Glycosyl glyceride 1과 2의 알칼리 가수분해를 위해 KOH/MeOH 농도 20%로 녹여 80\(^\circ \mathrm{C}\)의 항온 수조에 60분 동안 방치한 후, TLC로 초기 물질의 소멸 양상을 관측하고 산성 양이온 교환수지를 이용해 CHCl3-EtOH = 7:1로 중화하고 여과한 후 GC/MS 분석을 통해 지방산을 동정하였다.
<h2>Glycosyl glyceride \(1 \) 과 \(2 \) 의 알칼리 가수분해</h2> <p>각 화합물 \( (1.0 \mathrm { mg } ) \) 을 \( 20 \% \mathrm { KOH } / \mathrm { MeOH } (2 \mathrm { ~mL } ) \) 에 녹여 \( 80 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 의 항온 수조에 60 분 동안 방치하였다. 이를 실온에서 식힌 후, \( \mathrm { TLC } \) 에서 초기 물질의 소멸 양상을 관측하고 \( \left ( \mathrm { CHCl } _ { 3 } - \mathrm { EtOH } \right . \) \( = 7: 1 \) ), 산성 양이온 교환수지(Dowex \( 50 \mathrm { ~W } , \mathrm { H } ^ { + } \)form)를 이용해 중화하고 여과하였다. 각 여과액을 감압농축한 후, EtOAc ( \( \mathrm { 3mL } ) \) 와 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ( \mathrm { ~3mL } ) \) 로 분획하였다. EtOAc 분획물 \( 2000 \mathrm { ppm } \) 을 syringe filter \( (0.2,13 \mathrm { ~mm } ) \) 로 여과한 후, 여과액은 \( \mathrm { GC } - \mathrm { MS } \) 분석 전까지 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하였다.</p> <h2>GC/MS 분석</h2> <p>GC/MS 분석에는 DB- 5 column \( (0.25 \mu \mathrm { m } \) film diameter \( \times 0.25 \) \( \mathrm { mm } \) diameter \( \times 30 \mathrm { ~m } \) length)를 사용하였다. 운반 기체인 Helium을 \( 24.2 \mathrm { ~mL } / \mathrm { min } \) 의 유속으로 흘려주고, 오븐의 온도는 \( 160 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 \( 320 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 까지 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } / \mathrm { min } \) 로 15 분 동안 변화를 주었다. 인젝터와 검출기의 온도는 \( 280 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 로 동일하게 설정하였다. 시료 용액 \( (1 \mu \mathrm { L } ) \)을 10:1의 split ratio로 \( \mathrm { GC } \) column에 주사하였다. 검출기로는 전자 이온화(electron ionization; \( \mathrm { EI } )(70 \mathrm { ~eV } ) \) 와 사중극자 (quadrupole) 질량분석기를 사용하였다. 지방산은 순수 지방산의 보유시간과 질량 분광학적으로 비교하여 동정하였다.</p>