PL9fwy3NUQKwZ4sD4inWpJTEYsc71Y3xW0/O5R3sw9lkTg.srt

1
00:00:00,270 --> 00:00:03,750
هم رحمة الله وبركاته اللي بنعمل التاسع بعنوان

2
00:00:03,750 --> 00:00:08,690
isolation of Escherichia coli O157:H7 in foods

3
00:00:08,690 --> 00:00:14,210
لاحظوا احنا بنحكي isolation ما حكينا enumeration

4
00:00:14,210 --> 00:00:19,210
مابدنا نعد، ليش؟ لأنه ال Escherichia coli لو كان

5
00:00:19,210 --> 00:00:22,930
موجود كل واحدة منها بالfood بيكون ال food غير صالح

6
00:00:22,930 --> 00:00:26,850
لل human consumption معناته العدد ما بيهمني على قد

7
00:00:26,850 --> 00:00:33,130
ما بيهمني هل موجود إشريشيا كولاي O157:H7 أو لأ طيب،

8
00:00:33,130 --> 00:00:38,090
شو هما الـ O و الـ H اللي باسم البكتيريا؟ هدول

9
00:00:38,090 --> 00:00:42,790
الإتنين يعتبروا Antigens الـ O هو Somatic Antigen

10
00:00:42,790 --> 00:00:47,850
و الـ H هو Flagellar Antigen فلاجلر معناته البكتيريا

11
00:00:47,850 --> 00:00:52,430
عندها فلاجلة بتستخدمها البكتيريا للحركة يعني

12
00:00:52,430 --> 00:00:56,030
الشريشة كولاي O157:H7 تعتبر motile

13
00:00:58,400 --> 00:01:01,800
بالنسبة لـ الـ Objective هنعمل detection للإشريش

14
00:01:01,800 --> 00:01:06,500
كولاي O157:H7 in food هنتعرف على الـ pathogenic

15
00:01:06,500 --> 00:01:09,160
strains بناء على الـ biochemical و الـ

16
00:01:09,160 --> 00:01:13,080
physiological characteristics للبكتيريا كمان هيكون

17
00:01:13,080 --> 00:01:17,300
في rapid testing زي مثلا immunochromatographic

18
00:01:17,300 --> 00:01:20,140
technique بتأكد من خلالها على وجود الإشريشيا كولاي

19
00:01:20,140 --> 00:01:24,120
O157:H7 بالاعتماد على مبدأ antigen antibody

20
00:01:24,120 --> 00:01:29,500
reaction الشريشة كولاي O157:H7 is an important

21
00:01:29,500 --> 00:01:32,900
foodborne pathogen، food بنتقل عن طريق الفئة

22
00:01:33,550 --> 00:01:37,130
بكتيريا تنتقل عن طريق الـ food causing symptoms

23
00:01:37,130 --> 00:01:42,690
تعمل أعراض بتتراوح بين ميال ديارية لهيموروجيا

24
00:01:42,690 --> 00:01:46,210
كولايزي اللي هو بيكون في نزيف في القولون بالإضافة

25
00:01:46,210 --> 00:01:49,590
لهيموروجيا كيوراميكا سندروم Most outbreaks and

26
00:01:49,590 --> 00:01:52,950
sporadic cases have been associated with

27
00:01:52,950 --> 00:01:56,550
consumption إيش الأسباب ممكن تعمل في إمراضية

28
00:01:56,550 --> 00:02:00,760
بالإشريشيا كولاي؟ وين ممكن تكون موجودة؟لو أنه تم

29
00:02:00,760 --> 00:02:04,820
تناول food undercooked، غير مطهي بشكل منيح، خاصة

30
00:02:04,820 --> 00:02:08,760
اللحم البقري، وبرضه كمان dairy product منتجات

31
00:02:08,760 --> 00:02:12,760
الألبان زي الـmilk untreated، يعني مصل ومعالجة،

32
00:02:12,760 --> 00:02:17,100
يعني الحليب الغير مبستر Infections due to

33
00:02:17,100 --> 00:02:20,960
Escherichia coli O157:H7 لحظة يكون في

34
00:02:20,960 --> 00:02:24,480
المكتوب Escherichia coli O157:H7 عرفوها تلقائيا at

35
00:02:24,480 --> 00:02:28,520
seven إلا لو كنت أنا معنية أن تكون نوع آخر فبكتب

36
00:02:28,520 --> 00:02:34,340
Escherichia coli O157:H7 not at seven are increasing

37
00:02:34,340 --> 00:02:39,620
أن العدوى بالبكتيريا هيبتزداد ومتواجدة في wide

38
00:02:39,620 --> 00:02:48,320
ranges of food زي مثلا Under cooked meat اللحوم غير

39
00:02:48,320 --> 00:02:54,180
مطهية بشكل جيد، ال vegetables، الخضروات، السلطات

40
00:02:54,180 --> 00:03:00,500
الخضار، ال coleslaw اللي هي سلطات الكرنب كمان acid

41
00:03:00,500 --> 00:03:05,900
-based food زي القبل cider المقصود فيها عصير

42
00:03:05,900 --> 00:03:10,380
التفاح الليغارد اللبن ال sausages اللي هي النقانق

43
00:03:10,380 --> 00:03:14,400
microbiological guidelines for ready to eat food

