aust의 방법, Glutathione (GSH)의 함량측정은 Griffith의 방법에 준하였다. 간조직 일정량에 potasium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.4)를 첨가하고 glass-tefron homogenizer로 파쇄하고, 고속 및 초고속 원심분리 \( (105,000 \times \) \( \mathrm { g } , \mathrm { 1hr } \) ) 하여 mitochondria, cytosol 및 microsomal분획을 얻어 이를 효소액으로하여 xanthine oxidase XO의 활성측정은 Stirpe와 Della 방법, aldehyde oxidase AO의 활성측정은 Rajagopalan등의 방법, aninopyrine N-demethylase(AD)의 측정은 Nash의 방법, aniline hydroxylase AH의 활성 측정은 Bidlack등의 방법, glutathione S-transferase(GST)의 활성 측정은 Habig 등의 방법, superoxide dis-mutase (SOD) 활성의 측정은 Marklund와 Marklund의 방법, catalase 활성의 측정은 Aebi의 방법, glutathione peroxidase (GSH-Px) 활성의 측정은 Paglia와 Valentine의 방법, \( \gamma \)-glutamylcystein synthetase ( \( \gamma \)-GCS)의 측정은 Meister와 Richman의 방법, glutathione reductase (GR)의 활성 측정은 Mize와 Langdon의 방법에 준하여 측정하였다.</p> <p>단백질 정량 및 통계처리 - 단백질 정량은 bovine serum albumin (Sigma Fr.IV)을 표준품으로 하여 Lowry등의 방법 [25]에 따라서 측정하였으며, 실험결과는 평균치±표준편차로 포시하였고 통계적 유의성은 Duncan's new multiple range test를 이용하였다. P값이 \( 5 \% \) 미만일 때 통계적으로 유의성이 있다고 판정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>혈중 생화학적 변동</h2> <p>DDB한합제제인 DWP-04 \( (50,100,200 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } ) \) 을 2주간 전처리하고 GaIN을 투여하여 간독성을 유발시킨 다음 혈중간지표에 미치는 생화학적 변동을 관찰한 견과는 Table 1에 나타난 바와 갇다. 정상군의 aminotransferase, SDH, \( \gamma \)-GTP,ALP, 및 LDH의 활성은 GaIN 중독에 따라 현저히 증가되었으나 DWP-04를 투여함으로써 용량의존적으로 억제되었으며 특히 \( 100,200 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 의 투여에서 유의성 있게 감소하였다. Transaminase는 amino기 전이반응을 촉매하는 효소의 충칭으로 임상적으로 가장 많이 이용되고 있는 aspartate ami-notransferase (AST)와 alinine aminotransferase (ALT)가 있는데 이들 효소들은 amino산과 a-keto acid와의 사이에 amino기 전이반응을 촉매하는 것으로 체내에 널리 분포되어 있다. 이들이 간손상의 지표로 널리 이용되는 것은 간세포가 손상 되면 세포 밖으로 유출되는 효소이기 때문이다. 이러한 유출과정은 세포내의 energy공급이 감소되어 세포내의 \( \mathrm { K } ^ { + } \)이온이 세포외로 유출되고 \( \mathrm { Na } ^ { + } , \mathrm { Ca } ^ { + + } \)및 수분이 세포내로 유입이 되면서 세포는 팽창되고, 세포막이 늘어나게 되어 세포질에 즌재하는 AST와 ALT가 유출된다. 세포 밖으로 빠져나간 AST 및 ALT는 순환 혈액 중으로 빠르게 유입되어 간 손상시 정상치보다 현저히 증가됨으로써 간기능 검사에 이용되고 있다. Sorbitol dehydrogenase SDH 또한 간장에 존재하는 효소로서 fructose와 sorbitol의 상호전환과 가역적인 산화환원 반웅의 촉매로서 작용하는 효소로 간 질환이 있율때 현저히 증가되므로 간기능 검사의 지표로 널리 사용되고 있다. \( \gamma \)-Glutamyltransferase ( \( \gamma \)-GTP)는 \( \gamma \)-glutamyl기를 다른 peptide나 1-amino acid에 전이하는 전이 효소로서 간특이효소로 알려져 있다. 이 효소 또한 간조직 손상 시 혈중으로 유출이 증가되므로 간기능의 지표 검사에 많이 이용되고 있다. Alkaline phosphatase (ALP)는 monoesterified phosphoric acid를 가수분해 하는 효소로서 담즙 울체 및 간 질환에서 증가되는 효소이며, lactate dehydrogenase (LDH)는 생체내에서 해당계의 최종 단계에서 작용하는 효소로 L-lactate를 pyruvate로 전환하는 가역반응을 촉매하는 효소로서 이 효소 또한 간 질환시 증가되는 것으로 알려져 있다. 혈청 aminotransferase, SDH, \( \gamma \)-GTP, ALP, 및 LDH는 간세포의 변성이나 괴사를 반영하는 효소로서 잠재성 간장애의 분류 및 급성간염 발병의 조기진단에 필수적인 요소로서 간조직 손상시 다량 혈중으로 유출되어 그 활성이 증가되는 것으로 알려져 있다. 본 실험에서 DWP-04의 전처리로 GaIN에 의하여 유도된 여러효소의 활성이 억제되는 것은 이들이 GaIN에 의한 간조직의 손상을 억제하거나 간 세포막을 안정시킴으로써 나타나는 결과로 사료되어진다.</p>