id
stringlengths 2
9
| sections
sequence | sec_text
sequence | extractive_keyphrases
sequence | abstractive_keyphrases
sequence | sec_bio_tags
sequence |
---|---|---|---|---|---|
18980258 | [
"visual sleep staging is still the most widely used procedure to analyze sleep. it allows one",
"sleep stages",
"subjects and procedures",
"eeg parameter = (frequency time portion) sum of all time portions",
"statistical analysis",
"results",
"discussion",
"heterogeneity of sleep stages",
"spatial representation of sleep trajectory",
"sleep as a continuum versus sleep staging",
"title",
"abstract"
] | [
[
"TO",
"SUBDIVIDE",
"SLEEP",
"RECORDINGS",
"INTO",
"discrete",
"states",
"or",
"stages,",
"defined",
"by",
"coherent",
"and",
"recurrent",
"patterns",
"of",
"one",
"1",
"or",
"more",
"2",
"electrophysiologic",
"signals.",
"Based",
"on",
"this",
"method,",
"human",
"sleep",
"has",
"been",
"defined",
"as",
"an",
"alternating",
"sequence",
"of",
"4",
"stages",
"of",
"non-rapid",
"eye",
"movement",
"sleep",
"(NREM",
"stages",
"1",
"to",
"4),",
"and",
"rapid",
"eye",
"movement",
"(REM)",
"sleep.",
"3",
"Although",
"there",
"is",
"unanimous",
"acceptance",
"of",
"the",
"existence",
"of",
"2",
"different",
"states",
"of",
"sleep,",
"REM",
"and",
"NREM",
"sleep,",
"different",
"conceptions",
"of",
"the",
"structure",
"of",
"NREM",
"sleep",
"have",
"been",
"proposed.",
"Based",
"on",
"quantitative",
"electroencephalographic",
"analysis",
"during",
"sleep,",
"NREM",
"sleep",
"can",
"be",
"represented",
"as",
"a",
"continuum",
"instead",
"of",
"a",
"staged",
"process.",
"4,",
"5",
"A",
"continuous",
"representation",
"of",
"NREM",
"sleep",
"allows",
"one",
"to",
"model",
"the",
"sleep",
"process",
"by",
"quantitative",
"variables,",
"such",
"as",
"the",
"mean",
"electroencephalographic",
"(EEG)",
"frequency",
"or",
"the",
"power",
"of",
"different",
"EEG",
"frequency",
"bands.",
"6,",
"7,",
"8",
"In",
"contrast",
"with",
"this,",
"the",
"strongest",
"point",
"for",
"sleep",
"staging",
"is",
"that",
"it",
"allows",
"the",
"integration",
"of",
"a",
"variety",
"of",
"electrophysiologic",
"information",
"from",
"different",
"recording",
"channels",
"into",
"a",
"reasonably",
"small",
"number",
"of",
"well-defined",
"stages..",
"Sleep",
"staging",
"is",
"confronted",
"with",
"2",
"major",
"difficulties:",
"first,",
"how",
"to",
"exactly",
"delineate",
"neighboring",
"stages,",
"and",
"second,",
"how",
"to",
"handle",
"intrastate",
"variability?",
"Both",
"points",
"have",
"an",
"influence",
"on",
"the",
"reliability",
"of",
"sleep",
"studies.",
"9",
"Although",
"rules",
"for",
"the",
"definition",
"of",
"sleep",
"states",
"and",
"stages",
"have",
"been",
"developed,",
"2",
"the",
"question",
"of",
"intrastate",
"heterogeneity",
"has",
"been",
"widely",
"ignored.",
"Exceptions",
"consist",
"of",
"a",
"few",
"scattered",
"proposals",
"to",
"subdivide",
"the",
"sleep-onset",
"process",
"into",
"fine-graded",
"steps,",
"10",
"to",
"study",
"differences",
"between",
"stage",
"2",
"sleep",
"early",
"and",
"late",
"in",
"night-time",
"sleep,",
"11",
"or",
"to",
"subdivide",
"NREM",
"and",
"REM",
"sleep",
"into",
"tonic",
"and",
"phasic",
"segments.",
"12",
"Another",
"approach",
"to",
"subdivide",
"the",
"NREM",
"sleep",
"process",
"into",
"meaningful",
"subunits",
"has",
"been",
"proposed",
"by",
"Terzano",
"and",
"coworkers.",
"13,",
"14",
"These",
"authors",
"developed",
"the",
"concept",
"of",
"a",
"cyclic",
"alternating",
"pattern",
"(CAP),",
"corresponding",
"to",
"different",
"functional",
"states",
"of",
"arousal-control",
"mechanisms",
"during",
"NREM",
"sleep.",
"15",
"In",
"a",
"recent",
"study,",
"Brandenberger",
"et",
"al",
"16",
"called",
"into",
"question",
"the",
"homogeneity",
"of",
"stage",
"2",
"sleep.",
"These",
"authors",
"presented",
"data",
"that",
"suggest",
"that",
"2",
"types",
"of",
"stage",
"2",
"sleep",
"can",
"be",
"differentiated,",
"a",
"quiet",
"one,",
"preceding",
"slow-wave",
"sleep,",
"and",
"an",
"active",
"one,",
"preceding",
"REM",
"sleep..",
"Sleep",
"staging",
"is",
"a",
"rule-based",
"procedure,",
"which",
"uses",
"expert",
"knowledge",
"to",
"define",
"which",
"combination",
"of",
"electrophysiologic",
"patterns",
"defines",
"a",
"sleep",
"stage.",
"2",
"As",
"an",
"alternative,",
"a",
"statistical",
"analysis",
"could",
"explore",
"which",
"pattern",
"configurations,",
"extracted",
"from",
"EEG,",
"electromyogram",
"(EMG),",
"electrooculogram,",
"or",
"any",
"other",
"physiologic",
"signal,",
"are",
"either",
"typical,",
"ie,",
"occur",
"more",
"frequently,",
"or",
"atypical,",
"i.e.,",
"occur",
"less",
"frequently,",
"relative",
"to",
"one's",
"expectation.",
"The",
"configural",
"frequency",
"analysis",
"(CFA)",
"17",
"is",
"a",
"nonparametric",
"taxonomic",
"statistical",
"analysis",
"that",
"allows",
"one",
"to",
"identify",
"overrepresentations",
"(types)",
"or",
"underrepresentations",
"(antitypes)",
"in",
"the",
"frequency",
"distribution",
"of",
"multiple",
"variable",
"classifications.",
"This",
"procedure",
"examines",
"the",
"statistical",
"significance",
"of",
"patterns",
"of",
"cell",
"frequencies",
"in",
"cross-tabulated",
"data",
"and",
"defines",
"types",
"or",
"antitypes,",
"depending",
"on",
"whether",
"observed",
"cell",
"frequencies",
"are",
"greater",
"or",
"smaller",
"than",
"expected",
"by",
"the",
"marginal",
"distribution..",
"The",
"objective",
"of",
"the",
"present",
"study",
"was",
"to",
"investigate",
"the",
"structure",
"of",
"sleep",
"by",
"means",
"of",
"the",
"CFA.",
"We",
"applied",
"the",
"CFA",
"to",
"3",
"continuously",
"measured",
"variables",
"during",
"sleep:",
"(a)",
"an",
"EEG",
"parameter",
"(EEG-P),",
"representing",
"the",
"distribution",
"of",
"EEG",
"wave",
"lengths,"
],
[
"Study",
"Objectives:",
"To",
"study",
"the",
"structure",
"of",
"human",
"sleep",
"at",
"the",
"level",
"of",
"sleep",
"stages.",
"We",
"applied",
"taxonomic",
"statistics",
"to",
"detect",
"significant",
"configurations",
"(types)",
"of",
"different",
"physiologic",
"variables",
"and",
"their",
"relationship",
"to",
"sleep",
"stages.",
"Design",
"and",
"Statistics:",
"Polygraphic",
"sleep",
"recordings",
"from",
"32",
"subjects",
"(normal",
"sleepers",
"as",
"well",
"as",
"patients",
"with",
"insomnia,",
"sleep",
"apnea,",
"or",
"narcolepsy;",
"n",
"=",
"8",
"per",
"group)",
"were",
"visually",
"scored",
"and",
"submitted",
"to",
"a",
"configural",
"frequency",
"analysis.",
"The",
"configural",
"frequency",
"analysis",
"was",
"computed",
"with",
"3",
"continuous",
"input",
"variables:",
"an",
"electroencephalogram",
"parameter,",
"which",
"represents",
"the",
"point",
"of",
"gravity",
"of",
"the",
"EEG",
"frequency",
"distribution;",
"the",
"alpha",
"slow-wave",
"index,",
"and",
"the",
"Rest",
"Index,",
"based",
"on",
"the",
"presence",
"or",
"absence",
"of",
"phasic",
"electromyographic",
"activity.",
"These",
"variables",
"were",
"dichotomized",
"for",
"further",
"analysis.",
"The",
"combination",
"of",
"2",
"levels",
"(",
"+",
"or",
"-)",
"and",
"3",
"variables",
"resulted",
"in",
"2",
"3",
"patterns",
"(",
"+++",
"to",
"---",
"similar",
"to",
"other",
"continuous",
"EEG",
"parameters",
"4,",
"18",
";",
"(b)",
"the",
"alpha",
"slow-wave",
"index",
"(ASI)",
"19",
";",
"and",
"(c)",
"the",
"rest",
"index",
"(RI),",
"based",
"on",
"the",
"amount",
"of",
"phasic",
"or",
"transient",
"EMG",
"activity.",
"20",
"We",
"selected",
"these",
"parameters",
"because",
"they",
"are",
"continuous,",
"independent",
"from",
"staging",
"rules,",
"and",
"belong",
"to",
"the",
"standard",
"of",
"our",
"sleep-analysis",
"system.",
"The",
"EEG",
"parameter",
"describes",
"the",
"time",
"course",
"of",
"EEG",
"activity",
"during",
"sleep,",
"which",
"varies",
"between",
"low-amplitude",
"fast",
"waves",
"in",
"wakefulness",
"and",
"high-amplitude",
"slow",
"waves",
"during",
"deep",
"NREM",
"sleep.",
"The",
"ASI,",
"which",
"is",
"based",
"on",
"the",
"proportion",
"of",
"alpha",
"to",
"slowwave",
"EEG",
"activity,",
"recognizes",
"fairly",
"long",
"arousals",
"and",
"intervening",
"wakefulness.",
"19",
"Finally,",
"the",
"RI",
"is",
"a",
"measure",
"of",
"motor",
"rest",
"or",
"unrest,",
"based",
"on",
"the",
"presence",
"or",
"absence",
"of",
"transient",
"EMG",
"activity.",
"20,",
"21",
"Each",
"of",
"the",
"3",
"continuous",
"variables",
"EEG-P",
"(E),",
"ASI",
"(A),",
"and",
"RI",
"(R)",
"was",
"dichotomized,",
"and",
"the",
"resulting",
"cross-tabulation",
"was",
"tested",
"for",
"significant",
"patterns",
"of",
"configurations.",
"Significant",
"configurations",
"or",
"types",
"were",
"matched",
"with",
"conventional",
"sleep",
"stages.",
"This",
"comparison",
"allows",
"us",
"to",
"(1)",
"estimate",
"the",
"complexity",
"(homogeneity",
"vs",
"heterogeneity)",
"of",
"sleep",
"stages",
"and",
"(2)",
"determine",
"the",
"degree",
"of",
"potential",
"overlap",
"between",
"stages.",
"If",
"more",
"than",
"1",
"significant",
"configuration",
"emerges",
"from",
"the",
"same",
"sleep",
"stage,",
"this",
"stage",
"seems",
"to",
"be",
"heterogeneous.",
"On",
"the",
"other",
"hand,",
"if",
"a",
"given",
"configuration",
"occurs",
"in",
"more",
"than",
"1",
"stage,",
"this",
"indicates",
"overlap",
"between",
"stages."
],
[
"The",
"analysis",
"was",
"based",
"on",
"32",
"all-night",
"sleep",
"recordings",
"from",
"18",
"women",
"and",
"14",
"men.",
"The",
"mean",
"age",
"was",
"50.1",
"SD",
"9.3",
"years",
"(range:",
"35-70",
"years).",
"The",
"total",
"sample",
"consisted",
"of",
"4",
"groups",
"of",
"8",
"subjects",
"each,",
"namely",
"control",
"subjects",
"without",
"reported",
"sleep",
"disturbances",
"(4",
"women,",
"4",
"men;",
"mean",
"age:",
"56.5",
"years;",
"range:",
"36-70",
"years)",
"and",
"3",
"groups",
"of",
"patients",
"with",
"the",
"following",
"International",
"Classification",
"of",
"Sleep",
"Disorders-defined",
"sleep",
"disorders:",
"psychophysiological",
"insomnia",
"(5",
"women,",
"3",
"men;",
"mean",
"age:",
"48.4",
"years;",
"range:",
"35-63",
"years);",
"obstructive",
"sleep",
"apnea",
"syndrome",
"(OSA:",
"4",
"women,",
"4",
"men;",
"mean",
"age:",
"56.1",
"years;",
"range:",
"40-68",
"years);",
"and",
"narcolepsy",
"(5",
"women,",
"3",
"men;",
"mean",
"age:",
"52.1",
"years;",
"range:",
"35-62",
"years)..",
"Polygraphic",
"sleep",
"recordings",
"were",
"performed",
"for",
"7.5",
"to",
"8",
"hours",
"between",
"10:00",
"PM",
"and",
"6:30",
"AM",
"under",
"standardized",
"recording",
"conditions",
"in",
"a",
"clinical",
"sleep",
"lab.",
"The",
"following",
"variables",
"were",
"continuously",
"recorded:",
"EEG",
"(F1-A1,",
"C3-A2,",
"C4-A1,",
"O2-A2),",
"horizontal",
"electrooculogram,",
"chin",
"EMG,",
"heart",
"rate,",
"respiration",
"(nasal/mouth",
"flow,",
"respiratory",
"effort",
"of",
"abdomen",
"and",
"chest),",
"oxygen",
"saturation",
"and",
"EMG",
"from",
"right",
"and",
"left",
"m.",
"tibialis.",
"For",
"the",
"present",
"analysis,",
"we",
"used",
"1",
"EEG",
"channel",
"(C3-A2)",
"and",
"1",
"EMG",
"channel",
"(chin",
"EMG)..",
"Digital",
"sleep",
"data",
"were",
"stored",
"for",
"later",
"analysis,",
"and",
"sleep",
"stages",
"were",
"visually",
"analyzed",
"in",
"30-second",
"segments",
"(\"epochs\")",
"according",
"to",
"Rechtschaffen",
"and",
"Kales",
"2",
"criteria.",
"In",
"addition,",
"3",
"continuous",
"parameters",
"were",
"computed",
"from",
"the",
"recordings,",
"A,",
"a",
"measure",
"of",
"the",
"ratio",
"of",
"EEG",
"alpha",
"and",
"slow-wave",
"activity",
"19",
";",
"E,",
"representing",
"the",
"point",
"of",
"gravity",
"of",
"the",
"EEG",
"frequency",
"distribution",
"(similar",
"to",
"Haustein)",
"4",
";",
"and",
"R,",
"a",
"measure",
"that",
"is",
"based",
"on",
"the",
"momentary",
"amount",
"of",
"phasic",
"EMG",
"activity.",
"20",
"The",
"variable",
"A",
"is",
"defined",
"as",
"the",
"ratio",
"between",
"alpha",
"activity",
"and",
"the",
"sum",
"of",
"activity",
"in",
"the",
"delta",
"and",
"theta",
"frequency",
"ranges.",
"This",
"ratio",
"is",
"expressed",
"as",
"follows:.",
"During",
"a",
"transition",
"from",
"wakefulness",
"to",
"sleep,",
"the",
"contribution",
"of",
"alpha",
"decreases",
"while",
"that",
"of",
"the",
"slow-wave",
"frequency",
"ranges",
"increases..",
"E",
"is",
"a",
"continuous",
"variable",
"that",
"is",
"defined",
"for",
"each",
"30-second",
"epoch",
"from",
"the",
"EEG",
"frequency",
"distribution.",
"The",
"amount",
"of",
"EEG",
"activity",
"in",
"each",
"frequency",
"band",
"is",
"defined",
"by",
"an",
"algorithm",
"that",
"combines",
"zero",
"crossing",
"for",
"low",
"frequencies",
"(<",
"4",
"Hz)",
"and",
"peak-topeak",
"detection",
"for",
"higher",
"frequencies",
"(>",
"4",
"Hz).",
"The",
"time",
"portion",
"per",
"30-second",
"epoch",
"was",
"computed",
"for",
"each",
"wavelength.",
"E",
"is",
"defined",
"by",
"the",
"following",
"formula:"
],
[
"The",
"values",
"for",
"parameter",
"E",
"are",
"highest",
"in",
"waking",
"and",
"lowest",
"in",
"slow-wave",
"sleep..",
"R",
"was",
"computed",
"from",
"the",
"m.",
"mentalis",
"EMG.",
"An",
"EMG",
"increase",
"above",
"a",
"predefined",
"threshold",
"was",
"scored",
"as",
"transient",
"EMG",
"activity.",
"For",
"each",
"30-second",
"epoch,",
"it",
"was",
"determined",
"whether",
"or",
"not",
"there",
"was",
"transient",
"EMG",
"activity.",
"Based",
"on",
"this",
"information,",
"R",
"was",
"computed",
"as",
"a",
"continuous",
"variable",
"between",
"0",
"and",
"1.",
"As",
"long",
"as",
"there",
"is",
"no",
"transient",
"EMG",
"activity,",
"the",
"parameter",
"value",
"decreases",
"by",
"a",
"certain",
"constant",
"amount",
"per",
"time",
"unit,",
"whereas",
"it",
"increases",
"by",
"a",
"certain",
"amount",
"when",
"transient",
"EMG",
"activity",
"occurs.",
"As",
"a",
"result,",
"R",
"reaches",
"its",
"lowest",
"level",
"during",
"long",
"time",
"spans",
"without",
"transient",
"EMG",
"activity,",
"and",
"it",
"reaches",
"the",
"upper",
"level",
"when",
"a",
"series",
"of",
"EMG",
"transients",
"occurs.",
"The",
"amount",
"for",
"a",
"decrease",
"was",
"fixed",
"at",
"one",
"third",
"of",
"that",
"for",
"an",
"increase,",
"to",
"adjust",
"for",
"the",
"different",
"dynamics",
"of",
"EMG",
"changes",
"during",
"descending",
"(W",
"→",
"slow-wave",
"sleep)",
"and",
"ascending",
"(slow-wave",
"sleep",
"→",
"W",
"or",
"S1)",
"parts",
"of",
"the",
"sleep",
"cycle.",
"The",
"time",
"course",
"of",
"R",
"values",
"can",
"be",
"graphically",
"displayed",
"as",
"a",
"time-dependent",
"variable",
"(see",
"Figure",
"1",
").",
"The",
"computation",
"of",
"the",
"3",
"parameters",
"was",
"performed",
"by",
"a",
"commercial",
"sleep",
"analysis",
"software",
"package",
"(Leonardo;",
"MKE,",
"Willroth,",
"Germany).",
"Figure",
"1",
"represents",
"a",
"visually",
"scored",
"hypnogram",
"in",
"addition",
"to",
"the",
"3",
"continuous",
"measures",
"A,",
"E",
"and",
"R."
