본 실험에서는 ABTS + 를 형성시킨 후 흡광도 값이 0.70이 되도록 희석하여 희석용액 180씨에 sample 20씨를 첨가한 뒤 1 분 동안 방치한 후 흡광도를 측정하였다. 다양한 센터에서 분양 받아 사용된 균들은 3일 계대 배양 후 성장 최적조건에서 배양 시켰으며 disc diffusion method 법을 사용하여 추출물의 향균력 검색을 실시하였다.
<h2>ABTS radical 소거 활성</h2> <p>\( 7 \mathrm { mM } \) 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonicacid) (ABTS, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA)와 \( 2.45 \mathrm { mM } \) potassium persulfate를 최종 농도로 흔합하여 실온인 암소에서 24시간 동안 방치하여 ABTS + 을 형성시킨 후 96 well에 \( 734 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도 값이 \( 0.70( \pm 0.02) \) 이 되게 phos-phate buffer saline (PBS, pH 4)로 희석하였다. 희석된 용액 \(180\mathrm{\mu l}\)에 sample \(20\mathrm{\mu l}\)를 가하여 정확히 1분 동안 방치한 후 흡광도를 측정하였다. 각 시료 추출물과 단일 물질의 유리 라디칼 소거 활성은 시료를 첨가하지 않은 대조구의 흡광도를 \( 1 / 2 \) 로 환원시키는데 필요한 시료의 농도인 \( \mathrm { RC } _ { 50 } \) 값으로 나타내었다.</p> <h2>사용 균주 및 배지</h2> <p>본 실험에서 사용한 Eschetichia coli \( \mathrm { O } 157: \mathrm { H } 7 \) 의 표준균주인ATCC 4388, Bacillus cereus의 표준균주인 ATCC 12573은 미국균주보존센터로부터, Staphylococcus aureus의 표준균주인 KCTC 1621, Listeria monaytogene의 표준균주인 KCTC 3710은 한국생명공학연구원 생물자원센터로부터, Streptococcus mu-tans 의 표준균주인 KCCM 40105, Salmanella typhimurium의 표준균주인 KCCM 11862, Pseudamanas aeruginosz의 표준균주인 KCCM 1132, Vibrio parahaemolyticus의 표준균주인 KCCM11965 을 한국미생물보전센터로부터 분양 받아 각각의 균들을 tryptic soy broth (TSB, Difco, Detroit, USA)에 1백금이 접종하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 24시간 shaking하여 3희 계대 배양 후 성장 최적조건에서 배양 시켰다. 또한, 생균수 측정을 위한 배지는 tryptic soy agar (TSA, Difco)를, 세균을 희석하기 위한 희석수로는 멸균 증류수를 사용하였다.</p> <h2>항균활성 측정</h2> <p>추출물의 항균력 검색은 disc diffusion method 법을 실시하였다. 균주를 \(100 \mathrm{ml}\) TSB에 접종하고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 shaking 하면서 24시간 배양하여 활성화시키고 3일 계대 배양 후 spectrophotometer (UNIKON922, Kontron, Milan, Italy)를 이용하여 \( 560 \mathrm { ~nm } \) 에서 O. D.값이 0.2가 되게 하여 균수를 \( 1 \times 10 ^ { 7 } \) \( \mathrm { cfu } / \mathrm { ml } \) 로 사용하였다. 고체배지에 멸균된 glass spreader로 균을 고르게 spread 한 후, \( 8 \mathrm { ~mm } \) paper disc (diamerter \( 8 \mathrm { ~mm } \), Adantec co., Tokyo, Japan)를 올려놓은 다음 추출물을 최종농도가 \( 0.5,2.5,5 \mathrm { mg } / \mathrm { disc } \) 가 되도록 DMSO에 용해시키고 \(50\mathrm{\mu l}\)를 주입하여 완전히 흡수시킨 후 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) incubator에서 24시간 배양시켜 paper disc 주위의 inhibition zone \(\mathrm{mm}\)의 직경을 측정하였다.</p>