mHPRT 유전자 내부에 intron2, intron3 영역에 256bp와 545bp의 sequencing gap이 확인되었으며 PCR 방법으로 각 gap 영역의 DNA 염기서열이 결정되었다. 위 실험의 결과들을 종합하면 유전체 연구의 새로운 기술인 \(TAR cloning \) 법은 이종 간의 \(orthologue \) 분리에 매우 효과적으로 사용가능하다.
<h2>\(mHPRT \) 유전자 내부에 존재하는 두 개의 \(sequencing gap \)의 특성</h2> <p>\(mHPRR \) 유전자에 대하여 \(mouse genome project \)를 통해 염기서일을 조사한 걸과, 유전자 내부의 \(intron2 \)와 \(intron3 \) 영역에서 두 개의 염기서열이 결정되지 않은 작은 \(Gap \)을 확인하였다 \((mouse hprt public, gi20983873; NM_013556 range=chrX:39557221-39590617 Public) \). 이에 대해 본 실험 에서 분리된 \(positive clone \)을 이용하여 \(PCR \) 방법으로 \(gap \) 영역을 증폭하여, 각 \(gap \) 영역에 대한 \(DNA \) 염기서열이 결정하였다. 그 결과, \(Gap1 \)은 \(intron2 \)에 존재하며 크기가 \( 256 \mathrm { bp } \)이며, \(Gap2 \)는 \(intron3 \)에 존재하며 그 크기가 \(644 bp \)로 밝혀졌다. 이 영역에 대해 본 연구 그룹이 \(GenBank \) \( ( \mathrm { NCBI } ) \) 에 등록하여 각각 \(AY302564, AY302565 \)의 \(accession \) 번호를 획득하였다.</p> <p>이 \(gap \) 부분의 \(DNA \) 특성을 조사하여 \(DNA sequencing \)에 있어 \(gap \)으로 남는 영역의 특성을 조사한 결과, \(Table 4 \)에서 보여주는 것과 같이 (Gap1 \)은 \(CT repeat \)의 반복서열이 길게 존재하고, \(Gap2 \) 영역은 \(GC contents \)가 \( 76.4 \% \)로 매우 높게 나타내 DNA 염기서열 결정에 문제를 나타내는 영역으로 보인다. 이러한 결과는 앞서 본 연구팀에 의해서 보고된 연구와 일치하는 것으로, 높은 반복서열이나 높은 \( \mathrm { GC } \) \(content \)의 존재는 대장균 내에서 만들어진 \(library \) 제작과정에서 재배열이 일어나거나 불안정한 요인으로 작용하며, 또한 \(DNA sequencing \) 반응과정에 어려움의 요인으로 사료된다. 그러므로 \(TAR cloning \)과 같이 \(library \) 제작이 필요 없는 경우에는 이러한 재배열이 일어나지 않게 되어 특정부분의 염기서열이 보존될 수 있다. 본 연구의 결과들을 종합하면 유전체 연구의 새로운 기술인 \(TAR cloning \) 법은 이종 간의 \(orthologue \) 분리에 매우 효과적으로 사용할 수 있으며, 나아가 이 기술은 동종간의 \(gene duplication \)이나 \(paralogue \)의 분리에도 이용될 수 있을 가능성을 시사한다. 또한 염기서열의 결정에 어려워 \(gap \)으로 남게 된 \(DNA \) 염기서열의 특성 \((Table 4) \)을 밝혀, 반복서열과 높은 \( \mathrm { GC } \) \(contents \)가 유전체 연구의 염기서열 완성에 어려운 요소로 확인되어 이에 대한 방법으로도 \(TAR cloning \)법의 효용성이 제기된다.</p>