],
[
"For",
"each",
"continuous",
"variable",
"(A,",
"E,",
"R),",
"1",
"value",
"was",
"computed",
"for",
"each",
"30-second",
"epoch.",
"Later,",
"the",
"continuous",
"variables",
"were",
"transformed",
"into",
"binary",
"variables",
"by",
"separating",
"the",
"total",
"distribution",
"of",
"epoch-by-epoch",
"values",
"at",
"the",
"individual",
"median.",
"For",
"a",
"given",
"variable",
"and",
"epoch,",
"a",
"plus",
"(+)",
"was",
"assigned",
"if",
"the",
"actual",
"parameter",
"value",
"was",
"above",
"the",
"median,",
"and",
"a",
"minus",
"(-)",
"if",
"the",
"actual",
"value",
"was",
"below",
"the",
"median",
"for",
"a",
"given",
"subject.",
"The",
"combination",
"of",
"the",
"3",
"binary",
"variables",
"(A,",
"E,",
"R)",
"results",
"in",
"2",
"3",
"=",
"8",
"different",
"patterns",
"(",
",",
"...,",
"---).",
"The",
"first",
"sign",
"relates",
"to",
"A,",
"the",
"second",
"to",
"E,",
"and",
"the",
"third",
"to",
"R..",
"In",
"the",
"next",
"step,",
"a",
"sleep",
"stage",
"and",
"an",
"(A,",
"E,",
"R)",
"pattern",
"were",
"assigned",
"to",
"each",
"epoch",
"of",
"the",
"sleep",
"recording.",
"Finally,",
"the",
"frequency",
"of",
"occurrence",
"of",
"the",
"8",
"patterns",
"was",
"tabulated",
"for",
"each",
"sleep",
"stage",
"and",
"analyzed",
"by",
"CFA.",
"17,",
"22",
"The",
"CFA",
"is",
"a",
"test",
"procedure",
"for",
"the",
"analysis",
"of",
"multidimensional",
"contingency",
"tables.",
"It",
"computes",
"the",
"probability",
"of",
"whether",
"a",
"given",
"pattern",
"could",
"be",
"expected",
"to",
"occur",
"by",
"chance,",
"according",
"to",
"the",
"margin",
"frequency",
"distributions",
"of",
"the",
"binary",
"variables",
"A,",
"E,",
"and",
"R",
"pattern,",
"or",
"whether",
"it",
"is",
"significant,",
"i.e.,",
"overrepresented,",
"for",
"a",
"given",
"sleep",
"stage.",
"If",
"more",
"than",
"1",
"pattern",
"becomes",
"significant",
"for",
"a",
"given",
"sleep",
"stage,",
"this",
"suggests",
"that",
"the",
"stage",
"contains",
"different",
"identifiable",
"substages.",
"The",
"CFA",
"allows",
"one",
"to",
"define",
"types,",
"by",
"a",
"statistical",
"probability",
"above",
"the",
"chosen",
"level",
"of",
"significance,",
"as",
"well",
"as",
"antitypes,",
"which",
"occur",
"less",
"frequently",
"than",
"expected",
"by",
"chance.",
"In",
"the",
"present",
"case,",
"the",
"prediction",
"CFA",
"was",
"performed",
"with",
"the",
"configurations",
"A,",
"E,",
"R",
"as",
"predictors",
"and",
"with",
"visually",
"scored",
"sleep",
"stages",
"as",
"criteria.",
"23,",
"24",
"For",
"CFA",
"statistical",
"testing,",
"we",
"used",
"the",
"Fisher",
"exact",
"test",
"for",
"4-fold",
"tables.",
"23",
"The",
"level",
"of",
"significance",
"α",
"was",
"set",
"at",
".05,",
"and",
"the",
"Holm",
"method",
"25",
"was",
"applied",
"to",
"adjust",
"α",
"for",
"multiple",
"testing."
],
[
"The",
"analysis",
"was",
"based",
"on",
"32",
"polysomnographic",
"recordings",
"with",
"a",
"total",
"of",
"28,086",
"epochs.",
"The",
"distribution",
"of",
"sleep",
"stages",
"was",
"8.8%",
"(n",
"=",
"2484",
"epochs)",
"for",
"Stage",
"1,",
"46.9%",
"(n",
"=",
"13,182)",
"for",
"Stage",
"2,",
"7.5%",
"(n",
"=",
"2113)",
"for",
"Stage",
"3,",
"2.1%",
"(n",
"=",
"587)",
"for",
"Stage",
"4,",
"and",
"16.5%",
"(n",
"=",
"4,625)",
"for",
"REM",
"sleep.",
"The",
"remaining",
"epochs",
"were",
"scored",
"as",
"awake",
"(17.7%,",
"n",
"=",
"4972",
"epochs),",
"movement",
"time",
"(0.3%,",
"n",
"=",
"79),",
"or",
"undefined",
"(0.2%,",
"n",
"=",
"44",
"epochs).",
"There",
"was",
"no",
"definition",
"of",
"types",
"for",
"movement",
"time",
"and",
"undefined.",
"Table",
"1",
"shows",
"the",
"absolute",
"and",
"Table",
"2",
"the",
"relative",
"frequencies",
"of",
"the",
"8",
"combinations",
"of",
"binary",
"values",
"for",
"A,",
"E,",
"and",
"R",
"per",
"sleep",
"stage",
"for",
"all",
"32",
"sleep",
"recordings.",
"The",
"margin",
"frequencies",
"show",
"that",
"the",
"patterns",
"(n",
"=",
"6410,",
"22.8%)",
"and",
"---(n",
"=",
"5501,",
"19.6%)",
"were",
"the",
"most",
"frequent,",
"whereas",
"the",
"pattern",
"(n",
"=",
"1893,",
"6.7%)",
"was",
"least",
"frequent..",
"Those",
"patterns",
"identified",
"by",
"the",
"CFA",
"as",
"significant",
"for",
"the",
"total",
"sample",
"of",
"32",
"recordings",
"are",
"marked",
"in",
"Table",
"2",
"..",
"The",
"significant",
"patterns",
"or",
"types",
"for",
"the",
"4",
"groups",
"of",
"subjects",
"are",
"summarized",
"in",
"Table",
"3",
".",
"As",
"can",
"be",
"seen,",
"the",
"majority",
"of",
"significant",
"pattern-to-stage",
"relationships",
"applies",
"to",
"all",
"4",
"groups",
"of",
"subjects.",
"An",
"identical",
"pattern-to-stage",
"relationship",
"was",
"found",
"for",
"all",
"4",
"groups",
"in",
"11",
"cases,",
"for",
"3",
"groups",
"in",
"2",
"cases,",
"for",
"2",
"groups",
"in",
"5",
"cases,",
"and",
"for",
"1",
"group",
"in",
"2",
"cases.",
"Given",
"the",
"limited",
"sample",
"size",
"of",
"only",
"8",
"sleep",
"recordings",
"per",
"group,",
"this",
"suggests",
"a",
"rather",
"stable",
"pattern-to-stage",
"relationship,",
"largely",
"independent",
"of",
"the",
"specific",
"pathology",
"of",
"the",
"diagnostic",
"groups..",
"Stage",
"wake",
"was",
"characterized",
"by",
"a",
"single",
"pattern",
"(",
")",
"with",
"high",
"values",
"for",
"A,",
"E,",
"and",
"R",
"in",
"all",
"4",
"groups.",
"One",
"additional",
"pattern",
"(",
")",
"with",
"a",
"low",
"R",
"value",
"became",
"significant",
"for",
"patients",
"with",
"insomnia",
"and",
"narcolepsy,",
"and",
"1",
"(",
")",
"with",
"low",
"A",
"for",
"patients",
"with",
"OSA..",
"Stage",
"1",
"sleep",
"exhibited",
"2",
"significant",
"patterns",
"for",
"all",
"groups,",
"1",
"with",
"high",
"values",
"in",
"all",
"3",
"variables",
"(",
")",
"and",
"1",
"with",
"a",
"low",
"value",
"for",
"A",
"but",
"high",
"values",
"for",
"E",
"and",
"R",
"(.",
").",
"This",
"suggests",
"2",
"types",
"of",
"Stage",
"1",
"sleep,",
"1",
"with",
"more",
"alpha",
"activity",
"(",
")",
"and",
"1",
"with",
"less",
"alpha",
"(.",
").",
"An",
"additional",
"Stage",
"1",
"pattern",
"with",
"a",
"low",
"value",
"for",
"R",
"(",
")",
"became",
"significant",
"only",
"for",
"control",
"subjects",
"and",
"patients",
"with",
"insomnia..",
"Stage",
"2",
"sleep",
"turned",
"out",
"to",
"be",
"heterogeneous,",
"with",
"4",
"significant",
"patterns",
"in",
"all",
"4",
"groups.",
"All",
"4",
"patterns",
"had",
"a",
"low",
"value",
"for",
"E",
"in",
"common.",
"Two",
"patterns",
"had",
"a",
"high",
"value",
"for",
"A",
"(",
"and",
")",
"and",
"2",
"had",
"a",
"low",
"value",
"(",
"and",
"---),",
"whereas",
"the",
"value",
"for",
"R",
"was",
"twice",
"positive",
"and",
"twice",
"negative.",
"Interestingly,",
"none",
"of",
"the",
"Stage",
"2",
"patterns",
"overlapped",
"with",
"Stage",
"1",
"patterns",
"in",
"any",
"of",
"the",
"4",
"groups",
"of",
"subjects..",
"The",
"main",
"pattern",
"for",
"Stage",
"3",
"sleep,",
"valid",
"for",
"all",
"4",
"groups,",
"was",
"---.",
"One",
"additional",
"pattern",
"(",
")",
"became",
"significant",
"for",
"3",
"groups",
"(insomnia,",
"OSA,",
"narcolepsy),",
"and",
"1",
"other",
"(",
")",
"for",
"2",
"groups",
"(OSA,",
"narcolepsy).",
"All",
"3",
"patterns",
"were",
"characterized",
"by",
"a",
"low",
"value",
"for",
"E,",
"and",
"2",
"of",
"them",
"by",
"an",
"additionally",
"low",
"value",
"for",
"A",
"or",
"R,",
"respectively..",
"Stage",
"4",
"sleep",
"displayed",
"the",
"same",
"pattern",
"configuration",
"as",
"Stage",
"3.",
"Again,",
"the",
"pattern",
"---was",
"typical",
"for",
"all",
"4",
"groups,",
"whereas",
"the",
"remaining",
"2",
"patterns",
"were",
"significant",
"for",
"either",
"2",
"groups",
"(",
":",
"OSA",
"and",
"narcolepsy)",
"or",
"only",
"1",
"group",
"(",
":",
"insomnia)..",
"REM",
"sleep",
"was",
"characterized",
"by",
"4",
"significant",
"patterns.",
"All",
"4",
"had",
"a",
"high",
"value",
"for",
"the",
"EEG",
"parameter",
"E.",
"Two",
"of",
"these",
"were",
"also",
"high",
"for",
"A,",
"whereas",
"R",
"was",
"either",
"high",
"or",
"low",
"(",
"and",
").",
"The",
"remaining",
"2",
"patterns",
"were",
"low",
"for",
"A",
"but",
"differed",
"for",
"the",
"R",
"value",
"(",
"and",
").",
"The",
"latter",
"2",
"patterns",
"were",
"significant",
"for",
"all",
"4",
"groups",
"whereas",
"the",
"other",
"2",
"patterns",
"were",
"significant",
"for",
"3",
"groups",
"each",
"(",
"for",
"controls,",
"OSA,",
"and",
"narcolepsy;",
"for",
"controls,",
"insomnia,",
"and",
"OSA).",
"Representative",
"examples",
"for",
"each",
"type",
"are",
"shown",
"in",
"Figure",
"2",
"..",
"Overall,",
"76.8%",
"of",
"all",
"epochs",
"fitted",
"into",
"significant",
"patterns.",
"The",
"value",
"was",
"highest",
"for",
"Stage",
"3",
"(86.2%)",
"and",
"lowest",
"for",
"Stage",
"1",
"(68.3%)",
"sleep.",
"The",
"4",
"subject",
"groups",
"differed",
"only",
"slightly",
"in",
"the",
"total",
"number",
"of",
"epochs",
"fitting",
"into",
"significant",
"AER",
"patterns.",
"The",
"percentage",
"was",
"highest",
"for",
"OSA",
"(80.3%)",
"and",
"lowest",
"for",
"patients",
"with",
"narcolepsy",
"(74.5%)..",
"Beside",
"types,",
"the",
"CFA",
"also",
"allows",
"one",
"to",
"define",
"antitypes.",
"Antitypes",
"are",
"those",
"patterns",
"that",
"occur",
"significantly",
"less",
"frequently",
"than",
"would",
"be",
"expected",
"according",
"to",
"the",
"margin",
"frequencies.",
"In",
"the",
"present",
"analysis,",
"a",
"pattern",
"was",
"accepted",
"as",
"an",
"antitype",
"only",
"if",
"its",
"probability",
"was",
"less",
"than",
"0.05",
"and",
"if",
"this",
"was",
"the",
"case",
"in",
"all",
"4",
"groups.",
"Using",
"this",
"criterion,",
"20",
"patterns",
"could",
"be",
"defined",
"as",
"antitypes",
"(see",
"Table",
"4",
"Table",
"3",
")",
"and",
"of",
"20",
"antitypes",
"(see",
"Table",
"4",
").",
"The",
"remaining",
"8",
"fields",
"are",
"neutral,",
"ie,",
"they",
"may",
"either",
"hold",
"this",
"status",
"in",
"future",
"studies",
"with",
"larger",
"samples",
"or",
"they",
"may",
"shift",
"in",
"the",
"direction",
"of",
"types",
"or",
"antitypes.",
"The",
"percentage",
"of",
"epochs",
"in",
"fields",
"with",
"antitypes",
"was",
"quite",
"low",
"across",
"all",
"4",
"groups",
"of",
"subjects,",
"namely",
"1.6%",
"for",
"wake,",
"5.1%",
"for",
"Stage",
"1,",
"18.0%",
"for",
"Stage",
"2,",
"1.2%",
"for",
"Stage",
"3,",
"0%",
"for",
"Stage",
"4",
"and",
"10.5%",
"for",
"REM",
"sleep."
],
[
"The",
"present",
"results",
"call",
"attention",
"to",
"the",
"structural",
"complexity",
"of",
"sleep",
"stages.",
"The",
"statistical",
"analysis",
"revealed",
"that",
"visually",
"scored",
"sleep",
"stages",
"are",
"not",
"homogeneous",
"units",
"but,",
"rather,",
"agglomerations",
"of",
"different",
"significant",
"patterns,",
"called",
"types,",
"that",
"in",
"the",
"present",
"study",
"were",
"based",
"on",
"a",
"set",
"of",
"3",
"physiologic",
"variables",
"representing",
"aspects",
"of",
"the",
"momentary",
"EEG",
"and",
"EMG",
"activity.",
"The",
"decomposition",
"of",
"sleep",
"stages",
"into",
"types",
"by",
"the",
"prediction",
"CFA",
"resulted",
"in",
"fairly",
"comparable",
"solutions",
"for",
"the",
"various",
"diagnostic",
"groups.",
"This",
"is",
"in",
"agreement",
"with",
"the",
"experience",
"gained",
"from",
"clinical",
"sleep",
"research,",
"which",
"shows",
"that",
"sleep",
"recordings",
"from",
"different",
"diagnostic",
"groups",
"can",
"be",
"analyzed",
"with",
"the",
"same",
"scoring",
"system."
