실험동물은 female rat를 통하여 본 실험실에서 1주일간 고형사료와 물을 자유 급식시켜 실험실에서 적응시킨 후에 동물의 무게에 따라서 각각 7마리씩 4군으로 나누어 난소절제를 하지 않은 정상군은 \( 0.9 \% \) saline을 투여하고, 3개의 Ovx군은 각각 \( 0.9 \% \) saline, 인삼 사포닌, 인삼 수층을 투여하였다. 그리고 15주에 모든 쥐를 ether 마취시켜 해부한 뒤, 혈액과 간을 채취하여 실험하였다. 실험 종료 후에는 실험 동물을 ether 마취 하에서 개복 한 후 원심 분리하여 혈청을 분리하고, 간장을 적출하여 생리식 염수로 세척하여 vial에 담아 Deepfreezer에 보관하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실험 동물 및 식이</h2> <p>실힘동물은 체중 \( 160 \pm 10 \mathrm{g} \)의 female rat를 구입하여 본 실험실에서 1주일간 고형사료와 물을 자유 급식시켜 실험실에서 적응시킨 후 다음과 같이 나누었다. 동물의 체중에 따라 각각 7마리씩 4군으로 나누어 난소절제를 하지 않은 정상군(Sham)은 \( 0.9 \% \) saline을 투여하였고 3개의 Ovx군은 각각 \( 0.9 \% \) saline, 인삼 사포닌, 인삼 수층을 투여하였다. 난소 절제 후 인삼 사포닌을 투여하는 군 (Ovx\(+\)GTS)과 인삼 수층을 투여하는 군 (Ovx\(+\)GW)은 매일 쥐 무게 \(\mathrm{kg}\) 당 \( 100 \mathrm{mg} \)의 GTS와 GW를 D.D.W에 용해 시켜 난소 절제 이틀 후부터 복강 내 주입하였다. 정상군(Sham)과 난소 절제군 (Ovx)은 매일 쥐 무게의 \( 300 \mathrm{g} \)당 \( 0.9 \% \) saline \(0.5\mathrm{m} \ell \)를 복강 내 주입을 실시하였다. 15주에 모든 쥐를 ether 마취시켜 해부하여, 혈액과 간을 채취하였다.</p> <h2>실험방법</h2> <h3>1) 인삼 saponin의 추출</h3> <p>인삼의 saponin 추출은 Woo법에 따라 추출하였다. 인삼 뿌리 \( 100 \mathrm{g} \)를 5배의 \( 70 \% \) ethanol로 3시간 동안 추출한 후 여과시켜 농축하였다. 이 시료 \( 20 \mathrm{ml} \)에 증류수 \( 100 \mathrm{ml} \)와 ether \( 60 \mathrm{ml} \)를 가하여 잘 흔들어 준 후 4시간 정도 상 분리를 시킨 후 수층을 분리하였다. 수층에 n-butanol \( 60 \mathrm{ml} \)를 가하여 butanol층을 분리한 후, butanol 층에 증류수를 가하여 세척하였다. 증류수로 세척한 butanol층을 농축하여 동결건조한 것을 인삼 saponin으로 사용하였다.</p> <h3>2) 인삼 수층의 추출</h3> <p>잘게 썬 인삼 \( 100 \mathrm{g} \)당 \( 500 \mathrm{ml}\)의 D.D.W를 넣어 3시간 가량 끓여서 감압여과 시킨 후 농축시켜서 동걸 건조하여 인삼 수층(GW) 추출물로 실험에 사용하였다.</p> <h2>혈액 및 장기 채취</h2> <p>실험 종료 후 실험 동물을 ether 마취 하에서 개복 한 후 심장에서 채혈하여 30분 후 \( 3000 \times \mathrm{g} \)에서 10분간 원심 분리하여 혈청을 분라하였으며, 간장은 적출 하여 \( 0.9 \% \) 생리식 염수(saline)로 세척하여 vial에 담아 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) Deepfreezer에 보관하였다.</p> <h2>간 조직 중의 과산화지질 정량</h2> <p>과산화지질 정량은 간 \( 1 \mathrm{g} \)를 취하여 간 무게의 5배 용량인 \( 5 \mathrm{ml} \)의 \( 0.05 \mathrm{M} \) Phosphate Buffer(\(\mathrm{pH} 7.4\))에 homogenation 시켜 마개 있는 시험관에 \( 0.5 \mathrm{m \ell} \) 씩 Triple로 취하였다. TBA (Thiobarbituric acid)변법으로 \( 7 \% \) SDS로 가용화시켜 여기에 \( 0.67 \% \)TBA \(+\) acetic acid (\(1:1\)) \( 2 \mathrm{m \ell} \) 를 가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕상(Water bath)에서 50분간 가온 후 즉시 급랭시켜 butanol \( 5 \mathrm{~m} \ell \)로 \( 3000 \times g \)에서 10분간 원심분리 한 후 상등액을 취한 후 UV spectrophotometer (UVIKON 933) \(535\mathrm{nm}\)에서 흡광도를 측정하였다.</p>