SOD는 항산화 효소로서 생체를 보호하는 기능이 있는 분자량이 비교적 큰 단백질로서 열이나 알칼리에 약하다. 체내에서 활성을 가지며 이러한 단점을 보완하는 저분자물질인 SOD 유사활성 물질, 청각 ethyl acetate 추출물에 대한 연구가 진행되어 있다. 항산화 활성을 가진 물질의 총 phenol 함량이 클수록 DPPH 라디칼 소거능이 높았다. 최근에는 NO가 세포 활성화 물질 및 ROI에 의해 유발된 세포 독성을 최소화시키는 역할이 밝혀졌다.
<h2>SOD 유사활성(Superoxide dismutase -likeactivity : SODA 측정</h2><p>Superoxide dismutase (SOD)는 항산화 효소로서 세포에 유해한 oxygen radical를 과산화수소 전환시키고 다시 cata-lase에 의하여 무해한 물분자와 산소분자로 전환시켜 활성산소로부터 생체를 보호하는 기능으로 알려져 있다. SOD는 분자량이 비교적 큰 단백질로서 열이나 알칼리에 약하여 이러한 단점을 보완할 수 있는 저분자물질로 체내에서 역할이 유사한 SOD 유사활성 물질에 대한 연구가 진행되어 있다. Nice 등은 SOD 정제시 열안정성이 높고 SOD와 유사한 활성을 나타내는 물질을 함께 정제하였는데 이것은 SOD와 결합된 phenol 계 물질인 것으로 보고하였다. 따라서 항산화 및 항노화와 밀접한 관계가 있는 것으로 알려진 SOD 유사활성 측정을 pyrogallol의 자동산화 반응을 이용하여 분석하였다. 청각 ethyl acetate 추출물의 SOD 유사활성 측정 결과를 Fig. 4에 나타냈으며, SODA 측정 결과 추출물 농도가 증가할수록 항산화효과가 증가하였고, \( 2500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 약 \( 24 \% \)의 항산화 효과를 나타내었다. 이러한 결과는 비교적 항산화력이 높은 과일로 알려진 키위 착즙액의 SOD 유사 활성 \( (27.6 \%) \)과 비슷한 SOD 유사활성을 나타내었다.</p><h2>총 폴리페놀의 함량측정</h2><p>Polyphenol계 물질들은 식물체에 특수한 색깔을 부여하고 산화-환원 반응시 기질로 작용하며 한분자내에 2개 이상의 phenolic hydroxyl기를 가진 방향족 화합물을 가리킨다. 청각 ethyl acetate 추출물의 총 폴리페놀의 함량의 흡광도 값을 나타낸 것으로 농도가 증가함에 따라 총 폴리페놀 함량이 증가 한 것을 알 수 있었고, \( 2500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서는 control 보다 2배정도 높은 함량을 나타내었다. 페놀 화합물들은 수소공여 작용에 따른 환원 활성에 의하여 지질의 산화를 억제시키거나 지연시키는 것으로 밝혀져 있다. Fig. 5에 나타난바와 같이 DPPH 라디칼 소거능이 높으면 높을수록 페놀성물질의 함량도 증가하는 것으로 나타났으며 항산화 활성을 나타내는 물질은 총 phenol 함량이 크게 기여함을 알 수 있다. 이와 같이 DPPH 라디칼 소거능과 총 poly-phenol 함량과는 높은 상관관계를 가지는 것으로 많은 연구가 수행되어 왔다.</p><h2>NO assay 및 cell viability</h2><p>치주질환의 주요 병인균주인 Prevotella intermedia에 의하여 생성된 Bacterial lipopolysaccharise (LPS)를 대식세포에 처리하여 NO를 유도시킨 다음 청각추출물을 대식세포에 처리하여 NO 활성 및 iNOS합성에 미치는 영향을 조사하였다. Fig. 6 [A], [B]에 나타난바와 같이 LPS에 의하여 유도된 NO 활성은 청각추출물을 첨가함으로서 NO 활성이 현저히 감소하였다. 이러한 결과는 청각추출물이 면역기능과 관계가 있음을 나타내는 것이다. 일반적으로 암에 걸린 세포는 NO 활성이 증가하는데 항암제 등을 투여하면 NO 활성이 감소하는 것으로 나타난다.</p><p>세포활성은 MTT 분석을 통해서 측정하였으며 LPS로 처리된 대식세포는 약 \( 50 \% \) 정도의 세포감소를 나타냈지만 청각 추출물을 첨가하면 정상수준으로 회복되는 것이 관찰되었다(data not shown).</p><p>NO는 면역학적 방어에서 중요한 역할을 수행하고, 분비조직과 세포의 기능에 영향을 미치며, 세포성 면역계의 주된 역할의 하나로 NO는 세포 독성이나 성장 억제 활성을 나타낸다. NO는 L-arginine의 guanidino nitrogen으로부터 nitric oxide synthase(NOS)에 의하여 생성된다.</p><p>NO는 대부분의 포유류 동물의 세포내에서 생성되고 신경계에서는 화학적 신호 전달 물질로서, 혈관계에서는 혈압 조절과 혈소판의 응집 및 호중성구의 집합 작용을, 골격근에서는 대사와 근 수축 조절 등 생리학적으로 중요한 역할을 한다. 최근 NO가 신경계의 생리학적 전달자로서 뿐만 아니라, 염증 반응, 면역계 및 세포 독성 외에도 세포의 분화나 세포 내 신호 전달 등의 중요한 조절 물질로 알려지고 있다. 또한 면역 세포에서 iNOS에 의해 생성된 NO는 다량으로 외부의 자극에 의해 유전자 수준에서 발현되고 주로 침입한 미생물이나 종양 세포에 대해 독성을 갖는 방어 물질로서 작용하는 것으로 보고되고 있다. 최근에 NO가 세포 활성화 물질 및 reactive oxygen intermediates(ROI)에 의해 유발된 세포 독성을 최소화시키는 역할이 밝혀짐으로 이 분야에 대해서 활발히 연구되고 있다.</p>