44
00:03:14,770 --> 00:03:20,390
الـ Standard تحكي مشان يكون الطعام جاهز أنه ناكله

45
00:03:20,390 --> 00:03:25,110
صالح للهيوم الـ consumption فالمفترض بالناحية

46
00:03:25,110 --> 00:03:29,230
الاشريشيا هيكون اللهي O157:H7 يكون عدد البكتيريا

47
00:03:29,230 --> 00:03:35,190
Zero لإن كدنيا واحدة بتعمل disease، ان خمس وعشرين

48
00:03:35,190 --> 00:03:38,850
جرام خمسة و عشرين جرام هاي اللي هي ال analytical

49
00:03:38,850 --> 00:03:42,490
units هو خمسة و عشرين جرام أو خمسة و عشرين مل لازم

50
00:03:42,490 --> 00:03:45,670
لما نيجي نفحصها في المختبر لحتى نحكي هذا ال food

51
00:03:45,670 --> 00:03:49,830
صالح لل human consumption لازم مايكون في الشريشة

52
00:03:49,830 --> 00:03:53,930
كولاي O157:H7 خالص most strains of

53
00:03:53,930 --> 00:03:59,530
الشريشة كولاي O157:H7 don't ferment sorbitol طيب

54
00:03:59,530 --> 00:04:03,390
قبل اللي نحكي عن ال sorbitol لو سألت شو هم الـ

55
00:04:03,390 --> 00:04:07,990
characteristics لـ Escherichia coli O157:H7 نكون

56
00:04:07,990 --> 00:04:12,750
عارفين أن Escherichia coli O157:H7 هي من ضمن الـ

57
00:04:12,750 --> 00:04:16,110
Escherichia coli العادية يعني هي من ضمن الـ Total

58
00:04:16,110 --> 00:04:19,350
Coliform زي ما احنا عارفين كمان من ناحية المخطط

59
00:04:19,350 --> 00:04:22,090
اللي أنا كنت عاملة حكيت في عقلات

60
00:04:22,090 --> 00:04:25,480
Enterobacteriaceae هذه تعتبر الـ Gram Negative بصي

61
00:04:25,480 --> 00:04:28,380
الغرام قسموا الأوردنزم اللي فيها حسب اللاكتوز

62
00:04:28,380 --> 00:04:32,120
لاكتوز فرمنتر ونون لاكتوز فرمنتر وكانت توتر كولي

63
00:04:32,120 --> 00:04:34,860
و4 من ضمن اللاكتوز فرمنتر نشي على خصائص

64
00:04:34,860 --> 00:04:40,520
الإشريشيا كولاي O157:H7 أول حاجة Gram Negative بعدين

65
00:04:40,520 --> 00:04:45,840
باصي الغرام من ناحية اللاكتوز فهي لاكتوز فرمنتر طيب

66
00:04:45,840 --> 00:04:49,420
لما بعمل fermentation لسكر اللاكتوز بطلع منه

67
00:04:49,420 --> 00:04:55,350
produce acid with gas لإتنين كمان هي facultative

68
00:04:55,350 --> 00:04:59,550
and aerobic بكتيريا وقولت قبل شوية إنها بتكون

69
00:04:59,550 --> 00:05:05,550
foodborne pathogen كمان عندها flagella معناته هي

70
00:05:05,550 --> 00:05:12,910
motile طيب لو بدي أميز البكتيريا الإشريشيا كولاي عن

71
00:05:12,910 --> 00:05:18,250
الإشريشيا كولاي O157:H7 هل بينفع أستخدم ميديا

72
00:05:18,250 --> 00:05:23,810
المكونكي أجار المكونكي أجار معروف أنه فيها

73
00:05:23,810 --> 00:05:27,570
سكر اللاكتوز طيب، هل سكر اللاكتوز من خلاله بقدر

74
00:05:27,570 --> 00:05:30,850
أنه أنا أميز الإشريشيا كولاي عن الإشريشيا كولاي

75
00:05:30,850 --> 00:05:34,910
O157:H7؟ الجواب لأ، ليش؟ لأن هما الأثنين بيعملوا

76
00:05:34,910 --> 00:05:38,790
fermentation لسكر اللاكتوز، معناته ما بتقدر أنها

77
00:05:38,790 --> 00:05:44,110
تساعد في التفرقة بين البكتيريات طيب، شو حكوا؟ شو

78
00:05:44,110 --> 00:05:50,300
عملوا؟ راحوا عدلوا في ميديا المكونكي حكوا بدل ما

79
00:05:50,300 --> 00:05:53,800
فيها سكر اللاكتوز اللي مابيفيدني في التفريقة بروح

80
00:05:53,800 --> 00:06:00,760
أستخدم سكر تاني هو سكر السوربيتول صار اسم ال media

81
00:06:00,760 --> 00:06:07,020
سوربيتول ميكونكي بنحكي عنها اسمها سوربيتول ميكونكي

82
00:06:07,020 --> 00:06:12,420
ولاحظوا أن الإشريشيا كولاي O157:H7 ما بتعمل

83
00:06:12,420 --> 00:06:16,940
fermentation لسكر السوربيتول أما الإشريشيا كولاي

84
00:06:16,940 --> 00:06:23,120
بتعمل fermentation لسكر السوربيتول طيب المكونكي سواء

