본 연구의 사방오리나무는 경남 고성에서 채집하였으며 용매 분획을 얻기 위해 음건 세절한 시료에 메탄올을 첨가해 진탕 후 감압여과하였다. 이를 감압농축해 사방오리나무의 \( \mathrm { MeOH } \)을 얻게되었다. \( \alpha \)-amylase 저해활성을 알기 위해 satarch 기질로 측정했다. 농도별 희석액에 \( \alpha \)-amylase 효소액을 혼합하여 관찰하였다.
<p>따라서 본 연구에서는 약용식물로 알려진 오리나무속 식물 중에서 항당뇨 활성에 관한 연구가 보고된 적이 없는 사방오리나무의 추출물을 이용하여 \( \alpha \)-glucosidase 저해활성과 \( \alpha \)-amylase 저해활성 및 aldose reductase 저해활성 효과에 대해 연구하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 재료</h2> <p>본 연구에 사용된 사방오리나무는 경남 고성 지역에서 2006년 9-10월에 채집하여 음건한 뒤 세절하여 시료로 사용하였다.</p> <h2>추출물 조제 및 분획</h2> <p>사방오리나무의 각 용매 분획을 얻기 위해 음건 후 세절한 시료 \( 100 \mathrm { ~g } \)에 \( 99.8 \% \) methanol \( ( \mathrm { MeOH } ) \)을 첨가한 후 실온에서 진탕한 후 4시간 동안 3회 반복 추출하여 Whatman 여과지 No. 5A로 감압여과하였다. 여과액을 rotary vacuum evaporator (Ratavapor R-121, Buchi, Switzerland)로 감압농축하여, 사방오리나무의 \( \mathrm { MeOH } \) 추출물을 얻었다. 이 추출물을 각 용매별로 분획하여 hexane(HX) 층, dichloromethane(DCM) 층, ethyl acetate(EA) 층 그리고 butanol\( ( \mathrm { BuOH } ) \) 층으로 각각 용매 분획하고 각 층을 감압 농축 후 건조시킨 뒤 분말로 만들어 시료로 사용하였다.</p> <h2>\( \alpha \)-Amylase 저해활성</h2> <p>Pancreatin 유래의 \( \alpha \)-amylase (Sigma, Mo, U.S.A)와 human salivary 유래의 \( \alpha \)-amylase (Sigma, Mo, U.S.A)에 대한 저해활성은 starch를 기질로 하여 측정하였다. 농도별로 희석한 각 용매 분획물 \( 40 \mu \mathrm { l } \) 와 \( 1 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } \) 의 \( \alpha \)-amylase 효소액 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 와 \( 1.0 \% \) starch \( 100 \mu \mathrm { l } \) 를 혼합하여 \( 20 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3분간 preincubation 한 후, \( 96 \mathrm { mM } \) \( \mathrm { DNS } \) ( \(3,5 \)-dinitrosalicylic acid, sodium potassium tartrate in \( 2 \mathrm { M } \) \( \mathrm { NaOH } \) ) 발색시약 \( 100 \mu \mathrm { l } \)를 첨가하였다. \( 90 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 15분간 가열하여 발색을 시켜 충분히 냉각시킨 후 증류수를 가하여 교반한 후, \( 540 \mathrm { ~nm } \) 에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 acarbose (Sigma, Mo, USA)를 사용하였다.</p>