고등생물 게놈 분석은 BAC, PAC, YAC library의 개발에 의해 진전되었으나, 각 개체마다 게놈을 분리하여 library를 제작하기는 어렵다. 여러 생물 종에서 게놈 프로젝트가 진행되고 있지만, 다양한 생물종에서 유전정보 규명은 어려운 일이며, 복잡한 게놈으로부터 실험상에 필요한 유전자만 분리하는 것도 쉽지 않다.
<p>고등생물 게놈 분석은 \( \mathrm { Mb } \) (Mega-base) 단위의 \(DNA \) 단편까지 사용이 가능한 \(BAC (Bacterial Artificial Chromosomes), PAC (P1 Artificial Chromosomes) \) 그리고 \(YAC (Yeast Artificial Chromosomes) library \)의 개발에 의해 진전되었다. 그러나 이러한 \(library \)는 '종의 대표 예'로서 다형성(polymorphism) 혹은 변이주에 내한 연구에 사용하기 위해서는 각 개체마다 게놈을 분리하여 각가에 대한 library를 제작하기는 어렵다. 현재 여러 생물 종에서 게놈 프로젝트의 진행으로 많은 \(DNA \) 정보가 밝혀졌지단 여전히 다양한 생물종에서 유전정보의 규명이란 어려운 일이다. 더욱이 유전정보가 밝혀진 유전자라 하더라도 복잡한 게놈으로부터 실험상에 필요로 하는 유전자만을 분리해서 사용하는 것은 고등생물 중에서는 많은 어려움이 있다. 이러한 어려움과 문제점을 해결할 수 있는 방법으로 효모세포 내에서 형질전환과 동시에 일어나는 상동성재조합 \((in vioo homologous recombi-nation) \)에 의해 \(library \)들 제작하지 않고, 고등생물의 유전체네에 존재하는 특정 유전자 혹은 염색체 내의 특정부분만을 \(Targeting \) 하는 것과 같이 분리하는 \(TAR (Transformation-Associated Recombination) cloning \) 법이 개발되었다. 이 방법을 사용하여 특정유전자를 포함한 클론을 분리하는 종래의 방법으로 분리되지 않았던 다수의 중요한 유전자가 이 방법에 의해 분리되었다.</p> <p>\(TAR cloning \)을 시작하기 위해서는 분리하고자 하는 유전자 영역의 앙쪽 말단 \(DNA \) 염기서열에 대한 정보가 필요하다. 먼저 \(vector의 \) 양쪽 끝에 목적으로 하는 유전자 혹은 특정 염색체 부위의 끝 부분에 해당하는 염기배열을 증폭한 후, \(TAR vector \)의 \(multi-cloning site \)에 삽입하여 \(vector \)를 제작한다. 이 \(TAR vector \)에 삽입된 염기배열 부분을 \(hook (targeting sequence: \) 표직배열)이라 하며, 이 부분은 형질전환과 더불어 일어나는 상동성재조함에 이용된다. \(TAR cloning \) 법에서 상동성 재조합에 관여하는 \(hook \)은 사용되는 염기배열에 따라 크게 두 가지로 나눌 수 있다. 첫 번째는 각 목적 유전자의 \(5'- \)상류와 \(3'- \)하류 말단 부위에 존재하는 특이적 베열을 \(hook \)으로 사용하는 방법 \((two unique hook/two-specific hook) \)으로, 인간의 유방암 유전자 \(BRCA2 \)를 이 방법으로 분리하였다. \(BRCA2 \) 유전자의 상류와 하류에 위치하는 수백 \(bp \)의 단편을 양쪽 말단에 \(hook \)으로 만든 \(TAR vector와 human genome DNA \)를 효모세포로 \(co-trans-formation \)한 결과, 완전한 길이인 \( 90 \mathrm { ~kb } \)의 \( B R C A 2 \) 유전자가 선택적으로 분리되었다. 그러나 이 방법은 일부분의 \(cDNA \)배열만 알고 있는 경우는 사용한 수 잆다. 이러한 문재점을 해소하기 위해 유전자의 한쪽 부분 배열만으로 전체 게놈 \(DNA \)로부터 직접 유전자를 분리하는 다른 방법이 개발되었다.</p>