연구는 모발 내의 melanin 함량 차이를 유전적 요인에 따라 발생하는 것을 확인하는 것이다. 제주흑우, 한우, Holstein 품종들의 대표적인 모색 및 MC1R 유전자형에 따라 각 소들의 피부조직에서 TYR,TYRP1,DCT 유전자의 발현하는 것을 조사하고, 각 소들의 품종별 melanin의 함량과 MC1R 유전자형과의 관련여부를 조사하는 연구를 수행하였다.
<p>모발 내 melanin 함량의 차이는 melanin 생합성이나 mela-nosome의 생성과 이동 등 여러 유전적 요인에 의해 발생할 수 있다. 본 연구는 제주흑우와 한우, Holstein 품종에서 출현하는 대표적인 모색과 MC1R 유전자형에 따라 선정된 소들에서 채취한 피부조직에서 melanin 생합성에 직접적으로 관여하는 세 가지 유전자 (TYR,TYRP1,DCT)들의 피부조직 내 발현 여부, 품종 간 발현 양의 차이를 조사하고, 이를 품종별melanin 함량, MC1R 유전자형 등과의 상관관계를 규명하고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>본 연구에 이용된 시료는 농촌진흥청 국립축산과학원 제주출장소에서 제주흑우와 한우, 젖소 농가에서 Holstein에서 동일 계절에 피부조직은 채취하였다. 한우와 제주흑우의 피부조직은 동일한 위치인 왼쪽 어깨부위에서 채취하였고, 흑/백반인 Holstein에서는 한우, 제주흑우에서 채취한 부위와 가장 인접한 흑모색 및 백반 부위의 피부조직에서 채취되었다.</p> <h2>DNA분리와 MCIR 유전자형의 결정</h2> <p>피부조직 채취 전 채집한 혈액에서 DNA를 Sucrose-protei-nase K 방법을 일부 변형하여 추출하였다. 추출한 DNA를 주형으로 한 등의 보고한 MC1R 유전자형 분석 방법을 이용하여 제주흑우, 한우, Holstein의 MC1R 유전자형을 결정하였다. 유전자형 결정을 위한 PCR 반응은 10x 반영완충액, \( 20 \mathrm { mM } \) dNTP, 각각 \( 200 \mathrm { mM } \) primer, 1.5 units i-Taq DNA polymerase (Intron Biotechnology, Korea)와 50-60 ng genomic DNA 용액에 멸균한 탈이온수를 첨가하고, PTC-200 (MJ Research,USA)을 이용하여 \( 95 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 3분 초기변성 후, \( 94 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 30초, \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 45초, \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 45초로 구성된 연쇄반응을 35회 반복한 후 \( 72 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 5분간 최종 신장하였다. \(MC1R \) 296T>C의 결정은 AluI, \( 311 \mathrm { delG } \)( \(e \))는 MspI 제한효소로 공급자의 manual을 따라 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 overnight 처리한 후 \( 2.5 \% \) agarose gel 상에서 전개하여 판독하였다. Holstein은 \( E ^ { D } / E ^ { D } \), 제주흑우 \( E ^ { + } / E ^ { + } \)그리고 한우는 \( e / e \) 유전자형인 개체들은 선정하여 RNA 분리와 re-al-time RT-PCR 분석에 이용하였다.</p>