산화된 상태의 chronophin의 경우 linker에 연결된 core 도메인의 \( \alpha 4 \) helix의 C91과 cap 도메인의 \( \alpha 8 \) helix의 C211간에 disulfide bond가 있어 두 도메인사이의 움직임이 억제되었으나 환원된 상태의 chronophin의 구조에서는 두 개의 cysteine, C91와 C221사이에는 disulfide bond가 없는 상태이다. 전자밀도지도를 보면 두 cys-teine 사이의 electron density가 산화된 상태의 chronophin에서는 연결되어 있으나 환원된 상태의 chronophin에서는 끊어져 있는데, 이는 두 cysteine사이에 disulfide bond 결합이 없는 것을 의미하는 한편 Cap 도메인과 core 도메인 부분 모두에서 환원된 구조와 산화된 구조는 거의 동일하게 나타났으며 두 도메인의 상태적인 위치에도 변화가 없는 것으로 나타났다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <p>환원된 상태의 chronophin의 결정체는 공간그룹 \( \mathrm{P}_{3}{ }_{3} 2_{1} 2 \)에 속하며 단위체의 크기는 \( 54.4 \mathring{A} \times 54.4 \mathring{A} \times 213.4 \mathring{A} \) 이었다. 하나의 비대칭 단위에 한 개의 chronophin 분자가 들어 있는 크기로 Matthew's coefficient \( \left(\mathrm{V}_{\mathrm{m}}\right) \)은 \( 2.48 \mathring{A}^{3} \mathrm{Da}^{-1} \)이고 sol-vent content는 \( 50 \% \)이다. 최종적인 chronophin의 모델은 한 개의 \( \mathrm{Mg} \) 이온이 활성부위에 결합된 형태로 \( 2.6 \mathring{A} \) 해상도에 규명되었다. 이 모델의 \( \mathrm{R}_{\text {work }} \)와 \( \mathrm{R}_{\text {free }} \)값은 각각 0.231와 0.279이다. 전체적인 형태는 이전에 알려진 PLPP의 구조와 동일하게 두 개의 도메인, core 도메인과 cap 도메인으로 구성되어 있다. Core 도메인은 아미노산 M1에서 S87까지의 부위와 G212에서 D296까지의 부위로 구성된 \( \alpha / \beta \) 구조의 도메인이며 7개의 helix와 9개의 strand로 이루어져 있다. Core 도메인의 활성부위에서 Mg이온이 발견되었는데 Mg이온은 세 개의 아미노산 잔기, D25와 D27 그리고 D238에 의해 결합되어 있으며 세 개의 물분자와 더불어 배위결합을 하고 있다. 4개의 helix와 7개의 strand로 구성되어 있는 cap도메인은 S88에서 V211까지이며 \( \alpha / \beta \) 구조의 도메인이다. Cap 도메인( \( \alpha 4 \) helix에서 \( \beta 13 \) strand)은 core 도메인의 \( \beta 6 \) strand와 \( \alpha 8 \) helix사이에 삽입된 형태이며 core 도메인의 활성부위를 덮고 있다. 두 도메인을 연결하는 연결부위는 S87-S88과 V211-G212로 근접한 두 개의 짧은 linker로 이루어져 있다. Linker에 연결된 두 helix, core 도메인의 \( \alpha 8 \) helix와 cap 도메인의 \( \alpha 4 \) helix는 경첩의 역할을 하는 linker를 기준으로 활성부위의 반대쪽에 위치한다.</p> <p>산화된 상태의 chronophin의 경우 linker에 연결된 core 도메인의 \( \alpha 4 \) helix의 C91과 cap 도메인의 \( \alpha 8 \) helix의 C211간에 disulfide bond가 있어 두 도메인사이의 움직임이 억제되었다(PDB entry 2CFR). 그러나 환원된 상태의 chronophin의 구조에서는 두 개의 cysteine, C91와 C221사이에는 disulfide bond가 없는 상태이다. 산화된 상태의 PLPP의 구조의 경우 두 유황원자사이의 거리가 SeMet을 함유한 구조(PDB entry 2CFR)에서는 \( 2.04 \mathring{A} \) 이며 \( \mathrm{Mg} \) 이온이 결합된 native 구조(PDB entry 2CFS)에서는 \( 2.07 \mathring{A} \) 그리고 Ca이온과 기질인 PLP가 결합된 구조(PDB entry 2CFT)에서는 \( 2.06 \mathring{A} \)으로 측정된다. 환원된 chronophin의 구조에서는 두 cysteine의 유황원자사이의 거리가 \( 3.01 \mathring{A} \)으로 이는 산화된 상태에서의 PLPP 구조에서 보여주는 공유결합이 있을 때의 두 원자의 거리보다 멀다. 또한 전자밀도지도를 보면 두 cys-teine 사이의 electron density가 산화된 상태의 chronophin에서는 연결되어 있으나 환원된 상태의 chronophin에서는 끊어져 있음을 볼 수 있다. 이는 두 cysteine사이에 disulfide bond 결합이 없는 것을 의미한다. Disulfide bond가 없는 환원된 상태에서의 chronophin의 구조가 산화된 상태의 구조(PDB entry 2CFR)와 다른 지 비교하기 위해 두 구조를 포개 보았다. Cap 도메인과 core 도메인 부분 모두에서 환원된 구조와 산화된 구조는 거의 동일하게 나타났으며 두 도메인의 상태적인 위치에도 변화가 없는 것으로 나타났다.</p>