ITS 유전자 단편을 이용한 유연관계를 ITS 특이 프라이머를 사용해 증폭 후 염기서열을 분석해 NCBI에 등록된 정보와 비교해 해당 종의 진위 여부를 확인하였고, 국내 당귀와 세발당귀 및 해외에서 수집된 중국 당귀, 구당귀 시료들을 분석한 결과 동일한 Angelica속이라도 국내에서 자생하는 당귀에서 많은 수의 SNP를 확인할 수 있었던 반면 세발당귀는 단 2개의 SNP가 확인되어 국내 토종 당귀들 중 일당귀와 보다 높은 유연관계가 있음을 확인했다.
<h1>결과 및 고찰</h1> <h2>ITS 유전자 단편을 이용한 유연관계 분석</h2> <p>국내외의 다양한 경로를 통하여 수집한 각각의 시료들에 대하여 DNA를 분리하여 ITS 특이 프라이머를 사용하여 증폭한 다음 염기서열을 분석하여 NCBI에 등록된 정보와 비교하여 각각의 수집 개체에 대한 해당 종의 진위 여부를 확인 하였다. 아직 NCBI에 등록이 되어 있지 않은 세발당 귀는 참당귀와 비교하여 차이가 나는 단일염기다형성을 3회 이상 시료를 달리한 반복 실험을 통하여 확인하였다.</p> <p>국내 토종 당귀[참당귀(A. gigas Nakai) 및 세발당귀 (A. gigas Jiri)]와 해외에서 수집된 [일당귀(A. acutiloba), 중국당귀(A. sinensis), 구당귀(Levisticum officinale)] 시료들의 ITS 유전자 단편의 염기서열 분석을 한 결과(Table 1, Table 2A), 동일한 Angelica속이라도 국내에서 자생하는 참당귀(A. gigas, Nakai) 및 세발당귀(A. gigas Jiri)와 종이 다른 일당귀( A . acutiloba), 중국당귀(A. sinensis), 구당귀(Levisticum officinale) 사이에는 많은 수의 SNP를 확인할 수 있었다. 반면에 참당귀와 세발당귀는 단 2 개의 SNP가 확인되었다. 이들 염기서열을 상호 비교한 유전적 유연관계 분석을 통해 국내 토종 당귀들(참당귀, 세발당귀)은 해외에서 수집된 당귀들 중 일당귀와 보다 높은 유연관계를 확인할 수 있었다(Fig. 1).</p> <h2>ITS 유전자 단편에 대한 자생 계통 판별용 마커 개발</h2> <p>먼저 국내 토종당귀(참당귀 및 세발당귀)와 해외에서 수입되는 다른 당귀계통들에 대한 판별용 마커를 개발하고자 ITS 유전자 단편의 염기서열을 상호 비교하여 확인된 SNP를 바탕으로 국내 토종인 세발당귀 및 참당귀는 동일하고 다른 중국당귀, 일당귀, 구당귀와는 차이를 보이는 SNP를 근거로 하여(Fig. 1) 국내 자생 특이적 프라이머를 제작하였으며 (Table 2B, Fig. 2A), 이를 사용하여 Table 1에서 표시한 연구 재료로부터 분리한 염색체 DNA를 주형으로 하여 각 계통별 유전자의 증폭을 수행하였다. 그 결과, 국내 자생 당귀종인 세발당귀와 참당귀는 예상한 크기인 \( 514 \mathrm{bp} \) 크기에서 선명하게 밴드가 확인되었으나, 중국당귀, 일당귀, 구당귀의 밴드는 확인되지 않아 용이하게 판별이 가능하다는 것을 알 수 있었다(Fig. 2B).</p>