참치 부산물 내 주요 우점 미생물 분석을 위해, 총 10회에 걸쳐 채취한 참치 부산물을 20 ml의 포타슘 인산염 버퍼로 균질화하였다. 5번의 반복 시도를 통해 주요 미생물을 선택배지로 분석하였으며, 시료 내 호기성 미생물 및 총균수 측정은 \( \mathrm { APC } \) agar와 LB agar에 \( 0. 5 \% \mathrm { NaCl } \)을 첨가하여 배양 후 균수를 측정하였다. 유산균과 바실러스균의 측정은 MRS agar와 MYP agar를 사용하였다. 또한, biogenic-amines의 분석은 \( \mathrm { HPLC } \)를 이용하였다.
<h3>침치 부산물 내 주요 우점 미생물 분석</h3> <p>어분 제조 시 사용되는 참치 부산물 내 주요 우점 미생물을 분석하기 위하여 10 회에 걸쳐 채취한 참치 부산물을 20 ml의 potassium phosphate buffer \( (0.05 \mathrm { M } , \mathrm { pH } \) 7.0)를 사용하여 균질화 시켰다. 참치 부산물 내 주요 우점 미생물을 측정하기 위해 총 5 반복에 걸쳐 참치 부산물 내 존재하는 주요 우점 미생물을 선택배지를 사용하여 분석하였다. 시료 내 호기성 미생물과 총균수 측정을 위해 \( \mathrm { APC } \) agar (aerobic plate agar,Difco, Detroit, MI, USA) 및 LB agar (Luria Bertani; Difco,Detroit, \( \mathrm { MI } , \mathrm { USA } \) )에 \( 0.5 \% \mathrm { NaCl } \) 를 첨가하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 48 시간배양 후 균수를 측정하였다. 총 대장균수는 Macconkey sorbi-tol agar (Difco, Detroit, MI, USA)를 이용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24 시간 배양 후 측정하였다. 유산균과 바실러스균의 측정을 위해MRS agar (deMan Rogasa and Sharpe; Difco, Detroit, MI,USA)와 MYP agar (Mannitol egg-yolk-polymixin; Merck,Darmstadt, Germany)를 사용하였다[31]. Histamine과 bio-genic amines 함량 분석을 위해 \( 1 \% \) L-histidine이 포함된 trypticase soy broth (TSB)에서 48 시간 배양 후 2ml를 채취하였다.</p> <h3>\( \mathrm { HPLC } \) 을 이용한 biogenic-amines의 분석</h3> <p>Histamine dihydrochloride, methylamine hydrochloride,ethylamine hydrochloride, tyramine, 2-phenylethylamine</p> <p>hydrochloride, 1,4-diaminobutane dihydrochloride 또는 putrescine, 1,5-diaminopentane dihydrochloride 또는 ca-daverine (Sigma-Aldrich)를 표준시약으로 사용하였으며, Eluent \( \mathrm { A } \) 는 각각의 \( 0.05 \mathrm { M } \) sodium phosphate monobasic \( ( \mathrm { pH } 5.5) \), methanol, 그리고 THF \( (80: 19: 1 \mathrm { v } / \mathrm { v } ) \) 를 이용하였다. Eluent \( \mathrm { B } \) 는 methanol과 \( 0.05 \mathrm { M } \) sodium phosphate buf-fer \( ( \mathrm { pH } 5.5) \) 를 80:20으로 하여 이용하였다. Sodium phos- phate monobasic의 \( \mathrm { pH } \) 는 \( 1 \mathrm { ~N } \mathrm { NaOH } \) 를 이용하여 5.5로 보정하였다. OPA분석을 위해 methanol \( 5.9375 \mathrm { ml } \) 안에 2-mer-captoethanol (MCE) \( 0.3125 \mathrm { ml } \) 와 OPA \( 0.044 \mathrm { ~g } \) 으로 구성하여 만들어진 OPA시약은 24 시간 이내에 사용하였다.</p>