대뇌세포는 충판족단계라고 부르면서, 배양초기에는 신경가지돌기가 없는 원형 형태이다. 그 후 작은 가지를 내는 작은 가지 단계라 부르며, 그 중간에 부채꼴 모양으로 신경가지돌기가 발생하는 단계를 제1.5단계라 한다. 약재 추출물이 신경세포의 초기 형태발생에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물을 첨가한 뉴로베이잘 배지에 대뇌세포를 배양한 후 12시간 후에 관찰한 결과, 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들이 일반적으로 빈도가 증가함을 알 수 있다. HK,HC,HS,HSC를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비해 증가하였음을 알 수 있다.
<h1>결 과</h1> <h2>배양 대뇌신경세포의 초기성장단계의 구분</h2> <p>\( \mathrm{E}_{18} \) 대뇌세포의 배양 12 시간째 위상차 현미경으로 관찰하였다(Fig. 1). 대뇌신경세포는 배양 시작 후 2시간 정도부터 신경가지돌기를 내기 시작하며, 12 시간 후에는 \( 10 \sim 20 \mu \mathrm{m} \) 까지 자란다. 대뇌세포는 배양초기에는 신경가지돌기가 없는 원형 형태(Fig. 1의 화살표머리)로서 이 단계를 층판족(lamellipodia)단계(제1단계)라고 한다. 그 후 작은 가지를 내는 단계를 작은 가지(minor process) 단계(제2단계, Fig. 1의 화살표)라 하며, 그 중간에 부채꼴 모양으로 신경가지돌기가 발생하는 단계를 제1.5단계(Fig. 1의 별표)라 하였다. 본 실험에 사용한 뉴로베 이잘 배지는 혈청이 첨가되지 않은 배지로서 신경교세포는 약 \( 10 \% \) 정도로 거의 증식이 일어나지 않아 대부분이 신경세포로 구성되어 있다.</p> <h3>황금 추출물(HK), 황금 \( + \) 천마 복합 추출물(HC), 황금+석창포 복합 추출물(HS) 및 황금+석창포+천마 복합 추출물(HSC) 가 신경세포의 초기 형태발생에 미치는 영향</h3> <p>약재 추출물이 신경세포의 초기 형태발생에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물을 첨가한 뉴로베이잘 배지에 \( \mathrm{E}_{18} \) 대뇌세포를 배양하고 그 효능을 배양 12 시간 후에 관찰하였다. 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 제 \( 1.5 \) 및 제 2단계로 접어든 빈도가 증가하였다(Fig. 2A). 이를 통계(현미경 시야 수=20, 세포 수 \( =400 \) 내지 600 , 4회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 2B). HK, HC, HS,HSC 를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 제 2 단계 세포들의 비율이 각각 \( 2.76 \pm 0.5,3.07 \pm 0.6,6.18 \pm 0.7,7.04 \pm 0.6 \) 배로 매우 유의한 \( (\mathrm{p}<0.001) \) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포의 초기 형태적 발생을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p> <h3>HK,HC,HS,HSC 의 신경가지돌기 수에 미치는 영향</h3> <p>약재 추출물이 신경가지돌기의 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물이 첨가된 뉴로베이잘 배지에 \( \mathrm{E}_{18} \) 대뇌세포를 배양하고 24 시간 후에 관찰하였다. 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 돌기의 수가 증가하였는데 통계(현미경 시야 수 \( =20 \), 세포 수 \( =400 \) 내지 600,4 회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 3).HK,HC,HS,HSC 를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 돌기의 수가 각각 \( 112.5 \pm 35,125 \pm 40,128 \pm 35,150 \pm 38 \% \) 로 증가하였으며,HC 및 HS의 경우 유의한( \( \mathrm{p}<0.05) \) 증가,HSG 의 경우 매우 유의 한 \( (\mathrm{p}<0.01) \) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포의 초기 돌기의 생성을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p>