기내에서 식물체를 증식시킨 후, 순화하여 pot에 이식하였고, SWPA2p::C2C-Prx/pCAMBIA2300, E35Sp::C2C-Prx/pCAMBIA2300 그리고 벡터 control을 포함한 Agro-bacterium을 이용해 고구마 배발생 캘러스를 형질전환했다. 25℃ 암 조건에서 12시간 동안 배양하여 메칠 비올렛(MV)가 흡수되도록 하였으며, 연속 광 조건에서 추가로 24시간 배양하였다. 이후 12시간 간격으로 전기전도도계를 이용하여 용액의 이온 전도도를 측정하여 잎의 손상 정도를 조사하였다.
<h2>Methyl viologen 처리</h2> <p>\( \mathrm { MV } \) 처리를 위하여 기내에서 증식시킨 식물체를 순화하여 pot로 옮겼다. 생육 8주 된 식물체의 잎 (위로부터 5-7번째)으로부터 \( 8 \mathrm { ~mm } \) 직경의 잎 disc을 7개씩 취해 \( 20 \mu \mathrm { M } \) 의 MV를 포함하는 \( 0.4 \)M sorbitol 용액 \( 5 \mathrm { ~mL } \) 씩 들어있는 직경 \( 5 \mathrm { ~cm } \) 의 Petri dish에 각각 띄웠다. \( 25 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 암 조건에서 12 시간 동안 배양하여 \( \mathrm { MV } \) 가 흡수되도록 한 후 연속 광 조건에서 24 시간 배양하여 12 시간 간격으로 전기전도도계 (model 455C, Istek, Co., Seoul Korea)를 이용하여 용역의 이온 전도도를 측정하여 잎의 손상 정도를 조사하였다. 형질전환 식물체는 벡터 종류별 10 개체 이상을 이용하였으며, 실험은 3회 반복 실시하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>Agrobactrium 매개에 의한 형질전환 및 식울체 재분화</h2> <p>SWPA2p::C2C-Prx/pCAMBIA2300 (pSP-K), E35Sp::C2C-Prx/pC AMBIA2300 \( ( \mathrm { pEP } - \mathrm { K } ) \) 및 벡터 control \( ( \mathrm { pEV } - \mathrm { K } ) \) 을 각각 함유한 Agro-bacterium을 매개로 고구마 배발생 캘러스를 형질전환하였다. 배발생 캘러스를 2일 동안 항생제가 함유되지 않은 MS1D 배지에서 공동 배양한 후 \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) kanamycin과 \( 400 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) cefotaxime이 첨가된 MSIDCK 선발배지에서 3 주 간격으로 계대 배양하면서 선발하였다. 선발배지에서 계대배양이 진행되면서 대부분의 캘러스는 죽었지만 일부 캘러스가 배발생능을 그대로 유지하면서 중식되었다. 선발배지에서 4 개월 동안 배양된 캘러스를 2,4-D 를 제거한 BMCK 배지로 옮겨 명 조건에서 배양한 결과 체세포배가 유도되었으며 1-2개월 배양 결과 shoot와 뿌리가 유도되어 소식물체로 재분화 되었다 (Figure 2). 카나마이신 저항성 형질전환 고구마 캘러스에서 식물체 재분화의 형성은 \( 1 \% \) 미만으로 낮은 빈도를 나타내었으나 캘러스의 대부분이 체세포배로 발달하였다. 지금까지 보고된 고구마 형질전환 효율이 \( 1 \% \) 정도인 다른 보고와 비슷한 수준이었다 (Lim et al. 2004).</p>