Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 실험에 사용하였으며, 각 실험군에 8마리씩 준비하였다. 충북 옥천군에서 열풍 건조된 잎을 구입하여, 해당 잎과 증류수를 1:4 비율로 혼합 후 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 동안 추출하였다. 추출물은 건조 후에 물에 희석하여 음용시켰다. 췌장염 유발을 위하여 흰쥐에 DBTC를 1회 투여하였다. 그리고 실험군 간의 차이를 확인하기 위해 SPSS를 이용한 one-way ANOVA 분석과 DUNCAN 사후검증을 실시하였다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물</h2><p>실험에 사용된 동물은 \(230-250 \mathrm{g}\)의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 대한실험동물센터로부터 구입하였으며, 일주일 동안 온도 \( 22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 55 \pm 3 \% \)인 실험실 환경에서 12시간 밤낮 주기로 적응시킨 후 실험군 당 8마리씩 나누어 사용하였다.</p><h2>야콘잎 추출</h2><p>충북 옥천군에서 열풍 건조된 잎을 구입하였으며, 잎과 증류수를 \(1:4\) (\( \mathrm{w} / \mathrm{v} \)) 비율로 혼합하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 3시간 동안 열탕 추출하였다. 추출물을 여과한 후 감압 농축(N-1000, Tokyo Rikakikai Co., Ltd. Japan)하여 동결 건조시킨 다음, 건조된 분말을 \( 1 \% \) 농도로 생수에 희석하여 음용시켰다.</p><h2>췌장염 실험 모델</h2><p>췌장염 유발을 위하여 dibutyltin dichloride (DBTC, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 \( 100 \% \) 에탄올과 글리세롤(\(2:1\))에 섞어 본 실험에 사용된 수컷 흰쥐의 꼬리 정맥에 1회\( (8 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \) 투여하였다. 실험 동물군은 DBTC 투여 후 생수를 음용시킨 군(유발군)과 DBTC 투여 7일 후부터 \( 1 \% \) 야콘잎 추출물을 음용시킨 군(처리군)으로 나누어 관찰하였으며, DBTC를 투여하지 않고 생수를 음용시킨 군을 대조군으로 관찰하였다. 각 실험군은 7, 14, 21일째 희생하여 췌장 조직을 관찰하였다.</p><h2>조직표본 준비</h2><p>동물을 sodium pentobarbital \( (0.3 \mathrm{ml} / 100 \mathrm{g}) \)로 마취시킨 후 복부를 절개하여 췌장을 채취한 후 얻어진 조직을 \( 10 \% \) 중성 포르말린에 12시간 고정시킨 후 흐르는 물에 수세하였으며, 탈수화과정을 거친 다음 파라핀에 포매시켜 \( 5 \mu \mathrm{m} \)로 연속 절편하여 조직화학 및 면역조직화학적 염색에 이용하였다.</p><h2>조직화학 및 면역조직화학적 염색</h2><p>절편된 조직 표본을 xylene을 이용하여 탈파라핀한 후 가수화(rehydration)하여 조직화학적 염색으로는, collagen 섬유가 적색으로 관찰되는 van Gieson 염색을 행하였다. 또한 면역조직화학적 염색으로는 탈파라핀한 후 가수화시킨 표본을 proteinase K (\(20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\))에 5분 동안 proteolysis 과정을 거친 후 \( 3 \% \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \)로 5분간 처리하여 조직내의 내인성 과산화효소를 제거하고, 1차 항체 즉, COX-2 (Santa cruze Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA), TGF-\(\beta\)1 (Santa cruze, Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA, USA), VEGF (Chemicon, Billerica, MA, USA)를 각각 처리하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) humidified chamber에서 12시간 동안 반응시켰다. 그 후 \(0.02 \mathrm{M}\) phophate buffered saline (PBS)에 충분히 수세한 후 2차 항체인 biotinylated goat anti-rabbit IgG (DakoCytomation Inc., Carpinteria, CA, USA)에 실온에서 10분간 link하였다. PBS로 수세한 후 streptavidin peroxidase (DakoCytomation Inc., Carpinteria, CA, USA)에 10분간 반응시킨 후 \( 0.05 \% \) 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)로 발색 반응을 확인하였으며, Hematoxylin으로 대조 염색하여 광학현미경(Carl Zeiss J/902344, Germany) 하에서 비교 관찰한 후 디지털 카메라 (Sony DSC-F707, Japan)로 촬영하였다. van-Gieson 염색 표본은 현미경 관찰 후 400배율에서 collagen 생성량을 이미지분석 (Image-Pro Plus, ver. 7.0)하였으며, 각 조직 표본당 3곳을 측정하여 통계 처리하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>실험군 간의 유의성 검증을 위해 SPSS (ver. 17.0) program을 이용하였으며, one-way ANOVA로 분석하고 DUNCAN으로 사후 검증하였다. 유의수준은 \( p<0.05 \)에서 판별하였다.</p>