85
00:06:23,120 --> 00:06:27,720
العادية أو السوربيتول فيها الـ pH indicator هو هو نفسه

86
00:06:27,720 --> 00:06:32,680
اسمه الـ neutral red البكتيريا لما بتعمل

87
00:06:32,680 --> 00:06:37,920
fermentation لأي سكر بتطلع منها acid ال acid بتقلل

88
00:06:37,920 --> 00:06:41,920
ال pH بيحول لون ال media إلى لون pink to red تمام

89
00:06:41,920 --> 00:06:49,340
فالاشريشيا كولاي سواء بالمكونكي أو بالسوربيتول مكونكي

90
00:06:49,340 --> 00:06:54,520
هي أكيد هتعمل fermentation للنوعين سواء

91
00:06:54,520 --> 00:06:59,020
لكتوز أو سوربيتول هيكون اللون pink to red

92
00:06:59,020 --> 00:07:04,920
طيب الشريشة كولاي O157:H7 ما بتعمل fermentation

93
00:07:04,920 --> 00:07:11,040
لسكر السوربيتول ما بتعمل fermentation يعني ال pH

94
00:07:11,040 --> 00:07:16,610
هيكون basic يعني اللون هيكون colorless لما يكون

95
00:07:16,610 --> 00:07:21,170
colorless معناته هاي ميديا الشريشة كولاي O157:H7

96
00:07:21,170 --> 00:07:28,210
طيب الشريشة كولاي O157:H7 على الميديا المكونكي هيكون

97
00:07:28,210 --> 00:07:31,870
لونها pink to red لإنها بتعمل fermentation لسكر ال

98
00:07:31,870 --> 00:07:37,270
lactose لكن على السوربيتول لونها هيكون colorless لإنها

99
00:07:37,270 --> 00:07:41,440
ما بتعمل fermentation للـ Sorbitol فاحنا بدنا

100
00:07:41,440 --> 00:07:46,100
نعزل اللي هيكون لونها colorless على ميديا السوربيتول

101
00:07:46,100 --> 00:07:52,860
نرجع تاني معظم السلالات الإشريشيا كولاي O157:H7 don't

102
00:07:52,860 --> 00:07:58,800
ferment sorbitol within 24 hours بقدر أن أستخدمها

103
00:07:58,800 --> 00:08:02,540
لتعريف عن non-sorbitol fermenter و أضيف على ال

104
00:08:02,540 --> 00:08:06,880
characteristics للإشريشيا كولاي O157:H7 كمان بقدر أضيف

105
00:08:06,880 --> 00:08:11,360
إنها Beta-Glucuronidase Negative يعني ما عندها

106
00:08:11,360 --> 00:08:16,100
إنزيم لـ Glucuronidase وين مارى علينا هذا الإنزيم؟

107
00:08:16,100 --> 00:08:18,760
مارى علينا لما نحكي عن الـMUG لما يكون في عندى

108
00:08:18,760 --> 00:08:21,380
عينة water بحط عليها الـreagent تبعي اللي هو

109
00:08:21,380 --> 00:08:25,700
الـMUG وبقى أشوف لو البكتيريا عندها Glucuronidase

110
00:08:25,700 --> 00:08:31,200
هيكسر الـMUG ولما أعرضها لـUV هيطلع لون فلوريسانت

111
00:08:31,200 --> 00:08:34,940
معناته high Escherichia coli لكن زي ما بحكي بالـ

112
00:08:34,940 --> 00:08:39,900
slide إن الـ O157:H7 ما عندها الإنزيم هذا معناته لو

113
00:08:39,900 --> 00:08:44,960
عندى عينة water فيها إشريشيا كولاي O157:H7 بعرضها لـ

114
00:08:44,960 --> 00:08:50,580
UV مش هيصير تغيير في اللون whereas most other

115
00:08:50,580 --> 00:08:55,580
serogroups of إشريشيا كولاي gave positive reactions

116
00:08:56,100 --> 00:08:59,100
أن الأنواع التانية من الإشريشيا كولاي other than

117
00:08:59,100 --> 00:09:03,420
الإشريشيا كولاي O157:H7 هتكون positive للسوربيتول

118
00:09:03,420 --> 00:09:07,000
هتكون سوربيتول fermenter وكمان positive من ناحية

119
00:09:07,000 --> 00:09:10,860
الجلوكورونيداز يعني عندها الإنزيم الإشريشيا كولاي

120
00:09:10,860 --> 00:09:16,220
O157:H7 برضه معناته is pathogenic to man المقصود

121
00:09:16,220 --> 00:09:21,130
بالمان مش معناها المال، معناها الـ human هي ممرضة

122
00:09:21,130 --> 00:09:26,630
للـ human has a low infective dose يعني مقدار بسيط

123
00:09:26,630 --> 00:09:30,490
أو كمية بسيطة من البكتيريا بتعمل disease يعني ال

124
00:09:30,490 --> 00:09:34,570
pathogenicity عندها عالية and laboratory acquired

125
00:09:34,570 --> 00:09:38,630
infections have been reported المختبرات بمجرد ما

126
00:09:38,630 --> 00:09:43,510
يصلهم إنه في infection بشري بالإشريشيا كولاي O157:H7 لازم

