본 논문에서는 pheophytin-a, 9-HpbD-a, 9-HpbD-a red를 이용하여 세포 독성능을 비교하였으며, 광감작제의 농도가 증가할수록 세포생존율은 감소되었는데 9-HpbD-a의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 세포 독성능이 가장 우수한 광감작제임이 확인되었다. 9-HpbD-a에 대해 추후 레이저 조사량에 따른 세포 독성능 분석 결과 조사된 에너지의 양이 증가할수록 세포생존율은 감소하는 것을 볼 수 있었으며, 9-HpbD-a를 농도별, 레이저조사 시간에 따라 세포생존율을 분석한 결과 6시간까지 세포생존율이 통계적으로 의미 있게 감소하는 것을 확인하였다. 마지막으로 9-HpbD-a의 세포독성 실험 결과 9-HpbD-a의 농도가 높아질수록 광역학치료를 시행한 실험군에서는 급속한 세포 생존율의 감소하는 것을 확인했다.
<h1>결 과</h1><h2>세포 독성능 측정</h2><h3>Pheophytin-a, 9-HpbD-a와 9-HpbD-a red의 세포 독성능</h3><p>광감작제로 pheophytin-a, 9-HpbD-a, 9-HpbD-a red를 이용하여 세포 독성능을 비교하였다. 레이저 조사는 \( 400 \mathrm{mW} \)의 세기로 30분 \( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)으로 하였고 광감작제를 투여하고 바로 레이저 조사를 시행하였다. 3종류의 광감작제에서 공통적으로 \( 0.59 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서부터 세포 독성능을 나타내기 시작하였다. Pheophytin-a의 \( \mathrm{IC}_{50} \) (\(50\%\) inhibition concentration)은 \( 16.41 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 광감작제가 희석된 에탄올을 사용한 대조군의 \( \mathrm{IC}_{50} ~26.12 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)과 같이 낮은 세포 독성능을 보였고 9-HpbD-a, 9-HpbD-a red에서는 광감작제의 농도가 증가할수록 세포생존율은 감소되었는데 9-HpbD-a의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 \( 1.46 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 9-HpbD-a red의 \( \mathrm{IC}_{50}\) \(3.51 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)보다 세포 독성능이 가장 우수한 광감작제임을 확인하였다.</p><h3>레이저 조사량에 따른 세포 독성능</h3><p>세포 독성능이 가장 우수한 9-HpbD-a를 이용하여 레이저 조사량에 따른 세포독성을 확인하였다. 레이저 조사는 \( 400 \mathrm{mW} \)의 세기로 0분, 1분 \( \left(0.1 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\), 5분 \( \left(0.5 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\), 30분 \( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)으로 하였고 광감작제를 투여하고 바로 레이저 조사를 시행하였다. 레이저를 조사하지 않고 9-HpbD-a만을 투여한 실험군의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 \( 24.43 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 가장 높았으며 1분 \( \left(0.1 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)의 \( \mathrm{IC}_{50} \) 은 \( 11.72 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}\), 5분 \( \left(0.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 \( 4.87 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 그리고 30분 \( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 \( 1.46 \mu \mathrm{g} \) \( / \mathrm{ml} \)으로, 조사된 에너지의 양이 증가할수록 세포생존율은 감소되었다. 9-HpbD-a의 농도가 \( 4.69 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 세포생존율은 0분에서 \( 89 \%\), 1분 \( \left(0.1 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)에서 \( 81 \%\), 5분 \( (0.5 \)\( \left.\mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\), 30분 \( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\)에서 각각 \( 52 \%, 5 \% \)로 나타닜으며 9-HpbD-a의 농도가 \( 37.5 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 0분의 세포생존율은 \( 10 \% \)로 감소하였고, 1분 \( \left(0.1 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\), 5분 \( \left(0.5 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right)\), 30분 \( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)에서도 모두 세포생존율이 \( 1 \% \)로 감소함을 보아 9-HpbD-a의 농도가 높아질수록 세포생존율도 감소됨을 확인할 수 있었다.</p><h3>9-HpbD-a 와 배양시간에 따른 세포 독성능</h3><p>광감작제인 9-HpbD-a를 농도별로 96 well plate에 투여하고 레이저조사 까지의 시간 간격을 0, 3, 6, 9, 12시간으로 하여 세포생존율 확인한 결과 0시간에서의 \( \mathrm{IC}_{50} \)은 \( 1.43 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 가장 높았으며 3시간에서는 \( 0.27 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \), 그리고 6시간, 9시간, 12시간에서는 각각 \( 0.14 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}, 0.12 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml}, 0.11 \) \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)으로 6시간까지 세포생존율이 통계적으로 의미 있게 감소하였다\( (\mathrm{p}<0.05)\). 0시간을 제외한 나머지에서 \( 0.59 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 이상의 9-HpbD-a 농도에서 생존율이 모두 \( 10 \% \) 미만으로 감소되었다.</p><h3>9-HpbD-a의 세포 독성능</h3><p>세포 독성능이 가장 우수한 9-HpbD-a와 \( 660 \mathrm{nm} \) diode laser 를 이용하여 레이저조사량은 \( 400 \mathrm{mW} \)의 세기로 30분\((3.2 \left.\mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \)으로 하였고, 9-HpbD-a를 농도별로 96 well plate에 투여하고 레이저조사까지의 시간 간격을 6시간으로 하여 세포 생존율을 확인하였다. 대조군으로는 \( 400 \mathrm{mW} \)의 세기로 30분\( \left(3.2 \mathrm{J} / \mathrm{cm}^{2}\right) \) 간 레이저 조사만을 시행한 실험군, 다양한 농도의 9-HpbD-a만을 투여한 실험군 그리고 세포에 아무런 처치도 하지 않은 실험군으로 하여 세포생존율을 확인한 결과 9-HpbD-a의 농도가 \( 0.29 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \)에서 9-HpbD-a를 투여하고 레이저조사를 시행한 실험군의 세포생존율은 \( 13 \% \), 레이저조사만 시행한 실험군, 9-HpbD-a만을 투여한 실험군 모두 \( 87 \% \)로 광역학치료를 시행한 실험군에서 우수한 세포독성을 확인하였고 9-HpbD-a의 농도가 높아질수록 광역학치료를 시행한 실험군에서는 급속한 세포 생존율의 감소를 확인할 수 있었다. 반면에 대조군인 레이저조사만 시행한 실험군, 9-HpbD-a만 투여한 실험군에서는 세포생존율의 감소가 적었음을 확인하였다.</p>