본 연구는 Agrobacterium을 활용한 호접란 형질전환 시스템의 효율성 향상을 위해 진행되었다. 특정 조건 하에서 호접란 PLB의 대량증식이 가능하였으며, 형질전환 효율은 Agrobacterium 배양액의 흡광도 값이 0.8일 때 가장 높았다. 저농도 hygromycin이 포함된 배지에서 형질전환된 PLB를 선발하는 것이 효과적이었고, GUS 유전자를 도입한 형질전환체에서 정상적인 형질전환을 확인하였다. 이는 GUS assay를 통해 선발된 개체에서 GUS 특이 primer와 probe를 사용한 PCR 및 Southern blot 분석을 통해 GUS 유전자가 정상적으로 도입된 것을 확인한 결과에 근거한다.
<p>또한 GUS 유전자가 도입된 PLB와 식물체로부터 genomic DNA를 추출하여 GUS 특이적인 primer를 제작하여 PCR을 수행할 결과, 형질전환체에서 \( 1.2 \mathrm { ~kb } \) 크기의 GUS 밴드를 얻을 수 있었고, 야생형에서는 밴드가 나타나지 않아 GUS 발현을 보이는 개체들은 정상적으로 형질전환된 것을 알 수 있었다. 도입된 GUS 유전자의 insertion number를 알아보기 위해 genomic DNA를 EcoR I 으로 절단하고 GUS 유전자의 단편을 probe로 하여 Southern blot 분석을 실시한 결과, 전체 6개체의 형질전환체 중에서, 3개체는 single insertion site를 나타냈고, 나머지 3개체는 두 개 이상의 insertion site를 나타냈다.</p> <h1>요 약</h1> <p>본 연구는 Agrobacterium을 이용한 효율적인 호접란 형질전환 시스템의 확립을 위해 실시하였고, 호접란 PLB의 대량증식을 위한 배지 조성은 하이포넥스 기본 배지에 활성탄 1 \( \mathrm { g } / \mathrm { l } \), 티아민 \( 0.1 \mathrm { mg } / 1 \) 및 sucrose \( 30 \mathrm { ~g } / \mathrm { l } \)을 배지에 첨가한 경우 PLB가 안정적으로 증식되었다. 계대 배양시 PLB 절단 방법이 PLB의 생존과 증식에 큰 영향을 미치며, PLB 위쪽으로부터 \( 1 / 3 \) 부위를 절단하여 계대 배양한 경우 \( 90 \% \) 이상의 가장 높은 증식률을 나타났다. Agrobacterium 접종 시 균이 묻어 있는 침으로 PLB를 찔러 상처를 내는 dipping 방법을 이용하여 형질전환 효율을 높일 수 있었다. Agrobacterium 배양액의 흡광도 값이 0.8 일 때 형질전환 효율이 가장 높았고, 형질전환된 PLB의 선발은 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { l } \) 정도의 저농도 hygromycin을 함유한 배지에 계대배양 하는 것이 효율적이었다. 호접란 형질전환체를 먼저 GUS assay를 통하여 선발하였고, 선발된 개체로부터 genomic DNA를 추출하여 GUS 특이적 primer와 probe로 PCR과 Southern blot 분석을 수행하고 유전자의 도입여부를 조사한 결과 GUS 염색된 형질전환체에서 정상적으로 GUS 유전자가 도입된 것을 확인할 수 있었다.</p>