Caco-2 cells에 부착된 S. typhimurium KCTC 2054를 제거한 후, 생균수를 측정하였다. IDCC 9203, L. rhamnosus 투여군과 유산균을 투여하지 않은 대조군 등 총 3개의 실험군에서 장 정착성, salmonella 생육 억제능, 다른 장기로의 전이 여부를 평가하였다.
<h2>시험균 전처리에 따른 S. typhimurium의 부착능 평가</h2> <p>시험균 시료액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 Caco-2 monolayer가 형성된 각 wells에 넣고 60 분간 반응시켰다. 반응 후 상층액을 제거하고 PBS 로 2회 세척한 다음 S. typhimurium KCTC 2054 시료액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 가하여 90 분간 반응시켰다. 대조군으로는 시험균 시료액 대신 DMEM을 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 처리하고 동일하게 반응시켰다. 반응 후, 상층액을 제거하고 Caco-2 cells를 PBS로 2회 세척하여 부착되지 않은 S. typhimurium KCTC 2054를 제거하였다. Caco-2 cells에 부착된 S. typhimurium KCTC 2054의 생균수를 측정하기 위해 Tween \( 80(0.04 \% \), w/v \( ) 1 \) \( \mathrm { mL } \) 를 가하여 S. typhimurium KCTC 2054를 회수하였다. S.typhimurium KCTC 2054의 부착 저해율은 다음과 같이 계산하였다.</p> <caption>S. typhimurium 부착 저해율 \( \% \) \( =[1-( \) 시험군 처리시의 S. typhimurium 부착 균수/ DMEM 처리시의 S. typhimurium 부착 균수) \( ] \times 100 \)</caption> <h2>시험균과 S. typhimurium의 동시 부착(coincubation)에 따른 부착능 비교</h2> <p>시험균 시료액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 와 S. typhimurium KCTC 2054 시료액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 각각 혼합하고 Caco-2 monolayer가 형성된 각 wells에 혼합액 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 넣어 90 분간 반응시켰다. 대조군으로는 시험균 시료액 대신 DMEM을 \( 1 \mathrm { ~mL } \) 사용한 것으로 하였다. 반응 후 상층액을 제거하고 Caco-2 cells를 PBS로 2회 세척하여 부착되지 않은 시험균과 S.typhimurium KCTC 2054를 제거하였다. Tween 80( \(0.04 \% \), w/v) \( 1 \mathrm { ~mL } \) 를 가하여 Caco-2 cells에 부착된 S. typhimurium KCTC 2054를 회수하고 생균수를 측정하였다. S. typhimurium KCTC 2054 의 부착 저해율은 상기와 같이 계산하였다.</p> <h2>In vivo 장 정착성 및 salmonella 생육 억제능</h2> <p>IDCC 9203의 in vivo 장 정착성, salmonella 생육 억제능, 다른 장기로의 전이 여부를 평가하기 위하여 Plant 등[17]의 방법을 변형하여 동물 실험을 진행하였다. 실험동물은 4주령된 ICR 마우스를 시험군당 5 마리씩 사용하였다. 시험군은 IDCC 9203 투여군, L. rhamnosus 투여군, 유산균을 투여하지 않은 대조군 등 총 3 개군으로 하였다. 시험군으로 사용되는 유산균은 동결건조 분말 상태로 조제 \( \left (1 \times 10 ^ { 10 } \mathrm { CFU } / \mathrm { g } \right ) \)하여 사용하였다. 시험기간은 총 6 주로, 첫 0.5 주간은 실험 동물의 적응기로 하였으며 다음 1 주간은 ampicillin 투여 기간으로 매일 \( 0.4 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } \) 의 ampicillin을 음용수에 넣어 섭취케하였다. 다음 2주간은 유산균 투여기간으로 IDCC 9203과 L. rhamnosus 동결건조 분말을 음용수에 섞어 매일 섭취 \( ( \mathrm { g } \) \( 125 \mathrm { ~mL } \) /시험군)케 하였다. 대조군은 유산균 대신 동결 보호제인 \( 0.1 \% \) 탈지분유를 동결건조한 분말을 사용하였다. 유산균 투여를 종료한 후 2.5 주간은 일반적인 방법으로 사육하였다. 전 시험기간 동안 매주 2 회 각각의 시험군에서 분변을 회수하여 salmonellasㅇ lactobacilli의 균수를 각각 SS 평판배지와 LBS 평판배지로 측정하였다.</p>