본 논문은 양파즙의 농도와 L. plantarum 성장과 배양액의 항산화 활성 간의 상관관계를 밝히는 실험에 대해 설명하고 있다. 배지에 첨가되는 양파즙의 농도가 \( L\) plantarum의 성장과 배양액의 항산화 활성에 미치는 영향을 조사하는 5개의 실험에서, 항산화 활성은 배양 상등액의 free radical scavenging 활성을 DPPH용액을 이용해 평가했고 대조구로 배양 상등액 대신 멸균 증류수를 사용하여 반응 시킨 뒤 흡광도를 측정했다.
<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용균주 및 배양조건</h2><p>본 실험에서는 자연적으로 발효된 양파에서 분리 \(\cdot\) 동정된 Lactobacillus plantarumSK1990 을 사용하였고, 실험을 위한 종 균 배양은 MRS (Difco, USA) 배지를 이용하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 진탕 배양기에서 20시간 동안 배양한 후에 사용하였다.</p><h2>양파즙의 제조</h2><p>시중에 유통되는 국내산 양파(경북 울진군)를 수분첨가 없이 분쇄기(Philips HR2860, Netherlands)로 곱게 갈아서 양파즙을 제조하였다.</p><h2>균체 생산 분석</h2><p>발효 후 배양액에 존재하는 균체의 농도는 멸균된 \( 0.8 \% \) NaCl용액에 \( 10^{-7} \) 까지 희석한 후에 MRS 평판배지에 도말하였고, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 항온기에서 20시간 이상 배양한 후에 형성된 집락의 개수를 \( \mathrm{CFU} / \mathrm{ml} \) 로 표기하였다.</p><h2>항산화 활성의 평가</h2><p>항산화 활성은 배양 상등액의 free radical scavenging 활성을 DPPH (a, a'-diphenyl-ß-picrylhydrazyl, Sigma) 용액을 이용하여 평가하였다. 배양액을 \( 10,000 \mathrm{rpm} \)에서 5분간 원심분리한 후에 그 상등액을 취하여 사용하였다. 반응액은 배양 상등액과 멸균증류수, \( 99.9 \% \) 에탄올 그리고 \( 4 \times 10^{-4} \mathrm{M} \mathrm{DPPH} \)를 \( 0.1: 0.4: 1: 1 \)의 비율로 흔합한 후에 상온에서 15 분간 반응시킨 후 분광광도계(SHIMADZU, Japan)를 사용하여 \( 525 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 배양 상등액 대신 멸균 증류수를 사용하여 반응 시킨 후 흡광도를 측정하였다. 상대적인 free radical scavenging 활성근 다음 수식을 통하여 계산하였고, 모든 실험은 3반복으로 수행하였다.</p><p>Free radical scavenging activity \( (\%)=\left(1-\frac{O D_{\text {sample }}}{O D_{\text {blank }}}\right) \times 100 \)</p><h2>양파즙의 농도가 L. plantarum의 성장과 배양액의 항산화 활성에 미치는 영향 조사</h2><p>배지에 첨가되는 양퐈즙의 농도가 \( L \) plantarum의 성장과 배양액의 항산화 활성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 총 5개의 실험(run)을 구성하였다. 실험 1은 MRS 배지를 \( 100 \% \) 로 제조하였고, 실험 2 는 \( \mathrm{MRS} \) 배지 \( 20 \% \), 실험 3은 MRS 배지 \( 20 \% \) 와 양파즙 \( 20 \% \), 실험 4 는 MRS 배지 \( 20 \% \) 와 양파즙 \( 40 \% \), 실험 5는 MRS 배지 \( 20 \% \) 와 양파즙 \( 60 \% \)로 제조하였다. 각 실험 들의 배지조성에서 MRS 배지와 양파즙을 제외한 나머지 부분들은 증류수를 사용하여 총 \( 100 \% \)가 되도록 하였다. 준비된 각 실험들의 배지들은 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15 분간 멸균한 후에 사용하였고, L. plantarum 종균을 배양액의 \( 1 \% \) 로 접종한 후에 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 진탕배양기에서 \( 150 \mathrm{rpm} \)으로 교반하며 20 시간 동안 배양하였다.</p>