],
[
"Sleep",
"stages",
"contained",
"more",
"than",
"1",
"type,",
"indicating",
"a",
"physiological",
"heterogeneity",
"of",
"sleep",
"stages.",
"The",
"least-complex",
"stages",
"were",
"wakefulness",
"and",
"Stage",
"4;",
"the",
"most",
"complex",
"were",
"Stage",
"2",
"and",
"REM",
"sleep.",
"Each",
"of",
"the",
"latter",
"2",
"sleep",
"stages",
"was",
"composed",
"of",
"4",
"different",
"types,",
"which",
"did",
"not",
"significantly",
"overlap",
"between",
"these",
"2",
"stages..",
"Wakefulness",
"was",
"characterized",
"in",
"all",
"4",
"groups",
"by",
"type",
"AER/",
",",
"with",
"high",
"values",
"for",
"all",
"3",
"parameters.",
"The",
"additional",
"occurrence",
"of",
"patients",
"with",
"insomnia",
"and",
"narcolepsy",
"on",
"the",
"neighboring",
"type",
",",
"and",
"of",
"patients",
"with",
"OSA",
"on",
"type",
"AER/",
",",
"needs",
"replication",
"with",
"larger",
"samples",
"before",
"they",
"can",
"be",
"taken",
"for",
"granted..",
"Whereas",
"Stage",
"1",
"sleep",
"and",
"stage",
"wake",
"had",
"type",
"AER/",
"in",
"common,",
"Stage",
"1",
"sleep",
"displayed",
"AER/",
"as",
"a",
"second",
"type",
"in",
"all",
"4",
"groups.",
"This",
"shows",
"that",
"a",
"reduction",
"of",
"alpha",
"and",
"a",
"shift",
"to",
"EEG",
"slow-wave",
"activity,",
"resulting",
"in",
"a",
"low",
"value",
"for",
"parameter",
"A,",
"is",
"typical",
"of",
"a",
"significant",
"proportion",
"of",
"stage",
"1",
"epochs.",
"The",
"additional",
"pattern",
"AER/",
",",
"characterized",
"by",
"low",
"phasic",
"EMG",
"activity,",
"again",
"was",
"significant",
"only",
"for",
"patients",
"with",
"insomnia",
"and",
"control",
"subjects.",
"This",
"may",
"indicate",
"fewer",
"stage",
"1",
"movement",
"arousals",
"near",
"the",
"onset",
"of",
"sleep",
"for",
"the",
"control",
"and",
"insomnia",
"groups",
"compared",
"with",
"patients",
"in",
"the",
"OSA",
"and",
"narcolepsy",
"groups.",
"26",
"The",
"present",
"results",
"underline",
"the",
"position",
"of",
"Stage",
"1",
"as",
"a",
"transitional",
"stage",
"that",
"shares",
"the",
"same",
"AER",
"types",
"with",
"stage",
"wake",
"but",
"with",
"different",
"proportions",
"of",
"these",
"types",
"(see",
"Table",
"2",
")..",
"As",
"opposed",
"to",
"the",
"noticeable",
"overlap",
"of",
"types",
"in",
"stages",
"wake",
"and",
"1,",
"Stage",
"2",
"was",
"characterized",
"by",
"4",
"new",
"types.",
"All",
"Stage",
"2",
"types",
"had",
"a",
"low",
"value",
"for",
"parameter",
"E",
"in",
"common,",
"indicating",
"a",
"definite",
"shift",
"to",
"lower",
"EEG",
"frequencies.",
"The",
"other",
"2",
"parameters,",
"A",
"and",
"R,",
"were",
"either",
"high",
"or",
"low.",
"The",
"presence",
"of",
"4",
"AER",
"types",
"in",
"all",
"diagnostic",
"groups",
"suggests",
"that",
"Stage",
"2,",
"which",
"occupies",
"about",
"50%",
"of",
"total",
"sleep",
"time,",
"is",
"a",
"broadly",
"defined",
"heterogeneous",
"sleep",
"state.",
"27",
"In",
"an",
"early",
"study,",
"Sträle",
"(see",
"Lairy",
"11",
")",
"differentiated",
"between",
"3",
"Stage",
"2",
"EEG",
"patterns",
"with",
"the",
"following",
"characteristics:",
"(1)",
"epochs",
"with",
"fewer",
"than",
"4",
"sleep",
"spindles,",
"as",
"well",
"as",
"moderate",
"delta",
"activity;",
"(2)",
"epochs",
"with",
"fairly",
"low-voltage",
"mixed-frequency",
"EEG",
"with",
"4",
"to",
"8",
"spindles;",
"and",
"(3)",
"Stage",
"2",
"epochs",
"with",
"a",
"maximum",
"amount",
"of",
"slow",
"activity.",
"Sträle",
"observed",
"a",
"specific",
"chronologic",
"distribution",
"of",
"the",
"different",
"types",
"with",
"a",
"preference",
"for",
"the",
"second",
"type",
"of",
"Stage",
"2",
"later",
"in",
"the",
"night.",
"A",
"specific",
"chronologic",
"distribution",
"with",
"increasing",
"sleep-spindle",
"activity",
"during",
"sleep,",
"and",
"a",
"reciprocal",
"relationship",
"with",
"EEG",
"slow-wave",
"activity,",
"was",
"later",
"evaluated",
"more",
"systematically",
"by",
"others",
"using",
"digital",
"data-analysis",
"techniques.",
"28",
"Comparing",
"the",
"present",
"types",
"of",
"Stage",
"2",
"with",
"those",
"defined",
"by",
"Sträle,",
"his",
"type",
"c",
"may",
"correspond",
"with",
"the",
"types",
"AER/",
"and",
"---,",
"which",
"differ",
"only",
"in",
"phasic",
"EMG",
"activity.",
"In",
"future",
"studies,",
"it",
"would",
"be",
"of",
"interest",
"to",
"analyze",
"the",
"relationship",
"of",
"the",
"present",
"types",
"of",
"Stage",
"2",
"sleep",
"with",
"autonomic",
"and",
"hormone",
"data,",
"since",
"Brandenberger",
"et",
"al,",
"16",
"who",
"analyzed",
"such",
"data,",
"presented",
"evidence",
"for",
"a",
"quiet",
"type",
"of",
"Stage",
"2,",
"preceding",
"slow-wave",
"sleep,",
"and",
"an",
"active",
"type",
"that",
"precedes",
"REM",
"sleep..",
"Molinari",
"and",
"Foulkes'",
"12",
"distinction",
"between",
"tonic",
"and",
"phasic",
"NREM",
"sleep",
"corresponds",
"with",
"the",
"4",
"types",
"in",
"sleep",
"Stage",
"2",
"of",
"the",
"present",
"analysis,",
"2",
"of",
"them",
"with",
"phasic",
"EMG",
"activity",
"(AER/",
"and",
")",
"and",
"2",
"without",
"(AER/",
"and",
"---).",
"Thus,",
"Stage",
"2",
"seems",
"to",
"be",
"a",
"composite",
"state",
"with",
"consistently",
"low-frequency",
"background",
"EEG",
"(low",
"parameter",
"values",
"for",
"E)",
"activity,",
"but",
"fluctuations",
"of",
"the",
"alpha",
"to",
"slow-wave",
"ratio",
"(parameter",
"A",
"either",
"or",
"-),",
"and",
"of",
"tonic",
"versus",
"phasic",
"EMG",
"activity",
"(parameter",
"R",
"either",
"or",
"-).",
"29",
"The",
"type",
"AER/",
"---continued",
"into",
"deep",
"NREM",
"sleep",
"and",
"was",
"the",
"core",
"type",
"for",
"all",
"4",
"groups",
"in",
"sleep",
"Stages",
"3",
"and",
"4.",
"As",
"opposed",
"to",
"the",
"group",
"of",
"healthy",
"controls,",
"all",
"3",
"patient",
"groups",
"had",
"an",
"additional",
"significant",
"pattern",
"(AER/",
")",
"in",
"Stage",
"3,",
"which",
"persisted",
"in",
"patients",
"with",
"OSA",
"and",
"narcolepsy",
"even",
"in",
"stage",
"4.",
"This",
"finding,",
"which",
"awaits",
"confirmation,",
"suggests",
"that",
"patients",
"with",
"sleep",
"disorders",
"(as",
"opposed",
"to",
"healthy",
"persons)",
"have",
"a",
"significant",
"subset",
"of",
"epochs",
"in",
"Stages",
"3",
"and",
"4,",
"with",
"a",
"high",
"EEG",
"alpha",
"to",
"slow-wave",
"ratio",
"(parameter",
"A",
").",
"An",
"analysis",
"of",
"the",
"chronologic",
"sequence",
"of",
"appearance",
"of",
"types",
"is",
"also",
"needed",
"to",
"evaluate",
"whether",
"the",
"AER",
"types",
"and",
"in",
"deep",
"NREM",
"sleep",
"(see",
"Table",
"3",
")",
"represent",
"transitional",
"patterns",
"that",
"may",
"be",
"located",
"preferentially",
"near",
"the",
"onset",
"or",
"the",
"end",
"of",
"slow-wave",
"sleep..",
"REM",
"sleep",
"turned",
"out",
"to",
"be",
"a",
"complex",
"state",
"with",
"4",
"types.",
"In",
"contrast",
"with",
"the",
"AER",
"types",
"of",
"NREM",
"sleep,",
"all",
"AER",
"types",
"of",
"REM",
"sleep",
"had",
"a",
"high",
"value",
"for",
"parameter",
"E",
"in",
"common,",
"indicating",
"a",
"high-frequency",
"EEG.",
"Whereas",
"the",
"two",
"types",
"with",
"low",
"Taxonomical",
".",
"Configural",
"frequency",
"analysis",
"was",
"used",
"to",
"defined",
"types",
"of",
"activity-A",
"refers",
"to",
"alpha",
"slow-wave",
"index",
";",
"E,",
"electroencephalogram",
"parameter;",
"R,",
"Rest",
"Index;",
"S1,",
"R",
"represent",
"tonic",
"REM",
"sleep,",
"the",
"2",
"types",
"with",
"high",
"R",
"represent",
"phasic",
"REM",
"sleep.",
"12",
"Two",
"of",
"the",
"4",
"types",
"in",
"REM",
"sleep",
"occurred",
"in",
"all",
"patient",
"groups,",
"indicating",
"prototypes",
"of",
"REM-sleep",
"patterning",
"(AER/",
"and",
").",
"Type",
"AER/",
"was",
"significant",
"for",
"3",
"groups",
"(controls,",
"insomnia",
"and",
"OSA),",
"sparing",
"the",
"group",
"of",
"patients",
"with",
"narcolepsy.",
"A",
"closer",
"inspection",
"of",
"frequency",
"distributions",
"of",
"the",
"different",
"types",
"in",
"REM",
"sleep",
"showed",
"that,",
"in",
"contrast",
"with",
"the",
"other",
"3",
"groups,",
"in",
"patients",
"with",
"narcolepsy,",
"type",
"was",
"clearly",
"more",
"frequent",
"than",
"type",
",",
"suggesting",
"a",
"higher",
"rate",
"of",
"phasic",
"EMG",
"activity",
"in",
"REM",
"sleep",
"of",
"narcoleptic",
"patients.",
"This",
"is",
"in",
"agreement",
"with",
"results",
"by",
"Geisler",
"et",
"al,",
"30",
"who",
"found",
"higher",
"rates",
"of",
"phasic",
"EMG",
"activity",
"in",
"narcoleptic",
"patients",
"than",
"in",
"healthy",
"controls..",
"In",
"summary,",
"the",
"present",
"results",
"suggest",
"that",
"sleep",
"stages",
"are",
"not",
"homogeneous",
"units",
"but",
"represent",
"an",
"aggregation",
"of",
"different",
"substates",
"or",
"types.",
"Additionally,",
"the",
"analysis",
"showed",
"that",
"the",
"basic",
"structure",
"of",
"sleep,",
"defined",
"by",
"types,",
"is",
"similar",
"for",
"normal",
"sleepers",
"and",
"for",
"patients",
"with",
"different",
"sleep",
"pathologies.",
"This",
"is",
"in",
"line",
"with",
"the",
"clinical",
"experience",
"that",
"sleep",
"stages,",
"as",
"defined",
"for",
"normal",
"adult",
"sleepers,",
"31",
"are",
"also",
"used",
"routinely",
"for",
"the",
"analysis",
"of",
"patients",
"with",
"sleep",
"disturbances.",
"Future",
"studies",
"will",
"show",
"whether",
"the",
"observed",
"differences",
"between",
"diagnostic",
"groups",
"are",
"actually",
"valid",
"or",
"whether",
"they",
"merely",
"resulted",
"from",
"limited",
"sample",
"sizes",
"in",
"the",
"4",
"groups."
],
[
"The",
"types",
"from",
"Table",
"3",
"can",
"also",
"be",
"depicted",
"as",
"8",
"compartments",
"of",
"a",
"cube,",
"with",
"the",
"axes",
"A,",
"E,",
"and",
"R,",
"bisected",
"(",
"/-)",
"on",
"each",
"side",
"(see",
"Figure",
"3)",
".",
"In",
"this",
"figure",
"The",
"3-dimensional",
"representation",
"of",
"types",
"shows",
"apparent",
"similarities",
"to",
"Hobson's",
"3-dimensional",
"AIM",
"model,",
"32",
"with",
"the",
"3",
"dimensions",
"of",
"low",
"versus",
"high",
"activation",
"(A),",
"internal",
"versus",
"external",
"orientation",
"(I),",
"and",
"aminergic",
"versus",
"cholinergic",
"modulation",
"(M).",
"If",
"the",
"2",
"models",
"were",
"placed",
"to",
"coincide,",
"the",
"present",
"variables",
"of",
"A,",
"E,",
"and",
"R",
"would",
"correspond",
"with",
"the",
"dimensions",
"of",
"internal/external",
"(I),",
"low/high",
"activation",
"(A),",
"and",
"aminergic/cholinergic",
"modulation",
"(M),",
"respectively.",
"The",
"assumed",
"compatibility",
"suggests",
"that",
"both",
"models",
"represent",
"basic",
"dimensions",
"of",
"sleep",
"organization.",
"This",
"being",
"the",
"case,",
"one",
"would",
"expect",
"a",
"comparable",
"outcome",
"should",
"the",
"present",
"input",
"variables",
"be",
"replaced",
"by",
"other",
"physiologic",
"measures",
"such",
"as",
"autonomic",
"variables..",
"A",
"special",
"feature",
"of",
"the",
"CFA",
"is",
"that",
"it",
"defines",
"not",
"only",
"types,",
"but",
"antitypes",
"as",
"well.",
"The",
"interpretation",
"of",
"antitypes",
"warrants",
"some",
"caution,",
"since",
"the",
"independence",
"of",
"types",
"and",
"antitypes",
"has",
"been",
"questioned.",
"33",
"However,",
"Netter",
"24",
"has",
"emphasized",
"that",
"types",
"and",
"antitypes",
"can",
"be",
"interpreted",
"independently",
"if",
"the",
"data",
"are",
"embedded",
"not",
"in",
"2",
"×",
"2",
"but",
"in",
"larger",
"r",
"×",
"c",
"tables.",
"The",
"distribution",
"of",
"antitypes",
"was",
"quite",
"obvious",
"in",
"the",
"present",
"analysis.",
"Stage",
"wake",
"contained",
"3",
"antitypes",
"(AER/",
",",
",",
"and",
"---).",
"Two",
"of",
"them",
"were",
"also",
"significant",
"for",
"Stage",
"1.",
"All",
"3",
"antitypes",
"had",
"a",
"low",
"value",
"for",
"E,",
"i.e.,",
"low",
"EEG",
"frequency,",
"which",
"is",
"quite",
"untypical",
"of",
"these",
"stages.",
"In",
"contrast,",
"Stages",
"2,",
"3,",
"and",
"4",
"showed",
"4",
"antitypes,",
"all",
"with",
"a",
"high",
"value",
"for",
"E.",
"Finally,",
"all",
"4",
"antitypes",
"observed",
"in",
"REM",
"sleep",
"(AER/",
",",
",",
"and",
"---)",
"were",
"characterized",
"by",
"a",
"low",
"value",
"for",
"E,",
"again",
"indicating",
"a",
"low-frequency",
"EEG,",
"which",
"is",
"untypical",
"of",
"REM",
"sleep.",
"In",
"summary,",
"the",
"observed",
"antitypes",
"represent",
"those",
"patterns",
"of",
"physiologic",
"input",
"variables",
"that",
"are",
"very",
"unlikely",
"to",
"occur",
"in",
"these",
"states."
],
[
"The",
"present",
"analysis",
"began",
"with",
"3",
"continuous",
"physiologic",
"variables",
"(A,",
"E,",
"and",
"R),",
"which",
"were",
"then",
"split",
"into",
"dichotomous",
"entities",
"for",
"further",
"statistical",
"analysis",
"by",
"the",
"CFA",
"technique.",
"This",
"back",
"projection",
"of",
"continuous",
"variables",
"into",
"discrete",
"states",
"or",
"stages",
"touches",
"upon",
"a",
"crucial",
"question",
"of",
"sleep",
"research,",
"namely,",
"how",
"best",
"to",
"describe",
"the",
"sleep",
"process",
"as",
"such.",
"In",
"the",
"era",
"of",
"analog",
"signal",
"recording,",
"sleep",
"staging",
"was",
"the",
"single",
"most",
"reasonable",
"and",
"economic",
"procedure",
"for",
"analyzing",
"sleep",
"data.",
"1,",
"2",
"With",
"the",
"introduction",
"of",
"digital",
"data",
"recording",
"and",
"storage,",
"alternative",
"solutions",
"became",
"available.",
"Today",
"a",
"wealth",
"of",
"algorithms",
"is",
"available,",
"allowing",
"any",
"kind",
"of",
"signal",
"analysis",
"(from",
"microscopic",
"to",
"macroscopic)",
"of",
"sleep",
"data.",
"Sleep",
"staging",
"was",
"driven",
"by",
"the",
"concept",
"that",
"sleep",
"can",
"be",
"subdivided",
"into",
"different",
"states",
"(REM",
"and",
"NREM)",
"and",
"stages",
"within",
"NREM",
"sleep,",
"implying",
"specific",
"regulatory",
"mechanisms.",
"31",
"Many",
"recent",
"computerized",
"procedures",
"for",
"sleep",
"analysis",
"represent",
"hybrid",
"systems,",
"first",
"separating",
"the",
"sleep",
"process",
"into",
"NREM",
"and",
"REM",
"sleep",
"states,",
"then",
"analyzing",
"NREM",
"sleep",
"as",
"a",
"Continuum.",
"18",
"The",
"results",
"of",
"the",
"present",
"statistical",
"analysis",
"shed",
"light",
"on",
"the",
"following",
"3",
"aspects",
"of",
"sleep",
"structure:",
"(1)",
"Sleep",
"stages",
"are",
"constituted",
"by",
"discrete",
"substates",
"(types);",
"(2)",
"The",
"substates",
"or",
"types",
"overlap",
"between",
"Stages",
"wake,",
"1,",
"and",
"REM",
"and",
"between",
"NREM",
"Stages",
"2,",
"3,",
"and",
"4,",
"without",
"significant",
"overlap",
"between",
"these",
"2",
"clusters",
"of",
"states;",
"(3)",
"although",
"normal",
"sleepers",
"and",
"sleep",
"disorder",
"patients",
"displayed",
"basically",
"the",
"same",
"structure",
"of",
"substates,",
"there",
"appeared",
"some",
"specific",
"group",
"differences,",
"which",
"still",
"need",
"confirmation..",
"The",
"present",
"analysis",
"has",
"various",
"limitations",
"and",
"thus",
"can",
"only",
"constitute",
"a",
"first",
"step",
"in",
"the",
"direction",
"of",
"a",
"taxonomic",
"classification",
"of",
"sleep.",
"First,",
"the",
"3",
"input",
"variables",
"of",
"A,",
"E,",
"and",
"R",
"were",
"selected",
"from",
"a",
"pragmatic",
"point",
"of",
"view,",
"since",
"the",
"continuous",
"variables",
"were",
"computed",
"on",
"a",
"routine",
"basis",
"in",
"our",
"lab",
"and,",
"thus,",
"were",
"available",
"for",
"all",
"subjects.",
"Additionally,",
"because",
"A",
"and",
"E",
"are",
"both",
"EEGderived",
"parameters,",
"the",
"information",
"content",
"of",
"these",
"2",
"variables",
"may",
"overlap",
"to",
"a",
"certain",
"extent.",
"Other",
"continuous",
"variables",
"might",
"be",
"used",
"in",
"future",
"studies.",
"Second,",
"dichotomization",
"of",
"the",
"input",
"variables",
"at",
"the",
"individual",
"median",
"admittedly",
"coarsens",
"their",
"distribution.",
"Due",
"to",
"this",
"methodologic",
"restriction,",
"variability",
"within",
"each",
"variable",
"is",
"largely",
"reduced.",
"This",
"may",
"have",
"contributed",
"to",
"the",
"substantial",
"overlap",
"of",
"patterns",
"in",
"sleep",
"stages",
"2,",
"3,",
"and",
"4.",
"Trisecting",
"the",
"input",
"variables",
"as",
"an",
"alternative",
"procedure,",
"which",
"would",
"allow",
"a",
"finer",
"grading",
"of",
"the",
"input",
"variables,",
"has",
"the",
"disadvantage",
"of",
"resulting",
"in",
"27",
"different",
"patterns",
"for",
"only",
"3",
"variables.",
"In",
"this",
"case,",
"a",
"very",
"large",
"number",
"of",
"sleep",
"recordings",
"would",
"be",
"needed",
"for",
"statistical",
"testing..",
"The",
"taxonomic",
"analysis",
"of",
"multiple",
"physiologic",
"processes",
"in",
"sleep",
"uncovered",
"stable",
"pattern",
"configurations",
"beyond",
"the",
"level",
"of",
"sleep",
"stages.",
"Thus,",
"the",
"CFA",
"represents",
"an",
"analytic",
"procedure",
"that",
"allows",
"one",
"to",
"study",
"the",
"internal",
"structure",
"of",
"sleep",
"stages",
"and",
"transitions",
"between",
"stages."
],
[
"A",
"taxonomic",
"analysis",
"of",
"sleep",
"stages."
