IL-4는 5q31.1에 위치하는데, 선행 연구에서는 coding region에는 알러지와 관련된 SNP이 발표된 바 없으며, promoter region에 위치한 SNP에 대해서만 여러 보고가 있다. 본 논문에서는 10명의 알러지 환자 군의 DNA를 PCR하여 염기서열을 분석하여 IL-4 promoter region에 있는 -34 C/T, -590C/T SNP의 각 allele frequency를 조사하였다. -34 C/T가 IgE 농도 증가와 관련이 있고, -590C/T T allele이 천식 환자군에서 높은 frequency를 보이고 있다.
<p>IL-4는 염색체 5q31.1에 존재한다. 선행연구논문의 조사 결과 coding region에는 알러지와 관련된 SNP가 거의 발표된 바 없고, promoter region에 위치한 SNP에 대해서만 여러 보고가 있어, promoter region에 대한 SNP를 조사 연구하였다. IL-4 promoter region에 있는 -34 C/T가 혈중 IgE 농도의 증가와 관련이 있다는 보고가 있어 후보유전자로 채택했다. -590C/T의 T allele이 IgE의 농도증가와 연관이 있다는 보고와 IgE의 농도와는 상관관계가 뚜렷하지 않지만, 천식 환자군에서 T frequency가 높다는 보고가 있어, 그림과 같이 SNP를 조사하였다.</p> <h2>염기서열분석을 통한예비실험</h2> <p>우선적으로 본 연구팀원과 현재 알러지 환자 군 중 모두 10명을 선별하여 그들의 모근으로부터 DNA를 뽑아 PCR하여 염기서열을 밝혔다. 염기서열 분석 결과에 기초하여 기존에 알려진 SNP와 밝혀지지 않았으나 SNP로 추측되는 변이 중 알러지와 유관할 것으로 추정되는 변이를 총 8개 선정했다. 염기서열 분석 결과 IL-4Ra mid+와 IL-4Ra mid-로 PCR 했던 부분에 있던 3가지 SNP (E375A, C406R, S411L)에서는 환자군을 포함하여 아무런 변이가 발견되지 않아 Mass spectrometric genotyping에서 제외시키기로 최종 결정하였다. 또한 IL-4Ra ter+와 IL-4Ra ter-로 PCR했던 부분에서 SNP로 추정되는 변이가 2개 발견되었다. 하나는 ter2236 (2236은 IL-4Ra의 start codon을 1번 염기로 하여 매긴 번호를 말하며 Table 2의 extension primer를 통해 위치를 파악할 수 있다;Genbank X52425)으로 C/C가 정상이나 환자군에서 총 3명이 C/A로 나타났으며 ter2301에서도 같은 현상이 나타나 2가지를 추가하였다. Q576R의 302번째 자리에서 다른 모든 사람은 G/G이나 1명뿐인 정상인이 G/A 로 나타나 이것 역시 추가하여 실험하기로 결정하였다.</p> <p>Mitsuyas 등이 밝힌 I75V는 본 실험에서 염기서열 분석 결과 A/A인 사람은 총 10명(정상 1명, 과거 보유자 3명, 현재 보유자 6명)중 1명으로 현재 알러지 보유자였다. A/G로 hetero인 사람은 총 6명으로 과거 보유자와 정상인이 각각 한명이었고 현재 알러지 보유자가 4명이었다. 마지막으로 G/G, 즉 두 개의 상동염색체에 모두 변이가 일어난 사람은 총 3명으로 한명이 과거 보유자, 두 명이 현재 보유자였다. HG는 Fig. 2A의 ter 부분 염기서열 분석 과정 중에 새롭게 찾은 것으로 총 9명(정상 1명, 보유자 3명, 환자 6명) 중 정상 1명만 G/A hetero로 나타났으며 나머지는 모두 G/G로 나타났다. Hershey 등이 밝힌 Q576R은 총 9명중 현재 알러지 보유자 1명만 T/C hetero로 나타났으며 나머지는 모두 T/T로 정상이었다. Takabayashi 등이 밝힌 -34C/T는 총 8명 (정상 1명, 과거 보유자 3명, 현재 보유자 4명)중 5명 T/T였으며 그 중 1명이 과거 보유자, 4명은 현재 보유자였다. C/T인 사람은 총 3명으로 1명이 정상, 2명은 과거보유자였다. Noguchi 등이 밝힌 -590C/T는 염기서열을 분석한 모든 사람에서 C/C homo로 나타났다. 위에서 언급한 ter2236은 총 10명 (정상 1명, 과거 보유자 3명, 현재 보유자 6명)중 현재 보유자 3명이 C/A hetero로 나타났다. 또한 ter2301도 염기서열 분석 결과, 총 10명 중 현재 보유자 3명이 C/A hetero로 나타났다.</p>