본 연구는 2006년 5월부터 12월 사이에 부산시에 위치한 대학병원에서 건강진단을 받은 수진자 중 특정 조건을 만족하는 991명을 대상으로 신장, 체중, 체질량지수, 허리둘레, 수축기 및 이완기 혈압을 측정하였다. 또한 혈압 측정 후 정맥혈을 채혈하여 공복 혈당, 총 콜레스테롤, HDL-C, LDL-C와 중성지방 농도를 측정하였다. 이어 DNA 추출을 위해 Wizard genomic DNA purification kit을 사용하여 혈액에서 DNA를 추출하고, 추출된 DNA는 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 방치한 후 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 보관하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>연구대상</h2> <p>부산시에 위치하는 일개 대학병원에서 2006년 5월에서 2006년 12월 사이에 건강진단을 받은 수진자 가운데 본 연구에 참여하기를 동의하였던 1,120명 중 자료가 불층분하거나 고혈압, 당뇨, 고지혈증 등으로 약제를 복용중인 사람을 제외한 991명을 대상으로 하였다. 이 가운데 남자는 374명 이었고, 여자는 617명이었다.</p> <h2>신체계측 및 혈액검사</h2> <p>대상자들의 신체계측은 신장, 체중, 체질량지수, 허리둘레 와 수축기와 이완기 혈압을 측정하였다. 키, 체중은 자동측정기를 이용하고, 복부둘레는 직립자세에서 제대부위를 측정하였다. 혈압측정 후 정맥혈을 채혈하여 혈청내 공복 혈당, 총 콜레스테롤, HDL-C, 저밀도 지단백 콜레스테롤(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C과 중성지방 농도를 측정하였다. 공복 혈당, 총콜레스테롤, HDL-C, 중성지방의 농도는 Hitachi 7600-210 및 Hitachi 7180 (Hitachi, Tokyo, Japan)으로 측정하였다. 공복 혈당은 헥소카이네즈법, 총콜레스테롤 가 중성지방은 enzymatic colorimetric법, HDL-C는 selective inhibition 방법으로 측정하였으며, LDL-C는 Friedwald 공식을 이용하여 산출하였다.</p> <h2>DNA 추출</h2> <p>혈액으로부터 DNA를 추출하기 위해 Wizard genomic DNA purification kit (Promega Co, Madison, WI)를 사용하였다. 혈액 \( 300 \mu 1 \)를 \( 1.5 \mathrm { ml } \) 튜브에 분주한 후 세포 용해액 \( 900 \mu 1 \)를 첨가하였다. 위의 용액을 잘 섞은 후 실온에서 10분간 방치하였다. \( 13,000 \mathrm { rpm } \)에서 20초간 원심 분리하여 상층액의 잔여물이 약 \( 20 \sim 30 \mu \) 남도록 한 후 10~20초간 강하게 섞었다. 핵 용해액을 \( 300 \mu \) 첨가하고 세포가 완전히 용해될 수 있도록 5,6회 섞었다. 그 후 \( 1.5 \mu 1 \)의 RNase를 첨가하여 \( 2 \sim 5 \)회 섞은 뒤 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 15분 방치하였다. 단백질 침전 용액을 \( 100 \mu \mathrm { l } \) 첨가한 후 10~20초간 강하게 섞어 \( 13,000 \mathrm { rpm } \)에서 3분간 원심 분리하였다. 상등액을 새로운 튜브로 옮긴 뒤 \( 300 \mu \)의 isopropanol을 첨가하여 \( 2 \sim 5 \)회 섞었다. \( 13,000 \mathrm { rpm } \)에서 1분간 원심 분리하여 상층액을 제거한 후 DNA 침전물을 확인하였다. \( 70 \% \) 에타놀 \( 900 \mu \mathrm { l } \)를 첨가하여 DNA를 세척한 후 \( 13,000 \mathrm { rpm } \)에서 1분간 원심 분리하여 상층액을 완전히 제거하여 세포를 건조시켰다. DNA rehydration 용액을 \( 100 \mu \) 첨가하여 \( 65 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 1시간 방치하였다. 그 후 \( 4 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 24시간 방치한 후 \( -20 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 DNA를 보관하였다.</p>