Streptococcus iniae는 다양한 양식어종에 연쇄구균증을 유발하여 경제적 손실률이 높은 병원체이다. Streptococcus iniae의 계통유전학적 연구와 같은 연구에 대한 보고가 국내에서는 한정적이므로 PCR을 기반으로 하는 RAPD 기볍을 사용하여 각 serotype에 대한 DNA fingerprint pro-file을 비교하고자 한다. 2004년부터 2005년까지 제주도 양식장 전역에서 전형적인 연쇄구균증을 나타내는 양식넙치를 대상으로 연쇄구균을 배양하였으며, 배양된 연쇄구균은에서 Genomic DNA를 분리하였다.
<h1>Streptococcus iniae의 유전학적 다양성과 RAPD fingerprint profile의 비교</h1> <h2>서 론</h2> <p>Streptococcus iniae는 일반적으로 전 세계 다양한 양식어종에 연쇄구균증을 유발하며, 병원성도 비교적 강하여 경제적 손실률이 높은 병원체로 알려져 있다. 또한 근래에 들어 미약하기는 하나 인간에게도 병원성이 있는 것으로 보고되고 있어, 본 병원체에 대한 연구적 관심이 높아지고 있는 병원체이다 \( [11,13] \).</p> <p>RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) 분석기법은 PCR (Polymerase Chain Reaction) 기법을 기반으로 하여 DNA fingerprint profile을 얻어내고 유연관계를 분석하여 종간, 종내 유전학적 다양성을 비교적 용의하게 분석할 수 있는 방법이다[2]. 근래에 들어 이러한 기법을 이용하여 여러 연구자들이 어류의 병원성 세균에 대해 유전학적 다양성을 연구하였고, 국가별 혹은 지역별 DNA fingerprint pro-file들을 구축하여 전염병학적 연구에 기초 자료로 활용하고자 하고 있다 \( [1,2,6,12,14] \).</p> <p>이러한 가운데 국내에서는 주로 어류병원체로서의 특성 등에만 국한되어 이루어졌고 세부적으로 S. iniae의 혈청형 분류 연구나 계통유전학적 연구보고는 미약한 실정이다. 따라서 국내에 존재하는 S. iniae의 계통유전학적 분류 형질을 파악하고 자료화가 필요한 실정이다.</p> <p>한편, Bachrach[1]은 S. iniae의 각 serotype이 가지는 RAPD fingerprint profile에 대해 연구 보고하였는데, sero-type I 과 serotype \( Ⅱ \) 의 RAPD fingerprint profile이 다른 것으로 보고하였고, Zlotkin[16]은 serotype 가 항포식작용(antiphagocytic activity)이 높고, 대식세포의 세포사(apoptosis)를 유도하는 능력을 가져 병원성이 더욱 강력한 것으로 보고하였다. 따라서 Bachrach[1]이 S. iniae의 각 sero-type을 RAPD fingerprinting 기법으로 분류하였던 RAPD primer를 이용하여 국내 균주에 대한 혈청형의 분류에 적용해보거나 또는 계통유전학적 분류 연구를 수행해 볼 필요성이 있는 것으로 사료된다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h3>연쇄구균의 배양</h3> <p>2004년부터 2005년까지 제주도 양식장 전역에서 전형적인 연쇄구균증을 나타내는 양식넙치를 대상으로 신장, 뇌, 안구등에서 \( 1.5 \% \mathrm { NaCl } \) 첨가 BHIA (Brain Heart Infusion Agar)와 혈액배지에 \( 22 ^ {\circ } \mathrm { C } , 24-48 \) 시간 배양하고 간이 동정을 실시하여 순수 분리를 하였다. 또한 공시균주인 S. iniae KCTC-3657, S. parauberis KCTC-3651，S. pyogenes KCTC-3096 Lactococcus garveiae KCTC-3772를 한국 세포주 은행에서 분양 받아 본 연구에 사용하였다.</p> <h3>Genomic DNA의 분리</h3> <p>순수배양 된 Streptococcus sp. 들을 lysozyme \( (10 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } ) \) \( 60 \mu \) 씩 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } , 2 \) 시간 처리한 후 Bioneer사의 Genomic DNA extraction kit manual에 따라 분리하였다. 분리 후에 \( 1 \% \) agarose gel 상에서 \( 100 \mathrm { ~V } , 25 \) 분간 수평 전기영동하여 단일 밴드로 나타나는 것을 확인하였다. 분리된 genomic DNA는 UV/VIS spectrophotometer로 \( 260 \mathrm { ~nm } \) 와 \( 280 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하여 정량을 하였다.</p>