항생제 함유 재분화 선발배지에서 백화되지 않고 정상적으로 성장한 식물체는 유전자 도입이 성공적으로 이루어진 형질전환체로 판명되었다. 이를 바탕으로 merBl, merB4 두 라인을 연구 재료로 활용하였다. PCR과 northern blot 분석을 통해 merBl, merB4 라인에 유전자가 안정적으로 삽입되고 발현되는 것을 확인하였다. 또한, 이들 라인은 최대 2μM의 MMC에 저항성을 보였으며, 대조구 잎은 0.5 μM MMC에서 백화되어 고사하는 결과를 보였다.
<h2>유전자 발현 확인</h2> <p>대조구 식물체 잎 절편이 백화되어 고사하는 농도의 항생제가 포함된 재분화 선발배지 (MS, sucrose \( 3 \%, 40 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) hygromycin, \( 500 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) carbenicillin, \( 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) NAA, \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) \( \mathrm { BA } \) 에서 정상적으로 자라는 식물체는 유전자가 도입된 형질전환체라고 1 차적으로 판단을 할 수 있었다. 좀 더 명확히 유전자 도입 및 발현을 확인하기 위하여 PCR analysis를 실시하였다. 그 결과, 대조구는 증폭된 \( \operatorname { merB } \) 유전자 밴드를 찾아볼 수 없었고 5 개의 헝질전환체에서는 \( 403 \mathrm { bp } \) 의 \( \operatorname { merB } \) 유전자 단편이 증폭된 것율 확인하였다 (Fig. 2). 또한 \( \operatorname { merB } \) 유전자의 \( \mathrm { mRNA } \) 수준에서의 발현을 확인하기 위해서 northern blot 분석을 실시한 걸과, 형질전환 두 개 라인 (merBl, merB4)에서 \( \operatorname { merB } \) 유전자의 발헌을 확인 할 수 있었다 (Fig. 3). 이 결과를 바탕으로 향후 merBl, merB4 두 라인을 연구재료로. 사용 하였다.</p> <h2>형질전환 까마중(Solanum nigrum)의 수은 저항성 검정</h2> <p>\( \mathrm { PCR } \) 분석과 northern blot 분석을 통하여 유전자가 식물체에 안정적으로 삽입되고 발현되는 merBl, merB4 두 라인을 선발하였다. 이러한 분자유전학적 확인 이외에도 merB 유전자 발현에 의해서 실제로 수은에 저항성을 나타내는지 확인하기 위하여 MS 재분화 배지 (MS, sucrose \( 3 \%, 0.1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \) \( \mathrm { NAA } , 1 \mathrm { mg } / \mathrm { L } \mathrm { BA } \) 에 유기수은 제제인 MMC와 PMA를 \( 0.5 \), \( 1,2,5,10,20,40,60 \mu \mathrm { M } \) 농로로 처리하고 \( \operatorname { merBl } \), merB4 라인 까마중 잎 절편의 재분화를 유도하여 수은저항성 정도를 알아보았다. 그 결과 \( \operatorname { merB1 } , \operatorname { merB4 } \) 라인은 최고 \( 2 \mu \mathrm { M } \) 까지 MMC에 저항성을 보이며 잎 조직으로부터 재분화가 일어났다. 반면 대조구 잎은 \( 0.5 \mu \mathrm { M } \mathrm { MMC } \) 에서도 잎 절편이 흰색으로 백화되어 고사하였다 (Fig 4).</p>