Western blot법을 사용하여 RAW 264.7 세포에서 LPS 유도 밀배아유가 iNOS, COX-2 및 NF-KB p65에 미치는 영향을 알아본 결과, iNOS의 경우는 LPS 처리에 의해 발현이 증가하였으며, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리하였을 때 발현이 크게 감소하였고, COX- 2의 발현은 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 발현 억제가 증가하였다. NF-кB p65에서는 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 억제 효과가 증가하였는데, 밀배아유가 NF-кB signaling을 통해 염증 매개 물질 생성을 조절하는 것으로 사료된다.
<h2>iNOS, COX-2 및 NF-KB p65 발현 억제 효과</h2> <p>LPS로 유도한 밀배아유가 RAW 264.7 세포에서 염증반응의 지표인 iNOS 및 COX-2 생성 및 NF-кB p65에 미치는 영향을 알아보고자 Western blot법을 이용하여 단백질의 발현 억제정도를 알아보았다. 포유동물 세포의 NOS 의 경우, 유사형태 3가지 존재하는데 neuronal NOS (nNOS), endothelial NOS (eNOS), 그리고 iNOS이다. 이중 nNOS) 및 eNOS 는 항상 발현되어있으며 iNOS는 일부 세포에서 LPS, cytokine 및 박테리아 독소 같은 자극들에 노출되는 경우 발현되며 염증반응에 관여하게 된다. COX 는 arachidonic acid를 prostaglandin으로 촉진시키는 효소로써, 신체의 항상성 유지에 관여하며 대부분의 조직에서 정상적인 상태에 발현하는 COX-1과 일부 신생조직이나 염증, 기타 면역반응시 세포분열인자나 cytokine에 의해 염증 부위에서 발현이 증가되는 COX-2 가 있다. NF-KB는 일반적인 세포에서 p65와 p50의 heterodimer 형태로 cytosol에 존재하며, I \( \mathrm{KB} \) 와 결합이 되어 있어 핵으로의 이동을 막아 전사인자로써의 역할을 하지 못하게 된다. 하지만 LPS와 cytokine 등의 다양한 자극으로 인하여 \( \mathrm{I} \kappa \mathrm{B} \) 가 인산화 됨으로써 분해되어 \( \mathrm{NF}- \) \( \kappa \mathrm{B} \) 가 핵으로 이동하여 전사인자로써 역할을 하여 iNOS, COX-2 및 염증관련 cytokine을 합성한다. 본 연구에서는 RAW 264.7 세포에 밀배아유를 \( 0.1-100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리하여 iNOS, COX-2, NF-кB p65의 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. iNOS의 경우, LPS 처리에 의해 발현이 증</p> <p>가 하였으며, \( 0.1-50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도 범위에서는 LPS 단독 처리군에 비해 발현이 약간 감소하였으나, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도로 처리하였을 때 iNOS의 발현이 크게 감소하였다. 이에, Fig. 2 에서의 \( \mathrm{NO} \) 분비량 감소는 iNOS 의 발현 저해에 의한 것임을 확인하였다(Fig. 4). COX- 2 의 발현은 LPS 단독 처리에 의해 증가하였으며, 0.1-10 \( \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서는 발현 저해 효과가 없었으나, \( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 약간 감소하여 \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 발현 억제가 증가하였다. NF-кB p65에서는 10 -\( 50 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 에서 단백질 발현이 약간 저해되었으며, \( 100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 농도에서 억제효과가 증가하였다. 이는 밀배아유가 NF-кB signaling을 통해 iNOS, COX-2 및 염증관련 cytokine의 발현 및 생성을 조절하는 것으로 사료된다. 불포화 지방산 oleic acid는 NF-KB 활성 저해를 통한 iNOS와 COX- 2 의 발현 감소로 염증 작용을 조절한다고 알려져 있어, 밀배아유에 높게 함유된 불포화 지방산이 NF-KB signaling pathway에 관여하여 염증 매개 물질 조절을 통한 항염증 효과를 나타내는 것으로 사료된다.</p>