본 연구는 생후 3주령 암컷 Long-Evans 쥐 60마리를 이용해 진행되었으며, 지방산의 양이 변형된 AIN-93G 표준식을 8주간 급여하였다. 식이의 지방산 조성은 \( 14. 8 \% \) linoleic acid, \( 3. 0 \% \) linolenic acid, \( 1. 6 \% \) DHA를 포함하였다. 실험쥐는 뇌의 납 농도와 지방산 조성 분석을 위해 3주령에서 희생시키거나, 불안감 관련 동물 행동 양상 실험을 위해 11주령까지 사육되었다. 이후 9주령에서 동물 행동 학습 실험을 진행하였으며, 이를 통해 자발적인 운동성과 불안감을 측정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험동물의 사육 및 실험식이</h2> <p>본 실험에서는 생후 3주령 암컷 Long-Evans 쥐 60마리를 Charles River 실험실 (Portage, MI)로부터 구입하여 지방산의 양이 변형된 AIN-93G 표준식이를 급여하여 적정 환경(온도 \( 23 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 상대습도, 명암 12시간 주기)에서 8주간 사육하였다 식이의 지방산 조성은 \( 14.8 \% \) linoleic acid (LA), \( 3.0 \% \) linolenic acid (LNA) 및 \( 1.6 \% \) DHA를 함유하였다. 암컷 쥐가 11주령이 되었을 때 12주령 수컷과 교배시킨 후 임신 쥐들을 구별하여 교배 17일부터 개개 cage에서 사육하였다. \( 0.2 \% \mathrm { ~Pb } \) 농도는 여러 문헌을 참조하여 수유기 동안 납 노출이 성인이 되었을 때 동물의 행동양상에 영향을 미치는 범위로 결정되었다. 연령의 차이를 줄이기 위하여 출산 후 24시간 내에 태어난 수컷 신생쥐를 중심으로 엄마 쥐를 통한 간접적인 방법으로 납을 투여하는 방식으로 각각 \( 0.2 \% \) Pb acetate가 함유된 음용수 (Pb-treatment 군)와 대조군으로 \( 0.2 \% \) Na acetate가 함유된 음용수(Na-treatment 군)의 두 그룹으로 나누었다. 이때 한 세트는 실험군 당 5마리씩 취하여 뇌의 납 농도와 지방산 조성을 분석하기 위하여 3주령이 되었을 때 희생시켰고 나머지 한 세트는 불안감 관련 동물 행동 양상 실험을 위하여 군 당 10마리씩 취하여 11주령까지 사육하였다. Pb 투여는 이유기인 출생 후 21일까지 계속 진행되었다가 그 이후는 보통의 음용수로 전환하였고 실험식이와 음용수는 실험기간동안 자유섭취방법으로 급여하였다.</p> <h2>일반적인 동물 행동 양상 검사 실험(Motor activity test)</h2> <p>실험쥐들이 9주령이 되었을 때 일련의 동물 행동 학습 실험들이 행해졌다. 먼저 motor activity 실험을 행하여 쥐들의 자발적인 운동성을 측정하였다. 각각 실험쥐들을 bedding이 깔려져 있는 쥐용 case \( (25 \mathrm { ~cm } \times 45 \mathrm { ~cm } \times 20 \mathrm { ~cm } ) \) 에 넣고 비디오 카메라를 이용하여 이들의 moving distance (이동거리)와 moving time (이동시간)을 30분간 측정하였고 이러한 실험은 4일 연속 같은 시간에 측정하였다.</p> <h2>Elevated plus maze 실험</h2> <p>Elevated Plus Maze 실험을 행하여 실험쥐들의 불안감을 측정하였다. Elevated plus maze는 높이가 바닥에서 \( 70 \mathrm { ~cm } \) 정도이며 2개의 open arm과 2개의 close arm으로 구성되어져 있다. 쥐들은 선천적으로 어둡고 close arm에 머무르기를 좋아한다. 그래서 open arm을 통과 할 때는 상당한 불안감을 나타낸다. 처음 2분 동안은 maze의 중심에 실험쥐를 두고 새로운 환경에 대한 탐색시간을 주었고 나머지 5분 동안은 실험쥐가 두 개의 open arm을 통과해서 머무르는 시간과 횟수를 비디오 카메라를 이용하여 측정하였다. 이 실험은 2일 연속 같은 시간에 측정하였다.</p>