실험에 필요한 패모는 항량 건조시킨 후 메타올을 가해 메탄올 추출물을 생성하였다. 그 후 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올을 사용해 순차 분획하였으며, 분획물은 감압 건조하여 분말화하였다. 그 후 시료 분말은 DMSO에 녹여 항균 활성, 항혈전 활성, 항산화 활성에 이용하였다. 메탄올 추출물 등의 항균 활성을 평가하기 위해 대표적으로 그람 음성균인 Escherichia coli KCTC 1682 와 그람 양성균인 Staphylococcus aureus KCTC 1916을 이용하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료 및 패모 시료의 조제</h2><p>실험에 사용한 패모 시료는 2007년 11월 경북 안동에서 구입한 중국산 패모를 사용하였다. 구입 직후 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)에서 항량 건조시켜 수분함량을 측정한 결과 \( 12.0 \%\)\((\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)로 나타났으며, 이후 건조 패모 무게의 3배 부피의 메탄올을 가하여 상온에서 24시간씩 3회 반복 추출하였다. 이후 추출액은 filter paper로 거른 후 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 감압 건조하여 조제하였다. 이때 추출효율은 \( 1.14 \%\) \((\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)를 나타내었다. 메탄올 추출물은 물에 현탁한 후 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올을 이용하여 순차적으로 분획하였으며, 분획물과 물 잔류물은 동일한 방법으로 감압건조하여 분말화 하였다. 각각의 시료 분말은 DMSO에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 항균 활성, 항혈전 활성 및 항산화 활성에 사용하였다. 항혈전 활성 평가를 위한 트롬빈 타임 측정시, 혈장은 최근 1개월 동안 약물투여를 받지 않은 지원자의 전혈로부터 조제하였다. 채혈 후 즉시 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 5,000 \times \mathrm{g} \)로 5분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하고 냉동한 상태로 보관하였으며(신선동결혈장), 필요시 상온에서 해동하여 사용하였다. 기타 시약은 Sigma Co. (USA)의 제품을 구입하여 사용하였다.</p><h2>항균 활성 측정</h2><p>패모의 메탄올 추출물 및 이들의 분획물의 항균 활성을 평가하기 위해 그람 음성균으로 Escherichia coli KCTC 1682, Proteus vulgaris KCTC 2433, Salmonella typhimurium KCTC 1926을, 그람 양성균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916, Listeria monocytogenes KACC 10550, Bacillus subtilis KCTC 1924를 사용하였다. 한편 항진균 활성 평가를 위해서는 Saccharomyces cerevisiae IF0 0233 및 캔디다증 진균감염증 원인균 Candida albicans KCTC 1940를 사용하였으며, 항곰팡이 활성을 위해서는 Botrytis cinerea KACC 40574, Pyricularia grisea KACC 40414, Rhizoctonia solani KACC 40101, Glomerella cingulata KCTC 6075, Collectotrichum gloeosporioides KCTC 6169, Phytophthora capsici KACC 40157와 Botryosphaeria dothidea (겹무늬 썩음병 분리균)을 사용하였다. 항세균, 항진균 및 항곰팡이 활성 평가는 기존의 보고한 방법과 동일하게 사용하였으며, 각각 Nutrient agar (Difco Co., USA), Sabouraud dextrose 및 Potato dextrose agar (Difco Co. USA) 배지를 이용하여 각각의 시료 \( 5 \mu \mathrm{l} \)를 멸균 disc-paper (지름 \( 6.5 \mathrm{~mm} \) )에 가하여, 생육저지환의 크기를 측정하여 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 ampicillin과 항진균제인 miconazole (Sigma Co., USA)을 각각 \( 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{disc} \) 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 \( \mathrm{mm} \) 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.</p>