황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획과 아글리콘 분획의 농도를 각 세포생존율이 가장 높은 농도로 설정하여 미백활성을 측정하였다. 결과적으로 \( \alpha- \mathrm { MSH } \) 만 처리하였을 때보다 두 분획을 처리한 경우에 멜라닌 함량이 감소하였음을 확인할 수 있었다. 한편 멜라닌 생합성 저해활성을 확인하기 위해 황칠나무잎 추출물을 처리한 B16 melanoma 세포의 멜라닌 함량과 그 밖으로 배출된 멜라닌의 함량을 측정하였다. 이 결과로는 아글리콘 분획에서 가장 우수한 저해활성이 관찰되었다.
<h2>황칠나무 잎 추출물의 멜라닌 생성 저해활성 측정</h2> <p>황칠나무 잎 추출물의 B16F1 melanoma 세포에 대한 독성 평가: 황칠나무 잎 추출물의 멜라닌 생성 저해능 측정을 위해 황칠나무 잎 추출물과 대조군으로 사용된 알부틴의 세포독성을 알아보기 위하여 MTT assay를 통하여 실험에 사용될 농도 범위를 결정하였다. 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획의 세포 독성을 측정한 결과, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도 이하의 세포 생존율이 \( 80 \% \) 이상이었다. 아글리콘 분획의 경우, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 세포 생존율이 \( 56 \% \) 로 세포독성을 나타냈다. 비교물질로 사용한 알부틴은 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서도 거의 \( 90 \% \) 의 세포 생존율을 나타내었다(Fig. 6). 따라서 본 연구에서는 황칠나무 잎 추출물의 미백활성을 측정하기 위해 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획 및 아글리콘 분획의 농도를 \( 80 \% \) 이상의 세포생존율을 나타내는 최고 농도로 각각 \( 50,25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 로 설정하였으며, 비교물질인 알부틴은 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 로 설정하였다.</p> <p>B16F1 melanoma 세포의 형태학적 관찰: 황칠나무 잎 추출물의 멜라닌 생성 저해활성을 측정하기 위해서, B16F1 melanoma 세포에 황칠나무 잎 추출물을 농도 별로 처리하고 72 시간이 지난 후에 현미경으로 형태학적 변화를 비교 관찰하였다. 무처리군인 control에 비해서 \( \alpha- \mathrm { MSH } ^ { 2 } \) 를 처리한 경우, 유의적으로 멜라닌 함량이 증가하였다. 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획 \( (6.25 \sim 50 \mathrm { gg } / \mathrm { ml } ) \) 과 아글리콘 분획(3.13 25 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 을 처리한 경우, \( \alpha- \mathrm { MSH } \) 만 처리하였을 때와 비교하여 멜라닌 함량이 감소하였음을 확인할 수 있었다 (Fig. 7).</p> <p>멜라닌 생성 저해활성 측정: 황칠나무 잎 추출물의 미백 효과를 알아보기 위해 \( \alpha- \mathrm { MSH } \) 로 자극된 B16 melanoma 세포에 황칠나무 잎 추출물을 처리하여 세포 내의 멜라닌 함량과 세포 밖으로 배출된 멜라닌 함량을 측정함으로써 멜라닌 생합성 저해활성을 평가하였다. 기능성 화장품의 미백제로 널리 알려진 알부틴이 비교물질로 사용되었다. 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획은 \( \alpha- \mathrm { MSH } \) 만 처리하였을 때 \( ( + 66 \% \) of control)와 비교하여 6.25, 12.5, 25 및 \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 각각 13, 16, 21 및 \( 34 \% \) 의 세포 내 멜라닌 생합성 저해활성을 나타내었으며, \( 50 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 무 처리군인 control과 비슷한 멜라닌 함량을 나타내었다, 세포 밖으로 배출된 멜라닌 함량 또한 세포 내 멜라닌 함량과 비슷한 경향성을 보였다(Fig. 8A). 아글리콘 분획의 경우 \( \alpha- \) \( \mathrm { MSH } \) 만 처리하였을 때( + \( 105 \% \) of control)와 비교하여 3.13, 6.25, 12.5 및 \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 각각 1, 14, 24 및 \( 44 \% \) 의 멜라닌 생합성 저해활성을 나타내었으며, \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 무처리군인 control과 비슷한 멜라닌 함량을 나타내었다. 세포 밖으로 배출된 멜라닌 함량 또한 세포 내 멜라닌 함량과 비슷한 경향을 보였다(Fig. 8B). 비교물질로 사용된 알부틴은 \( \alpha \)-MSH만 처리하였을 때 세포의 멜라닌 함량은 \( 42 \% \) 증가하였고, \( \alpha- \mathrm { MSH } \) 단독 처리군과 비교하여 알부틴의 12.5, 25, 50 및 \( 100 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도에서 각각 14, 15, 18 및 \( 20 \% \) 의 멜라닌 생합성 저해활성을 나타내었다. 세포 밖으로 배출된 멜라닌 함량은 세포 내 멜라닌 함량 보다 다소 많았으며, 비슷한 경향성을 보였다(Fig. 8C). 황칠나무 잎 추출물과 알부틴은 모두 농도의존적으로 멜라닌 생합성 저해활성을 나타내었다. \( 25 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 황칠나무 잎 추출물의 아글리콘 분획이 가장 우수한 멜라닌 생합성 저해활성(44 \%)을 나타내었으며, 비교물질인 알부틴(15 \%) 보다 \( 2.93 \) 배 우수한 활성을 보였다. 황칠나무 잎 추출물의 에틸아세테이트 분획 \( (21 \%) \) 은 알부틴 보다 \( 1.4 \) 배 우수한 멜라닌 생합성 저해활성을 나타내었다.</p>