Keratin azure를 이용하여 keratinase activity를 측정한 결과, 활성이 가장 높은 균주 \( \mathrm { SH } -517 \) 이 최종 선별되어 glycerol 현타액과 1:1로 흔합하여 deep freezer에 보관하였다. 깃털과 Keratin azure는 전처리하여 배지 성분 및 activity test를 위한 기질로 사용하였고, spectrophotometer는 Hitachi model 2000을 사용하였으며, 시약은 kcratin azure를 사용하였다.
<p>동안 액체 배양하여 원심분리한 상등액을 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 애서 keratin azure를 이용하여 keratinase activity를 측정하였다. 이 중 활성이 가장 높은 균주를 최종 선별하여 \( \mathrm { SH } -517 \) 이라 명명하고 이후의 실험에 사용하였다. 최종 선별된 균주는 Nutrient Broth (NB) \( 100 \mathrm { ml } \) 을 \( 300 \mathrm { ml } \) Erlenmeyer flask에 넣어 배양 한 후 \( 30 \% \) glycerol 현타액과 \( 1: 1 \) 로 흔합하여 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) deep freezer에서 보관하였다. 그리고 효소 생산 조건을 검토하기 위한 배양은 2차 선별배지를 \( 300 \mathrm { ml } \) Erlenmeyer flask에 100 \( \mathrm { ml } \) 을 분주하여 \( 121 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 20 \mathrm { ~min } \) 동안 가압살균 한 후 전배 양한 배양액(2차 선별배지에서 활성화시킨) \( 1 \mathrm { ml } \) 을 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48 시간 진탕배양하였다.</p> <h2>우모 분해균의 동정</h2> <p>분리된 균주를 동정하기 위하여 Bergey's manual of sys-tematic bacteriology [15]에 기술된 방법에 따라 형태학적, 배양학적, 생리학적 특성을 조사하였다.</p> <h2>기질의 조제</h2> <h3>깃털의 전처리</h3> <p>도계장에서 수집한 깃털에서 다른 이물질들을 분리해낸 후, 증류수를 이용하여 10회 세척하였다. 세척한 chicken feather롤 \( 60 ^ {\circ } \mathrm { C } \) dry oven에서 완전 건조가 되도록 3 일 동안 건조하고, 약 \( 5 \mathrm { ~mm } \) 의 길이로 절단하여 배지 성분 및 activity test를 위한 기진로서 사용하였다.</p> <h3>Keratin azure의 전처리</h3> <p>Keratin azure를 기실로 사용하기 위하여 다음과 같이 전처리하였다. Keratin azure를 1~2 mm로 절단한 후 막자사발에 넣고 액체질소를 가하여 급랭시킨 후 미세하게 분쇄하여 분말화하였다.</p> <h3>사용 기기 및 시약</h3> <p>본 실험에 사용한 spectrophotometer는 Hitachi model 2000 을 사용하였으며, 시약은 Sigma 사의 kcratin azure를 사용하였으며, 그 외의 시약은 특급 내지 1 급 시약을 사용하였다.</p>