효소의 활성도는 표준액으로 uperoxide dismutase standard를 사용하였으며, Aebi의 방법을 이용한 phosphate buffer 1.9ml에 homogenate와 mitochondrial fraction을 \(\mathrm{800xg}\)에서 \(\mathrm{20min}\) 원심분리한 상등액 \(\mathrm{100 \mu l}\)를 buffer로 10, 20, 40, 80배 희석한 과산화 수소 용액을 혼합한 \(\mathrm{240nm}\)에서 \(\mathrm{90sec}\) 동안 흡광도 감소를 측정한다.
<h2>간 조직의 Superoxide Dismutase (SOD) 효소활성 측정</h2> <p>Beauchamp와 Fridovich의 방법에 따라 0.2 M potassiumphosphate buffer ( \( \mathrm { pH } ~7.4) \)를 \( 672 \mu l, 1 \mathrm { mM } \) xanthine \( 100 \mu \mathrm { l } \), \( 1 \% \) sodium deoxychlorate \( 30 \mu \mathrm { l } \), \(1.5 \mathrm { mM } ~ \mathrm { KCN } \) \(30 \mu \mathrm { l } \), \(0.2 \mathrm { mM } \) cytochrome C \( 150 \mu \mathrm { l } \) ile를 넣은 혼합에 sample \( 8 \mu \mathrm { l } \)를 넣고, xanthine oxidase원액을 \( 10 \mu \mathrm { l } \)를 넣어 mixing한 후 Elisa에 이용하여 \( 550 \mathrm { ~nm } \)에서의 흡광도 변화를 \( 2 \mathrm { ~min } \) 동안 측정하였다. 효소의 활성도는 표준액으로 Sigma사의 superoxide dismutase standard를 사용하였다.</p> <h2>간 조직의 Catalase의 활성 측정</h2> <p>Aebi의 방법을 이용하여 phosphate buffer \( (0.05 \mathrm { ~M } \) \( \mathrm { pH } ~7.0 \)) \( 1.9 \mathrm { ml } \)에 sample (homogenate와 mitochondrial fraction을 \( 800~ \mathrm { xg } \)에서 \( 20 \mathrm { ~min } \) 원심분리한 상등액 \( 100 \mu \mathrm { l } \)를 buffer로 10, 20, 40, 80배 희석) \( 0.1 \mathrm { ml } \)와 과산화수소 용액 \( 1 \mathrm { ml } \)를 혼합하여 \( 240 \mathrm { ~nm } \)에서 \( 90 \mathrm { sec } \) 동안 흡광도 감소를 측정 하였다.</p> <h2>간 조직의 GSH-peroxidase (GPx)의 활성 측정</h2> <p>Lawrence등의 방법에 준하여 \( 0.1 \mathrm { M } \) phosphate buffer(\(\mathrm{4 mM}\) EDTA) \( 400 \mu \mathrm { l } \), \(0.01 ~ \mathrm { M } ~ \mathrm { Na } \mathrm { N } _ { 3 } ~ 70 \mu \mathrm { l } \), \(0.01~ \mathrm { M } ~ \text { GSH } ~70 \mu \mathrm { l } \), \(1.5 \mathrm { mM } \) NADPH \( 70 \mu \mathrm { l } \), \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } ~360 \mu \mathrm { l } \), GSSG-reductase ( \(1.8 \mathrm { U } / \mathrm { ml } ) \) \(20 \mu \mathrm { l } \), sample \( 10 \mu \mathrm { l } \)를 혼합하여 상온에서 1분간 방치한 후 \( 5 ~ \mathrm { mM } ~ \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } ~100 \mu \mathrm { l } \)를 가해 잘 섞은 후 \( 340 \mathrm { ~nm } \)에서 \( 90 \mathrm { sec } \) 동안 흡광도 감소 측정을 하였다.</p>