Flohe와 Otting의 방법에 의해 Superoxide dismutase(SOD) 활성도를 측정하고, Wolff의 방법에 의해 Hydrogen peroxide 함량을 측정하였다. SOD 활성도는 cytochrome C의 환원 속도를 50% 역제하는 효소의 양을 1 unit으로 표시하고, H2O2 함량은 560nm에서 분광광도계로 측정하였다.
<h2>Superoxide dismutase(SOD) 활성도 측정</h2> <p>Flohe와 Otting의 방법에 의하여 측정하였다. 시험관에 \( 50 \mathrm { mM } \) potassium phosphate 완충용액(containing \( 0.1 \) \( \mathrm { mM } \) EDTA, \( \mathrm { pH } = 7.8 \) ) \( 990 \mu \mathrm { L } \), 중류수 \( 17 \mu \mathrm { L } \), 시료 \( 17 \mu \mathrm { L } \), \( 5 \mu \mathrm { M } \) xanthine \( 17 \mu \mathrm { L } \) 를 넣은 후 \( 17 \mu \mathrm { L } \) 의 xanthine oxidase (시료를 가하지 않은 반응에서 흡광도 증가가 \( 550 \mathrm { ~nm } \) 에서 분당 \( 0.025 \) 이상이 되도록 조절한 후)를 가한 다음 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } , 550 \) \( \mathrm { nm } \) 에서 흡광도 증가속도를 측정하여 \( \mathrm { SOD } \) 활성도를 구하였 다. SOD 활성도는 위의 조건에서 cytochrome \( \mathrm { C } \) 의 환원 속 도를 \( 50 \% \) 역제하는 효소의 양을 1 unit로 표시하였다.</p> <h2>Hydrogen peroxide 함량 측정</h2> <p>Hydrogen peroxide 측정방법은 Wolff에 의한 방법을 사용하여 측정하였다. \( 100 \mu \mathrm { M } \) xylenol orange, \( 250 \mu \mathrm { M } \) ammonium ferrous sulfate, \( 100 \mathrm { mM } \) sorbitol, \( 25 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { SO } _ { 4 } \) 가 되도록 각각을 합한 용액을 FOX I 시약으로 조제하고, 시료 \( 50 \mu \mathrm { L } \) 에 FOX Ⅰ 시약 \( 950 \mu \mathrm { L } \) 를 혼합한 후, 실온에서 최소 \(30 \)분 이상 방치한 다음, 원심분리하여 응결된 물질을 제거하고, \( 560 \mathrm { ~nm } \) 에서 분광광도계로 측정하였으며, 과산화수소를 표준시약으로 하였다.</p>