멸균수에 현탁된 메주가루 시료를 LB, MEA, PDA, MEA-skim milk, PDA-skim milk 평판배지에 도말하여 2 5일간 배양한 결과 다양한 종류의 세균(352종)과 곰팡이(10종)가 관찰되었고, 항균 활성 범위가 넓고 활성도 강한 균주 1종을 최종 선별하여 CJ9라 명명하였다. CJ9는 그람염색 및 포자 형성 관찰 결과 그람 양성 단백질을 생산하는 균주로 분류되었고, 16S rRNA 염기서열 분석 결과 Bacillus subtilis로 동정되었다. 분리균주의 유당 이용능을 조사한 결과, B polyfermenticus와 B subtilis의 결과는 유사하며, B polyfermenticus는 유당을 분해하여 대사에 이용한다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>항균 활성 균주의 분리 및 동정</h2> <p>항균 활성 균주를 분리하기 위해 멸균수에 현탁된 메주가루 시료를 희석하여 LB, MEA, PDA, MEA\(-\)skim milk, PDA\(-\)skim milk 평판배지에 도말하여 2\(-\)5일간 배양한 후, 형성된 미생물의 집락을 관찰하였다. 관찰 결과 다양한 종류의 세균(352종)과 곰팡이(10종)들이 관찰되었다. 이중 동일한 평판 배지 내에서 형성된 곰팡이 집락들에 대해 생육저해활성을 나타내는 균주를 선별하였다(Fig. 1). 선별된 미생물(18종)은 곰팡이, 효모, 세균에 대해 direct method 및 paper disk method을 통하여 항진균 활성과 항세균 활성을 조사하였다. 이중 항균 활성 범위가 넓고 그 활성도 강한 균주 1종을 최종 선별하고(data not shown), 이를 CJ9라 명명하였다.</p> <p>분리균주 CJ9은 그람염색 및 포자 형성 관찰 결과 그람 양성의 간균이며 내생포자를 형성하였다. API 50 CHB system을 이용한 당 이용성 조사를 통한 균주 동정 결과 Bacillus subtilis와 \( 87 \% \) 의 상동성을 나타내었으며, B. subtilis ATCC 6633이 유당을 분해하지 못한 결과와 달리 분리균주 CJ9은 유당을 분해하여 대사에 이용하였다(Table 1). 최종 동정을 위하여 16S rRNA gene의 염기서열을 결정하여(1,520 bp) 이를 GenBank에 등록된 표준균주(type strain)나 참고균주(reference strain)의 16S rRNA gene 염기 서열들과 상동성을 비교하였다. 그 결과 분리균주 CJ은 B. polyfermenticus와 \( 99.9 \% \) 의 상동성을 나타내어 최종적으로B. polyfermenticus로 동정되었으며 이를 B. polyfermenticus CJ9라 명명하였고, 그 16S rRNA gene의 염기서열은 GenBank(FJ436015)에 등록하였다.</p> <h2>분리 균주의 유당 이용능</h2> <p>분리균주의 유당 이용능을 조사하기 위하여 유당을 첨가 하지 않은 TSB 액체 배지와 \( 1 \% \), \( 2 \% \) 유당을 각각 첨가한 TSB 배지에서 B. subtilis ATCC 6633 균주와 B. polyfer-menticus CJ9의 생육도를 \( 600 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도로 측정하였다. B. subtilis ATCC 6633은 유당의 첨가 여부와 관계없이 비슷한 생육도를 나타내었으나, B polyfermenticus CJ9은 \( 1 \% \) 와 \( 2 \% \) 유당을 첨가한 TSB 배지에서 유당을 첨가하지 않은 TSB 배지보다 더 높은 생육도를 각각 나타내었다(Fig. 2). B. polyfermenticus CJ9에 유당을 \( 1 \% \) 와 \( 2 \% \) 첨가한 TSB 배 지에서 48시간 생육시 유당을 첨가하지 않은 TSB 배지보다 횔씬 높은 생육도(A600\(: 0 \% \) \(-\)7.37, \( 1 \% \) \(-\)11.22, \( 2 \% \) \(-\)9.74)를 나타내었다(Fig. 2). 이러한 결과로부터 B. polyfermenticus CJ9은 유당을 분해하여 대사에 이용함을 알 수 있었으며, 이와 같은 결과는 Table 1의 API 50 CHB system을 이용한 당 이용성 조사 결과와 함께 기존 보고에서 B. polyfermenticus는 B. subtilis와 상당히 유사한 것으로 인정되고 있으나, B. subtilis와 다른 점은 유당을 분해하는 능력이 있다는 보고와 일치하는 결과이다.</p>