감태를 채집하여 염분을 제거한 후 동결건조기로 건조 후 분쇄기로 분말화 하였다. 이를 초음파 분산기로 초음파 저온 추출 후, 일정한 양을 추출용매에 녹여 페놀성 화합물 함량 과 항산화 및 Tyrosinase저해활성 분석에 사용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험재료 및 추출</h2> <p>실험재료인 감태(Ecklonia cava)는 울릉도에서 스킨스쿠버를 이용하여 채집하였고, 한국 동해 연안 해조류 도감(국립수산과학원)을 참고로 하여 동정하였다. 채집된 감태는 흐르는 물로 여러 번 씻어 염분을 제거한 뒤 동결건조기(일신랩, PVTYFD 10A, Korea)를 이용하여 건조(<-40\( ^{\circ} \mathrm{C}\), \(2\sim3\)일)하였다. 건조된 시료는 분쇄기(Lab. Blender, 51BL30, USA)를 이용하여 분말화한 후, 초음파 추출과 용매 추출에 사용하였다.</p> <p>초음파 저온 추출은 초음파 분산기(Sonics VC750, USA)를 사용하여 수행하였다. 동결건조된 감태 \( 600\mathrm{~g} \)에 10배(\( \mathrm{w} / \mathrm{v} \))의 정제수를 첨가하고, \( 40^{\circ} \mathrm{C} \)에서 12시간 추출한 후, \( 40 \mathrm{kHz} \)에서 30분간 초음파 추출을 병행하는 방법을 사용하였다. 추출용액을 원심분리( \(5,000\mathrm{rpm}\), \( 5 \mathrm{~min}) \)한 후 상등액을 분리하였다. 물 및 에탄올 추출을 위해서 감태분말(\( 5 \mathrm{~g}) \)에 \(65 ^{\circ} \mathrm{C} \) 및 \( 24^{\circ} \mathrm{C} \) 물과 \( 50 \% \) 및 \( 100 \% \) 에탄올을 40배(\( \mathrm{w} / \mathrm{v} \)) 첨가하고, 12시간 동안 \( 150 \mathrm{rpm} \)에서 교반시킨 후, 원심분리기(Sorvall, USA)를 이용하여 상등액을 분리하였다 (\(5,000 \mathrm{rpm}\), \(5\mathrm{~min}) \). 분리된 추출액은 vacuum evaporator에서 건조하였고, 일정한 양을 각각의 추출용매에 녹여 페놀성화합물 함량과 항산화 및 ty-rosinase 저해 활성 분석에 사용하였다.</p> <h2>페놀성 화합물 정량</h2> <p>초음파 및 일반 추출법에 의해 추출된 각 추출물의 페놀성 화합물의 함량을 분석하였다. 시료 \( 0.5\mathrm{ml} \) 와 \( \mathrm{EtOH}\) \(0.5\mathrm{ml} \) 첨가한 후 Folin-Ciocalteu 시약 \( 0.5 \mathrm{ml}\), \(1\mathrm{ml} \)의 \( 7.5 \% \) \(\mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \)를 첨가하고, 증류수로 최종 \(10 \mathrm{ml} \)를 맞추었다. \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 20분간 발색시킨 후 \( 765\mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다. 대조구로서는 \( 50 \% \) 에탄올을 사용하였고, gallic acid를 사용하여 구한 검량 곡선으로부터 시료 중의 페놀성 화합물 함량을 계산하였다.</p> <h2>DPPH 라디칼 소거활성</h2> <p>DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 측정은 Lu와 Foo의 방법에 따라 실시하였다. 시료 \( 0.2 \mathrm{ml} \)에 \( 0.1 \mathrm{ml} \)의 DPPH (\( 16 \mathrm{mg}\)/\(100\mathrm{ml} \) \(\mathrm{EtOH}\)) 용액을 첨가하고 10분간 상온에서 반응시킨 후, \(517 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 유리 래디칼 소거 활성을 백분율(\(\%\))로 나타내었다. 계산식은 아래와 같다.</p> <p>Inhibition \( (\%)=\left[\left(\mathrm{A}_{0}-\mathrm{A}_{1}\right) / \mathrm{A}_{0}\right] \times 100 \)</p> <p>( \( \mathrm{A}_{0}= \) 대조군 흡광도 \( \mathrm{A}_{1}= \) 실험군 흡광도).</p> <p>실험은 3번 반복 수행하였으며, 결과는 평균값 \( \pm \mathrm{S D} \)로 표시하였다.</p> <h2>Tyrosinase 저해활성</h2> <p>Tyrosinase 저해 활성은 김 등의 방법에 따라 실시하였다. Tyrosinase ( \(100\mathrm{unit}\)/ \( \mathrm{ml})\), \(60\mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer \( (\mathrm{pH}~6.8 \) )와 \( 0.4\mathrm{ml} \)의 \( 10 \mathrm{mM} \) DOPA (dihydrox-yphenylalanine)를 혼합하였다. 혼합용액에 \(0.2 \mathrm{ml} \) 의 감태 추출물을 첨가한 후 \( 475\mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 저해활성은 다음 방정식으로 계산하였다.</p> <p>Inhibition \( (\%)=\left[\left(\mathrm{A}_{0}-\mathrm{A}_{1}\right) / \mathrm{A}_{0}\right] \times 100 \)<p>\( \left(\mathrm{A}_{0}=\right. \) 대조군 흡광도, \( \mathrm{A}_{1}= \) 실험군 흡광도 \( ) \).<p>실험은 3번 반복 수행하였으며, 결과는 평균값 \( \pm \mathrm{SD} \)로 표시하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>통계분석은 SPSS 통계 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. 데이터의 normality와 homogeneity는 ANOVA로 확인하였고, 실험구 간의 차이는 one-way ANOVA와 Duncan"s multi-ple range test로 평가하였다.</p>