섬유아세포에 위궤양을 일으키는 H. pylori 균을 접촉시켰을 때 생성되는 산화질소와 transforming growth factor- \( \beta \)를 정량분석하여 이들의 생성에 대한 생물활성을 이해하고 두 물질의 정량분석이 독소의 종류와 배양시간에 따라 어떤 차이를 보이는지 보고 이들의 생성양상을 밝히고자 한다. 섬유아세포는 정상인의 피부에서 조직을 구하여 EMEM이 들어간 조직배양용 접시에 넣고 3주 동안 배양한다. 배양된 세포를 NO와 TGF- \( \beta 1 \) 생성세포로 사용한다.
<p>Marshall 등에 의해서 그람음성, 미호기성, 만곡형 간균인 Helicobacter pylori가 1983년 호주에서 처음 분리된 이래로 이 균은 위내에 서식하면서 만성위염, 위십이지장계양, 위암 등과 관련을 가지고 있는 것으로 간주되고 있다. 본 실험에서는 초대배양한 정상인의 섭유아세포에 위궤양의 원인균인 H. pylori 항원을 노출시켰을 때 생성되어 나타나는 transforming growth factor- \( \beta \) (TGF- \( \beta \) 1)와 nitric oxide( \( \mathrm { NO } ) \) 를 정량분석하여 H. pylori 감염시 생체내 섬유아세포가 나타내는 이들 물질생성에 대한 생물활성을 이해하고자 한다. 또한 이들 세포에 H. pylori 항원이나, 그람 음성균의 세포벽 성분인 lipopolysaccharide (LPS), 그람 양성균인 황색포도상구균의 staphylococcal enterotoxin B(SEB)를 단독 노출 혹은 혼합 노출시켜 배양시켰을 때 나타나는 TGF- \( \beta \) 1과 \( \mathrm { NO } \)를 정량적으로 분석함으로서 독소의 중류 및 배양시간에 따른 차이를 알아내어 감염으로 인한 섬유아세포로부터의 TGF- \( \beta 1 \) 과 \( \mathrm { NO } \) 생성양상을 규명하고자 한다.</p> <h2>재료 및 방법</h2> <h3>섬유아세포의 배양</h3> <p>정상인의 피부로부터의 조직절편, 경부로부터의 조직절편 2-5 \( \mathrm { mm } ^ { 3 } \) 를 무균적으로 생검하여 \( 1 \mathrm { ~mm } ^ { 3 } \) 크기로 절편한 후 조직을 우태아혈청(fetal calf serum, FCS, Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany)울 \( 10 \% \) 추가하여 만든 Eagle's minimum essential medium(EMEM, Gibco, Grand Island, USA) \( 2 \mathrm { ml } \) 을 적하한 \( 60 \mathrm { ~mm } \) 조직배양용 접시(Costar, Cambridge, USA)에 정치하고 멸균된 cover slip으로 고정한 뒤 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 5 \% \mathrm { CO } _ { 2 } \) 배양기에 넣어 3-4일 간격으로 배지를 교환하면서 배양하였다. 약 3주 후에 배양용 접시 전체에 단층으로 형성된 섬유아세포로부터 배지를 흡입하여 버리고 인산완충식염수로 1회 세척한 후 \( 0.25 \% \)trypsin \( 0.3 \mathrm { ml } \) 을 첨가한 후 배양기에서 5분 동안 방치하였다. 박리된 세포들은 \( 10 \% \) FCS EMEM 으로 재부유시켜 TGF- \( \beta 1 \) 및 NO생성세포로 사용하였다.</p>