],
[
"Study",
"Objectives:",
"To",
"study",
"the",
"structure",
"of",
"human",
"sleep",
"at",
"the",
"level",
"of",
"sleep",
"stages.",
"We",
"applied",
"taxonomic",
"statistics",
"to",
"detect",
"significant",
"configurations",
"(types)",
"of",
"different",
"physiologic",
"variables",
"and",
"their",
"relationship",
"to",
"sleep",
"stages.",
"Design",
"and",
"Statistics:",
"Polygraphic",
"sleep",
"recordings",
"from",
"32",
"subjects",
"(normal",
"sleepers",
"as",
"well",
"as",
"patients",
"with",
"insomnia,",
"sleep",
"apnea,",
"or",
"narcolepsy;",
"n",
"=",
"8",
"per",
"group)",
"were",
"visually",
"scored",
"and",
"submitted",
"to",
"a",
"configural",
"frequency",
"analysis.",
"The",
"configural",
"frequency",
"analysis",
"was",
"computed",
"with",
"3",
"continuous",
"input",
"variables:",
"an",
"electroencephalogram",
"parameter,",
"which",
"represents",
"the",
"point",
"of",
"gravity",
"of",
"the",
"EEG",
"frequency",
"distribution;",
"the",
"alpha",
"slow-wave",
"index,",
"and",
"the",
"Rest",
"Index,",
"based",
"on",
"the",
"presence",
"or",
"absence",
"of",
"phasic",
"electromyographic",
"activity.",
"These",
"variables",
"were",
"dichotomized",
"for",
"further",
"analysis.",
"The",
"combination",
"of",
"2",
"levels",
"(+",
"or",
"-)",
"and",
"3",
"variables",
"resulted",
"in",
"2",
"3",
"patterns",
"(+++",
"to",
"-",
"-",
"-).",
"The",
"configural",
"frequency",
"analysis",
"is",
"a",
"nonparametric",
"X",
"2",
"-type",
"multivariate",
"statistic",
"that",
"identifies",
"significant",
"patterns",
"or",
"types.",
"Results:",
"Each",
"sleep",
"stage",
"contained",
"3",
"or",
"4",
"types.",
"For",
"non-rapid",
"eye",
"movement",
"sleep",
"stages",
"2,",
"3,",
"and",
"4,",
"types",
"overlapped,",
"whereas",
"there",
"was",
"no",
"overlap",
"of",
"types",
"between",
"stages",
"1",
"and",
"2.",
"Types",
"of",
"rapid",
"eye",
"movement",
"sleep",
"did",
"not",
"overlap",
"with",
"those",
"from",
"stages",
"2,",
"3,",
"and",
"4",
"but",
"did",
"overlap",
"with",
"wake",
"and",
"stage",
"1",
"types.",
"The",
"majority",
"of",
"observed",
"types",
"were",
"significant",
"in",
"all",
"4",
"groups",
"of",
"subjects.",
"Conclusions:",
"Sleep",
"stages",
"appear",
"to",
"be",
"less",
"homogenous",
"than",
"rule-based",
"sleep",
"scoring",
"would",
"suggest.",
"Types",
"were",
"either",
"restricted",
"to",
"one",
"stage",
"or",
"overlapped",
"with",
"neighboring",
"stages."
]
] | [
"classification"
] | [
"sleep wake cycle",
"electrodiagnosis",
"electrophysiology",
"electroencephalography"
] | [
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
]
] |
18980511 | [
"introduction",
"materials",
"preparation of supported lipid membranes",
"measurement of mol% cholesterol",
"afm imaging of lipid membranes",
"high-resolution sims analysis",
"determination of lipid composition within lipid phases",
"results",
"cholesterol-free phase-separated supported lipid membranes",
"n-dlpc/d 70 -dspc domains (see later)",
"phase-separated supported lipid membranes with 3-15 mol% cholesterol",
"supported lipid membranes containing 19 mol% cholesterol and greater",
"significance and implications",
"conclusion",
"title",
"abstract"
] | [
[
"Lateral",
"variations",
"in",
"component",
"distribution",
"within",
"the",
"plasma",
"membrane",
"are",
"required",
"to",
"coordinate",
"membrane-mediated",
"cellular",
"functions",
"[1]",
"[2]",
"[3]",
".",
"The",
"nonrandom",
"distributions",
"of",
"certain",
"proteins",
"within",
"the",
"plasma",
"membrane",
"are",
"well-established",
"[4]",
"[5]",
"[6]",
"[7]",
"[8]",
"[9]",
".",
"Lipids",
"and",
"cholesterol",
"are",
"also",
"believed",
"to",
"be",
"spatially",
"organized",
"in",
"biological",
"membranes,",
"but",
"whether",
"their",
"organization",
"is",
"driven",
"by",
"lipid-lipid",
"or",
"lipid-protein",
"interactions",
"is",
"not",
"clear",
"[1]",
"[2]",
"[3]",
".",
"In",
"one",
"model",
"of",
"plasma",
"membrane",
"organization,",
"differential",
"affinities",
"between",
"cholesterol",
"and",
"other",
"membrane",
"components",
"are",
"hypothesized",
"to",
"drive",
"the",
"formation",
"of",
"liquid-ordered,",
"cholesterol-and",
"sphingolipid-enriched",
"nanoscale",
"domains",
"(diameters",
"b300",
"nm)",
"that",
"are",
"referred",
"to",
"as",
"lipid",
"rafts",
"[1,",
"3,",
"10,",
"11]",
".",
"Thus,",
"characterizing",
"the",
"effects",
"of",
"cholesteroldependent",
"interactions",
"on",
"component",
"distribution",
"within",
"the",
"plasma",
"membrane",
"is",
"the",
"goal",
"of",
"much",
"research..",
"Insight",
"into",
"how",
"lipid-cholesterol",
"and",
"lipid-lipid",
"interactions",
"might",
"influence",
"lipid",
"organization",
"within",
"biological",
"membranes",
"has",
"been",
"acquired",
"by",
"studying",
"model",
"lipid",
"membranes",
"[12]",
".",
"In",
"the",
"absence",
"of",
"cholesterol,",
"membranes",
"composed",
"of",
"a",
"low",
"and",
"high",
"melting",
"temperature",
"lipid",
"component",
"homogeneously",
"mix",
"when",
"heated",
"above",
"the",
"melting",
"transition",
"temperature",
"(T",
"m",
")",
"of",
"both",
"lipid",
"species,",
"but",
"separate",
"into",
"disordered",
"fluid-phase",
"and",
"ordered",
"gel-phase",
"domains",
"when",
"cooled",
"below",
"the",
"T",
"m",
"of",
"the",
"high-melting",
"temperature",
"lipid",
"species",
"[13,",
"14]",
".",
"The",
"addition",
"of",
"cholesterol",
"to",
"the",
"membrane",
"affects",
"the",
"lipid",
"miscibility",
"and",
"domain",
"microstructure",
"observed",
"at",
"room",
"temperature",
"in",
"a",
"manner",
"that",
"depends",
"on",
"the",
"degree",
"of",
"saturation",
"in",
"the",
"low-melting",
"temperature",
"lipid",
"[15]",
"[16]",
"[17]",
"[18]",
".",
"At",
"low",
"cholesterol",
"concentrations,",
"membranes",
"composed",
"of",
"a",
"di-unsaturated",
"low",
"T",
"m",
"lipid,",
"such",
"as",
"1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine",
"(DOPC),",
"and",
"a",
"high",
"T",
"m",
"lipid",
"species",
"exhibit",
"macroscopic",
"fluid-and",
"gel-phase",
"domains",
"[14,",
"15]",
".",
"At",
"higher",
"cholesterol",
"concentrations",
"(mole",
"fraction",
"N~0.16),",
"the",
"gel-phase",
"is",
"replaced",
"by",
"macroscopic",
"liquidordered",
"domains",
"that",
"coexist",
"with",
"the",
"disordered",
"fluid-phase",
"[14,",
"[17]",
"[18]",
"[19]",
"[20]",
"[21]",
".",
"Above",
"a",
"threshold",
"cholesterol",
"concentration",
"(mole",
"fraction",
"Ñ",
"0.4),",
"phase",
"separation",
"ceases",
"and",
"homogeneous",
"lipid",
"mixing",
"occurs",
"[14,",
"[17]",
"[18]",
"[19]",
"[20]",
"[21]",
".",
"In",
"contrast,",
"macroscopic",
"liquid-ordered",
"domains",
"are",
"usually",
"not",
"detected",
"in",
"cholesterol-containing",
"ternary",
"membranes",
"in",
"which",
"the",
"lipid",
"species",
"with",
"the",
"low",
"T",
"m",
"is",
"saturated,",
"such",
"as",
"1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine",
"(DLPC)",
"[14,",
"15,",
"17,",
"18,",
"[22]",
"[23]",
"[24]",
"[25]",
".",
"The",
"gel-phase",
"domains",
"that",
"coexist",
"with",
"the",
"disordered",
"fluid-phase",
"undergo",
"a",
"reduction",
"in",
"size",
"without",
"the",
"formation",
"of",
"macroscopic,",
"liquid-ordered",
"domains",
"as",
"the",
"cholesterol",
"concentration",
"increases",
"[15,",
"22,",
"23]",
".",
"For",
"example,",
"Fig.",
"1",
"shows",
"the",
"ternary",
"phase",
"diagram",
"determined",
"by",
"Zhao",
"et",
"al.",
"for",
"giant",
"unilamellar",
"vesicles",
"composed",
"of",
"DLPC/1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine",
"(DSPC)/cholesterol",
"at",
"room",
"temperature",
"[22]",
".",
"At",
"a",
"threshold",
"cholesterol",
"concentration",
"(0.15-0.2",
"mole",
"fraction),",
"phase",
"separation",
"could",
"not",
"be",
"visualized",
"in",
"giant",
"unilamellar",
"vesicles",
"(GUVs)",
"using",
"conventional",
"fluorescence",
"microscopy,",
"but",
"fluorescence",
"resonance",
"energy",
"transfer",
"(FRET)",
"measurements",
"indicate",
"that",
"the",
"membrane",
"is",
"not",
"homogeneously",
"mixed",
"[18,",
"22]",
".",
"This",
"FRET",
"behavior",
"is",
"postulated",
"to",
"be",
"due",
"to",
"the",
"presence",
"of",
"nanoscopic",
"liquid-ordered",
"domains",
"in",
"the",
"membrane,",
"even",
"though",
"tiny",
"gel-phase",
"domains",
"and",
"distinct",
"lipid",
"clusters",
"transiently",
"produced",
"by",
"non-ideal",
"mixing",
"may",
"also",
"be",
"consistent",
"with",
"these",
"results",
"[18,",
"20,",
"22,",
"25,",
"26]",
"..",
"Although",
"saturated,",
"low",
"T",
"m",
"lipids",
"are",
"rarely",
"found",
"in",
"cellular",
"membranes,",
"identification",
"of",
"how",
"this",
"change",
"in",
"lipid",
"structure",
"alters",
"membrane",
"phase",
"behavior",
"provides",
"a",
"better",
"understanding",
"of",
"the",
"physiological",
"significance",
"of",
"fatty",
"acid",
"chain",
"unsaturation",
"in",
"biological",
"membranes.",
"Moreover,",
"demonstration",
"of",
"the",
"existence",
"of",
"nanoscopic",
"liquid-ordered",
"domains",
"in",
"model",
"lipid",
"membranes",
"would",
"indicate",
"that",
"lipid-lipid",
"and",
"lipid-cholesterol",
"interactions",
"are",
"sufficient",
"to",
"produce",
"liquid-ordered",
"domains",
"with",
"dimensions",
"similar",
"to",
"those",
"that",
"may",
"exist",
"in",
"biological",
"membranes.",
"Despite",
"the",
"significance",
"of",
"such",
"a",
"finding,",
"whether",
"the",
"nanoscale",
"heterogeneity",
"detected",
"in",
"membranes",
"composed",
"of",
"DLPC,",
"DSPC,",
"and",
"a",
"threshold",
"cholesterol",
"concentration",
"is",
"due",
"to",
"the",
"presence",
"of",
"liquid-ordered",
"domains,",
"gelphase",
"domains,",
"or",
"non-ideally",
"mixed",
"transient",
"lipid",
"assemblages",
"has",
"not",
"been",
"definitively",
"established..",
"A",
"key",
"difference",
"between",
"phase-separated",
"domains",
"and",
"nonideally",
"mixed",
"transient",
"lipid",
"clusters",
"is",
"that",
"the",
"composition",
"and",
"microstructure",
"would",
"be",
"constant",
"between",
"nanoscopic",
"phaseseparated",
"domains",
"of",
"the",
"same",
"phase,",
"as",
"opposed",
"to",
"varying",
"from",
"one",
"structure",
"to",
"another",
"in",
"non-ideally",
"mixed",
"lipid",
"assemblages",
"[18]",
".",
"Liquid-ordered",
"and",
"gel-phase",
"domains",
"can",
"be",
"discriminated",
"by",
"their",
"microstructures,",
"as",
"the",
"edges",
"of",
"liquid-ordered",
"domains",
"are",
"smooth",
"and",
"rounded,",
"whereas",
"the",
"perimeters",
"of",
"gel-phase",
"domains",
"are",
"angular",
"and",
"jagged",
"[18,",
"22,",
"23,",
"27]",
".",
"The",
"membrane",
"thickness",
"may",
"also",
"differ",
"between",
"gel-phase",
"and",
"liquid-ordered",
"domains",
"[28]",
".",
"Therefore,",
"information",
"on",
"the",
"composition",
"and",
"microstructure",
"of",
"individual",
"domains",
"is",
"required",
"to",
"identify",
"whether",
"the",
"lipid",
"structures",
"detected",
"at",
"the",
"threshold",
"cholesterol",
"concentration",
"are",
"non-ideally",
"mixed",
"lipid",
"assemblages",
"or",
"phase-separated",
"domains",
"in",
"the",
"gel-or",
"liquid-ordered",
"phase.",
"The",
"microstructure,",
"and",
"therefore",
"phase,",
"of",
"submicron-sized",
"lipid",
"assemblages",
"within",
"supported",
"lipid",
"bilayers",
"can",
"be",
"characterized",
"with",
"atomic",
"force",
"microscopy",
"(AFM)",
"even",
"when",
"the",
"domain",
"sizes",
"are",
"below",
"the",
"lateral",
"resolution",
"of",
"conventional",
"fluorescence",
"microscopy",
"[15,",
"16,",
"23,",
"25,",
"29,",
"30]",
"..",
"Assessing",
"the",
"lipid",
"composition",
"of",
"individual",
"lipid",
"domains",
"is",
"more",
"challenging",
"because",
"few",
"analytical",
"techniques",
"yield",
"spatially",
"resolved",
"and",
"chemically",
"specific",
"information.",
"Secondary",
"ion",
"mass",
"spectrometry",
"(SIMS)",
"is",
"one",
"of",
"the",
"few",
"approaches",
"that",
"enables",
"imaging",
"specific",
"lipid",
"species",
"within",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"with",
"both",
"chemical",
"and",
"spatial",
"specificity",
"[30]",
"[31]",
"[32]",
"[33]",
"[34]",
"[35]",
"[36]",
"[37]",
"[38]",
"[39]",
"[40]",
".",
"Time-of-flight",
"SIMS",
"(TOF-SIMS)",
"is",
"a",
"molecular",
"imaging",
"approach",
"that",
"has",
"the",
"advantage",
"of",
"not",
"requiring",
"labels",
"for",
"lipid",
"identification,",
"but",
"the",
"lateral",
"resolution",
"and",
"sensitivity",
"is",
"seldom",
"sufficient",
"to",
"characterize",
"submicron-sized",
"lipid",
"domains",
"[41]",
".",
"Recently,",
"a",
"combination",
"of",
"high-resolution",
"SIMS",
"performed",
"with",
"a",
"Cameca",
"NanoSIMS",
"50",
"and",
"lipid-specific",
"isotope",
"labeling",
"has",
"permitted",
"the",
"distributions",
"of",
"two",
"isotopically",
"labeled",
"lipid",
"species",
"in",
"phase-separated",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"to",
"be",
"imaged",
"with",
"100-nm-lateral",
"resolution",
"and",
"quantified",
"[31]",
",",
"rendering",
"this",
"a",
"promising",
"approach",
"to",
"analyze",
"the",
"lipid",
"composition",
"within",
"nanoscopic",
"lipid",
"domains",
"(diameters",
"b300",
"nm).",
"The",
"Cameca",
"NanoSIMS",
"50",
"is",
"a",
"magnetic",
"sector",
"mass",
"spectrometer",
"that",
"can",
"image",
"differences",
"in",
"elemental",
"and",
"isotopic",
"composition",
"[42]",
".",
"To",
"identify",
"and",
"image",
"different",
"lipids",
"using",
"a",
"NanoSIMS,",
"each",
"lipid",
"species",
"must",
"contain",
"a",
"distinct",
"stable",
"isotope",
"so",
"that",
"the",
"secondary",
"ions",
"generated",
"during",
"analysis",
"can",
"be",
"linked",
"to",
"the",
"parent",
"lipid",
"species",
"[42]",
"..",
"Here",
"we",
"use",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"to",
"characterize",
"the",
"effects",
"of",
"cholesterol",
"addition",
"on",
"the",
"microstructure",
"and",
"composition",
"of",
"lipid",
"domains",
"in",
"ternary",
"membranes",
"composed",
"of",
"the",
"saturated,",
"low",
"T",
"m",
"lipid",
"15",
"N-1,2-dilauryl-sn-glycero-3-phosphocholine",
"(",
"15",
"N-DLPC),",
"and",
"the",
"high",
"T",
"m",
"lipid",
"1,2-distearoyl-D",
"70",
"-sn-glycero-3-phosphocholine",
"(D",
"70",
"-DSPC).",
"We",
"investigated",
"the",
"cholesterol",
"concentrations",
"between",
"0",
"and",
"19",
"mol%.",
"Over",
"this",
"range",
"of",
"cholesterol",
"concentrations,",
"GUVs",
"composed",
"of",
"DLPC/DSPC",
"exhibit",
"macroscopic",
"phase-separated",
"domains",
"and",
"nanoscale",
"heterogeneous",
"mixing",
"that",
"is",
"postulated",
"to",
"signify",
"the",
"presence",
"of",
"tiny",
"liquid-ordered",
"domains",
"[18,",
"22]",
".",
"Supported",
"lipid",
"membranes",
"are",
"the",
"subject",
"of",
"these",
"studies",
"to",
"permit",
"analyses",
"with",
"NanoSIMS",
"and",
"AFM.",
"Although",
"discrepancies",
"in",
"the",
"phase",
"behavior",
"of",
"supported",
"membranes",
"and",
"GUVs",
"have",
"been",
"reported",
"[25]",
",",
"we",
"avoided",
"the",
"non-equilibrium",
"effects",
"potentially",
"induced",
"by",
"the",
"solid",
"support",
"by",
"using",
"slow-cooled",
"vesicle",
"fusion",
"to",
"prepare",
"the",
"supported",
"membranes,",
"as",
"demonstrated",
"by",
"Longo",
"and",
"coworkers",
"[23]",
".",
"Analysis",
"of",
"the",
"same",
"regions",
"of",
"the",
"membrane",
"with",
"both",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"enabled",
"correlation",
"of",
"domain",
"microstructure",
"with",
"lipid",
"composition,",
"and",
"allowed",
"us",
"to",
"assess",
"whether",
"the",
"nanoscopic",
"lipid",
"assemblages",
"that",
"occur",
"near",
"the",
"threshold",
"cholesterol",
"concentration",
"are",
"non-ideally",
"mixed",
"clusters,",
"or",
"phase-separated",
"lipid",
"domains",
"in",
"either",
"a",
"gel",
"or",
"liquid-ordered",
"state.",
"As",
"shown",
"later,",
"the",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"data",
"indicate",
"that",
"the",
"nanoscopic",
"lipid",
"assemblies",
"within",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"are",
"gel-phase",
"domains."
],
[
"The",
"chrome-patterned,",
"oxidized",
"silicon",
"substrates",
"(10-nm-thick",
"oxide",
"layer)",
"were",
"prepared",
"as",
"previously",
"described",
"[31]",
"using",
"silicon",
"wafers",
"that",
"were",
"a",
"generous",
"gift",
"from",
"Prof.",
"Steven",
"G.",
"Boxer",
"was",
"synthesized",
"as",
"reported",
"[31]",
".",
"To",
"minimize",
"possible",
"oxidation,",
"cholesterol",
"was",
"freshly",
"synthesized",
"from",
"i-cholesteryl",
"methyl",
"ether",
"(Sigma)",
"as",
"reported",
"[43]",
".",
"The",
"cholesterol",
"and",
"phospholipid",
"concentrations",
"in",
"the",
"vesicle",
"solutions",
"were",
"measured",
"with",
"the",
"Amplex",
"®",
"Red",
"Cholesterol",
"Assay",
"Kit",
"and",
"the",
"Amplex",
"®",
"Red",
"Phospholiase",
"D",
"Assay",
"Kit,",
"respectively,",
"from",
"Molecular",
"Probes",
"(Eugene,",
"OR).",
"Millipore",
"(18",
"mΩ)",
"water",
"was",
"used",
"in",
"all",
"experiments."
