초피를 간장과 된장에 첨가하여 생리활성효과를 분석한 결과 된장과 달리 초피간장의 추출물은 caspase를 활성화시키고 apoptosis 기작으로 DNA fragmentation을 일으켜 항암효과가 있음을 확인하였다.
<h2>DNA fragmentation assay</h2> <p>세포사에는 apoptosis와 necrosis가 있다. necrosis와 apoptosis는 형태학적으로 큰 차이를 보이는데 apoptosis가 일어나면 염색 질의 응축, 핵의 응축, 세포의 축소, antibody의 출현, 대식세포에 의한 탐식작용과 같은 현상이 관찰되어진다. 또한 apoptosis의 결정적인 증거가 되는 것이 DNA의 fragmentation이다. 초피간장 추출물처리에 의한 세포사가 necrosis인지 apoptosis인지 알아보기 위하여 세포내의 DNA 구조적 변화를 관찰하였다. 그 결과 무처리와 일반간장을 처리한 대조구세포의 DNA는 fragmentation이 일어나지 않았으나, 초피간장의 추출물을 처리한 세포는 endonuclease가 활성화되어 DNA가 일정한 크기로 단편화되어 전형적인 DNA ladder가 형성되어졌다(Fig. 7). 초피를 \( 1 \% \) 처리한 것에서는 ladder를 확인하기 힘들었고, \( 2 \% \)와 \( 4 \% \) 초피를 첨가한 간장의 추출물을 처리한 세포에서는 ADCL을 처리한 세포의 DNA와 같이 DNA fragmentation이 강하게 일어났다. 따라서 초피간장의 추출물에 의한 세포사는 apoptosis에 의한 것임을 확인했다. 초피를 첨가한 간장이 caspase-3 를 활성화시키고 DNA fragmentation을 일으키는 것으로서 초피간장의 항암효과가 있는 것으로 생각되어진다.</p> <h1>요 약</h1> <p>초피나무(Z. piperitum) 열매는 다양한 생리활성을 갖고 있으며, 과피 용매추출물은 세균에 대한 강한 항균활성을 갖고 있어, 간장과 된장제조에 초피를 첨가하여 생리활성효과를 조사하였다. 초피를 간장제조에 \( 1 \% \), \(2 \% \), \(4 \% \) 첨가하여 제조하고, 간장추출물을 식중독균(Sta. aureus, Sal. typhimurium, V. parahemolyticus, E. coli 0157:H7)에 대한 항균환성을 조사했다. 초피를 \(2 \% \) 첨가한 간장은 E. coli O157:H7과 V. parahemolyticus 의 생육을 각각 \( 70 \% \) 와 \( 50 \% \) 억제했으며, Sal. typhimurium 과 Sta. aureus 에 대한 항균효과는 농도와 간장제조시기에 따라 \( 40 \% \sim 60 \% \) 의 생육을 억제했다. 초피된장의 용매추출물에서는 약한 항균활성을 확인할 수 있었다.</p> <p>초피간장의 추출물을 백혈병세포 U-937에 처리하여 caspase-3 활성으로 항암활성을 조사했다. 그 결과 초피의 량을 \( 1 \% \), \(2 \% \), \(4 \% \) 첨가한 간장의 추출물은 초피를 첨가하지 않은 간장 보다 caspase-3 활성이 각각 4배, 12배, 15배 활성이 증가하는 것이 확인되어졌다. 이는 초피간장의 추출물이 apoptosis를 유도하는 것을 의미하며, 된장의 용매추출물은 caspase-3 활성에 아무런 영향이 없었다.</p> <p>초피간장 추출물을 처리한 세포의 죽음이 necrosis인지 apoptosis인지 알아보기 위하여 세포내의 DNA fragmentation을 확인한 결과, 초피간장 추출물을 처리한 세포는 DNA 단편화가 형성되어졌다. 초피를 \( 1 \% \) 첨가한 것에서는 fragmentation을 확인하기 힘들었고, \( 2 \% \)와 \( 4 \% \)피를 첨가한 간장추출물은 DNA fragmentation을 강하게 일으켰다. 초피를 첨가한 간장추출물이 caspase를 활성화시키고, DNA fragmentation을 일으키는 apoptosis 기작에 의해 암세포를 죽음으로 유도하는 초피간장의 항암효과를 입증했다.</p>