건조 상태의 계피를 20 30 mesh의 분말로 분쇄하여 밀봉하여 저온, 암실에서 보관하고 Waters AD-RC 08를 사용하여 35\(^\circ \mathrm{C}\), 300 bar에서 120분 추출하여 초임계 추출물을 제조하였다. 또한 계피 박과 건계피에 무게의 10 배의 메탄올을 가하여 24 시간 동안 정치 배양하여 3회 추출하여 초임계 박 메탄올 추출물 및 계피 메탄올 추출물을 제조하였다. 추출 수율은 추출 전의 시료 건조물 중량 대비 각 추출 방법에 의해 추출된 용액을 감압 농축한 추출물의 무게에 대한 백분율로 계산하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료</h2> <p>본 실험에서 사용한 계피는 중국산 계피를 대구시 약령시장에서 건조 상태의 것을 구입하여 20 30 mesh의 분말로 분쇄하여 밀봉하여 저온, 암실에서 보관하며 추출 및 실험에 사용하였다.</p> <h2>계피 초임계 추출물(SFC)의 제조</h2> <p>초임계 추출 장치는 Waters AD-RC 08 (Waters CO., Milford, MA, USA)를 사용하였다. 분말화된 건계피를 추출 용기에 \( 300 \mathrm { ~g } \) 을 넣어 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) flow rate: co-solvent의 flow rate를 \( 47.5 \mathrm { ~g } / \mathrm { min } : 2.5 \mathrm { ~g } / \mathrm { min } \) 으로 하여 total flow rate \( \left ( \mathrm { CO } _ { 2 } \right . \) flow rate + co-solvent flow rate)를 \( 50 \mathrm { ~g } / \mathrm { min } \) 의 속도로 흘려주었고 co-solvent로는 HPLC급 ethyl alcohol (JT Baker Co., Phillipsburg, NJ, USA)를 사용하였다. 추출 온도는 \( 35 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 압력 \( 300 \mathrm { bar } \) 조건에서 30 분씩 4 회 반복하여 총 120분 추출하였다.</p> <h2>초임계 박 메탄올 추출물(SFM), 계피 메탄올 추출물(ME) 제조 및 추출수율</h2> <p>초임계 추출을 하고 남은 부산물인 계피 박과 건계피를 무게의 10 배 (w/v)의 메탄올 \( (80 \%) \) 을 가하여 24 시간 동안 정치 배양하여 총 3회 추출하였다. 추출액은 여과지(whatman No.3)를 사용하여 여과하고 상등액은 rotary vacuum evaporator(UNI TRAP UT-1000, Eyela, Tokyo, Japan)로 \( 55 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 농축하여 사용하여 동결하여 사용하였다.</p> <p>추출 수율은 추출 조건에 따라 추출 전 시료 건조물의 중량에 대비 각 추출 방법에 의해 생성된 추출 용액을 회전진공농축기로 감압 농축하여 나온 추출물 무게에 대한 백분율로 나타내었다.</p> <p>추출수율 \( ( \%, \mathrm { ~W } / \mathrm { W } ) = \) 추출물건조무게 / 시료건조무 게 \( \times 100 \)</p> <h2>GC/MS를 이용한 성분 분석</h2> <p>실험에 사용한 GC/MS system은 HP 190915-433 model (Paloalto, California, USA)이며 column은 HP-5MS \( (30 \mathrm { ~m } \times \) \( 0.25 \mathrm { ~mm } , 0.25 \mu \mathrm { M } ) \) 를 사용하였고 Detector로는 \( \mathrm { MS } \) 를 이용하였다. ESI mode에서 \( 70 \mathrm { eV } \) 의 에너지로 이온화하였으며 TIC의 SCAN mode에서 검출이온 질량범위 35 350으로 설정하여 각 질량스펙트럼 중에서 가장 강도가 강한 main fragment ion을 중심으로 라이브러리를 검색하여 물질 확인 분석을 하였다. Injector temperature는 \( 260 ^ {\circ } \mathrm { C } \), detector temperature는 28 \( 0 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 이며 carrier gas는 helium을 사용하여 flow rate를 1 \( \mathrm { ml } / \mathrm { min } \) 으로 사용하였다. Oven temperature는 최초 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5분 동안 유지한 후 \( 4 { } ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \) 속도로 \( 200 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 상승시킨 후, \( 200 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \) 속도로 \( 280 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 온도를 상승시킨 후 20분간 유지하였다. 계피 초임계 추출물, 박 추출물, 메탄올 추출물은 에탄올에 희석한 후 \( 0.45 \mu \mathrm { M } \) membrane filter로 여과하여 분석 시료로 사용하였다. 라이브러리를 통해 검색된 main peak인 계피의 주요 성분인 cinamaldehyde는 50, 500, \( 1,000 \mathrm { ppm } \) 의 농도로 제조한 후 정량 분석에 이용하였다.</p>