각 분획물을 \(100 \mathrm{mg/mL}\)의 농도로 주사액용액을 만들어 tyrosinase 저해 활성을 조사한 결과, \(\mathrm{CH_2Cl_2}\) 분획과 \(EtOAc\) 분획이 저해 활성을 나타내었다. 이에 따라 활성이 뛰어난 \(EtOAc\) 가용분획으로부터 성분을 분리하기로 결정하였다. lachrymal-jobi var. ma-yuen)의 뿌리, 줄기, 잎, 껍질, 미강에 대해 각각 \(20 \mathrm{\mu g}\)의 시료를 \(70\%\) 에탄올로 추출하여 여과, 농축, 동결건조한 후 tyrosinase 억제 활성을 측정하였다. 그 결과, 활성이 우수한 율무 뿌리 (\(1.9 \mathrm{kg}\))를 \(70\%\) 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물 (\(333 \mathrm{g}\))을 얻었다.
<h2>추출 및 분리</h2> <p>건조 율무 (C. lachrymal-jobi var. ma-yuen) 뿌리, 줄기, 잎, 껍질, 미강에 대하여 각각 \( 20 \mathrm { ~g } \) 의 시료에 \( 70 \% \) 에탄올로 추출하여 여과, 농축, 동결건조 후 tyrosinase 억제 활성을 측정하였으며, 활성이 우수한 율무 뿌리 \( (1.9 \mathrm { ~kg } ) \) 을 \( 70 \% \) 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물 \( (333 \mathrm { ~g } ) \) 을 얻었다. 이를 증류수 현탁 후 \( n \) -hexane, \( \mathrm { CH } _ { 2 } \mathrm { Cl } _ { 2 } \), \( \mathrm { EtOAc } \), 수포화 \( \mathrm { BuOH } \) 로 용매분획을 반복 실시하였으며, 각각 \( n \)-hexane 분획 \( (14.3 \mathrm { ~g } ), \mathrm { CH } _ { 2 } \mathrm { Cl } _ { 2 } \) 분획 \( (5.1 \mathrm { ~g } ) \), \( \mathrm { EtOAc } \) 분획 \( (5.5 \mathrm { ~g } ) \), 수포화 \( \mathrm { BuOH } \) 분획 \( (28.9 \mathrm { ~g } ) \) 그리고 물 분획 \( (280 \mathrm { ~g } ) \) 을 얻었다. 각 분획물을 \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 의 농도로 stock solution을 제조하여 tyrosinase 저해 활성을 검색한 결과 \( \mathrm { CH } _ { 2 } \mathrm { Cl } _ { 2 } \) 분획과 \( \mathrm { EtOAc } \) 분획이 저해활성을 나타내었으며, 이에 활성이 우수한 \( \mathrm { EtOAc } \) 가용분획으로부터 성분분리를 시도하였다. \( \mathrm { EtOAc } \) 가용분획 \( (5 \mathrm { ~g } ) \) 에 대하여 증류수- \( \mathrm { MeOH } \) 혼합용매를 이동상으로 Diaion HP-20 레진을 이용한 컬럼크로마토그래피를 수행하여 7개의 소분획(G54-5-1 7)을 얻었다. 소분획 G54-5-3에 대하여 acetonitrile과 증류수를 이동상으로 역상 컬럼을 이용한 MPLC (RediSep \( ^ {\circledR } \) Rf \( 130 \mathrm { ~g } \) C18 Reverse Phase, \( 75 \mathrm { ~mL } / \mathrm { min } , 5 \) 에서 \( 50 \% \) acetonitrile, \( 100 \mathrm { ~min } ) \) 를 수행하여 8개의 분획(G54-8-1 8)으로 나누었다. 반복된 preparative HPLC (column: YMC-Pack ODS-A, \( 5 \mu \mathrm { m } , 250 \times 10 \mathrm { ~mm } \) I.D., \( 12 \mathrm { ~mL } / \mathrm { min } \), 증류수-acetonitrile, \( 95: 5 \) 에서 \( 7:3 \), \( 50 \mathrm { ~min } \) )를 수행하여 소분획 G5481로부터 화합물 3 (2.4 mg)과 5 (1.5 mg)를 얻었으며, G54-82로부터 화합물 1 \( (4.6 \mathrm { mg } ) \), 2 \((3.5 \mathrm { mg } ) \) 및 5 \((4.3 \mathrm { mg } ) \) 를 각각 분리 정제하였다. 화합물 6 \(7.5 \mathrm { mg } ) \) 은 G 54-8-5에 대하여 preparative HPLC (column: YMC-Pack ODS-A, \( 5 \mu \mathrm { m } , 250 \times 10 \mathrm { ~mm } \) I.D., \( 12 \mathrm { ~mL } / \) min, 증류수-acetonitrile, 90:10에서 50:50, \( 30 \mathrm { ~min } \) )를 수행하여 분리하였다.</p>