늘보리와 탈지 대두분, 표고 버섯균을 통해 표고버섯 균사체 분말 시료를 조제하려고 하였다. 표고버섯 균사체 배양물을 분쇄하여 분말화 하였고, 표고버섯 추출물의 \( \beta \)-glucan 함량을 높이기 위해 고체배양 표고버섯균사체 분말과 액체배양 표고버섯균사체 분말을 2:1(w/w)로 혼합한 LED를 개발하여 베타글루칸 측정 방법을 통해 측정하였다. \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \)로 복강 주사하여 rat의 간독성을 유발하고, LED의 최적 투여량 결정 연구를 수행하였다.
<p>따라서, 표고버섯 추출물을 간 기능보호를 위한 천연신소재로 활용하기 위해서는 \( \beta \)-glucan함량을 높일 필요가 있다. 최근 본연구진은 \( \beta \)-glucan 함량을 높이기 위해 표고버섯균사체 고체배양물과 액체배양물의 건조분말을 2:1 (w/w)로 혼합한 표고버섯균사체 혼합물(Lentinus edodes mycelia, LED라 명명)을 개발하고 이의 \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \)와 ethanol로 유도한 Sprague-Dawley(SD) rat의 간독성 완화능을 보고하였다.</p> <p>LED를 간 독성완화 기능성 소재로 개발하기 위해서는 LED의 간독성완화 최적 함량 결정이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \)로 rat의 간독성을 유발한 SD rat 꼬델에서 LED의 최적 투여량 결정에 관한 연구를 수행하였다.</p> <h1>재료 및 방법</h1> <h2>재료</h2> <p>늘보리는 진양농업협동조합(Jinju, Republic of Korea), 탈지 대두분은 쥐개미산업(Eumseong, Republic of Korea)으로 부터 구입하였다. 표고버섯균(Lentinus edodes)은 종자관리소 (Whaseong, Republic of Korea)로부터 품종생산/판매신고를 필한 (주)HK바이오텍(Jinju, Republic of Korea)의 균주를 사용하였다. RIPA buffer는 Cell Signaling Tech. Inc. (Boston, MA)에서 구입하였다. Thiobarbituric acid, 1,1,3,3,-tetramethox-ypropane (TMP), \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \), silymarin 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하여 사용하였다. 그 외 사용된 시약은 first grade 이상이었다.</p> <h2>표고버섯 균사체 분말 시료 조제<h2> <h3>고체 배양 표고버섯균사체 분말</h3> <p>물에 침지한 늘보리를 121 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 2시간 살균한 다음 25 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \)로 식혔다. 이 배지에 표고버섯균사체종균을 접종하였다. 이를 하 등의 방법에 따라 8일간 배양하고, 표고버섯균사체 배양물을 50 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \)에서 건조시켰다. 건조된 표고버섯균사체 배양물을 분쇄하여 100 mesh로 분말화하였다.</p> <h3>표고버섯균사체 혼합물(Lentinus edodes mycelia, LED)</h3> <p>표고버섯균사체 배양물 시료의 \( \beta \)-glucan 함량을 높이기 위해 고체배양 표고버섯균사체 분말과 액체배양 표고버섯균사체 분말을 \( 2: 1( \mathrm { w } / \mathrm { w } ) \)로 혼합한 LED를 시료로 사용하였다.</p> <h3>\( \beta \)-Glucan 함량 측정</h3> <p>시료 LED의 \( \beta \)-glucan 함량은 건강기능식품공전 건강기능 식품 시험법 III.3.4.3 베타글루칸 측정 방법에 준하여 측정하였다.</p> <h2>동물실험</h2> <p>수컷 Sprague-Dawley (SD) (Samtako, Osan, Republic of Korea, 7주령, 290-300 g) rat에 AIN-96G semipurified diet(Samtako, Osan, Republic of Korea)를 제공하면서 1주일간 적응시킨 후 Table 1과 같이 Vehicle, Control, LED (100,200,300 , 400), Silymarin 처리군으로 나누고(6마리/처리군) 1일 1회 2주간 경구 투여하였다. 식이와 물은 ad libitum으로 공급하였고, 사육실의 온도 및 습도는 각각 22 \( \pm \) 1 \( ^ {\circ } \mathrm { C } \), 50 \( \pm \)3 \( \% \)로 유지하였고, Light와 dark cycle을 12시간 간격으로 조절하였다. 시료처리 15일째에 Vehicle 처리군을 제외한 모든 처리군의 rat에 \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \)( \( \mathrm { CCl } _ { 4 } \) : corm oil, 1:1 v/v; 0.5 \( \mathrm { ml } / \mathrm { kg } \) BW)를 복강 주사하여 간독성을 유발하고, 12시간 절식시킨 후 심장채혈(heparin 함유 채혈 시험관)로 sacrifice 하였다. Vehicle 처리군 rat에는 corn oil ( 0.5 \( \mathrm { ml } \) / \( \mathrm { kg } \) BW)을 복강 주사하였다.</p>