Salmonella는 감염 질환을 유발하는 그람 음성의 장내 세균으로, macrophage라는 면역 세포를 감염시키고 전신에 퍼지며 질병을 일으킨다. 이 연구에서는 OmpW 단백질에 대한 정확한 기능과 유전자 발현 조절에 대한 이해를 높이기 위해, OmpW 단백질이 결손된 Salmonella 돌연변이주를 만들고, 이와 대비되는 야생주의 특성을 비교하였다. 또한 OmpW 특이적인 항체를 이용해, ompW 유전자의 발현을 조절하는 세포 외부 환경 요인을 연구하였다.
<h1>서 론</h1> <p>Salmonella는 그람 음성의 장내 세균으로 동물 또는 사람에 감염하여 위염, 설사, 장티푸스열 등의 질병을 유발한다. 대표적인 세포내 기생 병원체의 한 종류인 Salmonella는 숙주 세포의 대표적인 면역 세포인 macrophage 의 식균작용에서도 살아남아 macrophage내에 포함된 채로 숙주의 몸 전체에 퍼지면서 전신성 감염을 일으킨다. 이러한 일련의 감염과정 동안에 Salmonella는 다양한 환경조건에 직면하게 되는데, Salmonella를 포함한 다양한 병원균들은 이러한 환경조건들을 인식하고 그들의 생존에 불리한 환경을 극복할 수 있는 메커니즘을 가진다. 특히 그람 음성 세균의 외막 단백질들은 이러한 외부 환경 조건에 따라 그 발현에 변화가 생기는 경우가 많으며, 이렇게 발현된 외막 단백질들은 수송에 관여하는 통로, 외부 물질의 인지, 병원체의 부착인자 등으로 작용하게 된다. 몇몇 연구들에서 외부 환경 조건 중에서도 삼투환경 변화에 따른 외막 단백질의 발현 조절에 관한 연구가 수행되었다. 특히 Xu 등은 호염성 그람음성 세균의 한 종류인 Vibrio parahaemolyticus의 각기 다른 염농도에 따른 외막 단백질의 발현을 비교하였다. 이 연구에서 언급되었던 OmpW는 Escherichia coli colicin S4의 수용체라고 알려져 있지만 Salmonella에서의 자세한 기능에 대해서는 잘 연구되어있지 않다. 또한 OmpW는 외막 단백질에 위치하는 소수성 porin 단백질임이 알려졌으며 이러한 OmpW 단백질의 소수성은 숙주 세포로의 부착인자로서도 작용할 수 있다는 것을 의미한다.</p> <p>본 연구에서는 현재까지 정확한 기능과 유전자 발현 조절이 알려져 있지 않은 Salmonella의 OmpW 단백질이 결손된 돌연변이주를 구축하여 야생주와 대별되는 특징들을 파악하고자 하였다. 또한 OmpW 특이적인 항체를 제조하고, 이를 이용하여 ompW 유전자의 발현 조절에 관여하는 세포 외부 환경 인자를 알고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>사용 균주, 플라스미드 및 사용 배지, 균주 배양 조건</h2> <p>본 연구에서 사용된 균주와 플라스미드들을 Table 1에 열거하였다. Salmonella typhimurium과 Escherichia coli는 Luria- Bertani (LB) 액체배지 또는 1.5% agar를 첨가한 고체배지를 사용하여 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 배양하였다. 항생제는 필요한 경우 각각의 배양 조건에 다음과 같은 농도로 첨가하였다: ampi-cillin, 100 μg/ml; streptomycin, 50 μg/ml. Asd- 균주의 배양을 위하여 diaminopimelic acid를 50 μg/ml의 농도로 첨가하였다[8]. Allelic exchange 과정에서 suicide 플라스미드 내에 있는 sacB 유전자를 이용하여 suicide 플라스미드 DNA 결손 균주의 선별을 위해 5% sucrose를 포함하는 LB 고체배지를 사용하였다.</p>