본 문은 실험의 재료 및 방법에 대해 기술되어있다. 분리균주 중에 JE-34를 선발하여 사용하였으며 HPLC를 이용하여 색소물질을 동정하기 위해 prodigiosin을 생합성균으로 알려진 Serratia marcescens \( \mathrm { KCCM } 21204 \) 균주를 추출하여 분석에 사용하였다. 추출한 색소의 색을 보다 객관적이고 측정 가능한 값으로 다루기 위해 색차계를 이용하여 분석하였으며, I. E diagram은 색의 정보를 \( \mathrm { X } , \mathrm { Y } , \mathrm { Z } \) 로 나타낸다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>균주의 선정 및 배양</h2> <p>본 실험에 사용한 균주는 \(2005 \)년 \(9 \)월 동중국해에서 그랩을 이용하여 퇴적층으로부터 직접 분리하였으며, 채집된 퇴적물은 실험 전까지 멸균된 용기에 담아 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하였고 채집된 퇴적물 약 \( 1 \mathrm { ~g } \)을 멸균된 인산완충식염수(PBS)에 단계희석법으로 희석한 후, 각 희석단을 MA (Marine Agar, Difco. Co. USA)에 \( 100 \mathrm { ~mL } \)를 접종, 도말 후 \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 \(1 \sim 7 \)일간 배양하였다. 분리균주 중에 적색색소를 다량 생산하는 균주 JE-34를 선발하여 사용하였다.</p> <h2>색소물질의 추출</h2> <p>분리균주 JE-34를 MB (marine broth, Difco. Co. USA) \( 50 \mathrm { ~mL } \)에 \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 동안 전배양한 후, 이를 \( 200 \mathrm { ~mL } \) MB에 재접종한 후, \( 30 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서, 72시간 동안 배양하였다. 얻어진 배양액은 \( 10,000 \times \mathrm { g } \)에서 20분간 원심분리하여 상층액은 동량의 ethyl acetate를 가하여 색소를 추출하였고, 균체의 경우는 \( 20 \mathrm { ~mL } \)의 \( 100 \% \) acetone을 가하여 추출하였다.</p> <p>균체추출물은 \( 10,000 \times \mathrm { g } \)에서 20분간 원심분리 하여 탈색된 균체를 제거하고 상층액의 ethyl acetate 추출물과 혼합하였다. 이를 sodium sulfate를 가하여 탈수시킨 후, 회전감암 농축기로 농축하여 \( 50 \% \) methanol로 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \)의 농도로 용해시켰다. HPLC를 이용하여 색소물질을 동정하기 위해 prodigiosin을 생합성균으로 알려진 Serratia marcescens (KCCM 21204) 균주를 위와 동일한 방법으로 추출하여 분석에 사용하였다.</p> <h2>색소물질의 물성특성</h2> <p>추출한 색소의 색을 보다 객관적이고 측정 가능한 값으로 다루기 위해 색차계(JP 7100F), Color Techno System Japan)를 이용하여 분석하였다. C. I. E diagram은 색을 표현하는톄 있어 색차계에서 얻어진 색의 정보를 \( \mathrm { X } , \mathrm { Y } , \mathrm { Z } \)로 나타내며 다음의 공식에 의하여 계산하였다. 이때 표준백색판의 \( \mathrm { X } , \mathrm { Y } , \mathrm { Z } \) 값은 각각 90.65, 95.66, 103.24이었다.</p>