본 실험은 PMA, FSB 그리고 TFS가 U937 세포 증식에 미치는 영향을 분석한다. 먼저 RT-PCR을 통해 mRNA의 분석하고 Prostaglandin \( { E } _ { 2 } \) 생성 양을 확인하였다. \(PGE_ { 2 } \)생성 양은 U937 세포에 다양한 농도의 FSB 및 TFS를 처리하고 PMA 처리한 배지에서 배양한 후 흡광도를 측정해 확인하였다. 그 결과 PMA \( 40 \mathrm { nM } \)와 FSB 및 TFS \( 2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 는 U937 세포의 증식에 아무런 영향을미치지 않았다.
<h2>Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)에 의한 mRNA의 분석</h2> <p>동일 고전에서 배양된 세포를 PBS로 세척하고 TRIzol re-agent (Invitrogen Co., Carlsbad, CA, USA)를 \( 4 { } ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 1 시간 동안 처리하여 total RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정랑한 후, 각각의 primer, DEPC water 그리고 ONE-STEP RT-PCR PreMix Kit를 넣고 Mastercycler gradient 를 이용하여 증폭하였다. 각 PCR 산물들의 양적 차이를 확인하기 위하여 1X TAE buffer로 \( 1 \% \) agarose gel을 만들고 well 당 각각의 primer에 해당하는 PCR 산물에 DNA gel loading solution을 섞어서 loading 한 후 \( 100 \mathrm { ~V } \) 에시 전기영동을 행하였다. 전기영동으로 DNA 분리가 끝난 gel을 EtBr를 이용하여 염색한 후 UV 하에서 확인하고 Picture works' photo enhancer를 이용하여 시진 촬영을 하였다. 이때 house-keeping 유전자인 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogen-ase (GAPDH) 유전자를 internal control로 사용하였다.</p> <h2>Prostaglandin \( { E } _ { 2 } \) 의 측정</h2> <p>Prostaglandin \( { E } _ { 2 } \) ( \(PGE_ { 2 } \)) 생성 양의 측정을 위한 ( \(PGE_ { 2 } \)) EIA kit는 Cayman Chemicals에서 구입하였으며, ( \(PGE_ { 2 } \))의 양을 측정하기 위하여 U937 세포에 다양한 농도의 FSB 및 TFS를 1시간 선 처리 후 PMA ( \(40 \mathrm { nM } \) )를 처리한 배지에서 6 시간 동안 세포를 배양시킨 다음 상층액만 이용하여 제시된 방법에 따라 처리한 다음 ELISA reader를 이용한 \( 420 \mathrm { ~nm } \) 의 흡광도로 반응의 정도를 측정하였다.</p> <h1>결과 밎 고찰</h1> <h2>세포의 증식에 미치는 PMA, FSB 및 TFS의 영향</h2> <p>FSB 및 TFS를 단독 처리했을 경우와 PMA와 같이 처리했을 경우 U937 세포의 증식에 미치는 영향을 알아보기 위하 MTT assay를 이용하였다. FSB를 6시간동안 처리했을 경우는 \( 3.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 농도까지 아무런 변화가 나타나지 않았고, TFS의 경우는 \( 2.5 \) 및 \( 3.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 농도에서는 세포의 증식이 유의적으로 감소하였지만 \( 2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 이하의 농도에서는 변화가 관찰되지 않았다. 또한 FSB 및 TFS를 1 시간 선처리한 다음 \( 40 \mathrm { nM } \) 의 PMA를 6시간동안 처리했을 경우는 \( 2 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \)의 농도까지 세포의 중식에 아무런 변화가 관찰되지 않았다. 이상의 결과에서 \( 40 \mathrm { nM } \) 의 PMA와 \( 2.0 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 FSB 및 TFS 는 U937 세포의 증식에 아무런 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다.</p>