마늘의 치료 효과를 검증하기 위해 EDTA, DPEN, DMSA는 정상생리 식염수에 희석하여 실험에 사용하였으며 BAL은 식용유에 희석하였다. 흰쥐에게 매일 \( \mathrm{Pb} \) acetate trihydrate \( (2.5 \mathrm{~mg} \mathrm{Pb} / \mathrm{kg} \))를 5일간 복강내로 투여하고, 혈중 납농도를 확인한다. 이후 킬레이트제를 투여하는 동안 뇨를 모으며 혈액을 채취한다. 마늘의 방어 효과를 보기 위해 납에 의한 감소 효과를 확인한다. 이후 혈액에서늰 납을 측정하여 방어 효능을 알아본다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>체중\(180\)-\(200\mathrm{~g}\)인 수컷 Sprague-Dawley 흰쥐를 1주일간 사육실에서 적응 시킨 후 실험에 이용하였다.</p> <p>\( \mathrm{Pb} \) acetate trihydrate (ACS reagent, \( 99.9 \% \) purity, Sigma Chemical Co., USA)는 \( 2.5 \mathrm{~mg} \mathrm{~Pb} / \mathrm{ml} \)의 농도가 되게 증류수에 녹여 사용하였다. 킬레이트제로 사용된 EDTA, DPEN, BAL은 Aldrich Chemical Company사(USA)에서, DMSA는 Sigma Chemical Co. (USA)에서 구입하여 사용하였다. 마늘(Allium Sativum L.)은 김해산으로서 재래시장에서 구입하여 실험에 사용하였으며, 이외의 모든 시약은 특급이상의 것을 사용하였다.</p> <p>실험에 사용된 EDTA, DPEN, DMSA는 정상생리 식염수에 희석하였으며, BAL은 식용유에 희석하여 사용하였다. 마늘은 껍질을 벗겨 파쇄후 \( 3,000 \mathrm{~rpm} \)에서 10분간 원심 분리하여 상층액을 사용하였다.</p> <h2>마늘의 치료 효과</h2> <p>실험에 사용된 흰쥐에게 매일 오전 10시에 \( \mathrm{Pb} \) acetate trihydrate \( (2.5 \mathrm{~mg} \mathrm{Pb} / \mathrm{kg} \))를 5일간 복강내로 투여하였는데, 이는 예비 실험에서 혈중 납농도가 \(70.8 \) \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{dl} \)에 이르는 농도로 확인되었다. 5일째 투여 후 초산으로 세척한 플라스틱으로 된 metabolic cage에 한 마리씩 두고서 익일부터 2일간 매일 오전 10시에 정상생리 식염수 \( (1.0 \mathrm{~ml} / \mathrm{kg})\)를 복강내로 투여하였고, 24시간 뇨를 2일간 모았다.</p> <p>그 후 EDTA 투여군, DPEN 투여군, DMSA 투여군, BAL 투여군, 마늘 저용량( \(250 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg}) \) 투여군, 마늘 고용량(500 \( \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \)) 투여군, 식염수 투여군(비교군)의 7개 실험군으로 나뉘어져서 각 군에는 8마리씩의 흰쥐가 할당되었다. EDTA, DPEN, DMSA, BAL의 투여농도는 \( 30 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \)로 하였으며, EDTA, BAL은 복강내로, DPEN과 DMSA는 gavage tube를 통하여 식도로 투여하였다. 마늘은 1일 성인(체중 60\( \mathrm{kg} \))이 평균 \( 7.32 \mathrm{~g} \)을 먹는다는 기존의 연구결과에 따라, 흰쥐의 체중비로 환산하여 약 2배, 4배에 해당하는 250\( \mathrm{~mg} / \mathrm{kg}, 500 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \) 를 투여량으로 정하여서 역시 gavage tube를 통하여 식도로 투여하였다. 