PCR-RFLP는 시간, 비용, 재현성 등의 이점을 갖고 있으며, A.simplex의 18S rDNA 염기서열은 HaeIII로 두가지 패턴으로 나뉘어져 다형성을 보이며, Goezia를 out-group으로 사용하여 8가지 제한효소로 모두 다른 패턴을 보여 Anisakis나 Contracaecum과의 분류확상의 거리를 알 수 있었다. 분자생물학적 감별진단 방법을 정립하기위해 유충을 5종의 어류에서 분리하였고 분석 결과, 18S rDNA PCR-RFLP 방법은 A. simplex와 Contracaecum type C′의 감별 진단에 무용하지 않은 것으로 밝혀졌으며, Contracaecum type A의 분류에는 제한하여 사용하여야 하고 형태학적 분류 기준에 대한 재검토가 뒤따라야 할 것으로 사료되었다.
<p>A. simplex는 ITS-1이나 ITS-2 PCR-RFLP에서 HaeIII 에 의해 두가지 패턴으로 나뉘어져 ITS의 다형성(polymorphism)으로 보고 되기도 하였으나 본 실험에 사용한 5종의 해산어류에서 수집한 A. simplex 모두에서 제한효소 종류에 상관없이같은 pattern을 보여 18 S rDNA 염기서열이 ITS에 비해 변이정도가 매우 낮은 것을 확인할 수 있었다. 분류학적 out-roup인 Goezia 의 경우에는 사용한 8 종의 제한효소 모두에서 A. simplex 및 Contracaecum type A와 \( \mathrm { C } ^ {\prime } \)과 완전히 다른패턴을 보여 Anisakis나 Contracaecum과의 분류확상의 거리를 알 수 있었다.</p> <p>PCR-RFLP는 여러 다른 진단 방법들에 비해 시간 및 비용 절감 효과뿐만 아니라 재현성도 뛰어난 것으로 보고되고 있다. 또한 여러 다양한 보존액에 보관된 시료에서 기생충을 진단할 수 있는 편리한 방법으로 관심을 모으고 있다. 특히 기생 충의 숫자가 매우 적거나 충체의 일부만으로 진단하여야 할 경우 매우 유용한 수단이 될 수 있을 것으로 보여진다. 본 실험에서도 18 S rDNA는 제한효소 Hinf 1, Alu 1, Hha I, Dde 1 및 Hae III로 A. simplex와 Contmacaecum type \( \mathrm { C } ^ {\prime } \) 을 쉽게 구별할 수 있었다. 그러나 Contracaecum type A는 사용한 8 종 의 제한효소 가운데 Taq I, Hinf I, Alu I 및 Dde I을 사용한 경우 두가지 패턴을 보였는데 이들 가운데는 A. simplex, Contranectum type C', Goezia와 동일한 패턴을 보이거나 전혀 새로운 분석 양상으로 나타나기도 하였다. 이러한 결과는 Contracaecum type A에 대한 형태학적 분류가 분자유전학적 자료들과 함께 제검토되어야 함을 시사하고 있다.</p> <h1>요 약</h1> <p>고래회충유충증은 해산어류에 기생하는 고래회충과(family Anisakidae)에 속하는 선충류 유충에 의한 질병으로 유충의 직접적인 위장관내 침입으로 인한 병변과 더불어 유충의 분비 배설물에 의한 알레르기 질환도 유발될 수 있다. 고래회충유층 증은 A. simplex를 비롯하여 Contracaecum, Pseudoterranooa, Hysterothylacium 등의 유충에 의해 야기될 수 있으나 이들에 대한 형태학적 감별 진단은 유충의 형태적 유사성으로 인하여 매우 어려운 경우가 많다. 이러한 형태학적 진단의 어려움을 극복하고 분자생물학적 감별진단 방법을 확립하기 위하여 A. simplex, Contracaecum type A. type \( \mathrm { C } ^ {\prime } \) 및 Goezia 유충을 숭어, 도다리, 고둥어, 아나고, 참돔 등 5 종의 어류에서 분리하였다. 각각의 유층으로부터 분리한 18S DNA 를 PCR로 증폭한 후 Taq 1, Hinf I, Hha I, Alu 1, Dde I, Hae III, Sau 96I, Sau 3AI 등 8 종의 제한효소를 사용하여 PCR-RFLP를 시행하였다. PCR product의 크기는 약 \( 2.0 \mathrm { ~Kb } \) 였으며 \( \operatorname { Hinf } 1, A l u 1 \), Hha \( \mathrm { I } , \operatorname { Dde } \) 1 및 Hae III 로 A. simplex 와 Contracaecum type \( \mathrm { C } ^ {\prime } \) 을 구분할 수 있었다. 그러나 Contracaecum type A의 경우에는 Taq I, \( \operatorname { Hinf } \) I, Aiu I 및 Dde I의 경우에는 2가지 패턴으로 나타났으며 이들 가운데 일부는 A. simplex, Contracaecum type \( C ^ {\prime } \), 및 Gorzia 와 동일한 분석 패턴을 보이기도 하였다. Goczia 는 사용 한 8개의 제한 효소 모두에서 A. simplex 및 Contracnecum type A 및 type \( \mathrm { C } ^ {\prime } \)과 각기 다른 양상을 보였다. 이러한 결과로 18S rDNA PCR-RFLP 방법은 A. simplex와 Contracaecum type \( C ^ {\prime } \) 의 감별 진단예 유용한 것으로 밝혀졌으며, Contracaecum type A의 분류에는 제한적으로 사용되어야 함은 물론 형태학적 분류 기준에 대한 재검토가 뒤따라야 할 것으로 사료되었다.</p>