127
00:09:43,510 --> 00:09:48,020
إنهم يخبروا الجهات المسؤولة Therefore, the

128
00:09:48,020 --> 00:09:51,700
isolation and identification of this organism لما

129
00:09:51,700 --> 00:09:55,060
بدهم يعزلوا أو يتعرفوا علي الإشريشيا كولاي O157

130
00:09:55,060 --> 00:09:58,840
المسؤولة عن هذه المهمة هم ناس بيكونوا trained

131
00:09:58,840 --> 00:10:04,060
personnel ناس مدربين كيف أنهم يتعاملوا مع العينات

132
00:10:04,060 --> 00:10:07,500
اللي فيها ال pathogenic الإشريشيا كولاي in

133
00:10:07,500 --> 00:10:10,690
appropriately equipped مختبرات برضه بتكون

134
00:10:10,690 --> 00:10:15,550
المختبرات مجهزة بالأدوات والمعدات اللازمة وتحت

135
00:10:15,550 --> 00:10:22,990
إشراف من الـ qualified microbiologist اليوم

136
00:10:22,990 --> 00:10:27,190
بدي يصير detection للإشريشيا كولاي O157:H7 في الـ

137
00:10:27,190 --> 00:10:31,810
food the method has been shown to produce

138
00:10:31,810 --> 00:10:35,390
satisfactory results with artificially

139
00:10:35,390 --> 00:10:40,420
contaminated meats ممكن يكون أنه بنعزل ال bacteria

140
00:10:40,420 --> 00:10:45,590
من اللحوم سواء كانت البيف اللحم البقري الفيل اللي

141
00:10:45,590 --> 00:10:50,550
هي لحم العجل و الـ  pork لحم الخنزير ممكن كمان

142
00:10:50,550 --> 00:10:53,210
تكون موجودة في الـ vegetables في الـ dairy product

143
00:10:53,210 --> 00:10:57,370
في الـ spices التوابل و الـ environmental samples

144
00:10:57,370 --> 00:11:00,830
this method can be used successfully for the

145
00:11:00,830 --> 00:11:04,290
detection of Escherichia coli O157 in other foods

146
00:11:04,290 --> 00:11:06,930
برضه في الـ food ingredients في مكونات الطعام

147
00:11:06,930 --> 00:11:11,110
بالإضافة لـ environmental samples الشغل بدي يكون

148
00:11:11,110 --> 00:11:17,420
كالتالي، بتجيب لي العينة هي بتكون يعني الـ sample unit

149
00:11:17,420 --> 00:11:22,300
بدي آخذ منها الـ analytical unit بأخذ 25 جرام أو 25

150
00:11:22,300 --> 00:11:28,240
مل حسب الحالة الفيزيائية للـ sample تمام بروح أحطها

151
00:11:28,240 --> 00:11:33,820
في 225 مل من الـ media broth اسمها الـ tryptic soy

152
00:11:33,820 --> 00:11:41,820
broth  TSPهي ميديا وسط غذائي في أوساط ثانية ممكن 

153
00:11:41,820 --> 00:11:46,640
أستخدمها؟ اه في، هنتعرف عليها لقدام هيك صار عندي

154
00:11:46,640 --> 00:11:51,400
التخفيف واحد لعشرة كيف صار خمسة وعشرين جرام أو مل

155
00:11:51,400 --> 00:11:57,260
من العينة بحط عليها 225 مل من

156
00:11:57,260 --> 00:12:01,720
الـ tryptic soy broth شو هالـ tryptic soy broth؟ هي

157
00:12:01,720 --> 00:12:07,680
pre-enrichment media يعني ميديا بتثري نمو

158
00:12:07,680 --> 00:12:11,560
البكتيريا، بتحسّن الظروف اللي موجودة فيها البكتيريا

159
00:12:11,560 --> 00:12:15,420
بدون أن تؤثر على العدد، العدد ما بيزيد في الميديا 

160
00:12:15,420 --> 00:12:18,380
هاي إن أنا فقط أعملها resuscitation، يعني أنا

161
00:12:18,380 --> 00:12:24,160
بعملها إنعاش، يعني أول خطوة اسمها الـ Primary

162
00:12:24,160 --> 00:12:27,860
Enrichment إيش هي الـ Primary Enrichment؟ يعني بقى

163
00:12:27,860 --> 00:12:32,900
حط العينة بتاعتي في ميديا بتثري نمو البكتيريا بتحسن 

164
00:12:32,900 --> 00:12:36,900
من الظروف الموجودة فيها بتعملها إنعاش لكن ما بتزود 

165
00:12:36,900 --> 00:12:43,610
العدد طيب مشان أخلي أنه البكتيريا يصير لها إنعاش

166
00:12:43,610 --> 00:12:48,710
وتترى من نمو البكتيريا بروح أسمح لها بفترة 24 hour

167
00:12:48,710 --> 00:12:55,190
incubator على درجة حرارة 42 سيليزياس هاي الخطوة

168
00:12:55,190 --> 00:12:59,590
الأولى سميناها الـ primary enrichment بعد هيك شو

169
00:12:59,590 --> 00:13:06,950
بعمل؟ بعمل selective culture agar حكيت كلمة agar

