본 실험에 사용된 오징어는 물오징어로 평균 체중 295.7 \mathrm{~g}295.7 g, 전장 40.5 \pm 1.1 \mathrm{~cm}40.5\(\pm\)1.1 cm, 외투장 23.3 \pm 1.0 \mathrm{~cm}23.3\(\pm\)1.0 cm 이다. 구입 즉시 내장 부위로 각각 나누어 -40^{\circ} \mathrm{C}−40 \(^\circ \mathrm{C}\) 냉동고에 저장하여 두고서 실험하였다. 콜레스테롤 정량용 키트는 Wako chemicals Ltd에서 구매하여 그대로 사용하였다. 기타 시약과 용매는 연구급 수준의 것을 쓴다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료</h2><p>본 실험에 사용된 오징어 시료는 강원도 강릉 근해에서 1998년 1월에 어획된 물오징어, Todarodes pacificus STEEN STRUP이었고, 평균 체중 \( 295.7 \mathrm{~g} \), 전장 \( 40.5 \pm 1.1 \mathrm{~cm} \), 외투장 \( 23.3 \pm 1.0 \mathrm{~cm} \) 이었다. 구입 즉시 귀, 몸통, 다리와 족살, 눈, 간장, 간장 이외의 내장 부위로 각각 나누어 \( -40^{\circ} \mathrm{C} \) 냉동고에 저장하여 두고서 필요시 꺼내어 실험하였다.</p><h2>시약</h2><p>콜레스테롤과 \( 5 \alpha \)-cholestane은 Nakarai chemicals Ltd(Kyto, Japan), 효소법에 의한 콜레스테롤 정량용 키트는 Wako chemicals Ltd (Oosaka, Japan)에서 구입하여 더 이상 정제없이 그대로 사용하였다. 기타 시약과 용매는 분석급 수준의 것을 사용하였다.</p><h2>수분함량 측정</h2><p>상압가열법으로 시료 중의 수분함량을 측정하였다.</p><h2>시료 지질의 추출 및 지방함량 측정</h2>Bligh and Dyer법에 의해 총지질을 추출한 뒤, 그 추출물을 감압농축하여 중량 측정함으로써 지방함량을 결정하였다.</p><h2>지방종 분석 및 latroscan법에 의한 골레스테롤 정량</h2><p>추출 시료 지방을 일정량 취하여 TLC에 spot하고서 Hexane-Ethylether-Formic acid (\(80:20:1\)) 전개 용매내에서 분리한 뒤 TLC-FID system인 Iatroscan TH-10 (Iatroscan Laboratories, Japan)으로 지방종 분석을 행하였다. 한편, 콜레스테롤 정량을 위해서는 시료유지에 일정량의 \( 5 \alpha \)-cholestane을 내부표준물질로서 첨가하여 Iatroscan 전용 TLC봉에 loading한 후 Hexane-Ethylether-Formic acid (\(80:20:1\)) 전개용매 내에서 분리한 뒤 Iatroscan으로 분석하였다. 콜레스테롤 함량은 Fig. 1에 나타낸 검량선으로부터 환산하여 정하였다.</p><h2>효소법에 의한 콜레스테롤 정량</h2><p>Wako chemicals Ltd (Oosaka, Japan)에서 시판 중인 콜레스테롤 분석용 키트를 사용하여 Nakagawa등의 방법에 준해 분석하였다.</p><h2>가스크로마토그래피(GC)법에 의한 콜레스테롤 정량</h2><p>시료로부터 추출한 불검화물 획분에 내부표준물질로서 5\( \alpha \)-cholestane을 일정량 첨가하여 \( \mathrm{GC} \) 로 분석하였다. 분석조건은 다음과 같았다. 장치는 GC Sciences GC-380 (Japan), 유리칼럼 \( 3 \mathrm{~mm} \times 100 \mathrm{~cm} \) 에 일본 크로마토공업 시판의 DMCS (80-100mesh)를 충전하였다. 이동상 가스 \( 70 \mathrm{ml} / \mathrm{min} \), 칼럼 온도 \( 260^{\circ} \mathrm{C} \), 시료기화실 온도 \( 290^{\circ} \mathrm{C} \), 검출기 온도 \( 300^{\circ} \mathrm{C} \) 로 설정, 정량값은 기본적으로 반치폭법에 의해 면적비를 구해 산출하였다. 최종 분석치는 Fig. 2에 나타낸 \( 5 \alpha \)-cholestane에 대한 콜레스테롤의 면적비와 중량비로써 구해둔 콜레스테롤 검량선으로부터 계산하여 정하였다.</p>