남조류 Microcystis aeruginosa를 무균적으로 분리하기 위해 낙동강 물금지역의 수화를 멸균 증류수로 vortex 전처리를 하고, 세균제거 및 무균상태를 유지하기 위하여 항생물질(ampicillin \( 150 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \), neomycin \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m \ell} \) )을 첨가하고, 오염 기회를 줄이기 위하여 \( 0.7 \% \) agarose로 정형화시킨 CB고체배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C}\), \(40 \mu \mathrm{mol}\) \( \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) 광 조건을 형성하였다. 연구 결과로 26개의 Microcystis aeruginosa colony 중 3개의 무균 균주만이 확인되었다. 3개의 무균균주를 16S rRNA prim-er를 활용하여 PCR 증폭한 결과 M. aeruginosa AF 139292와 \( 99.5 \)에서 \( 100 \% \)의 상동성을 띄는 것으로 확인되었다.
<p>이렇게 무균처리된 M. aeruginosa strain들을 독립 집락으로 형성시켜 오염 기회를 줄이기 위하여 고체배지에 배양하였다. 고체배지의 gelling agent 종류별에 따른 성장 조사는 고체배지에 자란 집락을 모두 회수하여 엽록소 \( \mathrm{a} \) 함량을 측정함으로서 상대적인 성장도를 비교하였다. Table 4에서 보는바와 같이 agarose, high gel strength agar, phytagel, agar 순으로 성장을 보였으며, transfer gel, alginic acid를 사용한 고체배지에서는 집락을 형성하지 않았다. 그 중 가장 높은 성장을 보인 것은 \( 0.7 \% \) agarose였다.</p> <p>낙동강 하류지역에서 발생하고 있는 대표적인 Microcystis는 6종류인데, 본 실험의 물금 지역 수화로부터 분리한 대표적 Microcystis strain은 세포의 직경이 대부분 \( 3 \sim 4 \mu \mathrm{m}\)이고 군체의 형태가 부정형이며 상피막이 명료한 것이 특징인 M. aeruginosa였다.</p> <h2>PCR 증폭</h2> <p>낙동강 물금 지점에서 무균분리한 3개의 M. aeruginosastrain를 각각 순수 배양하여 DNA를 분리하였다. 분리된 DNA를 주형으로 하여 합성한 primer를 이용하여 PCR을 수행하였다. \( 1 \% \) garose gel을 사용하여 전기영동을 실시한 결과 3개 모두 \( 943 \mathrm{bp} \)의 16S rRNA의 band를 관찰할 수 있었다.</p> <h2>염기서열 분석</h2> <p>이들의 염기서열 분석을 위하여 각 PCR 산물을 정제하여 pGEM-T vector (Promega)에 cloning하고 다량의 DNA를 순수 정제하여 염기서열을 분석하였다. 본 연구에서 합성한 16S rRNA를 사용하여 무균분리한 3개의 Microcystis aeruginosa strain에 대한 3차례의 염기서열 분석결과 M. aeruginosa AF139292의 16S rRNA 염기서열과 가장 높은 상동성 (\(99.5\sim 100\%\))을 보이는 것으로 나타났다.</p> <h1>요 약</h1> <p>남조류 Microcystis aeruginosa를 무균적으로 분리하기 위해 낙동강 물금지역의 수화를 멸균 증류수로 vortex 전처리를 하였으며, 세균제거 및 무균상태를 계속 유지하기 위하여 항생물질(ampicillin \( 150 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m} \ell \), neomycin \( 25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m \ell} \) )을 배지에 첨가하고, 독립 집락으로 형성시켜 오염 기회를 줄이기 위하여 \( 0.7 \% \) agarose로 고형화시킨 CB고체배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C}\), \(40 \mu \mathrm{mol}\) \( \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \) 광 조건으로 배양하였다. 그 결과 분리되어진 26개의 Microcystis aeruginosa colony 중 3개의 무균 균주만이 확보되었다. 3개의 무균균주를 16S rRNA prim-er를 이용하여 PCR 증폭한 결과 M. aeruginosa AF 139292와 \( 99.5 \)에서 \( 100 \% \)의 상동성을 가지는 것으로 나타났다.</p>