170
00:13:06,950 --> 00:13:12,520
معناها بدي أزرع على طبق بروح آخذ 100 مايكرون من

171
00:13:12,520 --> 00:13:16,720
الـ Primary enrichment بروح آخذ من الـ Tryptic

172
00:13:16,720 --> 00:13:19,940
soy broth اللي فيها البكتيريا بعد فترة الـ

173
00:13:19,940 --> 00:13:24,480
Incubation طبعًا خلصت الـ 24 ساعة بروح آخذ 100

174
00:13:24,480 --> 00:13:27,940
مايكرون بروح أزرع على الطبق قولنا هنستخدم ميديا 

175
00:13:27,940 --> 00:13:31,720
اسمها لإنها بتميّز الاشريكية كلها يعني الاشريكية كلها

176
00:13:31,720 --> 00:13:37,520
O157:H7 هيطلع لون البكتيريا لون colorless إذا

177
00:13:37,520 --> 00:13:44,710
كانت O157:H7 هل هيك بكون متأكدة 100% إن اللون الـ

178
00:13:44,710 --> 00:13:48,830
colorless بنتها اشريكية كولاي O157:H7؟ الجواب لأ لازم

179
00:13:48,830 --> 00:13:53,170
أعمل بعد هيك خطوة الـ biochemical test وبعد هيك 

180
00:13:53,170 --> 00:13:56,730
بعمل الـ confirmatory test الـ biochemical test هي

181
00:13:56,730 --> 00:14:02,640
فحوصات تعريفية إنها بعمل زي مثلا الـ  Invic فالاشريكية

182
00:14:02,640 --> 00:14:06,240
يكون O157:H7 هتكون positive positive negative

183
00:14:06,240 --> 00:14:11,400
negative نيجي على الـ confirmatory test اللي هي الـ

184
00:14:11,400 --> 00:14:16,320
serology test antigen antibody reaction مثال عليها

185
00:14:16,320 --> 00:14:19,460
زي ما بتعرفوا اللي هي latex agglutination test

186
00:14:19,460 --> 00:14:23,400
فكرة الـ latex هيكون عندي فيها card الـ card فيها

187
00:14:23,400 --> 00:14:27,790
دوائر لها دي الدوائر بحط عليها الـ Antigen و الـ

188
00:14:27,790 --> 00:14:30,250
Antibody وبعدين بعملهم mix وبشوف هل صار 

189
00:14:30,250 --> 00:14:34,190
agglutination أو لأ أنا عينتي بدي أكشف فيها هل 

190
00:14:34,190 --> 00:14:37,150
موجود إشريكية كولاي أو لأ معناته الإشريكية كولاي 

191
00:14:37,150 --> 00:14:42,650
تعتبر Antigen فالشركات المصنعة بتكون مصنعين عالي

192
00:14:42,650 --> 00:14:49,170
two vials علبتين بيشبهوا زي تحت القطرة هيكون vial

193
00:14:49,820 --> 00:14:56,080
اسمها O157 Antisera يعني Antibody للـ Antigen اللي

194
00:14:56,080 --> 00:15:02,480
اسمه O157 الـ Vial الثاني اسمه H7 Antisera يعني

195
00:15:02,480 --> 00:15:08,760
Antibody موجه للـ H7 شو بعمل؟ بروح باخذ الـ drop من

196
00:15:08,760 --> 00:15:13,500
الـ O157 Antisera بحطه على دائرة من الدوائر بروح 

197
00:15:13,500 --> 00:15:16,960
بأخذ الـ drop من الـ H7 Antisera بروح بحطه على

198
00:15:16,960 --> 00:15:21,430
دائرة ثانية منفصلة طبعًا بعد هيك لو كانت عندي

199
00:15:21,430 --> 00:15:24,310
البكتيريا على شكل كولونيه بروح آخذ مسحة من 

200
00:15:24,310 --> 00:15:28,610
البكتيريا بحطها على أول دائرة بروح باخذ مسحة ثانية

201
00:15:28,610 --> 00:15:31,870
من البكتيريا وبحطها على الدائرة الثانية بعملهم

202
00:15:31,870 --> 00:15:36,090
mix وبشوف هل صار agglutination أو لا مشان أحكي

203
00:15:36,090 --> 00:15:40,350
هاي فعلًا اشريكية كولاي O157:H7 لازم يصير

204
00:15:40,350 --> 00:15:43,990
agglutination في الدائرتين معنى الـ agglutination

205
00:15:43,990 --> 00:15:50,580
أنه العينة اللي عندي فعلًا بتمتلك Antigen اسمه O157

206
00:15:50,580 --> 00:15:55,820
وبتمتلك Antigen اسمه H7 لهيك صار agglutination في 

207
00:15:55,820 --> 00:16:01,860
الدائرتين طيب لو

208
00:16:01,860 --> 00:16:07,880
كان في عندي فقط agglutination في الـ O157 antisera

209
00:16:07,880 --> 00:16:14,500
معناها البكتيريا اللي عندي هي عندها O157 عندها

210
00:16:14,500 --> 00:16:19,590
O157 Antigen لكن ما عندها H7 معناها هي الاشريكية

211
00:16:19,590 --> 00:16:26,510
الكولاي O157 not H7 طيب لو ما طلع agglutination 

