Remazol Black B 탈색율은 최소배지 \( 50 \mathrm{ml}(300 \mathrm{mL} \) 삼각플라스크)에 다양한 보조 탄소원 및 질소원을 첨가하고, \( 50 \mathrm{ppm} \) 농도의 염료를 넣은 다음 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) shaking incubator에서 진탕 배양 후, 염료 탈색능의 향상결과가 가장 좋은 보조 탄소원을 선별한 후, 보조 탄소원의 농도가 염료 탈색능에 미치는 영향을 알아보기 위하여 농도를 변화시키면서 흡광도 감소율을 분석하였다. 염료 탈색능 향상 결과가 가장 좋은 질소원을 선별하여 질소원의 농도가 염료 탈색능에 미치는 영향을 알아보기 위하여 농도를 변화시키면서 흡광도 감소율을 분석하였고, 배지 \( \mathrm{pH} \)를 변화시키면서 염료 탈색율을 측정하여 최적 \(\mathrm{pH}\)를 결정하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>Remazol Black B</h2> <p>반응성 염료중 azo계 염료로서 color index number는 20505이며, 분자량은 991.8이다. 발색단으로 두 개의 azobond \( (-\mathrm{N}=\mathrm{N}-) \) 가 있으며, reactive group으로 vinylsulpho-nyl group \( \left[\mathrm{NaO}_{3} \mathrm{SO}\left(\mathrm{CH}_{2}\right)_{2} \mathrm{SO}_{2}\right] \) 을 2 개씩 포함하고 있는 검은색의 미세한 입자로 되어 있다.</p> <h2>세포배양 및 염료 탈색율 측정</h2> <p>Remazol Black B 분해에 사용된 Phanerochaete sp. EJ-\( 31 \mathrm{~L} \)의 배양은 \( 0.1 \mathrm{~g} / \mathrm{L}_{4} \mathrm{NH}_{4} \mathrm{NO}_{3}, 1.4 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}, 0.27 \)\( \mathrm{g} / \mathrm{L} \mathrm{KH}_{2} \mathrm{PO}_{4}, 0.05 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.05 \mathrm{~g} / \mathrm{LaCl}_{2} \).\( 2 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.02 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}, 0.04 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \mathrm{NaCl}, 0.04 \mathrm{~g} / \mathrm{L} \)leucine이 들어간 배지에 각종 보조탄소원 또는 염료를 탄소원으로 첨가하여 사용하였다. Remazol Black B 탈색율은 최소배지 \( 50 \mathrm{ml}(300 \mathrm{~mL} \) 삼각플라스크)에 다양한 보조 탄소원 및 질소원을 첨가하고, \( 50 \mathrm{ppm} \) 농도의 염료를 넣은 다음 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) shaking incubator에서 진탕 배양을 하였다. 일정시간 간격으로 \( \mathrm{UV}-\mathrm{vis} \) spectrometer를 이용하여 600\( \mathrm{nm} \)에서 흡광도 변화를 측정하고, 검량곡선을 이용하여 흡광도 감소율을 계산하여 염료 탈색율을 측정하였다.</p> <h2>배양조건이 염료 탈색율에 미치는 영향 분석 실험</h2> <p>Remazol Black B의 탈색율에 영향을 미치는 보조 탄소원의 영향을 알아보기 위하여 \( 0.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 의 maltose, galac-tose, lactose, manitol, sucrose, arabinose, fructose, glucose를 보조 탄소원으로 첨가해 주었다. 염료 탈색능의 향상결과가 가장 좋은 보조 탄소원을 선별한 후, 보조 탄소원의 농도가 염료 탈색능에 미치는 영향을 알아보기 위하여 농도를 1.0,2.0,3.0,5.0,10.0%(w / v)으로 변화시키면서 흡광도 감소율을 분석하였다. 질소원의 영향은 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} \),\( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{SO}_{4} \), yeast extract, trypton peptone, malto extract,casein을 각각 \( 0.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 농도로 첨가해 주었다. 염료 탈색능 향상 결과가 가장 좋은 질소원을 선별한 후 질소원의 농도가 염료 탈색능에 미치는 영향을 알아보기 위하여 농도를 \( 0.05,0.1,0.2 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 으로 변화시키면서 흡광도 감소율을 분석하였다.</p> <p>배지 \( \mathrm{pH} \) 의 영향은 5.5,6.5,7.5,8.5,9.5로 변화시키면서 염료 탈색율을 측정하여 최적 \( \mathrm{pH} \) 를 결정하였다. 혐기적 조건에서의 염료 탈색능은 \( 35 \mathrm{~m} \ell \) 의 serum bottle에 배지를 넣은 후 \( 99.9 \% \) 순도의 질소 가스로 5 분간 충전 시켜 bottle 내를 혐기성 조건으로 만든 다음, 미생물을 접종하고 일정 시간 간격으로 주사기를 사용하여 시료를 \( 1 \mathrm{m \ell} \) 씩 채취하여 탈색율을 측정하였다.</p>