2007년에 대구에서 구입한 호이초 시료를 blender를 이용하여 균질화한 후, 항균 활성, 항혈전 활성 및 항산화 활성을 평가하였다. 항혈전 활성 평가를 위해 최근 약물투여를 받지 않은 지원자의 전혈에서 혈장을 분리하였고, 여러 종류의 그람 음성균과 그람 양성균을 이용해 호이초 생즙 및 메탄올 추출물의 항균 활성을 평가하였다. 이후, 세균을 접종한 뒤 배양하였으며, 각 시료를 배지에 도말한 후, 배양하였다. 그 결과를 통해 항균 활성을 평가하였다.
<h1>재료 및 방법</h1> <h2>실혐재료 및 호이초 시료의 조제</h2> <p>실험에 사용한 호이초 시료는 2007년 8월에서 대구지역에서 관상용을 구입하였으며, 구입 직후 지하부를 절단하여 지상부만을 회수하고 blender(Hanil Co., Korea)로 균질화 한 후, 5분간 원심분리 \( (4000 \mathrm{rpm} \), HA-1000-3, Hanil Science, Korea)하여 상등액을 회수하여 생즙(fresh juice)으로 이용하였다. 한편 메탄올 추출물 조제의 경우에는 지상부 \( 500 \mathrm{g} \)을 흐르는 물에 수세 후, 수분을 제거하고 \( 5 \mathrm{L} \)의 메탄올을 가하여 상온에서 24시간씩 3회 추출하였다. 이후, 추출액은 filter paper (Whatsman No. 2.)로 거른 후 60에서 감압 건조하여 조제하였다. 이때 추출효율은 \( 1.4 \%(\mathrm{w} / \mathrm{w}) \)를 나타내었다. 메탄올 추출물은 물에 현탁한 후, n-hexane, ethylacetate 및 butanol를 이용하여 순차적으로 분획하였으며, 분흭물과 물 잔류물은 동일한 방법으로 감압건조하여 분말화 하였다. 각각의 시료 분말은 DMSO에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 항균 활성, 항혈전 활성 및 항산화 활성에 사용하였다. 항혈전 활성 평가를 위한 thrombin time 측정시, 혈장은 최근 1개월 동안 약물투여를 받지 않은 지원자의 전혈로부터 조제하였으며, 채혈 후 즉시 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 5,000\mathrm{g} \)로 5분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하고 냉동한 상태로 보관하였으며 (신선동결혈장), 필요시 상온에서 해동하여 사용하였다. 기타 시약은 Sigma Co.(USA)의 제품을 구입하여 사용하였다.</p> <h2>항균 활성 측정</h2> <p>호이초 생즙 및 메탄올 추출물의 항균 활성을 평가하기 위해 그람 음성균으로 Escherichia coli KCTC 1682, E. coli O157:H7 ATCC 43895, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186, Proteus vulgaris KCTC 2433을, 그람 양성 균으로는 Streptococcus mutans JC-2, Bacillus subtilis KCTC 1924, Listeria monocytogenes KACC 10550를 사용하였다. 한편 민간에서 사용되는 피부질환 치료의 항균효과를 검중하기 위해, 실험자들의 여드름 피부에서 분리한 6종의 세균(UFM3, UFS3, I-1, I-3, I-4 및 I-5)과, 식물 부패 균이면서 항생제 내성세균인 Pseudomonas rhodesiae YAM-12 균주를 추가적으로 사용하였다. 여드름 피부 및 염증피부의 세균분리는 멸균 면봉을 이용하여 생체시료를 채취하고, 멸균 증류수에 현탁한 후, 일반적인 평판 도말법에 따라 도말하여 분리하였으며, LB 한천배지(Difco Co, USA) 에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양한 후 콜로니 색깔 및 형태 차이에 따라 6 종을 선별하였다. 한편 항진균 활성 평가를 위해서는 Saccharomyces cerevisiae IFO 0233 및 캔디다증 진균감염중 원인균 Candida albicans KCTC 1940를 사용하였다. 먼저, 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth (Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24 시간 동안 배양한 후, 각 균주를 O.D.\(_{ 600}\) 0.1로 조정하여 Nutrient agar(Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petridish ( \(90 \times 15 \mathrm{mm} \), 녹십자, 한국) 에 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 도말하고, 각각의 시료 \( 7 \mu \mathrm{L} \)를 멸균 disc-paper(지름 \( 6.5 \mathrm{~mm} \), Whatsman No.2)에 가하여, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균의 경우에는 Sabouraud dextrose 배지를 이용하여 동일한 방법으로 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조 항균 제로는 항세균제로는 ampicillin과 streptomycin sulfate을, 항진균제로는 miconazole(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 \(mathrm{mm}\) 단위로 측정하였으며, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.</p>