U937 세포에 FS, FBA 및 FYA를 다양한 농도로 1시간 동안 선행 처리 후, PMA를 사용하여 6시간 동안 배양한 후에 PGE2 EIA kit를 이용하여 반응을 측정한 실험을 설명하는 본문이다. 5mg/ml의 농도로 FS, FBA 및 FYA를 처리하였을 때, 약 80%의 생존율을 나타내며 세포사멸 현상은 발견되지 않았다. 또한, PMA를 적정 농도로 6시간 처리했을 때 COX-1에서는 변화가 없었지만, COX-2에서는 40nM의 농도에서 강한 발현을 확인하였다.
<h2>Prostaglandin E_2의 측정</h2> <p>PGE_2 생성량 측정을 위해 사용한 PGE_2 EIA kit는 Cayman Chemicals (Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다. U937 세포 에 다양한 농도의 FS, FBA 및 FYA를 1 시간 선 처리 후, PMA \( (40 \mathrm { nM } ) \) 를 처리한 배지에서 6시간 동안 세포를 배양시킨 후 상층액만 이용하여 \( \mathrm { PGE } _ { 2 } \) EIA kit에 제시된 방법에 따라 처리 한 다음 ELISA reader를 이용한 \( 420 \mathrm { ~nm } \) 의 흡광도로 반응의 정도를 측정하였다.</p> <h1>결 과</h1> <h2>세포증식에 미치는 FS, FBA 및 FYA의 영향</h2> <p>다양한 농도의 FS, FBA 및 FYA가 처리된 U937 세포의 증식 억제 여부를 알아보기 위하여 MTT assay를 이용하였다. Fig. 1 에서 나타난 바와 같이 FS, FBA 및 FYA를 6시간동안 5 \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 농도까지 처리하였을 때 \( 80 \% \) 전후의 생존율을 보였으며, 세포사멸 현상은 관찰되지 않았다. 따라서 \( 80 \% \) 이상의 생존을 보인 \( 3 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 농도를 실험 조건 농도로 설정하였다.</p> <h2>\( C_ { C } X_ { S } \) 의 발현에 미치는 PMA의 영향</h2> <p>U937 세포에서 PMA 처리에 의한 COX-1 및 COX-2의 발현 변화정도를 Western blotting으로 조사하였다. PMA를 적정 농도별로 6시간 처리하였을 경우 COX-1의 경우는 아무런 변 화가 관찰되지 않았지만 COX-2의 경우는 \( 40 \mathrm { nM } \) 의 농도에서 강하게 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 PMA 처리시간에 따른 발현정도를 비교해 본 결과 COX-1은 아무런 변화가 없었지만 COX-2는 처리시간 증가에 따라 발현양이 증가되어 6 시간에서 현저하게 중가되는 것을 관찰할 수 있었다.</p>2에 통합<h2>PMA에 의한 COX-2 의 발현증가에 미치는 FS, FBA 및 FYA의 영향</h2> <p>U937 세포에서 PMA에 의한 COX-2의 과발현 현상에 대한 FS, FBA 및 FYA의 영향을 조사하기 위하여 FS, FBA 및 FYA를 \( 3 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 농도로 단독 처리하였을 경우와 PMA를 1 시간 처리한 후 FS, FBA 및 FYA를 처리하여 6시간 경과 후의 COX-1 및 COX-2의 발현정도를 전사 및 번역 수준에서 조사 하였다. Fig. 3의 결과에서 알 수 있듯이 COX-1의 경우는 아무런 변화가 나타나지 않았지만 PMA에 의해서 과발현된 COX-2의 경우는 mRNA 및 단백질 발현 모두에서 FS, FBA 및 FYA의 처리에 의해서 현저히 감소하는 것으로 나타났다. 븍히 FYA 처리군에 경우 FS 및 FBA 처리군에 비해 PMA에 의하여 과발현된 COX-2의 억제 정도가 가장 높게 나타났다.</p>