본 연구는 CYP2J2 효소 활성 저해능을 가진 화합물을 찾기 위해 시판중인 120종 약물을 대상으로 CYP2J2 효소 활성 저해능을 평가하였다. 이는 CYP2J2의 기질 약물인 astemizole로부터 생성되는 CYP2J2 매개 대사체인 \( O \) desmethyl astemizole 생성 속도 측정을 통해 이루어졌다. 이러한 방법으로, aripiprazole, haloperidol, miconazole 및 terfenadine 등이 CYP2J2 저해능을 가진 화합물로 확인되었으며, 이들의 \( \mathrm { CYP } 2 \mathrm { ~J } 2 \) 활성 억제 상수 \( \left ( \mathrm { IC } _ { 50 } \right ) \)를 구하는 실험을 진행하였다.
<p>따라서, 본 연구에서는 CYP2J2 효소 활성에 저해능을 보이는 화합물을 밭굴하기 위하여, 현재 시판중인 약물 중 120종을 대상으로, 인체 CYP2J2 효소 활성 저해능을 평가하고자 하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>시약 및 재료</h2> <p>CYP2J2 효소 활성 측정에 필요한 CYP2J2 기질약물 및 대사체인 astemizole, O-desmethyl astemizole, ebastine, hydrox-yebastine 및 terfenadine은 TRC (North York, Canada)에서 구매하여 사용하였다. NADP, glucose-6-phosphate, glu-cose-6-phosphate dehydrogenase 및 CYP2J2 효소 활성 저해능 평가를 위한 약물 120종(Table 1)은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구매하여 사용하였다. 인체 간 마이크로솜(H161)과 terfenadine alcohol은 BD Gentest (Woburn, \( \mathrm { MA } \) )에서 구입하였다. 기타 본 연구에 이용된 시약은 모두 실험에 이용 가능한 최상급을 구입하여 사용하였다.</p> <h2>약물 스크리닝을 통한 CYP2J2 활성 저해제 탐색</h2> <p>120종 약물의 CYP2J2 효소 활성도 억제에 대한 연구는 CYP2J2의 기질 약물인 astemizole 로부터 생성되는 CYP2J2 매개 대사체인 \( O \) desmethyl astemizole의 생성 속도를 측정함으로써 평가하였다. 즉, astemizole \( (10 \mu \mathrm { M } ) \) 만을 혹은 astemizole과 함께 억제제로 약물 \( (50 \mu \mathrm { M } ) \) 을 \( 0.25 \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 인체 마이크로솜을 함유하고 있는 \( 100 \mathrm { mM } \) 인산 완충액( \( ( \mathrm { pH } 7.4) \) 에 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 배양하였다. 이후 \( \mathrm { NADPH } \) 재생성계 (3.3 mM glucose-6-phosphate, \( 1.3 \mathrm { mM } \) NADP, \( 3.3 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 2 \) 및 \( 1.0 \) unit/ml glucose-6-phosphate dehydrogenase)를 첨가함으로써 반응을 시작하고, 15분간의 반응 후 각 tube를 얼음 위에 놓고 내부표준물질로서 \( 0.5 \mu \mathrm { M } \) terfenadine을 포함하고 있는 아세토니트릴 40 씨를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응 정지 후, 원심분리기에서 5분간 원심분리 \( (20,000 \times g) \) 한 후 상층액을 직접 LC/MS/MS 시스템에 주입하였다.</p> <h2>Aripiprazole, haloperidol, miconazole 및 terfenadine의 CYP2J2 저해능 평가</h2> <p>120 종 약물의 CYP2J2 효소 활성도 억제 연구를 통하여 저해능이 확인된 화합물(aripiprazole, haloperidol, miconazole 및 terfenadine)에 대하여, \( \mathrm { CYP } 2 \mathrm { ~J } 2 \) 활성 억제 상수 \( \left ( \mathrm { IC } _ { 50 } \right ) \) 를 구하는 실험을 수행하였다. 즉, CYP2J2의 기질 약물인 astemi-zole, ebastine 및 terfenadine로부터 생성되는 CYP2J2 매개 대사체인 \( O \)-desmethyl astemizole, hydroxyebastine 및 terfe-nadine alcohol의 생성 속도를 측정하여 억제상수를 측정하였다. 즉, 3종의 CYP2]2 기질 약물 중 하나만을(10 \( \mu \mathrm { M } \) astemizole, \( 5 \mu \mathrm { M } \) ebastine, or \( 5 \mu \mathrm { M } \) terfenadine) 흑은 기질약물 한 종과 함께 억제제로 약물(0 200 μM)을 같이 \( 0.25 \) \( \mathrm { mg } / \mathrm { ml } \) 의 인체 마이크로솜을 함유하고 있는 \( 100 \mathrm { mM } \) 인산완충액 \( \left ( \mathrm { pH } \right . \) 7.4)에 넣고 \( 37 ^ {\circ } \mathrm { C } \) 에서 5 분간 배양하였다. 이후 NADPH 재생성계(3.3 mM glucose-6-phosphate, \( 1.3 \mathrm { mM } \)NADP, \( 3.3 \mathrm { mM } \mathrm { MgCl } 2 \) 및 \( 1.0 \mathrm { unit } / \mathrm { ml } \) glucose-6-phosphate dehydrogenase)를 첨가함으로써 반응을 시작하고, 15분간의 반응 후 각 tube를 얼음 위에 놓고 내부표준물질(2 μM terfe-nadine \( (O \)-desmethyl astemizole 및 hydroxyebastine 분석시), \( 4 \mu \mathrm { M } \) chlorpropamide (terfenadine alcohol 분석 시))을 포함하고 있는 아세토니트릴 \( 40 \mu l \) 를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 반응 정지 후, 원심분리기에서 5 분간 원심분리 \( (20,000 \times g) \) 한 후 상층액을 직접 LC/MS/MS 시스템에 주입하였다.</p>