자외선을 표피에 처리하면, ROS가 생성되며 이는 세포의 단백질, DNA 및 지질을 파괴하고, MMPs의 발현을 촉진해 세포외기질을 파괴해 노화를 촉진한다. 본 연구에서는 인동덩굴에서 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물 얻어 이들의 ROS 소거 활성을 측정하는 실험을 진행하였다. 실험결과 두 물질 모두 농도 의존적으로 ROS를 감소시켰으며, 최고 농도에서 두 물질을 비교한 결과 에틸아세테이트 분획물이 더 뛰어난 성능을 보였다. 다음으로 TLC 분석을 통해 두 물질의 성분을 확인한 결과 coumaric acid, apigenin, caffeic acid, luteolin 등을 볼 수 있었다.
<h3>세포 내 ROS 소거 활성.</h3> <p>피부의 최외각 방어망인 표피에 자외선을 처리하면 세포 내 생성된 ROS가 세포의 구성 성분인 단백질, DNA 및 지질을 손상시키고 콜라겐, 엘라스틴과 같은 세포외기질을 분해시키는 MMPs의 발현을 촉진시켜 피부 노화를 가속화시킨다. 그러므로 세포 내 ROS 억제 작용이 있는 항산화 물질은 피부 노화를 억제할 수 있다. 따라서 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물의 각질 형성 세포 내 UVB로 유도된 ROS 소거 활성을 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { DCF } - \mathrm { DA } \) 를 이용하여 측정하였다.</p> <p>실험 결과, UVB를 조사한 실험군은 조사하지 않은 군 \(100 \% \)에 비해 \( \mathrm { ROS } \) 가 \( 453.6 \% \) 로 증가하였다. 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물 및 에틸아세테이트 분획물을 \( \mathrm { HaCaT } \) 세포에 \( 0.4-12.5 \mathrm { gg } / \mathrm { ml } \) 농도 범위로 \( 24 \mathrm { ~h } \) 처리하였을 때, 모두 농도 의존적으로 ROS 감소를 나타내었다. \( 50 \% \) 에탄올 추출물의 경우 UVB 처리군에 비해 \( 1.56 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상에서 유의적 감소를 나타냈으며, 각각 \( 33.9,39.7,44.3,45.2 \% \) 감소율을 나타내었다. 그에 반해, 에틸아세테이트 분획물의 경우 \( 0.78 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 이상에서 유의적 감소를 나타냈으며, 각각 \( 22.7 \), \( 33.3,47.2,52.9,63.3 \% \) 의 감소율을 나타내었다. 게다가 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물과 에틸아세테이트 분획물을 비교했을 때, 최고 농도 \( 12.5 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 에서 유의적 차이가 있음을 통계적으로 관찰함으로써 세포 내 ROS 억제 효능이 인동덩굴 \( 50 \% \) 에탄올 추출물보다 에틸아세테이트 분획물에서 더욱 뛰어남을 확인하였다.</p> <h3>인동덩굴 추출물의 TLC 및 HPLC 성분 분석.</h3> <p>물의 TLC 크로마토그램은 Fig. 8에 나타내었다. Fig. 8은 인동덩굴 에틸아세테이트 분획물의 TLC 크로마토그램이며, 크게 6 개의 띠로 분리되었다. 이 중 4 개의 띠를 UV 및 NP-PEG 발색법을 이용해 확인하였다. 실험 결과, \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) 값이 \( 0.74 \)인 LJT1은 coumaric acid로 나타났고 \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) 값이 \( 0.63 \) 인 LJT2 는 apigenin, \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) 값이 \( 0.54 \) 인 LJT3는 caffeic acid, \( \mathrm { R } _ {\mathrm { f } } \) 값이 \( 0.40 \) 인 LJT4는 luteolin으로 확인되었다. 확인된 성분중에 caffeic acid와 luteolin이 가장 진한 색의 띠를 나타내었다.</p>