된장 시료들의 항산화 활성을 측정하기 위해 ABTS radical 소거활성과 FRAP assay 방법을 사용하였다. ABTS 용액과 FRAP 용액을 제조하고, 추출물과 용액을 혼합하여 10분 및 30분 반응시킨 뒤 흡광도를 측정하여 항산화 활성을 계산하였다. 또한 결과의 유의성 검정을 위해서 분산분석을 했고, Duncan's multiple range test를 했으며, 이렇게 검정된 분석을 SPSS 프로그램을 통해 처리하였다.
<p>Total phenolics content ( \( \mathrm { mg } / { g } \) GAE) \[ = \{ [( \text { Sample O.D. } -0.005)-0.007] / 0.004 \} \times \text { 희석배수 } / 1000 \]</p> <h2>항산화 활성 측정</h2> <p>항산화 활성 측정을 위한 된장 시료들은 동결건조한 된장 \( 1 \mathrm { ~g } \)에 증류수 \( 40 \mathrm { ml } \)로 열수 추출하고 여과한 추출물로 실험하였다. ABTS radical 소거활성은 Pellefrini 등의 방법을 사용하였다. ABTS 용액 제조는 \( 7 \mathrm { mM } \) ABTS (2,2'-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid diammonium salt, Sigma-Aldrich)와 \( 2.45 \mathrm { mM } \) potassium persulfate (Sigma-Aldrich)을 혼합하여 사용하였다. 제조한 ABTS 용액을 \( 734 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도 값을 \( 0.7000 \pm 0.005 \)으로 보정하여 실험에 사용하였다. 된장 추출물 \( 20 \mu \mathrm { l } \)와 보정한 ABTS 용액 \( 980 \mu \mathrm { l } \)를 섞어서 어두운 곳에서 10분 반응시킨 뒤 \( 734 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하고 아래 식에 따라 계산하였다. 대조구로는 시료 대신 추출에 사용한 용매를 사용하였다.</p> <p>DPPH radical scavenging activity \(( \%) \) \[=[1-( \text { sample O.D./control O.D. } )] \times 100 \]</p> <p>Benzie와 Strain의 FRAP assay 방법을 사용하여 된장 시료들의 항산화능을 측정하였다. FRAP 용액 제조를 위해 \( 300 \mathrm { mM } \) acetate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 3.6)와 \( 10 \mathrm { mM } \) TPTZ (2,4,6-tripyridyl-s-triazine, Sigma-Aldrich) 그리고 \( 20 \mathrm { mM } \mathrm { FeCl } _ { 3 } \). \( 6 \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } \) (Sigma-Aldrich)를 10:1:1 (v/v/v) 비율로 혼합하였다. FRAP용액 \( 1.5 \mathrm { ml } \)와 시료 추출물 \( 50 \mu \mathrm { l } \)를 혼합하여 어두운 곳에서 30분간 반응시킨 뒤 \( 593 \mathrm { ~nm } \)에서 흡광도를 측정하였다.</p> <h2>통계분석</h2> <p>모든 측정은 3회 반복하였으며, 결과들은 평균 \( \pm \) 표준편차로 표시하였다. 실험 결과들의 유의성을 검정하기 위하여 분산분석(ANOVA)을 행한 후, \( p<0.05 \) 수준에서 Duncan's multiple range test를 실시하였다. 모든 통계 분석은 SPSS (v18.0, SPSS Inc., USA) 통계 프로그램을 이용하여 처리하였다.</p>