Cisplatin 처리가 렛트 코르티기관의 염증성 사이토카인 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \), IL-6 분비를 증가시키며, 이들이 공동으로 작용하여 청각 유모세포 손상을 유발한다는 결과를 확인하였다. 이러한 사이토카인들이 cisplatin에 의한 청각유모세포 손상에 미치는 영향을 조사하기 위해, 세 사이토카인에 대한 중화항체를 전처리한 후 실험을 진행하였다. Cisplatin 처리로 인한 청각 유모세포의 stereocilia 손상은, anti-TNF- \( \alpha \), anti-IL-1 \( \beta \), anti-IL-6 항체의 전처리에 의해 크게 완화되었음을 발견하였다.
<h2>Cisplatin이 렛트 코르티기관의 염증성 사이토카인 분비에 미치는 영향</h2> <p>렛트 청가기관에서 cisplatin에 의한 염증성 사이토카인 생성을 확인하기 위하여 렛트 와우에서 분리 배양한 cochle-ar explant에 cisplatin을 처리한 후 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6 분비를 ELISA 방법으로 조사하였다. Cisplatin \( 30 ~ \mu \mathrm { M } \)을 30시간 처리한 상충액으로부터 염증성 사이토카인을 정량하였다. Cisplatin 처리는 렛트 코르티기관의 염증성 사이토카인 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6 분비를 현저히 증가시킴을 확인할 수 있었다.</p> <h2>Cisplatin 및 염증성 사이토카인이 청각세포 손상에 미치는 영향</h2> <p>염증성 사이토카인이 청각세포에 미치는 직접적인 영향을 조사하기 위하여, 렛트에서 분리한 organ of Corti 배양액에 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6 등을 처리한 후 청각세포의 stereocilia에 결합하는 phalloidin-TRITC 염색을 시행하였다. 정상 조직은 세 줄의 외측 청각유모세포(outcr hair cell)와 한 줄의 내측 청각유모세포(inner hair cell) 배열로 이루어져 있으나, \( 30 ~ \mu \mathrm { M } \) cisplatin 처리는 청가유모세포 손상에 의한 세포층 배열의 이상을 초래하였다. 또한 염증성 사이토카인 TNF- \( \alpha \) \( (200 \mathrm { ~ng } / \mathrm { ml } ) \), IL-1 \( \beta(200 \mathrm { ~ng } / \mathrm { ml } ) \) 및 IL-6 \( (200 \mathrm { ~ng } / \mathrm { ml } ) \)을 각각 처리한 실험군에서도 cisplatin 세포독성과 유사한 청각유모세포 배열의 파괴를 초래하였다. 이들 세 염증성 사이토카인의 병용처리는 상승효과를 나타내서 더욱 현저한 청각 유모세포 손상을 초래하였다. Fig. 4B는 각 실험군에서 임의로 정한 3개의 구역에서 청각유모세포의 수로 정량화하여 그래프로 표시하였다.</p> <h2>염증성 사이토카인의 중화(neutralization)가 cisplatin에 의한 코르티기관 청각유모세포 손상에 미치는 효과</h2> <p>염증성 사이토카인이 cisplatin에 의한 코르티기관 청각유모세포 손상에 미치는 효과를 조사하기 위하여 TNF- \( \alpha \), IL-1 \( \beta \) 및 IL-6에 대한 중화항체를 전 처리한 후, phalloidin-TRITC 염색을 시행하였다. Cisplatin \( (30 ~ \mu \mathrm { M } ) \) 처리는 칭각유모세포 stereocilia 손상을 초래하여, cisplatin에 의해 파괴된 외측 및 내축 청각유모세포의 배열은 anti-TNF- \( \alpha \) ( \(1.5 \mathrm { ~ug } / \mathrm { ml } \)), an-ti-IL-1 \( \beta \) \( (1.5 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 및 anti-IL-6 \( (1.5 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 항체의 전처리에 의하여 현저히 보호되었다. Fig. 5B에서는 각 실험군에서 임의로 정한 3개의 구역에서 anti-TNF- \( \alpha \) \( (1.5 ~ \mu \mathrm { g } \) \( / \mathrm { ml } ) \), anti-IL-1 \( \beta \) \((1.5 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 및 anti-IL-6 \( (1.5 ~ \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } ) \) 항체 전처리에 의한 청각유모세포의 보호 효과를 phalloi-din-TRITC 염색 세포수로 정량화하여 도식화 한 결과이다.</p>