소당탕 구성 한약재인 황련과 산약을 사용하여 실험동물을 이용하여 실험을 하였다. 실험에 사용한 기기는 회전식 감압기와 형광현미경으로 당뇨유발 실험인 SDT는 한약재를 0.2: 10.2:1 의 비율로 구성해서 2겹 거즈와 와트만 여과지를 사용해 농축하고 동결건조하였다. 또한 STZ실험에서는 혈당농도가 일정이상되는 동물들만 선별하여 실험에 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>본 실험에 사용된 소당탕(modified So-Dang-Tang; SDT)의 구성 한약재인 황련과 산약은 (주)광명당제약(울산, 한국)으로부터 구입하였으며, 동국대학교 한의과대학 본초학교실에서 검정하고 정선하여 사용하였다. 실험동물은 평균 \( 200 \mathrm{~g}, 8 \) 주령의 Sprague-Dawley 계열의 수컷 흰쥐를 코아텍(경기도, 한국)으로부터 구입하였으며, 전 실험 기간 동안 일반 실험동물용 고형사료(삼양유지사료, 서울, 한국)와 물을 충분히 공급하고, 실내온도 \( 22 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \), 습도는 \( 55 \pm 5 \% \), 명암은 12시간(Day light \( 06: 00 \sim 18: 00 \) )을 주기로 실험종료 시까지 일정한 사육조건을 유지시켰다.</p> <p>실험에 사용된 시약으로 streptozotocin (STZ), N-tri-tyl-1,3-propanediamine acetate, sulfanilamide, nitro blue tet-razolium salt (NBT), phenazine methosulfate (PMS), sulpha-nilic acid, thiobarbituric acid, trichloroacetic acid, N-(1-Naphthyl)ethylene diamine dihydrochloride, guanidine hy-drochloride, ethylenediamine tetraacetic acid, 2-vinyl Pyridine, 5,5'-dithiobis-(2-nitro benzoic acid) (DTNB)는 Sigma Chemicals Co. (St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였으며, superoxide dismutase, catalase, thiobarbituric acid re-active substances (TBARS)의 assay kits는 Cayman Chemical Co. (Ann Arbor, MG, USA), GLU-Lq Reagent는 아산제약(Asan Pharmaceutical Co., Seoul, South Korea), total gluta-thione quantification kit는 EMD4 Biosciences (Gibbstown, NJ, USA) 로부터 구입하여 사용하였다. 실험에 사용된 기기로는 회전식 감압기(Eyela, Japan), thermal cycler (BioRadLabolatories Inc.), UV-VIS spectrophotometer (Shimazu,Japan), 형광현미경(Olympus Imaging America Inc., Center Valley, PA, USA) 등이다.</p> <h2>약물제조</h2> <p>SDT는 황련 \( (20 \mathrm{~g}) \)과 산약 \( (100 \mathrm{~g}) \)을 \( 0.2: 1 \) 의 비율로 구성하여 21 정제수와 함께 추출기에서 5시간 동안 전탕하였다. 이를 2겹 거즈와 와트만 여과지(Whatman paper No. 1)로 흡입여과 한 후 회전식증발기로 감압농축하고 동결건조 하였다. 이때 SDT의 총 회수양은 \( 22.36 \mathrm{~g} \)이었으며, 수득율은 \( 18.63 \% \)였다.</p> <h2>당뇨유발 및 실험군 설정</h2> <p>STZ를 \( 0.01 \mathrm{M} \) citrate buffer \( (\mathrm{pH} 4.5 \) )에 녹여서 \( 45 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \) 용량으로 체중 \( 100 \mathrm{g} \) 당 \( 0.1 \mathrm{ml} \)을 단희 복강투여 하였다. 당뇨유발 정도를 확인하기 위해 STZ 주사 72 시간 후 12 시간 절식시킨 다음 꼬리로부터 혈액을 채집하여 혈당 농도가 300 \( \mathrm{mg} / \mathrm{dl} \) 이상 되는 동물들만 선별하여 실험에 사용하였다.</p> <p>혈당수치의 평균값을 맞추어 정상 대조군(saline-control\( \mathrm{n}=6 \) ), STZ 대조군(STZ control; \( \mathrm{n}=6) \), SDT 투여군(STZ+SDT \( 200 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \mathrm{~BW;} \mathrm{n}=6 \) ) 및 대조약물인 glibenclamide 투여군(G1; glibenclamide \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} ; \mathrm{n}=6 \) )으로 실험군을 설정하였고, 약물의 투여는 하루에 한번 28 일 동안 경구 투여하였으며, 정상대조군과 STZ 대조군은 체중 \( 100 \mathrm{~g} \) 당 \( 0.1 \mathrm{ml} \) 의 생리식염수를 동일한 방법으로 투여하였다.</p>