이 연구에서 사용한 뉴로베이잘 배지는 혈청이 첨가되지 않은 배지로, 거의 증식이 없어 대부분의 세포가 신경세포로 형성되는 것으로 알려져 있으며 약재 추출물의 효과를 확인하기 위해, 뉴로베이잘 배지에 약재 추출물을 첨가하여 대뇌세포를 배양하였고, 배양 후 12시간에 효과를 관찰하였다. 또한 HK, HC, HS, HSC를 배지에 첨가한 경우, 돌기의 수는 대조군에 비해 각각 약 \( 112.5 \pm 35,125 \pm 40,128 \pm 35,150 \pm 38 \% \) 증가하였습니다.
<h1>결 과</h1> <h3>배양 대뇌신경세포의 초기성장단계의 구분</h3> <p>\( \mathrm{E}_{18} \) 대뇌세포의 배양 12 시간째 위상차 현미경으로 관찰하였다(Fig. 1). 대뇌신경세포는 배양 시작 후 2시간 정도부터 신경가지돌기를 내기 시작하며, 12시간 후에는 \( 10 \sim 20 \mu \mathrm{m} \) 까지 자란다. 대뇌세포는 배양초기에는 신경가지돌기가 없는 원형 형태(Fig. 1의 화살표머리)로서 이 단계를 층판족(lamellipodia)가지(minor process) 단계(제2단계, Fig. 1의 화살표)라 하며,그 중간에 부채꼴 모양으로 신경가지돌기가 발생하는 단계를 제1.5단계(Fig. 1의 별표)라 하였다. 본 실험에 사용한 뉴로베이잘 배지는 혈청이 첨가되지 않은 배지로서 신경교세포는 약 \( 10 \% \) 정도로 거의 증식이 일어나지 않아 대부분이 신경세포로 구성되어 있다.</p> <h3>황금 추출물 \( (\mathrm{HK}) \), 황금 \( + \) 천마 복합 추출물 \( (\mathrm{HC}) \), 황금 \( + \) 석창포 복합 추출물 \( (\mathrm{HS}) \) 및 황금+석창포+천마 복합 추출물 \( (\mathrm{HSC}) \) 가 신경세포의 초기 형태발생에 미치는 영향</h3> <p>약재 추출물이 신경세포의 초기 형태발생에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물을 첨가한 뉴로베이잘 배지에 \( \mathrm{E}_{18} \)대뇌세포를 배양하고 그 효능을 배양 12 시간 후에 관찰하였다. 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 제 \( 1.5 \) 및 제 2 단계로 접어든 빈도가 증가하였다(Fig. 2A). 이를 통계(현미경 시야 수 =20, 세포 수=400 내지 600,4 회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 2B). HK, HC, HS,\( \mathrm{HSC} \) 를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 제 2 단계 세포들의 비율이 각각 \( 2.76 \pm 0.5,3.07 \pm 0.6,6.18 \pm 0.7,7.04 \pm 0.6 \) 배로 매우 유의한(p<0.001) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포의 초기 형태적 발생을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p> <h3>\( \mathrm{HK}, \mathrm{HC}, \mathrm{HS}, \mathrm{HSC} \) 의 신경가지돌기 수에 미치는 영향</h3> <p>약재 추출물이 신경가지돌기의 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 추출물이 첨가된 뉴로베이잘 배지에 \( \mathrm{E}_{18} \) 대뇌세포를 배양하고 24 시간 후에 관찰하였다. 대조군에 비하여 추출물을 첨가한 배지에서 자란 세포들은 일반적으로 돌기의 수가 증가하였는데 통계(현미경 시야 수=20, 세포 수=400 내지 600, 4회 반복 실험)적으로 조사하였다(Fig. 3). HK, HC,HS, HSC 를 배지에 첨가하였을 경우 대조군에 비하여 돌기의 수가 각각 \( 112.5 \pm 35,125 \pm 40,128 \pm 35,150 \pm 38 \% \) 로 증가하였으며,HC 및 HS 의 경우 유의한 \( (\mathrm{p}<0.05) \) 증가, HSC 의 경우 매우유의한 \( (\mathrm{p}<0.01) \) 증가를 보였다. 이는 이 추출물들이 신경세포의 초기 돌기의 생성을 촉진하는 효능이 있음을 의미한다.</p>