TNF-\(\alpha \)는 주로 활성화된 대식세포에서 생성되어 염증반응에서 다른 면역세포의 TNF receptor에 결합하여 염증유발인자의 발현을 증가시키고 IL-6는 IL-6 수용체에 결합하여 후천성면역과 관계된 림프구를 활성화시킨다. MAPKs 경로는 진핵세포의 신호전달에서 중요한 역할을 하는 단백질 인산화효소가 연속되는 경로로서, 세포질 내부의 신호를 세포내의 핵으로 전달한다. LPS 및 TNF-\( \alpha \)에 의한 신호전달이 활성화 되면 \( I \kappa B- \alpha\)가 분해되고 NF-\(\kappa\)B p65가 핵으로 이동하여 NF-\(\kappa\)B element에 결합하여 전사를 활성화시킨다.
<p>TNF-\(\alpha \)는 주로 활성화된 대식세포에서 생성되어 염증반응에서 다른 면역세포의 TNF receptor (TNFR)에 결합하여 염증유발인자의 발현을 증가시키는 등의 역할을 수행하고, IL-6는 IL-6 수용체(receptor)에 결합하여 후천성면역과 관계된 림프구를 활성화시키는 역할을 한다. 이들의 과도한 분비는 TNF-\( \alpha \) 및 IL-6의 면역계 항상성 불균형을 초래하여 다양한 세포와 조직에 기능저해를 일으켜 염증성 장질환, 류마치스 등과 같은 만성염증 및 자가면역질환을 유발할 수 있다. RGE를 \( \mathrm{Ag} ~Ⅰ/Ⅱ-\mathrm{N} \) 재조합단백질에 의해 염증 유발된 RAW 264.7 대식세포에 농도별로 처리한 후 염증관련 사이토카인 생성을 확인하였다. 그 결과 RGE 농도 \( 5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 TNF-\(\alpha \) 생성이 \( 50 \% \) 이상 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, IL-1 \(\beta \)와 IL-6는 \( 10 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 50 \% \)와 \( 46 \% \) 이상 각각 감소하는 것을 확인하였다. IL-10은 \( 15 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 \( 35 \% \) 이상 감소하는 것을 관찰하였다.</p> <p>MAPKs 경로는 진핵세포의 신호전달에서 중심적인 역할을 하는 단백질 인산화효소가 연속되는 경로로서, 세포질 내부의 신호를 세포내의 핵으로 전달하는데 관여하여 포유동물의 세포에서 다양한 생화학적 반응, 즉 세포의 선당, 분화, 사멸 등을 매개한다. ERK는 주로 표피성장인자에 의해 활성화 되고, 세포내의 다른 신호전달 체계에 관여하며, NF-\(\kappa\)B를 활성화시킨다고 하며, p38은 지질다당질 분자나 삼투압과 관련된 세포 스트레스에 의해 활성화 되며, TNF-\(\alpha \)의 stability와 translation을 통제한다고 보고하고 있다. 본 연구에서 MAPKs 신호전달 관련성을 확인한 결과, ERK와 p38의 인산화가 농도의존적으로 감소하는 것이 확인되었으나, JNK에서는 변화가 관찰되지 않았다</p> <p>LPS 및 TNF-\( \alpha \)에 의한 신호전달이 활성화 되면 \( I \kappa B- \alpha\)가 분해되고 NF-\(\kappa\)B p65가 핵으로 이동하여 염증유발인자 유전자의 프로모터에 존재하는 NF-\(\kappa\)B element에 결합하여 전사를 활성화시킨다. 본 연구에서도 위와 같은 변화를 관찰하기 위해 염증유발된 대식세포에서 세포질과 핵에서 관련 전사인자 NF-\(\kappa\)B p65의 활성화를 확인한 결과, RGE를 처리하였을 때 농도의존적으로 핵에서 p65 활성이 염증유발시 증가하던 단백질이 RGE 처리시 농도의존적으로 억제되었으며, 세포질 내 p65와 \(I \kappa B-\alpha\)는 농도의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.</p> <p>위 결과는 iNOS 관련의 발현은 \( \mathrm{Ag}Ⅰ/Ⅱ-\mathrm{N} \) 재조합단백질에 의한 ERK와 p38의 인산화에 의한 NF-\( \kappa\)B p65의 활성화에 의해 유도되기 때문에 이 농도에서 NF-\(\kappa\)B p65의 활성이 차단되어 iNOS의 발현 감소가 이루어진 것으로 추정되었다. 최근 연구에 의하면 NSAID 장기간 투여 시 위장과 신장의 기능저하를 일으키며 특히, 혈관을 확장시키는 PGE\(_{2} \)와 prostacyclin의 생성을 억제하여 심혈관과 관련된 여러 부작용이 보고되고 있다. 따라서 최근에는 천연물 유래의 COX-2 억제제가 NSAID에 비해 생체에 잘 흡수되고 대사되므로 부작용이 좀 더 적을 것으로 판단하여, 우유엉겅퀴 유래의 silymarin과 천연허브 6종을 혼합하여 만든 신바로(shinbaro) 등과 같은 천연물에서 COX-2 억제제를 찾으려는 노력이 진행되고 있다. 본 연구에서 이용한 홍삼 에탄올추출물 (RGE)은 천연추출물로서 TNF-\( \alpha\), IL-1\( \beta \) 그리고 IL-6와 같은 염증성 사이토카인과 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하고, NF-\(\kappa\)B의 활성화에 ERK와 p38 인산화가 관여하여 이를 억제하므로 천연물 유래 항염증 물질로 개발될 수 있을 것이라 기대한다.</p>