각 군에 대하여 매일 오전 10시에 1회씩 4일간 투여하였으며, 비교군은 식염수 \((1.0\mathrm{~ml}/\mathrm{kg}\))를 복강내로 주입하였다.</p> <p>킬레이트제를 투여하는 동안 매일 24시간 뇨를 모았으며, 마지막 채뇨후 에테르 마취하에 흰쥐의 하대정맥에서 약 \( 3 \mathrm{~ml} \) 정도의 혈액을 헤파린 처리 튜브에 채취하였으며, 간장, 신장, 뇌, 대퇴골을 적출하여 포르말런 용기에 담아서 분석시까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에 냉장 보관하였다.</p> <h2>마늘의 방어 효과</h2> <p>납과 킬레이트제를 동시 투여시에 납에 의한 영향을 감소시킬 수 있는 지를 확인하기 위하여 DPEN, DMSA와 마늘 \( 250 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg}, 500 \mathrm{~mg} / \mathrm{kg} \)를 \( \mathrm{Pb} \) acetate \( (2.5 \mathrm{~mg} \mathrm{Pb} / \mathrm{kg} \) )와 동시에 11일간 투여하였다. 비교군으로서 \( \mathrm{Pb} \) acetate만 동일한 방법으로 투여한 후 상기와 같이 혈액과 조직을 적출하였다. 이때 각 군에는 역시 8마리씩의 흰쥐를 할당하였다.</p> <h2>시료의 중금속 분석</h2> <p>혈액과 다른 조직에 대헤서는 납에 대해서만 측정을 하였으며, 뇨는 필수금속의 배설 여부를 알아보기 위하여 납을 포함한 \( \mathrm{Ca}, \mathrm{Fe}, \mathrm{Mg}, \mathrm{Zn}, \mathrm{Mn}, \mathrm{Cu} \)에 대하여서 분석을 하여 creatinine으로 보정한 값으로 비교하였다. creatinine의 측정은 Jaffe rate법을 이용하여 Synchron CS3 (Beckman, USA)로 측정하였다.</p> <p>시료의 전처리는 U. S. EPA 3015 method에 의한 질산 분해법을 이용하였다. 소변과 혈액은 각각 \( 1 \mathrm{~ml} \) 씩 취하였고, 간장, 신장, 뇌, 대퇴골은 약 \( 1 \mathrm{g} \) 정도를 취하여 무게를 단 후에 \( 60 \% \mathrm{~HNO}_{3} \) (특급시약 Matsunoen Chemical, Osaka, Japan) \( 5 \mathrm{ml} \)를 넣고 Microwave digestion system (MDS-2100 시료전처리기, CEM)을 사용하여 \( 70 \mathrm{psi} \) 까지 11분간 가압한 후 9분간 유지시켜 분해하였다. 전처리를 끝낸 시료들은 3차 증류수로 최종부피를 \( 10 \mathrm{ml} \) 로 조정하였다.</p> <p>시료의 중금속 분석은 Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometer (ICP-OES, Optima 3100 XL, Perkin Elmer, USA)로 측정하였다. 본 연구에서 기기의 분석 조건은 Table 1과 같다.</p> <h2>적출 조직의 병리조직학적 검색</h2> <p>모든 조직은 \( 10 \%\) 중성 포르말린에 고정하고 파라핀에 포매하여 \( 3\sim5 \mu \mathrm{m} \)의 두께로 박절하여 hematoxylin-eosin 염색하여 광학현미경 하에서 200배 또는 400배의 배율로 관찰하였다.</p> <h2>자료의 분석</h2> <p>자료 분석은 SPSS (Ver 10.0, SPSS Inc, USA)를 사용하여 통계적 유의성을 검정하였다. 뇨중 납 배설량과 필수 금속 배설량은 반복측정 general linear model로서 분석하였고, 조직내 납 함량의 비교는 분산분석으로 유의성을 검정하였고, Scheffe의 방법으로 다충 비교하였으며, 통계적 유의수준은 \( \mathrm{p}<0.05 \)로 하였다.</p>