ICR 마우스를 사용하여 밀배아유의 항염증 효과를 in vivo에서 평가하였다. croton oil을 도포하여 부종을 유도한 후, 이를 통해 밀배아유의 귀 부종 억제 효과를 관찰하였다. 동시에, 밀배아유의 단기 독성을 평가하기 위해 OECD 가이드라인에 따라 다양한 농도의 밀배아유를 마우스에 경구 투여하였다. 투여 전에는 마우스를 4-6시간 정도 절식시켰다.
<h2>귀 부종 측정 및 조직관찰</h2> <p>밀배아유의 in vivo에서 항염증 효과를 확인하기 위하여, croton oil로 부종이 유도된 ICR 마우스 모델에서 귀 부종 억제 및 귀 조직 관찰을 진행하였다. 밀배아유를 10,50 및 \( 250 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도로 \( 200 \mu \mathrm {\mu } \) 씩 ICR 마우스에 경구 투여하였다. 한 시간 후 오른쪽 귀에 \( 2.5 \% \) croton oil을 \( 20 \mu \mathrm { l } / \mathrm { ear } \) 로 도포하였다. 귀 두께의 측정은 croton oil을 도포한 후 5 시간 후에 실시하였으며, croton oil로 인한 귀 두께의 증가를 부종의 형성으로 간주하였다. 조직 관찰은 \( 100 \mathrm { mg } / \) \( \mathrm { ml } \) 농도의 밀배아유를 마우스 오른쪽 귀에 \( 20 \mu \mathrm { l } \) 도포하고 15 분 뒤 \( 5 \% \) croton oil을 \( 20 \mu \mathrm { l } \) 도포하였다. 6 시간 후에 diethyl ether로 마취사 시키고, 귀 조직을 절제하여 \( 10 \% \) formaldehyde에 72 시간 고정하였다. 고정 후 파라핀 블록을 만들어 박편을 제조하고 hematoxylin-eosin 및 toluidine-blue 염색을 하여 조직을 관찰하였다. 부종 생성율은 다음과 같은 식에 의해 계산하였다.</p> <p>Edema formation ( \%) = Sample 귀 두께/Control 귀 두께 \( \times 100 \)</p> <h2>단기독성평가</h2> <p>단기 독성 평가는 식품의약품안전처의 제 \( 2014-136 \) 호에 고시된 “의약품등의 독성시험기준”과 OECD test guide line을 참조하여 최대 허용 용량인 \( 5,000 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 기준에 따라 Balb/c 마우스에 밀배아유를 \( 300,2,000 \) 및 \( 5,000 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) body weight 농도로 경구 투여하였으며, 경구 투여 전 4-6시간 정도 절식시켰다. 경구 투여 후 6 시간 동안 비정상적인 행동을 관찰하였고, 2 주까지 사망한 마우스가 있는지 지속적으로 관찰하였다.</p> <h2>통계처리</h2> <p>모든 실험에 대한 통계 처리는 SAS program (Statistical analytical system V8.2, SAS Institute Inc., USA)을 이용하여 one way ANOVA법으로 실시하였으며, 조사 항목들 간의 유의성 검정은 Duncan의 다중검정법으로 \( p<0.05 \) 수준에서 실시하였다.</p>