기존에 연구된 바에 의하면, NO의 공여체인 SNP를 연골세포에 처리하면 연골세포의 탈분화를 유도한다는 연구 내용이 보고된 바 있으며 본 연구에서는 토끼 관절 연골세포의 탈분화를 유도하는 시약으로 알려져 있는 RA를 SNP와 함께 처리하였을 때 연골세포의 분화에 미치근 효과 및 그 신호전달경로 구축에 관한 연구를 진행하였다.
<h2>Statistics</h2> <p>각 실험에서 사용한 대조군 및 시약처리군들 간의 유의 한 차이가 있는지 알아보기 위해 one-way ANOVA 프로그램을 사용하여 측정값의 차이 및 유의성 정도를 파악하였다. \( p<0.05 \) 인 경우 유의성이 있는 것으로 판단하였으며 본 실험의 결과는 네 차례의 실험 중 평균적인 결과를 사용하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>RA에 의한 연골세포의 탈분화 촉진</h2> <p>기존에 연구된 바에 의하면, NO의 공여체인 SNP를 연골세포에 처리하면 연골세포의 탈분화를 유도한다는 연구 내용이 보고된 바 있다. 따라서 본 연구에서는 토끼 관절 연골세포의 탈분화를 유도하는 시약으로 알려져 있는 RA를 SNP와 함께 처리하였을 때. 연골세포의 분화에 미치근 효과 및 그 신호전달경로 구축에 관한 연구를 진행하였다.</p> <p>우선 연골세포의 분화 정도를 나타내는 단백질로 알려져 있는 proteoglycan의 합성량을 측정하기 위하여 Alcian blue staining을 수행하였다(Fig. 1). RA는 시간 의존적으로 pro-teoglycan의 합성량을 감소시키는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 1A). 또한 RA에 의해 감소된 proteoglycan의 합성량은 SNP를 함께 처리한 군에서 시간 의존적으로 더욱 감소되는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 1B and C). 따라서, 탈분화와 관련 있는 신호전달경로를 알기 위하여 연골세포 분화의 표지 단백질로 알려져 있는 type Ⅱ collagen 및 Sox-9의 발현량을 Western blot analysis를 통해 확인 해 본 결과, RA를 단독으로 처리한 군 보다(Fig. 2A) SNP와 RA를 함께 처리한 군에서 (Fig. 2B) type Ⅱ collagen 및 Sox-9의 발현량이 더욱 감소하는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 2). RA를 처리 한 후 24 시간이 지난 연골세포의 경우 대조군 세포와 비교 했을 때 type Ⅱ collagen의 발현량이 약 2.5 배 감소 하였으며(Fig. 2A. right panel), Sox-9의 경우 약 5 배 정도 발현량이 감소하는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 2B. right panel). Western blot analysis을 수행하여 얻은 결과 값은 image J 프로그램을 통해 수치화하였다(Fig. 2A and B. right panels). 또한 세포 수준에서 좀 더 효과적으로 RA의 효과를 입증하기 위하여 면역 형광 염색법을 수행한 결과, RA를 단독으로 처리한 군보다 SNP를 함께 처리한 군에서 type Ⅱ collagen의 발현량이 현저히 감소하는 것을 확인 할 수 있었다(Fig. 2C). 이와 같은 결과는 RA가 SNP에 의해 유도되는 탈분화를 더욱 촉진시킨다는 것을 말해주는 결과라 할 수 있었다(Fig. 2).</p>