],
[
"Small",
"unilamellar",
"vesicles",
"were",
"created",
"from",
"an",
"equal",
"molar",
"ratio",
"of",
"15",
"A",
"small",
"amount",
"(1",
"mol%)",
"of",
"the",
"fluorescent",
"lipid,",
"NBD-PC,",
"was",
"added",
"to",
"the",
"mixture",
"to",
"allow",
"the",
"evaluation",
"of",
"membrane",
"integrity",
"and",
"the",
"presence",
"of",
"phase",
"separation",
"using",
"fluorescence",
"microscopy.",
"These",
"components",
"were",
"dissolved",
"in",
"chloroform,",
"dried",
"under",
"nitrogen,",
"and",
"placed",
"under",
"a",
"vacuum",
"to",
"remove",
"residual",
"chloroform.",
"The",
"lipid",
"film",
"was",
"resuspended",
"in",
"65°C",
"water",
"to",
"a",
"final",
"lipid",
"concentration",
"of",
"0.5",
"mg/mL.",
"The",
"lipid",
"solution",
"was",
"heated",
"in",
"a",
"65°C",
"water",
"bath",
"for",
"15",
"min,",
"vortexed,",
"transferred",
"to",
"a",
"plastic",
"tube,",
"and",
"sonicated",
"using",
"a",
"tip",
"sonicator",
"(Branson",
"Tip",
"Sonifier",
"Model",
"250,",
"Branson",
"Ultrasonics,",
"Danbury",
"CT)",
"for",
"30",
"s",
"intervals",
"until",
"it",
"became",
"transparent.",
"The",
"vesicle",
"solution",
"was",
"reheated",
"to",
"65°C",
"in",
"a",
"water",
"bath,",
"and",
"2.5",
"mL",
"of",
"65°C",
"vesicle",
"solution",
"was",
"added",
"to",
"a",
"60-mmdiameter",
"×",
"15-mm-tall",
"polystyrene",
"culture",
"dish",
"containing",
"multiple",
"chrome-patterned,",
"oxidized",
"silicon",
"substrates",
"submerged",
"in",
"2.5",
"mL",
"of",
"65°C",
"water.",
"The",
"culture",
"dish",
"was",
"covered,",
"incubated",
"at",
"room",
"temperature",
"for",
"40",
"min",
"to",
"allow",
"for",
"bilayer",
"formation,",
"and",
"then",
"was",
"transferred",
"into",
"a",
"65°C",
"water",
"bath.",
"The",
"substrates",
"were",
"gently",
"shaken",
"under",
"water",
"to",
"dislodge",
"vesicles",
"adhered",
"to",
"the",
"bilayer's",
"surface,",
"and",
"were",
"transferred",
"to",
"a",
"fresh",
"65°C",
"water",
"bath.",
"The",
"water",
"bath",
"containing",
"the",
"substrates",
"was",
"placed",
"in",
"a",
"programmable",
"oven",
"(ECHOterm™",
"IN35",
"Programmable",
"Chilling/Heating",
"Incubator,",
"Torrey",
"Pines",
"Scientific,",
"San",
"Diego,",
"CA),",
"maintained",
"at",
"70°C",
"for",
"1",
"h,",
"and",
"then",
"was",
"slowly",
"cooled",
"to",
"room",
"temperature",
"at",
"a",
"rate",
"of",
"5°C/h",
"to",
"induce",
"phase",
"separation.",
"To",
"prepare",
"the",
"lipid",
"membranes",
"for",
"SIMS",
"analysis,",
"the",
"samples",
"were",
"flash-frozen",
"in",
"liquid",
"ethane",
"and",
"freeze-dried",
"as",
"previously",
"described",
"[31]",
"[32]",
"[33]",
".",
"To",
"evaluate",
"sample",
"quality,",
"fluorescence",
"imaging",
"was",
"performed",
"on",
"a",
"Leica",
"DM6000",
"B",
"upright",
"fluorescence",
"microscope",
"equipped",
"with",
"a",
"fluorescence",
"filter",
"cube",
"(GFP,",
"Leica)",
"that",
"matches",
"the",
"excitation",
"and",
"emission",
"spectra",
"for",
"NBD-PC."
],
[
"The",
"moles",
"of",
"cholesterol",
"and",
"phosphatidylcholine",
"(PC)",
"in",
"each",
"vesicle",
"solution",
"were",
"measured",
"using",
"the",
"Amplex",
"®",
"Red",
"Cholesterol",
"Assay",
"Kit",
"and",
"the",
"Amplex",
"®",
"Red",
"Phospholiase",
"D",
"Assay",
"Kit,",
"respectively.",
"The",
"assays",
"were",
"performed",
"in",
"96-well",
"plates",
"purchased",
"from",
"Costar",
"®",
"(Corning,",
"NY),",
"and",
"the",
"fluorescence",
"intensity",
"was",
"read",
"using",
"a",
"Synergy",
"HT",
"Multi-Mode",
"Microplate",
"Reader",
"Model",
"SIAFRT",
"(Biotek",
"®",
"Instruments,",
"Inc.,",
"Winooski,",
"VT).",
"Cholesterol",
"and",
"PC",
"standards",
"were",
"used",
"to",
"create",
"the",
"calibration",
"curves.",
"Eight",
"replicates",
"were",
"performed",
"on",
"each",
"vesicle",
"and",
"standard",
"solution.",
"The",
"μmole",
"of",
"cholesterol",
"and",
"PC",
"measured",
"in",
"each",
"small",
"unilamellar",
"vesicle",
"solution",
"was",
"used",
"to",
"calculate",
"the",
"mol%",
"of",
"cholesterol.",
"The",
"mol%",
"cholesterol",
"in",
"the",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"is",
"assumed",
"to",
"be",
"the",
"same",
"as",
"the",
"cholesterol",
"content",
"in",
"the",
"vesicle",
"solution",
"used",
"for",
"bilayer",
"formation."
],
[
"AFM",
"analysis",
"was",
"performed",
"in",
"ambient",
"air",
"and",
"temperature",
"using",
"an",
"Asylum",
"MFP-3D™",
"Stand",
"Alone",
"AFM.",
"AFM",
"images",
"were",
"acquired",
"of",
"the",
"phase-separated",
"membranes",
"within",
"specific",
"grid",
"boxes,",
"which",
"were",
"relocated",
"and",
"analyzed",
"with",
"the",
"NanoSIMS.",
"Measurements",
"were",
"taken",
"with",
"standard",
"tapping",
"300",
"kHz",
"AFM",
"probes",
"(Tap300Al-G,",
"Budget",
"Sensors,",
"Bulgaria)",
"in",
"AC",
"(tapping)",
"mode",
"operated",
"in",
"the",
"repulsive",
"tip-sample",
"interaction",
"regime",
"to",
"preserve",
"tip",
"lifetime.",
"Images",
"were",
"flattened",
"to",
"the",
"first",
"order.",
"The",
"line",
"scans",
"were",
"averaged",
"over",
"three",
"pixels",
"perpendicular",
"to",
"the",
"line-section",
"path",
"to",
"minimize",
"random",
"variations",
"in",
"height",
"due",
"to",
"noise.",
"The",
"line",
"scans",
"made",
"on",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"were",
"not",
"averaged",
"because",
"the",
"domains",
"were",
"often",
"smaller",
"than",
"the",
"3-pixel",
"averaging",
"width.",
"For",
"each",
"cholesterol",
"concentration",
"investigated,",
"the",
"height",
"difference",
"between",
"the",
"gel-and",
"fluid-phase",
"regions",
"was",
"measured",
"at",
"ten",
"different",
"domain",
"interfaces."
],
[
"SIMS",
"was",
"performed",
"on",
"a",
"Cameca",
"NanoSIMS",
"50",
"instrument",
"(Cameca,",
"France)",
"at",
"Lawrence",
"Livermore",
"National",
"Laboratory",
"(Livermore,",
"CA).",
"Measurements",
"were",
"made",
"with",
"a~0.8",
"pA,",
"16",
"keV",
"Cs",
"+",
"primary",
"ion",
"beam",
"focused",
"onto",
"a~100",
"nm-diameter",
"spot",
"with",
"an",
"analysis",
"area",
"of",
"25",
"μm",
"×",
"25",
"μm.",
"A",
"beam",
"diameter",
"of",
"102",
"nm",
"was",
"determined",
"using",
"the",
"reported",
"knife-edge",
"method",
"[31]",
".",
"Measurements",
"consisted",
"of",
"six",
"replicate",
"scans",
"of",
"512",
"×",
"512",
"pixels",
"with",
"a",
"dwell",
"time",
"of",
"0.3",
"ms/pixel,",
"and",
"corresponded",
"to",
"a",
"primary",
"ion",
"dose",
"of",
"3.8",
"×",
"10",
"14",
"ions/cm",
"2",
".",
"The",
"analysis",
"conditions",
"used",
"in",
"this",
"work",
"were",
"chosen",
"to",
"provide",
"sufficient",
"ion",
"counts",
"to",
"characterize",
"the",
"samples",
"while",
"minimizing",
"analysis",
"time.",
"Based",
"on",
"our",
"analysis",
"conditions,",
"a",
"total",
"sputter",
"time",
"of",
"472",
"s,",
"and",
"the",
"sputtering",
"rate",
"of",
"2.5",
"nm",
"μm",
"2",
"/pA",
"s",
"determined",
"on",
"other",
"biological",
"samples",
"[45]",
",",
"we",
"estimate",
"that",
"the",
"sputtering",
"depth",
"was~1.5",
"nm",
"for",
"these",
"measurements.",
"Based",
"on",
"the",
"thickness",
"of",
"the",
"bilayer,",
"the",
"analysis",
"time",
"could",
"have",
"been~3",
"times",
"longer,",
"though",
"the",
"secondary",
"ion",
"intensities",
"obtained",
"in",
"each",
"additional",
"replicate",
"scan",
"would",
"be",
"lower",
"than",
"the",
"previous",
"scan.",
"The",
"pixel",
"size",
"in",
"the",
"NanoSIMS",
"ion",
"images",
"was",
"49",
"nm×",
"49",
"nm,",
"which",
"is",
"smaller",
"than",
"the",
"beam",
"diameter.",
"The",
"secondary",
"ion",
"signals",
",",
"and",
"the",
"secondary",
"electron",
"signal",
"were",
"collected",
"simultaneously",
"using",
"multi-collection",
"mode.",
"A",
"mass",
"resolving",
"power",
"of~7500",
"was",
"used",
"to",
"separate",
"isobaric",
"interferences",
"from",
"the",
"isotopes",
"of",
"interest,",
"e.g.,",
")",
"were",
"smoothed",
"over",
"3",
"×",
"3",
"pixels",
"(147",
"nm×",
"147",
"nm).",
"Then",
"the",
"lipid-specific",
"ion",
"signal",
"was",
"normalized",
"by",
"dividing",
"the",
"intensity",
"for",
"each",
"ion",
"by",
"the",
"12",
"C",
"−",
"intensity",
"measured",
"at",
"the",
"same",
"pixel",
"in",
"order",
"to",
"minimize",
"random,",
"concentration-independent",
"changes",
"in",
"the",
"signal",
"intensity.",
"Regions",
"of",
"interest",
"(ROIs)",
"on",
"the",
"calibration",
"set",
"of",
"homogeneous",
"lipid",
"membranes",
"were",
"defined",
"on",
"areas",
"of",
"the",
"substrate",
"that",
"were",
"covered",
"by",
"the",
"membrane,",
"and",
"excluded",
"areas",
"where",
"the",
"chrome",
"grid",
"or",
"obvious",
"defects",
"were",
"visible",
"in",
"the",
"secondary",
"electron",
"image",
"that",
"was",
"collected",
"in",
"parallel",
"to",
"the",
"secondary",
"ion",
"images.",
"ROIs",
"on",
"the",
"phaseseparated",
"membranes",
"that",
"consisted",
"of",
"only",
"gel-phase",
"or",
"fluid-phase",
"regions",
"were",
"defined",
"based",
"on",
"the",
"correlated",
"AFM",
"images."
],
[
"A",
"calibration",
"curve",
"correlating",
"the",
"normalized",
"N-DLPC",
"in",
"the",
"membrane",
"was",
"made",
"as",
"previously",
"reported",
"[31,",
"32]",
".",
"Briefly,",
"NanoSIMS",
"analysis",
"was",
"performed",
"on",
"homogeneous",
"lipid",
"bilayers",
"that",
"systematically",
"varied",
"in",
"mol%",
"15",
"N-DLPC",
"to",
"unlabeled",
"DLPC.",
"These",
"samples",
"were",
"used",
"instead",
"of",
"15",
"N-DLPC/cholesterol",
"membranes",
"in",
"order",
"to",
"obtain",
"a",
"calibration",
"curve",
"that",
"was",
"accurate",
"at",
"both",
"high",
"and",
"low",
"15",
"N-DLPC",
"concentrations.",
"The",
"same",
"analytical",
"conditions",
"were",
"used",
"for",
"the",
"calibration",
"and",
"phaseseparated",
"samples.",
"We",
"assessed",
"the",
"validity",
"of",
"these",
"calibration",
"samples",
"by",
"calculating",
"the",
"relative",
"sensitivity",
"factors",
"(RSF)",
"[36]",
"N-DLPC",
"in",
"the",
"gel-phase",
"and",
"standard",
"deviation",
"were",
"calculated.",
"Because",
"NBD-PC",
"is",
"excluded",
"from",
"the",
"gel-phase",
"[31,",
"46]",
",",
"the",
"average",
"amount",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"in",
"the",
"gelphase",
"regions",
"of",
"the",
"cholesterol-free",
"membrane",
"was",
"determined",
"by",
"subtracting",
"the",
"mol%",
"15",
"N-DLPC",
"measured",
"at",
"membrane",
"locations",
"identified",
"as",
"gel-phase",
"by",
"AFM",
"from",
"100",
"mol%."
],
[
"The",
"cooling",
"rate",
"employed",
"for",
"bilayer",
"formation",
"determines",
"whether",
"the",
"phase",
"separation",
"approaches",
"equilibrium.",
"All",
"of",
"the",
"samples",
"we",
"studied",
"were",
"cooled",
"to",
"room",
"temperature",
"at",
"the",
"same",
"rate",
"to",
"ensure",
"that",
"any",
"variations",
"in",
"domain",
"morphology",
"were",
"not",
"due",
"to",
"differences",
"in",
"their",
"thermal",
"history.",
"For",
"compatibility",
"with",
"NanoSIMS",
"analysis,",
"the",
"room",
"temperature",
"15",
"N-DLPC/D",
"70",
"-DSPC/",
"cholesterol",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"were",
"flash-frozen",
"and",
"freeze-dried",
"to",
"remove",
"the",
"water",
"without",
"perturbing",
"lipid",
"organization",
"[31]",
".",
"Previous",
"studies",
"demonstrated",
"that",
"flash-freezing",
"and",
"freeze-drying",
"do",
"not",
"induce",
"further",
"phase",
"separation",
"or",
"other",
"changes",
"in",
"membrane",
"organization",
"[31]",
",",
"and",
"the",
"preserved",
"membrane",
"structure",
"reflects",
"that",
"present",
"at",
"room",
"temperature",
"prior",
"to",
"membrane",
"preservation.",
"The",
"lipids",
"in",
"the",
"membrane",
"do",
"not",
"exhibit",
"lateral",
"mobility",
"after",
"freeze-drying,",
"and",
"the",
"membrane",
"organization",
"does",
"not",
"change",
"in",
"the",
"time",
"between",
"AFM",
"imaging",
"and",
"NanoSIMS",
"analysis",
"(2-6",
"weeks).",
"Note",
"that",
"the",
"use",
"of",
"isotopically",
"labeled",
"lipids",
"is",
"not",
"expected",
"to",
"alter",
"membrane",
"phase",
"behavior",
"because",
"D",
"70",
"-DSPC",
"has",
"nearly",
"the",
"same",
"T",
"m",
"as",
"natural",
"abundance",
"DSPC",
"(50.5°C",
"and",
"55.0°C,",
"respectively,",
"[44]",
"),",
"and",
"the",
"single",
"nitrogen-15",
"isotope",
"in",
"15",
"N-DLPC",
"should",
"not",
"affect",
"its",
"T",
"m",
"."
