이화학적 물성 변화 측정 중 \( \mathrm{pH} \)는 \( \mathrm{pH} \) meter와 비중(SG)은 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온수조에서 비중계를 사용했으며, 굴절률(RI)은 0점 조절계가 달린 굴절계를 이용하여 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 측정했다. 또한, 유해 성분의 함량 변화를 확인하기 위해 페놀과 벤조피렌 표준품 \( 50,100 \mathrm{~mg} \)을 표준액으로 하였으며, 목초액 \( 10 \mathrm{~ml} \)를 검액으로 하였다.
<h2>이화학적 물성 변화</h2> <p>\( \mathrm{pH} \)는 \( \mathrm{pH} \) meter로 측정하였고, 비중(SG)은 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온수조에서 비중계를 사용하여 측정하였으며, 굴절률(RI)은 0점 조절계가 달린 굴절계를 이용하여 \( 20^{\circ} \mathrm{C} \)에서 측정하였다.</p> <p>용해타르(DT)는 증발접시를 미리 항량으로 만들어 목초액 \( 5 \mathrm{~g} \)을 넣고 \( 125 \pm 5^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 이상 건조시켜 얻어진 고형분잔사를 칭량하여 측정하였다.</p> <p>카르보닐기 측정을 위해 목초액 \( 1 \mathrm{ml} \)를 취해 카르보닐이 제거된 알코올을 가해 \( 50 \mathrm{ml} \)로 만든 다음, 이 액 \( 5 \mathrm{ml} \)를 취해 알코올과 벤젠 흔합액(1:9)을 가하여 \( 100 \mathrm{ml} \)로 만들어 검액으로 하였다. 헵타날 표준품 \( 30 \mathrm{mg} \)을 취해 벤젠에 용해하고 이를 적당히 희석하여 \( 3 \sim 30 ~ \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)의 농도의 표준액으로 하였다. 표준액, 검액 및 공시험용액(벤젠) \( 1 \mathrm{ml} \)를 각각 취하여 여기에 벤젠 \( 1 \mathrm{ml} \), 포화 2,4 -디니트로페놀(2,4-DNPH) 용액 \( 2 \mathrm{ml} \), 트리클로로아세트산(TCA) 용액 \( 2 \mathrm{ml} \)를 각각 가해 준 다음 유리마개를 덮고 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 가열한 후, 얼음 수욕에서 식혔다. 여기에 수산화칼륨 용액 \( 5 \mathrm{ml} \), 카르보닐기가 제거된 알코올 \( 25 \mathrm{ml} \)를 가해 준 다음 10분간 발색시킨 후 \( 430 \mathrm{~nm} \)에서 알코올과 벤젠 흔합액을 대조액으로 하여 공시험 용액, 검액 및 표준액의 흡광도를 측정하여 카르보닐기의 양을 구하였다.</p> <h2>유해 성분의 함량 변화</h2> <h3>페놀 및 벤조피렌</h3> <p>페놀과 벤조피렌의 함량분석은 개발된 분석법에 따라 실시하였다. 즉, 페놀과 벤조피렌 표준품 \( 50,100 \mathrm{~mg} \)을 물과 디메칠폭사이드에 용해 후 표준원액으로 하여 이를 물과 에탄올로 희석하고 표준액으로 하였으며, 목초액 \( 10 \mathrm{~ml} \)를 검액으로 하였다. 표준액 및 검액을 HPLC로 분석한 후 각각의 피크 면적비로 검액 중 페놀과 벤조피렌의 양을 구하였다. 이 때 컬럼은 Atlantis \( ^{TM} dC18 \left(4.6 \times 250 \mathrm{~mm}, 5 ~ \mu \mathrm{m}\right. \), Waters), 온도는 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \), 검출파장은 페놀 및 벤조피렌을 각각 280과 \( 289 \mathrm{~nm} \), 이동상은 각각 물과 아세토니트릴 흔합액(90:10,v/v), \( 100 \% \) 메탄올 그리고 유속 \( 1.0 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \)에서 시료 \( 20 ~ \mu \mathrm{l} \)를 주입하여 분석하였다.</p>