무작위로 나눠진 실험 동물을 급성 알코올 독성 유도 실험과 동일한 방법으로 4주간 ALC(25mg/body weight)과 에탄올(0.9g/body weight)을 매일 1회 투여하여 만성 알코올 독성 유도 실험을 수행하였다. 7일마다 실험동물의 체중과 사료 섭취량을 측정하고, 투여 처리기간 후 간 중량과 GOT, GPT 활성을 측정하였다. 그 결과 ALC의 처리가 Chang 세포에 미치는 영향을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하여 세포생존율이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.
<h2>만성 알코올 독성 유도</h2> <p>실험수행을 위해 동물을 무작위로 정상군, 알코올 투여군, ALC 투여 군에 각 10마리씩으로 나누어 실험을 수행하였다. 투여 방법은 급성 알코올 독성 유도 실험과 동일하게 수행하고 투여량을 달리하였다. ALC를 \( 25 \mathrm { mg } / \) body weight의 농도로, 에탄올은 \( 0.9 \mathrm { ~g } \) /body weight의 농도로 4주간 매일 같은 시간에 1회 투여 하였다. 7일마다 실험동물의 체중과 사료 섭취량을 측정하였다.</p> <h2>간 중량 측정</h2> <p>실험 동물의 간 중량 측정을 위하여 급성 알코올 독성 유도 실험의 경우 투여 처리기간인 1주 후, 만성 알코올 독성 유도 실험의 경우 4주 후 마취하고 심장 채혈한 후 간을 적출하였다. 적출한 간은 생리식염수로 세척한 다음 수분을 제거하고 중량을 측정하였다.</p> <h2>혈중 Glutamic oxaloacetic acid transaminase (GOT), Glutamic pyruvate transaminase (GPT) 활성 측정</h2> <p>혈액 채취 후 실온에서 30분간 방치하여 응고시킨 다음 3000 \( \mathrm { rpm } \) 에서 30분간 원심분리하여 혈청을 분리하고 \( -70 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 보관하여 사용하였다. GOT \( \mathrm { GPT } \) 측정 Kit (Asan, Korea)를 사용하여 \( \mathrm { GOT } \) 와 \( \mathrm { GPT } \) 활성을 측정하였다.</p> <h1>결과 및 고찰</h1> <h2>세포 독성 확인</h2> <p>Chang 세포에서 \( \mathrm { ALC } \) 의 처리가 세포에 미치는 영향을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하여 세포생존율을 측정하였다 ( \(Fig. \) \(1A \)). 실험 결과 \( \mathrm { ALC } \) 는 수행된 모든 농도 \( (0.05,0.1,0.2,0.5 \), \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) )에서 세포 독성을 나타내지 않았으며 세포생존율이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다.</p> <h2>알코올 독성 억제 효능 확인</h2> <p>Huh7 세포에 \( \mathrm { ALC } \) 를 1시간 전처리 한 후 에탄올을 \( 800 \mathrm { mM } \) 처리하고 24시간 뒤 세포생존율을 확인하였다 \(Fig. \) \(1B) \). 실험 결과, 에탄올 처리에 의해 감소된 세포생존율이 \( \mathrm { ALC } \) 처리에 의해 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. \( 0.1 \mathrm { mg } / \) \( \mathrm { mL } \) 의 농도에서부터 유의적으로 증가하였으며 \( 1 \mathrm { mg } / \mathrm { mL } \) 의 농도에서는 대조군과 유사한 수준까지 세포생존율이 증가된 것을 확인할 수 있었다. 따라서 \( \mathrm { ALC } \) 가 Huh7 세포를 에탄올 독성으로부터 보호하는 것을 확인하였다.</p>