],
[
"To",
"correlate",
"domain",
"structure",
"with",
"lipid",
"composition,",
"we",
"imaged",
"the",
"same",
"locations",
"within",
"the",
"phase-separated",
"supported",
"lipid",
"membrane",
"using",
"both",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS.",
"Similar",
"to",
"previous",
"AFM",
"studies",
"of",
"phase-separated",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"[29]",
"[30]",
"[31]",
"46",
",47],",
"we",
"observed",
"circular",
"gel-phase",
"domains",
"with",
"a",
"bimodal",
"size",
"distribution",
"in",
"the",
"cholesterol-free",
"membrane",
"(Fig.",
"3",
"and",
"supplemental",
"images).",
"Small",
"gel-phase",
"domains",
"with",
"diameters",
"below",
"200",
"nm",
"were",
"primarily",
"located",
"near",
"the",
"perimeters",
"of",
"the",
"large",
"gelphase",
"structures",
"that",
"were",
"several",
"microns",
"in",
"diameter",
"(",
"Fig.",
"3a",
"and",
"b)",
".",
"Nanoscopic",
"fluid-phase",
"subdomains",
"were",
"also",
"trapped",
"inside",
"of",
"the",
"micron-sized",
"gel-phase",
"domains.",
"We",
"measured",
"a",
"height",
"difference",
"of",
"1.3",
"nm",
"at",
"the",
"interface",
"between",
"the",
"gel-and",
"fluid-phase",
"domains",
"(Fig.",
"3b,",
"inset",
").",
"This",
"height",
"difference",
"is",
"smaller",
"than",
"that",
"previously",
"reported",
"between",
"gel-and",
"fluid-phase",
"domains",
"(1.8",
"nm)",
"and",
"is",
"closer",
"to",
"the",
"height",
"difference",
"between",
"an",
"asymmetric",
"domain,",
"with",
"one",
"gel-phase",
"and",
"one",
"fluid-phase",
"leaflet,",
"and",
"a",
"symmetric",
"fluidphase",
"domain",
"[31,",
"46]",
".",
"However,",
"NanoSIMS",
"analysis",
"of",
"these",
"domains",
"(",
"Fig.",
"3c",
"and",
"d)",
"indicated",
"they",
"contain",
"too",
"little",
"15",
"N-DLPC",
"to",
"be",
"asymmetric",
"15"
],
[
".",
"The",
"smaller",
"height",
"difference",
"we",
"measured",
"between",
"the",
"gel-and",
"fluid-phases",
"is",
"likely",
"due",
"to",
"our",
"use",
"of",
"a",
"repulsive",
"tip-sample",
"interaction",
"for",
"AFM",
"imaging",
"[48]",
".",
"AFM",
"imaging",
"of",
"similar",
"samples",
"performed",
"with",
"a",
"repulsive",
"tip-sample",
"interaction",
"yielded",
"a",
"height",
"difference",
"of",
"1.3",
"nm",
"at",
"the",
"gel/fluid",
"interface,",
"but",
"with",
"a",
"tip-sample",
"interaction",
"that",
"fluctuated",
"between",
"repulsive",
"and",
"attractive,",
"we",
"measured",
"a",
"height",
"difference",
"of",
"1.6",
"nm",
"at",
"the",
"same",
"location",
"(not",
"shown),",
"which",
"is",
"close",
"to",
"the",
"1.8",
"nm",
"height",
"difference",
"that",
"was",
"previously",
"reported",
"[31,",
"46]",
".",
"NanoSIMS",
"analysis",
"was",
"performed",
"at",
"the",
"same",
"membrane",
"locations",
"that",
"were",
"imaged",
"with",
"AFM.",
"The",
"normalized",
"12",
"N-DLPC,",
"respectively.",
"The",
"absence",
"of",
"lipid-specific",
"ions",
"at",
"the",
"some",
"pixels",
"is",
"due",
"to",
"the",
"low",
"intensity",
"of",
"the",
"minor",
"isotopes,",
"as",
"the",
"AFM",
"image",
"of",
"the",
"freeze-dried",
"membrane",
"does",
"not",
"show",
"damage",
"at",
"these",
"sites",
"(",
"Fig.",
"3a",
"and",
"b)",
".",
"Similar",
"to",
"previous",
"reports,",
"the",
"area",
"occupied",
"by",
"D",
"70",
"-DSPC",
"within",
"the",
"membrane",
"appeared",
"to",
"be",
"slightly",
"lower",
"than",
"that",
"expected",
"based",
"on",
"the",
"mol%",
"D",
"70",
"-DSPC",
"in",
"the",
"vesicles",
"used",
"for",
"membrane",
"preparation",
"[31]",
".",
"This",
"difference",
"in",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC",
"content",
"within",
"the",
"supported",
"membranes",
"and",
"the",
"vesicles",
"used",
"for",
"membrane",
"formation",
"is",
"likely",
"due",
"to",
"the",
"selective",
"adsorption",
"of",
"these",
"different",
"lipid",
"species",
"onto",
"the",
"substrate,",
"or",
"from",
"a",
"lipid",
"exchange",
"process",
"[23,",
"49]",
"..",
"Using",
"the",
"NanoSIMS",
"calibration",
"curves",
"described",
"earlier,",
"we",
"determined",
"that",
"the",
"15",
"N-DLPC",
"concentration",
"was~97",
"mol%",
"in",
"the",
"fluid-phase",
"domains,",
"and~6",
"mol%",
"in",
"the",
"gel-phase",
"domains.",
"Because",
"NBD-PC",
"is",
"excluded",
"from",
"the",
"gel-phase",
"[31,",
"46]",
",",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC",
"concentration",
"in",
"the",
"gel-phase",
"regions",
"of",
"the",
"cholesterol-free",
"membrane",
"is~94",
"mol%.",
"These",
"results",
"are",
"consistent",
"with",
"previous",
"NanoSIMS",
"studies",
"of",
"DLPC/DSPC",
"membranes,",
"and",
"with",
"phase",
"diagram",
"predictions",
"that",
"the",
"gel-phase",
"contains",
"≤10",
"mol%",
"DLPC",
"and",
"the",
"fluidphase",
"contains",
"≤10",
"mol%",
"DSPC",
"[31,",
"50]",
".",
"The",
"one",
"exception",
"was",
"at",
"the",
"edges",
"of",
"the",
"large",
"gel-phase",
"domains,",
"where",
"the",
"data",
"occasionally",
"suggest",
"the",
"fractions",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"and",
"15",
"N-DLPC",
"within",
"the",
"same",
"pixel",
"(yellow",
"areas,",
"Fig.",
"3c",
"and",
"d)",
"were",
"more",
"nearly",
"equal.",
"This",
"might",
"suggest",
"that",
"the",
"amount",
"of",
"lipid",
"mixing",
"at",
"the",
"edges",
"of",
"the",
"domains",
"was",
"greater",
"than",
"that",
"predicted",
"by",
"phase-diagrams.",
"However,",
"the",
"AFM",
"images",
"acquired",
"at",
"these",
"sites",
"show",
"that",
"the",
"edges",
"of",
"the",
"gelphase",
"domains",
"are",
"not",
"smooth,",
"but",
"instead",
"consist",
"of",
"many",
"small",
"crevices",
"and",
"peninsulas.",
"Thus,",
"the",
"detection",
"of",
"elevated",
"amounts",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"and",
"15",
"N-DLPC",
"at",
"the",
"same",
"pixel",
"occurred",
"because",
"these",
"structures",
"were",
"not",
"resolved",
"in",
"these",
"NanoSIMS",
"images,",
"which",
"were",
"acquired",
"with",
"a",
"beam",
"diameter",
"of~100",
"nm",
"and",
"were",
"smoothed",
"to",
"the",
"equivalent",
"of~150-nm-lateral",
"resolution."
],
[
"The",
"addition",
"of",
"cholesterol",
"to",
"the",
"membrane",
"induced",
"an",
"elongation",
"of",
"the",
"macroscopic",
"gel-phase",
"domains.",
"At",
"3",
"mol%",
"cholesterol,",
"the",
"macroscopic",
"D",
"70",
"-DSPC-enriched",
"gel-phase",
"domains",
"were",
"oblong",
"and",
"had",
"jagged",
"borders",
"(",
"Fig.",
"4a",
"and",
"d,",
"and",
"supplemental",
"images)",
".",
"A",
"network",
"of",
"gel-phase",
"domains",
"was",
"observed",
"at",
"7",
"mol%",
"cholesterol",
"(",
"Fig.",
"4b",
"and",
"e,",
"and",
"supplemental",
"images)",
".",
"Similar",
"to",
"the",
"cholesterol-free",
"membrane,",
"fluid-phase",
"subdomains",
"were",
"entrapped",
"within",
"the",
"macroscopic",
"gel-phase",
"structures,",
"and",
"gel-phase",
"microdomains",
"were",
"dispersed",
"throughout",
"the",
"fluid-phase",
"in",
"the",
"3",
"and",
"7",
"mol%",
"cholesterol",
"membranes.",
"A",
"networked",
"gel-phase",
"structure",
"that",
"contained",
"entrapped",
"fluid-phase",
"subdomains",
"was",
"also",
"observed",
"in",
"the",
"15",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane,",
"but",
"the",
"edges",
"of",
"the",
"gel-phase",
"structures",
"were",
"smoother",
"than",
"those",
"observed",
"in",
"the",
"other",
"membranes",
"(",
"Fig.",
"4c",
"and",
"f,",
"and",
"supplemental",
"images)",
".",
"The",
"area",
"occupied",
"by",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC-rich",
"domains",
"in",
"the",
"membranes",
"that",
"contained",
"7",
"and",
"15",
"mol%",
"cholesterol",
"was",
"higher",
"than",
"that",
"expected",
"based",
"on",
"the",
"compositions",
"of",
"the",
"vesicles",
"used",
"for",
"membrane",
"formation.",
"This",
"difference",
"in",
"surface",
"coverage",
"was",
"consistent",
"across",
"the",
"membrane",
"(see",
"supplemental",
"images).",
"We",
"attribute",
"these",
"results",
"to",
"the",
"phenomena",
"occurring",
"during",
"bilayer",
"formation,",
"such",
"as",
"the",
"selective",
"adsorption",
"of",
"the",
"lipid",
"species",
"onto",
"the",
"substrate",
"or",
"lipid",
"exchange,",
"as",
"opposed",
"to",
"selective",
"incorporation",
"of",
"cholesterol",
"into",
"the",
"ordered",
"domains,",
"because",
"cholesterol",
"is",
"expected",
"to",
"evenly",
"distribute",
"between",
"the",
"two",
"lipid",
"phases",
"[14]",
".",
"Moreover,",
"the",
"increase",
"in",
"D",
"70",
"-DSPC",
"domain",
"surface",
"coverage",
"seems",
"larger",
"than",
"the",
"fraction",
"of",
"cholesterol",
"in",
"the",
"membrane.",
"The",
"height",
"difference",
"between",
"the",
"gel-and",
"fluid-phase",
"regions",
"of",
"the",
"3,",
"7,",
"and",
"15",
"mol%",
"cholesterol",
"membranes",
"did",
"not",
"change",
"from",
"that",
"measured",
"in",
"the",
"cholesterol-free",
"membrane",
"(~1.3",
"nm)",
".",
"Similarly,",
"the",
"15",
"N-DLPC",
"concentration",
"within",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC-enriched",
"domains",
"remained",
"constant",
"at~6",
"mol%,",
"indicating",
"that",
"the",
"solubility",
"of",
"15",
"N-DLPC",
"within",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC-rich",
"domains",
"did",
"not",
"change",
"over",
"this",
"range",
"of",
"cholesterol",
"concentrations.",
"We",
"did",
"not",
"attempt",
"to",
"quantify",
"the",
"mol%",
"of",
"15",
"N-DLPC",
"in",
"the",
"fluid-phase",
"due",
"to",
"the",
"high",
"likelihood",
"that",
"the",
"numerous",
"nanoscopic",
"gel-phase",
"domains",
"detected",
"within",
"the",
"fluid-phase",
"by",
"AFM",
"would",
"inadvertently",
"be",
"included",
"in",
"the",
"measurement."
],
[
"Our",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"images",
"of",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"clearly",
"show",
"heterogeneity",
"in",
"membrane",
"composition",
"N-DLPC,",
"respectively,",
"were",
"acquired",
"at",
"the",
"same",
"site",
"as",
"the",
"AFM",
"image",
"(a).",
"The",
"absence",
"of",
"lipid-specific",
"ions",
"at",
"the",
"regions",
"that",
"appear",
"dark",
"is",
"due",
"to",
"the",
"low",
"intensity",
"of",
"the",
"minor",
"isotopes.",
"(d)",
"Detail",
"of",
"the",
"region",
"outlined",
"in",
"(a),",
"which",
"corresponds",
"to",
"the",
"AFM",
"image",
"in",
"(b).",
"The",
"NanoSIMS",
"images",
"were",
"acquired",
"with~100-nm-lateral",
"resolution",
"and",
"smoothed",
"over",
"a",
"lateral",
"resolution",
"of~150",
"nm..",
"and",
"structure",
"(Fig.",
"5)",
".",
"Individual",
"and",
"micron-sized",
"aggregates",
"of",
"nanoscopic",
"ordered",
"domains",
"enriched",
"with",
"D",
"70",
"-DSPC",
"are",
"visible",
"in",
"the",
"membrane.",
"The",
"height",
"difference",
"measured",
"with",
"AFM",
"between",
"the",
"gel-and",
"fluid-phases",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"did",
"not",
"vary",
"with",
"domain",
"size",
"(~1.2",
"nm),",
"and",
"was",
"similar",
"to",
"those",
"measured",
"in",
"membranes",
"with",
"lower",
"cholesterol",
"levels",
"(~1.3",
"nm).",
"The",
"15",
"N-DLPC",
"concentration",
"within",
"the",
"submicron-size",
"domains",
"that",
"were",
"resolved",
"in",
"the",
"NanoSIMS",
"images",
"was~7",
"mol%,",
"within",
"one",
"standard",
"deviation",
"of",
"the",
"value",
"measured",
"on",
"the",
"0-15",
"mol%",
"cholesterol",
"membranes.",
"Thus,",
"a",
"significant",
"increase",
"in",
"lipid",
"intermixing",
"did",
"not",
"occur",
"in",
"these",
"domains.",
"However,",
"elevated",
"amounts",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"and",
"15",
"N-DLPC",
"were",
"detected",
"at",
"the",
"same",
"pixel",
"more",
"frequently",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"than",
"in",
"the",
"other",
"membranes",
"(yellow",
"areas,",
"Fig.",
"5d-f",
").",
"Comparison",
"to",
"the",
"AFM",
"images",
"acquired",
"at",
"these",
"locations",
"revealed",
"the",
"presence",
"of",
"nanoscopic",
"lipid",
"structures",
"that",
"were",
"smaller",
"than",
"the",
"resolution",
"of",
"the",
"NanoSIMS",
"images",
"(Fig.",
"5a-c)",
".",
"Therefore,",
"the",
"detection",
"of",
"significant",
"amounts",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"and",
"15",
"N-DLPC",
"at",
"the",
"same",
"pixel",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"signifies",
"the",
"presence",
"of",
"a",
"phase-separated",
"domain",
"that",
"is",
"smaller",
"than",
"the",
"lateral",
"resolution",
"of",
"the",
"NanoSIMS",
"image.",
"The",
"lack",
"of",
"an",
"observable",
"change",
"in",
"the",
"height",
"of",
"the",
"nanoscopic",
"lipid",
"structures",
"or",
"lipid",
"intermixing",
"denotes",
"the",
"presence",
"of",
"phase-separated",
"domains,",
"and",
"not",
"non-ideally",
"mixed",
"lipid",
"clusters,",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane.",
"Because",
"AFM",
"imaging",
"also",
"shows",
"that",
"both",
"the",
"micron-sized",
"and",
"nanoscopic",
"lipid",
"domains",
"have",
"irregular",
"borders,",
"we",
"conclude",
"that",
"the",
"domains",
"enriched",
"with",
"D",
"70",
"-DSPC",
"remained",
"in",
"the",
"gel-phase",
"at",
"19",
"mol%",
"cholesterol.",
"We",
"also",
"attempted",
"to",
"characterize",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"that",
"contained",
"N19",
"mol%",
"cholesterol",
"(27",
"and",
"35",
"mol%",
"cholesterol).",
"These",
"membranes",
"exhibited",
"numerous",
"small",
"height",
"changes",
"(b1",
"nm)",
"and",
"taller",
"features",
"indicative",
"of",
"debris",
"by",
"AFM,",
"whereas",
"patches",
"of",
"15",
"N-DLPC",
"and",
"very",
"little",
"D",
"70",
"-DSPC",
"was",
"detected",
"on",
"the",
"substrate",
"using",
"the",
"NanoSIMS",
"(not",
"shown).",
"These",
"features",
"are",
"not",
"characteristic",
"of",
"those",
"we",
"have",
"observed",
"in",
"poorly",
"preserved",
"membranes,",
"nor",
"do",
"they",
"resemble",
"the",
"dehydration-induced",
"defects",
"characterized",
"by",
"others",
"[51]",
".",
"These",
"results",
"suggest",
"that",
"high-quality",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"did",
"not",
"form",
"under",
"the",
"same",
"conditions",
"as",
"those",
"used",
"to",
"create",
"the",
"membranes",
"with",
"lower",
"mol%",
"cholesterol.",
"found",
"that",
"the",
"addition",
"of",
"up",
"to",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"induced",
"significant",
"changes",
"in",
"domain",
"morphology,",
"but",
"produced",
"no",
"observable",
"change",
"in",
"the",
"miscibility",
"of",
"15",
"N-DLPC",
"within",
"the",
"gel-phase.",
"Unlike",
"previous",
"results",
"in",
"which",
"the",
"phase",
"behavior",
"of",
"analogous",
"supported",
"membranes",
"differed",
"from",
"that",
"of",
"GUVs",
"[25]",
",",
"our",
"results",
"are",
"in",
"agreement",
"with",
"those",
"reported",
"for",
"DLPC/DSPC/cholesterol",
"GUVs",
"and",
"mica-supported",
"membranes",
"[22,",
"47]",
".",
"This",
"good",
"agreement",
"indicates",
"that",
"the",
"slow-cooled",
"vesicle",
"fusion",
"process",
"we",
"employed",
"for",
"membrane",
"formation",
"likely",
"allowed",
"the",
"membrane",
"to",
"approach",
"equilibrium,",
"and",
"neither",
"the",
"silicon",
"substrate",
"nor",
"the",
"isotope",
"labels",
"appeared",
"to",
"alter",
"membrane",
"phase",
"behavior..",
"According",
"to",
"the",
"DLPC/DSPC/cholesterol",
"phase",
"diagram",
"(Fig.",
"1)",
",",
"the",
"miscibility",
"point",
"for",
"a",
"1:1",
"molar",
"ratio",
"of",
"DLPC/DSPC",
"is~19",
"mol%",
"cholesterol,",
"and",
"non-ideal",
"mixing",
"postulated",
"to",
"be",
"caused",
"by",
"nanoscopic",
"liquid-ordered",
"domains",
"has",
"been",
"previously",
"detected",
"with",
"FRET",
"at",
"slightly",
"higher",
"cholesterol",
"concentrations",
"(between",
"20",
"and",
"25",
"mol%)",
"[18,",
"22]",
".",
"Yet",
"gel-phase",
"domains",
"were",
"present",
"in",
"our",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"composed",
"of",
"DLPC/DSPC",
"(1:1",
"molar",
"ratio)",
"and",
"19",
"mol%",
"cholesterol.",
"A",
"higher",
"amount",
"of",
"D",
"70",
"-DSPC",
"than",
"15",
"N-DLPC",
"in",
"the",
"membrane,",
"which",
"could",
"have",
"occurred",
"due",
"to",
"small",
"gravimetric",
"and",
"volumetric",
"errors",
"in",
"measuring",
"the",
"lipids,",
"would",
"shift",
"the",
"miscibility",
"point",
"to",
"a",
"higher",
"cholesterol",
"concentration",
"(~20",
"mol%)",
"than",
"we",
"studied",
"[22]",
".",
"However,",
"we",
"expect",
"that",
"nanoscopic",
"gel-phase",
"domains",
"would",
"also",
"be",
"present",
"in",
"our",
"membranes",
"at",
"20-21",
"mol%",
"cholesterol",
"because",
"we",
"detected",
"a",
"small",
"number",
"of",
"micron-sized,",
"gelphase",
"domains",
"at",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"(",
"Fig.",
"5a",
"and",
"b,",
"lower",
"left)",
",",
"and",
"the",
"gel-phase",
"domains",
"in",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"undergo",
"a",
"reduction",
"in",
"size",
"due",
"to",
"domain",
"pinning",
"before",
"complete",
"miscibility",
"is",
"reached",
"[15,",
"47]",
".",
"This",
"expectation",
"is",
"supported",
"by",
"a",
"recent",
"report",
"by",
"Gosku",
"and",
"Longo",
"[47]",
".",
"The",
"speckling",
"in",
"Gosku",
"and",
"Longo's",
"fluorescence",
"microscopy",
"images",
"of",
"mica-supported",
"DLPC/DSPC/",
"cholesterol",
"(40/40/20",
"mol:mol:mol)",
"membranes",
"[47]",
"suggests",
"the",
"presence",
"of",
"tiny",
"phase-separated",
"domains",
"that",
"could",
"be",
"detected",
"by",
"AFM,",
"but",
"were",
"too",
"small",
"to",
"be",
"clearly",
"visualized",
"with",
"fluorescence",
"microscopy.",
"We",
"hypothesize",
"that",
"the",
"small",
"inconsistency",
"in",
"the",
"location",
"of",
"the",
"boundary",
"for",
"phase",
"separation",
"between",
"our",
"results",
"and",
"the",
"published",
"DLPC/DSPC/cholesterol",
"phase",
"diagram",
"is",
"due",
"to",
"the",
"difference",
"in",
"techniques",
"used",
"to",
"detect",
"phase",
"separation,",
"as",
"the",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"techniques",
"we",
"used",
"are",
"better",
"suited",
"to",
"unambiguously",
"detect",
"submicron-sized",
"domains",
"than",
"the",
"conventional",
"fluorescence",
"microscopy",
"[17,",
"22,",
"25,",
"47]",
".",
"The",
"fusion",
"of",
"DLPC/DSPC",
"(1:1",
"mol",
"ratio)",
"vesicles",
"that",
"contained",
"27",
"and",
"35",
"mol%",
"cholesterol",
"to",
"the",
"silicon",
"substrates",
"under",
"conditions",
"identical",
"to",
"those",
"employed",
"for",
"the",
"other",
"cholesterol",
"concentrations",
"did",
"not",
"produce",
"continuous,",
"defect-free",
"membranes.",
"Increasing",
"the",
"cholesterol",
"concentration",
"within",
"vesicles",
"composed",
"of",
"phase-separating",
"lipids",
"is",
"reported",
"to",
"hinder",
"vesicle",
"rupture,",
"causing",
"an",
"increase",
"in",
"the",
"critical",
"number",
"of",
"vesicles",
"that",
"must",
"adsorb",
"to",
"the",
"silicon",
"substrate",
"in",
"order",
"to",
"initiate",
"vesicle",
"fusion",
"[52]",
".",
"Because",
"others",
"have",
"used",
"vesicle",
"fusion",
"to",
"form",
"DLPC/DSPC",
"(1/1",
"mole",
"ratio)",
"membranes",
"that",
"contained",
"30",
"mol%",
"cholesterol",
"on",
"mica",
"substrates",
"[47]",
",",
"we",
"hypothesize",
"that",
"the",
"vesicle",
"concentration",
"or",
"incubation",
"time",
"we",
"employed",
"for",
"vesicle",
"fusion",
"was",
"insufficient",
"for",
"the",
"formation",
"of",
"defect-free",
"membranes",
"that",
"contained",
"27",
"or",
"35",
"mol%",
"cholesterol."
