본 논문에서 실험돌물을 이용한 실험을 진행하였으며, 혈청분석은 조제된 혈청 transaminase 측정용 kit를 사용하여 ALT 및 AST 활성을 통해 측정되었으며, 간조직 중 항산화 효소계의 활성 측정은 상징액을 취하여 그 속에 존재하는 효소원의 활성 측정을 통해 이뤄졌다. 다음으로 간조직 중 과산화지질 함량 분석과 간조직 중 GSH 함량 측정는 흡광도 분석을 통해 이뤄졌다. 전체적인 통계처리는 SPSS 통계 package가 이용되었으며, 각 실험군의 평균치간의 유의성 검증이 이루어졌다.
<h2>실험동물 처치</h2><p>실험동물은 처치 전 18시간 동안 절식시킨 후 \( \mathrm{CO}_{2} \)로 가볍게 마취된 상태에서 단두 절단하여 채혈한 후 \( 4,500 \times g \)에서 20분간 원심분리한 다음 분리한 혈청을 ALT 및 AST 활성 측정에 사용하였다. 혈액을 채취한 후 얼음위에서 즉시 간을 적출하여 \( 0.9 \% \) 생리식염수로 남아 있는 혈액 및 기타 부착물질을 제거하고 여지로 수분을 제거한 후 효소 활성 저하를 예방하기 위하여 급속 동결하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \)의 deep freezer에 보관하면서 항산화 관련 효소 활성 및 항산화 능력 측정에 사용하였다.</p><h2>혈청 중 AST 및 ALT 활성 측정</h2><p>혈청 aminotransferase 활성은 Reitman과 Frankel의 방법으로 조제된 혈청 transaminase 측정용 kit(Shinyang Co., Seoul, Korea)를 사용하여 ALT 및 AST 활성을 측정하였고, 단위는 혈청 \( \mathrm{ml} \)당 Karmen unit로 표시하였다.</p><h2>간조직 중 항산화 효소계의 활성 측정</h2><p>간조직 \( 1 \mathrm{g} \)당 4배량의 \( 0.25 \mathrm{M} \) sucrose buffer(\( \mathrm{pH} 7.5 \))를 가하고 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 ultra turax homogenizer(Janke \& Kunkel, Germany)로 \( 10,000 \times g \)에서 마쇄한 후, 마쇄액은 \( 600 \times \mathrm{g} ~4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분간 원심분리하여 핵과 미마쇄 부분을 제거한 다음 상징액을 \( 15,000 \times g \)에서 20분간 다시 원심분리하였다. 상징액을 취하여 xanthine oxidase(XO), superoxide dismutase(SOD), catalase 및 glutathione peroxidase(GSH-Px) 활성 측정을 위한 효소원으로 사용하였다. XO 활성은 Downey 방법, SOD 활성은 Crapo 등의 방법, catalase 활성은 Aebi 방법, GSH-Px 활성은 Flohe 등의 방법으로 측정하였다.</p><h2>간조직 중 과산화지질 함량 분석</h2><p>과산화지질 함량은 Buege와 Aust의 방법에 의하여 측정하였다. TBA 시약(\(0.375\%\) TBA in \( 0.25 \mathrm{N} ~\mathrm{HCl}) ~1.0 \mathrm{ml} \)에 BHT를 최종농도가 \( 0.01 \% \)가 되게 가하고 균질액 \( 1.0 \mathrm{ml} \)를 가하여 잘 혼합한 후 \( 98^{\circ} \mathrm{C} \)로 15분간 가열하였다. 즉시 냉각시켜 \( 1,500 \times g \)으로 15분간 원심분리하고 \( 535 \mathrm{nm} \)에서 상징액의 흡광도를 측정하였다. Malondialdehyde(MDA)의 흡광계수 \( 1.56 \times 1021 \cdot \mathrm{mmol}^{-1} \cdot \mathrm{cm}^{-1} \)를 이용하여 계산하였다.</p><h2>간조직 중 GSH 함량 측정</h2><p>GSH 함량은 Tietze의 방법을 약간 변형하여 측정하였다. 간조직 \( 0.1 \mathrm{g} \)과 10배의 \( 5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) sulfosalicylic acid(SSA) \( 2 \mathrm{ml} \)를 첨가하여 마쇄한 다음 \( 10,000 \times g \)에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 GSH 함량 측정을 위하여 사용하였다. 시험관에 working buffer \( 700 \mu \mathrm{l}\), 5,5'-dithio-bis-2-nitrobenzoic acid \( 100 \mu \mathrm{l} \), 시료액 \( 20 \mu \mathrm{l} \) 및 증류수 \( 180 \mu \mathrm{l} \)를 가하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3분간 방치한 후 GSSG \( 5 \mu \mathrm{l} \)를 첨가하고 \( 412 \mathrm{nm} \)에서 1분동안 변화되는 흡광도를 측정하였다. GSH 함량은 GSH 표준액 \( 1 \mu \mathrm{M}, 2 \mu \mathrm{M}, 3 \mu \mathrm{M} \) 및 \( 4 \mu \mathrm{M} \)을 상기와 같은 방법으로 측정하여 계산하였다.</p><h2>단백질 정량</h2><p>단백질의 정량은 Lowry 등의 방법에 의하여 bovine serum albumin(Sigma, A-2153)을 표준물질로 하여 측정하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>본 실험에서 얻은 결과는 SPSS 통계 package를 이용하여 실험군당 평균과 표준오차를 계산하였고, 일원배치 분산분석(one-way analysis of variance)을 한 후 \( \mathrm{p}<0.05 \) 수준에서 Tukey's test에 의하여 각 실험군의 평균치간의 유의성을 검정하였다.</p>