미네랄 함량은 AOAC 분석 방법을 이용하여 측정하였다. 지방산 분석은 Garces 및 Mancha으로 각각의 발효 분말의 지질을 chloroform 및 methanol 혼합액(2:1)으로 혼합 및 추출하였다.Tyrosinase 활성은 Masamoto 등의 실험 방법을 조금씩 변형한 후 측정하였다. 실험으로부터 얻은 결과는 one-way ANOVA 검정으로 평균치와 표준오차로 표시하였다.
<h2>미네랄 함량 측정</h2> <p>미네랄 함량은 AOAC 분석 방법에 준하여 측정하였다. 즉, 각 발효 분말 \( 1 \mathrm{~g} \)을 정확히 취해 \( 550^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 회화 시킨 후 \( 6 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \)에 용해시켜 완전히 산분해시켜 수욕상에서 산을 완전히 제거하고, 이 건고물에 \( 3 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \)를 가하여 여과한 후 원소 종류에 따라 각각 일정비율로 희석하여 원자흡광 분광광도계(Analyst 300, Perkin Elmer, Norwalk CT, USA)를 이용하여 측정하였다.</p> <h2>지방산 조성 분석</h2> <p>지방산 분석은 Garces 및 Mancha 방법으로 각 발효 분말의 지질을 chloroform 및 methanol 혼합액(2:1)으로 추출하였다. 추출된 지질 용액에 methanol:HCl \( (5:1, \mathrm{v} / \mathrm{v} \%) \) 용액으로 methylation 한 후 hexane으로 지방산 methylester를 추출하여 Omega-Wax capillary column (\( 30 \mathrm{~m} \times 0.25 \mu \mathrm{m} \), Supelco, USA)을 사용하여 Gas chromatography (GC-17A, Shimazdu, Koyto, Japan)로 지방산을 분석하였다. 지방산 분석 결과는 각 지방산 표준물질과 동일한 retention time에 검출된 것으로 하였으며, 이때 검출된 총 지방산의 면적에 대한 각 지방산의 면적 비율(\(\%\))로 나타내었다.</p> <h2>DPPH에 의한 항산화 활성 측정</h2> <p>항산화 활성 측정은 Blois 방법에 따라 각 발효된 분말을 \( 1 \% \) 농도로 만든 시료 용액에서 a,a'-diphenyl-\(\beta\)-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging 활성을 spectrophotometer (Hitachi U-2900)의 \( 528 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 시료 첨가구와 무첨가구의 흡광도차를 백분율(\(\%\))로 표시하였다. 이때 활성 비교는 합성 항산화제 butylated hydroxytoluene (BHT)를 \( 0.05 \% \) 농도로 첨가하여 시료와 동일한 방법으로 흡광도를 측정하였다.</p> <p>DPPH radical scavenging activity \( (\%)=[1-( \) sample absorb-ance \( 528 \mathrm{~nm}) / \) control absorbance \( 528 \mathrm{~nm}] \times 100 \)</p> <h2>\( \mathrm{Fe} / \mathrm{Cu} \) 환원력 측정</h2> <p>\( \mathrm{Fe} \)-환원력 측정은 Zhu 등의 방법에 각 발효된 분말 \( 1 \% \) 농도의 시료 용액에 \( 0.2 \mathrm{~M} \) sodium phosphate buffer (\(\mathrm{pH~} 6.6\)) 및 \( 1 \%\) (\(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) potassium ferricyanide \( \left[\mathrm{K}_{3} \mathrm{Fe}(\mathrm{CN})_{6}\right] \)를 혼합하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 반응 시키고 \( 10 \% \) trichloroacetic acid \( (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 상층액에 증류수 및 \( 0.5 \% \) ferric chloride (\(\mathrm{FeCl}_{3}\))를 혼합한 후 실온에서 반응 시켜 spectrophotometer (Hitachi U-2900)의 \( 700 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 한편, \( \mathrm{Cu} \)-환원력 측정도 각 발효된 분말 \( 1 \% \) 시료액에 \( 0.01 \mathrm{~M} \mathrm{~CuCl}_{2}\), \( 7.5 \mathrm{~mM} \) ethanolic neocuprorine solution, \( 1 \mathrm{~M} \mathrm{~NH}_{4} \mathrm{OAc} \) buffer를 혼합하여 상온에서 반응시킨 후 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 이때 환원력 비교를 위하여 천연 항산화제 ascorbic acid와 합성 항산화제 BHT를 \( 0.05 \% \) 농도와 동일한 방법으로 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>Tyrosinase 활성 측정</h2> <p>Tyrosinase 활성은 Masamoto 등의 실험 방법을 약간 변형하여 측정하였다. In vitro ushroom tyrosinase 활성 저해 능력을 측정하기 위하여 \( 1.5 \mathrm{~ml} \) plastic cuvette에 \( 2.5 \mathrm{~mM} \) 3,4-dihydroxyphenylalanin (L-DOPA) \( 0.3 \mathrm{ml}\), \( 1 \% \) 시료 \(0.05 \mathrm{~ml} \) 및 \( 0.1 \mathrm{~M} \) 인산완충용액( \( \mathrm{pH~} 6.8 \))을 혼합하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 먼저 반응시켰다. 여기에 1,380 units/\(\mathrm{ml}\) mushroom tyrosinase (2,500 unit, Sigma Chemical Co., St. Louis MO, USA) \( 0.05 \mathrm{~ml} \)를 넣은 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 2분간 반응시키면서 \( 475 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 대조구는 시료가 들어있지 않는 시료 용해 용액을 사용하였고, 양성대조구는 tyrosinase 저해제로 알려진 \( 0.6 \mathrm{~mM} \) kojic acid를 사용하였다. 이때 tyrosinase 활성 저해율(\(\%\))은 다음의 공식에 의하여 산출하였다.</p> <p>Tyrosinase 활성 저해율(\(\%\))=100-\([(\mathrm{A}-\mathrm{B}) / \mathrm{A}] \times 100 \)</p> <ul> <li>\( \mathrm{A} \)는 시료가 들어있지 않은 반응액의 0.5-1분 사이의 흡광도 차이</li> <li>\( \mathrm{B} \)는 시료가 들어있는 반응액의 0.5-1분 사이의 흡광도 차이</li></ul> <h2>통계처리</h2> <p>실험으로부터 얻어진 결과치는 one-way ANOVA 검정에 의한 평균치와 표준오차 \( (\operatorname{mean} \pm \mathrm{SD}) \)로 표시하였다.</p>