],
[
"Our",
"data",
"indicate",
"that",
"interactions",
"between",
"saturated",
"lipids,",
"such",
"as",
"DLPC",
"and",
"DSPC,",
"and",
"cholesterol",
"are",
"insufficient",
"to",
"drive",
"the",
"formation",
"of",
"liquid-ordered",
"domains",
"that",
"are",
"similar",
"to",
"those",
"expected",
"to",
"exist",
"within",
"biological",
"membranes.",
"Our",
"results,",
"and",
"those",
"reported",
"by",
"others,",
"suggest",
"that",
"molecular",
"interactions",
"between",
"the",
"fluid-phase",
"lipid",
"and",
"cholesterol",
"affect",
"the",
"structure",
"of",
"the",
"ordered",
"lipid",
"domains",
"that",
"form",
"in",
"the",
"membranes",
"[15,",
"23]",
".",
"Although",
"the",
"DLPC/DSPC/cholesterol",
"membranes",
"we",
"studied",
"are",
"not",
"compositionally",
"or",
"biophysically",
"representative",
"of",
"biological",
"membranes,",
"our",
"findings",
"do",
"provide",
"insight",
"into",
"the",
"physiological",
"significance",
"of",
"fatty",
"acid",
"chain",
"saturation",
"in",
"biological",
"membranes.",
"Specifically,",
"our",
"results",
"support",
"the",
"hypothesis",
"that",
"the",
"presence",
"of",
"unsaturation",
"in",
"the",
"fatty",
"acid",
"chains",
"of",
"the",
"low-melting",
"lipids",
"found",
"in",
"biological",
"membranes",
"is",
"required",
"for",
"the",
"formation",
"of",
"a",
"liquid-ordered",
"phase.",
"Furthermore,",
"we",
"propose",
"that",
"the",
"absence",
"of",
"saturated,",
"low",
"T",
"m",
"lipids",
"in",
"cellular",
"membranes",
"is",
"functionally",
"significant,",
"as",
"their",
"presence",
"may",
"hinder",
"the",
"formation",
"of",
"liquid-ordered",
"membrane",
"domains..",
"This",
"work",
"also",
"establishes",
"a",
"direct",
"approach",
"to",
"acquire",
"correlated",
"information",
"on",
"the",
"microstructure",
"and",
"composition",
"of",
"individual",
"lipid",
"domains.",
"This",
"approach",
"could",
"be",
"extended",
"to",
"quantifying",
"the",
"amounts",
"of",
"DSPC",
"and",
"cholesterol",
"in",
"the",
"lipid",
"domains",
"detected",
"in",
"these",
"membranes",
"by",
"also",
"incorporating",
"a",
"different",
"distinct",
"stable",
"isotope",
"into",
"the",
"cholesterol,",
"and",
"creating",
"separate",
"calibration",
"curves",
"for",
"DSPC",
"and",
"cholesterol",
"using",
"sets",
"of",
"standard",
"lipid",
"membrane",
"samples.",
"Such",
"studies",
"would",
"permit",
"identifying",
"whether",
"the",
"cholesterol",
"concentration",
"is",
"equal",
"in",
"both",
"lipid",
"phases,",
"as",
"indicated",
"by",
"original",
"experiments",
"[14]",
",",
"or",
"if",
"the",
"cholesterol",
"concentration",
"is",
"higher",
"in",
"the",
"ordered",
"domains,",
"as",
"found",
"for",
"other",
"lipid",
"mixtures",
"[18]",
".",
"Our",
"approach",
"could",
"also",
"be",
"used",
"to",
"construct",
"more",
"detailed",
"phasediagrams",
"that",
"include",
"tie",
"lines",
"for",
"DLPC/DSPC/cholesterol",
"or",
"other",
"more",
"physiologically",
"relevant",
"lipid",
"mixtures.",
"Such",
"studies",
"may",
"clarify",
"uncertainties",
"in",
"membrane",
"phase",
"behavior,",
"and",
"provide",
"a",
"better",
"understanding",
"of",
"how",
"cholesterol-dependent",
"interactions",
"contribute",
"to",
"cell",
"membrane",
"organization."
],
[
"By",
"analyzing",
"the",
"same",
"locations",
"in",
"supported",
"lipid",
"membranes",
"with",
"AFM",
"and",
"high-resolution",
"SIMS,",
"we",
"were",
"able",
"to",
"acquire",
"correlated",
"information",
"on",
"the",
"microstructure",
"and",
"composition",
"of",
"the",
"individual",
"lipid",
"domains",
"found",
"in",
"the",
"membranes",
"at",
"room",
"temperature.",
"We",
"showed",
"that",
"the",
"nanoscopic",
"D",
"70",
"-DSPC",
"domains",
"present",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane",
"were",
"in",
"the",
"gel-phase.",
"The",
"15",
"N-DLPC",
"concentration",
"in",
"the",
"D",
"70",
"-DSPC",
"domains",
"was",
"relatively",
"constant",
"(6-7",
"mol%)",
"for",
"cholesterol",
"concentrations",
"between",
"0",
"and",
"19",
"mol%,",
"indicating",
"that",
"cholesterol",
"did",
"not",
"induce",
"a",
"significant",
"increase",
"in",
"lipid",
"intermixing",
"in",
"these",
"domains.",
"Our",
"results",
"support",
"the",
"finding",
"of",
"Zhao",
"et",
"al.",
"[22]",
"that",
"nanoscopic",
"phase-separated",
"domains",
"are",
"present",
"in",
"the",
"membrane",
"at~19",
"mol%",
"cholesterol,",
"but",
"we",
"found",
"no",
"evidence",
"for",
"the",
"presence",
"of",
"liquid-ordered",
"domains.",
"We",
"conclude",
"that",
"the",
"interactions",
"between",
"cholesterol",
"and",
"saturated",
"lipids,",
"such",
"as",
"DLPC",
"and",
"DSPC,",
"are",
"not",
"sufficient",
"to",
"create",
"liquid-ordered",
"domains.",
"Consequently,",
"the",
"absence",
"of",
"saturated,",
"low-melting",
"lipids",
"in",
"biological",
"membranes",
"may",
"be",
"required",
"for",
"the",
"formation",
"of",
"the",
"liquidordered",
"domains",
"that",
"are",
"expected",
"to",
"exist",
"in",
"cellular",
"membranes."
],
[
"Correlated",
"AFM",
"and",
"NanoSIMS",
"imaging",
"to",
"probe",
"cholesterol-induced",
"changes",
"in",
"phase",
"behavior",
"and",
"non-ideal",
"mixing",
"in",
"ternary",
"lipid",
"membranes."
],
[
"Cholesterol",
"is",
"believed",
"to",
"be",
"an",
"important",
"component",
"in",
"compositionally",
"distinct",
"lipid",
"domains",
"in",
"the",
"cellular",
"plasma",
"membrane,",
"which",
"are",
"referred",
"to",
"as",
"lipid",
"rafts.",
"Insight",
"into",
"how",
"cholesterol",
"influences",
"the",
"interactions",
"that",
"contribute",
"to",
"plasma",
"membrane",
"organization",
"can",
"be",
"acquired",
"from",
"model",
"lipid",
"membranes.",
"Here",
"we",
"characterize",
"the",
"lipid",
"mixing",
"and",
"phase",
"behavior",
"exhibited",
"by",
"15",
"N-dilaurolyphosphatidycholine",
"(",
"15",
"N-DLPC)/",
"deuterated",
"distearoylphosphatiylcholine",
"(D",
"70",
"-DSPC)",
"membranes",
"with",
"various",
"amounts",
"of",
"cholesterol",
"(0,",
"3,",
"7,",
"15",
"or",
"19",
"mol%)",
"at",
"room",
"temperature.",
"The",
"microstructures",
"and",
"compositions",
"of",
"individual",
"membrane",
"domains",
"were",
"determined",
"by",
"imaging",
"the",
"same",
"membrane",
"locations",
"with",
"both",
"atomic",
"force",
"microscopy",
"(AFM)",
"and",
"high-resolution",
"secondary",
"ion",
"mass",
"spectrometry",
"(SIMS)",
"performed",
"with",
"a",
"Cameca",
"NanoSIMS",
"50.",
"As",
"the",
"cholesterol",
"composition",
"increased",
"from",
"0",
"to",
"19",
"mol%,",
"the",
"circular",
"ordered",
"domains",
"became",
"more",
"elongated,",
"and",
"the",
"amount",
"of",
"15",
"N-DLPC",
"in",
"the",
"gel-phase",
"domains",
"remained",
"constant",
"at",
"6-7",
"mol%.",
"Individual",
"and",
"micronsized",
"clusters",
"of",
"nanoscopic",
"domains",
"enriched",
"in",
"D",
"70",
"-DSPC",
"were",
"abundant",
"in",
"the",
"19",
"mol%",
"cholesterol",
"membrane.",
"AFM",
"imaging",
"showed",
"that",
"these",
"lipid",
"domains",
"had",
"irregular",
"borders,",
"indicating",
"that",
"they",
"were",
"gel-phase",
"domains,",
"and",
"not",
"non-ideally",
"mixed",
"lipid",
"clusters",
"or",
"nanoscopic",
"liquid-ordered",
"domains."
]
] | [
"phase separation",
"room temperature",
"atomic force microscopy",
"secondary ion mass spectrometry",
"microstructures"
] | [
"high resolution",
"lipid raft"
] | [
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"B",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
]
] |
18982235 | [
"",
"title",
"abstract"
] | [
[
"The",
"temperature",
"equation",
"diagnostic",
"terms",
"in",
"°C/second",
"along",
"the",
"glider",
"track",
"from",
"ESPreSSO",
"ROMS",
"model.",
"(A)",
"Temperature",
"rate",
"of",
"change,",
"(B)",
"Vertical",
"diffusion",
"term,",
"(C)",
"Total",
"advection.",
"The",
"total",
"advection",
"is",
"separated",
"into",
"along--shelf",
"advection",
"(D,",
"u*dT/dx);",
"cross--shelf",
"advection",
"(E,",
"v*dT/dy);",
"and",
"vertical",
"advection",
"(F,",
"w*dT/dz).",
"The",
"black",
"contour",
"in",
"all",
"plots",
"indicates",
"the",
"bottom",
"of",
"the",
"surface",
"mixed",
"layer",
"and",
"magenta",
"contour",
"indicates",
"the",
"bottom",
"of",
"the",
"thermocline.",
"Landfall",
"time",
"was",
"on",
"August",
"28",
"th",
"2011",
"at",
"9:35",
"GMT.",
"Supplementary",
"Fig.",
"7",
"Same",
"as",
"Fig.",
"4",
"but",
"for",
"maximum",
"sustained",
"10m",
"wind",
"speeds",
"(m/s).",
"Supplementary",
"Fig.",
"8",
"Central",
"pressure",
"sensitivity",
"table.",
"Sensitivity",
"(hPa)",
"is",
"calculated",
"by",
"taking",
"the",
"cumulative",
"hourly",
"sum",
"of",
"the",
"differences",
"from",
"00",
"to",
"13",
"UTC",
"on",
"28",
"August.",
"Options",
"column",
"is",
"described",
"in",
"Supplementary",
"Fig.",
"10",
"Time--series",
"plots",
"of",
"air",
"temperature",
"(red),",
"water",
"temperature",
"(blue),",
"pressure",
"(black),",
"and",
"wind",
"speed",
"(green).",
"The",
"first",
"vertical",
"black",
"line",
"indicates",
"the",
"maximum",
"water",
"temperature",
"before",
"wind",
"speed",
"increased",
"above",
"5",
"m",
"s",
"--1",
",",
"the",
"second",
"represents",
"the",
"minimum",
"temperature",
"ahead--of",
"or",
"at",
"the",
"minimum",
"pressure,",
"and",
"the",
"third",
"vertical",
"black",
"line",
"is",
"the",
"minimum",
"temperature",
"before",
"wind",
"speeds",
"drop",
"below",
"5",
"m",
"s",
"--1",
".",
"Values",
"from",
"these",
"plots",
"are",
"used",
"to",
"determine",
"ahead--of--eye--center",
"(AOEC)",
"and",
"in--storm",
"cooling",
"from",
"NDBC",
"buoys",
"used",
"to",
"create",
"Table",
"1",
"for",
"Hurricanes",
"Arthur",
"(2014),",
"Irene,",
"Barry,",
"and",
"Hermine.",
"Supplementary",
"Fig.",
"11",
"Time--series",
"plots",
"of",
"air",
"temperature",
"(red),",
"water",
"temperature",
"(blue),",
"pressure",
"(black),",
"and",
"wind",
"speed",
"(green).",
"The",
"first",
"vertical",
"black",
"line",
"indicates",
"the",
"maximum",
"water",
"temperature",
"before",
"wind",
"speed",
"increased",
"above",
"5",
"m",
"s",
"--1",
",",
"the",
"second",
"represents",
"the",
"minimum",
"temperature",
"ahead--of",
"or",
"at",
"the",
"minimum",
"pressure,",
"and",
"the",
"third",
"vertical",
"black",
"line",
"is",
"the",
"minimum",
"temperature",
"before",
"wind",
"speeds",
"drop",
"below",
"5",
"m",
"s",
"--1",
".",
"Values",
"from",
"these",
"plots",
"are",
"used",
"to",
"determine",
"ahead--of--eye--center",
"(AOEC)",
"and",
"in--storm",
"cooling",
"from",
"NDBC",
"buoys",
"used",
"to",
"create",
"Table",
"1",
"for",
"Hurricanes",
"Allison,",
"Bonnie,",
"Danny,",
"and",
"Arthur",
"(1996).",
"Supplementary",
"Fig.",
"12",
"Time--series",
"plots",
"of",
"air",
"temperature",
"(red),",
"water",
"temperature",
"(blue),",
"pressure",
"(black),",
"and",
"wind",
"speed",
"(green).",
"The",
"first",
"vertical",
"black",
"line",
"indicates",
"the",
"maximum",
"water",
"temperature",
"before",
"wind",
"speed",
"increased",
"above",
"5",
"m",
"s",
"--1",
",",
"the",
"second",
"represents",
"the",
"minimum",
"temperature",
"ahead--of",
"or",
"at",
"the",
"minimum",
"pressure,",
"and",
"the",
"third",
"vertical",
"black",
"line",
"is",
"the",
"minimum",
"temperature",
"before",
"wind",
"speeds",
"drop",
"below",
"5",
"m",
"s",
"--1",
".",
"Values",
"from",
"these",
"plots",
"are",
"used",
"to",
"determine",
"ahead--of--eye--center",
"(AOEC)",
"and",
"in--storm",
"cooling",
"from",
"NDBC",
"buoys",
"used",
"to",
"create",
"Table",
"1",
"for",
"Hurricanes",
"Emily,",
"Bob,",
"and",
"Charley."
],
[
"Stratified",
"coastal",
"ocean",
"interactions",
"with",
"tropical",
"cyclones"
],
[
"Accurate",
"forecasts",
"of",
"hurricane",
"intensity",
"remain",
"problematic.",
"Here,",
"using",
"an",
"ocean",
"observing",
"network",
"to",
"inform",
"ocean",
"and",
"atmospheric",
"model",
"simulations,",
"the",
"authors",
"show",
"that",
"consideration",
"of",
"ahead-of-eye",
"cooling",
"improves",
"intensity",
"forecasts."
]
] | [] | [
"oceanography",
"atmospheric science",
"earth sciences"
] | [
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
]
] |
18983838 | [
"introduction",
"charged thin shell wormholes",
"stability",
"case",
"conclusion",
"title",
"abstract"
] | [
[
"Lorentzian",
"wormholes",
"were",
"originally",
"found",
"as",
"solutions",
"of",
"the",
"Einstein",
"field",
"equations",
"with",
"nontrivial",
"topology.",
"In",
"their",
"more",
"simple",
"examples",
"they",
"present",
"two",
"mouths",
"in",
"asymptotically",
"flat",
"spacetimes",
"connected",
"by",
"a",
"throat",
"[1]",
".",
"More",
"general",
"and",
"purely",
"geometric",
"definitions",
"allow",
"to",
"remove",
"the",
"requirement",
"for",
"asymptotically",
"flat",
"regions",
"and",
"the",
"introduction",
"of",
"trivial",
"topologies",
"in",
"wormhole",
"spacetimes,",
"both",
"static",
"[2]",
"and",
"dynamic",
"[3]",
".",
"All",
"these",
"wormholes,",
"nonetheless,",
"must",
"be",
"threaded",
"by",
"matter",
"that",
"violates",
"the",
"null",
"energy",
"condition",
"if",
"they",
"are",
"going",
"to",
"be",
"traversable",
"by",
"material",
"systems",
"[1,",
"2,",
"3]",
"..",
"The",
"requirements",
"for",
"exotic",
"matter",
"that",
"violates",
"the",
"energy",
"conditions",
"can",
"be",
"reduced",
"introducing",
"scalar",
"fields",
"or",
"electric",
"charges.",
"Very",
"recently",
"Kim",
"and",
"Lee",
"[4]",
"have",
"presented",
"exact",
"solutions",
"for",
"a",
"static",
"charged",
"wormhole.",
"These",
"spacetimes",
"are",
"free",
"of",
"horizons,",
"so",
"the",
"charge,",
"although",
"having",
"effects",
"on",
"the",
"stability,",
"does",
"not",
"seriously",
"affect",
"the",
"spacetime",
"itself..",
"Despite",
"nothing",
"is",
"known",
"about",
"the",
"equation",
"of",
"state",
"of",
"exotic",
"matter,",
"a",
"stability",
"analysis",
"is",
"possible",
"through",
"linearized",
"perturbations",
"around",
"static",
"solutions",
"of",
"the",
"Einstein",
"field",
"equations.",
"This",
"imposes",
"contraints",
"onto",
"the",
"state",
"equation",
"and",
"the",
"stability",
"domain",
"of",
"the",
"solutions.",
"This",
"approach",
"has",
"been",
"implemented",
"by",
"Poisson",
"and",
"Visser",
"for",
"spherically",
"symmetric",
"thin-shell",
"wormholes",
"[5,",
"6]",
".",
"For",
"surgical",
"techniques",
"to",
"construct",
"thin-shell",
"wormholes,",
"the",
"reader",
"is",
"referred",
"to",
"the",
"papers",
"by",
"Visser",
"[7,",
"8]",
"..",
"In",
"this",
"paper",
"we",
"extend",
"the",
"stability",
"analysis",
"to",
"the",
"case",
"of",
"charged",
"wormholes",
"with",
"the",
"aim",
"to",
"establish",
"whether",
"the",
"presence",
"of",
"charge",
"effectively",
"can",
"increase",
"the",
"stability",
"domain",
"of",
"this",
"type",
"of",
"spacetimes."
