야생형 CGTase는 재조합의 경우 열안정성이 개선되었고, 다양한 효소에 의한 과당쇄화에 기인하는 것으로 여겨진다. 야생형 CGTase의 \(\alpha\)−,\(\beta\)−\(\Upsilon\)−CD 생산 비율이 6: 3: 16:3:1이지만, 재조합 CGTase는 CD 생산비율이 3.5: 2.4: 13.5:2.4:1을 보인다. 결과적으로 CD 전환율이 41%(20.2 g/L)로 야생형 효소와 비교했을 때 그 수치가 높았다.
<p>B. macerans 야생형 CGTase의 최적 온도는 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 열안정성은 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 24시간에 약 \( 70 \% \) 의 잔존활성에 비해 재조합 CGTase의 열안정성은 매우 향상되었음을 알 수 있고, 이는 재조합 효소에 발생한 과당쇄화에 기인하는 것으로 판단된다. 실제로 당쇄부가에 의한 열안정성이 증가된 효소는 Bacillus endoglucanase, Bacillus cycloinulo-oligo-saccharide fructanotransferase, Bacillus와 rice의 \( \alpha \)-amylase 등 다양하다.</p> <h2>반응 생성물의 분석</h2> <p>재조합 CGTase에 의한 \(\alpha\)-, \(\beta\)-, \(\gamma\)-CD의 생산 양상과 그 비율을 검토하기 위해서 \( 5 \% \) soluble starch를 기질로 \( 50 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 효소반응시킨 후 그 산물을 분석하였다. 48시간 반응 후, 야생형 CGTase의 \(\alpha\)-, \(\beta\)-, \(\gamma\)-CD 생산 비율이 \( 6: 3: 1 \)인 반면, 재조합 CGTase의 경우 CD 생산비율이 \( 3.5: 2.4: 1 \)로 나타나, \( \alpha \)-CD 비율이 낮아져 생산된 총 CD 중 \( 50 \% \)에 불과하였다. 하지만 B. macerans의 야생형 CGTase와 비교하면 각 CD의 생산량은 모두 증가함을 나타내었다. 기질인 starch에서 \(\alpha\)-, \(\beta\)-, \(\gamma\)-CD로의 전환율은 야생형 CGTase의 경우 \( 21 \% \)의 CD 전환율 \( (10.3 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } ) \) 을 나타내었고, 재조합 CGTase의 경우 반응 48시간에서 CD 전환율은 \( 41 \%(20.2 \mathrm { ~g } / \mathrm { L } ) \) 로 야생형 효소보다 횔씬 높았다. 반응 48시간 후 CD 생성량이 감소하는 경향을 보였는데, 이것은 생산된 CD 량과 malto 올리고당이 많음으로 인해 CGTase 활성 중 coupling 반응에 의해 CD가 다른 올리고당으로 전환되어지는 것으로 보여진다.</p>