가자 메탄올추출물(TCM)의 생리활성을 규명하기 위해 흰 쥐에 TCM을 투여하고 PQ독성기전에 미치는 영향을 측정했다. 일정한 조건에서 양성했던 ICR계 웅성 생쥐에게 TCM을 여러 용량으로 투여하였고, PQ 투여 후 독성효과를 측정하였다. 결과적으로, superoxide dismutase (SOD), catalase, 과산화효소, 그리고 glutathione peroxidase (GP) 등의 내인성 항산화 효소가 PQ 독성을 완화시킨다는 것을 밝혔다.
<p>이러한 PQ 유도 독성으로부터 생체를 보호하는 항산화효소로는 superoxide dismutase (SOD), catalase, 과산화효소 및 glutathione peroxidase (GP) 등 내인성 항산화 효소가 있음이 밝혀졌으며 항산화물질들은 조직 내에서 생성되는 free radical을 포착, 제거할 수 있다고 보고되어 있다. 본 논문에서는 가자 메탄올추출물(Terminalia chebulae methanol extract, TCM)의 새로운 생리활성을 규명할 목적으로 흰 쥐에 TCM을 투여하여 PQ독성기전에 미치는 영향을 신장 및 폐조직 세포 중에서 측정하여 그 결과를 보고하고자 한다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>시료 조제</h2> <p>부산 시내 한의원에서 구입한 가자 \( 500 \mathrm { ~g } \) 을 잘게 세절하여 메탄올 \( 500 \mathrm { ml } \) 에 넣고 \( 45 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 3시간 동안 3회 추출한 후 동결건조하여 최종 \( 96 \mathrm { ~g } \) 의 분말을 얻어 이를 생리활성 측정을 위한 시료로 삼았다.</p> <h2>실험 동물 및 처치</h2> <p>실험동물은 대한 BioLink (충북 음성)로부터 분양 받아 본 대학 동물사에서 일정한 조건(온도: \( 22 \pm 1 ^ {\circ } \mathrm { C } \), 습도: \( 55 \pm 3 \% \), 명암: 12시간 light/dark cycle)으로 1주 동안 고형 사료로 적응시킨 체중 \( 25 \pm 10 \mathrm { ~g } \) 의 ICR계 웅성 생쥐를 사용하였다. TCM의 투여는 mouse를 세군으로 나누어 각각 dose \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \), \( 200 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } , 300 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 의 용량으로 saline에 용해하여 매일 2주간 경구 투여하였고 PQ의 투여는 시료를 투여하고 난 후 \( 100 \mathrm { mg } / \mathrm { kg } \) 용량으로 복강주사하고 24시간 후에 처치하였다.</p> <h2>효소원의 조제</h2> <p>시료 투입이 끝난 실험동물을 \( \mathrm { CO } _ { 2 } \) gas로 가볍게 마취시킨 후 때어낸 폐와 신장조직에 \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.4)를 가하여 빙냉하에서 glass teflon homogenizer를 사용하여 \( 10 \% \) 마쇄액을 만들었다. 이 마쇄액을 homogenate 분획으로 하였으며, 이것을 \( 600 \times g \) 에서 10 분간 원심분리하여 핵 및 미마쇄 부분을 제거하고 다시 \( 10,000 \times g \) 에서 20분간 원심분리하여 그 침전물에 일정량의 \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer \( ( \mathrm { pH } \) 7.4)를 가하고 현탁시켜 mitochondria fraction으로 하고 상등액을 다시 105,000× \( g \) 에서 1시간 초원심 분리하여 cytosolic fraction으로, 그 침전물에 동일한 양의 \( 0.1 \mathrm { M } \) sodium phosphate buffer ( pH 7.4)를 가하여 현탁시킨 액을 microsomal fraction으로 하였다. Mitochondria fraction과 microsomal fraction은 현탁한 후 재원심분리하여 효소원으로 사용하였다.</p>