항균활성을 측정하기 위해 Agar diffusion test와 최소저해농도(MIC) 및 최소사멸농도(MBC)를 사용하였다. 각 추출물과 분획물의 농도를 \( 100,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)로 설정하고, paper disc에 \( 50 \mu \mathrm { l } \)의 시료를 천천히 흡수시킨 후 건조 과정을 거쳐 용매를 휘발시켰다. 이러한 과정을 통해 지모 추출물의 정확한 항균활성을 측정하였다.
<p>Agar diffusion test에 의한 항균활성 측정: 각 시료의 항균활성을 ager diffusion test를 통해 측정하였다. Paper disc(diameter 8mm, Poshi kaisha. Ltd., Japan)에 각 추출물 및 분획물의 농도는 \( 100,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 로 맞추어 실험에 사용하였고, 각 paper에 시료 \( 50 \mu \mathrm { l } \) 를 천천히 흡수시켜, 건조 과정을 거쳐 용매를 휘발시켰다. 배양된 균주는 \( 1 \times 10 ^ { 6 } - \) \( 1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 로 농도를 맞춰 실험에 사용하였다. 각 균주는 평판배지에 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 씩 접종하고 멸균 면봉을 사용하여 도 말하였다. 균주를 접종시킨 평판배지 위에 각 시료를 흡수시킨 paper disc를 밀착시킨 후 배양시켜 disc 주변에 나타난 저해환(clear zone)을 통해 항균활성을 측정하였다.</p> <p>최소저해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)와 최소사멸농도(minimum bactericidal concentration, MBC) 측정: 지모 추출물의 정확한 항균활성을 알아보기 위해 최소저 해농도(minimum inhibitory concentration, MIC)를 통해 확인하였다. 실험방법은 broth-dilution method를 사용하였다. 실험에 사용된 최고 농도는 \( 10,000 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 으로, 두배 희석법을 이용하여 추출물의 항균 활성을 확인하였다. 각각의 균주는 \( 1 \times 10 ^ { 6 } -1 \times 10 ^ { 7 } \mathrm { CFU } / \mathrm { ml } \) 로 농도를 맞춰 사용하였다. 각 시료를 96-well plate에 접종한 후 \( 30-37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 대의 배양기에서 배양하였다. 배양 후, 육안으로 관찰하였을 때, 각각의 균주가 콜로니로 자라거나 증식되지 않은 농도를 최소저해농도로 결정하였고, 균이 완전히 자라지 않은 농도를 최소사멸농도(minimum bactericidal concentration, MBC)로 결정 하였다. \( 50 \% \mathrm { DMSO } \) 를 음성대조군으로, 화장품 방부제로 주로 쓰이는 메틸 파라벤을 양성대조군으로 사용하였다.</p> <h2>지모 뿌리 추출물의 항산화 활성 측정</h2> <p>DPPH법을 이용한 free radical 소거활성: 자유 라디칼은 피부 노화의 주된 원인으로 간주되고 있다. \( \mathrm { DPPH } \) 법은 시료의 라디칼 소거능을 평가할 수 있는 실험법으로서, 비교적 안정한 라디칼에 속하는 \( \mathrm { DPPH } \)에 대한 시료의 환원력을 측정하는 실험법이다. 실험 방법은 시험관에 메탄올에 용해시킨 \( 0.2 \mathrm { mM } \mathrm { DPPH } \) 용액 \( 0.3 \mathrm { ml } \) 에 에탄올 \( 0.3 \mathrm { ml } \) 를 첨가하고 여러 농도의 추출물 \( 0.3 \mathrm { ml } \) 를 첨가하여 섞은 다음 시험관을 막고 볼텍싱하여 실온에서 \( 10 \mathrm { ~min } \) 동안 암반응 후에 spectrophotometer로 \( 517 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 넣은 것을 실험군(experiment)로 하고 시료를 넣지 않은 경우를 대조군(control)으로 하였다. \( \mathrm { DPPH } \)의 소거율( \%)은 다음 식과 같이 나타내었고, \( \mathrm { DPPH } \) 의 농도가 \( 50 \% \) 감소되는데 필요한 시료의 농도를 자유 라디칼 소거활성(free radical scavenging activity, \( \mathrm { FSC } _ { 50 } \) )로 표기하였다.</p>