본 실험에서 세 균주의 배양액에서 항균물질 존재 여부를 확인하기 위해 바이오스크린 C 기기로 검정하였을 때, 세 균주의 배양액에서 S. aureus의 균 생육을 저해하는 항균 물질이 포함되어 있음을 확인하였고 SSG 5 균주는 SSG 6이나 SSG 10 과는 다른 종류의 항균 물질을 생산할 가능성이 있음을 확인하였다. 균주의 염기서열을 비교 분석한 결과 P. koreensis와 가장 밀집한 것으로 확인되었다.
<h2>선발 균주의 항균효과 검정</h2> <p>본 실험에서 선발된 세 균주의 배양액에서 항균 물질이 존재하는가를 알기 위해 바이오스크린 C 기기를 이용해 검정하였다. 세 균주의 동정 결과에서 동일한 종으로 확인된 표준 균주인 P. koreensis KACC10848의 배양액과 TSB배지만을 첨가시킨 대조구에 비해 배양 13 시간 후에도 이들 선발 균의 제균 배양액이 S. aureus 균의 생육을 Fig. 3에서 보는 바와 같이 현저히 저하시킴을 알 수 있었다. 이 사실은 선발된 세 균주의 배양액에서 S. aureus의 균 생육을 저해하는 항균물질이 포함되어 있음을 의미하며 이 균주들이 이를 생산한다는 것을 지적해 준다. 특히 SSG6와 SSG10균주의 배양액은 13 시간 이후에도 전혀 균이 자라나오지 못함을 볼 때 배양시간이 경과함에 따라 어느 정도 균 생육이 증가하는 SSG5와는 달리 종류가 다른 강력한 항균물질이 포함되어 있거나 만약에 동일한 항균물질이라면 SSG6와 SSG10균주에서 그것의 생산량이 상대적으로 매우 높다고 추정할 수 있다. 한편 이들 균주들의 배양액으로부터 ethylacetate로 추출하여 감압 농축한 시료를 황색 포도상구균(Staphylococcus aureus), 식중독 균(Listeria monocytogenes) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)이 사전 함유된 항균검정용 고체 배지 상에서 이들 지시 균에 대한 성장저해환의 크기를 확인하는 방법으로 항균력 정도를 분석한 결과, 표준 균주인 P. koreensis KACC10848와는 달리 선발 균주들은 세 지시균 모두에 항균 활성을 나타내는 저지대를 보였다. 여기서 SSG5의 경우 S. aureus에 대한 항균활성이 Fig. 3에서 보는 바처럼 다른 두 균주에 비해 상대적으로 활성이 적게 나타났다. 그러나 L. monocytogenes와 B. subtilis에 대해서는 그활성이 떨어지지 않음을 보여준다. 이 사실은 SSG5 균주가 SSG6와 SSG10과는 전혀 다른 종류의 항균물질을 생산할 가능성을 암시해준다.</p> <h2>선발 균주의 동정</h2> <p>선발된 균주를 동정하기 위해 분자생물학적 방법과 생화학적 분석을 병행했으며, 최종 확인을 위해서 2003 년 본 연구원에서 신종으로 최초로 보고된 본 발명의 균주 종의 표준균주인 Pseudomonas koreensis KACC10848을 대조구로 사용하였다. 우선 분자생물학적 동정을 위해 시험 균주들의 genomic DNA로부터 약 \( 1.5 \mathrm{~kb} \) 크기의 \( 16 \mathrm{~S} \mathrm{rDNA} \) 를 PCR로 증폭하여 순수 정제하고 이를sequencing하였다. 이들의 염기서열들을 Blast search하여 비교 분석한 결과, 선발된 세 개의 균주들 모두가 계통분류학적으로 P. koreensis와 가장 유연관계가 밀접한 것으로 나타났다. 이러한 결과를 바탕으로 이들의 생화학적 특성을 표준 균주인 P. koreensis KACC10848를 대조구로 하여 API 20NE와 API ZYM 키트에 의한 생화학적 반응을 조사하였다. API \( 20 \mathrm{NE} \) 키트의 생화학반응에서 표준 균주와 비교하였을 때 gelatin 이용성을 제외한 나머지 18 종의 반응에서 일치하였고. API ZYM 키트에 의한 19종의 효소반응 검정에서는 모든 반응이 표준 균주와 동일하였다. 또한 ID \( 32 \mathrm{GN} \) 키트를 이용한 탄소원 이용성 조사에서도 itaconic acid를 제외한 31종의 탄소원 기질 이용성에도 표준 균주와 같았다. 위의 결과를 최종 종합해 볼 때, 이들 선발된 세 균주는 모두 P. koreensis에 속하는 것으로 동정되었다. 그러나 항균활성이 거의 없는 표준 균주와 달리 이들 균주 모두가 뛰어난 항균활성을 보이는 것은 매우 흥미롭다. 현재까지 2003년 신종으로 P. koreensis가 처음 보고된 이후, 이 종에서 항암성이나 항균성을 가진다는 보고는 아직까지는 없다.</p>