본 연구에서는 EGR-1 단백질이 암세포 활성 저하에 어떠한 영향을 미치는지 조사하였다. EGR-1의 발현을 저해한 후 apigenin의 암세포활성 저해효과를 비교한 결과, EGR-1이 저해된 세포에서는 세포활성 저해가 상당히 완화되었다는 것을 알 수 있었다. 또한, HCT-116 세포에 대해서는 apigenin이 농도에 따라 세포활성을 억제함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해, apigenin에 의한 항암세포 세포활성 억제는 상당부분 EGR-1에 의해 매개되는 것으로 파악되었다.
<h2>Apigenin에 의한 상피종양세포의 세포활성저하에 있어 EGR-1의 역활규명</h2> <p>Apigenin에 의하여 상피성 종양에 대한 세포활성의 효과를 MTS assay를 통해 실시하였다. 특히 HCT-116 세포에 대하여 농도 의존적으로 세포활성이 억제되었다. Apigenin의 대장암세포에 대한 독성효과는 다양한 논문을 통해서 증명 되어 지고 있다. 본 연구는 이런 암세포활성 저하에 있어서의 EGR-1 단백질의 관련성을 조사하였다. 특히 EGR-1 small interference RNA를 이용하여 EGR-1을 발현을 저해 시킨 후 apigenin에 의한 암세포활성 저해효과를 비교하였을 때, EGR-1가 저해된 세포주에서의 세포활성저해가 훨씬 완화되었다. 따라서 apigenin에 의한 세포활성저해는 상당부분 EGR-1에 의해 매개된다는 것을 알 수 있다. 이런 EGR-1 매개의 세포독성효과의 연결단백질을 분석하는 중 EGR-1에 의해 조절되는 세포증식억제 및 pro-apoptotic의 NAG-1 단백질이 24시간에서 현저하게 증가 되었으며 48시간에 현저히 증가되는 현상을 보였다. 따라서 이런 지속적인 NAG-1의 발현은 현저한 종양세포활성의 저하에 관여 될 수 있다는 것을 암시한다. Baek 등에 의하면 NAG-1에 의하여 대장암세포의 억제효과가 growth arrest와 pro-apoptosis에 의하여 매개되며 특히 troglitazone이나 NSAID의 경우 EGR-1에 의한 NAG-1 유전자의 유도가 직접적인 대장암세포활성억제의 주요 인자라는 것이 세포실험을 통하여 밝혀졌다. 하지만 선행의 연구들에 있어서 EGR-1이 직접적으로 NAG-1을 유도하는 것은 밝혀져 있지 않고 대부분 초기에 일시적으로 유도되는데 비하여 apigenin의 경우 9-12시간의 비교적 후기의 발현이며 이는 24-48시간에 나타나는 NAG-1발현의 시간대에 더욱 직접적으로 영향을 미칠 가능성이 클 것으로 사료 된다. 따라서 향후 동물실험을 통하여 유전자 발현을 분석하고 EGR-1이 직접적으로 대장암의 진행과 연관되는 것을 밝히는 것이 요구되어 진다.</p> <h1>요 약</h1> <p>Tumor suppressor 유전자로알려진 early growth response gene 1 (EGR-1)에 있어 항산화 천연물인 apigenin과 그대사물인 isovitexin에 의한 장관 상피성 종양세포에 대하여 항종양 역할을 규명하였다. Apigenin 과 isovitexin은 대장암세포에서의 EGR-1 단백질의 발현을 9-12시간의 노출에 의해 농도 의존적으로 증가하였다. 또한 신호전달측면에서 이런 apigenin에 의한 EGR-1 유전자의 유도가 U0126 화합물에 의해 완벽하게 저해 받는 것으로 보아 ERK1/2 MAP kinase pathway의 이 신호전달계에서의 관여를 보여주었다. 본 연구에서 apigenin에 의해 농도 의존적으로 대장암세포의 세포활성의 저해를 MTT assay를 통해 보였고, 또한 EGR-1 siRNA를 transfection한 세포의 경우 이런 apigenin에 의한 세포활성의 저해효과를 완화하였다. 따라서 apigenin에 의한 항종암세포 세포활성 억제에 있어 EGR-1의 중요성을 보여준다. 이런 EGR-1에 의해 유도되는 유전자중 대표적으로 NAG-1 유전자의 경우 apigenin과 isovitexin에 의해 24-48시간에 발현이 증가하였다. 결론적으로 암세포 증식억제활성이 있고 apoptosis 유도효과가 있는 NAG-1의 유도에 의해 대장암 세포의 세포활성이 억제된 것으로 의미되고 향후 apigenin 유도의 NAG-1유전자에 의한 암세포증식의 억제기전에 대한 명확한 연구가 요구된다.</p>