염증반응의 대표적인 매개물질인 \( \mathrm{NO} \)는 iNOS라는 효소에 의해 생합성되는데, Septicine의 처리가 LPS로 유도된 \( \mathrm{NO} \)의 분비를 억제하였기 때문에, \( \mathrm{NO} \)의 생성을 매개하는 iNOS의 발현에 대한 septicine의 영향을 조사하였고, iNOS 단백질 발현 양의 변화를 관찰한 결과, septicine의 처리는 농도 의존적으로 LPS에 의해 유도된 iNOS 단백질 발현 양이 감소됨을 확인했다. 대식세포인 RAW264.7세포를 LPS에 노출시키면 현저한 \( \mathrm{NO} \)및 염증성 사이토카인의 생성을 유발할 수 있는데 septicine은 이러한 염증매개물질의 생성억제를 세포독성이 없는 농도에서 억제하였다.
<p>RAW264.7 세포에서 LPS 자극에 의해 생성되는 염증성 사이토카인에 대한 septicine의 영향을 조사하기 위해 다양한 농도의 septicine과 LPS \( (100 \mathrm{ng} / \mathrm{ml}) \)를 처리한 후, 세포 배양액으로 분비된 IL-6 및 TNF- \( a \)를 측정하였다. IL-6의 경우 \( 125 \mathrm{nM} \) 및 그 이상의 농도의 septicine의 처리가 IL-6의 분비를 유의적으로 억제하였으며, TNF-a는 septicine \( 500 \mathrm{nM} \) 및 그 이상의 농도에서부터 유의적으로 감소하였다. 이와 같은 결과는 LPS에 의해 활성화된 RAW264.7 세포에서의 septicine의 처리는 염증성 매개물질(NO, IL-6 및 TNF-a)의 생성을 억제함으로 항염증 활성을 나타낸다는 것을 시사하고 있다.</p> <p>염증반응의 대표적인 매개물질인 NO는 iNOS라는 효소에 의해 생합성 된다. Septicine의 처리가 LPS로 유도된 \( \mathrm{NO} \)의 분비를 억제하였기 때문에, \( \mathrm{NO} \)의 생성을 매개하는 iNOS의 발현에 대한 septicine의 영향을 조사하였다.</p> <p>RAW264.7 세포에 septicine \( 62.5,125,250,500 \mathrm{nM}\)과 LPS \(100 \mathrm{ng} / \mathrm{ml} \)을 동시 처리 또는 LPS를 단독 처리하여 24시간 배양하여 Western blot으로 확인하였다. iNOS 단백질 발현 양의 변화를 관찰한 결과, septicine의 처리는 농도 의존적으로 LPS에 의해 유도된 iNOS 단백질 발현 양을 감소시킴을 관찰 할 수 있었다. 이러한 결과는 septicine의 의한 iNOS 단백질 발현 양의 감소가 \( \mathrm{NO} \) 생성을 억제한다는 것을 시사하고 있다.</p> <p>염증반응은 외부항원에 의해 활성화된 다양한 면역세포들에 의해 매개되는 복잡한 과정이며, 대식세포는 LPS와 같은 염증유발불질에 의해 활성화되어 TRL- 4 의 발현을 자극한다. TLR-4는 LPS/CD14 복합체에 대한 막 투과성 수용체로 염증유도의 단계적 과정을 활성화 한다. 이러한 기전을 통하여 \( \mathrm{NO} \)를 포함하는 염증매개물질이 유도된다.</p> <p>본 연구에서는 대식세포인 RAW264.7 세포를 LPS에 노출시키면 현저한 \( \mathrm{NO} \) 및 염증성 사이토카인의 생성을 확인 할 수 있는데 septicine은 이러한 염증매개물질의 생성억제를 세포독성이 없는 농도에서 억제 하였다. 위의 사실에 기초하여 \( \mathrm{NO} \) 생성저해의 기전을 알아보기 위해 Western blot을 이용하여 iNOS의 발현을 분석한 결과 \( \mathrm{NO} \) 생성억제와 유사한 경향을 나타냄으로써 \( \mathrm{NO} \) 의 생성 억제는 iNOS의 발현저해를 경유한 것임을 알 수 있었다. 이상의 결과를 요약하면 septicine은 염증반응의 주체가 되는 대식세포에서 LPS에 의해 유도되는\( \mathrm{NO} \), TNF-a, IL-6 등과 같은 염증매개물질의 생성을 억제함으로 항염증 작용을 나타내는 것으로 보인다. 차후 septicine의 항염증 작용의 기전 및 in vivo에서의 septicine의 항염증 작용에 대한 검증이 필요할 것으로 사료된다.</p>