실험동물 암컷 흰쥐는 신라대학교 실험실에서 번식시켜 사육하였고, 이는 평균체중에 따라 6마리씩, 실험음료에 따라 4군으로 나누었다. 당뇨병 유발은 streptozotocin을 복강 내 주사하여 수행되었다. 발효홍차는 추출한 홍차에 백성탕을 가한 뒤 tea fungus를 접종하여 제조하였다. 주 1회 같은 시간에 체중을 측정하고, 실험종료 후 채혈 및 개복을 통한 장기를 떼어내어 무게 측정 및 분석시료로 사용하였다. 실험결과는 평균과 표준편차로 나타내었고, SPSS를 이용한 ANOVA 유의성 검증을 통해 Duncan' multiple range test로 비교하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물 및 사육</h2><p>실험동물은 평균체중 \( 155.5 \pm 9.3 \mathrm{~g} \) 전후되는 Sprague-Dawley계 암컷 흰쥐로 신라대학교 실험실에서 번식시킨 쥐를 고형사료(삼양유지사료)로 실험기간 동안 사육하였다. 각 실험군은 평균체중이 비슷한 것끼리 한 군에 6마리씩 나누었고, 음수를 급여한 정상군과 당뇨대조군 및 당뇨발효홍차군은 음료수에 발효홍차를 \( 20 \% \)와 \( 40 \% \) 수준으로 급여한 군 등 4군으로 나누었고, 각 실험음료로 2주간 사육한 다음 당뇨를 유발시키고 계속 5주간 각 해당 실험음료로 사육하였다. 사육실의 온도는 \( 24 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도는 \( 50-60 \% \)를 항상 유지시켰으며, 명암은 12시간(8:00-20:00)을 주기로 자동 조절하였고, 실험음료와 식이는 자유 급식하였다.</p><p>당뇨병 유발은 \( 0.01 \mathrm{~M} \) citrate buffer \( (\mathrm{pH} ~4.5\))에 용해시킨 streptozotocin을 1회 \( (50 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \) body weight) 복강 내 주사하고 2일 후 2회 \( (40 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \) body weight) 복강 내 주사한 다음, 당뇨병의 유발 확인은 1 주일 후 미정맥에서 채혈 혈당을 측정하고 혈당량이 \( 300 \mathrm{~mg} \% \) 이상인 동물을 당뇨 쥐로 사용하였고, 대조군은 \( 0.01 \mathrm{~M} \) citrate buffer를 당뇨병 유발군과 같은 방법으로 주사하였다.</p><h2>발효홍차 음료 제조방법</h2><p>발효홍차 음료 제조는 끓인 증류수 1 liter에 홍차(태평양화학 tea bag 제품) \( 8 \mathrm{~g} \)를 넣고 10분간 추출한 후 실온에서 냉각시키고 발효병에 \( 200 \mathrm{~ml} \)씩 분주하고, 여기에 백설탕을 가하여 당도를 \( 10 \% \)로 조정한 액에 tea fungus를 \( 10 \mathrm{~g} \)씩 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10일간 배양하여 발효홍차를 제조하여 원심분리 후 상층액을 냉장 \( \left(4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 보관하여 시료로 사용하였다. 발효홍차의 급여 수준은 사람이 1일 보통 1 liter의 물을 마실 경우 한컵 정도 마시는 것을 기준으로 하여 쥐에게는 \( 20 \% \) 수준으로 정하였으며, 그 2배 섭취 시에 나타나는 영향을 아울러 검토하고자 \( 40 \% \) 수준으로 정하였다.</p><h2>시료 수집 및 분석</h2><p>매주 1회 같은 시간에 체중을 측정하였고, 채혈 및 장기 무게 측정은 실험종료 후 16시간 절식시킨 다음 ethyl ether로 마취하여 심장에서 채혈하고, 혈액은 실온에서 30분간 두었다가 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 20분간 원심 분리하여 혈청을 분리한 즉시 혈액분석에 사용하였다. 간, 신장, 췌장 및 비장은 복부를 개복한 다음 즉시 떼어 생리식염수로 씻고 여과지로 습기를 제거한 후 무게를 측정하고 분석시료로 사용하였다.</p><p>혈당 농도는 glucose oxidase 법으로 조제된 시약 kit(영연화학, Japan)로 측정하였고, 간의 지질은 Folch법으로 추출하여 지질측정용으로 사용하였다. 혈청과 간의 총 지질함량은 phospho-vanillin법, 중성지질, 인지질, 총 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 농도는 각각의 측정용 kit(Iatron, Japan)시약으로 측정하였다. LDL-콜레스테롤 농도는 Friedwald식 즉 total cholesterol-[HDL-cholesterol+ (triglyceride \( \div 5)] \)에 의하여 계산하였고, 동맥경화지수(ather-ogenic index)는 Haglund 등의 방법에 따라 계산하였다. 혈청의 총 단백질 농도는 Biuret법, 알부민 농도는 bromcresol green법, 헤모글로빈 농도는 cyanmethe-moglobin법, 헤마토크리트치는 고속원심침전에 의한 모세관법, glutamic oxaloacetic transaminase 및 glutamic pyruvic transaminase, alkaline phosphatase 활성은 각각의 측정용 kit(Iatron, Japan)시약으로 측정하였다.</p><p>본 연구의 실험결과는 평균치와 표준편차로 나타내었고, 통계처리는 SPSS를 이용하여 ANOVA로 유의성 검증을 하였고, 각 실험군간의 차이는 \( \mathrm{P}<0.05 \) 수준에서 Duncan' multiple range test로 상호 비교하였다.</p>