212
00:16:26,510 --> 00:16:33,750
خالص معناته البكتيريا هذه مش O157:H7 طيب

213
00:16:33,750 --> 00:16:38,370
لاحظوا أنا حكيت من ضمن الخطوات أول خطوة اللي هي الـ

214
00:16:38,370 --> 00:16:43,670
primary enrichment هل معنى الكلام في secondary

215
00:16:43,670 --> 00:16:48,730
enrichment الجواب لا في secondary enrichment طيب

216
00:16:48,730 --> 00:16:55,270
ليش ما سردناها من ضمن الـ steps لإن مش كل العينات

217
00:16:55,270 --> 00:16:59,530
بحاجة إننا نعمل لها secondary enrichment طيب شو هي

218
00:16:59,530 --> 00:17:02,770
فكرة الـ secondary enrichment بعد ما أخلص الـ

219
00:17:02,770 --> 00:17:06,670
primary وبعملها incubation لمدة 24 ساعة على درجة 

220
00:17:06,670 --> 00:17:13,740
حرارة 42 بروح باخذ واحد مل من الـ flask هذا بروح أحط

221
00:17:13,740 --> 00:17:19,240
في tube في تسعة مل من الـ media هيك صارت تخفيف عندي

222
00:17:19,240 --> 00:17:22,640
عشرة أقل سالب اتنين ليش عشرة أقل سالب واحد لأ 

223
00:17:22,640 --> 00:17:27,440
ل tube بالإضافة أنا واخدة من flask تخفيفه عشرة أقل 

224
00:17:27,440 --> 00:17:31,940
سالب واحد طيب هيك صرت عاملة الـ secondary enrichment 

225
00:17:31,940 --> 00:17:36,540
بعملها incubation وبعد هيك بروح أكمل الخطوات عادي

226
00:17:36,540 --> 00:17:40,740
بروح أعمل selective culture agar بروح بعمل بعد هيك

227
00:17:40,740 --> 00:17:46,780
الـ biochemical test و الـ confirmatory test طيب متى

228
00:17:46,780 --> 00:17:51,020
بلجأ لاستخدام الـ secondary enrichment؟ لما أكون

229
00:17:51,020 --> 00:17:56,290
بدي أعزل الاشريكية coli O157 من بعض أنواع الـ foods زي 

230
00:17:56,290 --> 00:18:02,230
الـ spices، التوابل، الـ onion، البصل و الـ garlic،

231
00:18:02,230 --> 00:18:06,990
الثوم الـ food had فيها antimicrobial effect يعني 

232
00:18:06,990 --> 00:18:14,170
عندها القدرة إنها تؤثر على عدد الاشريكية coli O157 

233
00:18:14,170 --> 00:18:19,530
اللي في العينات هاي فاحنا حكينا ما بدنا العدد يتأثر

234
00:18:19,530 --> 00:18:24,130
لهيك بحاجة إننا نعمل secondary enrichment لإن فكرة 

235
00:18:24,130 --> 00:18:27,470
الـ onion و الـ spices و الـ garlic نفس فكرة

236
00:18:27,470 --> 00:18:31,530
الـ antibiotic تقضي أو ممكن تقلل من عدد البكتيريا

237
00:18:31,530 --> 00:18:35,570
فبدي أحافظ على العدد زي ما هو بروح بعمل secondary

238
00:18:35,570 --> 00:18:38,970
enrichment اللي هي قولت بروح باخذ من الـ flask واحد

239
00:18:38,970 --> 00:18:45,050
مل بروح أحطه على tube في تسعة مل من الـ media تمام،

240
00:18:45,050 --> 00:18:49,450
هذا الشيء بيعمل أنه بيغذي الاشريكية Coli O157:H7

241
00:18:49,450 --> 00:18:53,530
طيب أول حاجة ليش بعمل secondary enrichment to

242
00:18:53,530 --> 00:18:57,310
reduce antimicrobial effect لحتى أقلل من الـ

243
00:18:57,310 --> 00:19:02,450
antimicrobial effect لبعض العينات كمان شغلة ثانية

244
00:19:02,450 --> 00:19:06,570
بحتاج أعملها secondary enrichment لما يكون في

245
00:19:06,570 --> 00:19:12,160
microbial load في العينة يعني العينة فيها عدد

246
00:19:12,160 --> 00:19:16,900
بكتيريا كتير غير الاشريكية كولاي O157:H7 معناته 

247
00:19:16,900 --> 00:19:22,080
هيك هيصير في منافسة على الـ nutrient فممكن هي هي

248
00:19:22,080 --> 00:19:26,900
البكتيريا الأخرى تستولي على الـ nutrient أو

249
00:19:26,900 --> 00:19:32,870
المغذيات اللي في الـ media فابحاجة إنه يكون في

250
00:19:32,870 --> 00:19:39,430
العينة إن يكون فيها وسط، هذا الوسط فقط بنمّل

251
00:19:39,430 --> 00:19:44,350
إشريكية كولاي O157:H7 وبيعمل inhibition أو بيثبت نمو 

252
00:19:44,350 --> 00:19:48,090
باقي أنواع البكتيريا لهيك بنعمل secondary

253
00:19:48,090 --> 00:19:53,310
enrichment to reduce microbial load لحتى أقلل من

