양파껍질 추줄물의 항 미생물 활성 검증을 위해 양파껍질 추출물을 제조하여 강원대학교 수의전염병학 실험실에 보관중이 균주를 분양받아 미생물 억제 효과와 항균활성 측정을 위해 실험을 하였다. 미생물 성장억제 효과를 검증하기 위해 집락형성단위를 측정하였는데 균주를 37도 에서 24시간 계대배양하고 이로 배양된 미생물을 TSA배지를 첨가하여 멸균하고 petri dish에 주입하고 배양하였다. 다음으로 항균활성 측정을 위해 paper disc를 주입하고 건조시킨 뒤 응고시킨 뒤 clear zone크기를 확인하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>양파껍질 추출물의 제조</h2><p>본 실험에 사용한 재료는 2011년 6월 국산 양파껍질을 구매하여 수세하고 3 일간 말린 후, 분쇄기로 분쇄하였다. 분쇄된 시료 \( 400 \mathrm{~g} \) 은 각각 \( 70 \% \) 와 \( 95 \% \) 의 발효. 주정 61 와 혼합하여 상온에서 24 시간 침지 후 추출물 용액을 진공 여과한 다음 얻어진 여액을 유기용매 분리형 rotary evaporator (EYELA, Japan)를 사용하여 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 농축한 후 냉장 \( \left(4^{\circ} \mathrm{C}\right) \) 보관하여 시료로 사용하였다.</p><h2>양파껍질 추출물의 항 미생물 활성 검증</h2><h3>공시균주</h3><p>본 실험에 사용된 균주는 강원대학교 수의전염병학 실험실에서 보관 중인 Escherichia Coli O157:H7 IVKB00014 KTCC13076, Salmonella Thphimurium KFRIO0251, Listeria man-ocytogenes K4-E22-L, Staphylococcus aureus KFRI240 균주를 분양받아 Violet Red Bile Agar (VRBA), Salmonella and Shigella Agar (SS Agar), Listeria Enrichment Broth (LEB), Staphylococcus medium 110 을 이용하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 계대배양 하였다.</p><h3>미생물 성장억제 효과</h3><p>성장억제력은 평판 계수법을 사용하여 측정하였다. TSB(Tryptone Soya Broth, Oxoid) 배지에는 \( 9.9 \mathrm{ml} \) 에 각 균주를 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 씩 첨가하여 2 차 배양하고, 상위에 제시된 추출과정으로 얻어진 각각의 추출물들은 TSA (Tryptone Soy Agar, Oxoid) 배지에 \( 0.2 \) 와 \( 0.4 \% \) 의 농도로 첨가하여 멸균하였다. 각각의 균주들은 희석액 \( (0.1 \% \) peptone \( \mathrm{G}) \) 을 사용하여 희석된 각각의 균주는 petri dish에 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 를 주입한 후, 멸균된 각각의 추출물에 첨가 배지 \( 15 \mathrm{ml} \) 를 주입하였다. Petri dish는 흔들어 내용물이 잘 혼합되도록 교반 후, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) incubator에서 24 시간 배양한 다음, 각 배지의 집락형성단위(colony forming unit, CFU)를 측정하였다.</p><h3>항균활성 측정</h3><p>항균활성 측정은 inhibition zone test method에 따라 측정하였다. 이들 균주의 생육을 위한 배지는 tryptone soy broth (Oxoid, England)와 tryptone soy agar (Oxoid, England)를 사용하였다. 각 추출물은 멸균된 paper disc (Ø \( 8 \mathrm{~mm} \), Advantec, Japan)에 각각 \( 4,6,8 \mathrm{mg} / \mathrm{disc} \) 로 주입한 후, \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 30분간 건조하였다. 멸균된 생육배지를 petri dish에 \( 15 \mathrm{ml} \) 씩 분주하여 응고시킨 후, 전 배양한 각 균주들은 응고된 배지에 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 씩 분주하여 무균적으로 도말한 다음, 사전에 추출물을 주입 및 건조시킨 paper disc를 배지표면에 가볍게 놓고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) incubator에서 24 시간 배양한 후, clear zone의 크기를 확인하였다.</p>