SIMCA-P software (v15.0, Umetrics AB, Umea, Sweden)를 이용하여 PCA, PLS-DA, OPLS-DA 순으로 다변량 통계 분석을 진행하고 score plot 과 S-plot을 구했다. 그리고 데이터를 통계처리하기 전 pareto scale로 평균 중심화(mean-centering)하였다. UPLC를 이용한 방풍과 식방풍의 분석법을 검증하기 위해, Waters UPLC I-Class (Waters Co.)를 이용하여 ACQUITY BEH C 18 column을 사용하였고 UV 검출기의 \(210 \mathrm { nm } \) 파장에서 흡광도를 측정하였다.
<h2>데이터처리 및 통계처리</h2> <p>수집된 데이터의 peak acquisition과 대사체의 alignment를 위해 Progenesis QI software (Waters Co.)를 사용하였다. TOF-MS를 통해 수집된 모든 데이터는 chromatographic peak alignment, peak picking, normalization, compound identification의 과정을 거쳐, ion intensity, m/z와 retention time을 포함하는 데이터로 처리되었다. 처리된 데이터의 다변량 통계 분석을 위해 SIMCA-P software (v15.0, Umetrics AB, Umea, Sweden)를 이용하였다. 통계 분석은 PCA, PLS-DA, OPLS-DA 순으로 진행하였으며, score plot 과 S-plot을 구하였다. 이때 얻어지는 \( \mathrm { R } ^ { 2 } , \mathrm { Q } ^ { 2 } \) 값은 각각 통계모델에서의 적합도(goodness of fit)와 통계직인 예측도(goodness of prediction)를 나타낸다. 데이터 통계처리 전 pareto scale로 평균 중심화(mean-centering) 하였다.</p> <h1>분석법 검증</h1> <p>UPLC를 이용한 방풍과 식방풍의 분석법 검증은 PDA detector가 결합된 Waters UPLC I-Class (Waters Co.)를 이용하였으며 ACQUITY BEH C 18 column ( \( 2.1 \mathrm { ~mm } \times 100 \mathrm { ~mm } \), \(1.7 \mu \mathrm { m } ) \)을 사용하였다. 증류수와 Acetonitrile (B)을 이동상으로 하였으며 유속은 \(0.4 \mathrm { ~mL } / \mathrm { min } \) 을 유지하였다. 기울기 조건은 \(5 \% \)의 B 를 6분 동안 \(12 \% \) 로 증가시키고 2분 동안 \(20\%\)로 증가시켰다. 이후 \(25 \% \) 로 2분 동안 증가시키고 7분 동안 \(70 \% \) 로 증가시킨 후, 5분 동안 \(100 \% \) 로 증가시켰다. 4분 동안 초기 조건인 \(5\%\)로 감소시킨 다음 2분간 유지하였다. UV 검출기의 \(210 \mathrm { nm } \) 파장에서 흡광도를 측정하였으며 시료 주입량은 \(2 \mu \mathrm { L } \) 이었다.</p> <p>Marker compound인 5-O-methylvisammioside와 peucedaonl 을 methanol에 녹여 표준용액을 제조하여 표준정량곡선 작성에 이용하였다. 지표물질 분석법 검증을 위해 특이성(specificity), 직선성(linearity), 검출한계(limit of detection), 정량한계(limit of quantitation), 정확성(accuracy) 및 정밀성(precision)으로 분석법의 유효성을 검증하고자 하였다. 2종의 marker compound에 대하여 3종의 농도조건으로 5일 동안 반복 분석하는 inter-day, 연속으로 5회 분석하는 intra-day 분석으로 정밀성(precision) 및 정확성(accuracy)을 구하여 분석법의 재현성(reproducibility)을 확인하였다. 각 성분에 대한 LOD , LOQ는 각 성분에 대한 표준 정량곡선의 signal-to-noise 값이 각각 3, 10일 때의 농도로 구하였다.</p>