254
00:19:53,310 --> 00:19:57,050
عدد البكتيريا اللي هي بتكون other than إشريكية كولاي

255
00:19:57,050 --> 00:20:03,700
O157:H7 الـ Principle نفس الخطوات اللي قلناهم إنّه

256
00:20:03,700 --> 00:20:09,060
أول شيء هيكون فيه selective enrichment بعد هيك راح 

257
00:20:09,060 --> 00:20:13,200
أعمل isolation from enrichment culture راح أنميها

258
00:20:13,200 --> 00:20:17,260
على selective culture agar بعد خطوة الـ primary 

259
00:20:17,260 --> 00:20:20,460
enrichment وبعد هيك بدي أعزلها باستخدام الـ

260
00:20:20,460 --> 00:20:23,980
monomagnetic separation اللي هو بدي أكون في مجال

261
00:20:23,980 --> 00:20:28,520
مغناطيسي هذا طبعًا هنتعرف عليها لقدام وبعدين 

262
00:20:28,520 --> 00:20:31,760
subculture to selective agar the selective agar

263
00:20:31,760 --> 00:20:34,460
cultures are examined for characteristic colorless

264
00:20:34,460 --> 00:20:38,260
بعد ما أزرع على selective culture agar بروح أطلع

265
00:20:38,260 --> 00:20:43,290
على الـ show على اللون اللي بيكون colorless طيب، هل 

266
00:20:43,290 --> 00:20:47,010
هيك بأقول متأكدة أن هاي إشريكية كولاي O157:H7؟ قولنا 

267
00:20:47,010 --> 00:20:50,350
لأ، شو بعمل؟ confirmation of pre-sumptive لسه هاي 

268
00:20:50,350 --> 00:20:54,470
pre-sumptive بفترض لك أنا مش متأكدة إنها O157:H7

269
00:20:54,470 --> 00:20:57,870
كيف بيصير الـ confirmation من خلال الـ biochemical

270
00:20:57,870 --> 00:21:03,790
و الـ serological test أنا قولت بالبداية في خطوة الـ

271
00:21:03,790 --> 00:21:08,740
primary enrichment إنّه باخذ 25 جرام أو مل من العينة 

272
00:21:08,740 --> 00:21:12,580
بروح أحطها 225 الـ tryptic soy broth أو أنواع ثانية من الـ

273
00:21:12,580 --> 00:21:16,880
media هنتعرف عليها لقدام فهاد هو الـ media اللي

274
00:21:16,880 --> 00:21:21,420
هتتلزمها Modified tryptic soy broth  لـ tryptic soy

275
00:21:21,420 --> 00:21:25,300
broth هي media general صارت سايلها modification 

276
00:21:25,300 --> 00:21:29,740
حطوا فيها النوفو بيوسين النوفو بيوسين هو

277
00:21:29,740 --> 00:21:34,000
antibiotic شو بيعمل؟ بيعمل inhibition لـ gram

278
00:21:34,000 --> 00:21:38,670
positive بكتيريا هيك سموها Modified Tryptic Soy

279
00:21:38,670 --> 00:21:43,170
Broth في كمان Interior Hemorrhagic Atrial Coli

280
00:21:43,170 --> 00:21:47,670
Enrichment Broth EEP طبعًا Interior Hemorrhagic 

281
00:21:47,670 --> 00:21:52,530
Atrial Coli ده هو اسم تاني لـ *E. coli* O157H7

282
00:21:52,530 --> 00:21:57,530
Modified Hemorrhagic Coli Agar with Tellurite and

283
00:21:57,530 --> 00:22:02,890
Cephalidin إيش هو Tellurite؟ هاد selective agent

284
00:22:02,890 --> 00:22:08,400
Cephalidin هو antibiotic، modified sorbitol ماكنكي

285
00:22:08,400 --> 00:22:13,000
الأجار اللي هي الأسماك طبعا هاي أجار بتلزمني في حالة

286
00:22:13,000 --> 00:22:18,380
ال selective culture أجار فالخطوة التانية modified

287
00:22:18,380 --> 00:22:21,460
ليش؟ لأنه شيلنا منها ال lactose و حطينا بداله ال

288
00:22:21,460 --> 00:22:25,660
sorbitol ال media هاي فيها till you write ك

289
00:22:25,660 --> 00:22:29,620
selective agent، Cefexime، Antibiotic، Cefsulodine

290
00:22:29,620 --> 00:22:37,960
برضه كمان Antibiotic الـ cell bios شو هو؟ هو الـ

291
00:22:37,960 --> 00:22:43,100
di-saccharide بنتج من الهيدروليس لسيريلوز كمان

292
00:22:43,100 --> 00:22:50,330
بنحتاج لكشغل في البحث عن إشريتشيا like O157H7 بحتاج

293
00:22:50,330 --> 00:22:56,290
إلى نصف المية بوتاسيوم صلفات لشو بحتاجه needed for

294
00:22:56,290 --> 00:22:59,910
some spices and foods containing large amount of

295
00:22:59,910 --> 00:23:04,910
spices بحتاج في حالة لو .. لو كان عندي spices أو

296
00:23:04,910 --> 00:23:09,110
لو كان في مثلا 

297
00:23:09,110 --> 00:23:12,770
لو كانت عينة لحمة و فيها كمية كبيرة من ال spices

