Milieux de culture, Différent, Sérum, Origine - Santé
Santé - Milieux de culture, Différent, Sérum, Origine
Le substrat par chromatographie par échange d'ions est purifié avec élimination de l'ADN résiduel et de l'albumine bovine du milieu de culture. Enfin la suspension d'antigènes HBs purifiée bénéficie d'un traitement par la chaleur et le formol inactivant les différentes classes de virus susceptibles d'être encore présentes dans la suspension. [...] Mais......on s'en fout du SVF (Sérum de veau foetal), c'est un constituant classique des milieux de culture cellulaire parce que la cellule y trouve tout ce dont elle a besoin (facteurs de croissance, etc...). [...]
On a l'habitude d'utiliser les milieux RPMI1640 et DMEM. Il faut savoir que le milieu DMEM est beaucoup plus riche que le RPMI, la proportion en acides aminés est globalement deux fois plus forte pour le DMEM. Le choix du milieu de culture et de sa supplémentation (sérum de veau foetal, L-Glutamine, Hépès, insuline, [...] Parmi les souches animales les plus courantes utilisées on a les NIH 3T3 (fibroblastes embryonnaires de souris), les HeLa (fibroblastes humains) et les COS (cellules reinales de singe vert africain). Mais si c'est une culture de cellules prélevées, je ne connais pas les modes opératoires dans ces cas là. [...]
Les inhibiteurs de la trypsine c'est nous qui les ajoutant au milieu de culture, alors pourquoi il représente un inconvénient, on a qu a ne pas les mettre =). [...] Elle sert à détacher les cellules de leur support en digérant la matrice. Seulement elle attaque aussi les cellules elles mêmes, créé un stress assez important. Et si tu travailles avec des cultures primaires que tu peux mettre jusqu'à 3h à isoler, mieux vaut aller vite et inactiver rapidement la trypsine. [...]
Ensuite, un schéma de protocole de culture, ce n'est pas assez précis. Cela dépend encore des cellules, certaines sont adhérentes d'autres surnageantes par exemple et pour chacun de ces cas le protocole sera différent. [...] On dépose (ensemence) les cellules à une faible densité (peu de cellules / cm²) dans des boites ou des flasques de culture dans un milieu approprié (par exemple le DMEM) et éventuellement supplémenté (a.a., antibio, sérum,...). [...]
En effet, avant le dépôt de ta solution de transfection sur tes cellules, enlève le milieu de culture et lave les cellules au PBS (moi je lave deux fois pour être sûr de bien éliminer le sérum présent dans le milieu de culture). [...] Pour l'opti-MEM, il m'est arrivé très souvent de transfecter directement dans le milieux de culture sans passer par l'étape opti et pour certains types cellulaires ça marche mieux et je changeais le milieu pour éliminer les morts... Sinon si tu utilise de l'opti je conseille de changer le milieu de transfection genre le soir si tu fais ça très tôt le matin car les cellules n'aiment pas rester trop longtemps dans ce milieu surtout qu'elles ont déjà été très stressées par le lipofectant. [...]