HPLC와 분광광도계(UV-VIS spectrophotometer)를 활용하여 회수된 베타-카로틴 결정의 순도를 측정하였다. 두 측정값의 비를 비교하여 순도가 98% 이상인지 확인하였다. 또한, 베타-카로틴 결정을 디클로메탄에 녹여 질량분석을 수행하였다.
<h2>베타-카로틴 순도 측정</h2> <p>회수된 베타-카로틴 결정의 순도를 측정하기 위하여 HPLC를 이용하였다. 베타-카로틴 결정 \( 10 \mathrm { mg } \) 을 정확히 정량하여 메스플라스크에 넣고 \( \mathrm { IBA } \) 를 첨가하여 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 용액을 제조하였다. 이를 적정농도로 희석한 후 HPLC 분석을 수행하였고 표준 용액을 이용하여 작성한 검량선으로부터 제조된 용액의 농도를 계산하였다. 측정된 농도를 제조된 농도로 나눈 후 여기에 100 을 곱하여 나온 값이 베타-카로틴 결정의 순도가 된다.</p> <p>또한 한국 식품의약품 안전청에서 추천하는 방법인 분광광도계(UV-VIS spectrophotometer)를 이용한 베타-카로틴 순도 측정방법을 따라 동일한 시료의 순도를 측정하였다. 베타-카로틴 결정 \( 30 \mathrm { mg } \) 을 취하여 메스플라스크에 넣고 사이클로핵산을 첨가하여 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 용액 (S1)을 제조하였다. S1 \( 10 \mathrm { ~mL } \) 를 취하여 메스플라스크에 넣고 사이클로핵산을 첨가하여 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 용액(S2)을 제조하였다. 다시 \( \mathrm { S } 210 \mathrm { ~mL } \) 를 메스플라스크에 넣고 사이클로핵산을 첨가하여 \( 100 \mathrm { ~mL } \) 용액 (S3)을 제조하였다. \( 340 \mathrm { ~nm } , 362 \mathrm { ~nm } \) 에서 \( \mathrm { S } 2 \) 의 흡광도를 측정하였고, \( 434 \mathrm { ~nm } , 455 \mathrm { ~nm } \) 및 \( 483 \mathrm { ~nm } \) 에서 \( \mathrm { S } 3 \) 의 흡광도를 측정하였다. 측정값들의 비를 계산하고 이를 허용기준치와 비교함으로써 시료의 순도가 \( 98 \% \) 이상인지의 여부를 확인하였다.</p> <h2>분석방법</h2> <p>역상칼럼인 J'sphere ODS H80 \( (250 \mathrm { ~mm } \times 4.6 \mathrm { ~mm } \), YMC Co., Ltd, Japan)을 장착한 HPLC를 사용하여 베타-카로틴 농도를 측정하였다. 메탄올(20 \%), 에탄올 \( (75 \%) \) 및 \( \mathrm { THF } (5 \%) \)를 포함한 혼합용액을 이동상으로 사용하였다. 펌프(515 HPLC pump, Waters, USA)에 의한 이동상의 유속은 \( 1.5 \) \( \mathrm { mL } / \mathrm { min } \) 이었고, 분리되어 나온 베타-카로틴은 UV 검출기 (Waters \( ^ {\mathrm { TM } } 486 \), Waters, USA)의 \( 450 \mathrm { ~nm } \) 에서 검출되었다.</p> <h2>질량분석을 통한 \( \beta \)-carotene 동정</h2> <p>질량분석을 위하여 정제된 베타-카로틴 결정을 디클로메탄 \( \left ( \mathrm { CH } _ { 2 } \mathrm { Cl } _ { 2 } \right ) \) 에 녹인 후 JEOL JMS-700 spectrometer를 이용하여 질량분석을 수행하였다.</p>