298
00:23:12,770 --> 00:23:21,110
شو بتعمل هاي؟البوتاسيوم سالفات بأستخدمه لحتى أقلل

299
00:23:21,110 --> 00:23:25,230
من الـ antimicrobial effect أنا قولت إنه ال spices

300
00:23:25,230 --> 00:23:29,950
بالإضافة إنه أنا بأعمل secondary enrichment برضه

301
00:23:29,950 --> 00:23:34,610
بأضيف نصف المية بوتاسيوم سالفات فلو سألتكم سؤال

302
00:23:34,610 --> 00:23:40,730
بالامتحان مثلا لو عندك لحمةواللحمة طبعا كان فيها

303
00:23:40,730 --> 00:23:45,790
spices شو هي الخطوات بأعملها from A to Z من

304
00:23:45,790 --> 00:23:51,110
البداية بمجرد ما تصلني طبعا هذه عينة solid بالنسبة

305
00:23:51,110 --> 00:23:55,810
لل sample unit بدي أخد من أكتر من مكان بعد هيك

306
00:23:55,810 --> 00:23:59,770
بعملها لـ Treatment و لـ Preparation الصح و لو بدي

307
00:23:59,770 --> 00:24:02,050
أبحث فيها مثلا في السوقة اللي كانت نوعية اللحمة

308
00:24:02,050 --> 00:24:06,330
بدي أبحث فيها على إشريشيا كولاي O157-H7 بدي أضيفه

309
00:24:06,330 --> 00:24:11,230
إنه إحنا بنعمل الخطوات

310
00:24:11,230 --> 00:24:14,550
كلهيتهم و بدي أضيف إنه بدي أحط عليها بوتاسيوم

311
00:24:14,550 --> 00:24:19,190
صلفية to reduce antimicrobial effect كمان بنحتاج

312
00:24:19,190 --> 00:24:23,970
للـHCl و لـNa وH هدول إتنين بيضبطوا الـpH للـfood

313
00:24:24,260 --> 00:24:28,680
قلنا لازم ال food يكون متعادل لإن لو كان acidic or

314
00:24:28,680 --> 00:24:33,020
basic هيأثر على ال pH indicator بتاع ال media ال

315
00:24:33,020 --> 00:24:39,080
pH meter بيقيص ال pH سومكر البلندر أو أي إشي من

316
00:24:39,080 --> 00:24:43,260
هذه القبيل بيستخدم إنه بيخلي العينة homogeneous

317
00:24:43,260 --> 00:24:46,860
بيحولها من solid إلى liquid control culture اللي

318
00:24:46,860 --> 00:24:50,520
هي ال ATCC قلنا high American type culture

319
00:24:50,520 --> 00:24:55,550
collection اللي هي بتكون بكتيريا معرفة عالمياً

320
00:24:55,550 --> 00:25:00,490
بنحتاج كـ Positive Control هي شريشة كولاي O157H7

321
00:25:00,490 --> 00:25:05,810
Negative Control شريشة كولاي مش O157H7 بنحتاج كمان

322
00:25:05,810 --> 00:25:12,130
لـ Incubator و لميديات لـ Tryptic Soy Agar With

323
00:25:12,130 --> 00:25:15,910
Yeast Extract هذه كان ممكن نحتاجهم Rapid

324
00:25:15,910 --> 00:25:19,650
Identification Kit زي اللي هي الـ API Analytical

325
00:25:19,650 --> 00:25:22,930
Profile Index الـ Lytic Agglutination Kits هي أنتجن

326
00:25:22,930 --> 00:25:26,650
أنتبادي الـ MVC هي Biochemical Test يوريا

327
00:25:26,650 --> 00:25:30,850
أجار سلاند ممكن أحتاج إلى اليوريا فلو كانت

328
00:25:30,850 --> 00:25:34,090
البكتيريا عندها أنزيم اليورياس هتكسر اليوريا اللي

329
00:25:34,090 --> 00:25:38,670
في الميديا و هتحطيني أمونيا الأمونيا بترفع ال pH

330
00:25:38,670 --> 00:25:42,750
هيصير اللون الوسط بدل ما هو أصفر بتحول إلى اللون

331
00:25:42,750 --> 00:25:46,790
pink ممكن أنكم تشوفوه يعني فوشي فوشي يعني يعني على

332
00:25:46,790 --> 00:25:51,500
الآخر بيكون واضح الـMUG هد هو الـreagent لو كان

333
00:25:51,500 --> 00:25:54,740
البكتيريا عندها الـglucorindiase هتتغير اللون،

334
00:25:54,740 --> 00:25:59,440
هيصير fluorescent لكن الشريشة Chloe O157H7 ما

335
00:25:59,440 --> 00:26:02,360
عندها، الإنزيم هد وبالتالي مش هيصير fluorescent

336
00:26:02,360 --> 00:26:06,160
ممكن كمان إنه نستخدم reagent تاني other than

337
00:26:06,160 --> 00:26:11,300
الـMUG اللي هو الـbromochloroendrogluconide نحتاج

338
00:26:11,300 --> 00:26:16,370
الـO157 وH7-antisera مشان لما نشتغل الـ

339
00:26:16,370 --> 00:26:19,190
confirmatory test اللي هو الـ latex agglutination