],
[
"We",
"use",
"geometrized",
"units",
"(c=G=1).",
"The",
"Reissner-Nordström",
"metric",
"is",
"the",
"unique",
"spherically",
"symmetric",
"solution",
"of",
"the",
"vacuum",
"Einstein-Maxwell",
"coupled",
"equations.",
"In",
"Schwarzschild",
"coordinates",
"X",
"α",
"=",
"(t,",
"r,",
"θ,",
"ϕ)",
"it",
"takes",
"the",
"form.",
"where",
"M",
"is",
"the",
"mass",
"and",
"Q",
"is",
"the",
"sum",
"of",
"electric",
"and",
"magnetic",
"charges,",
"measured",
"by",
"distant",
"observers.",
"If",
"|Q|",
"≤",
"M",
",",
"it",
"represents",
"a",
"black",
"hole",
"with",
"an",
"event",
"horizon",
"with",
"radius.",
"If",
"|Q|",
">",
"M",
"it",
"is",
"a",
"naked",
"singularity..",
"From",
"the",
"Reissner-Nordström",
"geometry",
"we",
"can",
"take",
"two",
"copies",
"of",
"the",
"region",
"with",
"r",
"≥",
"a:.",
"where",
"a",
">",
"r",
"h",
"if",
"|Q|",
"≤",
"M",
"and",
"a",
">",
"0",
"if",
"|Q|",
">",
"M,",
"and",
"glue",
"them",
"together",
"at",
"the",
"hypersurface.",
"to",
"make",
"a",
"charged",
"spherically",
"symmetric",
"thin",
"shell",
"wormhole",
"M",
"=",
"M",
"+",
"∪",
"M",
"−",
".",
"This",
"construction",
"creates",
"a",
"geodesically",
"complete",
"manifold",
"M",
"with",
"two",
"asymptotically",
"plane",
"regions",
"connected",
"by",
"a",
"throat.",
"To",
"study",
"this",
"traversable",
"wormhole",
"we",
"use",
"the",
"standard",
"Darmois-Israel",
"formalism",
"[9]",
".",
"For",
"a",
"modern",
"treatment",
"of",
"this",
"formalism",
"see",
"for",
"example",
"[10]",
"..",
"The",
"wormhole",
"throat",
"is",
"placed",
"at",
"Σ.",
"This",
"shell",
"is",
"a",
"synchronous",
"timelike",
"hypersurface.",
"We",
"can",
"adopt",
"coordinates",
"ξ",
"i",
"=",
"(τ,",
"θ,",
"ϕ)",
"in",
"Σ,",
"with",
"τ",
"the",
"proper",
"time",
"on",
"the",
"shell.",
"In",
"order",
"to",
"analyze",
"the",
"stability",
"under",
"spherically",
"symmetric",
"perturbations,",
"we",
"let",
"the",
"radius",
"of",
"the",
"throat",
"be",
"a",
"function",
"of",
"the",
"proper",
"time,",
"a",
"=",
"a(τ",
").",
"Then.",
"The",
"second",
"fundamental",
"forms",
"associated",
"with",
"the",
"two",
"sides",
"of",
"the",
"shell",
"are:.",
"where",
"n",
"±",
"γ",
"are",
"the",
"unit",
"normals",
"(n",
"γ",
"n",
"γ",
"=",
"−1",
")",
"to",
"Σ",
"in",
"M:.",
"In",
"the",
"orthonormal",
"basis",
"{eτ",
",",
"eθ,",
"eφ}",
"(eτ",
"=",
"e",
"τ",
",",
"eθ",
"=",
"r",
"−1",
"e",
"θ",
",",
"eφ",
"=",
"(r",
"sin",
"θ)",
"−1",
"e",
"ϕ",
",",
"gî",
"=",
"ηî)",
"we",
"have",
"that.",
"and.",
"where",
"the",
"dot",
"means",
"d/dτ",
"..",
"The",
"Einstein",
"equations",
"on",
"the",
"shell",
"reduce",
"to",
"the",
"Lanczos",
"equations:.",
"where.",
"is",
"the",
"surface",
"stressenergy",
"tensor,",
"with",
"σ",
"the",
"surface",
"energy",
"density",
"and",
"ϑ",
"1,2",
"the",
"surface",
"tensions.",
"Then",
"replacing",
"Eqs.",
"(8)",
"and",
"(9)",
"in",
"Eq.",
"(10)",
"we",
"obtain.",
"where",
"p",
"=",
"−ϑ",
"1",
"=",
"−ϑ",
"2",
"is",
"the",
"surface",
"pressure.",
"The",
"surface",
"energy",
"density",
"is",
"negative,",
"indicating",
"the",
"presence",
"of",
"exotic",
"matter",
"in",
"the",
"throat..",
"The",
"dynamical",
"evolution",
"of",
"the",
"wormhole",
"throat",
"is",
"governed",
"by",
"the",
"Einstein",
"equations",
"plus",
"the",
"equation",
"of",
"state",
"p",
"=",
"p(σ)",
"that",
"relates",
"p",
"and",
"σ.",
"From",
"the",
"Eqs.",
"(11)",
"and",
"(12)",
"above,",
"it",
"is",
"easy",
"to",
"verify",
"the",
"energy",
"conservation",
"equation:.",
"where",
"A",
"=",
"4πa",
"2",
"is",
"the",
"area",
"of",
"the",
"wormhole",
"throat.",
"The",
"first",
"term",
"of",
"Eq.",
"(13)",
"represents",
"the",
"internal",
"energy",
"change",
"of",
"the",
"throat",
"and",
"the",
"second",
"the",
"work",
"done",
"by",
"the",
"internal",
"forces",
"of",
"the",
"throat..",
"As",
"in",
"the",
"case",
"of",
"uncharged",
"wormholes",
"[6]",
",",
"the",
"conservation",
"equation",
"can",
"be",
"written",
"in",
"the",
"forṁ.",
"which",
"can",
"be",
"integrated",
"to",
"give.",
"This",
"can",
"be",
"formally",
"inverted",
"to",
"obtain",
"σ",
"=",
"σ(a).",
"Thus,",
"replacing",
"σ(a)",
"in",
"Eq.",
"(11)",
"and",
"regrouping",
"terms,",
"the",
"dynamics",
"of",
"the",
"wormhole",
"throat",
"is",
"completely",
"determined",
"by",
"a",
"single",
"equation:"
],
[
"Eq.",
"(16)",
"can",
"be",
"rewritten",
"in",
"the",
"form:ȧ.",
"with.",
"Let",
"us",
"consider",
"now",
"a",
"static",
"solution",
"with",
"radius",
"a",
"0",
"and",
"the",
"corresponding",
"values",
"of",
"energy",
"density",
"σ",
"0",
"and",
"pressure",
"p",
"0",
":.",
"A",
"Taylor",
"expansion",
"to",
"second",
"order",
"of",
"the",
"potential",
"V",
"(a)",
"around",
"the",
"static",
"solution",
"yields:",
".",
"Since",
"σ",
"′",
"=σ/ȧ,",
"using",
"the",
"Eq.",
"(14),",
"we",
"have",
"that.",
"The",
"second",
"derivative",
"of",
"the",
"potential",
"is.",
"Since",
"σ",
"′",
"+",
"2p",
"′",
"=",
"σ",
"′",
"(1",
"+",
"2p",
"′",
"/σ",
"′",
"),",
"defining",
"the",
"parameter",
"β",
"2",
"(σ)",
"≡",
"dp/dσ",
"=",
"p",
"′",
"/σ",
"′",
",",
"we",
"have",
"that.",
"Replacing",
"in",
"a",
"=",
"a",
"0",
",",
"we",
"have",
"that",
"V",
"(a",
"0",
")",
"=",
"V",
"′",
"(a",
"0",
")",
"=",
"0,",
"so.",
"with.",
"where.",
"The",
"wormhole",
"is",
"stable",
"if",
"and",
"only",
"if",
"V",
"′′",
"(a",
"0",
")",
">",
"0.",
"The",
"curves",
"where",
"V",
"′′",
"(a",
"0",
")",
"=",
"0",
"correspond",
"to.",
"and.",
"For",
"the",
"analysis",
"of",
"the",
"stability",
"regions",
"it",
"is",
"convenient",
"to",
"consider",
"five",
"cases",
"accordingly",
"to",
"the",
"value",
"of",
"charge:.",
"There",
"are",
"two",
"regions",
"of",
"stability,"
],
[
"|Q|",
"M",
"=",
"1.",
"There",
"are",
"two",
"regions",
"of",
"stability,.",
".",
"There",
"are",
"two",
"regions",
"of",
"stability,",
"i).",
".",
"There",
"are",
"two",
"regions",
"of",
"stability,.",
".",
"There",
"is",
"one",
"region",
"of",
"stability,.",
"The",
"regions",
"of",
"stability",
"for",
"different",
"values",
"of",
"charge",
"are",
"shown",
"in",
"Figs.",
"1",
"and",
"2",
".",
"For",
"ordinary",
"matter,",
"β",
"0",
"represents",
"the",
"velocity",
"of",
"sound,",
"so",
"it",
"should",
"satisfy",
"0",
"<",
"β",
"2",
"0",
"≤",
"1.",
"If",
"the",
"matter",
"is",
"exotic,",
"as",
"it",
"happens",
"to",
"be",
"in",
"the",
"throat,",
"β",
"0",
"is",
"not",
"necesarily",
"the",
"velocity",
"of",
"sound",
"and",
"it",
"is",
"not",
"clear",
"which",
"values",
"it",
"can",
"take",
"(see",
"discussion",
"in",
"[6]",
")."
],
[
"We",
"have",
"applied",
"a",
"linearization",
"stability",
"analysis",
"to",
"thin-shell",
"wormholes",
"endowed",
"with",
"charge",
"and",
"we",
"have",
"found",
"that",
"the",
"presence",
"of",
"large",
"charges",
"(|Q|/M",
"≈",
"1),",
"significantly",
"increases",
"the",
"possibility",
"of",
"obtaining",
"stable",
"wormhole",
"spacetimes,",
"imposing",
"less",
"severe",
"restrictions",
"on",
"the",
"equation",
"of",
"state",
"of",
"the",
"exotic",
"matter",
"that",
"must",
"be",
"present",
"in",
"the",
"wormhole",
"throat."
],
[
"Linearized",
"stability",
"of",
"charged",
"thin-shell",
"wormholes"
],
[
"The",
"linearized",
"stability",
"of",
"charged",
"thin",
"shell",
"wormholes",
"under",
"spherically",
"symmetric",
"perturbations",
"is",
"analized.",
"It",
"is",
"shown",
"that",
"the",
"presence",
"of",
"a",
"large",
"value",
"of",
"charge",
"provides",
"stabilization",
"to",
"the",
"system,",
"in",
"the",
"sense",
"that",
"the",
"constraints",
"onto",
"the",
"equation",
"of",
"state",
"are",
"less",
"severe",
"than",
"for",
"non-charged",
"wormholes.PACS",
"number(s):",
"04"
]
] | [
"exotic matter",
"equation of state",
"lorentzian wormholes"
] | [
"einstein-maxwell spacetimes",
"linear stability"
] | [
[
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"O",
"B",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
],
[
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"B",
"I",
"I",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O",
"O"
]
] |
18985550 | ["background","identifying existing guidelines search strategy","selection criteria","quality apprai(...TRUNCATED) | [["Populations","in","crisis","settings","such","as","those","resulting","from","natural","disasters(...TRUNCATED) | [
"health care",
"disasters"
] | ["occupational safety","epidemiology","environmental health","systematic review","injury prevention"(...TRUNCATED) | [["O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","O","O","O","O(...TRUNCATED) |
2870460 | ["introduction","wind dynamics","ejecta dynamics and line emission","continuum emission","detected?"(...TRUNCATED) | [["Studies","of","nearby","clusters","have","revealed","a","population","of","intergalactic","stars.(...TRUNCATED) | [
"galaxy clusters",
"interstellar medium"
] | [] | [["O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O(...TRUNCATED) |
2870734 | ["introduction","the generation of a q set or 'item sampling'","3","the participant group","statisti(...TRUNCATED) | [["This","paper","has","a","marked","practical","aspect.","We","wish","to","encourage","and","facili(...TRUNCATED) | ["qualitative research","william stephenson","eigenvalues","q methodology","factor rotation","factor(...TRUNCATED) | [
"factor inter- pretation"
] | [["O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","I","O","O","O","O","B","I","O(...TRUNCATED) |
2870808 | ["introduction","remark 2.3","remark 2.4","a priori estimates","estimate on","estimate on ||u","proo(...TRUNCATED) | [["The","scope","of","this","work","is","the","discretization","by","the","cell-centered","finite","(...TRUNCATED) | ["noncoercive elliptic equation","weak solution","numerical experiment","convection-diffusion equati(...TRUNCATED) | [
"weak regularity assumption",
"space dimension"
] | [["O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","I","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O(...TRUNCATED) |
2871302 | ["","participants and task","fmri acquisition and analysis","variance components analysis","fmri act(...TRUNCATED) | [["MULTISITE","STUDIES","may","remediate","some","of","the","limitations","in","current","functional(...TRUNCATED) | ["fmri","variance components analysis","region of interest","multisite studies","motor task","total (...TRUNCATED) | [
"reproducibility of re- sults"
] | [["B","I","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O(...TRUNCATED) |
2873973 | [
"background",
"case presentation",
"conclusion",
"consent",
"title",
"abstract"
] | [["Peritoneal","lymphomatosis","is","an","extremely","rare","presentation","of","lymphoma.","It","re(...TRUNCATED) | ["tuberculous peritonitis","tumor lysis syndrome","continuous renal replacement therapy","bone marro(...TRUNCATED) | [] | [["O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","O","B","I","O","O","O","O","O","O","O","O(...TRUNCATED) |
End of preview. Expand
in Dataset Viewer.
YAML Metadata
Warning:
empty or missing yaml metadata in repo card
(https://huggingface.co/docs/hub/datasets-cards)
A dataset for benchmarking keyphrase extraction and generation techniques from long document English scientific papers. For more details about the dataset please refer the original paper - .
Dataset Summary
Dataset Structure
Data Fields
- id: unique identifier of the document.
- sections: list of all the sections present in the document.
- sec_text: list of white space separated list of words present in each section.
- sec_bio_tags: list of BIO tags of white space separated list of words present in each section.
- extractive_keyphrases: List of all the present keyphrases.
- abstractive_keyphrase: List of all the absent keyphrases.
Data Splits
Split | #datapoints |
---|---|
Train-Small | 20,000 |
Train-Medium | 50,000 |
Train-Large | 1,296,613 |
Test | 10,000 |
Validation | 10,000 |
Usage
Small Dataset
from datasets import load_dataset
# get small dataset
dataset = load_dataset("midas/ldkp10k", "small")
def order_sections(sample):
"""
corrects the order in which different sections appear in the document.
resulting order is: title, abstract, other sections in the body
"""
sections = []
sec_text = []
sec_bio_tags = []
if "title" in sample["sections"]:
title_idx = sample["sections"].index("title")
sections.append(sample["sections"].pop(title_idx))
sec_text.append(sample["sec_text"].pop(title_idx))
sec_bio_tags.append(sample["sec_bio_tags"].pop(title_idx))
if "abstract" in sample["sections"]:
abstract_idx = sample["sections"].index("abstract")
sections.append(sample["sections"].pop(abstract_idx))
sec_text.append(sample["sec_text"].pop(abstract_idx))
sec_bio_tags.append(sample["sec_bio_tags"].pop(abstract_idx))
sections += sample["sections"]
sec_text += sample["sec_text"]
sec_bio_tags += sample["sec_bio_tags"]
return sections, sec_text, sec_bio_tags
# sample from the train split
print("Sample from train data split")
train_sample = dataset["train"][0]
sections, sec_text, sec_bio_tags = order_sections(train_sample)
print("Fields in the sample: ", [key for key in train_sample.keys()])
print("Section names: ", sections)
print("Tokenized Document: ", sec_text)
print("Document BIO Tags: ", sec_bio_tags)
print("Extractive/present Keyphrases: ", train_sample["extractive_keyphrases"])
print("Abstractive/absent Keyphrases: ", train_sample["abstractive_keyphrases"])
print("\n-----------\n")
# sample from the validation split
print("Sample from validation data split")
validation_sample = dataset["validation"][0]
sections, sec_text, sec_bio_tags = order_sections(validation_sample)
print("Fields in the sample: ", [key for key in validation_sample.keys()])
print("Section names: ", sections)
print("Tokenized Document: ", sec_text)
print("Document BIO Tags: ", sec_bio_tags)
print("Extractive/present Keyphrases: ", validation_sample["extractive_keyphrases"])
print("Abstractive/absent Keyphrases: ", validation_sample["abstractive_keyphrases"])
print("\n-----------\n")
# sample from the test split
print("Sample from test data split")
test_sample = dataset["test"][0]
sections, sec_text, sec_bio_tags = order_sections(test_sample)
print("Fields in the sample: ", [key for key in test_sample.keys()])
print("Section names: ", sections)
print("Tokenized Document: ", sec_text)
print("Document BIO Tags: ", sec_bio_tags)
print("Extractive/present Keyphrases: ", test_sample["extractive_keyphrases"])
print("Abstractive/absent Keyphrases: ", test_sample["abstractive_keyphrases"])
print("\n-----------\n")
Output
Medium Dataset
from datasets import load_dataset
# get medium dataset
dataset = load_dataset("midas/ldkp10k", "medium")
Large Dataset
from datasets import load_dataset
# get large dataset
dataset = load_dataset("midas/ldkp10k", "large")
Citation Information
Please cite the works below if you use this dataset in your work.
@article{mahata2022ldkp,
title={LDKP: A Dataset for Identifying Keyphrases from Long Scientific Documents},
author={Mahata, Debanjan and Agarwal, Naveen and Gautam, Dibya and Kumar, Amardeep and Parekh, Swapnil and Singla, Yaman Kumar and Acharya, Anish and Shah, Rajiv Ratn},
journal={arXiv preprint arXiv:2203.15349},
year={2022}
}
@article{lo2019s2orc,
title={S2ORC: The semantic scholar open research corpus},
author={Lo, Kyle and Wang, Lucy Lu and Neumann, Mark and Kinney, Rodney and Weld, Dan S},
journal={arXiv preprint arXiv:1911.02782},
year={2019}
}
@inproceedings{ccano2019keyphrase,
title={Keyphrase generation: A multi-aspect survey},
author={{\c{C}}ano, Erion and Bojar, Ond{\v{r}}ej},
booktitle={2019 25th Conference of Open Innovations Association (FRUCT)},
pages={85--94},
year={2019},
organization={IEEE}
}
@article{meng2017deep,
title={Deep keyphrase generation},
author={Meng, Rui and Zhao, Sanqiang and Han, Shuguang and He, Daqing and Brusilovsky, Peter and Chi, Yu},
journal={arXiv preprint arXiv:1704.06879},
year={2017}
}
Contributions
Thanks to @debanjanbhucs, @dibyaaaaax, @UmaGunturi and @ad6398 for adding this dataset
- Downloads last month
- 161