U2OS 세포에서 전이금속인 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)의 효과와 HDL의 항산화 작용을 실험했다. \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 동시에 처리하여도 세포 생존율에 영향을 주지 않았으며, \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)가 GSH를 감소시키고 GSSG를 증가시켜 ROS를 생성하는 것을 확인했다. DCF-DA 염료를 이용한 형광 실험을 통해 HDL이 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의해 생성된 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 생성을 억제하는 항산화 효과가 있음을 밝혔다.
<p>세포 내 ROS를 생성하는 것으로 알려진 전이금속인 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 대한 HDL의 항산화 효과를 측정하기 위해 U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 함께 처리하여 MTT assay 방법으로 세포의 생존율을 측정하였다. U2OS 세포에 \( 200 \mu \mathrm { M } \)의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 1, 5 , 10 \( \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \)의 농도로 HDL 단독 혹은 함께 12시간 동안 처리한 결과, \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 단독으로 처리한 경우 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었고, \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL을 함께 처리한 경우 또한 \( 80 \% \) 이상의 생존율을 나타내었다(Fig. 1C). 세포생존율에 대한 실험결과 U2OS 세포에 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 함께 처리하더라도 세포의 생존율에는 영향을 미치지 않는다는 사실을 확인하였다.</p> <h2>HDL의 hydrogen peroxide 생성 저해 효과</h2> <p>전이금속인 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)는 in vivo 및 in vitro에서 GSH의 수준을 감소시키고, GSSG의 수준을 증가시키며 오탄당인산회로 (pentose phosphate pathway)의 활성을 조절하여 ROS를 생성하는 것으로 알려져 있다. U2OS 세포에서 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 생성을 조사하기 위해 세포막 투과성이 있는 DCF-DA dye를 사용하여 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 생성 정도를 측정하였다. 형광을 띠지 않는 DCF-DA dye는 세포 내에서 DCF로 가수분해가 되며, 이 가수분해가 된 DCF-DA dye는 세포내의 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)와 반응하여 높은 형광을 띠게 된다. 따라서 DCF-DA dye에 의한 형광의 정도는 세포 내에 생성된 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 양과 비례한다. \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 \( 200 \mu \mathrm { M } \) 농도의 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)를 12시간 동안 처리시 control에 비하여 약 2.3배의 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)가 증가하였으며, \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)와 HDL을 함께 처리하였을 경우 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 생성은 HDL의 농도 의존적으로 감소하였다. \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)처리에 의해 생성이 증가된 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)는 \( 10 \mu \mathrm { g } / \mathrm { ml } \) 농도의 HDL에 의해 1.2배로 감소하였다(Fig. 2A). 이러한 연구결과 HDL이 \( \mathrm { CoCl } _ { 2 } \)에 의한 \( \mathrm { H } _ { 2 } \mathrm { O } _ { 2 } \)의 생성을 저해하는 항산화 효과를 확인하였다.</p>