AcAlgE 또는 KS-408 알긴산 분해효소를 처리한 아세틸알긴산 분해물의 \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR 스펙트럼을 분석한 결과, AcAlgE만 처리한 경우 총 아세틸기가 많이 남아있고 \( \mathrm { M } \)-2' 및 \( \mathrm { M } \)-3' peak들도 남아있었다. 그러나 Poly \( \mathrm { } \) AcAlgE와 KS-408 알긴산 분해효소를 함께 처리한 경우 \( 2.2 \mathrm { ppm } \) peak의 크기가 줄어들고 \( \mathrm { M } \)-2' 및 \( \mathrm { M } \)-3' peak들이 사라졌음을 확인하였다.
<h2>아세틸알긴산 효소분해물의 \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR 스펙트럼 분석</h2> <p>고분자 아세틸알긴산 및 산가수분해로 얻은 저분자 아세틸알긴산에 MJ-3 AcAlgE 또는 KS-408 알긴산 분해효소만을 처리하였거나 AcAlgE와 KS-408 알긴산 분해효소를 함께 처리하였을 때 생성된 분해물을 동결건조하고 \( \mathrm { D_2O } \) 로 녹인 다음 \( { } ^ { 1 } \mathrm { H } \)-NMR 스펙트럼을 측정한 결과는 Fig. 4 와 같았다. Fig. 4A에서와 같이 고분자 아세틸알긴산에 AcAlgE만을 처리하였을 때 \( 2.2 \mathrm { ppm } \) 의 peak 크기로 보아 총 아세틸기가 많이 남아있음을 알 수 있고 \( \mathrm { M } \)-2' 및 \( \mathrm { M } \)-3' peak들도 남아있음을 알 수 있었다. Poly \( \mathrm { M } \)-block에 KS-408 알긴산분해효소를 처리하면 Fig. 4C에서와 같이 거의 다 분해되어 불포화 dimer와 trimer를 생성하며 NMR 스펙트럼에서는 \( \underline {\triangle } \)-4- \( \mathrm { M } \) peak ( \( 5.8 \mathrm { ppm } \)), \( \underline {\mathrm { M } } \)- \( 1 _ { red } \) peak ( \(4.9 \mathrm { ~ppm } \) 및 \(5.4 \text { - } 5.2 \mathrm { ~ppm } \))등 분해산물들의 peak들이 보이는데 고분자 아세틸알긴산의 경우 \( \underline {\triangle } \)-4- \( \mathrm { M } \) peak ( \(5.8 \mathrm { ppm } \))가 거의 보이지 않는 것을 보아 Fig. 3의 결과에서와 같이 높은 점성으로 인한 효소접근성이 떨어져 \( \mathrm { M } \)- \( \mathrm { M } \) 사이의 분해가 제대로 일어나지 않은 것으로 보인다. 그러나 아세틸기 분해효소인 AcAlgE와 알긴산 분해효소인 KS-408 분해효소를 함께 처리한 경우에는 \( 2.2 \mathrm { ~ppm } \)의 아세틸기 peak가 많이 감소하고 \( \underline {\triangle } \)-4- \( \mathrm { M } \) ( \( 5.8 \mathrm { ~ppm } \)) 및 \( \underline {\mathrm { M } } \)-1 \(_ { red } \) ( \(5.2 \text { 및 } 4.9 \mathrm { ppm } \)) 등 비환원말단을 나타내는 peak들이 증가하였으므로 AcAlgE와 KS-408 분해효소를 함께 처리하면 아세틸알긴산의 분해효과가 높아짐을 알 수 있다. 산가수분해하여 20-50개의 mannuronate가 결합된 저분자 아세틸알긴산에 효소들을 처리한 경우는 Fig. 4B와 같았다. AcAlgE를 처리하였을 때 Fig. 4A의 경우보다 아세틸기 ( \( 2.2 \mathrm { ~ppm } \))가 많이 제거되었으며 \( \mathrm { M } \)-1 peak ( \(4.7 \mathrm { ~ppm } \))가 증가하는 반면 \( \mathrm { M } \)-2' 또는 \( \mathrm { M } \)-3' peak가 많이 감소하여 탈아세틸화가 많이 진행되었음을 볼 수 있었다. KS-408 분해효소를 처리하였을 경우에도 \( \underline {\triangle } \)-4- \( \mathrm { M } \) ( \(5.8 \mathrm { ~ppm } \))가 증가한 것을 보아 고분자 아세틸알긴산보다는 올리고머가 많이 생성되었음을 알 수 있고 TBA 방법으로 실험한 결과와 유사함을 알 수 있었다. 아세틸기 분해효소인 AcAlgE와 알긴산 분해효소인 KS-408 분해효소를 함께 처리한 경우 아세틸기는 완전히 제거되었고 \( \underline {\triangle } \)-4- \( \mathrm { M } \) ( \( 5.8 \mathrm { ~ppm } \)) 및 \( \underline {\mathrm { M } } \)-1 \(_ { red } \) ( \(5.2 \text { 및 } 4.9 \mathrm { ppm } \)) 등 비환원말단을 나타내는 peak들이 증가하여 polyM block을 알긴산 분해효소로 분해하였을 때와 같이 분해산물에서 나오는 peak들을 관찰할 수 있었다.</p>