봉독 처리에 의한 A549 세포의 증식 억제와 telomerase 활성 감소 사이의 관계를 조사하기 위해 telomere 조절 인자들과 전사 조절 인자의 발현에 봉독의 영향을 조사했다. Telomere 길이 조절에 중요한 역할을 하는 3가지 유전자인 hTERT, hTR, 그리고 TEP-1과 특히 hTERT의 발현을 조절하는 두 가지 전사 조절 인자인 c-myc와 Sp-1의 발현에 봉독이 미치는 영향을 조사했다. Fig. 3B의 결과에서는 봉독 처리된 배지에서 자란 A549 세포의 telomerase 활성이 봉독 처리 농도가 증가함에 따라 감소하는 경향을 보여준다. 이는 봉독에 의한 A549 세포의 증식 억제가 telomerase 활성 감소와 관련이 있음을 나타내며, 이는 hTERT, hTR, c-myc와 같은 telomere 조절 인자들의 발현 변화와 관련이 있음을 시사한다.
<h2>Telomere 조절인자들의 발현에 미치는 봉독의 영향</h2> <p>Ttelomere는 진핵세포의 염색체 말단 부위에 존재하는 re-peat sequences [(TTAGGG) \( n \) ]로 이루어져 있고, 이러한 반복구조의 형성 및 유지에 필수적으로 관여하는 효소가 telomer-ase이다. 대부분의 정상 체세포는 telomerase의 활성이 없기 때문에 세포가 분열할수록 telomere의 길이는 짧아지게 되지만, 암세포의 90% 이상에서는 telomerase의 catalytic sub-unit 단백질을 coding 하는 human telomerase reverse tran-scriptase (hTERT)가 과발현으로 높은 telomerase의 활성을 나타내고 있다. 따라서 telomerase 활성 변화는 노화, 혈관신생 및 면역계질환 등에서 뿐 만 아니라 암의 발생과 진행과도 밀접한 연관성이 있으며, 암의 진단과 진행의 정도를 나타내는 지표로 사용되고 있다. 노화 조절의 측면에서 telo-mere의 소실은 염색체의 안정성 소실을 야기하는 것으로. 특히 암과 연관된 부분에서 telomerase의 활성은 hTERT 유전자의 발현 조절에 의한 것이고, hTERT 유전자의 promoter 부위에는 다른 유전자의 promoter 보다 훨씬 더 많은 전사조절인자의 결합부위를 보유하고 있어 activator 또는 repressor로 작용할 수 있다. 따라서 암세포에서 높은 활성을 지니는 telomerase의 활성을 선택적으로 억제함으로서 암세포의 성장과 분열을 억제하고자하는 시도는 새로운 항암제 개발을 위한 표적이 되고 있다.</p> <p>봉독 처리에 의한 A549 세포의 증식억제가 telomere 조절인자들의 발현 변화와 어떤 연관성을 지니는지를 조사하기 위하여 telomere 길이에 조절에 가장 중요한 역할을 하는 3가지 유전자[hTERT, human telomerase RNA (hTR) 및 telomer-ase-associated protein (TEP)-1]와 특히 hTERT의 발현 조절에 관여하는 두 가지 전사조절인자(c-myc 및 Sp-1)의 발현에 미치는 봉독의 영향을 조사하였다. 이를 위하여 정상 및 봉독이 처리된 배지에서 48시간 동안 배양된 A549 세포들을 대상으로 RT-PCR을 실시하였다. Fig. 3A의 결과에서 알 수 있듯이 봉독의 처리 농도 증가에 따라 조사된 유전자 중 hTERT, hTR 및 c-myc의 mRNA 발현이 매우 감소되는 경향성을 보여 주었으나, TEP-1 및 Sp-1의 발현에는 큰 변화가 없었다. 이러한 telomere 조절인자들의 발현 변화는 telomere 길이 조절에 직접적으로 중요한 조절 역할을 하는 telomerase 효소의 활성 변화와 연관성이 있을 것으로 추정되므로 이를 확인하기 위하여 TRAP-ELISA를 통하여 봉독이 처리된 A549 세포의 telo-merase 효소 활성의 변화 여부를 조사하였다. Fig. 3B의 결과에서 알 수 있듯이 봉독 처리된 배지에서 자란 A549 세포의 telomerase 활성은 봉독의 처리 농도가 증가될수록 매우 감소되는 경향성을 보여주어 봉독에 의한 A549 세포의 증식 억제가 telomerase 활성 저하와 연관성을 지니며, 이는 hTERT, hTR 및 c-myc과 같은 telomere 조절 인자들의 발현 변화와 연관되어 있음을 알 수 있었다.</p>