실험을 통해서 사포닌이 hydroxyl radical에 의한 DNA의 손상을 유의성 있게 감소시킴을 확인 할 수 있었다. 사포닌은 농도에 비례하여 MMP-1의 활성이 뚜렷하게 증가시키는 것으로 확인되어, 상처치료에 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 나타내었다. 사포닌은 MMP-1와 마찬가지로 농도의존적으로 MMP-2의 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. 사포닌은 Erk의 활성을 억제하여 MMP-1과 MMP-2의 발현을 억제하는 것으로 나타났고, MMP-1 과 MMP-2의 유전자적 발현에 미치는 영향은 없는 것으로 나타났다.
<h2>사포닌의 hydroxyl radical에 의한 DNA 손상에 대한 항산화 효과</h2> <p>Fenton reaction에 의해 생성되는 hydroxyl radical에 genomic DNA가 노출되면 분해가 일어난다. 사포닌의 DNA 손상에 대한 항산화 효과를 조사하기 위하여 사람 섬유아세포로부터 genomic DNA를 분리하여 Fenton reaction에 의하여 생성된 hydroxyl radical에 노출시켰다. Fig. 3에서 보는 바와 같이, Fenton reaction 군과 비교 시 \( 100 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \)의 사포닌의 농도에서 DNA 분해가 억제되어, 사포닌이 이 농도에서 hydroxyl radical에 의한 DNA의 손상을 유의성 있게 감소시킴을 확인 할 수 있었다.</p> <h2>PMA로 자극된 사람 섬유아세포에서 사포닌의 MMP-1 활성에 대한 효과</h2> <p>MMP-1은 피부세포의 결합조직을 구성하는 성분들 가운데 콜라겐을 특이적으로 분해하는 단백질 분해효소로서 상처 치료의 단계 중 기질 재형성에 필수적인 요소이다. 사포닌의 MMP-1 활성 조절 효과를 알아 보기 위하여 사람 섬유아세포에 사포닌을 처리 한 후 PMA로 자극하여 72시간 동안 배양 후 상등액을 이용하여 casein zymograpy를 수행하였다. Fig. 4 에서 보는 바와 같이, 사포닌은 농도에 비례하여 MMP-1의 활성이 뚜렷하게 증가시키는 것으로 확인되어, 상처치료에 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 나타내었다.</p> <h2>PMA로 자극된 사람 섬유아세포에서 사포닌의 MMP-2 활성 조절 효과</h2> <p>Gelatin과 fibronectin 같은 세포외 기질을 분해한다고 알려져 있는 MMP-2 는 형태형성 및 상처치유와 같은 생리적인 과정에 필수적인 요소임으로, 사포닌의 MMP-2 활성 조절에 미치는 영향을 조사하기 위하여 gelatin zymography를 수행하였다. Fig. 5A에서는 사람 섬유아세포에 사포닌을 처리 한 후 72시간 동안 배양 한 상등액에서 MMP-2의 활성을 측정하였고 Fig. 5B에서는 사포닌을 처리 한 후 PMA로 자극하여 72시간 동안 배양 한 상등액을 이용하였다. Fig. 5A 에서 보는 바와 같이, MMP-1에서의 결과와 마찬가지로 사포닌은 농도의존적으로 MMP-2의 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. Fig. 5B 에서는 사포닌이 \( 5 \mathrm{\mu g} / \mathrm{ml} \) 이상의 농도에서 MMP-2의 활성을 증가시키는 것으로 나타났다.</p> <h2>HDF 세포에서 MMP-1, MMP-2, p-Erk 단백질의 발현에 대한 사포닌의 효과</h2> <p>사포닌이 세포외기질을 분해하는데 가장 중요한 기질분해 단백질인 MMPs의 단백질 발현을 어떻게 조절하는지 조사하였다. Fig. 6 에서 보는 바와 같이, 사포은 \( 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도 처리군에서 PMA 처리군과 비교 시 MMP-1과 MMP-2의 발현은 억제되는 것으로 나타났다. MMPs의 발현을 조절한다고 알려진 p-Erk의 발현도 사포닌에 의하여 억제되는 것으로 관찰되어, 사포닌은 Erk의 활성을 억제하여 MMP-1과 MMP-2의 발현을 억제하는 것으로 나타났다.</p> <h2>HDF 세포에서 MMP-1 그리고 MMP-2 유전자 발현에 대한 사포닌의 효과</h2> <p>사포닌의 MMP-1과 MMP-2의 유전자적 발현 효과는 mRNA 수준에서 RT-PCR을 수행하여 연구되었다. 사포닌으로 전 처리된 HDF에 PMA로 자극하였다. Fig. 7에서 보는 바와 같이 HDF 세포에서 MMP-1 과 MMP-2 의 mRNA 발현 정도는 농도와 관계없이 일정한 것으로 관찰되어, 사포닌은 MMP-1 과 MMP-2의 유전자적 발현에 미치는 영향은 없는 것으로 나타났다.</p>